KR20150005904A - 강력한 작용제 효과를 지닌 신규한 ｇｈ-ｒｈ 유사체 - Google Patents
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Abstract
하기 서열을 갖는 합성 펩타이드 및 이들의 약제학적으로 허용되는 염:
[RrA＼A2, A6, A8, A11, A12, A15, A20, A21, A22, Nle27, A28, A29, A30]hGH-RH(1-30)-R2(서열번호 1).
[여기서,
R1은 Ac, Tfa이거나, 부재하고,
A1은 Tyr, Dat, 또는 N-Me-Tyr이고,
A2는 Ala, D-Ala, Abu, 또는 D-Abu이고,
A6은 Phe 또는 Fpa5이고,
A8은 Asn, Ala, Gin, Thr, 또는 N-Me-Ala이고,
A11은 Arg, His, 또는 Har이고,
A12는 Orn, 또는 Lys(Me)2이고,
A15는 Abu, 또는 Ala이고,
A20은 Arg, His, 또는 Har이고,
A21은 Orn, 또는 Lys(Me)2이고,
A22는 Leu, 또는 Orn이고,
A28은 Ser, 또는 Asp이고,
A29는 Arg, Har, Agm, D-Arg, 또는 D-Har이고,
A30은 Arg, Agm, Ada, Amc, Aha, Apa, Har, D-Arg, D-Har, Gab, Gin, D-GIn, Gin-Gab, D-Gln-Gab이거나, 부재하고,
R2는 -NH2, -OH, -NHR2, -N(R2)2, 또는 -OR2이고, 여기서, R2는 C1 -12 알킬, C2 -12 알케닐, 또는 C2 -12 알키닐 중 어느 하나이며,
단, A29가 Agm인 경우, A30 및 R2가 부재하고, A1은 단지 N-Me-Tyr이다.]
[RrA＼A2, A6, A8, A11, A12, A15, A20, A21, A22, Nle27, A28, A29, A30]hGH-RH(1-30)-R2(서열번호 1).
[여기서,
R1은 Ac, Tfa이거나, 부재하고,
A1은 Tyr, Dat, 또는 N-Me-Tyr이고,
A2는 Ala, D-Ala, Abu, 또는 D-Abu이고,
A6은 Phe 또는 Fpa5이고,
A8은 Asn, Ala, Gin, Thr, 또는 N-Me-Ala이고,
A11은 Arg, His, 또는 Har이고,
A12는 Orn, 또는 Lys(Me)2이고,
A15는 Abu, 또는 Ala이고,
A20은 Arg, His, 또는 Har이고,
A21은 Orn, 또는 Lys(Me)2이고,
A22는 Leu, 또는 Orn이고,
A28은 Ser, 또는 Asp이고,
A29는 Arg, Har, Agm, D-Arg, 또는 D-Har이고,
A30은 Arg, Agm, Ada, Amc, Aha, Apa, Har, D-Arg, D-Har, Gab, Gin, D-GIn, Gin-Gab, D-Gln-Gab이거나, 부재하고,
R2는 -NH2, -OH, -NHR2, -N(R2)2, 또는 -OR2이고, 여기서, R2는 C1 -12 알킬, C2 -12 알케닐, 또는 C2 -12 알키닐 중 어느 하나이며,
단, A29가 Agm인 경우, A30 및 R2가 부재하고, A1은 단지 N-Me-Tyr이다.]
Description
본 발명은 미국 정부의 지원으로 일부 이루어졌다. 미국 정부는 본 출원에서 소정 권한을 갖는다.
서열목록
본 출원은, EFS-Web을 통한 ASCII 포맷으로 제출된 서열목록을 포함하고, 이의 전문이 본원에 인용에 의해 포함된다. 2011년 12월 13일에 생성된 상기 ASCII 사본은 파일명이 SHAL3041.txt이고, 크기가 35,007 바이트이다.
본 발명의 분야
본 발명은, 시험관내에서 성장 호르몬-방출 호르몬(GH-RH)에 대한 높은 결합 친화성을 갖고 생체내에서 뇌하수체의 기능에 대한 영향을 갖는, 성장 호르몬-방출 호르몬(GH-RH) 유사 펩타이드에 관한 것이다. 특히, 본 발명은, 뇌하수체에 의한 성장 호르몬의 방출을 촉진시키는, 합성 펩타이드에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은, 천연 hGH-RH(1-29)NH2보다 GH-RH 수용체에 대해 훨씬 더 높은 친화성을 나타내는 29 또는 30개의 아미노산의 hGH-RH 유사체에 관한 것이다.
또한, 본 발명은, 상기 GH-RH 작용제들 중 어느 하나를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이고, 장애의 치료 또는 예방에 있어서의 이들 작용제 펩타이드의 용도에 관한 것이다.
1981년, 사람 췌장 종양의 추출물로부터, 및 후속적으로 각종 포유동물의 시상하부로부터 사람 췌장 성장 호르몬 방출 호르몬(hGH-RH)을 처음으로 단리하였다. 이러한 펩타이드는, 뇌하수체에 의한 성장 호르몬(GH)의 방출을 촉진시키는 것으로 발견되었다. 사람 시상하부 GH-RH는, 췌장 GH-RH와 동일한 아미노산 서열을 갖는 것으로 발견되었다. 사람 GH-RH(hGH-RH)은, 아미드화된 카복실 말단을 갖는 44개의 아미노산을 함유한다. hGH-RH의 구조는 합성에 의해 재생성되었다. hGH-RH의 몇몇의 유사체들이 합성되었고, 이들의 생물학적 활성이 연구되었다. 이들 연구는 하기를 밝혔다:
a) 적어도 29개의 아미노산 잔기를 함유하는 GH-RH의 단편은 천연 GH-RH의 효력의 적어도 50%를 갖고; 아미노산 잔기의 추가의 결실은 생체활성의 현저한 감소를 초래한다[Cambell RM et al. Peptides 12: 569-574 (1991)];
b) 위치 29에서의 Agm(아그마틴, 4-구아니디노-부틸아민)에 의한 Arg의 대체는, C-말단으로부터의 효소적 분해에 대한 내성을 제공한다고 한다(Bajusz S et al. in Peptides, 1982, Blaha and Melon, Eds., Walter de Gruyter, Berlin-N.Y., 1983, pp. 643-647);
c) 위치 1에서의 데스-아미노티로신(Dat)에 의한 Tyr의 대체는, 효소적 분해에 대한 N-말단의 내성의 결과로서 증가된 생물학적 활성을 갖는 유사체를 유도한다고 한다[Felix A et al. Int. J. Peptide Protein Res. 32: 441-454 (1988), Kovacs M et al. Life Sci. 42: 27-35 (1988)]. 미국 특허 제4,622,312호, 제4,649,131호, 및 제4,784,987호는, 위치 15에 Ala 및 위치 1에 Dat를 갖는 hGH-RH(1-29) 작용제를 개시한다. 이들 작용제들 중 몇몇은 hGH-RH(1-29)의 효력의 4배인 효력을 갖는다고 한다;
d) 위치 1에 Dat 및 위치 29에 Agm을 함유하는 몇몇의 유사체들은, 향상된 GH 방출 능력을 나타내고, 따라서, hGH-RH(1-29)의 효력 및 생체내에서의 효력보다 큰 효력을 나타낸다고 한다[Zarandi M et al. Int. J. Peptide Protein Res. 36: 499-505 (1990), Zarandi M et al. Int. J. Peptide Protein Res. 39: 211-217 (1992)];
e) 펩타이드 서열의 C-말단에서의 소수성 그룹은, 유의하게 증가된 특이적 활성을 초래할 수 있다. 소수성의 관점에서, 이들 결과는 다른 그룹, 예를 들면, 무라니치(Muranichi)의 작업[Muranichi S et al. Pharm. Res. 8: 649-652 (1991)]과 모순된다;
유사하게, 미국 특허 제4,914,189호는, 위치 1에 Dat, 위치 2에 D-Ala, 위치 12에 Lys 또는 Orn, 위치 15에 Gly, 위치 21에 Lys, 및 위치 29에 Agm을 갖는 작용제를 개시한다. 그러나, GH 방출을 유도하는데 있어서 hGH-RH(1-29)보다 큰 효력을 갖는다고 하는 이들 작용제는 위치 12에 Lys 및 위치 2에 D-Ala를 가졌음에 주의해야 한다.
미국 특허 제4,689,318호에서, hGH-RH(1-29)의 유사체는 Orn에 의해 대체된 Lys12 또는 Lys21을 가질 수 있고, 여기서, 위치 8은 Ser(래트 GH-RH 서열), Asn(사람 GH-RH 서열), Thr(마우스 GH-RH 서열) 또는 Gln(GH-RH에서 자연 발생하지 않음)일 수 있고; 위치 27은 Nle일 수 있다. 이들 유사체에서, 위치 1은 절대 Dat가 아니고, 위치 15는 절대 Abu가 아니며, 위치 28은 절대 Asp가 아니고, 위치 29는 절대 Agm, Arg-NH-CH3, 또는 Arg-NH-CH2-CH3이 아니다. hGH-RH(1-40)만큼 강한 효력을 갖는다고 하는 이들 유사체는 위치 12 및 위치 21에서 Arg에 의한 치환을 가졌다.
다른 hGH-RH(1-29) 작용제는 PCT 특허 출원 번호 제WO 94/11396호 및 제94/11397호에 교시되어 있고, 여기서, 위치 12에서, Lys12는 D-Lys, Arg 또는 Orn에 의해 대체되어야 한다. 또한, 이들 유사체는, R1로서 Dat; R8로서 Asn, D-Asn, Ser, D-Ser; R15로서 Abu; R21로서 Lys, D-Lys, Arg 또는 D-Arg; R7로서 Nle; R28로서 Asp 또는 Ser; 및 R29로서 Agm을 함유할 수 있다. hGH-RH(1-29)에 의해 유도된 수준을 초과하는 수준으로 GH를 유도한다고 하는 이들 작용제는 위치 12에 Lys을 가졌다. 그러나, 이들 두 출원의 교시는, 이들 출원의 제출 후 소정 시점 이래로 의심의 여지가 있는 것으로 간주되었고, 합성된 것으로 생각되었던 화합물은, 이들이 본래 짝을 지었던 화학식에 확실하게 상응한다고 할 수 없음이 발견되었다. 또한, 당해 화합물은 본래 주장했던 수준으로 GH를 방출할 수 없음이 이들 출원의 제출 후에 추가로 발견되었다.
유럽 특허 출원 0 413 839호는 hGH-RH 유사체를 추가로 개시하고, 여기서, 위치 12 및 위치 21은 둘 다 Lys 또는 Orn일 수 있고, 여기서, 위치 15는 Ala이다. 그러나, GH 방출 능력에 대해 시험되어 hGH-RH(1-29)보다 큰 효력을 갖는다고 하는 이들 유사체는 위치 12 및 위치 21에 Lys을 가졌다.
미국 특허 제5262519호는, 하기 치환을 갖는 작용제를 개시한다: 위치 1에서의 N-MeTyr, 위치 8에서의 Ser, 위치 15에서의 Ala, 위치 16, 24 및 25에서의 Ala 또는 Aib, 위치 28에서의 Asn, 및 H 또는 저급 알킬인 R을 갖는 C-말단에서의 -NHR. 그러나, GH 방출을 유도하는데 있어서 hGH-RH(1-29)보다 큰 효력을 갖는다고 하는 이들 작용제는, 위치 8에 Gln 또는 Thr, 위치 12 및 위치 21에 Orn, 위치 15에 Abu, 및 위치 28에 Asp를 절대 갖지 않았다.
미국 특허 제5,792,747호는, 위치 1에 Dat; 위치 3에 Glu; 위치 8에 Ser, Gln, 또는 Thr; 위치 12 및 위치 21에 Orn; 위치 13에 Ile; 위치 15, 위치 22, 및 위치 23에 Ala 또는 Abu; 위치 25에 Glu; 위치 27에 Nle, Ile, 또는 Leu; 위치 28에 Asn 또는 Asp; 및 위치 29에 Agm을 갖는 GH-RH 작용제를 개시한다. GH 방출을 유도하는데 있어서 hGH-RH(1-29)보다 큰 효력을 갖는다고 하는 이들 작용제는 C-말단에 N-Me-Tyr1, D-Ala2, 및/또는 -NH-CH3 또는 -NH-CH2-CH3을 절대 갖지 않았다.
미국 특허 제7,928,063호는, 하기 치환을 갖는 GH-RH 작용제를 개시한다: 위치 1에서의 Dat; 위치 11 및 위치 20에서의 6-구아니디노-2-카프로산(hArg), 4-구아니딘-2-아미노부티르산(Gab), 또는 3-구아니디노-2-아미노프로피온산(Gap); 위치 12 및 위치 21에서의 Orn, hArg, Gab, 또는 Gap; 위치 15에서의 Ala; 위치 27에서의 Nle; 및 위치 29에서의 D-Arg, hArg, Gab, 또는 Gap. 이들 펩타이드는, 효소 작용에 대해 높은 내성을 나타낸다고 하고, 강력하고 선택적인 GH 방출 자극인자이다. 그러나, 이들 작용제는 시험되어 트립신 소화 시험에서만 높은 안정성을 나타내었음에 주의해야 한다.
현재까지, 기술된 GH-RH 유사체들 중 대부분은 래트 모델에서 시험관내 또는 생체내 시험되었다. 사람 및 래트 GRF(1-29)NH2는 현저하게 상이하므로, GH-RH의 구조-활성 관계는 상기 종 둘 다에서 상이하다. 따라서, 사람에 대해 래트에서 얻어진 결과를 추론하는 것은 불가능하다(Brazeau et al. 미국 특허 제6,458,764호).
다른 hGH-RH(1-29) 유사체는 미국 공개 출원 제2009/0023646 A1호 및 제WO 2009/009727 A2호에 교시되어 있고, 여기서, 가장 강력한 화합물은, 각각 D-Ala2, D-Tyr10, D-Ala15, 및 Lys22에 의해 대체된 Ala2, Tyr10, Gly15, 및 Leu22를 갖고, 래트 및 개 뇌하수체에서 소마토트로프 상의 GH-RH 수용체에 대한 결합을 나타내었고, 중성 GH-RH(1-44)보다 생체내에서 적어도 2배 강력하였다.
N-말단에서 트랜스-3-헥세노일 그룹에 의해 변형된 hGH-RH(1-44)NH2의 유사체(테사모렐린)는, DPP-IV 촉매화된 불활성화에 대한 내성을 나타내었다[Ferninandi ES et al. Basic Clin Pharmacol Toxicol. 100: 49-58 (2007) 및 Falutz J et al. Acquir Immune Defic Syndr 53: 311-322, (2010)]. 그러나, 이러한 작용제는, 엔도펩티타제 및 수용액 중의 화학적 분해에 대해 보호되지 않았고, GH-RH 자체의 단지 약 2배 정도 활성이었음이 언급되어야 한다.
천연 hGH-RH(1-44) 및 이의 유사체는 효소적 경로 및 화학적 경로 둘 다에 의해 생물학적으로 불활성화시킨다. 혈장에서, hGH-RH는, 혈장에서의 주요 개열 부위인 잔기 2와 잔기 3 사이의 디펩티딜펩티다제 IV(DPP-IV) 개열을 통해 신속하게 분해된다[Frohman et al., J. Clin. Invest. 83, 1533-1540 (1989), Kubiak et al. Drug Met. Disp. 17, 393-397 (1989)]. 뇌하수체 및 시상하부에서, 주요 개열 부위는 Leu14 - Gly15 사이(키모트립신-유사 효소) 및 Lys21 - Leu22 사이(트립신-유사 효소)이다[Boulanger et al. Brain Res. 616, 39-47 (1993)]. 또한, 염기성 아미노산 잔기에서의 다른 트립신 특이적 개열도 관찰된다. 또한, hGH-RH(1-44)도, 생체활성을 크게 감소시키는 수성 환경에서, 화학적 재배열[아미노석신이미드 형성을 통해 Asp8 또는 베타-Asp8을 형성함] 및 산화[Met27로부터 Met(O)27]를 행한다.
따라서, 아미노-말단에서의(효소적 분해를 예방하기 위함), 잔기 8에서의(이성질체화를 감소시키기 위함), 그리고 잔기 27에서의(산화를 예방하기 위함) 특이적 아미노산 대체를 이용한 장기-작용성 GH-RH 유사체를 개발하는 것이 유리하다. 또한, 수용체 결합 친화성을 향상시키는 것으로 기존에 입증되어 있는, Gly 15에 대한 Ala15 또는 Abu15 치환의 포함은, GH-RH 효력도 향상시킨다.
천연 hGH-RH(1-29)NH2와 비교하여 시험관내에서의 뇌하수체 수용체에 대한 결합 친화성을 상승시키고 생체내에서의 효력을 증가시킨 다중 아미노산 치환에 의해 hGH-RH 유사체를 생산하는 것이 바람직할 수 있다.
펩타이드의 아미노산 서열에서의 하나의 변화는, 펩타이드의 생물학적 효력뿐만 아니라 결합 특성에 대한 영향을 갖는 펩타이드의 3차원 구조에 큰 변화를 야기할 수 있으므로, hGH-RH 유사체에서의 하나 이상의 아미노산 대체 또는 치환의 조합이 향상된 결합 친화성 또는 높은 생체내 효력을 초래할 수 있음을 예측하는 것은 불가능하다.
본 발명은, 본 발명자들에게 알려져 있는 최상의 방식을 구성하는 본 발명의 바람직한 실시형태에 관해 기술되어 있지만, 당해 분야의 통상 기술을 갖는 숙련가에게 명백한 것일 수 있는 각종 변화 및 변형은, 여기에 첨부되어 있는 특허청구범위에 제시되는 본 발명의 범위로부터 벗어나지 않고 이루어질 수 있음이 이해되어야 한다. 예를 들면, 펩타이드 쇄에서의 변형, 특히, 펩타이드의 카복실 말단에서 시작하여 약 위치 29에 이르는 결실은, 공지의 실험적 관행에 따라, 펩타이드의 생물학적 효력의 전부 또는 매우 실질적인 부분을 보유하는 펩타이드 또는 펩타이드 단편을 생성하는 날짜까지 이루어질 수 있고, 이러한 펩타이드는 본 발명의 범위 내인 것으로 간주된다. 또한, 부가는 한쪽 말단에 또는 양쪽 말단에 이루어질 수 있고/있거나, 일반적으로 등가의 잔기는, 펩타이드 화학의 전체 분야에 익히 공지되어 있는 바와 같이, 천연 발생 잔기에 대해 치환되어, 본 발명의 범위를 벗어나지 않고 청구된 폴리펩타이드의 효력의 적어도 실질적인 부분을 갖는 다른 유사체를 생산할 수 있다. 또한, 현재 최신 기술에 따라 C-말단에서 바람직한 --NH2 그룹에 대한 변형이 이루어질 수 있고; 예를 들면, C-말단에서의 아미노산 잔기의 카복실 모이어티는, 본 발명으로부터 벗어나지 않고 저급 알킬, 플루오로 저급 알킬 또는 수소인 R 및 R'을 갖는 라디칼 --COOR, --CRO, --CONHNHR, --CON(R)(R') 또는 --CH2-OR일 수 있고, 이는 이러한 변형이 등가의 합성 펩타이드를 초래하기 때문이다(Rivier 미국 특허 제5262519호).
