WO2004080453A1

WO2004080453A1 - 抗ｃ型肝炎ウイルス剤と抗ｈｉｖ剤

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Publication number: WO2004080453A1
Application number: PCT/JP2004/003080
Authority: WO
Inventors: Tadahiko Mashino; Kumiko Shimotohno
Original assignee: Mitsubishi Corporation
Priority date: 2003-03-10
Filing date: 2004-03-10
Publication date: 2004-09-23
Also published as: ATE431737T1; EP1607091B1; CA2518766A1; US8344017B2; EP1607091A4; US7956079B2; US20070037867A1; US20110071202A1; CA2518766C; DE602004021175D1; EP1607091A1

Abstract

フラーレンの炭素クラスター骨格を構成する隣接結合炭素原子対とともに環を構成する窒素原子を有しているフラーレン誘導体もしくはその四級アミン塩を有効成分として含有している抗C型肝炎ウイルス剤または抗HIV剤とする。

Description

明細書抗 C型肝炎ウィルス剤と抗 H I V剤技術分野

この出願の発明は抗 C型肝炎ウィルス剤または抗 H I V剤に関するものである。さらに詳しくは、この出願の発明は、フラーレン誘導体またはその四級ァミン塩を有効成分として含有する新しい抗 C型肝炎ウィルス剤または抗 H I V 剤に関するものである。背景技術

C ₆。に代表される炭素クラスターであるフラーレンは 1 9 8 5年に Smally, K ro to等によって発見された新規な炭素同素体であり、 1 9 9 0年に大量合成法が確立されて以来、基礎 -応用両面で飛躍的に研究は進展している。

当初、化学反応性は低いと考えられたフラーレン類であるが、電子欠損性ォレフィンとして種々のァオン性基質が容易に付加することが示された。その他、 Diels-Alder反応や 1 , 3—双極子付加反応なども良好に進行し、フラーレンの 6員環 6員環接合部位の二重結合への付加体を与える。

この様な化学的に活性な新規物質群が生体に与える影響に関しても輿味がもたれている。たとえば、フラーレン誘導体に H I Vプロテア一ゼ阻害活性が次式の化合物について報告されている（非特許文献 1 )。

このような状況において、さらに新しい生理活性を有するフラーレン誘導体の探索が望まれているところであるが、実際には、生理活性剤としての応用のための検討はあまり進んでいない。

そこで、この出願の発明者は、次式（1) (2)

1 ;2. で表わされる二つのタイプの C 6。フラ一レン誘導体を合成し、その生理活性を検討してきた。これらの誘導体は、水に混和する有機溶媒（DMSO等）に容易に溶解し、水溶液反応に用いることができるという特徵を有している。

発明者は、この検討の過程において、まず C型肝炎ウィルスの RNAポリメラ一ゼ阻害と H I V逆転写酵素阻害に着目した。

C型肝炎ウィルス (HCV) は血液等を介して感染し慢性肝炎を引き起こす ₀ 感染者では肝硬変、肝がんを発症しやすく自然治癒率はきわめて低い。現在の治療法はィンターフェ口ン投与であり、さらにこれにリパビリンが併用されることもある。しかし HCVの排除率は 3分の 1程度と低い。よって新たな抗 HCV薬の開発が望まれている。

HCVは RNAウィルスであり、ヒトの肝細胞に進入後、自らの RNAを基にいくつかの醇素を宿主（ヒト）細胞のタンパク合成系を用いて作る。それらの酵素の一つに HCVの RNAポリメラ一ゼがあり、これが H C Vの増殖に必須である。

この RNAポリメラーゼの活性を阻害すれば C型肝炎ウィルスの増殖が抑制でき、ウィルス自体を駆逐することができることが報告されている。

—方、 1981年に初めてエイズが報告され、その後地球的に広がり大きな社会問題となっている。このエイズはヒト免疫不全ウィルス（HI V) によつて免疫系が破壊され、様々な感染症にかかりやすくなり、死に至る病である。

