WO1994028918A1 - Preparation vaginale contenant un peptide a activite physiologique - Google Patents

Description

明 細 書

生理学的に活性なぺプチドを含有する膣投与製剤 技術分野

本発明は、 生理学的に活性なペプチドを有効成分とする膣投与製剤、 さ らに詳しくは、 吸収促進剤としてショ糖脂肪酸エステルおよび有機酸を配 合したことを特徴とする、 生理学的に活性なペプチドが人体に安全で、 且 つ、 より効率よく膣粘膜から吸収されるように改良した生理学的に活性な ぺプチドを含有する膣投与製剤に関する。

背景技術

生理学的に活性なぺプチドの研究は近年急速に発展しており、 遺伝子操 作や精製技術の発展に伴い、 より純度の高いぺプチドの大量生産が可能に なり、 また薬理 '治療分野における薬物受容体 （レセプター) の構造等を 含む作用機作の解明、 さらには病態モデル動物の発見や改良等に伴う新た な生理活性の発見もされている。 以上のような発展に伴い、 これらの生理 学的に活性なペプチドは重要な薬物治療薬として期待され、 今日、 その臨 床応用に至るための研究に多大な努力が注がれている。

既に臨床に供されているぺプチド製剤の代表的な例としては、 ィンスリ ンとカルシ卜ニンが挙げられる。 これらのぺプチドの関与する主な病気で ある糖尿病と骨粗鬆症は、 近年の老齢人口の増加や簡便で豊かな食生活に 伴う偏食などによってとみに増加し、 社会的な問題にもなつている。

インスリンは筋肉や肝臓における糖、 アミノ酸、 カリウムイオンの膜透 過、 グリコーゲン合成酵素 ' リボゾームの活性化、 タンパク ·脂肪酸合成 の促進、 糖利用の促進と糖生成の抑制、 脂肪組織における糖の膜透過性の 促進、 脂肪酸合成の促進に関与し、 インスリ ン依存性糖尿病や精神分裂病 におけるショック療法に臨床的に使用されている。 また、 カルシトニンは、 生体に重要なカルシウムの代謝の恒常性に関与 することが知られ、 老人、 特に老女に多発する骨粗鬆症の疼痛や、 高カル シゥム血症、 骨ページュッ ト病に対する治療薬として臨床的に使用されて いる。 カルシトニン類は、 更に、 運動器疾患、 消化器疾患、 内分泌代謝疾 患、 血液疾患、 心血管疾患などに関与することが明らかにされ、 広範囲な 分野での治療薬としての可能性が幅広く検討されている。

しかしながら、 これらのペプチドは胃液やペプシン、 およびトリプシン などのプロテアーゼにより容易に分解される水溶性の高分子化合物であり、 経口投与すればほとんど吸収されず、 薬効を示すことができない。 そのた め、 所望の生理学的活性を得るために、 現在のところ、 これらのペプチド は通常、 注射薬として投与されているのが現状である。 このような投与形 態は、 上述の如き慢性疾患等の治療には、 該ペプチドを含有する製剤を定 期的、 且つ、 頻繁に投与しなければならず、 これに伴う病院への頻繁な通 院、 注射部位の疼痛や精神的苦痛は、 患者にとって極めて不都合であり、 困難を伴う。 更には、 注射においては局所のアレルギー反応、 筋拘縮症な どが起こる危険性もある。 以上の理由から、 使用がより簡便で、 自己投与 可能な投与剤型の出現が待ち望まれている。

ペプチドを注射以外の方法で有効に投与する方法として、 直腸、 鼻腔、 口腔、 膣などの粘膜からの吸収が研究されてきた。 即ち、 これら経粘膜投 与の場合、 単独ではほとんど吸収されないペプチドも、 界面活性作用を有 する物質等の添加により吸収が促進されることが明らかにされ、 今日まで 数多くの吸収促進剤が報告されている。

例えば、 ヒライ （H irai) らの米国特許第 4, 659, 696 号およびウダ （U da) らの米国特許 4, 670, 419 号各明細書には、 胃腸管でほとんど吸収さ れない親水性薬物とシクロデキストリンからなる鼻腔、 経膣または直腸投 与用医薬が記載されている。 この医薬中の薬物の中には、 インスリン、 L H— R H類似体、 ォキシトシンおよび T R Hなどのぺプチドが含まれてい る。

モリシタ （Morishita) らの米国特許第 4, 609, 640 号明細書には、 水 溶性の薬物と特定タイプの水溶性キレート化剤とを含み、 吸収性が優れて いるといわれている直腸または経膣投与用医薬が記載されている。 薬物と してはインスリン、 ソマトスタチン、 カルシ卜ニンなどのホルモン活性を 有するぺプチドを含む。

ヨーロッパ特許出願公開第 0 1 8 3 5 2 7号明細書には、 ベンジル酸と その塩、 力プリン酸とその塩、 ポリエチレングリコール 4 0◦、 ピリ ドキ サールとその塩、 リンゴ酸とその塩およびピロリン酸とその塩よりなる群 から選ばれる吸収促進剤の少なくとも 1種およびカルシトニンからなる吸 収性経鼻カルシトニン医薬が記載されている。 特定の吸収促進剤の 1種を 用いることにより、 鼻腔膜を通した吸収の有効性が改善されるといわれて いる。

英国特許公開第 2 1 2 7 6 8 9号には、 鼻腔粘膜投与に適した液体希釈 剤または担体中のカルシトニン、 塩化ベンザルコニゥムおよび Zまたは経 鼻投与に適した界面活性剤からなる経鼻投与用医薬が開示されている。 こ の医薬に界面活性剤が含まれているときには、 界面活性剤は好ましくは非 イオン性の界面活性剤、 最も好ましくはポリオキシアルキレン高級アルコ ールエーテルである。 これらのカルシトニン経鼻投与用製剤によりバイオ アベイラビリティ一が改善され、 安定性が良くなるといわれている。

モリモト （Morimoto) らの J. Pharm. Pharmacol. , 1985， 37, 759〜7 60 には、 ゥナギカルシトニンの半合成類似体の直腸吸収における非ィォ ン性界面活性剤であるポリオキシエチレンソルビタンモノォレエー卜およ W /2 1

