WO2004033502A1

WO2004033502A1 - キトサン含有多糖、その製造方法及び用途

Info

Publication number: WO2004033502A1
Application number: PCT/JP2003/012920
Authority: WO
Inventors: Hideo Okazaki; Tadao Hamaya; Shoichi Kurihara
Original assignee: Ricom Corporation
Priority date: 2002-10-08
Filing date: 2003-10-08
Publication date: 2004-04-22
Also published as: JPWO2004033502A1; HK1085489A1; EP1550674B1; JP5102435B2; EP1550674A4; US20050236328A1; KR20050061517A; CA2501820C; CN1330671C; TW200528475A; US7195675B2; KR100674672B1; CA2501820A1; AU2003271132A1; EP1550674A1; TWI247752B; CN1720265A

Abstract

　キトサン含有多糖、その製造方法、それを含む医薬品、食品を提供する。茸を濃苛性アルカリ水溶液中、加熱処理した後、固液分離し、得られた固形分を有機酸水溶液に溶解し、これにアルコール又は苛性アルカリを加えて沈殿を生じさせ、この沈殿を洗浄、乾燥して得られるキトサン含有多糖。このキトサン含有多糖はグルコサミンのホモポリマーと、グルカンが共有結合で結合した化合物であり、グルコサミンとグルコースの構成モル比は１～５：５～１であり、分子量約１５万、β（１→４）結合及びβ（１→６）結合を含むが、β（１→３）結合を含まない。蛋白質及び還元性多糖を含まない。このキトサン含有多糖は、高血圧、糖尿病等の生活習慣病の予防及び治療に有効である。

Description

明細書

キトサン含有多糖、その製造方法及び用途

技術分野

本発明は、新規なキトサン含有多糖、その製造方法、これを有効成分として含有する医薬組成物及び食品に関する。背景技術

現在に到るまで、力二ゃェビなど甲殻類のキトサン（以下、力二キトサンという）は、その性質や製造方法について多く研究されている力茸を代表とする植物性キトサンやその製造法に関しては、研究文献がほとんど見当たらないのが現状である。

黒力ビゃ水力ビ、放線菌などの菌類が産生するキトサンについては、いくつかの研究報告があるが、これら菌類の培養が困難であるのと、未知の毒性物質も含有されている可能性が強いことから、菌類が産生するキトサンは、食品や医薬品など人体への安全性が問題となるところには使用できなかった。

一方、腎臓病に効果のあることが知られているマッシュルーム（ァガリクスビスポラス）（Agaricus bisporus)の親水' 溶媒抽出物（商品名「シャンピニオンェキス」）には、キトサンの主たる成分であるダルコサミンが微量含まれていることがわかっていたが、この微量のダルコサミンが生理学的な意味を持っているのかどうかは不明であった。そして、マッシュルーム（ァガリタスビスポラス）をはじめとする茸類からキトサン含有多糖を積極的に製造しようとする試みはこれまでほとんどなされていない。

日本を含むアジア地域では、椎茸； Lentinus edodesやキクラゲ、フク口タケ、しめじ、舞茸は、古来より優れた健康食品として盛んに用いられてきた、医食同源の基本となる食材である。西洋では 17世紀よりマッシュルーム（シャンピニォン）（ァガリタスビスポラス）が食用として広く供されてきた。

いわゆるマッシュルームあるいはシャンピニオンといえば、本来全ての茸を総称するが、狭い意味では 17世紀からパリ近郊の洞窟で栽培されているァガリタスビスポラスを指す。混乱を避けるため、この明細書ではマッシュルームまたはシャンピニオンを「ァガリタスビスポラス」、全ての食用茸類を指す場合には、「茸」と呼ぶこととする。

世界におけるァガリタスビスポラスの年間生産量は 240〜320万トンで、全世界では栽培茸の 30〜38%を、アメリカでは栽培茸の 90%を占めている。歴史的には植物性キチンは、アルカリに不溶性の高分子物質として、 1811年フランス人の植物学者ブラコノー（Braconnot)によりマツシュルームから初めて抽出された。 185 9年 Rougetは、キチンを水酸化カリウムの濃厚溶液中で加熱すると、有機酸に可溶になることを発見し、 1894年、 Hoppe- Seylerによって、この物質は「キトサン」と命名された。

1999年〜 2000年にロシアの研究者らが黒カビ（Aspergillus niger)からキチン •グルカン化合物を分離している。このキチン■グルカン化合物は 15〜20%のグルカンを含有していた。このキチンとグルカンは強固な共有結合で結合しているので、酵素処理でし力、完全に分離できない。（非特許文献 1及び非特許文献 2参昭

1981年に志田らは、椎茸（Lentinus edodes)のアルカリ（24%、 5°C)に不溶な骨格グルカンについて報告している。メチル化分析によりグルカン部分の構造は高度に分岐した i3 -1, 6及び ]3 -1， 3結合を持った糖鎖であることがわかった。このグルカンはキチンと結合して椎茸の内部骨格を形成している。（非特許文献 3 )

1994年、 Hartlandらば、酵母（Saccharorayces cerevisiae)の細胞壁において、アル力リ可溶性の (1-3) ]3ダル力ンがキチンと結合して、アル力リに不溶な (1-3) βグルカンになることを見いだしている。（非特許文献 4 ) 茸や力ビ類の細胞壁の構成成分は、 α (1-3)グルカンとキチンであるといわれているが、これらの菌類の成長過程では多糖類の再構成や再組織化が頻繁に行われている。ァガリタスビスポラスの成長サイクルでも αとの構造の割合が変化すると言われている。増殖過程では（1-4)が、子実体などでは (1-6)の割合が増えるといわれている。

し力し、現在においても、これらキチンを含む茸の骨格成分は化学的に安定で水や希薄な酸又はアルカリ、有機溶媒には溶けないので、有効利用はほとんどなされていない。その理由の一つが、茸に含まれるキチンがほとんど全ての溶媒に不溶で、生理学的にも不活性で、健康食品や医薬としての有用性がほとんど期待されないことにあった。

茸由来の糖類としては、熱水抽出された椎茸の水溶性成分である βグルカンに免疫増強作用があることが見出され、免疫増強剤として開発されてきた。また、ァガリタスビスポラスに化学の光が当てられたのも最近のことで、リコム社により初めてその熱水抽出物に消臭作用があることが見出され、消臭剤として商品化されている。

その他大部分の茸は、現在においても、力ワラタケ、マンネンタケ、レイシ、ブラジル産の "ァガリタス" など、そのままの姿で、あるいは極く単純にその熱水抽出物およびその凍結乾燥品が健康食品として供されているにすぎなレ、。

非特許文献 1

uamayurova et al. Synthesis oi soluble derivatives of chitin - glucan co mplex. Chemistry and Computational Simulation. Butlerov Communicatios, 1 999 ;No. 1.