HI Vは C型肝炎ウィルスと類似しており RNAウィルスである。

エイズ治療薬として現在用いられているものは大きく 2種に分類できる。ひとつは H I Vの R NAを基に D NAを合成する逆転写酵素の阻害剤であり、もう一つは H I Vの増殖に必要な酵素（H I Vプロテア一ゼ、ウィルス R NAより合成されたタンパクを活性のある酵素に変換する酵素）の阻害剤である。逆転写酵素阻害剤としては主に核酸塩基類縁体が用いられているが、ヒトの細胞にも毒性を及ぼすなどの欠点がある。また、プロテア一ゼ阻害薬も生体内で安定で、かつ活性の高いものが少ない。このようにエイズに対する特効薬がないのが現状であるが、さらにこれらの薬剤に対して H I Vが耐性を獲得することも大きな問題となっている。

このような中、前記のとおり、フラーレン誘導体に H I Vプロテアーゼ阻害活性が報告された。現在これ以外に様々な誘導体が試みられているが、 H I V 逆転写酵素阻害活性を持つフラーレン誘導体は報告されていない。

非特許文献 1 ： R. F. Schinazi, et al.， Antimicrob. Agents

Chemother, 37, 1707 (1993) 発明の開示

そこで、この出願の発明は、以上のとおりの背景を踏まえて、フラーレン誘導体を有効成分とする新しい C型肝炎ウィルス R NAポリメラーゼ阻害活性を有する抗 C型肝炎ウィルス剤または H I V逆転写酵素阻害活性を有する抗 H I V剤を提供することを課題としている。

この出願は、上記の課題を解決するものとして、以下の発明を提供する。〔1〕フラーレンの炭素クラスタ一骨格を構成する隣接結合炭素原子対とともに環を構成する窒素原子を有しているフラーレン誘導体もしくはその四級アミン塩を有効成分として含有していることを特徴とする抗 C型肝炎ウィルス剤または抗 H I V剤。

〔2〕窒素原子は、炭化水素鎖を介して、もしくは炭化水素鎖を介することなしに直接に隣接結合炭素原子対の少くともいずれかに結合していることを特徴とする上記抗 C型肝炎ウィルス剤または抗 H I V剤。

〔3〕フラーレンの炭素クラスタ一骨格を構成する隣接結合炭素原子対の少くとも一つに、次式

(式中の Αおよび Βはフラーレン炭素クラスター骨格を構成する隣接して結合する炭素原子を示し、 1^ぉょぴ11²は、同一または別異に、置換基を有していてもよい炭化水素基を示し、 R ³および R⁴は、各々、同一または別異に、水素原子または置換基を有していてもよい炭化水素基を示す）

で表わされる有機結合構造を有しているフラーレン誘導体四級アミン塩を有効成分として含有していることを特徴とする抗 C型肝炎ウィルス剤または抗 Η I V剤を提供する _β

〔 4〕フラーレンの炭素クラス夕一骨格を構成する隣接結合炭素原子対の少くとも一つに、次式

R³

N - R⁵

(式中の Αおよび Βはフラーレン炭素クラスタ一骨格を構成する隣接して結合する炭素原子を示し、 R ³および R ⁴は、各々、同一または別異に、水素原子または置換基を有していてもよい炭化水素基を示し、 R ⁵は、置換基を有していてもよい炭化水素基を示す）

で表わされる有機結合構造を有しているフラーレン誘導体を有効成分として含有していることを特徴とする抗 C型肝炎ウィルス剤または抗 H I V剤。〔5〕フラーレンの炭素クラスタ一骨格を構成する隣接結合炭素原子対の少くとも一つに、次式

R⁶

R⁷

(式中の Aおよび Bはフラーレン炭素クラスター骨格を構成する隣接して結合する炭素原子を示し、 R ⁶および R ⁷は、各々、同一または別異に、水素原子または置換基を有していてもよい炭化水素基を示し、 Dおよび Eは、各々、同一または別異に、置換基を有していてもよい炭化水素基を示す）

で表わされる有機結合構造を有しているフラーレン誘導体もしくはその四級ァミン塩を有効成分として含有していることを特徵とする抗 C型肝炎ウィルス剤または抗 H I V剤。

〔6〕炭化水素基は直鎖状、分枝鎖状または環状の炭化水素基であることを特徵とする抗 C型肝炎ウィルス剤または抗 H I V剤。

〔7〕炭化水素基は、炭素数 1以上 1 6以下のアルキル基であることを特徵とする抗 C型肝炎ウィルス剤または抗 H I V剤。

〔8〕フラーレンの炭素クラスタ一骨格を構成する隣接結合炭素原子対の少くとも一つに、次式

N - R¹⁰- C O O R ¹¹

(式中の Aおよび Bは、フラーレン炭素クラスター骨格を構成する隣接して結合する炭素原子を示し、 R ⁸および R ⁹は、各々、同一または別異に、水素原子または C O O R基を示し、 Rは、水素原子または置換基を有していてもよい炭化水素基を示し、 R ^{1 Q}は、置換基を有していてもよい炭素水素鎖を示し、炭化水素鎖は異種原子を介して結合していてもよく、 R ^{1 1} R ^{1 2}および R ^{1 3}は、各々、同一または別異に、水素原子または置換基を有していてもよい炭化水素基を示す）

