UA127507C2 - Селективні супресори рецепторів естрогенів - Google Patents

Селективні супресори рецепторів естрогенів Download PDF

Info

Publication number
UA127507C2
UA127507C2 UAA202100102A UAA202100102A UA127507C2 UA 127507 C2 UA127507 C2 UA 127507C2 UA A202100102 A UAA202100102 A UA A202100102A UA A202100102 A UAA202100102 A UA A202100102A UA 127507 C2 UA127507 C2 UA 127507C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
compound
formula
cancer
cells
pharmaceutically acceptable
Prior art date
Application number
UAA202100102A
Other languages
English (en)
Inventor
Джолі Ен Бастіан
Джоли Эн Бастиан
Джеффрі Даньєл Коуен
Джеффри Даньел Коуен
Альмудена Рубіо
Альмудена Рубио
Даніель Джон Селл
Даниэль Джон Сэлл
Дженніфер Енн МакМахон
Дженнифер Энн Макмахон
Original Assignee
Елі Ліллі Енд Компані
Эли Лилли Энд Компани
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=67470734&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=UA127507(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Елі Ліллі Енд Компані, Эли Лилли Энд Компани filed Critical Елі Ліллі Енд Компані
Publication of UA127507C2 publication Critical patent/UA127507C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/436—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having oxygen as a ring hetero atom, e.g. rapamycin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/04—Ortho-condensed systems
    • C07D491/044—Ortho-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring
    • C07D491/052—Ortho-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring the oxygen-containing ring being six-membered
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4709—Non-condensed quinolines and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4741—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems condensed with ring systems having oxygen as a ring hetero atom, e.g. tubocuraran derivatives, noscapine, bicuculline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Finger-Pressure Massage (AREA)
  • Orthopedics, Nursing, And Contraception (AREA)

Abstract

Надані нові селективні супресори рецепторів естрогенів (SERD), формули: їх фармацевтично прийнятні солі та їх фармацевтичні композиції, де або R1 або R2, незалежно один від одного, вибраний з СІ, F, -CF3 або -СН3, а інший являє собою водень, та способи їх застосування.