びポリオキシエチレン- 9 -ラウリルエーテルの作用、 およびポリアクリノレ 酸ゲルベースの吸収促進能について報告されている。 ポリアクリル酸ゲル ベースは直腸粘膜、 膣粘膜および鼻粘膜からのィンスリンの吸収を改善す ること、 および直腸や経鼻経路によるカルシトニンの吸収を改善すること が発見されている。

初期の研究では、 吸収促進剤として両性およびカチォン性の両界面活性 剤、 とりわけ非ィォン性界面活性剤のポリオキシエチレンラウリルエーテ ルが用いられたが、 好ましいエーテル型界面活性剤は鼻粘膜を破壊するこ とにより医薬の吸収性を促進するといわれている。 さらには、 初期の報告 によれば、 吸収性の悪い医薬をェナミン、 カルボン酸および界面活性剤と ともに投与することによりその医薬の吸収性が高められるとされている。

—方、 中田らの特開昭 62-10020 号明細書には、 1 8価1 1〜1 6に 調製したショ糖脂肪酸エステルとカルシトニンよりなるトローチ剤、 バッ カル錠、 舌下錠、 咀しゃく錠、 滴下剤、 水溶性ゲル製剤および口腔粘膜付 着剤などの組成物が記載されている。

しかしながら、 上記のごとき多数の研究にもかかわらず、 これらを応用 した製剤は吸収性あるいは局所刺激性の点で充分満足のいくものとはいい 難い。 従って、 年齢 ·性別等の違いからくる患者間の生理学的 ·組織学的 な差をも考慮にいれた、 より安全性の高い、 より高い吸収促進効果をもつ 製剤が所望されている。

本発明者らの特開平 01-294632 号明細書および特開平 03-99021 号明 細書には、 N-ァシルアミノ酸、 コール酸類、 ぺクチン酸、 タウリン、 サッ カリン、 グリチルリチン、 アスパルテームおよびそれらの塩、 アルキルフエ ニルエーテル、 ァニオン性界面活性剤、 非イオン性界面活性剤、 中鎖脂肪 族力ルポン酸もしくはその塩類などの 1種または 2種以上を吸収促進剤と して用いた膣投与製剤が開示されている。

閉経後の女性においてはホルモン分泌が変化し、 また、 膣においても膣 内 pHや粘膜厚などが生理学的 ·組織学的にも異なっている。 したがって、 膣投与製剤を閉経後の女性に適用するにはそれらの点も考慮する必要があ る。 上記製剤もこれらの点を考慮したものではあるが、 なお不充分であり、 さらに改良が要求される。

発明の開示

本発明者らは、 これらの点に留意し、 上記課題を解決すべく鋭意研究を 重ねた結果、 生理学的に活性なぺプチドの注射によらない投与形態の開発 段階で、 有機酸単独配合の膣投与製剤やショ糖脂肪酸エステル単独配合の 膣投与製剤は吸収を改善するものの、 両者を組合せて配合した膣投与製剤 の方がはるかに優れた吸収の改善を示すことを見いだし、 本発明を完成す るに至った。 即ち、 本発明は、 生理活性のあるペプチドに、 少なくともショ 糖脂肪酸エルテルと有機酸またはその薬学的に許容し得る塩とを配合した ことを特徴とする高吸収性膣投与製剤を提供するものである。

発明を実施するための最良の形態

本発明に使用する生理学的に活性なぺプチドとは分子量 1万 5千以下の ぺプチドをいう。 該ぺプチドの好ましい例示としては、 インスリ ン、 アン ギオテンシン、 バソプレシン、 デスモプレシン、 L H— R H (黄体形成ホ ルモン放出ホルモン） 、 ソマトスタチン、 カノレシトニン、 グルカゴン、 ォ キン トシン、 ガストリ ン、 ソマトメジン、 セクレチン、 h-A N P (ヒ ト心 房性ナトリウム利尿ペプチド） 、 A C T H (副腎皮質刺激ホルモン） 、 M S H (黒色素胞剌激ホルモン） 、 /3 -エンドルフィ ン、 ムラミルジぺプチ ド、 エンケフアリン、 ニューロテンシン (neurotensin)、 ボンべシン (bomb esin)、 V I P (血管作用性小腸ペプチド） 、 C C K一 8 (コレシストキ ニン一 8 ) 、 P T H (副甲状腺ホルモン） 、 C G R P (カルシトニン遺伝 子関連ペプチド） 、 T R H (甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン） 、 T S H (甲状腺刺激ホルモン） エンドセリン （endothelin)、 T S H (甲状腺 刺激ホルモン） およびこれらの誘導体が挙げられる。

本発明に使用する種々のべプチドには、 天然のぺプチド自体のみならず、 生理学的 ·薬理学的に活性な合成および半合成体を含む誘導体およびこれ らの類似体も含まれる。 例えば、 本発明に使用しょうとするカルシトニン には、 サケカルシトニン、 ヒ トカルシトニン、 ブタカルシトニン、 ゥナギ カルシトニンおよびニヮ トリカノレシトニンなどの天然物のみならず （Asu¹ ■⁷) -ゥナギカルシトニン、 即ちエル力 卜ニンの様な類似体もまた含まれ る。 本発明に使用するのに特に好ましいペプチドは、 カルシトニンおよび P T Hである。

本発明の膣投与製剤中における生理学的に活性なぺプチドの含有量は使 用するべプチドの種類にもよるが、 所望の薬効を示すに充分な量である。 例えば、 カルシトニンを選択したときは、 ページヱッ ト病、 高カルシウム 血症または骨粗鬆症などの病的状態を治療するに充分な量である。 P H T、 C G R P、 ソマトメジンまたはそれらの類似体の場合には、 骨代謝の種々 の異常を治療するのに充分な量が用いられる。 インスリンの場合には、 血 糖レベルを調節し、 糖尿病を治療するのに充分な量が用いられる。 本発明 で使用することのできる他の生理学的に活性なぺプチドについても同様で める