非特許文献 2

Shabrukova et al. Study of the nature of chitin-glucan complex. Chemis try and Computational Simulation. Butlerov Communicatios, 2001 ;No. 4. 非特許文献' 3

Shi da, et al. Structure of tne alkali - insoluble skeltal glucan of Lent inus edodes. J- Biochem- Tokyo. 1981 ; 90 (4) : 1093- 1100.

非特許文献 4

Hart land et a丄. The linkage of (1一 3)— beta— glucan to chitin during cell wall assembly in Saccharomyces cerevisiae. Yeast. 1994； 10 (12) : 1591— 15 99. 発明の開示

本発明の目的は、新規なキトサン含有多糖を提供することである。

本発明の他の目的は、上記キトサン含有多糖の製造方法を提供することであり、特に、マッシュルーム（ァガリタスビスポラス）や椎茸をはじめとする広く贪用に供されている安全な茸キチンからキトサン含有多糖を効率よく大量に製造する方法を提供することである。

本発明のさらに他の目的は、上記キトサン含有多糖の用途、特にこれを含有する医薬品、食品を提供することである。

本発明は、以下のとおりである。

1 - 下記の特性を有するキトサン含有多糖。

( 1 ) 構成糖：ダルコサミンとグルコースから構成され、その構成モル比が 1〜 5 ： 5〜1である。

( 2 ) 分子量：ォストヮルド型粘度計により測定した分子量は約 5万〜約 4 0万である。また、ゲ^/ろ過クロマトグラフィーにより測定した分子量は約 4万〜約 2 0万である。

( 3 ) 構成単位：キトサン部分とグルカン部分から主として構成されている。

( 4 ) 結合の種類： 0 ( 1→4 ) 結合及び ;3 ( 1→6 ) 結合を含むが、 β ( 1→ 3) 結合を含まない。

(5) 酵素による分解性：キトサナーゼによりオリゴ糖に分解されるが、セルラーゼにより分解されない。

(6) 蛋白質及び還元性多糖：蛋白質及び還元性多糖を含まない。

(7) 呈色反応：ヨウ素一澱粉反応に陰性である。

(8) 物質の色：無色（白色）である。

(9) 溶解性： 5〜10質量％の酢酸、リンゴ酸、又はァスコルビン酸水溶液に溶解するが、水、エタノール、 Hl 0以上のアル力リ性水溶液に溶解しない。

2. グルコースとダルコサミンの構成モル比が 1 ： 1である上記 1記載のキトサン含有多糖。

3. キトサン含有量が 18〜72%である上記 1又は 2記載のキトサン含有多糖。

4. キトサン部分が、ダルコサミンのホモポリマーである上記 1〜 3のいずれか 1項記载のキトサン含有多糖。

5. グルカン部分が、グルコースのホモボリマーである上記 1〜 5のいずれか 1 項記載のキトサン含有多糖。

6. 茸を 25〜 50質量％の苛性アルカリ水溶液中、加熱処理した後、固液分離し、得られた固形分を有機酸水溶液に溶解し、これにアルコールを加える力 \ 又は p H 10以上となるように苛性アル力リを加えて沈殿を生じさせ、この沈殿を洗浄、乾燥することを特徴とする上記 1〜 5のいずれか 1項記载のキトサン含有多糖の製造方法。

7. 苛性アルカリ水溶液中の加熱処理の前に、茸をセルラーゼ又はダルカナーゼにより予備処理することを特徴とする上記 6記載のキトサン含有多糖の製造方法。

8. 茸が、ァガリタスビスポラスである上記 6又は 7記載のキトサン含有多糖の製造方法。

9. 茸を 25〜 50質量。 /。の性アル力リ ΤΚ溶液中、加熱処理した後、粘度を 3 〜2 0 m P a · sに調整した後、固液分離し、得られた固形分を洗浄、乾燥することを特徴とする上記 1〜 5のいずれか 1項記载のキトサン含有多糖の製造方法。 1 0 . 苛性アル力リ 7K溶液中、加熱処理した後、水又は酸を加えて粘度を 3〜 2 O m P a - sに調整する上記 9記載のキトサン含有多糖の製造方法。

1 1 . 上記 1〜 5のいずれか 1項記載のキトサン含有多糖を有効成分として含む医薬組成物。

1 2 . 生活習慣病の治療又は予防のための上記 1 0記載の医薬組成物。

1 3 . 上記 1〜 5のいずれか 1項記載のキトサン含有多糖を有効成分として含む本発明のキトサン含有多糖は、力ニキトサンにみられる不純物の蛋白質ゃ含硫ァミノ化合物等のアレルギー物質を含まないために、新規の機能性食品材料として有用である。甲殻類、例えば、力二を出発原料とする力二キトサンには、力二特有の異臭や不快なえぐみがあるが、本発明のキトサン含有多糖には、茸を原料とした場合には茸特有の好ましい香りが含まれており、異臭や不快なえぐみは全くない。その上、本発明のキトサン含有多糖には、ダルコサミン以外に 50%くらいの多糖類が含まれており、力ニキトサンには見られない新たな生理活性が存在している可能性も期待される。

さらにキトサン含有多糖が有利なのは、ェビ、力-などの甲殻類から分離されるキトサンと異なり、その構成糖類がほとんどグルコースからなる多糖類 ·グルカンであることにある。発明を実施するための最良の形態

以下、本発明を詳細に説明する。

我々は、リコム社で健康食品として供されているァガリタスビスポラス由来のシャンピニオンエキスの成分として、有機酸に可溶でアル力リに不溶な成分のあることに着目し、この物質の分析を試みたところ、キトサンによく似た性質を持つ多糖類が存在することを発見し、鋭意研究の結果、ァガリタスビスポラスからキトサンを大量に抽出することに成功した。ァガリタスビスポラスより抽出したキトサンは、基本的な性質において甲殻類から抽出された力ニキトサンに類似しているが、グルカン様多糖類を含有する点において、ダルコサミンのみから構成される単純なホモポリマーである力二キトサンとはその成分を異にする新規物質であることがわかった。

以下この明細書において、この新規物質を「キトサン含有多糖」と呼ぶことにする。 .

