WO2004055857A2 - Verfahren zur herstellung eines probenträgers für die maldi-massenspektrometrie - Google Patents

Verfahren zur herstellung eines probenträgers für die maldi-massenspektrometrie Download PDF

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WO2004055857A2
WO2004055857A2 PCT/EP2003/014230 EP0314230W WO2004055857A2 WO 2004055857 A2 WO2004055857 A2 WO 2004055857A2 EP 0314230 W EP0314230 W EP 0314230W WO 2004055857 A2 WO2004055857 A2 WO 2004055857A2
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maldi matrix
points
maldi
flat structure
layer
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Karsten Reihs
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Sunyx Surface Nanotechnologies Gmbh
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    • H—ELECTRICITY
    • H01—ELECTRIC ELEMENTS
    • H01J—ELECTRIC DISCHARGE TUBES OR DISCHARGE LAMPS
    • H01J49/00—Particle spectrometers or separator tubes
    • H01J49/02—Details
    • H01J49/04—Arrangements for introducing or extracting samples to be analysed, e.g. vacuum locks; Arrangements for external adjustment of electron- or ion-optical components
    • H01J49/0409—Sample holders or containers
    • H01J49/0418—Sample holders or containers for laser desorption, e.g. matrix-assisted laser desorption/ionisation [MALDI] plates or surface enhanced laser desorption/ionisation [SELDI] plates

Definitions

  • the present invention relates to a method for producing a sample carrier with a large number of MALDI matrix points, a flat structure obtainable with the method according to the invention and a long-term stable flat structure.
  • Mass spectrometry has become increasingly popular for the analysis of samples, for example in drug chemistry or in biological research and production.
  • Mass spectrometry with ionization through matrix-assisted laser desorption and ionization (MALDI) is preferably used for the analysis of biomolecules in the samples.
  • MALDI In the MALDI process, in particular biomolecules and / or biological material in the form of a drop of liquid are metered onto a so-called MALDI matrix point, for example pipetted, and dried.
  • the crystals that form are examined, for example, with a MALDI-TOF mass spectrometer in linear or reflector mode.
  • Nordhoff et. al. "MALDI-MS as a new method for the analysis of nucleic acid (DNA and RNA) with molecular masses up to 150,000 Dalton, Application of modern mass spectrometric methods to plant science research, Oxford University press, (1996) pages 86-101 which is hereby introduced as a reference and is therefore considered part of the disclosure.
  • the MALDI matrix points are produced according to the prior art by applying the matrix substance as a solution in the form of a drop of liquid to a sample carrier and drying it there.
  • this process is very complex despite automation techniques.
  • the shape of the MALDI matrix points is not uniform and is not homogeneous in itself.
  • the position of the matrix points on the sample carrier is relatively inaccurate. In order to prevent two neighboring points from running into one another, their spacing must be chosen to be correspondingly large. It is therefore an object of the invention to provide a method for producing a flat structure with a large number of MALDI matrix points which does not have the disadvantages of the prior art.
  • the object is achieved according to the invention with a method for producing a flat structure, preferably a sample carrier, with a multiplicity of MALDI matrix points, in which the MALDI matrix points are applied to the sample carrier by precipitation of the MALDI matrix substance from the gas phase become.
  • the MALDI matrix points can have any shape. They can be produced very reproducibly, are very homogeneous and have a surface structure with which very good mass spectra can be achieved.
  • a flat structure in the sense of the invention is any shaped body with an arbitrarily designed surface.
  • the fabric is preferably a plate with a flat surface, very particularly preferably a sample carrier, which, however, preferably has no indentations.
  • the sheet according to the invention is most preferably a film.
  • a MALDI matrix point in the sense of the invention essentially consists of at least one MALDI matrix substance familiar to the person skilled in the art. preferred
  • MALDI matrix substances are 3-hydroxypicolinic acid, ⁇ - cyano-4-hydroxycinnamic acid, 2,5-dihydroxybenzoic acid, sinapic acid, 2,4,6-trihydroxyacetophenone nitrobenzyl alcohol, nicotinic acid, ferulic acid, caffeic acid, 2-aminobenzoic acid, picolinic acid, 3 -Aminobenzoic acid, 2,3,4-trihydroxyacetophenone, 6-aza-2-thiothymidine, urea, succinic acid, adipic acid, malonic acid or a mixture thereof.
  • the MALDI matrix substance ⁇ - cyano-4-hydroxycinnamic acid is very particularly preferred.
  • SY0036PCT A compound is preferably chosen as the MALDI matrix substance, which sublimes on the fabric and is visible to the human eye.
  • the MALDI matrix points are generated by precipitation of the MALDI matrix substance from the gas phase.
  • Precipitation from the gas phase in the sense of the invention is any process in which the MALDI matrix substance is transferred from the gas phase to the fabric. Condensation or sublimation may be mentioned as examples.
  • the MALDI matrix points are preferably applied to the fabric by sublimation.
  • Sublimation in the sense of the invention includes that the MALDI matrix substance is transferred as a solid into the gas phase and / or is deposited in a solid form from the gas phase on the fabric.
  • Sublimation preferably takes place in a vacuum.
  • the solid is particularly preferably heated for sublimation.
  • MALDI matrix substances are particularly preferably used in parallel or sequentially.
  • the MALDI matrix substances can be used to produce different MALDI matrix points.
  • a MALDI matrix point it is also conceivable for a MALDI matrix point to have a substructure, for example partial points which are present separately from one another, each of which is composed of a different MALDI matrix substance.
  • a substructure can also be, for example, concentric circular rings, which each consist of a different MALDI matrix substance.
  • the sample carrier is preferably covered during the precipitation from the gas phase, particularly preferably sublimation, by a shaped body, a so-called mask, which has continuous recesses. It is only in the area of these recesses that the MALDI matrix substance is deposited on the fabric and forms a MALDI matrix point or partial point there.
  • This mask can have any number of recesses, which can have any shape.
  • the recesses can be round, rectangular, square, triangular or oval, to name just a small number of the possible shapes.
  • the shape can be used to differentiate the respective MALDI matrix substances on a flat structure.
  • the fabric can also be originally covered by several masks, which are then removed one after the other
  • SY0036PCT 3 are used, for example, to apply different MALDI matrix substances to different areas of the fabric according to the invention.