本発明において用いられるショ糖脂肪酸エステルはショ糖と 1種または 2種以上の脂肪酸のエステルで、 ショ糖 1分子に脂肪酸が 1分子結合した モノエステルから 8分子結合したォクタエステルがあり、 通常これらの混 合物として使用される。 一般には、 シュガーエステルと呼ばれ、 安全性の 極めて高い添加物として、 食品、 化粧品および医薬品中に添加剤として汎 用されている。 その結合脂肪酸としては、 ステアリン酸、 パルミチン酸、 ラウリン酸、 ォレイン酸などが挙げられる。 それらショ糖脂肪酸エステル の具体例としては、 ショ糖ステアリン酸エステル、 ショ糖パルミチン酸ェ ステル、 ショ糖ォレイン酸エステル、 ショ糖ラウリン酸エステル、 ショ糖 ベへニン酸エステル、 およびショ糖エル力酸エステルよりなる群から選ば れ、 特にショ糖ステアリン酸エステル、 ショ糖パルミチン酸エステル、 シ Ξ 糖ォレイン酸エステル、 ショ糖ラウリン酸エステルが好ましい。 これらを

1種または 2種以上用いる。 その配合量は製剤全重量に対して 0. 1 〜 30 w/w %、 好ましくは 0. 5 〜15 w/w %である。

本発明に用 ヽられる有機酸としては、 炭素数 2〜 6の飽和脂肪族カルボ ン酸、 不飽和脂肪族カルボン酸、 芳香族カルボン酸、 ァスコルビン酸類、 またはそれらの薬学的に許容し得る塩よりなる群より選ばれる。 飽和脂肪 族カルボン酸としては、 一塩基酸、 ォキシ酸および多価カルボン酸が挙げ られる。 一塩基酸の例示としては、 酢酸、 プロピオン酸、 酪酸、 吉草酸、 カブロン酸などが挙げられる。 ォキシ酸の例示としては、 リンゴ酸、 乳酸、 酒石酸、 クェン酸などが挙げられる。 多価カルボン酸としては、 リンゴ酸、 コノヽク酸、 酒石酸、 クェン酸、 フマル酸、 マロン酸、 グルタル酸、 アジピ ン酸などが挙げられる。 不飽和脂肪族カルボン酸としては、 フマル酸、 マ レイン酸などが挙げられる。 芳香族カルボン酸としては、 安息香酸、 フタ ル酸などが例示され、 またァスコルビン酸類としてはァスコルビン酸、 ィ ソァスコルビン酸などが挙げられる。 これら有機酸のうち、 特にクェン酸、 酒石酸、 リンゴ酸、 乳酸、 コハク酸、 安息香酸が好ましい。 これらを 1種 または 2種以上用いる。 その配合量は製剤全重量に対して 0. 1 〜 20 w /w %、 好ましくは 0. 5 〜 10 wZw %である。 これらの有機酸はクェン酸、 酒石酸、 リンゴ酸、 乳酸の名の如く、 天然 の植物や動物から発見されたものであり、 広く天然に存在し、 日常、 食物 や飲料として摂取している。 その安全性においては古来からの実証が何よ りも証明している。 また、 医薬添加物としての実績もある。

上述のように、 本発明に用いるショ糖脂肪酸エステルと有機酸は安全性 に関しても問題がなく、 したがって、 本発明の膣投与製剤はきわめて安全 な製剤である。

本発明の膣投与製剤には、 必須不可欠の成分というのではないが、 投与 後べプチドが吸収される過程に起るぺプチドの酵素的分解を回避するため に、 および/または薬効成分であるべプチドまたはその誘導体が不安定な 場合や配合処理で使用する容器の壁にぺプチドが吸着される場合に、 必要 に応じて動物性タンパク質および Zまたは植物性タンパク質を配合するこ とができる。 そのような動物性タンパク質および植物性タンパク質は、 食 用、 化粧用、 または医薬用に供されているものが好ましい。

動物性タンパク質の好ましい例としては、 アルブミン （例えばゥシ血清 アルブミン、 ヒ ト血清アルブミンなど） 、 レチシン、 カゼインおよびゼラ チンなどが挙げられる。 また植物性タンパク質め例としては、 グルテン、 ゼイン、 ダイズタンパク質、 レシチンなどが挙げられる。 これら動物性タ ンパク質または植物性タンパク質をそれぞれ単独で用いてもよく、 また両 者を適当な割合で組合せて用いることもできる。

本発明の膣投与製剤中に用いる動物性および/または植物性タンパク質 の配合量は安定化しょうとするぺプチドにもよるが、 一般に製剤全重量当 り 0. 001 〜 25 w/w %の範囲である。

本発明の膣投与製剤の剤形としては、 一般に、 生理学的に活性なぺプチ ド、 有機酸とショ糖脂肪酸エステル、 必要に応じて動物性タンパク質およ び または植物性タンパク質からなる液状製剤、 ゲル剤 （高粘性のものが 好ましい） 、 坐剤、 フィルム剤、 錠剤、 軟カプセル剤、 タンポン、 クリー ム剤などが含まれる。

本発明の膣投与製剤は、 生理学的に活性なペプチド、 有機酸とショ糖脂 肪酸エステル、 必要に応じて動物性タンパク質および または植物性タン パク質を、 直接混合、 ないしは精製水または生理食塩水等に溶解ないしは 混合し、 得られた溶液または混合物を通常の膣投与製剤用の基剤に配合し、 常法によって調製することができる。

本発明の膣投与製剤の PH は膣内の pH にできるだけ近いことが好ま しい。 従って、 有機酸を溶解するのに必要かつ最小限の希釈剤を用い、 次 いで塩基性物質を有機酸溶液に加え、 該溶液の pH が 3〜7、 好ましく は 3〜5 の範囲になるように調製する。 pH を調節するのに用いる塩基 性物質は、 調製した最終の溶液が人に対して毒性がなく、 刺激を起こすこ ともない公知の塩基でよく、 その好ましい例示としては、 水酸化ナトリウ ム、 水酸化カリウム、 および水酸化カルシウムのような塩基が挙げられる。 次にこの溶液に生理学的に活性なペプチド、 ショ糖脂肪酸エステル、 必要 に応じて動物性タンパク質およびノまたは植物性タンパク質を加え、 溶解 ないしは混合する。

高粘性のゲル製剤を得るには、 必要に応じて公知の粘性増強剤を添加す ればよい。 粘性増強剤の例としては、 セルロース低級アルコールエーテル、 P V A (ポリビニルアルコール） 、 P V P (ポリビニルピロリ ドン） 、 ポ リォキシエチレンォキシプロピレングリコールブロックコポリマー （P lu ronic™) などを挙げることができる。

