WO2000062772A1 - Agonistes du recepteur sensible a l'activateur du type peroxysome - Google Patents

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WO2000062772A1
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Kazuo Miyashita
Tadayoshi Shiraishi
Masayuki Abe
Masakazu Kato
Takehiko Ofuji
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Definitions

  • the present invention promotes binding of a peroxysome proliferate r-activated receptor (hereinafter abbreviated as PPAR) to a target gene sequence and promotes downstream gene expression.
  • PPARagonist peroxysome proliferate r-activated receptor
  • PPARagonist having an activity of causing visceral fat (hereinafter, abbreviated as PPARagonist), and visceral fat of humans or animals, particularly mammals, by the PPARagonist. It relates to reduction, suppression of visceral fat accumulation, improvement of abnormal lipid metabolism, improvement of abnormal glucose metabolism, or prevention and treatment of cancer.
  • Adipose tissue the major in vivo organ of visceral fat accumulation, has traditionally been understood as a mere place for storing excess fat.
  • adipose tissue is not just a place for storing excess energy in living organisms, but an organ that secretes various bioactive substances and functions actively in energy regulation. It has become clear.
  • PPAR one of the nuclear receptors, plays a major role in regulating the function of adipose tissue.
  • PPARs are organelles (Issemann et.al., Nature, 347, 645-650), and is derived from various animal species and tissues, including humans.
  • PPAR mainly expressed in hepatocytes
  • PPAR is abundant in heart, lung and kidney
  • PPAR is abundant in adipocytes.
  • Each PPAR subtype forms a heterodimer with retinoid X receptor (RXR) in common, binds to the PPAR response element upstream of the target gene, and regulates transcription of the target gene It exerts its function by performing the functions described above (Lemberger et. Al., Ann. Rev. Cell Dev. Biol., 12, 335-363, 1996).
  • RXR retinoid X receptor
  • Target genes for PP AR include the satiety factor levulin, lipo-lipin tin lipase involved in fatty acid uptake, fatty acid translocation overnight, fatty acid binding protein involved in fatty acid transport, and lignoic acid enzyme involved in fatty acid synthesis. , Phosphoenol virvinate carboxykinase, genes involved in oxidation, such as acyl-C0A synthase, acyl-CoA oxidase, and ketoacyl CoA thiolase, and in brown adipose tissue.
  • the uncoupled protein 1 (uncopling protein 1: UCP-1), which is involved in the heat production of, is known.
  • PPAR is used in vivo to synthesize, degrade, metabolize, (Kawata, History of Medicine, 184, 519, 1998; Kawata, Clinicians, 23, 1300, 1997; Akira, History of Medicine, 184, 513) , 1998).
  • PPARa the results of experiments on PPARa gene transfection into fibroblasts performed by Tontonz et al. Proved that PPARa is an important factor controlling adipocyte differentiation. (Cell, 79, 1147-1156, 1994).
  • substances that exhibit PPAR agonist activity are expected to enhance fat decomposition and metabolism, increase energy metabolism, reduce fat in the body, especially visceral fat, and improve abnormal lipid metabolism.
  • a thiazolidine derivative which is a PPAR agonist remarkably improves abnormalities in glucose metabolism typified by insulin resistance in patients with type II diabetes.
  • the PPAR agonist promotes the differentiation of adipocytes, thereby suppressing the production of TNF, which is one of the causative substances of insulin resistance, as well as in peripheral tissues. It is thought that it promotes the expression of glucose transport overnight (G 1 ut 4), reduces free fatty acids, and as a result, increases sugar uptake into cells and improves hyperglycemia.
  • G 1 ut 4 glucose transport overnight
  • PPARagonist stops cell proliferation and promotes cell differentiation (S. kitamura et.al. ⁇ Jpn. J. Cancer Res., 90, 75, 1999).
  • visceral fat accumulation, abnormal lipid metabolism, and abnormal glucose metabolism are important risk factors for lifestyle-related diseases such as hyperlipidemia, diabetes, hypertension, arteriosclerosis, fatty liver, and heart disease. Have been. Therefore, substances that reduce these risk factors are promising as foods, beverages, pharmaceuticals, and feed compositions that have the effect of preventing and improving many lifestyle-related diseases (Mizukami et al., New Medicine, 53, 402, 1998). ).
  • PPAR agonists that perform physiological functions in vivo are unidentified, but substances that exhibit PPAR agonist activity include long-chain fatty acids, leukotriene B4, clofibrate, and Potassium cyclaline is a substance exhibiting agonist activity of PPAR?
  • thiazolidine derivatives eg, , Toroguridazon
  • 15 Dokishi delta 12 '14 - prostaglandin J 2 Indome evening thin, highly unsaturated fatty acids are known (Kawada, Saishin Igaku, 53, 402, 1998; Kawata, history of medicine, 184, 519, 1998; SA. Kliewer et.al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94, 4318, 1997).
  • CLA synergized linoleic acid
  • PPAR synergized linoleic acid
  • agonist activity KLHouseknecht, Biochem. Biophys. Res. Comm., 244, 678.
  • each PPAR The ligand selectivity between sub-subunits is fairly broad, and it is widely accepted that substances that act as agonists for specific sub-subunits also show activity against other subtypes.
  • DHA docosahexaenoic acid
  • Tonalin registered trademark
  • Active Linol registered trademark
  • fish oil with a high content of DHA is also marketed as a health food material.
  • CLA and DHA-rich fish oils have insufficient visceral fat-reducing or visceral fat accumulation-inhibiting effects, and CLA has significant side effects such as hepatic hypertrophy, etc.
  • Sexual anxiety remains (DBWest et.al., Am. J. Physiol., 275, R667, 1998).
  • CLA and DHA both have poor flavor and are used as health foods by encapsulation.However, they are often used as compositions for general foods and drinks, pharmaceuticals, and feeds. Problems remain. In addition, both are expensive, and their use as compositions for general foods and feeds is limited.
  • clofibrate is used as a drug for improving lipid metabolism disorders such as hyperlipidemia
  • thiazolidin derivatives for example, TZD
  • TZD thiazolidin derivatives
  • cis-parinaric acid one of conjugated tetraenoic acids, binds to PPAR protein, but no PPARagonist activity has been confirmed (NAPalmer, R. Wolf, FEBS letter 431). , 476, 1998).
  • cis-valinaric acid is known to exist only in a very limited amount of raw materials, such as spinach seeds, in nature, so that industrial use is difficult.
  • D as a fat / oil composition having PP AR agonist activity, D
  • HA-rich fish oil and CLA are known, their visceral fat reduction effect is weak, and they have problems in flavor, taste, and economy as foods and drinks, and are becoming common as food and drink compositions. Has not been reached.
  • clofibrate and thiazolidine derivatives are known as pharmaceutical compositions, but the effect of reducing visceral fat is not sufficient, and a more active and safe composition is required.
  • an object of the present invention is to reduce visceral fat or suppress visceral fat accumulation, improve dyslipidemia, ameliorate glucose metabolism, and further prevent and treat cancer by using a novel PPARagonist having a strong activity. It is to provide a method. Disclosure of the invention
  • the inventors of the present invention have been conducting research on oils and fats related to foods for many years, and have particularly studied the mechanism of fat cell differentiation, substances that induce differentiation and their functions.
  • conjugated trienoic acid or conjugated tetraenoic acid was much more active than conjugated genic acid such as CLA. Based on this finding, as a result of further intensive studies, the present invention has been completed.
  • the active ingredients include punicic acid, calendic acid, hy-eleostearic acid, 5-eleostearic acid, catalpic acid and Choose from ballinaric acid It contains at least one selected conjugated unsaturated fatty acid, a salt thereof or an ester derivative thereof, particularly at least one of the ethyl ester and glycerol ester derivatives of the conjugated unsaturated fatty acid.
  • the peroxisome activator-responsive receptor is a peroxisome activator-responsive receptor agonist which is a peroxisome activator-responsive receptor.
  • an oil or fat composition containing the above-described peroxisome activator-responsive receptor agonist may be used.
  • a preferred embodiment of the oil and fat composition is a pomegranate family, a pterodaceae family, a pteridophyceae family, a squirrel family, a swelling squirrel family, and a plant belonging to at least one plant seed selected from the family belonging to the family Scrophulariaceae. It is an extract or a processed product thereof.
  • a further preferred embodiment of the oil / fat composition wherein the extract of plant seeds is selected from pomegranate seed oil, calendula seed oil, tung oil, two gourd seed oil, catalpa seed oil, and spinach oil seed oil. And one kind.
  • the above-mentioned peroxisome activator-responsive receptor agonist is used as a pharmaceutical agent containing the same as an active ingredient, for example, a visceral fat reducing and visceral fat accumulation inhibitor, a lipid metabolism disorder preventing and improving agent, a glucose metabolism disorder preventing and improving. Agent, and an agent for preventing and treating cancer.
  • the peroxisome activator-responsive receptor agonist can be used as a food or drink containing it, for example, for margarine, shortening, cooking oil, dressing, mayonnaise, chocolate, cookies, pies, and bread.
  • the above-mentioned peroxisome activator-responsive receptor agonist can also be administered to an animal by containing it in a feed.
  • the PPAR agonist of the present invention and the fat and oil composition containing the same are at the top of a series of gene cascades related to the differentiation and fat synthesis, accumulation, metabolism, degradation and regulation of sugar metabolism of fat cells in the living body, and control of heat production. Shows agonist activity against PPAR, an important factor.
  • the PPAR agonist activity of the PPAR agonist and the oil / fat composition of the present invention has been newly developed by the present inventors. Can be measured by an efficient method.
  • a plasmid that produces a chimeric protein of the ligand-binding site of PPARa expressed specifically in adipocytes and the DNA-binding site of GAL4 (a yeast DNA-binding transcription factor activator).
  • the agonist activity can be evaluated by measuring the activity of the produced luciferase (Pitka Gene Lighting Kit Instruction Manual, Toyo Venet).
  • the visceral fat-reducing effect or visceral fat accumulation-suppressing effect of the PPAR agonist and the oil / fat composition of the present invention can be obtained by administering a candidate compound to an experimental animal for a certain period of time (for example, 4 weeks). It is evaluated by quantifying the amount of visceral fat.
  • the PPAR agonist used in the practice of the present invention may exhibit agonist activity for any subtype of PPAR due to the extremely wide ligand selectivity of PPAR. Judging from the specificity of the distribution, it is more desirable to exhibit agonist activity against PPAR.
  • conjugated unsaturated fatty acids are not particularly limited as long as they exhibit PPARagonist activity, and may have an unsaturated bond in a portion other than the conjugated triene structure or conjugated tetraene structure. May be substituted with the atom of Nutritionally, physiologically and pharmacologically acceptable are preferred.
  • active ingredient exhibiting the agonist activity examples include punicic acid (18: 3, 9c, lit, 13c), calendic acid (18: 3). , 8t, 10t, 12c), jarcaric acid (18: 3, 8c, 10t, 12c), hy-eleostearic acid ) (18: 3, 9c, lit, 13t),?
  • stereoisomers are 9-cis, 11-trans. 13-cis punicic acid, 9-cis, 11-trans, 13-trans, hy-ereostearic acid, 9-trans, 11-trans, 13-cis Catalpic acid, Calendic acid, which is 8-trans, 10-trans, 12-cis, is preferred, and more preferably, punicic acid and hystereostearic acid.
  • the conjugate which is an active ingredient of the PPARagonist of the present invention.
  • the unsaturated fatty acid may be in the form of its salt or its ester derivative.
  • the salt is not particularly limited as long as it is food-, nutritional-, or pharmacologically-acceptable, such as metal salts such as sodium salt and calcium salt, ammonium salt, methylamine, ethylamine, and getylamine. And salts with an organic base such as triethylamine, pyrrolidine, piperidine, morpholine, hexamethylenimine, aniline and pyridine, and salts with amino acids such as arginine, glutamic acid and orditin.
  • metal salts such as sodium salt and calcium salt
  • ammonium salt methylamine
  • ethylamine ethylamine
  • getylamine getylamine.
  • salts with an organic base such as triethylamine, pyrrolidine, piperidine, morpholine, hexamethylenimine, aniline and pyridine
  • salts with amino acids such as arginine, glutamic acid and orditin.
  • ester derivative any food-, nutritional-, or pharmacologically-acceptable one can be selected.
  • Ethyl ester, butyl ester, propyl ester and glycerol ester are preferable, and more preferably.
  • Glycerol ester derivatives include monoglycerides and diglycerides And triglyceride, but diglyceride and triglyceride are preferred, and triglyceride is most preferred. In these diglycerides and triglycerides, the position at which the conjugated unsaturated fatty acid is esterified may be selected according to the purpose, and is not particularly limited.
  • conjugated unsaturated fatty acid ester examples include ethyl ethyl punicate, ethyl methyl calendinate, ethyl jarcaric acid, ethyl ethyl-eleostearate, ethyl ethyl? -Eleostearate, ethyl ethyl catalpinate, and vinalinaline.