  • the mask has further recesses with which information can be transferred to the flat structure.
  • the MALDI matrix substance is deposited on the fabric so that the information is visible there. Examples of information in the sense of the invention are the labeling of the rows and columns of a grid, abbreviations for the MALDI matrix substance used, but also adjustment points which allow an exact adjustment of the fabric in the corresponding analysis device.
  • the MALDI matrix points preferably have an area of 1 ⁇ m 2 - 10 mm 2 .
  • a drop of liquid can be deposited on such a surface and preferably anchored in such a way that it does not detach itself from the flat structure according to the invention when it hangs downwards.
  • the MALDI matrix points are preferably arranged along an exact grid, which enables simple control of metering and / or analyzing machines.
  • the MALDI matrix points can have any shape. Examples of possible shapes are rectangular, square, triangular or oval.
  • the shape of the MALDI matrix points can be used to differentiate them, because the shape can be recognized, for example, under a microscope in the mass spectrometer during the analysis. For example, a specific form can be assigned to a specific MALDI matrix substance.
  • a MALDI matrix point also preferably has a substructure. This substructure can consist of several sub-points which are isolated from one another and which preferably each consist of a different MALDI matrix substance. However, the substructure can also have several concentric circular rings.
  • the embodiment with several partial points has the advantage that a single drop of a substance to be analyzed, which is brought into contact with the MALDI matrix point, simultaneously wets several partial points and thus examinations with several different matrixes at one MALDI matrix point - Substances can be carried out.
  • the MALDI matrix points or partial points preferably represent regions which are better wettable than their surroundings and which are in each case completely surrounded by a region which is less wettable, preferably ultraphobic. This embodiment makes it possible to deposit a drop of liquid at a very specific location and anchor it there comparatively firmly.
  • the crystalline structure of the MALDI matrix points or partial points preferably has a crystallite size of ⁇ 1 ⁇ m.
  • This preferred embodiment of the present invention has the advantage, for example, that the MALDI matrix points are very well and uniformly dissolved by the substance to be tested and / or that a very good signal results.
  • Ultraphobic in the sense of the invention means that the contact angle of a drop of water and / or oil lying on an ultraphobic surface is more than 150 ° , preferably more than 160 ° and most preferably more than 170 ° and / or the roll angle 10 ° does not exceed.
  • the roll angle is understood to be the angle of inclination of a basically planar but structured surface against the horizontal, in which a standing water and / or oil drop with a volume of 10 ⁇ l is moved due to the force of gravity when the surface is inclined.
  • ultraphobic surfaces are described, for example, in WO 98/23549, WO 96/04123, WO 96/21523, WO 00/39369, WO 00/39368, WO 00/39239, WO 00/39051, WO 00/38845 and WO 96 / 34697, which are hereby introduced as a reference and are therefore considered part of the disclosure.
  • Such an ultraphobic surface is described in international patent application WO 99/10322, which is hereby introduced as a reference and is therefore considered part of the disclosure.
  • the fabric is designed as a disposable item.
  • a multilayer sheet with a first layer with an ultraphobic surface and a carrier layer is particularly suitable for this embodiment, the first layer being reversibly applied to the carrier layer and the maximum local deviation of the sheet from the flatness ⁇ 100 ⁇ m, particularly preferably ⁇ 20 ⁇ m over a length of 100 mm.
  • This flat structure has the advantage that the first layer with the ultraphobic surface can be detached from the carrier layer after one or more uses and can be replaced by a new first layer, so that it is excluded that this first layer has been contaminated by previous experiments ,
  • the first layer with the ultraphobic surface is particularly inexpensive to manufacture as a disposable item.
  • the flatness defined according to the invention ensures that the flat structure can be used in all common mass spectrometric and / or optical analysis devices.
  • the first layer is glued to the carrier layer.
  • the fabric according to the invention can be used in a variety of ways, but is preferably suitable for mass spectroscopic and / or optical analyzes.
  • SY0036PCT Another object of the present invention is a long-term stable sheet with at least one MALDI matrix point, characterized in that it is surrounded by a hollow body in which a vacuum prevails and which consists of a water vapor-impermeable material.
  • the fabric is completely surrounded by a hollow body in which there is a vacuum, preferably a pressure ⁇ 100 mbar.
  • the hollow body is made from a gas-impermeable, in particular water vapor-impermeable, material.
  • the hollow body is preferably opaque.
  • the hollow body is preferably made of a plastic film which is sealed on at least one side.
  • the plastic film particularly preferably has a gas barrier layer, in particular a water vapor barrier layer. This barrier layer is preferably made of aluminum.
  • the fabric according to the invention has the advantage that, in particular, the MALDI matrix points on the fabric are not subject to any or only a slight aging process over a period of at least several months.
  • Figure 1 shows the cross section of a multi-layer fabric according to the invention.
  • Figure 2 shows the surface of a fabric according to the invention.
  • FIG. 3 shows a mask for carrying out the method for producing a flat structure according to the invention.
  • FIG. 4 shows a MALDI matrix point obtainable with the method according to the invention.
  • FIG. 5 shows the use of the fabric according to the invention in the coupling of liquid chromatography and MALDI examinations.
  • a sample carrier was made as follows:
  • a roll-polished aluminum sheet (99.9%) with an area of 26 ⁇ 76 mm 2 and a thickness of 0.15 mm was degreased at room temperature with chloroform (pa) for 20 seconds in aqueous NaOH (5 g / l) at 50 ° C.
  • the mixture was then rinsed in distilled water for 30 s, then in NaHCO 3 (20 g / l) for 60 s at 40 ° C., then again in distilled water for 30 s and dried in a drying cabinet at 80 ° C. for 1 hour.
  • the sheet treated in this way was coated with an approximately 50 nm thick gold layer by sputtering in a high vacuum. Finally, the sample was immersed in a closed vessel for 24 hours by immersion in a solution of the thiol CF 3 - (CF 2 ) 7 - (CH 2 ) 2 -SH in benzotrifluoride (pa, 1 g / l) at room temperature
  • the surface For water, the surface has a static contact angle of 178 °. If the surface is inclined by ⁇ 2 °, a water drop with a volume of 10 ⁇ l rolls off.