で表わされる有機結合構造を有しているフラーレンカルボキシル誘導体のうちの少くとも 1種を有効成分として含有していることを特徵とする抗 C型肝炎ゥィルス剤または抗 H I V剤。

〔 9〕炭化水素鎖は直鎖または分枝鎖状の炭化水素基であることを特徵とする抗 C型肝炎ウィルス剤または抗 H I V剤。

〔1 0〕上記いずれかの発明において、フラーレンは C _{6 Q}フラーレンおよび高次フラーレンのうちの少くとも 1種であることを特徵とする抗 C型肝炎ウィルス剤または抗 H I V剤。発明を実施するための最良の形態

この出願の発明は上記のとおりの特徵をもつものであるが、以下にその実施の形態について説明する。

この出願の発明の抗 C型肝炎ウィルス剤または抗 H I V剤の有効成分は、前記式であらわれる構造を有するフラーレン誘導体またはその四級ァミン塩、あるいはフラーレンカルボキシル誘導体である。

この出願の発明の抗 C型肝炎ウィルス剤および抗 H I V剤の有効成分であるフラーレン誘導体もしくはその四級ァミン塩においては、前記式における符号！^ぉょび ²、そして R ⁵は、同一または別異に、置換基を有していてもよい炭化水素基を示し、 R ³および R ⁴、そして R ⁶および R ⁷は、同一または別異に、水素原子または置換基を有していてもよい炭化水素基を示すが、ここで炭化水素基としては鎖状または環状の各種のもので、飽和または不飽和の各種のものが考慮される。脂肪族、脂環式、芳香族の各種の炭化水素が考慮される。

なかでも、炭化水素基としては、直鎖または分枝鎖状の脂肪族炭化水素基が例示される。この場合、炭素数については限定されることはないが、たとえば、炭素数 1以上 1 6以下程度のものが好適なものとして例示される。

また、前記式における符号 Dおよび Eは、各々、同一または別異に、置換基を有してもよい炭化水素鎖を示すが、この場合の炭化水素鎖としては、炭素数 1〜 3のアルキル鎖がたとえば好適なものとして例示される。

上記炭化水素基あるいは炭化水素鎖に結合していてもよい置換基については適宜であってよく、たとえばアルコキシ基、ァシル基、力ルポキシル基、エステル基アミノ基、置換アミノ基、複素環基等が考慮される。

そしてまた、四級アミン塩の対イオンとしてのァニオンについては各種のものであってよく、薬理学的に許容されるァニオンとすることができる。たとえばハロゲンィォンゃ硫酸ィオンのような無機酸ィオンや、あるいは有機酸ィォム、さらには錯イオン等であってよい。

この出願の発明のフラーレン誘導体において炭素クラス夕一骨格を構成するフラーレンについても C ₆ 0をはじめとして、 C ₇。、 C _{8 2}等の高次フラーレンであってもよい。

この出願の発明の抗 C型肝炎ウィルス剤または抗 H I V剤においては、以上のようなフラーレン誘導体おょぴその四級アミン塩のうちの 1種または 2種以上を有効成分として含有することができる。

この出願の発明の有効成分としてのフラーレン誘導体およびその四級ァミン塩の合成について説明すると、たとえば次の反応式等に従つて合成することができる。 ^CBO 十 CH₃NHCH₂C0₂H + RCHO

tduene

この反応式において、アルデヒド（RCHO) の種類を種々変更することや、反応原料の割合を変更することで、側鎖 Rや結合数 nを様々なものとすることができる。

すなわち、たとえば、トルエン中に C ₆₀、 N—メチルグリシンおょぴ様々なアルデヒド (RCHO) を溶解しアルゴン気流下加熱して N—メチルピロリジン誘導体を得る。必要とする誘導体の置換基の数に応じて反応時間、試薬量を調節する。生成物はシリカゲルカラムにて精製する。次にヨウ化メチル中室温、あるいは加熱する。このようにして様々なアルキル置換基 (R) を有する誘導体 (2—アルキル— N, N—ジメチルピロリジニゥム誘導体）やその四級ァミノ塩を得ることができる。たとえば具体的には、後述のとおり、 R² = Hで、 R⁴が H (化合物 2) C₄H₉ (化合物 3)、 C₆H₁₃ (化合物 4)、 C₉H₁₉ (化合物 5)、化合物 9、化合物 12のフラーレン誘導体等が合成される。これらは、 DMSOに 5mM以上溶解することが確認されている。