  • Nissinole-sn-glyceronole (2-punicyl-sn-glycerol), 1,2-diph'nisinole-sn-glycerol (1,2-dipunicy-sn-glycerol), 2, 3-dipnicil-sn-glycerol (2, 3-dipunicyl-sn-glycerol), 1,2,3-tripnicic mono-sn-glycerol (1,2,3-tripunicyl-sn-glycerol) and the like.
  • an oil / fat composition having PPAR activity of the present invention an oil / fat which is an extract of natural animals and plants can be used.
  • the natural animal and vegetable fats and oils may be any of vegetable fats and oils, animal fats and oils, and marine fats and oils, preferably vegetable fats and oils, which are easy to secure in quantity, and more preferably vegetable seed oils.
  • general fats and oils commercially available for industrial use, food use or pharmaceutical use may be used, or natural animals and plants, preferably plant seeds may be extracted by a known method. .
  • the plant seeds used as raw materials are not particularly limited as long as they contain a conjugated unsaturated fatty acid having PPAR activity, a salt thereof or a derivative thereof, and include a pomegranate (Punicaceae), a pomegranate (Compositae (Asteraceae)), Plant seeds belonging to the family Euphordiaceae (Euphordiaceae), Cucurbitaceae (Cu curitaceae), Nozukakazari (Bignoniaceae), and the swelling family (Balsamin aceae) are preferred.
  • P. granatum L. calendula calendula genus genus (C.
  • the above-mentioned natural animal and vegetable fats and oils can be used as they are, but may be processed into fatty acids or derivatives thereof for use.
  • the method for processing into a fatty acid is preferably a method in which the above-mentioned animal or vegetable fat is pretreated as necessary, and then hydrolyzed to obtain a fatty acid, which is then purified.
  • Fats and oils can be pretreated by physical methods, such as leaving them at a temperature equal to or higher than the melting point to sediment and remove those with a high specific gravity, or centrifuging and removing those with a low specific gravity. And heat and stir to decompose protein and organic pigments, remove them by neutralization and washing, or add activated clay and heat-treat to adsorb and remove decomposed products, coloring substances, resinous substances, etc.
  • hydrolysis include a method of saponifying oils and fats with an alkali such as potassium hydroxide, and a medium-pressure catalyst that decomposes under a medium pressure condition using zinc oxide, calcium oxide, or magnesium oxide as a catalyst.
  • a chemical method such as a decomposition method or a continuous high-pressure decomposition method in which decomposition is performed continuously under high pressure, a biological hydrolysis method using a lipase II microorganism, and the like.
  • the method for separating and purifying fatty acids include a method of distilling and purifying a target fatty acid using a batch type, semi-continuous type, continuous type distillation apparatus or a precision distillation apparatus, and a method of preparing a fatty acid for a supersaturated solution or melt.
  • the crystals are cooled to an appropriate temperature according to the temperature, and the crystals are formed.
  • the generated crystals are squeezed, Solexol method (US Pat. Nos. 2,229,674 and 1942), and Emersol method (US Pat. Nos. 2,421,157 and 1974). , Henkel method (W. Stein et al., J. Am. Oil Chem. Soc., 45, 471, 1968).
  • the conjugated unsaturated fatty acid which is an active ingredient of the PPARagonist of the present invention, is prepared by culturing microorganisms such as algae, extracting oils and fats from the culture, and obtaining fatty acids by a known method. Is also good. It may also be prepared by reacting a known unsaturated fatty acid in the presence of a chemical catalyst or using a microorganism, an animal cell or an enzyme extracted therefrom.
  • a method for obtaining a highly conjugated unsaturated fatty acid having a conjugated triene structure from arachidonic acid, alolinolenic acid, or eicosapentaenoic acid by using isomerase produced by a red seaweed Ptilota filicina (MLWise, Biochemistry, 33 , 15223, 1994).
  • the method for converting a conjugated unsaturated fatty acid into an ester derivative is not particularly limited.
  • the fatty acid and an alcohol such as ethyl alcohol and glycerol may be used.
  • Direct esterification method to synthesize by dehydration reaction transesterification method to synthesize new ester by reaction of ester and alcohol, ester and the fatty acid, or ester and ester, method of synthesis from chloride and alcohol of the fatty acid, epoxy
  • Known methods such as a method of reacting a compound with the fatty acid and a method of reacting olefin and the fatty acid can be used, but a direct esterification method and a transesterification method are preferred.
  • the direct esterification method include mixing the fatty acid with an alcohol, adding an azeotropic dehydrating agent such as toluene or xylene as necessary, and adding sulfuric acid, P-toluenesulfonic acid, zinc oxide, activated aluminum, or oxide.
  • a method of heating in the presence of a catalyst such as titanium or tetraisopropyl titanate can be used.
  • transesterification method examples include an exchange reaction between a fatty acid ester and another fatty acid ester (Konoyoshi Hirao, Oil and Fat Chemistry, latter part, p522, Kazama Shobo, 1950), a reaction between a fatty acid ester and an alcohol (HJWright Oil & Soap, 21, 145, 1944) and the method of ATG ros & ROFeuge et al. Using an alkali catalyst (J. Am. Oil. Chem., 26, 704, 1949).
  • the fat and oil composition having PPAR activity of the present invention can be used as it is or as a food or drink by mixing as appropriate. Further, they can also be used as raw material materials and processed food materials of various foods and drinks produced industrially.
  • the content of the fat or oil composition in foods and drinks is not particularly limited, but is preferably from 0.01 to 99% by weight, and more preferably from 0.1 to 90% by weight.
  • various carriers and / or additives acceptable as foods and drinks can be added and blended as desired.
  • the carrier and additives used may be any as long as they do not adversely affect the PPARagonist activity of the oil or fat composition.
  • Specific examples of such carriers include various carrier carriers, extenders, diluents, bulking agents, dispersants, excipients such as glucose and lactose, hydroxypropylcellulose (HPC), and polyvinylpyrrolidone.
  • Binders such as Don (PVP), solvents such as water, ethanol and vegetable oil, solubilizers, buffers such as baking soda, dissolution promoters, gelling agents such as sodium CMC, HPMC, agar, gelatin, sodium CMC And a suspending agent such as sodium alginate.
  • PVP Don
  • solvents such as water, ethanol and vegetable oil
  • solubilizers buffers such as baking soda
  • dissolution promoters such as sodium CMC, HPMC, agar, gelatin, sodium CMC
  • a suspending agent such as sodium alginate.
  • additives include glutamine soda, inosinic acid, and other edible and seasonings for improving palatability, vanilla, mint, rosemary, linalool, natural flavors and other flavors, vitamin A , Vitamin B1, vitamin B2, vitamin B6, biyumi Vitamins, vitamin E, pantothenic acid, nicotinic acid, etc., sweeteners, such as stevia, citric acid, malic acid, fumaric acid, malonic acid, succinic acid, tartaric acid, tartaric acid, lactic acid, etc., coloring agents, moisture Inhibitor, fiber, electrolyte, mineral, nutrient, antioxidant, preservative, fragrance, humectant, tea extract, coffee extract, cocoa extract, orange, grape, apple, peach, pineapple, pear, Examples include natural plant extracts such as fruit extracts such as plums, cherries, papayas, tomatoes, melons, strawberries, and raspberries.
  • sweeteners such as stevia, citric acid, malic acid, fumaric acid, mal
  • the food or drink containing the oil or fat composition of the present invention may be any food or drink as long as it does not adversely affect the PPAR agonist activity of the oil or fat composition.
  • Tea drinks such as oolong tea, fruit and vegetable drinks such as soy milk, green juice, fruit juice, vegetable juice, lactic acid drinks such as yogurt, milk drinks such as milk, carbonated drinks such as cola, and various sports
  • bread products, potato products, cooked rice, rice, processed soybeans such as tofu, processed fish and meat such as sausage and ham, cakes, cookies, buns, rice crackers, ice cream, Puddings, sweets such as yokan, candy, chocolate, etc.
  • dairy products such as butter, yogurt, cheese, etc.
  • processed oil and fat products such as margarine and shortening, mayonnaise
  • seasonings such as lessing, soy sauce, miso, and sauces, konjac, and pickles.
  • Foods and drinks containing the oil and fat composition of the present invention can be used as foods and drinks exhibiting health maintenance, health promotion and physical strength enhancement effects.
  • the improvement of obesity or suppression of obesity, reduction of accumulated fat, especially visceral fat, suppression of fat accumulation, suppression of visceral fat accumulation, lipid metabolism such as hyperlipidemia and hypercholesterolemia As a food that exerts effects such as improvement of abnormalities, improvement of glucose metabolism abnormalities such as tendency of diabetes and postprandial hyperglycemia, improvement of hypertension, suppression of increase in arterial intimal hyperplasia, or as therapeutic food for cancer treatment Can be used.
  • oil-and-fat composition having PPAR agonist activity of the present invention is used as an active ingredient of a drug, it is used as it is or in a pharmaceutically acceptable non-toxic and inert carrier in the range of 0.01 to 99.5. %, Preferably 0.1 to 90% by weight for administration to mammals including humans.
  • the dose of the drug to humans and other mammals is appropriate for the purpose as long as the desired effect is exhibited and toxicity is not observed.
  • the effective amount of the fat or oil composition within the range of 1 mg to 3 g per kg of body weight of the animal may be administered once or several times a day. Good.
  • the exact dosage of the drug can vary widely depending on the mode of administration, dosage form of the drug administered, the condition and weight of the subject to be treated, and the experience and choice of the responsible physician or veterinarian. Is preferably determined by
  • a carrier a carrier used in a usual preparation in a solid, semi-solid, or liquid pharmaceutical preparation can be used.
  • excipients such as glucose and lactose; starch; Disintegrators such as methylcellulose calcium (CMC-Ca), binders such as hydroxypropylcellulose (HPC), polyvinylpyrrolidone (PVP), lubricants such as talc, magnesium stearate, and pH agents such as baking soda
  • CMC-Ca methylcellulose calcium
  • HPC hydroxypropylcellulose
  • PVP polyvinylpyrrolidone
  • lubricants such as talc, magnesium stearate
  • pH agents such as baking soda
  • regulators, stabilizers, diluents, pigments, and other formulation aids are used.
  • the pharmaceutical of the present invention is preferably in the form of tablets, capsules, granules, powders, powders, dragees, suspensions, liquids, syrups, drops.
  • compositions of the present invention include antiobesity agents, visceral fat reducing agents, visceral fat accumulation inhibitors, hyperlipidemia agents, hypercholesterolemia agents, diabetes agents, and insulins. It can be used as an agent for improving resistance to hypertension, an agent for treating hypertension, an anti-atherosclerotic agent, or an agent for preventing and treating cancer.
  • the fat or oil composition of the present invention can be used as a feed as it is or by appropriately mixing seasonings, flavors and the like for improving edibility and palatability.
  • an emulsifier and a stabilizer can be added to maintain certain physical properties. Further, they can also be used as raw materials for various processed feeds and pet foods produced industrially.
  • the oil or fat composition of the present invention may be used by directly sprinkling it on a feed.
  • the content of the oil and fat composition of the present invention in the feed is not particularly limited, but may be, for example, 0.1 to 99.5% by weight, preferably 0.5% to 90% by weight, based on the solid content of the feed. % Range.
  • This feed can be used as a feed for preventing obesity and improving obesity in livestock and companion animals, a feed for preventing and treating diabetes, and a feed for preventing and treating cancer.
  • oil and fat composition of the present invention when used in foods and drinks, pharmaceuticals and feeds, It may be used in combination with foods and beverages, pharmaceuticals, and feed compositions that have various effects.
  • the aqueous phase was separated, adjusted to pH 2.5, extracted with n-hexane, and the solvent was distilled off under reduced pressure to obtain free fatty acids.
  • the main component was free fatty acids.
  • the resulting free fatty acid is applied to silica gel column chromatography ( ⁇ Ko-gel C-200, manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), washed with n-hexane, and then washed with n-hexane containing 20% by volume of ethyl ether. Elution with xan gave a purified fatty acid fraction.
  • the yields are 0.88 g from pomegranate seed oil, 0.91 g from calendula seed oil, 0.92 g from paulownia oil, 0.90 g from bitumen seed oil, 0.90 g from catalpa seed oil. It was 0.89 g.
  • Injection temperature 200 ° C.
  • Table 1 Composition of fatty acids derived from vegetable seed oil
  • ND * below the detection limit
  • the main component of the fatty acid derived from pomegranate seed oil was punicic acid.
  • the major components of fatty acids derived from calendula seed oil were calendic acid and linoleic acid.
  • the main component of fatty acids derived from tung oil and bitter gourd seed oil was sodium eleostearic acid.
  • the major components of catalpa seed oil-derived fatty acids were catalpic acid and linoleic acid.
  • the main component of the fatty acid derived from seed oil was parinaric acid.
