WO2001074326A1

WO2001074326A1 - Agents ameliorant la fonction de barriere cutanee

Info

Publication number: WO2001074326A1
Application number: PCT/JP2001/002116
Authority: WO
Inventors: Tetsuji Hirao
Original assignee: Shiseido Company, Ltd.
Priority date: 2000-03-31
Filing date: 2001-03-16
Publication date: 2001-10-11
Also published as: US20030072816A1; JP2001288066A; EP1181927A1; EP1181927A4; KR20020040669A

Description

明細書

皮膚バリアー機能改善剤

技術分野

本発明は、化粧品または皮膚科学的製剤の技術分野に関する。より具体的には、本発明は、コ一二フアイドエンベロップ（以下、 C Eと略記する）の形成または成熟化促進剤およびその皮膚バリァー機能改善剤としての用途に関する。

背景技術

角層は、表皮角化細胞が終末分化して形成された角質細胞と、それをとりまく細胞間脂質から構成される。細胞間脂質は、セラミド、コレステロール、脂肪酸などを成分としてラメラ構造を形成し、角層バリァ一機能において重要な役割を演じていることが明らかになってきている。これは、角層バリアー機能が低下する種々の皮膚疾患や、肌荒れなどの皮膚トラブルにおいて、細胞間脂質が形態的にまた組成的にも乱れていることにより裏付けられている。一方、角質細胞は、ケラチン線維を主成分とし、それを包む C E (cornified envelope；角質肥厚膜）から構成される。 C Eは、表皮角化細胞の分化にしたがって該細胞において産生される複数の C E前駆体タンパク質が、酵素トランスグルタミナ一ゼにより架橋され不溶化して形成される。さらに、その一部には、セラミドなどが共有結合し、疎水的な構造をとることで、前述した細胞間脂質のラメラ構造の土台を供給し角層バリァ一機能の基礎を形成することが示唆されている。

C Eは、表皮組織または培養皮膚細胞などを、ドデシル硫酸ナトリウムなどの界面活性剤およびメルカプトエタノールなどの還元剤を含む溶液中で煮沸し、遠心分離などの手段により可溶性成分を除去した不溶性画分を得ることにより調製できる。これを顕微鏡で形態観察することにより、その性状を評価することができる。 Michel らは、角層の最外層に比較して角層の深部においては、脆弱な構造の C Eが多いことを報告している（J. Invest. Dermatol 9 1 ： 1 1 - 1 5 , 1 9 8 8 ) 。さらに、乾癬や葉状魚鱗癬などでは最外層においても脆弱な C Eが認められるとしている（Br. J. Dermatol. 1 2 2 ： 1 5 - 2 1， 1 9 9 0 ) 。

本発明者らは、皮膚、特に角層の状態を C Eの性状から解明すべく.検討を行つてきた。その結果、 C Eの形態に加えて、例えば、ナイルレツド（Nile Red) 染色により C Eの疎水性を調べ、また、構成要素であるィンボルクリンの抗原性を免疫染色により調べることにより角層のバリァ一機能の変調を適確に捉えることができることを見出した。

さらに、かかる染色性は培養角化細胞における C Eの形成または成熟度を評価することができることも見出した。かような知見に基づき、本発明者らは肌質の評価方法を提案した（特願平 1 1一 2 0 7 8 9 0号）。

他方、従来、乾癬のように最外層においてすら脆弱な C Eが認められ、病理組織所見としては不全角化（または角層バリアー機能の低下）を伴うとされる皮膚科学的疾患の治療では、'主としてコルチコステロイド等の外用剤が使用されてきており、また、角層バリアー機能の低下に起因する肌荒れなどの皮膚トラブルに対しても種々の対策が講じられてきた。

上述のように、皮膚の不全角化（もしくは角化細胞の未成熟化）または角層バリア一機能の低下に対して種々の対策が講じられてきているものの、さらなる有効手段を提供する必要性は依然として存在する。殊に、角層バリア一機能の基礎をなすと示唆されている C Eの形成や成熟化を量的にも質的にも促進する手段の提供が待たれるであろう。