본 발명의 요약
hGH-RH(1-29)NH2 또는 hGH-RH(1-30)NH2의 신규한 일련의 합성 펩타이드 유사체가 제공된다. 본 발명의 신규한 합성 펩타이드는, 사람을 포함하는 동물에서 뇌하수체 GH의 방출을 자극하는데 있어서 높은 활성을 나타낸다. 또한, 이들은 hGH-RH 수용체에 대해 매우 높은 결합 능력을 나타낸다. 또한, 이들 합성 hGH-RH 유사체는, 장기간 동안 용액 중의 이들의 생리학적 활성을 보유하고, 신체에서의 효소적 분해에 저항한다. 이전에 기술된 것과 비교하여, 새로운 유사체의 보다 강한 생체내 GH 방출 효력은, hGH-RH-(1-29) 또는 hGH-RH(1-30)NH2에서의 대체들의 조합으로부터, 그리고, 생체내 분해에 대한 내성으로부터 얻어진다. 본 발명 또는 본 발명의 범위를 어떠한 방법으로도 제한하지 않으면서, 본 출원인들은, 시험관내 활성의 보유 및 생체내 분해에 대한 내성이 분자 내의 다중 치환: 펩타이드를 N-말단에서의 분해로부터 보호하는, 위치 1에서의 N-Me-Tyr 또는 des-아미노-Tyr(Dat)의 포함; 위치 29에서의 아그마틴(Agm) 또는 -NH-CH3 또는 -NH-CH2-CH3의 포함, 또는 펩타이드를 C-말단에서의 분해로부터 보호하는, 오메가-아미노산을 이용한 C-말단의 연장; 및 트립신-유사 효소에 대한 열악한 기질인 오르니틴(Orn)으로 합성 펩타이드에서의 두 라이신의 대체; Abu에 의한 잔기 15에서의 Gly로 인한 것이라는 본 출원인들의 이해를 표현하기를 원한다. 화학적 안정성을 증가시키기 위해, 위치 8에서의 Asn을 Gln, Thr, 또는 Ala으로 대체한다. 또한, 위치 27에서의 Met는 노르류신(Nle)으로 대체한다. 또한, 펩타이드 내의 다른 잔기의 대체 및 이들 대체들의 조합은 생물학적 활성을 증진시키는 것으로 발견된다.
합성
펩타이드
하기 화학식으로 나타낼 수 있는 합성 hGH-RH 유사체 및 이들의 약제학적으로 허용되는 염:
[R1-A1, A2, A6, A8, A11, A12, A15, A20, A21, A22, Nle27, A28, A29, A30] hGH-RH(1-30)-R2
또는 대안으로서의
[R1-A1-A2-Asp-Ala-Ile A6-Thr-A8-Ser-Tyr-A11-A12-Val-Leu-A15-Gln-Leu-Ser-Ala-A20-A21-A22-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-A28, A29, A30]-R2 (서열번호 1)
[여기서,
R1은 Ac, Tfa이거나, 부재하고,
A1은 Tyr, Dat, 또는 N-Me-Tyr이고,
A2는 Ala, D-Ala, Abu, 또는 D-Abu이고,
A6은 Phe 또는 Fpa5이고,
A8은 Asn, Ala, Gln, Thr, 또는 N-Me-Ala이고,
A11은 Arg, His, 또는 Har이고,
A12는 Orn, 또는 Lys(Me)2이고,
A15는 Abu 또는 Ala이고,
A20은 Arg, His, 또는 Har이고,
A21은 Orn, 또는 Lys(Me)2이고,
A22는 Leu, 또는 Orn이고,
A28은 Ser, 또는 Asp이고,
A29는 Arg, Har, Agm, D-Arg, 또는 D-Har이고,
A30은 Arg, Agm, Ada, Amc, Aha, Apa, Har, D-Arg, D-Har, Gab, Gln, D-Gln, Gln-Gab, D-Gln-Gab이거나, 부재하며,
R2는 -NH2, -OH, -NHR3, -N(R3)2, 또는 -OR3이고, 여기서, R3은 C1 -12 알킬, C2 -12 알케닐, 또는 C2 -12 알키닐 중 어느 하나이고,
바람직하게는, 단, A29가 Agm인 경우, A30 및 R2가 부재하고, 적합하게 A1은 단지 N-Me-Tyr이며, 추가로 바람직하게는, 단, A30이 Agm인 경우, R2가 부재한다.]
바람직한 실시형태의 상세한 설명
A. 합성
펩타이드
1. 명명법
아미노산 잔기 및 합성 펩타이드를 정의하기 위해 사용된 명명법은, 생화학적 명명법()에 대한 IUPAC-IUB 위원회에 의해 명기된 것이다(European J. Biochem., 1984, 138, 9-37). 천연 아미노산은, Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Ser, Thr, Lys, Arg, Asp, Asn, Glu, Gln, Cys, Met, Phe, Tyr, Pro, Trp 및 His를 포함하는 단백질에서 발견되는 보통의 천연 발생 아미노산들 중 하나를 의미한다. Nle는 노르류신을 의미하고, Abu는 알파 아미노 부티르산을 의미하며, Orn은 오르니틴을 의미한다. 사용된 다른 약어들은 하기와 같다:
약어
Aah 알파-아미노-헥사노산
Aap 알파-아미노-펜타노산
Abu 알파-아미노부티르산
Ac 아세틸
AcOH 아세트산
Ac2O 아세트산 무수물
Ada 12-아미노도데카노일
Agm 아그마틴
Aha 6-아미노헥사노일
AM 아미노메틸
Amc 8-아미노카프릴릴
Apa 5-아미노펜타노일
Aib 알파-아미노이소부티로일
Boc tert-부틸옥시카르보닐
Bom 벤질옥시메틸
2BrZ 2-브로모-벤질옥시카르보닐
But 4급 부틸 (에스테르)
Bzl 벤질
cHx 사이클로헥실
2CIZ 2-클로로-벤질옥시카르보닐
2CITrt 2-클로로트리틸
Cpa 파라-클로로페닐알라닌
Dat des-아미노-티로신
DCM 디클로로메탄
DIC N,N'-디이소프로필카르보디이미드
DIEA 디이소프로필에틸아민
DMF 디메틸포름아미드
Et 에틸
Fm 플루오레닐메틸
Fmoc 플루오레닐메톡시카르보닐
For 포르밀
Fpa 모노- 또는 폴리-플루오르화된 Phe (방향족환 상의 불소 치환)
Fpa5 펜타플루오로-Phe
Gab 감마-아미노 부타노일
GH 성장 호르몬
GH-RH GH 방출 호르몬
Har 호모아르기닌
HBTU 2-(1 H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트
hGH-RH 사람 GH-RH
HOBt 1-하이드록시벤조트리아졸
HPLC 고성능 액체 크로마토그래피
Ibu 이소부티릴
MBHA 파라-메틸벤즈하이드릴아민
Me 메틸
MeOH 메탄올
MeCN 아세토니트릴
Mmt 4-메톡시트리틸
Mtr 4-메톡시-2,3,6-트리메틸벤젠설포닐
N-Me-Ala N-메틸-Ala
N-Me-Tyr N-메틸-Tyr
Nle 노르류신
NMM N-메틸모르폴린
Oaa 오메가-아미노산
Orn 오르니틴
PAM 페닐아세트아미도메틸
Pbf 2,2,4,6,7-펜타메틸-디하이드로벤조푸란-5-설포닐
Ph 페닐
PS 폴리스티렌
rGH-RH 래트 GH-RH
RP-HPLC 역상 HPLC
SPA 파라-설포닐-페녹시아세틸
tBu 4급 부틸 (에테르)
TFA 트리플루오로아세트산
Tfa 트리플루오로아세틸
Tos 파라-톨루엔설포닐
Trt 트리틸 (트리페닐메틸)
Z 벤질옥시카르보닐
합성 펩타이드의 아미노산 서열은 hGH-RH(1-29)에서의 아미노산 잔기에 상응하도록 넘버링하고; 따라서, 예를 들면, 합성 펩타이드에서의 Ala4 및 R8은 hGH-RH(1-29)에서의 Ala4 및 R8 잔기와 동일한 서열내 위치를 차지한다.
또한, 본원에서는 펩타이드의 N-말단이 왼쪽에 위치하고 C-말단이 오른쪽에 위치한다는 관례에 따른다.
2. 바람직한 실시형태
본 발명의 hGH-RH 작용제는 Gh 방출을 뇌하수체 수준으로 증가시키도록 설계되었다. 본 발명의 합성 펩타이드의 특히 바람직한 실시형태는 표 1에 나타낸다:
[표 1]
B. 제조 방법
1. 합성의 개요
펩타이드는, 적합한 방법에 의해, 예를 들면, 배타적(exclusive) 고체상 기술에 의해, 부분적 고체상 기술에 의해, 단편 축합에 의해, 또는 전형적인 용액상 합성에 의해 합성한다. 예를 들면, 전용의 고체상 합성의 기술은 텍스트북["Solid Phase Peptide Synthesis", J.M. Stewart and J.D. Young, Pierce Chem. Company, Rockford, Illinois, 1984 (2nd. ed.)] 및 문헌[M. Bodanszky, "Principles of Peptide Synthesis", Springer Verlag, 1984]에 제시되어 있다. hGH-RH 작용제 펩타이드는, 고체상 합성, 예를 들면, 문헌[Merrifield, J.Am.Chem.Soc, 85 p. 2149 (1963)]에 일반적으로 기술되어 있는 것을 이용하여 바람직하게 제조되지만, 당해 분야에 공지되어 있는 다른 등가의 화학적 합성도 이전에 언급된 바와 같이 사용될 수 있다.
아미노산의 알파 아미노 그룹에서 보호되는 아미노산을 이용하여 합성을 행한다. 우레탄 유형 보호 그룹(Boc 또는 Fmoc)은 알파 아미노 그룹의 보호에 바람직하게 사용된다. 소정 경우에, 보호된 오메가-아미노산도 합성 동안에 사용된다. 또한, Boc 또는 Fmoc 보호 그룹은 오메가-아미노 그룹의 보호에도 적절하다.
고체상 합성에서, C-말단에 최종 펩타이드의 아미노아실 그룹을 형성하는 N-알파-보호되거나 N-오메가-보호된 아미노산 모이어티는, 화학적 결합을 통해 중합성 수지 지지체에 부착된다. 커플링 반응의 완료 후, 알파(또는 오메가) 아미노 보호 그룹이 선택적으로 제거되어, 바람직하게는 N-알파- (N-오메가-) 보호 그룹이 Boc인 경우에는 DCM 중의 50% TFA를 이용하거나, 또는 N-알파- (N-오메가-) 보호 그룹이 Fmoc인 경우에는 DMF 중의 20% 피페리딘에 의해, 아미노-말단에서 후속적인 커플링 반응이 발생하도록 한다. 유사하게 Boc 또는 Fmoc-보호된 알파(또는 오메가) 아미노 그룹을 갖는 나머지 아미노산은, 순차적으로 수지 상의 선행 아미노산의 유리 아미노 그룹에 커플링되어 바람직한 펩타이드 서열이 수득된다. 아미노산 잔기가 C-말단 잔기의 알파(또는 오메가) 아미노 그룹에 커플링되므로, 합성 hGH-RH 유사 펩타이드의 성장은 C-말단에서 시작하여 N-말단을 향하여 진행된다. 바람직한 서열이 수득된 경우, 펩타이드가 아실화되거나 아미노 그룹이 N-말단에서 유리된 상태로 남아 있고, 펩타이드는 지지체 중합체로부터 제거된다.
각각의 보호된 아미노산은 과량(2.5 또는 3당량)으로 사용되고, 커플링 반응은 일반적으로 DCM, DMF, 또는 이들의 혼합물 중에서 행한다. 커플링 반응의 완료 정도는 닌하이드린 반응에 의해 각각의 단계에서 모니터링한다. 불완전 커플링이 측정되는 경우에, 다음 아미노산의 커플링 전에 알파(또는 오메가) 아미노 보호 그룹의 제거 이전에, 커플링 절차를 반복하거나, 미반응 아미노 그룹의 아세틸화에 의한 캡핑을 행한다.
전형적인 합성 주기는 표 2 및 표 3에 나타낸다.
2. 지지체 중합체의 선택
hGH-RH 작용제 펩타이드는 각종 지지체 중합체, 즉, MBHA, Merrifield, PAM, Rink 아미드 또는 Wang 수지 상에 합성될 수 있다. 또한, 펩타이드는 아미노메틸, MBHA, 또는 적합한 링커로 사전에 유도체화된 기타 수지 상에도 합성될 수 있다. 이러한 링커의 예로는 C-말단 카복실 그룹의 부착을 위한 염기-불안정 4-하이드록시메틸 벤조산(HMBA) 링커, 구아니디노 그룹을 통한 아그마틴의 부착을 허용하는 산-불안정 파라-설포닐-페녹시아세틸(SPA) 링커, 또는 C-말단 메틸아미드(-NH-CH3)를 이용한 펩타이드의 합성을 가능하게 하는 산-불안정 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 링커가 있다.
아미드화된 C-말단을 갖는 펩타이드가 Boc 전략을 이용하여 합성되는 경우, 바람직한 수지는 MBHA이다. 이러한 수지에의 C-말단 아미노산의 부착은, 표 2에 기술되어 있는 표준 DIC-매개된 커플링 방법에 의해 달성될 수 있다.
C-말단 메틸아미드(-NH-CH3) 또는 에틸아미드(-NH-CH2-CH3) 변형을 갖는 펩타이드를 제조하기 위해서, 2개의 방법을 사용할 수 있다: a) Merrifield 수지에, 상승된 온도에서 불화 칼륨(KF) 또는 세슘염에 의해 매개된 커플링에 의해 Boc-보호된 C-말단 아미노산을 로딩함; C-말단 메틸아미드(-NH-CH3) 또는 에틸아미드(-NH-CH2-CH3) 변형을 갖는 펩타이드의 합성에 대해 각각 a) [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 또는 b) 3-[(에틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지를 사용함. Fmoc 보호 그룹은, 합성 전에, 이들 수지를 사용하여 표 3에 기술된 방법으로 수지로부터 제거되어야만 한다.
C-말단에 Agm을 갖는 펩타이드의 합성을 위해, 2개의 방법이 사용되어 왔다. 한 경우에 있어서, 지지체 상은 MBHA 수지 또는 아미노메틸 수지이고, Boc-Agm의 구아니디노 그룹은, 안정하지만 쉽게 개열되는 링커, 예를 들면, 파라-설포닐-페녹시아세틸(SPA) 모이어티를 통해 지지체 중합체에 결합된다. 알파-아미노-Boc-보호된 Agm은 클로로설포닐 페녹시아세트산 Cl-SO2-C6H4-O-CH2-COOH와 반응하여 Boc-Agm-SO2-C6H4-O-CH2-COOH를 형성한다. 이어서, 이러한 화합물은, 활성화 시약으로서 DIC 또는 HBTU-HOBt-DIEA를 이용하여 지지체 중합체에, 예를 들면, MBHA 수지에 커플링되어 Boc-Agm-SPA-MBHA이 얻어진다. 다른 경우에 있어서, 합성에 Agm-SO2-PS 수지(1% DVB, 100-200 mesh, 2.5 mmol/g, Advanced ChemTech (Louisville, KY))를 pH 10 내지 13에서 사용하여 Boc-Agm-SO2-수지를 형성한다.
3. 사용된 아미노산 유도체
이기능성 아미노산, 즉, 측쇄 기능성 그룹을 갖지 않는 아미노산은, 주로 이들의 N-알파 Boc- 또는 Fmoc- 유도체의 형태로 합성에 사용된다. 또한, 이기능성 오메가-아미노산도 전형적으로 이들의 N-오메가 Boc- 또는 Fmoc- 유도체의 형태로 사용된다. 따라서, Boc-Gly-OH 또는 Fmoc-Gly-OH는 전형적으로 Gly 잔기를 도입하기 위해 사용된다. 천연 발생 이기능성 아미노산은 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Phe, 및 Pro이고, 본 발명에서 사용된 몇몇의 익히 공지되어 있는 암호화되지 않은 이기능성 아미노산은 Abu, Aib, Gab, Nle, Aah, 및 Aap이다.
펩타이드의 아미노산 잔기 중 일부는, 커플링 또는 탈보호에 사용되는 시약과 반응성인 측쇄 기능성 그룹을 갖는다. 이러한 측쇄 그룹이 존재하는 경우, 적합한 보호 그룹은 이들 기능성 그룹에 결합하여, 커플링 반응 동안 발생하는 바람직하지 않은 화학적 반응을 방지한다.
특정 측쇄 보호 그룹을 선택할 때에 하기 일반 규칙에 따른다: (a) 보호 그룹은 이들의 보호 특성을 보유하는 것이 바람직하고, 커플링 조건 하에 분리되지 않으며, (b) 보호 그룹은, 합성의 각 단계에서 알파 아미노 보호 그룹을 제거하기 위한 조건 하에 안정해야만 하고, (c) 측쇄 보호 그룹은, 펩타이드 쇄를 바람직하지 않게 변경하지 않을 것인 반응 조건 하에, 바람직한 아미노산 서열의 합성의 완료시 제거가능해야만 한다.
합성에 Boc-아미노산이 사용되는 경우, 반응성 측쇄 기능성 그룹은 하기와 같이 보호될 수 있다: Arg 및 Har에 대해 Tos 또는 니트로(NO2); Asp 및 Glu에 대해 cHx 또는 Fm; His에 대해 Bom; Lys 및 Orn에 대해 2CIZ 또는 Fmoc; Ser 및 Thr에 대해 Bzl; 및 Tyr에 대해 2BrZ. Asn 및 Gln의 측쇄는 보호되지 않는다.
Fmoc 합성의 경우에, 반응성 측쇄 기능성 그룹은 하기와 같은 다른 적절한 보호 그룹에 의해 보호될 수 있다: Arg 및 Har에 대해 2,2,4,6,7-펜타메틸-디하이드로벤조푸란-5-설포닐(Pbf), 4-메톡시-2,3,6-트리메틸벤젠설포닐(Mtr), 또는 비스-Boc; Asp 및 Glu에 대해 tert-부틸(But); Asn 및 Gln에 대해 비보호 그룹 또는 트리틸(Trt) 보호; His에 대해 Trt; Lys 및 Orn에 대해 Boc 또는 4-메톡시트리틸(Mmt); Ser 및 Thr에 대해 tBu 또는 Trt; 및 Tyr에 대해 tBu 또는 2-클로로트리틸(2ClTrt). 상기 언급되어 있는 널리 공지되어 있는 암호화된 아미노산 및 암호화되지 않은 아미노산 이외에, 본 출원의 펩타이드들 중 일부는 보통의 암호화되지 않은 아미노산, 예를 들면, 호모아르기닌(Har); 오르니틴(Orn); IM-메틸-알라닌[N-Me-Ala]; N-메틸-티로신[N-Me-Tyr]; 펜타플루오로-페닐알라닌[Phe(F)5, Fpa5]을 덜 함유한다. 이들 아미노산 잔기는, 적합한 보호된 아미노산 유도체와 커플링함으로써 펩타이드에 포함된다. 사용될 수 있는 이러한 보호된 아미노산 유도체의 비-배타적 목록은 하기와 같다: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-N-Me-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Fpa5-OH, Fmoc-Har(Pbf)-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-N-Me-Ala-OH, 및 Fmoc-N-Me-Tyr(2ClTrt)-OH. 상기 언급된 암호화되지 않은 아미노산의 보호된 유도체는, Novabiochem(San Diego, CA), Advanced ChemTech(Louisville, KY), RSP 아미노산 유사체 DBA(Worcester, MA), 및 AnaSpec(San Jose, CA)을 포함한 몇몇의 시판 공급업자로부터 일반적으로 입수가능하다.
