CN111808078A - 一种抑制ido1活性的来那度胺衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种抑制IDO1活性的来那度胺衍生物及其制备方法和应用，属于药物化学的技术领域。化合物结构如通式Ⅰ所示。本发明提供的来那度胺衍生物对IDO1的抑制活性明显优于靛玉红、来那度胺和泊马度胺。本发明的通式Ⅰ化合物可应用于制备抑制IDO1活性的药物。

Description

一种抑制IDO1活性的来那度胺衍生物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于药物化学的技术领域，具体涉及一种抑制IDO1活性的来那度胺衍生物及其制备方法和应用。

背景技术

来那度胺，英文名称Lenalidomide，化学名为3-(7-氨基-3-氧代-1H-异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮，是由美国Celgene生物制药公司开发的一个抗肿瘤药物，化学结构与沙利度胺相似，具有抗肿瘤、免疫调节和抗血管生成等多重作用。来那度胺是沙利度胺的新一代衍生物，但没有发现其具有致畸变的毒性，并且药效比沙利度胺强100倍。来那度胺是目前治疗多发性骨髓瘤疗效最显著的药品，另外它也是可以有效治疗骨髓增生异常综合症(MDS)唯一的药物。

靛玉红是一种天然产物药物，来源于中国传统中药古方“当归龙荟丸”，临床用于治疗慢性粒细胞白血病。经进一步研究发现，“当归龙荟丸”的主要化学活性成分为青黛，青黛中靛蓝的含量较高，但是其治疗白血病的主要活性成分是靛蓝的同分异构体-靛玉红。靛玉红具有止血、解热、抗炎、镇静、抗菌和抗病毒等功效。目前临床上主要用于治疗慢性粒细胞白血病，具有毒性小，副作用少等优点。靛玉红由两个吲哚环缩合而成，具有刚性近平面的分子结构，所有原子都在这个平面上，形成一个大的共轭体系，使得分子内有大范围的离域。

我们通过分子对接方法，发现靛红能够与IDO1的靶点(PDB:4PK5)发生竞争性的作用关系。靛红分子能够进入到IDO1靶点的血红素活性口袋中，其中吲哚酮结构位于靶点中血红素的正上方，吲哚酮上的羰基结构距离血红素中的Fe²⁺的距离只有2.5A，能够产生有效的作用关系；并且靛红分子中的另外一个吲哚结构中的N原子与262位的甘氨酸(G262)距离为2.9A，也能够形成作用关系，因此我们推断靛红能够作为一种潜在的IDO1竞争性抑制剂。

由于靛玉红具有独特的平面结构，能够插入到DNA的碱基之间，因此我们想根据生物活性亚结构拼接原理，通过linker把靛玉红分子和来那度胺及其类似物分子连接起来，进而起到增强化合物活性的作用，最后我们与南开大学和河南师范大学合作把得到的化合物分子进行了抑制IDO1活性研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种通式Ⅰ所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式、及其可药用的盐：

其中，R为氢原子或氧代基。

一种通式Ⅰ化合物的合成方法，是通过如下路线合成的：

合成方法如下：

通式Ⅱ化合物进行重氮化后与叠氮化钠反应生成通式Ⅱ的叠氮化合物，然后再与化合物Ⅲ发生发生闭环反应得到通式Ⅰ化合物；

其中，反应方程式中R为氢原子或氧代基。

优选的，所述通式Ⅰ化合物的具体合成方法如下

优选的，所述化合物Ⅲ是通过如下路线合成的：

将通式Ⅱ化合物和亚硝酸钠加入到四氢呋喃和水的混合溶液中，在0℃条件下搅拌均匀后缓慢滴加6mol/L的盐酸溶液，滴加完后搅拌20～30min，然后加入溶有叠氮化钠的水溶液，继续搅拌反应，TLC监控原料反应完全，然后加入二氯甲烷萃取，分出有机相，用饱和碳酸钠溶液调节有机相pH为中性，分出有机相，浓缩后和化合物Ⅲ加入混合溶液(V叔丁醇:V水:V四氢呋喃＝1:1:1)中，再加入抗坏血酸钠和无水硫酸铜，反应液搅拌加热至70℃，TLC监控化合物Ⅲ反应完全，过滤反应液，滤液用二氯甲烷萃取多次，合并有机相，浓缩后经硅胶柱层析分离得到目标化合物。