発明の開示

上述のような C Eの成熟度を適確に評価できる方法を用いると、皮膚科的疾患には至っていないものの、顔面などである一定の皮膚バリアー機能の低下した角層にも未熟 C Eが多く存在することが明らかになった。本発明者は、それらを十分な成熟度に導くことができれば、それに伴って皮膚バリア一機能が確実に改善できるものと想定した。

このような想定の下、多種多様な成分の C Eの形成または成熟の促進能について検討してみたところ、 C Eの十分な成熟度がもたらされれば皮膚バリァー機能が確実に改善できることが確認できた。本発明はこのような知見に基づくものである。加えて、上述のような C Eの十分な成熟度をもたらすための C Eの形成または成熟化促進作用を有するものとして、多種多様の生物学的生成物（biologic al products) が見出された。本発明は、このような知見にも基づくものである。

したがって、一の態様の本発明は、コ一ニフアイドエンベロップ（C E) 形成または成熟化促進作用を有する物質の表皮における C Eの十分な成熟度が達成できる量と希釈剤もしくはキヤリヤーとを含んでなる皮膚バリァ一機能改善剤に関する。

別の態様の本発明は、 C E形成または成熟化促進作用を有する物質を、被験者の皮膚に局所投与し、こうして該皮膚の表皮における C Eの十分な成熟度をもたらすことを含んでなる皮膚バリア一機能の改善方法に関する。また、かような改善を介する美容用のスキンケア方法も提供される。

さらなる別の態様の本発明は、皮膚バリアー機能改善剤の調製のための C E形成または成熟化促進作用を有する物質の表皮における C Eの十分な成熟度が達成できる量での使用に関する。

発明を実施するための最良の形態

本発明にいう C Eの形成または成熟化とは、表皮角化細胞が分化するにしたがつて産生される複数の C E前駆体タンパク質が酵素トランスグルタミナーゼ等の作用で架橋され不溶化し、さらに、その一部にセラミドなどが共有結合し、疎水的な構造となることを意味する。本発明に従えば、 C Eの形成または成熟化の尺度は、疎水性領域を選択的に染色できる色素、例えば、ナイルレツドによる染色陽性または C Eの構成タンパク質の抗原性の低下もしくは消失（具体的には、該タンパク質に対する抗体の結合性の低下もしくは消失）によって検出そして決定でさる。

したがって、本発明にいう「C Eの十分な成熟度が達成」されるとは、 C Eの構成タンパク質、例えばィンボクリンの抗原性が実質的に消失した状態にあることを指す。「該実質的に消失」とは、後述の C Eの性状評価において未熟 C Eが認められない状態をいう。

本発明に従えば、 C Eの形成もしくは成熟化促進作用を有する物質であれば、本発明の目的に沿う限りいかなる物質であっても皮膚バリアー機能の改善に使用できる。これは、該作用を奏する物質が、例えば、下記の多種多様な物質群から選び得ることから理解できるであろう。