Description

ПЕРЕДУМОВИ СТВОРЕННЯ ВИНАХОДУ
Селективні супресори рецепторів естрогенів (ЗЕНВО) зв'язуються з рецепторами естрогенів (ЕН) і пригнічують транскрипційну активність, опосередковану ЕВ. Ця деградація та пригнічення, спричинені БЕНВО, можуть бути корисними для лікування порушень проліферації клітин, таких як рак. Деякі приклади дрібномолекулярнич 5ЕНВО були розкриті в літературі (дивись, наприклад.
МО2005073204, МО2014205136 та МО2016097071). Однак відомі ФЕНО ще не є настільки корисними, як це потрібно для ефективного лікування раку. Наприклад, віднаходження 5ЕНО з кращими фармакокінетичними (РК) та фармакодинамічними (РО) властивостями, більш високою ефективністю в клінічній практиці та прийнятною пероральною біодоступністю було б дуже корисним для лікування раку. Цілковито антагоністичний 5ЕНО з потужним інгібуванням
ЕВ-опосередкованої транскрипції був би надзвичайно корисним для лікування раку. Існує потреба в нових 5ЕВО для лікування таких видів раку, як рак молочної залози, рак яечників, рак ендометрія, рак передміхурової залози, рак матки, рак шлунка та рак легенів, а також мутацій через резистентність, яка виникає. Зокрема, існує потреба в нових 5ЕНО для лікування ЕВ- позитивного раку молочної залози, раку шлунка та/або раку легенів.
СУТЬ ВИНАХОДУ
Цим винаходом надані сполуки формули тт 1
М Кк - ія о | в" о -- но М та їх фармацевтично прийнятні солі і їх фармацевтичні композиції. У цій формулі або В" або
В2, незалежно один від одного, вибраний з-посеред СІ, Е, -СЕз або -СНз, а інший являє собою водень.
Також надані способи застосування сполук, описаних в цьому описі, їх фармацевтично прийнятних солей та фармацевтичних композицій для лікування раку молочної залози, раку яєчників, раку ендометрія, раку передміхурової залози, раку матки, раку шлунка або раку легенів. Згадані способи включають введення, як описано в цьому описі, терапевтично ефективної кількості сполуки або її фармацевтично прийнятної солі пацієнту, який потребує цього.
Зо Крім того сполука, описана в цьому описі, та її фармацевтично прийнятні солі надані для застосування в терапії. Сполуки, описані в цьому описі, та їх фармацевтично прийнятні солі можуть бути застосовані для лікування раку молочної залози, раку яєчників, раку ендометрія, раку передміхурової залози, раку матки, раку шлунку або раку легенів.
Крім того надане застосування сполук, описаних в цьому описі, та їх фармацевтично прийнятних солей для виготовлення лікарського засобу для лікування раку молочної залози, раку яєчників, раку ендометрія, раку передміхурової залози, раку матки, раку шлунка або раку легенів.
ДОКЛАДНИЙ ОПИС
В цьому описі розкриті нові тетрациклічні сполуки та їх фармацевтичні солі, які діють як
ЗЕНО. Описані в цьому описі нещодавно винайдені 5ЕНО забезпечують інгібування ЕВ- опосередковаяої транскрипції, що буде корисним при лікуванні раку, такого як рак молочної залози, рак яєчників, рак ендометрія, рак передміхурової залози, рак матки, рак шлунка та рак легенів, а також мутацій через резистентність, яка виникає. Ці БЕНО можуть застосовуватися як окремі лікарські засоби, так і в комбінації з лікарськими засобами інших класів, в тому числі селективними модуляторами рецепторів естрогенів (5ЕВМ), інгібіторами ароматази, інгібіторами СОКА, Інгібіторами СОКЄ, інгібіторами РІЗК та інгібіторами ттТОВв, для лікування гормонально позитивних раків, таких як рак молочної залози, рак шлунка та/або рак легенів.
В цьому описі описані нові сполуки, представлені Формулою І:
тт 1 й о в" хх й но М І та їх фармацевтично прийнятні солі, де або В' або В, незалежно один від одного, вибраний з-посеред СІ, Е, -СЕз або -СНз, а інший являє собою водень. Фахівцю в цій галузі буде зрозуміло, що сполуки, описані Формулою І, або їх фармацевтично прийнятні солі містять хіральний центр, положення якого позначено " вище. Фахівцю у цій галузі також буде зрозуміло, що позначення хіральних центрів (Я) або (5) за системою Кана-Інгольда-Прелога будуть змінюватися залежно від моделей заміщення навколо хірального центру. Хіральний центр у сполуці Формули І утворює В-енантіомерну форму, показану Формулою ІІ: тт 1
Ж
Е о в?
Ух й но М ІЇ та 5-енантіомерну форму, показану Формулою ІІІ: о
ОД в' й пе; | в"
Ух - но М І.
Всі окремі стереоізомери, енантіомери та діастереомери, а також суміші енантіомерів та діастереомерів за Формулою І, Формулою ЇЇ іа Формулою ПІ, в тому числі рацемати, належать до сполук, описаних в цьому описі. Сполуки для фармацевтичного застосування, які містять хіральні центри, часто виділяють у вигляді окремих енантіомерів або діастереомерів, і такі ізольовані сполуки Формули І, Формули ІІ та Формули ІІЇ належать до сполук, розкритих в цьому описі. Фахівцю в цій галузі також буде зрозуміло, що описані в цьому описі сполуки Формули І,
Формули ІЇ та Формули І, та їх фармацевтично прийнятні солі можуть бути дейтеровані (де водень може бути заміщений дейтерієм), і такі молекули вважаються такими, що належать до сполук, розкритих в цьому описі.
Конкретні приклади сполук Формули І (в тому числі назви за номенклатурою ІШРАС) наведені нижче:
т лто и,
Е й о
Ще і хх - но М 5-(4-12-ІЗ-(фторметил)азетидин-1-іл|еєтоксиуфеніл)-8-(трифторметил)-5Н-П|бензопіраної|4.3- сіхінолін-2-ол;
Е о
ОД і і
Щі
ТУ й но М 5-(4-12-ІЗ-(фторметил)азетидин-1-іл|Іеєтоксиуфеніл)-7-(трифторметил)-5Н-П|бензопіраної|4,3- сіхінолін-2-ол; о
ОД й о СІ
Ух о -- но М 8-хлор-5-(4-2-ІЗ-«(фторметил)азетидин-1-іл|етоксих)феніл)-5Н-/1|бензопіраної|4,3-с|хінолін-2- ол; о
ОД сі
А ех - но М 7-хлор-5-(4--2-13-(фторметил)азетидин-1-іл|іетоксиуфенил)-5Н-И |бензопіраної|4,3-с|хінолін-2- ол;
тт и, й о фі Е
Ух - но М 8-фтор-5-(4-12-І(З-(фторметил)азетидин-1-іл|Іетокси)феніл)-5Н-ГП1|бензопіраної|4,3-с)хінолін-2- ол; о
ОД
Ще
Ух - но М 7-фтор-5-(4-12-І(З-(фторметил)азетидин-1-іл|Іетокси)феніл)-5Н-/1|бензопіраної|4,3-с)хінолін-2- ол; о
ОД
Ще
Ух й но М 5-(4-12-ІЗ--фторметил)азетидин-1-іл|етокси|феніл)-8-метил-5Н-П1|бензопіраної4,3-с|хінолін-2- ол; та о
ОД
Щі
Ух - но М 5-(4-12-ІЗ-(фторметил)азетидин-1-іл|еєтоксиуфеніл)-7-метил-5Н-/1|бензопіраної4, 3-с)хінолін-2- ол.
Завдяки хіральному центру, зазначеному вище, кожен із цих конкретних прикладів сполук
Формули І, показаних вище, маг В- та 5-енантіомерні форми (тобто В-енантіомерні сполуки
Формули ІІ та 5-енантіомерні сполуки Формули ЇЇ), як показано в Таблиці 1.
Таблиця 1
Енантіомерні форми сполук Формули
В-енантіомер (Формула ІЇ 5-енантіомер (Формула І! о 5-(4-22-ІЗ- а Ся є для (Фторметил)азетидин- щи о І Ду й о КО 1-іл|етокси)феніл)-8- ія Е т ія с (трифторметил)-5Н- Цф Хе хх
ППбензопіраної|4,3- що ше (я . . - сіхінолін-2-ол но М
Е Е
5-(4-2-|3- ОД Е Е оди Е Е (Фторметил)азетидин- |" о Е пло 1-іл|етокси)феніл)-7- Фф ! Щі (трифторметил)-5Н- ху жу
ППбензопірано!ї4,3- ф р ф р сіхінолін-2-ол но М но М мито мито 8-Хлор-5-(4-(2-І(3- Х Щі о сіє Ж фі Й й (фторметил)азетидин- Щі - ія 1 -Іп)етоксиуфеніл)-5Н- с с
ППбензопіраної4,3- Щі і сіхінолін-2-ол но Ми но М тт літо М сі 7-Хлор-5-(4-(2-|8- ДГ Ще сі Ю "7 Й (фторметил)азетидин- о З 1-іл|Ієстокси)феніл)-5Н- Щ с (1Ібензопірано|4.3- хе Щі сіхінолін-2-ол о - но кс ми мито 8-Фтор-5-(4-(2-(3- с Х Що о є Ю о є (фторметил)азетидин- т 1 -Іп)етоксиуфеніл)-5Н- с хх
ППбензопірано!ї4,3- Ці ія сіхінолін-2-ол но М но М ятнюто люто М Е 7-Фтор-5-(4-(2-|3- й Я Ще Е ЖД фі Й (фторметил)азетидин- о З 1-іл|Ієстоксиу)феніл)-5Н- Ще с (1Ібенчопірано|4,3- хх Ще сіхінолін-2-ол о - но кс о. 5-(4-(2-І(3- мито Ду о (Фторметил)азетидин- Ю і о про 1-іл|єтоксихфеніл)-8- Щ ія метил-5Н- с хе
ППбензопірано(4,3- Щі -х с|хінолін-2-ол но М Но й
Таблиця 1 (продовження) о. 5-(428- и КД (Фторметил)азетидин- и, Щі о тро 1-іл|етокси)феніл)-7- ія Щі метил-5Н- хх . й
ППбензопірано!ї4,3- ія Ще - с|хінолін-2-ол но МЕ но й
В цьому документі також описані фармацевтичні композиції, які містять сполуки Формули І,
Формули ІІ та Формули І, як описано в цьому описі, або їх фармацевтично прийнятні солі в комбінації з рармацевтично прийнятним наповнювачем, носієм або розріджувачем. Описані в цьому описі фармацевтичні композиції можуть бути одержані із застосуванням фармацевтично прийнятних домішок. Термін "Фармацевтично прийнятна домішка або домішки" у значенні, вжитому в цьому описі, означає один або декілька носіїв, розріджувачів та наповнювачів, сумісних з іншими домішками композицій і не шкідливих для пацієнта. Описані в цьому описі сполуки Формули І, Формули ІІ та Формули ПІ, або їх фармацевтично прийнятні солі можуть бути виготовлені у вигляді фармацевтичних композицій, що вводять різними шляхами, такими як пероральний або внутрішньовенний (ІМ). Біодоступність часто є фактором при лікуванні раку, і корисною є можливість вибору методів введення та фармацевтичних композицій для контролю або оптимізації біодоступності активного інгредієнта. Наприклад, особливо корисною була б композиція 5ЕНО, біодоступна пероральним шляхом. Вважається, що сполуки Формули Ї,
Формули ІЇ та Формули ПІ, або їх фармацевтично прийнятні солі, як описано в цьому описі, є перорально біодоступними. Приклади фармацевтичних композицій та способів їх одержання можна знайти в "Нетіпдіюп: Те 5сіепсє апа Ргасіїсе ої Рнаптасу". Г.М. Аеп Ук, Едіюг. 22па ЕбО.,
Маск Рибіїєпіпя Со. 2012. Необмежувальні приклади фармацевтично прийнятних носіїв, розріджувачів та наповнювачів охоплюють таке: сольовий розчин, вода, крохмаль, цукри, маніт та похідні діоксиду кремнію; сполучні агенти, такі як карбоксиметилцелюлоза та інші похідні целюлози, альгінати, желатин та полівінілпіролідон; каолін і бентоніт; та поліетилгліколі.
Далі в цьому описі описані способи лікування раку. Способи, описані в цьому описі, включають введення пацієнту, який потребує такого лікування, ефективної кількості сполуки
Формули І, Формули І та Формули І, як описано в цьому описі, або її фармацевтично прийнятної солі. Наприклад, способом введення ефективної кількості сполуки Формули Ї,
Формули ІЇ та Формули І, як описано в цьому описі, або її фармацевтично прийнятної солі, може бути пероральне введення. Згаданим раком може бути рак, який реагує на естроген. Крім того, цим раком може бути рак молочної залози, рак яєчників, рак ендометрія, рак
Зо передміхурової залози, рак матки, рак шлунка або рак легенів. Наприклад, цим раком може бути
ЕВ-позитивний рак молочної залози, ЕВ-позитивний рак шлунка або ЕВ-позитивний рак легенів.
Також описані в цьому описі сполуки Формули І, Формули ІІ та Формули ІІІ за цим винаходом або їх фармацевтично прийнятні солі надані для застосування в терапії. Цим винаходом також надані сполуки Формули І, Формули І та Формули І, які описані в цьому описі, або їх фармацевтично прийнятні солі для застосування при лікуванні раку молочної залози, раку яечників, раку ендометрія, раку передміхурової залози, раку матки, раку шлунка, або раку легенів. Зокрема, згаданим раком може бути ЕВ-позитивний рак молочної залози, ЕВ- позитивний рак шлунка або ЕН-позитивний рак легенів. Наприклад, сполуки Формули І,
Формули І та Формули ІШ або їх фармацевтично прийнятна сіль можуть бути введені пероральним шляхом.
Крім того, сполуки Формули І, Формули ЇЇ та Формули І, які описані в цьому описі, або їх фармацевтично прийнятні солі, можуть бути застосовані у виробництві лікарського засобу для лікування раку. Наприклад, згаданий лікарський засіб можна вводите пероральним шляхом. До раків, для лікування яких можуть бути застосовані лікарські засоби, описані в цьому описі, належать рак молочної залози, рак яечників, рак ендометрія, рак передміхурової залози, рак матки, рак шлунка або рак легенів. Зокрема, згаданим раком може бути ЕВ-позитивний рак молочної залози, ЕВ-позитивний рак шлунка або ЕВ-позитивний рак легенів.
Описані в цьому описі сполуки Формули І, Формули ЇЇ та Формули І та їх фармацевтично прийнятні солі можуть бути клінічно корисними як окремий засіб або в комбінації з одним або декількома іншими терапевтичними засобами (наприклад, протираковими засобами) для лікування раку, такого як рак молочної залози, рак яєчників, рак ендометрія, рак передміхурової залози, рак матки, рак шлунка або рак легенів. У разі застосування в комбінації з іншими терапевтичними засобами (такими як протиракові засоби), сполуки Формули І, Формули ІІ та
Формули ПІШ, які описані в цьому описі, або їх фармацевтично прийнятні солі можуть бути застосовані одночасно, послідовно або окремо з іншими терапевтичними засобами. Приклади класів лікарських засобів, з якими можуть бути скомбіновані сполуки Формули І, Формули ЇЇ та
Формули І, які описані в цьому описі, або їх фФармацевтично прийнятні солі, охоплюють 5ЕВМ, інгібітори ароматази, інгібітори СОКА, інгібітори СОКб, інгібітори РІЗК та інгібітори тТОВ для лікування гормонально-позитивного раку молочної залози. До більш конкретних прикладів лікарських засобів, з якими можуть бути скомбіновані сполуки Формули І, Формули ЇЇ та
Формули І, які описані в цьому описі, або їх фармацевтично прийнятні солі, належать абемацикліб (аретасісіїр) (інгібітор, СОК4/6), еверолімус (емегоїйтив) (інгібітор ттоВ), алпелісиб (аїреїївів) (інгібітор РІКЗСА) та 8-(5-(1-гідрокси-1-метилетил)піридин-3-ілІ|-1-(25)-2- метоксипропіл|-З-метил-1,3-дигідро-2Н-імідазо|4,5-с|хінолін-2-он (інгібітор РІЗК/ТТОВ).
Термін "ефективна кількість", вживаний в цьому описі, означас кількість або дозу сполуки
Формули І. Формули ІЇ та Формули ІЇЇ, яка описана в цьому описі, або її фармацевтично прийнятної солі, яка при введенні пацієнту у вигляді одноразової або багаторазової дози забезпечує бажаний результат у пацієнта відповідно до діагностування або лікування.
Переважно бажаним результатом є пригнічення проліферації пухлинних клітин, загибель пухлинних клітин або й те й інше. Сполуки Формули І, Формули ІІ та Формули І, які описані в цьому описі, або їх фармацевтично прийнятні солі загалом є ефективними в широкому діапазоні дозувань. Наприклад, дози на день зазвичай знаходяться в межах добового діапазону від приблизно 100 мг до приблизно 2000 мг.
Вживаний в цьому описі термін "лікувати", "лікування" або "курс лікування" означає стримування, уповільнення, зупинення або зворотній розвиток прогресування або тяжкості наявного симптому чи розладу.
Вживаний в цьому описі термін "пацієнт" означає людину, яка страждає на певну хворобу, розлад або стан.
Сполуки Формули І, Формули ІЇ та Формули ПП, які описані в цьому описі, або їх
Зо фармацевтично прийнятні солі можуть бути одержані із застосуванням різних процедур, відомих у цій галузі, деякі з яких проілюстровані в наведених нижче Препаративних методиках та Прикладах. Для одержання сполук Формули І, Формули ІІ та Формули ІІ, які описані в цьому описі, або їх фармацевтично прийнятних солей конкретні стадії синтезу для кожного з описаних шляхів можуть бути скомбіновані по-різному або можуть бути здійснені у поєднанні зі стадіями з різних процедур. Продукти можуть бути виділені звичайними методами, добре відомими в цій галузі, в тому числі екстракцією, випаровуванням, осадженням, хроматографією, фільтрацією, розтиранням та кристалізацією. Реагенти та вихідні матеріали є легко доступними для фахівця в цій галузі.
Проміжні хімічні сполуки та процеси, прийнятні для синтезу згаданих сполук Формули І,
Формули ІІ та Формули ІІ, як описано в цьому описі, мають бути включені до цього опису. Крім того, певні проміжні хімічні сполуки, описані в цьому описі, можуть містити одну або декілька захисних груп. Змінна захисна група може бути тією самою або різною в кожному випадку, залежно від конкретних умов реакції та конкретних перетворень, які потрібно здійснити. Умови захисту та відщеплення захисних груп добре відомі фахівцю і описані в літературі (Дивись, наприклад, "Стеепе"5 Ргоїєсіїме Стоцмрв іп Огдапіс Зупіпевзів". ЕоиИйп Еайіоп, Бу Реївег С.М. МУцшїв апа Тнеодога М. Сутеепе, допп УМіїєу апа 5опв, Іпс. 2007).
Окремі ізомери, енантіомери та діастереомери можуть бути відокремлені або виділені фахівцем у будь-який придатний момент синтезу сполук Формули І, Формули ЇЇ та Формули ПІ, як описано в цьому описі, такими методами, як селективна кристалізація або хіральна хроматографія (Дивись, наприклад. у). дасдиев, еї а!., "Епапіотегв5, Насетаїгїез, апа НезоіЇшіопв",
Чоп УМПеу апа боп5, Іпс., 1981, апа Е.Ї. ЕїїєїЇ апа 5.Н. М/йеп, "Зегеоспетівігу ої Огдапіс
Сотроийпав". УМПеу-Іпієгзсіепсе, 1994). Незважаючи на те, що окремі ізомери, енантіомери та діастереомери можуть бути відокремлені або виділені, як зазначено, їх (В) або (5) позначення за системою Кана-Інгольда-Прелога для хіральних центрів, можливо, ще не будуть визначеними. У разі недоступності (А) або (5) позначень за системою Кана-Інгольда-Прелога, використовуються ідентифікатори "ізомер 1" та "ізомер 2", які поєднуються з назвою ІШРАС без позначення стереохімії за системою Кана-Інгольда-Прелога. Сполуки Формули І, Формули ІІ та
Формули І, які в цьому описі ідентифікуються як "ізомер 1" або "ізомер 2", виділяють так, як визначено в наведених нижче конкретних описах досліджень. Чи є ізомер "1" або "2", означає бо порядок, в якому сполуки Формули І Формули ІЇ та Формули ІП елююються з колонки для хіральної хроматографії за перелічених умов, тобто "ізомер 1" є першим, що елююється зі згаданої колонки за зазначених умов. Якщо хіральну хроматографію розпочинають на початку синтезу, те саме позначення застосовують до подальших проміжних хімічних сполук та сполук
Формули І, Формули ІІ та Формули ПП.
У разі, якщо конкретно не вказано, скорочення, використані в цьому описі, визначені згідно з
АІагіснпітіса Ада, Мої. 17. Мо. 1. 1984. Інші скорочення визначені так: "АСМ" означає ацетонітрил; "ВБА" означає бичачий сироватковий альбумін; "саїаСХішт? А Ра 03" означає
Кди(1-адамантил)-бутилфосфін)-2-(2'-аміно-1,1-біфеніл)|паладію(ІЇ) метансульфомат; "ОСМ" означає дихлорметан або метиленхлорид; "ОМА" означає диметилацетамід; "ОМЕА" означає диметилетнламін; "ОМЕМ" означає модифіковане за способом Дульбекко середовище Ігла; "ОМЕ" означає М,М-диметилформамід; "ОМ5О" означає диметилсульфокснд; "ОМА" означає дезоксирибонуклеїнову кислоту: "СОМА" означає комплементарну ДНК; "ОМавзе" означає дезоксирибонуклеазу; "ОТТ" означає дитіотреїтол; "ЕСво" означає концентрацію засобу, який викликає 50 95 відповідь цільової активності порівняно з попередньо визначеною позитивною контрольною сполукою (абсолютна ЕСво); "ЕОТА" означає етилеидіамінтетраоцтову кислоту; "ее" означає енантіомерний надлишок; "ЕНо" означає рецептор естрогену альфа; "ЕВ!Др" означає рецептор естрогену бета; "ЕТОАс" означає етилацетат; "ЄЮН" означає етанол або етиловий спирт; "ЕВ5" означає ембріональну бичачу сироватку; "НВ55" означає збалансований сольовий розчин Хенкса; "НЕС" означає гідроксиетилцелюлозу; "НЕРЕ5" означає 4-(2-гідроксиетил)-1- піперазинетансульфонову кислоту; "НРІ С" означає високоефективну рідинну хроматографію; "ІСво" означає концентрацію засобу, яка спричинює 50 95 максимальної інгібуючої реакції, можливої для цього засобу (відносна ІСво), або концентрацію засобу, яка спричинює 50 95 інгібування активності цільового ферменту порівняно з контролем плацебо (абсолютна ІСво); "ІРА" означає ізопропіламш; "ІРОН" означає ізопропанол або ізопропіловий спирт; "ІМ" означає внутрішньовенне введення; "Кі" означає константу інгібування; "МЕК" означає метилетилкетон; "Меон" означає метиловий спирт або метанол; "МТВЕ" означає метил-трет-бутиловий ефір; "РВБ5" означає забуферений фосфатом фізіологічний розчин; "РО" означає пероральне введення; "РВо" означає рецептор прогестерону альфа; "00" означає дозування один раз на день; "ВМА" означає рибонуклеїнову кислоту; "НМазе" означає рибонуклеазу: "ВТ-РСВ" означає
Зо полімеразну ланцюгову реакцію зі зворотною транскрипцією; "ВТ-ДРСОВ" означає кількісну полімеразну ланцюгову реакцію зі зворотною транскрипцією; "ЗЕС" означає надкритичну флюїдну хроматографію; "ТЕЮво" означає ефективну дозу для досягнення 50 95 інгібування мішені в пухлинах; "ТНЕ" означає тетрагідрофуран; "КН)" означає час утримання; "ХапіРпоз Ра се" означає хлор(4,5-бісідифенілфосфіно)-9,9-диметилксантен)-2-(2'-аміно-1,1"- біфеніл)|паладій(ІІ); і "ХРнпоз Ра 2" означає хлор(2-дициклогексилфосфіно-2",4",6'-триїзопропіл- 1,1"-біфеніл)(2-(2'-аміно-1,1"-біфеніл)|паладій(І|).
Наведені далі препаративні методики та приклади додатково ілюструють цей винахід.
Препаративні методики та Приклади
Схема 1
Р Е
ВІ ія о Щі о ж СІ е с СІ сі
А - о ЕтапА ФІ Етап В | хх то М о МЕ МВ---262 - 1 ? Її. з но 4 М шко
М в 5 и тон Етап С ві неї о с и ОН о м в! 7 ' шт
Е о в он Е о ія ЕтапО
Зо ОС
І. 2 но М но М 8 Етап ГЕ 6 й лю
М е
Етап Е пи, Щі он в?
Фо
Р о в? ри в
Зо - но М
І
Схема 1 описує синтез сполук Формули Ї.
На етапі А здійснюється реакція Гріньяра. Реакція Гріньяра добре відома в цій галузі як реакція для утворення вуглець-вуглецевих зв'язків. Ця реакція включає в себе реакцію металоорганічної сполуки, в якій галогенід арил магнію, реактив Гріньяра, додають до карбонільної групи, такої як хлорангідрид, сполуки 2, і одержують сполуку Етапу А. Наприклад, для одержання сполуки З 4-хлорзаміщений хінолон, сполуку 1, обробляють реактивом Гріньяра, таким як ізопропілмагнію хлорид, і одержують проміжний продукт реакції Гріньяра, і подальшим додаванням хлорангідриду, 4-фторбензоїлхлориду, сполуки 2, у розчинник), такому як ТНЕ. По завершенні реакція може бути зупинена водою.
На Етапі В арилметиловий простий ефір сполуки З може бути деметильований в різних умовах, які можуть бути визнані фахівцем, наприклад, шляхом обробки трибромідом бору.
Наприклад, сполуку З повільно обробляють трибромідом бору при температурі приблизно 0 С у розчиннику, такому як ОСМ. Суміш перемішують при кімнатній температурі, гасять гідрофосфатом калію, і одержують сполуку 4.
Па Етапі С простий ефір 6 азетидину можна одержати шляхом введення в реакцію відповідного п-фторфенілкетону 4 і солі 5 азетидинового спирту, або відповідної вільної основи з відповідною основою, наприклад гідридом натрію, трет-бутоксидом натрію або трет- бутоксидом калію у відповідному полярному апротонному розчиннику, такому як ОМЕ або ТНЕ, щоб одержати простий ефір, сполуку 6.
Потім сполуку 6 алкілують відповідною заміщеною арилбороновою кислотою, сполукою 7, у реакції перехресного сполучення Сузукі, і одержують сполуку 8 на Етапі О. Фахівцю є зрозумілим існування цілого ряду умов, які можуть бути придатними для полегшення таких реакцій перехресного сполучення. Відповідними реактивами паладію можуть бути ХапіРноз Ра се. саїасХіште А ра а, біс(трифенілфосфін)паладіюції) хлорид, трис(дибензиліденацетон)дипаладій(0) З трициклогексилфосфіном, (1,7- бісідифенілфосфін)фероцен)паладію(Ії) хлорид, тетракістрифенілфосфін паладію або ацетат паладію(І!). Відповідними основами можуть бути фторид калію, карбонат цезію, карбонат
Зо натрію, карбонат калію, трет-бутоксид літію або триосновний монофосфат калію. Наприклад,
для одержанням сполуки 8 сполука 6 може бути введена в реакцію і відповідною бороновою кислотою, сполукою 7, такою як 2-фтор-4-«(трифторметил)фенілборонова кислота, у розчиннику, такому як 2-метил-2-бутанол, з основою, такою як карбонат калію, і каталізатором, таким як
ХРПоз Ра с2, з нагріванням до температури приблизно 80 "С в мікрохвильовій печі.
Фахівцю у цій галузі зрозуміло, що Етап 0, реакція перехресного сполучення Сузукі, може бути завершений до утворення простого ефіру азетидину на Етапі С.
Фахівцю в цій галузі зрозуміло, що на Етапі Е сполука 8 може бути циклізована шляхом початкового відновлення кетону. Це може бути здійснено із застосуванням відновника, такого як триетилборогідрид літію, у розчинниках, таких як 1,4-діоксан і ТНЕ, і при температурі від приблизно 0"С до кімнатної температури одержують відповідний вторинний спирт. Цей проміжний спирт може бути використаний у неочищеному вигляді і може бути депротонований прийнятною основою, такою як карбонат цезію, гідрид натрію, трет-бутоксид натрію або трет- бутоксид калію у розчиннику, такому як ТНЕ, ОМ5О або ОМЕ. Одержаний алкоксид може бути циклізований у фторид арилу при кімнатній температурі, з нагріванням до кипіння зі зворотним холодильником або при температурі приблизно 60 "С. Потім, при заміщенні фториду, може бути одержаний заміщений циклічний простий ефір для одержання сполуки Формули І.
Альтернативно кетон 8 можна відновити до спирту і хірально очистити на Етапі Е для одержання хірального спирту 9, а потім циклізувати на Етапі Сх так, як описано вище для Етапу
Е, і одержати сполуку Формули І.
За іншою альтернативною реакцією, кетон може бути відновлений із застосуванням хірального реагенту, такого як о (НВ)-(-)-о,о0-дифеніл-2-піролідинметанол, разом з триметилборатом та диметилсульфід-бораном з безпосереднім одержанням бажаного хірального спирту, сполуки 9, який потім можна циклізувати на Етапі С, як описано вище для
Етапу Е, і одержати сполуку Формули І.
На необов'язковому етапі фармацевтично прийнятна сіль сполуки Формули І, Формули ЇЇ та