本発明の膣投与製剤には、 賦形剤、 等張剤、 防腐剤、 酸化防止剤および 着色剤などの 1種または 2種以上を添加してもよい。 例えば、 デキス トリ ン、 D -マンニトール、 シクロデキストリ ンおよびトラガント などの賦形剤；塩化ナトリウム、 塩化力リウム、 炭酸ナトリウムなどの等 張剤；安息香酸、 パラォキシ安息香酸メチルやパラォキシ安息香酸プロピ ルなどのパラォキシ安息香酸エステル類；ベンジルアルコール、 ソルビン 酸などの防腐剤；プチルヒ ドロキシァニソール、 亜硫酸水素ナトリウムな どの酸化防止剤； ；5 -カロチン、 食用赤色 2号および食用青色 1号などの 着色剤を使用することができる。

以下、 実験例、 実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、 本 発明はこれらに限定されない。

実験例 1 (ショ糖脂肪酸エステルと有機酸との組合せによるカルシト ニンの吸収促進効果： ショ糖脂肪酸エステル単独、 有機酸単独添加との比 較）

ヒ トカルシトニン 2 mg を精秤し、 クェン酸 50 m およびショ糖脂肪 酸エステル （リ ヨ一トーシュガーエステル S - 9 7 0 ) 100 mg を加えよく 混合した。 この混合物にあらかじめ加温 ·撹捽して均質化した市販の坐剤 基剤ウイテブゾール S - 5 5 (ウイテプゾ一ル E - 8 5を最終膣坐剤の溶融 温度が 36. 5°Cになるように組成比を調製したもの） （ダイナミ ッ ト · ノ 一ベル社 （現、 ヒルス社） 製） を膣坐剤全重量が 5. 00 g となるように加 え、 約 40°Cでホモジナイザーを用いて充分に分散し、 均質な膣坐剤用組 成物を得た。 これを約 40°Cで、 内径約 3 mm のテフロン製チューブに流し 込み、 冷却固化せしめた後、 チューブから取り出し、 約 50 mg ずつに切 断して 1個当り 20 / g のヒ トカルシトニンを含有するラッ ト用膣坐剤を 得た。 同様に操作して、 クェン酸 50 mg だけを添加した膣坐剤およびショ 糖脂肪酸エステル 100 mg だけを添加した同様な膣坐剤 2種類を得た。 同 様に操作して、 クェン酸およびショ糖脂肪酸エステルを含まないヒ トカル 実験例 2 (各種基剤のショ糖脂肪酸エステルと有機酸との組合せによ るカルシトニンの吸収促進効果に及ぼす影響）

ヒ トカルシトニン 2 mg を精秤し、 クェン酸 50 mg およびリヨ一トー シュガーエステル S 9 7 0 100 mg を加えよく混合した。 この混合物にあ らかじめ加温 ·撹拌して均質化した下記の各基剤 （実験例 1と同様、 溶融 温度を調整したもの） を膣坐剤全重量が 5. 00 g となるように加え、 約 4 0°Cでホモジナイザーを用いて充分に分散し、 均質な膣坐剤用組成物を得 た。 以下、 実験例 1と同様に操作して 1個の重量が 50 m のヒ トカルシ トニン 20 / g を含有するラッ ト用膣坐剤 5種類を得た。

実験例 1と同じ方法で各膣坐剤をラッ ト膣内に投与し、 経時的 （2 , 4 および 6時間後） に採血を行い、 血清中のカルシウム濃度を測定した （n =4) 。

基 剤

1 . ウイテプゾ一ル H- 1 5

2. ウイテプゾ一ル W- 3 5

3 . ウイテプゾ一ル S - 5 5

4 . ファーマゾ一ル B - 1 0 5

5 . カカオ脂

(注： ファーマゾール： 日本油脂 (株)社製）

結果を第 2表に示す。

第 2表に示すように、 ショ糖脂肪酸エステルとクェン酸との組合せは、 いずれの基剤を用いても顕著な吸収促進効果を示し、 その効果は基剤の種 類には影響されないことが明らかとなった。 シ トニン含有膣坐剤を作製し、 対照とした。

—夜絶食させた体重約 200 〜 250 g の卵巣を摘出した Wistar系雌ラッ トにエーテル麻酔し、 投与前に右頸静脈より必要量採血した。

膣坐剤を膣内に投与した後、 経時的 （2， 4および 6時間後） に採血し た。 血清分離後、 血清中のカルシウム濃度をカルシウム測定キッ ト （カル シゥム Cテストヮコ一；和光純薬（株)製） を用いて測定した （n=3) 。 その結果を第 1表に示す。

第 1表から明らかなように、 血清中のカルシウム値の低下率の変化をみ ると、 ショ糖脂肪酸エステルまたはクェン酸の単独使用に比べ、 両者を組 合せた方が力ルシトニンの吸収促進効果がはるかに優れていることが示さ れた。

血清中のカルシウム値の低下率 （％)

膣 坐 剤 投与後の時間 添加した化合物 2 4 6 ショ糖脂肪酸 Iス i'KS-970) 14.9 19.5 11.1 及びクェン酸

ヒトカルシトニン ショ糖脂肪酸エス S-970)のみ 10.6 10.5 10.7 クェン酸のみ 9.5 8.0 5.7 対 照 2.6 2.2 3.8

一 11· 第 2 表 .