优选的，所述通式Ⅱ化合物、亚硝酸钠和叠氮化钠的投料量的摩尔比为1：2：2。

优选的，所述通式Ⅱ化合物与化合物Ⅵ的投料量的摩尔比为1：1。

路线1：

具体步骤如下：

(1)化合物Ⅳ(1,2-二氢-3H-吲哚-3-酮)与苯甲醛发生缩合反应得到化合物Ⅴ(2-亚苄基-1,2-二氢-吲哚-3-酮)；

(2)化合物Ⅴ在烯烃位置发生羧基化反应得到化合物Ⅵ((3-氧代-1,3-二氢-吲哚-2-亚烷基)-苯基乙酸)；

(3)化合物Ⅵ先发生酰胺化反应，再经分子内环合得到化合物Ⅶ-A；

(4)化合物Ⅶ-A和2-[2-(2-氯乙氧基)乙氧基]乙氧基丙炔发生取代反应得到化合物Ⅲ(1'-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基-乙氧基)-乙氧基]-乙基}-1H,1'H-[2,3']双亚二甲基-3,2'-二酮)。

优选的，所述步骤(2)的具体合成方法如下：

在氮气保护下，向反应瓶中加入四卤化碳和二甲基亚砜，搅拌下加入化合物Ⅴ和催化剂，搅拌均匀后向反应液中滴加溶有反应促进剂的二甲基亚砜溶液；滴加完毕后将反应液缓慢升温至40～80℃，开启日光灯照射反应液，保温反应2～7h后TLC监控化合物Ⅴ反应完全；然后将反应液降温至0～10℃，在氮气保护下向反应液中缓慢滴加水，控制反应体系温度≤20℃。滴加完后过滤反应液，向反应液中加入活性炭，然后将反应液加热至40℃搅拌热滤后，用稀盐酸调节滤液pH＝4～5，然后加入氯仿和水，萃取分液，有机相用水洗涤两次，再用饱和氯化钠溶液洗涤一次，无水硫酸镁干燥后浓缩，得化合物Ⅵ。

优选的，所述步骤(2)中四卤化碳为四氯化碳或四溴化碳中的一种。

优选的，所述步骤(2)中催化剂为碘化钴。

优选的，所述步骤(2)中反应促进剂为芘-1-磺酸钠盐、1,3,6,8-芘四磺酸四钠盐、3,9-苝二甲酸二钠盐中的一种。

优选的，所述步骤(2)中四卤化碳的投料量为以化合物Ⅴ计0.4～1.0ml/g；所述化合物Ⅲ、催化剂和反应促进剂的投料量摩尔比为1:0.1～0.2:0.1～0.3。

优选的，所述步骤(3)的具体合成方法如下：

搅拌下将把化合物Ⅵ加入到N,N-二甲基甲酰胺中，然后再加入TBTU、DMAP、DIPEA和铵盐，搅拌均匀后加热至50℃，反应9～15h后向反应液中加入水，然后用乙酸乙酯萃取反应液多次，合并有机相，浓缩后向浓缩物中加入溶剂，搅拌下再加入碳酸钠和BOC-L-脯氨酸，20～30℃搅拌反应2h；然后在氮气保护下将反应液降温至0℃，加入醋酸钯和乙酸酐，搅拌均匀后快速加入溶有过氧化物的水溶液，控制0℃保温反应10～11h；反应结束后向反应液中加入水，然后将反应液加热至50℃，搅拌30min后，降温至20～30℃，过滤反应液，滤液真空浓缩后用二氯甲烷萃取浓缩物多次。合并有机相，加入活性炭，将反应液升温至40℃下搅拌20～30min，降至20～30℃过滤，滤液用饱和食盐水洗涤，滤液浓缩后经硅胶柱层析分离提纯得到化合物Ⅶ-A。

优选的，所述步骤(3)中铵盐为氯化铵、硫酸铵或硝酸铵中的一种。

优选的，所述步骤(3)中溶剂为六氟异丙醇。

优选的，所述步骤(3)中过氧化物为叔丁基过氧化氢。

优选的，所述步骤(3)中所述化合物Ⅵ、TBTU、DMAP、DIPEA、铵盐和过氧化物的投料量摩尔比为1:1:2:2:2～3:1～2。

优选的，所述化合物Ⅲ是通过如下路线合成的：

路线2：

具体步骤如下：

(1)化合物Ⅴ的合成方法与路线1中步骤(1)相同；

(2)化合物Ⅵ的合成方法与路线1中步骤(2)相同；

(3)化合物Ⅵ与1-氨基-3,6,9-三氧杂十二炔发生酰化反应得到化合物Ⅶ-B；

(4)化合物Ⅶ-B发生分子内环合反应得到化合物化合物Ⅲ。

优选的，所述步骤(4)的具体合成方法如下：

将化合物Ⅶ-B、碳酸钠和BOC-L-脯氨酸加入六氟异丙醇中，搅拌混合均匀后再加入醋酸钯和乙酸酐，在0℃下搅拌均匀，反应体系在氮气保护下，快速加入溶有过氧化物的水溶液，保持0℃条件，反应结束后加入水，然后将反应液加热到50℃，搅拌一段时间后降至20～30℃后过滤反应液，滤液真空浓缩后用乙酸乙酯萃取多次，合并有机相后加入活性炭，在50℃下搅拌一段时间，过滤后滤液用饱和食盐水洗涤，滤液浓缩后经硅胶柱层析分离提纯得到化合物Ⅲ。