また、窒素原子に結合する前記式の符号 R¹および R ²については、上記反応式における N—メチルダリシンに代えて、各種の N—置換グリシンを用いることで、また、 CH₃ Iに代えて各種の反応原料を用いることで適宜なものとすることができる。たとえば、次の反応式等に従うことができる。 C₆₀ + C₁₀H₂₁ NHCH₂CO₂H + HCHO

toluene

すなわち、たとえば、トルエン中に C ₆ Q、 N—デシルグリシンおよびホルムアルデヒドを溶解しアルゴン気流下加熱して N—デシルピロリジン誘導体を得る。必要とする誘導体の nの数に応じて反応時間、試薬量を調節する。生成物はシリカゲルカラムにて精製する。次にヨウ化メチル中室温、あるいは加熱することにより（N—デシルー N—メチルピロリジニゥム誘導体）を得ることができる。たとえば具体的には後述のとおりの化合物 6が合成される。

また、前記式において、炭化水素鎖 Dおよび Eを持つような化合物については、たとえば、トルエン等の溶媒中に C ₆。フラーレンとピぺラジン等の含窒素環状化合物を加えて加熱攪拌すること等により合成することができ、その四級ァミン塩は、さらに C H ₃ I等を反応させることにより容易に合成することができる。このようにして、たとえば後述の化合物 1 1を合成することができる。さらにカルボキシル誘導体については、たとえばその合成法は次のように例示される。 <A>すなわち、次の反応式に従って、まず、トルエン中に C _{6 0}、ブロモマロン酸ジェチルおよび水素化ナトリウムを加えアルゴン気流下攪拌してマロン酸ジェチル誘導体を得る。必要とする誘導体の nの数に応じて反応時間、試薬量を調節する。生成物はシリカゲルカラムにて精製する。次にトルェン中にマロン酸ジェチル誘導体と水素化ナトリウムを加え、加熱環流後、直ちにメタノールを加えマロン酸誘導体（カルボキシル誘導体 1 ) を得る。

<B >また、次の反応式に従って、まず、トルエン中に C _{6 ()}、グリオキシル酸ェチル、ィミノジァセティックァシッドジェチルエステルおよび水素化ナトリゥムを加えアルゴン気流下加熱してジェチル誘導体を得る。必要とする誘導体の nの数に応じて反応時間、試薬量を調節する。生成物はシリカゲルカラムにて精製する。次にトルエン中にジェチル誘導体と水素化ナトリウムを加え、加熱環流後、直ちにメタノールを加え標記誘導体（後述のカルボキシル化合物 8 ) を得る。また、この反応において、イミノジァセティックアシッドジェチルエステルをイミノメチルァセティックァシッドエチルエステルに代えることにより後述の化合物 1 0が合成される。このようにして各種のものが合成可能であ。

そして、この出願の発明の抗 C型肝炎ウィルス剤または抗 H I V剤の有効成分としてのフラーレンカルボキシル誘導体については、前記式の符号 R ⁸および R ⁹ については、前記 R ³、 R⁴、 R ⁶、 R ⁷と同様のものであってよく、符号 R ¹ ⁰はたとえば前記同様の置換基を有していてもよい炭化水素鎖であって、これらは異種原子、たとえば酸素原子や窒素原子を介して結合していてもよい。直鎖状あるいは分枝鎖状の炭化水素、たとえばアルキル鎖であることができる。この炭化水素鎖の炭素数はたとえば 1〜： L 6程度の範囲が考慮される。また、符号 R ^{1 1} R ^{1 2}、 R ^{1 3}については、置換基を有していてもよい炭化水素基を示し、前記と同様のものを考慮することができる。