キトサンは歴史的には前述したように「mushroom」について発見されたのであるが、その後の研究はもっぱら甲殻類を主として研究が進められ、キトサンといえば力ニキトサンを指すものといってもよレ、。さらにキトサンの定義としては、力-キトサンの場合は、 N -ァセチルダルコサミンがほぼ 100%よりなる単純ポリマーなので、そのァセチル基が 80%以上脱ァセチル化されたものとされている。し力、し、本来のキトサンの定義は、前述した如く、希薄なアルカリに不溶で、希薄な有機酸に可溶な多糖を意味するものである。この定義に従えば、茸のキトサン含有多糖は立派にキトサンのフアミリーであるといえよう。

本発明の新規なキトサン含有多糖は広く食用に供されているほとんどの茸類から製造することが出来る。キトサン含有多糖は天然にも微量存在しているが、その大部分がグルカンと強固に結合したキチン質としてしか存在せず、我々が開発した方法により、初めてその全容が明らかとなったものである。

本発明のキトサン含有多糖の製造法を以下詳細に説明する。

本発明のキトサン含有多糖を製造するための原料は、キチン含有多糖を含有するものであれば特に限定されないが、得られたキトサン含有多糖が不快臭や異臭が少ないという観点から植物性の材料が好ましく、特に茸が好ましい。茸の中で好ましいものとしては、ァガリタスビスポラス、椎茸、エノキダケ、しめじ、舞茸、なめこ等が挙げられ、特に好ましいものとしては、ァガリタスビスポラス、椎茸、エノキダケ、しめじ等が挙げられる。

原料として茸を使用する場合、生鮮物でも乾燥物でも良いが、通常は石突きを除去し、水洗して泥土等の付着物を完全に除去する。ここで良く洗浄しないと不純物が最終製品まで残ってしまう。これを必要によりミキサーゃスライサーにかけて粉砕又はスライスした後、高濃度の苛性アル力リ水溶液、好ましくは 2 5〜 5 0質量％の苛性アルカリ水溶液中で、加熱処理する。苷性アル力リとしては苛性ソーダ、苛性カリが好ましい。原料の 1 0 0質量部（乾燥質量）に対して苛性アル力リ水溶液を好ましくは 4 0〜 5 0質量部加え、好ましくは 9 0〜 1 2 0 °C で 0 . 2〜 3 0時間、さらに好ましくは 1 0 0〜 1 1 0°Cで 1〜 1 0時間加熱処理を行つ。

なお、本発明では濃苛性アルカリ水溶液を使用するため、反応容器は、磁器もしくは硬質ガラス製のものを使用することが好ましい。加熱処理は常圧でも減圧又は加圧状態でもよレヽが通常は常圧で充分である。

また、加熱処理の前に、セルラーゼ、ダルカナーゼ、プロテアーゼ等による酵素処理や、冷凍解凍処理を行っても良い。酵素処理は、水に前記酵素を好ましくは 0 . 0 1〜 0 . 1質量⁰ /₀添加して 2 5 °C〜 4 0 °Cにおいて、 2〜 2 4時間行えばよい。酵素処理により、細胞壁あるいは蛋白質が分解され、キトサン含有多糖の製造が容易になる。また、冷凍した後、解凍させると、組織 (細胞壁)が破壌されキトサン含有多糖の製造が容易になる。特に、令凍解凍処理、スライスによる断片化、またはミキサーによる粉砕などの前処理を行うと、茸の繊維質がほぐされ、酵素処理（セルラーゼ処理等）の効率が良くなる。

例えば、前処理をした茸 1 0 k gを純水 2 0 Lに懸濁し、セルラーゼを 6 g〜 60 gくらい加えて、 40°Cに 2時間、 60°Cに 2時間、さらに温度を上げて沸騰するまで加熱する。上記セ/レラ一ゼとしては、例えば、 Aspergillus niger由来のもの、 Bacillus属由来のもの（ァノレカリ' 1"生セノレラーゼ）、 Tricoderma reesei由来のもの、 Anthrobacter由来のもの等が挙げられる。

荒熱を取ってから奇性ソーダまたは苛性力リを最終濃度が 50質量。 /₀程度になるように加える。このとき、温度が 100°C以上に上昇するが、そのまま約 2〜4時間くらい加熱を続ける。加熱が終了したら反応容器にそのまま蓋をして一夜放冷する。蓋はアル力リが空気中の炭酸ガスを吸収して劣化しないようにするために必要である。この加熱処理により、キチン含有多糖のアミノ基が脱ァセチル化され、キトサン含有多糖が生成する。

アルカリ処理液の上部表面に生成したキトサン含有多糖の層をステンレスの金網（100メッシュ）で、すくい取る。さらにデカントして底部に生成した沈殿も回収する。残りのアルカリ液は、そのまま再度次回のアルカリ処理に使用することが可能である。

得られた混合物を遠心分離、ろ過、デカント等の手段により、固液分離する。得られた固形分はキトサン含有多糖を主成分とするものである。具体的には、固形分すなわち粗製キトサン含有多糖を約 2〜10倍量の純水に懸濁し、さらし布等に移し、純水で洗液がほぼ中性になるまでよく洗う。このとき純水を用いることが肝要である。なぜならばここで得られた粗製キトサン含有多糖は水道水などから金属イオンなどの不純物を極めて効率よく吸着するからである。またこのときに洗浄処理を素早く行わないと粘度が高くなり、後の処理工程が困難になる。粘性が上がりすぎたときにはエタノールなどの有機溶媒で処理するのが効果的である。この処理で濾過が容易になる。

次に、水洗した粗製キトサン含有多糖を有機酸水溶液に溶解する。有機酸としては、酢酸、リンゴ酸、ァスコルビン酸等が挙げられる。有機酸の濃度は好ましくは 1〜 2 0質量％、さらに好ましくは 5〜 1 0質量％が適当である。溶解は、 5〜4 0 °C、 0 . 1〜4 8時間、通常は室温で一夜放置すれば良い。キトサン含有多糖は高分子なので、溶解に十分な時間が必要なためである。キトサン含有多糖を溶解した溶液から遠心分離、濾過、デカント等により不溶物を除去する。溶液の粘性が高いため、濾過、デカントにはかなりの時間を必要とするので遠心分離が好ましい。

得られた清明なキトサン含有多糖溶液にアルコール（例えば、エタノール、メタノール）、アセトン、又は昔性アルカリ（例えば、苛性ソーダ）を加えてキトサン含有多糖を沈殿させ、回収する。例えば、キトサン含有多糖溶液 1 0 0質量部に対して苛性ソーダを 0 . 0 1〜0 . 5質量部加えると、キトサン含有多糖が沈殿する。，これを、遠心分離等により固液分離して純キトサン含有多糖を回収する。エタノール沈殿は濾過が比較的容易なので操作が容易であるが、大量の溶媒を必要とする。キトサン含有多糖の溶液に対して少なくとも 2〜 3倍容のェタノールが必要である。さらにアルコールで調製したキトサン含有多糖は潮解性が高い傾向がある。また、ァセトンゃメタノールの使用はキトサンを食品や医薬品、化粧品などに用いる場合には溶媒としては好ましくない。

したがって通常の固液分離工程ではアル力リによる沈殿操作が好ましい。本処理工程を繰り返すことにより不純物を除去することが出来るが、キトサン含有多糖は不純物の吸着力が高いので必要以上に処理を複雑にしない方が好ましい。

—方、大量にキトサン含有多糖を得る場合には、固液分離の手段として、濃ァルカリ液の大量遠心分離は危険であり、またかなりの困難を伴う。このような場合には、以下に述べるような「遠心分離を用いない方法」を利用することが望ましい。