4. 아미노산
잔기의
순차적 커플링
상기 언급된 지지체 중합체를 이용하여, 그리고 보호된 C-말단 아미노산 또는 Agm 잔기의 로딩 후, 펩타이드 자체는 종래 방식으로의 고체상 합성에 의해 적합하게 구성될 수 있다. 각각의 보호된 아미노산은 수지-결합된 유리 아미노산 잔기와 관련하여 대략 3배 몰 과량으로 커플링되고, 커플링은 예를 들면, DMF-DCM(1:1) 또는 DMF 또는 DCM 단독과 같은 매질 중에서 행할 수 있다. 적절한 커플링 시약의 선택은 당해 분야의 기술 범위 내이다. 커플링 시약으로서, N,N'-디이소프로필 카르보디이미드(DIC), 또는 DIEA의 존재시에 HOBt와 결합된 HBTU가 특히 적합하다. 합성의 각 단계에서의 커플링 반응의 성공은 닌하이드린 반응에 의해 모니터링되는 것이 바람직하다. 불완전 커플링 반응이 발생하는 경우, 알파(또는 오메가) 아미노 보호 그룹의 제거 이전에, 커플링 절차를 반복하거나, 수지-결합된 미반응 아미노 잔기를 캡핑 시약을 이용하여 아세틸화한다. 적합한 캡핑 시약은 피리딘 중의 1-아세틸이미다졸 및 Ac2O이다.
5. 지지체 중합체로부터의
펩타이드의
개열
및
측쇄
보호 그룹의 제거
합성이 완료될 때, 펩타이드는 지지체 상으로부터 개열되고, 이의 측쇄 보호 그룹이 제거된다.
Boc 전략에 의해 MBHA, Merrifield, 또는 PAM 수지 상에 아미드화된 C-말단(-CONH2)을 갖거나 C-말단 카복실 그룹(-COOH)을 갖는 펩타이드가 제조되는 경우, 수지로부터의 펩타이드의 제거는 시약, 예를 들면, 액체 불화 수소(HF)로의 처리에 의해 행한다. 또한, 이는 Boc-Agm-SPA-MBHA 또는 Bos-Agm-토실-수지 상에 합성된 펩타이드에 대한 경우이다. 일부 경우, 액체 HF도 모든 나머지 측쇄 보호 그룹을 개열시킨다. 그러나, HF 처리에 대해 내성인 측쇄 보호 그룹이 펩타이드 상에 존재하는 경우, 이들 보호 그룹을 제거하기 위해서 추가의 개열 단계를 행해야만 한다. 따라서, Fm 및 Fmoc 보호 그룹은 HF 처리 이전에 또는 HF 처리 이후에 DMF 중의 20% 피페리딘으로 처리하여 제거한다.
적합하게, 건조되고 보호된 펩타이드-수지를, 1.0mL m-크레졸 및 10mL 무수불화수소/g펩타이드-수지로 이루어진 혼합물로 0℃에서 60 내지 120분 동안 처리하여 HF-불안정 측쇄 보호 그룹을 제거하는 것뿐만 아니라 수지로부터 펩타이드를 개열시킨다. 질소 기류 및 진공 하에 불화수소의 제거 후, 유리 펩타이드를 에테르로 침전시키고, 여과하고, 에테르 및 에틸 아세테이트로 세척하고, 50% 아세트산으로 추출하고, 동결건조시킨다.
Boc 전략에 의해 Merrifield, 또는 HMBA-MBHA 수지 상에 메틸- (-NH-CH3), 또는 에틸-아미드 (-NH-CH2-CH3) C-말단을 갖는 펩타이드가 제조되는 경우, 우선, 보호된 펩타이드를 메틸아민(CH3NH2) 또는 에틸아민(CH3CH2NH2) 매개된 아미노분해(aminolysis)에 의해 수지로부터 개열시킨다. 적합하게, 액체 CH3NH2 또는 CH3CH2NH2를, 건조되고 보호된 펩타이드-수지를 포함하는 냉각된 후벽형(heavy-walled) 유리 플라스크에 이동시킨다. 액체 CH3NH2 또는 CH3CH2NH2의 양은 펩타이드-수지를 덮기에 충분해야만 한다. 반응이 일어나도록 하기 위해서, 플라스크를 마개로 막고, 액체 CH3NH2 또는 CH3CH2NH2와 실온에서 3.5시간 동안 진탕시킨다. 그 후, 플라스크를 건조 냉욕에서 냉각시키고, 개구하고, 액체 CH3NH2 또는 CH3CH2NH2는 수지 및 개열된 펩타이드의 혼합물을 함유하는 고체 잔류물을 여과시키며, 상기 펩타이드는 여전히 부착된 보호 그룹을 갖는다.
펩타이드의 측쇄 보호 그룹을 제거하기 위해서, 고체 잔류물을 건조하고, 상기 기술된 바와 같이 HF 처리한다.
Fmoc 전략에 의해 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 AM 또는 3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 AM 수지 상에 메틸- (-NH-CH3), 또는 에틸-아미드 (-NH-CH2-CH3) C-말단을 갖는 펩타이드가 제조되는 경우, 각각, 보호된 펩타이드는, 개열 칵테일(cleavage cocktail)을 이용하여 수지로부터 개열된다. 단일 개열 및 탈보호 절차는 링커의 성질 및 펩타이드의 아미노산 조성 때문에 모든 펩타이드에 대해 최적이므로, 하기 개열 칵테일은 GHRH 작용제의 개열 및 탈보호에 가장 적합한 것임이 증명되었다: 94% TFA, 3% H20, 1.5% m-크레졸, 및 1.5% 페놀. 개열 칵테일은 신선하게 제조되어야 하고, 고품질 TFA 및 스캐빈저(scavenger)를 사용하여야만 한다. 개열 칵테일의 사용량은 펩타이드-수지의 양 및 펩타이드-수지의 특성 둘 다에 의존한다. 반응 동안 수지를 포화시키고 팽윤시키기 위해서, 부유하는 비드 아래에 약 2 내지 3mm의 투명한 용액으로의 충분한 칵테일 용액을 사용하여야만 한다. 일반적으로, 0.5g의 수지에 대해 5mL의 개열 칵테일을 사용한다. 반응 시간의 선택은 펩타이드의 링커 및 측쇄 보호 그룹에 의존한다. 바람직하게, GHRH 작용제의 개열 및 탈보호를 위해 3시간의 반응 시간을 사용한다. 펩타이드 침전을 유도하기 위해, 개열 혼합물을 차가운 에테르(바람직하게는 -20℃)에 적가한다. 비-펩타이드 생성물이 에테르 용액에 잔존한다. 침전된 물질은 여과 또는 원심분리에 의해 수집하고, 차가운 에테르로 3회 세척하여 임의의 잔존 스캐빈저를 제거한다. 개열되고 탈보호된 펩타이드를 50% 아세트산에 용해시키고, 여과에 의해 수지로부터 분리하고, 물로 희석한 후 용액을 동결건조시킨다.
6. 정제
조(crude) 펩타이드의 정제는 펩타이드 화학에 익히 공지되어 있는 절차를 이용하여 유효화될 수 있다. 예를 들면, 정제는, 127P 용매 모듈; UV-VIS 검출기, 모델 166P; 컴퓨터 워크스테이션과 CPU 모니터 및 프린터; 및 32-Karat 소프트웨어, 버젼 3.0이 장착된, XBridge Prep OBD™ 역상 컬럼(4.6 x 250 mm, packed with C18 실리카 겔, 300Å 공극 크기, 5μm 입자 크기)(Waters Co., Milford, MA)을 이용하는 Beckman System Gold HPLC 시스템(Beckman Coulter, Inc., Brea, CA)에서 행할 수 있다. 컬럼은, (A) 0.1% 수성 TFA 및 (B) 70% 수성 MeCN 중의 0.1% TFA로 이루어진 용매 시스템을 이용하여 선형 농도구배 방식(linear gradient mode)(예를 들면, 120분 내에 30 내지 55% B); 12mL/분의 유속으로 용리시킨다. 용리액을 220nm에서 모니터링하고, 분획물은 휴렛-팩커드(Hewlett-Packard) 모델 HP-1090 액체 크로마토그래프를 이용하여 분석용 HPLC에 의해 조사하고, 풀링하여 최대 순도를 제공한다. 분석용 HPLC는, 상기 정의된 (A) 및 (B)로 이루어진 용매 시스템으로의 등용매 용리(isocratic elution)를 이용하여, Supeico Discovery HS C18 역상 컬럼(2.1 x 50 mm, C18, 300 Å 공극 크기, 3μm 입자 크기)(Supeico, Bellefonte, PA) 상에서 0.2mL/분의 유속으로 행한다. 피크는 220 및 280nm에서 모니터링한다. 펩타이드는 분석용 HPLC에 의해 실질적으로 순수한 것(>95%)으로 판단된다. 분자량은 전기분무 질량 분광분석법(Agilent Technologies 6210 Time-of-Light LC/MS, Santa Clara, CA)에 의해 확인하고, 예상되는 아미노산 조성은 아미노산 분석에 의해 확인한다.
C. 약제학적 조성물 및 투여 방식
본 발명의 펩타이드는 약제학적으로 허용되는 비독성 염, 예를 들면, 산 부가 염의 형태로 투여될 수 있다. 이러한 산 부가 염의 예시는 염산염, 브롬화수소산염, 황산염, 인산염, 푸마르산염, 글루콘산염, 탄닌산염, 말레인산염, 아세트산염, 트리플루오로아세트산염, 시트르산염, 벤조산염, 석신산염, 알긴산염, 팜산염, 말산염, 아스코르브산염, 및 타르타르산염 등이 있다. 특히 바람직한 작용제는 저 용해성의 염, 예를 들면, 팜산염 등이다. 이들은 장기간의 활성을 나타낸다.
본 발명의 화합물은 대상체 사람 또는 동물에게 피하(s.c.), 근육내(i.m.), 또는 정맥내(i.v.); 비강내 또는 폐 흡입에 의해; 경피 전달에 의해; 또는 생체분해 적합성 중합체(예를 들면, D,L-락티드-코글라이콜리드)로부터 제형화된 데포(depot) 형태로(예를 들면, 미세캡슐, 미세과립, 또는 원통형 막대 유사 이식물) 적합하게 투여되고, 이전의 2개의 데포 방식이 바람직하다. 또한, 다른 등가의 투여 방식, 즉, 연속적 드립, 피부 패치, 데포 주사, 주입 펌프, 및 서방형(time release) 방식, 예를 들면, 미세캡슐 등도 본 발명의 범위 내이다. 임의의 생리학적으로 허용되는 주사가능한 담체로 투여되고, 생리 염수가 허용되지만, 당해 분야에 공지되어 있는 기타 담체도 사용될 수 있다.
펩타이드는 비경구, 근육내, 피하, 또는 정맥내로 약제학적으로 허용되는 담체, 예를 들면, 등장성 염수와 함께 바람직하게 투여된다. 대안으로, 펩타이드는 비강내 스프레이로서 적절한 담체와 함께 또는 폐 흡입에 의해 투여될 수 있다. 하나의 적합한 투여 경로는 생체분해 적합성 중합체, 예를 들면, 폴리-D,L-락티드-코글라이콜리드로부터 바람직한 길항제 화합물을 함유하는 미세캡슐, 미세과립 또는 원통형 이식체로서 제형화된 데포 형태이다.
필요한 펩타이드의 양은, 약제학적 조성물의 유형에 그리고 투여 방식에 의존한다. 사람 대상체가 GH-RH 작용제의 용액을 i.m. 또는 s.c. 주사에 의해 또는 비강내 스프레이의 형태 또는 폐 흡입에 의해 투여받는 경우, 전형적인 용량은 2 내지 20mg/일/환자이고, 1일 1회 제공되거나 1일 2 내지 4회 투여로 나누어진다. GH-RH 작용제가 사람 환자에게 정맥내 투여되는 경우, 전형적인 용량은 8 내지 80㎍/kg 체중/일의 범위 내이고, 1일 1 내지 4회 볼루스 주사로 나누어지거나 연속적 주입으로서 제공된다. GH-RH 작용제의 데포 제제가 예를 들면, 팜산염 또는 다른 저 가용성 염의 i.m. 주사에 의해 또는 생체분해성 중합체에 분산된 길항제 화합물을 함유하는 미세캡슐, 미세과립 또는 이식물의 i.m. 또는 s.c. 투여에 의해 사용되는 경우, 전형적인 용량은 1 내지 10mg 작용제/일/환자이다.
D.
hGH
-
RH
작용제의 의학적 적용
본 발명의 생성물을 이용하여, 온혈 동물(예를 들면, 사람)의 성장을 촉진시키고, 또한, 유액 생산 포유동물, 적합하게는 염소 및 소에만 한정되는 것은 아니지만 바람직하게는 소의 암컷의 유액 생산을 향상시킬 수 있다.
본 발명의 펩타이드는 약제학적으로 허용되는 비독성 염, 예를 들면, 산 부가 염의 형태로 투여될 수 있다. 이러한 산 부가 염의 예시는 염산염, 브롬화수소산염, 황산염, 인산염, 푸마르산염, 글루콘산염, 탄닌산염, 말레인산염, 아세트산염, 시트르산염, 벤조산염, 석신산염, 알긴산염, 팜산염, 말산염, 아스코르브산염, 및 타르타르산염 등이 있다.
본 발명의 화합물은 대상체 사람 또는 동물에게 s.c., i.m., 또는 i.v.; 비강내 또는 폐 흡입에 의해; 또는 생체분해 적합성 중합체(예를 들면, D,L-락티드-코글라이콜리드)로부터 제형화된 데포 형태(예를 들면, 미세캡슐, 미세과립, 또는 원통형 막대 유사 이식물)로 적합하게 투여되고, 이전의 2개의 데포 방식이 바람직하다. 또한, 다른 등가의 투여 방식, 즉, 연속적 드립, 데포 주사, 주입 펌프, 및 서방형(time release) 방식, 예를 들면, 미세캡슐 등도 본 발명의 범위 내이다. 임의의 생리학적으로 허용되는 주사가능한 담체로 투여되고, 생리 염수가 허용되지만, 당해 분야에 공지되어 있는 기타 담체도 사용될 수 있다.
용량 수준은, 적합하게는 주사량이 약 15 내지 약 30일 이상 지속되는 것으로 계산되는 경우의 데포 형태를 제외하고는 0.01㎍ 내지 2㎍/kg 체중/주사이다. 이들 용량 범위는 바람직하다. 비-데포 형태의 투여는 1일 1 내지 4회, 또는 유액 생산 포유동물의 경우에는 각각의 착유 후일 수 있다.
재조합-DNA 방법에 의한 성장 호르몬의 생산이 시작되었을 때까지, 뇌하수체-유도된 사람 성장 호르몬의 소량 공급은 이의 용도를 성장 호르몬 결핍증을 갖는 아동의 치료에 한정시켰다. 합성 사람 성장 호르몬의 넓은 이용가능성은, 성장 호르몬의 다른 잠재적으로 이로운 용도 및 이의 보다 많은 생리학적인 작용의 장기 연구를 가능하게 하였다. 합성 GH는 현재 내인성 성장 호르몬의 결여로 인한 성장 부전의 치료용으로 미국에서만 승인되어 있지만, 이러한 치료요법은, 또한, 전형적으로 CH 결핍이 아닌 저신장 아동을 치료하는데에도 사용되어 왔다. 그러나, hGH의 장기 치료의 비용 및 매일 s.c. 투여의 필요성은 중요한 고려 사항이다. 현재, 성장 결핍을 갖는 아동에 대한 성장 호르몬 치료요법의 비용은 체중에 따라 1년에 $10,000 내지 30,000의 범위이다. hGH를 갖는 70kg의 성인의 1주 3회 치료는 1년에 $13,800의 비용이 든다. Vance, M. L, N.Eng.J.Med 323:52-54 (1990). 따라서, 성장 호르몬 분비가 약해진 노인의 장기 성장 호르몬 치료는 상당한 개인적 및 재정적 투자를 요구할 것이다. 또한, 전세계에는 이러한 치료요법의 비용 때문에 hGH로 치료받을 수 없는 GH 결여로 인한 성장 지체를 갖는 많은 아동들이 있다. 결과적으로, GH를 방출하고 알맞은 가격을 갖는 약물을 개발하는 것에 대한 필요성이 시급하다. 내인성 성장 호르몬 분비를 증가시키기 위한 이러한 대안의 방법은 성장 호르몬-방출 호르몬의 작용성 유사체의 투여를 통한 것이다. GH-RH 작용성 유사체를 이용한 치료요법은 hGH를 이용하는 치료요법보다 훨씬 덜 비싸야만 한다. 또한, 이들 유사체에 대한 장기-작용성 전달 시스템의 개발은 이러한 새로운 치료 방식을 보다 실용적이고 편리하게 할 수 있다.
재조합 DNA기술에 의해 합성 성장 호르몬을 생산하는 능력은, 잠재적으로 한정되지 않은 양으로의 GH의 제조를 가능하게 하였다. 이것은 GH-결핍 아동의 치료를 매우 용이하게 하였다. 상기 언급된 바와 같이, 합성 hGH는 현재 충분한 내인성 성장 호르몬의 결여로 인한 성장 부전의 치료에 대해서만 승인되어 있지만, hGH는, 또한, 전형적으로 GH 결핍이 아닌 저신장 아동, 예를 들면, 터너 증후군을 갖는 소녀, 만성 신 부전증 및 중증의 성장 지체를 갖는 사춘기 전 아동; 및 비-GH 결핍인 저신장 아동을 치료하는데에도 사용되어 왔다.
유전자 조작에 의한 GH의 생산은 임상적으로 사용하기에 매우 고가이다. 특히, 이들 시판 제제가, 사용된 세균 균주 유래의 물질로 오염될 위험이 존재한다. 이들 세균 오염물질은 발열원일 수 있거나, 환자에서의 면역성 반응을 초래할 수 있다. 재조합 생성물의 정제는, 하기 다수의 성공적인 크로마토그래피 단계들에 의해 행한다. 관리 기관에 의해 도입된 극단적인 순도 기준은 다중 품질 제어 단계를 필요로 한다. 미국 특허 제6458764호.