Формули ПІІ за цим винаходом, може бути одержана шляхом реакції відповідної вільної основи сполуки Формули І Формули І та Формули ПШ, як описано в цьому описі, з відповідною фармацевтично прийнятною кислотою у прийнятному розчиннику за стандартних умов. Крім того, утворення таких солей може відбуватись одночасно з відщепленням азотзахисної групи.
Зо Можливе утворення фармацевтично прийнятних солей с добре відомим. Дивись, наприклад.
Сюоціа. Р.Г., "Зак веІесіоп ог Бразіс агпав", Іпіегпайопа! доштта! ої Рнаптасецшіісв, 33; 201-217 (1986); Вавійп, В.У., єї аї!., "За Зеїесіоп апа Оріїтігайоп Ргоседигев5 ог РНаптасешіса! Мем
Спетіса! Епійіев", Огдапіс Ргосе55 Везєагсі апа ЮОемеіортенпі, 4: 427-435 (2000); та Вегдє, 5.М., еї а)І,, "Рпнапптасецііса! Зав, " доштпаї ої Рнаптасеціїса! Зсієпсев, 66: 3-19. (1977). Для фахівця в цій галузі буде зрозуміло, що сполука Формули І, Формули ЇЇ і Формули ЇЇ, як описано в цьому описі, без утруднень перетворюється на фармацевтично прийнятну сіль, і може бути виділена як фармацевтично прийнятна сіль. До прикладів корисних солей належать, але ними не обмежуються, солі бензолсульфонової кислоти та солі 4-метилбензолсульфонової кислоти.
Солі 4-метилбензолсульфонової кислоти також відомі як тозилатні солі.
Препаративна методика І 2-ІЗ-«Фторметил)азетидин-1-іл|етан-1-ол ще
М ит тон
До перемішуваного при температурі 0"7С розчину 3-(фторметил)азетидину гідрохлориду (160 г, 1,28 моль) у ОСМ (2,4 л) у атмосфері М» порціями протягом 15 хв додають триацетоксиборогідрид натрію (405 г, 1,91 моль), та перемішують при температурі 0" протягом 10 хв. 6 порціями протягом 1 год. при температурі 0 "С додають 1,4-діоксан-2,5-діол (99 г, 0,83 моль), і потім перемішують при температурі 0-5 "С протягом 15 хв. Реакційній суміші дозволяють нагрітися до кімнатної температури, і перемішують у атмосфері Ме протягом 2 год.
Реакційну суміш охолоджують до температури 10-15 С протягом 20 хв, потім нагрівають до температури 25-30 "С, і витримують при цій температурі протягом 2 год. Протягом 25-30 хв при температурі 10-1457С додають воду (800 мл), дозволяють протягом 5-10 хв нагрітися до кімнатної температури, і потім розділяють шари. Водний шар промивають ЮОСМ (800 мл), розділяють шари, після чого об'єднані водні шари охолоджують до температури 10-15 "С, ї рн доводять до 13-14 із застосуванням 50 95 розчину гідроксиду натрію (4540 мл). Водному шару дозволяють нагрітися до кімнатної температури, екстрагують ЮСМ (4х800 мл). висушують сульфатом натрію (80 г). фільтрують, концентрують насухо, і одержують вказану в заголовку сполуку (139 г, 82 95) у вигляді густого масла жовтого кольору. ЕБ/М5 (т/л2): 134,1 (МН).
Препаративна методика 2 2-ІЗ-«Фторметил)азетидин-1-іл|еєтан-1-олу гідрохлорид ще
М ма
НОЇ
2-ІЗ-«Фторметил)азетидин-1-іл|єтан-1-осл (529г, 4 моль) розчиняють у МТВЕ (2,6 л), та охолоджують до температури 0 "С. Краплями протягом 30 хв додають розчин НСІ/ЕЮН (492 мл,
ЗО 9о (мас.)), після чого перемішують при температурі 0 "С протягом 30 хв. Тверді речовини відфільтровують, і відфільтрований осад промивають МТВЕ (2х200 мл). Сушать у атмосфері М2 протягом 8 годин, і одержують вказану в заголовку сполуку (580 г, 86 95) у вигляді твердої речовини білого кольору. ЕБ/М5 (т/2): 134,0 (МН).
Препаративна методика З (З-Хлор-7-метоксихінолін-4-іл)-(4-рторфеніл)метанон
Е ія о
СІ
-- 7о М
Суміш 4-бром-3З-хлор-7-метоксихіноліну (70 г, 254 ммоль) і ТНЕ (1 л) охолоджують у атмосфері М2 до температури -40 "С, шо призводить до осадження матеріалу. Протягом 20 хв додають ізонропілмагнію хлорид (2МбБ ТНЕ, 254 мл, 509 ммоль), і суміш перемішують протягом 1 год. Краплями додають розчин 4-фторбензоїлхлориду (66 мл, 559 ммоль) у ТНЕ (140 мл), після чого дозволяють нагрітися до кімнатної температури. Реакцію зупиняють насиченим розчином МНАСІ (300 мл) і водою (200 мл), і розділяють шари. Органічний шар промивають насиченим розчином МНаСІ (300 мл), сушать над МабБО»:, фільтрують, концентрують, і одержують маслянистий залишок. Неочищене масло коричневого кольору фільтрують через силікагель, елююючи сумішшю МТВЕ/гексани (1:1), і одержують неочищений продукт у вигляді твердої речовини жовтого кольору (84 г). Цю тверду речовину обробляють сумішшю 10 95 метил ацетат/гептан (800 мл), і перемішують при кімнатній температурі протягом ночі. Тверді речовини
Зо відфільтровують, і зберігають. Фільтрат концентрують, і очищають на силікагелі, елююючи сумішшю 10-4095 ЕфОАс/гексани, після чого продукт обробляють сумішшю 10 95 метилацетат/гептан (200 мл), і перемішують при кімнатній температурі протягом З год.
Одержані тверді речовини відфільтровують, об'єднують із твердими речовинами попередньої фільтрації, сушать під вакуумом протягом ночі, і одержують вкачану в заголовку сполуку (31 г, 38 95) у вигляді твердої речовини жовтого кольору. ЕБ/М5 (т/2): 316,0 (МАН).
Препаративна методика 4 (З-Хлор-7-гідроксихінолін-4-іл)--4-фторфеніл)метанон
Е
Ще о
СІ
І
- но М
До суміші (3З-хлор-7-метоксихінолін-4-іл)-(4-фторфеніл)уметанону (31 г, 98 ммоль) у ОСМ (217 мл) додають трибромід бору (ІМ в ОСМ, 295 мл, 295 ммоль), і суміш перемішують при кімнатній температурі протягом З днів. Суміш повільно вливають у розчин гідрофосфату калію (2 М у воді, 700 мл) і води (200 мл) при температурі 0 "С. Суміші дозволяють нагрітися до кімнатної температури, і перемішують протягом 1 год. Розчин концентрують іп масо для видалення органічних розчинників, фільтрують, фільтрат збирають, і висушують під вакуумом при температурі 45 "С протягом ночі. Тверду речовину обробляють сумішшю ЮСМ/гептаи (11. 450 мл), і перемішують протягом ночі. Тверду речовину збирають, сушать під вакуумом протягом ночі, і одержують вказану в заголовку сполуку (32 г, кількісний вихід) у вигляді твердої речовини світло-коричневого кольору. ЕБ/М5 (т/2): 302,0 (Ма-Н).
Препаративна методики 5 (З-Хлор-7-гідроксихінолін-4-іл)-(4-(2-І(З-«"фторметил)азетидин-1-іл|стокси)феніл)метанон о
ОД й о
СІ о - но М
До перемішуваного розчину (З-хлор-7-гідроксихінолін-4-іл)-(4-рторфеніл)метанону (5,00 г, 15,3 ммоль) в ЮОМЕ (75 мл) додають спочатку 2-І3З-«(фторметил)азетидин-1-іл|етан-1-олу гідрохлорид (3,90 г, 23,0 ммоль), а потім гідрид натрію (6095 у мінеральному маслі, 3,02 г, 76,8 ммоль). Перемішують у атмосфері Ме». і протягом 45 хв нагрівають до температури 40 "с.
Роччин гасять водою, і концентрують. Залишок розподіляють між 2095 ІРІОН/СНСІз та насиченим водним розчином бікарбонату натрію, і розділяють, водний розчин екстрагують 2х20 95 іІРГОН/СНСІз, органічні екстракти об'єднують, об'єднані органічні шари сушать над сульфатом магнію, фільтрують, і фільтрат концентрують до одержання неочищеного продукту у вигляді масла темно-червоного кольору. Неочищений матеріал очищають колонковою хроматографією на силікагелі, елююючи градієнтом 5-10 95 7 М МНз в Меон/ОСМ, і одержують вказану в заголовку сполуку (5,31 г, 84 95) у вигляді твердої речовини жовтого кольору. ЕБ/М5 (т/2): 415,0 (М--Н).
Зо Препаративна методика 6 (4-(2-ІЗ-«Фторметил)азетидин-1-іл|етоксиуфеніл)(3-(2-фтор-4-«(трифторметил)феніл|-7- гідроксихінолін-4-ілуметанон тт и, і
Е й о
Щі
І
-- Е но М
Суміш (З-хлор-7-гідроксихінолін-4-іл)-4-(2-ІЗ-(фторметил)азетидин-1- іл|стокси)феніл)уметанону (200 мг, 0,48 ммоль), 2-фтор-4-(трифторметил)фенілборонової кислоти (158 мг, 0,72 ммоль), карбонату калію (202 мг, 1,45 ммоль). 2-метил-2-бутанолу (3 мл) та води (1 мл) знегажують Ме (5х) у флаконі для мікрохвильової печі. Додають ХРпоз Ра се (12 мг, 0,015 ммоль), герметизують, і витримують у мікрохвильовій печі при температурі 80 С протягом 2 год. Залишок розподіляють між МТВЕ та насиченим розчином МНаеСіІ. Шари розділяють, і водний розчин екстрагують МТВЕ. Органічні екстракти об'єднують, сушать над сульфатом магнію, фільтрують, і фільтрат концентрують до одержання залишку оранжевого кольору. Неочищений матеріал очищають колонковою хроматографією на силікагелі, елююючи 595 МеонН/ОСМ, і одержують вказану в заголовку сполуку (205 мг. 78 95) у вигляді твердої речовини жовтого кольору. ЕБ/М5 (т/л2): 543,2 (МН).
Наведені нижче сполуки одержують у спосіб, по суті аналогічний способу одержання сполуки за Препаративною методикою 6, з такими варіаціями в процедурі: час нагрівання від 1 год. до 2 год., екстрагування МТВЕ або Ес і висушування органічних шарів над сульфатом магнію або над сульфатом натрію. Очищають із застосуванням колонкової хроматографії на силікагелі із застосуванням до 10 95 (МеОН або 7 М амонізований МеонН) в ОСМ (Препаративна методика 10: градієнт 3-8945 7 М амонізований МеоОН в ОСМ; Препаративна методика 9 і
Препаративна методика 11: градієнт від 4 95 до 10 95 7 М амонізованого МеОН в ОСМ) та/або із застосуванням хроматографії з оберненою фазою з великим рн, як зазначено.
Таблиця 2
Сполуки, одержані за Препаративною методикою б й (4-(2-І3- о (Фторметил)азетидин-1- Ду ФІ іл|Іетоксиуфеніл)(3-(2- о 7 фтор-3- і Е 543,0 (трифторметил)феніл|-7- ФІ а й гідроксихінолін-4- - ке іл)іметанон по " о (3-(4-Хлор-2-фторфеніл)- | ОД ія 7-гідроксихінолін-4-іл|(4- о сі (2-ІЗ- ія 509,0 (фторметил)азетидин-1- хх іл|стокси)феніл)метанон | - Е но М о (3-(3-Хлор-2-фторфеніл)- |. ОД Ще 7-гідроксихінолін-4-іл|(4- о сі (2-ІЗ- Ці 509,0 (фторметил)азетидин-1- З іл|ф|єтоксиуфеніл)метанон | - Е но М о (3-(2,4-Дифторфеніл)-7- |. ОД і гідроксихінолін-4-іл|(4-(2- о Р 10 ІЗ-«-фторметил)азетидин- ія 493,0 1- й іл|стокси)феніл)метанон Фф - Е но М о (3-(2,3-Дифторфеніл)-7- |, ОД Ще гідроксихінолін-4-іл|(4-(2- о 11 ІЗ-«-фторметил)азетидин- Цф 493,0 1- хх Е іл|стокси)феніл)метанон | - Е но М
Таблиця 2 (продовження)
Препаративна с. ЕБ/М5 (т/2) методика Ме Хімічна назва Структура (Мен) (4-(2-(3- ми? (Фторметил)азетидин-1- с о іл|стокси)феніл)|(3-12- 12 фтор-4-метилфеніл)-7- с 489,2 гідроксихінолін-4- с іл|метанон но са г (4-(22-І3- ми (Фторметил)азетидин-1- ЖД о іл|Іетоксиуфеніл)(3-(2- 13 фтор-3З-метилфеніл)-7- с 489,2 гідроксихінолін-4- с ілметанон но 4 Р аОчиїцають флеш-хроматографісю з оберненою фазою з великим рН (колонка Недізер ВІ
СО 02 Нідп Репогтапсе С18, елююючи 35-45 95 АСМ у 10 мм водному розчині бікарбонату амонію з 5 96 мМеон).
ЬПісля очищення на силікагелі, елююють 4-10 95 7М амонізованим МеОН в ОСМ, додатково очищають флеш-хроматографісю з оберненою фазою з великим рН (колонка Недізер ВІ
СО Ое Нідн Репогтапсе С18, елююючи 30-44 95 АСМ у 10 мМ водному розчині бікарбонату амонію з 5 У5 МеОН).
Препаративна методика 14
Рацемічний 4-(2-ІЗ-«-фторметил)азетидин-1-іл|етокси)феніл) (гідрокси)метил|-3-(2-фтор-4- (трифторметил)феніл)хінолін- 7-ол тт
У й он
Е
Е сх -- Е но М (4-(2-ІЗ-«(фторметил)азетидин-1-іл|етоксиуфеніл)(3-(2-фтор-4-«(трифторметил)феніл|-7- гідроксихінолін-4-іл| метаном (305 г, 562.2 ммоль) 1 ТНЕ (1,5 л) поєднують у атмосфері М», і одержаний розчин охолоджують до температури 0-5 "С. Краялями додають триетилборогідрід літію (1М в ТНЕ, 1,5 л, 1,5 моль). Суміш перемішують при температурі 0-5 "С протягом 1 год.
Краплями додають воду (300 мл) і насичений розчин МНАСІ (1 л). Суміш нагрівають до кімнатної температури. Додають ЕОАс (2 л), і збирають органічний шар. Органічний шар промивають розсолом (500 мл), сушать над МоБ5О», фільтрують, і концентрують насухо. Залишок розчиняють у суміші 95:5 ацетону та 2М аміаку в Меон, фільтрують через силікагель, іодержують вказану в заголовку сполуку (264 г, 86,295) у вигляді твердої речовини помаранчевого кольору. ЕБ/МО(т/2): 545,2 (МАН).
Препаративна методика 15 4-(2-ІЗ-«Фторметил)азетидин-1-іл|Іетокси)феніл) (гідрокси)метилі-3-І(2-фтор-4- (трифторметил)феніл|ухінолін-7-ол. Ізомер 1 тт
М Е и її он в
Е
Ух -х Е но М
Рацемічний 4-(2-ІЗ-«-фторметил)азетидин-1-іл|етокси)феніл) (гідрокси)метил|-3-(2-фтор-4- (трифторметил)феніліхінолін-7-ол (354 г, 0,62 моль) очищають із застосуванням хіральної хроматографії за таких умов: Колонка СпігаІрак А0-Н, 150х50 мм, швидкість потоку 300 г/хв, УФ 350 нм, рухома фазе 35 95 ІРОН з 0,5 55 ОМЕА/СО», температура колонки 40 "С, і одержують вказану в заголовку сполуку (171,4 г, 48 95) першого елюйованого ізомеру. Енантіомерне збагачення ізомеру 1 підтверджують хіральною аналітичною 5ЕС, » 98 95 ее, КА) - 0,79 хв, колонка: 4,6х150 мм СпНігаІрак А0Б-Н, елююючи рухомою фазою 35 95 ІРОН з 0,5 95 ОМЕА в Со», швидкість потоку 0,6 мл/хв, УФ-детектування при 350 нм.
Альтернативна препаративна методика 15
До розчину (Н)-(-)-о,-дифеніл-2-піролідинметанолу (132 мг, 0,52 ммоль) у ТНЕ (20 мл) додають триметилборат (65 мг, 0,62 ммоль). Суміш перемішують у атмосфері М» при кімнатній температурі протягом 1 год. Додають спочатку диметилсульфід-боран (2,0 М в ТНЕ, 2,6 мл, 5,2 ммоль), а потім (4-(2-(З-«(фторметил)азетидин-1-іл|етокси|феніл)(3-(2-фтор-4- (трифторметил)феніл|-7-гідроксихінолін-4-іл)уметанон (1,0 г, 1,73 ммоль). Реакційну суміш гріють протягом ночі при температурі 45 "С. Додають додаткову кількість диметилсульфід-борану (2,0 М У ТНЕ, 2,6 мл, 5,2 ммоль), і перемішують протягом 5 год. при температурі 45 "С. Повільно додають насичений розчин МНАСІ (25 мл), і виділяють органічну фазу. Повторно екстрагують водний екстракт 2095 іІРІОН/СНСІз. Органічні екстракти об'єднують, сушать над Ма»50Оа, фільтрують, випаровують, і одержують проміжний продукт, який є борановим комплексом (1,2 г). Третину цього проміжного продукту, який с борановим комплексом (0,4 г, 0,6 ммоль), розчиняють у 1,4-діоксані (4 мл) та етаноламіні (0,3 мл, 5 ммоль), і реакційну суміш нагрівають до температури 70 С протягом З год. Реакцію гасять насиченим розчином МНАСІ (25 мл), і виділяють органічну фазу. Повторно екстрагують водний екстракт 20 95 ІРГОН/СНСІ»з (4х25 мл).
Органічні екстракти об'єднують, сушать над Ма?»5О»:, фільтрують, концентрують насухо, іодержують вказану в заголовку сполуку у вигляді твердої речовини помаранчевого кольору (0,33 г, 0,57 ммоль, 100 95 вихід). Ї С/М5 (т/2): (МАНІ|545. Енантіомериєе збагачення ізомеру 1 підтверджують хіральною аналітичною 5ЕС, 9695 ее, МН)-0,79 хв, колонка: 4,6х150 мм
Зо СНігаїрак А0-Н, елююючи рухомою фазою 35 95 ІРОН з 0,5 95 ЮОМЕА в СО», швидкість потоку 0,6 мл/хв, УФ-детектування при 350 нм.
ПРИКЛАД 1
Рацемічний 5-(4-(2-ІЗ-«фторметил)азетидин-1-іл|еєтоксиуфеніл)-8-(трифторметил)-5Н-
ППбензопіраноїЇ4,3-с|хінолін-2-ол о
ОД
Е о Е р,
Ж
- но М
Розчин (4-(2-ІЗ-«(фторметил)азетидин-1-іл|Іетокси|феніл)(3-(2-фтор-4-«трифторметил)фенілі|- 7-гідроксихінолін-4-ілуметанону (5,27 г, 9,71 ммоль) у 1,4-діоксані (100 мл) охолоджують до температури 5 "С. Додають триєтилборгідрид літію (1М в ТНЕ, 30,0 мл, 30,0 ммоль). Видаляють охолоджуючу баню, і перемішують протягом 1,5 год. при кімнатній температурі. Суміш гасять водою. Додають насичений розчин МНаСІ ії ЕМЮОАс. Шари відокремлюють, і водний шар екстрагують ЕІОАс. Органічні екстракти об'єднують, сушать над безводним Ма50О5», фільтрують,
і фільтрат концентрують. Неочищений залишок розчиняють у ТНЕ (100 мл). Додають гідрид натрію (6095 у мінеральному маслі, 1,94 г, 48,5 ммоль). Розчин кип'ятять зі зворотним холодильником протягом 1,5 год. Додають додаткову кількість гідриду нагрію (6095 у мінеральному маслі, 1,94 г, 48,5 ммоль), після чого кип'ятять зі зворотним холодильником протягом додаткових 30 хв. Розчин охолоджують до кімнатної температури і гасять водою.
Додають ЕІАс та насичений розчин МНАСІ. Шари відокремлюють, і водний шар екстрагують
ЕЮАс. Органічні екстракти об'єднують, сушать над безводним Ма5О», фільтрують, і фільтрат концентрують. Залишок очищають колонковою хроматографією на силікагелі, елююючи градієнтом 5-7 96 МеОН в ОСМ, і одержують вказану в заголовку сполуку (3,70 г, 72 95) у вигляді піни світло-жовтого кольору. ЕБ/М5 (т/2): 525,2 (МАН).
Наведені нижче сполуки одержують у спосіб, по суті аналогічний способу одержання сполуки Прикладу 1, з наведеними далі варіаціями процедури. Для відновлення використовують від З еквівалентів до 5 триетилборогідриду літію з часом реакції від 30 хв до однієї години та висушування органічних шарів над сульфатом магнію або сульфатом натрію. Неочищений залишок використовують безпосередньо або очищають колонковою хроматографією на силікагелі, елююючи градієнтом 0-5-7,5-10 95 МеоОН в ОСМ перед циклізацією. Циклізацію завершують кип'ятінням зі зворотним холодильником у ТНЕ до 16 год. або у ОМЕ від 2 год. при кімнатній температурі для Прикладу 2, до 2 год. при температурі 85"С для Прикладу 8.
Екстрагують ОСМ або ЕІОАсС, і органічні шари сушать над сульфатом магнію або сульфатом натрію. Очищають колонковою хроматографією на силікагелі із застосуванням до 10 до (МЕеОоНн або 7 М амонізованого МеоН) в ОСМ (Приклад 2: градієнт 0-10 95 МеоН в ОСМ; Приклад 5: градієнт 4-10 95 7 М амонізованого МеОН в ОСМ: Приклад 8: градієнт 5-7,5 95 7 М амонізованого
Меон в ОСМ) або НРІ С (високоефективною рідинною хроматографією) з оберненою фазою з великим рн, як зазначено.
Таблиця З
Наведені як приклад сполуки, одержані за Прикладом 1 в
Е
Рацемічний 5-(4-(2-І3- мо Е Е (фторметил) азетидин-1- ЖК Щі о іл|стоксиуфеніл)- 7- 2 (трифторметил)-5Н- Ці 525,2
ППбензопірано|4, 3-с|хінолін- та 2-ол й но М о
Рацемічний 8-хлор-5-(4-(2-(3- ОД Ще (фторметил)азетидин-1- о сі
За іл|Істоксиуфеніл)-5Н- ія 491,0
ППрбензопіраноїЇ4,3-с|хінолін- хх 2-ол - но М є, ми сі
Рацемічний 7-хлор-5-(4-(2-|3- ЖД і (фторметил)азетидин- 1- о дь іл|стокси)феніл)-5Н- ія 491,0
ІПбензопіраної|4,3-с|хінолін- ія хх 2-ол я но М о.
Рацемічний 8-фтор-5-(4-(2-. |. ОД Ще
ІЗ-(фторметил)азетидин-1- о Р
Бе іл|Істокси(феніл)-5Н- Щ 475,0
ППбензопіраноїЇ4,3-с|хінолін- 7 2-ол р но М
Таблиця З (продовження)
Приклад с. ЕБ/М5 (т/г)
Мо Хімічна назва Структура (Мен) ши мо Е
Рацемічний 7-фтор-5-(4-(2- Х
ІЗ-(фторметил)азетидин- 1- о іл|Істоксиуфеніл)-5Н- ЩФ 475,0
ППбензопіраноїЇ4,3-с|хінолін- сх 2-ол - но М тт
Рацемічний 5-(4-(2-І3- ЧИ, і (фторметил)азетидин-1- о 7е іл|Істоксиуфеніл) -8-метил-5Н- Ще 471,2
ППбензопіраноїЇ4,3-с|хінолін- хх 2-ол т но М ми
Рацемічний 5-(4-(2-(3- ЖД (фторметил)азетидин-1- о іл|Істоксиуфеніл) -7-метил-5Н- і 471,2
ППбензопіраноїЇ4,3-с|хінолін- сх 2-ол я но М айчищають НРІ С з оберненою фазою з великим рН (КІМЕТЕХ? С18, 5 мкм. колонка 30х250 мм, з елююванням 35-50 95 АСМ у 10 мМ водному розчині бікарбонату амонію з 5 95 меон). ьОчищають НРІ С з оберненою фазою з великим рН (КІМЕТЕХЗ? СТ18, 5 мкм, колонка 30х250 мм, з елююванням 35-43 95 АСМ у 10 мМ водному розчині бікарбонату амонію з 5 95 меон). сПісля очищення на силікагелі з елююванням 4-10 95 7М амонізованим МеОН в ОСМ, додатково очищають НРІ С з оберненою фазою з великим рН (КІМЕТЕХ? С18, 5 мкм, колонка 30х250 мм. з елююванням 30-44 95 АСМ у 10 мМ водному розчині бікарбонату амонію з 5 95 меон). азОчищають НРІ С з оберненою фазою з великим рН (КІМЕТЕХЗ? С18, 5 мкм, колонка 30х75 мм, з елююванням 10-75 95 АСМ у 10 мМ водному розчині бікарбонату амонію з 5 95 меон). «Очищають НРІ С з оберненою фазою з великим рН (ХВВІОСЕ? С18 5 мкм ОВО, колонка 30х75 мм, з елююванням 10-60 95 АСМ у 10 мМ водному розчині бікарбонату амонію з 5 95 меон).
ПРИКЛАД ТА
5-(4-12-ІЗ-(Фторметил)азетидин-1-іл|Іетокси)феніл)-8-(трифторметил)-5Н-ГИ1|бензопіраної|4,3- сіхінолін-2-ол, Ізомер 1 та
ПРИКЛАД 1В 5-(4-12-ІЗ-(Фторметил)азетидин-1-іл|Іетокси)феніл)-8-(трифторметил)-5Н-И1|бензопіраної|4,3- сіхінолін-2-ол, Ізомер 2 о
ОД І
Е й о
Щі і
Ух - но М
Два енантіомери 5-(4-2-І3-«(фторметил)азетидин-1-іл|еєтокси|Їфеніл)-8-«'трифторметил)-5Н-
ППбензопіраної|4,3-с|хінолін-2-олу розділяють хіральною 5ЕС в таких умовах: Колонка: ХУ
СеїшМіоб5е-1,5х25 см: елюювання мобільною фазою 3095 іРІОН (з 0,595 ОМЕА) у СО»; температура колонки: 40 "С; швидкість потоку: 300 г/хв; довжина хвилі УФ-детектування: 270 нм, і одержують сполуку Прикладу ТА як перший елюйований енантіомер (Ізомер 1). Е5Б/М5 (т/2): 525,2 (МН). Енантіомерне збагачення Ізомеру 1 підтверджують хіральною аналітичною
ЗЕО. »99 95 ее, МН): 1,30 хв; колонка: СНІВАГ СЕ 2 О0-Н, 4,6х150 мм; елюювання рухомою фазою 30 95 Меон (0,2 95 ІРА) у СО»; температура колонки: 40 "С: швидкість потоку: 5 мл/хв; довжина хвилі УФ-детектування: 225 нм. Виділяють вказану в заголовку сполуку Прикладу 18, і одержують другий елюйований енантіомер (Ізомер 2). ЕБ/М5 (т/2): 525,2 (МАН). Енантіомерне збагачення Ізомеру 2 підтверджують хіральною аналітичною 5ЕС, 59895 ее, КА): 2,03 хв; колонка: СНІВАГ СЕЇІ 2? О0-Н, 4,6х150 мм; елюювання рухомою фазою 30 95 Меон (0,2 95 ІРА) у
СО»; температура колонки: 40 "С: швидкість потоку: 5 мл/хв; довжина хвилі УФ-детектування: 225 нм.
Альтернативна препаративна методика ПРИКЛАДУ 18
Кристалічний 5-(4-(2-ІЗ-«фторметил)азетидин-1-іл|еєтоксиуфеніл)-8-(трифторметил)-5Н-
ППбензопіраноїЇ4,3-с|хінолін-2-ол, Ізомер 2 5-(4-12-ІЗ-(Фторметил)азетидин-1-іл|Іетокси)феніл)-8-(трифторметил)-5Н-ГИ1|бензопіраної|4,3- сіхінолін-2-ол, 4-метилбензолсульфонову кислоту, ізомер 2 (23,8 г, 0,034 моль) перемішують у воді (250 мл) при 1000 об/хв. Додають Маон (76 мкл), і розчин перемішують протягом 2 год.
Додають ОСМ (600 мл). Суміш розділяють, екстракт в ОСМ сушать сульфатом магнію, матеріал фільтрують крізь шприцевий фільтр (0,45 мкм), і концентрують насухо. Матеріал витримують у потоці М протягом уікенду. Додають 1:11 ЕЮН/воду (80 мл), і суміш перемішують З одночасним оброблянням ультразвуком. Тверду речовину жовтувато-коричневого кольору відфільтровують на нейлоновій мембрані, і одержують вказану в заголовку сполуку (10,47 г, 0,02 моль, 59 95).
Порошкова рентгенографія (ХА)
Порошкові рентгенограми (ХАРО) кристалічних твердих речовин одержують Із застосуванням порошкового рентгенівського дифрактометру ВгиКег 04 Епаєамог, спорядженому джерелом СикКо; і детектором Мапіес, що працює при 35 кВ і 50 мА. Зразок сканують у межах 4- 407 29 з величиною кроку, яка становить 0,008" 26, при швидкості сканування 0,5 с/крок, з 1,0 мм розходженням, фіксованим рівнем антирозсеювання 6,6 мм та 11,3 мм діафрагмами детектору.
Сухим порошком наповнюють кварцовий тримач зразку, і гладеньку поверхню одержують із застосуванням предметного скла. Дифрактограми кристалічної форми одержують при температурі і відносній вологості навколишнього середовища. Положення піків кристалічної форми визначають на МОІ-даде після змінення дифрактограми у цілому на основі стандартних піків МІСТ 675 при 8,853" 26 і 26,774" 29. З кристалографії добре відомо, що, для будь-якої даної кристалічної форми, відносна інтенсивність дифракційних піків може змінюватись через переважну орієнтацію, яка є наслідком таких факторів як морфологія і форма кристалу. Якщо наявні впливи переважної орієнтації, інтенсивність піків змінюється, однак характеристичні положення піків поліморфних модифікацій залишаються незмінними. Дивись, наприклад, Те
Опіей 5іаге5 Ріаптасореїа 523, Маїййопа! Роптиціагу 218, раде5 1843-1844. 1995. Окрім того, з кристалографії також добре відомо, що для будь-якої даної кристалічної форми кутові положення піків можуть дещо змінюватись. Наприклад, положення піків можуть зсуватись унаслідок змій температури, при якій аналізується зразок, зміщення зразку або наявності чи відсутності внутрішнього стандарту. У даному разі змінність положення піків 0,27 29 буде враховувати потенційні зміни без перешкоджання ооднозначній ідентифікації вказаної кристалічної форми. Підтвердження кристалічної форми може бути здійснено на основі будь- якої унікальної комбінації характеристичних піків.
Одержаний зразок кристалічного /5-(4-(2-ІЗ-(фторметил)азетидин-1-іл|ветокси)феніл)-8- (трифторметил)-5Н-П|бензопірано|4,3-с|хінолін-2-олу, Ізомеру 2, характеризується порошковою рентгенограмою, одержаною із застосуванням джерела випромінювання СикКое., як такий, що мас піки дифракції (значення 2-тета), описані у наведеній нижче Таблиці 4, зокрема, як такий, що має піки при 19,8" в комбінації з одним або декількома піками, вибраними з групи, яку складають піки при кутах 6,87, 16,07 та 22,17 з допуском на кути дифракції 0,27.
Таблиця 4
Піки порошкової рентгенограми кристалічної сполуки Прикладу 18 . о о Відносна інтенсивність 1111 ев111111г1111111111с2гм1 6 7177777777111111111111198177777711111111111171111111111111111111о00001 81111111 28901 8 1111111171248111111111111117111111111111111111116401
Альтернативна препаративна методика ПРИКЛАДУ 18 4-(2-ІЗ-«Фторметил)азетидин-1-іл|Істоксилфеніл)(гідрокси)метил|)|-3-(2-фтор-4- (трифторметил)феніл)хінолін-7-ол, Ізомері (63,05 г, 104,7 ммоль), розчиняють в ОМ5О (1,3 л) в атмосфері М2г при кімнатній температурі. Порціями протягом 5 хв додають карбонат цезію (108 г, 331 ммоль). Суміш нагрівають до температури 60 "С протягом 15 год. Суміш охолоджують до кімнатної температури, і розбавляють водою (2,1 л) та ЕІЮАс (1,3 л). Суміш протягом 5 хвилин перемішують, і відокремлюють. Водний матеріал повторно екстрагують ЕЮАс (1,3 л), і перемішують протягом 5 хвилин. Органічні екстракти відокремлюють, і об'єднують, промивають розсолом, водою та ЕЇАс. Органічні екстракти сушать М950О0»5. концентрують, і сушать під високим вакуумом протягом ночі при кімнатній температурі, і одержують вказану в заголовку сполуку у вигляді твердої речовини коричневого кольору (52,69 г, 95,9 95). Енантіомерне збагачення сполуки Прикладу 1В підтверджують хіральною аналітичною 5ЕС, 98,1 95 ее, КВ): 2,03 хв; колонка: СНІВА СЕ 2 О0-Н, 4,6х150 мм; елюювання рухомою фазою 3095 Меон (0,2 95 ІРА) у СО»; температура колонки: 40 "С; швидкість потоку: 5 мл/хв; довжина хвилі Уф- детектування: 225 нм.