优选的，所述过氧化物为叔丁基过氧化氢。

优选的，所述步骤(4)中化合物Ⅶ-B、和过氧化物的投料量摩尔比为1:1～2。

一种通式Ⅰ化合物的应用，通式Ⅰ化合物在制备抑制IDO1活性的药物中的应用。本发明的有益效果为：

本发明提供的来那度胺衍生物对IDO1的抑制活性明显优于靛玉红、来那度胺和泊马度胺。本发明的通式Ⅰ化合物可应用于制备抑制IDO1活性的药物。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明实施例1的HNMR图谱；

图2是本发明实施例2的HNMR图谱；

图3是本发明实施例8的HNMR图谱。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。

实施例1

1'-{2-[2-(2-{1-[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基]]-1H-[1,2,3]三唑-4-基甲氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙基}-1H,1'H-[2,3']双亚二甲基-3,2'-二酮的制备。

将3-(7-氨基-3-氧代-1H-异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮2.6g和亚硝酸钠1.35g，加入到四氢呋喃20mL和水10mL的混合溶液中，在0℃条件下搅拌10min，缓慢滴加6mol/L的盐酸溶液8mL，滴加完后再次搅拌30min，然后加入溶有叠氮化钠1.3g的水溶液10mL，继续搅拌10h，TLC监控原料反应完全，然后加入二氯甲烷萃取，分出有机相，用饱和碳酸钠溶液调节有机相pH为中性，分出有机相，浓缩后得到3-(4-叠氮基-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮；把化合物Ⅲ4.3g和3-(4-叠氮基-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮3.4g加入混合溶液(V叔丁醇:V水:V四氢呋喃＝1:1:1)60mL中，再加入抗坏血酸钠2.0g和无水硫酸铜1.6g，搅拌加热至70℃，反应5h，TLC监控化合物Ⅵ反应完全，过滤反应液，滤液用二氯甲烷萃取多次，合并有机相，浓缩后经硅胶柱层析分离得到目标化合物3.1g。产品检测数据如下：

¹H NMR(600MHz,DMSO)δ11.03(d,J＝16.8Hz,2H),8.82(s,1H),8.77(d,J＝7.8Hz,1H),8.06(d,J＝7.8Hz,1H),7.83(d,J＝7.8Hz,1H),7.74(t,J＝7.8Hz,1H),7.63(d,J＝7.2Hz,1H),7.56(t,J＝7.8Hz,1H),7.39(d,J＝8.4Hz,1H),7.28(t,J＝7.8Hz,1H),7.14(d,J＝7.8Hz,1H),7.05(t,J＝7.2Hz,1H),7.00(t,J＝7.2Hz,1H),5.17(dd,J＝13.2,5.4Hz,1H),4.71–4.62(m,2H),4.57(s,2H),3.98(t,J＝5.4Hz,2H),3.69(t,J＝5.4Hz,2H),3.58–3.53(m,4H),3.51–3.46(m,5H),2.96–2.88(m,1H),2.61–2.58(m,1H),2.03(m,1H)。

实施例2

1'-{2-[2-(2-{1-[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基]-1H-[1,2,3]三唑-4-基甲氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙基}-1H,1'H-[2,3']双亚二甲基-3,2'-二酮的制备。

把4-氨基-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚-1,3-二酮2.73g和亚硝酸钠1.35g加入到四氢呋喃20mL和水10mL的混合溶液中，在0℃条件下搅拌10min，缓慢滴加盐酸溶液8mL，滴加完后再次搅拌30min，然后加入溶有叠氮化钠1.3g的水溶液10mL，继续搅拌10h，TLC监控原料反应完全，然后加入二氯甲烷，分出有机相，用饱和碳酸钠溶液调节有机相pH为中性，分出有机相，浓缩后得到4-叠氮基-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-异吲哚-1,3-二酮；把化合物Ⅲ4.3g和4-叠氮基-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-异吲哚-1,3-二酮3.6g加入混合溶液(V叔丁醇:V水:V四氢呋喃＝1:1:1)60mL中，再加入抗坏血酸钠2.0g和无水硫酸铜1.6g，搅拌加热至70℃，反应5h，TLC监控化合物Ⅵ反应完全，过滤反应液，滤液用二氯甲烷萃取多次，合并有机相，浓缩后经硅胶柱层析分离得到目标化合物4.7g。产品检测数据如下：

