CN104520314B - 新的具有强效激动效果的gh-rh类似物 - Google Patents
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Abstract
合成肽具有序列：[RrA\A2,A6,A8,A11,A12,A15,A20,A21,A22,Nle27,A28,A29,A30]hGH-RH(1-30)-R2(序列表序号：1)，其中R1是Ac、Tfa或不存在，A1是Tyr、Dat或N-Me-Tyr，A2是Ala、D-Ala、Abu或D-Abu，A6是Phe或Fpa5，A8是Asn、Ala、Gln、Thr或N-Me-Ala，A11是Arg、His或Har，A12是Orn或Lys(Me)2，A15是Abu或Ala，A20是Arg、His或Har，A21是Orn或Lys(Me)2，A22是Leu或Orn，A28是Ser或Asp，A29是Arg、Har、Agm、D-Arg或D-Har，A30是Arg、Agm、Ada、Amc、Aha、Apa、Har、D-Arg、D-Har、Gab、Gln、D-Gln、Gln-Gab、D-Gln-Gab或不存在，R2是-NH2、-OH、-NHR2、-N(R2)2或-OR2，其中R2是C1-12烷基、C2-12烯基或C2-12炔基中的任一种，条件是，如果A29是Agm，那么A30和R2不存在，A1仅仅是N-Me-Tyr，及其药学上可接受的盐。
Description
本发明是部分在政府支持下做出的。政府对本申请享有某些权利。
序列表
本申请包含序列表，该序列表已通过EFS-Web以ASCII形式提交，在此通过引用将其全文合并入本文。所述ASCII副本，创建于2011年12月13日，命名为SHAL3041.txt，大小为35,007字节。
发明领域
本发明涉及在体外与GH-RH受体具有高结合亲和力，并且在体内影响脑下垂体功能的生长激素(growthhormone)释放激素(GH-RH)类似肽。特别地，本发明涉及促进脑下垂体释放生长激素的合成肽。更特别地，本发明涉及与天然hGH-RH(1-29)NH2相比，与GH-RH受体具有高得多的亲和力的29或30个氨基酸的hGH-RH类似物。
本发明还涉及包括所述GH-RH激动剂中的任一种的药物组合物，以及这些激动肽在治疗或预防疾病(disorder)上的应用。
发明背景
在1981年，人胰生长激素释放激素(hGH-RH)首次从人胰腺肿瘤提取物中被分离出来，并随后从不同哺乳动物的下丘脑中提取出来。这种肽被发现促进脑垂体释放生长激素(GH)。人下丘脑GH-RH被发现与胰GH-RH具有相同的氨基酸序列。人GH-RH(hGH-RH)包含44个氨基酸，并具有酰胺化羧基末端。hGH-RH的结构通过合成被复制出来。已经合成了几种hGH-RH的类似物并研究了它们的生物学活性。这些研究发现：
a)包含至少29个氨基酸残基的GH-RH片段具有天然GH-RH的至少50％的效力；氨基酸残基的进一步缺失导致生物活性显著减少[CambellRMetal.Peptides12:569-574(1991)]；
b)将位置29上的Arg替换为Agm(胍基丁胺，4-胍基-丁胺)据说能提供对C-末端酶降解的抗性(BajuszSetal.inPeptides,1982,BlahaandMelon,Eds.,WalterdeGruyter,Berlin-N.Y.,1983,pp.643-647)；
c)将位置1上的Tyr替换为脱氨基酪氨酸(Dat)据说会由于N-末端对酶降解的抗性，从而获得具有增加的生物学活性的类似物[FelixAetal.Int.J.PeptideProteinRes.32:441-454(1988),KovacsMetal.LifeSci.42:27-35(1988)]。美国专利Nos.4,622,312,4、649,131和4,784,987公开了在位置15上具有Ala，以及在位置1上具有Dat的hGH-RH(1-29)激动剂。这些激动剂中的几种据说具有4倍于hGH-RH(1-29)的效力；
d)在位置1上包含Dat以及在位置29上包含Agm的几种类似物据说显示出增强的GH释放能力，因此具有比hGH-RH(1-29)强的效力，并在体内具有效力[ZarandiMetal.Int.J.PeptideProteinRes.36:499-505(1990),ZarandiMetal.Int.J.PeptideProteinRes.39:211-217(1992)]；
e)肽序列C-末端的疏水基团可以导致显著增加的特异活性。在疏水性这方面，这些结果与其他小组，例如Muranichi的结果[MuranichiSetal.Pharm.Res.8:649-652(1991)]相矛盾；
类似地，美国专利No.4,914,189公开了在位置1具有Dat、在位置2具有D-Ala、在位置12具有Lys或Orn、在位置15具有Gly、在位置21具有Lys并在位置29具有Agm的激动剂。但是应当注意，那些据称在诱导GH释放方面比hGH-RH(1-29)具有更强效力的激动剂在位置12具有Lys并在位置2具有D-Ala。
在美国专利No.4,689,318中，hGH-RH(1-29)的类似物的Lys12或Lys21可以被Orn替换，且其中位置8可以是Ser(大鼠GH-RH序列)、Asn(人GH-RH序列)、Thr(小鼠GH-RH序列)或Gln(在GH-RH中非天然存在)；且位置27可以是Nle。在这些类似物中，位置1从不是Dat，位置15从不是Abu，位置28从不是Asp，且位置29从不是Agm、Arg-NH-CH3或Arg-NH-CH2-CH3。那些据称与hGH-RH(1-40)具有同样强效力的类似物在位置12和21上被Arg取代。
其它hGH-RH(1-29)激动剂在PCT专利申请WO94/11396和94/11397中有教导，其中在位置12上，Lys12被替换为D-Lys、Arg或Orn。这些类似物还可以包含Dat作为R1；Asn、D-Asn、Ser、D-Ser作为R8；Abu作为R15；Lys、D-Lys、Arg或D-Arg作为R21；Nle作为R27；Asp或Ser作为R28；以及Agm作为R29。那些据称诱导GH的水平超过hGH-RH(1-29)诱导水平的激动剂在位置12上具有Lys。然而，这两份出版物的教导被认为可能存在问题，因为在这些申请提交之后的一段时间，发现被认为已经合成出来的这些化合物不能确定无疑地对应上它们最初所配对的结构式(furmulae)。而且，在这些申请提交之后进一步发现这些化合物不能以最初所声称的水平释放GH。
欧洲专利申请0413839公开了另外的hGH-RH类似物，其中位置12和21可以都是Lys或Orn，而且其中位置15是Ala。而且，那些被检测了GH释放能力并据称具有大于hGH-RH(1-29)的效力的类似物在位置12和21上具有Lys。
美国专利No.5262519公开了具有下述取代的激动剂：位置1上是N-MeTyr，位置8上是Ser，位置15上是Ala，位置16、24和25上是Ala或Aib，位置28上是Asn且C-末端是–NHR，R是H或低级烷基。但是应当注意这些据称在诱导GH释放方面比hGH-RH(1-29)具有更强效力的激动剂在位置8上从不具有Gln或Thr，在位置12和21上从不具有Orn，在位置15上从不具有Abu，且在位置28上从不具有Asp。
美国专利No.5,792,747公开了在位置1具有Dat；在位置3具有Glu；在位置8具有Ser、Gln或Thr；在位置12和21具有Orn；在位置13具有Ile；在位置15、22和23具有Ala或Abu；在位置25具有Glu；在位置27具有Nle、Ile或Leu；在位置28具有Asn或Asp；且在位置29具有Agm的激动剂。但是应当注意那些据称在诱导GH释放方面比hGH-RH(1-29)具有更强效力的激动剂在C-末端从不具有N-Me-Tyr1、D-Ala2、和/或-NH-CH3或-NH-CH2-CH3。
美国专利No.7,928,063公开了具有下述取代的GH-RH激动剂：位置1上是Dat；位置11和20上是6-胍基-2-己酸(hArg)、4-胍-2-氨基丁酸(Gab)或3-胍基-2-氨基丙酸(Gap)；位置12和21上是Orn、hArg、Gab或Gap；位置15上是Ala；位置27上是Nle；且位置29上是D-Arg、hArg、Gab或Gap。这些肽据称对酶作用具有高的抗性，并且是强效的和选择性的GH释放刺激物。但是应当注意这些激动剂仅在胰蛋白酶消化试验中进行了试验并表现出高稳定性。
到目前为止，所描述的大部分GH-RH类似物已在大鼠模型中，在体外或体内被检测。由于人和大鼠GRF(1-29)NH2显著地不同，在这两个物种中GH-RH的结构-活性关系是不同的。因此，不能将大鼠中获得的结果外推至人。(Brazeauetal.US_Patent6,458,764)。
其它hGH-RH(1-29)类似物在美国公开申请2009/0023646A1和WO2009/009727A2中有教导，其中最有效的化合物中的Ala2、Tyr10、Gly15和Leu22分别被D-Ala2、D-Tyr10、D-Ala15和Lys22取代，其显示出与大鼠和狗的脑垂体中生长激素细胞(somatotrophs)上GH-RH受体的结合，且在体内的效力至少是天然GH-RH(1-44)的两倍。
一种在N-末端受到反-3-己烯酰基修饰的hGH-RH(1-44)NH2类似物(替莫瑞林tesamorelin)显示出对于DPP-IV催化的失活作用的抗性[FerninandiESetal.BasicClinPharmacolToxicol.100:49-58(2007)和FalutzJetal.AcquirImmuneDeficSyndr53:311-322,(2010)]。但是应当说明的是，这种激动剂在含水溶液中不被保护免遭于肽链内切酶和化学降解，且其活性仅仅是GH-RH本身的两倍。
天然hGH-RH(1-44)和其类似物通过酶和化学两种方式被生物灭活。在血浆中，hGH-RH通过二肽基肽酶IV(DPP-IV)在残基2和3之间(血浆中的主要切割位点)的切割而快速被降解[Frohmanetal.,J.Clin.Invest.83,1533-1540(1989),Kubiaketal.DrugMet.Disp.17,393-397(1989)]。在脑垂体和下丘脑中，主要的切割位点是在Leu14-Gly15之间(糜蛋白酶样酶)和Lys21-Leu22之间(胰蛋白酶样酶)[Boulangeretal.BrainRes.616,39-47(1993)]。还观察到在碱性氨基酸残基上的其它胰蛋白酶特异切割。hGH-RH(1-44)在含水环境中还经过化学重排[通过氨基琥珀酰亚胺的形成由Asn8形成Asp8或beta-Asp8]和氧化[由Met27形成Met(O)27]，极大地减少其生物活性。
因此，有利地是使用在氨基末端(防止酶促降解)、在残基8位(减少异构化)、在残基27位(防止氧化)的特异性氨基酸替换开发长效GH-RH类似物。在Gly15位包含Ala15或Abu15取代，先前已被证明增强受体结合亲和力，也提高GH-RH的效力。
通过进行多重氨基酸取代产生hGH-RH类似物，其与天然hGH-RH(1-29)NH2相比，在体外具有提高的与垂体受体的结合亲和力，以及在体内增加的效力，这将会是合乎期望的。
由于肽的氨基酸序列的一个变化可能引起肽三维结构的巨大变化，影响肽的结合性质和生物学效力，因此不可能预测hGH-RH类似物中哪一个或哪几个氨基酸的替换或取代的组合可以导致提高的结合亲和力或者高的体内效力。
虽然本发明已经描述了其优选的实施方案，其构成本发明人目前所知的最佳方式，应当理解，对于本领域的普通技术人员来说可以进行各种变化和改变，而不背离所附的权利要求中述及的本发明的范围。例如，根据迄今为止已知的实验实践，可以进行肽链的改变，特别是从肽的羧基末端开始延伸到大约位置-29的缺失，以产生保留了肽的生物学效力的全部或恰好实质部分的肽或肽片段，这种肽被视为是在本发明的范围之内。而且，可以对任一末端，或者对两个末端进行添加，和/或可以用通常等同的残基替换天然存在的残基，如肽化学的全部领域所众所周知的，以产生具有所请求保护的多肽的至少实质部分的效力的其它类似物，而不偏离本发明的范围。而且，根据目前本领域的状况，可以对位于C-末端的优选的--NH2基团进行修饰；例如，位于C-末端的氨基酸残基的羧基分子可以是-COOR、--CRO、--CONHNHR、--CON(R)(R')或--CH2-OR基，其中R和R'是低级烷基、氟代低级烷基或氢，而不偏离本发明，因为这种修饰获得等同的合成肽。(Rivier美国专利5262519)。
发明内容
提供了hGH-RH(1-29)NH2或hGH-RH(1-30)NH2的合成肽类似物的新系列。本发明的新的合成肽在动物，包括人中在刺激脑垂体GH的释放上显示出高的活性。它们还显示出对hGH-RH受体的极高的结合能力。这些合成的hGH-RH类似物还在溶液中保留它们的生理活性达延长的时间期间，且在身体内抵抗酶降解。与之前所描述的类似物相比，新类似物在体内的较强的GH释放效力是hGH-RH(1-29)NH2或hGH-RH(1-30)NH2中的替换的组合以及对体内降解的抗性所带来的。不以任何方式限制本发明或其范围，申请人希望表达他们的认识，即体外活性的保留和对体内降解的抗性是分子中的多重取代造成的：在位置1并入N-Me-Tyr或脱氨基-Tyr(Dat)保护肽不在N-末端被降解；在位置29并入胍基丁胺(Agm)或-NH-CH3或-NH-CH2-CH3或者用omega-氨基酸延长C-末端保护肽不在C-末端被降解；而且还在合成肽中用鸟氨酸(Orn)替换两个赖氨酸，其中鸟氨酸是胰蛋白酶样酶的不良底物；残基15的Gly被Abu替换。为增加化学稳定性，位置8的Asn被Gln、Thr或Ala替换。并且位置27的Met被正亮氨酸(Nle)替换。肽中的其它残基的替换和这些替换的组合也被发现提高生物学活性。
合成肽
合成的hGH-RH类似物可以被表示为
[R1-A1,A2,A6,A8,A11,A12,A15,A20,A21,A22,Nle27,A28,A29,A30]hGH-RH(1-30)-R2
或者可替换地表示为
[R1-A1-A2-Asp-Ala-IleA6Thr-A8-Ser-Tyr-A11-A12-Val-Leu-A15-Gln-Leu-Ser-Ala-A20,A21-A22-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-A28,A29,A30]-R2(序列表序号：1)
其中
R1是Ac、Tfa，或不存在，
A1是Tyr、Dat或N-Me-Tyr，
A2是Ala、D-Ala、Abu或D-Abu，
A6是Phe或Fpa5，
A8是Asn、Ala、Gln、Thr或N-Me-Ala，
A11是Arg、His或Har，
A12是Orn或Lys(Me)2，
A15是Abu或Ala
A20是Arg、His或Har，
A21是Orn或Lys(Me)2，
A22是Leu或Orn，
A28是Ser或Asp，
A29是Arg、Har、Agm、D-Arg或D-Har，
A30是Arg、Agm、Ada、Amc、Aha、Apa、Har、D-Arg、D-Har、Gab、Gln、D-Gln、Gln-Gab,
D-Gln-Gab或不存在，
R2是-NH2、-OH、-NHR3、-N(R3)2或-OR3，其中R3是C1-12烷基、C2-12烯基或C2-12炔基中的任一种，
优选地，条件是，如果A29是Agm，那么A30和R2不存在，且适当地是，A1仅仅是N-Me-Tyr，更优选地，条件是，如果A30是Agm，那么R2不存在，及其药学上可接受的盐。
优选实施方案详述
A.合成肽1.术语
用于定义氨基酸残基和合成肽的术语是由IUPAC-IUB生物化学术语委员会(CommissiononBiochemicalNomenclature)规定的(EuropeanJ.Biochem.,1984,138,9-37)。天然氨基酸是指蛋白质中常见的、天然存在的氨基酸，包括Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Ser、Thr、Lys、Arg、Asp、Asn、Glu、Gln、Cys、MetPhe、Tyr、Pro、Trp和His。Nle指正亮氨酸，Abu指alpha氨基丁酸，Orn指鸟氨酸。其它所使用的缩写如下所示：
缩写
Aahalpha-氨基己酸
Aapalpha-氨基戊酸
Abu氨基丁酸
Ac乙酰基
AcOH乙酸
Ac2O乙酸酐
Ada12-氨基十二酰基
Agm胍基丁胺
Aha6-氨基己酰基
AM氨甲基
Amc8-氨基辛基
Apa5-氨基戊酰基
Aibalpha-氨基异丁酰基
Boc叔丁氧羰基
Bom苄氧基甲基
2BrZ2-溴-苄氧羰基
But叔丁基(酯)
Bzl苄基
cHx环己基
2CIZ2-氯-苄氧羰基
2CITrt2-氯三苯甲基
Cpa对-氯苯丙氨酸
Dat脱-氨基-酪氨酸
DCM二氯甲烷
DICN,N'-二异丙基碳二亚胺
DIEA二异丙基乙胺
DMF二甲基甲酰胺
Et乙基
Fm芴甲基
Fmoc芴甲氧羰基
For甲酰基
Fpa单-或聚-氟化Phe(芳香环上的氟取代)
Fpa5五氟-Phe
Gabgamma-氨基丁酰基
GH生长激素
GH-RHGH释放激素
Har高精氨酸
HBTU2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯
hGH-RH人GH-RH
HOBt1-羟基苯并三唑
HPLC高效液相色谱
Ibu异丁酰基
MBHA对-甲基二苯甲基胺
Me甲基
MeOH甲醇
MeCN乙腈
Mmt4-甲氧三苯甲基
Mtr4-甲氧基-2,3,6-三甲基苯磺酰
N-Me-AlaN-甲基-Ala
N-Me-TyrN-甲基-Tyr
Nle正亮氨酸
NMMN-甲基吗啉
Oaaomega-氨基酸
Orn鸟氨酸
PAM苯乙酰胺甲基
Pbf2,2,4,6,7-五甲基-二氢苯并呋喃-5-磺酰基
Ph苯基
PS聚苯乙烯
rGH-RH大鼠GH-RH
RP-HPLC反相HPLC
SPA对-磺酰基-苯氧乙酰基
tBu叔丁基(醚)
TFA三氟乙酸
Tfa三氟乙酰基
Tos对-甲苯磺酰基
Trt三苯甲基(trityl)(三苯甲基(triphenelmethyl))
Z苄氧羰基
根据hGH-RH(1-29)中的氨基酸残基对合成肽的氨基酸序列进行编号；因此，例如，合成肽中的Ala4和R8在序列中所处的位置与hGH-RH(1-29)中的Ala4和R8残基相同。
本文中也遵循这样的惯例：肽的N-末端位于左边，C-末端位于右边。
2.优选的实施方案
本发明的hGH-RH激动剂被设计为增加脑垂体水平的Gh释放。本发明的合成肽的特别优选的实施方案显示于表1：
B.制备方法
1.合成概述
肽通过适当的方法被合成，例如通过完全固相技术，通过部分固相技术，通过片段缩合或者通过经典的液相合成(solutionphasesynthesis)。例如，完全固相合成记载在教科书“SolidPhasePeptideSynthesis(固相肽合成)”,J.M.StewartandJ.D.Young,PierceChem.Company,Rockford,Illinois,1984(2nd.ed.)和M.Bodanszky,“PrinciplesofPeptideSynthesis(肽合成的原理)”,SpringerVerlag,1984中。优选使用固相合成制备hGH-RH激动剂肽，例如通常由Merrifield,J.Am.Chem.Soc,85p.2149(1963)所描述的，虽然也可以使用之前所提及的本领域已知的其它等同的化学合成。
使用在其alpha氨基基团处被保护的氨基酸进行合成。优选使用尿烷类保护基团(Boc或Fmoc)保护alpha氨基基团。在特定的情况下，在合成过程中也使用被保护的omega-氨基酸。Boc或Fmoc保护基团也适合于保护omega-氨基基团。
在固相合成中，N-alpha-被保护的或N-omega-被保护的氨基酸分子形成位于最终肽的C-末端的氨酰基基团，其与聚合树脂支持物通过化学键相连。完成偶联反应之后，alpha(或omega)氨基保护基团被选择性除去以允许在氨基末端发生后续偶联反应，优选当N-alpha-(N-omega-)保护基团是Boc的时候使用DCM中的50％TFA除去，当N-alpha-(N-omega-)保护基团是Fmoc的时候用DMF中的20％哌啶除去。类似地具有Boc或Fmoc-保护的alpha(或omega)氨基基团的其余氨基酸被逐步偶联到树脂上的先前的氨基酸的游离氨基基团上，以获得所期望的肽序列。由于氨基酸残基被偶联到C-末端残基的alpha(或omega)氨基基团上，合成的hGH-RH类似物肽的生长从C末端开始向N-末端前进。当已获得所期望的序列时，肽被酰化，或者N-末端的氨基基团保持游离，并从支持物聚合物上除去肽。
每种被保护的氨基酸被过量使用(2.5或3倍当量)，且偶联反应通常在DCM、DMF或其混合物中进行。每个阶段偶联反应完成的程度通过茚三酮反应监测。在测定到不完全偶联的情况下，在下一个氨基酸偶联之前除去alpha(或omega)氨基保护基团之前，重复偶联步骤(procedure)，或者通过乙酰化作用使未反应的氨基基团封闭(capping)。
典型的合成循环显示在表2和表3中。
表2.使用Boc策略的典型合成循环的方案
表3.使用Fmoc策略的典型合成循环的方案
合成完成后，可以用肽化学中众所周知的步骤完成肽从树脂上的切割。
2.支持物聚合物的选择
hGH-RH激动剂肽可以在多种支持物聚合物上被合成，即甲苯氢胺(MBHA)、氯甲基(Merrifield)、聚丙烯酰胺(PAM)、Rinkamide或Wang树脂。肽还可以在已经事先用合适的接头衍生化的氨甲基、MBHA或其它树脂上被合成。这种接头的实例是用于连接C-末端羧基基团的碱不稳定的4-羟甲基苯甲酸(HMBA)接头、可以通过其胍基连接胍基丁胺的酸不稳定的对-磺酰基-苯氧乙酰(SPA)接头、或者允许用C-末端甲酰胺(-NH-CH3)来合成肽的酸不稳定的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰接头。
当使用Boc策略合成具有酰胺化C-末端的肽时，优选的树脂是MBHA。C-末端氨基酸与该树脂的连接可以通过表2中描述的标准DIC-介导的偶联方法完成。
为了制备具有C-末端甲酰胺(-NH-CH3)或乙酰胺(-NH-CH2-CH3)修饰的肽，可以使用两种方法：a)通过高温下氟化钾(KF)或铯盐介导的偶联在氯甲基树脂上装载上Boc-保护的C-末端氨基酸；为合成具有C-末端甲酰胺(-NH-CH3)或乙酰胺(-NH-CH2-CH3)修饰的肽，分别使用a)[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM或b)3-[(乙基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂。使用这些树脂，不得不在合成前使用表3描述的方法从树脂除去Fmoc保护基团。