血清中のカルシウム値の低下率 （％) - 主 薬 した基 投与後の時間 （hr)

2 4 6 ウイテブゾール H - 15 16.8 17.7 10.4 ヒトカルシトニン ウイテプゾ一ル W- 35 6.6 20.4 13.2 ウイテブゾール S- δ 5 16.5 22.5 13.0 ファーマゾール B- 105 13.4 14.8 10.6 カカオ脂 12.5 10.7 8.3 実験例 3 (各種ショ糖脂肪酸エステルと有機酸との組合せによるカル シトニンの吸収促進効果に及ぼす影響）

ヒ トカルシトニン 2 mg を精秤し、 クェン酸 50 mg および下記の HL B価の異なる各種ショ糖脂肪酸エステル （表 A) 100 mg を加え、 よく混 合した。 以下、 実験例 1と同様に操作して 1個の重量が 50 mg の ヒトカ ルシトニン 20 g を含有するラッ ト用膣坐剤 6種類を得た。 同様にして、 下記の HLB価が同一で結合脂肪酸の異なる各種ショ糖脂肪酸エステルを 調製し （表 B) , それらの各 100 mg を用いて同様なラッ ト用膣坐剤 4種 類を得た。

実験例 1と同じ方法で各膣坐剤をラッ ト膣内に投与し、 経時的 （2, 4 および 6時間後） に採血を行い、 血清中のカルシウム濃度を測定した （n =4) 表 A

ショ糖脂肪酸エステル HLB価 結合脂肪酸

1. リヨ一卜一シュガーエステル S-370 3 ステアリン酸

2. 〃 S-570 5

3. " S-770 7

4. 〃 S-970 9

5. " S-1670 16

6. 〃 L-1695 16 ラウリン酸 表 B

ショ糖脂肪酸エステル （HLB価： 9) 組成比 結合脂肪酸

1.リヨ一トーシュガーエステル S-370+S-1670 (5:6) ステアリン酸

2. 〃 P-070+P-1670 (4:5) パルミチン酸

3. 〃 L-595+L-1695 (3:2) ラウリン酸

4. 〃 S-970 (対照） ステアリン酸 結果を第 3表および第 4表に示す。

第 3表および第 4表に示すようにショ糖脂肪酸エステルとクェン酸との 組合せによる顕著な吸収促進効果は、 使用するショ糖脂肪酸エステルの H L B価にも、 また結合脂肪酸の種類にも影響されないことが明らかとなつ た。

第 3 表

血清中のカルシウム値の低下率 （％)

主 薬 ショ糖脂肪酸エステル HLB価 結合脂肪酸 投与後の時間 (hr)

2 4 6 リヨ-ト-シュガ- エステル (S-370) 3 ステアリン酸 13.4 18.2 11.4

" (S-570) 5 〃 12.8 17.2 12.0

〃 (S-770) 7 〃 13.6 14.8 11.8 ヒトカルシトニン 〃 (S-970) 9 " 12.2 17.4 11.8

〃 (S-1670) 16 〃 11.4 16.4 12.6

〃 (L-1695) 16 ラウリン酸 12.8 13.4 11.4

第 4 表

血清中のカルシウム値の低下率 （％)

主薬 ショ糖脂肪酸エステル HLB価 結合脂肪酸 投与後の時間 (hr) リヨ-ト-シュガ-エステル 組成比 2 4 6

S-370 + S-1670 5 : 6 9 ステアリン酸 6.9 15.3 12.3 ヒトかレ

P-070 + P-1670 4 : 5 9 ハ。ルミチン酸 8.2 17.3 13.8 シトニン

L-595+L-1695 3： 2 9 ラウリン酸 11.0 14.4 9.7

S-970 1 : 0 9 ステアリン酸 6.3 11.6 11.0 実験例 4 (ショ糖脂肪酸エステル濃度のカルシトニン吸収促進効果に 及ぼす影響）

ヒ トカルシトニン 2 mg を精枰し、 クェン酸 100 mg およびリョートー シュガーエステル S-970をそれぞれ 50 mg、 100 mg、 および 400 mg ずつ加え、 よく混合した。 以下、 実験例 1と同様に操作して 1個の重量が 50 mg の ヒ トカノレシ卜ニン 20^2 を含有する 3種類のラッ ト用膣坐剤 を得た。

実験例 1と同じ方法で各膣坐剤をラッ ト膣内に投与し、 経時的 （2およ び 4時間後） に採血を行い、 血清中のカルシウム濃度を測定した （n==3) c 結果を第 5表に示す。

第 5表から明らかなように、 ショ糖脂肪酸エステルとクェン酸との組合 せによる吸収促進効果は、 ショ糖脂肪酸エステルのいずれの添加濃度でも 著明な血中カルシウム値の低下を示した。 第 5 表

血清中のカルシウム値の低下率 （ ） 主 薬 添加したショ糖脂肪酸エステルの量 投与後の時間 (hr)

(膣坐剤換算： %) 2 4

10.8 16.5 ヒトカルシトニン 2 8.0 18.2

8 21.8 17.5 実験例 5 (ショ糖脂肪酸エステルと各種有機酸との組合せによるカル シトニンの吸収促進効果）

ヒ トカルシトニン 2 mg を精秤し、 pH 4 に調製した下記の各種有機酸 50 mg を含む水溶液に溶解した後、 リ ヨ一トーシュガーエステル R- 9 7 0 100 mg を加え、 よく混合した。 以下、 実験例 1と同様に操作して 1個 の重量が 50 mg の ヒ トカルシ トニン 20 z g を含有するラッ ト用膣坐剤 4種類を得た。

実験例 1と同じ方法で各膣坐剤をラッ ト膣内に投与し、 経時的 （2 , 4 および 6時間後） に採血を行い、 血清中のカルシウム濃度を測定した （n = 5) 。

有 機 酸

1 . クェン酸

2 . 酒石酸

3 . 乳酸

4 . リ ンゴ酸

結果を第 6表に示す。

第 6表から明らかなように、 いずれの有機酸を用いても著明な血中カル シゥム値の低下を示した。

第 6 表

血清中のカルシウム値の低下率 （％)

主 薬 使用した有機酸 投与後の時間 （hr)

2 4 6 ク ェ ン 酸 11.4 19.6 8.4 ヒトカルシトニン 酒 石 酸 12.2 8.0 3.4

乳 酸 17.0 10.6 5.4 リ ン ゴ 酸 18.6 13.0 7.0 実験例 6 (有機酸濃度のカルシトニン吸収促進効果に及ぼす影響） ヒトカルシトニン 2 mg を精秤し、 pH 3.5 に調製したクェン酸 50 mg を含む水溶液 700 mg、 クェン酸 100 mg を含む水溶液 750 mg、 クェン 酸 250 mg を含む水溶液 900 mg、 およびクェン酸 500 mg を含む水溶液 1150 m にそれぞれ溶解した後、 リヨ一トーシュガーエステル S- 970 100 mg を加え、 よく混合し均一化した。 以下、 実験例 1と同様に操作し て 1個の重量が 50 mg の ヒ トカルシトニン 20^g を含有する 4種類の ラッ ト用膣坐剤を得た。