¹H NMR(600MHz,DMSO)δ11.15(s,1H),11.07(s,1H),8.78(d,J＝7.8Hz,1H),8.65(s,1H),8.15(t,J＝4.8Hz,1H),8.07(d,J＝4.8Hz,2H),7.64(d,J＝7.8Hz,1H),7.57(t,J＝7.2Hz,1H),7.40(d,J＝8.4Hz,1H),7.30(t,J＝7.2Hz,1H),7.15(d,J＝7.8Hz,1H),7.06(t,J＝7.8Hz,1H),7.02(t,J＝7.2Hz,1H),5.17(dd,J＝13.2,5.4Hz,1H),4.60(s,2H),3.98(t,J＝6.0Hz,2H),3.69(t,J＝6.0Hz,2H),3.57-3.54(m,4H),3.51–3.47(m,5H),2.91–2.83(m,1H),2.60(d,J＝18.0Hz,1H),2.08–2.02(m,1H)。

实施例3

化合物Ⅴ的合成

在带有搅拌器和分水器的多口反应瓶中，搅拌下把化合物Ⅳ13.3g加入甲苯200mL中，再加入甲醇钠11g和苯甲醛11g，加入甲醇钠时注意需要保持搅拌状态，防止反应液升温剧烈，然后升温至回流，回流反应过程中通过分水器除去反应过程中生成的水分，TLC监控化合物Ⅳ反应完全后真空浓缩反应液，然后倒入水150mL，通过稀盐酸调节反应液pH为中性，然后用二氯甲烷100mL萃取多次，合并有机相，再经硅胶柱层析分离提纯得到化合物Ⅴ19.4g。LC-MS(ESI):m/z 222[M+H]⁺。

实施例4

化合物Ⅵ的合成

在带有氮气保护装置的反应瓶中，把化合物Ⅴ22.1g和碘化钴3.1g加入到四氯化碳20mL和二甲基亚砜200mL中，搅拌均匀后呈现浑浊状态，在氮气保护下，缓慢滴加溶有芘-1-磺酸钠盐3.0g的二甲基亚砜溶液150mL，滴加完后在氮气保护下缓慢升温至60℃，并且在普通日光灯(家用钨灯)照射下，保持该温度搅拌反应7h，TLC监控化合物Ⅴ反应完全；然后降温至0～10℃，在氮气保护下缓慢地滴加水120mL，控制反应体系温度≤20℃。滴加完后过滤反应液，向反应液中加入活性炭10g，加热至40℃搅拌20min，趁热过滤反应液，然后用稀盐酸调节反应液pH为4～5，加入氯仿200mL和水150mL，搅拌萃取，然后分出有机相；有机相用水20mL×2洗涤有机相两次，再用饱和氯化钠溶液10mL洗涤一次，最后经无水硫酸镁干燥，抽滤后浓缩，得到化合物Ⅵ16.1g。LC-MS(ESI):m/z264[M-H]^-。

实施例5

化合物Ⅵ的合成

在带有氮气保护装置的反应瓶中，把化合物Ⅴ22.1g和碘化钴3.1g加入四氯化碳20mL和二甲基亚砜200mL中，搅拌均匀后呈现浑浊状态，在氮气保护下，缓慢滴加溶有1,3,6,8-芘四磺酸四钠盐6.1g的二甲基亚砜溶液150mL，滴加完后在氮气保护下缓慢升温至60℃，并且在普通日光灯(家用钨灯)照射下，保持该温度搅拌反应3h，TLC监控化合物Ⅴ反应完全；然后降温至0～10℃，在氮气保护下缓慢地滴加水120mL，控制反应体系温度≤20℃，滴加完后过滤反应液，向反应液中加入活性炭10g，加热至40℃搅拌20min，趁热过滤反应液，然后用稀盐酸调节反应液pH为4～5，加入氯仿200mL和水150mL，搅拌萃取，然后分出有机相；有机相用水20mL×2洗涤有机相两次，再用饱和氯化钠溶液10mL洗涤一次，最后经无水硫酸镁干燥，抽滤后浓缩，得到化合物Ⅵ24.3g。LC-MS(ESI):m/z 264[M-H]^-。

