RU2235099C2 - Антагонистические аналоги рилизинг-гормона гормона роста (gh-rh), ингибирующие инсулиноподобные факторы роста (igf-i и-ii) - Google Patents
Антагонистические аналоги рилизинг-гормона гормона роста (gh-rh), ингибирующие инсулиноподобные факторы роста (igf-i и-ii) Download PDFInfo
- Publication number
- RU2235099C2 RU2235099C2 RU2001117218/04A RU2001117218A RU2235099C2 RU 2235099 C2 RU2235099 C2 RU 2235099C2 RU 2001117218/04 A RU2001117218/04 A RU 2001117218/04A RU 2001117218 A RU2001117218 A RU 2001117218A RU 2235099 C2 RU2235099 C2 RU 2235099C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- arg
- nle
- peptide
- har
- abu
- Prior art date
Links
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 title claims description 30
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title claims description 9
- 102000038461 Growth Hormone-Releasing Hormone Human genes 0.000 title abstract description 87
- 239000000095 Growth Hormone-Releasing Hormone Substances 0.000 title abstract description 87
- 101710142969 Somatoliberin Proteins 0.000 title abstract description 87
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 title description 16
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 title 1
- ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N D-arginine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N 0.000 claims abstract description 196
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 169
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 46
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 20
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 16
- 108090001117 Insulin-Like Growth Factor II Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 102000048143 Insulin-Like Growth Factor II Human genes 0.000 claims abstract description 11
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 11
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims abstract description 10
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine Chemical compound NCCCC[C@@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 8
- AHLPHDHHMVZTML-SCSAIBSYSA-N D-Ornithine Chemical compound NCCC[C@@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-SCSAIBSYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- DCXYFEDJOCDNAF-UWTATZPHSA-N D-Asparagine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UWTATZPHSA-N 0.000 claims abstract description 3
- CCUAQNUWXLYFRA-IMJSIDKUSA-N Ala-Asn Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC(N)=O CCUAQNUWXLYFRA-IMJSIDKUSA-N 0.000 claims abstract 2
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 claims description 29
- OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 Chemical compound C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N 0.000 claims description 19
- 101710176384 Peptide 1 Proteins 0.000 claims description 19
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 abstract description 67
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 abstract description 43
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 abstract description 43
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 abstract description 43
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 40
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 18
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 abstract description 17
- 230000001629 suppression Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 abstract 1
- WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N phenylacetic acid Chemical group OC(=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 144
- 101000825742 Homo sapiens Somatoliberin Proteins 0.000 description 101
- 102000045304 human GHRH Human genes 0.000 description 101
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 85
- QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N alpha-aminobutyric acid Chemical compound CCC(N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 78
- 229960003424 phenylacetic acid Drugs 0.000 description 72
- 239000003279 phenylacetic acid Substances 0.000 description 72
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 48
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 45
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 40
- -1 residues 1-29 Substances 0.000 description 31
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 28
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 26
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 26
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 26
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 24
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 22
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 21
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 16
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 16
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 15
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 13
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 11
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 10
- FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoisobutyric acid Chemical compound CC(C)(N)C(O)=O FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 230000004044 response Effects 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 8
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 8
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 8
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 8
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 7
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 7
- VVNYDCGZZSTUBC-LURJTMIESA-N (2s)-5-amino-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O VVNYDCGZZSTUBC-LURJTMIESA-N 0.000 description 6
- UHPQFNXOFFPHJW-UHFFFAOYSA-N (4-methylphenyl)-phenylmethanamine Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C(N)C1=CC=CC=C1 UHPQFNXOFFPHJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 6
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N (2s)-5-[amino-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]methylidene]azaniumyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoate Chemical compound CC1=CC=C(S(=O)(=O)NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C=C1 WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 5
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 5
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N acetic acid anhydride Natural products CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 description 5
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 5
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 5
- WBIIPXYJAMICNU-CQSZACIVSA-N (2r)-5-[amino-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]methylidene]azaniumyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoate Chemical compound CC1=CC=C(S(=O)(=O)NC(N)=NCCC[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C=C1 WBIIPXYJAMICNU-CQSZACIVSA-N 0.000 description 4
- QVHJQCGUWFKTSE-YFKPBYRVSA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)OC(C)(C)C QVHJQCGUWFKTSE-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- NLPQIWFEEKQBBN-NSHDSACASA-N (2s)-4-cyclohexyloxy-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(=O)OC1CCCCC1 NLPQIWFEEKQBBN-NSHDSACASA-N 0.000 description 4
- QJCNLJWUIOIMMF-YUMQZZPRSA-N (2s,3s)-3-methyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoic acid Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C QJCNLJWUIOIMMF-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- 206010000599 Acromegaly Diseases 0.000 description 4
- FYYSQDHBALBGHX-YFKPBYRVSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-asparagine Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O FYYSQDHBALBGHX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 4
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 4
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 4
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 4
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 4
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 4
- 229940075620 somatostatin analogue Drugs 0.000 description 4
- VZQHRKZCAZCACO-PYJNHQTQSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]propanoyl]amino]prop-2-enoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N VZQHRKZCAZCACO-PYJNHQTQSA-N 0.000 description 3
- UYWMYJQSTUVRHR-SFHVURJKSA-N (2s)-3-[4-[(2-bromophenyl)methoxycarbonyloxy]phenyl]-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound C1=CC(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)=CC=C1OC(=O)OCC1=CC=CC=C1Br UYWMYJQSTUVRHR-SFHVURJKSA-N 0.000 description 3
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 3
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 3
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000007342 Diabetic Nephropathies Diseases 0.000 description 3
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001622557 Hesperia Species 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 3
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 208000033679 diabetic kidney disease Diseases 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 3
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 3
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 3
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 3
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 3
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 3
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- DMBKPDOAQVGTST-LBPRGKRZSA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylmethoxypropanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)COCC1=CC=CC=C1 DMBKPDOAQVGTST-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- PNFVIPIQXAIUAY-LURJTMIESA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]butanoic acid Chemical compound CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C PNFVIPIQXAIUAY-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- ZIOCIQJXEKFHJO-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound CCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C ZIOCIQJXEKFHJO-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- SZXBQTSZISFIAO-ZETCQYMHSA-N (2s)-3-methyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]butanoic acid Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C SZXBQTSZISFIAO-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 2
- JPOKAKNGULMYHZ-UILVTTEASA-N (2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]hexanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-(4-hydroxyp Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N)C1=CC=C(O)C=C1 JPOKAKNGULMYHZ-UILVTTEASA-N 0.000 description 2
- CTXPLTPDOISPTE-YPMHNXCESA-N (2s,3r)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylmethoxybutanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)[C@@H](C)OCC1=CC=CC=C1 CTXPLTPDOISPTE-YPMHNXCESA-N 0.000 description 2
- MUSGYEMSJUFFHT-UWABRSFTSA-N 2-[(4R,7S,10S,13S,19S,22S,25S,28S,31S,34R)-34-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-4-[[(2S,3S)-1-amino-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]-methylcarbamoyl]-25-(3-amino-3-oxopropyl)-7-(3-carbamimidamidopropyl)-10-(1H-imidazol-5-ylmethyl)-19-(1H-indol-3-ylmethyl)-13,17-dimethyl-28-[(1-methylindol-3-yl)methyl]-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-decaoxo-31-propan-2-yl-1,2-dithia-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-decazacyclopentatriacont-22-yl]acetic acid Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@H](N)Cc1ccc(O)cc1)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](Cc2cnc[nH]2)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN(C)C(=O)[C@H](Cc2c[nH]c3ccccc23)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](Cc2cn(C)c3ccccc23)NC(=O)[C@@H](NC1=O)C(C)C)C(=O)N(C)[C@@H]([C@@H](C)CC)C(N)=O MUSGYEMSJUFFHT-UWABRSFTSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 2
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N D-Serine Chemical compound OC[C@@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 2
- 102000038455 IGF Type 1 Receptor Human genes 0.000 description 2
- 108010031794 IGF Type 1 Receptor Proteins 0.000 description 2
- QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N L-Homoarginine Natural products OC(=O)C(N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N L-homoarginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N Ndelta-carbamoyl-DL-ornithine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=O RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108050001286 Somatostatin Receptor Proteins 0.000 description 2
- 102000011096 Somatostatin receptor Human genes 0.000 description 2
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 2
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001270 agonistic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 2
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 2
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 2
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 2