なお、フラーレン力ルポキシル誘導体は薬理的に許容される塩として用いられてもよい。

この出願の発明の薬剤については、その形態は特に制限されず、例えば、錠剤、顆粒剤、細粒剤、丸剤、散剤、カプセル剤、トローチ剤、チユアブル剤などの固形製剤、外用のためのゼリー状剤や粘調剤、エリキシル剤、シロップ剤、懸濁剤、乳剤、注射剤、輸液などの液剤であってもよい。

製剤の調製には、製剤の種類に応じて慣用の担体成分が使用できる。例えば、固形製剤の調製には、慣用の成分、例えば、デンプン、乳糖、ショ糖、マン二トール、コーンスターチなどの糖類、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロース、軽質無水ケィ酸などの賦形剤；ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルエーテル、ェチルセルロース、アラビアゴム、トラガント、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、クェン酸カルシウム、デキストリン、ぺクチンなどの結合剤；ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク、ポリエチレングリコール、コロイドシリカなどの滑沢剤；デンプン、カルボキシメチルセル口ース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウムなどの崩壌剤、崩壌助剤、保湿剤、界面活性剤などが使用できる。

液剤の調製には、慣用の成分、例えば、注射用水、水、エタノール、ェチレングリコ一ルなどの溶剤やエタノール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、 D—マンニトール、コレステロール、トリエタノールァミン、炭酸ナトリウム、クェン酸ナトリゥムなどの溶解補助剤、ステアリルトリエタノールァミン、ラウリル硫酸ナトリウム、レシチン、モノステアリン酸グリセリンなどの界面活性剤；ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシェチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースなどの親水性高分子などの懸濁化剤、塩化ナトリウム、グリセリン、 D—マンニトールなどの等張化剤、リン酸塩、酢酸塩、炭酸塩、クェン酸塩などの緩衝剤、ベンジルアルコールなどの無痛化剤、ブドウ糖、アミノ酸などが使用できる。前記固形製剤や液剤には、必要に応じて、保存剤、可溶化剤、乳化剤、分散剤、増粘剤、可塑剤、吸着剤、香料、着色剤、矯味矯臭剤、甘味剤、防腐剤、抗酸化剤などを使用できる。そして、この出願の発明の抗 C型肝炎ウィルス剤、抗 H I V剤は、製剤の形態に応じて、例えば、混和、混練、造粒、打錠、コ一テイング、滅菌処理、乳化などの慣用の方法で製造できる。なお、製剤の製造に関しては、日本薬局方製剤総則の各項を参照できる。

また、この出願の発明の薬剤は、前記のフラーレン誘導体を有効成分として含んでいるのであれば、他の薬用活性成分を含有していてもよい。

たとえば経口剤として処方する場合には、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシゥム、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、水酸化アルミニウム、水酸化ァルミニゥムゲル、ケィ酸マグネシウム、ケィ酸アルミン酸マグネシウム、合成ケィ酸アルミニウム、水酸化アルミニウム》炭酸水素ナトリウム共沈生成物、水酸化マグネシウム ·炭酸マグネシウム共沈生成物、メタケイ酸アルミン酸マグネシゥム、ジヒドロキシアルミニウムアミノアセテートなどの制酸剤、ゲンチアナ、センプリ、ホミカ、リュウタン、トウヒ、ウイキヨウ、塩化カルニチ、ムグルタミン醆塩酸塩、塩酸べタイン、塩化ぺ夕ネコールなどの健胃剤、パンクレアチン、ペプシン、塩酸リモナ一ゼ、コール酸、胆汁末、デヒドロコール酸などの消化剤、赤芽柏、ァセンャク、ゥパイ、ケッメイシ、ゲンノショウコなどの整腸剤、口ペラミド、次硝酸ビスマス、次炭酸ビスマス、塩化ベルべリンなどの止瀉剤、塩酸ジサイクロミン、臭化水素酸スコポラミン、臭化メチルァトロピン、臭化メチルスコポラミン、塩酸パパべリン、ヨウ化イソプロパミド、ベラドンナエキス、ロートエキスなどの鎮痛鎮痙剤、スクラルフアート、スルピリド、ゲファルナート、テプレノンなどの粘膜修復剤などが含まれる。これらの活性成分は一種又は二種以上使用できる。

また、この出願の発明の薬剤は他の抗 C型肝炎ウィルス剤としてインターフエロンゃリパビリン、他の抗 H I V剤としての逆転写酵素阻害剤のアジドチミジン、ラミブジン等や、プロテアーゼ阻害剤のイソジナビル、サキナビル等を含有していてもよい。