매년 미국에서 태어난 3백만명의 아동들 중에서, 90,000명은 키에 대해 1/3 백분위 미만일 것이다. 이러한 아동들은 저신장을 갖는 것으로 라벨링될 수 있고, GH 치료에 대한 지원자일 수 있다. 사람 성장 호르몬을 이용한 치료요법은 현재 1년에 약 $20,000의 비용이 들고, 치료의 평균 길이는 약 10년이다. 치료는, 일반적으로, 환자가 허용가능한 성인 크기(5피트를 충분히 초과하는 키)에 도달하는 경우에, 또는 환자가 성적으로 성숙해지고 골단이 닫히는 경우에, 선형 성장이 용이해지는 시점에, 또는 환자가 치료에 대해 반응하는 것에 실패하는 경우에 중단될 것이다. 키에 대해 1/3 백분위 미만인 아동들 모두가 5년 과정의 hGH 치료요법을 받는다면, 키 증강 치료요법을 위한 hGH는 1년에 적어도 $80억 내지 10억의 비용이 들 것이다. Lantos J. et al., JAMA 261:1020-1024, (1989).
저신장을 갖는 아동의 내인성 생리학적 능력을 확인하여 hGH를 생산하는 것이 바람직하다. 이는, 50 내지 100㎍ 용량의 GH-RH; 50 내지 100㎍ 용량의 화학식 I의 합성 펩타이드인 GH-RH 유사체를 이용하고; 각각의 용량에 의해 일어나는 GH 반응을 검정하는 진단학적 시험으로 이루어질 수 있다.
검정 수단은, 환자로부터 인출한 혈액 샘플에 존재하는 hGH의 정량적 양을 나타낼 임의의 종래의 수단일 수 있다. 혈청 중의 GH의 농도는, 예를 들면, 문헌[Miles I. E. M. et al., Lancet ii, 492-493 (1968) 또는 O'Dell W et al., J.Lab.Clin.Med. 70, 973-80 (1967)]에 제시된 바와 같은 표준 방사선 면역 검정("RIA") 절차를 이용하여 측정한다.
시험은 하기와 같이 사용한다. 우선, GH-RH 용량을 투여한다. 30분 후, 혈액 샘플을 GH의 RIA를 위해 취한다. 각종 시판 키트(예를 들면, Nichols Institute of Diagnostics, San Juan Capistrano, Calif.) 또는 hGH의 표준 제제(예를 들면, NIAMDD-hGH-RP-1)를 GH의 RIA에 사용할 수 있다. GH-RH의 효과가 사라지기를 6 내지 24시간 대기한 후, 합성 펩타이드 GH-RH 유사체의 용량을 투여한다. GH의 방사선 면역 검정을 위한 혈액을 재차 인출한다.
제1 검정에서의 정상 hGH 반응의 존재는, 내인성 hGH 생산 능력이 존재함을 나타낸다. 또한, 이러한 결과는, 짧은 중간 과정의 GH-RH 치료요법이 필요에 따라서 적합할 수 있음을 시사한다. 제1 용량에 대한 낮은 GH 반응 또는 무반응은, GH-RH가 제2 시험 결과의 관점에서 평가되어야만 함을 나타낸다. 양호한 hGH 반응이 제2 용량에 따라 일어나는 경우, GH-RH에 의해 일어나지 않는 명백한 생리학적 hGH 생산 능력이 존재한다. 이는, GH-RH 유사체를 이용한 치료요법이 바람직할 수 있음을 나타낸다. 최종적으로, 두 시험에 대한 무반응 또는 낮은 반응은, hGH를 생산하는 생리학적 능력이 결여되어 있음을 나타내고, 따라서, 아마도 hGH를 이용한 치료요법이 필요할 것임을 시사한다.
상기 나타낸 바와 같이, 아동의 저신장은 다수의 원인으로부터 초래될 수 있고, 이들 중 어느 것도 즉시 나타나지 않는다. 이러한 병태를 지닌 모든 아동들에 대한 진단학적 시험의 사용은 저신장의 원인을 매우 명확히 할 것이다. 또한, 이러한 광범위한 스크리닝 시험은 바람직한 치료에 대한 보다 빠른 징후를 제공할 수도 있다.
글루코코르티코이드는 사람에서의 선형 성장의 잠재적 저해제이고, 성장 억제는, 스테로이드로의 천식 아동의 장기 치료의 익히 알려져 있는 위험이다. 따라서, 왜소 성장(stunted growth)은, 아동기의 글루코코르티코이드의 만성 투여의 중요한 결과이다. GH 분비의 저해는, 글루코코르티코이드의 만성 투여가 GHRH를 억제한다는 사실에 소정 정도 기인한 것이다. 이러한 저해는 시상하부의 수준 또는 그 이상에서 발생하고, 이러한 상황에서는 GH-RH를 이용한 치료만이 선형 성장을 자극할 것이다.
성장 호르몬은 노화 진행에 따라 감소하는 경향이 있고, 이는 근육 질량의 감소 및 비만을 초래할 수 있다. 연구는, 성장 호르몬 결핍증을 갖는 건강한 노인 남성 및 여성이, 6개월의 hGH 투여 후에 지방 제외 신체 질량(lean body mass)의 증가 및 지방 질량의 감소를 나타냈음을 밝혔다. 신체 조성에 대한 hGH의 장기 투여의 다른 효과는, 척추-골 밀도의 증가 및 피하 지방 두께의 증가를 포함하였다. 또한, 8일 동안의 폐경기 여성에게의 매일 GH-RH 주사가 GH 반응 및 IGF-I 수준을 증강시키고, 혈청 오스테오칼신 수준을 상승시킨다는 것이 보고되었다. 따라서, GH-RH 작용성 유사체를 이용한 치료요법은 근육, 골 및 피부 질량의 손실을 감소시키고, 일반적으로 노화 진행을 수반하는 체지방의 증가를 경감시킨다.
성장 호르몬은, 단백질 합성 및 질소 보유를 향상시키는 잠재적 동화성 호르몬(anabolic hormone)이다. GH-RH의 작용성 유사체의 만성 투여는 내인성 성장 호르몬 분비를 증가시킨다. GH-RH 작용성 유사체를 이용한 치료요법은, 예를 들면, 체중 손실을 가속화시키는 이화 상태; 중증의 신체 표면 화상을 지닌 환자에서의 조직 복구, 불유합 골절(nonunion fracture)의 치유 가속화; 및 몇몇의 심부전의 경우에 다른 영역의 의약에서의 용도를 갖는다.
모든 치료 반응이 GH으로 인한 것으로 할 수 있기 전에 장기 추적 연구가 필요하지만, 심장 질량에서의 향상 및 심장 질량 및 수축성 둘 다에서의 증가가 존재하였다. hGH를 이용한 치료요법은 심장-악액질 사이클을 방해한다. 이러한 반응은 GH를 이용한 치료요법이 성인의 이화 상태에서 주요한 역할을 갖는다는 다른 관찰과 일치한다. 이들 병태에서의 내인성 성장 호르몬 분비를 증가시키기 위한 대안의 방법은 GH-RH 작용성 유사체의 투여이다[Korpas et al., J. Clin. Endoc. Metabol. 75, 530-535, (1992)].
이들 GH-RH의 작용성 유사체는 다수의 적용을 위해 hGH를 대체할 수 있다. GH-결핍 아동은 성장의 증가로 GH-RH(1-40), GH-RH(1-29) 또는 GH-RH(1-44)에 반응한다. Thorner M. 0. et al., supra; Ross et al., supra; Takano K et al., supra; 및 Kirk et al., supra. hGH에 대해 반응하는 대부분의 아동은 GH-RH에 대해 반응할 것이다. 이는, 대부분의 GH-결핍 아동이 GH 방출에 있어서 시상하부 결함을 갖기 때문이고, 시상하부 호르몬 GH-RH의 유사체의 투여 후 GH 반응을 나타낼 것이다. 따라서, GH-RH의 반복 투여는 선형 성장을 촉진시킨다. 1일 2회 피하로 제공된 GH-RH(1-29)NH.sub.2는 GH-결핍 아동 그룹의 대략 50%에서 선형 성장을 촉진시켰다(Ross et al, 상기 인용됨). 소그룹의 중증의 GH-결핍 아동은 6(육)개월의 치료 후에 GH-RH에 반응할 것이다.
성장 지체를 갖는 아동에서의 GH-RH의 작용성 유사체의 추가의 임상학적 적용
1. 성장 호르몬 결핍증에 대한 스크리닝 시험.
2. 시상하부 GH-RH 결핍증의 치료.
3. 체질성 성장 지연.
4. 터너 증후군.
5. 가족성 저신장.
6. 만성 신 부전증 및 중증의 성장 지체를 갖는 사춘기 전의 아동.
7. 자궁내 성장 지체를 갖는 유아 및 아동.
8. 뇌하수체 또는 시상하부 병변에 대한 방사선 치료요법에 따른 GH 결핍증을 갖는 아동.
9. 글루코코르티코이드를 이용하여 장기 치료 중인 보통 이하의 비율로 성장하는 아동.
성인에서의 GH-RH의 작용성 유사체의 추가의 임상적 적용
1. 노인 환자: 근육, 골, 및 피부 질량의 손실을 감소시키고, 보통 노화 진행을 수반하는 체지방의 증가를 경감시키기 위함.
2. 이화 상태
3. 상처 치유
4. 골절의 지연된 치유
5. 골다공증
6. 비만
7. 만성 폐쇄성 폐 질환을 갖는 영양실조의 환자에서의 총 비경구 영양법에의 부가물로서
8. 심 부전
9. GH-RH 작용제는, GH 분비의 감소에 대응하기 위해 우주 비행 동안 및 우주 비행 후에 사용할 수 있다. 우주 비행의 무중력상태는 성장 호르몬의 방출을 현저하게 감소시키고, 이는, 많은 우주 비행사들이 연장 우주 비행 후에 경험하는 골 손실 및 근육 약화를 설명할 수 있다.
GH
-
RH
작용제의 치료학적 용도
hGH-RH 및 hGH-RH(1-40)을 이용한 성장 호르몬 결핍증의 성공적인 치료법은 문헌[Takano K et al., Endocrinol. Japan 35; 775-781 (1988) 및 Thorner M. O. et al., N.Engl.J.Med., 312, 4-9 (1985)]에 각각 보고되어 있다. 또한, hGh-RH(1-29)를 이용한 사람 성장 호르몬 결핍증에 대한 치료학적 처치[Ross R. J. M. et al., Lancet 1:5-8, (1987)]; 노인 남성에서의 GH 감소[Corpas et al., J. Clin. Endocrin. Metabol. 75, 530-535 (1992)]; 및 특발성 저신장[Kirk J. M. W. et al., Clinical Endocrinol. 41, 487-493 (1994)]도 문헌에 보고되어 있다. hGH-RH의 이전의 유사체가, 저수준의 GH와 관련된 병태를 성공적으로 치료하였으므로, 본원에 기술되어 있는 신규 합성 hGH-RH 펩타이드도 또한 GH의 방출을 유도하고 이들 병태에 대한 신규 치료학적 처치임은 놀랍지 않다.
실제로, 치료제로서의 이러한 적합성은, 하기에 보고되어 있는 생체내 시험에 의해 확인한다. 이러한 시험은, 당해 분야 숙련가가, 사람을 포함하는 고등 포유동물을 치료할 것으로 예측할 수 있는 결과의 합리적인 예측인 것으로 생각된다. 하기 결과로부터, 당해 분야 숙련가는, 성장 호르몬 결핍증에 대해, 그리고, 극저수준의 GH으로부터 생기는 다수의 다른 병태에 대해 사람을 치료학적으로 처치하는데 신규한 합성 hGH-RH 유사체가 유용함을 예측할 것이다. 따라서, 본 발명은, 체중 kg당 1일 0.01 .mu.g 내지 2 .mu.g의 펩타이드를 투여함을 포함하는 사람 성장 호르몬 결핍증을 치료하는 방법을 추가로 포함한다.
합성 펩타이드는, 부형제와 함께 약제학적 용량형으로 제형화되어, 치료학적 또는 진단학적 목적을 위해 사람 또는 동물에게 투여될 수 있다. 보다 구체적으로, 합성 펩타이드를 사용하여 온혈 동물, 예를 들면, 사람의 성장을 촉진시켜, 내인성 GH의 생체내 합성 및/또는 방출을 자극함으로써 사람 성장 결핍증을 치료하도록 하고; 만성 신 부전증으로 인한 중증의 성장 지체와 같은 소정 생리학적 병태를 치료하도록 하고; 노화, 소정 효과를 상쇄, 예를 들면, 근육 손실 및 골 손실을 감소시키도록 하고; 치유 및 조직 복구를 가속화시키도록 하고; 공급물 이용을 향상시킴으로써 지방 대신에 근육 획득을 선호하는 지방 제외/지방 비율을 증가시키도록 하고; 그리고, 유액 생산 소에서의 유액 생산을 향상시키도록 할 수 있다. 또한, 합성 펩타이드는, hGH를 생산하는 내인생 생리학적 능력을 확인하는 방법에서 사용될 수 있다.
실시예
본 발명은, 설명의 목적을 위해서만 제시되는 하기 실시예와 관련하여 설명된다. 실시예에 있어서, 구체적으로 언급된 경우를 제외하고는 L-입체배치로의 광학 활성 보호된 아미노산을 사용한다. 하기 실시예는 고체상 기술에 의해 신규한 GH-RH 길항제를 합성하는 적합한 방법을 제시한다.
실시예
I
N-Me-Tyr1-Ala2-Asp3-Ala4-Ile5-Fpa56-Thr7-Gln8-Ser9-Tyr10-Arg11-Orn12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Orn21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-Asp28-Agm29 (펩타이드 20103)
[N-Me-Tyr1, Fpa56, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Agm29]hGH-RH(1-29) (서열번호 2)
합성은, 수동의 고체상 펩타이드 합성 장치를 이용하여 단계별 방식으로 행한다. C-말단에 Agm을 갖는 펩타이드의 합성을 위해, 2개의 방법이 사용되어 왔다. 한 경우에 있어서, 합성의 출발 물질은, 캘리포니아 펩타이드 리서치, 인코포레이티드.(California Peptide Research, Inc.)(Napa, CA)로부터 시판되는 것을 수득한, 0.3mmol/g의 치환을 갖는 Boc-아그마틴-NG-설포닐-페녹시아세틸-MBHA(Boc-Agm-SPA-MBHA) 수지이다. 이러한 수지의 합성은 미국 특허 제4,914,189호 및 과학 문헌(Zarandi M, Serfozo P, Zsigo J, Bokser L, Janaky T, Olsen DB, Bajusz S, Schally AV, Int. J. Peptide Protein Res. 39: 211-217, 1992)에 기술되어 있고, 이들 문헌은 인용에 의해 본원에 포함된다. 간략하게, Boc-Agm-SPA-MBHA 수지(1.67g, 0.50mmol)를 DCM에서 사전-팽윤시키고, 이어서, Boc 보호 그룹을 제거하고 다음 아미노산의 커플링을 위한 펩타이드-수지를 제조하기 위해서, 표 2에 기술되어 있는 탈보호 및 중화 프로토콜을 행한다. 다른 경우에 있어서, Agm-설포닐-폴리스티렌(PS) 수지[1% DVB, 100-200 mesh, 0.74mmol/g, American Peptide Company(Sunnyvale, CA)]를 사용한다. 간략하게, Agm-설포닐-PS 수지(680mg, 0.50mmol)를 DCM 중의 5% DIEA로 중화시키고, 표 2에 기술되어 있는 프로토콜에 따라 세척한다. 수동 고체상 펩타이드 합성 장치에서, DMF-DCM 중의 Boc-Asp(OcHx)-OH(475mg, 1.5mmol)의 용액(1:1)을 중화된 수지 및 DIC(235μL, 1.5mmol)와 함께 1시간 동안 진탕한다. 이어서, Boc 보호 그룹을 제거하고 다음 아미노산의 커플링을 위한 펩타이드-수지를 제조하기 위해서, 표 2에 기술되어 있는 탈보호 및 중화 프로토콜을 행한다. 상기 경우들 둘 다에서, 수동 고체상 펩타이드 합성 장치를 이용하여 단계적 방식으로 합성을 계속하고, 펩타이드 쇄는, 수지 상에 나타낸 순서대로 하기 보호된 아미노산을 커플링함으로써 단계적으로 만들어져 바람직한 펩타이드 서열이 수득된다: Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Fpa5-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
이들 보호된 아미노산 잔기(또한, NovaBiochem, Advanced Chemtech, Bachem, 및 Peptides International로부터 시판됨)는 익히 허용되어 있는 종래 기술에 따라 상기에 나타낸다. 특정 아미노산의 측쇄 기능성 그룹에 적합한 보호 그룹은 괄호 안에 나타낸다. 상기 화학식에서의 OH 그룹은, 각각의 잔기의 카복실 말단이 유리되어 있음을 나타낸다.
보호된 아미노산(각각 1.5mmol)은, 이들의 사전 제조된 HOBt 에스테르와 커플링되는 Boc-Asn-OH 및 Boc-Gln-OH를 제외하고는 DIC(235μL, 1.5mmol)와 커플링된다.
수지로부터 펩타이드를 개열하고 이를 탈보호하기 위해서, 250mg의 건조된 펩타이드 수지의 일부를 0.5mL의 m-크레졸 및 5mL의 불화 수소(HF)와 함께 0℃에서 2시간 동안 교반한다. 질소 기류 및 진공 하의 HF의 증발 후, 잔류물을 건조 디에틸 에테르 및 에틸 아세테이트로 세척한다. 개열되고 탈보호된 펩타이드를 50% 아세트산에 용해시키고, 여과에 의해 수지로부터 분리한다. 물로의 희석 및 동결건조 후, 68mg의 조 생성물을 수득한다.
조 펩타이드를, Supelco Discovery HS C18 역상 컬럼(2.1mm x 5cm, C18 실리카 겔로 팩킹됨, 300Å 공극 크기, 3㎛ 입자 크기)(Supelco, Bellefonte, PA)이 장착된 휴렛-팩커드 모델 HP-1090 액체 크로마토그래프를 이용하여 분석용 HPLC에 의해 조사하고, 풀링하여 최대 순도를 제공한다. (A) 0.1% 수성 TFA 및 (B) 70% 수성 MeCN 중의 0.1% TFA로 이루어진 용매 시스템을 이용하는 선형 농도구배 용리(예를 들면, 40 내지 70% B)를 사용하고, 유속은 0.2mL/분이다. 정제는, 127P 용매 모듈; UV-VIS 검출기, 모델 166P; 컴퓨터 워크스테이션과 CPU 모니터 및 프린터; 및 32-Karat 소프트웨어, 버젼 3.0이 장착된, Beckman System Gold HPLC 시스템(Beckman Coulter, Inc., Brea, CA)에서 행할 수 있다. 68mg의 조 펩타이드를 AcOH/H2O에 용해시키고, 교반하고, 여과하고, XBridge Prep OBD™ 역상 컬럼(4.6 x 250mm, C18 실리카 겔로 팩킹됨, 300Å 공극 크기, 5㎛ 입자 크기)(Waters Co., Milford, MA)에 가한다. 컬럼을 상기 기술된 용매 시스템으로 선형 농도구배 방식(예를 들면, 120분 내에 40 내지 60% B); 유속 12mL/분으로 용리한다. 용리액을 220nm에서 모니터링하고, 분획물은 분석용 HPLC에 의해 조사한다. 95% 초과의 순도를 갖는 분획물을 풀링하고, 동결건조시켜 18mg의 순수한 생성물을 제공한다. 분석용 HPLC는, 상기 기술된 용매 시스템으로의 등용매 용리를 이용하여, 상기 기술된 Supeico Discovery HS C18 역상 컬럼 상에서 0.2mL/분의 유속으로 행한다. 피크는 220 및 280nm에서 모니터링한다. 생성물은 분석용 HPLC에 의해 실질적으로 순수한 것(>95%)으로 판단된다. 분자량은 전기분무 질량 분광분석법에 의해 확인하고, 예상되는 아미노산 조성은 아미노산 분석에 의해 확인한다.