为了合成C-末端具有Agm的肽，使用两种方法。在一种方法中，支持物相是MBHA树脂或氨甲基树脂，Boc-Agm的胍基基团通过稳定但易于切割的接头例如对-磺酰基-苯氧乙酰(SPA)分子与支持物聚合物连接。alpha-氨基-Boc-保护的Agm与氯磺酰基苯氧乙酸Cl-SO2-C6H4-O-CH2-COOH反应生成Boc-Agm-SO2-C6H4-O-CH2-COOH。然后使用DIC或HBTU-HOBt-DIEA作为活化试剂使该化合物与支持物聚合物(例如MBHA)偶联，生成Boc-Agm-SPA-MBHA。在另一种方法中，使用Agm-SO2-PS树脂在pH10-13进行合成(1％DVB，100-200目，2.5mmol/g，AdvancedChemTech(Louisville,KY))形成Boc-Agm-SO2-树脂。
3.使用的氨基酸衍生物
双官能团氨基酸，即那些不具有侧链官能团的氨基酸主要以它们的N-alphaBoc-或Fmoc-衍生物形式被用于合成。双官能团的omega-氨基酸通常也以它们的N-omegaBoc-或Fmoc-衍生物的形式被使用。因此，Boc-Gly-OH或Fmoc-Gly-OH典型地被用于合并Gly残基。天然存在的双官能团氨基酸是Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Phe和Pro，本发明中所使用的一些众所周知的非编码双官能团氨基酸是Abu、Aib、Gab、Nle、Aah和Aap。
肽的一些氨基酸残基具有与偶联或去保护反应中所使用的试剂起反应的侧链官能团。当存在这种侧链基团时，适当的保护基团与这些官能团连接以防止在偶联反应中发生不希望的化学反应。
在选择特定的侧链保护基团上遵循下述的一般规则：(a)保护基团优选在偶联条件下保持其保护特性并且不会脱落，(b)保护基团在合成的每一步在用于除去alpha氨基保护基团的条件下应当是稳定的，(c)所期望的氨基酸序列的合成完成时，在不会令人不期望地改变肽链的反应条件下，侧链保护基团必须是可除去的。
当在合成中使用Boc-氨基酸时，反应的侧链官能团可以如下被保护：Tos或硝基(NO2)用于保护Arg和Har；cHx或Fm用于保护Asp和Glu；Bom用于保护His；2CIZ或Fmoc用于保护Lys和Orn；Bzl用于保护Ser和Thr；以及2BrZ用于保护Tyr。Asn和Gln的侧链无保护。
在Fmoc合成的情况下，起反应的侧链官能团可以通过如下其他合适的基团被保护：2,2,4,6,7-五甲基-二氢苯并呋喃-5-磺酰基(Pbf)、4-甲氧基-2,3,6-三甲基苯磺酰基(Mtr)、或二-Boc用于保护Arg和Har；三-丁基(But)用于保护Asp和Glu；无保护基团或三苯甲基(Trt)用于保护Asn和Gln；Trt用于保护His；Boc或4-甲氧基三苯甲基(Mmt)用于保护Lys和Orn；tBu或Trt用于保护Ser和Thr；以及tBu或2-氯代三苯甲基(2CITrt)用于保护Tyr。除了上述提及的众所周知的编码和非编码氨基酸，本申请的一些肽含有较不常见的非编码氨基酸例如高精氨酸(Har)；鸟氨酸(Orn)；N-甲基-丙氨酸[N-Me-Ala]；N-甲基-酪氨酸[N-Me-Tyr]；五氟-苯丙氨酸[Phe(F)5、Fpa5]。这些氨基酸残基通过与适当的被保护的氨基酸衍生物偶联被并入到肽中。可以使用的这种被保护的氨基酸衍生物的不完全列表如下：Boc-Har(Tos)-OH、Boc-Orn(2CIZ)-OH、Boc-N-Me-Ala-OH、Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH、Boc-Fpa5-OH、Fmoc-Har(Pbf)-OH、Fmoc-Orn(Boc)-OH、Fmoc-N-Me-Ala-OH和Fmoc-N-Me-Tyr(2CITrt)-OH。上述提及的非编码氨基酸的被保护的衍生物通常可以从几个商业供应商获得，包括Novabiochem(SanDiego,CA),AdvancedChemTech(Louisville,KY),Bachem(KingofPrussia,PA),PeptidesInternational(Louisville,KY),RSPAminoAcidAnaloguesDBA(Worcester,MA)和AnaSpec(SanJose,CA)。
4.氨基酸残基的逐步偶联
使用上述提及的支持物聚合物，并且在装载被保护的C-末端氨基酸或Agm残基之后，可以以常规方式通过固相合成适当地组装出肽本身。每种被保护的氨基酸以相对于与树脂结合的游离氨基残基而言过量大约三倍摩尔数的量被偶联，且偶联可以在例如DMF—DCM(1:1)或单独的DMF或单独的DCM的介质中进行。合适的偶联试剂的选择在本领域的技术之内。特别适合作为偶联试剂的是N,N'-二异丙基碳二亚胺(DIC)，或者在存在DIEA的条件下HBTU与HOBt的组合。每个阶段的偶联反应的成功优选通过茚三酮反应监测。在发生不完全偶联的情况下，在除去alpha(或omega)氨基保护基团之前，或者重复偶联步骤，或者使用封闭试剂(cappingreagent)将与树脂结合的未反应的氨基残基乙酰化。合适的封闭试剂是1-乙酰咪唑和吡啶中的Ac2O。
5.从支持物聚合物上切掉肽并除去侧链保护基团
当完成合成时，肽被从支持物相上切掉，而且其侧链保护基团被除去。
在使用Boc策略在MBHA、Merrifield或PAM树脂上制备具有酰胺化C-末端(-CONH2)或具有C-末端羧基基团(-COOH)的肽的情况下，肽从树脂上的去除通过用试剂例如液态氟化氢(HF)处理来进行。在Boc-Agm-SPA-MBHA或Bos-Agm-甲苯磺酰基-树脂上合成肽的情形也是如此。在一些实例中，液态HF还切掉所有剩余的侧链保护基团。但是，如果肽上存在抗HF处理的侧链保护基团，应当进行额外的切割步骤以除去这些保护基团。因此，在HF处理之前或之后，通过用DMF中的20％哌啶进行处理除去Fm和Fmoc保护基团。
适当地，干燥的和被保护的肽-树脂用由每克肽-树脂1.0mL间甲酚和10mL无水氟化氢组成的混合物在0℃处理60-120min，以从树脂上切掉肽并且除去HF-不稳定的侧链保护基团。在氮气气流和真空下除去氟化氢之后，用乙醚沉淀游离肽，过滤，用乙醚和乙酸乙酯洗涤，用50％乙酸提取并冻干。
在使用Boc策略在Merrifield或HMBA-MBHA树脂上制备具有甲基-(-NH-CH3)或乙基-酰胺(-NH-CH2-CH3)的C-末端的肽的情况下，首先通过甲胺(CH3NH2)或乙胺(CH3CH2NH2)介导的氨解从树脂上切掉被保护的肽。适当地，液态CH3NH2或CH3CH2NH2被转移至包含有干燥的和被保护的肽-树脂的冷却的厚壁玻璃烧瓶中。液态CH3NH2或CH3CH2NH2的量应当足以覆盖肽-树脂。用塞子塞住烧瓶，与液态CH3NH2或CH3CH2NH2一起在室温摇动3.5小时，以使反应发生。在此之后，在干冰浴中冷却烧瓶，打开，从包含树脂和切掉的肽的混合物的固体残余物滤出液态CH3NH2或CH3CH2NH2，肽仍然连接有保护基团。
固体残余物被干燥并如上所述进行HF处理，以除去肽的侧链保护基团。
在使用Fmoc策略分别在[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM或3-[(乙基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上制备具有甲基-(-NH-CH3)或乙基-酰胺(-NH-CH2-CH3)的C-末端的肽的情况下，用切割混合物(cleavagecocktail)从树脂切掉被保护的肽。由于接头的性质和肽的氨基酸组成，没有单一的切割和去保护步骤对所有的肽都是最优的，下面的切割混合物被证明最适合于GHRH激动剂的切割和去保护：94％的TFA、3％的H2O、1.5％的间甲酚和1.5％的苯酚。切割混合物必需新鲜制备，并且必需使用高质量的TFA和清除剂。所使用的切割混合物的量取决于肽-树脂的量和其性质二者。应当使用足够的混合物溶液以在反应过程中使树脂饱和和膨胀，在漂珠下面有大约2-3mm清液。通常0.5g树脂使用5mL切割混合物。反应时间的选择取决于接头和肽的侧链保护基团。优选地，3-小时的反应时间被用于GHRH激动剂的切割和去保护。为了诱导肽沉淀，切割混合物被逐滴加入到冷的(优选-20℃)乙醚中。非肽产物保留在乙醚溶液中。通过过滤或离心收集沉淀物质并用冷的乙醚洗涤三次以除去任何残余的清除剂。被切掉的和去保护的肽溶解于50％乙酸中，通过过滤从树脂分离，并且，在用水稀释后，溶液被冻干。
6.纯化
粗肽的纯化可以通过肽化学中众所周知的步骤实现。例如可以在配备有127P溶剂模块；UV-VIS检测器，模块166P；具有CPU监控器和打印机，和32-Karat软件，3.0版本的计算机工作站的BeckmanSystemGoldHPLC系统(BeckmanCoulter,Inc.,Brea,CA)上使用XBridgePrepOBDTM反相柱(4.6x250mm，装满C18硅胶，孔径300，粒径5μm)(WatersCo.,Milford,MA)进行纯化。柱用由(A)0.1％的含水TFA和(B)70％的含水MeCN中0.1％的TFA组成的溶剂系统以线性梯度模式(例如120min内30-55％的B)洗脱；流速为12mL/min。在220nm监测洗脱液，使用Hewlett-PackardModelHP-1090液相色谱通过分析HPLC检查级分，并合并(pooled)级分以获得最大纯度。在SupeicoDiscoveryHSC18反相柱(2.1x50mm、C18、孔径300、粒径3μm)(Supeico,Bellefonte,PA)上进行分析HPLC，用由上述所定义的(A)和(B)组成的溶剂系统以0.2mL/min的流速进行等度洗脱。监测的峰值在220和280nm。由分析HPLC判断肽是基本上(>95％)纯的。用电喷雾质谱(AgilentTechnologies6210Time-of-LightLC/MS,SantaClara,CA)检查分子量并通过氨基酸分析确认预期的氨基酸组成。
C.药物组合物和给药方式
本发明的肽可以以药学上可接受的，无毒的盐，例如酸加成盐的形式给药。这种酸加成盐的说明性例子是盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、延胡索酸盐、葡糖酸盐、单宁酸盐、马来酸盐、醋酸盐、三氟醋酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、藻酸盐、双羟萘酸盐、苹果酸盐、抗坏血酸盐、酒石酸盐等。特别优选的激动剂是低溶解性的盐，例如双羟萘酸盐等。这些酸加成盐显示出长时间的活性。
本发明的化合物适合于对人或动物受试者进行皮下(s.c)、肌内(i.m.)或静脉内(i.v)给药；鼻内或肺吸入给药；经皮递送给药；或以用生物可降解的合适聚合物(例如D,L-丙交酯-聚乙交酯)制造的储药(depot)形式(例如微胶囊、微颗粒、或圆柱形棒状植入物)，前两种储药形式的方式是优选的。其它等同的给药方式也在本发明的范围内，即持续滴注(drip)、皮肤贴剂、储药注射、输液泵和延时释放方式例如微胶囊等。给药是在任何生理学上可接受的可注射载体中进行的，生理盐水是可接受的，虽然也可以使用其它本领域已知的载体。
肽优选用药学上可接受的载体例如等渗盐水进行肠胃外、肌内、皮下或静脉内给药。可替换地，肽可以用合适的载体进行鼻内喷雾给药或者通过肺吸入给药。一种合适的给药方式是用生物可降解的合适聚合物(例如D,L-丙交酯-聚乙交酯)制造的储药形式，如包含分散的激动化合物的微胶囊、微颗粒或者圆柱形植入物。
所需要的肽的量取决于药物组合物的类型和给药方式。在人受试者接受GH-RH激动剂溶液，通过i.m.或s.c.注射，或者以鼻内喷雾或肺吸入的形式给药的情况下，典型的剂量是在2-20mg/天/患者之间，一天一次，或者分为2-4次给药/天。当GH-RH激动剂向人患者静脉内给药时，典型的剂量是在8-80μg/kg体重/天的范围内，分为1-4次顿量注射(bolusinjections)/天或者连续输注(infusion)。当使用GH-RH激动剂的储药制备物的时候，例如通过i.m.注射双羟萘酸盐或者其它低溶解性的盐，或者通过i.m.或s.c.进行包含分散在生物可降解聚合物中的激动化合物的微胶囊、微颗粒或植入物的给药时，典型的剂量是在1-10mg激动剂/天/患者之间。
D.hGH-RH激动剂的医疗应用
本发明的产品可以用于促进温血动物(例如人)的生长，还可以增加产奶哺乳动物，适宜地但不完全是羊和牛，优选牛的雌性的产奶量。
本发明的肽可以以药学上可接受的、无毒的盐，例如酸加成盐的形式给药。这种酸加成盐的说明性例子是盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、延胡索酸盐、葡糖酸盐、单宁酸盐、马来酸盐、醋酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、藻酸盐、双羟萘酸盐、苹果酸盐、抗坏血酸盐、酒石酸盐等。
本发明的化合物适合于对人或动物受试者进行s.c、i.m.、或i.v给药；鼻内或肺吸入给药；或以用生物可降解的合适聚合物(例如D,L-丙交酯-聚乙交酯)制造的储药形式(例如微胶囊、微颗粒、或圆柱形棒状植入物)，前两种储药方式是优选的。其它等同的给药模式也在本发明的范围内，即持续滴注、储药注射、输液泵和延时释放方式例如微胶囊等。给药是在任何生理学上可接受的可注射载体中进行的，生理盐水是可接受的，虽然也可以使用其它本领域已知的载体。
剂量水平适当地是在每次注射0.01μg和2μg/kg体重之间，除了储药形式，其注射的量应当计算为持续大约15至大约30天或更长。这些剂量范围仅仅是优选的。非储药形式的给药可以是在每天1-4次之间，或者对于泌乳的哺乳动物，在每次挤奶之后。
直到开始通过重组DNA方法产生生长激素，来自于脑垂体的人生长激素的小量供应限制了它在治疗患有生长激素缺乏症的儿童中的应用。合成的人生长激素的广泛获得使得可能对生长激素的其它潜在有益用途和它的更多的生理作用进行长期研究。虽然合成的GH目前在美国仅被批准用于治疗由于缺乏内源生长激素导致的生长不足，这种治疗也已被用于治疗非传统GH缺乏的矮小儿童。然而，用hGH进行长期治疗的成本和对每天s.c.给药的需要是重点考虑的问题。目前，用于生长缺陷儿童的生长激素治疗的成本范围是一年$10,000至30,000，这取决于体重。每周三次用hGH治疗70-kg的成年人，一年要花费$13,800。Vance,M.L,N.Eng.J.Med323:52-54(1990)。因此，在生长激素分泌减少的中老年人中进行长期生长激素治疗将会需要相当大的个人和金钱投资。此外，全球有许多儿童因为缺乏GH而生长迟缓，他们因这项治疗的费用问题而无法用hGH进行治疗。因此，迫切需要开发能释放GH并且具有可承受价格的药物。这种增加内源生长激素分泌的替代方法是通过生长激素释放激素的激动类似物的给药来实现的。用GH-RH激动类似物进行的治疗比使用hGH的费用少得多。此外，这些类似物的长效递送系统的开发能够使得这种新的治疗模式更实用和更便利。
通过重组DNA技术产生合成的生长激素的能力使得GH以可能无限的量被制造。这极大地便利了GH-缺乏的儿童的治疗。正如上面所述的，合成的hGH目前仅被批准用于治疗由于缺乏足够的内源生长激素导致的生长不足，但是hGH也已被用于治疗非传统GH缺乏的矮小儿童，例如患有特纳氏综合症的女孩；患有慢性肾功能不全和严重生长迟缓的青春期前儿童；以及患有非GH缺乏性身材矮小的儿童。
通过基因工程生产GH用于临床应用非常昂贵。特别是，存在这些商业制备物被来自于所使用的细菌菌株的材料污染的风险。这些细菌污染物可能是热原或者可能在患者中导致免疫原性反应。通过多个连续的层析步骤进行重组产品的纯化。管理机构规定的严格的纯度标准必需多个质量控制步骤。美国专利6458764。
每年在美国出生的3百万儿童中，90,000名儿童的身高将会低于第3百分位。这些儿童可以被划归到身材矮小的行列，并且可能是GH治疗的候选者。目前用人生长激素进行的治疗每年花费大约$20,000，治疗的平均时间长度是大约10年。通常当患者达到可接受的成人高度(身高大大超过5英尺)时，或者当患者性成熟并且骨骺闭合时，那时线性生长放缓，或者如果患者对治疗没有反应时，则停止治疗。如果所有身高低于第3百分位的儿童接受5年期的hGH治疗，用于身高增加治疗的hGH每年将会花费至少$80亿至100亿。LantosJ.etal.,JAMA261:1020-1024,(1989)。
需要确定患有身材矮小的儿童产生hGH的内源性生理能力，这可以通过使用50-100μg剂量的GH-RH；50-100μg剂量的式I的合成肽的GH-RH类似物；并检测由每一剂量引发的GH反应，进行诊断性检测来实现。
检测方法可以是将指示从患者抽取的血样中存在的hGH的定量数量的任何传统方法。血清中GH的浓度通过标准放射免疫检测(“RIA”)步骤测定，其步骤在例如MilesI.E.M.etal.,Lancetii,492-493(1968)或O'DellWetal.,J.Lab.Clin.Med.70,973-80(1967)中描述。
如下进行检测。首先，进行GH-RH剂量给药。三十分钟后，取血样用于对GH进行RIA。可以使用各种商业可获得的试剂盒(例如NicholsInstituteofDiagnostics,SanJuanCapistrano,Calif.)或者hGH的参考制备物(例如NIAMDD-hGH-RP-1)对GH进行RIA。等待6-24小时GH-RH的效果渐渐消失后，进行合成肽GH-RH类似物的剂量给药。再次抽血对GH进行放射免疫检测。
第一次检测中存在正常hGH反应表明存在内源hGH产生能力。这个结果也表明短期的、温和的GH-RH治疗，如果有的话，可能是合适的。对于第一次剂量的低GH反应或者无反应仅表明应当基于第二次检测的结果对GH-RH进行评价。如果第二次剂量后有好的hGH反应，很明显生理性hGH产生能力没有被GH-RH引发。这表明可能需要用GH-RH类似物进行治疗。最后，对两次检测都没有反应或是低反应可信地表明缺乏产生hGH的生理能力，因此表明可能需要用hGH治疗。
如上面所指出的，儿童的身材矮小可能由多种原因导致，其中没有哪种原因是能立即看出来的。对于所有有这种病症(condition)的儿童进行诊断性检测将会极大地理清身材矮小的原因。这种普遍的筛选试验还将为合乎期望的治疗提供早期指征。
糖皮质激素是男性线性生长的强效抑制剂，生长抑制是哮喘儿童用类固醇进行长期治疗的一个众所周知的风险。因此，生长萎缩是幼年时代长期进行糖皮质激素给药的严重后果。GH分泌的抑制在某种程度上是由于糖皮质激素的长期给药抑制GHRH。这种抑制发生在下丘脑或之上的水平上，在这种情况下，只有用GH-RH激动剂进行治疗才会刺激线性生长。
生长激素倾向于随着衰老过程而下降，并且可能导致肌肉质量下降以及肥胖。研究表明具有生长激素缺乏症的健康年长男性和女性在经过六个月的hGH给药之后，瘦体重(leanbodymass)增加，而脂肪组织的质量减少。长期hGH给药对于身体组成的其它效果包括脊椎骨密度增加以及皮肤皱褶厚度增加。此外，已有报道每天给绝经期女性注射GH-RH，注射8天，增加GH反应和IGF-I水平，并且提高血清骨钙素水平。因此，用GH-RH激动类似物进行的治疗减少肌肉量、骨量和皮肤量的损失，并且减少通常伴随着衰老过程的体脂的增加。
生长激素是强效的合成代谢激素，其增加蛋白质合成和氮存留。GH-RH激动类似物的长期给药增加内源性生长激素分泌。用GH-RH激动类似物进行的治疗在医学的其它领域也有应用，例如导致加速的体重减轻的分解代谢状态；严重体表烧伤患者的组织修复，使不愈合骨折加速愈合；以及心力衰竭的一些情况。
虽然在所有治疗反应可以被归因于GH之前需要进行长期的随访，已存在心脏质量的改善以及心脏质量和收缩能力的增加。用hGH进行的治疗中断心脏-恶病质循环。这种反应与其它观察相一致，GH的治疗对成年人的分解代谢状态具有重要作用。在这些病症中增加内源生长激素分泌的替代方法是GH-RH激动类似物的给药[Korpasetal.,J.Clin.Endoc.Metabol.75,530-535,(1992)]。
这些GH-RH的激动类似物在许多应用中可以替代hGH。GH-缺乏的儿童对GH-RH(1-40)、GH-RH(1-29)或GH-RH(1-44)有反应，其生长增加。ThornerM.0.etal.,supra；Rossetal.,supra；TakanoKetal.,supra；和Kirketal.,supra。大部分对hGH有反应的儿童会对GH-RH有反应。这是因为大部分GH-缺乏的儿童的下丘脑有GH释放的缺陷，从而在进行下丘脑激素GH-RH的类似物的给药之后会表现出对GH的反应。因此GH-RH的重复给药促进线性生长。一天两次皮下给予GH-RH(1-29)NH.sub.2将GH-缺乏儿童组的线性生长提高大致50％(Rossetal，上面所引用的)。一小组严重GH-缺乏的儿童在6个月的治疗之后将会对GH-RH有反应。
GH-RH的激动类似物在生长迟缓儿童中的进一步临床应用
1.作为生长激素缺乏症的筛查试验。
2.治疗下丘脑GH-RH缺乏症。
3.体质性生长迟缓。
4.特纳氏综合症。
5.家族性身材矮小。
6.具有慢性肾功能不全和严重生长迟缓的青春期前儿童。
7.宫内发育迟缓的婴儿和儿童。
8.脑垂体或下丘脑病变放疗之后的GH缺乏儿童。
9.长期用糖皮质激素治疗并且以低于正常速度生长的儿童。
GH-RH的激动类似物在成人中的进一步临床应用
1.老年患者：减少肌肉量、骨量和皮肤量的损失，并减少通常伴随着衰老过程的体脂增加。
2.分解代谢状态
3.创伤愈合
4.骨折的延迟愈合
5.骨质疏松症
6.肥胖
7.作为患有慢性阻塞性肺病的营养不良患者的完全肠胃外营养的添加物
8.心力衰竭
9.GH-RH激动剂在太空飞行的过程中以及之后被使用以抵消GH分泌的减少。太空飞行的失重显著减少了生长激素的分泌，这可以解释许多宇航员在长时间的太空飞行之后经历的骨质疏松和肌无力。
GH-RH激动剂的治疗用途
使用hGH-RH和hGH-RH(1-40)对生长激素缺乏症的成功治疗已经分别在TakanoKetal.,Endocrinol.Japan35；775-781(1988)和ThornerM.O.etal.,N.Engl.J.Med.,312,4-9(1985)中报道。使用hGH-RH(1-29)进行的有疗效地治疗(therapeuticictreatments)也已报道能治疗人生长激素缺乏症，RossR.J.M.etal.,Lancet1:5-8,(1987)；老年男性中的GH减少；Corpasetal.,J.Clin.Endocrin.Metabol.75,530-535(1992)；和先天性身材矮小，KirkJ.M.W.etal.,ClinicalEndocrinol.41,487-493(1994)。由于较早的hGH-RH类似物已成功地治疗与低水平GH相关的病症，本文所描述的新的合成hGH-RH肽也诱导GH释放，并且是这些病症的新的治疗疗法(therapeutictreatments)并不会令人惊讶。