- CSHFHJNMIMPJST-HOTGVXAUSA-N methyl (2s)-2-[[(2s)-2-[[2-[(2-aminoacetyl)amino]acetyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoate Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)OC)CC1=CC=CC=C1 CSHFHJNMIMPJST-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 101800002712 p27 Proteins 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013222 sprague-dawley male rat Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RWLSBXBFZHDHHX-VIFPVBQESA-N (2s)-2-(naphthalen-2-ylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=CC2=CC(N[C@@H](C)C(O)=O)=CC=C21 RWLSBXBFZHDHHX-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- SLWWWZWJISHVOU-LBPRGKRZSA-N (2s)-3-(4-methoxyphenyl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound COC1=CC=C(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C=C1 SLWWWZWJISHVOU-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DFPYXQYWILNVAU-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1.C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 DFPYXQYWILNVAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-GSVOUGTGSA-N D-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-STHAYSLISA-N D-threonine Chemical compound C[C@H](O)[C@@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-STHAYSLISA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N Dimethyl ether Chemical compound COC LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N Ethyl urethane Chemical compound CCOC(N)=O JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010031792 IGF Type 2 Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000038460 IGF Type 2 Receptor Human genes 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QWCKQJZIFLGMSD-VKHMYHEASA-N L-alpha-aminobutyric acid Chemical compound CC[C@H](N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N L-citrulline Chemical group NC(=O)NCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 206010064912 Malignant transformation Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- AWZVYNHQGTZJIH-UHFFFAOYSA-N N-Nitrosomethylvinylamine Chemical compound C=CN(C)N=O AWZVYNHQGTZJIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101001075370 Rattus norvegicus Gamma-glutamyl hydrolase Proteins 0.000 description 1
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002253 Tannate Polymers 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003875 Wang resin Substances 0.000 description 1
- NERFNHBZJXXFGY-UHFFFAOYSA-N [4-[(4-methylphenyl)methoxy]phenyl]methanol Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1COC1=CC=C(CO)C=C1 NERFNHBZJXXFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical group 0.000 description 1
- YBCVMFKXIKNREZ-UHFFFAOYSA-N acoh acetic acid Chemical compound CC(O)=O.CC(O)=O YBCVMFKXIKNREZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000030621 adenylate cyclase Human genes 0.000 description 1
- 108060000200 adenylate cyclase Proteins 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 125000000266 alpha-aminoacyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000003557 bones of lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N chloramine T Chemical compound [Na+].CC1=CC=C(S(=O)(=O)[N-]Cl)C=C1 VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 description 1
- 235000013477 citrulline Nutrition 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- DEZRYPDIMOWBDS-UHFFFAOYSA-N dcm dichloromethane Chemical compound ClCCl.ClCCl DEZRYPDIMOWBDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N dimethylformamide dmf Chemical compound CN(C)C=O.CN(C)C=O UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 210000003054 facial bone Anatomy 0.000 description 1
- 125000005519 fluorenylmethyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000005251 gamma ray Effects 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 239000003324 growth hormone secretagogue Substances 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000004731 jugular vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000004130 lipolysis Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036212 malign transformation Effects 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 208000029565 malignant colon neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- BCVXHSPFUWZLGQ-UHFFFAOYSA-N mecn acetonitrile Chemical compound CC#N.CC#N BCVXHSPFUWZLGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- COTNUBDHGSIOTA-UHFFFAOYSA-N meoh methanol Chemical compound OC.OC COTNUBDHGSIOTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 229940105631 nembutal Drugs 0.000 description 1
- 230000000955 neuroendocrine Effects 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000002952 polymeric resin Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 208000023958 prostate neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003488 releasing hormone Substances 0.000 description 1
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 210000002356 skeleton Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000012289 standard assay Methods 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 231100000732 tissue residue Toxicity 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001875 tumorinhibitory effect Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/60—Growth hormone-releasing factor [GH-RF], i.e. somatoliberin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/02—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin
- A61P5/04—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin for decreasing, blocking or antagonising the activity of the hypothalamic hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/06—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/06—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH
- A61P5/08—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH for decreasing, blocking or antagonising the activity of the anterior pituitary hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к пептиду, выбранному из группы, имеющей формулу: X-R1-R2-Asp-Ala-R5-R6-Thr-R8-R9-R10-Arg-R12-R13-R14-R15-R16-Leu-R18-R19-Arg-R21-R22-Leu-Gln-Asp-Ile-R27-R28-R29-NH2, где X означает PhAc, IndAc или Nac, R1 означает Tyr или His, R2 означает D-Arg, R5 означает Ile или Val, R6 означает Phe или Phe(Cl), R8 означает Asn, Gln, Ala или D-Asn, R9 означает Arg, Har, Lys, Orn, D-Arg, D-Har, D-Lys, D-Orn, Cit, Nle, Tyr(Me), Ser, Ala или Aib, R10 означает Tyr или Tyr(Me), R12 означает Lys, R13 означает Val или Nle, R14 означает Leu или Nle, R15 означает Gly, Ala, Abu, Nle или Gln, R16 означает Gln или Arg, R18 означает Ser или Nle, R19 означает Ala, R21 означает Lys, R22 означает Leu, Ala или Aib, R27 означает Met, Leu, Nle, Abu или D-Arg, R28 означает Arg, D-Arg или Ser, R29 означает Arg, D-Arg, Har или D-Har, при условии, что когда R9 и R28 означают Ser, R29 не является Arg или Har, и его фармацевтически приемлемым солям. Соединения по изобретению являются антагонистами рилизинг-гормона гормона роста и обладают повышенным сродством к рецептору. Описан также способ подавления избыточных уровней гормона роста у больного, способ лечения злокачественной опухоли и способ ингибирования уровней IGF-II в опухолях. 4 с. и 7 з.п. ф-лы, 9 табл., 5 ил.
Description
Данное изобретение было осуществлено при частичной правительственной поддержке Медицинской Исследовательской Службы Департамента по делам ветеранов. Правительство имеет определенные права на данную заявку.
Настоящее изобретение относится к новым синтетическим пептидам, которые ингибируют высвобождение гормона роста из гипофиза у млекопитающих, и к терапевтическим композициям, содержащим такие новые пептиды.
Предпосылки создания изобретения
Гормон роста (GH) является пептидом, имеющим 191 аминокислоту, который стимулирует продуцирование многочисленных различных факторов роста, например инсулиноподобного фактора роста I (IGF-I), и, таким образом, стимулирует рост многочисленных тканей (скелет, соединительная ткань, мышцы и внутренние органы) и физиологическую активность (повышение синтеза нуклеиновых кислот и белков и липолиза и понижение секреции мочевины).
Высвобождение GH находится под контролем высвобождающих и ингибирующих факторов, выделяемых гипоталамусом. Основным рилизинг-фактором является рилизинг-гормон гормона роста (GH-RH); рилизинг-гормон человеческого гормона роста (hGH-RH) является пептидом, состоящим из 44 аминокислот. Новые пептиды по настоящему изобретению относятся к аналогам hGH-RH, имеющим только остатки от 1 до 29 (hGH-RH(1-29)NH2), то есть к аналогам пептида, имеющего аминокислотную последовательность:
Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile5-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr10-Arg-Lys-Val-Leu-Gly15-
Gln-Leu-Ser-Ala-Arg20-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp25-Ile-Met-Ser-Arg29-NH2
GH причастен к некоторым заболеваниям. Одним из заболеваний, в которое вовлечен GH, является акромегалия, при которой присутствуют избыточные уровни GH. Патологически гипертрофированные лицевые кости и кости конечностей при данном заболевании могут подвергаться лечению путем введения антагониста GH-RH.
Другими заболеваниями, в которые вовлечен GH, являются диабетическая ретинопатия и диабетическая нефропатия. Полагают, что соответственно повреждение сетчатки и почек при таких заболеваниях, приводящее к слепоте или снижению функции почек, связано с GH. Такое поражение может быть предотвращено или замедлено при введении эффективного антагониста GH-RH.
Однако главное применение антагонистов GH-RH предполагается в области злокачественных новообразований (A.V. Schally et al. in Growth Hormone Secretagogues in Clinical Practice, eds. Bercu, B.B. & Walker, R.F., Dekker, New York, pp. 145-162, 1998). IGF-I и -II являются сильнодействующими митогенами для различных злокачественных опухолей. Подавляя секрецию GH, антагонисты GH-RH уменьшают синтез IGF-I в печени и других тканях. Антагонисты GH-RH также понижают аутокринное и паракринное продуцирование IGF-I и/или IGF-II различными опухолями. При некоторых экспериментальных злокачественных опухолях лечение антагонистами GH-RH приводит к уменьшению IGF-I и -II, сопутствующему ингибированию роста опухоли.
При попытке воздействовать на развитие этих заболеваний и других состояний некоторые исследователи попытались контролировать уровни GH, используя соматостатин, один из ингибиторов высвобождения GH. Однако соматостатин, введенный в отдельности, не подавляет уровни GH или IGF-I до желаемой степени. При введении в комбинации с антагонистом GH-RH соматостатин намного бы улучшил подавление уровней IGF-I.
Исследовались различные модификации GH-RH для выяснения связи структуры GH-RH с его активностью в попытке обеспечить синтетические родственные соединения с улучшенными агонистическими или антагонистическими свойствами. Так, ранее было установлено, что фрагмент GH-RH, включающий остатки 1-29, или GH-RH (1-29), является минимальной последовательностью, необходимой для биологической активности. Этот фрагмент сохраняет 50% или более активности природного GH-RH.
Было найдено, что первый описанный антагонист GH-RH, [Ас-Туr1, D-Arg2]hGH-RH (1-29) NH2, который обычно называют в литературе "стандартным антагонистом", предотвращает активацию аденилатциклазы передней доли гипофиза крысы с помощью hGH-RH(l-29)NH2. Тот же пептид блокировал действие GH-RH на его рецепторах в гипофизе и гипоталамусе и ингибировал пульсирующую секрецию гормона роста.
В значительном числе патентов и статей в открытой литературе описываются аналоги GH-RH, которые действуют либо как агонисты GH-RH (то есть, действуют как стимуляторы высвобождения GH), либо как антагонисты GH-RH (то есть, действуют как ингибиторы высвобождения GH). Большинство этих пептидов происходит от пептидной последовательности GH-RH(1-29) со специфическими структурными модификациями, которые отвечают за их повышенные агонистические или антагонистические свойства.
Так, патент США №4659693 раскрывает антагонистические аналоги GH-RH, которые содержат определенные N,N'-диалкил-α-гуанидино-α-аминоацильные остатки в положении 2 последовательности GH-RH(1-29).
Опубликованная международная заявка на патент WO 91/16923 рассматривает ранние попытки изменить вторичную структуру hGH-RH путем модификации его аминокислотной последовательности. Такие предпринятые ранее попытки включают замену Туr1, Ala2, Asp3 или Asn8 их D-изомерами; замену Asn8 на L- или D-Ser, D-Arg, Asn, Thr, Gln или D-Lys; замену Ser9 на Ala для повышения амфифильности участка и замену Gly15 на Ala или Aib. Когда R2 в аналогах является D-Arg и R8, R9 и R15 замещены как указано выше, в результате наблюдают антагонистическую активность. Такие антагонистические пептиды считаются подходящими для введения в качестве фармацевтических композиций для лечения состояний, связанных с избыточными уровнями GH, например акромегалии.
Антагонистическая активность аналога hGH-RH [Ser9-ψ[СН2-NH]-Туг10]hGH-RH(1-29) по патенту США №5084555 была определена как результат псевдопептидной связи (то есть, пептидной связи, восстановленной до [CH2-NH]-связи) между остатками R9 и R10. Однако было указано, что антагонистические свойства [Sеr9-ψ[СH2-NН]-Туr10] hGH-RH(1-29) были ниже, чем у стандартного антагониста, [N-Ac-Tyr1, D-Arg2]GH-RH(1-29)-NH2.
Патент США №5550212 и заявка на патент США 08/642472, представляющие такие же объекты, что и настоящая заявка, описывают аналоги hGH-RH(1-29)NH2, характеризующиеся повышенными антагонистическими свойствами и продолжительным временем действия. Считается, что такие свойства являются результатом замены различных аминокислот и ацилирования ароматическими или неполярными кислотами по N-концу GH-RH(1-29)NH2. Необходимо заметить, что в вышеупомянутых патенте США и заявке на патент США R9 всегда является Ser, R16 является Gln или аминокислотой, образующей лактамный мостик (то есть, Glu), R28 является Ser, Asn, Asp, Ala или Abu и R29 означает Agm, Arg-NH2, Arg-OH, Cit-NH2, Cit-OH, Har-NH2, Har-OH или аминокислоту, образующую лактамный мостик (то есть, Lys или Orn).