상기 절차에 따라서, 펩타이드 20105, 펩타이드 20107, 펩타이드 20109, 펩타이드 20110, 펩타이드 20111, 펩타이드 20113, 펩타이드 20115, 펩타이드 20350, 펩타이드 20351, 펩타이드 20356, 펩타이드 20357, 펩타이드 20358, 펩타이드 20359, 펩타이드 20360, 펩타이드 20361, 펩타이드 20363, 펩타이드 20367, 펩타이드 20370, 펩타이드 20371, 펩타이드 20372, 펩타이드 20373, 펩타이드 20374, 펩타이드 20375, 펩타이드 20376는, 이들 펩타이드 또한 펩타이드 서열 내의 다른 아미노산 치환 및 이들의 N-말단에서의 아실 모이어티를 함유함을 제외하고는 펩타이드 20103과 동일한 방식으로 합성한다. 이들 합성에 대한 상세한 설명은 하기에 제시된다.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Fpa56, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Agm29]hGH-RH(1-29)인 펩타이드 20105의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 Agm-SO2-PS 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Fpa5-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [[N-Me-Tyr1, Fpa56, Ala8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Agm29]hGH-RH(1-29)(서열번호 3)인 펩타이드 20107의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 Agm-SO2-PS 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Fpa5-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Fpa56, Ala8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Agm29]hGH-RH(1-29)인 펩타이드 20109의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 Agm-SO2-PS 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Fpa5-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Fpa56, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Agm29]hGH-RH(1-29)인 펩타이드 20110의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 Agm-SO2-PS 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Fpa5-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Fpa56, Thr8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Agm29]hGH-RH(1-29)인 펩타이드 20111의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 Agm-SO2-PS 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Fpa5-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, Fpa56, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Agm29]hGH-RH(1-29)(서열번호 4)인 펩타이드 20113의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 Agm-SO2-PS 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc- Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Fpa5-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, Fpa56, Thr8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Agm29]hGH-RH(1-29)(서열번호 5)인 펩타이드 20115의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 Agm-SO2-PS 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Fpa5-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Fpa56, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Agm29]hGH-RH(1-29)인 펩타이드 20117의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 Agm-SO2-PS 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Fpa5-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [Dat1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Agm29]hGH-RH(1-29)인 펩타이드 20350의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 Agm-SO2-PS 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Fpa5-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [Ac-N-Me-Tyr1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Agm29]hGH-RH(1-29)인 펩타이드 20351의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 Agm-SO2-PS 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Fpa5-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Ac-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Agm29]hGH-RH(1-29)(서열번호 6)인 펩타이드 20356의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 Agm-SO2-PS 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Fpa5-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [Dat1, D-Ala2, N-Me-Ala8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Agm29]hGH-RH(1-29)인 펩타이드 20357의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 Agm-SO2-PS 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-N-Me-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Fpa5-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [Dat1, D-Ala2, N-Me-Ala8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Agm29]hGH-RH(1-29)인 펩타이드 20358의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 Agm-SO2-PS 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-N-Me-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Fpa5-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Fpa56, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Agm]hGH-RH(1-29)인 펩타이드 20359의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 Agm-SO2-PS 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Fpa5-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Thr8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Agm29]hGH-RH(1-29)인 펩타이드 20360의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 Agm-SO2-PS 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Agm29]hGH-RH(1-29)인 펩타이드 20361의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 Agm-SO2-PS 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Agm29]hGH-RH(1-29)인 펩타이드 20367의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 Agm-SO2-PS 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Agm29]hGH-RH(1-29)(서열번호 7)인 펩타이드 20370의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 Agm-SO2-PS 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, Thr8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Agm29]hGH-RH(1-29)(서열번호 8)인 펩타이드 20371의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 Agm-SO2-PS 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Agm29]hGH-RH(1-29)(서열번호 9)인 펩타이드 20372의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 Agm-SO2-PS 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Agm29]hGH-RH(1-29)(서열번호 10)인 펩타이드 20373의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 Agm-SO2-PS 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Agm29]hGH-RH(1-29)(서열번호 11)인 펩타이드 20374의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 Agm-SO2-PS 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, Thr8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Agm29]hGH-RH(1-29)(서열번호 12)인 펩타이드 20375의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 Agm-SO2-PS 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Agm29]hGH-RH(1-29)(서열번호 13)인 펩타이드 20376의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 Agm-SO2-PS 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
펩타이드 20105, 펩타이드 20107, 펩타이드 20109, 펩타이드 20110, 펩타이드 20111, 펩타이드 20113, 펩타이드 20115, 펩타이드 20350, 펩타이드 20351, 펩타이드 20356, 펩타이드 20357, 펩타이드 20358, 펩타이드 20359, 펩타이드 20360, 펩타이드 20361, 펩타이드 20363, 펩타이드 20367, 펩타이드 20370, 펩타이드 20371, 펩타이드 20372, 펩타이드 20373, 펩타이드 20374, 펩타이드 20375, 펩타이드 20376의 반-분취용(semipreparative) HPLC에 의한 HF 개열 및 탈보호, 및 후속적인 정제는 펩타이드 20103의 경우에 기술되어 있는 바와 같이 행한다. 정제된 화합물은 분석용 HPLC에 의해 실질적으로 순수한 것(>95%)으로 판단된다. 이들의 분자량은 전기분무 질량 분광분석법에 의해 확인하고, 예상되는 아미노산 조성은 아미노산 분석에 의해 확인한다.
실시예
II
Dat1-D-Ala2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe6-Thr7-Asn8-Ser9-Tyr10-Arg11-Orn12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Orn21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-Asp28-Arg29-Amc30-NH2 (펩타이드 21300) [Dat1, D-Ala2, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Amc30]hGH-RH(1-30)NH2.
합성은, 수동의 고체상 펩타이드 합성 장치를 이용하여 단계별 방식으로 행한다. 간략하게, 파라-메틸벤즈하이드릴아민(MBHA) 수지(100-200mesh, 1% DVB, 0.7mmol/g, Advanced Chemtech, Louisville, KY)(350mg, 0.50mmol)를 DCM 중의 5% DIEA로 중화시키고, 표 2에 기술되어 있는 프로토콜에 따라 세척한다. 수동 고체상 펩타이드 합성 장치에서, DMF-DCM 중의 Boc-Amc-OH(390mg, 1.5mmol)의 용액(1:1)을 중화된 MBHA 수지 및 DIC(235μL, 1.5mmol)와 함께 1시간 동안 진탕한다. 커플링 반응의 완료가 음성 닌하이드린 시험에 의해 증명된 후에, Boc 보호 그룹을 제거하고 다음 아미노산의 커플링을 위한 펩타이드-수지를 제조하기 위해서, 표 2에 기술되어 있는 탈보호 및 중화 프로토콜을 행한다. 합성을 계속하고, 펩타이드 쇄는, 수지 상에 나타낸 순서대로 하기 보호된 아미노산들을 커플링함으로써 단계적으로 만들어져 바람직한 펩타이드 서열이 수득된다: Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
이들 보호된 아미노산 잔기(또한, NovaBiochem, Advanced Chemtech, Bachem, 및 Peptides International로부터 시판됨)는 익히 허용되어 있는 종래 기술에 따라 상기에 나타낸다. 특정 아미노산의 측쇄 기능성 그룹에 적합한 보호 그룹은 괄호 안에 나타낸다. 상기 화학식에서의 OH 그룹은, 각각의 잔기의 카복실 말단이 유리되어 있음을 나타낸다. 보호된 아미노산(각각 1.5mmol)은, 이들의 사전 제조된 HOBt 에스테르와 커플링되는 Boc-Asn-OH 및 Boc-Gln-OH를 제외하고는 DIC(235μL, 1.5mmol)와 커플링된다.
수지로부터 펩타이드를 개열하고 이를 탈보호하기 위해서, 250mg의 건조된 펩타이드 수지의 일부를 0.5mL의 m-크레졸 및 5mL의 불화 수소(HF)와 함께 0℃에서 2시간 동안 교반한다. 질소 기류 및 진공 하의 HF의 증발 후, 잔류물을 건조 디에틸 에테르 및 에틸 아세테이트로 세척한다. 개열되고 탈보호된 펩타이드를 50% 아세트산에 용해시키고, 여과에 의해 수지로부터 분리한다. 물로의 희석 및 동결건조 후, 130mg의 조 생성물을 수득한다.
조 펩타이드를, Supelco Discovery HS C18 역상 컬럼(2.1mm x 5cm, C18 실리카 겔로 팩킹됨, 300Å 공극 크기, 3㎛ 입자 크기)(Supelco, Bellefonte, PA)이 장착된 휴렛-팩커드 모델 HP-1090 액체 크로마토그래프를 이용하여 분석용 HPLC에 의해 조사한다. (A) 0.1% 수성 TFA 및 (B) 70% 수성 MeCN 중의 0.1% TFA로 이루어진 용매 시스템을 이용하는 선형 농도구배 용리(예를 들면, 40 내지 70% B)를 사용하고, 유속은 0.2mL/분이다. 정제는, 127P 용매 모듈; UV-VIS 검출기, 모델 166P; 컴퓨터 워크스테이션과 CPU 모니터 및 프린터; 및 32-Karat 소프트웨어, 버젼 3.0이 장착된, Beckman System Gold HPLC 시스템(Beckman Coulter, Inc., Brea, CA)에서 행한다. 130mg의 조 펩타이드를 AcOH/H2O에 용해시키고, 교반하고, 여과하고, XBridge Prep OBD™ 역상 컬럼(4.6 x 250mm, C18 실리카 겔로 팩킹됨, 300Å 공극 크기, 5㎛ 입자 크기)(Waters Co., Milford, MA)에 가한다. 컬럼을 상기 기술된 용매 시스템으로 선형 농도구배 방식(예를 들면, 120분 내에 40 내지 60% B); 유속 12mL/분으로 용리한다. 용리액을 220nm에서 모니터링하고, 분획물은 분석용 HPLC에 의해 조사한다. 95% 초과의 순도를 갖는 분획물을 풀링하고, 동결건조시켜 28mg의 순수한 생성물을 제공한다. 분석용 HPLC는, 상기 기술된 용매 시스템으로의 등용매 용리를 이용하여, 상기 기술된 Supelco Discovery HS C18 역상 컬럼 상에서 0.2mL/분의 유속으로 행한다. 피크는 220 및 280nm에서 모니터링한다. 생성물은 분석용 HPLC에 의해 실질적으로 순수한 것(>95%)으로 판단된다. 분자량은 전기분무 질량 분광분석법에 의해 확인하고, 예상되는 아미노산 조성은 아미노산 분석에 의해 확인한다.
상기 절차에 따라서, 펩타이드 21301, 펩타이드 21303, 펩타이드 21304, 펩타이드 21305, 펩타이드 21306, 펩타이드 21307, 펩타이드 21308, 펩타이드 21309, 펩타이드 21310, 펩타이드 21311, 펩타이드 22325, 펩타이드 22326, 펩타이드 22327, 펩타이드 22328, 펩타이드, 22329, 펩타이드 22330, 펩타이드 22331, 펩타이드 22332, 펩타이드, 22334, 펩타이드 22335, 펩타이드 22336, 펩타이드 22337, 펩타이드 23250, 펩타이드 23251, 펩타이드 23252, 펩타이드 23253, 펩타이드 23254, 펩타이드 23255, 펩타이드 23256, 펩타이드 23257, 펩타이드 23258, 펩타이드 23259, 펩타이드 23260, 펩타이드 23261, 펩타이드 23262, 펩타이드 23263, 펩타이드 23264, 펩타이드 23265, 펩타이드 24340, 펩타이드 24341, 펩타이드 24342, 펩타이드 24344, 펩타이드 24345, 펩타이드 24346, 펩타이드 24347, 펩타이드 24348, 펩타이드 25501, 펩타이드 25502, 펩타이드 25503, 펩타이드 25504, 펩타이드 25506, 펩타이드 25508, 펩타이드 25516, 펩타이드 26802, 펩타이드 26803, 펩타이드 2680은, 이들 펩타이드 또한 펩타이드 서열 내의 다른 아미노산 치환 및/또는 이들의 C-말단에서의 상이한 알파- 또는 오메가-아미노산 모이어티를 함유함을 제외하고는 펩타이드 20300과 동일한 방식으로 합성한다. 이들 합성에 대한 상세한 설명은 하기에 제시된다.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Amc30]hGH-RH(1-30)NH2(서열번호 14)인 펩타이드 21301의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Amc-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Amc30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 21303의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Amc-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [Dat1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Amc30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 21304의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Amc-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Amc30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 21305의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Amc-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [Dat1, D-Ala2, Thr8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Amc30]hGH-RH(1-30)NH)인 펩타이드 21306의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Amc-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Thr8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Amc30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 21307의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Amc-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [Dat1, D-Ala2, Ala8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Amc30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 21308의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Amc-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Ala8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Amc30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 21309의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Amc-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [Dat1, D-Ala2, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, Asp28, Amc30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 21310의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Amc-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, Asp28, Amc30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 21311의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Amc-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Apa30]hGH-RH(1-30)NH2(서열번호 15)인 펩타이드 22325의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Apa-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Apa30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 22326의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Apa-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [Dat1, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Apa30]hGH-RH(1-30)NH2(서열번호 16)인 펩타이드 22327의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Apa-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [Ac-Tyr1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Apa30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 22328의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Apa-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Ac-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Apa30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 22329의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Apa-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Thr8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Apa30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 22330의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Apa-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Ala8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Apa30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 22331의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Apa-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Apa30]hGH-RH(1-30)NH2(서열번호 17)인 펩타이드 22332의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Apa-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Apa30]hGH-RH(1-30)NH2(서열번호 18)인 펩타이드 22334의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Apa-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc- Ser(Bzl)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, Thr8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Apa30]hGH-RH(1-30)NH2(서열번호 19)인 펩타이드 22335의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Apa-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, Ala8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Apa30]hGH-RH(1-30)NH2(서열번호 20)인 펩타이드 22336의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Apa-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Cpa6, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Apa30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 22337의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Apa-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Cpa-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [Dat1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Har30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 23250의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [Dat1, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Har30]hGH-RH(1-30)NH2(서열번호 21)인 펩타이드 23251의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [Dat1, D-Ala2, Orn12, Abu15, Orn21, Nile27, Asp28, Har30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 23252의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [Dat1, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Har30]hGH-RH(1-30)NH2(서열번호 22)인 펩타이드 23253의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [Dat1, D-Ala2, Thr8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Har30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 23254의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [Dat1 Thr8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Har30]hGH-RH(1-30)NH2(서열번호 23)인 펩타이드 23255의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [Dat1, D-Ala2, Ala8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Har30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 23256의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [Dat1, Ala8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Har30]hGH-RH(1-30)NH2(서열번호 24)인 펩타이드 23257의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Har30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 23258의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Har30]hGH-RH(1-30)NH2(서열번호 25)인 펩타이드 23259의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Har30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 23260의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Har30]hGH-RH(1-30)NH2(서열번호 26)인 펩타이드 23261의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Thr8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Har30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 23262의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, Thr8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Har30]hGH-RH(1-30)NH2(서열번호 27)인 펩타이드 23263의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Ala8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Har30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 23264의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, Ala8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Har30]hGH-RH(1-30)NH2(서열번호 28)인 펩타이드 23265의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Aha30]hGH-RH(1-30)NH2(서열번호 29)인 펩타이드 24340의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Aha-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Aha30]hGH-RH(1-30)NH2)인 펩타이드 24341의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Aha-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [Dat1, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Aha30]hGH-RH(1-30)NH2(서열번호 30)인 펩타이드 24342의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Aha-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [Dat1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Aha30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 24344의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Aha-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Aha30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 24345의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Aha-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Aha30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 24346의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Aha-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Thr8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Aha30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 24347의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Aha-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Ala8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Aha30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 24348의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Aha-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Gab30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 25501의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Gab-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [Dat1, D-Ala2, Fpa56, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Gab30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 25502의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Gab-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Fpa5-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, Abu2, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Gab30]hGH-RH(1-30)NH2(서열번호 31)인 펩타이드 25503의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Gab-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Abu-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [Dat1, D-Abu2, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Gab30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 25504의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Gab-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Abu-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Abu2, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Gab30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 25506의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Gab-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Abu-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [Tfa-Tyr1, D-Ala2, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Gab30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 25508의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Gab-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Gab30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 25516의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Gab-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [Dat1, D-Ala2, Thr8, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, Ada30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 26802의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Ada-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Gln8, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, Ada30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 26803의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Ada-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Ada30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 26804의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Ada-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
펩타이드 21301, 펩타이드 21303, 펩타이드 21304, 펩타이드 21305, 펩타이드 21306, 펩타이드 21307, 펩타이드 21308, 펩타이드 21309, 펩타이드 21310, 펩타이드 21311, 펩타이드 22325, 펩타이드 22326, 펩타이드 22327, 펩타이드 22328, 펩타이드 22329, 펩타이드 22330, 펩타이드 22331, 펩타이드 22332, 펩타이드 22334, 펩타이드 22335, 펩타이드 22336, 펩타이드 22337, 펩타이드 23250, 펩타이드 23251, 펩타이드 23252, 펩타이드 23253, 펩타이드 23254, 펩타이드 23255, 펩타이드 23256, 펩타이드 23257, 펩타이드 23258, 펩타이드 23259, 펩타이드 23260, 펩타이드 23261, 펩타이드 23262, 펩타이드 23263, 펩타이드 23264, 펩타이드 23265, 펩타이드 24340, 펩타이드 24341, 펩타이드 24342, 펩타이드 24344, 펩타이드 24345, 펩타이드 24346, 펩타이드 24347, 펩타이드 24348, 펩타이드 25501, 펩타이드 25502, 펩타이드 25503, 펩타이드 25504, 펩타이드 25506, 펩타이드 25508, 펩타이드 25516, 펩타이드 26802, 펩타이드 26803, 펩타이드 2680의 반-분취용 HPLC에 의한 HF 개열 및 탈보호, 및 후속적인 정제는 펩타이드 21300의 경우에 기술되어 있는 바와 같이 행한다. 정제된 화합물은 분석용 HPLC에 의해 실질적으로 순수한 것(>95%)으로 판단된다. 이들의 분자량은 전기분무 질량 분광분석법에 의해 확인하고, 예상되는 아미노산 조성은 아미노산 분석에 의해 확인한다.