すなわち、良く洗浄し、 1〜 3 mm厚にスライスしたマッシュルーム、スライスした椎茸、半切りにしたエノキ、乾燥ァガリクスを水に戻したもの等に、アル力リ、例えば、苛性ソーダを最終濃度で 4 0〜 6 0質量％、例えば、 5 0質量％になるように加える。アル力リが良く溶けるように必要に応じて極少量の蒸留水を加えてもよい。 8 0〜1 2 0 °Cで 3〜3 0時間、例えば、 1 1 0 °C以上で、 2時間以上、加熱して放冷する。これに必要に応じて等量以上、好ましくは 3〜4倍量の蒸留水、もしくは 1 0〜2 0質量％の無機酸（例えば、塩酸、硫酸）または有機酸（例えば、酢酸、ァスコノレビン酸、乳酸）を加えて、粘度を 3〜2 0 m P a ■ s、好ましくは 5〜： L O m P a ■ sに調整する。この状態で一夜静置し、必要に応じて p Hを 9〜6 . 5、好ましくは 7になるように調整する。次いで、フイノレター、例えば、ステンレス製、さらし布製又はチーズクロス製のフィルターで濾過する。

ここで粘性が高くなると、以後の濾過処理工程が困難になるので、粘度があがらないように蒸留水や無機 ·有機酸の加え方を調整することが肝要である。そのためには試料の一部を用いて予備テストを行ったほうが良い。無機酸又は有機酸を加える場合は p Hが 9〜6 . 5、好ましくは 7になるように加える。

得られた固形分を蒸留水に再懸濁し、軽く撹拌しながら p Hが 9〜6 . 5、好ましくは常に 7になるように調整する。再度、濾過またはデカン卜して蒸留水を加えて塩分濃度と p Hが+分に低下するまで上記操作を繰り返す。最後にチーズクロスで濾過し、圧力をかけて脱水し、固形分を凍結乾燥して乾燥品とする。得られた粗製キトサン含有多糖からキトサン含有多糖を得るのは、操作する量も、アルカリ度も低いので、通常の「遠心分離を用いる方法」が使用できる。すなわち、粗製キトサン含有多糖を 5〜1 0 %酢酸に溶解して、十分に撹拌してから遠心分離し、その上清をアルカリで中和して、再度遠心分離し、得られたキトサン分画 ·沈澱部を水洗いし、さらし布もしくはチーズクロスで濾過、圧搾して水分を少なくしてから凍結乾燥して精製キトサン含有多糖を得る。

本発明のキトサン含有多糖中のキトサン含有量は製造条件によって変わるが通常は 5 ~ 8 0質量％、特に 1 5〜 7 5質量％の範囲にある。キトサン含有多糖中のキトサンの含有量は、以下の方法により行う。

キトサン含有多糖粉末 0. 5 gを正確に秤量し、これを 5容量％酢酸に溶かして正確に 100 gとする。この溶液 1 gを 20 Om 1容の三角フラスコに正確にはかりとり、脱イオン水 3 Om 1を加え、充分攪拌混合する。指示薬として 0. 1 %トルイジンブルー溶液 2〜 3滴を加え、 NZ 400ポリビニル硫酸力リウム溶液 [C₂H₃OSK) _n、 n =l 500以上] で滴定する。脱ァセチル化度（すなわちキトサン含有量 =ダルコサミン含有量）は下記の式に従って求める。脱ァセチルィ匕度= /161)/[ /161)+ /203)] 100 (%)

X= (1/400) X (1/1000) Xf X161X v

Y=0.5X (1/100)— X

v =N/400 ポリビニル硫酸力リゥム溶液滴定値 (ml)

f= N/400 ポリビエル硫酸力リゥム溶液のファクター

ファタター fは 1.005である。

式を書き直すと

脱ァセチル化度 = [203X/ (203X+161Y)] X 100 (%)

X=l.005X161 X V (滴定値; ml)

Y=5— X

精製キトサン含有多糖は、必要に応じて上記の希薄な有機酸、例えば 1〜5% の酢酸、リンゴ酸、ァスコルビン酸などに再溶解してアル力リによる中和沈殿処理を繰り返すことによりさらに精製することが出来る。しかし通常は 1回で十分である。可溶性の精製キトサン含有多糖を希薄な有機酸に溶解したままスプレードライもしくは凍結乾燥することにより、白色粉末とすることが出来る。この可溶性キトサン含有多糖は純水に瞬時に溶解する。アル力リ沈殿処理により得られた純キトサン含有多糖は、そのまま凍結乾燥する。このものは純水には溶けないので、希薄な有機酸、例えば、ァスコノレビン酸もしくはリンゴ酸に溶解してから使用することが出来る。塩酸には溶けにくい。キトサン含有多糖を用いた医薬品又は食品

本発明のキトサン含有多糖は、血圧、尿糖値、血糖値、尿酸値、総コレステロール値、中性脂肪値等の低下作用を有する。従って、本発明のキトサン含有多糖は、高血圧症や糖尿病などの生活習慣病、成人病の検査数値改善に大いに効果があり、医薬品又は食品の形態で使用するのに好適である。

本発明のキトサン含有多糖を液剤の形態で使用するには、キトサン含有多糖に、安息香酸ナトリウム、 p—ォキシ安息香酸メチル、デヒドロ酢酸ナトリウムなどの保存剤、リンゴ酸、ァスコルビン酸、クェン酸、酢酸などの溶解補助剤、さらに着色剤、香料、風味剤、グルコース、マンニトールなどの甘味剤などを必要に応じて配合し、さらに蒸留水、生理食塩水などの希釈剤を必要に応じて加えて医薬品又は食品を調製する。

キトサン含有多糖を有効成分とする医薬品は、通常、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、座剤等の固形製剤の形態に調製する。その際、これらの医薬製剤は、通常使用される充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、崩壌剤、表面活性剤、滑沢剤などの稀釈剤又は賦形剤を用いて調製される。

錠剤の形態に形成するに際しては、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えば乳糖、マンニトール、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、澱粉、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロースなどの賦形剤、蒸留水、生理食塩水、単シロップ、ブドウ糖液、澱粉液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビュルピロリドンなどの結合剤、乾燥澱粉、アルギン酸ナトリゥム、カンテン末、炭酸水素ナトリゥム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノダリセリド、澱粉、乳糖などの崩 ¾¾、白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油などの崩壌抑制剤、酢酸、ァスコルビン酸、リンゴ酸などの溶解吸収促進剤、グリセリン、澱粉、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状硅酸などの吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩、ポリエチレングリコールなどの滑沢剤などがあげられる。さらに錠剤は、必要に応じて糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠あるいは二重錠、多層錠とすることができる。

丸剤の形態に成形するに際しては、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えばブドウ糖、乳糖、マンニトール、澱粉、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルクなどの賦形剤、アラビアゴム末、ゼラチンなどの崩壌剤などが挙げられる。座剤の形態に成形するに際しては、担体として従来公知のものを広く使用でき、例えばカカオ脂、高級アルコールのエステル類、ゼラチンなどが挙げられる。

