UA68407C2 - Antagonistic analogues of growth hormone releasing hormone (gh-rh) inhibiting activity of endogenous insulin-like growth factors - Google Patents
Antagonistic analogues of growth hormone releasing hormone (gh-rh) inhibiting activity of endogenous insulin-like growth factors Download PDFInfo
- Publication number
- UA68407C2 UA68407C2 UA2001064393A UA2001064393A UA68407C2 UA 68407 C2 UA68407 C2 UA 68407C2 UA 2001064393 A UA2001064393 A UA 2001064393A UA 2001064393 A UA2001064393 A UA 2001064393A UA 68407 C2 UA68407 C2 UA 68407C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- peptide
- ago
- aby
- nag
- compound according
- Prior art date
Links
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title claims abstract description 10
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 title claims description 8
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 title claims 2
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 title description 16
- 102000038461 Growth Hormone-Releasing Hormone Human genes 0.000 title 1
- 239000000095 Growth Hormone-Releasing Hormone Substances 0.000 title 1
- 101710142969 Somatoliberin Proteins 0.000 title 1
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 claims abstract description 12
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 159
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 53
- 101710176384 Peptide 1 Proteins 0.000 claims description 22
- OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 Chemical compound C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N 0.000 claims description 21
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 17
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 7
- 239000003488 releasing hormone Substances 0.000 claims description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 claims description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 2
- 238000012876 topography Methods 0.000 claims 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 abstract description 48
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 17
- 230000036515 potency Effects 0.000 abstract 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 68
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 44
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 39
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 30
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 27
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 27
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 24
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 24
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 22
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- -1 9-fluorenylmethyloxycarbonyl Chemical group 0.000 description 17
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 17
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 16
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 16
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 13
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 11
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 11
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 11
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 11
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 10
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 8
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 8
- UHPQFNXOFFPHJW-UHFFFAOYSA-N (4-methylphenyl)-phenylmethanamine Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C(N)C1=CC=CC=C1 UHPQFNXOFFPHJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 7
- 241001190694 Muda Species 0.000 description 7
- 230000009471 action Effects 0.000 description 7
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 7
- 108010005636 polypeptide C Proteins 0.000 description 7
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 7
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 7
- 230000004044 response Effects 0.000 description 7
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 7
- FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoisobutyric acid Chemical compound CC(C)(N)C(O)=O FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 6
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 6
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 5
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 5
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 5
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 5
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 5
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 206010000599 Acromegaly Diseases 0.000 description 4
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 4
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N phenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- VZQHRKZCAZCACO-PYJNHQTQSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]propanoyl]amino]prop-2-enoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N VZQHRKZCAZCACO-PYJNHQTQSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 3
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000007342 Diabetic Nephropathies Diseases 0.000 description 3
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 3
- 208000033679 diabetic kidney disease Diseases 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 3
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 3
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 101150006605 rpa gene Proteins 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 3
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- RWLSBXBFZHDHHX-VIFPVBQESA-N (2s)-2-(naphthalen-2-ylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=CC2=CC(N[C@@H](C)C(O)=O)=CC=C21 RWLSBXBFZHDHHX-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- JPOKAKNGULMYHZ-UILVTTEASA-N (2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]hexanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-(4-hydroxyp Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N)C1=CC=C(O)C=C1 JPOKAKNGULMYHZ-UILVTTEASA-N 0.000 description 2
- MUSGYEMSJUFFHT-UWABRSFTSA-N 2-[(4R,7S,10S,13S,19S,22S,25S,28S,31S,34R)-34-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-4-[[(2S,3S)-1-amino-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]-methylcarbamoyl]-25-(3-amino-3-oxopropyl)-7-(3-carbamimidamidopropyl)-10-(1H-imidazol-5-ylmethyl)-19-(1H-indol-3-ylmethyl)-13,17-dimethyl-28-[(1-methylindol-3-yl)methyl]-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-decaoxo-31-propan-2-yl-1,2-dithia-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-decazacyclopentatriacont-22-yl]acetic acid Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@H](N)Cc1ccc(O)cc1)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](Cc2cnc[nH]2)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN(C)C(=O)[C@H](Cc2c[nH]c3ccccc23)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](Cc2cn(C)c3ccccc23)NC(=O)[C@@H](NC1=O)C(C)C)C(=O)N(C)[C@@H]([C@@H](C)CC)C(N)=O MUSGYEMSJUFFHT-UWABRSFTSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 2
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N L-citrulline Chemical compound NC(=O)NCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N Ndelta-carbamoyl-DL-ornithine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=O RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 2
- 108050001286 Somatostatin Receptor Proteins 0.000 description 2
- 102000011096 Somatostatin receptor Human genes 0.000 description 2
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 2
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001270 agonistic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 2
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 125000005519 fluorenylmethyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 2
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 208000029565 malignant colon neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 229960003424 phenylacetic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000003279 phenylacetic acid Substances 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 2-Aminobutanoic acid Natural products CCC(N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HBAHZZVIEFRTEY-UHFFFAOYSA-N 2-heptylcyclohex-2-en-1-one Chemical compound CCCCCCCC1=CCCCC1=O HBAHZZVIEFRTEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SFWWGMKXCYLZEG-UHFFFAOYSA-N 3-methylmorpholine Chemical compound CC1COCCN1 SFWWGMKXCYLZEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010075254 C-Peptide Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 241000219112 Cucumis Species 0.000 description 1
- 235000015510 Cucumis melo subsp melo Nutrition 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- QWCKQJZIFLGMSD-GSVOUGTGSA-N D-alpha-aminobutyric acid Chemical compound CC[C@@H](N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- NIGWMJHCCYYCSF-UHFFFAOYSA-N Fenclonine Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=C(Cl)C=C1 NIGWMJHCCYYCSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
- 101000825742 Homo sapiens Somatoliberin Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N L-Homoarginine Natural products OC(=O)C(N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N L-homoarginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 206010064912 Malignant transformation Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000343235 Maso Species 0.000 description 1
- 229920001367 Merrifield resin Polymers 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- AWZVYNHQGTZJIH-UHFFFAOYSA-N N-Nitrosomethylvinylamine Chemical compound C=CN(C)N=O AWZVYNHQGTZJIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229910020163 SiOCl Inorganic materials 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002253 Tannate Polymers 0.000 description 1
- GFBKORZTTCHDGY-UWVJOHFNSA-N Thiothixene Chemical compound C12=CC(S(=O)(=O)N(C)C)=CC=C2SC2=CC=CC=C2\C1=C\CCN1CCN(C)CC1 GFBKORZTTCHDGY-UWVJOHFNSA-N 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N [4,6-bis(cyanoamino)-1,3,5-triazin-2-yl]cyanamide Chemical compound N#CNC1=NC(NC#N)=NC(NC#N)=N1 FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 102000030621 adenylate cyclase Human genes 0.000 description 1
- 108060000200 adenylate cyclase Proteins 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 125000000266 alpha-aminoacyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000003557 bones of lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N chloramine T Chemical compound [Na+].CC1=CC=C(S(=O)(=O)[N-]Cl)C=C1 VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 description 1
- 235000013477 citrulline Nutrition 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 150000001993 dienes Chemical class 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 210000003054 facial bone Anatomy 0.000 description 1
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 102000045304 human GHRH Human genes 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 210000004731 jugular vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 230000004130 lipolysis Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036212 malign transformation Effects 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- CSHFHJNMIMPJST-HOTGVXAUSA-N methyl (2s)-2-[[(2s)-2-[[2-[(2-aminoacetyl)amino]acetyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoate Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)OC)CC1=CC=CC=C1 CSHFHJNMIMPJST-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- MWZPENIJLUWBSY-VIFPVBQESA-N methyl L-tyrosinate Chemical compound COC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 MWZPENIJLUWBSY-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 229940105631 nembutal Drugs 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001668 nucleic acid synthesis Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 101800002712 p27 Proteins 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000002952 polymeric resin Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000000541 pulsatile effect Effects 0.000 description 1
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 208000015347 renal cell adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 210000002356 skeleton Anatomy 0.000 description 1
- 208000000649 small cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 229940075620 somatostatin analogue Drugs 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/60—Growth hormone-releasing factor [GH-RF], i.e. somatoliberin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/02—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin
- A61P5/04—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin for decreasing, blocking or antagonising the activity of the hypothalamic hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/06—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/06—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH
- A61P5/08—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH for decreasing, blocking or antagonising the activity of the anterior pituitary hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Опис винаходу
Даний винахід був здійснений при частковій урядовій підтримці Медичної Дослідницької Служби 2 Департаменту у справах ветеранів. Уряд має визначені права на дану заявку.
Даний винахід стосується нових синтетичних пептидів, що інгібують звільнення гормону росту з гіпофіза в ссавців, і терапевтичних композицій, що містять такі нові пептиди.
Передумови створення винаходу
Гормон росту (ЗН") є пептидом, що має 191 амінокислоту, що стимулює продукування численних 70 різноманітних факторів росту, наприклад, інсуліноподібного фактора росту І (ІСБ-Ї), і, таким чином, стимулює ріст численних тканин (скелет, сполучна тканина, м'язи і внутрішні органи) і фізіологічну активність (підвищення синтезу нуклеїнових кислот і білків і ліполізу і зниження секреції сечовини).
Вивільнення СН знаходиться під контролем, визволяючих і інгібуючих факторів, що виділяються гіпоталамусом. Головним рилізинг-фактором є рилізинг---рмон гормону росту ("ЗН-КН"); рилізинг-гормон 12 людського гормону росту ("ПОН-КН") є пептидом, що складається з 44 амінокислот. Нові пептиди за даним винаходом стосуються аналогів АЗН-КН, що мають тільки залишки від 1 до 29 ("пе нН-КН(1-29)МН 2"), тобто, до аналогів пептиду, що має амінокислотну послідовність:
Туг-АІа-Азр-Аіа-Пе?-Рне-Тиг-Азп-Зег-Туг 7О-Аго-І ув-Ма!-І еи-Сіу 15- 2 СІп-І еи-Зег-АІа-Аго 20-| ув-І ец-І еи-СІп-Азр 25-Це-Меї-Зег-Ага29-МН»
СН причетний до деяких захворювань. Одним із захворювань, до яких залучено СН, є акромегалія, при якій присутні надлишкові рівні ОН. Патологічно гіпертрофованої лицеві кістки і кістки кінцівок при даному захворюванні можуть піддаватися лікуванню шляхом введення антагоніста ОН-КН.
Іншими захворюваннями, до яких залучено СН, є діабетична ретинопатія і діабетична нефропатія. Думають, сч дв ЩО, відповідно, ушкодження сітківки і нирок, при таких захворюваннях, що призводить до сліпоти або зниження функції нирок, пов'язане з СН. Така поразка може бути відвернена або уповільнена при введенні ефективного (о) антагоніста ОН-КН.
Проте головне застосування антагоністів (ЇН-КН передбачається в області злоякісних новотворів (А. М. зспайу еї аї. іп Сгомій Ногтопе Зесгейадодиез іп Сіїпіса| Ргасіїсе, едз. Вегси, В.В. 5 УМаїКег, К. Е., ОеККег, Мем їм
МогК, рр. 145-162, 1998). ІСБ-| ії -Й є сильнодіючими мітогенами для різноманітних злоякісних пухлин.
Придушуючи секрецію СН, антагоністи ЗН-ВН зменшують синтез ІСБЕ-І у печінці й інших тканинах. Антагоністи «2
СН-КН також знижують аутокринне і паракринне продукування ІСР-1І і/або ІСР-ІІЇ різноманітними пухлинами. При « деяких експериментальних злоякісних пухлинах лікування антагоністами СН-КН призводить до зменшення ІСБЕ- і-ї, що супроводжує інгібування росту пухлини. с
При спробі впливати на розвиток цих захворювань і інших станів деякі дослідники спробували контролювати с рівні СН, використовуючи соматостатин, один з інгібіторів звільнення (ЗН. Проте, соматостатин, введений окремо, не придушує рівні СН або ІСЕ-| до бажаного ступеня. При введенні в комбінації з антагоністом З3Н-КН соматостатин набагато б поліпшив придушення рівнів ІСР-Ї.
Досліджувалися різноманітні модифікації (зЗН-КН для з'ясовування зв'язку структури СН-КН із його активністю « за В спробі забезпечити синтетичні родинні з'єднання з поліпшеними агоністичними або антагоністичними -о властивостями. Так, раніше було встановлено, що фрагмент ЗН-КН, що включає залишки 1-29, або ЗН-КН с (1-29), є мінімальною послідовністю, необхідної для біологічної активності. Цей фрагмент зберігає 5095 або :з» більш активності природного (ЗН-КН.
Було знайдено, що перший описаний антагоніст ЗН-РЕН, ІАс-Туг!, О-АгаЛ)Н-ВН (1-29) МН», котрий звичайно називають у літературі "стандартним антагоністом", запобігає активації аденілатциклази передньої частки б гіпофіза пацюка за допомогою. ПОН-КН(1-29)МН».. Той же пептид блокував дію ЗН-КН на його рецепторах у гіпофізі і гіпоталамусі і інгібував пульсуючу секрецію гормону росту. со У значному числі патентів і статей у відкритій літературі описуються аналоги ЗН-КН, що діють або як 4 ї5» агоністи (ЗН-КН (тобто, діють як стимулятори звільнення СН), або як антагоністи (зЗН-КН (тобто, діють як інгібітори звільнення СН). Більшість цих пептидів походить від пептидної послідовності ЗН-КН(1-29) із о специфічними структурними модифікаціями, що відповідають за їх підвищені агоністичні або антагоністичні
І властивості.
