EA029827B1 - Производные бензимидазола и их фармацевтические композиции для лечения воспалительных заболеваний - Google Patents

Производные бензимидазола и их фармацевтические композиции для лечения воспалительных заболеваний Download PDF

Info

Publication number
EA029827B1
EA029827B1 EA201691468A EA201691468A EA029827B1 EA 029827 B1 EA029827 B1 EA 029827B1 EA 201691468 A EA201691468 A EA 201691468A EA 201691468 A EA201691468 A EA 201691468A EA 029827 B1 EA029827 B1 EA 029827B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
compound
present
diseases
mixture
pharmaceutically acceptable
Prior art date
Application number
EA201691468A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201691468A1 (ru
Inventor
Кристель Жанн Мари Мене
Оскар Маммолити
Хавьер Блан
Мислав Оршулиц
Майя Рошциц
Original Assignee
Галапагос Нв
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Галапагос Нв filed Critical Галапагос Нв
Publication of EA201691468A1 publication Critical patent/EA201691468A1/ru
Publication of EA029827B1 publication Critical patent/EA029827B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D235/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings
    • C07D235/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D235/04—Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles
    • C07D235/06—Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached in position 2
    • C07D235/08—Radicals containing only hydrogen and carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4184—1,3-Diazoles condensed with carbocyclic rings, e.g. benzimidazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение раскрывает соединения формулы Iгде Cy, R, L, R, R, R, Lи Rтакие, как определено в настоящем документе. Раскрыты новые бензимидазолы формулы I, способные ингибировать JAK, эти соединения могут быть получены в виде фармацевтической композиции и могут быть использованы для профилактики и лечения различных состояний у млекопитающих, включая человека, включая в качестве неограничивающего примера аллергические заболевания, воспалительные заболевания, аутоиммунные заболевания, пролиферативные заболевания, отторжение трансплантата, заболевания, связанные с ухудшением обновления хряща, врожденные дефекты развития хряща, и/или заболевания, связанные с гиперсекрецией IL6 или гиперсекрецией интерферонов.

Description

изобретение относится к соединениям, которые являются ингибиторами .ГАК, семейства тирозинкиназ, которые вовлечены в аллергические заболевания, воспалительные заболевания, аутоиммунные заболевания, пролиферативные заболевания, отторжение при трансплантации, заболевания, связанные с ухудшением обновления хряща, врожденными дефектами хряща, и/или заболевания, связанные с гиперсекрецией ГЬб или гиперсекрецией интерферонов. В частности, соединения по изобретению ингибируют .ТАК1 и/или ΤΥΚ2. Настоящее изобретение также относится к способам получения соединений по настоящему изобретению, фармацевтическим композициям, содержащим соединения по настоящему изобретению, способам профилактики и/или лечения заболеваний, включая аллергические заболевания, воспалительные заболевания, аутоиммунные заболевания, пролиферативные заболевания, отторжение при трансплантации, заболевания, связанные с ухудшением обновления хряща, врожденными дефектами хряща, и/или заболевания, связанные с гиперсекрецией ГЬб или гиперсекрецией интерферонов, путем введения соединения по настоящему изобретению.
Предпосылки создания изобретения
.Гапик киназы (.ТАК) представляют собой цитоплазматические тирозинкиназы, которые трансдуцируют передачу сигналов цитокинов от мембранных рецепторов к факторам транскрипции 8ΤΑΤ. Описаны четыре представителя семейства .ТАК, 1АК1, 1АК2, 1АК3 и ΤΥΚ2. После связывания цитокина с его рецептором представители семейства .ТАК ауто- и/или трансфосфорилируют друг друга с последующим фосфорилированием ЩАХ которые затем мигрируют в ядра клеток, модулируя транскрипцию. Во внутриклеточной сигнальной трансдукции ГАК-δΤΛΤ задействованы интерфероны, большинство интерлейкинов, а также ряд цитокинов и эндокринных факторов, таких как ЕРО, ТРО, ОН, О8М, ЬГР, ΟΝΤΡ, ОМС8Р и РРЬ (Уашсйепкет еГ а1., 2008).
Исследование комбинации генетических моделей и ингибитора .ТАК, имеющего небольшую молекулу, обнаружило терапевтический потенциал некоторых .ТАК. 1АК3 аттестована генетикой мыши и человека как мишень для подавления иммунитета (О'ЗЬеа I. еГ а1., 2004). Ингибиторы 1АК3 были успешно апробированы в клиническом исследовании, вначале в случае отторжения трансплантата органа и позднее также при других иммуновоспалительных показаниях, таких как ревматоидный артрит (КА), псориаз и болезнь Крона (НирУ/сПшсаНпаКдоу/).
ΤΥΙ<2 представляет собой потенциальную мишень для иммуновоспалительных заболеваний, что подтверждено исследованием с учетом генетики человека и исследованием с использованием мышейнокаутов (Ьеуу апй Боотй. 2007)). 1АК1 представляет собой мишень в области иммуновоспалительных заболеваний. 1АК1 гетеродимеризуется с другими .ТАК, трансдуцируя цитокинстимулируемую провоспалительную передачу сигнала. Таким образом, ингибирование 1АК1 представляет интерес для иммуновоспалительных заболеваний со связанными с патологией цитокинами, которые используют передачу сигналов 1АК1, таких как ГЬ-б, ГЬ-4, ГЬ-5, ГВ-13 или ΓΡΝγ, а также для других заболеваний, стимулируемых .ТАК-опосредованной сигнальной трансдукцией.
Дегенерация хряща является отличительным признаком различных заболеваний, среди которых наиболее известны ревматоидный артрит и остеоартрит. Ревматоидный артрит (КА) представляет собой хроническое дегенеративное заболевание суставов, характеризуемое воспалением и разрушением структур суставов. Когда заболевание неконтролируемо, она ведет к значительной потере трудоспособности и боли вследствие потери функции сустава и даже преждевременной смерти. Цель лечения КА поэтому состоит не только в замедлении течения заболевания, но и в достижении состояния ремиссии для того, чтобы приостановить разрушение суставов. Помимо тяжести последствий заболевания, высокая распространенность КА (~0,8% взрослого населения во всем мире поражено этим заболеванием) представляет большую социально-экономическую проблему (СЬоу апй Рапауц 2001; РпекГет, 2003; Ьее апй УешЫаГГ, 2001; ОИеН, 2004; §то1еп апй 8Гетег, 2003).
1АК1 и 1АК2 участвуют во внутриклеточной сигнальной трансдукции для многих цитокинов и гормонов. Патологии, связанные с любым из этих цитокинов и гормонов могут быть облегчены с помощью ингибиторов 1АК1 и 1АК2. Следовательно, ряд аллергических или воспалительных состояний и аутоиммунных заболеваний могут извлечь пользу от лечения соединениями, описанными в настоящем изобретении, включая ревматоидный артрит, системную красную волчанку, ювенильный идиопатический артрит, остеоартрит, астму, хроническое обструктивное заболевание легких ХОЗЛ, фиброз тканей, эозинофильное воспаление, эзофагит, воспалительные заболевания кишечника (например, болезнь Крона, язвенный колит), трансплантацию, реакцию "трансплантант против хозяина", псориаз, миозит, рассеянный склероз (Кор£ еГ а1., 2010).
Остеоартрит (также называемый ОА, или артрит, обусловленный изнашиванием или старением) представляет собой наиболее распространенную форму артрита и характеризуется потерей суставного хряща, часто связанную с гипертрофией кости и болями (\У1е1апй еГ а1., 2005).
Остеоартрит трудно поддается лечению. В настоящее время не существует лечения, которое полностью бы излечило это заболевание, и лечение, как правило, фокусируется на ослаблении боли и предотвращении деформации пораженного сустава. Обычные лечения включают использование нестероидных противовоспалительных лекарственных средств ЩЗАГО). Несмотря на то что добавки к рациону, такие
- 1 029827
как хондроитин и глюкозамин сульфат, были рекомендованы как безопасные и эффективные возможные варианты для лечения остеоартрита, последнее клиническое испытание обнаружило, что оба лечения не снижают боль, связанную с остеоартритом (С1едд с1 а1., 2006).
Стимулирование анаболических процессов, блокирование катаболических процессов или комбинация этих двух путей может привести к стабилизации хряща и, возможно, даже реверсии нарушения и в соответствии с этим предотвратить дальнейшее прогрессирование заболевания. Были разработаны терапевтические методы для коррекции изменений суставного хряща, которые появляются во время остеоартритического заболевания, но до настоящего времени ни один из них не смог опосредовать регенерацию суставного хряща ίη κίΐιι и ίη νίνο. Суммируя вышеизложенное, можно утверждать, что на данный момент не существует подходящих болезнь-модифицирующих остеоартритических лекарственных средств.
УапбедкткЮ е1 а1. (УапбедЫпкЮ е1 а1., 2005) раскрыли ίΛΙ<1 как мишень, ингибирование которой может иметь терапевтическую значимость для некоторых заболеваний, включая ОА. Нокаут гена ΙΑΚ1 у мышей показал, что ΙΑΚ1 играет существенную и нерезервированную роль во время развития: ΙΑΚ1-/мыши погибали в течение 24 ч после рождения и развитие лимфоцитов серьезно замедлялось. Кроме того, ΙΑΚ1-/- клетки оказались нереактивными или менее реактивными в отношении цитокинов, которые используют цитокиновые рецепторы класса II, цитокиновым рецепторам, которые используют гамма-с субъединицу для передачи сигнала и семейству цитокиновых рецепторов, которые используют субъединицу др130 для передачи сигнала (Ροάίβ е1 а1., 1998).
В биологии хондроцитов различные группы вовлечены в сигнальный путь ΙΑΚ-8ΤΑΤ (Ы е1 а1., 2001) показали, что Онкостатин М индуцирует экспрессию генов ММР и ΤΙΜΡ3 в первичных хондроцитах путем активации ΙΑΚ/8ΤΑΤ и МАРК сигнальных путей. Окак е1 а1. (Окай е1 а1., 2003) показали, что интерферон-гамма-опосредованное ингибирование коллагена II в хондроцитах включает ΙΑΚ-8ΤΛΤ сигнальный путь. ГЛ-бета индуцирует катаболизм хряща путем снижения экспрессии компонентов матрикса и путем индуцирования экспрессии коллагенов и индуцируемой синтазы оксида азота (N082), которая опосредует продуцирование оксида азота (N0). О1его е1 а1. (О1его е1 а1., 2005) показали, что лептин и тбета синергически индуцируют продуцирование NО или экспрессию мРНК NО82 в хондроцитах и что это блокируется ингибитором ΙΑΚ. Ьедепбге е1 а1. (Ьедепбге е1 а1., 2003) показали, что ίΚ6/ίΚ6 рецептор индуцирует понижающую регуляцию генов хрящ-специфического матрикса, коллагена II, появления ядра аггрекана и белка связи в бычьих суставных хондроцитах, и что это опосредуется ίΑΚ/8ΤΑΤ сигнальным путем. Таким образом, эти данные наблюдений свидетельствуют в пользу роли активности ΙΑΚ киназ в гомеостазе хряща и терапевтических возможностей ингибиторов ΙΑΚ киназ.
Представители семейства ΙΑΚ оказались вовлеченными в дополнительные состояния, включая миелопролиферативные заболевания (О'8и1Шап е1 а1., 2007), в которых были идентифицированы мутации в ΙΑΚ2. Это указывает на то, что ингибиторы ίΑΚ. в частности, ΙΑΚ2. могут также найти применение в лечении миелопролиферативных заболеваний. Кроме того, семейство ΙΑΚ, в частности, ΙΑΚ1, ΙΑΚ2 и ΙΑΚ3, оказалось связанным с видами рака, в частности, лейкозами, например, острым миелоидным лейкозом (О'8и11Аап е1 а1., 2007; Х|апд е1 а1., 2008) и острым лимфобластным лейкозом (МиШдйап е1 а1., 2009) или солидными опухолями, например, лейомиосаркомой матки (Соп51апйпе5си е1 а1., 2008), раком предстательной железы Дат е1 а1., 2007). Эти результаты свидетельствуют о том, что ингибиторы ΙΑΚ, в частности, ΙΑΚ1 и/или ΙΑΚ2, могут также найти применение для лечения злокачественных новообразований (лейкозы и солидные опухоли, например лейомиосаркома матки, рак предстательной железы).
Кроме того, болезнь Кастлемана, множественная миелома, мезангиальный пролиферативный гломерулонефрит, псориаз и саркома Капоши, по-видимому, обусловлены гиперсекрецией цитокина Ш-б, биологические действия которого опосредованы внутриклеточным ΙΑΚ-8ΤΑΤ сигнальным путем (№ка е1 а1. 2002). Этот результат показывает, что ингибиторы ΙΑΚ могут также найти применение в лечении указанных заболеваний.
Современные методы лечения не являются достаточными, и поэтому, остается необходимость в идентифицировании других соединений, которые можно было использовать для лечения аллергических заболеваний, воспалительных заболеваний, аутоиммунных заболеваний, пролиферативных заболеваний, отторжения при трансплантации, заболеваний, характеризующихся ухудшением обновления хряща, врожденными дефектами хряща и/или заболеваний, связанных с гиперсекрецией [Ъ6 или гиперсекрецией интерферонов. Таким образом, настоящее изобретение относится к соединениям, к способам их получения и к фармацевтическим композициям, содержащим соединения по настоящему изобретению вместе с подходящим фармацевтическим носителем. Настоящее изобретение также относится к применению соединения по настоящему изобретению для получения лекарственного средства для лечения аллергических заболеваний, воспалительных заболеваний, аутоиммунных заболеваний, пролиферативных заболеваний, отторжения при трансплантации, заболеваний, характеризующихся ухудшением обновления хряща, врожденными дефектами хряща, и/или заболеваний, связанных с гиперсекрецией [Ъ6 или гиперсекрецией интерферонов.
- 2 029827
Сущность изобретения
Настоящее изобретение основано на обнаружении того факта, что соединения по настоящему изобретению способны действовать как ингибиторы ΙΆΚ и что они являются полезными для лечения аллергических заболеваний, воспалительных заболеваний, аутоиммунных заболеваний, пролиферативных заболеваний, отторжения при трансплантации, заболеваний, характеризующихся ухудшением обновления хряща, врожденными дефектами хряща; и/или заболеваний, связанных с гиперсекрецией 1Ь6 или гиперсекрецией интерферонов. В конкретном аспекте соединения по настоящему изобретению представляют собой ингибиторы ΙΆΚ1 и/или ΤΥΚ2. Настоящее изобретение также относится к способам получения этих соединений, к фармацевтическим композициям, содержащим эти соединения, и к способам лечения аллергических заболеваний, воспалительных заболеваний, аутоиммунных заболеваний, пролиферативных заболеваний, отторжения при трансплантации, заболеваний, характеризующихся ухудшением обновления хряща, врожденными дефектами хряща; и/или заболеваний, связанных с гиперсекрецией 1Ь6 или гиперсекрецией интерферонов, путем введения соединения по настоящему изобретению.
Соответственно, в первом аспекте настоящего изобретения предлагаются соединения по настояще-
где К1 представляет собой Н или Ме;
Ь1 представляет собой -ΝΚ2-, -О- или -СН2-;
Су представляет собой фенил или 5-9-членный моноциклический или конденсированный бициклический гетероарил, содержащий от 1 до 4 гетероатомов, независимо выбранных из Ν, О и 8;
К2 представляет собой Н или С1-4алкил;
К3 представляет собой Н, галоген, С1-4алкил, необязательно замещенный одним или несколькими галогенами, или С1-4алкокси, необязательно замещенный одним или несколькими галогенами;
К4 представляет собой Н или галоген;
К5 представляет собой -СН галоген или представляет собой -Ь2-К6;
-Ь2 отсутствует или представляет собой -С(=О)-, -С(=О)НК7-, -НК7С(=О)-, -8О2-, -8Ο2ΝΚ7- или -ΝΚ78Ο2-;
К6 представляет собой Н или С1-6алкил, необязательно замещенный одной или несколькими независимо выбранными группами К8;
К7 представляет собой Н или С1-4алкил;
К8 представляет собой ОН, СН, галоген или С1-4алкокси;
Ьа отсутствует или представляет собой -С(=О)-, -С(=О)О- или -С(=О)НН-;
Ка представляет собой:
Н,
С1-4алкил, необязательно замещенный одной или более независимо выбранными группами Кь,
С3-7 моноциклический циклоалкил, необязательно замещенный одной или более независимо выбранными Кс, или
4- 7-членный моноциклический гетероциклоалкил, содержащий один или несколько гетероатомов, независимо выбранных из О, N и 8, или
5- 6-членный моноциклический гетероарил, содержащий один или несколько гетероатомов, независимо выбранных из О, Ν и 8;
Кь представляет собой: галоген,
СН,
ОН,
С1-4алкокси,
С3-7циклоалкил,
4-7-членный моноциклический гетероциклоалкил, содержащий один или несколько гетероатомов, независимо выбранных из О, Ν и 8 (гетероциклоалкил необязательно замещен одним или более независимо выбранным галогеном или оксо),
-8О2-С1-4алкил или
-С(=О)ЖЬ1КЬ2;
Кс представляет собой: галоген,
СН,
ОН,
- 3 029827
С1-4алкил,
-С(=О)ОН или
-С( О)\Н Н '; и
каждый Кы, КЬ2, Кс1 и Кс2 независимо выбран из Н и С1-4алкила.
В конкретном варианте осуществления соединения по настоящему изобретению представляют собой ингибиторы ίΆΚ1 и/или ΤΥΚ2.
Неожиданно, в настоящее время было обнаружено, что соединения по настоящему изобретению могут обладать улучшенной ίη νίίτο активностью по сравнению со структурно аналогичными соединениями.
Кроме того, в конкретном аспекте соединения по настоящему изобретению могут обладать повышенной стабильностью ίη νίίτο, по сравнению с близкородственными аналогами. Это улучшение может привести ίη νίνο к более низкой дозировке требуемого лекарственного средства, и, таким образом, может привести к уменьшению токсичности и/или межлекарственному взаимодействию.
В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим соединения по настоящему изобретению и фармацевтический носитель, эксципиент или разбавитель. Кроме того, соединения по настоящему изобретению, используемые в фармацевтических композициях и способах лечения, раскрытых в настоящем описании, являются фармацевтически приемлемыми в том виде, как их получают и используют. В этом аспекте настоящего изобретения фармацевтическая композиция может дополнительно содержать другие активные ингредиенты, подходящие для применения в комбинации с соединениями по настоящему изобретению.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к соединению по настоящему изобретению или фармацевтической композиции, содержащей соединение по настоящему изобретению для применения в качестве лекарственного средства. В конкретном варианте осуществления указанная фармацевтическая композиция дополнительно содержит дополнительный активный ингредиент.