有効成分として使用するキトサン含有多糖の含有量は特に限定されず広範囲に選択されるが、通常製剤中に 1〜90質量％、好ましくは 10〜70%質量で含有させるのがよい。

投与量は特に限定されないが、用法、患者の年齢、性別、疾患の程度などの条件に応じて適宜選択すればよく、体重 1 kgに対してキトサン含有多糖が 0. l〜l(k g、好ましくは 0. 5~ 5 mgとなる量を一日 1〜4回に分けて経口投与する。キトサン含有多糖の含有量が多いと、これが鉄分やビタミンを吸収、包接するために鉄分ゃビタミンの欠乏症になることがあるが、上記範囲の投与量であればキトサン含有多糖の含有量が比較的低いので、鉄分ゃビタミンを補う必要はない。

本発明のキトサン含有多糖を含有する食品は特に限定されないが、例えば、スープ、味噌汁、ドリンク、ゼリー、グミ等が挙げられる。これら食品中のキトサン含有多糖の含有量は、好ましくは 0 . 0 1〜5 . 0質量％、さらに好ましくは 0 . 0 2〜1 . 0質量⁰ /₀、最も好ましくは 0 . 0 5〜0 . 5質量％である。

4 実施例 .

以下、本発明のキトサン含有多糖の製造法、キトサン含有多糖の生化学的性質を実施例により詳細に説明する。製造例 1 (茸キチンの製造） .

ァガリタスビスポラスの土の付いた石突きを切り落とし、秤量し 440 gを得た。これに、 1 %リンゴ酸、 0. 1%ァスコルビン酸を含む水溶液 900mlを加え、 2回に分けて、ミキサーで 30秒間ブレンドした。これを湯煎（100°C)でときどきかき混ぜながら 120分間保温した。上記懸濁液の温度は 70°Cくらいから 85°Cくらいになつた。次いでこの懸濁液を 2〜 3時間かけてゆっくり吸引濾過した。口紙に残つたものをスパーテルでかき取り、残りは純水で洗浄しながら回収した。容量で約 600mlの粗キチン懸濁液を得た。これに N- NaOHを 6 0 Oml加え、 60°Cで 20分間、湯煎加熱して吸引濾過した。同じ濾紙上で、純水、エタノールで洗浄した。

濾紙上に残った粗キチン含有多糖を純水 1 0 0 O mlに懸濁し、この茸キチン含有多糖懸濁液を N- HC1で中和し、 4 5 0 0 r p mで遠心分離した。沈殿部分の茸キチン分画を、 99%エタノールに懸濁し、約 1000mlくらいにしてから濾紙を 2枚重ねとし、濾過した。エタノール約 500mlで洗い、完全に吸引した。精製キチン含有多糖分画の湿質量は約 53 gであった。これをシリカゲルを敷き詰めたデシケ一ターに入れて、減圧乾燥して精製キチン含有多糖 5 . 5 4 gを得た。

娜ァガリクスビスポラス 100gあたりの乾燥 ·精製キチン含有多糖の収量は、 1. 260gとなる。乾燥したキチン含有多糖の性状は、煎餅状であり、ピンセットで簡単にほぐし、割ることができる。製造例 2 (茸キチン含有多糖からキトサン含有多糖の製造）

製造例 1で製造したァガリクスビスポラスの乾燥した精製キチン含有多糖 4. 99 gに 50 °/₀NaOH水溶液 200mlを加えて懸濁した。 90°Cで 2時間ときどき撹拌しながら加熱処理を行った。遠心分離 (4500rp_m、 15分、 4 °C；遠心分離の条件は以下同じ）して、固形分を回収した。この固形分の主成分はキトサン含有多糖である。これに 10%酢酸水溶液 1 0 0 0 mlを加えてホモジナイズし、そのまま一夜室温に静置し、キトサン含有多糖を溶解させた。溶液はかなり粘稠である。再度、遠心分離して上清画分を回収した。沈殿画分は、再度 10%酢酸水溶液に再溶解しキトサン含有多糖を抽出して上清に加えた。合わせた上清を pHIOに調整した。遠心分離し、沈殿画分に純水を 1 0 0 O ml加えて懸濁し、遠心分離し、この操作を 3 回操り返した。一回目の洗浄では pH10、 2回目の洗浄で pHは 7. 5、 3回目の洗浄で最終的に pHは約 6. 5になった。

沈殿を濾紙の上に移して 2 5 °Cで 40時間の減圧乾燥を行つた。

全体で 1050mg、ダルコサミンの含有量が 55°/。のキトサン含有多糖が得られた。キチン含有多糖 1 gあたりのキトサン含有多糖の収量は、 210mgである。

このキトサン含有多糖を以下の条件で加水分解し、加水分解物を以下の薄層ク口マトグラフィ一条件で分析したところ、ダルコサミンとグルコースがほぼ 3 ： 1の割合で検出された。これ以外の単糖類及びガラクトサミンは検出されなかつた。薄層クロマトグラフィ一により分析されたダルコサミンの量がポリビエル硫酸法による分析値より高い理由としては、 4 M— H C 1中、 1 0 0 °Cの加水分解条件において、ダルコサミンに比べてグ^/コースの生成量が少ないか、さらに力 Π 水分解を受けてしまうことなどが考えられる。

キトサン含有多糖の加水分解条件：

4 M-H C 1中、 1 0 0でで 3時間

加水分解物の薄層ク口マトグラフィ一条件：

担体： Whatman 4860-820 (厚さ 250 μ m)

展開溶媒： n—ブタノール/ピリジン/ 0 . 1 M-H C 1 ( 5 : 3 : 2 ) 室温で約 2時間展開

発色試薬：ジフヱニルァミン /ァニリン //リン酸製造例 3 (スライスしたァガリタスビスポラスからのキトサン含有多糖の製造）ァガリタスビスポラスの土の付いた石突き部分を切り落とし、秤量し 546gを得た。これを包丁またはフードプロセッサーで約 l mm厚にスライス処理した。 10 00mlビーカー 2個にそれぞれ 2ァ0 gのスライスを入れて、固体の NaOHを 270 gずつ加えた。 15分間ほど静置すると、ァガリタスビスポラスがアル力リになじんで容量が減少した。ビーカーを 1つにまとめて湯煎で加熱した。撹拌しながら約 2時間 90°C〜95°Cに加熱したのち、室温まで放冷した。

浮いている茸（主成分はキトサン含有多糖である）をァク取り杓文字で注意深く掬い取り、 80%エタノールで 3回洗った。 600〜800ralくらいのエタノールを用いて、 10分間くらい軽く撹拌しながら洗った。さらに純水 1000mlで 2回洗レ、、酢酸 25mlを加えて pHが中性になっているのを確認し、さらに 1/10容量の酢酸を加えて室温に一夜放置し、キトサン含有多糖を溶解させた。チーズクロスで濾過し、濾過液を 50%Na0Hで中和し、キトサン含有多糖を沈澱させた。