实际上，作为治疗剂的这种适用性通过下面报道的体内试验所证实。这种试验被认为能够合理地预测在治疗高等哺乳动物，包括人上能够预期的结果。根据下面的结果，可以预期新的合成的hGH-RH类似物可用于有疗效地治疗(therapeuticallytreatments)人的生长激素缺乏症，以及因非常低水平的GH而产生的多种其它病症。因此，本发明进一步包括治疗人生长激素缺乏症的方法，包括每kg体重每天给药0.01.mu.g至2.mu.g肽。
合成肽可以用赋形剂配制成药物剂型并为治疗或诊断目的对人或动物给药。更特别地，合成肽可用于促进温血动物生长，同样地，在人中用于通过刺激内源GH的体内合成和/或释放治疗人生长缺陷；用于治疗特定的生理病症例如由于慢性肾功能不全导致的严重生长迟缓；用于抵消衰老的特定影响，例如减少肌肉损失和骨损失；用于加速愈合和组织修复；用于提高饲料利用率，从而增加瘦肉/脂肪比以帮助消耗脂肪增加肌肉；还用于在泌乳奶牛中增加产奶量。进一步，合成肽可以应用于确定产生hGH的内源性生理能力的方法中。
实施例
结合下述实施例对本发明进行描述，下述实施例的描述仅仅是为了举例说明的目的。在实施例中，使用L-构型的光学活性的被保护氨基酸，除非特别指出。下述实施例描述通过固相技术合成新的GH-RH激动剂的适当方法。
实施例I
N-Me-Tyr1-Ala2-Asp3-Ala4-Ile5-Fpa56-Thr7-Gln8-Ser9-Tyr10-Arg11-Orn12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Orn21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-Asp28-Agm29(肽20103)
[N-Me-Tyr1,Fpa56,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)(序列表序号：2)
使用人工固相肽合成设备以逐步的方式进行合成。用两种方法进行在C-末端具有Agm的肽的合成。在一种方法中，合成的起始物质是具有0.3mmol/g的取代的Boc-胍基丁胺-NG-磺酰基-苯氧乙酰基-MBHA(Boc-Agm-SPA-MBHA)树脂，其是从CaliforniaPeptideResearch,Inc.(Napa,CA)商购获得的。这种树脂的合成在美国专利No.4,914,189和科学文献(ZarandiM,SerfozoP,ZsigoJ,BokserL,JanakyT,OlsenDB,BajuszS,SchallyAV,Int.J.PeptideProteinRes.39:211-217,1992)中已有描述，在此通过引用将其合并到本文中。简短地说，Boc-Agm-SPA-MBHA树脂(1.67g、0.50mmol)在DCM中预膨胀，然后进行表2中所述的去保护和中和方案以除去Boc保护基团并制备肽-树脂以进行下一个氨基酸的偶联。在另一种方法中，使用Agm-磺酰基-聚苯乙烯(PS)树脂[1％DVB，100-200目，0.74mmol/g，AmericanPeptideCompany(Sunnyvale,CA)]。简短地说，Agm-磺酰基-PS树脂(680mg、0.50mmol)用DCM中的5％DIEA中和，并根据表2中所述的方案洗涤。DMF-DCM(1:1)中的Boc-Asp(OcHx)-OH(475mg,1.5mmol)溶液与被中和的树脂和DIC(475mg、1.5mmol)一起在人工固相肽合成仪器中摇动1小时。然后进行表2中所述的去保护和中和方案以除去Boc保护基团并制备肽-树脂用于下一个氨基酸的偶联。在两种方法中都使用人工固相肽合成设备以逐步的方式继续进行合成，通过使下述被保护的氨基酸在树脂上以所指出的顺序偶联，逐步组装出肽链，以获得所期望的肽序列：Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Fpa5-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
上述这些被保护的氨基酸残基(通常还可以从NovaBiochem、AdvancedChemtech、Bachem和PeptidesInternational获得)以广泛接受的惯例表示。用于特定氨基酸侧链官能团的合适的保护基团显示在括号中。上述式子中的OH基团表示每个残基的羧基末端是游离的。
被保护的氨基酸(每种1.5mmol)与DIC(235μL、1.5mmol)偶联，除了Boc-Asn-OH和Boc-Gln-OH，它们与它们的预制HOBt酯偶联。
为了从树脂切掉肽并使其去保护，将一份250mg的干燥的肽树脂与0.5mL间甲酚和5mL氟化氢(HF)在0℃搅拌2小时。在氮气气流和真空中蒸发掉HF之后，将残余物用干的二乙醚和乙酸乙酯洗涤。被切掉的和去保护的肽溶解于50％乙酸中并通过过滤从树脂中分离出来。用水稀释并冻干后，得到68mg粗产物。
粗肽使用配备有SupelcoDiscoveryHSC18反相柱(2.1mmx5cm，装满C18硅胶，孔径300，粒径3μm)(Supelco,Bellefonte,PA)的Hewlett-PackardModelHP-1090液相色谱通过分析HPLC检查。使用由(A)0.1％的含水TFA和(B)70％的含水MeCN中的0.1％TFA组成的溶剂系统进行线性梯度洗脱(例如40-70％B)，流速为0.2mL/min。在配备有127P溶剂模块；UV-VIS检测器，模块166P；具有CPU监控器和打印机，和32-Karat软件，3.0版本的计算机工作站的BeckmanSystemGoldHPLC系统(BeckmanCoulter,Inc.,Brea,CA)上进行纯化。68mg粗肽溶解于AcOH/H2O中，搅拌，过滤，并施加在XBridgePrepOBDTM反相柱(4.6x250mm，装满C18硅胶，孔径300，粒径5μm)(WatersCo.,Milford,MA)上。柱用上述的溶剂系统以线性梯度模式(例如120min内40-60％B)洗脱；流速为12mL/min。在220nm监测洗脱液，通过分析HPLC检查级分。合并纯度高于95％的级分并冻干得到18mg纯产物。在上述的SupelcoDiscoveryC18反相柱上进行分析HPLC，使用上述的溶剂系统以0.2mL/min的流速等度洗脱，。在220和280nm监测峰值。由分析HPLC判断肽是基本上(>95％)纯的。用电喷雾质谱检查分子量并通过氨基酸分析确认预期的氨基酸组成。
根据上述步骤，用与肽20103相同的方式合成肽20105、肽20107、肽20109、肽20110、肽20111、肽20113、肽20115、肽20350、肽20351、肽20356、肽20357、肽20358、肽20359、肽20360、肽20361、肽20363、肽20367、肽20370、肽20371、肽20372、肽20373、肽20374、肽20375、肽20376，除了这些肽在肽序列中还包含其它氨基酸取代，以及在它们的N-末端有酰基分子。这些合成的细节如下所述。
对于肽20105的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Fpa56,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)，下述被保护的氨基酸在Agm-SO2-PS树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Fpa5-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽20107的合成，其化学结构是[[N-Me-Tyr1,Fpa56,Ala8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)(序列表序号：3))，下述被保护的氨基酸在Agm-SO2-PS树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Fpa5-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽20109的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Fpa56,Ala8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)，下述被保护的氨基酸在Agm-SO2-PS树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Fpa5-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽20110的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Fpa56,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Agm29]hGH-RH(1-29)，下述被保护的氨基酸在Agm-SO2-PS树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Fpa5-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽20111的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Fpa56,Thr8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)，下述被保护的氨基酸在树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Fpa5-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽20113的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,Fpa56,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)(序列表序号：4)，下述被保护的氨基酸在Agm-SO2-PS树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Fpa5-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽20115的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,Fpa56,Thr8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)(序列表序号：5)，下述被保护的氨基酸在Agm-SO2-PS树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Fpa5-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽20117的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Fpa56,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Agm29]hGH-RH(1-29)，下述被保护的氨基酸在Agm-SO2-PS树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Fpa5-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽20350的合成，其化学结构是[Dat1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)，下述被保护的氨基酸在树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Fpa5-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽20351的合成，其化学结构是[Ac-N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)，下述被保护的氨基酸在Agm-SO2-PS树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Fpa5-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Ac-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽20356的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)(序列表序号：6)，下述被保护的氨基酸在Agm-SO2-PS树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Fpa5-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽20357的合成，其化学结构是[Dat1,D-Ala2,N-Me-Ala8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)，下述被保护的氨基酸在Agm-SO2-PS树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-N-Me-Ala-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Fpa5-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽20358的合成，其化学结构是[Dat1,D-Ala2,N-Me-Ala8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)，下述被保护的氨基酸在Agm-SO2-PS树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-N-Me-Ala-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Fpa5-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽20359的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Fpa56,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)，下述被保护的氨基酸在Agm-SO2-PS树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Fpa5-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽20360的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Thr8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)，下述被保护的氨基酸在Agm-SO2-PS树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽20361的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)，下述被保护的氨基酸在Agm-SO2-PS树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽20367的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)，下述被保护的氨基酸在Agm-SO2-PS树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽20370的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)(序列表序号：7)，下述被保护的氨基酸在Agm-SO2-PS树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽20371的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,Thr8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)(序列表序号：8)，下述被保护的氨基酸在Agm-SO2-PS树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽20372的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)(序列表序号：9)，下述被保护的氨基酸在Agm-SO2-PS树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽20373的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Agm29]hGH-RH(1-29)(序列表序号：10)，下述被保护的氨基酸在Agm-SO2-PS树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽20374的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Agm29]hGH-RH(1-29)(序列表序号：11)，下述被保护的氨基酸在Agm-SO2-PS树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽20375的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,Thr8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Agm29]hGH-RH(1-29)(序列表序号：12)，下述被保护的氨基酸在Agm-SO2-PS树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽20376的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Agm29]hGH-RH(1-29)(序列表序号：13)，下述被保护的氨基酸在Agm-SO2-PS树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
如肽20103的方法中所述那样进行肽20105、肽20107、肽20109、肽20110、肽20111、肽20113、肽20115、肽20350、肽20351、肽20356、肽357、肽20358、肽20359、肽20360、肽20361、肽20363、肽20367、肽20370、肽20371、肽20372、肽20373、肽20374、肽20375、肽20376的HF切割和去保护，以及用半制备HPLC进行后续纯化。纯化的化合物经分析HPLC判断是基本上(>95％)纯的。用电喷雾质谱检查分子量并通过氨基酸分析确认预期的氨基酸组成。
实施例II
Dat1-D-Ala2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe6-Thr7-Asn8-Ser9-Tyr10-Arg11-Orn12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Orn21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-Asp28-Arg29-Amc30-NH2(肽21300)[Dat1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Amc30]hGH-RH(1-30)NH2。
使用人工固相肽合成设备以逐步的方式进行合成。简短地说，对-甲基二苯甲胺(MBHA)树脂(100-200目，1％DVB，0.7mmol/g，AdvancedChemtech,Louisville,KY)(350mg、0.50mmol)用DCM中的5％DIEA中和，并根据表2中所述的方案洗涤。DMF-DCM(1:1)中的Boc-Amc-OH(390mg、1.5mmol)溶液与被中和的MBHA树脂和DIC(235μL,1.5mmol)一起在人工固相肽合成仪器中摇动1小时。由阴性茚三酮试验证明偶联反应完成之后，进行表2中所述的去保护和中和方案以除去Boc保护基团并制备肽-树脂用于下一个氨基酸的偶联。继续合成，通过使下述被保护的氨基酸在树脂上以所指出的顺序偶联逐步组装出肽链以获得所期望的肽序列：Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。上述这些被保护的氨基酸残基(通常还可以从NovaBiochem、AdvancedChemtech、Bachem和PeptidesInternational获得)以广泛接受的惯例表示。用于特定氨基酸侧链官能团的合适的保护基团显示在括号中。上述式子中的OH基团表示每个残基的羧基末端是游离的。被保护的氨基酸(每种1.5mmol)与DIC(235μL、1.5mmol)偶联，除了Boc-Asn-OH和Boc-Gln-OH，它们与它们的预制HOBt酯偶联。
为了从树脂切掉肽并使其去保护，将一份250mg的干燥的肽树脂与0.5mL间甲酚和5mL氟化氢(HF)在0℃搅拌2小时。在氮气气流和真空中蒸发掉HF之后，将残余物用干的二乙醚和乙酸乙酯洗涤。被切掉的和去保护的肽溶解于50％的乙酸中并通过过滤从树脂中分离出来。用水稀释并冻干后，得到130mg粗产物。