Краткое описание изобретения
Представлен новый ряд синтетических аналогов hGH-RH(1-29)NH2. Данные аналоги ингибируют активность эндогенного hGH-RH и тем самым предотвращают высвобождение гормона роста. Более сильные ингибирующие эффекты новых аналогов по сравнению с описанными ранее являются результатом замены различных аминокислот.
Конкретно, изобретение относится к пептидам, которые охватываются формулами:
Х-R1-R2-Аsр-Аla-R5-R6-Тhr-R8-R9-R10-Аrg-R12-R13-R14-R15-R16-Leu-R18-R19-Arg-R2l-R22-Leu-Gln-Asp-Ile-R27-R28-R29-NH2,
где Х означает PhAc, IndAc, Ibu, Nac, 1- или 2-Npr или
Fpr,
R1 означает Туr или His,
R2 означает D-Arg или D-Cit,
R5 означает Ilе или Val,
R6 означает Phe, Nal или Phe(Y), в котором Y=F, Cl, Br,
R8 означает Asn, Gln, Ser, Thr, Ala, D-Asn, D-Gln, D-Ser, D-Thr, Abu, D-Abu или Aib,
R9 означает Arg, Har, Lys, Orn, D-Arg, D-Har, D-Lys, D-Orn, Cit, Nle, Tyr(Me), Ser, Ala или Aib,
R10 означает Туr или Phe(Y), в котором Y=H, F, Cl, Br или
ОСН3,
R12 означает Lys, D-Lys или Orn,
R13 означает Val или Nle,
R14 означает Leu или Nle,
R15 означает Gly, Ala, Abu, Nle или Gln,
R16 означает Gln или Arg,
R18 означает Ser или Nle,
R19 означает Ala или Abu,
R21 означает Lys или Orn,
R22 означает Leu, Ala или Aib,
R27 означает Met, Leu, Nle, Abu или D-Arg,
R28 означает Arg, D-Arg, Ser, Asn, Asp, Ala или Abu,
R29 означает Arg, D-Arg, Наг или D-Har, и к их фармацевтически приемлемым солям.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения рассматриваются пептиды, в которых Х означает PhAc, IndAc или Nac, R1 означает Туr или His, R2 означает D-Arg, R5 означает Ile, R6 означает Phe(pCl), R8 означает Asn или Abu, R9 означает Аrg или Наr, Lys, Orn, D-Arg, D-Har, D-Lys, D-Orn, Cit, Nle или Тyr(Me), R10 означает Тyr или Тyr(Me), R12 означает Lys, R13 означает Val или Nle, R14 означает Leu или Nle, R15 означает Abu, Ala или Nle, R16 означает Gln или Arg, R18 означает Ser или Nle, R19 означает Ala или Abu, R21 означает Lys, R27 означает Nle или D-Arg, R28 означает D-Arg, Arg или Ser, R29 означает D-Arg, Наr или D-Har.
Отмечено, что аминокислотные остатки от 30 до 44 природной молекулы GH-RH, по-видимому, не являются существенными для активности; также не является критичной их идентичность. Поэтому похоже, что присоединение некоторых или всех из этих дополнительных аминокислотных остатков к С-концу аналогов hGH-RH(1-29)-NH2 по настоящему изобретению не повлияет на эффективность этих аналогов в качестве антагонистов GH-RH. Если некоторые или все из этих аминокислот присоединяли к С-концу аналогов hGH-RH(1-29)-NH2, то присоединенные аминокислотные остатки могли бы быть такими же, как и остатки от 30 до 44 в последовательности природного hGH-RH, или приемлемыми эквивалентами.
Синтетические методы.
Синтетические пептиды получают подходящим способом, как, например, исключительно твердофазным способом, частично твердофазным способом, путем конденсации фрагментов или путем классического синтеза в растворе.
Когда аналоги по изобретению синтезируют твердофазным способом, С-концевой остаток (здесь R29) подходящим образом связывается (закрепляется) с инертным твердым носителем (смола), сохраняя в то же время защитные группы для своей α-аминогруппы (и, соответственно, при необходимости, для функциональной группы боковой цепи). После завершения этой стадии защитную группу α-аминогруппы удаляют с закрепленного аминокислотного остатка и прибавляют следующий аминокислотный остаток, R28, имеющий подходящим образом замещенную α-аминогруппу (как и любую соответствующую функциональную группу боковой цепи), и так далее. Защитные группы N-конца удаляют после присоединения каждого остатка, но в то же время не удаляют защитные группы боковой цепи. После того как присоединили все желаемые аминокислоты в надлежащей последовательности, пептид отделяют от носителя и освобождают от всех защитных групп боковой цепи в условиях, которые являются минимально деструктивными по отношению к остаткам в последовательности. Затем следует тщательная очистка и точная идентификация синтетического продукта для гарантии того, что действительно получена желаемая структура.
Особо предпочтительно защитить α-аминофункциональную группу аминокислот во время стадии сочетания с помощью чувствительной к кислоте или основанию защитной группы. Такие защитные группы должны обладать свойствами сохранения стабильности в условиях образования пептидных связей, в то же время должны легко удаляться без разрушения растущей пептидной цепи и без рацемизации любого из содержащихся там хиральных центров. Подходящими защитными группами α-аминогруппы являются Воc(трет-бутоксикарбонил) и Fmoc(9-флуоренилметилоксикарбонил).
Применения в медицине.
Являющиеся антагонистами hGH-RH пептиды или соли этих пептидов могут быть приготовлены в виде фармацевтических лекарственных форм, содержащих эффективные количества указанных соединений, и введены людям или животному с лечебными или диагностическими целями. Пептиды могут быть использованы для подавления уровней GH и для лечения состояний, связанных с избыточными уровнями GH, например диабетическая ретинопатия и нефропатия, и акромегалия. Также обеспечены методы лечения этих заболеваний путем введения композиции по изобретению индивидууму, нуждающемуся в таком лечении. Основное применение антагонистов GH-RH относится, однако, к области злокачественных новообразований, например при раке молочной железы, легкого, ободочной кишки, мозга, поджелудочной железы и предстательной железы человека, где присутствуют рецепторы IGF-I или IGF-II.
Краткое описание чертежей
Фиг.1 представляет графическую зависимость изменений объема мышиных, относящихся к молочной железе злокачественных опухолей МХТ от дней обработки при обработке определенными антагонистами GH-RH.
Фиг.2 представляет графическую зависимость изменений объема человеческих злокачественных опухолей молочной железы MDA-MB-468 у бестимусных мышей от дней обработки при обработке определенными антагонистами GH-RH.
Фиг.3 представляет графическую зависимость изменений объема человеческих злокачественных опухолей ободочной кишки НТ-29 у бестимусных мышей от дней обработки при обработке определенными антагонистами GH-RH.
Фиг.4 представляет графическую зависимость изменений объема человеческих глиобластом U87MG у бестимусных мышей от дней обработки при обработке антагонистом GH-RH.
Фиг.5 представляет графическую зависимость изменений объема человеческих злокачественных опухолей предстательной железы РС-3 у бестимусных мышей от дней обработки при обработке определенными антагонистами GH-RH.
Подробное описание предпочтительных вариантов осуществления изобретения
А. Сокращения
Номенклатура, используемая для определения пептидов, является такой, которая установлена специальным уполномоченным ИЮПАК-МБС (МБС - Международный биохимический союз) по биохимической номенклатуре, где в соответствии с общепринятым представлением аминогруппа при N-конце находится слева и карбоксильная группа при С-конце находится справа. Термин "природная аминокислота", используемый здесь, означает одну из обычных, встречающихся в природе L-аминокислот, находящихся в природных белках: Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Ser, Thr, Lys, Arg, Asp, Asn, Glu, Gln, Cys, Met, Phe, Tyr, Pro, Trp и His, Когда остаток природной аминокислоты существует в изомерных формах, именно L-форма аминокислоты представлена здесь, если специально не указано иначе.
Некодированные аминокислоты или аминокислотные аналоги также включены в антагонисты GH-RH. ("Некодированные" аминокислоты представляют те аминокислоты, которые не находятся среди примерно 20 природных аминокислот, встречающихся в природных пептидах). К некодированным аминокислотам или аминокислотным аналогам, которые могут быть использованы в пептидах, являющихся антагонистами hGH-RH, относятся следующие: под Abu имеют ввиду α-аминомасляную кислоту, под Aib имеют ввиду α-аминоизомасляную кислоту, под Наr имеют ввиду гомоаргинин, под Nal имеют ввиду 2-нафтилаланин, под Nle имеют ввиду норлейцин и под Оrn имеют ввиду орнитин. Когда эти некодированные аминокислоты или аналоги аминокислот существуют в изомерных формах, именно L-форма аминокислоты представлена здесь, если специально не указано иначе. Используемые здесь сокращения:
Abu - α-аминомасляная кислота;
Ас - ацетил;
АсОН - уксусная кислота;
Ас2O - уксусный ангидрид;
Aib - α-аминоизомасляная кислота;
Воc - трет-бутоксикарбонил;
Воm - бензилоксиметил;
2BrZ - 2-бромбензилоксикарбонил;
сНх - циклогексил;
Cit - цитруллин (2-амино-5-уреидовалериановая кислота);
2CIZ - 2-хлорбензилоксикарбонил;
DCM - дихлорметан (ДХМ);
DIC - N,N'-диизопропилкарбодиимид (ДИКД);
DIEA - диизопропилэтиламин (ДИЭА);
DMF - диметилформамид (ДМФА);
Fmoc - флуоренилметилоксикарбонил;
Fpr - 3-фенилпропионил;
GH - гормон роста;
GH-RH - рилизинг-гормон гормона роста;
Наr - гомоаргинин;
HBTU - 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметил-урония гексафторфосфат;
hGH-RH - человеческий GH-RH;
HOBt - 1-гидроксибензотриазол;
HPLC - высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ);
Ibu - изобутирил;
IndAc - индол-3-ацетил;
МВНА - п-метилбензгидриламин (МБГА);
МеОН - метанол;
MeCN - ацетонитрил;
Nac - 1-нафтилацетил;
Nal - 2-нафтилаланин;
NMM - N-метилморфолин;
Npr - нафтилпропионил;
РАМ - фенилацетамидометил;
Phe(pCl) - п-хлорфенилаланин;
PhAc - фенилацетил;
rGH-RH - крысиный GH-RH;
RP-HPLC - ВЭЖХ с обращенной фазой;
TFA - трифторуксусная кислота (ТФК);
Tos - п-толуолсульфонил;
Тyr(Me) - простой тирозинметиловый эфир;
Z - бензилоксикарбонил.