この出願の発明の薬剤については、その投与量については特に限定的ではないが、目安としては、経口投与する場合には、 1日当り体重 1 k gあたり、 0 . 0 0 5〜5 O m gの範囲で、分割投与することが考慮される。

そして、この出願の発明のフラーレン誘導体についてはその毒性は低く、薬剤として有用である。

もちろん、この出願の発明においては、ヒトへの適用が考慮されているが、非ヒト動物であってもよいことは言うまでもない。

そこで、この出願の発明者は、次表に例示したこの出願の発明の有効成分としてのフラーレン誘導体、その四級ァミン塩等の化合物について合成を行い、抗 C型肝炎ウィルスおよび抗 H I Vの活性を評価した。

8

以下に、その合成例と活性試験の結果例を説明する。

<合成例 >

1 ： C₆。—bis (N— methyl— 2— hexylpyyrolidine)の合成

C₆₀20 Omg (0. 28mmo 1 ) を脱水したトルエン 600 m 1に溶解させ、 N—メチルグリシン 5 Omg (0. 56mmo l、 2当量)、ヘプタナール 95mg (0. 83mmo l、 3当量）を加え、アルゴン気流下、 135度で 3時間加熱還流した。反応液を水、飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧下にて留去した。得られた固体をシリカゲルカラムクロマトグラフィ一（溶出溶媒は順次トルエン：へキサン =5 ： 1，トルエン 100 %、トルエン：酢酸ェチル =20 ： 5) により精製し、 C₆₀-bis(N— methyl -2-hexylpyyrolidine) の位置異性体混合物を 25mg (0. 025mmo 1) 得た（収率 9%)。

2 ： C₆。— bis(N， N-diiethyl- 2 -hexylpyyrolidinium iodido)の合成 C₆。一 bis (N—methyl— 2— hexyl爾 rolidine) 65mg (0. 065mm o 1) をヨウ化メチル 5ml中室温で 24時間攪拌して反応させた。析出した固体をトルエン、酢酸ェチルで順次洗浄し、 C₆₀— bis(N, N— dimethyl— 2 -hexylpyyrolidinium iodido) 55mg (0. 043 mm o 1) を得た。収率

<阻害活性 >

( 1 ) C型肝炎ウィルスの RNAポリメラーゼ活性を測定する実験系 (D. Dhanak et al.， J.Biol. Chem, 277, 38322-38327 (2002) )を用いてその阻害活性を調ベた。

なお、上記化合物 2に関しては主要な位置異性体を分離精製したが、他は混合物で生理活性を検討した。

その結果を、表 1に例示した。化合物 2が最も高い阻害活性を示し、位置異性体間での有意差は認められなかつた。表 1

フラーレン誘導体

2t-2 2t-3 2t-4 5 7 8 化合物

50%阻害 '濃度 ( ) 3.0 0.27 0.31 0.34 1.6 1.8 2.0

C型肝炎ウィルスの RNAポリメラーゼ阻害活性を有する化合物に関する報告は 2002年秋に発表 (D.Dhanak et al, J. Biol. Che 277, 38322-38237 (2 002))されたもののみである。次式にその化合物を示すが 50 %阻害濃度は 0. 08 Mで我々の誘導体よりは若干いいが、ほぼ同じといえる。フラーレン誘導体は世界で 2番目の C型肝炎ウイルスの RNAポリメラーゼ阻害剤であり、従来公知の次式の化合物とは構造が全く異なる新たな抗 C型肝炎ウイルス薬として有望である。

(2) また、 H I V逆転写酵素は RNAポリメラーゼの一種であることから、発明者は、その阻害活性を検討した。

実験は 50iM Tris-塩酸バッファ一 (pH 8.3)中で， 30IDM NaCl, ΙΟιπΜ MgCl 2.5 m M DTT, 1.25 g/mL poly(rA) · oligo(dT) 12 - 18, 250 iiM dTTP に調製した反応液 10 L に³² P - dTTP (800 Ci/mmol), DMS0に溶かしたサンプル 1 iL、 HIV逆転写酵素 (Ο.ΟΙϋ/iL) 1 zLを加え、全量が 20 になるようにした。 37でで