  • Example 2 PPARagonist activity of fatty acid derived from vegetable seed oil
  • CV-1 (Male cultured African monkey monkey kidney-derived cultured cells, Hyuma Foundation The emissions Science purchased from Agency) 2 x 1 0 4 pieces, 1 0% fetal bovine serum (GIBC made 0 companies), penicillin 'scan streptomycin (it it 1 0000 units / ml, 1 0000 ⁇ g / ml , GIBC ⁇ ), DMEM (Dulbecco's Modified Eagle medium, GIBCO) containing ascorbic acid (37 ⁇ g / m1, Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) in a 24-well plate containing 500 ⁇ 1 implantation, 37 ° C, in 5% C0 2 under the conditions and cultured for 24 hours, OP TI- washed with MEM (GIB CO, Ltd.), previously Yoshikawa method (Kazuaki Yoshikawa, transgenic expression studies for neurophysiology PM-PPAR [pSV40 expression vector containing yeast-derived transcription factor GAL4 gene (amino acid sequence 1-147) in pSV
  • conjugated linoleic acid Fatty acid derived from pomegranate seed oil, fatty acid derived from calendula seed oil, fatty acid derived from tung oil, fatty acid derived from catalpa seed oil, fatty acid derived from catalpa seed oil, and fatty acid derived from Nigauri seed oil prepared in the same manner as in Example 1
  • CLA conjugated linoleic acid
  • Hexane solutions of acids and fatty acids derived from potato seed oil are dried up in a nitrogen stream, then dissolved in dimethyl sulfoxide (DMS O), and diluted 10,000 times with DMEM containing 10% activated charcoal-treated fetal bovine serum.
  • a group was prepared by replacing the medium with the prepared medium (final fatty acid concentration: 20 ⁇ M).
  • a group was prepared in which only DMS O was replaced with a medium diluted with DMEM containing 10% activated charcoal-treated fetal calf serum.
  • a medium containing troglidazone manufactured by Sankyo Co., Ltd .; hereinafter, abbreviated as TZD) (1 M), which is conventionally known as a powerful agonist of PPARa
  • TZD troglidazone
  • 10-week-old female C57BL / 6J mice should be bred for three weeks on a high-fat, high-sugar purified feed (manufactured by Oriental Yeast Co., Ltd.) whose composition is shown in Table 4.
  • the animals were divided into 8 animals / group and tested for 2% by weight of soybean oil as an essential fatty acid source in a standard mixed feed for growth period (AIN-93G: manufactured by Oriental Yeast Co., Ltd.) from which fat was removed.
  • the animals were reared for 3 weeks on a test feed to which 7% by weight of fat or oil or 7% by weight of control fat or oil was added.
  • the collected blood was centrifuged at 300 rpm for 15 minutes under cooling to obtain plasma, and the total cholesterol concentration was determined by cholesterol C test (available from Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), and the neutral fat concentration was determined by plasma.
  • the free fatty acid concentration was measured by Liglyceride G Test Co., Ltd. (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and NE FAC Test Co., Ltd. (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.).
  • Example 2 a group added with pomegranate seed oil prepared in the same manner as in Example 1 (pomegranate seed oil group), as a control group, a group added with soybean oil (soybean oil group), and as a comparative group A group (fish oil group) to which a DHA-rich fish oil (containing 20% by weight of DHA) (manufactured by Harima Chemicals, Inc.), which is known to have an obesity improving effect, was added. Further, as a CLA group, a group (CLA group) was added to which 6.5% by weight of soybean oil and 0.5% by weight of CLA (manufactured by Kenko Tsusho Co., Ltd., 0% purity) were added.
  • CLA group a group (CLA group) was added to which 6.5% by weight of soybean oil and 0.5% by weight of CLA (manufactured by Kenko Tsusho Co., Ltd., 0% purity) were added.
  • mice 8 6-week-old female ICR CD-1 mice (Charles River Inc.) Using a feed prepared by adding a predetermined amount of the test oil to a standard formula feed for mice and rats from which fat was removed (AIN-93G for growth period, manufactured by Oriental Yeast Co., Ltd.) They were bred for weeks. Four weeks later, the mice were dissected under ether anesthesia, and the peri-renal adipose tissue, peri-ovarian adipose tissue, liver, kidney, and spleen were collected and weighed. The sum of the weights of the perirenal adipose tissue and the periovary adipose tissue was evaluated as visceral fat.
  • Example 2 As a test group, a group added with 1.7% by weight of pomegranate seed oil (1% by weight as puni carboxylic acid) and 5.3% by weight of soybean oil prepared in the same manner as in Example 1 (Pomegranate seed oil group)
  • a control group a group to which 7% by weight of soybean oil was added (soybean oil group), and as a comparison group, a fish oil high in DHA (containing 20% DHA, manufactured by Harima Chemicals Co., Ltd.), which is known to have an obesity-reducing effect.
  • a group (fish oil group) to which 7% by weight was added was provided.
  • Table 7 shows the results of the measurement of the weight of each organ as the ratio of organ weight to body weight.
  • a significant visceral fat accumulation inhibitory effect was observed.
  • Zaku mouth seed oil group an effect of suppressing the accumulation of visceral fat, which was equivalent to that of oil and bob, was observed.
  • Table 7 Effect of pomegranate seed oil on visceral fat accumulation
  • mice Female 6-week-old ICR CD-1 mice (Charles River Inc.) were administered by oral gavage with pomegranate seed oil at a rate of 10 g / kg to 5 mice, and the general condition of the mice was observed for 1 week did. As a result, no particular toxic symptoms were observed. Also, the same mice as in Example 1 were prepared by adding 8 wt / mouse of the same mice to a standard diet for fat-free mice / rats (AIN-93G for growing season, manufactured by Oriental Yeast Co., Ltd.) at 2% by weight of soybean oil.
  • Hardened soybean oil 60% by weight, 20% by weight of palm oil, 20% by weight of corn oil 80% by weight of oil and fat composition, 0.3% by weight of lecithin, monoglycer 0.3 parts by weight of lid, 16 parts by weight of water, 2 parts by weight of salt, 5 parts by weight of pomegranate seed oil prepared in the same manner as in Example 1, and a small amount of vitamin E as an antioxidant, added at 60 ° C Then, the mixture was emulsified at 50 V for 15 minutes using a TK homomixer while blowing nitrogen gas, and then rapidly cooled and kneaded at 15 ° C to obtain a sheet-like margarine having no problem in flavor.
  • Mixed oil consisting of 70 parts by weight of rapeseed oil with a rising melting point of 34 ° C and 30 parts by weight of coconut hardened oil with a melting point of 32 ° C, 0.8 parts by weight of synthetic diglycerol stearate as an emulsifier, soy lecithin 0.6 parts by weight and 3 parts by weight of pomegranate seed oil were added and dissolved at an oil temperature of 70 ° C to obtain an oil / fat composition.
  • 0.1 part by weight of sodium hexametaphosphate was added to 54.9 parts of skim milk, and the mixture was heated with stirring to 55 ° C.
  • Example 13 Production of French dressing containing pomegranate seed oil 150 parts by weight of salad oil, 30 parts by weight of pomegranate seed oil, 100 parts by weight of wine vinegar, a little salt and pepper, and a little French with no problem in flavor Dressing manufactured.
  • Pomegranate seed oil, sycamore seed oil, calendula seed oil, pomegranate seed oil, fatty acid derived from pomegranate seed oil, paulownia oil-derived fatty acid, fatty acid derived from calendula seed oil, or balsam seed oil prepared according to the method of Example 1 1 part by weight of an oil-derived fatty acid, 8.5 parts by weight of a mixed emulsifier, and 90.5 parts by weight of a reduced starch saccharified product are mixed and emulsified. Immediately, the mixture is pasteurized by heating at 80 ° C. for 10 minutes.
  • pomegranate seed oil 40 mg of pomegranate seed oil, two gourd seed oil, Kinsen seed oil, baleen seed oil or commercial tung oil obtained in the same manner as in Example 1, lactose 200 mg, starch 70 mg, polyvinylpyrrolidone 5, After mixing 35 mg of crystalline cellulose, the mixture was filled in a # 3 gelatin capsule, and the surface was coated with gelatin to prepare an oral capsule.
  • a pomegranate seed oil-derived fatty acid, a tung oil-derived fatty acid, a ginseng power seed oil-derived fatty acid, or a ginseng power seed oil-derived fatty acid 5 g, lactose 70 g, and corn starch 30 g obtained in the same manner as in Example 1 Mix and add 10% of hydroxypropyl Add 25 ml of cellulose solution and granulate with stirring. After drying, this was sized, 2 g of magnesium stearate and 2 g of talc were added and mixed, and tablets were produced using a rotary tableting machine.
  • Intralipid manufactured by Bacus Yuichi Co., Ltd. Pomegranate seed oil, calendula seed oil, catalpa seed oil, bittern seed oil, and goose seed oil obtained in the same manner as in Example 1. Or tung oil (5 parts by weight) was added and emulsified to obtain an emulsifier containing conjugated triglyceride.
  • An oil or fat composition containing conjugated trienoic acid or conjugated tetraenoic acid exhibiting PPAR agonist activity, a salt thereof, or an ester derivative thereof has an effect of reducing visceral fat, an effect of suppressing visceral fat accumulation, an effect of improving lipid metabolism, sugar metabolism Because it has an effect of improving abnormalities and an effect of suppressing the growth of cancer cells, it can be used as a diet for humans, a composition of health drinks, health foods, supplements, and pharmaceuticals for the purpose of improving the above physical tendencies. Can be. It can also be used as a feed for preventing and treating pet obesity and diabetes, or for preventing and treating cancer.

