WO1997004126B1 - Procede d'amplification de sequences d'acide nucleique par deplacement, a l'aide d'amorces chimeres - Google Patents
Procede d'amplification de sequences d'acide nucleique par deplacement, a l'aide d'amorces chimeresInfo
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Abstract
Pour amplifier une séquence d'acide nucléique cible (12), en présence d'un système enzymatique comprenant des activités d'ADN polymérase, de déplacement de brin et de RNAse H, on utilise une amorce chimère (A1, A2) comprenant successivement, dans le sens 5' → 3', un segment de type ARN capable de s'hybrider avec un segment de l'extrémité 3' de la cible et un segment de type ADN capable de s'hybrider avec un segment contigu audit segment d'extrémité 3' de la cible, et une amorce B1, de type ADN ou ARN, capable de s'hybrider avec ledit segment de l'extrémité 3' de la cible. On obtient une amplification cyclique pouvant être mise en ÷uvre de façon isotherme et réalisable indifféremment à partir d'une cible ADN ou ARN, même lorsque les extrémités ne sont pas définies.
Claims
REVENDICATIONS MODIFIEES
[reçues par le Bureau international le 22 janvier 1997 (22.01.97); revendication 8 modifiée; autres revendications inchangées (1 page)]
polynucléotidique amont.
7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé par le fait que le produit de départ est un ARN contenant la séquence à amplifier, et que pour obtenir ledit polynucléotide monobrin de type ADN, on met en contact ledit ARN avec lesdites première et seconde amorces et le cas échéant avec lesdites troisième et quatrième amorces.
8. Nécessaire pour la mise en oeuvre d'un procédé d'amplification d'une séquence d'acide nucléique cible, caractérisé par le fait qu'il comprend un système enzymatique ayant une activité de RNAse H et au moins une amorce chimère comprenant successivement, dans le sens 5'→ 3':
- un segment, facultatif, de type ADN,
- un segment de type ARN,
- et un segment de type ADN.
9. Nécessaire selon la revendication 8, caractérisé par le fait qu'il contient en outre un système enzymatique ayant une activité d'ADN polymerase ADN -dépendante et une activité de déplacement de brin.
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