生じた沈殿を遠心分離し、酢酸に溶解して 4 °Cに 2昼夜 (64時間)保存し、キトサン含有多糖を溶解させた。キトサン含有多糖の酢酸溶液（10%酢酸 600ml) .を遠心分離して上清 (pH4. 48)を回収した。沈殿分画を 10%酢酸 (pHは 2. 18) 500mlで再抽出して上清に加えた。上清をまとめて中和 (pHIO)し、生じたキトサン含有多糖の沈殿を遠心分離して回収した。これを 10%酢酸 500ralに溶解し、遠心分離し、上清を回収した。再度 50%NaOHを加えて中和し、生じた沈殿を遠心分離して回収した。

沈殿に水 500mlを加えて懸濁し遠心分離する、という操作を 2回行った。褐色の沈殿が得られた。この沈殿をドライアイス Zアセトンで凍結して凍結乾燥した。凍結乾燥後の収量は、 2702mgであった。キトサン含有多糖中のダルコサミン含有量は 19. 6%、生鮮茸 100 gあたりのキトサン含有多糖の収量は 495mgであった。製造例 4及び 5 (ォートクレーブ処理とリンゴ酸の添加効果）

生鮮ァガリクスビスポラスを石突きを除いて水洗い後、ミキサ一で 30秒間粉碎した。これを二つに分けて、一つには純水 200mlを、もう一つには 5 °/₀リンゴ酸 7溶液 200mlを加え、 120°Cで 30分間オートクレーブ処理した後、一昼夜放置した。ガーゼでろ過してから純水に懸濁し 200mlとした。

それぞれに Na0H200 gを加え、オートクレープで 120°C、 30分間、加熱処理を行つた。それぞれに純水約 200mlを加えて遠心分離した。キトサン含有多糖の沈殿を回収して 10%酢酸に溶かした。この溶液を遠心分離して得られた上清を、 25% NaOHで中和し、生じたキトサン含有多糖の沈殿を遠心分離した。得られたキトサン含有多糖の沈殿をさらに遠心分離法により純水 500mlで 3回洗つた。純水洗浄を 3回行うと _PHは約 7. 5くらいまで低下した。

凍結乾燥し収量とダルコサミンの含有量を測定した。収量はそれぞれ 643mg及び ⁷13mg、ダルコサミンの含有量はそれぞれ 71. 3%及び 37. 6° /。であった。

またダルコサミンの含有量は純水処理でォートクレーブにかけたものが最も高い数値を与えた。製造例 6 (セルラーゼ前処理をともなうキトサン含有多糖の製造）

この例では、新鮮なァガリタスビスポラスを原料として、セルラーゼ、濃アルカリ加熱処理を行い、希薄な有機酸に可溶で、アルカリに不溶なキトサン含有多糖を得た。これを凍結乾燥し、粉末約 11 gを得た。以下、詳細に説明する。

ァガリタスビスポラス 3. 2kgを素早く水洗いし、付着している泥土を完全に除去した。次に、 1 mm厚にスライスした。このスライスを純水 5600mlに懸濁し、セルラ一ゼ（Aspergillus niger由来のもの、食品用）を 12 g加えて、 40°Cに 2時間、 60°Cに 2時間、さらに温度を上げて沸騰するまで加熱した。

荒熱を取ってから苛性ソーダを最終濃度が 50%になるように加えた。このとき、温度が 110°Cまで上昇したが、そのまま約 3時間加熱を続けた。加熱終了後、そのまま蓋をして 3日間静置した。次いでアル力リ処理液の上部表面に出来たキトサン含有多糖層をステンレスの金網（100メッシュ）ですくい取った。さらにデカントして底部に生成したキトサン含有多糖の沈殿も回収した。

得られた粗製キトサン含有多糖 15 gを約 300倍量の純水に懸濁し、さらし布に移し、純水で洗液がほぼ中性になるまでよく洗った。洗诤した粗製キトサン含有多糖を 10%酢酸にゆつくり 1〜 2時間かけて溶解した。キトサン含有多糖を溶解した溶液から遠心分離によって不溶物を除去した。得られた清明なキトサン含有多糖の溶液 3500mlに 10N-Na0H約 500mlを加えてキトサン含有多糖を沈殿させ、回収した。沈澱を純水 3 Lで洗浄し、遠心分離した。得られた精製キトサン含有多糖を凍結乾燥することにより、灰白色粉末 10. 8 gを得た。

表 1にキトサン含有多糖製造例 2〜 6の結果を示す。表 1

(注 1 )後述するようにこのダルコサミンの含有量（％)という測定値は、キトサン含有多糖の場合には、キトサン含有量そのものを反映していると考えられる。

9 製造例 7 (遠心分離を使用しない「粗製キトサン含有多糖」の製造法）良く洗净し、 1〜3瞧厚にスライスしたマッシュルーム、スライスした椎茸、半切りにしたエノキ、乾燥ァガリタスを水に戻したものを生換算で各 1 2 O kgになるように混合し、これに約 5 0 0 kgの NaOHを最終濃度で 5 0 %になるように加えた。 NaOHが良く溶けるように、 1 0 0 k gの蒸留水を加えた。 9 0〜 1 1 0 °C に、 2時間以上、加熱して一夜放冷した。これに 5倍量の 2 0質量 °/₀クェン酸を加えて、この状態で一夜静置した。 p Hは 8 . 0であった。翌、チーズクロス製のフィルターで濾過した。

得られた固形分を蒸留水 1 0 0 0 Lに再懸濁し、軽く撹姅しながら p Hが常に 7になるように調整した。再度、濾過して蒸留水を加えて塩分濃度と p Hが十分に低下するまで上記操作を 3回繰り返した。最後にチーズク口スで濾過し、圧力をかけて脱水し、固形分を凍結乾燥し約 5 . 6 kgの乾燥品を得た。粗製キトサン含有多糖の回収率は、原料を 4 8 0 kgとして、 1 . 2 %であった。

粗製キトサン含有多糖 5 . 6 kgを 1 0質量％酢酸 1 0 0 Lに溶解して、十分に撹拌してから遠心分離し、その上清を苛性ソーダで中和して、遠心分離し、得られたキトサン分画 '沈澱部を水洗いし、チーズクロスで濾過、圧搾して水分を少なくしてから凍結乾燥してキトサン含有多糖 1 . 2 kgを得た。

キトサン含有多糖の回収率は原材料に対して 0 . 2 5 %、また粗製キトサン含有多糖の中には 2 0 %以上のキトサン含有多糖が含まれていたことになる。製造例 8

製造例 7において、アルカリ加熱処理後、 5倍量の 2 0質量％クェン酸の代わりに 2 0質量％乳酸 2 0 0 0 Lを加えて、この状態で一夜静置したほかは同様の操作を行った。同様の結果が得られた。製造例 9