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Description

明細書 ペルォキシゾーム活性化剤応答性受容体ァゴニス ト 技術分野
本発明は、 ペルォキシゾーム活性化剤応答性受容体 （peroxysome prol iferate) r- activated receptor) (以下、 P P A Rと略称する。 ) の標的遺伝子配列に対 する結合を促進し、 その下流の遺伝子発現を促進する活性 （以下、 P P A Rァゴ 二ス ト活性と略称する） を有するァゴニス ト （以下、 P P A Rァゴニス トと略称 する。 ） 、 及び該 P P A Rァゴニス トによる、 ヒ ト又は動物、 特に哺乳類の内臓 脂肪の低減、 内臓脂肪の蓄積抑制、 脂質代謝異常の改善、 糖代謝異常の改善、 又 は癌の予防、 治療に関する。 背景技術
高齢化社会の到来により糖尿病、 動脈硬化、 高血圧、 高脂血症、 脂肪肝、 癌に 代表されるヒ 卜の生活習慣病の予防 ·治療に有効な飲食品、 医薬品の必要性が増 大している。 また、 愛玩動物においても、 肥満、 糖尿病は今日的な問題となって おり、 これらを予防 ·治療できる飼料、 動物用医薬品の開発が待たれている。 最 近の肥満研究の進歩によって、 肥満、 特に内臓脂肪蓄積型肥満が生活習慣病の重 要なリスクファクタ一であることが明らかになりつつあり （高橋ら、 第 1 9回日 本肥満学会プログラム ·抄録集、 p64、 1998) 、 内臓脂肪蓄積型肥満を改善する ことにより、 これら生活習慣病を予防 ·改善できるのではないかと期待されてい る。
内臓脂肪蓄積の主要な生体内器官である脂肪組織は、 従来、 単なる余剰脂肪の 蓄積場所として理解されてきた。 しかし、 最近の脂肪細胞研究の進歩によって、 脂肪組織は単なる生体の余剰エネルギー蓄積の場ではなく、 自ら様々な生理活性 物質を分泌し、 エネルギー調節に積極的に機能している臓器であることが明らか となってきた。 この脂肪組織の機能調節には、 核内受容体の一つである P P A R が重量な役割を果たしていると考えられている。 P P A Rは、 細胞内小器官であ るペルォキシゾームの増殖作用を持つ多様な構造の化合物により活性化されるこ とより命名され （Issemann et.al.、 Nature, 347、 645-650) 、 ヒ トを含む様々 な動物種や組織より c—D N Aがクロ一ニングされ、 現在では 3種のサブタイプ ひ、 β ァが知られ、 それそれ PPARa、 P P AR 3 (P PARS、 又は FA ARs NU C 1と呼称される場合もある） 、 P PARァと称されている。 P PA Rひは主に肝細胞に発現し、 P PAR ?は心臓、 肺、 腎臓で多くみられ、 P PA Rァは脂肪細胞に豊富にみられる。 P PARの各サブタイプは共通して、 レチノ ィ ド X受容体 （RXR) とへテロ 2量体を形成して、 標的遺伝子上流の P PAR 応答配列に結合し、 標的遺伝子の転写を調節することにより機能を発揮している (Lemberger et.al., Ann. Rev. Cell Dev. Biol., 12、 335-363、 1996) 。 PP ARの標的遺伝子としては、 飽食因子レブチン、 脂肪酸の取り込みに関与するリ ポプ口ティンリパーゼ、 脂肪酸トランスポ一夕一、 脂肪酸の輸送に関与する脂肪 酸結合蛋白質、 脂肪酸合成に関与する リ ンゴ酸酵素、 フォスフォエノールビルビ ン酸カルボキシキナーゼ、 ?酸化に関与するァシルー C 0 A合成酵素、 ァシル— C o Aォキシダ一ゼ、 ケトーァシル C o Aチオラ一ゼ等の遺伝子群及び、 褐色脂 肪組織での熱産生に関与する非共役タンパク 1 (uncopling protein 1： U C P — 1 ) 、 の遺伝子等が知られている。 これらの標的遺伝子産物は何れも生体での 脂肪代謝、 糖代謝、 及びエネルギー代謝を制御する重要なタンパクであることよ り、 P PARは生体内において、 脂肪の合成 '分解 ·代謝、 糖代謝、 及びエネル ギー代謝を制御する重要な蛋白質であると考えられている （河田、 医学のあゆみ 、 184、 519、 1998 ;河田、 臨床医、 23、 1300、 1997；審良、 医学のあゆみ、 184 、 513、 1998) 。 特に、 P PARァに関しては、 Tontonzらにより実施された繊維 芽細胞への P PARァ遺伝子の導入発現実験の結果より、 P PARァが脂肪細胞 の分化をコントロールする重要な因子であることが証明されている （Cell、 79、 1147-1156、 1994) 。 従って、 P P A Rァゴニスト活性を示す物質には、 脂肪の 分解と代謝を亢進すると共に、 エネルギー代謝を亢進し、 生体内での脂肪特に内 臓脂肪を低減し、 脂質代謝異常を改善することが期待されている （河田、 医学の あゆみ、 184、 519、 1998 ;河田、 臨床医、 23、 1300、 1997；審良、 医学のあゆみ 、 184、 513、 1998) 。 また、 P PARァァゴニストであるチアゾリジン誘導体が II型糖尿病患者のィ ンスリン抵抗性に代表される糖代謝異常を顕著に改善することが知られている。 その機構は十分には解明されていないが、 P P ARァァゴニストが脂肪細胞の分 化を促進する結果、 ィンスリン抵抗性誘発原因物質の一つである TNFひの産生 を抑制すると共に、 末梢組織でのグルコース トランスポ一夕一 （G 1 u t 4 ) 発 現を促進し、 遊離脂肪酸を減少させ、 その結果、 細胞内への糖取り込みが亢進し 、 高血糖の改善が得られると考えられている。 （河田、 最新医学、 53、 402、 1 998 ;荒木ら、 医学のあゆみ、 188、 500、 1999； J.M.Lehmann et.al.、 J.Biol.Ch em. s 270、 12953、 1995； T.Fujiwara et.al.、 Diabetes, 37、 1549、 1988)。 ま た、 P PARァゴニス トは細胞の増殖を停止し、 細胞分化を促進することが報告 されている （S.kitamura et.al.ヽ Jpn. J. Cancer Res.、 90、 75、 1999) 。
内臓脂肪の蓄積や脂質代謝の異常、 及び糖代謝の異常は、 高脂血症、 糖尿病、 高血圧、 動脈硬化、 脂肪肝、 心臓疾患等の生活習慣病の重要なリスクファクター であることは良く知られている。 従って、 これらのリスクファクターを低減する 物質は、 多くの生活習慣病の予防 ·改善効果を示す飲食品、 医薬品、 飼料組成物 として有望視されている （水上ら、 最新医学、 53、 402、 1998) 。
今日、 生体内で生理的な機能を果たしている真の P P ARァゴニストは未同定 であるが、 P P ARひのァゴニス ト活性を示す物質としては長鎖脂肪酸、 ロイコ トリェン B 4、 クロフイブレート、 及び力ルバプロス夕サイクリンが、 PPAR ?のァゴニス ト活性を示す物質としては長鎖脂肪酸、 力ルバプロス夕サイクリン 、 べサフイブリン酸が、 また、 P P ARァァゴ二ス ト活性を示す物質としては、 チアゾリジン誘導体 （例えば、 トログリダゾン） 、 15—デォキシー Δ12' 14— プロスタグランジン J 2、 インドメ夕シン、 高度不飽和脂肪酸等が知られている (河田、 最新医学、 53、 402、 1998 ;河田、 医学のあゆみ、 184、 519、 1998； S.A .Kliewer et.al.、 Proc.Natl. Acad. Sci.USA、 94、 4318、 1997) 。 また最近、 共 役化リノール酸 （以下、 C LAと略称する。 ） が P PARひ、 及びァァゴニス 卜活性を示すことが報告されている （K.L.Houseknecht、 Biochem. Biophys. Res . Comm.、 244、 678、 1998； S. Y.Moya-Camarena et. al.、 Biochemica et Biophy sica Acta, 1436、 331、 1999) 。 これらの報告より明らかな様に、 PPARの各 サブ夕ィプ間のリガン ド選択性はかなり広く、 特定のサブ夕ィプのァゴニス トと して作用する物質が、 他のサブタイプに対しても活性を示すことが広く認められ
、 P P ARの一つの特徴となっている。
P P ARァゴニス ト活性を示す物質の内、 C LAと、 高濃度ドコサへキサェン 酸 （以下、 DHAと略称する。 ） を含有する魚油にはダイエツ 卜効果が報告され ている （K.L.Houseknecht， Biochem. Biophys. Res. Comm. 244,678,1998, 特表 平 10- 508189号公報、 T.Ka ada et.al., J. Agr.Food Chem., 46,1225,1998) 。 CLAは T o na l i n (登録商標） 、 又は活性リノール （登録商標） の商品名 で健康食品として市販され、 D H A高含有魚油も健康食品素材として市販されて いる。 しかし、 C L Aも D H A高含有魚油も、 内臓脂肪低減効果又は内臓脂肪蓄 積抑制効果は不十分であり、 C LAは、 効果を発揮する用量で顕著な肝肥大等の 副作用が認められる等、 安全性に不安が残されている （D.B.West et.al.、 Am. J . Physiol.、 275、 R667、 1998) 。 また、 前記 C LA及び DHAは、 両者ともに 風味が悪く、 カプセル化する等の方法で健康食品として用いられているが、 一般 的な飲食品、 医薬品、 及び飼料の組成物として使用するには多くの問題が残され ている。 また、 前記両者とも高価であり、 一般的な食品、 飼料等の組成物として の利用は制限されている。 従って、 安全で、 活性が強く、 風味、 嗜好性等に優れ 、 経済的で、 顕著な内臓脂肪低減効果、 内臓脂肪蓄積予防効果を発揮する飲食品 、 医薬品、 及び飼料の組成物の開発及びそれらの用途開発が待たれている。
また、 クロフイブレートは高脂血症等の脂質代謝異常改善薬として、 チアゾリ ジン誘導体 （例えば、 T Z D) はイ ンスリ ン抵抗性改善効果をもつ II型糖尿病治 療薬として利用されているが、 より安全で、 効果の強い新規な組成物が求められ ている。
一方、 共役テトラェン酸の一つであるシスーパリナリン酸が P P ARァタンパ クに結合することが報告されているが、 P PARァァゴ二ス ト活性は確認されて いない （ N.A.Palmer及び R.Wolf、 F E B S letter 431、 476、 1998) 。 また 、 シス—バリナリン酸は天然ではホウセン力種子等、 極めて限られた原料に限ら れた量が存在することが知られているのみで、 工業的利用は困難な状況にある。 上述したように、 従来、 P P ARァゴニス ト活性を有する油脂組成物として D H A高含有魚油及び C L Aが知られているが、 これらの内臓脂肪低減効果は弱く 、 また、 飲食品としての風味、 嗜好性、 経済性に問題があり、 飲食品組成物とし て一般化するには至っていない。 また、 医薬品組成物として、 クロフイブレート 、 チアゾリジン誘導体が知られているが、 内臓脂肪低減効果は十分でなく、 更に 高活性で安全な組成物が求められている。
従って、 本発明の目的は、 強力な活性を有する新規な P PARァゴニストによ り、 内臓脂肪低減又は内臓脂肪蓄積抑制、 脂質代謝異常改善、 糖代謝異常改善、 更には癌の予防及び治療を行う方法を提供することにある。 発明の開示
本発明者らは、 長年に渡り食品に関わる油脂について研究を重ね、 特に脂肪細 胞の分化のメカニズムと、 分化を誘導する物質とその機能について研究を行って 来た。 これらの研究の過程で、 PP ARの代表的サブタイプである P PARァの ァゴニストを効率よく評価する系を構築し、 その評価系を用いて高度不飽和脂肪 酸の P PARァゴニス ト活性を評価したところ、 共役トリェン酸又は共役テトラ ェン酸が、 C L A等の共役ジェン酸より遙かに高活性であることを見いだした。 この知見を基に、 更に鋭意検討を重ねた結果、 本発明を完成するに至った。 即ち、 本発明のペルォキシゾーム活性化剤応答性受容体ァゴニス トは、 有効成 分として、 分子内に共役ト リェン構造 （― CH = CH— CH = CH— CH= CH 一） 又は共役テトラエン構造 （一 CH = CH— CH = CH— CH二 CH— CH = CH-) を有する炭素数 1 0〜 26の共役不飽和脂肪酸、 その塩及びそのエステ ル誘導体の内から選択される少なく とも 1種を含むものである。