粗肽使用配备有SupelcoDiscoveryHSC18反相柱(2.1mmx5cm，装满C18硅胶，孔径300，粒径3μm)(Supelco,Bellefonte,PA)的Hewlett-PackardModelHP-1090液相色谱通过分析HPLC检查。使用由(A)0.1％的含水TFA和(B)70％的含水MeCN中的0.1％的TFA组成的溶剂系统进行线性梯度洗脱(例如40-70％的B)，流速为0.2mL/min。在配备有127P溶剂模块；UV-VIS检测器，模块166P；具有CPU监控器和打印机，和32-Karat软件，3.0版本的计算机工作站的BeckmanSystemGoldHPLC系统(BeckmanCoulter,Inc.,Brea,CA)上进行纯化。130mg粗肽溶解于AcOH/H2O中，搅拌，过滤，并施加在XBridgePrepOBDTM反相柱(4.6x250mm，装满C18硅胶，孔径300，粒径5μm)(WatersCo.,Milford,MA)上。柱用上述的溶剂系统以线性梯度模式(例如120min内40-60％的B)洗脱；流速为12mL/min。在220nm监测洗脱液，通过分析HPLC检查级分。合并纯度高于95％的级分并冻干得到28mg纯产物。在上述的SupelcoDiscoveryC18反相柱上进行分析HPLC，使用上述的溶剂系统以0.2mL/min的流速等度洗脱。在220和280nm监测峰值。由分析HPLC判断肽是基本上(>95％)纯的。用电喷雾质谱检查分子量并通过氨基酸分析确认预期的氨基酸组成。
根据上述程序，用与肽20300相同的方式合成肽21301,肽21304、肽21305、肽21306、肽21307、肽21308、肽21309、肽21310、肽21311、肽22325、肽22326、肽22327、肽22328、肽22329、肽22330、肽22331、肽22332、肽22334、肽22335、肽22336、肽22337、肽23250、肽23251、肽23252、肽23253、肽23254、肽23255、肽23256、肽23257、肽23258、肽23259、肽23260、肽23261、肽23262、肽23263、肽23264、肽23265、肽24340、肽24341、肽24342、肽24344、肽24345、肽24346、肽24347、肽24348、肽25501、肽25502、肽25503、肽25504、肽25506、肽25508、肽25516、肽26802、肽26803、肽2680，除了这些肽在肽序列中还包括其它氨基酸取代，和/或在它们的C-末端有不同的alpha-或omega-氨基酸分子。这些合成的细节如下所述。
对于肽21301的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Amc30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：14)，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Amc-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽21303的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Amc30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Amc-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽21304的合成，其化学结构是[Dat1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Amc30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Amc-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽21305的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Amc30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Amc-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽21306的合成，其化学结构是[Dat1,D-Ala2,Thr8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Amc30]hGH-RH(1-30)NH)，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Amc-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽21307的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Thr8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Amc30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Amc-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽21308的合成，其化学结构是[Dat1,D-Ala2,Ala8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Amc30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Amc-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽21309的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Ala8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Amc30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Amc-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽21310的合成，其化学结构是[Dat1,D-Ala2,His11,Orn12,Abu15,His20,Orn21,Nle27,Asp28,Amc30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Amc-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-His(Bom)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-His(Bom)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽21311的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,His11,Orn12,Abu15,His20,Orn21,Nle27,Asp28,Amc30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Amc-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-His(Bom)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-His(Bom)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽22325的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Apa30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：15)，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Apa-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽22326的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Apa30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Apa-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽22327的合成，其化学结构是[Dat1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Apa30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：16)，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Apa-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽22328的合成，其化学结构是[Ac-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Apa30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Apa-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Ac-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽22329的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Apa30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Apa-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽22330的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Thr8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Apa30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Apa-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽22331的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Ala8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Apa30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Apa-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽22332的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Apa30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：17)，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Apa-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽22334的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Apa30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：18)，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Apa-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽22335的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,Thr8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Apa30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：19)，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Apa-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽22336的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,Ala8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Apa30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：20)，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Apa-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽22337的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Cpa6,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Apa30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Apa-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Cpa-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽23250的合成，其化学结构是[Dat1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Har30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Har(Tos)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽23251的合成，其化学结构是[Dat1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Har30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：21)，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Har(Tos)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽23252的合成，其化学结构是[Dat1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nile27,Asp28,Har30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Har(Tos)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽23253的合成，其化学结构是[Dat1,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Har30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：22)，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Har(Tos)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽23254的合成，其化学结构是[Dat1,D-Ala2,Thr8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Har30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Har(Tos)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽23255的合成，其化学结构是[Dat1Thr8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Har30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：23)，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Har(Tos)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽23256的合成，其化学结构是[Dat1,D-Ala2,Ala8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Har30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Har(Tos)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽23257的合成，其化学结构是[Dat1,Ala8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Har30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：24)，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Har(Tos)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽23258的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Har30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Har(Tos)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽23259的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Har30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：25)，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Har(Tos)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽23260的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Har30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Har(Tos)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽23261的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Har30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：26)，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Har(Tos)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽23262的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Thr8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Har30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Har(Tos)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽23263的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,Thr8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Har30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：27)，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Har(Tos)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽23264的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Ala8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Har30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Har(Tos)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽23265的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,Ala8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Har30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：28)，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Har(Tos)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽24340的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Aha30