1時間インキュベーション後、その反応液 10 L を Whatman DE81濾紙にのせ、 N a₂HP(Lで 3回、 70%エタノールで 1回、エタノールで 1回洗浄した。乾燥した濾紙をパイアルビンに入れ、液体シンチレーション測定法により放射能をカウントし υ、 HIV逆転写酵素活性とした。

その結果を表 2に例示した。この出願の発明の有効成分は逆転写酵素を阻害することが確認される。抗エイズ薬として用いられている逆転写酵素阻害薬 A Z Tは核酸塩基類緣体であり、この出願の発明によつて従来のものとは異なる新しい逆転写酵素阻害剤が提供される。

そして、同じ作用点を持つものとして、現在用いられている抗 H I V薬のデラビルジン、ネビラピンの H I V逆転写酵素阻害活性 (F. ¾L Uckun et al. , Bio org · Med. Che Lett. , 1999, 9, 2721-2726) に比べても高い活性を示している。表 2—

フラーレン誘導体

Ί 2 (異性俥混合物） 3 4 5

1 C₅₀ (^ M)

1. 2 1. 0 1. 1 0. 8 0. 5 フラーレン誘導体

6 7 8 9 10 11 12

8. 9 1. 3 0. 029 1. 6 1. 0 1. 1 5. 2

<抗菌活性〉

さらに、この出願の発明について強調されることは、この出願の発明で有効成分としているフラ一レン誘導体等は抗菌活性を有していることである。

特に、 H I Vに感染すると免疫系が破壊され、様々な感染症にかかりやすくなり、死に至るため、エイズ発症者には抗 H I V剤と共に抗菌薬が用いられる場合が多い。このことから、この出願の発明のフラーレン誘導体等には抗菌活性もあるため他の抗 H I V薬より優れている。たとえば以上のようなこの出願の発明の有効成分の抗菌活性については、表

3に例示することができる。

なお、前記の化合物 2に関しては主要な位置異性体を分離精製したが、他は混合物で生理活性を検討した。

この表 3は、各種グラム陽性菌の増殖を抑制する各フラーレン誘導体等の最小濃度 (MIC)をバンコマイシン (VCM)と比較して示したものである（低濃度（数値の小さいもの）なものほど活性が高い）各フラーレン誘導体等は DMS0に溶解して菌の培養液に加えた。バンコマイシンは現在問題となっている薬剤耐性菌 (メシチリン耐性菌、 M R S A) に用いられている抗菌剤である。化合物 2の位置異性体、 2t-2, 2t-3, 2t - 4、および化合物 3、 4に有効な抗菌活性が見られたが、化合物 3、 4は化合物 2の位置異性体より活性が多少低かった。化合物 2の位置異性体、 2t-2, 2t-3， 2t - 4では菌により多少効果に差が見られるが有意差はなく、ほぼバンコマイシンに相当する抗菌活性があり、 MR S Aにも有効であった。さらに特筆すべきはバンコマイシン耐性菌 (WE)にもこれらブラ一レン誘導体等が有効な抗菌活性を示す点である。また、化合物 2の位置異性体間で差がないことは、他の化合物において位置異性体を分離する必要がないことを示している。現在、バンコマイシンに耐性な菌も出現し始めており、化合物 2はそれらに対する効果が期待される。

表 3 .C -(mg/mL) of iullepene for -gram positive bacteria

2 t-2 2 t-3 2 t-4 3 4 VC o. aureus ZWdr Jし— i 丄.56 0.78 3.12 6.25 6.25 1.56■

S. aureus M (MRSA) 0.78 1.56 3.12 6.25 12.5 1.56

S. aureus M126 (MRSA) 3.12 1.56 3.12 6.25 12.5 1.56

S.eidermidis KTCC 14990 6.25 3.12 3.12 6.25 12.5 3.12

B.J ae ATCC 8043 12.5 6.25 6.25 6.25 25 3.12

E.faecalis W-73 12.5 6.25 6.25 6.25 50 3.12

E.faecium vanA (VRE) 12.5 6.25 6.25 12.5 12.5 〉100

KfaecaliS NCTC 12201 (VRE) 12.5 3.12 6.25 6.25 25 〉100 発明の効果

以上のとおりのこの出願の発明によって、フラーレン誘導体およびフラーレンカルボキシル誘導体を有効成分とする新しい C型肝炎ウィルス R NAポリメラ一ゼ阻害活性を有する抗 C型肝炎ウィルス剤または H I V逆転写酵素阻害活性を有する抗 H I V剤とが提供される。