前記ペルォキシゾーム活性化剤応答性受容体ァゴニス トの好ましい実施態様と しては、 前記有効成分として、 分子内に共役ト リエン構造 （― CH = CH— CH = CH— CH= CH—） を有する炭素数 1 0〜 2 6の共役不飽和脂肪酸、 その塩 及びそのエステル誘導体の内から選択される少なく とも 1種を含むものである。 前記ペルォキシゾ一ム活性化剤応答性受容体ァゴニス 卜の更に好ましい実施態 様としては、 前記有効成分として、 プニカ酸、 カレンディン酸、 ひ-エレォステ アリン酸、 5-エレォステアリン酸、 カタルピン酸及びバリナリン酸の内から選 択される少なく とも 1種の共役不飽和脂肪酸、 その塩又はそのエステル誘導体、 特に、 前記共役不飽和脂肪酸のェチルエステル及びグリセロールエステル誘導体 の少なく とも 1種を含むものである。
別の好ましい実施態様としては、 前記ペルォキシゾーム活性化剤応答性受容体 がペルォキシゾーム活性化剤応答性受容体ァであるペルォキシゾーム活性化剤応 答性受容体ァゴニス トである。
また、 上記のようなペルォキシゾーム活性化剤応答性受容体ァゴニストを含む 油脂組成物であってもよい。
前記油脂組成物の好ましい実施態様は、 ざくろ科、 きく科、 とうだいぐさ科、 う り科、 のうぜんかずら科及びつりふねそう科に属する植物の内から選択される 少なく とも 1種の植物種子の抽出物又はその加工物である。
前記油脂組成物の更に好ましい実施態様は、 前記植物種子の抽出物が、 ザクロ 種子油、 キンセン力種子油、 桐油、 二ガウリ種子油、 キササゲ種子油、 及びホウ セン力種子油から選択される少なく とも 1種である。
上記のペルォキシゾーム活性化剤応答性受容体ァゴニス トは、 これを有効成分 として含有する医薬品として、 例えば、 内臓脂肪低減及び内臓脂肪蓄積抑制剤、 脂質代謝異常予防及び改善剤、 糖代謝異常予防及び改善剤、 並びに癌予防及び治 療剤として使用することができる。
また、 ペルォキシゾーム活性化剤応答性受容体ァゴニス トは、 これを含有する 飲食品として、 例えば、 マーガリン、 ショートニング、 食用油、 ドレッシング、 マヨネーズ、 チョコレート、 クッキー、 パイ、 及びパンに使用することができる 更に、 上記ペルォキシゾーム活性化剤応答性受容体ァゴニス トは、 これを飼料 に含有させて動物に投与することもできる。
以下、 本発明について更に詳細に説明する。 本発明の P P A Rァゴニス ト及び それを含む油脂組成物は、 生体の脂肪細胞の分化と脂肪合成 · 蓄積 ·代謝 ·分解 と糖代謝制御、 及び熱産生に関わる一連の遺伝子カスケ一ドの頂点にある重要な 因子である P P A Rに対しァゴニス 卜活性を示す。 本発明の P P A Rァゴニス ト 及び油脂組成物の P P A Rァゴニス 卜活性は、 本発明者らによって新たに開発さ れた効率的な方法によって測定することができる。 即ち、 脂肪細胞特異的に発現 する P PARァのリガン ド結合部位と GAL 4 (酵母の D N A結合性転写因子活 性化因子） の DNA結合部位のキメラタンパクを産生するプラスミ ド （pM— P PAR) 、 又は pM— P PARから P PARァ遺伝を取り除いたブラスミ ド （P M) と、 レポ一夕一遺伝子であるルシフェラーゼ遺伝子の上流に GAL 4の応答 配列 （ U S A g ) が 4個組み込まれているプラスミ ド （4 xUAS g— l u c ) を、 アフリカミ ドリザル腎臓由来の培養細胞 （ C V— 1 ) にリポフエクシヨン法 によりコ トランスフエクシヨンし （吉川和明、 神経生理学のための遺伝子導入発 現研究法、 シュプリンガーフエアラーク東京、 1997) 、 得られたトランスフォ一 マントを一定期間培養後、 ァゴニス ト候補物質で処理することにより、 PPAR ァ一 GAL 4キメラ夕ンパクを活性化させ、 4 xUAS g— l u c上流の U S A gへの結合を亢進し、 その結果、 ルシフヱラ一ゼの産生を増加させる。 ァゴニス ト活性は、 産生されたルシフェラ一ゼの活性を測定 （ピツカジーン発光キッ ト取 り扱い説明書、 東洋ビーネッ 卜社） することにより評価することができる。 本発明の P P ARァゴニスト及び油脂組成物による内臓脂肪低減効果又は内臓 脂肪蓄積抑制効果は、 実験動物に候補化合物を一定期間 （例えば 4週間） 投与後 、 精巣周囲脂肪組織ゃ腎周囲脂肪組織等の内臓脂肪量を定量することにより評価 される。
本発明の実施に用いる P P ARァゴニス トとしては、 P P ARのリガンド選択 性が極めて広いことより、 P PARの何れのサブタイプに対してァゴニス ト活性 を示すものでも良いが、 各サブタイプの組織分布の特異性より判断すると、 PP ARァに対してァゴニス ト活性を示すことがより望ましい。 本発明の P PARァ ゴニス トは、 ァゴニス ト活性を示す有効成分として、 分子内に共役トリェン構造 (― CH= CH— CH二 CH— CH = CH—） 又は共役テトラエン構造 （― CH =CH— CH= CH— CH = CH— CH= CH— ) を有する炭素数 1 0〜 2 6の 共役不飽和脂肪酸、 その塩及びそのエステル誘導体を少なく とも一つ以上含有す る。 これら共役不飽和脂肪酸は、 P PARァゴニス ト活性を示すものであれば特 に制限はなく、 共役ト リエン構造又は共役テトラェン構造以外の部分に不飽和結 合を有していても、 また、 他の原子で置換されていても構わないが、 食品学的、 栄養学的、 生理学的、 薬理学的に許容されるものが好ましい。
前記ァゴニス ト活性を示す有効成分の具体的な例としては、 プニカ酸（punicic acid) ( 1 8 : 3、 9 c、 l i t, 1 3 c ) 、 カレンディン酸 （calendic acid ) ( 1 8 : 3、 8 t、 1 0 t、 1 2 c ) 、 ジャルカリ ック酸 （jarcaric acid) ( 1 8 : 3、 8 c、 1 0 t、 1 2 c ) 、 ひ-エレォステアリン酸（ひ- eleostealic acid) ( 1 8 : 3、 9 c、 l i t, 1 3 t ) 、 ?-エレォステアリン酸（ 3-eleos tealic acid) ( 1 8 : 3 , 9 t、 l i t, 1 3 t ) 、 カタルピン酸 （catalpic a cid) ( 1 8 : 3 , 9 t、 l i t, 1 3 c ) カム口レニン酸 （kamlolenic acid ) ( 1 80H、 9 c、 l i t, 1 3 t ) や、 その他の共役ォクタデカ トリエン酸 、 エイコサテ卜ラエン酸の共役化脂肪酸、 共役テ卜ラエン酸であるバリナリン酸 (parinaric acid) ( 1 8 : 4、 9 c、 l i t, 1 3 t、 1 5 c) 等が挙げられ る。 安定性及び入手の容易さという点では、 共役トリェン構造を有する炭素数 1 8の脂肪酸が好ましく、 更には P PARァァゴ二ス ト活性の点では、 立体異性が 、 9— cis、 1 1 -trans 1 3— cisであるプニカ酸、 9 -cis、 1 1 -trans、 1 3—transであるひ 一エレォステアリン酸、 9— trans、 1 1 - trans, 1 3 -c isであるカタルピン酸、 8—trans, 1 0 -trans, 1 2— cisであるカレンディ ン酸が好ましく、 更に好ましくは、 プニカ酸及びひ一エレォステアリン酸である 本発明の P PARァゴニス卜の有効成分である前記共役不飽和脂肪酸は、 その 塩又はそのエステル誘導体の形態でも良い。 塩としては、 食品学的、 栄養学的、 又は薬理学的に許容されるものであれば特に制限されず、 ナトリウム塩、 カルシ ゥム塩等の金属塩、 アンモニゥム塩、 メチルァミン、 ェチルァミン、 ジェチルァ ミン、 トリェチルァミン、 ピロリジン、 ピぺリジン、 モルホリン、 へキサメチレ ンィミン、 ァニリン、 ピリジン等の有機塩基との塩、 アルギニン、 グルタミン酸 、 オル二チン等のアミノ酸との塩等が挙げられる。 また、 エステル誘導体として は、 食品学的、 栄養学的、 又は薬理学的に許容されるものであれば何れでも選択 しうるが、 ェチルエステル、 ブチルエステル、 プロピルエステル及びグリセロー ルエステルが好ましく、 更に好ましくはェチルエステル及びグリセロールエステ ルである。 グリセロールエステル誘導体としては、 モノグリセリ ド、 ジグリセリ ド、 卜 リグリセリ ドの何れの形でもよいが、 ジグリセリ ド及びトリグリセリ ドの 形が好ましく、 ト リグリセリ ドが最も好ましい。 これらジグリセリ ド、 トリグリ セリ ドにおいて、 共役不飽和脂肪酸がエステル化される位置は目的に応じて選択 すればよく、 特に制限されることはない。 具体的な共役不飽和脂肪酸エステル誘 導体としては、 プニカ酸ェチル、 カレンディン酸ェチル、 ジャルカリック酸ェチ ル、 ひ-エレォステアリン酸ェチル、 ?-エレォステアリン酸ェチル、 カタルピン 酸ェチル、 バリナリン酸ェチル、 プニカ酸プチル、 プニカ酸プロピル、 1—プニ シ一リレー s n—グリセ口一ノレ ( 1 -punicyl—sn— glycerol) 、 2—フ。ニシーノレ一 s n—グリセローノレ ( 2—punicyl-sn— glycerol) 、 1 , 2—ジフ'ニシーノレ一 s n— グリセロール （ 1 , 2 -dipunicy卜 sn- glycerol) 、 2、 3—ジプニシ一ルー s n ーグリセロール （ 2、 3 -dipunicyl-sn-glycerol) 、 1 , 2、 3— トリプニシ一 ルー s n—グリセロール （ 1 , 2、 3 -tripunicyl-sn- glycerol) 等が挙げられ る。
本発明の P P AR活性を有する油脂組成物としては、 天然動植物の抽出物であ る油脂を利用することができる。 前記天然の動植物油脂としては、 植物油脂、 動 物油脂、 海産物油脂のいずれでも良いが、 量的確保が容易な植物油脂が好ましく 、 更には植物種子油がより好ましい。 これらの動植物油脂は、 工業用、 食品用又 は医薬品用として市販されている一般の油脂を用いても良いし、 天然の動植物、 好ましくは植物種子を公知の方法で抽出して得ることもできる。 原料となる植物 種子としては、 P PAR活性を有する共役不飽和脂肪酸、 その塩又はその誘導体 を含有するものであれば特に限定されないが、 ざくろ科 （Punicaceae) 、 きく科 (Compositae (Asteraceae) )、 とうだレヽぐさ科 (Euphordiaceae) 、 う り科 (Cu curitaceae) 、 のうぜんかずら科 (Bignoniaceae) 、 つりふねそう科 (Balsamin aceae) に属する植物種子が好ましく、 更に好ましくは、 ざくろ科ザクロ属ざく ろ （P. granatum L.) 、 きく科キンセンカ属きんせんか （C. officinalis L.) 、 とうだいぐさ科ァブラギリ属あぶらきり （A.cordata Mubll.Arg) 、 う り科二 ガウリ属つるれいし （にがう り） （M, charantia L.) 、 のうぜんかずら科キサ サゲ属きささげ （C. ovata G. Don) 、 つりふねそう科ヅリフネソゥ属ほうせん か （I.Balsamina L.) の種子である。 本発明では、 前記天然の動植物油脂を、 そのまま利用することもできるが、 脂 肪酸又はその誘導体の形に加工して用いても良い。 脂肪酸への加工方法は、 上記 動植物油脂を必要に応じて前処理した後、 加水分解して脂肪酸を得、 それを精製 するといつた方法が好ましい。 油脂の前処理方法としては、 融点以上の温度で放 置して比重の大きなものを沈降除去したり、 比重の軽いものを遠心分離除去する といった物理的な方法、 又は原料油脂に硫酸又はリン酸を加えて加熱攪拌し、 夕 ンパク質、 有機色素類を分解し、 中和、 洗浄により除去したり、 活性白土を加え て加熱処理し、 分解物、 着色物質、 樹脂状物質等を吸着除去するといつた化学的 な方法が挙げられる。 また、 加水分解の具体例としては、 油脂を水酸化カリウム 等のアルカリでケン化する方法、 酸化亜鉛、 酸化カルシウム、 又は酸化マグネシ ゥムを触媒として用いて中圧条件下で分解する中圧触媒分解法、 又は高圧下連続 的に分解する連続高圧分解法等の化学的な方法、 リパーゼゃ微生物を用いる生物 学的な加水分解法等が挙げられる。 脂肪酸の分離精製法としては、 バッチ式、 半 連続式、 連続式蒸留装置、 又は精密蒸留装置を用いて目的とする脂肪酸を蒸留精 製する方法、 過飽和状態の溶液又は溶融体を目的とする脂肪酸に応じて適切な温 度に冷却し、 結晶を生成させ、 生成した結晶を、 圧搾法、 S o l e x o l法 （米 国特許第 2293674号、 1942) 、 Eme r s o l法 （米国特許第 2421157号、 1974) 、 H e nk e l法 （W. S t e i nら、 J.Am. Oil Chem. Soc.、 45、 471、 1968) 等の方法で分取する方法が挙げられる。