  • a high vacuum evaporation plant (Edwards E306)
  • 0.5 g of ⁇ -cyano-4-hydroxycinnamic acid is placed in a heatable quartz crucible with an upward opening of 10 mm in diameter.
  • a sample holder which is covered with a mask according to FIG. 3, is mounted at a distance of 150 mm.
  • the quartz crucible is heated with the help of external windings made of tungsten wire.
  • the temperature of the solid is regulated in the powder bed with a thermocouple at 180 ° C.
  • the layer thickness of the deposited film of o-cyano-4-hydroxycinnamic acid is determined with the aid of a quartz crystal thickness gauge, which is previously calibrated with an absolute layer thickness determination (e.g. atomic force microscope).
  • the sublimation is broken off at a layer thickness of 1 ⁇ m.
  • the MALDI matrix points obtained are shown by way of example in FIG. 4.
  • a mass spectrum of this MALDI matrix point was obtained as follows:
  • the peptides were prepared for mass spectrometric analysis as follows: 0.5 ⁇ l of an aqueous solution, each 5 fmol of peptides 1-6, 1 fmol of peptide 7 and a volume percent of trifluoroacetic acid and 1 mM of the nonionic detergent n-octyl-ß-D- contained glucopyranoside were pipetted onto the MALDI matrix point. After the solvent completely SY0036PCT 9 had evaporated, the sample thus prepared was washed once. For this purpose, the entire sample holder was exchanged for a 0.1% trifluoroacetic acid for 2 seconds and immediately thereafter, for the removal of remaining liquid residues, held in a nitrogen gas stream (2.5 bar) for 10 seconds.
  • the mass spectrum of positive molecular ions was recorded in a MALDI time-of-flight mass spectrometer from Bruker Daltonik, Bremen (Scout-MTP Autoflex) in reflector operating mode and with time-delayed ion extraction (delay time: 70 nanoseconds) and 20 kV acceleration voltage. To improve the signal-to-noise ratio, 100 single-shot spectra were added up.
  • FIG. 1 shows the fabric 1 that consists of a first layer 2 with an ultraphobic surface 3 and a carrier layer 4.
  • the first layer 2 is fixed on the carrier layer by means of an adhesive layer 5.
  • the person skilled in the art recognizes that the adhesive layer 5 does not necessarily have to be present.
  • the adhesive layer 5 consists of an electrically conductive material, so that there is an electrical contact between the first layer 2 and the carrier material.
  • FIG. 2 shows a flat structure according to the invention, onto which several MALDI matrix points 6 have been sublimed in a grid-like manner.
  • the MALDI matrix points in the respective rows 1-4 have different shapes which symbolize the user that different MALDI-Marix substances were used in each row.
  • the MALDI matrix point 2D is shown enlarged so that it can be seen that it consists of four partial points 8. These sub-points 8 are each made up of different MALDI matrix substances, so that four different analyzes can be carried out at this MALDI matrix point.
  • an inscription 7 has additionally been applied to the flat structure, which informs the user of the MALDI matrix substance used in this row.
  • the fabric has two centering crosses 9.
  • the inscription and the centering crosses are sublimed like the MALDI matrix points on the fabric by placing a mask over the fabric that has corresponding recesses.
  • the person skilled in the art recognizes that the rows 1-4 of the grid were produced one after the other.
  • Figure 3 shows the mask with 8 x 8 openings 12 with a diameter of 0.8 mm with a distance of the center points of 2.25 mm (not to scale).
  • FIG. 4 shows an optical micrograph of a matrix spot obtained with the mask from FIG. 3.
  • FIG. 5 shows the very advantageous use of the sample carrier according to the invention in the coupling of liquid chromatography and MALDI examination (LC-MALDI coupling).
  • SY0036PCT 11 Mixtures of substances are often first separated chromatographically before a MALDI examination. Examples are mixtures of peptides that have been generated by enzymatic (eg trypsin) peptide degradation. After the chromatographic separation, the fractions of the eluate are then applied to the MALDI matrix points 6 of the sample holder 1.
  • enzymatic eg trypsin
  • MALDI matrix points 6 are used for this, which are very close to each other, but are still completely enclosed by an ultraphobic area.
  • the distances (measured from center to center) of the MALDI matrix points are 1.5 times their diameter.
  • MALDI matrix points which were created by sublimation via masks, their location and size are very precisely defined. In this way it can be achieved that the liquid can run out of the opening 11 of the LC column 10 for application to the MALDI matrix points continuously. A separate collection of the fractions in vessels with subsequent pipetting onto the matrix points or a discontinuous generation of fractions by lingering the outlet opening over a MALDI matrix point and then quickly moving on to the next MALDI matrix point is omitted.
  • the sample carrier 1 is moved at a constant speed under the outlet opening 11.
  • Each MALDI matrix point now captures a constant volume of the liquid that is dispensed from the outlet opening.
  • the process is started at point A and meanders across all points to point E.
  • the MALDI matrix points then contain the entire eluate of the chromatography on the MALDI matrix points A to E in fractions that correspond to the constant volume, that every MALDI matrix point takes up. This volume can be changed by changing the speed at which the carrier 1 is displaced under the entrance opening 11.

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Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung eines Probenträgers mit einer Vielzahl von MALDI-Matrix-Punkten, ein Flächengebilde erhältlich mit dem erfindungsgemässen Verfahren sowie ein langzeitstabiles Flächengebilde.

Description

Verfahren zur Herstellung eines Probenträgers für die MALDI-
Massenspektrometrie
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung eines Probenträgers mit einer Vielzahl von MALDI-Matrix-Punkten, ein Flächengebilde erhältlich mit dem erfindungsgemäßen Verfahren sowie ein langzeitstabiles Flächengebilde.
Für die Analyse von Proben beispielsweise in der Wirkstoffchemie oder in der biologischen Forschung und Produktion hat sich vermehrt die Massenspektrometrie durchgesetzt. Für die Analyse von in den Proben befindlichen Biomolekülen wird vorzugsweise die Massenspektrometrie mit Ionisierung durch Matrix-unterstützte Laserdesorption und Ionisierung (MALDI) eingesetzt.