ПРИКЛАД 2А 5-(4-12-ІЗ-(Фторметил)азетидин-1-іл|Іетокси)феніл)-7-(трифторметил)-5Н-ГИ1|бензопіраної|4,3- сіхінолін-2-ол, Ізомер 1 та
ПРИКЛАД 28 5-14-12-ІЗ-(Фторметил)азетидин-1-іл|Іетокси)феніл)-7-(трифторметил)-5Н-ГИ1|бензопіраної|4,3- сіхінолін-2-ол, Ізомер 2
Е о й о о й но М
Два енантіомери 5-(4-(2-ІЗ-(фторметил)азетидин-1-іл|єтоксиуфеніл)-7-«(трифторметил)-5Н-
ППбензопіраноїЇ4,3-с|хінолін-2-олу розділяють хіральною Б5ЕС ов таких умовах: Колонка:
Зо СНІВАЇ РАК? ІС, 21х250 см; елюювання мобільною фазою 30 95 ІРОН (з 0,2 95 ІРА) у СО»; температура колонки: 40 "С; швидкість потоку: 70 г/хв; довжина хвилі УФ-детектування: 225 нм, і одержують сполуку Прикладу 2А як перший елюйованин енантіомер (Ізомер 1). ЕБ/М5 (т/г): 525,1 (МАН). Енантіомерне збагачення Ізомеру 1 підтверджують хіральною аналітичною 5ЕС, »99 95 ее, КР): 1,56 хв; колонка: СНІВАЇ РАК? ІС, 4,6х150 мм; елюювання рухомою фазою 30 95
ІРОН (0,2 95 ІРА) у СО»; температура колонки: 40 "С; швидкість потоку: 5 мл/хв; довжина хвилі
УФ -детектування: 225 нм. Виділяють вказану в заголовку сполуку Прикладу 2В, і одержують другий елюйований енантіомер (Ізомер 2). ЕБ/М5 (т/л2): 525,2 (МН). Енантіомерне збагачення
Ізомеру 2 підтверджують хіральною аналітичною ЕС, 9895 ее, КА): 2,33 хв; колонка:
СНІВАЇ РАК? ІС, 4,6х150 мм: елюювання рухомою фазою 30 95 ІРОН (0,295 ІРА) у СО»; температура колонки: 40 "С: швидкість потоку: 5 мл/хв; довжина хвилі УФ-детектування: 225 нм.
ПРИКЛАД ЗА
8-Хлор-5-(4-(2-ІЗ-«-фторметил)азетидин-1-іл|єтоксихфеніл)-5Н-П|бензопіраної4,3-с|хінолін-2- ол. Ізомер 1 та
ПРИКЛАД ЗВ
8-Хлор-5-(4-(2-ІЗ-«фторметил)азетидин-1-іл|єтоксиуфеніл)-5Н-(З|бензопіраної4,3-с|хінолін-2- ол. Ізомер 2 о
М
-Х Щі о сі
Ух о - но М
Два енантіомери 8-хлор-5-(4-2-ІЗ--фторметил)азетидин-1-іл|Іетоксиуфеніл)-5Н-
ППбензопіраноїЇ4,3-с|хінолін-2-олу розділяють хіральною Б5ЕС ов таких умовах: Колонка:
СНІВАЇ СЕІГ 2 О0-Н, 21х250 см; елюювання мобільною фазою 30 95 Меон (з 0,2 95 ІРА) у СО»; температура колонки: 40 "С; швидкість потоку: 80 г/хв; довжина хвилі УФ-детектування: 225 нм, і одержують сполуку Прикладу ЗА як перший елюйований енантіомер (Ізомер 1). ЕБ/М5 (т/л): 491,0 (МН). Енантіомерне збагачення Ізомеру 1 підтверджують хіральною аналітичною 5ЕС, »99 95 ее, КВ): 1,55 хв; колонка: СНІВАГ СЕІ? ОБ0Б-Н, 4,6х150 мм; елюювання рухомою фазою 35 95 ІРОН (0,2 95 ІРА) у СО»; температура колонки: 40 "С; швидкість потоку: 5 мл/хв; довжина хвилі УФ-детектування: 225 нм. Виділяють вказану в заголовку сполуку Прикладу ЗВ, і одержують другий елюйований енантіомер (Ізомер 2). ЕБ/М5 (т/г2): 491,0 (МАН). Енантіомерне збагачення Ізомеру 2 підтверджують хіральною аналітичною 5ЕС, »99 95 ее, КН): 2,26 хв; колонка: СНІВАГ СЕЇІ 2? О0-Н, 4,6х150 мм; елюювання рухомою фазою 35 95 Меон (0,2 95 ІРА) у
СО»; температура колонки: 40 "С; швидкість потоку: 5 мл/хв; довжина хвилі УФ-детектування:
Зо 225 нм.
ПРИКЛАД 4А 7-Хлор-5-14-(2-ІЗ-«фторметил)азетидин-1-іл|єстоксилфеніл)-5Н-ГП1 |бензопіраної|4,3-с)хінолін-2- ол. Ізомер 1 та
ПРИКЛАД 48 7-Хлор-5-(4-(2-ІЗ-«фторметил)азетидин-1-іл|єстоксихфеніл)-5Н-П|бензопіраної4,3-с|хінолін-2- ол. Ізомер 2 тт
М сі с Ще о
С - р но М
Два енантіомери 7-хлор-5-(4-12-ІЗ-«фторметил)азетидин-1-іл|Іетоксиуфеніл)-5Н-
ППбензопіраноїЇ4,3-с|хінолін-2-олу розділяють хіральною Б5ЕС ов таких умовах: Колонка:
СНІВАГ СЕІ? ОБ-Н, 21х250 см: елюювання мобільною фазою 35 95 Мен (з 0,2 95 ІРА) у СО»; температура колонки: 40 "С; швидкість потоку: 80 г/хв; довжина хвилі УФ-детектування: 225 нм, і одержують сполуку ПрикладудА як перший елюйований енантіомер (Ізомер 1). ЕБ/М5 (т/л): 491,0 (МН). Енантіомерне збагачення Ізомеру 1 підтверджують хіральною аналітичною 5ЕС, »99 95 ее, КВ): 1,71 хв; колонка: СНІВАГ СЕІ? ОБ0Б-Н, 4,6х150 мм; елюювання рухомою фазою 35 96 Меон (0,2 95 ІРА) у СО»; температура колонки: 40 "С: швидкість потоку: 5 мл/хв; довжина хвилі УФ-детектування: 225 нм. Виділяють вказану в заголовку сполуку Прикладу 48, і одержують другий елюйований енантіомер (Ізомер 2). ЕБ/М5 (т/г2): 491,0 (МАН). Енантіомерне збагачення Ізомеру 2 підтверджують хіральною аналітичною 5ЕС, »99 95 ее, МА): 2,38 хв: колонка: СНІВАГ СЕГ? О0-Н, 4,6х150 мм; елюювання рухомою фазою 35 95 Меон (0,2 95 ІРА) у
СО»; температура колонки: 40 "С; швидкість потоку: 5 мл/хв; довжина хвилі УФ-детектування: 225 нм.
ПРИКЛАД 5А 8-Фтор-5-(4-12-ІЗ-(фторметил)ацетидин-1-іл|єтоксиуфеніл)-5Н-П |бензопіраної|4,3-с|хінолін-2- ол, Ізомер 1 та
ПРИКЛАД 5А 8-Фтор-5-(4-12-І(ІЗ-(фторметил)азетидин-1-іл|Ііетоксиуфеніл)-5Н-ГП1 |бензопіраної|4,3-с)хінолін-2- ол, Ізомер 2 то
М
Ж Щі о " Е
Ж
- но М
Два енантіомери 8-фтор-5-(4-2-ІЗ-«(фторметил)азетидин-1-іл|еєтокси)феніл)-5Н-
ППбензопіраноїЇ4,3-с|хінолін-2-олу розділяють хіральною Б5ЕС ов таких умовах: Колонка:
СНІВАЇ СЕІ 2 О0-Н, 21х250 см; елюювання мобільною фазою 30 95 Меон (з 0,2 95 ІРА) у СО»; температура колонки: 40 "С; швидкість потоку: 80 г/хв; довжина хвилі УФ-детектування: 225 нм, і одержують сполуку Прикладу 5А як перший елюйований енантіомер (Ізомер 1). ЕБ/М5 (т/л): 475,0 (МН). Енантіомерне збагачення Ізомеру 1 підтверджують хіральною аналітичною 5ЕС, »99 95 ее, КА): 1,56 хв; колонка: СНІВАІ СЕІ? О0-Н, 4,6х150 мм; елюювання рухомою фазою до Меон (0,2 95 ІРА) у СО»; температура колонки: 40 "С: швидкість потоку: 5 мл/хв; довжина хвилі УФ-детектування: 225 нм. Виділяють вказану в заголовку сполуку Прикладу 5БВ, і
Зо одержують другий елюйований снантіомер (Ізомер 2). ЕБ/М5 (т/г2): 475,0 (МН). Енантіомерне збагачення ізомеру 2 підтверджують хіральною аналітичною 5ЕС, »99 95 ее, КН): 2,29 хв; колонка: СНІВАГ СЕЇІ 2? О0-Н, 4,6х150 мм; елюювання рухомою фазою 30 95 Меон (0,2 95 ІРА) у
Со»; температура колонки: 40 "С; швидкість потоку: 5 мл/хв; довжина хвилі УФ-детектувапня: 225 нм.
ПРИКЛАД бА 7-Фтор-5-(4-12-ІЗ-(фторметил)азетидин-1-іл|Ііетоксиуфеніл)-5Н-ГП1 |бензопіраної|4,3-с)хінолін-2- ол, Ізомер 1 та
ПРИКЛАД 6В 7-Фтор-5-(4-12-ІЗ-(фторметил)азетидин-1-іл|Ііеєтоксилфеніл)-5Н-П|бензопіраної4,3-с|хінолін-2- ол, Ізомер 2 то
М Е и ія о ф
Ж
-- но М
Два енантіомери 7-фтор-5-(4-2-ІЗ-«фторметил)азетидин-1-іл|еєтокси)феніл)-5Н-
ППбензопіраної|4,3-с|хінолін-2-олу розділяють хіральною Б5ЕС в таких умовах: колонка:
СНІВАГ СЕІ? ОБ-Н, 21х250 см: елюювання мобільною фазою 35 95 Мен (з 0,2 95 ІРА) у СО»; температура колонки: 40 "С; швидкість потоку: 80 г/хв; довжина хвилі УФ-детектування: 225 нм, і одержують сполуку Прикладу бА як перший елюйований енантіомер (Ізомер 1). ЕБ/М5 (т/л): 475,0 (МН). Енантіомерне збагачення Ізомеру 1 підтверджують хіральною аналітичною 5ЕС, »99 95 ее, КВ): 1,32 хв; колонка: СНІВАГ СЕІ? ОБ0Б-Н, 4,6х150 мм; елюювання рухомою фазою 35 96 Меон (0,2 95 ІРА) у СО»; температура колонки: 40 "С; швидкість потоку: 5 мл/хв; довжина хвилі УФ-детектування: 225 нм. Виділяють вказану в заголовку сполуку Прикладу 6БВ, і одержують другий елюйований енантіомер (Ізомер 2). ЕБ/М5 (т/г2): 475,0 (МАН). Енантіомерне збагачення Ізомеру 2 підтверджують хіральною аналітичною 5ЕС, »99 95 ее, МА): 1,95 хв; колонка: СНІВАГ СЕЇІ 2? О0-Н, 4,6х150 мм; елюювання рухомою фазою 35 95 Меон (0,2 95 ІРА) у
СО»; температура колонки: 40 "С; швидкість потоку: 5 мл/хв; довжина хвилі УФ-детектування: 225 нм.
ПРИКЛАД вА 5-(4-12-ІЗ-(Фторметил)азетидин-1-іл|Ііетокси!феніл)-7-метил-5Н-П|бензопіраноїЇ4,3-с|хінолін-2- ол, Ізомер 1 та
ПРИКЛАД 88 5-(4-12-ІЗ-(Фторметил)азетидин-1-іл|Іетокси)феніл)-7-метил-5Н-П|бензопіраної|4,3-с|хінолін-2- ол, Ізомер 2 тт
М с ія о
С
-- но М
Два енантіомери 5-(4-(2-ІЗ-(фторметил)азетидин-1-іл|етокси)феніл)-7-метил-5Н-
ППбензопіраної|4,3-с|хінолін-2-олу розділяють хіральною Б5ЕС в таких умовах: колонка:
СНІВАЇ СЕЇІ 2 О0-Н, 21 х 250 см; елюювання мобільною фазою 30 95 ІРОН (з 0,2 95 ІРА) у СО»; температура колонки: 40 "С; швидкість потоку: 80 г/хв; довжина хвилі УФ-детектування: 265 нм, і одержують сполуку Прикладу ВА як перший елюйований енантіомер (Ізомер 1). ЕБ/М5 (т/л):
Зо 471,2 (МН). Енантіомерне збагачення Ізомеру 1 підтверджують хіральною аналітичною 5ЕС, 299 95 ее, КА): 1,47 хв; колонка: СНІВА! СЕ? О0-Н, 4,6х150 мм; елюювання рухомою фазою
ЗО 95 ІРОН (0,2 95 ІРА) у СО»; температура колонки: 40 "С; швидкість потоку: 5 мл/хв; довжина хвилі УФ-детектуваннн: 225 нм. Виділяють вказану в заголовку сполуку Прикладу 8БВ, і одержують другий елюйований енантіомер (Ізомер 2). ЕБ/М5 (т/г2): 471,2 (МАН). Енантіомерне збагачення Ізомеру 2 підтверджують хіральною аналітичною 5ЕС, »99 95 ее, КА): 2,05 хв; колонка: СНІВАГ СЕІ? ОБ-Н, 4,6х150 мм; елюювання рухомою фазою 30 95 ІРОН (0,2 95 ІРА) у
СО»; температура колонки: 40 "С; швидкість потоку: 5 мл/хв; довжина хвилі УФ-детектування: 225 нм.
ПРИКЛАД 9 5-(4-12-ІЗ-(Фторметил)азетидин-1-іл|Іетокси)феніл)-8-(трифторметил)-5Н-ГИ1|бензопіраної|4,3- сіхінолін-2-ол, Ізомер 2, бензолсульфонова кислота о
ОД
Е й о
Я
Ж. Ж о он - но М
Суспензію 5-(4-(2-ІЗ-«фторметил)азетидин-1-іл)етоксиуфеніл)-8-«-трифторметил)-5Н-
ППбензопіраної|4,3-с|хінолін-2-олу, Ізомер 2 (Приклад 18) (100 мг, 0,19 ммоль) в АСМ (3 мл) нагрівають до температури 50 "С. Додають розчин моногідрату бензолсульфонової кислоти (40 мг, 0,23 ммоль) в АСМ (1 мл). Прозорий розчин жовтого кольору гріють протягом 10 хв при температурі 50 "С. Нагрівання припиняють, реакційну суміші дозволяють охолонути до кімнатної температури, і цю суміш перемішують протягом ночі. Додають толуол (2 мл), і реакційну суміш перемішують протягом 2 год. Розчин фільтрують, одержану тверду речовину збирають, і промивають її АСМ (1 мл). Тверду речовину сушать під вакуумом, і одержують вказану в заголовку сполуку (74 мг, 55 95). Альтернативна препаративна методика ПРИКЛАДУ 9
Суспензію 5-(4-(2-ІЗ-«фторметил)азетидин-1-іл|Іієтоксиуфеніл)-8-(фифторметил)-5Н-
ППбензопіраної|4,3-сіІхінолін-2-олу, Ізомер 2 (Прикладів) (124,1 мг, 0,24 ммоль) в МЕК (4 мл) нагрівають до температури 50 "С. Додають розчин моногідрату бензолсульфонової кислоти (50 мг, 0,28 ммоль) в МЕК (1 мл). Нагрівання припиняють, реакційній суміші дозволяють охолонути до кімнатної температури, і цю суміш перемішують протягом уїкенду. Концентрують у потоці М2. Додають МЕК (1 мл), суспендують, і одержують кристалічну тверду речовину жовтого кольору. Тверду речовину збирають, промивають МЕК, сушать під вакуумом при кімнатній температурі, і одержують вказану в заголовку сполуку (78,8 мг, 48 б).
ХВО, Приклад 9
ХАО виконують так. як описано для Прикладу 18. Одержаний зразок 5-(4-12-|3- (фторметил)азетидин-1-іл|Іетокси)феніл)-8-(трифторметил)-5Н-И1|бензопіраної|4,3-с)хінолін-2- олу, Ізомер 2, бензолсульфонова кислота, характеризується порошковою рентгенограмою, одержаною із застосуванням випромінювання СиКо; як такий, що має піки дифракції (значення 2-тета), які описані в наведеній нижче Таблиці 5, і зокрема мас піки при куті 20,5" в комбінації з одним або декількома піками, вибраними з групи, яку складають піки при кутах 12,3", 22,27 та 23,17; з допуском на кути дифракції 0,2 градуса.
Таблиця 5
Піки порошкової рентгенограми кристалічної сполуки Прикладу 9 . о о Відносна інтенсивність 6 ЇЇ 77777711111192111Ї111111111111111111111112601 78 11711112 4550С1 78 17777711 233311Ї711111111111111111111119368011177сСс2С
ПРИКЛАД 10
Кристалічний 5-(4-(2-ІЗ--фторметил)азетидин-1-іл|еєтоксиуфеніл)-8-(трифторметил)-5Н-
ППбензопіраноїЇ4,3-сіІхінолін-2-ол, 4-метилбензолсульфонова кислота. Ізомер 2 тт
М Е
Е и Ще о
Я о 3. - / но М но
Спочатку об'єднують 5-(4-(2-ІЗ-(фторметил)азетидин-1-іл|Іетоксиу)феніл)-8-(трифторметил)- 5Н-ПІбензопіраної|4.3-с)хінолін-2-ол. Ізомер 2 (Приклад 18) (204,2 г, 389 ммоль), та ЕЮАсС (5 л), і перемішують при температурі 60 "С, після чого додають Мен (200 мл) при температурі 607 з одержанням прозорого розчину коричневого кольору. Додають вказаний у заголовку продукт (11,48 г) для затравки розчину з подальшим додаванням попередньо змішаного розчину гідрату 4-метилбензолсульфонової кислоти (81,4 г, 428 ммоль) в ЕОАс (800 мл), і одержують суспензію жовтого кольору. Суспензію перемішують протягом 30 хв при температурі 50 "С. Суспензію концентрують до 5 об'єму. Розчин охолоджують при кімнатній температурі протягом 1 год., фільтрують, збирають тверду речовину, і промивають тверду речовину ЕІОАс. Тверду речовину сушать під вакуумом при температурі 30 "С протягом уїкенду, і одержують вказану в заголовку сполуку (239 г, 343 ммоль). Для подальшого очищення цього матеріалу разом додають вказану в заголовку сполуку (229 г, 328,7 ммоль) та 2-пропанол (4,6 л), і нагрівають до температури 60 "С протягом 2 год. Охолоджують до кімнатної температури протягом 30 хв. Тверду речовину відфільтровують, і промивають ІРОН (100 мл). Тверду речовину сушать під потоком Ме2 протягом ночі, і одержують вказану в заголовку сполуку (174,4 г, 76,2 905). Різні партії вказаної в заголовку сполуки, одержані по суті у такий самий спосіб, об'єднують, і додають гептан (2 л).
Суспензію перемішують протягом 30 хв. тверду речовину відфільтровують, і промивають гептаном (300 мл). Зібрану тверду речовину сушать під потоком М»е протягом ночі, і одержують вказану в заголовку сполуку (199,7 г, 99,5 Урв).
ХВО. Приклад 10
ХВО виконують так, як описано для Прикладу 18. Одержаний зразок сполуки 5-(4-12-|3- (фторметил)азетидин-1-іл|Ііестокси!їфеніл)-8-(трифторметил)-5Н-П|бензопіраної|4,3-с)хінолін-2-ол,
Ізомер 2. 4-метилбензолсульфонова кислота (Приклад 10), характеризується порошковою рентгенограмою, одержаною із застосуванням випромінювання СиКо, як такий, що має піки дифракції (значення 2-тета) такі, як описано в наведеній нижче Таблиці 6. і. зокрема, має піки при куті 20,17 в комбінації з одним або декількома піками, вибраними з групи, яку складають піки при кутах 12,87, 19,57 та 22,8"; з допуском на кути дифракції 0,2 градуса.
Таблиця 6
Піки порошкової рентгенограми кристалічної сполуки Прикладу 10 . о о Відносна інтенсивність 61 ГввМ1111111111111111111111111ловбою1 28117711 2381111111111117111111111111111111114090СсС1 81 Г111111112281111111111111111111111111111111139401
Біологічні дослідження
Докази взаємозв'язку між експресісю ЕВ та раком певних видів добре відомі в цій галузі.
Результати наведених нижче досліджень демонструють, що наведені як приклад сполуки
Формули І, Формули ІЇ та Формули ПШШ є ефективними 5ЕНО і можуть бути корисними при лікуванні раку.
Дослідження конкурентною зв'язування ЕКо; (дикий тип), ЕКо; (мутант 5375) та ЕВВ
Метою наведених нижче досліджень конкурентного зв'язування Ей є визначення спорідненості досліджуваної сполуки до ЕКо; (дикий тип), ЕКо; (мутант 5375) та ЕВрД.
Дослідження конкурентного зв'язування здійснюють у буфері, що містить 50 мМ НЕРЕ5, рН 7,5, 1,5 ММ ЕОТА, 150 мМ Масі, 10 95 гліцерину, 1 мг/мл овальбуміну та 5 мМ ОТ із застосуванням 0,025 мк Кюрі на лунку "Н-естрадіолу (118 Кюрі/ммоль, 1 мкКюрі/мл), 7,2 нг/лунку рецептора ЕВс: (дикий тил), або 7,2 нг/лунку рецептора ЕКо (мутант 5375). або 7,7 нг/лунку рецептора ЕВрД, Досліджувану сполуку додають у 10 різних концентраціях в діапазоні від 10000
НМ до 0.5 нМ, і неспецифічне зв'язування визначають у присутності 1 мкМ 17р-естрадіолу.
Зв'язувальну реакційну суміш (140 мкл) інкубують протягом 4 год. при кімнатній температурі, а потім до кожної реакційної суміші додають холодний декстран-вугільний буфер (70 мкл) (що містить, на 50 мл аналітичного буфера, 0,75 г деревного вугілля та 0,25 г декстрану). Вміст планшетів змішують протягом 8 хв на орбітальному шейкері при температурі 4 "С, а потім центрифугують при 3000 об/хв при температурі 4 "С протягом 10 хв. Аліквоту (120 мкл) суміші переносять в інший 95-лунковий білий планшет з плоским дном (Созіаї) і у кожну лунку додають сцинтиляційну рідину (175 мкл) Реїкіп ЕІтег Оріїрназе Зирегтіх. Планшети герметизують, і енергійно струшують на орбітальному шейкері. Після інкубації протягом 2,5 год. планшети зчитують із застосуванням лічильнику У/аЇйїас Містореїа. ІСво розраховують підгонкою до 4- параметричної логістичної кривої і обчислюють 95 інгібування при 10 мкМ. Значення ІСво для сполуки перетворюють на КІ із застосуванням рівняння Ченга-Прусофа. Результати цього дослідження демонструють, що сполуки Прикладу 1. Прикладу ТА та Прикладу 18 (та інші) зв'язуються з рекомбінантним ЕЮКо дикого типу та мутантом ЕНо (5375) так, як показано в наведеній нижче Таблиці 7, а також було визначено, що Кі (нМ) конкурентного зв'язування ЕНр сполукою Прикладу 1В становить 0,11:50,07, п-3.
Таблиця 7
Результати конкурентного зв'язування ЕКа (дикий тип), ЕКа (мутант 5375) та ЕКВ
Кі (НМ) ЕКа (дикий тип) нини инших ни 0061111111111111111111114л4111171 11111115 06111111 Її 81111113 11111114
З-посеред досліджуваних наведених для прикладу сполук, значення Кі для ЕКо; дикого типу коливалось від приблизно 0,300 нМ до приблизно 65 нМ. Значення Кі для мутанта ЕКо 5375 коливалось від приблизно 2 НМ до 300 нМ. Результати цього дослідження демонструють зв'язувальну спорідненість та ефективність наведених для прикладу сполук проти білків ЕКо. дикого типу, мутантів (ЕЗБАТ 5375) та ЕВ.
Дослідження деградації ЕКо; в клітинах МСЕ7
Метою наведеного нижче дослідження деградації ЕЮКо є визначення деградації ЕВо досліджуваною сполукою в ЕВ-позитивній лінії клітин раку молочної залози, такій як МСЕ7.
Клітини МСЕ? (закуплені від АТСС НТВ-22) культивують у середовищі ОМЕМ, доповненому 95 ЕВ5, 0,01 мг/мл людського інсуліну для цукрового діабету 1-го типу та 1 95 антибіотиків пеніциліну/стрептиміцину, і висівають на 384-лункові планшети з плоским дном з розрахунку 4000 клітин на лунку в середовищі ОМЕМ (20 мкл), що не містить фенолового червоного, і 10 містить 10 95 ЕВ5, десорбованої деревним вугіллям.
Клітини інкубують протягом ночі в інкубаторі для культур клітин (595 СО», 95 95 відносна вологість при температурі 37 "С), і надають клітинам можливість прикріплення до планшету.
Наступного дня клітинам дозують досліджувану сполуку. Для одержання послідовних розведень (1:3) досліджуваних сполук в діапазоні від б мкМ до 0,0003 мкМ застосовують акустичний дозатор Еспо 555. Клітинам дозують додаванням досліджувану сполуку (5 мкл) з планшету з послідовними розведеннями на планшет для вирощування клітинних культур для одержання кінцевої концентрації ОМ5О 0,2 95 з кінцевим діапазоном концентрації досліджуваної сполуки від 2 мкМ до 0,0001 мкМ. Для максимальної точки використовують середовище, що містить 0,2 96 ОМ5О, а для мінімальної точки використовують фулвестранг, розведений до кінцевої концентрації 2 мкМ, у середовищі для вирощування, що містить 0,2 95 ЮОМ50. Після дозування досліджуваної сполуки планшети для вирощування клітинних культур інкубують при температурі 37"С та 595 СО» протягом 24 год. Клітини фіксують додаванням 14 95 параформальдегіду (10 мкл) протягом 30 хв при кімнатній температурі. Клітини одноразово промивають РВ5 (20 мкл), та інкубують з РВ5 (20 мкл), що містить 0,595 (у об'ємному відношенні) ТУМЕЕМ? 20 протягом 1 год. Клітини промивають РВ5, що містить 0,05 95 ТУМЕЕМ?У 20 (2х), і блокують З 95 ВБ5А у РВ5, що містить 0,05 95 ТМ/ЕЕМе 20 та 0,1 95 ТВІТОМ м Х-100 (20 мкл/лунку), протягом 1 год. при кімнатній температурі. Додають перше антитіло (1:500) (20 мкл) (ЕНо (Клон 5Р1) моноклонального кролячого антитіла Мо АМ-9101-5. ТНепто 5сієпійіс), розведене в 1 55 ВБА/РВ5, що містить 0,05 95 ТМ/ЕЕМе 20 на лунку, планшети герметизують, та
Зо інкубують протягом ночі при температурі 4 "С. Наступного дня клітини промивають РВ5, що містить 0,05 95 ТМ/ЕЕМе 20 (2х), та інкубують з другим антитілом (20 мкл/лунка) (розведення 1:1000. козячий анти-кролячий І9М АГЕХА РІ ОВ м 488) у РВ5 з 1 95 ВБ5А протягом 105 хв при кімнатній температурі. Після промивання планшетів РВ5 (2х20 мкл) додають РНКазу (5ідта) (20 мкл 50 мкг/мл) і розчин йодиду пропідію 1:1000 у РВ5 на лунку (20 мкл). Планшети герметизують, та інкубують протягом 1 год. при кімнатній температурі на стенді (захищеними від світла). Планшети сканують із застосуванням АСОМЕМ ЕХРІ ОВЕН "м |лазерно-сканувальний флуоресцентний мікропланшетний цитометр виробництва ТТР І АВТЕСН І ТОДІ для визначення
ЕНо. Аналіз зображення для ідентифікації позитивних клітин базується на клітинних флуоресцентних сигналах. ЕНВ-позитивні клітини ідентифікують за середньою інтенсивністю.
Для ідентифікації окремих клітин застосовують загальну інтенсивність на рівні 575-640 нм від йодиду пропідію/ДНК. Результатом цього аналізу є 95 ЕВ-позитивних клітин. Іво визначають підгонкою кривої до чотирипараметричного логістичного рівняння для кожного результату із застосуванням СЕМЕ ОАТАТМ, Результати цього аналізу демонструють високоактивну деградацію ЕЮКо в клітинах МСЕ7 раку молочної залози, індуковану сполуками Формули |,
Формули ІЇ та Формули ІШ, які описані в цьому описі. Відносні значення ІСво для сполук
Прикладу 1, Прикладу 1А та Прикладу 18 наведені в Таблиці 8.
Таблиця 8
Дослідження деградації ЕКа в клітинах МСЕ7
Таблиця 8 (продовження) 00061111 бо5о8бж0,006889,п-3.1 68111111 0б009132С1 81111111 00173840,008752,п-2...:/:..:.:И/(Е
Зокрема, результати в Таблиці 8 показують високоактивну деградацію ЕНКо сполукою
Прикладу 1 у клітинах МСЕ7 раку молочної залози. З-посеред наведених як приклад досліджуваних сполук відносна Ібво коливалась у межах від 0,003 мкМ до 22 мкМ, що вказує на те, що всі сполуки, крім сполуки Прикладу 2В, виявляли активність при досліджуваній концентрації. Результати цього дослідження демонструють, що сполука Формули І, є 5ЕНО з високою активністю деградації ЕВо; в клітинах.
Дослідження індукування РЕс; у клітинах МСЕ7
Метою наступного дослідження індукування РКАКо є визначення, чи має досліджувана сполука агоністичну активність щодо рецептора ЕВо; (очікується, що агоніст активує рецептор).
Клітини МСЕ7 (закуплені від АТСС НТВ-22) культивують у середовищі ОМЕМ, доповненому 10 95 ЕВ5, 0,01 мг/мл людського інсуліну для цукрового діабету 1-го типу та 1 95 антибіотиків пеніциліну/стрептоміцину, і ці клітини висівають (до досягнення 70 95 конфлюентності) на 384- лункові планшети з плоским дном і розрахунку 4000 клітин на лунку в середовищі ОМЕМ (20 мкл), що не містить фенолового червоного, і містить 10 95 ЕВ5 (десорбованої деревним вугіллям). Клітини інкубують протягом ночі в інкубаторі для культур клітин (595 СО», 95 965 відносна вологість при температурі 37 "С), і надають клітинам можливість прикріплення до планшету. Наступного дня клітинам дозують досліджувану сполуку. Для одержання послідовних розведень (1:3) сполук в діапазоні від б мкМ до 0,0003 мкМ застосовують акустичний дозатор
Еспо 555. Клітинам дозують додаванням досліджувану сполуку (5 мкл) з планшету з послідовними розведеннями на планшет для вирощування клітинних культур для одержання кінцевої концентрації ОМ5О 0,2 95 з кінцевим діапазоном концентрації досліджуваної сполуки від 2 мкМ до 0,0001 мкМ. Для максимальної точки використовують середовище, що містить 0,2 96 ОМ5О, а для мінімальної точки використовують фулвестрант, розведений до кінцевої концентрації 2 мкМ, у середовищі для вирощування, що містить 0,2 95 ЮОМ50. Після дозування досліджуваної сполуки планшети для вирощування клітинних культур інкубують при температурі 37"С та 595 СО» протягом 24 год. Клітини фіксують додаванням 14 95 параформальдегіду (10 мкл) протягом 30 хв при кімнатній температурі. Клітини одноразово
Зо промивають РВ5 (20 мкл), та інкубують з РВ5 (20 мкл), що містить 0,595 (у об'ємному відношенні) ТУМЕЕМе 20 протягом 1 год. Клітини двічі промивають РВ5 (20 мкл). що містить 0,0595 ТМ/ЕЕМУ 20, і блокують 395 ВБА у РВ5, що містить 0,0595 ТМУЕЕМУ 20 та 0,1 95
ТАІТОМ М Х-100 (20 мкл/лунку), протягом 1 год. при кімнатній температурі. Додають перше антитіло (1:500) (20 мкл) (РА моноклонального мишачого антилюдського антитіла, клон РОН 636 рако, М43569). розведене в 1 95 ВБА/РВ5, що містить 0,05 95 ТМ/ЕЕМ? 20 на лунку, планшети герметизують, та інкубують протягом ночі при температурі 4 "с.
Наступного дня клітини промивають РВ5, що містить 0,05 95 ТМУЕЕМе? 20 (2х20 мкл), та інкубують з другим антитілом (20 мкл/лунка) (розведення 1:1000, козячий анти-кролячий ІДМ
АГЕХА РІ ШОВ'М 488) у РВ5 з 195 В5БА протягом 105 хв при кімнатній температурі. Після промивання планшетів РВ5 (2х20 мкл) додають РНКазу (20 мкл, 50 мкг/мл) (бідта) і розчин йодиду пропідію 1:1000 у РВ5 на лунку. Планшети герметизують, та інкубують протягом 1 год.