また、 本発明の PPARァゴニス トの有効成分である共役不飽和脂肪酸は、 藻 類等の微生物を培養し、 培養物より油脂を抽出し、 更に公知の方法で脂肪酸を得 ることにより調製しても良い。 また、 公知の不飽和脂肪酸を、 化学的触媒存在下 、 又は微生物、 動物細胞又はこれらより抽出した酵素を用いて反応させることに より調製しても良い。 例えば、 赤色海藻 Ptilota filicinaの産生するイソメラー ゼを用いることにより、 ァラキドン酸、 ァ一リノレン酸、 又はエイコサペンタエ ン酸より共役ト リエン構造を有する高度共役不飽和脂肪酸を得る方法 （M.L.Wise 、 Biochemistry, 33、 15223、 1994) が挙げられる。
本発明において、 共役不飽和脂肪酸をエステル誘導体とする方法は特に限定さ れず、 例えば、 当該脂肪酸とエチルアルコール、 グリセロール等のアルコールよ り脱水反応で合成する直接エステル化法、 エステルとアルコール、 エステルと当 該脂肪酸、 又はエステルとエステルの反応で新しいエステルを合成するエステル 交換法、 当該脂肪酸の塩化物とアルコールより合成する方法、 エポキシ化合物と 当該脂肪酸を反応させる方法、 ォレフィンと当該脂肪酸を反応させる方法等、 公 知の方法を用いることができるが、 直接エステル化法、 エステル交換法が好まし い。 前記直接エステル化法の具体例としては、 当該脂肪酸とアルコールを混合し 、 必要に応じて トルエン、 キシレン等の共沸脱水剤を加え、 硫酸、 P-トルエンス ルホン酸、 酸化亜鉛、 活性アルミ、 酸化チタン、 テトライソプロピルチタナート 等の触媒存在下で加熱する方法が挙げられる。 また、 エステル交換法の具体例と しては、 脂肪酸エステルと他の脂肪酸エステル間で交換反応 （平尾子之吉、 油脂 化学本論後編、 p522、 風間書房、 1950) 、 脂肪酸エステルとアルコールとの反応 (H.J.Wrightら、 Oil & Soap、 21、 145、 1944) 、 アルカリを触媒とする、 A.T.G ros & R.O.Feugeらの方法 （J.Am. Oil. Chem.、 26、 704、 1949) 等が挙げられる。 本発明の P P AR活性を有する油脂組成物は、 そのまま、 又は適宜配合して飲 食品とすることができる。 また、 更に、 これらは、 工業的に生産される種々の飲 食品の原料素材及び加工食品素材として用いることもできる。 飲食品における前 記油脂組成物の含有量は特に限定されないが、 好ましくは 0. 0 1〜9 9重量％ 、 更に好ましくは 0. 1〜90重量％である。 また、 所望に応じて飲食品として 許容される各種の担体及び/又は添加剤を添加配合することができる。 用いる担 体や添加剤は、 前記油脂組成物の P PARァゴニス ト活性に悪影響を与えない限 り如何なるものでも良い。 この様な担体の具体例としては、 各種のキャリア一担 体、 イクステンダー剤、 希釈剤、 増量剤、 分散剤、 ブドウ糖、 乳糖等の賦形剤、 ヒ ドロキシプロピルセルロース （ H P C ) 、 ポリビニルピロリ ドン （ P V P ) 等 の結合剤、 水、 エタノール、 植物油等の溶媒、 溶解補助剤、 重曹等の緩衝剤、 溶 解促進剤、 ナトリウム CMC、 HPMC、 カンテン、 ゼラチン等のゲル化剤、 ナ トリウム CMC、 ナト リウムアルギネート等の懸濁化剤等が挙げられる。 また、 添加剤の具体例としては、 グルタミンソ—ダ、 イノシン酸等の可食性、 嗜好性を 向上させるための調味料、 バニラ、 ミント、 ローズマリー、 リナロール、 天然香 料等の香料、 ビタミン A、 ビタミン B l、 ビタミン B 2、 ビタミン B 6、 ビ夕ミ ン〇、 ビタミン E、 パントテン酸、 ニコチン酸等のビタミン類、 ステビア等の甘 味料、 クェン酸、 リンゴ酸、 フマル酸、 マロン酸、 コハク酸、 酒石酸、 乳酸等の 有機酸、 着色料、 湿気防止剤、 ファイバー、 電解質、 ミネラル、 栄養素、 抗酸化 剤、 保存剤、 芳香剤、 湿潤剤、 茶抽出物、 コーヒー抽出物、 ココア抽出物、 ォレ ンジ、 グレープ、 アップル、 モモ、 パイナップル、 ナシ、 プラム、 サクランボ、 パパイア、 トマト、 メロン、 イチゴ、 ラズベリー等のフルーツ抽出物等の天然植 物抽出物が挙げられる。
本発明の油脂組成物を含有してなる飲食品としては、 該油脂組成物の P P A R ァゴニス ト活性に悪影響を与えない限り如何なるものでも良く、 具体的には、 コ 一ヒ一、 紅茶、 緑茶、 ウーロン茶等の茶飲料類、 豆乳、 青汁、 果物ジュース、 野 菜ジュース等の果実野菜飲料類、 ヨーグルト等の乳酸菌飲料類、 牛乳等の乳飲料 類、 コーラ等の炭酸飲料類、 及び各種のスポーツドリンク類等の他、 パン類のベ —カリ一製品、 米飯、 麵類、 豆腐等の大豆加工食品、 ソーセージやハム等の魚畜 肉加工食品、 ケーキ、 クッキ一、 饅頭、 煎餅、 アイスクリーム、 プディング、 羊 羹、 キャンディー、 チョコレート等の菓子類、 バター、 ヨーグルト、 チーズ等の 乳製品、 マーガリン、 ショートニング等の加工油脂食品、 マヨネーズ、 ドレッシ ング、 醤油、 味噌、 ソース等の調味料、 コンニヤク、 漬け物類等が挙げられる。 本発明の油脂組成物を含有してなる飲食品は、 健康維持、 健康増進、 体力増強 効果を示す飲食品として利用することができる。 具体的には、 肥満状態の改善又 は肥満抑制、 蓄積した脂肪、 特に内臓脂肪の低減、 脂肪蓄積抑制、 特に内臓脂肪 蓄積の抑制、 高脂血症傾向 ·高コレステロール血症傾向等の脂質代謝異常の改善 、 糖尿病傾向 ·食後の高血糖傾向等の糖代謝異常の改善、 高血圧傾向の改善、 動 脈内膜肥厚亢進の抑制等の効果を発揮する食品として、 又は癌治療時の治療食品 として用いることができる。
本発明の P P A Rァゴニス ト活性を有する油脂組成物を医薬品の有効成分とし て用いる場合は、 そのまま、 又は医薬的に許容される無毒性かつ不活性の担体中 に 0 . 0 1〜 9 9 . 5重量％、 好ましくは 0 . 1〜 9 0重量％を含有させて、 ヒ トを含む哺乳動物に投与する。 前記医薬品のヒ トその他の哺乳動物への投与量は 、 目的とする効果を発揮し、 毒性の認められない範囲内であれば、 目的に応じ適 宜選択できるが、 前記油脂組成物の摂取量が前記動物の体重 1 k g当たり 1 m g 〜 3 gの範囲内での有効量を、 1 日当たり 1回又は数回に分割する方法で投与す ればよい。 尚、 前記医薬品の厳密な用量は、 投与様式、 投与薬の剤形、 治療しよ うとする対象の症状及び体重等により広範囲に変化しうるので、 責任ある医師も しくは獣医師の経験と選択により決定されることが好ましい。 また、 担体として は、 固形、 半固形、 液状の医薬品製剤において通常の製造の際に用いられる担体 を使用することができ、 特に制限されないが、 ブドウ糖、 乳糖等の賦形剤、 デン プン、 カルボキシメチルセルロースカルシウム （ C M C— C a ) 等の崩壊剤、 ヒ ドロキシプロピルセルロース （H P C ) 、 ポリ ビニルピロ リ ドン （ P V P ) 等の 結合剤、 タルク、 ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤、 重曹等の p H調節剤、 安定化剤、 希釈剤、 色素等及び他の処方用の助剤等の 1種以上が用いられる。 一 般に医薬品は、 投与単位形態で投与することが好ましく、 本発明の医薬品は、 錠 剤、 カプセル剤、 顆粒剤、 末剤、 散剤、 糖衣錠、 懸濁剤、 液剤、 シロップ剤、 ド ロップ剤、 舌下錠、 乳化剤等の経口剤として、 又は注射剤、 坐剤等の非経口投与 剤として使用できる。 長期にわたり投与を必要な場合は、 経口投与が望ましい。 本発明の油脂組成物を含有してなる医薬品は、 抗肥満剤、 内臓脂肪低減剤、 内 臓脂肪蓄積抑制剤、 高脂血症治療剤、 高コレステロール血症治療剤、 糖尿病治療 剤、 イ ンスリ ン抵抗性改善剤、 高血圧治療剤、 抗動脈硬化剤、 癌予防 ·治療剤と して用いることができる。
本発明の油脂組成物は、 そのまま、 又は可食性や嗜好性を向上するための調味 料、 香料等を適宜配合し飼料とすることもできる。 このとき、 一定の物性を保つ ため、 乳化剤、 安定剤を配合することもできる。 また、 更に、 これらは、 工業的 に生産される種々の加工飼料、 ペッ トフードの原料素材として用いることもでき る。 また、 本発明の油脂組成物を飼料に直接振りかけて用いても良い。 飼料にお ける本発明の油脂組成物の含有量は特に制限されないが、 飼料に対して固形分換 算で例えば 0 . 1〜 9 9 . 5重量％、 好ましくは 0 . 5 %〜 9 0重量％の範囲で ある。 この飼料は、 家畜及び愛玩動物の肥満予防 ·肥満改善飼料、 糖尿病予防 - 治療飼料、 癌予防 ·治療飼料として用いることができる。
また、 本発明の油脂組成物を、 飲食品、 医薬品、 飼料に用いる場合に、 他の同 様な効果を持つ飲食品、 医薬品、 飼料組成物と併用しても構わない。 発明を実施するための最良の形態
以下、 実施例により本発明を更に詳しく説明するが、 本発明はかかる実施例に 限定されるものではない。
(実施例 1 ) 植物種子からの共役不飽和脂肪酸グリセロールエステル及び共役 不飽和脂肪酸の調製
市中の果物店より購入したザクロ （米国、 カルフォルニア産） の実を割り、 中: の種の周りにある液果を除去し、 乾燥させたザクロ種子、 市中の種子販売店より 購入したキンセン力種子、 二ガウリ種子及びホウセン力種子、 市中の漢方薬店よ り購入したキササゲ種子をそれそれ粉砕後、 2倍重量の n—へキサンを加え、 室 温で 6時間、 2回抽出を行い、 それそれの抽出液を得た。 各抽出液より溶媒を溜 去し、 ザクロ種子油、 キンセン力種子油、 二ガウリ種子油及びキササゲ種子油を 得た。 得られた各種子油及び市販の桐油 （ナカライテスク （株） ） のへキサン溶 液をシリカゲル 6 0 F 2 54 T L Cプレート （E.M e r c k社製） にスポッ ト し、 n—へキサン ：ェチルエーテル ：酢酸 （ 6 0 : 40 : 1 ) で展開後、 ヨウ素 を用いて発色させたところ、 桐油と同様の Rf 0. 5〜0. 7にかけて トリグリ セリ ドに相当する主要スポッ トを認めた。 上記の様にして得られた各植物種子油 及び桐油の 1 gをエタノールに溶解後、 KOHを加えて加熱加水分解した。 分解 生成物より不ケン化物を抽出除去した後、 水相を分取し、 p H 2.5に調整した 後、 n—へキサン抽出し、 溶媒を減圧溜去して遊離脂肪酸を得た。 各脂肪酸画分 を上記と同様に TL C分析した結果、 主成分は遊離脂肪酸であった。 得られた遊 離脂肪酸をシリカゲルカラムクロマトグラフィー （ヮコ一ゲル C一 200、 和光 純薬株式会社製） に付与し、 n—へキサンで洗浄した後、 2 0容量％ェチルエー テル含有 n—へキサンで溶出して、 精製脂肪酸画分を得た。 収量はザクロ種子油 より 0. 88 g、 キンセン力種子油より 0. 9 1 g、 桐油より 0. 9 2 g、 ニガ ゥリ種子油より 0. 9 0 g、 キササゲ種子油より 0. 90 g、 ホウセン力種子油 より 0. 8 9 gであった。
上記のようにして得られた各脂肪酸と、 市販の C LA (研光通商社製） を、 ジ メチルスルフォキシド存在下、 硫酸—メ夕ノール溶液 ( 2 ： 230、 容量比） で 処理して脂肪酸メチルエステル誘導体とし、 ガスクロマトグラフィーにより下記 の条件で分析した。
システム ： HP (ヒュ一レツ ド ' ノ ッカー） 株式会社製 5 890シリーズ II。 カラム ： S P E LU CO S P— 238 0、 100mm x 0.25匪 ID。
力ラム温度 ： 1 8 5 °C。
インジェクション温度 ： 2 0 0 °C。
検出器温度 ： 2 1 0°C。