В еще одном аспекте настоящего изобретения настоящее изобретение относится к способу лечения млекопитающего, восприимчивого к или страдающего состоянием из числа тех, которые перечислены в настоящем описании, и, в частности, такого состояния, которое может быть связано с аберрантной активностью ίΛΚ, например, аллергические заболевания, воспалительные заболевания, аутоиммунные заболевания, пролиферативные заболевания, отторжение при трансплантации, заболеваний, характеризующихся ухудшением обновления хряща, врожденными дефектами хряща; и/или заболевания, связанные с гиперсекрецией 1Ь6 или гиперсекрецией интерферонов, и этот способ включает введение эффективного количества фармацевтической композиции или соединения по настоящему изобретению, как описано в настоящем описании. В конкретном варианте осуществления состояние связано с аберрантной активностью ίΛΚ1 и/или ΤΥΚ2.
В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к соединению по настоящему изобретению для применения в лечении или профилактике состояния, выбранного из состояний, перечисленных в настоящем описании, в частности, таких состояний, которые могут быть связаны с аберрантной активностью ίΛΚ, например, аллергических заболеваний, воспалительных заболеваний, аутоиммунных заболеваний, пролиферативных заболеваний, отторжения при трансплантации, заболеваний, характеризующихся ухудшением обновления хряща, врожденными дефектами хряща; и/или заболеваний, связанных с гиперсекрецией 1Ь6 или гиперсекрецией интерферонов.
В еще одном аспекте способа лечения настоящее изобретение относится к способу лечения млекопитающего, восприимчивого к или пораженного состоянием, которое причинно связано с аномальной активностью ίΛΚ, как описано в настоящем описании, и включает введение эффективного количества фармацевтической композиции или соединения по настоящему изобретению, эффективного для лечения или предотвращения состояний, описанных в настоящем описании. В конкретном аспекте состояние причинно связано с аномальной активностью ίΆΚ1 и/или ΤΥΚ2.
В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к соединению по настоящему изобретению или фармацевтической композиции, содержащей соединение по настоящему изобретению, для применения в качестве лекарственного средства.
В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к соединению по настоящему изобретению для применения в лечении или профилактике состояния, которое причинно связано с аномальной активностью ίΛΚ.
В дополнительных аспектах настоящее изобретение относится к способам синтеза соединений по настоящему изобретению, причем репрезентативные протоколы и пути синтеза раскрываются позднее в настоящем описании.
Соответственно, основной целью настоящего изобретения является создание новых соединений, которые могут модифицировать активность ίΛΚ и таким образом предотвращать или лечить любые заболевания, которые могут быть причинно связаны с этим. В конкретном аспекте соединения по настоящему изобретению модулируют активность ίΛΚ1 и/или ΤΥΚ2.
Другой целью настоящего изобретения является получение соединений, которые могут лечить или облегчать заболевания или их симптомы, такие как аллергические заболевания, воспалительные заболе- 4 029827
вания, аутоиммунные заболевания, пролиферативные заболевания, отторжение при трансплантации, заболевания, связанные с ухудшением обновления хряща, врожденными дефектами хряща; и/или заболевания, связанные с гиперсекрецией 1Ь6 или гиперсекрецией интерферонов, которые могут быть причинно связаны с активностью ΙΛΚ. в частности, ΙΛΚ1 и/или ΤΥΚ2.
Еще одной целью настоящего изобретения является разработка фармацевтической композиции, которая может быть использована для лечения или предотвращения различных состояний, в том числе заболеваний, связанных с активностью ΙΛΚ. таких как аллергические заболевания, воспалительные заболевания, аутоиммунные заболевания, пролиферативные заболевания, отторжение при трансплантации, заболевания, связанные с ухудшением обновления хряща, врожденными дефектами хряща, и/или заболевания, связанные с гиперсекрецией 1Ь6 или гиперсекрецией интерферонов. В конкретном варианте осуществления заболевание связано с активностью ΙΛΚ1 и/или ΤΥΚ2.
Другие цели и преимущества станут очевидными для специалистов в данной области из рассмотрения нижеследующего подробного описания.
Подробное описание изобретения Определения
Подразумевается, что нижеследующие термины имеют значения, представленные в настоящем описании ниже, и их используют для достижения более полного понимания существа описания и предполагаемого объема настоящего изобретения.
При описании настоящего изобретения, которое может включать соединения, фармацевтические композиции, содержащие такие соединения, и способы применения таких соединений и композиций, следующие термины, если присутствуют, имеют следующие значения, если не указано иное. Также следует понимать, что описанные в настоящем документе любые фрагменты, определенные далее ниже, могут быть замещены разнообразными заместителями и что соответственные определения предназначены для включения таких замещенных фрагментов в пределах их объема, который изложен ниже. Если не установлено иное, термин "замещенный" должен быть определен так, как изложено ниже. Следует дополнительно понимать, что термины "группы" и "радикалы" могут считаться взаимозаменяемыми при использовании в настоящем документе.
Формы единственного числа могут использоваться в настоящем описании для обозначения одного или более чем одного (т.е. по меньшей мере одного) грамматических объектов. Например, "аналог" означает один аналог или более чем один аналог.
"Алкил" означает линейный или разветвленный алифатический углеводород с определенным количеством атомов углерода. Конкретные алкильные группы имеют 1-8 атомов углерода. Более конкретная группа представляет собой низший алкил, который имеет 1-6 атомов углерода. Еще одна конкретная группа имеет 1-4 атомов углерода. Примеры линейных алкильных групп включают метил, этил, нпропил и н-бутил. Разветвленная означает, что одна или несколько низших алкильных групп, таких как метил, этил, пропил или бутил присоединена к линейной алкильной цепи, примеры разветвленных групп включают изопропил, изобутил, трет-бутил и изоамил.
"Алкокси" относится к группе -ОК26, где К26 представляет собой алкил с указанным количеством атомов углерода. Конкретные алкоксигруппы представляют собой метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, н-бутокси, трет-бутокси, втор-бутокси, н-пентокси, н-гексокси и 1,2-диметилбутокси. Конкретные алкоксигруппы представляют собой низший алкокси, т.е. с 1-6 атомами углерода. Более конкретные алкоксигруппы имеют от 1 до 4 атомов углерода.
"Алкенил" относится к одновалентным олефиновым (ненасыщенным) углеводородным группам с определенным количеством атомов углерода. Конкретный алкенил содержит 2-8 атомов углерода, и, более конкретно, 2-6 атомов углерода, которые могут быть линейными или разветвленными, и имеющий по меньшей мере 1 и, в частности, от 1 до 2 участков олефиновой ненасыщенности. Конкретные алкенильные группы включают этенил (-СН=СН2), н-пропенил (-СН2СН=СН2), изопропенил (-С(СН3)=СН2) и подобное.
"Амино" относится к радикалу -ΝΗ2.
"Арил" относится к моновалентной ароматической углеводородной группе, полученной удалением одного атома водорода от одного атома углерода исходной ароматической циклической системы. В частности, арил относится к ароматической циклической структуре, моноциклической или конденсированной полициклической, с определенным количеством атомов в кольце. В частности, термин включает группы, включающие от 6 до 10 кольцевых членов. В том случае, когда арильная группа представляет собой моноциклическую кольцевую систему, она предпочтительно содержит 6 атомов углерода. Особенно арильные группы включают фенил и нафтил.
"Циклоалкил" относится к неароматической углеводородной кольцевой структуре, моноциклической, конденсированной полициклической, мостиковой полициклической или спироциклической, с определенным количеством атомов в кольце. Циклоалкил может иметь от 3 до 12 атомов углерода, в частности от 3 до 10, более предпочтительно от 3 до 7 атомов углерода. Такие циклоалкильные группы включают, в качестве примера, однокольцевые структуры, такие как циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и циклогептил.
- 5 029827
"Циано" относится к радикалу -СЫ.
"Гало" или "галоген" означает фтор (Г), хлор (С1), бром (Вг) и йод (I). Конкретные галогеногруппы представляют собой либо фтор, либо хлор.
"Гетеро" в том случае, когда используют для описания соединения или группы, присутствующей в соединении, означает, что один или несколько атомов углерода в соединении или в группе были заменены гетероатомом азота, кислорода или серы. Гетеро может быть применен к любым гидрокарбильным группам, описанным выше, таким как алкил, например, гетероалкил, циклоалкил, например, гетероциклоалкил, арил, например гетероарил, и т.п., имеющим от 1 до 4, и в особенности, от 1 до 3 гетероатомов, более типично 1 или 2 гетероатома, например один гетероатом.
"Гетероарил" означает ароматическую кольцевую структуру, моноциклическую или конденсированную полициклическую, которая включает один или несколько гетероатомов, независимо выбранных из О, N и δ, и определенное количество атомов в кольце. В частности, ароматическая кольцевая структура может иметь от 5 до 9 кольцевых членов. Гетероарильная группа может быть, например, 5-членным или 6-членным моноциклическим кольцом или конденсированной бициклической структурой, образованной из конденсированных 5- и 6-членных колец, или из двух конденсированных 6-членных колец, или в качестве дополнительного примера из двух конденсированных 5-членных колец. Каждое кольцо может содержать вплоть до четырех гетероатомов, обычно выбранных из азота, серы и кислорода. Обычно гетероарильное кольцо будет содержать вплоть до 4 гетероатомов, более обычно вплоть до 3 гетероатомов, более обычно вплоть до 2, например один гетероатом. В одном из вариантов осуществления гетероарильное кольцо содержит по меньшей мере один атом азота в кольце. Атомы азота в гетероарильных кольцах могут быть основными, как в случае имидазола или пиридина, или, по существу, неосновными, как в случае азота в индоле или в пирроле. В большинстве случаев число основных атомов азота, присутствующих в гетероарильной группе, включая любые аминогруппы-заместители кольца, будет составлять менее пяти.
Примеры 5-членных моноциклических гетероарильных групп включают, но ими не ограничиваются, пирролил, фуранил, тиофенил, имидазолил, фуразанил, оксазолил, оксадиазолил, оксатриазолил, изоксазолил, тиазолил, изотиазолил, пиразолил, триазолил и тетразолил.
Примеры 6-членных моноциклических гетероарильных групп включают, но ими не ограничиваются, пиридинил, пиразинил, пиридазинил, пиримидинил и триазинил. Конкретные примеры бициклических гетероарильных групп, содержащих 5-членное кольцо, конденсированное с другим 5-членным кольцом, включают, но ими не ограничиваются, имидазотиазолил и имидазоимидазолил. Конкретные примеры бициклических гетероарильных групп, содержащих 6-членное кольцо, конденсированное с 5членным кольцом, включают, но ими не ограничиваются, следующие группы: бензофуранил, бензтиофенил, бензимидазолил, бензоксазолил, изобензоксазолил, бензизоксазолил, бензтиазолил, бензизотиазолил, изобензофуранил, индолил, изоиндолил, индолизинил, пурин (например, аденин, гуанин), индазолил, пиразолопиримидинил, триазолопиримидинил и пиразолопиридинил. Конкретные примеры бициклических гетероарильных групп, содержащих два конденсированных 6-членных кольца, включают, но ими не ограничиваются, хинолинил, изохинолинил, пиридопиридинил, хиноксалинил, хиназолинил, циннолинил, фталазинил, нафтиридинил и птеридинил. Конкретные гетероарильные группы представляют собой гетероарильные группы, полученные из тиофенила, пирролила, бензотиофенила, бензофуранила, индолила, пиридинила, хинолинила, имидазолила, оксазолила и пиразинила. Примеры типичных гетероарилов включают следующие:
где каждый Υ выбран из >С(=О), ΝΗ, О и δ.
"Гетероциклоалкил" означает неароматическую полностью насыщенную кольцевую структуру, моноциклическую, конденсированную полициклическую, спироциклическую или мостиковую полициклическую, которая включает один или несколько гетероатомов, независимо выбранных из О, N и δ, и определенное количество атомов в кольце. Гетероциклоалкильная кольцевая структура может иметь от 4 до 12 кольцевых членов, в частности от 4 до 10 кольцевых членов и более предпочтительно от 4 до 7 кольцевых членов. Каждое кольцо может содержать до четырех гетероатомов, как правило, выбранных из азота, серы и кислорода. Обычно гетероциклоалкильное кольцо содержит вплоть до 4 гетероатомов, более типично до 3-х гетероатомов, более обычно до 2-х, например один гетероатом. Примеры гетероциклических колец включают, но ими не ограничиваются, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил
- 6 029827
(например, 1-пирролидинил, 2-пирролидинил и 3-пирролидинил), морфолинил, тиоморфолинил, тетрагидрофуранил, тетрагидротиофенил, имидазолинил, оксазолинил, тиазолинил, пиперидинил (например, 1-пиперидинил, 2-пиперидинил, 3-пиперидинил и 4-пиперидинил), пиранил, диоксанил, тетрагидр опиранил (например, 4-тетрагидропиранил), 2-пиразолинил, пиразолидинил или пиперазинил.
Конкретные примеры моноциклических гетероциклоалкильных групп показаны в следующих иллюстративных примерах:
где каждый и Υ независимо выбран из СН2, ΝΗ, О и 8.
Конкретные примеры конденсированных бициклических гетероциклоалкильных групп показаны в следующих иллюстративных примерах:
где каждый и Υ независимо выбран из СН2, ΝΗ, О и 8.
Конкретные примеры мостиковых бициклических гетероциклоалкильных групп показаны в следующих иллюстративных примерах:
где каждый и Υ независимо выбран из СН2, ΝΗ, О и 8, Ζ представляет собой N или СН. Конкретные примеры спироциклических гетероциклоалкильных групп показаны в следующих иллюстративных примерах:
где каждый из Υ выбран из ΝΗ, О и 8.
"Гидроксил" относится к радикалу -ОН.
"Оксо" относится к радикалу =0.
"Замещенный" относится к группе, в которой один или несколько атомов водорода независимо заменены одинаковыми или разными заместителем(ями).
"Сульфо" или "сульфоновая кислота" относится к такому радикалу, как -803Н.
"Тиол" относится к группе -8Н.
В контексте настоящего описания термин "замещенный одним или более" относится к одному до четырех заместителей. В одном из вариантов осуществления он относится к одному-трем заместителям. В других вариантах осуществления он относится к одному или двум заместителям. В еще одном варианте осуществления он относится к одному заместителю.
"Тиоалкокси" относится к группе -8К26, где К26 имеет указанное число атомов углерода и, в частности, С1-С8-алкил. Конкретные тиоалкоксигруппы представляют собой тиометокси, тиоэтокси, нтиопропокси, изотиопропокси, н-тиобутокси, трет-тиобутокси, втор-тиобутокси, н-тиопентокси, нтиогексокси и 1,2-диметилтиобутокси. Конкретные тиоалкоксигруппы представляют собой низший тиоалкокси, т.е. с 1-6 атомами углерода. Более конкретные алкоксигруппы имеют 1-4 атомов углерода.
Специалисту в области органического синтеза понятно, что максимальное количество гетероатомов в стабильном, химически реальном гетероциклическом кольце, будь оно ароматическим или неароматическим, определяется размером цикла, степенью ненасыщенности и валентностью гетероатомов. Вообще, гетероциклическое кольцо может иметь от одного до четырех гетероатомов при условии, что гетероароматический цикл является химически реальным и стабильным.
"Фармацевтически приемлемый" означает утвержденный или одобренный регулирующим органом Федерального правительства или правительства штата или соответствующего ведомства в странах, помимо США, или который находится в перечне Фармакопеи США или другой общеизвестной фармакопеи для применения для животных и, в частности, для людей.
"Фармацевтически приемлемая соль" относится к соли соединения по настоящему изобретению, которая является фармацевтически приемлемой и которая обладает желательной фармакологической
- 7 029827
активностью исходного соединения. В частности, такие соли являются нетоксичными и могут представлять собой неорганические или органические кислотно-аддитивные соли и основно-аддитивные соли. Конкретно, такие соли включают: (1) кислотно-аддитивные соли, образованные с неорганическими кислотами, такими как хлористо-водородная кислота, бромисто-водородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и тому подобное; или образованные с органическими кислотами, такими как уксусная кислота, пропионовая кислота, гексановая кислота, циклопентанпропионовая кислота, гликолевая кислота, пировиноградная кислота, молочная кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, яблочная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, винная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, 3-(4-гидроксибензоил)бензойная кислота, коричная кислота, миндальная кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, 1,2-этандисульфоновая кислота, 2гидроксиэтансульфоновая кислота, бензолсульфоновая кислота, 4-хлорбензолсульфоновая кислота, 2нафталинсульфоновая кислота, 4-толуолсульфоновая кислота, камфорсульфоновая кислота, 4метилбицикло[2.2.2]-окт-2-ен-1-карбоновая кислота, глюкогептоновая кислота, 3-фенилпропионовая кислота, триметилуксусная кислота, трет-бутилуксусная кислота, лаурилсерная кислота, глюконовая кислота, глутаминовая кислота, гидроксинафтойная кислота, салициловая кислота, стеариновя кислота, муконовая кислота и тому подобное; или (2) соли, образованные в тех случаях, когда кислый протон присутствует в исходном соединении, либо замещен на ион металла, например, ион щелочного металла, ион щелочноземельного металла или ион алюминия; или координирует с органическим основанием, таким как этаноламин, диэтаноламин, триэтаноламин, Ν-метилглюкамин и т.п. Кроме того, соли включают, в качестве примера только, натрий, калий, кальций, магний, аммоний, тетраалкиламмоний и тому подобное; и в тех случаях, когда соединение содержит основную функциональность, соли нетоксичных органических или неорганических кислот, такие как гидрохлорид, гидробромид, тартрат, мезилат, ацетат, малеат, оксалат и т.п. Термин "фармацевтически приемлемый катион" относится к приемлемому катионному противоиону кислой функциональной группы. Примерами таких катионов являются катионы натрия, калия, кальция, магния, аммония, тетраалкиламмония и т.п.
"Фармацевтически приемлемый носитель" относится к разбавителю, адъюванту, эксципиенту или носителю, с которым соединение по настоящему изобретению вводят.
"Пролекарства" относятся к соединениям, включая производные соединений по настоящему изобретению, которые имеют расщепляемые группы и превращаются с помощью сольволиза или в физиологических условиях в соединения по настоящему изобретению, которые являются фармацевтически активными ίη νίνο. Такие примеры включают, но не ими ограничиваются, производные холинового эфира и тому подобное, Ν-алкилморфолиновые эфиры и т.п.