실시예 III
Dat1-D-Ala2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe6-Thr7-Asn8-Ser9-Tyr10-Arg11-Orn12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Orn21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-Asp28-Arg29-NH-CH3 (펩타이드 27400)
[Dat1, D-Ala2, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3
합성은, 수동의 고체상 펩타이드 합성 장치를 이용하여 단계별 방식으로 행한다. 간략하게, [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 AM 수지(Nova Biochem, La Jolla, CA)(750mg, 0.50mmol)를 DMF 중의 20% 피페리딘으로 5분 및 15분 동안 탈보호시키고, 표 3에 기술되어 있는 프로토콜에 따라 세척한다. 수동 고체상 펩타이드 합성 장치에서, DMF 중의 Fmoc-Arg(Pbf)-OH(975mg, 1.5mmol)의 용액(1:1)을 세척된 수지 및 DIC(235μL, 1.5mmol)와 함께 1시간 동안 진탕한다. 수지를 DMF로 3회 세척한 후, 상기 기술된 바와 같이 커플링 반응을 반복하였다. 반복된 커플링 후, 및 반응의 완료가 음성 닌하이드린 시험에 의해 증명된 후에, Fmoc 보호 그룹을 제거하고 다음 아미노산의 커플링을 위한 펩타이드-수지를 제조하기 위해서, 표 3에 기술되어 있는 탈보호 및 중화 프로토콜을 행한다.
합성을 계속하고, 펩타이드 쇄는, 수지 상에 나타낸 순서대로 하기 보호된 아미노산들을 커플링함으로써 단계적으로 만들어져 바람직한 펩타이드 서열이 수득된다: Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Dat-OH.
이들 보호된 아미노산 잔기(또한, NovaBiochem, Advanced Chemtech, Bachem, 및 Peptides International로부터 시판됨)는 익히 허용되어 있는 종래 기술에 따라 상기에 나타낸다. 특정 아미노산의 측쇄 기능성 그룹에 적합한 보호 그룹은 괄호 안에 나타낸다. 상기 화학식에서의 OH 그룹은, 각각의 잔기의 카복실 말단이 유리되어 있음을 나타낸다.
보호된 아미노산(각각 1.5mmol)은, HBTU와 커플링되는 Fmoc-Asn(Trt)-OH 및 Fmoc-Gln(Trt)-OH를 제외하고는 DIC(235μL, 1.5mmol)와 커플링된다.
수지로부터 펩타이드를 개열하고 이를 탈보호하기 위해서, 250mg의 건조된 펩타이드 수지의 일부를 2.5mL의 개열 칵테일(94% TFA, 3% H2O, 1.5% m-크레졸, 및 1.5% 페놀)과 함께 실온에서 3시간 동안 교반한다. 펩타이드 침전을 유도하기 위해서, 개열 혼합물을 적가하여 에테르를 냉각시킨다(바람직하게는 -20℃). 침전된 물질을 여과 또는 원심분리에 의해 수집하고, 차가운 에테르로 3회 세척한다. 개열되고 탈보호된 펩타이드를 50% 아세트산에 용해시키고, 여과에 의해 수지로부터 분리한다. 물로의 희석 및 동결건조 후, 118mg의 조 생성물을 수득한다.
조 펩타이드를, Supelco Discovery HS C18 역상 컬럼(2.1mm x 5cm, C18 실리카 겔로 팩킹됨, 300Å 공극 크기, 3㎛ 입자 크기)(Supelco, Bellefonte, PA)이 장착된 휴렛-팩커드 모델 HP-1090 액체 크로마토그래프를 이용하여 분석용 HPLC에 의해 조사한다. (A) 0.1% 수성 TFA 및 (B) 70% 수성 MeCN 중의 0.1% TFA로 이루어진 용매 시스템을 이용하는 선형 농도구배 용리(예를 들면, 40 내지 70% B)를 사용하고, 유속은 0.2mL/분이다. 정제는, 127P 용매 모듈; UV-VIS 검출기, 모델 166P; 컴퓨터 워크스테이션과 CPU 모니터 및 프린터; 및 32-Karat 소프트웨어, 버젼 3.0이 장착된, Beckman System Gold HPLC 시스템(Beckman Coulter, Inc., Brea, CA)에서 행한다. 118mg의 조 펩타이드를 AcOH/H2O에 용해시키고, 교반하고, 여과하고, XBridge Prep OBD™ 역상 컬럼(4.6 x 250mm, C18 실리카 겔로 팩킹됨, 300Å 공극 크기, 5㎛ 입자 크기)(Waters Co., Milford, MA)에 가한다. 컬럼을 상기 기술된 용매 시스템으로 선형 농도구배 방식(예를 들면, 120분 내에 40 내지 60% B); 유속 12mL/분으로 용리한다. 용리액을 220nm에서 모니터링하고, 분획물은 분석용 HPLC에 의해 조사한다. 95% 초과의 순도를 갖는 분획물을 풀링하고, 동결건조시켜 19mg의 순수한 생성물을 제공한다. 분석용 HPLC는, 상기 기술된 용매 시스템으로의 등용매 용리를 이용하여, 상기 기술된 Supelco Discovery HS C18 역상 컬럼 상에서 0.2mL/분의 유속으로 행한다. 피크는 220 및 280nm에서 모니터링한다. 생성물은 분석용 HPLC에 의해 실질적으로 순수한 것(>95%)으로 판단된다. 분자량은 전기분무 질량 분광분석법에 의해 확인하고, 예상되는 아미노산 조성은 아미노산 분석에 의해 확인한다.
상기 절차에 따라서, 펩타이드 27401, 펩타이드 27403, 펩타이드 27404, 펩타이드 27405, 펩타이드 27406, 펩타이드 27407, 펩타이드 27408, 펩타이드 27409, 펩타이드 27410, 펩타이드 27411, 펩타이드 412, 펩타이드 27413, 펩타이드 27414, 펩타이드 27415, 펩타이드 27416, 펩타이드 27417, 펩타이드 27418, 펩타이드 27419, 펩타이드 27422, 펩타이드 27423, 펩타이드 27424, 펩타이드 27425, 펩타이드 27440, 펩타이드 27441, 펩타이드 27442, 펩타이드 27443, 펩타이드 27444, 펩타이드 27445, 펩타이드 27446, 펩타이드 27447, 펩타이드 27448, 펩타이드 27449, 펩타이드 27450, 펩타이드 27451은, 이들 펩타이드 또한 펩타이드 서열 내의 다른 아미노산 치환도 함유함을 제외하고는 펩타이드 27400과 동일한 방식으로 합성한다. 이들 합성에 대한 상세한 설명은 하기에 제시된다.
화학 구조가 [Dat1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH-CH3인 펩타이드 27401의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc- Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3인 펩타이드 27403의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc- Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Fpa56, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3인 펩타이드 27404의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc- Thr(tBu)-OH, Fmoc-Fpa5-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27]hGH-RH(1-29)NH-CH3(서열번호 32)인 펩타이드 27405의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3(서열번호 33)인 펩타이드 27406의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [Dat1, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3(서열번호 34)인 펩타이드 27407의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc- Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [Dat1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3인 펩타이드 27408의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc- Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3인 펩타이드 27409의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc- Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Thr8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3인 펩타이드 27410의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc- Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Thr8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27]hGH-RH(1-29)NH-CH3인 펩타이드 27411의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc- Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Ala8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp23]hGH-RH(1-29)NH-CH3인 펩타이드 27412의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [Dat1, Gln8, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3(서열번호 35)인 펩타이드 27413의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Fpa56, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Gab30]hGH-RH(1-30)NH-CH3인 펩타이드 27414의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Gab-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Fpa5-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Gab30]hGH-RH(1-30)NH-CH3(서열번호 36)인 펩타이드 27415의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Gab-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Gln8, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3인 펩타이드 27416의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [Ac-Tyr1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3인 펩타이드 27417의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Ac-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [Ac-Tyr1, D-Ala2, Fpa56, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3인 펩타이드 27418의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Fpa5-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Ac-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [Ac-Tyr1, Thr8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27]hGH-RH(1-29)NH-CH3(서열번호 37)인 펩타이드 27419의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH, Ac-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-D-Tyr1, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3인 펩타이드 27422의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-D-Tyr1, D-Ala2, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3인 펩타이드 27423의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc- Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [Dat1, Thr8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27]hGH-RH(1-29)NH-CH3(서열번호 38)인 펩타이드 27424의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [N-Me-D-Tyr1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3인 펩타이드 27425의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [Dat1 Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH-CH3인 펩타이드 27440의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH-CH3인 펩타이드 27441의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Fpa56, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH-CH3인 펩타이드 27442의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Fpa5-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH-CH3인 펩타이드 27443의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tfiu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH-CH3인 펩타이드 27444의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Thr8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH-CH3인 펩타이드 27445의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Ala8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH-CH3인 펩타이드 27446의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Apa30]hGH-RH(1-30)NH-CH3인 펩타이드 27447의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Apa-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Aha30]hGH-RH(1-30)NH-CH3인 펩타이드 27448의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Aha-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Amc30]hGH-RH(1-30)NH-CH3인 펩타이드 27449의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Amc-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Har30]hGH-RH(1-30)NH-CH3인 펩타이드 27450의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Har(Pbf)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Gln8, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, Asp28, Aha30]hGH-RH(1-30)NH-CH3인 펩타이드 27451의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Apa-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
펩타이드 27401, 펩타이드 27403, 펩타이드 27404, 펩타이드 27405, 펩타이드 27406, 펩타이드 27407, 펩타이드 27408, 펩타이드 27409, 펩타이드 27410, 펩타이드 27411, 펩타이드 27412, 펩타이드 27413, 펩타이드 27414, 펩타이드 27415, 펩타이드 27416, 펩타이드 27417, 펩타이드 27418, 펩타이드 27419, 펩타이드 27422, 펩타이드 27423, 펩타이드 27424, 펩타이드 27425, 펩타이드 27440, 펩타이드 27441, 펩타이드 27442, 펩타이드 27443, 펩타이드 27444, 펩타이드 27445, 펩타이드 27446, 펩타이드 27447, 펩타이드 27448, 펩타이드 27449, 펩타이드 27450, 펩타이드 27451의 반-분취용 HPLC에 의한 TFA 개열 및 개열 칵테일로의 탈보호, 및 후속적인 정제는 펩타이드 27400의 경우에 기술되어 있는 바와 같이 행한다. 정제된 화합물은 분석용 HPLC에 의해 실질적으로 순수한 것(>95%)으로 판단된다. 이들의 분자량은 전기분무 질량 분광분석법에 의해 확인하고, 예상되는 아미노산 조성은 아미노산 분석에 의해 확인한다.
실시예 IV
N-Me-Tyr1-D-Ala2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe6-Thr7-Gln8-Ser9-Tyr10-Arg11-Orn12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Orn21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-Asp28-Arg29-NH-CH2-CH3 (펩타이드 28420)
N-Me-Tyr1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3
합성은, 수동의 고체상 펩타이드 합성 장치를 이용하여 단계별 방식으로 행한다. 간략하게, [3-[(에틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 AM 수지(Nova Biochem, La Jolla, CA)(610mg, 0.50mmol)를 DMF 중의 20% 피페리딘으로 5분 및 15분 동안 탈보호시키고, 표 3에 기술되어 있는 프로토콜에 따라 세척한다. 수동 고체상 펩타이드 합성 장치에서, DMF 중의 Fmoc-Arg(Pbf)-OH(975mg, 1.5mmol)의 용액을 세척된 수지 및 DIC(235μL, 1.5mmol)와 함께 1시간 동안 진탕한다. 수지를 DMF로 3회 세척한 후, 상기 기술된 바와 같이 커플링 반응을 반복하였다. 반복된 커플링 후, 및 반응의 완료가 음성 닌하이드린 시험에 의해 증명된 후에, Fmoc 보호 그룹을 제거하고 다음 아미노산의 커플링을 위한 펩타이드-수지를 제조하기 위해서, 표 3에 기술되어 있는 탈보호 및 중화 프로토콜을 행한다. 합성을 계속하고, 펩타이드 쇄는, 수지 상에 나타낸 순서대로 하기 보호된 아미노산들을 커플링함으로써 단계적으로 만들어져 바람직한 펩타이드 서열이 수득된다: Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
이들 보호된 아미노산 잔기(또한, NovaBiochem, Advanced Chemtech, Bachem, 및 Peptides International로부터 시판됨)는 익히 허용되어 있는 종래 기술에 따라 상기에 나타낸다. 특정 아미노산의 측쇄 기능성 그룹에 적합한 보호 그룹은 괄호 안에 나타낸다. 상기 화학식에서의 OH 그룹은, 각각의 잔기의 카복실 말단이 유리되어 있음을 나타낸다.
보호된 아미노산(각각 1.5mmol)은, HBTU 시약과 커플링되는 Fmoc-Asn(Trt)-OH 및 Fmoc-Gln(Trt)-OH를 제외하고는 DIC(235μL, 1.5mmol)와 커플링된다.
수지로부터 펩타이드를 개열하고 이를 탈보호하기 위해서, 250mg의 건조된 펩타이드 수지의 일부를 2.5mL의 개열 칵테일(94% TFA, 3% H2O, 1.5% m-크레졸, 및 1.5% 페놀)과 함께 실온에서 3시간 동안 교반한다. 펩타이드 침전을 유도하기 위해서, 개열 혼합물을 적가하여 에테르를 냉각시킨다(바람직하게는 -20℃). 침전된 물질을 여과 또는 원심분리에 의해 수집하고, 차가운 에테르로 3회 세척한다. 개열되고 탈보호된 펩타이드를 50% 아세트산에 용해시키고, 여과에 의해 수지로부터 분리한다. 물로의 희석 및 동결건조 후, 110mg의 조 생성물을 수득한다.
조 펩타이드를, Supelco Discovery HS C18 역상 컬럼(2.1mm x 5cm, C18 실리카 겔로 팩킹됨, 300Å 공극 크기, 3㎛ 입자 크기)(Supelco, Bellefonte, PA)이 장착된 휴렛-팩커드 모델 HP-1090 액체 크로마토그래프를 이용하여 분석용 HPLC에 의해 조사한다. (A) 0.1% 수성 TFA 및 (B) 70% 수성 MeCN 중의 0.1% TFA로 이루어진 용매 시스템을 이용하는 선형 농도구배 용리(예를 들면, 40 내지 70% B)를 사용하고, 유속은 0.2mL/분이다. 정제는, 127P 용매 모듈; UV-VIS 검출기, 모델 166P; 컴퓨터 워크스테이션과 CPU 모니터 및 프린터; 및 32-Karat 소프트웨어, 버젼 3.0이 장착된, Beckman System Gold HPLC 시스템(Beckman Coulter, Inc., Brea, CA)에서 행한다. 110mg의 조 펩타이드를 AcOH/H2O에 용해시키고, 교반하고, 여과하고, XBridge Prep OBD™ 역상 컬럼(4.6 x 250mm, C18 실리카 겔로 팩킹됨, 300Å 공극 크기, 5㎛ 입자 크기)(Waters Co., Milford, MA)에 가한다. 컬럼을 상기 기술된 용매 시스템으로 선형 농도구배 방식(예를 들면, 120분 내에 40 내지 60% B); 유속 12mL/분으로 용리한다. 용리액을 220nm에서 모니터링하고, 분획물은 분석용 HPLC에 의해 조사한다. 95% 초과의 순도를 갖는 분획물을 풀링하고, 동결건조시켜 16mg의 순수한 생성물을 제공한다. 분석용 HPLC는, 상기 기술된 용매 시스템으로의 등용매 용리를 이용하여, 상기 기술된 Supelco Discovery HS C18 역상 컬럼 상에서 0.2mL/분의 유속으로 행한다. 피크는 220 및 280nm에서 모니터링한다. 생성물은 분석용 HPLC에 의해 실질적으로 순수한 것(>95%)으로 판단된다. 분자량은 전기분무 질량 분광분석법에 의해 확인하고, 예상되는 아미노산 조성은 아미노산 분석에 의해 확인한다.
상기 절차에 따라서, 펩타이드 28421, 펩타이드 28430, 펩타이드 28431, 펩타이드 28460, 펩타이드 28461, 펩타이드 28462, 펩타이드 28463, 펩타이드 28464, 펩타이드 28465, 펩타이드 28466, 펩타이드 28467, 펩타이드 28468, 펩타이드 28469, 펩타이드 28470, 펩타이드 28471, 펩타이드 28472, 펩타이드 28473, 펩타이드 28474, 펩타이드 28475, 펩타이드 28476, 펩타이드 28477, 펩타이드 28478, 펩타이드 28479는, 이들 펩타이드 또한 펩타이드 서열 내의 다른 아미노산 치환도 함유함을 제외하고는 펩타이드 28460과 동일한 방식으로 합성한다. 이들 합성에 대한 상세한 설명은 하기에 제시된다.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3인 펩타이드 28421의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3인 펩타이드 28430의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Thr8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3인 펩타이드 28431의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(tBu)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Fpa56, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3인 펩타이드 28460의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Fpa5-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Fpa56, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3인 펩타이드 28462의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Fpa5-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3인 펩타이드 28463의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Fpa56, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3인 펩타이드 28464의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Fpa5-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28]hGH-RH(1-30)NH-CH2-CH3인 펩타이드 28465의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Fpa56, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28]hGH-RH(1-30)NH-CH2-CH3인 펩타이드 28466의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Fpa5-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28]hGH-RH(1-30)NH-CH2-CH3인 펩타이드 28467의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Fpa56, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28]hGH-RH(1-30)NH-CH2-CH3인 펩타이드 28468의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Fpa5-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [Dat1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3인 펩타이드 28469의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [Dat1, D-Ala2, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3인 펩타이드 28470의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-AspfOBuyOH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [Dat1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3인 펩타이드 28471의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-H, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [Dat1, D-Ala2, Fpa56, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3인 펩타이드 28472의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Fpa5-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [Dat1, D-Ala2, Fpa56, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3인 펩타이드 28473의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Fpa5-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [Dat1, D-Ala2, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3인 펩타이드 28474의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Apa30]hGH-RH(1-30)NH-CH2-CH3인 펩타이드 28475의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Apa-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Aha30]hGH-RH(1-30)NH-CH2-CH3인 펩타이드 28476의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Aha-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Amc30]hGH-RH(1-30)NH-CH2-CH3인 펩타이드 28477의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Amc-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Har30]hGH-RH(1-30)NH-CH2-CH3인 펩타이드 28478의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Har(Pbf)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Gln8, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, Asp28, Apa30]hGH-RH(1-30)NH-CH2-CH3인 펩타이드 28479의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 [3-[(메틸-Fmoc-아미노)메틸]-인돌-1-일]-아세틸 Am 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Fmoc-Apa-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ser(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OBut)-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH.
펩타이드 28421, 펩타이드 28430, 펩타이드 28431, 펩타이드 28460, 펩타이드 28461, 펩타이드 28462, 펩타이드 28463, 펩타이드 28464, 펩타이드 28465, 펩타이드 28466, 펩타이드 28467, 펩타이드 28468, 펩타이드 28469, 펩타이드 28470, 펩타이드 28471, 펩타이드 28472, 펩타이드 28473, 펩타이드 28474, 펩타이드 28475, 펩타이드 28476, 펩타이드 28477, 펩타이드 28478, 펩타이드 28479의 반-분취용 HPLC에 의한 TFA 개열 및 개열 칵테일로의 탈보호, 및 후속적인 정제는 펩타이드 28420의 경우에 기술되어 있는 바와 같이 행한다. 정제된 화합물은 분석용 HPLC에 의해 실질적으로 순수한 것(>95%)으로 판단된다. 이들의 분자량은 전기분무 질량 분광분석법에 의해 확인하고, 예상되는 아미노산 조성은 아미노산 분석에 의해 확인한다.