製造例 7において、アル力リ加熱処理後、 5倍量の 2 0質量％クェン酸の代わりに 2 0質量％酢酸 2 0 0 0 Lを加えて、この状態で一夜静置したほかは同様の操作を行った。同様の結果が得られた。製剤例 1 (キトサン含有多糖を含む錠剤）

製造例 6で製造したキトサン含有多糖 1 0 gに、リンゴ酸 1 0 g、ァスコルビン酸 1 0 gを加えて 1 0 0 0 mlの水に溶解し、凍結乾燥して水溶性キトサンを製造した。このものは純水に瞬時に溶解する特性を有する。この凍結乾燥物 1 0 g にマンニトール 2 0 g、乳糖 5 0 g、ポリデキストロース 2 0 gを加えて良く混合し、結着剤としてショ糖脂肪酸エステル 2 gを加えて錠剤を作った。

この錠剤は、高血圧や糖尿病などの生活習慣病、成人病の患者の血圧、尿糖値、血糖値、尿酸値、総コレステロール値、中性脂肪値等の低下作用を有する。実施例 1 (精製キトサン含有多糖の成分解析）

製造例 6で製造したキトサン含有多糖について以下の分析を行った。

ビューレツト法により蛋白質の存在を、アントロン硫酸法により還元多糖の存在を確認したが、蛋白質及び還元多糖はいずれも検出されなかった。

ョゥ素一澱粉反応は陰性であつたが、キトサンに固有の茶褐色の呈色がわずかに認められた。

ポリビュル硫酸法及びエルソン ·モルガン法によりキトサン含有多糖中のダルコサミン含有量を定量した。近似した測定値を与えた。

β ( 1→3 ) グルカンの分析を行ったが、検出限界以下であった。

なお、製造例 6において苛性ソーダの代わりにエタノールを使用して沈澱させたキトサン含有多糖は、かなりの潮解性もしくは吸湿' I生を有する。

製造例 1のようにミキサーで粉砕処理した場合、多糖の部分が物理的に削られて短くなり、キトサン部分の量が増え、一方、製造例 3のようにスライス処理した場合には多糖の部分が多く、より自然の状態に近い（すなわちキトサン部分の量の多い）キトサン含有多糖が得られるようである。実施例 2 (市場でよく見られる茸類中のキトサン含有多糖）

製造例 2の方法により、市場で見られる各種の茸を処理してキトサン含有多糖を得た。生鮮茸 1 0 0 gあたりのキトサン含有多糖の含有量（m g ) 、キトサン含有多糖中のダルコサミンの含有量（質量。/。）及びキトサン含有多糖の分子量を表 2に示す。分子量は、キトサン含有多糖を 5 %齚酸に溶解して室温に一昼夜静置したもの（キトサン含有多糖濃度 0 . 0 5 %) について、ォストワルド型粘度計（柴田 2 6 3 0— 1 ) を用いて測定したものである。ここで分子量は、下記式を用いて計算した。

LogM= (log (1/C*ln ( η _rel) ) +3. 05/0. 71

ここで、 [ η _r は実験結果から求められた相対粘度である。

表 2

(注 2 ) '茸は生鮮で約 90%の水分を含む。乾物ではこの 10倍量のキトサンが得られる。舞茸やなめこから、ほとんどキトサン含有多糖が得られなかったのは、もともとキチン質が少ないためであると考えられる。この実験の結果、エノキ茸、ァガリタスビスポラス及び椎茸が、原料の価格や入手も容易で、本究明のキトサン含有多糖の製造原料として適していることがわかる。実施例 3 (キトサン含有多糖の成分の解析）

製造例 3で製造したキトサン含有多糖及び市販の力ニキトサンを、 4M- HC1で 10 0°C、 3時間加熱することにより加水分解を行つた。この加水分解物をシリカゲル薄層クロマトグラフィー（Whatman)で展開した。

展開溶剤：ブタノール/プロパノール Z塩酸

糖類の発色にはァニリン試薬を用いた。

(Ghebregzabher, . , Rufini, ， Sapia, G. M. and Lato. M. 1979； J. Chromatography, 1 80， 1.及び Zweig, G. and Sherma, J. (eds. ) 1972 ; CRC Handbook of Chromatograph y, Vol. 1.参照）

対照には、グルコース、ガラクトース、ガラクトサミン、ダルコサミン及び N ーァセチルダルコサミンを用い、本宪明のキトサン含有多糖及び力ニキトサンの酸加水分解物を同時に展開した。

力二キトサンの酸加水分解物は、ダルコサミンとそのダイマーのスポットを与え、キトサン含有多糖の酸加水分解物は、力ニキトサンの酸加水分解物と同様に、グノレコサミンとそのダイマーのスポットの他に、グノレコースのスポットを与えた。ダルコサミンダイマーの量は、力ニキトサンの酸加水分解物及びキトサン含有多糖の酸加水分解物ともに、ダルコサミンモノマーの量の約 1 0 %であった。

製造例 3で製造したキトサン含有多糖はグルコースのモーリッシュ反応による呈色反応が製造例 2で製造したキトサン含有多糖よりも強く認められた。この結果はダルコサミンの含有量のデータと良く一致している。

また、加水分解物中にダルコサミンとグルコースからなる二糖の存在が認められないので、キトサン含有多糖はダルコサミンとグルコースのキメラ構造を持つていないかその存在量は極めて少ないことが明らかにされた。また、このようなキメラ構造は生合成過程が極めて複雑であることが予想、され、そのような構造が存在する可能性は低レ、と推定される。

キトサン含有多糖のキトサン部分は、ダルコサミンのホモポリマーであって、この部分がキトサン含有多糖の物性を支配している。すなわち、キトサン含有多糖においては、この部分が多糖全体の数。/。であっても、ダルコサミンをほぼ 100

%含む甲殻類のキトサンと同じように、希薄な有機酸に可溶で、アル力リに不溶であるというキトサンとして定義された性質を具備する。このことは、キトサン含有多糖のグルカン部分の親水性が高く、希薄な有機酸に対する溶解性をキトサン部分が担っているためであると考えられる。実施例 4 (キトサン含有多糖の分子量及び吸収スペクトル）

製造例 3及び 6で製造したキトサン含有多糖の分子量は測定条件により変わるが、結果は次のとおりであった。

なお、ォストヮルド型粘度計を用いた測定は 2回行ったものである。表 3

ゲル濾過ク口マトグラフィ一のゲル担体はセル口フアイン GCL 2 0 0 0 m (生化学工業社製商品名）、溶媒は 1 0 %酢酸を使用した。分子量のマーカーとしては、フェリチン（44万）、ガンマグロブリン（16万）、ヘモグロビン（6. 45万）卵白アルブミン（4. 6万）、チトクローム C (l. 25万）を用いた。製造例 6のキトサン含有多糖は単一のピークを与えず、 5万〜 4 0万に分散し、中心の分子量は約 15万であった。力二キトサンは 2万から 100万に分散し、中心の分子量は 40万であつ 7こ ₀