В. Аналоги GH-RH
Аналоги hGH-RH по настоящему изобретению были получены с целью повышения сродства пептидов к рецептору, повышения метаболической устойчивости и максимизирования амфифильности вторичной структуры молекул. Многие из этих аналогов вызывают очень эффективное и продолжительное ингибирование высвобождения GH, стимулированного hGH-RH(1-29)NH2 in vitro и in vivo.
Следующие варианты осуществления изобретения особенно предпочтительны как обладающие прекрасной биологической активностью:
[PhAc0,D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 1;
[IndAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NН2 пептид 2;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Наr9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 3;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 4;
[Nac0, D-Arg3, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 5;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 6;
[PhAc0, His1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 7;
[Nac0, His1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 8;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 9;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Abu15, Аrg16, Nle27, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 10;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 11;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Nle9, Abu15, Nle27, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 12;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Nle13, Nle14, Abu15, Nle27, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 13;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Nle15, Nle27, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 14;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Abu15, Nle18, Nle27, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 15;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Тyr(Ме)10, Abu15, Nle27, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 16;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Abu8, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 17;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, D-Abu8, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 18;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Tyr(Me)10, Abu15, D-Arg27, Arg28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 19;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Tyr(Me)3, Abu15, D-Arg27, Arg28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 20;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Abu15, D-Arg27, Arg28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 21;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Abu8, Tyr(Me)10, Abu15, D-Arg27, Arg28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 22;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, D-Abu8, Туr(Ме)10, Abu15, D-Arg27, Arg28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 23;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Lys9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 24;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Orn9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 25;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, D-Аrg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 26;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, D-Har9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 27;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, D-Lys9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 28;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, D-Orn9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 29;
(PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 30.
Шесть очень предпочтительных вариантов осуществления изобретения имеют формулы:
PhAc0-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Arg9-Tyr10-Arg11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle-27-D-Arg28-Har29-NH2 пептид 1;
lndAc0-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Arg9-Tyr10-Arg11-Lys12Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2 пептид 2;
PhAc0-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Har9-Tyr(Me)10-Arg11-Lys12-Var13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2 пептид 3;
PhAc0-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Arg9-Tyr(Me)10-Arg11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2 пептид 6;
PhAc0-His1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Arg9-Tyr10-Arg11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2 пептид 7;
Nac0-His1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Asnв-Arg9-Tyr10-Arg11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2 пептид 8.
Согласно общепринятому правилу такие соединения могут быть представлены с сокращенным наименованием, как следует ниже:
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 1;
[IndAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 2;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 3;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 6;
[PhAc0, His1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 7;
[Nac0, His1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29) NH2 пептид 8.
С. Способ получения
1. Обзор синтеза.
Пептиды синтезируют подходящими способами, как, например, исключительно путем твердофазного пептидного синтеза, частично путем твердофазного синтеза, путем конденсации фрагментов или путем классического синтеза в растворе. Например, методики исключительно твердофазного синтеза представлены в учебнике "Solid Phase Peptide Synyhesis", J.M. Stewart and J.D. Young, Pierce Chem. Company, Rockford, 111, 1984 (2nd. ed.), and M. Bodanszky, "Principles of Peptide Synthesis", Springer Verlag, 1984. Являющиеся антагонистами hGH-RH пептиды предпочтительно получают при применении твердофазного синтеза, как, например, описанного Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 85, р. 2149 (1963), хотя другие эквивалентные химические синтезы, известные в данной области, могут быть также применены, как указывалось выше.
Синтез осуществляют с аминокислотами, которые защищены по α-аминогруппе. Предпочтительно для защиты α-аминогруппы используют защитные группировки типа уретана (Воc или Fmoc). Предпочтительной защитной группой является Воc.
При твердофазном синтезе защищенный по атому азота α-аминогруппы участок аминокислоты, который образует аминоацильную группу конечного пептида при С-конце, присоединяют химической связью к носителю из полимерной смолы. После завершения реакции связывания защитную группу α-аминогруппы для проведения последующих реакций связывания по аминоконцу селективно удаляют, предпочтительно с помощью 50% трифторуксусной кислоты (ТФК) в дихлорметане (ДХМ), когда N-α-защитной группой является Воc. Остальные аминокислоты с подобным же образом Вос-защищенными α-аминогруппами постадийно присоединяют к свободной аминогруппе предыдущей аминокислоты на смоле для получения желаемой пептидной последовательности. Так как аминокислотные остатки связываются с α-аминогруппой С-терминального остатка, рост синтетических пептидных аналогов hGH-RH начинается при С-конце и продвигается в направлении к N-концу. Когда получена желаемая последовательность, пептид ацилируют по N-концу и его удаляют с полимерного носителя.
Каждую защищенную аминокислоту применяют в избытке (2,5 или 3 эквивалента), и реакции сочетания обычно проводят в ДХМ, ДМФА или в их смесях. Степень завершения реакции связывания контролируется на каждой стадии с помощью реакции с нингидрином. В случаях, когда определяют неполное связывание, процедуру связывания повторяют или реакцию завершают путем ацилирования непрореагировавших аминогрупп до удаления защитной группы с α-аминогруппы перед связыванием следующей аминокислоты.
Типичный цикл синтеза представлен в таблице 1.
После завершения синтеза отщепление пептида от смолы может быть осуществлено с использованием методик, хорошо известных в химии пептидов.
Некоторые из аминокислотных остатков пептидов имеют такие функциональные группы в боковой цепи, которые реакционноспособны по отношению к реагентам, использующимся при связывании или снятии защиты. Когда в боковой цепи присутствуют такие группы, подходящие защитные группы присоединяют к этим функциональным группам для предотвращения нежелательных химических реакций, происходящих при реакциях, используемых для образования пептидов. При выборе соответствующей защитной группы для боковой цепи придерживаются следующих общих правил: (а) защитная группа предпочтительно сохраняет свои защитные свойства и не отщепляется в условиях связывания, (b) защитная группа должна быть устойчивой в условиях удаления защитной группы с α-аминогруппы на каждой стадии синтеза, (с) защитная группа боковой цепи должна быть способной после завершения синтеза желаемой аминокислотной последовательности удаляться в реакционных условиях, которые не изменят нежелательным образом пептидную цепь.
Реакционноспособные функциональные группы боковой цепи предпочтительно защищают следующим образом: бензил для Thr и Ser; 2-бромбензилоксикарбонил для Тyr; п-толуолсульфонил или нитрогруппа для Аrg и Наr; 2-хлорбензилоксикарбонил или флуоренилметилоксикарбонил для Lys, Orn; бензилоксиметил для His и циклогексил или флуоренилметил для Asp и Glu. Боковые цепочки Asn и Gln не защищаются.
3. Постадийное связывание аминокислотных остатков с полимерным носителем.
Пептиды, являющиеся антагонистами hGH-RH, могут быть синтезированы на ряде полимерных носителей, то есть, на смоле на основе п-метилбензгидриламина (МБГА), на смоле Меррифилда, на смоле на основе фенилацетамидометила или на смоле Wang. Когда для синтеза используются N-α-Boc-защищенные аминокислоты, предпочтительной смолой является смола на основе МБГА. В этом случае получают пептиды с амидированным С-концом при отщеплении от фазы-носителя.
Сначала С-концевая аминокислота присоединяется к нейтрализованной МБГА-смоле и затем проводятся последующие связывания аминокислот. Каждая защищенная аминокислота связывается примерно при трехкратном молярном избытке по отношению к связанным смолой остаткам со свободными аминогруппами, и связывание может быть проведено в среде, как, например, ДМФА: CH2Cl2 (1:1) или только в ДМФА, или только в CH2Cl2. Выбор подходящего связывающего реагента является компетенцией специалиста в данной области. Особенно подходящими в качестве реагентов связывания являются N,N-диизопропилкарбодиимид (ДИКД) или гексафторфосфат 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония, смешанный с 1-гидроксибензотриазолом. Успех прохождения реакции связывания на каждой стадии синтеза предпочтительно контролируется с помощью нингидриновой реакции. В случаях, когда происходит неполное связывание, либо процесс связывания повторяют, либо связанные смолой непрореагировавшие остатки с аминогруппами ацетилируют с использованием уксусного ангидрида в ДХМ до удаления защитной группы α-аминогруппы.
Конечное ацилирование N-конца пептида проводят таким же образом, как и предыдущие связывания, с той разницей, что вместо аминокислоты используют соответствующую карбоновую кислоту.
4. Удаление пептида с полимерного носителя.
Когда синтез завершен, пептид отщепляют от фазы-носителя. Удаление пептида со смолы осуществляют при обработке реагентом, как, например, жидкий фтористый водород, который также отщепляет все оставшиеся защитные группы боковой цепи.
Соответственно, высушенный и защищенный пептид-смола обрабатывают смесью, состоящей из 1,0 мл м-крезола и 10 мл безводного фтористого водорода на грамм пептида-смолы, в течение 60 мин при 0°С для отщепления пептида со смолы, а также для удаления всех защитных групп боковой цепи. После удаления фтористого водорода в токе азота и в вакууме свободные пептиды осаждают диэтиловым эфиром, фильтруют, промывают диэтиловым эфиром и этилацетатом, экстрагируют 50% уксусной кислотой и подвергают лиофилизации.
5. Очистка.
Очистку технических пептидов можно осуществлять, используя методики, хорошо известные в химии пептидов. Например, очистка может быть проведена с использованием системы MacRabbit для ВЭЖХ (Rainin Instrument Co. Inc., Woburn, MA) с УФ-фотометром Knauer и регистрирующим устройством Kipp и Zonen BD40, используя колонку Vydac 218TP5010 с обращенной фазой (10×250 мм, заполненную силикагелем С 18, размер пор 300, размер частиц 5 мкм) (The Separations Group Inc., Hesperia, CA). Колонку элюируют системой растворителей, состоящей из (А) 0,1% водной ТФК и (В) 0,1% ТФК в 70% водном MeCN с линейным градиентом (например, 30-55% В в 120 мин). Элюент контролируется при 220 нм и фракции исследуются с помощью аналитической ВЭЖХ при использовании жидкостного хроматографа модели HP-1090 фирмы Hewlett-Packard и объединяются для обеспечения максимальной чистоты. Аналитическую ВЭЖХ осуществляют на колонке Vydac 218TP52 с обращенной фазой (2×250 мм, С 18, 300, 5 мкм), применяя изократное элюирование системой растворителей, состоящей из (А) и (В), обозначенных выше. Пики регистрируются при 220 и 280 нм. Пептиды по данным аналитической ВЭЖХ получают в значительной степени чистыми (> 95%). Ожидаемый аминокислотный состав также подтверждается аминокислотным анализом.