また、 各脂肪酸を高木の方法 （高木、 日本化学雑誌、 86、 296、 1965) を参考 に、 各脂肪酸 0. 5 gにエタノール 6 Omlとヒ ドラジンヒ ドラート 1 Om lを 加え、 冷却器を付け 5 0°Cで空気を吹き込みながら 2時間かき混ぜ、 反応生成物 をジェチルエーテルで抽出し、 抽出液を塩酸水溶液で洗った後、 エーテルを留去 した。 生成物に 2 %硫酸一メタノール 1 0mlを加え窒素下で一夜放置し、 メチ ルエステルとした。 得られた生成物を硝酸銀浸漬シリカゲル薄膜クロマトグラフ ィ一により分析した。 また、 二硫化ジメチル付加物に導き、 GC/MS (サーモ クェス ト社 GC— 9 ) にて分析した。
これらの分析結果を基に、 得られた脂肪酸の炭素数、 不飽和結合数、 不飽和結 合の位置、 及び立体異性を決定した。 分析の結果を表 1にまとめた。
表 1 植物種子油由来の脂肪酸組成
Figure imgf000018_0001
ND*：検出限界以下 その結果、 ザクロ種子油由来の脂肪酸の主成分はプニカ酸であった。 キンセン 力種子油由来脂肪酸の主成分はカレンディン酸とリノール酸であった。 桐油及び 二ガウリ種子油由来脂肪酸の主成分はひ —エレォステアリン酸であった。 キササ ゲ種子油由来脂肪酸の主成分はカタルピン酸とリノール酸であった。 ホウセン力 種子油由来の脂肪酸の主成分は、 パリナリン酸であった。
(実施例 2 ) 植物種子油由来脂肪酸の P P A Rァゴニス ト活性
C V - 1 (雄性アフ リカミ ドリザル腎臓由来の培養細胞、 財団法人 ヒユーマ ンサイエンス事業団より購入） 2 x 1 04個を、 1 0 %牛胎仔血清 （G I B C 0 社製） 、 ペニシリ ン ' ス ト レプトマイシン （それそれ 1 0000単位/ ml、 1 0000〃 g/ml、 G I B C〇社製） 、 ァスコルビン酸 （ 37〃 g/m 1、 和 光純薬株式会社製） を含有する DMEM (Dulbecco's Modified Eagle medium, G I B CO社製） 5 00〃 1を入れた 24穴プレートに植え込み、 37 °C、 5 % C02条件下で 24時間培養し、 OP T I— MEM (G I B CO社製） で洗浄後 、 予め吉川の方法 （吉川和明、 神経生理学のための遺伝子導入発現研究法、 シュ プリンガ一フエアラーク東京、 1997) を参考に調製保存した pM— P P AR [p S V40発現べクタ一中に、 酵母由来転写因子 G A L 4遺伝子 （アミノ酸配列 1 - 147) を含む p S V 40発現ベクターの G AL 4の C末側に P P ARァ リガ ンド結合部位遺伝子 （アミノ酸配列 2 04— 5 05 ) を挿入して調製したキメラ 蛋白発現用プラスミ ド] と 4 xUAS g— l u c [レポーター遺伝子であるルシ フェラーゼ遺伝子の上流に G A L 4の応答配列 （UAS g) を 4回組み込んだレ ポー夕—プレスミ ド] 、 或いは、 PM (上記 P M— P PARより P PARァ リガ ンド結合部位配列を除去したプラスミ ド] 、 及び 4 xUAS g— l u cを L i p o f e c t AM I NE (G I B CO社製） を用いて トランスフエクシヨンし、 トランスフヱクシヨン完了 5時間後、 20 %牛胎仔血清含有 DMEMを追加し、 血清濃度を 1 0 %に調整しオーバーナイ 卜で培養した。 翌朝、 リガンド試薬添加 群として、 共役リノール酸 （C LA、 研光通商株式会社より購入） 、 及び実施例 1と同様の方法で調整したザクロ種子油由来脂肪酸、 キンセン力種子油由来脂肪 酸、 桐油由来脂肪酸、 キササゲ種子油由来脂肪酸、 二ガウリ種子油由来脂肪酸、 ホウセン力種子油由来脂肪酸の各へキサン溶液を窒素気流下でドライアツプ後、 ジメチルスルホキシド （DMS O) に溶解し、 1 0 %活性炭処理済牛胎仔血清含 有 DMEMを用いて 1 000倍希釈して調製した培地に交換した群を設けた （最 終脂肪酸濃度 2 0〃M) 。 また、 無処置対照群としては、 DMS Oのみを 1 0 % 活性炭処理済牛胎仔血清含有 DMEMで希釈した培地で交換した群を設けた。 また、 陽性対照群として、 従来より P PARァの強力なァゴニス トであることが知られ ている トログリダゾン （三共株式会社製、 以下、 T ZDと略称する。 ） （ 1〃M ) を含有する培地で交換した群を設けた。 培地交換の 1日後、 培地を除き、 細胞 をリン酸緩衝生理食塩水 （ P B S) で洗浄後、 ピッカージーン細胞溶解液 L u c (東洋インキ株式会社製） を用いて細胞溶解液を調製し、 細胞溶解液 2 0〃 1を ピッカージーン発光基質 （東洋インキ株式会社製） 1 0 0〃 1と反応させ、 測定 時間 1 0秒の設定でルミノメ一夕一 （ベルトールド Luma t LB 9 5 0 1 ) を 用い、 ルシフヱラーゼ活性を測定した。
得られた結果の解析は以下の通り行った。 即ち、 無処置対照群において、 測定 群 （pM— P PARと 4 x UA S g— l u cを トランスフエクシヨンした群） の コントロール群 （pMと 4 xUA S g— l u cをトランスフエクシヨンした群） の比を （a) とし、 リガン ド試薬添加群において、 測定群のコントロール群に対 する比を （b) とし、 リガンド試薬による P PARァァゴニス 卜活性は （b) / (a) の比で評価した。 試験間でのトランスフエクシヨン効率の違いによる誤差 を避けるため、 陽性対照群として T Z D ( 1〃M) を入れ試験間の値を補正した
表 2 植物種子油由来の共役不飽和脂肪酸の P P ARァゴニス ト活性
Figure imgf000020_0001
表 2に示す通り、 共役ト リエン酸を主成分とする植物種子由来の脂肪酸を添加 した群では、 何れも、 CL Aより強い P PARァゴニス ト活性が認められた。 各 脂肪酸画分に含まれる共役ト リェン酸以外の脂肪酸には C L Aに優るような強い P PARァゴニスト活性が認められないことより、 共役トリエン酸が強い P P A Rァゴニス ト活性を有していることは明らかである。
(実施例 3 ) ザクロ種子油由来の脂肪酸と C L Aの P P A Rァゴニス ト活性比 較
実施例 2 と同様にして、 C L Aとザクロ種子油由来脂肪酸の濃度を変えて、 そ の P PARァゴニス ト活性を評価した。 その結果、 表 3に示す通り、 ザクロ種子 由来脂肪酸は C L Aの約 1 / 1 0濃度でほぼ同等の P PAR yァゴニス ト活性を 示し、 5 7〃M以上の濃度では、 T Z D ( 1 iM) とほぼ同等の活性を示すこと が明らかとなった。 表 3 ザクロ種子油由来脂肪酸と C L Aの P P A Rァゴニスト活性
Figure imgf000021_0001
(実施例 4) ザクロ種子油の内臓脂肪低減効果、 脂質代謝改善効果
1 0週令の雌性 C 5 7 B L/6 Jマウス （日本クレア株式会社製） を、 表 4に 組成を示す高脂肪 ·高糖分食精製飼料 （オリエンタル酵母株式会社製） で 3週間 飼育することにより肥満にした後、 8匹/群に分け、 脂肪分を除去した成長期用 標準配合飼料 （A I N— 9 3 G ： オリエンタル酵母株式会社製） に必須脂肪酸源 としてダイズ油 2重量％と被試験油脂 7重量％又は対照油脂 7重量％を加えた試 験飼料にて更に 3週間飼育した。 3週間後、 最後の餌を与えた後、 1 6時間絶食 にした後、 エーテル麻酔下でへパリンを含む注射筒を用いて全採血し、 その後、 解剖し、 腎臓周囲脂肪組織、 卵巣周囲脂肪組織、 肝臓、 腎臓、 脾臓を採取し、 そ れらの重量を測定した。 得られた臓器重量を体重で除し、 対体重臓器重量比を求 めた。 腎臓周囲脂肪組織及び卵巣周囲脂肪組織を内臓脂肪組織として評価した。 採血した血液は、 冷却下 3 0 0 0回転で 1 5分間遠心し血漿を得た後、 総コレス テロール濃度はコレステロール Cテス トヮコ一 （和光純薬株式会社製） により 、 中性脂肪濃度はト リグリセリ ド Gテス トヮコ一 （和光純薬株式会社製） によ り、 遊離脂肪酸濃度は NE F A Cテス トヮコー （和光純薬株式会社製） により 測定した。 試験群としては、 実施例 1 と同様の方法で調製したザクロ種子油を添 加した群 （ザクロ種子油群） 、 対照群としては、 ダイズ油を添加した群 （ダイズ 油群） 、 比較群として、 肥満改善効果の知られている DHA高含有魚油 （D HA 2 0重量％含有） （ハリマ化成株式会社製） を添加した群 （魚油群） を設けた。 また、 C L A群としてダイズ油 6. 5重量％、 C L A (研光通商株式会社製、 Ί 0 %純度） 0. 5重量％を添加した群 （ C LA群） を設けた。 尚、 予備試験の結 果、 同様の試験条件下で、 C L Aは 1重量％以上添加において顕著な肝肥大 （対 照に対し 1. 4倍） 、 摂餌量の減退が認められたことより、 実質的な用量は 0. 5重量％以下と判断し、 0. 5重量％とした。 一方、 最初から試験の期間を通し てダイズ油 9重量％を含む標準食を食べさせる群 （標準食群、 n= 3 ) を設けた 。 試験期間中水は自由摂取、 餌は、 ダイズ油群と同等の摂餌量になるように制限 給餌を行った。 表 4 高脂肪 ·高糖分食飼料組成
Figure imgf000022_0001
その結果、 表 5に示す通り、 試験期間中、 各群間の摂餌量、 体重増加量には有 意な変化を認めなかった。 ダイズ油群では標準食群に較べ、 対体重内臓脂肪重量 比が明らかに増加しており、 高脂肪 ·高糖分食摂取によりマウスは内臓脂肪型肥 満を呈していたことが示唆された。 各群の対体重内臓脂肪重量比を比較すると、 魚油群 >ダイズ油群 > C L 群>ザクロ種子油群の順序で、 ザクロ種子油は明ら かに魚油及び C L Aに優る内臓脂肪低減効果を示した。 表 5 ザクロ種子油の内臓脂肪低減効果
Figure imgf000023_0001
N T ：測定せず
* ： P < 0 . 0 5 また、 血漿中総コレステロール濃度、 中性脂肪濃度、 遊離脂肪酸濃度を分析し た結果、 表 6に示す通り、 ザクロ種子油群では中性脂肪低減傾向と遊離脂肪酸の 有意な低減効果が認められ、 生体内での脂質代謝改善効果が認められた。 表 6 ザクロ種子油の脂質代謝改善効果
Figure imgf000023_0002
N T ：測定せず
* ： P < 0 . 0 5、 * * ： P < 0 . 0 1
(実施例 5 ) ザクロ種子油の内臓脂肪蓄積抑制効果
6週令の雌性 I C R系 C D— 1マウス （チャールズリバ一株式会社製） を 8匹 /群に分け、 脂肪を除去したマウス · ラッ ト用標準配合飼料 （成長期用 A I N— 9 3 G、 オリエンタル酵母株式会社製） に被試験油脂を所定量添加して調製した 飼料を用い、 4週間飼育した。 4週間後、 エーテル麻酔下解剖し、 腎臓周囲脂肪 組織、 卵巣周囲脂肪組織、 肝臓、 腎臓、 脾臓を採取し、 それらの重量を測定した 。 腎臓周囲脂肪組織及び卵巣周囲脂肪組織の重量の和を内臓脂肪として評価した 。 試験群としては、 実施例 1と同様の方法で調製したザクロ種子油 1. 7重量％ (プニ力酸として 1重量％) とダイズ油 5. 3重量％を添加した群 （ザクロ種子 油群） 、 対照群として、 ダイズ油 7重量％を添加した群 （ダイズ油群） 、 比較群 として、 肥満改善効果の知られている DH A高含有魚油 （DHA 2 0 %含有、 ハ リマ化成株式会社製） 7重量％を添加した群 （魚油群） を設けた。
その結果、 試験期間中の各群間の摂餌量、 体重増加量には有意な変化を認めな かった。 各臓器重量の測定結果を対体重臓器重量比として表 7に示す。 魚油群で は有意な内臓脂肪蓄積抑制効果が認められた。 ザク口種子油群では 、油とぼぼ同 等の内臓脂肪蓄積抑制効果が認められた。 表 7 ザクロ種子油の内臓脂肪蓄積抑制効果
Figure imgf000024_0001
* ： P < 0. 05
(実施例 6 ) 高度共役不飽和脂肪酸による癌細胞増殖抑制効果
1 0 %牛胎仔血清添加 R P M I - 1 640培地 （Gibco BRL社製） に懸濁した ヒ ト大腸癌由来細胞 D LD— 1細胞 （ 5 x 1 05cells/m 1 ) の 2 00〃 1を 9 6穴プレー トの各ゥヱルに分注し、 3 7°C、 5 %C02条件下で 24時間培養後 、 各ゥエルに、 実施例 1で調製したザクロ種子油由来の脂肪酸、 又は桐油由来脂 肪酸のへキサン溶液を窒素気流下で溶媒を十分に揮散させた後、 ジメチルスルフ ォキシ ドに溶解し、 ホスフェートバッファ一ドセ一ライ ン （P B S) で希釈する ことにより予め調製しておいた脂肪酸溶液を添加し、 更に 2 0時間培養した。 そ の後、 [3 H] t hymi d i n e (アマシャムジャパン社製） を 1〃 c i / 1 0 ^ 1/w e 1 1添加し、 更に 4時間培養した。 細胞を PB Sで洗浄後 2 N— N aOH溶液 1 00 1で溶解し、 4 N— H C L 5 0〃 1で中和後、 放射活性を液 体シンチレーションカウン夕一を用いて測定した。 試験サンプルの代わりに P B Sを用いた試験を対照とした。 その結果を表 8に示す。 桐油及びザクロ種子油に は癌細胞増殖抑制効果が認められた。 表 8 桐油由来脂肪酸、 ザクロ種子油由来脂肪酸による癌細胞増殖抑制効果