при кімнатній температурі на стенді (захищеними від світла). Планшети сканують із застосуванням АСОМЕМ ЕХРІ ОВЕН М Ілазерно-скандувальний флуоресцентний мікропланшетний цитометр виробництва ТТР ГАВТЕСН І ТО) для визначення РЕс. Аналіз зображення для ідентифікації позитивних клітин базується на клітинних флуоресцентних сигналах. РА-позитивні клітини ідентифікують за середньою інтенсивністю. Для ідентифікації окремих клітин застосовують загальну інтенсивність на рівні 575-640 нм від йодиду пропідію/ДНК. Результатом дослідження є 95 РА-позитивних клітин. ЇСхо визначають підгонкою кривої до чотирипараметричного логістичного рівняння для кожного результату із застосуванням СЕМЕ ОБАТАТМ, Результати цього дослідження не демонструють значущої агоністичної активності сполук Формули І, Формули І та Формули Ш в клітинах МСЕ7 раку молочної залози. Відносні значення ІС5о для сполук, тестованих у цьому дослідженні, становлять 22 мкМ. Результати цього дослідження не демонструють значущої агоністичної активності наведених для прикладу досліджуваних сполук в клітинах МСЕ7 раку молочної залози. Ці результати також демонструють, що наведені для прикладу досліджувані сполуки є антагоністами ЕКо; в клітинах МСЕ7 раку молочної залози (тобто, вони мають активність ФЕНОЮ).
Клітинне дослідження інгібування РЕс; (функціональний антагонізм ЕВо)д в клітинах МСЕ7-
ЕБЗА1 У537М 682 СВІ5РА.
Мета наведеного нижче клітинного дослідження інгібування РАо (функціональний антагонізм ЕВо) полягає у визначенні антагоністичної активності досліджуваної сполуки щодо мутантного рецептора ЕНо У537М. Очікується, що антагоніст у цьому дослідженні буде блокувати функцію рецептора ЕВо. РЕсо є низхідною транскрипційною мішенню ЕКо. і, отже, антагоніст ЕКсх, як очікується, буде інгібувати експресію РЕсх.
Клітини МСЕ7-Е5ЗА1Т М5371М-682 (одержані редагуванням СВІЗРА/Саз9 гена Е5ВІ у клітинах
МСЕ7, клон Мо 682) культивують у середовищі ЮОМЕМ, доповненому 1095 ЕВ та 1 95 антибіотиків пеніциліну/стрептоміцину, і ці клітини висівають (до досягнення /-70 95 конфлюентності) на 384-лункові планшети з плоским дном з розрахунку 4000 клітин на лунку в середовищі ЮМЕМ (20 мкл), що не містить фенолового червоного, і містить 1095 ЕВ5 (десорбованої деревним вугіллям). Клітини інкубують протягом ночі в інкубаторі для культур клітин (5 9ю6 СО», 95 95 відносна вологість при температурі 37 "С), і надають клітинам можливість
Зо прикріплення до планшету. Наступного дня клітинам дозують досліджувану сполуку. Для одержання послідовних розведень (1:3) сполук в діапазоні від б мкМ до 0,0003 мкм застосовують акустичний дозатор Еспо 555. Клітинам дозують додаванням досліджувану сполуку (5 мкл) з планшету з послідовними розведеннями на планшет для вирощування клітинних культур для одержання кінцевої концентрації ОМ5О 0,2 95 з кінцевим діапазоном концентрації досліджуваної сполуки від 2 мкМ до 0,0001 мкМ. Для максимальної точки використовують середовище, що містить 0,2 95 ОМ5О, а для мінімальної точки використовують фулвестрант, розведений до кінцевої концентрації 2 мкМ, у середовищі для вирощування, що містить 0,295 ОМ5О. Після дозування досліджуваної сполуки планшети для вирощування клітинних культур інкубують при температурі 37 С та 595 СО» протягом 72 год. Клітини фіксують додаванням 1495 параформальдегіду (10 мкл) протягом 30 хв при кімнатній температурі. Клітини промивають РВ5 (1х20 мкл), та інкубують з РВ5 (20 мкл), що містить 0,5 95 (у об'ємному відношенні) ТУХЕЕМе 20 протягом 1 год. Клітини промивають РВ5 (2х20 мкл), що містить 0,05 95 ТМ/ЕЕМе 20, і блокують З 95 ВБ5А/РВ5, що містить 0,05 95 ТМУЕЕМ? 20 та 0,1 95
ТАІТОМ М Х-100 (20 мкл/лунку), протягом 1 год. при кімнатній температурі. Додають перше антитіло (1:500) (20 мкл) (РА моноклонального мишачого антилюдського антитіла, клон РОН 636 рако, М3569), розведене в 1 95 В5А/РВ5, що містить 0,05 95 ТМ/ЕЕМе 20 на лунку, планшети герметизують, та інкубують протягом ночі при температурі 4 "с.
Наступного дня клітини промивають РВ5, що містить 0,05 95 ТУМУЕЕМ? 20 (2х20 мкл), та інкубують з другим антитілом (20 мкл/лунка) (розведення 1:1000. козячий анти-кролячий ІДМ
АГЕХА РІ ШОВ'М 488) у РВ5 з 195 В5БА протягом 105 хв при кімнатній температурі. Після промивання РВ5 (2х20 мкл) додають РНКазу (20 мкл 50 мкг/мл) (Зідта) і розчин йодиду пропідію 111000 у РВ5 на лунку. Планшети герметизують, та інкубують протягом 1 год. при кімнатній температурі на стенді (захищеними від світла). Планшети сканують із застосуванням
АСИМЕМ ЕХРІОВЕВ М |лазерно-сканувальний флуоресцентний мікроиланшетний цитометр виробництва ТТР ГАВТЕСН І ТО) для визначення РЕс. Аналіз зображення для ідентифікації позитивних клітин базується на клітинних флуоресцентних сигналах. РЕ-позитивні клітини ідентифікують за середньою інтенсивністю. Для ідентифікації окремих клітин застосовують загальну інтенсивність на рівні 575-640 нм від йодиду пропідію/ДНК. Результатом дослідження є
Фо РЕ-позитивних клітин. ІСво визначають підгонкою кривої до чотирипараметричного бо логістичного рівняння для кожного результату із застосуванням СЕМЕ ВАТА "М,
Результати цього дослідження демонструють високоактивне інгібування РВАс |і функціональний антагонізм сполук Прикладу 1, Прикладу 1А та Прикладу 18 в клітинах МС Е-7 (Е5АТ У537М, гетерозиготний мутант) раку молочної залози. Відносні значення ІСво сполук
Прикладу 1, Прикладу ТА та Прикладу 1В (та інших) в цьому дослідженні представлені в наведеній нижче Таблиці 9. Відносні значення ІСсо наведених для прикладу досліджуваних сполук коливаються у межах від приблизно 0,0118 мкМ до »1,6 мкМ, що вказує на те, що наведені для прикладу сполуки є високоактивним антагоністом мутанта ЕНо (У537М) та високоактивними інгібіторами ЕКо-опосередкованої транскрипції, за виключенням сполуки
Прикладу 2В (1,6 мкМ). РВАс (РВО) також є транскрипційною мішенню ЕКс; і результати цього дослідження демонструють високоактивне інгібування ЕКсо-опосередкованої транскрипції РЕс..
Таблиця 9
Клітинне дослідження інгібування РКа (функціональний антагонізм ЕКа) в клітинах МСЕ7
У537М 682 СВІЗБРА 16111111 00631950,01609,п-2..://:/..::/Х"И.:ЦУИИУ 61111111 0601961ССсС2С 00811111 бо412420,006572,п-2...:/ :/.,/:Г:(|У(
Клітинне дослідження інгібування РЕс: (функціональний антагонізм ЕКос) в клітинах МСЕ7
Мета наведеною нижче клітинного дослідження інгібування РВо; (функціональний антагонізм
ЕНо) полягає у визначенні антагоністичної активності досліджуваної сполуки щодо рецептора
ЕВо. Очікується, шо антагоніст у цьому дослідженні буде блокувати функцію рецептора ЕВс..
РАс; є низхідною транскрипційною мішенню ЕКо.; і, отже, антагоніст ЕВо, як очікується, буде інгібувати експресію РЕсх.
Це дослідження здійснюють в умовах, які докладно описані у наведеному вище клітинному дослідженні деградації ЕКо; із застосуванням питометру Аситеп, із застосуванням лінії клітин
МСЕ, за винятком того, що перед дозуванням досліджуваної сполуки з планшету для вирощування клітинних культур видаляють середовище і всі лунки, за виключенням лунок негативного контролю (24 стовпчик планшета), попередньо протягом 30 хв обробляють аналітичним середовищем, яке містить 0,47 нМ естрадіолу. У цьому дослідженні проводять імунофарбування для виявлення РАо, і планшети сканують із застосуванням АСОМЕМ
ЕХРІ ОВЕВ М |лазерно-сканувальний флуоресцентний мікропланшетний цитометр виробництва
ТТР ГАВТЕСН І ТО для визначення РАс. Аналіз зображення для ідентифікації позитивних клітин базується на клітинних флуоресцентних сигналах. РВо-позитивні клітини ідентифікують за середньою інтенсивністю. Для ідентифікації окремих клітин використовують загальну інтенсивність на рівні 575-640 нм від йодиду пропідію/ДднНК. Результатом дослідження є 95 РВо- позитивних клітин. ЇСво визначають підгонкою кривої до чотирипараметричного логістичного рівняння для кожного результату із застосуванням СЕМЕ БАТАТ"М, Результати цього дослідження демонструють високоактивне інгібування РЕо: і функціональний антагонізм сполук
Прикладу 1, Прикладу 1А та Прикладу 18 в клітинах МСЕ7 раку молочної залози.
Відносні значення ІСзо сполук Прикладу 1, Прикладу ТА та Прикладу 18 в цьому дослідженні представлені в наведеній нижче Таблиці 10. Відносні значения ІСсо наведених для прикладу сполук коливаються у межах від приблизно 0,027 мкМ до 22 мкМ, що вказує на те, що всі наведені для прикладу досліджувані сполуки, за виключенням сполук Прикладу ТА та Прикладу 28. Є високоактивними антагоністами білка ЕНо дикого типу та високоактивним інгібітором
ЕВо-опосередкованої транскрипції. РАо (РАС) також є транскрипційною мішенню ЕКс. і результати цього дослідження демонструють високоактивне інгібування ЕНо-опосередкованої транскрипції РЕс; у випробуваних концентраціях.
Таблиця 10
Клітинне дослідження інгібування ЕКа (функціональний антагонізм ЕКа) в клітинах МСЕ7 00611711 00825850,005682,0-3.Й.:.:'',/:С:СУУ.:/" ОН) 06111111 002835.ССсС1С 00861111 00683550,020273,п-2..-:/..:ИК Л::(Кж
Дослідження клітинної проліферації в МСЕ7 та МСЕ7-Е5ВІ 537-682 Метою наведених нижче досліджень проліферації клітин, в цілому, с виявлення того, чи впливас досліджувана сполука на клітинну проліферацію.
Клітини МСЕ? (закуплені від АТСС НТВ-22) висівають з розрахунку 2000 клітин на лунку в середовище ОМЕМ (20 мкл), що не містить фенолового червоного, і містить 1095 ЕВ5 (десорбованої деревним вугіллям), на 384-лунковий планшет для вирощування клітинних культур з прозорим дном. Клітини МСЕ7-Е5АМ537М-682 (одержані редагуванням СВІЗБРНА/Саз59 гена ЕН у клітинах МСЕ7, клон Мо 682) висівають на середовище ОМЕМ, доповнене 10 95 ЕВ5 та 1 95 антибіотиків пеніциліну/стрептоміцину, з розрахунку 1000 клітин на лунку. Планшети інкубують при температурі 37 "С та 595 СО». Наступного дня клітинам дозують досліджувану сполуку. Для одержання послідовних розведень (1:3) сполук в діапазоні від 60 мкМ до 0,003
МКМ застосовують акустичний дозатор Еспо 555. Клітинам дозують додаванням досліджувану сполуку (5 мкл) з планшету з послідовними розведеннями на планшет для вирощування клітинних культур для одержання кінцевої концентрації ОМ5О 0,2 95 і кінцевим діапазоном концентрації досліджуваної сполуки від 20 мкМ до 0,001 мкМ. Для максимальної точки використовують середовище, яке містить 0,2 95 ОМ5О, а для мінімальної точки використовують
Зо фулвестрант, розведений до кінцевої концентрації 2 мкМ, у середовищі для вирощування, яке містить 0,295 ОМ5О. Після дочування досліджуваної сполуки планшети для вирощування клітинних культур інкубують при температурі 37 "С та 5 95 СО». Через сім днів після додавання досліджуваної сполуки планшети виймають з інкубатора, і у кожну лунку додають холодний
ЕЮН 96 95 (65 мкл). Через 30 хв видаляють середовище, і у кожну лунку додають РНКазу (20 мкл 50 мкг/мл) (Зідта) та розчин йодиду пропідію 1:1000 у РВ5. Планшети герметизують, та інкубують протягом 1 год. при кімнатній температурі на стенді (захищеними від світла).
Планшети сканують із застосуванням АСИОМЕМ ЕХРІОВЕН"М (|лазерно-сканувальний флуоресцентний мікропланшетний цитометр виробництва ТТР ГАВТЕСН І ТО). Оскільки лінія клітин МСЕ-7 росте з утворенням агрегатів, кількість клітин, як кількість об'єктів, не може бути використана для зчитування; тому кількість клітин може бути оцінена за можливим значенням кількості клітин (розрахованим через параметр площі (відношення загальної площі до загальної сумарної популяції клітин (визначений діапазон пікової інтенсивності РІ -І (РІ) та середньої площі популяції одиничних клітин (визначається периметром)). Іво визначають підгонкою кривої до чотирипараметричного логістичного рівняння для кожного результату із застосуванням
СЕМЕ рАТА"мМ. Відносні ІСво сполук Прикладу 1, Прикладу ТА та Прикладу 1В (та інших) у клітинах МСЕ7 ЕБ5НАЇ дикого типу та мутантних клітинах МСЕ7-Е5В1 У537М показані в наведеній нижче Таблиці 11. Результати цього дослідження демонструють високу антипроліферативну активність та інгібування росту клітин сполуками Прикладу 1, Прикладу 1А та Прикладу 18В (та інших) у МСЕ7 (ЕЗАТ дикого типу) та МСЕ7 (Е5АТ У537М мутантних) клітин раку молочної залози. Відносні ІСзо наведених для прикладу сполук коливаються від приблизно 0,0035 мкМ до 1,176 мкМ у МСЕ7 Е5В1 дикого типу та від приблизно 0,014 мкМ до 1,86 мкМ у МСЕ7 (ЕБЗА1
У537М мутантних) клітин раку молочної залози, що вказує на те, що всі наведені для прикладу досліджувані сполуки демонструють високу антипроліферативну активність та пригнічення росту клітин у МСЕ7 (ЕЗА1 дикою типу) та МСЕ? (Е5АТ У537М мутантних) клітин раку молочної залози.
Таблиця 11
Дослідження клітинної проліферації в МСЕ7 та МСЕ7-ЕЗА1Т У537М-682 типу мутантних клітин 77761111 005128.777777777777717171111111111111110002962СсС 61 Ї1111111111111111111111111111111111001599.4....Й.;07ЙЮСКСКС 77767177 004157,777777777 1771 00329020,003002,п-2. -:-
Дослідження цільового Інгібування іп мімо (ІМТІ) (аналіз РОВ ВТ-дРСВ) при пухлинах МСЕ7
Метою цього дослідження ІМТІ є визначення здатності досліджуваної сполуки (5ЕНЮ) інгібувати експресію (транскрипцію) гена РВо; у низхідному напрямку відносно ЕВо; у пухлинних ксенотрансплантатах, імплантованих мишам.
Мишам-самицям лінії МОЮ СІЮ (22-25 г) від Епхідо ВМ5, Іпс., Мадізоп, штат Вісконсін, підшкірно па ділянці з правого боку імплантують 5х10е5 клітин клітин МСЕ7 ЕВ-позитивного раку молочної залози (АТСС, Мо за каталогом НТВ-22) в розчині (1:11) НВ55-МАТВІСЕЇ тм (200 мкл).
За 1 день до імплантації пухлинних клітин підшкірно імплантують гранули 17р-естрадіолу (0,18 мг/гранула, вивільнення протягом 90 днів, від Іппомаїїме Незеєагсі). Ріст пухлин та масу тіла визначають двічі на тиждень, починаючи з сьомого дня після імплантації. Коли розміри пухлий досягають 250-350 мм, тварин рандомізують, і об'єднують в групи з п'яти тварин.
Тваринам вводять досліджувану сполуку в декількох дозах в характерному носії досліджуваної сполуки (1 95 гідроксиетилцелюлози/0,25 95 ТМ/ЕЕМ? 80/0,05 95 протиспінювача у очищеній воді) або лише носій пероральним шляхом протягом З днів, і збирають пухлини та кров через потрібні інтервали часу після останньої дози. Тварин вмертвляють із застосуванням ізофлуранової анестезії зміщенням шийного хребця. Пухлини піддають надшвидкому заморожуванню, і зберігають при температурі -80 "С до обробки для виділення РНК та дослідження АТ-ДРСВ. Кров збирають у пробірки з ЕОТА, центрифугують для відокремлення плазми, і заморожують при температурі -80"С у 96б-лунковому планшеті. Експозицію досліджуваних сполук визначають мас-спектрометрією.
Пухлини подрібнюють в порошок в рідкому азоті, і лізують у буфері для лізису 1х РНК (з наборів для виділення РНК) із застосуванням гранул Маїйгїх О (МР Віотеаісаї!, Мо за каталогом 6913-500) у клітинному подрібнювані РА5ТРАЕР-24ТМ (МР Віотеєаіса!). Лізати пухлин переносять у свіжі пробірки після центрифугування при 14000 об/хв протягом 20 хв при температурі 4 "С. РНК з пухлинних лізатів виділяють із застосуванням мінінабору РОВЕГІМКУ
ВАВМА Міпі Кії (Іпийгодеп, Мо за каталогом 12183018А) або мінінабору АМеазу Міпі Кії (Оіадеп,
МоМо за каталогом 74104 та 74106). Речовини, які забруднюють ДНК, видаляють із застосуванням набору РОВЕГІМКеУ Опазе 5еї (Іпийгодеп, Мо за каталогом 12185010) або набору
АМазе-Ргтее ОМавзе 5еї (Оіадеп. Мо за каталогом 79254). Концентрацію ізольованої РНК визначають шляхом розведення зразків у вільній віл РНКази воді та вимірювання оптичної
Зо густини при 260 нм із застосуванням планшет-рідера (бресігаМахІ90). Середнє виміряне значення оптичної густини контрольного зразка при 260 нм (лише вільна від РНКази вода) віднімають від виміряних при 260 нм значень усіх інших зразків РНК. Зразки РНК розводять до однакових концентрацій у вільній від РНКази воді. кКДНК з розведеної РНК синтезують із застосуванням системи Рігзі-5ігапа Зупіпезі5 Зузієт ВТ-РСВ (Іпийгодеп, Мо за каталогом 18080- 051). Для проведення КТ-Я9РСВ кДНК спочатку розводять у вільній від РНКази воді. Для кожної реакції у планшеті для ПЛР (Арріїєа Віозубзіетв5, Ме за каталогом 4309849) поєднують 2х Арзо!ше
Віне аОРСОВ ОХ Міх (Тнпепто, Мо за каталогом АВ-4139/А). праймер РОВ (ген про гес те ройового рецептора) (Пепто,х Неь0О1556702 т!) і розбавлену кКДНК. кКДНК ампліфікують. інкубуючи зразки протягом 2 хв при температурі 50 "С, а потім протягом 15 хв при температурі 957С у термоциклері (система виявлення послідовності АВІ Ргізт 7900НТ). Інкубацію продовжують при температурі 95 "С протягом 15 с а потім при температурі 50 "С протягом 60 с впродовж 40 циклів. Цикли нормалізують відносно облігатного гена, та застосовують для розрахунку 95 інгібування РОМА порівняно і самим носієм. Кожен зразок досліджують з повторенням і середні значення використовують для розрахунків. Відсоток цільового (РЕВА) інгібування обчислюють із застосуванням Ехсеї! та ХІ. Ні.
Результати цього дослідження демонструють, що сполука Прикладу 1В інгібує експресію
РЕАс: (РО) в моделі пухлинного ксенотрансплантата. Сполука Прикладу 1В інгібує експресію
РЕАс: (РОБ) на «78 95 у моделі пухлинного ксенотрансплантата протягом 24 год. у дозі 30 мг/кг при пероральному введенні. Ці результати демонструють значне та стійке інгібування антагоністичної активності ЕНо; та опосередкованої ЕКо; транскрипційної активності іп мімо на моделі пухлинного ксенотрансплантата.
Дослідження пригнічення росту пухлин іп мімо на ксенотрансплантатних моделях ЕВ- позитивних (ЕН дикого типу) ракових пухлин молочної залози, імплантованих мишам
Метою наведеного нижче дослідження інгібування пухлинного ксенотрансплантата є визначення зменшення об'сму пухлини у відповідь на введення досліджуваної сполуки.
Ракові клітини молочної залози людини МСЕ7 (АТСС, Мо за каталогом НТВ-22) та НСС1428 (АТСС, Мо за каталогом СВІ -2327) культивують, збирають, і вводять 5х10е5 клітин у розчині (17) НВ555МАТВЇІСЕЇ тм (200 мкл) підшкірно в задню частину правого боку мишей-самиць лінії
МОЮ СІЮ (22-25 г, Епмідо ВМ5, Іпс). За двадцять чотири години до імплантації клітин підшкірно бо імплантують гранули естрогену (0,18 мг/гранулу, 17 р-естрадіол, вивільнення протягам 90 днів,
Іппомаїїме Везеагсі). Ракові клітини молочної залози людини Т47О (АТСС, Мо за каталогом НТВ- 22) культивують, збирають, і вводять з розрахунку 5х1О0еб клітин у розчині (1:1)
НВ5ОБ5АМАТНЇСЕЇ "м (200 мкл) підшкірно в задню частину правою боку мишей-самиць лінії МОЮ
ЗСІЮ (22-25 г, Епмідо ВМ5, Іпс). За двадцять чотири години до імплантації клітин підшкірно імплантують гранулі естрогену (0,38 мг/гранулу, 17р-естрадіол, вивільнення протягом 90 днів,
Іппомаїїме Незеагсі). Ракові клітини молочної залози людини 2Н8-75-1 (АТСС, Мо за каталогом
СВІ -1500) культивують, збирають, і вводять 5х10е?х клітин у розчині (1:11) НВ55-МАТНВІСЕЇ тм (200 мкл) підшкірно в задню частину правого боку мишей-самиць лінії МОЮ СІЮ (22-25 г, Епмідо
ВМ5, Іпс). Тваринам вводять 50 мкл естрадіолу валерата (ОєіІезітодеп) внутрішньом'язово (10 мг/мл) за двадцять чотири години до імплантації клітин, а потім один раз на 14 днів протягом дослідження. Ріст пухлин та масу тіла визначають двічі на тиждень, починаючи з сьомою дня після імплантації. Коли розміри пухлини досягають 250-350 мм, тварин рандомізують, і об'єднують в групи з 5 тварин.
Досліджувану сполуку, Приклад 18, готують у відповідному носії (1 95 гідроксиетилцелюлози/0,25 95 ТУМЕЕМе 80/0,05 95 протиспінювача у очищеній воді) та вводять за допомогою шлункового зонду протягом 28 днів, ОО. Реакцію пухлин визначають шляхом вимірювання їх об'єму двічі на тиждень протягом курсу лікування. При визначенні об'єму пухлин масу тіла приймають як загальний критерій токсичності.
Встановлено, що сполука Прикладу 18 має значення 95 дельта Т/С таке, як зазначено в наведеній нижче Таблиці 12. Ці результати вказують на те, що сполука Прикладу 18 демонструє хорошу пероральну біодоступність у мишей та значну протипухлинну активність або регресію пухлин в ксенотрансплантатних моделях ЕВ-позитивних (ЕБНА1 дикого типу) ракових пухлин молочної залози людини.
Таблиця 12
Дослідження пригнічення росту пухлин іп мімо на ксенотранепдантатих моделях ЕН-позитивних (ЕЗВА!1 дикого типу) ракових пухлин молочної залози, імплантованих мишам до дельта Т/С або 95 регу молочно малою 0,001 молочної залози) «0,001 раку молочної залози) «0,001
НОС1428 (ксенотрансплантат 0,001" раку молочної залози) «0,001
Аналіз об'єму пухлин базується на І одно та коваріаційній структурі Зрайа! Ромжег. "7: значуще (ре0,05) порівняно з контрольним носієм. до дельта Т/С обчислюється, коли кінцевий об'єм пухлини в досліджуваній групі дорівнює вихідному об'єму пухлини або перевищує вихідний об'єм пухлини. Формула виглядає так: 1004(Т-То/С-Со), де Т і С є середніми кінцевими об'ємами пухлин в досліджуваній або контрольній групі, відповідно. То ії Со є середніми вихідними об'ємами пухлин в цих групах.
Фо регресу обчислюється, коли кінцевий об'єм нижче вихідного рівня. Формула виглядає так: 1005(Т-То)/ТГо, де То - середній вихідний об'єм пухлини для досліджуваної групи.
Загальне середнє значення всіх груп від вихідного рівня (рандомізація) на 32 день використовується для обчислення 95 зміни Т/с.
Дослідження пригнічення росту пухлин іп мімо на РОХ-моделі (5Т941/НІ) ЕБА1 мутантного раку молочної залози, імплантованій мишам
Метою наступного дослідження інгібування пухлинного ксенотрансплантата є визначення зменшення об'єму пухлини у відповідь на введення досліджуваної сполуки в РОХ
Зо (ксенотрансплантат, одержаний з тканини паціента)-імоделі Е5БНТ! мутантного та гормононезалежного (НІ) раку молочної залози.
РОХ-модель 51Т941/НІ РОХ була створена та випробувана в боцій Теха5 Ассеїегаїва
Везеагсп Пегарецшіісв (Зап Апіопіо, штат Техас). Фрагменти пухлин збирали у тварин-хазяїв, імплантували імунодефіцитним мишам (Те даскзоп І арогайогу), і дослідження розпочинали із середнім об'ємом пухлин приблизно 125-250 мм3. Досліджувану сполуку, Приклад 18, готували у відповідному носії (1 95 гідроксиетилцелюлози/0,25 96 ТУМЕЕМе 80/0,05 95 протиспінювача у очищеній воді), та вводили за допомогою шлункового зонду протягом 28 днів. Реакцію пухлин визначати шляхом вимірювання їх об'єму двічі на тиждень протягом курсу лікування. При визначенні об'єму пухлин масу тіла приймають як загальний критерій токсичності.
Встановлено, що сполука Прикладу 18 мала значення 95 дельта Т/С такі, як зазначено в наведеній нижче Таблиці 13. Ці результати вказують на те. що сполука Прикладу 18 демонструє хорошу пероральну біодостуиність у мишей та значну протипухлинну активність або регресію пухлин в РОХ-моделі ЕЗВА1 мутантного (5375) раку молочної залози людини.
Таблиця 13
Дослідження пригнічення росту пухлин іп мімо на РОХ-моделі ЕЗВ1 мутантного раку молочної залози, імплантованій мишам нннетнит | петтню | СЕ | Влрння (ення
Пухлинна модель Доза (мг/кг) . р-значення лікарського засобу або 95 регресу 5Т941С/НІ (РОХ- 2800 юДЛмЇ вв щ | 0213 модель Е5ВІ 20 Ї1777777171117109077777177717171717171115. 17000 мутантного раку Й
Аналіз об'єму пухлин базується на І одно та коваріаційній структурі Зрайа! Ромжег.": значуще (р«е0,05) у порівнянні з контрольним носієм.
Фо дельта Т/С обчислюють, коли кінцевий об'єм пухлини в досліджуваній групі дорівнює вихідному об'єму пухлини або перевищує вихідний об'єм пухлини. Формула виглядає так: 100(Т-То/С-Со), де Т і С є середніми кінцевими об'ємами пухлин в досліджуваній або контрольній групі, відповідно. То і Со є середніми вихідними об'ємами пухлий в цих групах.
Фо регресу обчислюють, коли кінцевий об'єм нижче вихідного рівня. Формула виглядає так: 1005(Т-То)/ТГо, де То - середній вихідний об'єм пухлини для досліджуваної групи.
Загальне середнє значення всіх груп від вихідного рівня (рандомізація) на 32 день використовують для обчислення 95 зміни Т/с.
Дослідження комбінованої терапії
Через неоднорідність пухлин та набуту стійкість до ендокринної терапії, комбінована терапія стала важливою при лікуванні ЕВ-позитивного та задавненого/метастатичного раку молочної залози для ефективної терапії або подолання набутої стійкості. Автори досліджували комбіновану дію сполуки Прикладу 18В з інгібітором СОК4/6 абемациклібом. інгібітором тТтОоВ еверолімусом, інгібітором РІКЗСА алпелісибом та інгібітором РІЗК/тТОМР 8-(5-(1-гідрокси-1- метилетил)піридин-3-іл|-1-(25)-2-метоксипропіл|-3-метил-1,3-дигідро-2Н-імідазо|4,5-с)хінолін-2- оном ("Сполука А") на п'яти лініях клітин ЕВ-позитивного раку молочної залози іп міїго. Тест на життєздатність клітин при дослідженнях комбінацій
Клітини висівають зі щільністю, вказаною в наведеній нижче Таблиці 14, в 20 мкл об'єм середовищ, описаних її таблиці, на 384-лунковий планшет для вирощування клітинних культур з прозорим дном.
Таблиця 14
Інформація щодо клітинних ліній в аналізі життєздатності клітин посіву джерела постачання (год.)
ВМРІ 10 95 ЕВ5, 1 95 антибіотиків т-470 1000 АТСС НТВ-133 пеніциліну/стрептоміцин у 72 (Р/5), 0,008 мг/мл бичачого інсуліну
ОМЕМ 10 95 ЕВ5, 1 95 Р/5 мов, | оо | атоснтес? оо мумллодакювся 86
НУВВЇ!І-САВЕ (1 л НО, 1,5 г/л вт-474 1000 АТСС НТВ-20 бікарбонату натрію, 10 95 144
ЕВ5, 1 95 Р/5