D. Фармацевтическая композиция
Пептиды по изобретению могут вводиться в виде фармацевтически приемлемых нетоксичных солей, как, например, аддитивные соли кислоты. Примерами таких аддитивных солей кислот являются гидрохлорид, гидробромид, сульфат, фосфат, фумарат, глюконат, таннат, малеат, ацетат, цитрат, бензоат, сукцинат, альгинат, памоат, малат, аскорбат, тартрат и им подобные. Особенно предпочтительными антагонистами являются соли с малой растворимостью, например памоаты и им подобные. Они проявляют продолжительную активность.
Соединения по настоящему изобретению соответственно вводят людям или животным подкожно, внутримышечно или внутривенно, через нос или путем легочной ингаляции, или в виде формы с замедленным выделением (депо-форма) (например, микрокапсулы, микрогранулы или цилиндрическая палочка, подобная имплантатам), приготовленной из биораспадающегося подходящего полимера (как, например, D,L-лактид-согликолид), причем первые две депо-формы являются предпочтительными. Другие эквивалентные формы введения также представлены в рамках данного изобретения, то есть, продолжительное капельное внутривенное вливание, инъекции веществ замедленного всасывания, инфузионный насос и формы с высвобождением во времени, как, например, микрокапсулы, и им подобные. Введение допустимо в любом физиологически приемлемом инъецируемом носителе, физиологическом растворе, хотя другие носители, известные в данной области, могут также использоваться.
Пептиды предпочтительно вводят парентерально, внутримышечно, подкожно или внутривенно с фармацевтически приемлемым носителем, как, например, изотонический солевой раствор. Альтернативно пептиды могут вводиться в виде интраназального аэрозоля с помощью подходящего носителя или путем легочной ингаляции. Подходящим путем введения является депо-форма, приготовленная из биораспадающегося соответствующего полимера, например поли-D,L-лактид-согликолида, в виде микрокапсул, микрогранул или цилиндрических имплантатов, содержащих диспергированные антагонистические соединения.
Необходимое количество пептида зависит от способа введения и предполагаемого результата. Обычно диапазон доз составляет 1-100 мкг/кг массы тела организма-хозяина в день.
Е. Терапевтическое применение антагонистов GH-RH.
Антагонисты hGH-RH могут быть применены при лечении состояний, вызванных избытком гормона роста, например акромегалии, которая проявляется в виде аномального разрастания костей лица и конечностей. Антагонисты GH-RH могут также применяться для лечения диабетической ретинопатии (главная причина слепоты у диабетиков) и диабетической нефропатии, при которых повреждения глаз и почек, соответственно, связывают с GH.
Антагонисты hGH-RH предназначаются для блокирования связывания и, следовательно, действия GH-RH, который стимулирует выделение GH, который, в свою очередь, стимулирует продуцирование IGF-I. Антагонисты GH-RH могут вводиться отдельно или вместе с аналогами соматостатина, как комбинация, которая более полно понижает уровни IGF-I. Полезнее вводить антагонисты-GH-RH, чем соматостатин, благодаря тому факту, что антагонисты GH-RH могут быть применены в ситуациях, когда сайты мишеней не имеют рецепторов соматостатина.
Однако, главным образом, антагонисты GH-RH применяются в области злокачественных заболеваний. Это основывается на следующих соображениях: антагонисты GH-RH предназначаются для блокирования связывания и поэтому действия GH-RH, который стимулирует выделение GH, который, в свою очередь, стимулирует продуцирование инсулиноподобного фактора роста I (IGF-I), который также называется соматомедин-С. Хорошо установлено вовлечение IGF-I (соматомедин-С) в злокачественные заболевания молочной железы, предстательной железы, ободочной кишки, в опухоли костей и другие злокачественные заболевания, но одни аналоги соматостатина адекватно не подавляют уровни GH и IGF-I. Для лучшего ингибирования роста опухоли требуется полное подавление уровней IGF-I или его выделения. Аутокринное продуцирование IGF-I различными опухолями могло бы быть также под контролем GH-RH и поэтому могло бы ингибироваться антагонистами GH-RH. Антагонисты GH-RH могли бы также ингибировать продуцирование IGF-I. Более детальная теоретическая предпосылка применений GH-RH в области онкологии (рака) следующая: рецепторы IGF-I присутствуют в первичных человеческих злокачественных опухолях молочной железы, злокачественных опухолях предстательной железы, злокачественных опухолях легких, злокачественных опухолях ободочной кишки, в опухолях мозга, в злокачественных опухолях поджелудочной железы и в гипернефроидных опухолях почки.
Присутствие рецепторов IGF-I в этих опухолях связано с злокачественной трансформацией и пролиферацией этих злокачественных опухолей. IGF-I может действовать как эндокринный, паракринный или аутокринный фактор роста для различных злокачественных опухолей человека, именно рост этих новообразований зависит от IGF-I. Антагонисты GH-RH, подавляя выделение GH, понизят продуцирование IGF-I. Поскольку IGF-I стимулирует рост таких различных новообразований (рака), то понижение уровней циркулирующего IGF-I должно привести к ингибированию опухолевого роста. Возможно, что антагонисты GH-RH смогли бы также понизить паракринное или аутокринное продуцирование IGF-I опухолями, что должно также привести к ингибированию пролиферации злокачественных новообразований. Эти взгляды находятся в соответствии с современными концепциями клинической онкологии. Антагонисты GH-RH следует давать отдельно или вместе с аналогами соматостатина, и комбинация привела бы к достижению более полного подавления уровней IGF-I, к ликвидации уровней IGF-I в тканях, например, в человеческих остеосаркомах, а также при раке молочной железы, раке ободочной кишки, раке предстательной железы и немелкоклеточном раке легкого (non-SCLC).
Преимущество антагонистов GH-RH над аналогами соматостатина основывается на факте, что антагонисты GH-RH могут быть использованы для подавления опухолей, которые не имеют соматостатиновых рецепторов, например человеческие остеогенные саркомы.
Было показано, что антагонистические аналоги GH-RH подавляют рост различных опухолей in vivo. Этот эффект проявляется частично через ингибирование системы GH-RH-IGF-I. Тем не менее, аутокринный/паракринный контроль пролиферации с помощью IGF-II также является главным фактором во многих опухолях. Нарушение такого аутокринного, стимулирующего рост метаболического пути предлагает подход к контролю опухолей. Антагонистические аналоги GH-RH, MZ-4-71 {[Ibu0, Tyr1, D-Arg2, Abu15, Nle27]hGH-RH(1-28) Agm} и MZ-5-156 {[PhAc0, D-Arg2, Abu15, Nle27]hGH-RH(1-28) Agm} значительно ингибировали скорость пролиферации линий клеток рака молочной железы (MDA-MB-468, ZR-75-1), предстательной железы (РС-3 и DU-145) и поджелудочной железы (MiaPaCa-2, SW-1990 и Capan-2) in vitro, как показано с помощью колориметрических тестов и тестов по включению [3H]-тимидина, понижали экспрессию мРНК IGF-II в клетках и концентрацию IGF-II, выделяемого в культуральную среду. Те же антагонисты GH-RH давали похожие результаты in vivo (ингибирование пролиферации и уменьшение продуцирования IGF-II) в случае опухолей предстательной железы (РС-3, DU-145), аденокарциномы почки (Caki-I) и немелкоклеточного рака легкого (Н157). Эти результаты предполагают, что антагонистические аналоги GH-RH могут ингибировать рост опухоли не только путем ингибирования системы GHRH-GH-IGF-I, но также за счет уменьшения выработки IGF-II в некоторых опухолевых клетках, тем самым нарушая ее аутокринный регуляторный метаболический путь.
Настоящее изобретение описывается следующими примерами, которые далее представлены только с целью иллюстрации. В примерах используются оптически активные защищенные аминокислоты в L-конфигурации, за исключением специальных указаний.
Следующие примеры далее представляют подходящие способы синтеза новых антагонистов GH-RH с помощью твердофазного синтеза.
Пример 1
PhAc0-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Arg9-Tyr10-Arg11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2 (пептид 1) {[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Наr29] hGH-RH (1-29) NH2}
Синтез осуществляют постадийно, используя оборудование для твердофазного пептидного синтеза с ручным управлением. Вкратце, смолу на основе МБГА (Bachem, California) (720 мг, 0,5 ммоль) нейтрализуют 5% ДИЭА в CH2Cl2 и промывают в соответствии с протоколом, описанным в таблице 1. Раствор Boc-Har(NO2)-ОН (500 мг, 1,5 ммоль) в ДМФА-СН2Сl2 (1:1) встряхивают с нейтрализованной смолой и ДИКД (235 мкл, 1,5 ммоль) в аппарате с ручным управлением для твердофазного пептидного синтеза в течение 1 часа. После завершения реакции связывания, что подтверждается отрицательным нингидриновым тестом, снятия защиты с помощью 50% ТФК в CH2Cl2 и нейтрализации с помощью 5% ДИЭА в CH2Cl2 пептидную цепь строят постадийно путем связывания на смоле следующих защищенных аминокислот в указанном порядке для получения желаемой пептидной последовательности: Boc-D-Arg(Tos)-ОН, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH.
Эти защищенные аминокислотные остатки (также обычно получаемые от фирмы Bachem Co.) обозначены выше в соответствии с хорошо известным правилом. Подходящая защитная группа для функциональной группы боковой цепи определенных аминокислот указывается в скобках. Гидроксильные группы в представленных выше формулах указывают, что карбоксильный конец каждого остатка свободен.
Защищенные аминокислоты (1,5 ммоль каждой) связывают с ДИКД (235 мкл, 1,5 ммоль) за исключением Boc-Asn-OH и Вос-Gln-ОН, которые связываются с их ранее образованными сложными эфирами с 1-гидроксибензотриазолом. После удаления Nα-Boc-защитной группы от Туr1 пептид ацилируют с помощью фенилуксусной кислоты (PhAc) (272 мг, 2 ммоль), применяя ДИКД (313 мкл, 2 ммоль).
Для того чтобы отщепить пептид от смолы и снять с него защиту, высушенную смолу с пептидом (2,18 г) перемешивают с 2 мл м-крезола и 20 мл фтористого водорода (HF) при 0° в течение 1 часа. После упаривания HF в вакууме остаток промывают безводным диэтиловым эфиром и этилацетатом. Отщепленный и лишенный защиты пептид растворяют в 50% уксусной кислоте и отделяют от смолы путем фильтрации. После разбавления водой и лиофилизации получают 1,51 г неочищенного продукта.