"Сольват" относится к формам соединения, которое связано с растворителем, обычно посредством реакции сольволиза. Эта физическая связь включает водородную связь. Обычные растворители включают воду, ЕЮН, уксусную кислоту и т.п. Соединения по настоящему изобретению можно получить, например, в кристаллической форме, и оно может находиться в сольватированной или гидратной форме. Подходящие сольваты включают фармацевтически приемлемые сольваты, такие как гидраты, и, кроме того, включают как стехиометрические сольваты, так и нестехиометрические сольваты. В некоторых случаях сольват может быть выделен, например, когда одна или несколько молекул растворителя включены в кристаллическую решетку кристаллического твердого вещества. "Сольват" охватывает как сольваты в жидкой фазе, так и поддающиеся выделению сольваты. Репрезентативные сольваты включают гидраты, этанолаты и метанолаты.
"Субъект" включает людей. Термины "человек", "пациент" и "субъект" используют в настоящем описании взаимозаменяемо.
"Эффективное количество" означает количество соединения по настоящему изобретению, которое при введении субъекту для лечения заболевания оказывается достаточным для воздействия такого лечения на такое заболевание. "Терапевтически эффективное количество" может варьироваться в зависимости от соединения, заболевания и его степени тяжести, и возраста, массы тела и тому подобное, субъекта, подлежащего лечению.
"Предотвращение" или "профилактика" относится к снижению риска приобретения или развития заболевания или нарушения (т.е. предотвращение развития по меньшей мере одного из клинических симптомов заболевания у субъекта, который может быть подвергнут воздействию вызывающего заболевание средства, или предрасположенного к заболеванию до начала его возникновения).
Термин "профилактика" относится к "предотвращению" и относится к мероприятию или способу, цель которого состоит в предотвращении, а не лечении или излечении заболевания. Неограничивающие примеры профилактических мер могут включать введение вакцин; введение низкомолекулярного гепарина госпитализированным больным с повышенным риском возникновения тромбоза вследствие, например, обездвиживания; и введение противомалярийного средства, такого как хлорохин, перед визитом в географический регион, для которого малярия эндемична или где высок риск контакта с малярией.
"Лечащий" или "лечение" любого заболевания или нарушения относится, в одном из вариантов осуществления, к облегчению заболевания или нарушения (т.е. остановке заболевания или уменьшения проявления, степени или тяжести по меньшей мере одного из его клинических симптомов). В другом
- 8 029827
варианте осуществления "лечащий" или "лечение" относится к улучшению по меньшей мере одного физического параметра, который может быть неявным для субъекта. В еще одном варианте осуществления "лечащий" или "лечение" относится к модуляции заболевания или нарушения, либо физически, (например, стабилизация заметного симптома), физиологически (например, стабилизация физического параметра) или и того, и другого. В дополнительном варианте осуществления "лечащий" или "лечение" относится к замедлению прогрессирования заболевания.
Как используется в настоящем описании термин "аллергическое заболевание(я)" относится к группе состояний, характеризующихся нарушением иммунной системы, проявляющимся в виде реакции гиперчувствительности, включая, аллергические заболевания дыхательных путей (например, астма, ринит), синусит, экзему и крапивницу, а также пищевую аллергию или аллергию на яд насекомого.
В контексте настоящего описания термин "астма" относится к любому заболеванию легких, характеризующемуся изменениями в легочном газопотоке, связанными с сужением дыхательных путей любой причины (внутренние, внешние или обе причины; аллергические или неаллергические факторы). Термин "астма" может быть использован с одним или несколькими прилагательными для указания причины.
В контексте настоящего описания термин "воспалительное заболевание(я)" относится к группе заболеваний, включающих ревматоидный артрит, остеоартрит, ювенильный идиопатический артрит, псориаз, псориатический артрит, анкилозирующий спондилоартрит, аллергическое заболевание дыхательных путей (например, астма, ринит), хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ), воспалительные заболевания кишечника (например, болезнь Крона, язвенный колит), вызванные эндотоксинами болезненные состояния (например, осложнения после аортокоронарного шунтирования или хронические эндотоксические состояния, приводящие, например, к хронической сердечной недостаточности) и родственные заболевания с участием хрящей, такие как заболевания суставов. В частности, термин относится к ревматоидному артриту, остеоартриту, аллергическому заболеванию дыхательных путей (например, астме), хроническому обструктивному заболеванию легких (ХОЗЛ) и воспалительным заболеваниям кишечника. Более конкретно этот термин относится к ревматоидному артриту, хроническому обструктивному заболеванию легких (ХОЗЛ) и воспалительным заболеваниям кишечника.
В контексте настоящего описания термин "аутоиммунное заболевание(я)" относится к группе заболеваний, включая непроходимость дыхательных путей, включая состояния, такие как ХОЗЛ (хроническое обструктивное заболевание легких), астма (например, наследственная бронхиальная астма, приобретенная бронхиальная астма, индуцированная пылью астма, инфантильная астма), в частности, хроническая или трудноизлечимая [запущенная] астма (например, поздняя астма и гиперчувствительность дыхательных путей), бронхит, включая бронхиальную астму, системная красная волчанка (8ЬЕ), кожная красная волчанка, волчаночный нефрит, дерматомиозит, синдром Шегрена, рассеянный склероз, псориаз, заболевание, вызываемое сухостью глаза, сахарный диабет 1 типа и осложнения, связанные с ним, диффузный нейродерматит (атопический дерматит), тиреоидит (болезнь Хашимото и аутоимунный тиреоидит), контактный дерматит и дополнительный экзематозный дерматит, воспалительное заболевание кишечника (например, болезнь Крона и неспецифический язвенный колит), атеросклероз и боковой амиотрофический склероз. В частности, термин относится к ХОЗЛ, астме, системной красной волчанке, сахарному диабету I типа и воспалительному заболеванию кишечника. В контексте настоящего описания термин "пролиферативное заболевание(я)" относится к состояниям, таким как рак (например, лейомиосаркома матки или рак предстательной железы), миелопролиферативные нарушения (например, болезнь Вакеза, эссенциальный тромбоцитоз и миелофиброз), лейкоз (например, острый миелоидный лейкоз, острый и хронический лимфобластный лейкоз), множественная миелома, псориаз, рестеноз, склеродермия или фиброз. В частности, термин относится к раку, лейкозу, множественной миеломе и псориазу.
В контексте настоящего описания термин "рак" относится к злокачественному или доброкачественному росту клеток в коже и в органах тела, например, но ими не ограничиваясь, молочная железа, предстательная железа, легкое, почка, поджелудочная железа, желудок или кишечник. Рак имеет тенденцию к инфильтрации в соседние ткани и распространению (метастазированию) в отдаленные органы, например, в костную ткань, печень, легкое и головной мозг. В контексте настоящего описания термин "рак" включает как метастатические типы опухолевых клеток (такие как, но ими не ограничиваясь, меланома, лимфома, лейкемия, фибросаркома, рабдомиосаркома и мастоцитома) так и типы тканевой карциномы (такие как, но ими не ограничиваясь, колоректальный рак, рак простаты, мелкоклеточный рак легкого и немелкоклеточный рак легкого, рак молочной железы, рак поджелудочной железы, рак мочевого пузыря, рак почки, рак желудка, глиобластома, первичный рак печени, рак яичника, рак простаты и лейомиосаркома матки). В частности, термин "рак" относится к острому лимфобластному лейкозу, острому миелолейкозу, адренокортикальной карциноме, раку анального канала, раку аппендикса, астроцитоме, атипичной тератоидно-рабдоидной опухоли, базально-клеточной карциноме, раку желчного протока, раку мочевого пузыря, раку костей (остеосаркома и злокачественная фиброзная гистиоцитоксантома), глиоме ствола головного мозга, опухолям головного мозга, опухолям головного мозга и спинного мозга, раку молочной железы, опухолям бронхов, лимфоме Беркитта, раку шейки матки, хроническому лимфоцитарному лейкозу, хронической гранулоцитной лейкемии, раку толстой кишки, колоректальному раку, краниофарингиоме, кожной Т-клеточной лимфоме, эмбриональным опухолям, раку эндометрия, эпендимобластоме,
- 9 029827
эпендимоме, раку пищевода, опухолям семейства саркомы Юинга, раку глаза, ретинобластоме, раку желчного пузыря, раку желудочно-кишечного тракта (рак желудка), гастроинтестинальной карциноидной опухоли, гастроинтестинальной стромальной опухоли (ΟΙ8Τ), гастроинтестинальной опухоли стромальной клетки, герминогенной опухоли, глиоме, волосатоклеточному лейкозу, раку головы и шеи, гепатоцеллюлярному раку (печени), лимфоме Ходжкина, гипофарингеальному раку, внутриглазной меланоме, опухоли островков поджелудочной железы (эндокринная часть поджелудочной железы), саркоме Капоши, раку почки, лангергансоклеточному гистиоцитозу, раку гортани, лейкозу, острому лимфобластному лейкозу, острому миелолейкозу, хроническому лимфоцитарному лейкозу, хронической гранулоцитной лейкемии, волосатоклеточному лейкозу, раку печени, немелкоклеточному раку легкого, мелкоклеточному раку легкого, лимфоме Беркитта, кожной Т-клеточной лимфоме, лимфоме Ходжкина, неходжкинской лимфоме, лимфоме, макроглобулинемии Вальденстрема, медуллобластоме, медуллоэпителиоме, меланоме, мезотелиоме, раку ротовой полости, хронической гранулоцитной лейкемии, миелоидному лейкозу, множественной миеломе, раку носоглотки, невробластоме, неходжкинской лимфоме, немелкоклеточному раку легкого, раку ротовой полости, раку ротоглотки, остеосаркоме, злокачественной фиброзной гистиоцитоме костей, раку яичников, эпителиальному раку яичников, герминогенной опухоли яичников, пограничной опухоли яичника, раку поджелудочной железы, папилломатозу, раку паращитовидной железы, раку полового члена, фарингеальному раку, паренхиматозной опухоли шишковидного тела промежуточной дифференцировки, пинеобластоме и супратенториальным примитивным нейроэктодермальным опухолям, опухоли гипофиза, плазмоклеточной опухоли/множественной миеломе, плевролегочной бластоме, первичной лимфоме центральной нервной системы, раку предстательной железы, раку прямой кишки, почечно-клеточному раку (почки), ретинобластоме, рабдомиосаркоме, раку слюнной железы, саркоме, опухолям семейства саркомы Юинга, саркоме Капоши, синдрому Сезари, раку кожи, мелкоклеточному раку легкого, раку тонкого кишечника, саркоме мягких тканей, плоскоклеточной карциноме, раку желудка, супратенториальной примитивной нейроэктодермальной опухоли, раку яичка, раку гортани, тимоме и тимусной карциноме, раку щитовидной железы, раку уретры, раку матки, саркоме матки, вагинальному раку, раку вульвы, макроглобулинемии Вальденстрема и опухоли Вильмса. В другом конкретном варианте осуществления термин рак относится к раку поджелудочной железы, раку печени, гепатоцеллюлярной карциноме (НСС), раку молочной железы или раку толстой кишки.
В контексте настоящего описания термин "лейкоз" относится к неопластическим заболеваниям крови и кровеобразующим органам. Такие заболевания могут вызвать нарушение функции костного мозга и иммунной системы, что приводит хозяина в состояние высокой чувствительности к инфекции и кровотечению. В частности, термин "лейкоз" относится к острому миелоидному лейкозу (АМЬ), и острому лимфобластному лейкозу (АЬЬ), и хроническому лимфобластному лейкозу (СЬЬ). В другом конкретном варианте осуществления термин лейкоз относится к Т-клеточному острому лимфобластному лейкозу (ΤАЬЬ), хроническому лимфобластному лейкозу (СЬЬ) или диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфоме (ОЬВСЬ).
В контексте настоящего описания термин "отторжение трансплантата" относится к острому или хроническому отторжению клеток, алло- или ксенотрансплантатов ткани или солидных органов, например, островков Лангерганса, стволовых клеток, костного мозга, кожи, мышцы, корнеальной ткани, нейронной ткани, сердца, легкого, комбинированного сердца-легкого, почки, печени, кишки, поджелудочной железы, трахеи или пищевода, или реакциям "трансплантат-против-хозяина".
В контексте настоящего описания термин "заболевания, характеризующиеся ухудшением обновления хряща" включает состояния, такие как остеоартрит, псориатический артрит, ювенильный ревматоидный артрит, подагрический артрит, септический или инфекционный артрит, реактивный артрит, симпатическая рефлекторная дистрофия, альгодистрофия, синдром Титце или реберный хондрит, фибромиалгия, остеохондрит, нейрогенный или нейропатический артрит, заболевание суставов, эндемические формы артрита, подобные деформирующему эндемическому остеоартриту, болезнь Мселени и болезнь Хандигоду; дегенерацию, являющуюся результатом фибромиалгии, системную красную волчанку, склеродермию и анкилозирующий спондилит.
В контексте настоящего описания термин "врожденный дефект(ы) хряща" включает состояния, такие как наследственный хондролиз, хондродисплазии и псевдохондродисплазии, в частности, но ими не ограничиваясь, микротию, анотию, метафизарную хондродисплазию, и родственные заболевания.
В контексте настоящего описания термин "заболевание(я), связанное с гиперсекрецией 1Ь6" включает состояния, такие как болезнь Кастлемана, множественная миелома, псориаз, саркома Капоши и/или мезангиальный пролиферативный гломерулонефрит.
В контексте настоящего описания термин "заболевание(я), связанное с гиперсекрецией интерферонов" включает состояния, такие как системная и кожная красная волчанка, волчаночный нефрит, дерматомиозит, синдром Шегрена, псориаз, ревматоидный артрит.
"Соединение(я) по настоящему изобретению" и эквивалентные выражения, как подразумевается, охватывают соединения формулы(л), описанные выше, и это выражение включает фармацевтически приемлемые соли и сольваты, например, гидраты, и сольваты фармацевтически приемлемых солей, где контекст это допускает. Аналогично, ссылка на промежуточные соединения, независимо от того, заяв- 10 029827
ляются они как таковые, или нет, как полагают, охватывает их соли и сольваты, если контекст это допускает.
Когда в настоящем описании ссылаются на интервалы, например, но без ограничения, С1-8 алкил, то цитирование интервала следует рассматривать как представление каждого члена указанного интервала.
Другие производные соединений по настоящему изобретению обладают активностью в обеих формах, в виде кислоты и производных кислоты, но кислоточувствительная форма часто предлагает преимущества растворимости, тканевой совместимости или замедленного высвобождения в организме млекопитающего (Випбдаагб, 1985). Пролекарства включают производные кислот, хорошо известные специалистам в данной области, такие как, например, сложные эфиры, получаемые взаимодействием исходной кислоты с подходящим спиртом, или амиды, получаемые взаимодействием исходного кислотного соединения с замещенным или незамещенным амином, или ангидриды кислоты, или смешанные ангидриды. Особо полезными пролекарствами являются простые алифатические или ароматические сложные эфиры, амиды и ангидриды, производные кислотных групп, подвешенных на соединениях по настоящему изобретению. В некоторых случаях желательно получить пролекарства типа двойного сложного эфира, такие как (ацилокси)алкиловые сложные эфиры или ((алкоксикарбонил)окси)алкиловые сложные эфиры. Такие конкретные пролекарства представляют собой С1-С8-алкиловые, С2-С8-алкениловые, С6-10 необязательно замещенные ариловые и (С6-10арил)-(С1-4алкил) сложные эфиры соединений по настоящему изобретению.
В контексте настоящего описания термин "изотопный вариант" относится к соединению, которое содержит неприродные пропорции изотопов одного или более атомов, которые составляют такое соединение. Например, "изотопный вариант" соединения может содержать один или более нерадиоактивных изотопов, таких как, например, дейтерий (2Н или д), углерод-13 (13С), азот (15Ν) или подобные. Понятно, что в соединении, где произведено такое изотопное замещение, следующие атомы, где присутствуют, могут варьироваться, так, например, какой-либо атом водорода может представлять собой 2Н/Э. какойлибо атом углерода может представлять собой 13С или какой-либо атом азота может представлять собой 15Ν, и специалисты в данной области могут определить наличие и положение таких атомов. Также настоящее изобретение может включать получение изотопных вариантов с радиоизотопами, например, в случае, когда результирующие соединения можно применять для исследований распределения в ткани лекарства и/или субстрата. Радиоактивные изотопы трития, т.е. 3Н, и углерода-14, т.е. 14С, особенно полезны для этой цели с точки зрения простоты их включения и легкости детектирования. Кроме того, можно получить соединения, которые замещены позитрон-испускающими изотопами, такими как 11С, 18Р, 15О и 13Ν, и были бы пригодны при исследованиях методом позитронной эмиссионной топографии (ПЭТ) с целью исследования степени занятости рецепторов субстратом.
Все изотопические варианты соединений, представленных в настоящем описании, независимо от того, радиоактивные они или нет, как предполагают, охватываются объемом данного изобретения.
Понятно также, что соединения, которые имеют одинаковые молекулярные формулы, но различаются по природе или последовательностью связывания атомов или расположением своих атомов в пространстве, называются "изомерами". Изомеры, которые различаются расположением своих атомов в пространстве, называются "стереоизомерами".
Стереоизомеры, которые не являются зеркальными изображениями друг друга, называются "диастереомерами", и те стереомеры, которые являются зеркальными изображениями, не совмещаемыми при наложении друг на друга, называются "энантиомерами". Если соединение имеет асимметрический центр, например, связанный с четырьмя различными группами, то возможна пара энантиомеров. Энантиомер может характеризоваться абсолютной конфигурацией его асимметрического центра, и его описывают по правилам К- и 8-последовательности Кана и Прелога или способом, при котором молекула вращает плоскость поляризованного света, и обозначают как правовращающий или левовращающий (т.е. как (+) или (-)-изомеры, соответственно). Хиральное соединение может существовать в виде индивидуального энантиомера или смеси энантиомеров. Смесь, содержащая равные пропорции энантиомеров, называется "рацемической смесью".
"Таутомеры" относятся к соединениям, которые представляют собой взаимозаменяемые формы структуры конкретного соединения и которые отличаются расположением водородных атомов и электронов. Таким образом, две структуры могут находиться в равновесии благодаря перемещению πэлектронов и атома (обычно Н). Например, енолы и кетоны являются таутомерами, поскольку они быстро взаимопревращаются при обработке либо кислотой, либо основанием. Другим примером таутомерии являются аци- и нитроформы фенилнитрометана, которые подобным образом образуются при обработке кислотой или основанием.
Таутомерные формы могут быть релевантны в достижении оптимальной химической реакционной способности и биологической активности соединения, представляющего интерес.