실시예 V
Dat1-D-Ala2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe6-Thr7-Asns-Ser9-Tyr10-Arg11-Orn12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Orn21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-Ser28-Arg29-Gln-Gab30-NH2 (펩타이드 29702)
Dat1, D-Ala2, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Gln-Gab30]hGH-RH(1-30)-NH2
합성은, 수동의 고체상 펩타이드 합성 장치를 이용하여 단계별 방식으로 행한다. 간략하게, 파라-메틸벤즈하이드릴아민(MBHA) 수지(Bachem, King of Prussia, PA)(720mg, 0.50mmol)를 DCM에서 사전 팽윤시키고, DCM 중의 5% DIEA로 중화시키고, 표 I에 기술되어 있는 프로토콜에 따라 세척한다. 수동 고체상 펩타이드 합성 장치에서, DMF-DCM(1:1) 중의 Boc-Gab-OH(265mg, 1.5mmol)의 용액을 중화된 수지 및 DIC(235μL, 1.5mmol)와 함께 1시간 동안 진탕한다. 커플링 반응의 완료가 음성 닌하이드린 시험에 의해 증명된 후에, Boc 보호 그룹을 제거하고 다음 아미노산의 커플링을 위한 펩타이드-수지를 제조하기 위해서, 표 2에 기술되어 있는 탈보호 및 중화 프로토콜을 행한다. 합성을 계속하고, 펩타이드 쇄는, 수지 상에 나타낸 순서대로 하기 보호된 아미노산들을 커플링함으로써 단계적으로 만들어져 바람직한 펩타이드 서열이 수득된다: Boc-Gab-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Dat-OH.
이들 보호된 아미노산 잔기(또한, NovaBiochem, Advanced Chemtech, Bachem, 및 Peptides International로부터 시판됨)는 익히 허용되어 있는 종래 기술에 따라 상기에 나타낸다. 특정 아미노산의 측쇄 기능성 그룹에 적합한 보호 그룹은 괄호 안에 나타낸다. 상기 화학식에서의 OH 그룹은, 각각의 잔기의 카복실 말단이 유리되어 있음을 나타낸다.
보호된 아미노산(각각 1.5mmol)은, 사전 제조된 HOBt 에스테르와 커플링되는 Boc-Asn-OH 및 Boc-Gln-OH를 제외하고는 DIC(235μL, 1.5mmol)와 커플링된다.
수지로부터 펩타이드를 개열하고 이를 탈보호하기 위해서, 250mg의 건조된 펩타이드 수지의 일부를 0.5mL의 m-크레졸 및 5mL 불화 수소(HF)와 함께 0℃에서 2시간 동안 교반한다. 질소 기류 및 진공 하의 HF의 증발 후, 잔류물을 건조 디에틸 에테르 및 에틸 아세테이트로 세척한다. 개열되고 탈보호된 펩타이드를 50% 아세트산에 용해시키고, 여과에 의해 수지로부터 분리한다. 물로의 희석 및 동결건조 후, 109mg의 조 생성물을 수득한다.
조 펩타이드를, Supelco Discovery HS C18 역상 컬럼(2.1mm x 5cm, C18 실리카 겔로 팩킹됨, 300Å 공극 크기, 3㎛ 입자 크기)(Supelco, Bellefonte, PA)이 장착된 휴렛-팩커드 모델 HP-1090 액체 크로마토그래프를 이용하여 분석용 HPLC에 의해 조사한다. (A) 0.1% 수성 TFA 및 (B) 70% 수성 MeCN 중의 0.1% TFA로 이루어진 용매 시스템을 이용하는 선형 농도구배 용리(예를 들면, 40 내지 70% B)를 사용하고, 유속은 0.2mL/분이다. 정제는, 127P 용매 모듈; UV-VIS 검출기, 모델 166P; 컴퓨터 워크스테이션과 CPU 모니터 및 프린터; 및 32-Karat 소프트웨어, 버젼 3.0이 장착된, Beckman System Gold HPLC 시스템(Beckman Coulter, Inc., Brea, CA)에서 행할 수 있다. 109mg의 조 펩타이드를 AcOH/H2O에 용해시키고, 교반하고, 여과하고, XBridge Prep OBD™ 역상 컬럼(4.6 x 250mm, C18 실리카 겔로 팩킹됨, 300Å 공극 크기, 5㎛ 입자 크기)(Waters Co., Milford, MA)에 가한다. 컬럼을 상기 기술된 용매 시스템으로 선형 농도구배 방식(예를 들면, 120분 내에 40 내지 60% B); 유속 12mL/분으로 용리한다. 용리액을 220nm에서 모니터링하고, 분획물은 분석용 HPLC에 의해 조사한다. 95% 초과의 순도를 갖는 분획물을 풀링하고, 동결건조시켜 27mg의 순수한 생성물을 제공한다. 분석용 HPLC는, 상기 기술된 용매 시스템으로의 등용매 용리를 이용하여, 상기 기술된 Supeico Discovery HS C18 역상 컬럼 상에서 0.2mL/분의 유속으로 행한다. 피크는 220 및 280nm에서 모니터링한다. 생성물은 분석용 HPLC에 의해 실질적으로 순수한 것(>95%)으로 판단된다. 분자량은 전기분무 질량 분광분석법에 의해 확인하고, 예상되는 아미노산 조성은 아미노산 분석에 의해 확인한다.
상기 절차에 따라서, 펩타이드 29701, 펩타이드 29703, 펩타이드 29704, 펩타이드 29706, 펩타이드 29708, 펩타이드 29710, 펩타이드 29720, 펩타이드 29721, 펩타이드 29722, 펩타이드 29723, 펩타이드 29724는, 이들 펩타이드 또한 펩타이드 서열 내의 다른 아미노산 치환도 함유함을 제외하고는 펩타이드 29702와 동일한 방식으로 합성한다. 이들 합성에 대한 상세한 설명은 하기에 제시된다.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Gln-Gab30]hGH-RH(1- 30)NH2인 펩타이드 29701의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Gab-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-NLe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(Bzl)-OH.
화학 구조가 N-Me-Tyr1, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Gln-Gab30]hGH-RH(1-30)NH2(서열번호 39)인 펩타이드 29703의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Gab-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-NLe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx), Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2CIZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(Bzl)-OH.
화학 구조가 [Dat1, D-Ala2, Glns, Orn12, Abu15, Orn21,22, Nle27, Gln-Gab30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 29704의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Gab-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-NLe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx), Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2CIZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(Bzl)-OH.
화학 구조가 [Tfa-Tyr1, D-Abu2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Gln-Gab30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 29706의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Gab-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Abu-OH, Tfa-Tyr-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Fpa56, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Gln-Gab30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 29708의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Gab-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Fpa5-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Fpa56, Ala8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Gln-Gab30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 29710의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Gab-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Fpa5-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [Dat1, D-Ala2, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Gln-Gab30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 29720의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Gab-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [Dat1, D-Ala2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Gln-Gab30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 29721의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Gab-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc- Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-0m(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Dat-OH.
화학 구조가 [Tfa-Tyr1, D-Abu2, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Gln-Gab30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 29722의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Gab-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc- Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Abu-OH, Tfa-Tyr-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Fpa56, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Gln-Gab30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 29723의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Gab-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc- Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Fpa5-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
화학 구조가 [N-Me-Tyr1, D-Ala2, Fpa56, Ala8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Gln-Gab30]hGH-RH(1-30)NH2인 펩타이드 29724의 합성을 위해, 하기 보호된 아미노산들은 MBHA 수지 상에 나타낸 순서로 커플링된다: Boc-Gab-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc- Asp(OcHx)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Fpa5-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH.
펩타이드 29701, 펩타이드 29703, 펩타이드 29704, 펩타이드 29706, 펩타이드 29708, 펩타이드 29710, 펩타이드 29720, 펩타이드 29721, 펩타이드 29722, 펩타이드 29723, 펩타이드 29724의 반-분취용 HPLC에 의한 HF 개열 및 탈보호, 및 후속적인 정제는 펩타이드 21300의 경우에 기술되어 있는 바와 같이 행한다. 정제된 화합물은 분석용 HPLC에 의해 실질적으로 순수한 것(>95%)으로 판단된다. 이들의 분자량은 전기분무 질량 분광분석법에 의해 확인하고, 예상되는 아미노산 조성은 아미노산 분석에 의해 확인한다.
실시예 VI
근육내 주사용 수용액
N-Me-Tyr1, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Agm29]hGH-RH(1-29)(펩타이드 20356)(서열번호 6) 500.0mg
젤라틴, 비항원성 5.0mg
주사용수 q.s. 100.0mL 첨가
젤라틴 및 GH-RH 길항제 펩타이드 11602를 주사용수에 용해시키고, 이어서, 상기 용액을 멸균 여과한다.
실시예 VII
지효성 근육내 주사가능한 제형(참깨유 겔)
[N-Me-Tyr1, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Agm29]hGH-RH(1-29)(펩타이드 20356)(서열번호 6) 10.0mg
알루미늄 모노스테아레이트, USP 20.0mg
참깨유 q.s. 1.0mL 첨가
알루미늄 모노스테아레이트를 참깨유와 합하고, 투명한 황색 용액이 형성될 때까지 교반하면서 125℃까지 가열한다. 이어서, 이러한 혼합물을 멸균하기 위해 오토클레이빙하고, 냉각시킨다. 이어서, GH-RH 길항제 펩타이드 11604를 분쇄하여 무균 첨가한다. 특히 바람직한 길항제는 저 가용성의 염, 예를 들면, 팜산염 등이다. 이들은 장기 활성을 나타낸다.
실시예 VIII
지효성 근육내(IM) 주사가능한-생체분해성 중합체 미세캡슐
미세캡슐은 하기로부터 제조된다:
25/75 글라이콜리드/락티드 공중합체 (0.5 고유 점도) 99%
[N-Me-Tyr1, Gln8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, Asp28, Agm29]hGH-RH(1-29)(펩타이드 20356)(서열번호 6) 1%
상기 미세캡슐 25mg을 하기 비히클 1.0mL에 현탁시킨다:
덱스트로스 5.0%
CMC, 나트륨 0.5%
벤질 알콜 0.9%
트윈 80 0.1%
정제수 q.s. 100% 첨가
실시예 IX
성장 호르몬 방출 활성
성장 호르몬 방출은, 본원에 인용에 의해 포함된 문헌[S. Vigh and A. V. Schally, Peptides 5, Suppl: 241-347,1984]에 기술된 바와 같은 슈퍼융합된(superfused) 래트 뇌하수체 세포 시스템을 이용함으로써 검정한다. 대조군으로서 hGH-RH P20356 및 JI-38의 새로운 합성 펩타이드 유사체를 하기에 나타낸 바와 같이 1nM 농도로 3분 동안 투여한다(1mL 관류액). 1ml의 분획물을 수집하고, 각각에서의 GH 함량을 ELISA에 의해 측정한다. 펩타이드 P20356은 JI-38보다 시험관내에서 약 3배 더 강력하였다. 슈퍼융합된 래트 뇌하수체 세포 시스템에서의 GH 방출에 대한 hGH-RH 유사체(1nM)의 효과.
2마리의 수컷 래트로부터의 뇌하수체 세포를 슈퍼융합 시스템의 각각의 채널로 사용하였다. 세포를 3분 펄스의 새로운 GHRH 작용제에 또는 표준물로서의 JI-38에 30분마다 노출시키켰다. 각각의 채널의 유출 샘플(1ml)을 3분마다 수집하였고, ELISA에 의해 GH 수준을 측정하였다.
실시예 X
수용체 결합 검정
125I-표지된 [His1, Nle27]hGH-RH(1-32)-NH2을 이용한 리간드 경쟁 검정을 사용하여 래트 뇌하수체 전엽 세포에 대한 신규한 hGH-RH 작용제의 결합 친화성을 측정하였다. 사용된 방법은, 인용에 의해 포함되는 문헌[Halmos G, et al. Receptor 3: 87-97, 1993]에 상세하게 기술되어 있다. 간략하게, 클로르아민-T 방법에 의해, 방사성요오드화된(radioidonated) [His1, Nle27]hGH-RH(1-32)-NH2를 제조한다. 경쟁적 결합 분석에 있어서, 125I-표지된 [His1, Nle27]hGH-RH(1-32)-NH2(0.2nM)는 GH-RH 유사체에 의해 10-8 내지 10-12M로 나타났다. 최종 결합 친화도는 LIGAND-PC 컴퓨터화된 곡선-맞춤 프로그램을 이용하여 계산하였다. 상대적 친화도는 hGH-RH(1-29) 및/또는 유사체 JI-38에 대해 비교하였고(Izdebski J, et al. Proc. Natl. Acad. Sci. 92: 4872-4876, 1995), 표준물의 IC50에 대한 시험된 펩타이드의 IC50의 비로서 계산하였다. IC50은, 수용체에 대한 특이적 결합의 50% 저해를 야기하는 시험된 펩타이드의 용량이다.
GHRH 수용체 결합 연구
결합 친화도
재료 및 방법
사람 뇌하수체 막 분획의 제조 및 GHRH 작용제의 수용체 결합은, 상기 기술된 바와 같이, 사람 뇌하수체 막 균질액(homogenate)에 대한 125I-표지된 JV-1-42의 결합에 기초한 민감성 시험관내 리간드 경쟁 검정을 이용함으로써 행하였다. 정상 사람 뇌하수체는 National Hormone and Peptide Program(A.F. Parlow, Los Angeles, County Harbor-UCLA Medical Center, Torrance, CA)으로부터 구매하였다. 간략하게, 경쟁적 결합 분석에 있어서, 125I-표지된 JV-1-42(약 0.2nM)는 GHRH 작용제에 의해 10-6 내지 10-12M로 나타났다.
최종 결합 친화도는, IC50 값으로 나타냈고, McPherson에 의해 변형된 Munson 및 Rodbard의 LIGAND PC 컴퓨터화된 곡선-맞춤 프로그램을 이용함으로써 계산하였다.
결과
이들 실험의 결과는 표 5에 제공된다. 최상의 작용제의 IC50 값은 0.01 내지 0.09nM 범위 내였다. 수용체 결합 결과에 기초하여, 이들 새로운 GHRH 작용제 모두가 본 발명의 참조 펩타이드 JI-38의 결합 친화도를 초과하였다. 이들 새로운 GHRH 작용제의 일부는 최고 GHRH 수용체 결합 친화도를 나타냈고, 이들의 IC50 값은 GHRH(1-29)의 IC50 값보다 45 내지 406배 낮았다. 이의 IC50 값에 기초하여, GHRH 작용제 P20356은 본 발명의 참조 화합물 JI-38보다 171배 높은 결합 친화도를 나타냈다.
GH-RH 수용체 결합 연구
결합 친화도
재료 및 방법
사람 뇌하수체 막 분획의 제조 및 GHRH 작용제의 수용체 결합은, 상기 기술된 바와 같이, 사람 뇌하수체 막 균질액에 대한 125I-표지된 [His1, Nle27]hGHRH(1-32)NH2의 결합에 기초한 민감성 시험관내 리간드 경쟁 검정을 이용함으로써 행하였다. 정상 사람 뇌하수체는 National Hormone and Peptide Program(A.F. Parlow, Los Angeles, County Harbor-UCLA Medical Center, Torrance, CA)으로부터 구매하였다.
간략하게, 경쟁적 결합 분석에 있어서, [His1, 125I-Tyr10, Nle27]hGHRH(1-32)NH2(약 0.2nM)는 GHRH 작용제에 의해 10-6 내지 10-12M로 나타났다. 최종 결합 친화도는, IC50 값으로 나타냈고, McPherson에 의해 변형된 Munson 및 Rodbard의 LIGAND PC 컴퓨터화된 곡선-맞춤 프로그램을 이용함으로써 계산하였다.
결과
이들 실험의 결과는 첨부된 표에 제공된다. 최상의 작용제의 IC50 값은 0.04 내지 0.09nM 범위 내였다. 수용체 결합 결과에 기초하여, 이들 새로운 GHRH 작용제 모두가 참조 펩타이드 JI-34, JI-36 및 JI-38의 결합 친화도를 초과하였다. 이들 새로운 GHRH 작용제의 일부는 최고 GHRH 수용체 결합 친화도를 나타냈고, 이들의 IC50 값은 GHRH 작용제 JI-38의 IC50 값보다 21 내지 48배 낮았다.
GH-RH 수용체 결합 연구
결합 친화도
재료 및 방법
사람 뇌하수체 막 분획의 제조 및 GHRH 작용제의 수용체 결합은, 상기 기술된 바와 같이, 사람 뇌하수체 막 균질액에 대한 125I-표지된 JV-1-42의 결합에 기초한 민감성 시험관내 리간드 경쟁 검정을 이용함으로써 행하였다. 정상 사람 뇌하수체는 National Hormone and Peptide Program(A.F. Parlow, Los Angeles, County Harbor-UCLA Medical Center, Torrance, CA)으로부터 구매하였다.
간략하게, 경쟁적 결합 분석에 있어서, 125I-표지된 JV-1-42(약 0.2nM)는 GHRH 작용제에 의해 10-6 내지 10-12M로 나타났다. 최종 결합 친화도는, IC50 값으로 나타냈고, McPherson에 의해 변형된 Munson 및 Rodbard의 LIGAND PC 컴퓨터화된 곡선-맞춤 프로그램을 이용함으로써 계산하였다.
결과
이들 실험의 결과는 첨부된 표에 제공된다. 최상의 작용제의 IC50 값은 0.16 내지 0.87nM 범위 내였다. 수용체 결합 결과에 기초하여, 이들 새로운 GHRH 작용제의 대부분이 참조 펩타이드 JI-38의 결합 친화도를 초과하였다. 이들 새로운 GHRH 작용제의 일부는 GHRH 작용제 JI-38보다 5 내지 27배 더 높은 결합 효력을 나타냈다. 표 7을 참조한다.
실시예
XI
새로운 GHRH 작용제의 내분비 활성에 대한 생체내 시험.
정맥내 투여.
정맥내 투여에 기초한 생체내 시험을 위해, 성체 수컷 스프라그-돌리 래트를 i.p. 주사된 펜토바르비탈(6mg/100/g, b.w.)로 마취하고; 펜토바르비탈 주사 20분 후에 혈액 샘플을 경정맥(사전처리된 수준)으로부터 채취하고, 그 직후에 hGH-RH(1-29)NH2(대조군으로서) 또는 hGH-RH 유사체를 i.v. 주사한다. 주사 후 5분, 15분 및 30분째에 경정맥으로부터 혈액 샘플을 채취한다. 혈액 샘플을 원심분리하여 혈장을 제거하고, ELISA에 의해 GH 수준을 측정한다. hGH-RH(1-29)NH2에 대한 효력으로서 나타낸 결과를 표 8에 나타낸다.