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：29)，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Aha-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽24341的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Aha30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Aha-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽24342的合成，其化学结构是[Dat1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Aha30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：30)，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Aha-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽24344的合成，其化学结构是[Dat1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Aha30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Aha-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽24345的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Aha30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Aha-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽24346的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Aha30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Aha-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽24347的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Thr8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Aha30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Aha-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽24348的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Ala8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Aha30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Aha-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽25501的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gab30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Gab-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽25502的合成，其化学结构是[Dat1,D-Ala2,Fpa56,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gab30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Gab-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Fpa5-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽25503的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,Abu2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gab30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：31)，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Gab-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Abu-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽25504的合成，其化学结构是[Dat1,D-Abu2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gab30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Gab-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Abu-OH,Dat-OH。
对于肽25506的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Abu2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gab30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Gab-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Abu-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽25508的合成，其化学结构是[Tfa-Tyr1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gab30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Gab-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽25516的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Gab30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Gab-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽26802的合成，其化学结构是[Dat1,D-Ala2,Thr8,His11,Orn12,Abu15,His20,Orn21,Nle27,Ada30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Ada-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-His(Bom)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-His(Bom)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽26803的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,His11,Orn12,Abu15,His20,Orn21,Nle27,Ada30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Ada-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-His(Bom)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-His(Bom)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽26804的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Ada30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Ada-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
如肽21300的方法中所述那样进行肽21301、肽21303、肽21304、肽21305、肽21306、肽21307、肽21308、肽21309、肽21310、肽21311、肽22325、肽22326、肽22327、肽22328、肽22329、肽22330、肽22331、肽22332、肽22334、肽22335、肽22336、肽22337、肽23250、肽23251、肽23252、肽23253、肽23254、肽23255、肽23256、肽23257、肽23258、肽23259、肽23260、肽23261、肽23262、肽23263、肽23264、肽23265、肽24340、肽24341、肽24342、肽24344、肽24345、肽24346、肽24347、肽24348、肽25501、肽25502、肽25503、肽25504、肽25506、肽25508、肽25516、肽26802、肽26803、肽2680的HF切割和去保护，以及用半制备HPLC进行后续纯化。纯化的化合物经分析HPLC判断是基本上(>95％)纯的。用电喷雾质谱检查分子量并通过氨基酸分析确认预期的氨基酸组成。
实施例III
Dat1-D-Ala2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe6-Thr7-Asn8-Ser9-Tyr10-Arg11-Orn12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Orn21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-Asp28-Arg29-NH-CH3(肽27400)
[Dat1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3使用人工固相肽合成设备以逐步的方式进行合成。简短地说，[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂(NovaBiochem、LaJolla,CA)(750mg、0.50mmol)用DMF中的20％的哌啶去保护5和15分钟，并根据表3中所述的方案洗涤。DMF中的Fmoc-Arg(Pbf)-OH(975mg、1.5mmol)溶液与洗涤的树脂和DIC(235μL,1.5mmol)一起在人工固相肽合成仪器中摇动1小时。用DMF洗涤树脂三次后，如上所述重复偶联反应。在重复偶联之后且在由阴性茚三酮试验证明偶联反应完成之后，进行表3中所述的去保护和中和方案以除去Fmoc保护基团并制备肽-树脂用于下一个氨基酸的偶联。继续合成，通过使下述被保护的氨基酸在树脂上以所指出的顺序偶联逐步组装出肽链以获得所期望的肽序列：Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Asn(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Dat-OH。
上述这些被保护的氨基酸残基(通常还可以从NovaBiochem、AdvancedChemtech、Bachem和PeptidesInternational获得)以广泛接受的惯例表示。用于特定氨基酸侧链官能团的合适的保护基团显示在括号中。上述式子中的OH基团表示每个残基的羧基末端是游离的。
被保护的氨基酸(每种1.5mmol)与DIC(235μL、1.5mmol)偶联，除了Fmoc-Asn(Trt)-OH和Fmoc-Gln(Trt)-OH，它们与HBTU试剂偶联。
为了从树脂切掉肽并使其去保护，将一份250mg的干燥的肽树脂与2.5mL切割混合物(94％TFA、3％H2O、1.5％间甲酚和1.5％苯酚)在室温搅拌3小时。为了诱导肽沉淀，切割混合物被逐滴加入到冷的(优选-20℃)乙醚中。通过过滤或离心收集沉淀物质并用冷的乙醚洗涤三次。被切掉的和去保护的肽溶解于50％乙酸中，通过过滤从树脂分离。用水稀释并冻干后，得到118mg粗产物。
粗肽使用配备有SupelcoDiscoveryHSC18反相柱(2.1mmx5cm，装满C18硅胶，孔径300，粒径3μm)(Supelco,Bellefonte,PA)的Hewlett-PackardModelHP-1090液相色谱通过分析HPLC检查。使用由(A)0.1％的含水TFA水溶液和(B)70％的含水MeCN中的0.1％的TFA组成的溶剂系统进行线性梯度洗脱(例如40-70％的B)，流速为0.2mL/min。在配备有127P溶剂模块；UV-VIS检测器，模块166P；具有CPU监控器和打印机，和32-Karat软件，3.0版本的计算机工作站的BeckmanSystemGoldHPLC系统(BeckmanCoulter,Inc.,Brea,CA)上进行纯化。118mg粗肽溶解于AcOH/H2O中，搅拌，过滤，并施加在XBridgePrepOBDTM反相柱(4.6x250mm，装满C18硅胶，孔径300，粒径5μm)(WatersCo.,Milford,MA)上。柱用上述的溶剂系统以线性梯度模式(例如120min内40-60％的B)洗脱；流速为12mL/min。在220nm监测洗脱液，通过分析HPLC检查级分。合并纯度高于95％的级分并冻干得到19mg纯产物。在上述的SupelcoDiscoveryC18反相柱上进行分析HPLC，使用上述的溶剂系统以0.2mL/min的流速等度洗脱。在220和280nm监测峰值。由分析HPLC判断肽是基本上(>95％)纯的。用电喷雾质谱检查分子量并通过氨基酸分析确认预期的氨基酸组成。
根据上述程序，用与肽27400相同的方式合成肽27401、肽27403、肽27404、肽27405、肽27406、肽27407、肽27408、肽27409、肽27410、肽27411、肽412、肽27413、肽27414、肽27415、肽27416、肽27417、肽27418、肽27419、肽27422、肽27423、肽27424、肽27425、肽27440、肽27441、肽27442、肽27443、肽27444、肽27445、肽27446、肽27447、肽27448、肽27449、肽27450、肽27451，除了这些肽在肽序列中还包括其它氨基酸取代。这些合成的细节如下所述。
对于肽27401的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基Am树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽27403的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽27404的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Fpa56,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Asn(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Fpa5-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽27405的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27]hGH-RH(1-29)NH-CH3(序列表序号：32)，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽27406的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3(序列表序号：33)，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽27407的合成，其化学结构是[Dat1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3(序列表序号：34)，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽27408的合成，其化学结构是[Dat1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽27409的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽27410的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Thr8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽27411的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Thr8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27]hGH-RH(1-29)NH-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽27412的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Ala8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp23]hGH-RH(1-29)NH-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽27413的合成，其化学结构是[Dat1,Gln8,His11,Orn12,Abu15,His20,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3(序列表序号：35)，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-His(Trt)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-His(Trt)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽27414的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Fpa56,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gab30]hGH-RH(1-30)NH-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Gab-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Asn(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Fpa5-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽27415的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gab30]hGH-RH(1-30)NH-CH3(序列表序号：36)，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Gab-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Asn(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽27416的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,His11,Orn12,Abu15,His20,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-His(Trt)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-His(Trt)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽27417的合成，其化学结构是[Ac-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Ac-Tyr(tBu)-OH。
对于肽27418的合成，其化学结构是[Ac-Tyr1,D-Ala2,Fpa56,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Fpa5-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Ac-Tyr(tBu)-OH。
对于肽27419的合成，其化学结构是[Ac-Tyr1,Thr8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27]hGH-RH(1-29)NH-CH3(序列表序号：37)，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Ala-OH,Ac-Tyr(tBu)-OH。