Так, патент США Мо4659693 розкриває антагоністичні аналоги ЗН-КН, що містять визначені М,М'-диалкіл- с3- гуанідино-А-аміноацильні залишки в положенні 2 послідовності ЗН-КН(1-29).
Опублікована міжнародна заявка на патент У/О 91,16923 розглядає ранні спроби змінити вторинну структуру
ПОН-КН шляхом модифікації його амінокислотної послідовності. Такі початі раніше спроби включають: заміну і) ТУГІ, дДіа?, Авр3 або Авп? їх О-ізомерами; заміну Азп? на І- або О-Зег, О-Аго, Авп, Тиг, Сіп або О-І ув; заміну ю ек на діа для підвищення амфіфільності ділянки і заміну Су "У на Аа або АїБ. Коли В? в аналогах є О-Аго і 28, в? ї вк!» заміщені як зазначено вище, у результаті спостерігають антагоністичну активність. Такі 60 антагоністичні пептиди вважаються підходящими для введення в якості фармацевтичних композицій для лікування станів, пов'язаних із надлишковими рівнями СН, наприклад, акромегалії.
Антагоністична активність аналога ПеН-ВН " (Зев9-у-ІСН2-МНІ-Туг ЗпОен-вН(1-299" за патентом. США
Мо5084555 була визначена як результат псевдопептидного зв'язку (тобто, пептидного зв'язку, відновленого до ве ІСНо-МНІ-зв'язку) між залишками БК З і В. Проте було зазначено, що антагоністичні властивості
ІЗев?-у-ІСН2-МНІ-Туг "пе н-внН(1-29) були нижче, ніж у стандартного антагоніста, (М-Ас-Туг!, О-Аго?)
СН-КН(1-29)-МН ».
Патент США Мо5550212 і заявка на патент СШАО8,642472, що подають такі ж об'єкти, що і дана заявка, описують аналоги пОН-КН(1-29)МН», що характеризуються підвищеними антагоністичними властивостями і тривалим часом дії. Вважається, що такі властивості є результатом заміни різноманітних амінокислот і ацилювання ароматними або неполярними кислотами по М-кінцю ЗН-КН(1-29)МН ». Необхідно зауважити, що у вищезгаданому патенті США і заявці на патент США ЕЗ завжди є Зетг, ВК 79 є Сіп або амінокислотою, що утворює лактамний місток (тобто, Сію), К28 є Зег, Азп, Азр, Аіа або Аби і К2? означає Адт, Ага-МН»о, Ага-ОН, СИ-МН»,
СІ-ОН, Наг-МН», Наг-ОН або амінокислоту, що утворює лактамний місток (тобто, І уз або Огп).
Стислий опис винаходу
Подано новий ряд синтетичних аналогів ПОН-КН(1-29)МН 5. Дані аналоги інгібують активність ендогенного
ПОН-КН і таким чином запобігають звільненню гормону росту. Більш сильні інгібуючі ефекти нових аналогів, у порівнянні з описаними раніше є результатом заміни різноманітних амінокислот.
Конкретно, винахід стосується пептидів, що охоплюються формулами: х-в7-в2-Авр-Аіа-К?-5-Тиг-28-29-в19-Агд-В 12-11. 15-в 164) еуц-В 18-19. Агд-221-222-| ец-СІп-Авр-ІІе-К27-528 -828.МН», де Х означає РпАс, ІпадАс, Іри, Мас, 1- або 2-Мрг або Ррг,
В! означає Туг або Нів,
В2 означає О-Аго або О-СІЇ, 720 ВЕ5 означає Не або Маї, 25 означає Ре, Ма! або Рпесу), у котрому У-Е, СІ, Вг, 28 означає Авгп, Сіп, Зег, ТНг, АІа, О-Авп, О-сіп, О-Зег, О-ТНг, Аби, О-Аври або АБ,
В? означає Ага, Наг, Гуз, От, О-Аго, О-Наг, О-ІГ уз, О-От, СІіЇї, Міе, Ту(Ме), 5ег, Аа або АЇБ, Ге! 25 ВО означає Туг або Рпесу), у котрому М-Н, Е, СІ, Вг або ОСН», о
В: означає І ув, О-І ув або От,
ВЗ означає Ма! або Міеє,
В" означає І еи або Міеє, ча зо В" означає СУ, Аа, Аби, Міє або біп, 25 означає Сіп або Ага, о
К означає бег або Міеє, «Е
ВЗ означає Аїа або Аби,
В2! означає І уз або Оп, 09 35 222 означає І ем, Аа або діб, (Се) 827 означає Меї, ГГ ем, Міє, Аби або О-Аго, 228 означає Аго, О-Аго, Зег, Азп, Азр, Аіа або Аби, 229 означає Ага, О-Ага, Наг або О-Наг, і їх фармацевтично прийнятних солей. «
У кращому варіанті здійснення винаходу розглядаються пептиди, у який Х означає РіАс, ІпаАс або Мас, К 1 ш-в с означає Туг або Нів, 22 означає О-Аго, ВЕ? означає Не, ЕЗ означає Рне(рсі), ЕЗ означає Азп або Аби, БУ означає . Аго або Наг, Гуз, От, О-Аго, О-Наг, О-ІГув, О-Оп, Сії, Міе або ТугМе), 2/9 означає Туг або Ту((Ме), 212 означає и"? І ув, ВЗ означає Маї або Міе, В 17 означає І еи або Міе, В 1? означає Аби, Аа або Міе, ВУ означає Сіп або Аго, Б означає Зег або Міє, ВУ означає Аа або Ари, ВК?! означає І ув, В?! означає Міє або О-Аго, 28 означає О-Аго,
Аг або Зег, К2? означає О-Аго, Наг або О-Наг. (о) Відзначено, що амінокислотні залишки від ЗО до 44 природної молекули СН-КН, очевидно, не є істотними для о активності; також не є критичною їх ідентичність. Тому схоже, що приєднання деяких або усіх із цих додаткових амінокислотних залишків до С-кінця аналогів НЗН-КН(1-29)-МН» за даним винаходом не вплине на ефективність ї- цих аналогів у якості антагоністів ЗН-КН. Якщо деякі або усе з цих амінокислот приєднували до С-кінця о 50 аналогів ПОН-КН(1-29)-МН», то приєднані амінокислотні залишки могли б бути такими ж, як і залишки від 30 до 44 у послідовності природного НЗН-КН, або прийнятними еквівалентами. "м Синтетичні методи.
Синтетичні пептиди одержують підходящим способом, як, наприклад, винятково твердофазним способом, частково твердофазним способом, шляхом конденсації фрагментів або шляхом класичного синтезу в розчині. 59 Коли аналоги за винаходом синтезують твердофазним засобом, С-кінцевий залишок (тут 229) підходящим
ГФ) чином зв'язується (закріплюється) з інертним твердим носієм (смола), зберігаючи в той же час захисні групи для своєї А-аміногрупи (і, відповідно, при необхідності, для функціональної групи бічного ланцюга). Після де завершення цієї стадії захисну групу А-аміногрупи видаляють із закріпленого амінокислотного залишку і додають такий амінокислотний залишок, Код, що має підходящим чином заміщену А-аміногрупу (як і будь-яку відповідну 60 функціональну групу бічного ланцюга), і так далі. Захисні групи М-кінця видаляють після приєднання кожного залишку, але в той же час не видаляють захисні групи бічного ланцюга. Після того, як приєднали всі бажані амінокислоти в належній послідовності, пептид відокремлюють від носія і звільняють від усіх захисних груп бічного ланцюга в умовах, що є мінімально деструктивними стосовно залишків у послідовності. Потім випливає ретельне очищення і точна ідентифікація синтетичного продукту для гарантії того, що дійсно отримана бажана бо структура.
Особливо переважно захистити А-амінофункціональну групу амінокислот під час стадії сполучення за допомогою чутливої до кислоти або основи захисної групи. Такі захисні групи повинні мати властивості зберігання стабільності в умовах утворення пептидних зв'язків, у той же час повинні легко віддалитися без руйнації пептидного ланцюга, що зростає, і без рацемізації любого з хиральних центрів, що містяться там.
Підхожими захисними групами А-аміногрупи є Вос (трет-бутоксикарбоніл) і Етос (9-флуоренілметилоксикарбоніл).
Застосування в медицині.
Пептиди, що є антагоністами ЙОН-КН, або солі цих пептидів можуть бути приготовлені у вигляді 7/0 фармацевтичних лікарських форм, що містять ефективні кількості зазначених сполук, і введені людям або тварині з лікувальними або діагностичними цілями. Пептиди можуть бути використані для придушення рівнів ЗН і для лікування станів, пов'язаних із надлишковими рівнями СН, наприклад, діабетична ретинопатія і нефропатія, і акромегалія. Також забезпечені методи лікування цих захворювань шляхом введення композиції за винаходом індивідууму, що потребує такого лікування. Основне застосування антагоністів (ЗН-КН стосується, /5 проте, області злоякісних новотворів, наприклад, при раку молочної залози, легенів, ободкової кишки, мозку, підшлункової залози і передміхурової залози людини, де присутні рецептори ІСЕ-ІЇ або ІСБ-1І.
Стислий опис малюнків
Фіг.1 подає графічну залежність змін обсягу мишачих, що стосуються молочної залози, злоякісних пухлин
МХТ від днів опрацювання при опрацюванні визначеними антагоністами ЗН-КН.
Фіг.2 подає графічну залежність змін обсягу людських злоякісних пухлин молочної залози МОА-МВ-468 у бестимусних мишей від днів опрацювання при опрацюванні визначеними антагоністами СН-КН.
Фіг.З подає графічну залежність змін обсягу людських злоякісних пухлин ободкової кишки НТ-29 у бестимусних мишей від днів опрацювання при опрацюванні визначеними антагоністами СН-КН.
Фіг.А4 подає графічну залежність змін обсягу людських гліобластом О87МО в бестимусних мишей від днів сч дб опрацювання при опрацюванні антагоністом ЗН-КН.
Фіг.5 подає графічну залежність змін обсягу людських злоякісних пухлин передміхурової залози РО-3 у і) бестимусних мишей від днів опрацювання при опрацюванні визначеними антагоністами СН-КН.
Докладний опис кращих варіантів здійснення винаходу
А. Скорочення М зо Номенклатура, що використовується для визначення пептидів, є такою, що встановлена спеціальним уповноваженим ІЮПАК-МБС (МБС - Міжнародна біохімічна спілка) по біохімічній номенклатурі, де відповідно до о звичайного уявлення аміногрупа при М-кінці знаходиться зліва і карбоксильна група при С-кінці знаходиться «г справа. Термін "природна амінокислота", використовуваний тут, означає одну зі звичайних, що зустрічаються в природі, І-амінокислот, що знаходяться в природних білках: Су, Аа, Маї, Гей, Не, бег, ТАг, Гуз, Аго, Агр, со
Азп, СІМ, Сіп, Суз, Меї, Рпе, Туг, Рго, Тгтр і Нів. Коли залишок природної амінокислоти існує в ізомерних «о формах, саме І -форма амінокислоти подана тут, якщо спеціально не зазначено інакше.
Некодовані амінокислоти або амінокислотні аналоги також включені в антагоністи ЗН-КН. ("Некодовані" амінокислоти подають ті амінокислоти, що не знаходяться серед приблизно 20 природних амінокислот, що зустрічаються в природних пептидах). До некодованих амінокислот або амінокислотних аналогів, що можуть « бути використані в пептидах, що є антагоністами НОН-КН, відносяться такі: з с під Ари мають на увазі а-аміномасляну кислоту, під Аір мають на увазі А-аміноїзомасляну кислоту, під Наг мають на увазі гомоаргінін, під Ма! мають на увазі 2-нафтилаланін, під Міе мають на увазі норлейцин і під Огп ;» мають на увазі орнітин. Коли ці некодовані амінокислоти або аналоги амінокислот існують у ізомерних формах, саме І -форма амінокислоти подана тут, якщо спеціально не зазначено інакше. Використовувані тут скорочення:
Й б Ари А-аміномасляна кислота
Ас ацетил (о) АсОон оцтова кислота їз Ас оцтовий ангідрид
А А-аміноізомасляна кислота о 50 В І ос трет-бутоксикарбоніл г (ЧІ Вот бензилоксиметил 287 2-бромбензилоксикарбоніл снх циклогексил сії цитрулін (2-аміно-5-уреїдовалеріанова кислота) 2С17 2-хлорбензилоксикарбоніл
Ф) ром дихлорметан (ДХМ) ке ІС М,М"-диіїзопропілкарбодиїімід (ДІКД)
ІЕА диізопропілетіламін (ДІЕА) 60 ОМЕ диметилформамід (ДМФА)
Етос флуоренилметилоксикарбоніл
Ерг З-фенілпропіоніл он гормон росту
СН-КН о рилізинг-гормон гормону росту б5 Наг гомсаргінін нвт 2-(1нН-бензотріазол-1-іл)-1,1,3,3-тетраметилуронію гексафторфосфат
ПОН-КН людський СН-КН
НОВІ 1-гідроксибензотриазол
НРІС високоефективна рідинна хроматографія (ВЕЖХ)
Іри ізобутирил
ІпаАс індол-З-ацетил
МВНА / п-метилбензгідриламін (МБГА) меон метанол месм ацетонітрил
Мас 1-нафтилацетил маї 2-нафтилаланін
МММ М-метилморфолін
Мрг нафтилпропіоніл
РАМ фенілацетамідометил
Рпе (рсіЇ) п-хлорфенілаланін
РИПАс фенілацетил гОН-КН о щурячий СОН-КН
КР-НРІ С ВЕЖУ із зверненою фазою
ТЕА трифтороцтова кислота (ТФК)
Тов п-толуолсульфоніл
Туг(Ме) простий тирозинметиловий ефір 7 бензилоксикарбоніл
В. Аналоги ОН-КН Ге
Аналоги пПОН-КН за даним винаходом були отримані з метою підвищення спорідненості пептидів до (5) рецептора, підвищення метаболічної усталеності і максимізування амфіфільності повторної структури молекул.