実験例 1と同じ方法で各膣坐剤をラッ ト膣内に投与し、 経時的 （2、 4 および 6時間後） に採血を行い、 血清中のカルシウム濃度を測定した （n =3) 。

結果を第 7表に示す。

第 7表から明らかなように、 ショ糖脂肪酸エステルとクェン酸との組合 せによる吸収促進効果は、 いずれのクェン酸添加濃度でも著明な血中カル シゥム値の低下を示した。 第 7 表

血清中のカルシウム値の低下率 （％)

主 薬 添加した有機酸の量 投与後の時間 （hr)

(膣坐剤換算： %) 4 6

14.6 15.7 9.2 ヒトカルシト:：ン 2 15.3 18.7 8.2

5 17.9 19.4 7.5 0 18.4 19.0 5.0

2

実験例 Ί (膣坐剤中の溶液の pH がカルシトニン吸収促進効果に及 ぼす影響）

ヒ トカルシトニン 2 mg を精秤し、 クェン酸 100 mg を含む pH 3.0、 3.5、 4.0、 4.5、 5.0 および 5.5 に調製した水溶液にそれぞれ溶解した後、 リヨ一トーシュガーエステル S-970 100 mg を加え、 よく混合し均質 化した。 以下、 実験例 1と同様に操作して 1個の重量が 50 mg のヒ トカ ルシトニン 20i g を含有するラッ ト用膣坐剤 6種類を得た。

実験例 1と同じ方法で各膣坐剤をラッ ト膣内に投与し、 経時的 （2， 4 および 6時間後） に採血を行い、 血清中のカルシウム濃度を測定した （n =3)。

結果を第 8表に示す。

この結果から、 ショ糖脂肪酸エステルとクェン酸との組合せによる吸収 促進効果は、 pH3.0〜 5.5 の範囲で認められ、 特に pH 3.0〜 4.5 の 間ではその効果にほとんど差がないことが明らかとなった。 第 8 表

血清中のカルシウム値の低下率 （％) 膣坐剤中の 投与後の時間 （hr)

溶液の pH 2 4 6

3.0 11.0 22.0 8.7

3.5 9.4 19.8 8.8

4.0 9.4 20.2 10.2

4.5 9.5 22.8 9.1

5.0 10.2 11.4 2.7

5.5 8.1 13.2 4.3 実験例 8 (ビーグル犬におけるカルシトニン膣坐剤の投与実験： クロ ス ·オーバ一試験）

エル力トニン 4 mgを精秤し、 pH 3.2 に調製したクェン酸 0.5 gを 含む水溶液 2.5gに溶解した後、 リヨ一トーシュガーエステル S-970 1. 0 gを加えよく混合した。

この混合物にあらかじめ加温 ·撹拌して均質化したウイテプゾ一ル S-5 5 (実験例 1と同様、 溶融温度を調整したもの） を膣坐剤全重量が 50.0 となるように加え、 約 40°Cでホモジナイザーを用いて充分に分散し、 均質な膣坐剤用組成物を得た。 これを約 40°Cで、 市販の坐剤用プラスチッ ク製コンテナー （0.9 ml； (株）カナェ製） に約 0.5 になるように充塡 し、 冷却固化せしめて 1個当り 40 zgのエル力トニンを含有するビーダ ル犬用膣坐剤を得た。 —夜絶食させた体重約 10 〜 12 kg の卵巣を摘出した雌ビーグル犬を 用い、 投与前にその前腕静脈より、 必要量採血した。

上記の卵摘ビーグル犬を 2群 （1群 3匹） に分け、 1群に上記膣坐剤を 膣内に、 他の 1群には 1 ml 当り のエル力 卜ニンを含む注射剤 （ェ ルシトニン；旭化成工業 (株）製） を筋肉内に投与した後、 経時的 （10, 20, 30, 45, 60, 90， 120, 180 および 240 分後） に採血した。 血漿分離後、 血漿中のエル力トニン濃度を R I A法 （ラジオィムノアッセィ ： ^{1 2 5} I— エル力トニンを用いた競合法を利用） で測定した。 ついで、 各群の投与方 法を入れ替え、 前者には筋肉内注射を、 後者には膣坐剤を投与し、 同様に して、 血漿中のエル力 トニン濃度を測定した。

その結果を第 9表および第 1図に示す。

第 9表および第 1図から明らかなように、 血漿中のエル力トニン濃度の 変化をみると、 上記のショ糖脂肪酸エステルとクェン酸とを組合せて配合 した膣坐剤は筋肉内投与とほぼ同等のエル力トニンの血漿中濃度推移を示 した。 従って、 本発明による膣投与製剤の場合、 筋肉内投与の 約 5 倍量 で同等の結果が得られるという、 極めて優れた結果を得ることができた。 第 9表

血漿中のエル力トニンの濃度 （pgZml)

投与 剤 形 エルカトニン 投与後の時間 min)

部位 投与量 10 20 30 45 60 90 120 180 240 筋肉内 注射剤 8 lig 315 368 337 255 165 82 50 16 - 4 膣坐剤 40 lig 158 363 370 363 231 128 76 36 -10 実験例 9 ((1-34)) -酢酸テリパラチド （PTH) 膣坐剤のラッ ト投与 実験）

(1-34)-酢酸テリパラチド （旭化成工業 (株）製） 2 mg を精枰し、 クェン 酸 50 m および、 リヨ一トーシュガーエステル S-970 100 mg を加え、 よく混合し均質化した。 以下、 実験例 1と同様に操作して 1個の重量が 5 0 mg の酢酸テリパラチド を含有するラッ ト用膣坐剤を得た。

—夜絶食させた体重約 200〜 250 g の卵巣を摘出した Wistar系雌ラッ 卜にエーテル麻酔し、 投与前に右頸静脈より必要量採血した。

上述の卵摘ラッ トを 2群 （1群 3匹） に分け、 1群に上記膣坐剤を膣内 に、 他の 1群には 1 ml 当り 3 の PTHを含む注射剤 （酢酸テリパラ チドを 1 ml の滅菌生理食塩水に溶かしたもの） 0.2 ml を筋肉内に投与 した後、 経時的 （30, 60, 120および 240分後） に採血を行い、 血漿中の PTH濃度を PTH測定キッ ト （ I NS- PTHキッ ト ；ェコル ス社製） を用いて測定した。