실시예
XI
피하 투여
성체 수컷 래트를 사용하고, i.p. 주사된 펜토바르비탈(6mg/100g, b.w.)로 마취하고; 펜토바르비탈 주사 20분 후에, 혈액 샘플을 경정맥(사전처리된 수준)으로부터 채취하고, 그 직후에 hGH-RH(1-29)NH2(대조군으로서) 또는 hGH-RH 유사체를 피하(s.c.) 주사한다. 주사 후 5분, 15분 및 30분째에 또는 15분째 및 30분째에만 경정맥으로부터 혈액 샘플을 채취한다. 혈액 샘플을 원심분리하여 혈장을 제거하고, ELISA에 의해 GH 수준을 측정한다. 효력의 관점에서의 결과를 표 9에 요약한다.
[표 9]
내분비 시험의 분석
정맥내 투여에 따르면, 새로운 유사체는, hGH-RH(1-29)NH2 또는 JI-38 유래의 성장 호르몬 수준보다 큰 성장 호르몬 수준을 제공한다. 효과는 보다 길게 지속되고, 이는, 유사체가 보다 높은 수용체 친화성을 가질 뿐만 아니라 증가된 펩티다제 내성도 가짐을 나타낸다. 가장 강력한 i.v. 유사체는 P-27403 및 P-25502였다. 피하 투여에 따르면, 유사체는, hGH-RH 또는 JI-38보다 큰 성장 호르몬 수준을 제공한다. 여기서, 유사체 P-22326, P-20350, P-20356, P-27403, P-27404, P-27409, P-25501, P-25502는 일반적으로 높은 반응을 생산한다.
i.v. 및 s.c. 투여의 결과는 상이한 생물학적 활성 패턴을 나타낸다. i.v. 제공된 유사체는 혈류에서 분해된다. s.c. 제공된 유사체는 주사 부위에서 펩티다제에 의해 분해될 수 있다. 활성은 주로 펩타이드의 수용체에 대한 펩타이드의 결합 능력, 및 바람직한 수송 특성, 혈장 단백질에 대한 적합한 결합 및 대사 안정성에 의존하는 것으로 생각된다. 따라서, 상기 발견은, 보다 우수한 활성을 나타내는 유사체가 피하 제공되는 경우에 주사 부위에서의 국소 분해에 대해 내성이고, 이들은 혈류에서의 효소 분해에 대해 덜 민감성일 수 있고/있거나 GH-RH 수용체에 대해 hGH-RH(1-29)NH2보다 큰 친화성을 가질 수 있음을 나타낸다.
결론적으로, 가장 강력한 i.v. 유사체는 P-27403 및 P-25502였다. 피하 투여에 따르면, hGH-RH 또는 JI-38보다 특히 큰 성장 호르몬 수준을 제공하는 유사체는 P-22326, P-20356, P-27403, P-27404, P-27409, P-25501, P-25502이다.
SEQUENCE LISTING
<110> UNIVERSITY OF MIAMI;
UNITED STATES OF AMERICA REPRESENTED BY THE DEPARMENT OF VETERANS AFFAIRS
<120> NOVEL GH-RH ANALOGS WITH POTENT AGONISTIC EFFECTS
<130> SHAL3.0-041
<150> US 13/332,624
<151> 2011-12-21
<160> 42
<170> KopatentIn 1.71
<210> 1
<211> 31
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<223> N-term may be Ac or Tfa
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Tyr, Dat, or N-Me-Tyr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Ala, D-Ala, Abu, or D-Abu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Phe or Fpa5
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Asn, Ala, Gln, Thr, or N-Me-Ala
<220>
<221> MOD_RES
<222> (11)..(11)
<223> Arg, His, or Har
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Orn or Lys(Me)2
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Abu or Ala
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Arg, His, or Har
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Orn or Lys(Me)2
<220>
<221> MOD_RES
<222> (22)..(22)
<223> Leu or Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> Nle
<220>
<221> MOD_RES
<222> (28)..(28)
<223> Ser or Asp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> Arg, Har, Agm, D-Arg, or D-Har
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Arg, Agm, Ada, Amc, Aha, Apa, Har, D-Arg, D-Har, Gab, Gln,
D-Gln, or is absent
<220>
<221> MOD_RES
<222> (31)..(31)
<223> Gab or absent
<220>
<223> C-term -NH2, -OH, -NHR3, -N(R3)2, or -OR3, in which R3 is any of
C1-12 alkyl, C2-12 alkenyl, or C2-12 alkinyl preferably provided
that if A29 is Agm then A30 and R2 are absent and suitably A1 is
N-Me-Tyr only, and further preferably provided that where A30 is
<220>
<223> cont'd from above: Agm then R2 is absent, and pharmaceutically
acceptable salts thereof
<400> 1
Xaa Xaa Asp Ala Ile Phe Thr Xaa Ser Tyr Xaa Xaa Val Leu Xaa Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ala Xaa Xaa Xaa Leu Gln Asp Ile Leu Xaa Xaa Xaa Xaa
20 25 30
<210> 2
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> N-Me-Tyr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Fpa5
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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peptide
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polypeptide
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<213> Artificial Sequence
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MOD_RES
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<223> N-Me-Tyr
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<221> MOD_RES
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<223> Abu
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<223> Orn
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<223> Nle
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<221> MOD_RES
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<223> Apa
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<223> C-term NH2
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<220>
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<223> Abu
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<223> Orn
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<221> MOD_RES
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<223> Nle
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<221> MOD_RES
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MOD_RES
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<223> Orn
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<221> MOD_RES
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<223> Orn
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<221> MOD_RES
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<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Har
<220>
<223> C-term NH2
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Leu Ser Ala Arg Xaa Leu Leu Gln Asp Ile Leu Asp Arg Arg
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Dat
<220>
<221> MOD_RES
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> Nle
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Har
<220>
<223> C-term NH2
<400> 23
Tyr Ala Asp Ala Ile Phe Thr Thr Ser Tyr Arg Xaa Val Leu Xaa Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ala Arg Xaa Leu Leu Gln Asp Ile Leu Asp Arg Arg
20 25 30
<210> 24
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Dat
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Abu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> Nle
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Har
<220>
<223> C-term NH2
<400> 24
Tyr Ala Asp Ala Ile Phe Thr Ala Ser Tyr Arg Xaa Val Leu Xaa Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ala Arg Xaa Leu Leu Gln Asp Ile Leu Asp Arg Arg
20 25 30
<210> 25
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> N-Me-Tyr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Abu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> Nle
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Har
<220>
<223> C-term NH2
<400> 25
Tyr Ala Asp Ala Ile Phe Thr Gln Ser Tyr Arg Xaa Val Leu Xaa Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ala Arg Xaa Leu Leu Gln Asp Ile Leu Asp Arg Arg
20 25 30
<210> 26
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> N-Me-Tyr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Abu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> Nle
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Har
<220>
<223> C-term NH2
<400> 26
Tyr Ala Asp Ala Ile Phe Thr Asn Ser Tyr Arg Xaa Val Leu Xaa Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ala Arg Xaa Leu Leu Gln Asp Ile Leu Asp Arg Arg
20 25 30
<210> 27
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> N-Me-Tyr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Abu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> Nle
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Har
<220>
<223> C-term NH2
<400> 27
Tyr Ala Asp Ala Ile Phe Thr Thr Ser Tyr Arg Xaa Val Leu Xaa Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ala Arg Xaa Leu Leu Gln Asp Ile Leu Asp Arg Arg
20 25 30
<210> 28
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> N-Me-Tyr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Abu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> Nle
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Har
<220>
<223> C-term NH2
<400> 28
Tyr Ala Asp Ala Ile Phe Thr Ala Ser Tyr Arg Xaa Val Leu Xaa Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ala Arg Xaa Leu Leu Gln Asp Ile Leu Asp Arg Arg
20 25 30
<210> 29
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> N-Me-Tyr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Abu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> Nle
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Aha
<220>
<223> C-term NH2
<400> 29
Tyr Ala Asp Ala Ile Phe Thr Gln Ser Tyr Arg Xaa Val Leu Xaa Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ala Arg Xaa Leu Leu Gln Asp Ile Leu Asp Arg Xaa
20 25 30
<210> 30
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Dat
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Abu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> Nle
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Aha
<220>
<223> C-term NH2
<400> 30
Tyr Ala Asp Ala Ile Phe Thr Gln Ser Tyr Arg Xaa Val Leu Xaa Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ala Arg Xaa Leu Leu Gln Asp Ile Leu Asp Arg Xaa
20 25 30
<210> 31
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> N-Me-Tyr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Abu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Abu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> Nle
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Gab
<220>
<223> C-term NH2
<400> 31
Tyr Xaa Asp Ala Ile Phe Thr Asn Ser Tyr Arg Xaa Val Leu Xaa Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ala Arg Xaa Leu Leu Gln Asp Ile Leu Ser Arg Xaa
20 25 30
<210> 32
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> N-Me-Tyr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Abu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> Nle
<220>
<223> C-term NH-CH3
<400> 32
Tyr Ala Asp Ala Ile Phe Thr Gln Ser Tyr Arg Xaa Val Leu Xaa Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ala Arg Xaa Leu Leu Gln Asp Ile Leu Ser Arg
20 25
<210> 33
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> N-Me-Tyr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Abu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> Nle
<220>
<223> C-term NH-CH3
<400> 33
Tyr Ala Asp Ala Ile Phe Thr Gln Ser Tyr Arg Xaa Val Leu Xaa Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ala Arg Xaa Leu Leu Gln Asp Ile Leu Asp Arg
20 25
<210> 34
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Dat
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Abu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> Nle
<220>
<223> C-term NH-CH3
<400> 34
Tyr Ala Asp Ala Ile Phe Thr Gln Ser Tyr Arg Xaa Val Leu Xaa Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ala Arg Xaa Leu Leu Gln Asp Ile Leu Asp Arg
20 25
<210> 35
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Dat
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Abu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> Nle
<220>
<223> C-term NH-CH3
<400> 35
Tyr Ala Asp Ala Ile Phe Thr Gln Ser Tyr His Xaa Val Leu Xaa Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ala His Xaa Leu Leu Gln Asp Ile Leu Asp Arg
20 25
<210> 36
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> N-Me-Tyr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Abu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> Nle
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Gab
<220>
<223> C-term NH-CH3
<400> 36
Tyr Ala Asp Ala Ile Phe Thr Asn Ser Tyr Arg Xaa Val Leu Xaa Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ala Arg Xaa Leu Leu Gln Asp Ile Leu Ser Arg Xaa
20 25 30
<210> 37
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<220>
<223> N-term Ac
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Abu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> Nle
<220>
<223> C-term NH-CH3
<400> 37
Tyr Ala Asp Ala Ile Phe Thr Thr Ser Tyr Arg Xaa Val Leu Xaa Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ala Arg Xaa Leu Leu Gln Asp Ile Leu Ser Arg
20 25
<210> 38
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Dat
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Abu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> Nle
<220>
<223> C-term NH-CH3
<400> 38
Tyr Ala Asp Ala Ile Phe Thr Thr Ser Tyr Arg Xaa Val Leu Xaa Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ala Arg Xaa Leu Leu Gln Asp Ile Leu Ser Arg
20 25
<210> 39
<211> 31
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> N-Me-Tyr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Abu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> Nle
<220>
<221> MOD_RES
<222> (31)..(31)
<223> Gab
<220>
<223> C-term NH2
<400> 39
Tyr Ala Asp Ala Ile Phe Thr Gln Ser Tyr Arg Xaa Val Leu Xaa Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ala Arg Xaa Leu Leu Gln Asp Ile Leu Ser Arg Gln Xaa
20 25 30
<210> 40
<211> 31
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<223> N-term may be Ac or Tfa
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Tyr, Dat, or N-Me-Tyr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Ala, D-Ala, Abu, or D-Abu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Phe or Fpa5
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Asn, Ala, Gln, Thr, or N-Me-Ala
<220>
<221> MOD_RES
<222> (11)..(11)
<223> Arg, His, or Har
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Orn or Lys(Me)2
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> His, Abu, Aib, Aah, Aap, Ala, or D-Ala
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Arg, His, or Har
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Orn or Lys(Me)2
<220>
<221> MOD_RES
<222> (22)..(22)
<223> Leu or Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> Nle or Met
<220>
<221> MOD_RES
<222> (28)..(28)
<223> Ser or Asp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> Arg, Har, Agm, D-Arg, or D-Har
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Arg, Agm, Ada, Amc, Aha, Apa, Har, D-Arg, D-Har, Gab, Gln,
D-Gln, or is absent
<220>
<221> MOD_RES
<222> (31)..(31)
<223> Gab
<220>
<223> C-term NH2, -OH, -NHR3, -N(R3)2, or -OR3, in which R3 is any of
C1-12 alkyl, C2-12 alkenyl, or C2-12 alkinyl, provided that if
A29 is Agm then A30 and R2 are absent, A1 is N-Me-Tyr only, and
pharmaceutically acceptable salts thereof
<400> 40
Tyr Xaa Asp Ala Ile Phe Thr Xaa Ser Tyr Xaa Xaa Val Leu Xaa Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ala Xaa Xaa Xaa Leu Gln Asp Ile Leu Xaa Xaa Xaa Xaa
20 25 30
<210> 41
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<223> May be N-term Ac
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Tyr, Dat, or N-Me-Tyr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Ala, D-Ala, Abu, or D-Abu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Phe or Fpa5
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Asn, Ala, Gln, or Thr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Abu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> Nle
<220>
<221> MOD_RES
<222> (28)..(28)
<223> Ser or Asp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> Arg, D-Arg, or Agm
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Arg, Agm, Ada, Amc, Aha, Apa, Har, D-Arg, D-Har, Gab, Gln,
D-Gln, or is absent
<220>
<223> C-term -NH2, -OH, -NHR3, -N(R3)2, or -OR3, in which R3 is any
of C1-12 alkyl, C2-12 alkenyl, or C2-12 alkinyl, provided that
if A29 is Agm then A30 and R2 are absent, A1 is N-Me-Tyr only,
and pharmaceutically acceptable salts thereof
<400> 41
Tyr Xaa Asp Ala Ile Phe Thr Xaa Ser Tyr Arg Xaa Val Leu Xaa Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ala Arg Xaa Leu Leu Gln Asp Ile Leu Xaa Xaa Xaa
20 25 30
<210> 42
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Dat or N-Me-Tyr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Ala or D-Ala
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Phe or Fpa5
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Asn, Gln, or Thr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Abu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> Nle
<220>
<221> MOD_RES
<222> (28)..(28)
<223> Ser or Asp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> Arg, D-Arg, or Agm
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Arg, Agm, Ada, Amc, Aha, Apa, Har, D-Arg, D-Har, Gab, Gln,
D-Gln, or is absent
<220>
<223> C-term -NH2, -OH, -NHR3, -N(R3)2, or -OR3, in which R3 is any
of C1-12 alkyl, C2-12 alkenyl, or C2-12 alkinyl, provided that
if A29 is Agm then A30 and R2 are absent, A1 is N-Me-Tyr only,
and pharmaceutically acceptable salts thereof
<400> 42
Tyr Ala Asp Ala Ile Phe Thr Xaa Ser Tyr Arg Xaa Val Leu Xaa Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ala Arg Xaa Leu Leu Gln Asp Ile Leu Xaa Xaa Xaa
20 25 30
Claims (4)
- 하기 화학식을 갖는 그룹으로부터 선택되는, 펩타이드 및 이들의 약제학적으로 허용되는 염:
[R1-A1, A2, A6, A8, A11, A12, A15, A20, A21, A22, Nle27, A28, A29, A30] hGH-RH(1-30)-R2 (서열번호 40).
[여기서,
R1은 Ac, Tfa이거나, 부재하고,
A1은 Tyr, Dat, 또는 N-Me-Tyr이고,
A2는 Ala, D-Ala, Abu, 또는 D-Abu이고,
A6은 Phe 또는 Fpa5이고,
A8은 Asn, Ala, Gln, Thr, 또는 N-Me-Ala이고,
A11은 Arg, His, 또는 Har이고,
A12는 Orn, 또는 Lys(Me)2이고,
A15는 His, Abu, Aib, Aah, Aap, Ala, 또는 D-Ala이고,
A20은 Arg, His, 또는 Har이고,
A21은 Orn, 또는 Lys(Me)2이고,
A22는 Leu, 또는 Orn이고,
A27은 Nle, 또는 Met이고,
A28은 Ser, 또는 Asp이고,
A29는 Arg, Har, Agm, D-Arg, 또는 D-Har이고,
A30은 Arg, Agm, Ada, Amc, Aha, Apa, Har, D-Arg, D-Har, Gab, Gln, D-Gln, Gln-Gab, D-Gln-Gab이거나, 부재하고,
R2는 -NH2, -OH, -NHR3, -N(R3)2, 또는 -OR3이고, 여기서, R3은 C1 -12 알킬, C2 -12 알케닐, 또는 C2 -12 알키닐 중 어느 하나이며,
단, A29가 Agm인 경우, A30 및 R2가 부재하고, A1은 단지 N-Me-Tyr이다.] - 제1항에 있어서, 하기 화학식을 갖는 그룹으로부터 선택되는, 펩타이드 및 이들의 약제학적으로 허용되는 염:
[R1-A1, A2, A6, A8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, A28, A29, A30] hGH-RH(1-30)-R2 (서열번호 41)
[여기서,
R1은 Ac이거나 부재하고,
A1은 Tyr, Dat, 또는 N-Me-Tyr이고,
A2는 Ala, D-Ala, Abu, 또는 D-Abu이고,
A6은 Phe 또는 Fpa5이고,
A8은 Asn, Ala, Gln, 또는 Thr이고,
A12는 Orn이고,
A15는 Abu이고,
A21은 Orn이고,
A27은 Nle이고,
A28은 Ser, 또는 Asp이고,
A29는 Arg, D-Arg, 또는 Agm이고,
A30은 Arg, Agm, Ada, Amc, Aha, Apa, Har, D-Arg, D-Har, Gab, Gln, D-Gln이거나, 부재하고,
R2는 -NH2, -OH, -NHR3, -N(R3)2, 또는 -OR3이고, 여기서, R3은 C1 -12 알킬, C2 -12 알케닐, 또는 C2 -12 알키닐 중 어느 하나이며,
단, A29가 Agm인 경우, A30 및 R2가 부재하고, A1은 단지 N-Me-Tyr이다.] - 제2항에 있어서, 하기 화학식을 갖는 그룹으로부터 선택되는, 펩타이드 및 이들의 약제학적으로 허용되는 염:
[A1, A2, A6, A8, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, A28, A29, A30] hGH-RH(1-30)-R2 (서열번호 42)
[여기서,
A1은 Dat 또는 N-Me-Tyr이고,
A2는 Ala 또는 D-Ala이고,
A6은 Phe 또는 Fpa5이고,
A8은 Asn, Gln, 또는 Thr이고,
A27은 Nle이고,
A28은 Ser, 또는 Asp이고,
A29는 Arg, D-Arg, 또는 Agm이고,
A30은 Arg, Agm, Ada, Amc, Aha, Apa, Har, D-Arg, D-Har, Gab, Gln, D-GIn이거나, 부재하고,
R2는 -NH2, -OH, -NHR3, -N(R3)2, 또는 -OR3이고, 여기서, R3은 C1 -12 알킬, C2 -12 알케닐, 또는 C2 -12 알키닐 중 어느 하나이며,
단, A29가 Agm인 경우, A30 및 R2가 부재하고, A1은 단지 N-Me-Tyr이다.] - 제1항에 있어서, 하기 화학식을 갖는 그룹으로부터 선택되는, 펩타이드:
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