Багато з цих аналогів викликають дуже ефективне і тривале інгібування звільнення СН, стимульованого пОНн-КН(1-29)МН» іп мігго і іп мімо.
Наступні варіанти здійснення винаходу особливо переважні як такі, що мають чудову біологічну активність: -
ІРпАс», О-Агдо, РпегрСуМ, Аго, Ави!?, Ме", О-Аго, Наг"Тзнен-яНИ. о 29)мчн, пептид ! «Е
НядАсе, О-Аго?, Рпе(рсі?, Агдо", Аби"ї, Міе??, О-Аго??, Наг?)вСН-ВНІ1- со 281чН. пептид 2
Зо ІРпАсе, О-Агог, РпегрСІЇ», Наг?, ТугіМе)"», Аби», Мів?", О-Агд?е, Нагзунен. (Се)
ВАі1-28)чнН, пептид З й
ІРйАс", О-Ага, Рпеірсі", На, Ав", Ме", Б-Ага?, Наг|нСН-ВНИ.- « 291МчН, пептид 4 и т0 Імасе, О-Аго?, Рперсій, Агоб, Аби, Міе??, О-Аго?е, НагпОн.-ВНИ.- в с 281МчНн, пептид 5 и 29 "» ІРпАс", О-Аго", Рва(рсірй, Аго?, Тупімен?, діне, Міе??, В Аго?», Наг" пон. вНІ1.29)мч, пептид 6
Ф 75 (РАС, Нів!, О-Акд", Рпе(рСіЇ", Аг", Аби?, Ме", О-Аго?е, наг|нСн-яНИ- 281МчН, пептид 7 І
Со масо, Нів!, О-Ага?, Рпе(рСІЇЄ, Аго?, Аби", Ме", О-Аго?", Наг)пОн-ВНІ1. т- 28)МН, пептид 8 с ШІ ІРвАс", О-Аго", РпефрСЄ, Ахео?, Ави!?, Ме!", О-Агд? Ін СН-ВНІ1-291МН, «м пептид 9 іме) бо б5
ІРпПАс", О-Агд?, Рпе(рСі)?, АВо?, Агд', Мег", О-Агд"псн-ВН(1- 29)МчН, пептид 10
ІРМАс", О-Аго?, Рне(рсі, Аву"?, Ме??, О-Агдйі, Наг2з1нсн-янИ-291Мн, 9 пептид 11
ІРпАс", О-Агд", Рнеірстує, Ме", дроиз, Ме?, О-Агр"зон.Анг.-29МН, пептид 12
ІРпАдс", О-Агд", РнегрсСіі?, Ме", Ме!", Ави!?, Міе?", О-Аго?)пОН-ВНИ- 710 291МН., пептид 13
ІРнАс", О-Агд", Рве(рсі)», Ме!?, Ме??, О-Агд?"Юптен-яН(129)МН, пептид 14
ІРпАс", О-Агд?, Рне(рсСі", Аби!?, Міе"?, Ме", О-Аго?ІваН-ВН(1-29)МН, а пептид 15 .
ІРпАс", ОхАго", Рве(рсіі", ТупімМе)?, АвВи?, МВ, р-Агда"!пен-вна. 291чн, пептид 16
ІРпАс",О-Аго", РпегрСІ)?, Або, Туг/Ме?, А ви", Мей", О-Аго?)їпСН-ВНІ1. 28)МН, пептид 17 (рвдс», О.А? РпегрсТ, О-АЬу, ТупгіМе!", Ави"?, Ме??, О-Агаг"|пОН.
ВНИ1-28)МН, пептид 18
ІРпАс", О.Аго", РнегрСі)», ТугіМене, дьоя, О-Аго"", Агр?е, О-Агдгз пон. сч яНІ1-28)МН, пептид 19 |РНАс", О.Агд", РнегрСІ", ТудМе!?, Абу, О-Аго??, Аго??, О-Аго?! пн. о
ЯНОИ.-29)МН, пептид 20
ІРпАс", О-Агд", Рпесрсу», Ави!», О-Аго?", Агов, О-Аго?)їреН-ВН(1-29)МН, пептид 21 -
РАС", О-Агд", Рпе(рСІй, Аву?, ТупгіМе)?, Аво», О.Аго?!, Аго??, 0. «в
Ага" |воН-АНИ.29)МН, пептид 22 «
ІРвАс", О-Аго?, Рпе(рсі)й, О-Ави?, ТугпМе)", Ави!я, Р-Агда"", Ага??, р.
Ага?" )РоН-ВНІ1-29)МН, пептид 23 со
ІРпАс", О-Ага", РпегрСІ», ув", Ави!?, Мів??, О-Аго?, НагеІнСн-ВН(1- (Се)
Зо 29ММН, пептид 24
І(РпАс", О-Аго", Рпе(рсі», Огп?, Ари??, Мів??, Б-Аго?б, Наге|нон-вн(1- 28)МН, пептид 25 « - с . а (о) (ее) їх (ав) що ко бо 65
ІРнАс", р.Аго?, Рвес(рСІІй, О-Аго?, Аби"? Ме?!, О-Аго?», НагзвСн-ВН(1- 29)чн. пептид 26 (РпАс", О.Аго?, Рне(рСіІЄ, О-На?, Аби"?, Міе??, О-Асд??, Наг?)пСН-ВН(1- 9 29)МН. пептид 27 (РпАс», О-Агд?, РпєрСІ)?, О-цув?, Ави, Ме?", О-Аго?", НагДвСН-ВНІ1- 29)МН, пептид 28 :
ІРпАсе, 0-Аго?, РпегрСІ)Є, О-Ога?, АВ, Ме", О-Аго??, Наг"|паН-вН(1- 70 285)чнН. пептид 29
ІРвпАс", О-Аго?, РнегрСЦ, Сі, Аби, Ме", О.Агд?», Наг?|пСнН-вН(1- 23)МН. пептид 30
Шість дуже кращих варіантів здійснення винаходу мають формули: 75 Рпдс тує. ОАгд!- Ар Аве. Рпегрсіе-тнг Ап Агог- туго Аді увиз.
Маг треш дво». біл сви Баг діа" Агог ув? рви?з ви. біл? -дврз-
Пегб-Ме?/"-0.Агод?».Наг-МН, пептид 1
Іпадеи-Туг-О-Аго!-Авр?-Аів"-Це- перс тв Авпй-Аго?- тупо Ага сувій.
Мар'-рвум дет. Сі я ви !-бегія-діа'-Агу» ув? во ву. бід? др.
Месб-Мме"!"О.Агд Нас. МНн. пептид 2
РпАс"иТугО-Ага"-Азри- Аа" Пе?-Рне(рст-Тнг -Авп-НагТупМе) Аг ува! уверх. Ария.Сіпие ер! Бег'я. Діаз. Арго. ув вий? виз віп.
Аврг»-Пего.Ме??- О.А гдав- аг? МН пептид З ше сч
Рпдс тує ВоАго!.Авр?. діатез Рпе(рспе-тпг?-Авпе- Ага? ТугіМе б Агу.
Мув'Магрец Аво!? бій! меш! бег'б. Дія. Аго 2 ув?! виг? еце3. іп. о
Авр"Пее де". Аг? Нага- МН, пептид б
РВАс"-Нів-О-Агд?- Арі. Аве. Рне(рсі)?-ТАг?-Азп?-Агае-Туг се А го ув'я.
Маг? ец Авц зобі ер! Бег'?. Дів. Агд о. ув. еці?. ву? сІпл.- дер. ї- пе2е-Ме".О.Аго?о.Нагз-МН, пептид 7 (ав)
Мас'-нів"О-Ага?-Авр?. Азаз-Пез-Рне(рСІ-Тг-Азпе. Аг. Ту го. год увиз. чІ
Ма? івц'Аво!8.біп'є. ео'!. Зв. Дів з. Аг. ув? ві. вцз. іп. дері.
Пе??-Ме".О.Аго?б-Наге-мн, пептид 8 со
Відповідно до загального правила такі сполуки можуть бути подані зі скороченим найменуванням, як (се) випливає нижче:
ІРпАс", О-Ато?, Ріе(рсі), Аго?, АВи"?, Мів??, р-Аго?е, Наг "пе нН-ВН1- 231Мн, пептид 1 «
Нпаде", О-Агд?, Рае(рсій, Агу?, Аби, Ме??", р-Аго?е, Нагьсн-ВНІ1- - с 231чн, пептид 2 "з ІРпАс", О-Аго?, Ріев(рСІ, Наг?, ТугіМе", АВи!», Мів?", О-Аго??, Нагг нон. " АНИ-29)МН, пептид З о . (Рпде", О-Аго?, Рнегрсій, Аго?, ТугіМе?, Аби, Ме", О-Аго", Нагг3п бН.. б» 395 ВНІ1-29)Мн, пептид 6
ІРпАс", Нів', О-Агд?, Рпе(рСІК, Аго", Аби"?, Мів?", О-Аго?е, Наг?ІнНон-ВНИ-
Со 291МН, пептид 7 «їз» Імаєс", Нів', О-Аго?, Рпе(рСіІ)?, Аго?, Аби"?, Міе?!, Д-Аго??, Наг?|їпОон-ВНІ1- о 50 28)Мн, пептид 8
С. Спосіб одержання "М 1. Огляд синтезу
Пептиди синтезують підходящими способами, як, наприклад, винятково шляхом твердофазного пептидного синтезу, частково шляхом твердофазного синтезу, шляхом конденсації фрагментів або шляхом класичного 22 синтезу в розчині. Наприклад, методики винятково твердофазного синтезу подані в (підручнику "Зої Рпазе
ГФ) Реріїде Зупіпевів", )У. М. Зіежмаг апа у. О. Моцпо, Ріегсе Спет. Сотрапу, Коскіога, 111, 1984 (2па. еа.), апа
М. ВодапзагкКу, "Ргіпсіріев ої Реріїде Зупіпевів", Зргіпдег Мегіад, 1984). пептиди, що є антагоністами пОН-КН, де переважно одержують при застосуванні твердофазного синтезу, як, наприклад, описаного (|Мегтгійеїа, 3.
Ат.Спет. бос, 85, р. 2149 (1963)), хоча інші еквівалентні хімічні синтези, відомі в даній області, можуть 60 бути також застосовані, як зазначалось вище.
Синтез здійснюють з амінокислотами, що захищені по А-аміногрупі. Переважно для захисту А-аміногрупи використовують захисні угруповання типу уретану (Вос або Етос). Кращою захисною групою є Вос.
При твердофазному синтезі захищена по атому азоту А-аміногрупи ділянка амінокислоти, що утворює аміноацильну групу кінцевого пептиду при С-кінці, приєднують хімічним зв'язком до носія з полімерної смоли. бо Після завершення реакції зв'язування захисну групу А-аміногрупи для проведення наступних реакцій зв'язування по амінокінцю селективно видаляють, переважно за допомогою 5095 трифтороцтової кислоти (ТФК) у дихлорметані (ДХМ), коли М-А-захисною групою є Вос. Інші амінокислоти з подібним чином Вос-захищеними
А-аміногрупами постадійно приєднують до вільної аміногрупи попередньої амінокислоти на смолі для одержання бажаної пептидної послідовності. Оскільки амінокислотні залишки зв'язуються з А-аміногрупою С-термінального залишку, ріст синтетичних пептидних аналогів ПН-КН починається при С-кінці і просувається в напрямку до
М-кінця. Коли отримана бажана послідовність, пептид адилюють по М-кінцю і його видаляють із полімерного носія.