Соединения по настоящему изобретению могут обладать одним или несколькими асимметрическими центрами; такие соединения, таким образом, могут быть получены как индивидуальные (К)- или (8)стереоизомеры или как их смеси.
Если не указано иное, описание или название конкретного соединения в описании изобретения и
- 11 029827
пункты формулы изобретения, как подразумевается, включают как индивидуальные энантиомеры, так и их смеси, рацемические или иные. Способы определения стереохимии и разделение стереоизомеров являются хорошо известными в данной области.
Следует принять во внимание, что соединения по настоящему изобретению могут метаболизироваться с образованием биологически активных метаболитов.
Изобретение
Настоящее изобретение основано на обнаружении того, что соединения по настоящему изобретению представляют собой ингибиторы 1ΛΚ и что они являются полезным для лечения аллергических заболеваний, воспалительных заболеваний, аутоиммунных заболеваний, пролиферативных заболеваний, отторжения трансплантата, заболеваний, связанных с ухудшением обновления хряща, врожденными дефектами развития хряща; и заболеваний, связанных с гиперсекрецией 1Ь6 или гиперсекрецией интерферонов. В конкретном варианте осуществления соединения по настоящему изобретению представляют собой ингибиторы .ΙΑΚ1 и/или ΤΥΚ2.
Настоящее изобретение также относится к способам получения соединений по настоящему изобретению, фармацевтическим композициям, содержащим соединение по настоящему изобретению, и к способам лечения аллергических заболеваний, воспалительных заболеваний, аутоиммунных заболеваний, пролиферативных заболеваний, отторжения трансплантата, заболеваний, связанных с ухудшением обновления хряща, врожденными дефектами развития хряща; и заболеваний, связанных с гиперсекрецией 1Ь6 или гиперсекрецией интерферонов, путем введения соединения по настоящему изобретению. В конкретном варианте осуществления соединения по настоящему изобретению представляют собой ингибиторы .ΙΑΚ1 и/или ΤΥΚ2.
Соответственно, в первом аспекте настоящего изобретения соединения по настоящему изобретению представлены в соответствии с формулой (I):
Ь1 представляет собой -ΝΚ2-, -О- или -СН2-;
Су представляет собой фенил или 5-9-членный моноциклический или конденсированный бициклический гетероарил, содержащий от 1 до 4 гетероатомов, независимо выбранных из Ν, О и 8;
К2 представляет собой Н или С1-4алкил;
К3 представляет собой Н, галоген, С1-4алкил, необязательно замещенный одним или несколькими независимо выбранным галогеном, или С1-4алкокси, необязательно замещенный одним или несколькими независимо выбранным галогеном;
К4 представляет собой Н или галоген;
К5 представляет собой -СХ галоген или представляет собой -Ь2-К6;
-Ь2 отсутствует или представляет собой -С(=О)-, -С(=О)МК_7-, -ЫК_7С(=О)-, -8О2-, -8Ο2ΝΚ7- или -ΝΚ78Ο2-;
К6 представляет собой Н или С1-6алкил, необязательно замещенный одной или несколькими независимо выбранными группами К8;
К7 представляет собой Н или С1-4алкил;
К8 представляет собой ОН, ΟΝ, галоген или С1-4алкокси;
Ьа отсутствует или представляет собой -С(=О)-, -С(=О)О- или -С(=О)НН-;
Ка представляет собой:
Н,
С1-4алкил, необязательно замещенный одним или более независимо выбранными группами Кь,
С3-7 моноциклический циклоалкил, необязательно замещенный одной или более независимо выбранными группами Кс,
4- 7-членный моноциклический гетероциклоалкил, содержащий один или несколько гетероатомов, независимо выбранных из О, Ν и 8, или
5- 6-членный моноциклический гетероарил, содержащий один или несколько гетероатомов, независимо выбранных из О, Ν и 8;
Кь представляет собой: галоген,
СЧ
ОН,
С1-4алкокси,
- 12 029827
С3-7циклоалкил,
4-7-членный моноциклический гетероциклоалкил, содержащий один или несколько гетероатомов, независимо выбранных из О, N и 8 (гетероциклоалкил необязательно замещен одним или более независимо выбранным галогеном, или оксо),
-802-С1-4алкил или
-С(=0^КЪ1КЪ2;
Кс представляет собой: галоген,
сч
ОН,
С1-4алкил,
-С(=О)ОН или
-С( 0)\Кс11К'2; и
каждый КЪ1, КЪ2, Кс1 и Кс2 независимо выбран из Н и С1-4алкила.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует формуле I, где К1 представляет собой Ме.
В другом варианте осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует формуле I, где Су представляет собой фенил.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует формуле I, где Су представляет собой 5-9-членный моноциклический или конденсированный бициклический гетероарил, содержащий 1-4 гетероатома, независимо выбранных из Ν, О и 8. В другом варианте осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует формуле I, где Су представляет собой 59-членный моноциклический или конденсированный бициклический гетероарил, содержащий 1 или 2 гетероатома, независимо выбранных из Ν, О и 8. В конкретном варианте осуществления Су представляет собой пиразолил, пирролил, имидазолил, триазолил, тиофенил, тиазолил, фуранил, пиридил, пиразинил, пиримидил, пиридазинил, бензофуранил, бензотиофенил, бензотиазолил, бензотиадиазолил, бензоксазолил, индолил или индазолил.
В другом варианте осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует формуле I, где Су представляет собой 5-6-членный моноциклический гетероарил, содержащий 1-4 гетероатома, независимо выбранных из Ν, О и 8. В еще одном варианте осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует формуле I, где Су представляет собой 5-6-членный моноциклический гетероарил, содержащий 1 или 2 гетероатома, независимо выбранных из Ν, О и 8. В конкретном варианте осуществления Су представляет собой пиразолил, пирролил, имидазолил, фуранил, тиофенил, триазолил, тетразолил, тиазолил, оксазолил, тиадиазолил или оксадиазолил. В другом конкретном варианте осуществления Су представляет собой пиридинил, пиразинил, пиримидинил или пиридазолил. В более конкретном варианте осуществления Су представляет собой пиридил.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует формулам Па, ПЪ или Пс:
где К3, К4, Ьа, Ка и К5 такие, как описано в любом из указанных выше вариантов осуществления.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует формулам Ша, ШЪ или Шс:
где К3, К4, Ьа, Ка и К5 такие, как описано в любом из указанных выше вариантов осуществления.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой
из формул ШПс, где Ц представляет собой -СН2-.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул ШПс, где Ц представляет собой -О-.
- 13 029827
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Ι-Шс, где Ь1 представляет собой -ΝΚ2- и К2 является таким, как описано в любом из указанных выше вариантов осуществления.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Ι-Шс, где Ь1 представляет собой -ΝΚ2-, где К2 представляет собой Н.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Ι-Шс, где Ь1 представляет собой -ΝΚ2-, где К2 представляет собой С1-4алкил. В конкретном варианте осуществления К2 представляет собой Ме, Εΐ или ιΡγ. В более конкретном варианте осуществления К2 представляет собой Ме. В другом более конкретном варианте осуществления К2 представляет собой Εΐ.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует формулам 1Уа, ΙΥΒ, 1Ус, ΙΥά, 1Уе или ΙΥί:
где К3, К4, К5, Ьа и Ка такие, как описано в любом из указанных выше вариантов осуществления.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Ι-ΙΥί, где Ьа отсутствует.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формулы Ι-ΙΥί, где Ьа представляет собой -С(=О)-, -С(=О)О- или -Ο=Ο)ΝΗ-. В конкретном варианте осуществления Ьа представляет собой -С(=О)-.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует формулам Υа, ΥΒ, Υ^ Υά, Υе или Υί:
где К3, К4, К5 и Ка такие, как описано в любом из указанных выше вариантов осуществления.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Ι-Υί, где К4 представляет собой Н или галоген. В конкретном варианте осуществления К4 представляет собой Г или С1. В другом конкретном варианте осуществления К4 представляет собой Н.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Ι-Υί, где К3 представляет собой Н.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Ι-Υί, где К3 представляет собой галоген. В конкретном варианте осуществления К3 представляет собой Г или С1. В более конкретном варианте осуществления К3 представляет собой С1.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Ι-Υί, где К3 представляет собой С1-4алкил. В конкретном варианте осуществления К3 представляет собой Ме, Εΐ или η-Рг. В более конкретном варианте осуществления К3 представляет собой Ме
- 14 029827
или ЕГ. В наиболее конкретном варианте осуществления К3 представляет собой ЕГ. В другом наиболее конкретном варианте осуществления К3 представляет собой Ме.
В другом варианте осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Г-УТ, где К3 представляет собой С1-4алкил, замещенный одним или более независимо выбранным галогеном. В конкретном варианте осуществления К3 представляет собой -СНР2, -СР3, -СН2-СНР2 или -СН2-СР3. В более конкретном варианте осуществления К3 представляет собой -СР3 или -СН2-СР3.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Г-УТ, где К3 представляет собой С1-4алкокси. В конкретном варианте осуществления К3 представляет собой -ОМе, -ОЕГ или -Оп-Рг. В более конкретном варианте осуществления К3 представляет собой -ОМе или -ОЕГ.
В другом варианте осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Г-УТ, где К3 представляет собой С1-4алкокси, замещенный одним или более независимо выбранным галогеном. В конкретном варианте осуществления К3 представляет собой -ОСНР2, -ОСР3 или -ОСН2-СНР2. В более конкретном варианте осуществления К3 представляет собой -ОСНР2.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Г-УТ, где К5 представляет собой ΟΝ.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Г-УТ, где К5 представляет собой галоген. В конкретном варианте осуществления К5 представляет собой Ρ или С1. В более конкретном варианте осуществления К5 представляет собой Ρ.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Г-УТ, где К5 представляет собой -Ь2-Кб, Кб является таким, как описано выше, Ь2 представляет собой -С(=О^К -, -ΝΡ. С(=О)-, -8О2Ж - или -ΝΡ. §О2-, и К является таким, как определено в любом из предшествующих вариантов осуществления. В конкретном варианте осуществления К7 представляет собой Н. В другом конкретном варианте осуществления К7 представляет собой С1-4алкил. В более конкретном варианте осуществления К7 представляет собой Ме, или ЕГ. В наиболее конкретном варианте осуществления К7 представляет собой Ме.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Г-УТ, где К5 представляет собой -Ь2-Кб, Ь2 является таким, как описано выше, и Кб представляет собой Н.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Г-УТ, где К5 представляет собой -Ь2-Кб, Ь2 является таким, как описано выше, и Кб представляет собой С1-балкил. В конкретном варианте осуществления Кб представляет собой Ме, ЕГ, ιΡγ или 1Ви. В более конкретном варианте осуществления Кб представляет собой Ме или ЕГ.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Г-УТ, где К5 представляет собой -Ь2-Кб, Ь2 является таким, как описано выше, и Кб представляет собой С1-балкил, замещенный одной или более независимо выбранными группами К8. В другом варианте осуществления Кб представляет собой Ме, ЕГ, ιΡγ или 1Вн, каждый из которых замещен одной или более, независимо выбранными группами К8. В конкретном варианте осуществления Кб представляет собой С1-балкил, замещенный одной, двумя или тремя независимо выбранными группами К8. В другом конкретном варианте осуществления Кб представляет собой Ме, ЕГ, ιΡγ или 1Вн, каждый из которых замещен одной, двумя или тремя независимо выбранными группами К8. В более конкретном варианте осуществления Кб представляет собой С1-балкил, замещенный одной группой К8. В другом конкретном варианте осуществления Кб представляет собой Ме, ЕГ, ιΡγ или 1Вн, каждый из которых замещен одной группой К8.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Г-УТ, где К8 представляет собой ОН, ΟΝ, галоген или С1-4алкокси. В конкретном варианте осуществления К8 представляет собой ОН, ΟΝ, Ρ, С1, -ОМе или -ОЕГ.
В конкретном варианте осуществления К5 представляет собой -Ь2-Кб, Ь2 представляет собой -С(=О)или -8О2-, и Кб представляет собой С1-балкил. В более конкретном варианте осуществления К5 представляет собой -Ь2-Кб, Ь2 представляет собой -С(=О)- или -§О2 и Кб представляет собой Ме, ЕГ, ιΡγ или 1Ви. В наиболее конкретном варианте осуществления К5 представляет собой -С(=О)Ме, -С(=О)ЕГ, -8О2Ме или -8О2ЕГ.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Г-УТ, где К5 представляет собой -Ь2-Кб, Ь2 представляет собой -С(=О)ХК7-, -ХК7С(=О)-, -8О2ХК7- или -ХК7§О2-, Кб и К7 имеют значения, определенные в любом из предшествующих вариантов осуществления. В конкретном варианте осуществления К7 представляет собой Н, Ме или ЕГ и Кб является таким, как определено в любом из предшествующих вариантов осуществления. В другом конкретном варианте осуществления К7 является таким, как определено в любом из предшествующих вариантов осуществления, и Кб представляет собой Н. В еще одном конкретном варианте осуществления К7 является таким, как определено в любом из предшествующих вариантов осуществления, и Кб представляет собой С1-балкил, необязательно замещенный одним или более независимо выбранными ОН, 6Ν, галогеном, или С1-4алкокси. В более конкретном варианте осуществления К7 представляет собой Н, Ме или ЕГ и Кб
- 15 029827
представляет собой Н. В другом более конкретном варианте осуществления К7 представляет собой Н, Ме или Εΐ и К6 представляет собой Ме, Εΐ, ιΡγ или (Ви, каждый из которых необязательно замещен одним или более независимо выбранными ОН, ΟΝ, галогеном или С.'1-4алкокси. В еще одном более конкретном варианте осуществления К7 представляет собой Н, Ме или Εΐ и К6 представляет собой Ме, Εΐ, ιΡγ или (Ви, каждый из которых необязательно замещен одним или более независимо выбранными ОН, С^ Р, С1, ОМе или ΟΕΐ. В наиболее конкретном варианте осуществления К5 представляет собой -ί'.'(=Ο)ΝΗ2 или -δΟ2ΝΗ2.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул 1-УГ, где Ка представляет собой Н.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул 1-УГ, где Ка представляет собой С1-4алкил. В конкретном варианте осуществления Ка представляет собой Ме, Εΐ, ιΡγ или (Ви. В более конкретном варианте осуществления Ка представляет собой Ме или Εΐ. В наиболее конкретном варианте осуществления Ка представляет собой Ме.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул 1-УГ, где Ка представляет собой С|-2алкил, замещенный одним или более независимо выбранными Кь В другом варианте осуществления Ка представляет собой Ме, Εΐ, ιΡγ или (Ви, каждый из которых замещен одной или несколькими независимо выбранными Кь. В конкретном варианте осуществления Ка представляет собой С1-4алкил, замещенный одной, двумя или тремя независимо выбранными Кь В другом конкретном варианте осуществления Ка представляет собой Ме, Εΐ, ιΡγ или (Ви, каждый из которых замещен одной, двумя или тремя, независимо выбранными группами Кь. В более конкретном варианте осуществления Ка представляет собой С1-4алкил, замещенный одной группой Кь. В другом более конкретном варианте осуществления Ка представляет собой Ме, Εΐ, ιΡγ или (Ви, каждый из которых замещен одной группой Кь
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул 1-УГ, где Кь представляет собой галоген, СN или ОН. В конкретном варианте осуществления Кь представляет собой Р, С1, СN или ОН.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул 1-УГ, где Кь представляет собой С1-4алкокси. В конкретном варианте осуществления Кь представляет собой ОМе, ΟΕΐ или ΟιΡγ. В более конкретном варианте осуществления Кь представляет собой ОМе.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул 1-УГ, где Кь представляет собой Сз-7циклоалкил. В конкретном варианте осуществления Кь представляет собой циклопропил, циклобутил, циклопентил или циклогексил. В более конкретном варианте осуществления Кь представляет собой циклопропил.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул 1-УГ, где Кь представляет собой 4-7-членный моноциклический гетероциклоалкил, содержащий один или несколько гетероатомов, независимо выбранных из О, N и 8. В конкретном варианте осуществления Кь представляет собой оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, азетидинил, пирролидинил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил или тиоморфолинил.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул 1-УГ, где Кь представляет собой 4-7-членный моноциклический гетероциклоалкил, содержащий один или несколько гетероатомов, независимо выбранных из О, N и 8, замещенный одним или несколькими независимо выбранным галогеном или оксо. В конкретном варианте осуществления Кь представляет собой оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, азетидинил, пирролидинил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил или тиоморфолинил, каждый из которых замещен одним или несколькими независимо выбранными галогеном или оксо. В другом конкретном варианте осуществления Кь представляет собой 4-7-членный моноциклический гетероциклоалкил, содержащий один или несколько гетероатомов, независимо выбранных из О, N и 8, замещенный одним или несколькими независимо выбранными Р, С1 или оксо. В более конкретном варианте осуществления Кь представляет собой оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, азетидинил, пирролидинил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил или тиоморфолинил, каждый из которых замещен одним или несколькими независимо выбранными Р, С1 или оксо. В наиболее конкретном варианте осуществления Кь представляет собой 4-7-членный моноциклический гетероциклоалкил, содержащий один или несколько гетероатомов, независимо выбранных из О, N и 8, замещенный одним, двумя или тремя независимо выбранными Р, С1 или оксо. В другом наиболее конкретном варианте осуществления Кь представляет собой оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, азетидинил, пирролидинил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил или тиоморфолинил, каждый из которых замещен одним, двумя или тремя независимо выбранными Р, С1 или оксо.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул 1-УГ, где Кь представляет собой -8Ο2-С1-4алкил. В конкретном варианте осуществления Кь представляет собой -8Ο2ΟΗ3 или -8Ο2ΟΗ2ΟΗ3.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой
- 16 029827
из формул Ι-УГ, где Кь представляет собой -С(=О)МКЬ1КЬ2, где каждый Кы или КЬ2 независимо выбран из Н и С1-4алкила. В конкретном варианте осуществления каждый КЬ1 или КЬ2 независимо выбран из Н, -СН3 и -СН2СН3. В более конкретном варианте осуществления Кь представляет собой ^(=Ο)ΝΗ2, -С(=О)ИМеН или ^(=Ο)ΝΜθ2.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Ι-УГ, где Ка представляет собой С3-7 моноциклический циклоалкил. В конкретном варианте осуществления Ка представляет собой циклопропил, циклобутил или циклопентил. В более конкретном варианте осуществления Ка представляет собой циклопропил.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Ι-УГ, где Ка представляет собой С3-7 моноциклический циклоалкил, замещенный одной или несколькими независимо выбранными группами Кс. В другом варианте осуществления Ка представляет собой циклопропил, циклобутил или циклопентил, каждый из которых замещен одной или несколькими независимо выбранными группами Кс. В конкретном варианте осуществления Ка представляет собой С3-7 моноциклический циклоалкил, замещенный одной, двумя или тремя независимо выбранными группами Кс. В другом конкретном варианте осуществления Ка представляет собой циклопропил, циклобутил или циклопентил, каждый из которых замещен одной, двумя или тремя независимо выбранными группами Кс. В более конкретном варианте осуществления Ка представляет собой С3-7 моноциклический циклоалкил, замещенный одной группой Кс. В другом конкретном варианте осуществления Ка представляет собой циклопропил, циклобутил или циклопентил, каждый из которых замещен одной группой Кс.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Ι-УГ, где Кс представляет собой галоген, ΟΝ, или ОН. В конкретном варианте осуществления Кс представляет собой Р, С1, СN или ОН. В более конкретном варианте осуществления Кс представляет собой Р.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Ι-УГ, где Кс представляет собой Сщ4алкил. В конкретном варианте осуществления Кс представляет собой -Ме, -Εί или -ΪΡγ.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Ι-УГ, где Кс представляет собой -С(=О)ОН.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Ι-УГ, где Кс представляет собой -С(=О) МКс1Кс2, где каждый Кс1, или Кс2 независимо выбран из Н и Сщалкила. В конкретном варианте осуществления каждый Кс1 или Кс2 независимо выбран из Н, -СН3 и -СН2СН3. В более конкретном варианте осуществления Кс представляет собой -С(=О)ИН2, -С(=О)ИМеН или -С(=Ο)NΜе2.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Ι-ΥΓ, где Ка представляет собой:
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Ι-ΥΓ, где Ка представляет собой:
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Ι-УГ, где Ка представляет собой 4-7-членный моноциклический гетероциклоалкил, содержащий один или несколько гетероатомов, независимо выбранных из О, Ν и 8. В конкретном варианте осуществления Ка представляет собой оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, азетидинил, пирролидинил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил или тиоморфолинил.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует любой из формул Ι-УГ, где Ка представляет собой 5-6-членный моноциклический гетероарил, содержащий один или несколько гетероатомов, независимо выбранных из О, Ν и 8. В конкретном варианте осуществления Ка представляет собой фуранил, тиенил, пирролил, оксазолил, тиазолил, имидазолил, триазолил, оксадиазолил, тетразол, пиридинил, пиразинил или пиримидинил.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует формуле Ι, где соединение выбрано из:
N-(6-((6-циано-4-этилпиридин-3-ил)(метил)амино)-1-метил-1Н-бензо[ά]имидазол-4- 17 029827
ил)циклопропанкарбоксамида,
Ы-(6-(4-циано-2-этил-6-фторфениламино)-1-метил-1Н-бензо[й]имидазол-4ил)циклопропанкарбоксамида,
Ы-(6-((4-циано-2-этил-6-фторфенил)(метил)амино)-1-метил-1Н-бензо[й]имидазол-4ил)циклопропанкарбоксамида,
метил 6-((6-циано-4-этилпиридин-3-ил)(метил)амино)-1-метил-1Н-бензо[й]имидазол-4илкарбамата,
метил 6-((4-циано-2-этил-6-фторфенил)(метил)амино)-1-метил-1Н-бензо[й]имидазол-4илкарбамата,
(1К,2К)-Ы-[6-[(6-циано-4-этил-3-пиридил)окси]-1-метилбензимидазол-4-ил]-2фторциклопропанкарбоксамида,
Ы-(6-((4-циано-2-этил-6-фторфенил)(метил)амино)-1-метил-1Н-бензо[й]имидазол-4-ил)-2фторциклопропанкарбоксамида (18,2§)/(1К,2К) рацемической смеси,
(1К,2К)-Ы-(6-((6-циано-4-этилпиридин-3-ил)(метил)амино)-1-метил-1Н-бензо[й]имидазол-4-ил)-2фторциклопропанкарбоксамида,
(1К,2К)-Ы-(6-((6-циано-4-метилпиридин-3-ил)(метил)амино)-1-метил-1Н-бензо[й]имидазол-4-ил)-2фторциклопропанкарбоксамида,
(1К,2К)-Ы-[6-(4-циано-2-этил-фенокси)-1-метилбензимидазол-4-ил]-2фторциклопропанкарбоксамида,
(1К,2К)-Ы-[6-(2-хлор-4-циано-6-фтор-М-метиланилино)-1 -метилбензимидазол-4-ил] -2фторциклопропанкарбоксамида,
(1К,2К)-2-фтор-Ы-[6-[(6-фтор-4-метил-3-пиридил)метиламино]-1-метилбензимидазол-4ил]циклопропанкарбоксамида,
(1К,2К)-Ы-[6-[(2,6-дифтор-3 -пиридил)метиламино] -1 -метилбензимидазол-4-ил] -2фторциклопропанкарбоксамида,
(1К,2К)-Ы-[6-[(6-циано-2-фтор-3 -пиридил)метиламино] -1 -метилбензимидазол-4-ил] -2фторциклопропанкарбоксамида,
(1К,2К)-Ы-[6-(4-циано-2-фтор-М-метиланилино)-1 -метилбензимидазол-4-ил] -2фторциклопропанкарбоксамида,
(1К,2К)-2-фтор-М-[6-(2-фтор-М6-диметил-4-метилсульфониланилино)-1-метилбензимидазол-4ил]циклопропанкарбоксамида,
(1К,2К)-2-фтор-М-[6-(2-фтор-Н-метил-4-метилсульфониланилино)-1-метилбензимидазол-4ил]циклопропанкарбоксамида,
Ы-[6-[(4-этил-6-метилсульфонил-3-пиридил)метиламино]-1-метилбензимидазол-4ил]циклопропанкарбоксамида,
Ы-[6-(2-фтор-М6-диметил-4-метилсульфониланилино)-1-метилбензимидазол-4ил]циклопропанкарбоксамида,
(1К,2К)-Ы-[6-[(6-циано-4-метил-3-пиридил)окси]-1-метилбензимидазол-4-ил]-2фторциклопропанкарбоксамида,
(1К,2К)-Ы-[6-[(6-циано-2-фтор-4-метил-3-пиридил)метиламино]-1-метилбензимидазол-4-ил]-2фторциклопропанкарбоксамида,
(1К,2К)-Ы-[6-[(2-циано-3-фтор-5-метил-4-пиридил)метиламино]-1-метилбензимидазол-4-ил]-2фторциклопропанкарбоксамида,
Ы-[6-[(6-циано-4-метил-3-пиридил)окси]-1-метилбензимидазол-4-ил]циклопропанкарбоксамида,
5-((4-(циклопропанкарбоксамидо)-1-метил-1Н-бензо[й]имидазол-6-ил)(метил)амино)-4этилпиколинамида,
4- этил-5-((4-((1К,2К)-2-фторциклопропанкарбоксамидо)-1-метил-1Н-бензо[й]имидазол-6ил)(метил)амино)пиколинамида,
(1К,2К)-Ы-[6-(М2-диметил-4-метилсульфониланилино)-1-метилбензимидазол-4-ил]-2фторциклопропанкарбоксамида,
(1К,2К)-Ы-[6-(4-этилсульфонил-Н,2-диметиланилино)-1-метилбензимидазол-4-ил]-2фторциклопропанкарбоксамида,
5- (7 -амино-3 -метилбензимидазол-5 -ил)окси-4-метилпиридин-2-карбонитрила, Ы-[6-[(4-этил-6-метилсульфонил-3-пиридил)окси]-1-метилбензимидазол-4ил] циклопропанкарбоксамида,
Ы-[6-[4-(цианометил)анилино]-1-метилбензимидазол-4-ил]циклопропанкарбоксамида,
Ы-[6-(2,3-дигидро-1,4-бензодиоксин-6-иламино)-1-метилбензимидазол-4ил]циклопропанкарбоксамида и
5-[7-[[(1К,2К)-2-фторциклопропанкарбонил]амино]-3-метилбензимидазол-5-ил]окси-4метилпиридин-2 -карбоксамида.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует формуле I, где соединение выбрано из
- 18 029827
1-[6-[(6-циано-4-метил-3 -пиридил)окси]-1-метилбензимидазол-4-ил] -3 -изопропилмочевины,
4- метил-5-[3-метил-7-(метиламино)бензимидазол-5-ил]оксипиридин-2-карбонитрила,
5- [7-(диметиламино)-3-метилбензимидазол-5-ил]окси-4-метилпиридин-2-карбонитрила,
Ы-[6-[(6-циано-4-метил-3 -пиридил)окси]-1-метилбензимидазол-4-ил] -3 -гидроксиазетидин-1 карбоксамида,
Ы-[6-[(6-циано-4-метил-3-пиридил)окси]-1-метилбензимидазол-4-ил]морфолин-4-карбоксамида и
1-[6-[(6-циано-4-метил-3 -пиридил)окси]-1-метилбензимидазол-4-ил] -3 -изопропилмочевины.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует формуле I, где соединение представляет собой Ы-[6-[(6-циано-4-метил-3-пиридил)окси]-1метилбензимидазол-4-ил]-2-фторциклопропанкарбоксамид. В более конкретном варианте осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует формуле I, где соединение представляет собой (1К,2К)-Н-[6-[(6-циано-4-метил-3-пиридил)окси]-1-метилбензимидазол-4-ил]-2фторциклопропанкарбоксамид.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует формуле I, где соединение не представляет собой Ы-[6-[(6-циано-4-метил-3-пиридил)окси]-1метилбензимидазол-4-ил]-2-фторциклопропанкарбоксамид. В более конкретном варианте осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует формуле I, где соединение не представляет собой (1К,2К)-Н-[6-[(6-циано-4-метил-3-пиридил)окси]-1-метилбензимидазол-4-ил]-2фторциклопропанкарбоксамид.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует формуле I, где соединение представляет собой Ы-(6-((6-циано-4-метилпиридин-3-ил)(метил)амино)-1-метил1Н-бензо[б]имидазол-4-ил)-2-фторциклопропанкарбоксамид. В более конкретном варианте осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует формуле I, где соединение представляет собой (1К,2К)-Ы-(6-((6-циано-4-метилпиридин-3 -ил)(метил)амино)-1 -метил-1Н-бензо [б]имидазол-4-ил)-2фторциклопропанкарбоксамид.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует формуле I, где соединение не представляет собой Ы-(6-((6-циано-4-метилпиридин-3-ил)(метил)амино)-1метил-1Н-бензо[б]имидазол-4-ил)-2-фторциклопропанкарбоксамид. В более конкретном варианте осуществления соединение по настоящему изобретению соответствует формуле I, где соединение не представляет собой (1К,2К)-Ы-(6-((6-циано-4-метилпиридин-3 -ил)(метил)амино)-1 -метил-1Нбензо[б]имидазол-4-ил)-2-фторциклопропанкарбоксамид.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению не является изотопическим вариантом.
В одном из аспектов соединение по настоящему изобретению по любому из вариантов осуществления, описанных в настоящем документе, присутствует в виде свободного основания.
В одном из аспектов соединение по настоящему изобретению по любому из вариантов осуществления, описанных в настоящем документе, представляет собой фармацевтически приемлемую соль.
В одном из аспектов соединение по настоящему изобретению по любому из вариантов осуществления, описанных в настоящем документе, представляет собой сольват соединения.
В одном из аспектов соединение по настоящему изобретению по любому из вариантов осуществления, описанных в настоящем документе, представляет собой сольват фармацевтически приемлемой соли соединения.
Несмотря на то что указанные группы для каждого варианта осуществления, как правило, были перечислены выше в общем порядке по отдельности, соединение по настоящему изобретению включает группу, в которой несколько или каждый вариант осуществления в соответствии с вышеупомянутой формулой, а также в соответствии с другими представленными в настоящем документе формулами, выбраны из одного или нескольких конкретных членов или групп, обозначенных, соответственно, для каждой переменной. Таким образом, подразумевается, что настоящее изобретение включает все комбинации таких вариантов осуществления в пределах его объема.
Несмотря на то что указанные группы для каждого варианта осуществления, как правило, были перечислены выше по отдельности, соединение по настоящему изобретению может быть одно, для которого одно или несколько переменных (например, К групп) выбраны из одного или нескольких вариантов осуществления в соответствии с любой из вышеперечисленных формул. Таким образом, подразумевается, что настоящее изобретение включает все комбинации переменных из любого из раскрытых вариантов осуществления в пределах его объема.
В качестве альтернативы, исключение одного или нескольких из указанных переменных из группы или варианта осуществления, или их комбинации, также предусматривается настоящим изобретением.
В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к пролекарствам и производным соединений в соответствии с приведенными выше формулами. Пролекарства являются производными соединений по настоящему изобретению, которые имеют метаболически расщепляемые группы и превращаются с помощью сольволиза или в физиологических условиях в соединения по настоящему изобретению, которые являются фармацевтически активными ίη νίνο. Такие примеры включают, но ими не ограничива- 19 029827
ются, производные холинового эфира и тому подобное, алкилморфолиновые эфиры и т.п.
Другие производные соединений по настоящему изобретению обладают активностью в обеих формах, в виде кислоты и производных кислоты, но кислоточувствительная форма часто предлагает преимущества растворимости, тканевой совместимости или замедленного высвобождения в организме млекопитающего (Бипбдаагб, 1985). Пролекарства включают производные кислот, хорошо известные специалистам в данной области, такие как, например, сложные эфиры, получаемые взаимодействием исходной кислоты с подходящим спиртом, или амиды, получаемые взаимодействием исходного кислотного соединения с замещенным или незамещенным амином, или ангидриды кислоты, или смешанные ангидриды. Предпочтительными пролекарствами являются простые алифатические или ароматические сложные эфиры, амиды и ангидриды, производные кислотных групп, подвешенных на соединениях по настоящему изобретению. В некоторых случаях желательно получить пролекарства типа двойного сложного эфира, такие как (ацилокси)алкиловые сложные эфиры или ((алкоксикарбонил)окси)алкиловые сложные эфиры. Такие конкретные пролекарства представляют собой С1-С8-алкиловые, С2-С8-алкениловые, ариловые, С7-С12-замещенные ариловые и С7-С12-арилалкиловые сложные эфиры соединений по настоящему изобретению.
Пункты
1) Соединение формулы I
Ка
К4 ΗΝ
где К1 представляет собой Н или Ме;
Ь1 представляет собой -ΝΚ2-, -О- или -СН2-;
Су представляет собой фенил или 5-9-членный моноциклический или конденсированный бициклический гетероарил, содержащий от 1 до 4 гетероатомов, независимо выбранных из Ν, О и 8;
К2 представляет собой Н или С1-4алкил;
К3 представляет собой Н, галоген, С1-4алкил, необязательно замещенный одним или более независимо выбранным галогеном, или С1-4алкокси, необязательно замещенный одним или более независимо выбранным галогеном;
К4 представляет собой Н или галоген;
К5 представляет собой -ΟΝ, галоген или представляет собой -Ь2-К6;
-Ь2 отсутствует или представляет собой -С(=О)-, -С( О)\1С-, -ВЫК.7С(=О)-, -8О2-, -8Ο2ΝΚ7- или -ΝΚ78Ο2-;
К6 представляет собой Н, или С1-6алкил, необязательно замещенный одной или несколькими независимо выбранными группами К8;
К7 представляет собой Н или С1-4алкил;
К8 представляет собой ОН, ΟΝ, галоген или С1-4алкокси;
Ьа отсутствует или представляет собой -С(=О)-, -С(=О)О- или -С(=О)ЫН-;
Ка представляет собой:
Кь
Н,
С1-4алкил, необязательно замещенный одной или несколькими независимо выбранными группами
С3-7 моноциклический циклоалкил, необязательно замещенный одной или более независимо выбранными группами Кс,
4- 7-членный моноциклический гетероциклоалкил, содержащий один или несколько гетероатомов, независимо выбранных из О, Ν и 8, или
5- 6-членный моноциклический гетероарил, содержащий один или несколько гетероатомов, независимо выбранных из О, Ν и 8;
Кь представляет собой: галоген,
ΌΝ,
ОН,
С1-4алкокси,
С3-7циклоалкил,
4-7-членный моноциклический гетероциклоалкил, содержащий один или несколько гетероатомов, независимо выбранных из О, Ν и 8 (гетероциклоалкил необязательно замещен одним или более независимо выбранным галогеном или оксо),
-8О2-С1-4алкил или
- 20 029827
-С(=О)ЧКЬ1КЬ2;
Кс представляет собой: галоген,
СЧ,
ОН,
С1-4алкил,
-С(=О)ОН или
-С(=о)чКс1Кс2; и
каждый КЬ1, КЬ2, Кс1 и Кс2 независимо выбран из Н и С1-4алкила;
или фармацевтически приемлемая соль, или сольват, или сольват фармацевтически приемлемых солей.
2) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.1, где К1 представляет собой Ме.
3) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1, 2, где Су представляет собой фенил.
4) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп. 1, 2, где Су представляет собой 5-9-членный моноциклический или конденсированный бициклический гетероарил, содержащий 1-4 гетероатома, независимо выбранных из Ν, О и 8.
5) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1, 2, где 5-6-членный моноциклический гетероарил, содержащий 1-4 гетероатома, независимо выбранных из Ν, О и 8.
6) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1, 2, где Су представляет собой пиридил.
7) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.1, где соединение соответствует формулам 11а, 11Ь или 11с:
где Ьх, К3, К4, Ьа, Ка и К5 являются такими, как описано в п.1.
8) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.1, где соединение соответствует формулам 111а, 111Ь или 111с:
где Ь1, К3, К4, Ьа, Ка и К5 являются такими, как описано в п.1.
9) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп. 1 -8, где Ь1 представляет собой -СН2-.
10) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп. 1 -8, где Ь1 представляет собой О.
11) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1-8, где Ь1 представляет собой -ЧК2-.
12) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.11, где К2 представляет собой Н.
13) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.11, где К2 представляет собой С1-4алкил.
14) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.11, где К2 представляет собой Ме.
15) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.1, где соединение соответствует формулам ТУа, ТУЬ, ТУс, ΙΥά, 1Уе или ΙΥί:
- 21 029827
16) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1-15, где Ьа отсутствует.
17) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1-15, где Ьа представляет собой -С(=О)-.
18) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.1, где соединение соответствует формулам Уа, УЪ, Ус, Уб, Уе или У£:
где К3, К4, К5, Ьа, и Ка являются такими, как описано в п.1.
19) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1-18, где К4 представляет собой Н.
20) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1-18, где К4 представляет собой Р или С1.
21) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1-18, где К3 представляет собой Н.
22) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1-18, где К3 представляет собой С1-4алкил.
23) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.22, где К3 представляет собой Ме или Εί.
24) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1, 23, где К5 представляет собой СИ.
25) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1, 23, где К5 представляет собой галоген.
26) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.25, где К5 представляет собой Р или С1.
27) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1, 23, где К5 представляет собой -Е2-К6, К6 является таким, как описано в п.1, Е2 представляет собой -С(=О)ИК7-, -ИК7С(=О)-, -8ОА1С- или -ИК78О2-.
28) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.27, где К7 представляет собой Н.
29) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1, 23, где К5 представляет собой -Е2-К6, Е2 является таким, как описано в п.1, и К6 представляет собой Н.
30) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1, 26, где К5 представляет собой -Е2-К6, Е2 является таким, как описано в п.1, и К6 представляет собой Сх-6алкил.
31) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.30, где К6 представляет собой Ме.
- 22 029827
32) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1, 23, где К5 представляет собой -Ь2-К6, Ь2 является таким, как описано в п.1, и К6 представляет собой С]-6алкил. замещенный одной или несколькими независимо выбранными группами К8.
33) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.32, где К6 представляет собой Ме, Εΐ, ιΡγ или 1Би, каждый из которых замещен одной или несколькими, независимо выбранными группами К8.
34) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.33, где К8 представляет собой ОН, СЫ, Р, С1, -ОМе или -ΟΕΐ.
35) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1, 23, где К5 представляет собой -Ь2-К6, где Ь2 представляет собой -С(=О)- или -8О2- и К6 представляет собой С1-6алкил.
36) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.35, где К5 представляет собой -С(=О)Ме, -С(=О)Е1, -§О2Ме или -δΟζΕί.
37) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1, 23, где К5 представляет собой -Ь2-К6, где Ь2 представляет собой -С(=О)ЫК7-, -ЫК7С(=О)-, -8О2ЫК7- или -ЫК78О2-, где К7 представляет собой Н, Ме или Εΐ и К6 представляет собой Ме, Εΐ, ιΡγ или 1Би, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими независимо выбранными ОН, СЫ, галогеном или С1-4алкокси.
38) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.37, где К5 представляет собой -С(=О)ЫН2 или -8О2ЫН2.
39) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1-38, где Ка представляет собой С1-4алкил.
40) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.39, где Ка представляет собой Ме или Εΐ.
41) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1-38, где Ка представляет собой С1-4алкил, замещенный одной или более независимо выбранными группами Кь
42) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.41, где Ка представляет собой Ме, Εΐ, ιΡγ или 1Би.
43) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.41 или 42, где Кь представляет собой Р, С1, СЫ или ОН.
44) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.41 или 42, где Кь представляет собой ОМе, ΟΕΐ или О1Рг.
45) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.41 или 42, где Кь представляет собой циклопропил, циклобутил, циклопентил или циклогексил.
46) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.41 или 42, где Кь представляет собой оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, азетидинил, пирролидинил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил или тиоморфолинил.
47) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.41 или 42, где Кь представляет собой оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, азетидинил, пирролидинил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил или тиоморфолинил, каждый из которых замещен одним или несколькими независимо выбранными галогеном или оксо.
48) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.41 или 42, где Кь представляет собой -ЗО2СН3 или 8О2СН2СН3.
49) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.41 или 42, где Кь представляет собой -С(=О)ЫН2, С(=О)ЫМеН или -С(=О)ЫМе2.
50) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1-38, где Ка представляет собой С3-7 моноциклический циклоалкил.
51) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1-38, где Ка представляет собой С3-7 моноциклический циклоалкил, замещенный одной или несколькими независимо выбранными группами Кс.
52) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.50 или 51, где Ка представляет собой циклопропил, циклобутил или циклопентил.
53) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.51, где Кс представляет собой Р, С1, СЫ или ОН.
54) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.51, где Кс представляет собой -Ме, -Εΐ или -ιΡγ.
55) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.51, где Кс представляет собой -С(=О)ОН.
56) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.51, где Кс представляет собой -С(=О)ЫН2, -С(=О)ЫМеН или -С(=О)ЫМе2.
57) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1-38, где Ка представляет собой:
- 23 029827
58) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1-38, где Ка представляет собой:
59) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1-38, где Ка представляет собой 4-7-членный моноциклический гетероциклоалкил, содержащий один или несколько гетероатомов, независимо выбранных из О, N и 8.
60) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.59, где Ка представляет собой оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, азетидинил, пирролидинил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил или тиоморфолинил.
61) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1-38, где Ка представляет собой 5-6-членный моноциклический гетероарил, содержащий один или несколько гетероатомов, независимо выбранных из О, N и 8.
62) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.61, где Ка представляет собой фуранил, тиенил, пирролил, оксазолил, тиазолил, имидазолил, триазолил, оксадиазолил, тетразол, пиридинил, пиразинил или пиримидинил.
63) Соединение, или его фармацевтически приемлемая соль, по п.1, в котором соединение выбрано из табл. I.
64) Соединение, или его фармацевтически приемлемая соль, по п.1, где соединение представляет
собой (1К,2К)-Ы-[6-[(6-циано-4-метил-3-пиридил)окси]-1-метилбензимидазол-4-ил]-2фторциклопропанкарбоксамид.
65) Соединение, или его фармацевтически приемлемая соль, по п.1, где соединение не представляет
собой (1К,2К)-Ы-[6-[(6-циано-4-метил-3-пиридил)окси]-1-метилбензимидазол-4-ил]-2фторциклопропанкарбоксамид.
66) Соединение, или его фармацевтически приемлемая соль, по п.1, где соединение представляет собой (1К,2К)-Ы-(6-((6-циано-4-метилпиридин-3-ил)(метил)амино)-1-метил-1Н-бензо[б]имидазол-4-ил)2-фторциклопропанкарбоксамид.
67) Соединение, или его фармацевтически приемлемая соль, по п.1, где соединение не представляет собой (1К,2К)-Ы-(6-((6-циано-4-метилпиридин-3-ил)(метил)амино)-1-метил-1Н-бензо[б]имидазол-4-ил)2-фторциклопропанкарбоксамид.
68) Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и фармацевтически эффективное количество соединения по любому одному из пп.1-67.
69) Фармацевтическая композиция по п.68, содержащая дополнительное терапевтическое средство.
70) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1-67 или фармацевтическая композиция по любому из пп.68-69, для применения в медицине.
71) Соединение по любому из пп.1-67 или фармацевтическая композиция по любому из пп.68-69 для применения в лечении или профилактике аллергических заболеваний, воспалительных заболеваний, аутоиммунных заболеваний, пролиферативных заболеваний, отторжения при трансплантации, заболеваний, связанных с ухудшением обновления хряща, врожденными дефектами развития хряща, и/или заболеваний, связанных с гиперсекрецией ΙΒ6 или гиперсекреции интерферонов.
72) Соединение по любому из пп.1-67 или фармацевтическая композиция по любому из пп.68-69 для применения в лечении или профилактике пролиферативных заболеваний.
73) Соединение по п.72, где пролиферативных заболеваний выбраны из миелофиброза, Тклеточного острого лимфобластного лейкоза (1^/41.1.), множественной миеломы, хронического лимфоцитарного лейкоза (СЬЬ), диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы ([)1.ВС1), рака поджелудочной железы, рака печени, гепатоцеллюлярной карциномы (НСС), рака легкого, рака молочной железы и рака толстой кишки.
74) Способ лечения или профилактики аллергических заболеваний, воспалительных заболеваний, аутоиммунных заболеваний, пролиферативных заболеваний, отторжения при трансплантации, заболеваний, связанных с ухудшением обновления хряща, врожденными дефектами развития хряща, и/или заболеваний, связанных с гиперсекрецией П.6 или гиперсекреции интерферонов, включающий введение ко- 24 029827
личества соединения по любому из пп.1-67 или фармацевтической композиции по любому из пп.68-69, достаточного для осуществления указанного лечения, или профилактики.
75) Способ лечения или профилактики пролиферативных заболеваний, включающий введение количества соединения по любому одному из пп.1-67 или фармацевтической композиции по любому из пп.68-69, достаточного для осуществления указанного лечения, или профилактики.
76) Способ лечения по п.76, где пролиферативные заболевания выбраны из миелофиброза, Тклеточного острого лимфобластного лейкоза (Τ-ЛЬЬ), множественной миеломы, хронического лимфоцитарного лейкоза (СЬЬ), диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы (ОЬВСЬ), рака поджелудочной железы, рака печени, гепатоцеллюлярной карциномы (НСС), рака легкого, рака молочной железы и рака толстой кишки.
77) Способ по любому из пп.75-77, где соединение по любому одному из пп.1-67 или фармацевтическая композиция по любому из пп.68-69 вводят в комбинации с дополнительным терапевтическим средством.
78) Фармацевтическая композиция по п.69 и способ по п.78, где дополнительное терапевтическое средство представляет собой средство для лечения или профилактики аллергических заболеваний, воспалительных заболеваний, аутоиммунных заболеваний, пролиферативных заболеваний, отторжения при трансплантации, заболеванияй, связанных с ухудшением обновления хряща, врожденными дефектами развития хряща, и/или заболеваний, связанных с гиперсекрецией 1Ь6 или гиперсекреции интерферонов.
79) Фармацевтическая композиция по п.69 или способ по п.78, где дополнительное терапевтическое средство представляет собой средство для лечения или профилактики миелофиброза, Т-клеточного острого лимфобластного лейкоза (Т-ЛЬЬ), множественной миеломы, хронического лимфоцитарного лейкоза (СЬЬ), диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы (ОЬВСЬ), рака поджелудочной железы, рака печени, гепатоцеллюлярной карциномы (НСС), рака легкого, рака молочной железы и рака толстой кишки.
Фармацевтические композиции
При использовании в качестве фармацевтического препарата соединение по настоящему изобретению обычно вводят в форме фармацевтической композиции. Такие композиции могут быть получены способом, хорошо известным в фармацевтической области, и содержат по меньшей мере одно активное соединение по настоящему изобретению формулы Ι. Как правило, соединение по настоящему изобретению вводят в фармацевтически эффективном количестве. Количество соединения по настоящему изобретению в действительности вводимого соединения обычно определяется врачом с учетом соответствующих обстоятельств, включая состояние, подлежащее лечению, выбранный путь введения, реально вводимое соединение по настоящему изобретению, возраст, массу тела и реакцию конкретного пациента, степень тяжести симптомов у пациента и т.п.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут быть введены различными путями, включая пероральный, ректальный, трансдермальный, подкожный, внутрисуставный, внутривенный, внутримышечный и интраназальный пути. В зависимости от предполагаемого пути введения, соединение по настоящему изобретению, предпочтительно, получают либо в виде инъецируемых или пероральных композиций или в виде мазей, лосьонов или пластырей, все из которых предназначены для трансдермального введения.
Композиции для перорального введения могут иметь форму растворов или суспензий жидкого продукта, хранимых в сосудах, или сыпучих порошков. В большинстве случаев, однако, композиции представлены в единичных дозированных формах для облегчения точного дозирования. Термин "единичные дозированные формы" относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве единичных дозировок для человека и других млекопитающих, где каждая единица содержит заранее определенное количество активного вещества, вычисленное для получения желательного терапевтического эффекта, в сочетании с подходящим фармацевтическим эксципиентом, наполнителем или носителем. Обычные единичные дозированные формы включают предварительно заполненные, предварительно отмеренные ампулы или шприцы с жидкими композициями или пилюли, таблетки, капсулы или тому подобное в случае твердых композиций. В таких композициях соединение по настоящему изобретению формулы Ι представляет собой обычно второстепенный компонент (от приблизительно 0,1 до приблизительно 50 мас.% или предпочтительно от приблизительно 1 до приблизительно 40 мас.%), где остальная часть представляет собой раличные наполнители или носители и технологические добавки, полезные для формования желательной дозированной формы.
Жидкие формы, подходящие для перорального введения, могут включать подходящий водный или неводный наполнитель с буферами, суспендирующими и диспергирующими средствами, красителями, ароматизаторами и т.п. Твердые формы могут включать, например, любой из нижеследующих ингредиентов, или соединение по настоящему изобретению аналогичной природы: связующее вещество, такое как микрокристаллическая целлюлоза, трагакантовая камедь или желатин; эксципиент, такой как крахмал или лактоза, дезинтегрирующее средство, такое как альгиновая кислота, примогель или кукурузный крахмал; лубрикант, такой как стеарат магния; глидант, такой коллоидный диоксид кремния; подсластитель, такой как сахароза или сахарин; или ароматизирующее вещество, такое как мята перечная или от- 25 029827
душка апельсина.
Композиции для инъекции, обычно основаны на стерильном физиологическом растворе для инъекций или забуференном фосфатом физиологическом растворе или других подходящих для инъекции носителях, известных в данной области. Исходя из вышесказанного, активное соединение по настоящему изобретению формулы I в таких композициях обычно представляет собой второстепенный компонент, часто составляющий от приблизительно 0,05 до 10 мас.%, при этом оставшаяся часть представляет собой подходящий для инъецирования носитель и т.п.
Трансдермальные композиции обычно составляют в виде мази или крема для местного нанесения, содержащего активный ингредиент(ы), обычно в количестве, находящемся в диапазоне от приблизительно 0,01 до приблизительно 20 мас.%, предпочтительно от приблизительно 0,1 до приблизительно 20 мас.%, предпочтительно, от приблизительно 0,1 до приблизительно 10 мас.% и более предпочтительно, от приблизительно 0,5 до приблизительно 15 мас.%. При приготовлении в виде мази активные ингредиенты обычно смешивают либо с парафиновой мазевой основой, либо с водорастворимой мазевой основой. Альтернативно, активные ингредиенты могут быть составлены в крем, например, с основой крема типа "масло-в-воде". Такие составы для чрескожного введения хорошо известны в данной области и обычно включают дополнительные компоненты, обеспечивающие повышенную проницаемость через кожу, стабильность активных ингредиентов или состава. Все вышеуказанные известные трансдермальные составы и ингредиенты не выходят за рамки объема данного изобретения.
Соединение по настоящему изобретению можно также вводить посредством трансдермального устройства. В соответствии с этим трансдермальное введение может быть осуществлено с помощью пластыря либо резервуарного типа, либо типа пористой мембраны, или разновидности твердого матрикса.
Вышеописанные компоненты для перорально вводимых, инъецируемых или местно вводимых композиций носят только репрезентативный характер. Другие материалы, а также способы приготовления и тому подобное приведены в Рак 8 о£ Кеш1п§1оп'8 РЬагтасеикса1 ЗИепсеь 17ΐΗ ебПюп, 1985, Маек РнЫкктд Сотрапу, Еакоп, Реппкуката, содержание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки.
Соединение по настоящему изобретению также может быть введено в формах с замедленным высвобождением или из систем доставки лекарственного средства с замедленным высвобождением. Описание репрезентативных материалов с замедленным высвобождением можно найти в КетшдХоп'к Ркагтасеикса1 Зиепсек.
Следующие примеры составов иллюстрируют репрезентативные фармацевтические композиции, которые могут быть получены в соответствии с этим изобретением. Настоящее изобретение, однако, не ограничено следующими фармацевтическими композициями.
Состав 1 - таблетки.
Соединение по настоящему изобретению формулы I может быть смешано в виде сухого порошка со связующим веществом, сухим желатином при массовом соотношении приблизительно 1:2. В качестве лубриканта может быть добавлено незначительное количество стеарата магния. Смесь может быть сформирована в таблетки массой 240-270 мг (80-90 мг активного соединения по настоящему изобретению формулы I на таблетку) в таблетировочном прессе.
Состав 2 - капсулы.
Соединение по настоящему изобретению формулы I может быть смешано в виде сухого порошка с разбавителем, крахмалом при массовом соотношении приблизительно 1:1. Смесь может быть заполнена в 250-мг капсулы (125 мг активного соединения по настоящему изобретению формулы I на капсулу).
Состав 3 - жидкость.
Соединение по настоящему изобретению формулы I (125 мг) может быть смешано с сахарозой (1,75 г) и ксантановой камедью (4 мг) и полученная смесь может быть подвергнута смешиванию, пропусканию через сито с размером отверстий 10 меш США и затем смешана с заранее приготовленным раствором микрокристаллической целлюлозы и натрий-карбоксиметилцеллюлозы (11:89, 50 мг) в воде. Бензоат натрия (10 мг), ароматизатор и краситель могут быть разбавлены водой и добавлены в смесь при перемешивании. Затем при перемешивании может быть добавлено достаточное количество воды. Достаточное количество воды затем добавляют с получением общего объема 5 мл.
Состав 4 - таблетки.
Соединение по настоящему изобретению формулы I может быть смешано в виде сухого порошка со связующим веществом, сухим желатином при массовом соотношении приблизительно 1:2. В качестве лубриканта может быть добавлено незначительное количество стеарата магния. Смесь может быть сформирована в таблетки массой 490-900 мг (150-300 мг активного соединения по настоящему изобретению формулы I) в таблетировочном прессе.
Состав 5 - раствор для инъекций.
Соединение по настоящему изобретению формулы I может быть растворено или суспендировано в инъекционной водной среде на основе забуференного стерильного физиологического раствора в концентрации приблизительно 5 мг/мл.
- 26 029827
Состав 6 - для местного нанесения.
Стеариловый спирт (250 г) и белый вазелин (250 г) могут быть расплавлены при температуре приблизительно 75°С и затем в полученный расплав может быть добавлена смесь соединения по настоящему изобретению формулы I (50 г), метилпарабена (0,25 г), пропилпарабена (0,15 г), лаурилсульфата натрия (10 г) и пропиленгликоля (120 г), растворенная в воде (приблизительно 370 г), и полученную смесь перемешивают до тех пор, пока она не застынет.
Способы лечения
Соединение по настоящему изобретению может быть использовано в качестве терапевтического средства для лечения состояний у млекопитающих, которые причинно связаны с или могут быть приписаны аберрантной активности 1ΆΚ. В частности, состояний, связанных с аберрантной активностью 1ΆΚ1 и/или ΤΥΚ2. В соответствии с этим соединения и фармацевтические композиции по настоящему изобретению находят применение в качестве терапевтических средств для профилактики и/или лечения аллергических заболеваний, воспалительных заболеваний, аутоиммунных заболеваний, пролиферативных заболеваний, отторжения трансплантата, заболеваний, связанных с ухудшением обновления хряща, врожденными пороками развития хряща; и заболеваний, связанных с гиперсекрецией 1Ь6 или гиперсекрецией интерферонов у млекопитающих, включая человека.