Планшети інкубують при температурі 37 "С і 595 СО». Наступного дня клітинам дозують досліджувану сполуку. Приклад 18.
Сполуки готують у вигляді 10 мМ вихідних розчинів у ОМ5О та використовують для дослідження залежності "доза-ефект" з максимальною концентрацією, починаючи з 10 мкМ або 1 мкМ; дві сполуки випробують разом у фіксованому співвідношенні, після чого готують послідовні розведення 1:3, а також окремі сполуки для визначення ІбФбо з початковою концентрацією 20 мкМ. Клітинам дозують додаванням 5 мкл з планшету для послідовного розведення на планшет для вирощування клітинних культур до одержання кінцевої концентрації
РМ5О 0,2 95 з кінцевим діапазоном концентрації доз досліджуваної сполуки від 20 мкМ до 0,001
МКМ для одноразової обробки або нижчим діапазоном для комбінацій. Для максимальної точки використовують середовище, що містить 0,2 95 ОМ5О, а для мінімальної точки використовують ставроспорин, розведений до кінцевої конценграції 2 мкМ у середовищі для вирощування, що містить 0,295 ОМ5О. Після дочування досліджуваної сполуки, планшети для вирощування клітинних культур інкубують при температурі 37 "С та 595 СО». Після дворазової інкубації з повторенням зі сполуками, планшети видаляють з інкубатора, і в кожну лунку додають холодний
ЕЮН 96 95 (65 мкл). Через 30 хв середовище видаляють, і в кожну лунку додають РНКазу (20 мкл 50 мкг/мл) (Зідта) та розчин йодиду нропідію (1:1000) у РВ5. Планшети герметизують, та інкубують протягом 1 год. при кімнатній температурі (захищеними від світла). Планшети сканують за допомогою АСИОМЕМ ЕХРІОВЕВ"М (лазерно-скандувальний флуоресцентний мікропланшетний цитометр виробництва ТР ГАВТЕСН І ТО. Оскільки деякі клітинні лінії ростуть з утворенням агрегатів, кількість клітин, як кількість об'єктів, не може бути використана для зчитування: тому для визначення кількості клітин може бути застосоване відношення загальної площі до загальної сумарної популяції клітин (визначений діапазон пікової інтенсивності РІ -1 (РІ)) або загальна інтенсивність Рі.
Дані досліджень комбінацій іп міго свідчать про синергію (як визначено нижче) комбінації сполуки Прикладу 1В з абемациклібом або еверолімусом у 5 з 5 ліній клітин ЕВ-позитивного раку молочної залози, як показано в Таблиці 15. Поєднання сполуки Прикладу 18 зі Сполукою А
Зо є синергічним у 4 з 4 тестованих ліній клітин ЕВ-позитивного раку молочної залози. Результат взаємодії сполуки Прикладу 18 з алпелісибом є адитивним у 2 з 4 ліній клітин ЕВ-позитивного раку молочної залози та синергічним у 2 з 4 ліній клітин ЕВ-позитивного раку молочної залози.
Таблиця 15
Іп міо комбінація сполуки Прикладу 18 з іншими цільовими засобами у лініях клітин ЕВ- позитивного раку молочної залози ваумоютно обротже! | обо? | юмбнаці | я мі раку молочної| Обробка 1 Обробка 2 комбінації |. ї . . інтерпретація | інтерпретація залози Сіво
Абемацикліб . .
Емегоїїтив
Сполука Алпелісиб . . 7Вв-75-1 Сполука
Прикладу 18 7В-75-30 Сполука
Прикладу 18
ЕЕМ-19 Сполука
Прикладу 18
Дослідження даних та інтерпретація комбінованою ефекту
Для розрахунку ефекту взаємодії іп міо використовували методи, опубліковані в літературі, (Г. 7Нао, єї аї. Егопі Віозсі. 2010. 2:241-249 та |. 7Нао, вї аї, Сіїп Сапсег Рез, 2004, 10(23):7994- 8004). Для того, щоб виявити синергічну або антагоністичну взаємодію між двома лікарськими засобами, було проведено дослідження зсуву кривої за допомогою спеціального шаблону Хі. з надбудовами Хі Ей 5. Криві окремого лікарського засобу регулюються з використанням чотирипараметричної логістичної регресії. Критеріями та обмеженнями, які використовуються для підгонки, є () точки мінімуму «(-20), зафіксовані як 0, та (і) точка максимуму » 120, зафіксована як 100. У разі, якщо всі спостереження нижчі за порогове значення, виконується постійна підгонка з нахилом -0, а ІСбо вважається вищою, аніж максимальна включена концентрація. Після одержання абсолютного значення ІСво кожного окремого лікарською засобу, обчислювали еквівалентну концентрацію при 50 95 активності для окремих лікарських засобів та комбінації. Використовуючи ці еквівалентні концентрації разом з визначеною активністю, автори повторно обчислювали абсолютну ІСво, й крива для окремих лікарських засобів досягала 50 95 активності при значеннях еквівалентних концентрацій, що дорівнюють 1, тоді як синергічні комбінації досягали 5095 при нижчих значеннях, що призводило до зсуву вліво, а антагоністична комбінація демонструвала зсув вправо. Еквівалентні концентрації також використовуються для розрахунку Сізо (комбінований індекс при 50 95 активності), де Сіво дорівнює абсолютній Іво комбінованої кривої. Разом з Сібсо можуть бути розраховані інші СІ (комбіновані індекси) при різних відсотках активності (Сіто, СіІго, СІзо, СІло, СІво, СіІго, СіІво, Сіво).
Для розрахунку Сіл обчислюються еквівалентні концентрації при різному відсотку активності.
Для кожного відсотка активності автори обчислювали допустиму межу похибки, яка є довірчим інтервалом при 95 95, і використовуючи цей довірчий інтервал, автори обчислювали верхню межу, як додавання допустимої межі похибки до Сі, і нижню межу, як віднімання допустимої межі похибки від СІ. Верхня межа - СІ я довірчий інтервал 95 95 і нижня межа Сі-довірчий інтервал 95 95. Потім ці межі використовуються для інтерпретації результатів.
Статистична інтерпретація для кожного відсотка активності виглядає так:
Зо
Зб
Біологічна інтерпретація для кожного відсотка активності виглядає так:
Дослідження комбінацій іп мімо
Через неоднорідність пухлин та набуту стійкість до ендокринної терапії, комбінована терапія стала важливою при лікуванні ЕВ-позитивного та задавненого/метастатичного раку молочної залози для ефективної терапії або подолання набутої стійкості. Існує гіпотеза, що комбінація цілеспрямованих терапевтичних засобів може бути більш ефективною для уповільнення або навіть зупинення ЕН-позитивного раку молочної залози. Комбінація інгібіторів СОКА4/6 та фулвестранту схвалена для лікування ЕВ-позитивного метастатичного раку молочної занози, але у високого відсотку пацієнтів розвивається стійкість через набуті мутації Е2А1 або РІКЗСА.
Як потужний супресор та антагоніст ЕВе, пероральний 5ЕНО, такий як сполука Прикладу 18, може бути більш ефективним у сповільненні або зупиненні ЕЗБНА1-мутантного або РІКЗСА- мутантного раку молочної залози як у вигляді окремого лікарського засобу, так і у комбінації з інгібітором СОК4/6, таким як абемацикліб, або інгібітором РІЗК/ТПТОВ, таким як Сполука А.
Маючи це на увазі, сполуку Прикладу 1В тестували на пригнічення росту пухлини в комбінації з абемапиклібом (за патентом) або сполукою А (за патентом). Більш конкретно, сполуку Прикладу 18 тестували в комбінації з абемациклібом або сполукою А на ксенотрансплантацій моделі раку молочної залози ЕН дикого типу та РІКЗзСа-мутантній лінії МСЕ 7.
Ракові клітини молочної залоги людини МСЕ7 (АТСС, Мо за каталогом НТВ-22) культивують, збирають, і вводять з розрахунку 5х10е5 клітин у розчині (111) НВ55-МАТВІСБЕЇ м (200 мкл) підшкірно в задню частину правого боку мишей-самиць лінії МОЮ СІЮ (22-25 г, Еплідо ВМ5,
Іпс). За двадцять чотири години до імплантації клітин підшкірно імплантують гранули естрогену (0,18 мг/гранулу, 17 р-естрадіол, вивільнення протягом 90 днів, Іппомаїїме Незеагсі). Ріст пухлин та масу тіла визначають двічі на тиждень, починаючи з сьомого дня після імплантації. Коли розміри пухлини досягають 250-350 мм3. тварин рандомізують, і об'єднують в групи з 5 тварин.
Досліджувану сполуку, Приклад 18, готують у відповідному носії (1 95 гідроксиетилцелюлози/0,25 956 ТУМЕЕМе 80/0,05 95 протиспінювача у очищеній воді), та вводять
Зо за допомогою шлункового зонду протягом 42 днів. Інгібітор СОКА4/6 (абемацикліб) приготовляють в 195 НЕС у 25 мМ натрійфосфатному буфері, рН 2,0. Інгібітор РІЗК/Пї ТОВ (Сполука А) оприготовляють в 195 гідроксиетилцелюлози/0,25 95 ТУМЕЕМУ 80/0,05 95 протиспінювача в очищеній воді. Реакцію пухлин визначають за вимірюванням їх об'єму двічі на тиждень протягом курсу лікування. При визначенні об'єму пухлин масу тіла приймають як загальний критерій токсичності. Об'єм пухлини визначають за допомогою формули м-Іхмех0,535, де І х більший вимірюваний діаметр і м/ - менший вертикальний діаметр.
Статистичний аналіз
Статистичний аналіз даних з об'єму пухлин починається з перетворення даних у логарифмічний масштаб для вирівнювання дисперсії за часом та досліджуваними групами.
Логарифмічні дані об'єму аналізуються із застосуванням двофакторного дисперсійного аналізу з повторними вимірюваннями за часом та обробкою із застосуванням процедур МІХЕО у програмі
ЗА (версія 9.3). Кореляційною моделлю для повторних вимірювань є бБраїйа! Ромуег.
Досліджувані групи порівнюються з контрольною групою в кожен момент часу. Процедура
МІХЕЮО також застосовується окремо до кожної досліджуваної групи для обчислення скоригованих середніх значень та середніх квадратичних помилок у кожний момент часу.
Обидва аналізи враховують автокореляцію по кожній тварині та втрату даних, яка відбувається тоді, коли тварини з великими пухлинами вилучаються з дослідження на ранньому етапі.
Відкориговані середні значення та середні квадратичні помилки (5.6.) наносять на графік для кожної досліджуваної групи залежно від часу. Аналіз об'єму пухлин базується на Іодіо та коваріаційній структурі ЗраййаіІ Роумег. Р-значення базується на порівнянних значеннях двох конкретних груп.
Метод комбінованою дослідження (метод незалежності Бліса для досліджень ІМЕРЕ)
По-перше, звичайну модель повторних вимірювань підганяють до од об'єму у залежності від групи та часу. Потім суперечливі твердження використовуються для перевірки результату взаємодії в кожний момент часу, використовуючи 2 специфічні лікарські засоби, які комбінуються. Це еквівалентно методу незалежності Бліса і передбачає, що об'єми пухлин теоретично можуть досягати нуля, тобто повного регресу. Очікувана адитивна відповідь (ЕАВ) для комбінації розраховується за шкалою об'єму пухлин так: відповідь (ЕАРВ), об'єм
ЕАН-МІ1"М2/У0, де МО, М1 та М2 - розрахункові середні обсяги пухлин для контрольного носія, обробки 1 самостійно та обробки 2 самостійно, відповідно. Якщо результат випробування на взаємодію є значущим, ефект взаємодії оголошується статистично більш ніж адитивним або менш ніж адитивним, залежно від того, чи є спостережуваний комбінований середній об'єм меншим або більшим за об'єм ЕАВ. відповідно. В іншому випадку статистичний висновок є адитивним. Крім того, біологічно значущий діапазон адитивності може бути визначений як ХУ вище і нижче об'єму ЕАВ. Звичайно Х становитиме від 25 95 до 40 95. Тоді для певної комбінації можна зробити біологічний висновок такий як "більш ніж адитивний", "адитивний" або "менш ніж адитивний", якщо спостережуваний середній об'єм комбінації знаходиться нижче, в межах або вище інтервалу адитивності.
Можливі ситуації, коли зупинення росту пухлини є найкращою очікуваною відповіддю. У цих ситуаціях метод Бліса може бути застосований безпосередньо до значень 95 дельта Т/С для одержання відсоткової відповіді ЕАН: ЕАВ 95 дельта Т/С-У17у2/100, де М1 та МУ2 - відсоткові значення дельта Т/С для обробки одним лікарським засобом. В даний час не існує статистичного тесту для порівняння спостережуваного 96 дельта Т/С у комбінованій групі у зіставленні з ЕАЕВ, але може застосовуватись біологічний критерій, описаний вище.
Як показано в Таблиці 15 та Таблиці 16, обробка лише сполукою Прикладу 18 або лише абемациклібом як окремими лікарськими засобами призводила до 32 95 (95 а/б - -32) та 52 95 (У а/с - -52) регресу пухлин, відповідно, і обидві є статистично значущими (р«е0,001) порівняно з контрольним носієм. Ефективність комбінації сполуки Прикладу 18 з абемациклібом була "менш ніж адитивною", але ефективність комбінації сполуки Прикладу 1В та абемациклібу була значно кращою, аніж лише сполуки Прикладу 1В (р«0,001). Однак ефективність застосування абемациклібу як єдиного лікарського засобу за статистичною значущістю не відрізнялась від комбінації (Р-0,055). Комбінація переноситься тваринами без значної втрати маси тіла.
Таблиця 15
Ефективність комбінації сполуки Прикладу 18 з абемациклібом у моделі МСЕ7 ЕВ-позитивного раку молочної залози
Середня
Обробка 1 Обробка 2 Різниця? квадратична р-значення помилка
Носій, ОЮХ42, Сполука Прикладу 18, 10 мг/кг, у перорально ООрх42, перорально 0,628 0,0658 0,001
Носій, ОЮХ42, Абемацикліб, 50 мг/кг, ООХх42, я
Сполука Прикладу 18, 10 мг/кг,
Носій, ООХ42, ООха42, « перорально перорально/Абемацикліб 50 0,756 0,0658 «0,001 мг/кг, ООх42, перорально
Сполука Прикладу око Прикладу 18, 10 мг/кг, вдова Орхаг, перорально/Абемацикліб. 50 0,128 0,0658 0,055 рор мг/кг, ООх42, перорально
Абемацикліб, 50 око Прикладу 18, 10 мг/кг, мок Ох, перорально/Абемацикліб, 50 0,278 0,0658 «0,001 рор мг/кг, ООх42, перорально
ЬРізниця - Обробка 1 - Обробка 2; "р-значення: значуще (р«е0,05)
ЗЕ - Середня квадратична помилка
Зо
Таблиця 16
Ефективність комбінації сполуки Прикладу 18 з абемациклібом у моделі МСЕ7 ЕВ-позитивного раку молочної залози о, о регресу
Носій 77777711 МА 7 1777 МА Її Її
Сполука Прикладу 18 «во 77711111
Абемацикліб «во 77111111 18/Абемацикліб/«Комбінація Мк адитивний зміни
Аналіз об'єму пухлин базується на І одно та коваріаційній структурі Зрайа! Ромег. "7: р- значення: значуще (р«е0,05), МА: не застосовується. до дельта Т/С обчислюється, коли кінцевий об'єм пухлини в досліджуваній групі дорівнює вихідному об'єму пухлини або перевищує вихідний об'єм пухлини; і 96 регресу обчислюється для об'єму пухлини нижче вихідного об'єму. Формула виглядає так: 1005(«Т-ТО/С-Со), детіс є середніми кінцевими об'ємами пухлин в досліджуваній або контрольній групі, відповідно, То і Со є середніми вихідними обьемами пухлин в цих групах.
Як показано в Таблиці 17 та Таблиці 18, обробка лише сполукою Прикладу 1В або лише
Сполукою А як окремим лікарським засобом призводила до 32 95 (95 А/С - -32) та 36 95 (96 а/с - -36) регресу пухлин, відповідно, і обидві є статистично значущими (р«0,001) порівняно з контрольним носієм. Ефективність комбінації сполуки Прикладу 1В зі Сполукою А була "менш ніж адитивною", але ефективність комбінації сполуки Прикладу 18 плюс Сполука А була значно вищою, ніж лише сполуки Прикладу 1В (р«0,001) або лише Сполуки А (р-0,0027). Ця комбінація переноситься тваринами без значної втрати маси тіла.
Таблиця 17
Ефективність комбінації сполуки Прикладу 18 зі Сполукою А у моделі МСЕ7 ЕВ-позитивного раку молочної залози
Середня
Обробка 1 Обробка 2 Різниця? квадратична р-значення помилка
Носій, ОЮХ42, Сполука Прикладу 18, 10 « перорально мг/кг, О0х42, перорально 0,479 0,0759 0,001
Носій, ОЮХ42, Сполука А, 7,5 мг/кг, я
Сполука Прикладу 18, 10 що мг/кг, ОЮХ42,
Носій, ота перорально/Сполука А, 0,761 0,0791 -0,0017 рор 7,5 мг/кг, ВІОХА2, перорально
Сполука Прикладу 18, 10
Сполука Прикладу |мг/кг, ООх42, 18, 10 мг/кг, ООХх42, | перорально/Сполука А, 0282 0,0791 -0,0017 перорально 7,5 мг/кг, ВІОХ42, перорально
Сполука Прикладу 18, 10 мг/кг, О0Х42, кош роамике перорально/Сполука А, 0257 0,0791 0,002" "перор 7,5 мг/кг, ВІОХА2, перорально
ЬРізниця - Обробка 1 - Обробка 2; "р-значення: значуще (р«е0,05)
ЗЕ - Середня квадратична помилка
Таблиця 18
Ефективність комбінації сполуки Прикладу 18 із Сполукою А у моделі МСЕ7 ЕВ-позитивного раку молочної залози о о регресу
Носій 77777111 1111117 МА 1777 МА Її / ЇСССсС
Сполука Прикладу 18 «во ГГ «во 1111111 18/Сполука А/ (Комбінація Мк адитивний зміни
Аналіз об'єму пухлин оснований на І одно та коваріантній структурі брайа! Роуег, "7: р- значення: значуще (р«е0,05), МА: не застосовується. до дельта Т/С обчислюється, коли кінцевий об'єм пухлини в досліджуваній групі дорівнює вихідному об'єму пухлини або перевищує вихідний об'єм пухлини; і 96 регресу обчислюється для об'єму пухлини нижче вихідного об'єму. Формула виглядає так 100(Т-То0)/(С-Со),детіс є середніми кінцевими об'ємами пухлин в досліджуваній або контрольній групі, відповідно. То і Со є середніми вихідними об'ємами пухлин в цих групах.
Як показано в Таблиці 19 та Таблиці 20, обробка лише сполукою Прикладу 10 або лише абемациклібом як окремим лікарським засобом призводила до 51 95 (95 4/0 - -51) та 70 95 (90 ат/с - -70) регресу пухлий, відповідно, і обидві є статистично значущими (р«0,001) порівняно з контрольним носієм. Ефективність комбінації сполуки Прикладу 10 з абемациклібом була "менш ніж адитивною", але ефективність комбінації сполуки Прикладу 10 плюс абемацикліб була значно кращою, ніж лише сполуки Прикладу 10 (р«0,039). Однак ефективність комбінації сполуки Прикладу 10 плюс абемацикліб суттєво не відрізнялась від ефективності лише абемациклібу (р-0,905). Ця комбінація переноситься тваринами без значної втрати маси тіла.
Таблиця 19
Ефективність комбінації сполуки Прикладу 10 і абемациклібом у моделі МСЕ7 ЕВ-позитивного раку молочної залози
Середня
Обробка 1 Обробка 2 Різниця? квадратична р-значення помилка
Носій, ОЮХ42, Сполука Прикладу 10, 15 мг/кг, у перорально Орх42, перорально 0,659 0113 0,001
Носій, ОЮХ42, Абемацикліб 50 мг/кг, ООХх42, я
Сполука Прикладу 10, 15 мг/кг.
Носій, ООХ42, ООха2, « перорально пероральпо/Абемацикліб, 50 0,672 0,1054 «0,001 мг/кг, О0х42, перорально
Сполука Прикладу дон Прикладу 10. 15 мг/кг, тв оодніко орхаг, перорально/Абемацикліб 50 0,013 01103 0,905 рор мг/кг, О0х42, перорально
Абємацикліб, 50 дон Прикладу 10, 15 мг/кг. мок ех, перорально/Абемацикліб, 50 0,227 0,1054 0,039 рор мг/кг, О0х42, перорально ьрРізниця - Обробка 1 - Обробка 2; "р-значення: значуще (р«е0,05)
ЗЕ - Середня квадратична помилка
Таблиця 20
Ефективність комбінації сполуки Прикладу 10 з абемациклібом у моделі МСЕ7 ЕВ-позитивного раку молочної залози о о регресу
Обробка МА ЇЇ МА 77711
Сполука Прикладу 10 «оо ГГ
Абемацикліб «оо 71111111 10/Абемацикліб/ (Комбінація Мк адитивний зміни
Аналіз об'єму пухлин оснований на І! одіс та коваріаційній структурі Зрайа! Роуег. х: р-значення: значуще (р«0,05). МА: не застосовується. до дельта Т/С обчислюється, коли кінцевий об'єм пухлини в досліджуваній групі дорівнює вихідному об'єму пухлини або перевищує вихідний об'єм пухлини; і 96 регресу обчислюється для об'єму пухлини нижче вихідного об'єму. Формула виглядає так: 100(Т-ТоО)/С-Со), детіс є середніми кінцевими об'ємами пухлин в досліджуваній або контрольній групі, відповідно.
То і Со є середніми вихідними об'ємами пухлин в цих групах.
Як показано в Таблиці 21 та Таблиці 22, обробка лише сполукою Прикладу 10 або лише алпелісибом як окремим лікарським засобом призводила до 51 95 (95 4/0 - -51) та 21 95 (95 ат/с - -70) регресу пухлин, відповідно, і обидві є статистично значущими (р«0,001 ї р-0,013) порівняно з контрольним носієм. Ефективність комбінації сполуки Прикладу 10 з алпелісибом була "адитивною", і ефективність комбінації сполуки Прикладу 10 плюс алпелісиб була значно кращою, ніж лише сполуки Прикладу 10 (р-0,009). Ефективність комбінації сполуки Прикладу 10 плюс алпелісиб також була значно кращою, ніж ефективність лише алпелісибу (р«е0,001). Ця комбінація переноситься тваринами без значної втрати маси тіла.
Таблиця 21
Ефективність комбінації сполуки Прикладу 10 з алпелісибом у моделі МСЕ7 ЕВ-позитивного раку молочної залози
Середня
Обробка 1 Обробка 2 Різниця? |квадратична р-значення помилка
Носій, ОЮХ42, Сполука Прикладу 10, 15 мг/кг, у перорально ООрх42, перорально ба 01121 0,039
Носій, ОЮХ42, Алпелісиб, 15 мг/кг (ді-д7), 10 мг/кг у перорально (д8-42). Орх42, перорально 0,45 01121 0,001
Сполука Прикладу 10, 15 мг/кг,
Носій, ОЮХ42, ООрх42, перорально/алпелісиб 15 мг/кг я перорально (д1-д7), 10 мг/кг (д8-42), ОЮХх42, 0,755 0121 0,001 перорально
Сполука Прикладу 10, 15 мг/кг,
Сполука Прикладу . 10, 15 мг/кг, ООХА2, Орх42, перорально/алпелісиб 15 мг/кг 0,514 01124 «0,01 (д1-д7), 10 мг/кг (д8-42), ООХх42, перорально перорально
Алпелісиб, 15 мг/кг | Сполука Прикладу 10, 15 мг/кг, (д1-д7), 10 мг/кг (д8-| 00х42, перорально/алпелісиб 15 мг/кг к 42), О0Ха2, (д1-д7), 10 мг/кг (д8-42), О0ХА2, 0,310 01121 0,009 перорально перорально ьрРізниця - Обробка 1 - Обробка 2: "р-значення: значуще (р«е0,05)
ЗЕ - Середня квадратична помилка
Таблиця 22
Ефективність комбінації сполуки Прикладу 10 з алпелісибом у моделі МСЕ7 ЕВ-позитивного раку молочної залози о о регресу
Носій 77777711 МА ЇЇ МА Її 77717111
Сполука Прикладу 10 «во ГО «во ГО 10/алпелісиб (Комбінація 16 0,001 Адитивний зміни
Аналіз об'єму пухлин оснований на І одно та коваріантній структурі брайа! Роугег. «:р-значення: значуще (р«е0,05). МА: не застосовується, уо дельта Т/С обчислюється, коли кінцевий об'єм пухлини в досліджуваній групі дорівнює вихідному об'єму пухлини або перевищує вихідний об'єм пухлини; і 96 регресу обчислюється для об'єму пухлини нижче вихідного об'єму. Формула виглядає так: 100(Т-ТО/С-Со),детіс є середніми кінцевими об'ємами пухлин в досліджуваній або контрольній групі, відповідно.
То і Со є середніми вихідними об'ємами пухлин в цих групах.
Як показано в Таблиці 23 та Таблиці 24, обробка лише сполукою Прикладу 10 або лише еверолімусом як окремим лікарським засобом призводила до 51 95 (95 4/0 - -51) та 50 95 (95 ат/с - -50) регресу пухлин, відповідно, і обидві г статистично значущими (р«0,001 і р«е0,001) порівняно і контрольним носієм. Ефективність комбінації сполуки Приклад) 10 з еверолімусом була "адитивною", і ефективність комбінації сполуки Прикладу 10 плюс еверолімус була значно кращою, ніж лише сполуки Прикладу 10 (р-0,004). Ефективність комбінації сполуки Прикладу 10 плюс алпелісиб також була значно кращою, ніж ефективність лише еверолімусу (р-0,04). Ця комбінація переноситься тваринами без значної втрати маси тіла.
Таблиця 23
Ефективність комбінації сполуки Прикладу 10 з еверолімусом у моделі МСЕ7 ЕВ-позитивного раку молочної залози
Середня
Обробка 1 Обробка 2 Різниця? квадратична р-значення помилка
Носій. ООХ42, Сполука Прикладу 10, 15 мг/кг, ООХх42, я перорально перорально 0,445 0,0999 0,001
Носій, ООХ42, : х
Еверолімус 5 мг/кг, О0х42, перорально | 0,433 0,1038 -0,001 г. Сполука Прикладу 10, 15 мг/кг, ООХх42,
Носій, Орха2, перорально/Еверолімус, 5 мг/кг, 0Ох42,| 0,748 0,0999 -0,0017 перорально перорально
Сполука Прикладу |Сполука Прикладу 10, 15 мг/кг, 0Ох42, 10, 15 мг/кг, ООх42, | перорально/Еверолімус, 5 мг/кг, ООх42,| 0,303 0,0999 0,004" перорально перорально . Сполука Прикладу 10, 15 мг/кг, ООХх42,
Еверолімус. 5 мг/кг, . к
ОЮха2, перорально перорально/Еверолімус. 5 мг/кг, 0Ох42,| 0,315 0,138 0,004 перорально ьРізниця - Обробка 1 - Обробка 2; "р-значення: значуще (ре0,05)
ЗЕ-Середня квадратична помилка
Таблиця 24
Ефективність комбінації сполуки Прикладу 10 з еверолімусом у моделі МСЕ7 ЕВ-позитивного раку молочної залози о, о регресу
Носій 77777711 11111717 МА ЇЇ МА Її 7 / Її!
Сполука Прикладу 10 «во ГГ «оо ГГ 10/Еверолімус/ (Комбінація 16 0,001 Адитивний зміни
Аналіз об'єму пухлин оснований на І одно та коваріаційній структурі Зрайа! Роуег. я р-значення: значуще (р-е0,05). МА: не застосовується. до дельта Т/С обчислюється, коли кінцевий об'єм пухлини в експериментальній групі дорівнює вихідному об'єму пухлини або перевищує вихідний об'єм пухлини; і 95 регресу обчислюється для об'єму пухлини нижче вихідного об'єму. Формула виглядає так: 1005(Т-
То/С-Со), де Т і С є середніми кінцевими об'ємами пухлин в досліджуваній або контрольній групі, відповідно. То ії Со є середніми вихідними об'ємами пухлин в цих групах.
Дослідження пероралмюї біодоступності у пацюків
Мета наведеного нижче дослідження - показати біодоступність досліджуваної сполуки при введенні псрорильннм шляхом.
Досліджувану сполуку вводять пацюкам лінії хХргадие-Оамієу внутрішньовенно у дозі 1 мг/кг (із застосуванням як носій будь-якого з: 20 95 САРТІБОЇ 2 у 25 мМ натрійфосфатному буфері, рН 2, ацсапійт заїїв; або 25 55 ОМА, 15 95 ЕН, 10 95 пропіленгліколю, 25 95 2-піролідону та 25 95 очищеної води), та перорально у дозі 10 мг/кг (із застосуванням носія, який містить 1 95 гідроксиетилцелюлози, 0,25 95 полісорбату 80, 0,05 95 протиспінювача 1510-05 та очищеної води диапійт заїїв5). Послідовні зразки крові збирають через 0,08 год., 0,25 год, 0,5 год, і год, 2 год., 4 год., 8 год. та 12 год. після введення дози внутрішньовенним болюсом та через 0,25 год., 0,5 год, 1 год, 2 год., 4 год., 8 год. та 12 год. після введення дози пероральним шляхом. Після обробки коагулянтом ЕОТА плазму одержують центрифугуванням, і зберігають при температурі -70"Сб до проведення дослідження за допомогою І С-М5/М5. Визначають концентрацію досліджуваної сполуки в плазмі, і завантажують в систему УУаївоп ГІМ5"М, де шляхом некомпартментного аналізу розраховують площу під кривою (АС) як для ІМ, так і для РО.
Пероральну біодоступність (до Е обчислюють за таким рівнянням: Фо
РА(«(АОСРОХхДдОоЗВІМ)ДАОСІМхдозаРО)х100. У вищевказаному аналізі сполука прикладу 18 демонструє значення 95 Е-50 У». Цей аналіз демонструє, що сполука Прикладу 18 має хорошу пероральну біодоступність.