Кожну захищену амінокислоту застосовують у надлишку (2,5 або З еквівалента), і реакції сполучення 70 звичайно проводять у ДХМ, ДМФА або в їх сумішах. Ступінь завершення реакції зв'язування контролюється на кожній стадії за допомогою реакції з нінгідрином. У випадках, коли визначають неповне зв'язування, процедуру зв'язування повторюють або реакцію завершують шляхом ацилювання аміногруп, що не прореагували, до видалення захисної групи з А-аміногрупи перед зв'язуванням такої амінокислоти.
Типовий цикл синтезу поданий у таблиці Ї. нини нний » (хвил.) ся ща зо о
ДІКД або заздалегідь приготований складний ефір 1-гідроксибензотриазолу і Вос-амінокислоти 2 сн на ПИ МИ» з о « 40 . ! . с. -
Після завершення синтезу відщеплення пептиду від смоли може бути здійснене з використанням методик, с добре відомих у хімії пептидів. :з» Деякі з амінокислотних залишків пептидів мають такі функціональні групи в бічному ланцюзі, які реакційно-спроможні стосовно реагентів, що використовується при зв'язуванні або знятті захисту. Коли в бічному ланцюзі присутні такі групи, підходящі захисні групи приєднують до цих функціональних груп для б 75 запобігання небажаних хімічних реакцій, що відбуваються при реакціях, використовуваних для утворення пептидів. При виборі відповідної захисної групи для бічного ланцюга притримуються таких загальних правил: (ее) (а) захисна група переважно зберігає свої захисні властивості і не відщдеплюється в умовах зв'язування, 1» (в) захисна група повинна бути стійкою в умовах видалення захисної групи з А-аміногрупи на кожній стадії синтезу, (ав) 20 (с) захисна група бічного ланцюга повинна бути спроможною після завершення синтезу бажаної -ч амінокислотної послідовності віддалитися в реакційних умовах, що не змінять небажаним чином пептидний ланцюг.
Реакційно-спроможні функціональні групи бічного ланцюга переважно захищають таким чином: бензил для
ТАигої Зег; 2-бромбензилоксикарбоніл для Туг; п-толуолсульфоніл або нітрогрупа для Аг і Неаг; 2-хлорбензилоксикарбоніл або флуоренілметилоксикарбоніл для уз, Огп; бензилоксиметил для Ніз і
ГФ) циклогексил або флуоренілметил для Авгр і сім. Бічні ланцюжки Авп і біп не захищаються. 7 3. Постадійне зв'язування амінокислотних залишків із полімерним носієм
Пептиди, що є антагоністами ПОН-КН, можуть бути синтезовані на ряді полімерних носіїв, тобто, на смолі на основі п-метилбензгідриламіну (МБГА), на смолі Меррифілда, на смолі на основі фенілацетамідометилу або на 60 смолі МУапд. Коли для синтезу використовуються М-А-Вос-зазахищені амінокислоти, переважною смолою є смола на основі МБГА. У цьому випадку одержують пептиди з амідованим С-кінцем при відщепленні від фази-носія.
Спочатку С-кінцева амінокислота приєднуєтеся до нейтралізованої МБГА-смоли і потім проводяться наступні зв'язування амінокислот. Кожна захищена амінокислота зв'язується приблизно при триразовому молярному 65 надлишку стосовно пов'язаних смолою залишкам із вільними аміногрупами, і зв'язування може бути проведене в середовищі, як, наприклад, ДМФА: СН Сі» (1:11) або тільки в ДМФА, або тільки в СНЬСі». Вибір підходящого реагенту, що зв'язує, є компетенцією спеціаліста в даній області. Особливо підходящими в якості реагентів зв'язування є М,М-диізопропілкарбодиімід (ДІКД) або гексафторфосфат 2-(1Н-бензотриазол-1-іл)-1,1,3,3-тетра метилуронію, змішаний із 1-гідроксибензотриазолом. Успіх проходження реакції зв'язування на кожній стадії синтезу переважно контролюється за допомогою нінгідринової реакції. У випадках, коли відбувається неповне зв'язування, або процес зв'язування повторюють, або пов'язані смолою залишки, що не прореагували, з аміногрупами ацетилюють із використанням оцтового ангідриду в ДХМ до видалення захисної групи
А-аміногрупи. 70 Кінцеве ацилювання М-кінця пептиду проводять таким же чином, як і попередні зв'язування, із тією різницею, що замість амінокислоти використовують відповідну карбонову кислоту. 4. Видалення пептиду з полімерного носія.
Коли синтез завершений, пептид відщеплюють від фази-носія. Видалення пептиду зі смоли здійснюють при опрацюванні реагентом, як, наприклад, рідкий фтористий водень, що також відщеплює усі захисні групи бічного /5 ланцюга, що залишилися.
Відповідно, висушений і захищений пептид-смолу опрацьовують сумішшю, що складається з 1,0мл м-крезолу ії їОмл безводного фтористого водню на грам пептиду-смоли, протягом 60 хвилин при 0"С для відщеплення пептиду зі смоли, а також для видалення всіх захисних груп бічного ланцюга. Після видалення фтористого водню в току азоту й у вакуумі вільні пептиди осаджують діетиловим ефіром, фільтрують, промивають діетиловим ефіром і етилацетатом, екстрагують 5075 оцтовою кислотою і піддають ліофілізації. 5. Очищення
Очищення технічних пептидів можна здійснювати, використовуючи методики, добре відомі в хімії пептидів.
Наприклад, очищення може бути проведене з використанням системи МасКаррії для ВЕЖХ ІКаїпіп Іпзігитепі
Со. Іпс., Моригп, МА) з УФ-фотометром Кпапшег і реєструючим пристроєм, Кірр і 7опеп ВО40, використовуючи сч ов Колонку Мудас 218ТРБОТО із зверненою фазою (10 х 250мм, заповнену силікагелем С 18, розмір пір ЗООА, розмір часток 5мкм) (Те Зерагайопе ОСгоцр Іпс., Незрегіа, СА). Колонку елююють системою розфакторів, що і) складається з (А) 0,195 водяної ТФК і (В) 0,190 ТФК у 7095 водяному Месм із лінійним градієнтом (наприклад, 30 - 5595 В 120 хвилин). Елюент контролюється при 22Онм і фракції досліджуються за допомогою аналітичної ВЕЖХ при використанні рідинного хроматографа моделі НР-1090 фірми Немжміенф-Раскага і об'єднуються для М зо забезпечення максимальної чистоти. Аналітичну ВЕЖХ здійснюють на колонку Мудас 218ТРБ2 із зверненою фазою (2 х 250мм, С 18, ЗО0А, Бмкм), застосовуючи ізократне елюювання системою розфакторів, що о складається з (А) і (В), позначених вище. Піки реєструються при 220 і 280нм. Пептиди за даними аналітичної «г
ВЕЖХ одержують у значній мірі чистими (2 9595). Очікуваний амінокислотний склад також підтверджується амінокислотним аналізом. со
Ор. Фармацевтична композиція «о
Пептиди за винаходом можуть вводитися у вигляді фармацевтично прийнятних нетоксичних солей, як, наприклад, адитивні солі кислоти. Прикладами таких адитивних солей кислот є гідрохлорид, гідробромід, сульфат, фосфат, фумарат, глюконат, танат, малеат, ацетат, цитрат, бензоат, сукцинат, альгінат, памоат, малат, аскорбат, тартрат і їм подібні. Особливо переважними антагоністами є солі з малою розчинністю, «
Наприклад, памоати і їм подібні. Вони виявляють тривалу активність. з с Сполуки за даним винаходом відповідно вводять людям або тварин підшкірно, внутрішньом'язово або внутрішньовенно, через ніс або шляхом легеневої інгаляції, або у вигляді форми з уповільненим виділенням ;» (депо-форма) (наприклад, мікрокапсули, мікрогранули або циліндрична паличка, подібна імплантатам), приготовленої з підходящого біорозкладаючогося полімеру, (як, наприклад, О.І -лактид-согликолід), причому перші дві депо-форми є кращими. Інші еквівалентні форми введення також подані в рамках даного винаходу,
Ге» тобто, тривале краплинне внутрішньовенне уливання, ін'єкції речовин уповільненого всмоктування, інфузійний насос і форми зі звільненням у часу, як, наприклад, мікрокапсули, і їм подібні. Введення припустимо в со будь-якому фізіологічно прийнятному ін'єкувальному носії, фізіологічному розчині, хоча інші носії, відомі в ї5» даній області, можуть також використовуватися.
Пептиди переважно вводять парентерально, внутрішньом'язово, підшкірно або внутрішньовенно з о фармацевтично прийнятним носієм, як, наприклад, ізотонічний сольовий розчин. Альтернативно пептиди можуть "М вводитися у вигляді інтраназального аерозолю за допомогою підходящого носія або шляхом легеневої інгаляції.
Підходящим шляхом введення є депо-форми, приготовлені з відповідного біорозкладаючогося полімеру наприклад, полі-О,Ї -лактид-согликоліду, у вигляді мікрокапсул, мікрогранул або циліндричних імплантатів, що дв Містять дисперговані антагоністичні сполуки.
Необхідна кількість пептиду залежить від засобу введення і гаданого результату. Звичайно діапазон доз (Ф) складає 1-10Омкг, кг маси тіла організму-хазяїна на день. ка Е. Терапевтичне застосування антагоністів СН-КН.
Антагоністи ПЗН-КН можуть бути застосовані при лікуванні станів, викликаних надлишком гормону росту, бо наприклад, акромегалії, який виявляється у вигляді аномального розростання кісток обличчя і кінцівок.
Антагоністи СН-КН можуть також застосовуватися для лікування діабетичної ретинопатії (головна причина сліпоти в діабетиків) і діабетичної нефропатії, при яких ушкодження очей і нирок, відповідно, зв'язують із СН.
Антагоністи НЗН-КН призначаються для блокування зв'язування і, отже, дії ЗН-КН, що стимулює виділення
СН, що, у свою чергу, стимулює продукування ІСЕ-І. Антагоністи ЗН-КН можуть вводитися окремо або разом з 65 аналогами соматостатину, як комбінація, що більш повно знижує рівні ІСЕ-І. Корисніше вводити антагоністи
СН-КН, ніж соматостатин, завдяки тому факту, що антагоністи (ЗН-КН можуть бути застосовані в ситуаціях, коли сайти мішеней не мають рецепторів соматостатину.
Проте, головним чином, антагоністи (ЗН-КН застосовуються в області злоякісних захворювань. Це грунтується на таких міркуваннях: антагоністи ЗН-КН призначаються для блокування зв'язування і тому дії
СН-КН, який стимулює виділення СН, який, у свою чергу, стимулює продукування інсуліноподібного фактора росту І (ІСЕ-І), що також називається соматомедин-С. Добре встановлене залучення ІСЕ-І (соматомедин-С) у злоякісні захворювання молочної залози, передміхурової залози, ободкової кишки, в пухлини кісток і інші злоякісні захворювання, але одні аналоги соматостатину адекватно не придушують рівні СН і І-І. Для кращого інгібування росту пухлини потрібно повне придушення рівнів ІСЕ-І або його виділення. Аутокринне продукування 7/0. |6Р-І різноманітними пухлинами могло б бути також під контролем ОН-КН і тому могло б інгібуватися антагоністами (ЗН-КН. Антагоністи ЗН-КН могли б також інгібувати продукування ІСЕ-І. Більш детальна теоретична передумова застосувань ЗН-КН в області онкології (раку) така: рецептори ІСЕ-| присутні в первинних людських злоякісних пухлинах молочної залози, злоякісних пухлинах передміхурової залози, злоякісних пухлинах легенів, злоякісних пухлинах ободкової кишки, у пухлинах мозку, у злоякісних пухлинах 7/5 Підшлункової залози й у гіпернефроїдних пухлинах нирки.
Присутність рецепторів ІСЕ-І| у цих пухлинах пов'язано зі злоякісною трансформацією і проліферацією цих злоякісних пухлин. ІЗЕ-І може діяти як ендокринний, паракринний або аутокринний фактор росту для різноманітних злоякісних пухлин людини, саме ріст цих новотворів залежить від ІСБ-І. Антагоністи ЗН-КН, придушуючи виділення СН, знизять продукування ІСБ-І. Оскільки ІЗБ-І стимулює ріст таких різноманітних новотворів (раку), то зниження рівнів ІСР-І, що циркулює, повинно призвести до інгібіювання пухлинного росту.