Claims

請求の範囲

1 . フラーレンの炭素クラスタ一骨格を構成する隣接結合炭素原子対とともに環を構成する窒素原子を有しているフラーレン誘導体もしくはその四級アミン塩を有効成分として含有していることを特徵とする抗 C型肝炎ウィルス剤または抗 H I V剤。

2 . 窒素原子は、炭化水素鎖を介して、もしくは炭化水素鎖を介することをなしに直接に隣接結合炭素原子対の少くともいずれかに結合していることを特徵とする請求項 1の抗 C型肝炎ウィルス剤または抗 H I V剤。

3 . フラーレンの炭素クラスタ一骨格を構成する隣接結合炭素原子対の少くとも一つに、次式

(式中の Aおよぴ Bはフラーレン炭素クラス夕一骨格を構成する隣接して結合する炭素原子を示し、 R ¹および R ²は、同一または別異に、置換基を有していてもよい炭化水素基を示し、 R ³および R ⁴は、各々、同一または別異に、水素原子または置換基を有していてもよい炭化水素基を示す）

で表わされる有機結合構造を有しているフラーレン誘導体四級ァミン塩を有効成分として含有していることを特徵とする請求項 1または 2の抗 C型肝炎ウイルス剤または抗 H I V剤。 '

4. フラーレンの炭素クラス夕一骨格を構成する隣接結合炭素原子対の少くとも一つに、次式 N - R^!

(式中の Aおよび Bはフラーレン炭素クラスタ一骨格を構成する隣接して結合する炭素原子を示し、 R ³および R ⁴は、各々、同一または別異に、水素原子または置換基を有していてもよい炭ィ匕水素基を示し R ⁵は、置換基を有していてもよい炭素水素基を示す）

で表わされる有機結合構造を有しているフラーレン誘導体を有効成分として含有していることを特徴とする請求項 1または 2の抗 C型肝炎ウィルス剤または抗 H I V剤。

5 . フラーレンの炭素クラスタ一骨格を構成する隣接結合炭素原子对の少くとも一つに、次式

R⁶

R⁷

(式中の Aおよび Bはフラーレン炭素クラスタ一骨格を構成する隣接して結合する炭素原子を示し、 R ⁶および R ⁷は、各々、同一または別異に、水素原子または置換基を有していてもよい炭化水素基を示し、 Dおよび Eは、各々、同一または別異に、置換基を有していてもよい炭素水素基を示す）

で表わされる有機結合構造を有しているフラーレン誘導体もしくはその四級ァミン塩を有効成分として含有していることを特徴とする請求項 1または 2の抗 C型肝炎ウィルス剤または抗 H I V剤。

6. 炭化水素鎖は直鎖状、分枝鎖状、または環状の炭化水素基であることを特徴とする請求項 1から 5のうちのいずれかの抗 C型肝炎ウィルス剤または抗 H I V剤。

7. 炭化水素基は、炭素数 1以上 16以下のアルキル基であることを特徴とする請求項 6の抗 C型肝炎ウィルス剤または抗 H I V剤。

8. フラーレンの炭素クラスター骨格を構成する隣接結合炭素原子対の少くとも一つに、次式

(式中の Aおよび Bはフラーレン炭素クラス夕一骨格を構成する瞵接して結合する炭素原子を示し、 R⁸および R⁹は、各々、同一または別異に、水素原子または COOR基を示し、 Rは、水素原子または置換基を有していてもよい炭化水素基を示し、 R¹⁰は、置換基を有していてもよい炭素水素基を示し、炭化水素鎖は異種原子を介して結合していてもよく、 R¹¹ R ¹²および R ¹³は、各々、同一または別異に、水素原子または置換基を有していてもよい炭化水素基を示す）

で表わされる有機結合構造を有しているフラーレン力ルポキシル誘導体のうちの少くとも 1種を有効成分として含有していることを特徵とする抗 C型肝炎ゥィルス剤または抗 HI V剤。

9. 炭化水素鎖は直鎖または分枝鎖状の炭化水素基であることを特徴とする請求項 8の抗 C型肝炎ウィルス剤または抗 H I V剤。

1 0 . フラーレンは C _{6 0}フラーレンおよび高次フラーレンのうちの少くとも 1種であることを特徵とする請求項 1ないし 9のいずれかの抗 C型肝炎ウィルス剤または抗 H I V剤。