Figure imgf000025_0001
(実施例 7 ) ザクロ種子油の安全性評価
6週令の雌性 I CR系 CD— 1マウス （チャールズリバ一株式会社製） 5匹に ザクロ種子油を 1 0 g/k gの割合で強制経口投与し、 マウスの一般状態を 1週 間親察した。 その結果、 特段の毒性症状は認めなかった。 また、 同マウス 8匹/ 群を、 脂肪分除去マウス · ラッ ト用標準配合飼料 （成長期用 A I N— 9 3 G、 ォ リエンタル酵母株式会社製） にダイズ油 2重量％と実施例 1と同様な方法で調製 したザクロ種子油 7重量％を添加した飼料 （ザクロ種子油群） 、 ダイズ油 8.5 重量％と実施例 1と同様な方法で調製したザク口種子油由来の脂肪酸 0. 5重量 %を添加した飼料 （ザクロ種子油由来脂肪酸群） 、 ダイズ油 9重量％を添加した 飼料 （ダイズ種子油群） で、 4週間飼育し、 体重変化、 摂餌量変化、 一般状態、 及び 4週間後の主要組織重量測定及び肉眼的観察を行った。 その結果、 各群間で 体重変化及び摂餌量に差異を認めず、 特段の毒性所見を認めなかった。
(実施例 8 ) ザクロ種子油含有マーガリンの製造
硬化ダイズ油 （mp 40 °C) 6 0重量％、 パーム油 2 0重量％、 コーン油 20 重量％からなる油脂組成物を 8 0重量部、 レシチンを 0. 3重量部、 モノグリセ リ ド 0 . 3重量部、 水 1 6重量部、 食塩 2重量部、 実施例 1 と同様にして調製し たザクロ種子油 5重量部、 抗酸化剤としてビタミン Eを少量加え、 6 0 °Cで、 窒 素ガスを吹き込みながら T Kホモミキサ一を用いて 5 0 Vで 1 5分間乳化したの ち、 1 5 °Cに急冷捏和し、 風味的に問題のないシート状マーガリンを得た。
(実施例 9 ) ザクロ種子油含有マーガリンを用いたパイの製造
実施例 8で得たザク口種子油含有シート状マ一ガリン 1 2 5 0 g、 薄力粉 1 5 0 0 g、 強力粉 1 0 0 0 g、 粉乳 6 0 gを混ぜ、 これに、 食塩 4 5 g 砂糖 1 5 0 0 gを水 1 2 5 0 m 1に溶解した水溶液を加え、 軽く混ぜて生地をまとめ、 こ れをシート状に延ばし、 三つ折りを 5回繰り返して成形した後、 オープンにて焼 きパイを製造した。
(実施例 1 0 ) ザクロ種子油由来脂肪酸含有食パンの製造
製パン原料 （強力小麦粉 1 0 0重量部、 イースト 3重量部、 粉乳 3重量部、 砂 糖 5重量部、 水 7 0重量部、 塩 2重量部、 マ一ガリン 7重量部） の混捏時に、 小 麦粉 1 0 0重量部に対して実施例 1 と同様な方法で得られたザクロ種子油由来脂 肪酸 1重量部を添加して、 捏上げて発酵させてパン生地を作り、 このパン生地を 2 5 °Cでフロアータイム 6 0分をとり、 分割した後、 室温でベンチタイム 3 0分 をとり、 次いで、 パン型に入れ、 温度 3 8 °C、 湿度 9 0 %の条件下に 6 0分保持 した後、 オーブンで焼成して （ 1 9 0 °Cで 4 5分） 、 食パンを製造した。
(実施例 1 1 ) ザクロ種子油を含有するチョコレートの製造
カカオマス 2 2重量部、 カカオバター 1 0重量部、 カカオバタ一代替油脂 1 0 重量部、 全粉乳 8重量部、 実施例 1 と同様な方法で調製したザクロ種子油 1重量 部を 6 0 °Cで良く混合し、 リファイナ一に通し、 コンチング、 テンパリングを行 い、 次いで型に流して冷却し、 板チョコを製造した。
(実施例 1 2 ) ザク口種子油を含有するホイ ップクリームの製造
上昇融点 3 4 °Cのナタネ硬化油 7 0重量部と上昇融点 3 2 °Cのヤシ硬化油 3 0 重量部からなる混合油脂に、 乳化剤として合成ジグリセロールステアレート 0 . 8重量部、 大豆レシチン 0 . 6重量部、 ザクロ種子油 3重量部を油温 7 0 °Cにお いて添加溶解して油脂組成物を得た。 別に脱脂乳 5 4 . 9部にへキサメタリン酸 ナトリウム 0 . 1重量部を加え 5 5 °Cまで攪拌しつつ加温した。 この脱脂乳中に 前記の乳化剤添加油脂組成物 4 5重量部を加え、 6 5 °Cに保持しつつ予備乳化し 、 この混合物をホモジナイザーに通し、 1回目 8 0 k g/c m2、 2回目 2 0 k g/cm2の圧力にて均質化した後、 9 5°C、 1 5秒間殺菌処理を行い、 更にプ レート式冷却機を用いて 5 °Cまで冷却した後、 5 °Cの恒温器中に 24時間エージ ングして起泡性合成クリームを得た。 得られたクリームは風味に問題は無かった
(実施例 1 3) ザクロ種子油を含有するフレンチ ドレッシングの製造 サラダオイル 1 5 0重量部、 ザクロ種子油 30重量部、 ワインビネガー 1 00 重量部と塩、 胡椒を少々加え風味に問題のないフレンチドレッシングを製造した 。
(実施例 1 4 ) 共役不飽和脂肪酸、 又は共役不飽和脂肪酸トリグリセリ ド含有 飲料の製造
実施例 1の方法に準じて調製したザクロ種子油、 二ガウリ種子油、 キンセン力 種子油、 ホウセン力種子油、 ザクロ種子油由来脂肪酸、 桐油由来脂肪酸、 キンセ ンカ種子油由来脂肪酸、 又はホウセン力種子油由来脂肪酸を 1重量部、 混合乳化 剤 8. 5重量部、 及び還元澱粉糖化物 90. 5重量部を混合乳化し、 直ちに、 8 0°C、 1 0分加熱殺菌し、 その乳化物 5重量部を、 グラニュー糖 5重量部、 液糖 14重量部、 香料 1重量部、 クェン酸 0. 5重量部、 クェン酸ナト リウム 0. 2 重量部、 水 74重量部、 p H 3. 3と混合し飲料を得た。
(実施例 1 5) 経口用カプセル剤の調製
実施例 1と同様の方法で得られたザクロ種子油、 二ガウリ種子油、 キンセン力 種子油、 ホウセン力種子油又は市販桐油を 40 mg、 乳糖 2 00 mg、 デンプン 70mg、 ポリ ビニルピロ リ ドン 5 , 結晶セルロース 3 5mgを混合後、 # 3ゼ ラチンカプセルに充填し、 表面をゼラチンコ一ティングし経口用カプセルを調製 した。
(実施例 1 6) 経口錠剤の調製
実施例 1と同様の方法で得られたザクロ種子油由来脂肪酸、 桐油由来脂肪酸、 キンセン力種子油由来脂肪酸、 又はホウセン力種子油由来脂肪酸 5 gと、 乳糖 7 0 g、 コーンスターチ 30 gを均一に混合し、 これに 1 0 %のヒ ドロキシプロピ ルセルロース溶液 2 5 m 1を加え、 攪拌造粒する。 これを乾燥後、 整粒しステア リン酸マグネシウム 2 g、 タルク 2 gを加え混合し、 ロータリー打錠機にて錠剤 を製造した。
(実施例 1 7 ) 共役トリエン酸ト リグリセリ ド含有乳化剤の調製
バクス夕一社製イ ン トライビヅ ド （ I n t r a l i p i d ) 9 5重量部に実施 例 1と同様にして得たザクロ種子油、 キンセン力種子油、 キササゲ種子油、 ニガ ゥリ種子油、 ホウセン力種子油、 又は桐油 5重量部を加えて乳化し、 共役トリェ ン酸トリグリセリ ド含有乳化剤を得た。
(実施例 1 8 ) 共役不飽和脂肪酸又は共役不飽和脂肪酸ト リグリセリ ド含有べ ッ トフ一ドの調製
チキンすり身 8 0重量部、 赤身牛肉挽肉 1 0重量部、 大豆蛋白 1 0重量部、 実 施例 1 と同様の方法で調製した、 ザクロ種子油、 二ガウリ種子油、 キンセン力種 子油、 ホウセン力種子油、 実施例 1 と同様の方法で調製したザクロ種子油由来脂 肪酸、 桐油由来脂肪酸、 キンセン力種子油由来脂肪酸、 又はホウセン力種子油由 来脂肪酸を 3重量部、 化学調味料 1重量部、 トコフエロール 1重量部、 その他力 ルシゥムを少々、 ビタミン類少々、 デンプン少々、 ソルビトールを少々をフード カッターで練り合わせ、 羊腸に充填し、 9 0 ~ 9 5 °Cで加熱調理後、 5 0 °Cで通 風乾燥して ドライソセージタイプのぺヅ トフ一ドを得た。 産業上の利用可能性
P P A Rァゴニスト活性を示す共役トリエン酸又は共役テトラェン酸、 それら の塩、 又はそれらのエステル誘導体を含有する油脂組成物は、 内臓脂肪低減効果 、 内臓脂肪蓄積抑制効果、 脂質代謝異の改善効果、 糖代謝異常の改善効果、 癌細 胞の増殖抑制効果を有することより、 ヒ トのダイエツ トゃ上記身体的傾向の改善 を目的とした健康飲料、 健康食品、 補助食品、 医薬品の組成物として利用するこ とができる。 また、 ペッ トの肥満や糖尿病傾向の予防 ·治療用飼料、 又は癌予防 •治療用飼料の原料として利用することができる。

Claims

請求の範囲
1. 分子内に共役トリェン構造 （一 CH = CH— CH二 CH— CH = CH— ) 又は共役テトラエン構造 （一 CH = CH— CH二 CH— CH=CH— CH = C H— ) を有する炭素数 1 0〜 2 6の共役不飽和脂肪酸、 その塩及びそのエステル 誘導体の内から選択される少なく とも 1種をァゴニストとして、 その予防 ·治療 学的有効量をヒ ト又は動物に投与することからなる、 ヒ ト又は動物のペルォキシ ゾーム活性化剤応答性受容体の標的遺伝子配列に対する結合を促進し、 その下流 の遺伝子発現を促進する方法。
2. 前記ァゴニス トが、 分子内に共役トリェン構造 （一 CH= CH— CH二 CH— CH = CH— ) を有する炭素数 1 0〜2 6の共役不飽和脂肪酸、 その塩及 びそのエステル誘導体の内から選択される少なく とも 1種である請求項 1記載の 方法。
3. 前記ァゴニス トが、 プニカ酸、 カレンディ ン酸、 ひ-エレォステアリ ン 酸、 エレォステアリン酸、 カタルピン酸、 及びバリナリン酸の内から選択さ れる少なく とも 1種の共役不飽和脂肪酸、 その塩又はそのエステル誘導体である 請求項 1記載の方法。
4. 前記ァゴニス トが、 前記共役不飽和脂肪酸のェチルエステル及びグリセ ロールエステル誘導体の内から選択される少なく とも 1種である請求項 3記載の 方法。
5. 前記ァゴニス トを含む油脂組成物をヒ ト又は動物に投与する請求項 1記 載の方法。
6. 前記油脂組成物が、 ざくろ科、 きく科、 とうだいぐさ科、 うり科、 のう ぜんかずら科及びつりふねそう科に属する植物の内から選択される少なくとも 1 種の植物種子の抽出物又はその加工物である請求項 5記載の方法。
7. 前記植物種子の抽出物が、 ザクロ種子油、 キンセン力種子油、 桐油、 二 ガウリ種子油、 キササゲ種子油及びホウセン力種子油の内から選択される少なく とも 1種である請求項 6記載の方法。
8. 前記ペルォキシゾーム活性化剤応答性受容体がペルォキシゾーム活性化 剤応答性受容体ァである請求項 1記載の方法。
9 . 前記ァゴニス トを含む飲食品をヒ ト又は動物に投与する請求項 1記載の 方法。
1 0 . 前記飲食品が、 マ一ガリン、 ショートニング、 食用油、 ドレッシング 、 マヨネーズ、 チョコレート、 クッキ一、 パイ、 及びパンの内から選択される少 なくとも 1種である請求項 9記載の方法。
1 1 . 前記ァゴニス トを有効成分として含む医薬品をヒ ト又は動物に投与す る請求項 1記載の方法。
1 2 . 前記ァゴニス 卜を含む飼料を動物に投与する請求項 1記載の方法。
1 3 . 請求項 1記載の方法によりペルォキシゾーム活性化剤応答性受容体の 標的遺伝子配列に対する結合を促進し、 その下流の遺伝子発現を促進することで 、 ヒ ト又は動物の内臓脂肪低減又は内臓脂肪蓄積抑制を行う方法。
1 4 . 請求項 1記載の方法によりペルォキシゾーム活性化剤応答性受容体の 標的遺伝子配列に対する結合を促進し、 その下流の遺伝子発現を促進することで 、 ヒ ト又は動物の脂質代謝異常の予防又は改善を行う方法。
1 5 . 請求項 1記載の方法によりペルォキシゾーム活性化剤応答性受容体の 標的遺伝子配列に対する結合を促進し、 その下流の遺伝子発現を促進することで 、 ヒト又は動物の糖代謝異常の予防又は改善を行う方法。
1 6 . 請求項 1記載の方法によりペルォキシゾーム活性化剤応答性受容体の 標的遺伝子配列に対する結合を促進し、 その下流の遺伝子発現を促進することで
、 ヒト又は動物の癌の予防又は治療を行う方法。
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