Можливо, що антагоністи (ЗН-КН змогли б також понизити паракринное або аутокринное продукування ІСБ-І пухлинами, що повинно також призвести до інгібування проліферації злоякісних новотворів. Ці погляди відповідають сучасними концепціями клінічної онкології. Антагоністи ЗН-КН варто давати окремо або разом з аналогами соматостатину, і комбінація призвела б до досягнення більш повного придушення рівнів ІСБР-Ї, до сч ов Ліквідації рівнів ІЗР-І у тканинах, наприклад, у людських остеосаркомах, а також при раку молочної залози, раці ободкової кишки, раці передміхурової залози і недрібнококлітинному раці легенів (поп-5СІ С). і)
Перевага антагоністів ЗН-КН над аналогами соматостатину грунтується на факті, що антагоністи СПОН-КН можуть бути використані для придушення пухлин, що не мають соматостатинових рецепторів, наприклад, людські остеогенні саркоми. М зо Було показано, що антагоністичні аналоги СН-КН придушують ріст різноманітних пухлин іп мімо. Цей ефект виявляється частково через інгібування системи ЗН-КН-ІОБ-І. Проте, аутокринний, паракринний контроль о проліферації за допомогою ІСБ-І також є головним фактором у багатьох пухлинах. Порушення такого «г аутокринного, стимулюючого ріст метаболічного шляху пропонує підхід до контролю пухлин. Антагоністичні аналоги СН-ВН, М2-4-71 « (ви, Туго, Туг!, О-Агу?, Ари"5, Міе?7 |НЗН-ВН (1-28) Адт) і М7-5-156 (РпАсо, О0-Агд?, 90
Аври!», Ме?2/| НОН-ВН (1-28) Адт), значно інгібували швидкість проліферації ліній клітин раку молочної залози «о (МОА-МВ8-468, 2К-75-1), передміхурової залози (РОС-3 і 000-145) і підшлункової залози (МіаРаСа-2, 5МУ-1990 і
Сарап-2) іп міо, як показано за допомогою колориметричних тестів і тестів по вмиканню | ЗНІ-тимідину, знижували експресію мРНК ІСБ-ІІ у клітинах і концентрацію ІСЕ-ІЇ, що виділяється в культуральне середовище. «
Ті ж антагоністи СН-КН давали схожі результати іп мімо (інгібування проліферації і зменшення продукування |ББ-І) у випадку пухлин передміхурової залози (рС-3, 000-145), аденокарциноми нирки (Сакі-Ї) і т с недрібноклітинного раку легенів (Н157). Ці результати припускають, що антагоністичні аналоги СОН-КН можуть ч інгібувати ріст пухлини не тільки шляхом інгібування системи СОНКН-ОН-ІСБ-ІЇ, але також за рахунок зменшення » виробітки ІСБ-ІІ у деяких пухлинних клітинах, тим самим порушуючи її аутокринний регуляторний метаболічний шлях.
Даний винахід описується такими прикладами, що далі подані тільки з метою ілюстрації. У прикладах (2) використовуються оптично активні захищені амінокислоти в І -конфігурації, за винятком спеціальних указівок. о Такі приклади далі подають підходящі засоби синтезу нових антагоністів ЗН-КН за допомогою твердофазного синтезу. т. Приклад 1 о 20 впАсо-Туг!-0-Агд"-Авр3-А1а!-т1е5-Рпе (рС1) Тр -Авп'-дкді-тую- «М Вгд"-фув'?-уар -рец'-дри"?-біп'-гец'!-Зег"-А1а дк ув
Беп??-реціз-суп! дер?б-т1е26-М1іе?"-0-Агд-Нак??-МН. (пептид 1) ря ((РНдс?, 0-Ака?, Рве(рс1)7, Акд?", АБші?, М1е!", р-Ако", о Наг1всн-ВЕН(-29УМНЇ
Синтез здійснюють постадійно, використовуючи устаткування для твердофазного пептидного синтезу з о ручним керуванням. Коротко, смолу на основі МБГА (Васпет, Саїйогпіа) (720мг, О,5ммоль) нейтралізують 595
ДІЕА в СН»еСІ» і промивають відповідно до протоколу, описаним у таблиці 1. Розчин Вос-Наг((МО»2)-ОН (50Омг, 60 1,5ммоль) у ДМФА-СНЬ»СІ» (1:1) струшують із нейтралізованою смолою і ДІКД (235мкл, 1,5ммоль) в апараті з ручним керуванням для твердофазного пептидного синтезу протягом 1 години. Після завершення реакції зв'язування, що підтверджується негативним нінгідриновим тестом, зняття захисту за допомогою 50956 ТФК у
СНоСІ» і нейтралізації за допомогою 5956 ДІЕА в СНоСі» пептидний ланцюг будують постадійно шляхом зв'язування на смолі таких захищених амінокислот у зазначеному порядку для одержання бажаної пептидної бо послідовності: Вос-О-Аго(То5)-ОН, Вос-Міе-ОН, Вос-Пе-ОН, Вос-Азр(ОсНхХ)ОН, Вос-СіІп-ОН, Вос-ІГеи-ОН,
Вос-Гец-ОН, Вос-І ув(2СІ2)-ОН, Вос-Агоа(То8в)-ОН, Вос-Аіа-ОН, Вос-Зег((В2І)-ОН, Вос-ГешШ-ОН, Вос-с|Іп-ОН,
Вос-Ари-ОН, Вос-Іец-ОН, Вос-МаІ-ОН, Вос-І ув(2С12)-ОН, Вос-Ага(Тов)-ОН, Вос-Ту(к2Вг)-ОН, Вос-Агу(Тов)-ОН,
Вос-Азп-ОН, Вос-Тиг(В2І)-ОН, Вос-Рпе(рсіІ)-сн, Вос-ІПе-ОН, Вос-АІа-ОН, Вос-Азр(ОсНх)-ОН, Вос-О-Аго(Тов)-ОН,
Вос-Ту(к2Вг)-ОН.
Ці захищені амінокислотні залишки (також звичайно одержувані від фірми Васпет Со.) позначені вище відповідно до добре відомого правила. Підходяща захисна група для функціональної групи бічного ланцюга визначених амінокислот вказується в скобках. Гідроксильні групи в поданих вище формулах указують, що карбоксильний кінець кожного залишку вільний. 70 Захищені амінокислоти (1,5ммоль кожній) зв'язують із ДІКД (235мкл, 1,5ммоль) за винятком Вос-Азп-ОН і
Вос-сСІп-ОН, що зв'язуються з їх раніше утвореними складними ефірами з 1-гідроксибензотриазолом. Після видалення М2-Вос-захистної групи від Туг! пептид ацилюють за допомогою фенілоцтової кислоти (РНАс) (272мг, 2ммоль), застосовуючи ДІКД (31Змкл, 2ммоль).
Для того, щоб відщепити пептид від смоли і зняти з нього захист, висушену смолу з пептидом (2,18Гг) 75 перемішують із 2мл м-крезолу і 20мл фтористого водню (НЕ) при 0 протягом 1 години. Після розпарювання НЕ у вакуумі залишок промивають безводним діетиловим ефіром і етилацетатом. Відщиплений і позбавлений захисту пептид розчиняють у 5095 оцтовій кислоті і відокремлюють від смоли шляхом фільтрації. Після розведення водою і ліофілізації одержують 1,51г неочищеного продукту.
Неочищений пептид досліджують за допомогою аналітичної ВЕЖХ, використовуючи рідинний хроматограф моделі НР-1090 фірми Немек-Раскага із колонкою Мудас 218ТРБ2 із зверненою фазою (2 х 250мм, заповнена силікагелем С18, розмір пір ЗО0ОА, розмір часток Бмкм) (Те Зерагайоп Сгоцр Іпс., Незрегіа, СА) і лінійний градієнт елюції (наприклад, 40 - 7095 В) за допомогою системи розфакторів, що складається з (А) 0,195 водяної
ТФК і (В) 0495 ТФК у 7096 водяному МесмМ. Розчиняють 50,О0мг неочищеного пептиду в АСОН,Н», перемішують, фільтрують і наносять на колонку Весктап ОІКгаргер 005 (21,2 х 150мм, заповнена силікагелем С18, розмір пір. сч
ЗО0А, розмір часток 1Омкм). Колонку елююють системою розфакторів, описаною вище, із лінійним градієнтом о (наприклад, ЗО - 5590 В за 120Охвил.); швидкість потоку бмл/хв. Елюент контролюють при 22Онм і фракції досліджують за допомогою аналітичної ВЕЖХ. Фракції з чистотою вище 9595 об'єднують і ліофілізують, одержуючи 98мг чистого продукту. Аналітична ВЕЖХ проводиться на колонці Мудас С18 із зверненою фазою, описаною вище, із застосуванням ізократної елюції системою розфакторів, описаною вище, із швидкістю потоку /-|жж
О,2мл/хв. Піки аналізуються при 220 і 280нм. Судячи з даних аналітичної ВЕЖХ, продукт у значній мірі є чистим (» 9595). Молекулярну масу визначають за допомогою мас-спектрометрії з електродиспергуванням, і о очікуваний амінокислотний склад підтверджують амінокислотним аналізом. «І
Приклад ЇЇ со ввАсо-Тук!-0-Ака"-Авр'-А1а-т11е3-Рне(рС1) -ТвВк -Авпо-Нак- (Се)
Тук (Ме) 10 де оруві?-уа173-трец. дра -б1п'Є- реп"! Бек? -А1аї
Агд?-рув'"!-рец'?-рец'-сіп"-Ввр'-т11е75-М1е27-0-Агу-Нахк?"?-МН» (пептид 3) | « (ГРВАСсо, р-Ага", Рпе(рсі)б, Наг!, Тук (Ме) М, Ари?, шей, т с р-дку"?, нак? |)вон-Вн(1-29) МН) . ни Синтез здійснюють постадійно, використовуючи устаткування для твердофазного пептидного синтезу з ручним керуванням. Коротше, смолу на основі МБГА (Васпет, Саїйогпіа) (100мг, 0,070ммоль) нейтралізують 595 ДІЕА в СНоСІі» і промивають відповідно до протоколу, описаним у таблиці 1. Розчин Вос-На(МО»)-ОН (8Змг, (2) 0,25ммоль) у ДМФА-СН»СІ» (1:1) струшують із нейтралізованою смолою і ДІКД (44мкл, О0,275ммоль) в апараті з о ручним керуванням для твердофазного пептидного 31 синтезу протягом 1 години. Після завершення реакції зв'язування, що підтверджується негативним нінгідриновим тестом, зняття захисту за допомогою 50956 ТФК у - СНоСІ» і нейтралізації за допомогою 5956 ДІЕА в СНоСі» пептидний ланцюг будують постадійно шляхом о 50 зв'язування на смолі таких захищених амінокислот у зазначеному порядку для одержання бажаної пептидної послідовності: Вос-О-Аго(То5)-ОН, Вос-Міе-ОН, Вос-Пе-ОН, Вос-Азр(ОсНхХ)ОН, Вос-СіІп-ОН, Вос-ІГеи-ОН, "м Вос-Гец-ОН, Вос-І ув(2СІ2)-ОН, Вос-Агоа(То8в)-ОН, Вос-Аіа-ОН, Вос-Зег((В2І)-ОН, Вос-ГешШ-ОН, Вос-с|Іп-ОН,
Вос-Ари-ОН, Вос-Іец-ОН, Вос-МаІ-ОН, Вос-І уг(2С12)-ОН, Вос-Ага(Тоз)-ОН, Вос-Ту(Ме)-ОН, Вос-На(мМо»)-ОН,
Вос-Азп-ОН, Вос-Тиг(В2І)-ОН, Вос-Рпе(рсіІ)-сн, Вос-ІПе-ОН, Вос-АІа-ОН, Вос-Азр(ОсНх)-ОН, Вос-О-Аго(Тов)-ОН, Вос-Ту(2Вг2)-ОН.
Ге! Ці захищені амінокислотні залишки (також звичайно що поставляються фірмою Васпет Со.) позначені вище відповідно до добре відомого правила. Підхожа захисна група для функціональної групи бічного ланцюга ко визначених амінокислот вказується в скобках. Гідроксильні групи в поданих вище формулах вказують, що карбоксильний кінець кожного залишку вільний. 60 Захищені амінокислоти (0,25ммоль кожній) зв'язують із ДІКД (44мкл, 0,275ммоль) за винятком Вос-Азп-ОН і
Вос-СІп-ОН, що зв'язуються з їх раніше утвореними складними ефірами з 1-гідроксибензотриазолом. Після видалення М2-Вос-захистної групи від Туг! пептид ацилюють за допомогою фенілоцтової кислоти (РНАс) (54мг,
О 4ммоль), застосовуючи ДІКД (7Омкл, О,44ммоль).
Для того, щоб відщепити пептид від смоли і зняти з нього захист, висушену смолу з пептидом (206бмг) бо перемішують із 0,5мл м-крезолу і Бмл фтористого водню (НЕ) при 0" протягом 1 години. Після розпарювання НЕ у вакуумі залишок промивають безводним діетиловим ефіром і етилацетатом. Відщиплений і позбавлений захисту пептид розчиняють у 5095 оцтовій кислоті і відокремлюють від смоли шляхом фільтрації. Після розведення водою і ліофілізації одержують 112мг неочищеного продукту.