その結果を第 10表に示す。

第 10表から明らかなように、 血漿中の PTH濃度の変化をみると、 シ; 糖脂肪酸酸エステルと有機酸とを組合せて配合した膣坐剤は、 実験例 8の エル力 トニンの場合と同様、 約 6 倍量で、 筋肉内投与とほぼ同等の血漿 PTH濃度推移を示した。

第 10表

血漿中の PTHの濃度 （pgZml) 投与 剤 形 PTH 投与後の時間 （hr)

部位 投与量 30 60 120 240 筋肉内 注射液 0.6 g 530 298 136 21 膣 膣坐剤 4.0 g 575 437 170 87 実施例 (膣投与坐剤の調製）

坐剤を調製するには、 ウイテブゾール （Witepsol) 、 マクロゴール、 グリセ口ゼラチンなどの公知の坐剤基剤を用いることができる。 生理学的 に活性なぺプチドを含有する液状ないしはペースト状調製物を適当な温度 (坐剤基剤に適当な流動性を与えるのに充分な最低温度） で機械的な混合 装置 （ホモジナイザー、 ミキサーなど） を用いて坐剤基剤と充分に混合し て均質化し、 坐剤型枠に注入した後、 冷却させる。

下記処方に従い、 実験例 5に準じて膣投与用坐剤を調製した。 尚、 型枠 は坐剤用プラスチックコンテナー（0.9 ml)を使用した。 また下記いずれの 処方においても、 ショ糖脂肪酸エステルとしては代表的なリョート一シュ ガーエステル S-970を、 また坐剤基剤のウイテプゾ一ルとしては代表 的なウイテブゾール S-55を用いたが、 前記他の物質も同様に用いられ る。 それは他の実施例においても同様である。

処方 1.

エル力トニン 0.004 g

クェン酸 0.5 g 水酸化ナ卜リウム溶液 2.0 g

ショ糖脂肪酸エステル 1.0 g

ウイテブゾール 3@ 量

全 量 50.0 g (100 個分）

処方 2.

ヒ トカノレシトニン 0.002 g

コハク酸 0.05 g

水酸化ナトリウム溶液 0.6 g

ショ糖脂肪酸エステル 0.1 g

ゥシ血清アルブミン（B S A) 0.015 g

P-ォキシ安息香酸ブチル 0.001

ゥィテブゾール

全 量 5.0 g (10 個分）

下記処方に従い、 実験例 1に準じて膣投与用坐剤を調製した。 型枠は、 実施例 1と同様、 坐剤用プラスチックコンテナー（0.9 ml)を使用した。 処方 1.

ヒ トカルシ トニン 0.002 g

フタル酸 0.05 g

ショ糖脂肪酸エステル 0.1

ゥィテブゾール

全 量 5.0 g (10 個分）

処方 2.

サケカルシトニン 0.002 g

フマル酸 0.5 g

ショ糖脂肪酸エステル 1.0 g ゥィテブゾール

全 量 50. 0 g (100 個分）

処方 3.

インスリン 1， 000 I. U.

P—ヒ ドロキシ安息香酸 0. 05 g

ショ糖脂肪酸エステル 0. 1

ゥィテブゾール

全 量 5. 0 g (10 個分）

実施例 2 (膣投与錠剤の調製）

錠剤を調製するには、 生理学的に活性なぺプチドを含有する液状または ペースト状調製物を充塡剤、 結合剤、 崩壊剤などの適当な添加剤とともに 充分に混合し、 次いで乾燥させ、 必要ならば滑沢剤などの他の添加剤を加 える。 最終の混合物を打錠機により打錠して錠剤にすることができる。 なお、 非崩壊性錠剤の剤型の場合には、 本発明の経膣投与用製剤のため に膣中でヒドロゲルを生成することの可能な基剤が必要である。 そのよう な基剤の例としては、 ダルコマンナン、 アルギン酸およびそのカルシウム 塩、 ぺクチン、 ヒ ドロキシプロピルメチルセルロースなどが挙げられる。 崩壊性錠剤では速効効果が得られるが、 非崩壊性錠剤では通常、 徐放性の 効果が得られる。

下記処方に従い、 常法により膣投与用錠剤を調製した。

処方 1.

エル力 トニン 0. 004 g

吉草酸 0. 5 g

水酸化ナトリウム溶液 2. 0 g

ショ糖脂肪酸エステル 1. 0 g CMC · Na 1.0 g

コーンスターチ 15.0 g

乳 糖

全 量 50.0 g (100 個分）

処方 2.

ヒ 卜 PTH 0.002 g

ァスコルビン酸 0.05 g

水酸化ナトリウム溶液 0.2 g

ショ糖脂肪酸エステル 0.1

CMC · Na 0.1 g

コーンスターチ 1.5 g

乳 糖

全 量 5.0 g (10 個分）

実施例 3 (膣投与発泡錠の調製）

実施例 2の膣投与錠剤の調製に於て、 炭酸水素ナトリウムなどの炭酸剤 を添加剤として用い、 有機酸を相当量加増して発泡錠とすることもできる _c 下記処方に従い、 常法により膣投与用発泡錠を調製した。

処方 1.

ヒ トカルシトニン 0.004 g

プロピオン酸 0.05 g

水酸化ナトリウム溶液 0.2 g

ショ糖脂肪酸エステル 0.1 g

クェン酸 0.5 g

CMC · Na 0.1 g

コーンスターチ 1.0 g 炭酸水素ナトリウム 0.5 g

ステアリ ン酸 Mg 0.25 g

乳 糖

全 量 5.0 g (10個分）

処方 2.

インスリ ン 1， 000 I. U.

乳酸 0.05 g

ショ糖脂肪酸エステル 0.1 g

クェン酸 0.5 g

CMC · Na 0.1 g

コーンスターチ 1.0 g

炭酸水素ナトリウム 0.5 g

ステアリ ン酸 Mg 0.25 g

乳 糖

5.0 g (10 個分）

実施例 4 (膣投与クリーム剤の調製）

クリーム剤を調製する場合には、 本発明の組成にしたがって油中水型ク リーム剤および水中油型クリーム剤の両方を調製することができる。 下記処方に従い、 常法により膣投与用クリームを調製した。

処方 3.