对于肽27422的合成，其化学结构是[N-Me-D-Tyr1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽27423的合成，其化学结构是[N-Me-D-Tyr1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Asn(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽2742.4的合成，其化学结构是[Dat1,Thr8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27]hGH-RH(1-29)NH-CH3(序列表序号：38)，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽27425的合成，其化学结构是[N-Me-D-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽27440的合成，其化学结构是[Dat1Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽27441的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽27442的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Fpa56,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Fpa5-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽27443的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tfiu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽27444的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽27445的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Thr8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽27446的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Ala8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽27447的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Apa30]hGH-RH(1-30)NH-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Apa-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽27448的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Aha30]hGH-RH(1-30)NH-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Aha-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽27449的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Amc30]hGH-RH(1-30)NH-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Amc-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽27450的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Har30]hGH-RH(1-30)NH-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Har(Pbf)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽27451的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,His11,Orn12,Abu15,His20,Orn21,Nle27,Asp28,Aha30]hGH-RH(1-30)NH-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Apa-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-His(Trt)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OHFmoc-His(Trt)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
如肽27400的方法中所述那样用切割混合物进行肽27401、肽27403、肽27404、肽27405、肽27406、肽27407、肽27408、肽27409、肽27410、肽27411、肽27412、肽27413、肽27414、肽27415、肽27416、肽27417、肽27418、肽27419、肽27422、肽27423、肽27424、肽27425、肽27440、肽27441、肽27442、肽27443、肽27444、肽27445、肽27446、肽27447、肽27448、肽27449、肽27450、肽27451的TFA切割和去保护，以及用半制备HPLC进行后续纯化。纯化的化合物经分析HPLC判断是基本上(>95％)纯的。用电喷雾质谱检查分子量并通过氨基酸分析确认预期的氨基酸组成。
实施例IV
N-Me-Tyr1-D-Ala2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe6-Thr7-Gln8-Ser9-Tyr10-Arg11-Orn12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Orn21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-Asp28-Arg29-NH-CH2-CH3(肽28420)
N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3
使用人工固相肽合成设备以逐步的方式进行合成。简短地说，[3-[(乙基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂(NovaBiochem,LaJolla,CA)(610mg,0.50mmol)用DMF中的20％哌啶去保护5和15分钟，并根据表3中所述的方案洗涤。DMF中的Fmoc-Arg(Pbf)-OH(975mg、1.5mmol)溶液与洗涤的树脂和DIC(235μL、1.5mmol)一起在人工固相肽合成仪器中摇动1小时。用DMF洗涤树脂三次后，如上所述重复偶联反应。在重复偶联之后且在由阴性茚三酮试验证明偶联反应完成之后，进行表3中所述的去保护和中和方案以除去Fmoc保护基团并制备肽-树脂用于下一个氨基酸的偶联。继续合成，通过使下述被保护的氨基酸在树脂上以所指出的顺序偶联逐步组装出肽链以获得所期望的肽序列：Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
上述这些被保护的氨基酸残基(通常还可以从NovaBiochem、AdvancedChemtech、Bachem和PeptidesInternational获得)以广泛接受的惯例表示。用于特定氨基酸侧链官能团的合适的保护基团显示在括号中。上述式子中的OH基团表示每个残基的羧基末端是游离的。
被保护的氨基酸(每种1.5mmol)与DIC(235μL、1.5mmol)偶联，除了Fmoc-Asn(Trt)-OH和Fmoc-Gln(Trt)-OH，它们与HBTU试剂偶联。
为了从树脂切掉肽并使其去保护，将一份250mg的干燥的肽树脂与2.5mL切割混合物(94％TFA、3％H2O、1.5％间甲酚和1.5％苯酚)在室温搅拌3小时。为了诱导肽沉淀，切割混合物被逐滴加入到冷的(优选-20℃)乙醚中。通过过滤或离心收集沉淀物质并用冷的乙醚洗涤三次。被切掉的和去保护的肽溶解于50％乙酸中，通过过滤从树脂分离。用水稀释并冻干后，得到110mg粗产物。
粗肽使用配备有SupelcoDiscoveryHSC18反相柱(2.1mmx5cm，装满C18硅胶，孔径300，粒径3μm)(Supelco,Bellefonte,PA)的Hewlett-PackardModelHP-1090液相色谱通过分析HPLC检查。使用由(A)0.1％的含水TFA和(B)70％的含水MeCN水溶液中的0.1％的TFA组成的溶剂系统进行线性梯度洗脱(例如40-70％的B)，流速为0.2mL/min。在配备有127P溶剂模块；UV-VIS检测器，模块166P；具有CPU监控器和打印机，和32-Karat软件，3.0版本的计算机工作站的BeckmanSystemGoldHPLC系统(BeckmanCoulter,Inc.,Brea,CA)上进行纯化。110mg粗肽溶解于AcOH/H2O中，搅拌，过滤，并施加在XBridgePrepOBDTM反相柱(4.6x250mm，装满C18硅胶，孔径300，粒径5μm)(WatersCo.,Milford,MA)上。柱用上述的溶剂系统以线性梯度模式(例如120min内40-60％的B)洗脱；流速为12mL/min。在220nm监测洗脱液，通过分析HPLC检查级分。合并纯度高于95％的级分并冻干得到16mg纯产物。在上述的SupelcoDiscoveryC18反相柱上进行分析HPLC，使用上述的溶剂系统以0.2mL/min的流速等度洗脱。在220和280nm监测峰值。由分析HPLC判断肽是基本上(>95％)纯的。用电喷雾质谱检查分子量并通过氨基酸分析确认预期的氨基酸组成。
根据上述程序，用与肽28460相同的方式合成肽28421、肽28430、肽28431、肽28460、肽28461、肽28462、肽28463、肽28464、肽28465、肽28466、肽28467、肽28468、肽28469、肽28470、肽28471、肽28472、肽28473、肽28474、肽28475、肽28476、肽28477、肽28478、肽28479，除了这些肽在肽序列中还包括其它氨基酸取代。这些合成的细节如下所述。
对于肽28421的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Asn(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽28430的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽28431的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Thr8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(tBu)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽28460的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Fpa56,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Fpa5-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽28462的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Fpa56,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Asn(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Fpa5-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽28463的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Asn(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽28464的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Fpa56,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Fpa5-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽28465的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-30)NH-CH2-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽28466的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Fpa56,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-30)NH-CH2-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Asn(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Fpa5-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽28467的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-30)NH-CH2-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Asn(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽28468的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Fpa56,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-30)NH-CH2-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Fpa5-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽28469的合成，其化学结构是[Dat1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽28470的合成，其化学结构是[Dat1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-AspfOBuyOH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Asn(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽28471的合成，其化学结构是[Dat1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-H,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽28472的合成，其化学结构是[Dat1,D-Ala2,Fpa56,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Fpa5-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽28473的合成，其化学结构是[Dat1,D-Ala2,Fpa56,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Asn(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Fpa5-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽28474的合成，其化学结构是[Dat1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Asn(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽28475的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Apa30]hGH-RH(1-30)NH-CH2-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Apa-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽28476的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Aha30]hGH-RH(1-30)NH-CH2-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Aha-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽28477的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Amc30]hGH-RH(1-30)NH-CH2-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Amc-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽28478的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Har30]hGH-RH(1-30)NH-CH2-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Har(Pbf)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
对于肽28479的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,His11,Orn12,Abu15,His20,Orn21,Nle27,Asp28,Apa30]hGH-RH(1-30)NH-CH2-CH3，下述被保护的氨基酸在去保护的[3-[(甲基-Fmoc-氨基)甲基]-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂上以指定的顺序被偶联：Fmoc-Apa-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Nle-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-His(Trt)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Abu-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Val-OH,Fmoc-Orn(Boc)-OH,Fmoc-His(Trt)-OH,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Asp(OBut)-OH,Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-N-Me-Tyr(tBu)-OH。
如肽28420的方法中所述那样用切割混合物进行肽28421、肽28430、肽28431、肽28460、肽28461、肽28462、肽28463、肽28464、肽28465、肽28466、肽28467、肽28468、肽28469、肽28470、肽28471、肽28472、肽28473、肽28474、肽28475、肽28476、肽28477、肽28478、肽28479的TFA切割和去保护，以及用半制备HPLC进行后续纯化。纯化的化合物经分析HPLC判断是基本上(>95％)纯的。用电喷雾质谱检查分子量并通过氨基酸分析确认预期的氨基酸组成。
实施例V
Dat1-D-Ala2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe6-Thr7-Asns-Ser9-Tyr10-Arg11-Orn12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Orn21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-Ser28-Arg29-Gln-Gab30-NH2(肽29702)
Dat1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gln-Gab30]hGH-RH(1-30)-NH2
使用人工固相肽合成设备以逐步的方式进行合成。简短地说，对-甲基二苯甲胺(MBHA)树脂(Bachem,KingofPrussia,PA)(720mg、0.50mmol)在DCM中预膨胀并用DCM中的5％DIEA中和，并根据表1中所述的方案洗涤。DMF-DCM(1:1)中的Boc-Gab-OH(265mg、1.5mmol)溶液与被中和的树脂和DIC(235μL、1.5mmol)一起在人工固相肽合成仪器中摇动1小时。由阴性茚三酮试验证明偶联反应完成之后，进行表2中所述的去保护和中和方案以除去Boc保护基团并制备肽-树脂用于下一个氨基酸的偶联。继续合成，通过使下述被保护的氨基酸在树脂上以所指出的顺序偶联逐步组装出肽链以获得所期望的肽序列：Boc-Gab-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Dat-OH。