В одном аспекте настоящее изобретение относится к соединению по настоящему изобретению или фармацевтической композиции, содержащей соединение по настоящему изобретению, для применения в качестве лекарственного средства.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к соединению по настоящему изобретению или фармацевтической композиции, содержащей соединение по настоящему изобретению, для применения в получении лекарственного средства.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения млекопитающего, страдающего или имеющего риск наличия заболевания, описанного в настоящем описании, включающему введение эффективного для лечения состояния или предупреждения состояния количества одной или нескольких фармацевтических композиций, или соединений по настоящему изобретению, описанных в настоящем документе. В конкретном аспекте, настоящее изобретение относится к способу лечения млекопитающего, страдающего или имеющего риск развития аллергических заболеваний, воспалительных заболеваний, аутоиммунных заболеваний, пролиферативных заболеваний, отторжение трансплантата, заболеваний, связанных с ухудшением обновления хряща, врожденными пороками развития хряща, и/или заболеваний, связанных с гиперсекрецией 1Ь6 или гиперсекреции интерферонов.
В аспектах способов лечения настоящее изобретение относится к способам лечения и/или профилактики млекопитающего, восприимчивого к или страдающего аллергической реакцией, включающим введение эффективного для лечения состояния или предупреждения состояния количества одной или нескольких фармацевтических композиций или соединений по настоящему изобретению, как описано в настоящем документе. В конкретном варианте осуществления аллергическая реакция выбрана из аллергического заболевания дыхательных путей, синусита, экземы и крапивницы, пищевой аллергии и аллергии на яд насекомых.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к соединению по настоящему изобретению для применения в лечении и/или профилактике аллергических реакций. В конкретном варианте осуществления аллергическая реакция выбрана из аллергического заболевания дыхательных путей, синусита, экземы и крапивницы, пищевой аллергии и аллергии на яд насекомых.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к соединению по настоящему изобретению или к фармацевтической композиции, содержащей соединение по изобретению, для применения в получении лекарственного средства для лечения или профилактики аллергических реакций. В конкретном варианте осуществления аллергическая реакция выбрана из аллергического заболевания дыхательных путей, синусита, экземы и крапивницы, пищевой аллергии и аллергии на яд насекомых.
В дополнительных аспектах способа лечения настоящее изобретение относится к способам лечения и/или профилактики млекопитающего, восприимчивого к или страдающего воспалительным состоянием. Способы включают введение эффективного для лечения состояния или предупреждения состояния количества одной или нескольких фармацевтических композиций или соединений по настоящему изобретению, описанных в настоящем документе. В конкретном варианте осуществления воспалительное состояние выбрано из ревматоидного артрита, остеоартрита, аллергического заболевания дыхательных путей (например, астмы) и воспалительных заболеваний кишечника.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к соединению по настоящему изобретению для применения в лечении и/или профилактике воспалительного состояния. В конкретном варианте осуществления воспалительное состояние выбрано из ревматоидного артрита, остеоартрита, аллергического заболевания дыхательных путей (например, астмы) и воспалительных заболеваний кишечника.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к соединению по настоящему изобретению или фармацевтической композиции, содержащей соединение по изобретению, для применения в получении лекарственного средства для лечения и/или профилактики воспалительного состояния. В конкретном варианте осуществления воспалительное состояние выбрано из ревматоидного артрита, остеоартри- 27 029827
та, аллергического заболевания дыхательных путей (например, астмы) и воспалительных заболеваний кишечника.
В дополнительных аспектах способа лечения, настоящее изобретение относится к способам лечения и/или профилактики млекопитающего, восприимчивого к или страдающего аутоиммунным заболеванием. Способы включают введение эффективного для лечения состояния или предупреждения состояния количества одной или нескольких фармацевтических композиций или соединений по настоящему изобретению, описанных в настоящем документе. В конкретном варианте осуществления аутоиммунное заболевание выбрано из ХОЗЛ, астмы, системной красной волчанки, сахарного диабета Ι типа и воспалительного заболевания кишечника.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к соединению по настоящему изобретению для применения в лечении и/или профилактике аутоиммунных заболеваний. В конкретном варианте осуществления аутоиммунное заболевание выбрано из ХОЗЛ, астмы, системной красной волчанки, сахарного диабета Ι типа и воспалительного заболевания кишечника. В более конкретном варианте осуществления аутоиммунное заболевание представляет собой системную красную волчанку.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к соединению по настоящему изобретению или фармацевтической композиции, содержащей соединение по настоящему изобретению для применения в получении лекарственного средства для лечения и/или профилактики аутоиммунных заболеваний. В конкретном варианте осуществления аутоиммунное заболевание выбрано из ХОЗЛ, астмы, системной красной волчанки, сахарного диабета Ι типа и воспалительного заболевания кишечника.
В дополнительных аспектах способа лечения, настоящее изобретение относится к способам лечения и/или профилактики млекопитающего, восприимчивого к или страдающего пролиферативным заболеванием, указанные способы включают введение эффективного для лечения состояния или предупреждения состояния количества одной или нескольких фармацевтических композиций или соединений по настоящему изобретению, описанных в настоящем документе. В конкретном варианте осуществления пролиферативное заболевание выбрано из рака (например, солидных опухолей, таких как лейомиосаркома матки или рак предстательной железы), лейкоза (например, ЛМЬ, ЛЬЬ или СЬЬ), множественной миеломы и псориаза. В более конкретном варианте осуществления пролиферативное заболевание выбрано из миелофиброза, Т-клеточного острого лимфобластного лейкоза (Т-ЛЬЬ), множественной миеломы, хронического лимфоцитарного лейкоза (СЬЬ), диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы (ОЬВСЬ). рака поджелудочной железы, рака печени, гепатоцеллюлярной карциномы (НСС), рака легкого, рака молочной железы и рака толстой кишки.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к соединению по настоящему изобретению для применения в лечении и/или профилактике пролиферативного заболевания. В конкретном варианте осуществления пролиферативное заболевание выбрано из рака (например, солидных опухолей, таких как лейомиосаркома матки или рак предстательной железы), лейкоза (например, ЛМЬ, ЛЬЬ или СЬЬ), множественной миеломы и псориаза. В более конкретном варианте осуществления пролиферативное заболевание выбрано из миелофиброза, Т-клеточного острого лимфобластного лейкоза (Т-ЛЬЬ), множественной миеломы, хронического лимфоцитарного лейкоза (СЬЬ), диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы (ОЬВСЬ), рака поджелудочной железы, рака печени, гепатоцеллюлярной карциномы (НСС), рака легкого, рака молочной железы и рака толстой кишки.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к соединению по настоящему изобретению или фармацевтической композиции, содержащей соединение по настоящему изобретению, для применения в получении лекарственного средства для лечения и/или профилактики пролиферативного заболевания. В конкретном варианте осуществления пролиферативное заболевание выбрано из рака (например, солидных опухолей, таких как лейомиосаркома матки или рак предстательной железы), лейкоза (например, ЛМЬ, ЛЬЬ или СЬЬ), множественной миеломы и псориаза. В более конкретном варианте осуществления пролиферативное заболевание выбрано из миелофиброза, Т-клеточного острого лимфобластного лейкоза (Т-ЛЬЬ), множественной миеломы, хронического лимфоцитарного лейкоза (СЬЬ), диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы (ОЬВСЬ), рака поджелудочной железы, рака печени, гепатоцеллюлярной карциномы (НСС), рака легкого, рака молочной железы и рака толстой кишки.
В дополнительном способе аспектов лечения, настоящее изобретение относится к способам лечения и/или профилактики млекопитающего, восприимчивого или страдающего отторжением при трансплантации, указанные способы включают введение эффективного для лечения состояния или предупреждения состояния количества одной или нескольких фармацевтических композиций или соединений по настоящему изобретению, описанных в настоящем документе. В конкретном варианте осуществления отторжение при трансплантации представляет собой отторжение трансплантата органа.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к соединению по настоящему изобретению для применения в лечении и/или профилактике отторжения трансплантата. В конкретном варианте осуществления отторжение при трансплантации представляет собой отторжение трансплантата органа.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к соединению по настоящему изобретению или к фармацевтической композиции, содержащей соединение по настоящему изобретению, для применения в получении лекарственного средства для лечения и/или профилактики отторжения трансплантата.
- 28 029827
В конкретном варианте осуществления отторжение при трансплантации представляет собой отторжение трансплантата органа.
В способе аспекта лечения, настоящее изобретение относится к способу лечения и/или профилактики млекопитающего, восприимчивого к или страдающего заболеваниями, связанными с ухудшением обновления хряща, включающему введение терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению, или одну или несколько из фармацевтических композиций, описанных в настоящем документе.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к соединению по настоящему изобретению для применения в лечении и/или профилактике заболеваний, связанных с ухудшением обновления хряща.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к соединению по настоящему изобретению или фармацевтической композиции, содержащей соединение по настоящему изобретению, для применения в получении лекарственного средства для лечения и/или профилактики заболеваний, связанных с ухудшением обновления хряща.
Настоящее изобретение также относится к способу лечения и/или профилактики врожденных пороков развития хряща, включающему введение эффективного количества одной или нескольких фармацевтических композиций или соединений по настоящему изобретению, описанных в настоящем документе.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к соединению по настоящему изобретению для применения в лечении и/или профилактике врожденных пороков развития хряща.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к соединению по настоящему изобретению или фармацевтической композиции, содержащей соединение по настоящему изобретению, для применения в получении лекарственного средства для лечения и/или профилактики врожденных пороков развития хряща.
В дополнительных аспектах способа лечения, настоящее изобретение относится к способам лечения и/или профилактики у млекопитающего, восприимчивого к или страдающего заболеваниями, связанными с гиперсекрецией ]Ъ6, указанные способы включают введение эффективного для лечения состояния или предупреждения состояния количества одной или нескольких фармацевтических композиций или соединений по настоящему изобретению, описанных в настоящем документе. В конкретном варианте осуществления заболевание, связанное с гиперсекрецией ]Ъ6, выбрано из болезни Кастлемана и мезангиального пролиферативного гломерулонефрита.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к соединению по настоящему изобретению для применения в лечении и/или профилактике заболеваний, связанных с гиперсекрецией Ш6. В конкретном варианте осуществления заболевание, связанное с гиперсекрецией ]Ъ6, выбрано из болезни Кастлемана и мезангиального пролиферативного гломерулонефрита.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к соединению по настоящему изобретению или фармацевтической композиции, содержащей соединение по настоящему изобретению, для применения в получении лекарственного средства для лечения и/или профилактики заболеваний, связанных с гиперсекрецией Ш6. В конкретном варианте осуществления заболевание, связанное с гиперсекрецией ]Ъ6, выбрано из болезни Кастлемана и мезангиального пролиферативного гломерулонефрита.
В дополнительных аспектах способа лечения, настоящее изобретение относится к способам лечения и/или профилактики у млекопитающего, восприимчивого к или страдающего заболеваниями, связанными с гиперсекрецией интерферонов, включающим введение эффективного для лечения состояния или предупреждения состояния количества одной или нескольких фармацевтических композиций или соединений по настоящему изобретению, описанных в настоящем документе. В конкретном варианте осуществления заболевание, связанное с гиперсекрецией интерферонов, выбрано из системной и кожной красной волчанки, волчаночного нефрита, дерматомиозита, синдрома Шегрена, псориаза и ревматоидного артрита.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к соединению по настоящему изобретению для применения в лечении и/или профилактике заболеваний, связанных с гиперсекрецией интерферонов. В конкретном варианте осуществления заболевание, связанное с гиперсекрецией интерферонов, выбрано из системной и кожной красной волчанки, волчаночного нефрита, дерматомиозита, синдрома Шегрена, псориаза и ревматоидного артрита.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к соединению по настоящему изобретению или фармацевтической композиции, содержащей соединение по настоящему изобретению, для применения в получении лекарственного средства для лечения и/или профилактики заболеваний, связанных с гиперсекрецией интерферонов. В конкретном варианте осуществления заболевание, связанное с гиперсекрецией интерферонов, выбрано из системной и кожной красной волчанки, волчаночного нефрита, дерматомиозита, синдрома Шегрена, псориаза и ревматоидного артрита.
В качестве дополнительного аспекта настоящего изобретения предлагается соединение по настоящему изобретению для применения в качестве фармацевтического препарата, главным образом, для лечения или профилактики вышеупомянутых состояний и заболеваний. Кроме того, в настоящем описании предлагается применение соединений по настоящему изобретению для получения лекарственного средства для лечения и/или предотвращения одного из вышеупомянутых состояний и заболеваний.
- 29 029827
Конкретная схема способа по настоящему изобретению включает введение субъекту, страдающему заболеванием, связанным с воспалением, эффективного количества соединения по настоящему изобретению на протяжении периода времени, достаточного для снижения уровня воспаления у субъекта, и предпочтительно устранения процессов, ответственных за указанное воспаление. Отдельный вариант осуществления способа включает введение эффективного количества соединения по настоящему изобретению пациенту, страдающему или восприимчивому к развитию ревматоидного артрита, на протяжении периода времени, достаточного для уменьшения или предотвращения, соответственно, воспаления в суставах указанного пациента, и предпочтительно устранения процессов, ответственных за указанное воспаление.
Дополнительная конкретная схема способа по настоящему изобретению включает введение субъекту, страдающему патологическим состоянием, характеризуемым деградацией хряща или суставов (например, ревматоидный артрит и/или остеоартрит), эффективного количества соединения по настоящему изобретению на протяжении периода времени, достаточного для уменьшения или предпочтительно прекращения самовоспроизводящихся процессов, ответственных за указанную деградацию. Конкретный вариант осуществления способа включает введение эффективного количества соединения по настоящему изобретению пациенту, страдающему или восприимчивому к развитию остеоартрита, на протяжении периода времени, достаточного для уменьшения или предотвращения соответственно деградации хряща в суставах указанного пациента, и предпочтительно прекращения самовоспроизводящихся процессов, ответственных за указанную деградацию. В конкретном варианте осуществления указанное соединение может проявлять анаболические и/или противокатаболические свойства в отношении хряща.
Уровни дозы инъекции колеблются от приблизительно 0,1 мг/кг/ч до по меньшей мере 10 мг/кг/ч, все в течение периода времени от приблизительно 1 до приблизительно 120 ч и в особенности в течение периода времени 24-96 ч. Для достижения адекватных уровней устойчивого состояния может быть также введен болюс с предварительной нагрузкой от приблизительно 0,1 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг или больше. Максимальная общая доза, как предполагают, не превышает приблизительно 2 г/день для пациента-человека с массой тела 40-80 кг.
Для профилактики и/или лечения длительных (хронических) состояний, таких как дегенеративные состояния, программа лечения растягивается на многие месяцы или годы, поэтому пероральное введение дозы является предпочтительным для удобства пациентов и для переносимости пациентами. При пероральном введении дозы одна-пять и особенно две-четыре и обычно три пероральные дозы в день представляют собой репрезентативные схемы. С использованием этих протоколов введения дозы, каждая доза обеспечивает от приблизительно 0,01 до приблизительно 20 мг/кг соединения по настоящему изобретению, где каждая из конкретных доз обеспечивает от приблизительно 0,1 до приблизительно 10 мг/кг и в особенности приблизительно 1 до приблизительно 5 мг/кг.
Дозы при трансдермальном введении, как правило, выбирают для обеспечения аналогичных или более низких уровней в крови, чем достигаются с использованием доз при инъекционном введении.
При использовании для профилактики возникновения состояния соединение по настоящему изобретению вводят пациенту с риском развития состояния, обычно по заключению и под наблюдением лечащего врача при уровнях доз, описанных выше. Пациенты с риском развития конкретного состояния обычно включают пациентов, которые имеют семейный анамнез этого состояния, или пациентов, которые были идентифицированы с помощью генетического тестирования и скрининга как особенно предрасположенные к развитию этого состояния.
Соединение по настоящему изобретению можно вводить в виде единственного активного средства или его можно вводить в комбинации с другими терапевтическими средствами, включая другие соединения, которые проявляют такую же или аналогичную терапевтическую активность и которые определены как безопасные и эффективные для такого комбинированного введения. В конкретном варианте осуществления совместное введение двух (или большего числа) средств предусматривает использование значительно более низких доз каждого из средств, тем самым снижая проявление побочных действий.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению или фармацевтическую композицию, содержащую соединение по настоящему изобретению, вводят в качестве лекарственного средства. В конкретном варианте осуществления указанная фармацевтическая композиция дополнительно содержит дополнительный активный ингредиент.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению вводят совместно с другим терапевтическим средством для лечения и/или предотвращения заболевания, сопровождающегося воспалением; конкретные средства включают, но ими не ограничиваются, иммунорегуляторные средства, например, азатиоприн, кортикостероиды (например, преднизолон или дексаметазон), циклофосфамид, циклоспорин А, такролимус, микофенолят мофетил, муромонаб-СО3 (ОКТ3, например, ортоколон®), АТС (антитимоцитарный глобулин), аспирин, ацетаминофен, ибупрофен, напроксен и пироксикам.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению вводят совместно с другим терапевтическим средством для лечения и/или предотвращения артрита (например, ревматоидного артрита); конкретные средства включают, но ими не ограничиваются, анальгетики, нестероидные про- 30 029827
тивовоспалительные лекарственные средства (Ν8ΑΙΌ8), стероиды, синтетические ПМАКО8 (болезньмодифицирующие антиревматические лекарственные средства) (например, но ими не ограничиваются, метотрексат, лефлуномид, сульфасалазин, ауранофин, натрий ауротиомалат, пеницилламин, хлорохин, гидроксихлорохин, азатиоприн и циклоспорин), и биологические ПМАК08 (например, но ими не ограничиваются, инфликсимаб, этанерцепт, адалимумаб, ритуксимаб и абатацепт).