Неочищенный пептид исследуют с помощью аналитической ВЭЖХ, используя жидкостной хроматограф модели HP-1090 фирмы Hewlett-Packard с колонкой Vydac 218TP52 с обращенной фазой (2×250 мм, заполнена силикагелем С18, размер пор 300, размер частиц 5 мкм) (The Separation Group Inc., Hesperia, CA) и линейный градиент элюции (например, 40-70% В) с помощью системы растворителей, состоящей из (А) 0,1% водной ТФК и (В) 0,1% ТФК в 70% водном MeCN. Растворяют 500 мг неочищенного пептида в AcOH/H2O, перемешивают, фильтруют и наносят на колонку Beckman Ultraprep ODS (21,2×150 мм, заполнена силикагелем С18, размер пор 300, размер частиц 10 мкм). Колонку элюируют системой растворителей, описанной выше, с линейным градиентом (например, 30-55% В за 120 мин); скорость потока 6 мл/мин. Элюент контролируют при 220 нм и фракции исследуют с помощью аналитической ВЭЖХ. Фракции с чистотой выше 95% объединяют и лиофилизуют, получая 98 мг чистого продукта. Аналитическая ВЭЖХ проводится на колонке Vydac C18 с обращенной фазой, описанной выше, с применением изократной элюции системой растворителей, описанной выше, со скоростью потока 0,2 мл/мин. Пики анализируются при 220 и 280 нм. Судя по данным аналитической ВЭЖХ, продукт в значительной степени является чистым (> 95%). Молекулярную массу определяют с помощью масс-спектрометрии с электродиспергированием, и ожидаемый аминокислотный состав подтверждают аминокислотным анализом.
Пример 2
PhAc0-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Har9-Tyr(Me)10-Arg11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2 (пептид 3)
{[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2}
Синтез осуществляют постадийно, используя оборудование для твердофазного пептидного синтеза с ручным управлением, Вкратце, смолу на основе МБГА (Bachem, California) (100 мг, 0,070 ммоль) нейтрализуют 5% ДИЭА в CH2Cl2 и промывают в соответствии с протоколом, описанным в таблице 1. Раствор Вос-Har(NO2)-OH (83 мг, 0,25 ммоль) в ДМФА-СН2Сl2 (1:1) встряхивают с нейтрализованной смолой и ДИКД (44 мкл, 0,275 ммоль) в аппарате с ручным управлением для твердофазного пептидного синтеза в течение 1 часа. После завершения реакции связывания, что подтверждается отрицательным нингидриновым тестом, снятия защиты с помощью 50% ТФК в CH2Cl2 и нейтрализации с помощью 5% ДИЭА в CH2Cl2 пептидную цепь строят постадийно путем связывания на смоле следующих защищенных аминокислот в указанном порядке для получения желаемой пептидной последовательности: Boc-D-Arg(Tos)-ОН, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Вос-Asp(OcHx)-ОН, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH.
Эти защищенные аминокислотные остатки (также обычно поставляемые фирмой Bachem Co.) обозначены выше в соответствии с хорошо известным правилом. Подходящая защитная группа для функциональной группы боковой цепи определенных аминокислот указывается в скобках. Гидроксильные группы в представленных выше формулах указывают, что карбоксильный конец каждого остатка свободен.
Защищенные аминокислоты (0,25 ммоль каждой) связывают с ДИКД (44 мкл, 0,275 ммоль) за исключением Boc-Asn-OH и Boc-Gln-OH, которые связываются с их ранее образованными сложными эфирами с 1-гидроксибензотриазолом. После удаления Nα-Вос-защитной группы от Тyr1 пептид ацилируют с помощью фенилуксусной кислоты (PhAc) (54 мг, 0,4 ммоль), применяя ДИКД (70 мкл, 0,44 ммоль).
Для того чтобы отщепить пептид от смолы и снять с него защиту, высушенную смолу с пептидом (206 мг) перемешивают с 0,5 мл м-крезола и 5 мл фтористого водорода (HF) при 0° в течение 1 часа. После упаривания HF в вакууме остаток промывают безводным диэтиловым эфиром и этилацетатом. Отщепленный и лишенный защиты пептид растворяют в 50% уксусной кислоте и отделяют от смолы путем фильтрации. После разбавления водой и лиофилизации получают 112 мг неочищенного продукта.
Неочищенный пептид исследуют с помощью аналитической ВЭЖХ, используя жидкостной хроматограф модели HP-1090 фирмы Hewlett-Packard с колонкой Vydac 218TP52 с обращенной фазой (2×250 мм, заполнена силикагелем С18, размер пор 300, размер частиц 5 мкм) (The Separation Group Inc., Hesperia, CA) и линейный градиент элюции (например, 40-70% В) с системой растворителей, состоящей из (А) 0,1% водной ТФК и (В) 0,1% ТФК в 70% водном MeCN. Растворяют 80 мг неочищенного пептида в АсОН/Н2O, перемешивают, фильтруют и наносят на колонку Vydac 218ТР5010 (10×250 мм), заполненную силикагелем С 8. Колонку элюируют системой растворителей, описанной выше, с линейным градиентом (например, 30-55% В за 120 мин); скорость потока 2 мл/мин. Элюент контролируют при 220 нм и фракции исследуют с помощью аналитической ВЭЖХ. Фракции с чистотой выше 95% объединяют и лиофилизуют, получают 9,6 мг чистого продукта. Аналитическая ВЭЖХ осуществляется на колонке Vydac C18 с обращенной фазой, описанной выше, с применением изократной элюции системой растворителей, описанной выше, со скоростью потока 0,2 мл/мин. Пики анализируются при 220 и 280 нм. Судя по данным аналитической ВЭЖХ, продукт в значительной степени является чистым (>95%). Молекулярную массу определяют с помощью масс-спектрометрии с электродиспергированием, и ожидаемый аминокислотный состав подтверждают аминокислотным анализом.
Пептид 2 и пептиды от 4 до 30 синтезируют таким же образом, как пептид 1 и пептид 3, за исключением того, что эти пептиды также содержат другие замещения, получая:
[IndAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH, пептид 2;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Наr9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 4;
[Nac0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 5;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 6;
[PhAc0, His1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 7;
[Nac0, His1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 8;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 9;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Abu15, Arg16, Nle27, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 10;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 11;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Nle9, Abu15, Nle27, D-Arg29]hGH-RHC(1-29)NH2
пептид 12;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Nle13, Nle14, Abu15, Nle27, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 13;
(PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Nle15, Nle27, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 14;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Abu15, Nle18, Nle27, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 15;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 16;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Abu8, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 17;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, D-Abu8, Тyr(Ме)10, Abu15, Nle27, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 18;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Тyr(Ме)10, Abu15, D-Arg27, Arg28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 19;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Tyr(Me)9, Abu15, D-Arg27, Arg28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 20;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Abu15, D-Arg27, Arg28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 21;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)8, Abu8, Tyr(Me)10, Abu16, D-Arg27, Arg28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 22;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, D-Abu8, Tyr(Me)10, Abu15, D-Arg27, Arg28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 23;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Lys9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 24;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Orn9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 25;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, D-Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 26;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, D-Har9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 27;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, D-Lys9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 28;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, D-Orn9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 29;
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 30.
Пример 3
Биологическая активность
Пептиды по настоящему изобретению исследовались в in vitro и in vivo тестах на способность ингибировать индуцированное hGH-RH(1-29)NН3 высвобождение GH.
Суперслитая гипофизарная система крысы.
Аналоги исследовались in vitro в тесте, описанном ранее (S. Vigh and A.V. Schally, Peptides 5: 241-347, 1984) с модификацией (Z. Rekasi and A.V. Schally, P.N.A.S. 90:2146-2149, 1993).
Вкратце, клетки предварительно инкубируют с пептидами в течение 9 минут (3 мл) при различных концентрациях. Сразу после инкубирования вводят 1 нМ hGH-RH(1-29)NH2 в течение 3 минут (1 мл) [ответная реакция 0 минут]. Для проверки продолжительности антагонистического эффекта аналога применяют 1 нМ hGH-RH(1-29)NH2 через 30, 60, 90 и 120 минут в течение 3 минут [ответные реакции 30, 60, 90, 120 мин]. Оцениваются результирующие суммарные значения ответов GH. Ответы GH сравниваются и выражаются как процент от первоначального ответа GH, вызванного 1 нМ GH-RH(1-29)NH2. Эффект новых антагонистов сравнивают с от действия [Ас-Туr1, D-Arg2]hGH-RH(1-29)NH2, "стандартного антагониста".
Радиоиммунный анализ гормона роста.
Уровни крысиного GH в аликвотных пробах неразбавленных и разбавленных суперслитых образцов измеряли с помощью радиоиммунного анализа с двойным антителом, используя материалы, предоставляемые Национальной Программой по гормонам и гипофизу (National Hormone and Pituitary Program), Baltimore, Maryland. Результаты радиоиммунного анализа анализировали с помощью компьютерной программы, разработанной в институте, где работают авторы (V. Csernus and A.V. Schally, in Neuroendocrine Research Methods, Harwood Academic (Greenstein, B.D. ed., London, pp. 71-109, 1991), включенной сюда в виде ссылки. Разброс между анализами был менее 15% и разброс внутри серии анализов был менее 10%.
Анализ связывания GH-RH. Для определения характеристик связывания антагонистов GH-RH был проведен анализ связывания чувствительного радиорецептора (G. Halmos, A.V. Schally et al., Receptor 3, 87-97, 1993), на что здесь имеется ссылка. Анализ основывается на связывании меченого [His1, Nle27] hGH-RH (1-32) NH2 с гомогенатами мембран передней доли гипофиза крысы. Иодированные производные [His1, Nle27]hGH-RH(1-32)NH2 получают по методу с хлорамином Т (F.C. Greenwood et al., Biochemistry 89; 114-123, 1963), на что здесь ссылаются. Гипофизы самцов крыс линии Sprague-Dawley (250-300 г) используются для приготовления неочищенных мембран. Для анализов насыщенности связывания гомогенаты мембран инкубируют с, как минимум, 6 концентрациями [His1, 125I-Tyr10, Nle27]hGH-RH(1-32)NH2 в диапазоне от 0,005 до 0,35 нМ в присутствии или отсутствии избытка немеченого пептида (1 мкМ).