上述这些被保护的氨基酸残基(通常还可以从NovaBiochem、AdvancedChemtech、Bachem和PeptidesInternational获得)以广泛接受的惯例表示。用于特定氨基酸侧链官能团的合适的保护基团显示在括号中。上述式子中的OH基团表示每个残基的羧基末端是游离的。
被保护的氨基酸(每种1.5mmol)与DIC(235μL、1.5mmol)偶联，除了Boc-Asn-OH和Boc-Gln-OH，它们与它们的预制HOBt酯偶联。
为了从树脂切掉肽并使其去保护，将一份250mg的干燥的肽树脂与0.5mL间甲酚和5mL氟化氢(HF)在0℃搅拌2小时。在氮气气流和真空中蒸发掉HF之后，将残余物用干的二乙醚和乙酸乙酯洗涤。被切掉的和去保护的肽溶解于50％乙酸中并通过过滤从树脂中分离出来。用水稀释并冻干后，得到109mg粗产物。
粗肽使用配备有SupelcoDiscoveryHSC18反相柱(2.1mmx5cm，装满C18硅胶，孔径300，粒径3μm)(Supelco,Bellefonte,PA)的Hewlett-PackardModelHP-1090液相色谱通过分析HPLC检查。使用由(A)0.1％含水的TFA和(B)70％含水的MeCN中的0.1％的TFA组成的溶剂系统进行线性梯度洗脱(例如40-70％的B)，流速为0.2mL/min。在配备有127P溶剂模块；UV-VIS检测器，模块166P；具有CPU监控器和打印机，和32-Karat软件，3.0版本的计算机工作站的BeckmanSystemGoldHPLC系统(BeckmanCoulter,Inc.,Brea,CA)上进行纯化。109mg粗肽溶解于AcOH/H2O中，搅拌，过滤，并施加在XBridgePrepOBDTM反相柱(4.6x250mm，装满C18硅胶，孔径300，粒径5μm)(WatersCo.,Milford,MA)上。柱用上述的溶剂系统以线性梯度模式(例如120min内40-60％B)洗脱；流速为12mL/min。在220nm监测洗脱液，通过分析HPLC检查级分。合并纯度高于95％的级分并冻干得到27mg纯产物。在上述的SupelcoDiscoveryC18反相柱上进行分析HPLC，使用上述的溶剂系统以0.2mL/min的流速等度洗脱。在220和280nm监测峰值。由分析HPLC判断肽是基本上(>95％)纯的。用电喷雾质谱检查分子量并通过氨基酸分析确认预期的氨基酸组成。
根据上述程序，用与肽29702相同的方式合成肽29701、肽29703、肽29704、肽29706、肽29708、肽29710、肽29720、肽29721、肽29722、肽29723、肽29724，除了这些肽在肽序列中还包括其它氨基酸取代，以及在它们的N-末端有酰基分子。这些合成的细节如下所述。
对于肽29701的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Gln-Gab30]hGH-RH(1-30)NH2；下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Gab-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-NLe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(Bzl)-OH。
对于肽29703的合成，其化学结构是N-Me-Tyr1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Gln-Gab30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：39)，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Gab-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-NLe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx),Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2CIZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(Bzl)-OH。
对于肽29704的合成，其化学结构是[Dat1,D-Ala2,Glns,Orn12,Abu15,Orn21,22,Nle27,Gln-Gab30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Gab-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-NLe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx),Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2CIZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(Bzl)-OH。
对于肽29706的合成，其化学结构是[Tfa-Tyr1,D-Abu2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gln-Gab30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Gab-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Abu-OH,Tfa-Tyr-OH。
对于肽29708的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Fpa56,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gln-Gab30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Gab-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Fpa5-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽29710的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Fpa56,Ala8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gln-Gab30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Gab-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Fpa5-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽29720的合成，其化学结构是[Dat1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Gln-Gab30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Gab-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽29721的合成，其化学结构是[Dat1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Gln-Gab30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Gab-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-0m(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Dat-OH。
对于肽29722的合成，其化学结构是[Tfa-Tyr1,D-Abu2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Gln-Gab30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Gab-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Phe-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Abu-OH,Tfa-Tyr-OH。
对于肽29723的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Fpa56,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Gln-Gab30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Gab-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Asn-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Fpa5-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
对于肽29724的合成，其化学结构是[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Fpa56,Ala8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Gln-Gab30]hGH-RH(1-30)NH2，下述被保护的氨基酸在MBHA树脂上以指定的顺序被偶联：Boc-Gab-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Nle-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Gln-OH,Boc-Abu-OH,Boc-Leu-OH,Boc-Val-OH,Boc-Orn(2CIZ)-OH,Boc-Arg(Tos)-OH,Boc-Tyr(2BrZ)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-Fpa5-OH,Boc-Ile-OH,Boc-Ala-OH,Boc-Asp(OcHx)-OH,Boc-D-Ala-OH,Boc-N-Me-Tyr(2BrZ)-OH。
如肽21300的方法中所述那样进行肽29701、肽29703、肽29704、肽29706、肽29708、肽29710、肽29720、肽29721、肽29722、肽29723、肽29724的HF切割和去保护，以及用半制备HPLC进行后续纯化。纯化的化合物经分析HPLC判断是基本上(>95％)纯的。用电喷雾质谱检查分子量并通过氨基酸分析确认预期的氨基酸组成。
实施例VI
用于肌肉注射的含水溶液
[N-Me-Tyr1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)(肽20356)(序列表序号：6)500.0mg
明胶，无抗原性5.0mg
注射用水适量加至100.0mL
将明胶和GH-RH激动剂肽11602溶解于注射用水中，然后无菌过滤该溶液。
实施例VII
长效的可肌肉注射制剂(芝麻油凝胶)
[N-Me-Tyr1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)(肽20356)(序列表序号：6)10.0mg
单硬脂酸铝，USP20.0mg
芝麻油适量加至1.0mL
单硬脂酸铝与芝麻油混合并搅拌加热到125℃直至形成澄清的黄色溶液。然后该混合物被高压蒸汽灭菌并使其冷却。然后研碎并无菌地加入GH-RH激动剂肽11604。特别优选的激动剂是低溶解性的盐，例如双羟萘酸盐等。这些显示出长时间的活性。
实施例VIII
长效的可肌肉(IM)注射并可降解的聚合物微胶囊
微胶囊由下述原料制成：
25/75乙交酯/丙交酯共聚物(0.5特征粘度)99％
[N-Me-Tyr1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)(肽20356)(序列表序号：6)1％
25mg上述微胶囊悬浮于1.0mL下述载体中：
右旋糖5.0％
CMC，钠0.5％
苯甲醇0.9％
Tween800.1％
纯水适量加至100％
实施例IX
生长激素释放活性
使用S.Vigh和A.V.Schally,Peptides5,Suppl:241-347,1984所述的过冷的大鼠脑垂体细胞系统检测生长激素释放，通过引用将该文献合并入本文。hGH-RH的新的合成肽类似物P20356和作为对照的JI-38以1nM的浓度被施用3分钟(1mL灌注液)，如下所示。收集1ml的级分，通过ELISA测定每者中的GH含量。肽P20356在体外的效力比JI-38强大约3倍。在过冷的大鼠脑垂体细胞系统中hGH-RH类似物(1nM)对GH释放的效果。表4.在过冷的大鼠脑 垂体细胞中GHRH激动剂P20356(MR-356)和JI-38的GH-释放效果
过冷系统的每个通道使用来自2个雄性大鼠的脑垂体细胞。细胞每30min按标准被暴露于3-min脉冲的新GHRH激动剂或暴露于JI-38。每3min收集每个通道(1ml)流出的样品，通过ELISA测定GH水平。
实施例X
受体结合检测
用125I-标记的[His1,Nle27]hGH-RH(1-32)-NH2进行配体竞争检测以测定新hGH-RH激动剂与大鼠脑垂体前叶细胞的膜受体的结合亲和力。所使用的方法已有详细描述(HalmosG,etal.Receptor3:87-97,1993)，这里通过引用合并入本文。简短地说，用氯胺T法制备放射性碘标记的(radioidonated)[His1,Nle27]hGH-RH(1-32)-NH2。在竞争性结合分析中，125I-标记的[His1,Nle27]hGH-RH(1-32)-NH2(0.2nM)被10-6-10-12M的GH-RH类似物置换。使用LIGAND-PC计算机曲线拟合程序计算最终的结合亲和力。相对亲和力是与hGH-RH(1-29)和/或类似物JI-38(IzdebskiJ,etal.Proc.Natl.Acad.Sci.92:4872-4876,1995)进行比较，并计算为试验肽的IC50与标准的IC50的比率。IC50是试验肽导致与受体的特异性结合被50％抑制的剂量。
GHRH受体结合研究
结合亲和力
材料与方法
使用基于125I-标记的JV-1-42与人脑垂体膜匀浆物的结合的灵敏的体外配体竞争检测，如前所述制备人脑垂体膜级分并进行GHRH激动剂的受体结合。正常的人脑垂体购自国家激素和肽项目(NationalHormoneandPeptideProgram)(A.F.Parlow,LosAngeles,CountyHarbor-UCLAMedicalCenter,Torrance,CA)。简短地说，在竞争性结合分析中，125I-标记的JV-1-42(～0.2nM)被10-6至10-12M的GHRH激动剂置换。
最终的结合亲和力表示为IC50值，并使用McPherson修正的Munson和Rodbard的LIGANDPC计算机曲线拟合程序计算。
结果
这些实验的结果在表5中给出。最佳的激动剂的IC50值在0.01-0.09的范围。基于受体结合的结果，所有这些新的GHRH激动剂都超过我们的参考肽JI-38的结合亲和力。所试验的这些新GHRH激动剂中的一些显示出最高的GHRH受体结合亲和力，它们的IC50值比GHRH(1-29)低45-406倍。基于其IC50值，GHRH激动剂P20356显示出比我们的参考化合物JI-38高171倍的结合亲和力。
表5.新GHRH激动类似物的IC50值和结合活性
*表达为相对于GHRH(1-29)＝1或者JI-38(GHRH激动剂)＝1,
由两个重复试管计算这些值。
GH-RH受体结合研究
结合亲和力
材料与方法
使用基于125I-标记的[His1,Nle27]hGHRH(1-32)NH2与人脑垂体膜匀浆物的结合的灵敏的体外配体竞争检测，如前所述制备人脑垂体膜级分并进行GHRH激动剂的受体结合。正常的人脑垂体购自国家激素和肽项目(A.F.Parlow,LosAngeles,CountyHarbor-UCLAMedicalCenter,Torrance,CA)。
简短地说，在竞争性结合分析中，[His1,125I-Tyr10,Nle27]hGHRH(1-32)NH2(0.2nM)被10-6至10-12M的GHRH激动剂置换。最终的结合亲和力表示为IC50值，并使用McPherson修正的Munson和Rodbard的LIGANDPC计算机曲线拟合程序计算。
结果
这些实验的结果在所附的表中给出。最佳的激动剂的IC50值在0.04-0.09的范围。基于受体结合的结果，所有这些新的GHRH激动剂都超过我们的参考肽JI-34、JI-36和JI-38的结合亲和力。这些新GHRH激动剂中的一些显示出最高的GHRH受体结合亲和力，它们的IC50值比GHRH激动剂JI-38低21-48倍。
表6.新GHRH激动类似物的IC50值和结合活性
*表达为相对于GHRH(1-29)＝1或者JI-38(GHRH激动剂)＝1
由两个或三个重复试管计算这些值。
GH-RH受体结合研究
结合亲和力
材料与方法
使用基于125I-标记的JV-1-42与人脑垂体膜匀浆物的结合的灵敏的体外配体竞争检测，如前所述制备人脑垂体膜级分并进行GHRH激动剂的受体结合。正常的人脑垂体购自国家激素和肽项目(A.F.Parlow,LosAngeles,CountyHarbor-UCLAMedicalCenter,Torrance,CA)。
简短地说，在竞争性结合分析中，125I-标记的JV-1-42(～0.2nM)被10-6至10-12M的GHRH激动剂置换。最终的结合亲和力表示为IC50值，并使用McPherson修正的Munson和Rodbard的LIGANDPC计算机曲线拟合程序计算。
结果
这些实验的结果在所附的表中给出。最佳的激动剂的IC50值在0.16-0.87的范围。基于受体结合的结果，这些新的GHRH激动剂的大部分都超过我们的参考肽JI-38的结合亲和力。这些新GHRH激动剂中的一些显示出比GHRH激动剂JI-38高5-27倍的结合效力。
表7.新GHRH激动类似物的IC50值和结合活性
表示为相对于Jl-38(GHRH激动剂)＝1
由两个重复试管计算这些值。
*参考化合物
实施例XI
GHRH激动剂对内分泌活性的体内试验。
静脉给药
对于基于静脉给药的体内试验，用戊巴比妥(6mg/100/g,b.w.)使成年雄性麻醉，i.p.注射；注射戊巴比妥后20分钟，从颈静脉取血样(预处理水平)，并在那之后立即i.v.注射hGH-RH(1-29)NH2(作为对照)或hGH-RH类似物。注射后5、15和30分钟从颈静脉取血样。离心血样，除去血浆并用ELISA测量GH水平。结果表示为相对于hGH-RH(1-29)NH2的效力，显示于表8。
表8
实施例XI
皮下给药
使用成年雄性大鼠，用戊巴比妥(6mg/100/g,b.w.)麻醉，i.p.注射；注射戊巴比妥后20分钟，从颈静脉取血样(预处理水平)，并在那之后立即皮下(s.c.)注射hGH-RH(1-29)NH2(作为对照)或hGH-RH类似物。在注射后5、15和30分钟，或仅在注射后15和30分钟从颈静脉取血样。离心血样，除去血浆并用ELISA测量GH水平。结果用效力表示，总结在表9。
表9
皮下(s.c.)注射后hGH-RH类似物相对于JI-38(＝1)的GH释放效力
内分泌试验分析
静脉给药之后，新的类似物使得生长激素水平高于hGH-RH(1-29)NH2或JI-38给药的结果。该效果是更持久的，这表明该类似物不仅仅具有更高的受体亲和力，而且还具有增加的肽酶抗性。最强效的i.v.类似物是P-27403和P-25502。皮下给药之后，类似物使得生长激素水平高于hGH-RH(1-29)NH2或JI-38给药的结果。这种情况下，类似物P-22326、P-20350、P-20356、P-27403、P-27404、P-27409、P-25501、P-25502通常产生高反应。
i.v.和s.c.给药的结果表现出不同的生物活性模式。i.v.给药的类似物在血流中受到降解。s.c.给药的类似物可以在注射部位被肽酶降解。相信活性主要依赖于肽与其受体的结合能力，并来自于良好的运输特性，与血浆蛋白质的适当结合以及代谢稳定性。因此，上述发现表明，当在皮下给药时表现出较好的活性的类似物对注射部位的局部降解具有抗性，并且它们可能在血流中也较不易被酶降解，和/或它们与hGH-RH(1-29)NH2相比与GH-RH受体的亲和力更强。
综上所述，最强效的i.v.类似物是P-27403和P-25502。在皮下给药之后，与hGH-RH和JI-38相比，使生长激素水平尤其较高的是P-22326、P-20350、P-20356、P-27403、P-27404、P-27409、P-25501、P-25502。
Claims (18)
1.一种GH-RH激动剂肽，选自具有下式的组：
P-20350[Dat1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)；
P-20351[Ac-N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)；
P-20356[N-Me-Tyr1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)(序列表序号：6)；
P-20357[Dat1,D-Ala2,N-Me-Ala8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)；
P-20359[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Fpa56,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)；
P-20360[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Thr8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)；
P-20361[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)；
P-20367[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)；