Bei dem MALDI-Verfahren werden insbesondere Biomoleküle und/oder biologisches Material in Form eines Flüssigkeitstropfens auf einen sogenannten MALDI-Matrix- Punkt dosiert, beispielsweise pipettiert, und getrocknet. Die sich dabei bildenden Kristalle werden beispielsweise mit einem MALDI-TOF Massenspektrometer im linearen- oder im Reflektor-Betrieb untersucht. Details zu diesem Verfahren können Nordhoff et. al. „ MALDI-MS as a new method for the analysis of nucleic acid (DNA and RNA) with molecular masses up to 150,000 Dalton, Application of modern mass spectrometric methods to plant science research, Oxford University press, (1996) Seite 86- 101 entnommen werden, das hiermit als Referenz eingeführt wird und somit als Teil der Offenbarung gilt.
Die MALDl-Matrix-Punkte werden gemäß dem Stand der Technik erzeugt, indem die Matrix-Substanz als Lösung in Form eines Flüssigkeitstropfens auf einen Probenträger aufgebracht und dort getrocknet wird. Insbesondere bei Serienversuchen, bei denen teilweise mehr als 200 MALDl-Matrix-Punkte auf den Probenträger aufgebracht werden müssen, ist dieses Verfahren trotz Automationstechniken sehr aufwendig. Darüber hinaus sind die MALDl-Matrix- Punkte in ihrer Form-nicht gleichmäßig und in sich nicht homogen. Weiterhin ist die Position der Matrix-Punkte auf dem Probenträger relativ ungenau. Um ein Ineinanderlaufen zweier benachbarter Punkte zu verhindern, muß deren Abstand entsprechend groß gewählt werden. Es stellt sich deshalb die Aufgabe ein Verfahren zur Herstellung eines Flächengebildes mit einer Vielzahl von MALDI-Matrix-Punkten zur Verfügung zu stellen, das die Nachteile des Standes der Technik nicht aufweist.
Gelöst wird die Aufgabe erfindungsgemäß mit einem Verfahren zur Herstellung eines Flächengebildes, vorzugsweise eines Probenträgers, mit einer Vielzahl von MALDI- Matrix-Punkten, bei dem die MALDl-Matrix-Punkte durch Niederschlag der MALDI- Matrix-Substanz aus der Gasphase auf den Probenträger aufgetragen werden.
Es war für den Fachmann überaus erstaunlich und nicht zu erwarten, dass es mit dem erfindungsgemäßen Verfahren gelingt, eine beliebige Anzahl von MALDI-Matrix- Punkten gleichzeitig zu erzeugen. Die MALDl-Matrix-Punkte können eine beliebige Form aufweisen. Sie sind sehr gut reproduzierbar herstellbar, sehr homogen und weisen eine Oberflächenstruktur auf, mit der sich sehr gute Massenspektren erzielen lassen.
Ein Flächengebilde im Sinne der Erfindung ist jeder beliebige Formkörper mit einer beliebig gestalteten Oberfläche. Vorzugsweise ist das Flächengebilde jedoch eine Platte mit einer ebenen Oberfläche, ganz besonders bevorzugt ein Probenträger, der jedoch vorzugsweise keine Einbuchtungen aufweist. Am meisten bevorzugt ist das erfindungsgemäße Flächengebilde eine Folie.
Ein MALDI-Matrix-Punkt im Sinne der Erfindung besteht im wesentlichen aus mindestens einer dem Fachmann geläufigen MALDI-Matrix-Substanz. Bevorzugte
MALDI-Matrix-Substanzen sind 3-Hydroxypicolinsäure, α-Cyano-4-hydroxy- zimtsäure, 2,5-Dihydroxybenzoesäure, Sinapinsäure, 2,4,6-Trihydroxyacetophenon Nitrobenzylalkohol, Nikotinsäure, Ferulasäure, Kaffeesäure, 2-Aminobenzoesäure, Picolinsäure, 3-Aminobenzoesäure, 2,3,4-Trihydroxyacetophenon, 6-Aza-2- thiothymidin, Harnstoff, Bernsteinsäure, Adipinsäure, Malonsäure oder deren Mischung. Ganz besonders bevorzugt ist die MALDI-Matrix-Substanz α-Cyano-4- hydroxyzimtsäure.
SY0036PCT Vorzugsweise wird als MALDI-Matrix-Substanz eine Verbindung gewählt, die auf dem Flächengebilde sublimiert und für das menschliche Auge sichtbar ist.
Erfindungsgemäß werden die MALDl-Matrix-Punkte durch Niederschlag der MALDI- Matrix-Substanz aus der Gasphase erzeugt. Niederschlag aus der Gasphase im Sinne der Erfindung ist jedes Verfahren, bei dem die MALDI-Matrix-Substanz aus der Gasphase auf das Flächengebilde übertragen wird. Beispielhaft seien Kondensation oder Sublimation genannt. Vorzugsweise erfolgt die Auftragung der MALDl-Matrix- Punkte auf das Flächengebilde jedoch durch Sublimation. Sublimation im Sinne der Erfindung beinhaltet, dass die MALDI-Matrix-Substanz als Feststoff in die Gasphase überführt und/oder aus der Gasphase auf dem Flächengebilde feststoffförmig niedergeschlagen wird. Die Sublimation findet vorzugsweise im Vakuum statt . Besonders bevorzugt wird der Feststoff zur Sublimation erwärmt. Vorzugsweise werden bei dem Niederschlag aus der Gasphase, besonders bevorzugt der Sublimation, mehrere MALDI-Matrix-Substanzen besonders bevorzugt parallel oder sequentiell eingesetzt. Die MALDI-Matrix-Substanzen können zur Herstellung unterschiedlicher MALDl-Matrix-Punkte eingesetzt werden. Es ist aber auch denkbar, dass ein MALDI-Matrix-Punkt eine Substruktur, beispielsweise separat voneinander vorliegende Teilpunkte, aufweist, die jeweils aus einer unterschiedlichen MALDI- Matrix-Substanz aufgebaut sind. Eine Substruktur können aber auch beispielsweise konzentrische Kreisringe sein, die jeweils aus einer unterschiedlichen MALDI-Matrix- Substanz bestehen.