しかし、かかる作用物質としては、化粧品分野で用いることのできる植物（ノヽ —ブ、根、葉、花、果実、種子等）に由来する生成物を挙げることができる。ィ匕粧品分野で用いることのできる植物としては、和漢薬を初めとする民間療法に用ヽられてヽる ¾1¾ゃヽ伊!1え、ヽ International Cosmetic Ingredient Dictiona ry and Handbook" , Seventh Edition, 1997, Published by The Cosmetic, Toil etry, and Fragrance Association, Washington, DC の" Biolobical Products の節に列挙されているものから選ぶことができる。限定されるものでないが、上記作用を奏する物質として、オリ一ブ (Plea europaea L. ) 油、ツバキ (Camell ia japonica L. 油ヽククイ油 [candle nut oil：ククイノキ (Aleurites molu ccana Wild. ) の種子の油] 、アマニン [アマ（Linujij usitatisimun L. ) の種子] 油ヽァボカド (Persea americana Mill. ) 油ヽテョウジ「Syzygium aromaticum Merrill et Perry のつぼみ（Caryophylli Flos) ] 抽出物またはチヨウジ油、卜ショウ (Juniperus communis L. ) 抽出物、ユーカリ（Eucalyptus globulus L abill) 抽出物、トウキ (Angelica acutiloba itagawa) 抽出物、力ミツレ（Ma tricaria chamomilla L. ) 抽出物、ォゥバク [Phellodendri Cortex：キハダ (P hellodendron amurense Ruprecht) の樹皮] 抽出物ヽョクイニン [Coicis Semen ：ノヽ卜ムギ (Coix Cacryraa-jobi L. var. ma-yuen Stapf) の果実カヽら果皮ヽ種皮等を除いたもの] 抽出物、コウチヤ Thea sinensis L. var. assamica Pieqr e) 抽出物、チヤ（Thea sinensis L. ) 抽出物、ヒキォコシ（Plectranthus japo nicas Koidz. ) 抽出物ヽァズキ (Phaseolus radiatus L. var. aurea Prain) 抽出物、アマチヤ [Hydrangeae Dulcis Folium： Hydrangea macrophylla Seringe var. thunbergii Makino の葉の発酵陽乾物] 抽出物、トウャク [Swertiae Herb a：センブリ（ we ia japonica Makino) の全草] 抽出物を挙げることができる。上記は好適な有効成分として、特定の種、変異株等によって、起源を示しているが、本発明で「 · · ·油」または「· · '抽出物」と称するときは、上記特定種、株に近縁の植物から得られ、本発明の目的に沿うものである限り、すべての近縁の植物由来の成分を包含し、また、いかなる精製段階にあるものも包含する。かよう油または抽出物は、殆どが生薬または生薬原料として市販されているものをそのまま、或は簡単な調製（例えば、溶媒抽出、蒸留、水蒸気蒸留、等）を介して使用することができる。また、上記油または抽出物には、それぞれ多種多様な化合物が含まれていることが知られており、必ずしも、相互に共通する化学構造を有するものばかりでもない（例えば、廣川薬用植物大事典、廣川書店発行、昭和 5 5年 2月 2 5日等を参照されたし。）。にもかかわらず、本発明者らが確立した評価系で C Eの形成もしくは成熟化促進作用を示す物質は、共通して皮膚バリア一機能の改善効果を有する。

上記の物質は、また、それら自体が生体外または生体内で角化細胞または表皮における C Eの形成もしくは成熟化を促進し、十分な成熟度を達成するための有効成分たりうる。したがって、本発明は、究極的には皮膚バリアー機能の改善につながるだけでなく、皮膚科学的疾患の予防または治療に、ならびに美容上のスキンケアに、他方、生体外での使用は、例えば、表皮細胞調製物の提供に資することができる。

以上の抽出物または油は、本発明に従う改善剤または促進剤の有効成分として、総組成物重量当たり、一般に、乾燥重量で 0. 0 0 0 0 1〜1 0重量％、好ましくは 0. 0 0 0 1〜5重量％処方される。 0. 0 0 0 0 1重量％未満では本願発明効果が十分に発揮され難く、一方、 1 0重量％を超えて配合してもさほど大きな効果の向上は認められず、また製剤化が難しくなるので好ましくない。