实施例6

化合物Ⅵ的合成

在带有氮气保护装置的反应瓶中，把化合物Ⅴ22.1g和碘化钴3.1g加入四氯化碳20mL和二甲基亚砜200mL中，搅拌均匀后呈现浑浊状态，在氮气保护下，缓慢滴加溶有3,9-苝二甲酸二钠盐3.9g的二甲基亚砜溶液150mL，滴加完后在氮气保护下缓慢升温至60℃，并且在普通日光灯(家用钨灯)照射下，保持该温度搅拌反应4h，TLC监控化合物Ⅴ反应完全；然后降温至0～10℃，在氮气保护下缓慢地滴加水120mL，控制反应体系温度≤20℃，滴加完后过滤反应液，向反应液中加入活性炭10g，加热至40℃搅拌20min，趁热过滤反应液，然后用稀盐酸调节反应液pH为4～5，加入氯仿200mL和水150mL，搅拌萃取，然后分出有机相；有机相用水20mL×2洗涤有机相两次，再用饱和氯化钠溶液10mL洗涤一次，最后经无水硫酸镁干燥，抽滤后浓缩，再经硅胶柱层析分离得到化合物Ⅵ14.8g。LC-MS(ESI):m/z 264[M-H]^-。

实施例7

化合物Ⅵ的合成

在带有氮气保护装置的反应瓶中，把化合物Ⅴ22.1g和碘化钴3.1g加入四溴化碳10mL和二甲基亚砜200mL中，搅拌均匀后呈现浑浊状态，在氮气保护下，缓慢滴加溶有3,9-苝二甲酸二钠盐3.9g的二甲基亚砜溶液150mL，滴加完后在氮气保护下缓慢升温至70℃，并且在普通日光灯(家用钨灯)照射下，保持该温度搅拌反应2h，TLC监控化合物Ⅴ反应完全；然后降温至0～10℃，在氮气保护下缓慢地滴加水100mL，控制反应体系温度≤20℃，滴加完后过滤反应液，向反应液中加入活性炭10g，加热至40℃搅拌20min，趁热过滤反应液，然后用稀盐酸调节反应液pH为4～5，加入氯仿300mL和水150mL，搅拌萃取，然后分出有机相；有机相用水20mL×2洗涤有机相两次，再用饱和氯化钠溶液10mL洗涤一次，最后经无水硫酸镁干燥，抽滤后浓缩，得到化合物Ⅵ18.8g。LC-MS(ESI):m/z 264[M-H]^-。

实施例8

化合物Ⅶ-A的合成

把化合物Ⅵ26.5g加入N,N-二甲基甲酰胺800mL中，再加入TBTU 32.1g，DMAP24.4g，DIPEA 26.0g和氯化铵16.0g，搅拌均匀后加热至50℃，反应15h后向反应液中加入水1500mL，然后再用乙酸乙酯萃取反应液多次，合并有机相，浓缩后加入六氟异丙醇500mL中，再加入碳酸钠10.6g和BOC-L-脯氨酸21.5g，搅拌混匀后于20～30℃反应2～3h，然后在氮气保护下将反应液降温至0℃，加入醋酸钯2.3g和乙酸酐20.4g，在0℃下搅拌均匀，反应体系在氮气保护下，快速加入溶有叔丁基过氧化氢18.0g的水溶液200mL，保持0℃条件，反应11h，反应结束后加入水150mL，然后将反应液加热到50℃，搅拌30min，降至20～30℃后过滤反应液，滤液真空浓缩后用二氯甲烷萃取多次，每次用量50mL，合并有机相后加入活性炭3g，在40℃下搅拌20min，过滤后滤液用饱和食盐水洗涤，滤液浓缩后经硅胶柱层析分离提纯得到化合物Ⅶ-A 13.0g。

¹H NMR(600MHz,DMSO)δ10.98(s,2H),8.77(d,J＝6.0Hz,1H),7.66(d,J＝6.0Hz,1H),7.08(dd,J₁＝6.0Hz,J₂＝12.0Hz,1H),7.42(d,J＝6.0Hz,1H),7.26-7.23(m,1H),7.02(dd,J₁＝6.0Hz,J₂＝6.0Hz,2H),6.90(d,J＝6.0Hz,1H).