Неочищений пептид досліджують за допомогою аналітичної ВЕЖХ, використовуючи рідинний хроматограф моделі НР-1090 фірми Немек-РаскКага із колонкою Мудас 218ТРБ2 із зверненою фазою (2 х 250мм, заповнена силікагелем С18, розмір пір ЗО0ОА, розмір часток Бмкм) (Те Зерагайоп Сгоцр Іпс., Незрегіа, СА) і лінійний градієнт елюції (наприклад, 40 - 7095 В) із системою розфакторів, що складається з (А) 0,190 водяної ТФК і (В) 0,196 ТФК у 7095 водяному МесСмМ. Розчиняють 8Омг неочищеного пептиду в АСОН/Н2ЬС, перемішують, фільтрують /о | завдають на колонку Мудас 218ТРБО10 (10 х 250мм), заповнену силікагелем С18. Колонку елююють системою розфакторів, описаною вище, із лінійним градієнтом (наприклад, 30 - 5595 В за 120хвил.); швидкість потоку 2мл/хв. Елюент контролюють при 220Онм і фракції досліджують за допомогою аналітичної ВЕЖХ. Фракції з чистотою вище 9595 об'єднують і ліофілізують, одержують 9,бмг чистого продукту. Аналітична ВЕЖХ наноситься на колонку Мудас С18 із зверненою фазою, описану вище, із застосуванням ізократної елюції системою 7/5 розфакторів, описаною вище, із швидкістю потоку 0,2мл/хв. Піки аналізуються при 220 і 2860нм. Судячи з даних аналітичної ВЕЖХ, продукт у значній мірі є чистим (» 95965). Молекулярну масу визначають за допомогою мас-спектрометрії з електродиспергуванням, і очікуваний амінокислотний склад підтверджують амінокислотним аналізом.
Пептид 2 і пептиди від 4 до 30 синтезують таким же чином, як пептид 1 і пептид З, за винятком того, що ці 2о пептиди також містять інші заміщення, одержуючи:
Плд4Ас?, О-Агд?, Рпе(рСі?, Аго?, дви, Ме", О-Аго?", Наг|пен-АНИ. 29)мн, пептид 2
ІРпАсе, О-Аго?, РпесрСі!?, Наг, Або, Ме"", О-Аго??, Нагдпсн-ВН. 29)МН, пептид 4 се 15 27 28 29 мас», О-Агд?, Рне(рСІ?, Ага", Ави", Ме", О-Агд??,. Наг)пСН-ВНИ- Ге) 291МН, пептид 5
ІРпАсо, О-Аго?, Рпе(рСІЙ, Аго?, тупі Ме)?, Аби", Ме?", 0-го", Наго Зп Н-
ВН1-29)Мн, пептид 6 м. 30. ІРНАсС", Нів", О-Аго", Рне(рСіЇ?, Аго?, Ав!» Ме??, О-Ата??, Мага нВН(1- о 29ИМН, пептид 7
Мас", Ніз', О-Аго?, РпегрСІІЄ, Агд", Ари!?, Ме??, О-Аго??, Нагдпсн-ВНИ- в 29)Мн, пептид 8 (ге) т. 2 б З 18 пов. 29 й й
ІРпАс", О-Агда", РіегрСІЇ, Аго", Аби", Ме? 0-Ага? ве н-ВНІ1-29)МН, Ге пептид 9
ІРвАЄ О.Аго", РнерСІй, Ави, Ага, Ме? О-дго?|нОн-ВН(1- 29|Мн, пептид 10 «
ІРпде", О-Аго", РпегрСі)?, АБи"?, Ме", О-Аго?, Наг?|пен-ВН(1-281МН, З пептид 11 с ІРпАс?, О-Агд", Рпе(рСі)й, Ме, Ави!», Ме?" О-Ага?|1нан-ВН(1-29)МН, . :з» пептид 12
ІРпАс", О-Аго", Рпе(рсій, Ме", Ме", дви? Ме?", О-Аго?1рСн-ВНИ. (о) (ее) щ» («в) що іме) 60 б5
29)МН. пептид 13 (Рпдс», О-Агд?, РпеірСт)?, Ме", Ме", О-Атд?)пен-ВН(1-29)МИ, пептид 14 9 ІРпАс", О-Аго?, Рне(рсі, Аби, Мів'ї, Ме?!", О-Агой по НАВАН -29)МН, пептид 15
ІРпАс", О-Аго?, РпефрСі?, ТупМеум?, Ари, Міе??, О-Аго"|пСсН-АНИ. 29)МН, пептид 16 й
ІРВАс?, О-Аго?, РнеїрСТЄ, ДЬц, ТуйМе с, Аби?, Мі?" О-Аго" па Н-ЯН(1- 29)МН, пептид 17
ІРвАС", О-Аго?, Рпе(рсі", О-Або?, Туп Ме", Ари?, Мвт", р-Агоа?)пСН-
АНі1-29)МН. пептид 18 І
ІРпАс", О-Аго?, Рпе(рСІ)й, Тупме)", Ави"?, О-Аго?", Аго??, О-Агу" пен. т АНІ1-29)МН, пептид 19
ІРпАС?, О-Аго?, РавірСі)Є, ТугіМе)», Аби", О-Аго??, Агд??, Д-Аго?)пОН-
ВНІ1-29)МнН, пептид 20
ТРАС", О-Аго?, РнвгрСІі, Ави"?, Д-Агд?", Аго??, 0-Агд?")нСН-ВН(1-29)МН, пептид 21
ІРНАс?, 0-Аго?, РпегрСІ), Аби", ТупгіМе)?, АБи?, р-Аго", Агд"е, р-
Ага?|вОн.АН(т.29)МН;. пептид 22 с (РпАс", О-Агод?, Рне(рсі)", О-АБий, ТупгіМе!", Ари?, О-Аго?", Ага?", р. Го)
Ага?" |пСн-АН(І-291МН, пептид 23
ІРпАс", О-Аго?, РпефрСІР, ув", Аби, Ме"", О-Аго?е, Нас? )ДранвНИ» 29)МН, пептид 24 . че
ІРпАє", О-Ага?, Рвефрсіє, Огп?, Або", Міе??, О-Аго?е, Наг пс н-ВН1- о 291МН. пептид 25
ІРнАс", реАго?, РпегрСіє, О-Аго?, Аби", Ме??, Д.-Аго??, Наг?|вОН-ВН1. З 291МН, пептид 26 (ее)
ЛРпде", О-Агд", РнегрСіі?, О-Наг, Ави", Ме?!, О-Аго??, Наб"|нСнН-ВН- со 281МН, пептид 27
ІВпАсе, р-Аго?, Рперсі)б, 0-Куз?, Аби", Ме??, Д-Агоге, Наг? по Н-ВН(1- 29)Ммн, Рерпде 28 І « |внАсг, О-Аго?, РпвірСІ, 0-Огй, Ари"?, Міе?", Р-Агд?", Наг'упен-янИ. ш-в с 29УМН, Рерііде 29 ;» |Рпдс?, О-Аго", Рнегрсі", Сб, Аби'?, Мів?, О-Агд?, Нагвен-АНІ. 29)МН., Рерпде 30
Приклад ЇЇ (о) Біологічна активність бо Пептиди за даним винаходом досліджувалися в іп мійго і іп мімо тестах на спроможність інгібіювати індуковане НЗН-КН(1-29)МН» звільнення ОН.
Її Суперзлита гіпофізарна система пацюка. о 50 Аналоги досліджувалися іп мйго у тесті, описаному раніше |5. Мідп апа А. М. ЗегіаПйу, Реріідев 5: 241-347, 1984) із модифікацією (7. Кеказвзі апа А. М. ЗспапПу, Р. М. А. 5. 90:2146-2149, 1993). що Коротше, клітини попередньо інкубують із пептидами протягом 9 хвилин (Змл) при різноманітних концентраціях. Відразу після інкубування вводять НМ ПОН-КН(1-29)МН »5 протягом З хвилин (мл) Івідповідна реакція О хвилині. Для перевірки тривалості антагоністичного ефекту аналога застосовують їн НН-КН(1-29УМН»
Через 30, 60, 90 ії 120 хвилин протягом З хвилин |відповідні реакції ЗО, 60, 90, 120 хвил.). Оцінюються результуючі сумарні значення відповідей ЗН. Відповіді ЗН дорівнюються і виражаються як відсоток від о початкової відповіді СН, викликаного ТЯМ ОН-КН(1-29)МНь. Ефект нових антагоністів порівнюють із ефектом де від дії (Ас-Туг!, О-Аго2| ПОН-ВН(1-29)МН», "стандартного антагоніста".
Радіоіїмунний аналіз гормону росту. 60 Рівні СН пацюка в аліквотних пробах нерозведених і розведених суперзлитих зразків вимірювали за допомогою радіоїмунного аналізу з подвійним антитілом, використовуючи матеріали, надані Національною
Програмою по гормонах і гіпофізу (Майопа! Ногтопе апа Рішйагу Ргодгат), Вайтоге, Магуїапа. Результати радіоїмунного аналізу аналізували за допомогою комп'ютерної програми, розробленої в інституті, де працюють автори М. Свегпив апа А. М. ЗспаїІуУ, іп Меигоепаосгіпе Кезеагспї Меїйодз, Наглмосод Асадетіс ОСгеепвіевїп, В. 0. 65 ей., Гопдоп, рр. 71-109, 1991), включеної сюди у вигляді посилання. Розкид між аналізами був менше 15595 і розкид усередині серії аналізів був менше 10905.
Аналіз зв'язування СН-КН. Для визначення характеристик зв'язування антагоністів ЗН-КН був проведений аналіз зв'язування чутливого радіорецептора |б. НаІтовз, А. М. Зспайу еї. аіІ., Кесеріог З, 87-97, 1993), на що тут є посилання. Аналіз грунтується на зв'язуванні міченого (Ніз 7, Мег"пОнН-ВН(1-32)МН» із гомогенатами мембран передньої частки гіпофіза пацюка. Йодовані похідні (Нізі, МегЛиеНн-ВН(1-32)МН» одержують за методом з хлораміном Т ІБ. С ОСгеепжоса еї аї., Віоспетівігу 89: 114-123, 1963), на що тут посилаються.
Гіпофізи самців пацюків лінії Зргадое-Оаулеу (250-300г) використовуються для готування неочищених мембран.
Для аналізів насиченості зв'язування гомогенати мембран інкубують із, як мінімум, б концентраціями
ІНів!, 1251-Тув"9, Ме27) пОН-ВЕН (1-32)МН.о у діапазоні від 0,005 до 0,35нМ в присутності або відсутності 70 надлишку неміченого пептиду (1мМкМ).
Радіоактивність осадка підраховують у лічильнику гамма-квантів. Спорідненість пептидів антагоніста, досліджуване стосовно рецепторів ЗН-КН гіпофіза пацюка, визначають в експериментах по конкурентному зв'язуванню. Кінцеву спорідненість до зв'язування оцінюють за допомогою К ; (константа дисоціації комплексу інгібітор-рецептор) і визначають за допомогою комп'ютерних програм Гідапа РС і МеРНегзгоп, розроблених 79 Мипвоп і Кодбьага (|Р. У. Мипзоп апа 0. Кодрбага, Апаї. Віоспет. 107, 220-239, 1980). Відносна спорідненість у порівнянні з (Ас-Туг", О-Ага"| пОнН-ВН(1-29)МН», стандартним антагоністом, розраховують як відношення К ; досліджуваного антагоніста ЗН-КН до К; стандартного антагоніста.
Тести іп мімо.
Антагоністичний ефект аналогів у відношенні ЗН-КН досліджували на молодих самцях пацюків лінії
Зргадие-Оаміеу (200-250г). У кожному експерименті використовували 5 груп, із 7 тварин кожна. Сполуки (8Омкг, ку) Її ЄН-КН(1-29УМН» (Змкг, кг) розчиняли в 5,595 маниті і уводили внутрішньовенно в шийну вену пацюків при анестезії нембуталом. Час, що протікає між введеннями антагоніста і ЗН-КН, варіювалося між групами у відповідності з таким графіком. Перша група тварин одержувала ін'єкцію ЗН-КН через 5 хвилин після введення антагоніста; для другий, третьої і четвертої груп тварин тимчасові інтервали між ін'єкцією антагоніста й с ін'єкцією ЗН-КН складали 15, 30 і 60 хвилин, відповідно. Контрольна група була спочатку ін'єкована тільки (У розфактором замість антагоніста, після чого через 5 хвилин робили ін'єкцію «зЗН-КН.
Зразки крові в О04мл відбирали для радіоїмунного аналізу СН перед введенням антагоніста ("кров 0") |і через 5 хвилин після ін'єкції ЗН-КН ("кров 1"). Відповідь СН у кожній групі розраховували як гН-(СН кров 1/9Н кров о), середнє значення їх стандартна помилка виміру індивідуальних різниць. Відносне інгібування відповіді зн - (в) у кожній групі, що піддавалась опрацювання розраховували як 100 х (геН опрацьована 1)/КПР контрольна 1). ав!
Результати досліджень іп міго.
Результати антагоністичної активності іп мійго, досліджуваної в суперзлитій гіпофізарній системі пацюка, М і аналіз зв'язування підсумовані в таблиці І і таблиці І, відповідно. Як можна бачити з цих даних, с заміщення, що мають місце в молекулах, викликають величезне збільшення зв'язування рецептора, а також
Зо інгібування звільнення СН іп міїго у порівнянні зі стандартним антагоністом. Найбільше сильний антагоніст іп. о міо, пептид 1, викликав повне інгібування викликаного ЗН-КН звільнення СН за 90 хвилин у стандартних. умовах аналізу. Перша ознака відновлення реактивності ЗН-КН визначали через 120 хвилин після впливу даного аналога. « то З с нн г нн дАнтатнст Доза(му 0 нпбування вивільзеня СНО що
Ф Стандартний анттонет 100 62 25091 со т. Петядз 10000300 85 зв 90920 в - ж Петядя 00000300 ввво 0908 4
Петяде 11100300 98| 53 | 97095050
Петядя 11100030 100) лоб зв 97050 їй о Петядю 11113006 69 4605022 юю Пеплидії 71130196 ве во Бо
Петяді? 00003000 т50лв 05202 во нн бо Значення К,;, і відносна спорідненість антагоністів ПН-КН
ПП о,
Результати дослідження іп мімо.