こうして処方される組成物は、希釈剤もしくはキヤリヤーとしての、純水、もしくはイオン交換水または緩衝化された水、メタノール、エタノールもしくはィソプロピルアルコール等の低級アル力ノールまたはその含水溶液、グリセ口ール、プロピレングリコール、 1 , 3—ブチレングリコール等のグリコールまたはその含水溶液に、あるいは硬化ヒマシ油、ワセリン、スクァラン等の油分に必要により界面活性斉 ij等を使用して、混合または均質化して調製することができる。本発明の組成物には、さらに、本発明の効果を損なわない範囲内で、通常化粧品や医薬品等の外用剤に用いられる他の成分、例えば美白剤、保湿剤、酸化防止剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、高級アルコール類、粉末成分、色剤、水性成分、水、各種皮膚栄養剤等を必要に応じて適宜配合することができる。さらに、本発明の組成物には、ェデト酸ニナトリウム、ェデト酸三ナトリウム、クェン酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、グルコン酸等の金属封鎖剤、カフヱイン、タンニン、ベラパミル、トラネキサム酸およびその誘導体、グラブリジン、カリンの果実の熱水抽出物、上記以外の各種生薬、酢酸トコフ iロール、グリチルリチン酸およびその誘導体またはその塩等の薬剤、ビタミン C、ァスコルビン酸リン酸マグネシウム、ァスコルビン酸グルコシド、アルブチン、コウジ酸等の美白剤、グルコース、.フルクトース、マンノース、ショ糖、トレハロース等の糖類、レチノイン酸、レチノ一ル、レチノ一ル酢酸、レチノールパルミチン酸等のビタミン A誘導体類などを適宜配合してもよい。

本発明に従う剤または組成物は、その剤型が特に限定されるものでなく、溶液系、可溶化系、乳化系、粉末分散系、水一油二層系、水一油一粉末三層系、軟膏、ゲル、エアゾール等、任意の剤型であることができる。また、その使用形態も任意であり得、例えば化粧水、乳液、クリーム、パック等のフエ一シャル化粧料やファンデーションの他、メーキヤップ化粧料、毛髪用化粧料、芳香化粧料、浴用剤等であることができるが、これらに限定されるものでない。

本発明に従う剤を生体に使用する場合は、上記のような組成物を被験者の皮膚局所または身体の皮膚全体へ経皮的に投与する。投与量は、被験者の年齢、性別および皮膚の状態によって、最適量が変動するので限定できるものでないが、通常、 1曰 1回ないし数回上記のように調製された組成物を皮膚に投与すればよい。必要があれば後述する評価法に従って適当な検体を評価した結果を参照しながら、用量または投与頻度を決定してもよい。

以下、具体例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、これらは本発明の理解を容易にする目的で提供されるものである。なお、以下の説明において、パーセンテ一ジ（％) は、特記しない限り、重量ノ重量基準である。

例 1： CEの形成および性状評価試験

CEの形成

ヒト表皮ケラチノサイ卜は、 Rheinwald & Greenの方法（Cell 6： 331— 344, 1975) にしたがって、培養した。増殖培地（10%ゥシ胎児血清、ヒドロコルチゾン 0.5〃 g/m 1，インスリン 5^gZml, コレラトキシン 10— ^1βΜ，上皮増殖因子101 /1111 , アデニン 1.8x 10_⁴Μを含む DM EM- Ham' s F 12 (3： 1) ) にて培養しコンフルェントに達した後に、被験物質を含む培養液（0.1%ゥシ血清アルブミンを含む MEM) に置換して、さらに 1週間培養を続けた。培養終了後に、ジチオスレイト一ル、ドデシル硫酸ナトリウムを含む卜リス塩酸緩衝液を加えて、 100°Cにて 10分間加熱した。不溶物を、 4000 g 10分間の遠心により集めた。さらに溶出液添加と加熱を繰り返して、可溶性成分を徹底的に除去した。こうして得られた不溶物を CEとした。得られた CEの量を目視で評価した。あるいは、その数を、血球計算板を用いて顕微鏡下でカウントした。結果を表 1に示す。

CEの性状評価

上述の方法で調製した CEをスライドグラスに滴下し、風乾させた後、冷ァセトン中で固定した。ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩液にて水和させた後、マウス抗ヒトインボルクリン抗体（N0V0CASTEA社）を 1次抗体として反応させた。余剰の抗体を洗浄により除去した後に、 F I TC標識ゥサギ抗マウスィムノグロプリン抗体を 2次抗体として反応させた。余剰の抗体を洗浄により除去した後に、ナイルレッド（Nile Red) 染色液を反応させ、封入し、蛍光顕微鏡にて観察した _c 観察画像を C CDカメラを介してコンピュータに取り込み、画像解析ソフト（Ma c Scope) を用いて、ィンボルクリン陽性の未熟 CE、 Nile Red陽性の成熟 CE など、その成熟度を鑑別した。結果を表 1に示す。