Радиоактивность осадка подсчитывают в счетчике гамма-квантов. Сродство пептидов антагониста, исследуемое по отношению к рецепторам GH-RH гипофиза крысы, определяют в экспериментах по конкурентному связыванию. Конечное сродство к связыванию оценивают с помощью Ki (константа диссоциации комплекса ингибитор-рецептор) и определяют с помощью компьютерных программ Ligand PC и McPherson, разработанных Munson и Rodbard (P.J. Munson and D. Rodbard, Anal. Biochem. 107, 220-239, 1980). Относительное сродство по сравнению с [Ас-Туr1, D-Arg2]hGH-RH(l-29)NH2, стандартным антагонистом, рассчитывают как отношение Ki исследуемого антагониста GH-RH к Ki стандартного антагониста.
Тесты in vivo.
Антагонистический эффект аналогов в отношении GH-RH исследовали на молодых самцах крыс линии Sprague-Dawley (200-250 г). В каждом эксперименте использовали 5 групп, из 7 животных каждая. Соединения (80 мкг/кг) и GH-RH(1-29)NH2 (3 мкг/кг) растворяли в 5,5% манните и вводили внутривенно в шейную вену крыс при анестезии нембуталом. Время, протекающее между введениями антагониста и GH-RH, варьировалось между группами в соответствии со следующим графиком. Первая группа животных получала инъекцию GH-RH через 5 мин после введения антагониста; для второй, третьей и четвертой групп животных временные интервалы между инъекцией антагониста и инъекцией GH-RH составляли 15, 30 и 60 мин соответственно. Контрольная группа была сначала инъецирована только растворителем вместо антагониста, после чего через 5 мин делали инъекцию GH-RH.
Образцы крови в 0,4 мл отбирали для радиоиммунного анализа GH перед введением антагониста ("кровь 0") и через 5 мин после инъекции GH-RH ("кровь 1"). Ответ GH в каждой группе рассчитывали как rСН=(СНкровь 1/СНкровь 0), среднее значение ± стандартная ошибка измерения индивидуальных разностей. Относительное ингибирование ответа GH (%) в каждой подвергшейся обработке группе рассчитывали как 100×(rСНобравотанная-1)/(rСНконтрольная-1).
Результаты исследований in vitro.
Результаты антагонистической активности in vitro, исследованной в суперслитой крысиной гипофизарной системе, и анализ связывания подытожены в таблице 2 и таблице 3 соответственно. Как можно видеть из этих данных, замещения, имеющие место в молекулах, вызывают огромное увеличение связывания рецептора, а также ингибирования высвобождения GH in vitro по сравнению со стандартным антагонистом. Наиболее сильный антагонист in vitro, пептид 1, вызывал полное ингибирование вызванного GH-RH высвобождения GH за 90 мин в стандартных условиях анализа. Первый признак восстановления реактивности GH-RH определяли через 120 мин после воздействия данного аналога.
Результаты исследования in vivo.
В таблице 4 представлены ответные реакции сывороточного GH и их относительное ингибирование у крыс, предварительно обработанных антагонистами GH-RH. Все из исследуемых аналогов (пептид 1, пептид 2, пептид 3, пептид 4, пептид 8, пептид 9, пептид 11 и пептид 16) вызывают сильное и продолжительное ингибирование высвобождения GH, стимулированного hGH-RH(1-29)NН2. Пептид 1 и пептид 2 являются наиболее сильнодействующими в течение короткого времени, ингибируя ответы GH на 95% и 91%, когда их вводят за 5 мин до hGH-RH(1-29)NH2. Действие этих двух пептидов длится, как минимум, 30 мин. С другой стороны, пептид 11 и пептид 3, которые немного менее активны в течение короткого времени, являются чрезвычайно длительно действующими: их действие длится, как минимум, 60 мин.
Пример 4
Онкологические исследования.
Противоопухолевую активность пептидов по настоящему изобретению исследовали на различных моделях рака. Противоопухолевые эффекты этих новых пептидов сравнивали с таковыми для ранних аналогов (MZ-4-71 и MZ-5-156, объект патента США №5550212 и заявки на патент США 08/642472).
Действие антагонистов GH-RH на мышиные, относящиеся к молочной железе опухоли МХТ.
Эстроген-независимые опухоли МХТ трансплантировали подкожно самкам мышей BDF. Через день после трансплантации мышей делили на группы из 10 животных каждая и начинали обработку. Мышам в группах 1, 2, 3 и 4 делали ежедневно одноразовые инъекции различных антагонистов GH-RH подкожно в дозе 20 мкг в день в течение 18 дней. В группах 5 и 6 пептиды вводили с помощью осмотических насосов Alzet, высвобождающих ежедневное количество пептида в 20 мкг. Опухоли регулярно измеряли и рассчитывали объем опухоли. Мышей умерщвляли на 18 день и измеряли массы опухолей.
Результаты
Пептиды, пептид 1 и пептид 3, оказывали похожий сильный ингибирующий эффект на мышиные, относящиеся к молочной железе опухоли МХТ. Обработка с помощью MZ-5-156 также приводила к значительному ингибированию роста опухоли, но в этом случае эффект был слабее, чем эффект пептида 1 или пептида 3 (см. таблицу 5 и фиг.1).
Воздействие антагонистов GH-RH на ксенотрансплантаты человеческого рака молочной железы MDA-MB-468 у бестимусных мышей.
Бестимусных мышей с ксенотрансплантатами гормононезависимого рака молочной железы человека MDA-MB-468 делили на группы из 10 животных каждая. Подвергающимся обработке группам делали ежедневно подкожные инъекции из 20 мкг антагонистов GH-RH. Одну группу обрабатывали пептидом 1, вторую группу обрабатывали MZ-5-156 для сравнения. Контрольную группу инъецировали носителем в виде растворителя. Обработку продолжали 5 недель. Опухоли измеряли раз в неделю и рассчитывали объем опухоли. В конце эксперимента мышей умерщвляли и измеряли массы опухолей.
Результаты
Оба пептида обладали значительными ингибирующими опухоль эффектами на ксенотрансплантаты MDA-MB-468. В группе, инъецируемой пептидом 1, 4 опухоли обнаруживали постоянную регрессию во время эксперимента. Подобным же образом MZ-5-156 вызывал регрессию 3 опухолей. Через 5 недель обработки у этих злокачественных опухолей отмечали регрессию до небольших, напоминающих шрам остатков ткани. Гистологическое исследование этих тканей обнаружило недифференцированные эпителиальные опухоли с обширным некрозом и только узкую краевую линию живой опухолевой ткани. По контрасту все опухоли у контрольных животных стабильно прогрессировали. Конечные объемы опухолей и массы в группах, подвергшихся обработке, существенно уменьшались (см. таблицу 6 и фиг.2), пептид 1 проявлял более сильный эффект.
Действие антагонистов GH-RH на ксенотрансплантаты человеческого рака ободочной кишки НТ-29 у бестимусных мышей
Человеческие злокачественные опухоли ободочной кишки НТ-29 трансплантировали подкожно самцам бестимусных мышей. Через 19 дней после трансплантации мышей делили на группы в каждой по 10 животных и начинали обработку. Мышам делали ежедневно одноразовые инъекции различных антагонистов GH-RH подкожно в дозе 20 мкг в день в течение 6 недель. Регулярно измеряли опухоли и рассчитывали объем опухоли. В конце эксперимента мышей умерщвляли и измеряли массы опухолей.
Результаты
Пептид 1 и MZ-5-156 оказывали одинаково сильный ингибирующий эффект на человеческие злокачественные опухоли ободочной кишки НТ-29. Обработка пептидом 9 приводила к меньшему, но еще существенному ингибированию роста опухоли. Пептид 11 и MZ-4-71 проявляли только малый незначительный эффект. (Результаты обобщены в таблице 7 и на фиг.3).
Действие антагониста GH-RH, пептида 1, на ксеноттрансплантаты человеческой глиобластомы U87MG у бестимусных мышей.
Мышам имплантировали подкожно глиобластомы U87MG и, когда опухоли достигали объема примерно 70 мм3, мышей путем случайной выборки делили на 2 экспериментальные группы. Одну группу обрабатывали пептидом 1 в виде одноразовых ежедневных подкожных инъекций в 20 мкг в течение 28 дней, в то время как другая группа служила контролем.
Результаты
Обработка пептидом 1 приводила к ингибированию роста опухоли на 77% через четыре недели обработки против контрольной группы (см. таблицу 8 и фиг.4).
Действие антагонистов GH-RH на ксенотрансплантаты человеческого рака предстательной железы РС-3 у бестимусных мышей.
Самцам бестимусных мышей имплантировали подкожно в оба бока фрагменты ткани в 3 мм3 человеческого гормононезависимого рака предстательной железы РС-3. Когда опухоли достигали объема примерно в 40-50 мм3, мышей делили на 3 экcпepимeнтальные группы. Первую и вторую группы обрабатывали пептидами, пептидом 3 и MZ-5-156 соответственно, ежедневно путем одноразовых подкожных инъекций в 20 мкг в течение 21 дня, в то время как третья группа служила контролем. Объемы опухолей измеряли с интервалами в неделю, массы опухолей измеряли в конце эксперимента.
Результаты
Оба антагониста GH-RH ингибировали рост опухолей РС-3 (см. таблицу 9 и фиг.5). Пептид 3 вызывал более сильное ингибирование роста (65% ингибирования в объеме опухоли и 62% в массе опухоли), чем MZ-5-156 (52% и 46% соответственно).
Claims (11)
1. Пептид, выбранный из группы, имеющей формулу:
X-R1-R2-Asp-Ala-R5-R6-Thr-R8-R9-R10-Arg-R12-R13-R14-R15-R16-Leu-R18-R19-Arg-R21-R22-Leu-Gln-Asp-Ile-R27-R28-R29-NH2,
где X означает PhAc, IndAc или Nac;
R1 означает Туr или His;
R2 означает D-Arg;
R5 означает Ilе или Val;
R6 означает Phe или Phe(Cl);
R8 означает Asn, Gln, Ala или D-Asn;
R9 означает Arg, Har, Lys, Orn, D-Arg, D-Har, D-Lys, D-Orn, Cit, Nle, Tyr(Me), Ser, Ala или Aib;
R10 означает Туr или Туr(Me);
R12 означает Lys;
R13 означает Val или Nle;
R14 означает Leu или Nle;
R15 означает Gly, Ala, Abu, Nle или Gln;
R16 означает Gln или Arg;
R18 означает Ser или Nle;
R19 означает Ala;
R21 означает Lys;
R22 означает Leu, Ala или Aib;
R27 означает Met, Leu, Nle, Abu или D-Arg;
R28 означает Arg, D-Arg или Ser;
R29 означает Arg, D-Arg, Наr или D-Har при условии, что когда R9 и R28 означают Ser, R29 не является Arg или Наr,
и его фармацевтически приемлемые соли.
2. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(l-29)NH2 пептид 1
[IndAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(l-29)NH2 пептид 2
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29] hGH-RH(1-29)NH2 пептид 3
[PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29] hGH-RH(1-29)NH2 пептид 6
[PhAc0, His1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(l-29)NH2 пептид 7
[Nac0, His1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29] hGH-RH(1-29)NH2 пептид 8.
3. Соединение по п.1, имеющее формулу [PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH (1-29)NH2 пептид 1.
4. Соединение по п.1, имеющее формулу [IndAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH (1-29)NH2 пептид 2.
5. Соединение по п.1, имеющее формулу [PhAc0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Туr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 3.
6. Соединение по п.1, имеющее формулу [РhАс0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Туr (Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 6.
7. Соединение по п.1, имеющее формулу [PhAc0, His1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 7.
8. Соединение по п.1, имеющее формулу [Nac0, His1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 пептид 8.
9. Способ подавления избыточных уровней GH у больного, нуждающегося в этом, который заключается во введении указанному больному эффективного количества соединения по п.1.
10. Способ лечения больного, имеющего злокачественную опухоль, несущую рецепторы IGF-I или -II, который заключается во введении указанному больному эффективного количества соединения по п.1.
11. Способ ингибирования уровней IGF-II в опухолях (злокачественных опухолях) и экспрессии мРНК для IGF-II в тех же опухолях, который заключается во введении упомянутому больному эффективного количества соединения по п.1.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US09/199,381 | 1998-11-25 | ||
US09/199,381 US6057422A (en) | 1998-11-25 | 1998-11-25 | Antagonistic analogs of GH-RH inhibiting IGF-I and -II |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2001117218A RU2001117218A (ru) | 2003-05-20 |
RU2235099C2 true RU2235099C2 (ru) | 2004-08-27 |
Family
ID=22737273
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2001117218/04A RU2235099C2 (ru) | 1998-11-25 | 1999-11-23 | Антагонистические аналоги рилизинг-гормона гормона роста (gh-rh), ингибирующие инсулиноподобные факторы роста (igf-i и-ii) |
Country Status (29)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US6057422A (ru) |
EP (1) | EP1133522B1 (ru) |
JP (1) | JP2002530432A (ru) |
KR (1) | KR100629013B1 (ru) |
CN (1) | CN100422211C (ru) |
AR (1) | AR022392A1 (ru) |
AT (1) | ATE332310T1 (ru) |
AU (1) | AU757222B2 (ru) |
BG (1) | BG65137B1 (ru) |
BR (1) | BR9915512A (ru) |
CA (1) | CA2351665C (ru) |
CO (1) | CO5180565A1 (ru) |
CZ (1) | CZ20011794A3 (ru) |
DE (1) | DE69932255T2 (ru) |
DK (1) | DK1133522T3 (ru) |
ES (1) | ES2264279T3 (ru) |
HK (1) | HK1036461A1 (ru) |
HU (1) | HUP0105094A3 (ru) |
IL (1) | IL142899A0 (ru) |
NO (1) | NO20012489L (ru) |
NZ (1) | NZ511307A (ru) |
PL (1) | PL197471B1 (ru) |
PT (1) | PT1133522E (ru) |
RU (1) | RU2235099C2 (ru) |
SK (1) | SK7252001A3 (ru) |
TR (1) | TR200101492T2 (ru) |
TW (1) | TW585873B (ru) |
UA (1) | UA68407C2 (ru) |
WO (1) | WO2000031136A1 (ru) |
Families Citing this family (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2454135A1 (en) * | 2001-07-12 | 2003-01-23 | Exelixis, Inc. | Gpcs as modifiers of the irrtk and p21 pathways and methods of use |
US20040121407A1 (en) * | 2002-09-06 | 2004-06-24 | Elixir Pharmaceuticals, Inc. | Regulation of the growth hormone/IGF-1 axis |
EP1539959A2 (en) * | 2002-09-18 | 2005-06-15 | Centre Hospitalier de l'Université de Montréal (CHUM) | Ghrh analogues |
TW200517400A (en) * | 2003-08-05 | 2005-06-01 | Univ Tulane | Antagonistic analogs of GH-RH (2003) |
US8691942B2 (en) | 2008-03-28 | 2014-04-08 | University Of Miami | N- and C- terminal substituted antagonistic analogs of GH-RH |
BRPI0910873A2 (pt) * | 2008-03-28 | 2015-10-06 | Us Of America Represented By The Dept Of Veterans Affairs | análogos antagonistas de gh-rh substituídos nos terminais n e c |
US10240138B2 (en) | 2008-06-12 | 2019-03-26 | Ipsen Bioinnovation Limited | Polypeptides that bind to and inhibit secretion from growth hormone secreting cells |
AU2009259033B2 (en) | 2008-06-12 | 2013-11-07 | Ipsen Bioinnovation Limited | Suppression of neuroendocrine diseases |
GB0820970D0 (en) | 2008-11-17 | 2008-12-24 | Syntaxin Ltd | Suppression of cancer |
US8227421B2 (en) * | 2009-09-17 | 2012-07-24 | University Of Miami | Fluorinated GHRH antagonists |
CN103547591A (zh) | 2011-04-21 | 2014-01-29 | 瑟瑞技术公司 | 生长激素释放因子(grf)类似物及其用途 |
US9079974B2 (en) * | 2011-12-21 | 2015-07-14 | The University Of Miami | GH-RH analogs with potent agonistic effects |
WO2014100809A2 (en) | 2012-12-21 | 2014-06-26 | University Of Miami | Ghrh agonists for the treatment of ischemic disorders |
WO2014100816A2 (en) | 2012-12-21 | 2014-06-26 | University Of Miami | Ghrh agonists for islet cell transplantation and function and the treatment of diabetes |
EP3218395B1 (en) | 2014-11-12 | 2022-01-05 | The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services | Treatment of hormonal disorders of growth |
WO2020163833A2 (en) | 2019-02-08 | 2020-08-13 | United States Government As Represented By The Department Of Veterans Affairs | Growth hormone-releasing hormone antagonists and uses thereof |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4659693A (en) * | 1984-04-30 | 1987-04-21 | Syntex (U.S.A.) Inc. | N,N'-dialkyl substituted guanidino amino acyl residue substituted GRF-analog peptides |
WO1991016923A1 (en) * | 1990-05-04 | 1991-11-14 | The Administrators Of The Tulane University Educational Fund | Novel synthetic grf analogs |
US5550212A (en) * | 1993-12-17 | 1996-08-27 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Analogues of hGH-RH(1-29)NH2 having antagonistic activity |
US5942489A (en) * | 1996-05-03 | 1999-08-24 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | HGH-RH(1-29)NH2 analogues having antagonistic activity |
-
1998
- 1998-11-25 US US09/199,381 patent/US6057422A/en not_active Expired - Fee Related
-
1999
- 1999-11-16 CO CO99072002A patent/CO5180565A1/es not_active Application Discontinuation
- 1999-11-23 IL IL14289999A patent/IL142899A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1999-11-23 AU AU20291/00A patent/AU757222B2/en not_active Ceased
- 1999-11-23 TR TR2001/01492T patent/TR200101492T2/xx unknown
- 1999-11-23 CA CA002351665A patent/CA2351665C/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-11-23 KR KR1020017006568A patent/KR100629013B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-11-23 AT AT99963962T patent/ATE332310T1/de not_active IP Right Cessation
- 1999-11-23 PL PL349877A patent/PL197471B1/pl unknown
- 1999-11-23 NZ NZ511307A patent/NZ511307A/en unknown
- 1999-11-23 SK SK725-2001A patent/SK7252001A3/sk unknown
- 1999-11-23 RU RU2001117218/04A patent/RU2235099C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1999-11-23 EP EP99963962A patent/EP1133522B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-11-23 DK DK99963962T patent/DK1133522T3/da active
- 1999-11-23 ES ES99963962T patent/ES2264279T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-11-23 CZ CZ20011794A patent/CZ20011794A3/cs unknown
- 1999-11-23 PT PT99963962T patent/PT1133522E/pt unknown
- 1999-11-23 JP JP2000583962A patent/JP2002530432A/ja not_active Ceased
- 1999-11-23 DE DE69932255T patent/DE69932255T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1999-11-23 HU HU0105094A patent/HUP0105094A3/hu unknown
- 1999-11-23 CN CNB998137359A patent/CN100422211C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-11-23 WO PCT/US1999/027822 patent/WO2000031136A1/en active IP Right Grant
- 1999-11-23 UA UA2001064393A patent/UA68407C2/uk unknown
- 1999-11-23 BR BR9915512-5A patent/BR9915512A/pt not_active Application Discontinuation
- 1999-11-24 TW TW088120503A patent/TW585873B/zh not_active IP Right Cessation
- 1999-11-24 AR ARP990105977A patent/AR022392A1/es active IP Right Grant
-
2000
- 2000-04-11 US US09/547,215 patent/US7026281B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2001
- 2001-05-21 NO NO20012489A patent/NO20012489L/no not_active Application Discontinuation
- 2001-06-22 BG BG105638A patent/BG65137B1/bg unknown
- 2001-10-29 HK HK01107515A patent/HK1036461A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5846936A (en) | Growth hormone releasing factor analogs | |
RU2235099C2 (ru) | Антагонистические аналоги рилизинг-гормона гормона роста (gh-rh), ингибирующие инсулиноподобные факторы роста (igf-i и-ii) | |
IL98638A (en) | Analogs of the factor that releases human growth hormone, their preparation and pharmaceutical preparations that contain them | |
EP0914340B1 (en) | hGH-RH(1-29)NH2 ANALOGUES HAVING ANTAGONISTIC ACTIVITY | |
RU2335506C2 (ru) | Пептидные аналоги gh-rh с антагонистическим действием, способ снижения уровня gh, способ снижения уровня igf-i и igf-ii, применение для ингибирования роста раковых клеток, фармакологически приемлемая композиция (варианты) | |
EP0734396B1 (en) | ANALOGUES OF hGH-RH (1-29)NH2 HAVING ANTAGONISTIC ACTIVITY | |
WO1997042223A9 (en) | hGH-RH(1-29)NH2 ANALOGUES HAVING ANTAGONISTIC ACTIVITY | |
KR20150005904A (ko) | 강력한 작용제 효과를 지닌 신규한 gh-rh 유사체 | |
Zarandi et al. | Analogues of hGH-RH (1-29) NH2 having antagonistic activity | |
MXPA98008996A (en) | Analogues of hgh-rh (1-29) nh2 that possess an antagonist activity |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20091124 |