В таблиці ІМ представлені реакції у відповідь сироваточного СН і їх відносну інгібування у пацюків, заздалегідь оброблених антагоністами ЗН-КН. Всі з аналогів (пептид 1, пептид 2, пептид 3, пептид 4, пептид 8, пептид 9, пептид 11 і пептид 16), що досліджуються викликають сильне і тривале інгібування вивільнення СН, стимульованого ПОН-КН(1-29)МН». Пептид 1 і пептид 2 є найбільш сильнодіючими протягом короткого часу, інгібуючи відповіді СН на 9595 і 91905, коли їх вводять за 5 хвил. до НЗН-КН(1-29)МН 5. Дія цих двох пептидів триває, як мінімум, ЗО хвилин. З іншого боку, пептид 11 і пептид 3, які трохи менш активні протягом короткого часу, є надзвичайно тривало діючими: їх дія триває, як мінімум, 60 хвилин.
Таб ІМ с
ПОП о
СН-КН в різні проміжки часу до введення ПОН-КН(1-299МН2
ПОП ї-
Антагоніст Проміжок часу (хвил.) Відповідь СН середнє значення ж стандартна Відносне інгібування (95)
ОТ вд Мо «
Пептид " в ятквмав со
Те) пи т У ОХ ПО юю 00011100 ч и но с 11101100 вянаю001010101100112 . окенроль 11 ваткоя 10 4
Ф вав 11 со окенроль 11 левков 1 з о 000010 00010101010101011111118 в юю 00010000 яння 000000 зв юної
Ф) вв ю ни чи нн тт пн По во во 7,32 ж 1,16 10 б5 нини сет: ння ПО оо юю 00010000 витазяа 00000000 о 11111101 конроль 11 визкя1о
Приклад ЇМ
Онкологічні дослідження.
Протипухлинну активність пептидів за даним винаходом досліджували на різних моделях рака.
Протипухлинні ефекти цих нових пептидів порівнювали з такими для ранніх аналогів (М2-4-71 і М2-5-156, об'єкт патенту США Мо5550212 і заявки на патент США Мо08/642472).
Дія антагоністів ЗН-КН на мишачі пухлини, що відносяться до молочної залози МХТ.
Естроген-незалежні пухлини МХТ трансплантували підшкірно самицям мишей ВО. Через день після трансплантації мишей ділили на групи, з 10 тварин кожна, і починали обробку. Мишам в групах 1,2, З і 4 робили щодня одноразові ін'єкції різних антагоністів ЗН-КН підшкірно в дозі 20мкг на день протягом 18 днів. У групах 5 і 6 пептиди вводили за допомогою осмотичних насосів АІгеї, тих, що вивільняють щоденну кількість пептиду в 20мкг. Пухлини регулярно вимірювали і розраховували об'єм пухлини. Мишей умертвлювали на 18 день і вимірювали масу пухлин. с
Результати
Пептиди, пептид 1 і пептид 3, надавали схожий сильний інгібуючий ефект на мишачі, пухлини, що відносяться і) до молочної залози МХТ. Обробка з допомогою М2-5-156 також приводила до значного інгібування зростання пухлини, але в цьому випадку ефект був слабшим, ніж ефект пептиду 1 або пептиду З (див. таблицю М і фіг.1). т " ИМЖШВ8ЬЩ6662 2 «Ц Й.А.--6 2 - 7-7-7є.- о ч нини
Група | Об'єм пухлини (мм?) |Маси пухлини (мг)|Число мишей, що вижили со зв Ф
З Пелтид' щоденна інет ор кввя ази вевітвв 00000006 « 4 Пептидз щоденна некця ооо змо зав сот Без 008 и но с (б.Пептидзнасос 0 пбвв оо ото ков везе жава | 8 . «» хро «0,05, "р « 0,01
Вплив антагоністів ОН-КН на ксенотрансплантати людського рака молочної залози МОА-МВ-468 у бестимусних мишей.
Ге»! Бестимусних мишей з ксенотрансплантатами гормононезалежного рака молочної залози людини
МОА-МВ-468 ділили на групи, з 10 тварин кожна. Групам, що піддавалися обробці робили щодня підшкірні ін'єкції бо з 20мкг антагоністів ЗН-КН. Одну групу обробляли пептидом 1, другу групу обробляли М2-5-156 для порівняння. ї» Контрольну групу ін'єкували носієм у вигляді розфактора. Обробку продовжували 5 тижнів. Пухлини вимірювали 5ор раз на тиждень і розраховували об'єм пухлини. У кінці експерименту мишей умертвляли і вимірювали масу о пухлин. "І Результати
Обидва пептиди мали значну інгібуючими пухлини ефектами на ксенотрансплантати МОА-МВ-468. У групі, ін'єкованій пептидом 1, 4 пухлини виявляли постійну регресію під час експерименту. Подібним же чином
М2-5-156 викликав регресію З пухлин. Через 5 тижнів обробки у цих злоякісних пухлин відзначали регресію до невеликих, залишків тканини, нагадуючих шрам. Гістологічне дослідження цих тканин виявило іФ) недиференційовані епітеліальні пухлини з великим некрозом і тільки вузьку крайову лінію живої пухлинної ко тканини. По контрасту, всі пухлини у контрольних тварин стабільно прогресували. Кінцеві об'єми пухлин і маси в групах, що зазнали обробки, істотно меншали (див. таблицю МІ і фіг.2), пептид 1 виявляв більш сильний ефект. 60 нини о вв
Контроль 477.5 41.2 440.7 37.7 0)
"р 0,05, "ра 0,01
Дія антагоністів ЗН-КН на ксенотрансплантаті людського рака ободкової кишки НТ-29 у бестимусних мишей.
Людські злоякісні пухлини ободкової кишки НТ-29 трансплантували підшкірно самцям бестимусних мишей.
Через 19 днів після трансплантації мишей ділили на групи, в кожній по 10 тваринах, і починали обробку. Мишам робили щодня одноразові ін'єкції різних антагоністів ЗН-КН підшкірно в дозі 20мкг в день протягом 6 тижнів. 70 Регулярно вимірювали пухлини і розраховували об'єм пухлини. В кінці експерименту мишей умертвляли і вимірювали масу пухлин.
Результати
Пептид 1 ії М2-5-156 надавали однаково сильний інгібуючий ефект на людські злоякісні пухлини ободкової кишки НТ-29. Обробка пептидом 9 приводила до меншого, але ще істотному інгібіюванню зростання пухлини.
Пептид 11 і М2-4-71 виявляли тільки малий незначний ефект. (Результати узагальнені в таблиці МІ! ії на фіг.3). нини 2 нний сч о тр « 0,05 -
Дія антагоніста ЗН-КН, пептиду 1, на ксенотрансплантати людської глобластоми 0О87МО у бестимусних мишей. | «в)
Мишам імплантували підшкірно глобластоми 087МО і, коли пухлини досягали об'єму приблизно 7Омм 7, «Е мишей шляхом випадкової вибірки ділили на 2 експериментальні групи. Одну групу обробляли пептидом 1 у вигляді одноразових щоденних підшкірних ін'єкцій в 20мкг протягом 28 днів, в той час, як інша група служила со зв Контролем. «со
Результати
Обробка пептидом 1 приводила до інгібування зростання пухлини на 7790 через чотири тижні обробки проти контрольної групи (див. таблицю МІ! і фіг.4). « й З
І» нини
Ф со тр 0,01 їз Дія антагоністів ЗН-КН на ксенотрансплантати людського рака передміхурової залози РО-3 у бестимусних мишей. («в) 50 с У : : З амцям бестимусних мишей імплантували підшкірно в обидва боки фрагменти тканини в З мм" людських "І гормононезалежного раку передміхурової залози РО-3. Коли пухлини досягали об'єму приблизно в 40 - 50мм, мишей ділили на З експериментальні групи. Першу і другу групи обробляли пептидами, пептидом З і М2-5-156 відповідно, щодня шляхом одноразових підшкірних ін'єкцій в 20мкг протягом 21 діб, в той час, як третя група служила контролем. Об'єми пухлин вимірювали з інтервалами в тиждень, маса пухлин вимірювала в кінці експерименту. о Результати ко Обидва антагоністи СН КН інгібували зростання пухлий РО-3 (див. таблицю ІХ і фіг.5). Пептид З викликав більш сильне інгібування зростання (65905 інгібування в об'ємі пухлини і 6295 в масі пухлини), ніж М2-5-156 (5296 6о і 46906, відповідно). нний 5 нн
Група Кінцевий об'єм пухлини (мм) Маса пухлини (мг)
"р « 0,05 ---- Контроль 700 -ї- М2-5-156 (щоденні ін'єкції) . Й 70 000 -йкк-. Пептид 1 (щоденні ін'єкції) -Щ-: Пептид З (щоденні ін'єкції) "8000 фу Пептид 1 (осмотичний насос) . -6 Пептид З (осмотичний насос)
Я во - 50
В / т В / А: як 24000 Іл 5 | гі 8 ж 3000 і М. /ї й //7 /: р 2000 / 14 7 ле ук 1000 , і ба ДИ сч ! сс динь й оф "ре005 «ер о в) 2 4 6 8 10 12 14 16 18
Дні після трансплантації м зо Фіг. 1 «в) 500 -4Ф. Контроль « 450 -)-- Мививв ' со -йк-: Пептид 1 й "400 |се) ре 350 « Ес «
Е - 300
ЕІ
- 0 Козво с З :
З 200 з 150 як жи
Ге») 100 й ч-к р шен
Жодоар а ані, «Я бо 50 Р як я іі чий жк с» о «ереб.01 о 05 10 15 2025 30 35 40 "і Дні
Фіг. 2
Ф) іме) бо б5
--- Контроль й 2000 -- М7-4-71 ! -к- М2-5-156 й 1800 хр: Пептид 11 | и 1600 -4у-: Пептид 9 /х щ --. Пептид 1 // 8 1400 и
В Я, 1200 Ір
Е й шк
З 1000 й й й о я й 800 й | я у де ра вою я УМ
А
400 ож ий 200 дн жі ВИ «ре0.05 в ла 5 20 25 30 35 40 45
Дні обробки
Фіг. 3 см 1 о 4000 -4-- Контроль 3500 -кк- Пептид 1 - | о 3000 «І
А (се) 5 2500 во Ге) ! 2000 : .
З 1500 « то 1000 З с г і ра ни БОЮ -й 0 шт «ер«0.0ї
Ге) 5 10 15 20 25 30 (о) їх Час (дні)
Фіг. 4 о "і (Ф. ко 60 65
400 -0- Контроль --й- Пептид З с -- М2-65-156 300 І ю 200 ї ж 100 "1 ето 8 о 0 8. 15 22
Дні обробки 720 Фіг. 5
Claims (11)
1. Пептид, що є антагонісличним аналогом рилізинг-ормону гормону росту (ЗН-КН), що інгібує інсуліноподібні фактори росту (ІСЕ-1 і -ІЇ), вибраний з групи, що має формулу: Х-В!-в2-Авр-Аіа-К2-В9-Тнг-8-в9-в19-Аго-в 2-8 13-14 15-15 ец-в 18-в19-Агд-В21-822-| ец-(Іп-Авр-Пе-В27 -28-29-МН», у де Х означає РІАс, Іпадс або Мас, о В! означає Туг або Н ів, В2 означає О-Аго, З В? означає Іе або Маї, с 25 означає Ріє або Рпе(СІ) со 28 означає Авгп, СіІп, АІа або Ю-Авп, ВЕ? означає Ага, Наг, Гуз, От, О-Аго, О-Наг, О-ІГ уз, О-От, СІіЇ, Міе, Туг(Ме), 5ег, Аа або АЇБ, ВЗ означає Туг або Туг(Ме), « В: означає І уз, ВЗ означає Ма! або Міеє, в) с В" означає І еи або Міє, Із» ВЗ означає СУ, Аа, Аби, Міеє або СіІп, 25 означає Сіп або Ага, ВВ означає Зег або Міє, Ге» ВЗ означає Аа, В2! означає І уз, со ! 222 означає І ем, Аа або діб, ве 827 означає Меї, ГГ ем, Міє, Аби або О-Аго, с ШІ 228 означає Аго, О-Аго або Зег, -ч 229 означає Ага, О-Аго, Наг або О-Накг, за умови, що коли 2 і В28 означають Зег, 29 не є Агу або Наг, і його фармацевтично прийнятні солі.