Vorzugsweise wird der Probenträger während des Niederschlags aus der Gasphase, besonders bevorzugt der Sublimation, von einem Formkörper, einer sogenannten Maske, bedeckt, die durchgehende Ausnehmungen aufweist. Nur im Bereich dieser Ausnehmungen schlägt sich die MALDI-Matrix-Substanz auf dem Flächengebilde nieder und bildet dort einen MALDI-Matrix-Punkt oder Teilpunkt. Diese Maske kann eine beliebige Anzahl von Ausnehmungen aufweisen, die eine beliebige Form haben können. Beispielsweise können die Ausnehmungen rund, rechteckig, quadratisch, dreieckig oder oval sein, um nur eine kleine Anzahl der möglichen Formen zu nennen. Die Form kann zur Unterscheidung der jeweiligen MALDI-Matrix-Substanzen auf einem Flächengebilde herangezogen werden. Das Flächengebilde kann auch ursprünglich von mehreren Masken bedeckt sein, die dann nacheinander entfernt
SY0036PCT 3 werden, um beispielsweise auf unterschiedliche Bereiche des erfindungsgemäßen Flächengebildes unterschiedliche MALDI-Matrix-Substanzen aufzutragen.
In einer besonders bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung weist die Maske weitere Ausnehmungen auf, mit denen Informationen auf das Flächengebilde übertragen werden können. Im Bereich dieser Ausnehmungen schlägt sich die MALDI-Matrix-Substanz auf dem Flächengebilde nieder, so dass die Information dort sichtbar wird. Beispiele für Informationen im Sinne der Erfindung sind die Beschriftung der Reihen und Spalten eines Rasters, Kürzel für die verwendete MALDI-Matrix-Substanz aber auch Justierpunkte, die eine exakte Justierung des Flächengebildes in dem entsprechenden Analysegerät erlauben.
Vorzugsweise haben die MALDl-Matrix-Punkte eine Fläche von 1 μm2 - 10 mm2. Auf einer derartigen Fläche läßt sich ein Flüssigkeitstropfen absetzen und vorzugsweise so verankern, dass er sich selbst nach unten hängend nicht von dem erfindungsgemäßen Flächengebilde löst.
Weiterhin bevorzugt sind die MALDl-Matrix-Punkte entlang eines exakten Rasters angeordnet, das ein einfaches Ansteuern von Dosier- und/oder Analysierautomaten ermöglicht. Die MALDl-Matrix-Punkte können eine beliebige Form aufweisen. Beispiele für mögliche Formen sind rechteckig, quadratisch, dreieckig oder oval. Die Form der MALDl-Matrix-Punkte kann zu deren Unterscheidung herangezogen werden, weil die Form beispielsweise unter einem Mikroskop im Massenspektrometer bei der Analyse erkennbar ist. Beispielsweise kann eine bestimmte Form einer bestimmten MALDI-Matrix-Substanz zugeordnet werden. Weiterhin bevorzugt weist ein MALDI-Matrix-Punkt eine Substruktur auf. Diese Substruktur kann aus mehreren von einander isolierten Teilpunkten bestehen, die vorzugsweise jeweils aus einer unterschiedlichen MALDI-Matrix-Substanz bestehen. Die Substruktur kann aber auch mehrere konzentrische Kreisringe aufweisen. Insbesondere die Ausführungsform mit mehreren Teilpunkten hat den Vorteil, dass ein einziger Tropfen einer zu analysierenden Substanz, der mit dem MALDI-Matrix- Punkt in Kontakt gebracht wird, gleichzeitig mehrere Teilpunkte benetzt und somit an einem MALDI-Matrix-Punkt Untersuchungen mit mehreren verschiedenen Matrix- Substanzen durchgeführt werden können.
SY0036PCT 4 Vorzugsweise stellen die MALDl-Matrix-Punkte oder Teilpunkte Bereiche dar, die besser benetzbar als ihre Umgebung sind und die jeweils von einem schlechter benetzbaren, vorzugsweise ultraphoben Bereich vollständig umschlossen sind. Durch diese Ausführungsform ist es möglich, einen Flüssigkeitstropfen an einem ganz bestimmten Ort abzulegen und dort vergleichsweise fest zu verankern.
Vorzugsweise weist die kristalline Struktur der MALDl-Matrix-Punkte oder Teilpunkte eine Kristallit-größe < 1 μm auf. Diese bevorzugte Ausführungsform der vorliegenden Erfindung hat beispielsweise den Vorteil, dass die MALDl-Matrix-Punkte von der zu testenden Substanz sehr gut und gleichmäßig angelöst werden und/oder dass ein sehr gutes Signal resultiert.
Ultraphob im Sinne der Erfindung bedeutet, dass der Kontaktwinkel eines Wasser- und/oder Öltropfens, der auf einer ultraphoben Oberfläche liegt, mehr als 150°, vorzugsweise mehr als 160° und am meisten bevorzugt mehr als 170° beträgt und/oder der Abrollwinkel 10° nicht überschreitet. Als Abrollwinkel wird der Neigungswinkel einer grundsätzlich planen aber strukturierten Oberfläche gegen die Horizontale verstanden, bei dem ein stehender Wasser- und/oder Öltropfen mit einem Volumen von 10 μl aufgrund der Schwerkraft bei einer Neigung der Oberfläche bewegt wird. Solche ultraphoben Oberflächen sind zum Beispiel in der WO 98/23549, WO 96/04123, WO 96/21523, WO 00/39369, WO 00/39368, WO 00/39239, WO 00/39051, WO 00/38845 und WO 96/34697 offenbart, die hiermit als Referenz eingeführt werden und somit als Teil der Offenbarung gelten.
In einer bevorzugten Ausführungsform weisen die ultraphoben Bereiche eine Oberflächentopographie auf, bei der die Ortsfrequenz der einzelnen Fourier- komponenten und deren Amplitude a (f) ausgedrückt durch das Integral S (log(f)) = a(f) . f errechnet zwischen den Integrationsgrenzen log (fi/μm"1) = -3 und log (f2/μnrr1) = 3 mindestens 0,3 beträgt und die aus einem hydrophoben oder insbesondere oleophoben Material besteht oder mit einem haltbar hydrophobierten und/oder insbesondere haltbar oleophobierten Material beschichtet sind. Eine solche ultraphobe Oberfläche ist in der internationalen Patentanmeldung WO 99/10322 beschrieben, die hiermit als Referenz eingeführt wird und somit als Teil der Offenbarung gilt.