一方、ォストヮルド型粘度計で、溶媒として 0. 2M酢酸 Ζθ. 1M NaCl/4M尿素を用いて分子量を求めると、製造例 3のキトサン含有多糖は 6万〜 1 3万、製造例 6のキトサン含有多糖は 1 4万〜 2 8万、力ニキトサンは 4 0万〜 5 8万であつた。ここで分子量の計算には、 Mark- Houwink -桜田の式 [ η ] =K · M^aを用いて計算した。ここで、 [ 77 ]は実験結果から求められた固有粘度であり、 Kと aの値として、それぞれ 8. 93Χ ΚΓ⁴と 0. 71を用いた。

製造例 2のキトサン含有多糖について濃度 2 mg/_ml (5%酢酸）で紫外可視吸光度を測定した。 2 3 6〜 2 3 9 nmに小さなピークが認められた。

本発明のキトサン含有多糖のォストヮルド型粘度計で測定される分子量は約 5 万〜約 4 0万であった。

以上の結果は、本発明のキトサン含有多糖のグルカン部分力複雑な分岐構造を有するグルコースのホモポリマーであることを示唆している。さらにグルカン部分の親水性が高いこと、 β (1-3) グルカンが検出されないこと、セルラーゼによって分解されないことなどから、グルカン部分の構造は |8 (1-6) の分岐を多く持ったグリコ一ゲンゃァミロぺクチンに似た構造をしていることが推定される。実施例 5 (キトサン含有多糖の食感テスト）

本発明の製造例 2のキトサン含有多糖及び市販の力ニキトサンを、 10人の男女各 5人にそれぞれ 50mgずつ試食させた。試食した全ての人が、力二キトサンの方は不快なえぐみを感じたが、本発明のキトサン含有多糖は、良好な食味で不快な味は全くないと回答した。このことは本発明のキトサン含有多糖が食品に添加しても食味をほとんど損なわないことを示している。実施例 6 (キトサン含有多糖摂取による健康診查数値の改善効果）

本発明の製剤例 1のキトサン含有多糖製剤（100rag/ S )を 6ヶ月間、ヒト（54歳：男性）に経口投与し、各種の検査項目についてその改善効果を調べた。結果 ( キトサン含有多糖の経口投与前後における検査数値の変化 (54歳：男性)）を表 4 に示す。表 4

本発明のキトサン含有多糖製剤の長期（6ヶ月）経口投与により、尿糖、血糖値、尿酸などの注意項目において改善効果が認められ、数値は正常値に戻っていた。総コレステロール、中性脂肪の低下、さらに血圧の低下作用も顕著である。本発明のキトサン含有多糖製剤投与中に、生活態度や環境、体重の変化はなく、健康診查数値の改善が認められたことから、本発明のキトサン含有多糖は、高血圧や糖尿病などの生活習慣病、成人病の検査数値改善に大いに効果があるといえる。産業上の利用可能性

本発明のキトサン含有多糖製造技術を応用することにより、これまで大量に捨てられていたキチン質を含む産業廃棄物、例えば、ビール酵母や抗生物質産生後の放線菌などの微生物固形成分や茸抽出物あるレヽは各種の果実や植物の残渣、穀物の種皮など力ゝら、新規な植物性含量由来のキトサン含有多糖を製造することが可能になる。得られた植物性キトサン含有多糖は、医薬や健康食品などの機能性食品としての利用が期待される。もっとも、これらビールやエタノール製造ブラントの産業廃棄物はアミノ酸や核酸、蛋白質などを大量に含んでいて、キトサン含有多糖の精製が煩雑になるため、直接キトサン含有多糖の原料とするよりも、茸のコンポストとして実際に利用されているので、茸として再生産し、それからキトサン含有多糖を製造する方が望ましいと考えられる。その方が純度の高い植物性キトサン含有多糖を容易に得ることが可能になるからである。

本発明のキトサン含有多糖の製造方法は、基本的にはキチンを含む全ての穀物や、植物成分に応用可能で、一般的な有用性が極めて高い。

Claims

請求の範囲

1. 下記の特性を有するキトサン含有多糖。

( 2 ) 分子量：ォストヮルド型粘度計により測定した分子量は約 5万〜約 40万である。

(3) 構成単位：キトサン部分とグルカン部分から主として構成されている。

(4) 結合の種類： β (1→4) 結合及び (1→6) 結合を含むが、 β (1→ 3) 結合を含まない。

(7) 呈色反応：ヨウ素一澱粉反応に陰性である。

(8) 物質の色：無色（白色）である。

(9) 溶解性： 5〜： 10質量％の酢酸、リンゴ酸、又はァスコルビン酸水溶液に溶解するが、水、エタノール、 ρ Η 10以上のアル力リ性水溶液に溶解しない。 2. グルコースとダルコサミンの構成モル比が 1 ： 1である請求項 1記載のキトサン含有多糖。

3. キトサン含有量が 18〜72%である請求項 1又は 2記載のキトサン含有多糖。

4. キトサン部分が、ダルコサミンのホモポリマーである請求項 1〜 3のいずれか 1項記載のキトサン含有多糖。

5. グルカン部分が、グルコースのホモポリマーである請求項 1〜4のいずれか 1項記載のキトサン含有多糖。

6 . 茸を 2 5〜 5 0質量％の苛性アル力リ水溶液中、加熱処理した後、固液分離し、得られた固形分を有機酸水溶液に溶解し、これにアルコールを加えるか、又は p H l 0以上となるように性アルカリを加えて沈殿を生じさせ、この沈殿を洗浄、乾燥することを特徴とする請求項 1〜 5のヽずれか 1項記載のキトサン含有多糖の製造方法。

7 . 苷性アルカリ水溶液中の加熱処理の前に、茸をセルラーゼ又はダルカナーゼにより予備処理することを特徴とする請求項 6記載のキトサン含有多糖の製造方法。

8 . 茸が、ァガリクスビスポラスである請求項 6又は 7記載のキトサン含有多糖の製造方法。

9 . 茸を 2 5〜 5 0質量。 /。の性アル力リ水溶液中、加熱処理した後、粘度を 3 〜2 0 m P a ■ sに調整した後、固液分離し、得られた固形分を洗浄、乾燥することを特徴とする請求項 1〜 5のいずれか 1項記載のキトサン含有多糖の製造方法。

1 0 . 苛性アル力リ水溶液中、加熱処理した後、水又は酸を加えて粘度を 3〜 2 O m P a ■ sに調整する請求項 9記載のキトサン含有多糖の製造方法。

1 1 . 請求項 1〜 5のレ、ずれか 1項記載のキトサン含有多糖を有効成分として含む医薬組成物。

1 2 . 生活習慣病の治療又は予防のための請求項 1 1記載の医薬組成物。

1 3 . 請求項 1〜 5のいずれか 1項記載のキトサン含有多糖を有効成分として含む食品。