なお、表 1に示す、評価の指標は、次の基準による。

C E形成促進効果：

一： CE形成なし

+： CE形成認められるが、陽性対照（増殖培地）に比較してやや少ない + +：陽性対照（増殖培地）と同等量の CE形成が認められる

+ + + :陽性対照（増殖培地）より明らかに多い CE形成が認められる

CE成熟度の評価：

一：インボルクリン陽性の未熟 C Eが認められる

+：ィンボルクリン陽性の未熟 CEが認められない表 1 C E形成促進効果

(a) 上記増殖培地に同じ

(b) 0. 1 %ゥシ血清アルブミンを含む M E M

(c) 粧配規適合品

(d) 和光純薬より入手

(e) 粧配規適合品より溶媒留去した乾燥残分を試験に用いた _c

(f) 丸善製薬より入手製剤例 1 ：乳液

(処方）

ステアリン酸 2. 5 セチノレアノレコ一ノレ 1. 5 ワセリン 5. 0 流動パラフィン 5. 0 オリーブ油（エキストラバージン） 5. 0 ポリオキシエチレン（1 0モル）モノォレイン酸エステル 2. 0 ポリエチレングリコール 1 5 0 0 3. 0 トリエタノ一ルァミン 1 . 0 カルボキシビニルポリマー 0. 0 5 亜硫酸水素ナトリウム 0. 0 1 ェチルパラベン 0. 2 香料

ィォン交換水 '

(製法）

少量のイオン交換水にカルボキシビ二ルポリマーを溶解する（相）。残りのイオン交換水にポリエチレングリコール 1 5 0 0とトリエタノ一ルァミンを加え、加熱溶解して 7 0 °Cに保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して 7 0 °Cに保つ（油相）。水相に油相を加え予備乳化を行い、 A相を加えホモミキサーで均一乳化し、乳化後よくかき混ぜながら 3 0 °Cまで冷却し、乳液を得た。

製剤例 2 ：化粧水

(処方）

エタノール 5. 0 カルボキシビニルポリマー 0. 3 ポリオキシエチレン（1 5モル）ォレイルェ一テル 0. 8 グリセリン 5. 0

1， 3—ブチレングリコール 5. 0 チヨウジ抽出液 1. 0 クェン酸 0. 0 3 クェン酸ナトリウム 0. 0 7 メチルパラベン 0. 1 ィォン交換水

(製法）

イオン交換水に、クェン酸とクェン酸ナトリウムを溶解し、これを水相とした c 他方、その他の成分を撹拌溶解し、これを水相に添加して均質にし、化粧水を得製剤例 2 : クリーム

(処方）

ステアリン酸 2. 0 ステアリルアルコール 7. 0 水添ラノリン 2. 0 トウキスクヮラン抽出物 5 , 0

2—ォクチノレドデシルアルコール 6. 0 ポリオキシエチレン（2 5モル）セチルアルコールエーテル 3. 0 グリセリンモノステアリン酸エステル 2. 0

1 , 3—ブチレングリコール 5. 0 ェデト酸 3ナトリウム 0. 1 グリチルレチン酸ナトリウム 0. 1 ビタミン Eァセテ一ト 0. 3 ェチルパラベン 0. 3 イオン交換水

(製法）

イオン交換水に 1 , 3—ブチレングリコール、ェデト酸 3ナトリウム、グリチルレチン酸ナトリウムを加えて 7 0 °Cに保ち、これを水相とした。他方、その他の成分を混合し、加熱融解し 7 0 °Cに保ち、これを油相とした。水相に油相を加えて予備乳化を行ない、ホモミキサーで均一に乳化した後、 3 0 °Cに冷却しクリームを得た。

産業上の利用可能性

以上のとおり、本発明に従えば、表皮における C Eの十分な成熟度を達成できる手段が提供できる。従って、本発明は化粧品分野や美容産業で利用できる。

Claims

請求の範囲

1. コ一ニフアイドエンベロップ（C E) の形成または成熟化促進作用を有する物質の表皮における C Eの十分な成熟度が達成できる量と希釈剤もしくはキヤリヤーとを含んでなる皮膚バリァー機能改善剤。