SY0036PCT 5 Das erfindungsgemäße Verfahren eignet sich insbesondere zur Herstellung von Flächengebilden, mit einer Vielzahl von MALDI-Matrix-Punkten. Dieses Flächengebilde ist deshalb ebenfalls Gegenstand der vorliegenden Erfindung.
In einer bevorzugten Ausführungsform wird das Flächengebilde als Einmalartikel gestaltet. Für diese Ausführungsform ist insbesondere ein mehrschichtiges Flächengebilde mit einer ersten Schicht mit einer ultraphoben Oberfläche und einer Trägerschicht geeignet, wobei die erste Schicht auf der Trägerschicht reversibel aufgebracht ist und die maximale lokale Abweichung des Flächengebildes von der Planheit <100 μm, besonders bevorzugt < 20 μm auf einer Länge von 100 mm beträgt.
Dieses Flächengebilde hat den Vorteil, dass die erste Schicht mit der ultraphoben Oberfläche nach einmaliger oder mehrmaliger Verwendung von der Trägerschicht abgelöst werden kann und durch eine neue erste Schicht ersetzt werden kann, so dass ausgeschlossen ist, dass diese erste Schicht durch vorhergehende Experimente kontaminiert worden ist. Die erste Schicht mit der ultraphoben Oberfläche ist als Einmalartikel besonders günstig herzustellen. Durch die erfindungsgemäß definierte Planheit ist sichergestellt, dass das Flächengebilde in allen gängigen massenspektrometrischen und/oder optischen Analysegeräten einsetzbar ist.
In einer bevorzugten Ausführungsform des Flächengebildes ist die erste Schicht auf die Trägerschicht aufgeklebt.
Weiterhin bevorzugt besteht zwischen der ersten Schicht und der Trägerschicht ein elektrischer Kontakt. Diese Ausführungsform ist insbesondere bei massenspektroskopischen Analysen von Vorteil.
Das erfindungsgemäße Flächengebilde ist mannigfaltig einsetzbar, vorzugsweise eignet es sich jedoch bei massenspektroskopischen und/oder optischen Analysen.
SY0036PCT Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein langzeitstabiles Flächengebilde mit mindestens einem MALDI-Matrix-Punkt, dadurch gekennzeichnet, dass es von einem Hohlkörper umgeben ist, in dem Vakuum herrscht und der aus einem wasserdampfundurchlässigen Material besteht.
Bezüglich des Flächengebildes und der MALDl-Matrix-Punkte wird auf die oben stehende Offenbarung verweisen.
Erfindungsgemäß wird das Flächengebilde von einem Hohlkörper vollständig umgeben, in dem Vakuum, vorzugsweise ein Druck < 100 mbar herrscht.
Weiterhin erfindungsgemäß ist der Hohlkörper aus einem gasundurchlässigen, insbesondere wasserdampfundurchlässigen, Material gefertigt.
Vorzugsweise ist der Hohlkörper lichtundurchlässig.
Vorzugsweise ist der Hohlkörper aus einer Kunststoffolie gefertigt, die an mindestens einer Seite gesiegelt ist. Besonders bevorzugt weist die Kunststoffolie eine Gasbarriereschicht , insbesondere eine Wasserdampfbarriereschicht auf. Vorzugsweise ist diese Barriereschicht aus Aluminium.
Das erfindungsgemäße Flächengebilde hat den Vorteil, daß insbesondere die MALDl-Matrix-Punkte auf dem Flächengebilde über einen Zeitraum von zumindest mehreren Monaten keinem oder nur einem geringen Alterungsprozeß unterliegen.
Im folgenden wird die Erfindung anhand von Beispiel 1 und Figur 1 - 5 erläutert. Diese Erläuterungen sind lediglich beispielhaft und schränken den allgemeinen Erfindungsgedanken nicht ein.
Figur 1 zeigt den Querschnitt eines erfindungsgemäßen mehrschichtigen Flächengebildes.
Figur 2 zeigt die Oberfläche eines erfindungsgemäßen Flächengebildes.
SY0036PCT Figur 3 zeigt eine Maske zur Durchführung des Verfahrens zur Herstellung eines erfindungsgemäßen Flächengebildes.
Figur 4 zeigt einen MALDI-Matrix-Punkt erhältlich mit dem erfindungsgemäßen Verfahren.
Figur 5 zeigt die Verwendung des erfindungsgemäßen Flächengebildes bei der Kopplung von Flüssigkeitschromatographie und MALDI-Untersuchungen.
Beispiel 1:
Ein Probenträger wurde wie folgt hergestellt:
Ein walzpoliertes AI-Blech (99,9%) mit einer Fläche von 26x76mm2 und einer Dicke von 0,15 mm wurde bei Raumtemperatur mit Chloroform (p.a.) anschließend 20s in wässriger NaOH (5g/l) bei 50°C entfettet.
Danach wurde 20s in H3PO4 (100g/l) vorgebeizt, 30s in destilliertem Wasser gespült und 90s in einer Mischung von HCI/H3BO3 (je 4g/l) bei 35°C und 120mA/cm2 bei 35V Wechselspannung elektrochemisch gebeizt.
Nach 30s Spülung in Wasser und 30s alkalischer Spülung in wässiger NaOH (5g/l) wurde erneut 30s in destilliertem Wasser gespült und anschließend 90s in H2SO4 (200g/l) bei 25°C mit 30mA/cm2 bei 50V Gleichspannung anodisch oxidiert.
Danach wurde 30s in destilliertem Wasser, dann 60s bei 40°C in NaHCO3 (20 g/l), dann wieder 30s in destilliertem Wasser gespült und 1 Stunde bei 80°C im Trockenschrank getrocknet.
Das so behandelte Blech wurde mit einer etwa 50nm dicken Goldschicht durch Kathodenzerstäubung im Hochvakuum beschichtet. Schließlich wurde die Probe 24 Stunden durch Tauchen in eine Lösung des Thiols CF3-(CF2)7-(CH2)2-SH in Benzotrifluorid (p.a., 1g/l) bei Raumtemperatur in einem geschlossenem Gefäß mit
SY0036PCT einer Monolage beschichtet, anschließend mit Benzotrifluorid (p.a.) gespült und getrocknet.
Die Oberfläche weist für Wasser einen statischen Randwinkel von 178° auf. Bei einer Neigung der Oberfläche um < 2° rollt ein Wassertropfen des Volumens 10μl ab.