实施例9

化合物Ⅶ-A的合成

把化合物Ⅵ26.5g加入N,N-二甲基甲酰胺1200mL中，再加入TBTU 48.2g，DMAP36.7g，DIPEA 38.8g和硫酸铵26.4g，搅拌均匀后加热至50℃，反应9h后向反应液中加入水2000mL，然后再用乙酸乙酯萃取反应液多次，合并有机相，浓缩后加入六氟异丙醇500mL中，再加入碳酸钠10.6g和BOC-L-脯氨酸21.5g，搅拌混匀后于20～30℃反应2～3h，然后在氮气保护下将反应液降温至0℃，加入醋酸钯2.3g和乙酸酐20.4g，在0℃下搅拌均匀，反应体系在氮气保护下，快速加入溶有叔丁基过氧化氢18.0g的水溶液200mL，保持0℃条件，反应11h，反应结束后加入水150mL，然后将反应液加热到50℃，搅拌30min，降至20～30℃后过滤反应液，滤液真空浓缩后用二氯甲烷萃取多次，每次用量50mL，合并有机相后加入活性炭3g，在40℃下搅拌20min，过滤后滤液用饱和食盐水洗涤，滤液浓缩后经硅胶柱层析分离提纯得到化合物Ⅶ-A 23.3g。

实施例10

化合物Ⅶ-A的合成

把化合物Ⅵ26.5g加入N,N-二甲基甲酰胺1200mL中，再加入TBTU 48.2g，DMAP36.7g，DIPEA 38.8g和硝酸铵24.0g，搅拌均匀后加热至50℃，反应13h后向反应液中加入水2000mL，然后再用乙酸乙酯萃取反应液多次，合并有机相，浓缩后加入六氟异丙醇600mL中，再加入碳酸钠10.6g和BOC-L-脯氨酸21.5g，搅拌混匀后于20～30℃反应2～3h，然后在氮气保护下将反应液降温至0℃，加入醋酸钯2.3g和乙酸酐20.4g，在0℃下搅拌均匀，反应体系在氮气保护下，快速加入溶有叔丁基过氧化氢18.0g的水溶液200mL，保持0℃条件，反应10h，反应结束后加入水150mL，然后将反应液加热到50℃，搅拌30min，降至20～30℃后过滤反应液，滤液真空浓缩后用二氯甲烷萃取多次，每次用量50mL，合并有机相后加入活性炭3g，在40℃下搅拌20min，过滤后滤液用饱和食盐水洗涤，滤液浓缩后经硅胶柱层析分离提纯得到化合物Ⅶ-A 20.1g。

实施例11

化合物Ⅲ的合成

将化合物Ⅶ-A 26.2g加入到N,N-二甲基甲酰胺150mL中，完全溶解，然后加入2-[2-(2-氯乙氧基)乙氧基]乙氧基丙炔24.8g和碳酸钾27.6g，在氮气保护下加热至回流，反应3h，TLC监控化合物Ⅶ-A反应完全，把反应液倒入水200mL中，搅拌一段时间后过滤反应液，然后用二氯甲烷50mL萃取滤液4次，合并有机相，真空浓缩后得到化合物Ⅲ31.0g。LC-MS(ESI):m/z 433[M+H]⁺。

实施例12

化合物Ⅶ-B的合成

在反应瓶中加入化合物Ⅵ26.5g和N,N-二甲基甲酰胺250mL，氮气保护下20～30℃搅拌完全溶解；加入HATU 8.61g，严格控制体系温度不超过25℃，逐滴加入DIPEA 5.9g，将1-氨基-3,6,9-三氧杂十二炔18.7g溶到N,N-二甲基甲酰胺100mL中，体系温度不超过25℃，加入反应体系后，在25-35℃反应12h；TLC显示反应完成，加水500mL打浆后抽滤，滤饼烘干后得到化合物Ⅶ-B 38.1g。LC-MS(ESI):m/z 435[M+H]⁺。

实施例13

化合物Ⅲ的合成

在带有冷却的反应装置中将化合物Ⅶ-B 43.4g、碳酸钠10.6g和BOC-L-脯氨酸10.8g加入六氟异丙醇600mL中，搅拌混合均匀后再加入醋酸钯2.3g和乙酸酐20.4g，在0℃下搅拌均匀，反应体系在氮气保护下，快速加入溶有叔丁基过氧化氢18.0g的水溶液200mL，保持0℃条件，反应11h，反应结束后加入水300mL，然后加热到50℃，搅拌1h，降至20～30℃后过滤反应液，滤液真空浓缩后用乙酸乙酯萃取多次，每次用量100mL，合并有机相后加入活性炭3g，在50℃搅拌20min，过滤后滤液用饱和食盐水洗涤，滤液浓缩后经硅胶柱层析分离提纯得到化合物Ⅲ30.3g。LC-MS(ESI):m/z 433[M+H]⁺。