2. C Eの形成または成熟化促進作用を有する物質が、化粧品分野で用いることのできる植物由来の生成物である請求項 1記載の皮膚バリア一機能改善剤。

3. C Eの形成または成熟化促進作用を示す物質がオリ一ブ油、ツバキ油、ククイナッツ油、アマニン油、アボカド油、チヨウジ抽出物、トシヨウ抽出物、ュ一カリ抽出物、トウキ抽出物、力ミツレ抽出物、ォゥバク抽出物、ォゥゴン抽出物、ハトムギ（ョクイニン）抽出物、コウチヤ抽出物、チヤ抽出物、ヒキォコシ抽出物、ァズキ抽出物、アマチヤ抽出物およびセンプリ抽出物からなる群より選ばれる 1種または 2種以上の混合物である請求項 1記載の皮膚バリァ一機能改善剤。

4. オリ一ブ油、ツバキ油、ククイナッツ油、アマ二油、アボカド油、チョウジ抽出物、トシヨウ抽出物、ユーカリ抽出物、トウキ抽出物、力ミツレ抽出物、ォゥパク抽出物、ォゥゴン抽出物、ハトムギ（ョクイニン）抽出物、コウチヤ抽出物、チヤ抽出物、ヒキォコシ抽出物、ァズキ抽出物、アマチヤ抽出物およびセンブリ抽出物からなる群より選ばれる 1種の物質または 2種以上の混合物と希釈剤またはキヤリヤーとを含んでなる生体内または生体外でのコ一ニフアイドエンベロップの形成または成熟化促進剤。

5. C E形成または成熟化促進作用を有する物質を用意すること、

該物質での処置が望ましい被験者の皮膚に該物質を局所投与すること、およびこうして該皮膚の表皮における C Eの十分な成熟度をもたらすこと

を含んでなる皮膚バリァー機能の改善方法。

6. C Eの形成または成熟化促進作用を有する物質が、化粧品分野で用いることのできる植物由来の生成物である請求項 5記載の皮膚バリアー機能改善方法。

7. C Eの形成または成熟化促進作用を示す物質がォリーブ油、ツバキ油、ククイナッツ油、アマニン油、アボカド油、チヨウジ抽出物、トシヨウ抽出物、ュ

—カリ抽出物、トウキ抽出物、力ミツレ抽出物、ォゥバク抽出物、ォゥゴン抽出物、ハトムギ（ョクイニン）抽出物、コウチヤ抽出物、チヤ抽出物、ヒキォコシ抽出物、ァズキ抽出物、アマチヤ抽出物およびセンプリ抽出物からなる群より選ばれる 1種の物質または 2種以上の混合物である請求項 5記載の皮膚ノリァ一機能改善方法。

8. C E形成または成熟化促進作用を有する物質を用意すること、

該物質での処置が望ましい被験者の皮膚に該物質を局所投与すること、およびこうして該皮膚の表皮における C Eの十分な成熟度をもたらして皮膚バリァー機能を改善することを特徴とする美容用のスキンケア方法。

9. C E形成または成熟化促進作用を有する物質がオリ一ブ油、ツバキ油、ククイナッツ油、アマ二油、アボカド油、チヨウジ抽出物、トシヨウ抽出物、ユーカリ抽出物、トウキ抽出物、力ミツレ抽出物、ォゥパク抽出物、ォゥゴン抽出物、ハトムギ（ョクイニン）抽出物、コウチヤ抽出物、チヤ抽出物、ヒキォコシ抽出物、ァズキ抽出物、アマチヤ抽出物およびセンプリ抽出物からなる群より選ばれる 1種の物質または 2種以上の混合物である請求項 8記載のスキンケア方法。

1 0. 皮膚バリア一機能改善剤の調製のための C E形成または成熟化促進作用を有する物質の表皮における C Eの十分な成熟度が達成できる量での使用。