Claims (16)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Сполука, що має формулу: о ОД в' Е є! в? Ух , -- но М де один з Е! та К-, незалежно один від одного, вибраний з СІ, Е, -СЕз або -СН», тоді як інший являє собою водень, або її фармацевтично прийнятна сіль.
2. Сполука за п. 1, яка відрізняється тим, що згадана сполука являє собою тт и, ї Е є! в? хх й но М або її фармацевтично прийнятну сіль.
3. Сполука за п. 1, яка відрізняється тим, що згадана сполука являє собою о ОД Ї Е но о в? Ух --- но М або її фармацевтично прийнятну сіль.
4. Сполука за п. 2, яка відрізняється тим, що згадана сполука являє собою о ОД Е Е й о Щі І Ух -- но М або її фармацевтично прийнятну сіль.
5. Сполука за п. 4, яка відрізняється тим, що згадана сполука являє собою о ОД і Е й о ія і Ух Ж но М
6. Сполука за п. 3, яка відрізняється тим, що згадана сполука являє собою о ОД Е Е й 6/0 ія і Ух Ж но М або її фармацевтично прийнятну сіль.
7. Сполука за п. 4 або 6, яка відрізняється тим, що фармацевтично прийнятна сіль являє собою сіль бензолсульфонової кислоти.
8. Сполука за п. 4 або 6, яка відрізняється тим, що фармацевтично прийнятна сіль являє собою сіль 4-метилбензолсульфонової кислоти.
9. Сполука за п. 6, де згадана сполука являє собою о ОД Е Е Е в о о і Ух пт но М
10. Фармацевтична композиція, яка містить сполуку або її фармацевтично прийнятну сіль за будь-яким з пп. 1-9 у комбінації з фармацевтично прийнятним наповнювачем, носієм або розріджувачем.
11. Фармацевтична композиція за п. 10, яка відрізняється тим, що містить один або декілька інших терапевтичних засобів.
12. Сполука або її фармацевтично прийнятна сіль або фармацевтична композиція за будь-яким з пп. 1-11 для застосування в терапії.
13. Сполука або її фармацевтично прийнятна сіль за будь-яким з пп. 1-9 для застосування при лікуванні раку молочної залози, раку яєчників, раку ендометрія, раку передміхурової залози, раку матки, раку шлунка або раку легенів.
14. Сполука або її сіль за п. 13 для застосування при лікуванні ЕК-позитивного раку молочної залози.
15. Сполука або її сіль за п. 13 для застосування при лікуванні ЕК-позитивного раку шлунка.
16. Сполука або її сіль за п. 13 для застосування при лікуванні ЕК-позитивного раку легенів.
UAA202100102A 2018-07-12 2019-07-11 Селективні супресори рецепторів естрогенів UA127507C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862697100P 2018-07-12 2018-07-12
PCT/US2019/041334 WO2020014435A1 (en) 2018-07-12 2019-07-11 Selective estrogen receptor degraders