实施例14

生物活性测试

将处于对数期生长的Hela细胞以每孔50000个细胞的数目铺于96孔细胞培养板中，用含10％胎牛血清的RPMI1640培养5～6小时，加入稀释好的待测化合物(浓度分别为128μmol/L，64μmol/L，32μmol/L，16μmol/L，8μmol/L，4μmol/L)100μL和终浓度为100ng/mg重组人源干扰素γ激活IDO1表达。细胞于富含5％二氧化碳的37℃细胞培养箱中培养18～20小时后，用一定量的三氯乙酸终止反应，并于50℃孵育30分钟。细胞培养液经沉淀后，取上清液用对(N,N-二甲基)苯甲醛显色后用Synergy HTX多功能酶标仪检测480nm处的吸光度。将不含药物只有IFNγ培养基处理的组作为100％(At)，只含0.1％DMSO培养基处理的组作为空白对照0％(Ab)；根据下面的公式计算不同条件处理时的吸光度：吸光度％＝(A-Ab)/(At-Ab)，A：药物处理+100ng/mL IFNγ，Ab：空白对照，At：没有药物只含有100ng/mLIFNγ；根据使用Graph Pad Prism 6.0软件生成具有IC₅₀值的抑制曲线。结果如下表1：

表1-抑制细胞增殖活性测试结果

Compd.no	实施例1	实施例2	靛玉红	来那度胺	泊马度胺
						IDO<sub>1</sub>/IC<sub>50</sub>(umol/L)	54.71	74.25	71.61	＞100	90.73

由表1中的测试结果可以看出，我们实施例1得到的目标化合物对IDO₁的抑制活性明显优于靛玉红、来那度胺和泊马度胺。

尽管通过优选实施例的方式对本发明进行了详细描述，但本发明并不限于此。在不脱离本发明的精神和实质的前提下，本领域普通技术人员可以对本发明的实施例进行各种等效的修改或替换，而这些修改或替换都应在本发明的涵盖范围内/任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以权利要求所述的保护范围为准。

Claims (9)

1.一种抑制IDO1活性的来那度胺衍生物，其特征在于，表示为下述通式Ⅰ：

或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式、及其可药用的盐；

其中，R为氢原子或氧代基。

2.一种抑制IDO1活性的来那度胺衍生物的合成方法，其特征在于，所述通式Ⅰ化合物是通过如下路线合成的：

合成方法如下：

通式Ⅱ化合物进行重氮化后与叠氮化钠反应生成通式Ⅱ的叠氮化合物，然后再与化合物Ⅲ发生发生闭环反应得到通式Ⅰ化合物；

其中，反应方程式中R为氢原子或氧代基。

3.如权利要求2所述的一种抑制IDO1活性的来那度胺衍生物的合成方法，其特征在于，所述化合物Ⅲ是通过如下路线合成的：

将通式Ⅱ化合物和亚硝酸钠加入到四氢呋喃和水的混合溶液中，在0℃条件下搅拌均匀后缓慢滴加6mol/L的盐酸溶液，滴加完后搅拌20～30min，然后加入溶有叠氮化钠的水溶液，继续搅拌反应，TLC监控原料反应完全，然后加入二氯甲烷萃取，分出有机相，用饱和碳酸钠溶液调节有机相pH为中性，分出有机相，浓缩后和化合物Ⅲ加入混合溶液中，混合溶液为V叔丁醇:V水:V四氢呋喃＝1:1:1，再加入抗坏血酸钠和无水硫酸铜，反应液搅拌加热至70℃，TLC监控化合物Ⅲ反应完全，过滤反应液，滤液用二氯甲烷萃取多次，合并有机相，浓缩后经硅胶柱层析分离得到目标化合物；

优选的，所述通式Ⅱ化合物、亚硝酸钠和叠氮化钠的投料量的摩尔比为1：2：2；

优选的，所述通式Ⅱ化合物与化合物Ⅵ的投料量的摩尔比为1：1。

4.如权利要求2所述的一种抑制IDO1活性的来那度胺衍生物的合成方法，其特征在于，所述化合物Ⅲ是通过如下路线合成的：

具体步骤如下：

(1)化合物Ⅳ与苯甲醛发生缩合反应得到化合物Ⅴ；

(2)化合物Ⅴ在烯烃位置发生羧基化反应得到化合物Ⅵ；

(3)化合物Ⅵ先发生酰胺化反应，再经分子内环合得到化合物Ⅶ-A；

(4)化合物Ⅶ和2-[2-(2-氯乙氧基)乙氧基]乙氧基丙炔发生取代反应得到化合物Ⅲ。

5.如权利要求4所述的一种抑制IDO1活性的来那度胺衍生物的合成方法，其特征在于，所述步骤(2)的具体合成方法如下：

在氮气保护下，向反应瓶中加入四卤化碳和二甲基亚砜，搅拌下加入化合物Ⅴ和催化剂，搅拌均匀后向反应液中滴加溶有反应促进剂的二甲基亚砜溶液；滴加完毕后将反应液缓慢升温至40～80℃，开启日光灯照射反应液，保温反应2～7h后TLC监控化合物Ⅴ反应完全；然后将反应液降温至0～10℃，在氮气保护下向反应液中缓慢滴加水，控制反应体系温度≤20℃；滴加完后过滤反应液，向反应液中加入活性炭，然后将反应液加热至40℃搅拌热滤后，用稀盐酸调节滤液pH＝4～5，然后加入氯仿和水，萃取分液，有机相用水洗涤两次，再用饱和氯化钠溶液洗涤一次，无水硫酸镁干燥后浓缩，得化合物Ⅵ；