P-20373[N-Me-Tyr1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Agm29]hGH-RH(1-29)(序列表序号：10)；
P-21300[Dat1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Amc30]hGH-RH(1-30)NH2；
P-21301[N-Me-Tyr1,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Amc30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：14)；
P-21303[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Amc30]hGH-RH(1-30)NH2；
P-21304[Dat1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Amc30]hGH-RH(1-30)NH2；
P-22325[N-Me-Tyr1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Apa30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：15)；
P-22326[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Apa30]hGH-RH(1-30)NH2；
P-22327[Dat1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Apa30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：16)；
P-23252[Dat1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Har30]hGH-RH(1-30)NH2；
P-23254[Dat1,D-Ala2,Thr8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Har30]hGH-RH(1-30)NH2；
P-23256[Dat1,D-Ala2,Ala8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Har30]hGH-RH(1-30)NH2；
P-25501[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gab30]hGH-RH(1-30)NH2；
P-25502[Dat1,D-Ala2,Fpa56,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gab30]hGH-RH(1-30)NH2；
P-25503[N-Me-Tyr1,Abu2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gab30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：31)；
P-25504[Dat1,D-Abu2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gab30]hGH-RH(1-30)NH2；
P-27400[Dat1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3；
P-27401[Dat1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH-CH3；
P-27403[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3；
P-27404[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Fpa56,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3；
P-27405[N-Me-Tyr1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27]hGH-RH(1-29)NH-CH3(序列表序号：32)；
P-27406[N-Me-Tyr1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3(序列表序号：33)；
P-27407[Dat1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3(序列表序号：34)；
P-27408[Dat1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-30)NH-CH3；
P-27409[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3；
P-27410[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Thr8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3；
P-27412[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Ala8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3；
P-27413[Dat1,Gln8,His11,Orn12,Abu15,His20,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3(序列表序号：35)；
P-27414[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Fpa56,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gab30]hGH-RH(1-30)NH-CH3；
P-27415[N-Me-Tyr1,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gab30]hGH-RH(1-30)NH-CH3(序列表序号：36)；
P-27425[N-Me-D-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3；
P-27450[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Har30]hGH-RH(1-30)NH-CH3；
P-28420[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3；
P-28421[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3；
P-28475[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Apa30]hGH-RH(1-30)NH-CH2-CH3；
P-29701[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Gln-Gab30]hGH-RH](1-30)NH2；
P-29702[Dat1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gln-Gab30]hGH-RH(1-30)NH2；以及
P-29703[N-Me-Tyr1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gln-Gab30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：39)。
2.如权利要求1所述的肽，具有下式：
P-20356[N-Me-Tyr1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)(序列表序号：6)。
3.如权利要求1所述的肽，具有下式：
P-27403[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3。
4.如权利要求1所述的肽，具有下式：
P-27406[N-Me-Tyr1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3(序列表序号：33)。
5.如权利要求1所述的肽，具有下式：
P-27409[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3。
6.如权利要求1所述的肽，具有下式：
P-27410[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Thr8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3。
7.如权利要求1所述的肽，具有下式：
P-28420[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3。
8.如权利要求1所述的肽，具有下式：
P-28421[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3。
9.如权利要求1所述的肽，具有下式：
P-25502[Dat1,D-Ala2,Fpa56,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gab30]hGH-RH(1-30)NH2。
10.一种药物组合物，包括治疗有效量的GH-RH激动剂肽，所述GH-RH激动剂肽选自具有下式的组：
P-20350[Dat1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)；
P-20351[Ac-N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)；
P-20356[N-Me-Tyr1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)(序列表序号：6)；
P-20357[Dat1,D-Ala2,N-Me-Ala8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)；
P-20359[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Fpa56,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)；
P-20360[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Thr8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)；
P-20361[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)；
P-20367[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)；
P-20373[N-Me-Tyr1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Agm29]hGH-RH(1-29)(序列表序号：10)；
P-21300[Dat1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Amc30]hGH-RH(1-30)NH2；
P-21301[N-Me-Tyr1,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Amc30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：14)；
P-21303[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Amc30]hGH-RH(1-30)NH2；
P-21304[Dat1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Amc30]hGH-RH(1-30)NH2；
P-22325[N-Me-Tyr1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Apa30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：15)；
P-22326[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Apa30]hGH-RH(1-30)NH2；
P-22327[Dat1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Apa30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：16)；
P-23252[Dat1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Har30]hGH-RH(1-30)NH2；
P-23254[Dat1,D-Ala2,Thr8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Har30]hGH-RH(1-30)NH2；
P-23256[Dat1,D-Ala2,Ala8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Har30]hGH-RH(1-30)NH2；
P-25501[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gab30]hGH-RH(1-30)NH2；
P-25502[Dat1,D-Ala2,Fpa56,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gab30]hGH-RH(1-30)NH2；
P-25503[N-Me-Tyr1,Abu2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gab30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：31)；
P-25504[Dat1,D-Abu2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gab30]hGH-RH(1-30)NH2；
P-27400[Dat1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3；
P-27401[Dat1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH-CH3；
P-27403[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3；
P-27404[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Fpa56,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3；
P-27405[N-Me-Tyr1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27]hGH-RH(1-29)NH-CH3(序列表序号：32)；
P-27406[N-Me-Tyr1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3(序列表序号：33)；
P-27407[Dat1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3(序列表序号：34)；
P-27408[Dat1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-30)NH-CH3；
P-27409[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3；
P-27410[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Thr8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3；
P-27412[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Ala8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3；
P-27413[Dat1,Gln8,His11,Orn12,Abu15,His20,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3(序列表序号：35)；
P-27414[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Fpa56,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gab30]hGH-RH(1-30)NH-CH3；
P-27415[N-Me-Tyr1,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gab30]hGH-RH(1-30)NH-CH3(序列表序号：36)；
P-27425[N-Me-D-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3；
P-27450[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Har30]hGH-RH(1-30)NH-CH3；
P-28420[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3；
P-28421[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3；
P-28475[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Apa30]hGH-RH(1-30)NH-CH2-CH3；
P-29701[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Gln-Gab30]hGH-RH](1-30)NH2；
P-29702[Dat1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gln-Gab30]hGH-RH(1-30)NH2；
P-29703[N-Me-Tyr1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gln-Gab30]hGH-RH(1-30)NH2(序列表序号：39)，
和药学上可接受的赋形剂。
11.如权利要求10所述的药物组合物，包括治疗有效量的具有下式的GH-RH肽：
P-20356[N-Me-Tyr1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28,Agm29]hGH-RH(1-29)(序列表序号：6)，
和药学上可接受的赋形剂。
12.如权利要求10所述的药物组合物，包括治疗有效量的具有下式的GH-RH肽：
P-27403[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3，
和药学上可接受的赋形剂。
13.如权利要求10所述的药物组合物，包括治疗有效量的具有下式的GH-RH肽：
P-27406[N-Me-Tyr1,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3(序列表序号：33)，
和药学上可接受的赋形剂。
14.如权利要求10所述的药物组合物，包括治疗有效量的具有下式的GH-RH肽：
P-27409[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3，
和药学上可接受的赋形剂。
15.如权利要求10所述的药物组合物，包括治疗有效量的具有下式的GH-RH肽：
P-27410[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Thr8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH3，
和药学上可接受的赋形剂。
16.如权利要求10所述的药物组合物，包括治疗有效量的具有下式的GH-RH肽：
P-28420[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Gln8,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3，
和药学上可接受的赋形剂。
17.如权利要求10所述的药物组合物，包括治疗有效量的具有下式的GH-RH肽：
P-28421[N-Me-Tyr1,D-Ala2,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Asp28]hGH-RH(1-29)NH-CH2-CH3，
和药学上可接受的赋形剂。
18.如权利要求10所述的药物组合物，包括治疗有效量的具有下式的GH-RH肽：
P-25502[Dat1,D-Ala2,Fpa56,Orn12,Abu15,Orn21,Nle27,Gab30]hGH-RH(1-30)NH2，
和药学上可接受的赋形剂。
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