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA127507C2 true UA127507C2 (uk) 2023-09-13

Family

ID=67470734

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA202100102A UA127507C2 (uk) 2018-07-12 2019-07-11 Селективні супресори рецепторів естрогенів

Country Status (37)

Country Link
US (4) US10654866B2 (uk)
EP (2) EP4155310A1 (uk)
JP (4) JP6995241B2 (uk)
KR (3) KR20230148386A (uk)
CN (2) CN117379428A (uk)
AR (1) AR115694A1 (uk)
AU (2) AU2019299947B2 (uk)
BR (2) BR122023025061A2 (uk)
CA (1) CA3105501C (uk)
CL (1) CL2021000045A1 (uk)
CO (1) CO2021000043A2 (uk)
CR (1) CR20210007A (uk)
DK (1) DK3820873T3 (uk)
EA (1) EA202092975A1 (uk)
EC (1) ECSP21001770A (uk)
ES (1) ES2933980T3 (uk)
FI (1) FI3820873T3 (uk)
HR (1) HRP20230009T1 (uk)
HU (1) HUE060963T2 (uk)
IL (3) IL280065B (uk)
JO (1) JOP20210005A1 (uk)
LT (1) LT3820873T (uk)
MA (2) MA53124B1 (uk)
MD (1) MD3820873T2 (uk)
MX (2) MX2021000375A (uk)
NZ (1) NZ771718A (uk)
PE (1) PE20210400A1 (uk)
PH (1) PH12021550049A1 (uk)
PL (1) PL3820873T3 (uk)
PT (1) PT3820873T (uk)
RS (1) RS63809B1 (uk)
SA (1) SA521421008B1 (uk)
SG (1) SG11202100148TA (uk)
SI (1) SI3820873T1 (uk)
TW (1) TWI702219B (uk)
UA (1) UA127507C2 (uk)
WO (1) WO2020014435A1 (uk)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2018003929A (es) 2015-10-01 2018-11-22 Olema Pharmaceuticals Inc Fármacos anti-estrogénicos tetrahidro-1h-pirido [3,4-b] indol.
DK3820874T3 (da) * 2018-07-12 2022-12-12 Lilly Co Eli Selektive estrogenreceptornedbrydere
TWI702219B (zh) * 2018-07-12 2020-08-21 美商美國禮來大藥廠 選擇性雌激素受體降解劑
CN114957114A (zh) * 2021-02-26 2022-08-30 冷志 一种4-溴-3-氯-7-甲氧基喹啉的合成方法
TWI837605B (zh) 2021-03-09 2024-04-01 美商美國禮來大藥廠 使用serd組合給藥方案治療癌症之方法
TW202300492A (zh) * 2021-03-16 2023-01-01 美商美國禮來大藥廠 選擇性雌激素受體降解劑
AU2023216654A1 (en) 2022-02-01 2024-07-11 Eli Lilly And Company Processes for the preparation of selective estrogen receptor degraders
WO2024083716A1 (en) 2022-10-17 2024-04-25 Astrazeneca Ab Combinations of a serd for the treatment of cancer
WO2024097206A1 (en) 2022-11-02 2024-05-10 Petra Pharma Corporation Allosteric chromenone inhibitors of phosphoinositide 3-kinase (pi3k) for the treatment of disease
WO2024100236A1 (en) 2022-11-11 2024-05-16 Astrazeneca Ab Combination therapies for the treatment of cancer
US20240180893A1 (en) 2022-11-17 2024-06-06 Astrazeneca Ab Methods of treatment of breast cancer

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002094788A1 (en) * 2001-05-22 2002-11-28 Eli Lilly And Company 2-substituted 1,2,3,4-tetrahydroquinolines and derivatives thereof, compositions and methods
US7329654B2 (en) * 2001-12-19 2008-02-12 Janssen Pharmaceutica N.V. Heteroatom containing tetracyclic derivatives as selective estrogen receptor modulators
EP1497277A1 (en) * 2002-04-19 2005-01-19 Signal Pharmaceuticals, Inc. Benzopyranone compounds, compositions thereof, and methods of treatment therewith
UA85862C2 (uk) 2004-01-22 2009-03-10 Елі Ліллі Енд Компані Селективні модулятори рецепторів естрогену для лікування вазомоторних симптомів
US20080221163A1 (en) * 2005-01-18 2008-09-11 Jeffrey Alan Dodge Selective Estrogen Receptor Modulators
MX2015016171A (es) 2013-06-19 2016-08-08 Seragon Pharmaceuticals Inc Moduladores del receptor de estrogeno de azetidina y usos de los mismos.
ES2819448T3 (es) * 2014-12-18 2021-04-16 Hoffmann La Roche Tetrahidro-pirido[3,4-b]indoles como moduladores del receptor de estrógenos y usos de los mismos
JP6807841B2 (ja) 2014-12-18 2021-01-06 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト エストロゲン受容体モジュレーター及びその使用
WO2018108954A1 (en) 2016-12-12 2018-06-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Process for the preparation of 2-(3-(fluoromethyl)azetidin-1-yl)ethan-1-ol
DK3820874T3 (da) * 2018-07-12 2022-12-12 Lilly Co Eli Selektive estrogenreceptornedbrydere
TWI702219B (zh) * 2018-07-12 2020-08-21 美商美國禮來大藥廠 選擇性雌激素受體降解劑

Also Published As

Publication number Publication date
NZ771718A (en) 2024-05-31
US11634426B2 (en) 2023-04-25
IL289871B (en) 2022-10-01
KR20230148386A (ko) 2023-10-24
EA202092975A1 (ru) 2021-04-14
PT3820873T (pt) 2022-12-23
KR102589886B1 (ko) 2023-10-17
PL3820873T3 (pl) 2023-02-13
JOP20210005A1 (ar) 2021-01-10
CA3105501A1 (en) 2020-01-16
CN112638916B (zh) 2023-09-12
WO2020014435A1 (en) 2020-01-16
CN117379428A (zh) 2024-01-12
PH12021550049A1 (en) 2021-09-20
IL295598B1 (en) 2023-05-01
JP2022050591A (ja) 2022-03-30
AU2019299947B2 (en) 2022-03-17
JP2021530484A (ja) 2021-11-11
BR122023025061A2 (pt) 2024-02-20
AR115694A1 (es) 2021-02-17
TW202019935A (zh) 2020-06-01
CO2021000043A2 (es) 2021-01-18
US20200347073A1 (en) 2020-11-05
AU2019299947A1 (en) 2021-01-07
HUE060963T2 (hu) 2023-04-28
US20230234960A1 (en) 2023-07-27
AU2022203969B2 (en) 2024-02-15
SI3820873T1 (sl) 2023-02-28
JP2023081954A (ja) 2023-06-13
AU2022203969A1 (en) 2022-06-30
SG11202100148TA (en) 2021-02-25
JP7009672B1 (ja) 2022-01-25
JP7241211B2 (ja) 2023-03-16
RS63809B1 (sr) 2023-01-31
LT3820873T (lt) 2023-01-10
SA521421008B1 (ar) 2022-10-30
EP3820873A1 (en) 2021-05-19
US10654866B2 (en) 2020-05-19
IL295598B2 (en) 2023-09-01
IL295598A (en) 2022-10-01
KR102550538B1 (ko) 2023-07-04
US11117902B2 (en) 2021-09-14
ECSP21001770A (es) 2021-02-26
KR20230005404A (ko) 2023-01-09
CN112638916A (zh) 2021-04-09
ES2933980T3 (es) 2023-02-15
TWI702219B (zh) 2020-08-21
FI3820873T3 (fi) 2023-03-02
JP6995241B2 (ja) 2022-01-14
MA53124A (fr) 2021-05-19
IL280065B (en) 2022-04-01
IL289871A (en) 2022-03-01
IL280065A (en) 2021-03-01
JP2022037102A (ja) 2022-03-08
CA3105501C (en) 2023-10-31
MA53126A (fr) 2021-05-19
JP7557564B2 (ja) 2024-09-27
IL289871B2 (en) 2023-02-01
EP3820873B1 (en) 2022-11-23
MX2023006047A (es) 2023-06-02
US11993608B2 (en) 2024-05-28
KR20210019065A (ko) 2021-02-19
US20210403480A1 (en) 2021-12-30
BR112020025654A2 (pt) 2021-04-06
PE20210400A1 (es) 2021-03-02
CL2021000045A1 (es) 2021-07-19
CR20210007A (es) 2021-02-08
DK3820873T3 (da) 2022-12-12
HRP20230009T1 (hr) 2023-02-17
EP4155310A1 (en) 2023-03-29
MX2021000375A (es) 2021-05-27
MD3820873T2 (ro) 2023-05-31
US20200017516A1 (en) 2020-01-16
MA53124B1 (fr) 2023-02-28
MA53126B1 (fr) 2023-02-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA127507C2 (uk) Селективні супресори рецепторів естрогенів
EP3237420B1 (en) Erk inhibitors
US20230002376A1 (en) Bicyclic pyrazolyl amines as cdk2 inhibitors
EA029827B1 (ru) Производные бензимидазола и их фармацевтические композиции для лечения воспалительных заболеваний
UA125890C2 (uk) Селективні супресори рецепторів естрогенів
EA045961B1 (ru) Селективные супрессоры рецептора эстрогена
EA040517B1 (ru) Селективные супрессоры рецептора эстрогена