Auf den Probenträger wurden Matrix-Punkte wie folgt sublimiert:
In einer Hochvakumverdampfungsanlage (Edwards E306) werden 0,5 g α-Cyano-4- hydroxyzimtsäure in einen heizbaren Quarztiegel mit einer nach oben gerichteten Öffnung von 10 mm Durchmesser gefüllt. Im Abstand von 150 mm wird ein Probenträger montiert, der mit einer Maske gemäß Figur 3 bedeckt ist. Nach Abpumpen auf einen Basisdruck < 10"5 mbar wird der Quarztiegel mit Hilfe von außen liegenden Wicklungen aus Wolframdraht beheizt.
Die Temperatur des Feststoffs wird in der Pulverschüttung mit einem Thermoelement auf 180°C geregelt. Die Schichtdicke des abgeschiedenen Films aus o.-Cyano-4- hydroxyzimtsäure wird mit Hilfe eines Schwingquarz-Schichtdickenmessgerätes bestimmt, das zuvor mit einer absoluten Schichtdickenbestimmung (z.B. Rasterkraftmikroskop) geeicht wird. Die Sublimation wird bei einer Schichtdicke von 1 μm abgebrochen.
Die erhaltenen MALDl-Matrix-Punkte sind beispielhaft in Figur 4 gezeigt. Ein Massenspektrum dieses MALDI-Matrix-Punkt es wurde wie folgt erhalten:
MALDI Massenspektrum der einfach protonierten Peptide (1-7): Humanes Angiotensin I und II, Substanz P-methylester, Neurotensin (Aminosäuren 1-11), Neurotensin, ACTH (Aminosäuren 1 - 17) und ACTH (Aminosäuren 18 - 39), aufgenommen von einem präpariertem MALDI-Matrix-Punkt mit einem Durchmesser von 800 μm. Die Peptide wurden für die massenspkektrometrische Analyse wie folgt präpariert: 0.5μl einer wäßrigen Lösung, die jeweils 5 fmol der Peptide 1-6, 1 fmol des Peptids 7 sowie ein Volumenprozent Trifluoressigsäure und 1 mM des nichtionischen Detergenz n-Octyl-ß-D-glukopyranosid enthielt, wurden auf den MALDI-Matrix-Punkt aufpipettiert. Nach dem das Lösungsmittels vollständig SY0036PCT 9 abgedampft war, wurde die so präparierte Probe einmal gewaschen. Hierzu wurde der gesamte Probenträger für 2 Sekunden in eine 0.1 %ige Trifluoressigsäure eingetauscht und unmittelbar danach, für die Abtrennung verbleibender Flüssigkeitsreste, für 10 Sekunden in einen Stickstoffgasstrom (2,5 bar) gehalten. Das Massenspektrum positiver Molekülionen wurde in einem MALDI Flugzeitmassenspektrometer der Firma Bruker Daltonik, Bremen (Scout-MTP Autoflex) im Reflektorbetriebsmodus und mit zeitlich verzögerter lonenextraktion (Verzögerungszeit: 70 Nanosekunden) und 20 kV Beschleunigungsspannung aufgenommen. Zur Verbesserung des Signal/Rausch-Verhältnisses wurden 100 Einzelschussspektren aufsummiert.
Das Ergebnis ist in der folgenden Graphik dargestellt.
Figure imgf000011_0001
600 800 1000 1200 1400 1630 1800 2000 2200 2400 2600 3800 .000 3200 m/z
Im folgenden werden die Figuren 1 bis 5 beschrieben.
SY0036PCT 10 Figur 1 zeigt das Flächengebilde 1, dass aus einer ersten Schicht 2 mit einer ultraphoben Oberfläche 3 und einer Trägerschicht 4 besteht. Die erste Schicht 2 ist auf der Trägerschicht mittels einer Klebschicht 5 fixiert. Der Fachmann erkennt, dass die Klebschicht 5 nicht notwendigerweise vorhanden sein muß. Die Klebschicht 5 besteht aus einem elektrisch leitenden Material, so dass ein elektrischer Kontakt zwischen der ersten Schicht 2 und dem Trägermaterial besteht.
Figur 2 zeigt ein erfindungsgemäßes Flächengebilde, auf das mehrere MALDl- Matrix-Punkte 6 rasterförmig sublimiert wurden. Die MALDl-Matrix-Punkte in den jeweiligen Reihen 1-4 weisen unterschiedliche Formen auf, die dem Anwender symbolisieren, dass in jeder Reihe unterschiedliche MALDI-Marix-Substanzen verwendet wurden. Der MALDI-Matrix-Punkt 2D ist vergrößert dargestellt, so dass erkennbar ist, dass er aus vier Teilpunkten 8 besteht. Diese Teilpunkte 8 sind aus jeweils unterschiedlichen MALDI-Matrix-Substanzen aufgebaut, so daß an diesem MALDI-Matrix-Punkt vier unterschiedliche Analysen vorgenommen werden können. Unterhalb des MALDI-Matrix-Punktes 4D ist zusätzlich eine Beschriftung 7 auf das Flächengebilde aufgetragen worden, die den Benutzer über die in dieser Reihe verwendete MALDI-Matrix-Substanz informiert. Zusätzlich weist das Flächengebilde zwei Zentrierkreuze 9 auf.
Die Beschriftung und die Zentrierkreuze werden wie die MALDl-Matrix-Punkte auf das Flächengebilde sublimiert, indem eine Maske über das Flächengebilde gelegt wird, die entsprechende Ausnehmungen aufweist. Der Fachmann erkennt, dass die Reihen 1 - 4 des Rasters nacheinander hergestellt wurden.
Figur 3 zeigt die Maske mit 8 x 8 Öffnungen 12 im Durchmesser von 0,8 mm mit einem Abstand der Mittelpunkte von 2,25 mm (nicht maßstabsgetreu).
Figur 4 zeigt eine lichtmikroskopische Aufnahme eines Matrixspots, der mit der Maske aus Figur 3 erhalten wurde.
Die sehr vorteilhafte Verwendung der erfindungsgemäßen Probenträger bei der Kopplung von Flüssigkeitschromatographie und MALDI Untersuchung (LC-MALDI Kopplung) zeigt die Figur 5.