インスリ ン 1, 000 I. U.

フマル酸 0.05 g

水酸化ナトリウム溶液 0.2 g

ショ糖脂肪酸エステル 0.1

白色ヮセリ ン 1.25 g ステアリルアルコール 1.0 g

PG 0.5 g

モノステアリン酸グリセリン 0.25 g

P-ヒ ドロキン安息香酸メチル 0.005 g

精製水 —適 量

全 量 5.0 g (10 回分）

処方 2.

エル力トニン 0.004 g

酒石酸 0.5 g

水酸化ナトリウム溶液 2.0 g

ショ糖脂肪酸エステル 1.0 g

白色ヮセリン 12.5 g

ステアリルアルコール 10.0 g

PG 5.0 g

モノステアリン酸グリセリン 2.5 g

P-ヒ ドロキシ安息香酸メチル 0.05 g

B S A 0.15 g

精製水 M 量

全 量 50.0 g (100 回分）

その他の製剤の製法として、 以下の様なものが挙げられる。

フィルム剤を調製するには、 上記液状ないしはペースト状調製物をヒ ド ロキシプロピルメチルセルロース、 キトサン、 プルラン （pullulan) 、 グ ルコマンナン （glucoraannan) 、 ポリアクリレートエステルなどのフィル ム基剤とともに充分に撹拌して均質化し、 次いで均質な混合物をキャスティ ングし、 蒸発 （乾燥） させて製造する。 軟カプセル剤を調製するには、 生理学的に活性なぺプチドを含有する油 性の調製物もしくはポリエチレングリコール調製物を軟カプセル殻中に封 入すればよい。 タンポン型の用具を調製するには、 種々の方法が考えられ る。 典型的な方法は次のようにして行う。 即ち、 シリコーン樹脂のタンボ ン形状コアを、 生理学的に活性なぺプチドを含有するキトサンやポリアク リレートメタクリレートコポリマーのようなポリマーフィルムで被覆させ ればよい。

発明の効果

生理学的に活性なぺプチドは経口投与した場合、 タンパク質分解酵素の 分解を受け、 充分に吸収されず、 所望の薬効が発揮されない。 そのため、 これらのぺプチドはもっぱら注射によって投与されている。 本発明の少な くとも有機酸とショ糖脂肪酸エステルとを組合せて配合した膣投与製剤に よれば、 難吸収性のペプチドが少量で、 また少量のショ糖脂肪酸エステル と有機酸の添加によって、 極めて高い吸収が得られる。 従って、 本発明の 膣投与製剤を用いれば、 従来注射でしか得られなかったような効果を、 投 与時の苦痛も少なく、 容易に得ることができる。 特に、 頻繁に投与を必要 とする慢性疾患にも、 本発明の膣投与製剤を用いれば患者自ら容易に投与 でき、 自宅療法を可能にするものである。

以上述べた如く、 本発明の膣投与製剤は、 従来の注射剤の欠点を克服し 得る製剤として極めて意義あるものである。

Claims

請 求 の 範 囲

1 . 通常の薬学的に許容される担体に生理学的に活性なペプチド、 ショ糖 脂肪酸エステルおよび有機酸またはその薬学的に許容し得る塩とを配合し たことを特徴とする生理学的に活性なぺプチドを含有する膣投与製剤。

2. ショ糖脂肪酸エステルがショ糖ステアリ ン酸エステル、 ショ糖パルミ チン酸エステル、 ショ糖ォレイン酸エステル、 ショ糖ラウリン酸エステル、 ショ糖べへニン酸エステルおよびショ糖エル力酸エステルよりなる群から 選ばれる 1種または 2種以上である請求項 1に記載の膣投与製剤。

3. 有機酸が、 炭素数 2〜 6の飽和脂肪族カルボン酸、 不飽和脂肪族カル ボン酸または芳香族カルボン酸より選ばれる請求項 1に記載の膣投与製剤。

4. 飽和脂肪族カルボン酸が、 一塩基酸、 ォキシ酸および多価カルボン酸 よりなる群から選ばれる請求項 3に記載の膣投与製剤。

5. —塩基酸が、 酢酸、 プロピオン酸、 酪酸、 吉草酸またはカブロン酸、 ォキシ酸がリンゴ酸、 乳酸、 酒石酸またはクェン酸および多価カルボン酸 がリンゴ酸、 コハク酸、 酒石酸、 クェン酸、 マロン酸、 グルタル酸、 アジ ピン酸またはフタル酸である請求項 4に記載の膣投与製剤。

6. 不飽和脂肪族カルボン酸が、 フマル酸またはマレイン酸である請求項 3に記載の膣投与製剤。

7. 芳香族カルボン酸が、 安息香酸、 フタル酸またはヒドロキン安息香酸 である請求項 3に記載の膣投与製剤。

8. 有機酸が、 ァスコルビン酸またはイソァスコルビン酸である請求項 1 に記載の膣投与製剤。

9. 生理学的に活性なペプチドが、 インスリン、 アンギオテンシン、 バソ プレシン、 デスモプレシン、 L H— R H、 ソマトスタチン、 カルシトニン、 グルカゴン、 ォキシトシン、 ガストリン、 ソマトメジン、 セクレチン、 h- ANP、 ACTH、 MSH、 β-ェンドルフィン、 ムラミルジぺプチド、 エンケフアリン、 ニューロテンシン、 ボンべシン、 V I P、 C CK— 8、 PTH、 CGRP、 TRH、 TSH、 エンドセリンおよびこれらの合成お よび半合成体を含む誘導体よりなる群から選ばれた分子量 1万 5千以下の ぺプチドである請求項 1に記載の膣投与製剤。

10. カルシトニンが、 サケカルシトニン、 ヒ トカルシトニン、 ブタカル シトニン、 ゥナギカルシトニン、 ニヮ トリカルシトニン、 ラッ トカルシト ニン、 およびヒッジカルシトニンよりなる群から選ばれる請求項 9に記載 の膣投与製剤。

11. ゥナギカルシトニンが （Asu^{1 7}) ゥナギカルシトニン （エルカトニ ン） である請求項 10に記載の膣投与製剤。