2. Сполука за п. 1, яка відрізняється тим, що вибрана з групи, що складається з ІРпАсо, О-Аго2, Рпе(рСІ)Є, Агу?, Аби», Міе27, О-Агд28, НагУ|пОн-ВНІІ-29)МН » пептид 1, (падсо, О-Аго2, Рпе(рСІ)Є, Агд?, Аби», Міе27, О-Агд28, НагУ|пОн-ВНІІ-29)МН » пептид 2, о ІРпАсо, О-Агог, Рпе(рСІЄ, Наг?, Туг (Ме) 19, Ари"», Ме?27, О-Ага?28, Наг2пОн-ВН(1-29)МН » пептид 3, ю ІРпАсУ, О-Аго?, Рпе(рСІ)Є, Аго?, Туг(Ме) 19, Ари!"», Ме?27, О-Ага?8, НаггпОн-ВН(1-29)МН о пептид 6, ІРпАсеУ, Нів!", О-Аго?, Рпе(рСІ)Є, Агу?, Ари"», Міе27, О-Аго?28, НагУ|пОн-ВН(1-29)МН » пептид 7, 60 масо, Нів!, О-Агд2, Рпе (рСІ)Є, Агу?, Аби», Міе27, О-Аго28, Наг|нОн-ВН(1-29)МН » пептид 8.
3. Сполука за п. 1, яка відрізняється тим, що має формулу ІРпАс 9, 0-Агоа?, Ріе(рСІ)?, Аго?, Аби!», Ме?", О-Аго28, наг?"|1пОН-ВН(1-29)МН » пептид 1.
4. Сполука за п. 1, яка відрізняється тим, що має формулу (ІпаАсо, О-Аго?, Рпе(рсі)Є, Аго?, АБи?, Ме?2", О-Агу 65 28, Наг?9|пОН-ВН(1-29)МН » пептид 2.
5. Сполука за п. 1, яка відрізняється тим, що має формулу (РпАс?, О-Аго?, Рне(рСІ)У, Наг?, Туг (Ме) 9, Ари 5,
Міе27, О-Аго?28, НагУ|пОнН-ВНІ(1-29)МН » пептид 3.
6. Сполука за п. 1, яка відрізняється тим, що має формулу І(РпАсО, О-Аго?2, Рпе(рСІ)Є, Аго?, Туг (Ме) 9, Ави У, Міе27, О-Ага28, НаггпОн-ВНІІ-29)МН » пептид 6.
7. Сполука за п. 1, яка відрізняється тим, що має формулу |РНАс 2, Нів", О-Аго?, Рне(рСІ)б, Аго?, Ави 5, Міе27, О-Агр28, НагеЯНпОн-ВН(1-29)МН » пептид 7.
8. Сполука за п. 1, яка відрізняється тим, що має формулу (Мас, Нів", О-Ага?, Рне(рСІ)Є, Агд?, Аби», Міе?", р-Агоа28, Наг2У|пОн-ВН(1-29)МН » пептид 8. 70
9. Спосіб приглушення надмірних рівнів СН у хворого, потребуючого цього, який полягає у введенні вказаному хворому ефективної кількості сполуки за п. 1.
10. Спосіб лікування хворого, що має злоякісну пухлину, що несе рецептори ІСБ-ІЇ або -ІЇ, який полягає у введенні вказаному хворому ефективної кількості сполуки за п. 1.
11. Спосіб інгібування рівнів ІСЕ-ІЇ в пухлинах (злоякісних пухлинах) і експресії МРНК для ІСБ-ІЇ в тих /5 Же пухлинах, який передбачає введення згаданому хворому ефективної кількості сполуки за п. 1. Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних мікросхем", 2004, М 8, 15.08.2004. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і науки України. с (8) ча о « с (Се) ші с ;» (22) (ее) щ» о 50 що Ф) іме) 60 б5
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US09/199,381 US6057422A (en) | 1998-11-25 | 1998-11-25 | Antagonistic analogs of GH-RH inhibiting IGF-I and -II |
| PCT/US1999/027822 WO2000031136A1 (en) | 1998-11-25 | 1999-11-23 | Antagonistic analogs of gh-rh inhibiting igf-i and -ii |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA68407C2 true UA68407C2 (en) | 2004-08-16 |
Family
ID=22737273
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA2001064393A UA68407C2 (en) | 1998-11-25 | 1999-11-23 | Antagonistic analogues of growth hormone releasing hormone (gh-rh) inhibiting activity of endogenous insulin-like growth factors |
Country Status (29)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6057422A (uk) |
| EP (1) | EP1133522B1 (uk) |
| JP (1) | JP2002530432A (uk) |
| KR (1) | KR100629013B1 (uk) |
| CN (1) | CN100422211C (uk) |
| AR (1) | AR022392A1 (uk) |
| AT (1) | ATE332310T1 (uk) |
| AU (1) | AU757222B2 (uk) |
| BG (1) | BG65137B1 (uk) |
| BR (1) | BR9915512A (uk) |
| CA (1) | CA2351665C (uk) |
| CO (1) | CO5180565A1 (uk) |
| CZ (1) | CZ20011794A3 (uk) |
| DE (1) | DE69932255T2 (uk) |
| DK (1) | DK1133522T3 (uk) |
| ES (1) | ES2264279T3 (uk) |
| HK (1) | HK1036461A1 (uk) |
| HU (1) | HUP0105094A3 (uk) |
| IL (1) | IL142899A0 (uk) |
| NO (1) | NO20012489L (uk) |
| NZ (1) | NZ511307A (uk) |
| PL (1) | PL197471B1 (uk) |
| PT (1) | PT1133522E (uk) |
| RU (1) | RU2235099C2 (uk) |
| SK (1) | SK7252001A3 (uk) |
| TR (1) | TR200101492T2 (uk) |
| TW (1) | TW585873B (uk) |
| UA (1) | UA68407C2 (uk) |
| WO (1) | WO2000031136A1 (uk) |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20060121041A1 (en) * | 2001-07-12 | 2006-06-08 | Lori Friedman | Gpcs as modifiers of the irrtk p21 pathways and methods of use |
| US20040121407A1 (en) * | 2002-09-06 | 2004-06-24 | Elixir Pharmaceuticals, Inc. | Regulation of the growth hormone/IGF-1 axis |
| KR20050071498A (ko) * | 2002-09-18 | 2005-07-07 | 상트르 오스피딸리에 드 루니버시떼 드 몬트리알 | 성장 호르몬 방출 호르몬 유사체 |
| TW200517400A (en) * | 2003-08-05 | 2005-06-01 | Univ Tulane | Antagonistic analogs of GH-RH (2003) |
| CN101983068B (zh) * | 2008-03-28 | 2014-12-24 | 迈阿密大学 | N末端和c末端取代的人gh-rh拮抗类似物 |
| US8691942B2 (en) | 2008-03-28 | 2014-04-08 | University Of Miami | N- and C- terminal substituted antagonistic analogs of GH-RH |
| EP2719392B1 (en) | 2008-06-12 | 2019-07-24 | Ipsen Bioinnovation Limited | Fusion proteins for use in the treatment of acromegaly |
| JP5799397B2 (ja) | 2008-06-12 | 2015-10-28 | イプセン・バイオイノベーション・リミテッドＩｐｓｅｎ Ｂｉｏｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｌｉｍｉｔｅｄ | 癌の抑制 |
| GB0820970D0 (en) | 2008-11-17 | 2008-12-24 | Syntaxin Ltd | Suppression of cancer |
| US8227421B2 (en) * | 2009-09-17 | 2012-07-24 | University Of Miami | Fluorinated GHRH antagonists |
| KR20140027284A (ko) | 2011-04-21 | 2014-03-06 | 쎄러테크놀로지스 인코포레이티드 | 성장 호르몬 방출 인자(grf) 유사체 및 이의 용도 |
| US9079974B2 (en) * | 2011-12-21 | 2015-07-14 | The University Of Miami | GH-RH analogs with potent agonistic effects |
| EP2934565B1 (en) | 2012-12-21 | 2019-03-13 | University of Miami | Ghrh agonists for the treatment of ischemic disorders |
| WO2014100816A2 (en) | 2012-12-21 | 2014-06-26 | University Of Miami | Ghrh agonists for islet cell transplantation and function and the treatment of diabetes |
| AU2015346277B2 (en) | 2014-11-12 | 2020-03-26 | Centre Hospitalier Universitaire De Liège | Treatment of hormonal disorders of growth |
| WO2020163833A2 (en) | 2019-02-08 | 2020-08-13 | United States Government As Represented By The Department Of Veterans Affairs | Growth hormone-releasing hormone antagonists and uses thereof |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4659693A (en) * | 1984-04-30 | 1987-04-21 | Syntex (U.S.A.) Inc. | N,N'-dialkyl substituted guanidino amino acyl residue substituted GRF-analog peptides |
| EP0527914A4 (en) * | 1990-05-04 | 1993-08-11 | The Administrators Of The Tulane University Educational Fund | Novel synthetic grf analogs |
| US5550212A (en) * | 1993-12-17 | 1996-08-27 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Analogues of hGH-RH(1-29)NH2 having antagonistic activity |
| US5942489A (en) * | 1996-05-03 | 1999-08-24 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | HGH-RH(1-29)NH2 analogues having antagonistic activity |
-
1998
- 1998-11-25 US US09/199,381 patent/US6057422A/en not_active Expired - Fee Related
-
1999
- 1999-11-16 CO CO99072002A patent/CO5180565A1/es not_active Application Discontinuation
- 1999-11-23 DK DK99963962T patent/DK1133522T3/da active
- 1999-11-23 CA CA002351665A patent/CA2351665C/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-11-23 DE DE69932255T patent/DE69932255T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1999-11-23 UA UA2001064393A patent/UA68407C2/uk unknown
- 1999-11-23 BR BR9915512-5A patent/BR9915512A/pt not_active Application Discontinuation
- 1999-11-23 AU AU20291/00A patent/AU757222B2/en not_active Ceased
- 1999-11-23 TR TR2001/01492T patent/TR200101492T2/xx unknown
- 1999-11-23 CN CNB998137359A patent/CN100422211C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-11-23 PT PT99963962T patent/PT1133522E/pt unknown
- 1999-11-23 AT AT99963962T patent/ATE332310T1/de not_active IP Right Cessation
- 1999-11-23 SK SK725-2001A patent/SK7252001A3/sk unknown
- 1999-11-23 JP JP2000583962A patent/JP2002530432A/ja not_active Ceased
- 1999-11-23 IL IL14289999A patent/IL142899A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1999-11-23 WO PCT/US1999/027822 patent/WO2000031136A1/en active IP Right Grant
- 1999-11-23 NZ NZ511307A patent/NZ511307A/en unknown
- 1999-11-23 RU RU2001117218/04A patent/RU2235099C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1999-11-23 HU HU0105094A patent/HUP0105094A3/hu unknown
- 1999-11-23 CZ CZ20011794A patent/CZ20011794A3/cs unknown
- 1999-11-23 ES ES99963962T patent/ES2264279T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-11-23 KR KR1020017006568A patent/KR100629013B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-11-23 PL PL349877A patent/PL197471B1/pl unknown
- 1999-11-23 EP EP99963962A patent/EP1133522B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-11-24 AR ARP990105977A patent/AR022392A1/es active IP Right Grant
- 1999-11-24 TW TW088120503A patent/TW585873B/zh not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-04-11 US US09/547,215 patent/US7026281B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2001
- 2001-05-21 NO NO20012489A patent/NO20012489L/no not_active Application Discontinuation
- 2001-06-22 BG BG105638A patent/BG65137B1/bg unknown
- 2001-10-29 HK HK01107515A patent/HK1036461A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2233170C2 (ru) | Композиция контролированного высвобождения, включающая gnrh-ii | |
| UA68407C2 (en) | Antagonistic analogues of growth hormone releasing hormone (gh-rh) inhibiting activity of endogenous insulin-like growth factors | |
| CN104395338B (zh) | 人胰岛淀粉样多肽类似物 | |
| EP0559756B1 (en) | Nonapeptide bombesin antagonists | |
| CN101983068B (zh) | N末端和c末端取代的人gh-rh拮抗类似物 | |
| US5942489A (en) | HGH-RH(1-29)NH2 analogues having antagonistic activity | |
| RU2335506C2 (ru) | Пептидные аналоги gh-rh с антагонистическим действием, способ снижения уровня gh, способ снижения уровня igf-i и igf-ii, применение для ингибирования роста раковых клеток, фармакологически приемлемая композиция (варианты) | |
| EP0734396B1 (en) | ANALOGUES OF hGH-RH (1-29)NH2 HAVING ANTAGONISTIC ACTIVITY | |
| DK171682B1 (da) | Væksthormon-frigørende peptid og pharmaceutisk acceptable salte deraf, sammensætning med indhold deraf samt fremgangsmåde til fremstilling af peptider | |
| US7189692B2 (en) | Synthetic peptides and pseudopeptides having osteogenic activity and pharmaceutical compositions containing the same | |
| EP0541654A1 (en) | Bombesin antagonists | |
| EP2198878A1 (en) | Polypeptide bombesin antagonists | |
| NZ226764A (en) | Peptides containing a succinimide residue and having hypoglycamic activity |