SY0036PCT 11 Häufig werden Substanzgemische vor einer MALDI Untersuchung zunächst chromatographisch getrennt. Beispiel sind Gemische von Peptiden, die durch einen enzymatischen (z.B. Trypsin) Peptidabbau erzeugt wurden. Nach der chromatographischen Trennung werden die Fraktionen des Eluates dann auf die MALDl-Matrix-Punkte 6 des Probenträgers 1 aufgebracht.
In dem vorliegenden Beispiel werden dazu MALDl-Matrix-Punkte 6 verwendet, die sehr eng aneinander liegen, jedoch noch von einem ultraphoben Bereich vollständig umschlossen sind. Vorzugsweise betragen die Abstände (gemessen von Mittelpunkt zu Mittelpunkt) der MALDl-Matrix-Punkte das 1 ,5 fache von deren Durchmesser.
Durch Verwendung von MALDI-Matrix-Punkten, die durch Sublimation über Masken erzeugten wurden, ist deren Ort und deren Größe sehr genau definiert. Auf diese Weise kann erreicht werden, dass die Flüssigkeit aus der Auftrittsöffnung 11 der LC Säule 10 zum Aufbringen auf die MALDl-Matrix-Punkte kontinuierlich auslaufen kann. Ein gesondertes Sammeln der Fraktionen in Gefäßen mit anschließendem Aufpipettieren auf die Matrix-Punkte oder ein diskontinuierliches Erzeugen von Fraktionen durch Verweilen der Austrittsöffnung über einem MALDI-Matrix-Punkt und anschließendes schnelles Weiterbewegen zum nächsten MALDI-Matrix-Punkt entfällt.
Der Probenträger 1 wird in einer konstanten Geschwindigkeit unter der Austrittsöffnung 11 hinweg bewegt. Jeder MALDI-Matrix-Punkt fängt nun ein konstantes Volumen der Flüssigkeit ein, die aus der Austrittsöffnung abgegeben wird. Gestartet wird der Prozess am Punkt A und verläuft mäanderförmig über alle Punkte hinweg zum Punkt E. Die MALDl-Matrix-Punkte enthalten anschließend das gesamte Eluat der Chromatographie auf den MALDI-Matrix-Punkten A bis E in Fraktionen, die dem konstanten Volumen entsprechen, das jeder MALDI-Matrix-Punkt aufnimmt. Durch Änderung der Geschwindigkeit mit der der Träger 1 unter der Auftrittsöffnung 11 verschoben wird, kann dieses Volumen geändert werden.
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Claims

Patentansprüche:
1. Verfahren zur Herstellung eines Flächengebildes, vorzugsweise eines Probenträgers, mit einer Vielzahl von MALDI-Matrix-Punkten, dadurch gekennzeichnet, dass die MALDl-Matrix-Punkte durch Niederschlag einer MALDI-Matrix-Substanz aus der Gasphase, vorzugsweise Sublimation, auf den Probenträger aufgetragen werden.
2. Verfahren nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass der Probenträger während des Niederschlags aus der Gasphase von einer Platte abgedeckt wird, die durchgehende Ausnehmungen aufweist, deren Querschnittsfläche jeweils der Querschnittsfläche der MALDl-Matrix-Punkte entspricht.
3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Platte mindestens eine weitere durchgehende Ausnehmung aufweist, mit der Information durch Niederschlag der MALDI-Matrix-Substanz aus der Gasphase auf den Probenträger übertragen wird.
4. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass die Information beispielsweise die Zusammensetzung der MALDI-Matrix-Substanz und/oder Justierpunkte sind.
5. Verfahren nach einem der voranstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die MALDl-Matrix-Punkte entlang eines Rasters angeordnet sind.
6. Verfahren nach einem der voranstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die MALDl-Matrix-Punkte SubStrukturen aufweisen.
7. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass die MALDl-Matrix- Punkte in mehrere vorzugsweise voneinander isolierte Teilpunkte aufgeteilt sind.
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8. Verfahren nach einem der voranstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass auf einen Probenträger unterschiedliche MALDI-Matrix- Substanzen aufgetragen werden.
9. Verfahren nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, dass zumindest mehrere MALDl-Matrix-Punkte oder -Teilpunkte jeweils aus einer MALDI- Matrix-Substanz aufgebaut sind.
10. Verfahren nach einem der voranstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass als eine MALDI-Matrix-Substanz -Cyano-4- hydroxyzimtsäure eingesetzt wird.
11. Verfahren nach einem der voranstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass der Probenträger eine ultraphobe Oberfläche aufweist.
12. Verfahren nach Anspruch 11 , dadurch gekennzeichnet, dass die MALDl- Matrix-Punkte oder -Teilpunkte hydrophile Bereiche darstellen, die von ultraphoben Bereichen vollständig umschlossen sind.
13. Flächengebilde erhältlich mit einem Verfahren nach einem der Ansprüche 1 - 12.
14. Flächengebilde nach Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet, dass es mehrschichtig ist.
15. Flächengebilde (1) nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, dass es eine erste Schicht (2) mit einer ultraphoben Oberfläche (3) und eine Trägerschicht (4) aufweist.
16. Flächengebilde nach Anspruch 15, dadurch gekennzeichnet, dass die erste Schicht (2) auf einer Trägerschicht (4) reversibel aufgebracht ist und die maximale lokale Abweichung des Flächengebildes von der Planheit < 100 μm auf einer Länge von 100 mm beträgt.
SY0036PCT 14
17. Flächengebilde nach Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, daß die erste Schicht (2) auf die Trägerschicht (4) aufgeklebt ist.
18. Flächengebilde nach einem der Ansprüche 16 oder 17, dadurch gekennzeichnet, dass zwischen der ersten Schicht (2) und der Trägerschicht (4) ein elektrischer Kontakt besteht.
19. Langzeitstabiles Flächengebilde mit mindestens einem MALDI-Matrix-Punkt, dadurch gekennzeichnet, dass es von einem Hohlkörper umgeben ist, in dem Vakuum herrscht und der aus einem wasserdampfundurchlässigen und vorzugsweise lichtundurchlässigem Material besteht.
20. Flächengebilde nach Anspruch 19, dadurch gekennzeichnet, dass es zusätzlich biologisches Material auf dem MALDI-Matrix-Punkt aufweist.
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