优选的，所述步骤(2)中四卤化碳为四氯化碳或四溴化碳中的一种；

优选的，所述步骤(2)中催化剂为碘化钴；

优选的，所述步骤(2)中反应促进剂为芘-1-磺酸钠盐、1,3,6,8-芘四磺酸四钠盐、3,9-苝二甲酸二钠盐中的一种；

优选的，所述步骤(2)中四卤化碳的投料量为以化合物Ⅴ计0.4～1.0ml/g；所述化合物Ⅲ、催化剂和反应促进剂的投料量摩尔比为1:0.1～0.2:0.1～0.3。

6.如权利要求4所述的一种抑制IDO1活性的来那度胺衍生物的合成方法，其特征在于，所述步骤(3)的具体合成方法如下：

搅拌下将把化合物Ⅵ加入到N,N-二甲基甲酰胺中，然后再加入TBTU、DMAP、DIPEA和铵盐，搅拌均匀后加热至50℃，反应9～15h后向反应液中加入水，然后用乙酸乙酯萃取反应液多次，合并有机相，浓缩后向浓缩物中加入溶剂，搅拌下再加入碳酸钠和BOC-L-脯氨酸，20～30℃搅拌反应2h；然后在氮气保护下将反应液降温至0℃，加入醋酸钯和乙酸酐，搅拌均匀后快速加入溶有过氧化物的水溶液，控制0℃保温反应10～11h；反应结束后向反应液中加入水，然后将反应液加热至50℃，搅拌30min后，降温至20～30℃，过滤反应液，滤液真空浓缩后用二氯甲烷萃取浓缩物多次；合并有机相，加入活性炭，将反应液升温至40℃下搅拌20～30min，降至20～30℃过滤，滤液用饱和食盐水洗涤，滤液浓缩后经硅胶柱层析分离提纯得到化合物Ⅶ-A；

优选的，所述步骤(3)中铵盐为氯化铵、硫酸铵或硝酸铵中的一种；

优选的，所述步骤(3)中溶剂为六氟异丙醇；

优选的，所述步骤(3)中过氧化物为叔丁基过氧化氢；

优选的，所述步骤(3)中所述化合物Ⅵ、TBTU、DMAP、DIPEA、铵盐和过氧化物的投料量摩尔比为1:1:2:2:2～3:1～2。

7.如权利要求2所述的一种抑制IDO1活性的来那度胺衍生物的合成方法，其特征在于，所述化合物Ⅳ是通过如下路线合成的：

具体步骤如下：

(1)化合物Ⅳ与苯甲醛发生缩合反应得到化合物Ⅴ；

(2)化合物Ⅴ在烯烃位置发生羧基化反应得到化合物Ⅵ；

(3)化合物Ⅵ与1-氨基-3,6,9-三氧杂十二炔发生酰化反应得到化合物Ⅶ-B；

(4)化合物Ⅶ-B发生分子内环合反应得到化合物化合物Ⅲ。

8.如权利要求7所述的一种抑制IDO1活性的来那度胺衍生物的合成方法，其特征在于，所述步骤(4)的具体合成方法如下：

将化合物Ⅶ-B、碳酸钠和BOC-L-脯氨酸加入六氟异丙醇中，搅拌混合均匀后再加入醋酸钯和乙酸酐，在0℃下搅拌均匀，反应体系在氮气保护下，快速加入溶有过氧化物的水溶液，保持0℃条件，反应11h，反应结束后加入水，然后将反应液加热到50℃，搅拌30min，降至20～30℃后过滤反应液，滤液真空浓缩后用乙酸乙酯萃取多次，合并有机相后加入活性炭，在50℃下搅拌20min，过滤后滤液用饱和食盐水洗涤，滤液浓缩后经硅胶柱层析分离提纯得到化合物Ⅲ；

优选的，所述过氧化物为叔丁基过氧化氢；

优选的，所述化合物Ⅶ-B、和过氧化物的投料量摩尔比为1:1～2。

9.一种通式Ⅰ化合物的应用，其特征在于，通式Ⅰ化合物在制备抑制IDO1活性的药物中的应用。

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