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению вводят совместно с другим терапевтическим средством для лечения и/или профилактики пролиферативных заболеваний; конкретные средства включают, но ими не ограничиваются, метотрексат, лейковорин, адриамицин, пренизон, блеомицин, циклофосфамид, 5-фторурацил, паклитаксел, доцетаксел, винкристин, винбластин, винорелбин, доксорубицин, тамоксифен, торемифен, мегестрол ацетат, анастрозол, госерелин, моноклональное антитело против НЕК2 (например, Герцептин™), капецитабин, ралоксифен гидрохлорид, ингибиторы ЕОРК (например, пресса®, тарцева®, эрбитукс®), ингибиторы УЕСР (например, авастин™), ингибиторы протеасомы (например, велкаде™), гливек® и ингибиторы 1ΐ5ρ90 (например, 17-ЛЛС). Кроме того, соединение по настоящему изобретению можно вводить в комбинации с другими видами лечениями, включая, но ими не ограничиваясь, лучевую терапию или хирургическое вмешательство. В конкретном варианте осуществления пролиферативное заболевание выбрано из злокачественного новообразования, миелопролиферативного заболевания или лейкоза.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению вводят совместно с другим терапевтическим средством для лечения и/или предотвращения аутоиммунных заболеваний, конкретные средства включают, но ими не ограничиваются, глюкокортикоиды, цитостатические средства (например, аналоги пурина), алкилирующие средства, (например, азотистые производные иприта (циклофосфамид), нитрозомочевины, соединения платины, и другие), антиметаболиты (например, метотрексат, азатиоприн и меркаптопурин), цитотоксические антибиотики (например, дактиномицин, антрациклины, митомицин С, блеомицин и митрамицин), антитела (например, моноклональные антитела против СЭ20. против СЭ25 или против СЭ3 (ОТКЗ), атгам® и тимоглобулин®), циклоспорин, такролимус, рапамицин (сиролимус), интерфероны (например, ΙΡΝ-β), ΤΝΡ-связывающие белки (например, инфликсимаб (ремикейд™), зтанерцепт (энбрел™), или адалимумаб (хумира™)), микофенолят, финголимод и мириоцин.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению вводят совместно с другим терапевтическим средством для лечения и/или предотвращения отторжения трансплантата, конкретные средства включают, но ими не ограничиваются, ингибиторы кальциневрина (например, циклоспорин или такролимус (ΡΚ506)), ингибиторы тТОК (например, сиролимус, эверолимус), противопролиферативные средства (например, азатиоприн, микофенольная кислота), кортикостероиды (например, преднизолон, гидрокортизон), антитела (например, моноклональные антитела против рецептора 1Ь-2Ка, басиликсимаб, даклизумаб), поликлональные антитела против Т-клеток (например, антитела против тимоцитного глобулина (АТС), антитела против лимфоцитного глобулина (ЛЬС)).
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению вводят совместно с другим терапевтическим средством для лечения и/или предотвращения астмы, и/или ринита, и/или СОРЭ, конкретные средства включают, но ими не ограничиваются, агонисты бета2-адренорецептора (например, сальбутамол, левалбутерол, тербуталин и битолтерол), эпинефрин (ингаляционный или таблетки), антихолинергические средства (например, бромид ипратропия), глюкокортикоиды (пероральные или ингаляционные), в2-агонисты пролонгирующего действия (например, салметерол, формотерол, бамбутерол и пероральный албутерол пролонгированного действия), комбинации ингаляционных стероидов и бронходилататоров длительного действия (например, флутиказон/салметерол, будесонид/формотерол), антагонисты лейкотриенов и ингибиторы синтеза лейкотриенов (например, монтелукаст, зафирлукаст и зилеутон), ингибиторы высвобождения медиаторов (например, кромогликат и кетотифен), биологические регуляторы 1дЕ ответа (например, омализумаб), антигистамины (например, цетеризин, циннаризин, фексофенадин) и сосудосуживающие средства (например, оксиметазолин, ксилометазолин, нафазолин и трамазолин).
Кроме того, соединение по настоящему изобретению можно вводить в комбинации с экстренной терапией при астме и/или СОРЭ, такие терапии включают введение кислорода или кислородно-гелиевой смеси, ингаляцию аэрозоля сальбутамола или тербуталина (необязательно в комбинации с антихолинергическим средством (например, ипратропий), системные стероиды (пероральное или внутривенное введение, например, преднизона, преднизолона, метилпреднизолона, дексаметазона или гидрокортизона), внутривенный сальбутамол, неспецифические бета-агонисты, инъекционные или ингаляционные (например, эпинефрин, изоэтарин, изопротеренол, метапротеренол), противохолинергические средства (внутривенно или ингаляция аэрозолем, например, гликопирролат, атропин, ипратропий), метилксантины (теофиллин, аминофиллин, бамифиллин), ингаляционные анестетики, которые оказывают бронхолитическое действие (например, изофлуран, галотан, энфлуран), кетамин и внутривенный сульфат магния.
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению вводят совместно с другим терапевтическим средством для лечения и/или предотвращения воспалительного заболевания
- 31 029827
кишечника (ГВО), конкретные средства включают, но ими не ограничиваются, глюкокортикоиды (например, преднизон, будесонид), синтетические модифицирующие заболевание, иммуномодулирующие средства (например, метотрексат, лефлуномид, сульфасалазин, месалазин, азатиоприн, б-меркаптопурин и циклоспорин) и биологические модифицирующие заболевание, иммуномодулирующие средства (инфликсимаб, адалимумаб, ритуксимаб и абатацепт).
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению совместно вводят с другим терапевтическим средством для лечения и/или предотвращения §ЬЕ (системная эриматозная волчанка); конкретные средства включают, но ими не ограничиваются, болезнь-модифицирующие антиревматические лекарственные средства (ОМАКО), такие как противомалярийные средства (например, плаквенил, гидроксихлорохин), иммунодепрессанты (например, метотрексат и азатиоприн), циклофосфамид и микофенольная кислота; иммунодепрессивные лекарственные средства и анальгетики, такие как нестероидные противовоспалительные лекарственные средства, опиаты (например, декстропропоксифен и кокодамол), опиоиды (например, гидрокодон, оксикодон, МС-контин или метадон) и фентаниловый трансдермальный пластырь (дюрогезик).
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению вводят совместно с другим терапевтическим средством для лечения и/или профилактики псориаза, конкретные средства включают, но ими не ограничиваются, местные лечения, такие как растворы для ванн, увлажнители, лечебные кремы и мази, содержащие деготь, дитранол (антралин), кортикостероиды, подобные дезоксиметазону (топикорт™), флуоцинонид, аналоги витамина Ό3 (например, кальципотриол), аргановое масло и ретиноиды (этретинат, ацитретин, тазаротен), системные терапии, такие как метотрексат, циклоспорин, ретиноиды, тиогуанин, гидроксимочевина, сульфасалазин, микофенолят мофетил, азатиоприн, такролимус, сложные эфиры фумаровой кислоты или биопрепараты, такие как амевив™, энбрел™, хумира™, ремикейд™, раптива™ и устекинумаб (блокатор ГЬ-12 и ГВ-23). Кроме того, соединение по настоящему изобретению можно вводить в комбинации с другими терапиями, включая, но ими не ограничиваясь, светолечение или фотохимиотерапию (например, сочетание светочувствительного псоралена с облучением УФ-лучами большой длины волн (А) (РИУА)).
В одном из вариантов осуществления соединение по настоящему изобретению вводят совместно с другим терапевтическим средством для лечения и/или профилактики аллергических реакций, в частности, средства включают, но ими не ограничиваются: антигистамины (например, цетиризин, дифенгидрамин, фексофенадин, левоцетиризин), глюкокортикоиды (например, преднизолон, бетаметазон, беклометазон, дексаметазон), эпинефрин, теофиллин или антилейкотриены (например, монтелукаст или зафирлукаст), антихолинергики и деконгестанты.
Как очевидно специалистам в данной области, при совместном введении возможно использование любого способа доставки двух или нескольких терапевтических средств пациенту, как часть одной и той же схемы лечения. Несмотря на то что два или несколько средств могут вводиться одновременно в виде одного состава это не является существенным. Эти средства могут быть введены в различных составах и в разное время.
Способы химического синтеза Общее
Соединения по настоящему изобретению могут быть получены из легкодоступных исходных веществ, используя нижеприведенные общие методы и способы. Следует иметь в виду, что там, где представлены типичные или предпочтительные условия проведения способа (т.е. температуры реакции, время, мольные отношения реагирующих веществ, растворители, давления и тому подобное), могут быть также использованы и другие условия осуществления способа, если не оговорено иначе. Оптимальные условия проведения реакции могут варьироваться в зависимости от использования конкретных реагирующих веществ и растворителей, тем не менее, вышеуказанные условия могут быть определены специалистом в данной области техники, пользуясь обычными методами оптимизации.
Кроме того, как очевидно специалистам в данной области, для предотвращения протекания нежелательных реакций с участием некоторых функциональных групп возможно использование обычных защитных групп. Выбор подходящей защитной группы для конкретной функциональной группы, а также подходящих условий для защиты и снятия защиты хорошо известны в данной области (Огеепе, Τ.\.; \\'иК Р.О.М., 1991).
Нижеследующие способы подробно представляют способы получения соединения по настоящему изобретению, определенного в данном контексте выше, и сравнительных примеров. Соединения по настоящему изобретению могут быть получены из известных или коммерчески доступных исходных веществ и реагентов специалистом в данной области органического синтеза.
Все реагенты представляли собой продукты торгового качества и их использовали без дополнительной очистки, если не оговорено особо. Для реакций, проводимых в инертной атмосфере, использовали коммерчески доступные безводные растворители. Если не оговорено иначе, во всех других случаях использовали растворители реактивной чистоты. Колоночную хроматографию осуществляли на силикагеле б0 (35-70 мкм). Тонкослойную хроматографию осуществляли, используя пластины, предварительно
- 32 029827
покрытые силикагелем Р-254 (толщина 0,25 мм). Спектры 2Н-ЯМР регистрировали на ЯМРспектрометре Вгикег ΏΡΧ 400 (400 МГц или на ЯМР-спектрометре Вгикег Абуапсе 300 (300 МГц). Химические сдвиги (δ) для спектров Υ-ЯМР приводятся в ч./млн (м.д.) относительно тетраметилсилана (δ 0,00) или пика соответствующего остаточного растворителя, т.е. СНС13 (δ 7,27), в качестве внутреннего стандарта. Мультиплетность приведена в виде синглета (с), дублета (д), триплета (т), квартета (кв), квинтиплета (квин), мультиплета (м) и уширенного сигнала (уш). Спектры МС с электрораспылением получали на платформе ЖХ/МС-спектрометра Ша1ег8 или с СВЭЖХ на Ша1ег8 Асцийу Н-С1১ ИРЬС совместно с масс-спектрометрическим детектором Ша1ег8 М১ беίесίο^ 3100. Использовали колонки: Ша1ег8 Асцийу ИРЬС ВЕН С18 1,7 мкм, 2,1 мм в.д.х50 мм длина, Ша1ег8 Асцийу ИРЬС ВЕН С18 1,7 мкм, 2,1 мм
в.д.х30 мм длина, или Ша1ег8 Х1егга М3 5 мкм С18, 100x4,6 мм. Во всех методах использовали или градиенты МеСИ/Н2О (Н2О содержит или 0,1% ТРА или 0,1% ΝΗ3) или градиенты МеОН/Н2О (Н2О содержит 0,05% ТРА). Микроволновый нагрев проводили с помощью микроволнового реактора Вкладе 1пШаίΘΓ.
Очистку препаративной ВЭЖХ проводили с использованием масс-направленной системы автоматической очистки в сочетании с одинарным квадрупольным масс-спектрометром Ζρ. Все очистки ВЭЖХ проводили с градиентом Н2О (различные рН)/МеСИ. Разделения препаративной ВЭЖХ в основных условиях, как правило, проводили с использованием предколонки ВЕН ХВыдбе С18 (δ мкм, 19x5 мм) и ВЕН ХВг1§бе С18 (δ мкм, 19x100 мм). Разделения в кислых условиях, как правило, проводили с использованием предколонки С8Н Зе1еО; С18 (δ мкм, 19x5 мм) и С8Н 3е1еО; С18 (δ мкм, 19x100 мм). Фокусирующий градиент составлял от х% до х+25% ацетонитрила в воде в течение 5 мин с временем цикла 10 мин. Скорость потока в колонке была 20 мл/мин. Объем впрыска составлял от 200 до 750 мкл. Капиллярный делитель потока использовали для отвода потока после разделительной колонки в масс-спектрометр, который разбавляли 1 мл/мин подпиточного потока. Подпиточный поток представляет собой 0,1% муравьиной кислоты в метаноле. Все образцы очищали с помощью масс-направленного сбора фракций Шаίе^8.
Таблица I
Перечень сокращений, используемых в экспериментальном разделе
Сокращение
АсОН
АТФ
ΒΙΝΑΡ
ушир.с ВгеббрНоз
Определение
уксусная кислота
аденозинтрифосфат
2,2'-бис(дифенилфосфино)-1,1'-бинафтил Уширенный синглет
2-(дициклогексилфосфино)3,6-диметокси2',4',6'-триизопропил-1,1'-бифенил
- 33 029827
В5А бычий сывороточный альбумин
С'Фа1 коммерчески доступный
Конц. концентрированный
Соед. соединение
ОСМ дихлорметан
ΏΜΕ диметилформамид
ДМСО диметилсульфоксид
ϋΡΡΑ дифенилфосфорилазид
ϋοο'ά полностью описанный выше
ϋΤΤ дитиотреитол
ΕϋΤΑ этилендиаминтетрауксусная кислота
Ε6ΤΑ этиленгликоль тетрауксусная кислота
ЕЪО диэтиловый эфир
ЕОзВ триэтилборан
Ε03Ν триэтиламин
ЕЕОАс этилацетат
ЕООН этанол
ЕАС5 сортировка клеток с активированной флуоресценцией
ЕВ 5 фетальная бычья сыворотка
г грамм
ч час
НЕРЕ5 4-(2-гидроксиэтил)-1пиперазинэтансульфонова кислота
ВЭЖХ высокоэффективная жидкостная хроматография
Промеж. .соед. Промежуточное соединение
ФРгОН изопропанол
м мультиплет
М масса
МС метилцеллюлоза
МеСЫ ацетонитрил
Ме1 йодметан
МеЫН2 метиламин
МеОН метанол
мг миллиграмм
- 34 029827
мин минута
мл миллилитр
ммоль миллимоль
МОРЗ 3-(Ν-морфолино)пропансульфоновая кислота
МС опр. измеренная масс-спектрометрией молекулярная масса
Сп. способ
ММ молекулярная масса
N03 Ν-хлорсукцинимид
ΝΜΡ Ν-метилпирролидон
ЯМР ядерный магнитный резонанс
РВЗ Фосфатно-солевой буферный раствор
рВЗК фагмида рВ1иезсг1рб
Ρά (ОАс) 2 ацетат палладия(II)
Р0(РРЬ.з) 4 тетракис(трифенилфосфин)палладий (0)
Ρά2 (бЬа) з трис(дибензилиденацетон)дипалладий (0)
Р0С12(άρρί).ОСМ [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен] дихлорпалладий(II), комплекс с дихлорметаном
ΡϋΧ ксенотрансплантаты, полученные из тканей пациента
ПЭТ позитронно-эмиссионная топография
РМВ пара-метоксибензил
ррт Части на миллион (м.д.)
р-Тз0Н.Н20 моногидрат пара-толуолсульфоновой кислоты
кт Комнатная температура
с синглет
нас. насыщенный
3ίΟ2 диоксид кремния
Исх.в. исходное вещество
ТРА трифторуксусная кислота
ТНР тетрагидрофуран
ХапбрПоз 4,5-бис(дифенилфосфино)-9,9-диметилксантен
ХРПоз 2-дициклогексилфосфино-2', 4 ', б ' триизопропилбифенил
Синтетическое получение соединения по настоящему изобретению.
Пример 1. Синтез промежуточных соединений по настоящему изобретению.
1.1. Синтез бис-(4-метоксибензил)амина (промежуточное соединение 1)
ΝΗ?
О
п-Анисальдегид (411 ммоль), 4-метоксибензиламин (411 ммоль) и толуол (500 мл) объединяли в круглодонной колбе, снабженной холодильником и ловушкой Дина-Старка. Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 1 ч, в течение которого воду удаляли из реакционной смеси. Реакционную смесь охлаждали и концентрировали. Остаток растворяли в МеОН (120 мл). Смесь охлаждали до температуры 5°С и добавляли порциями в течение 45 мин №ВН| (205 ммоль). Реакционную смесь медленно нагревали до температуры кипения с обратным холодильником. Через 2 ч при кипячении с обратным холодильником реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали. Остаток растворяли в ЕЮАс. Органический слой промывали (3хН2О и насыщенный солевой раствор), сушили (№2ЗО4) и концентрировали с получением желаемого продукта.
- 35 029827
1.2. Синтез (6-бром-1-метил-1Н-бензоимидазол-4-ил)-бис-(4-метоксибензил)амина (промежуточное соединение 2)
Стадия ΐ: 5-бром-1,3-дифтор-2-нитробензол.
Раствор 4-бром-2,6-дифторанилина (240 ммоль) в АсОН (150 мл) по каплям добавляли к суспензии \аВО3.4 Н2О (325 ммоль) в АсОН (450 мл) при температуре 70°С в течение 30 мин. Другие 2080 ммоль ΝαΒΟ3.4 Н2О добавляли в течение 5 ч к смеси. В течение этого периода смесь перемешивали при температуре 70°С. Смесь выливали в воду и экстрагировали Εί2Ο. Органический слой объединяли с другим раствором Εί2Ο, полученным из другой реакции с использованием тех же условий, описанных выше. Смесь концентрировали. Образовался осадок, и его отделяли фильтрацией. Фильтрат концентрировали с получением желаемого продукта после колоночной флэш-хроматографии (8ΐΟ2, петролейный эфир).
1.2.2. Стадия ΐΐ: (5-бром-3-фтор-2-нитрофенил)метиламин.
2 М ΜοΝΗ2 в ΤΗΡ (82 мл) добавляли по каплям к раствору 5-бром-1,3-дифтор-2-нитробензола (164 ммоль) и С§2СО3 (197 ммоль) в ΤΗΡ (1 л). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч, а затем при комнатной температуре в течение 1 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток разделяли между ЕЮЛс и Н2О. Две фазы разделяли и органический слой сушили (Να28Ο4) и концентрировали с получением желаемого продукта.
1.2.3. Стадия ΐΐΐ: 5-бром-Н^бис-(4-метоксибензил)-№-метил-2-нитробензол-1,3-диамин.
Смесь бис-(4-метоксибензил)амина (346 ммоль), 5-бром-3-фтор-^метил-2-нитроанилина (297 ммоль) и Εί3Ν (891 ммоль) перемешивали при 120°С в течение 16 ч. Смесь затем охлаждали. Сырой продукт объединяли с другим, полученным по тому же способу, описанному выше. Полученную смесь разбавляли ЕЮЛс и промывали (2x0,2 М НС1, Н2О и насыщ. \аНСО3). Органическую фазу сушили (Ж28О4) и концентрировали с получением желаемого продукта.
1.2.4. Стадия ίν: 5-бром^^-бис-(4-метоксибензил)-№'-метил-бензол-1,2,3-триамин.
Смесь 5-бром^^-бис-(4-метоксибензил)-№-метил-2-нитробензол-1,3-диамина (170 ммоль), \Н)С1 (2038 ммоль) и Ζη (2034 ммоль) в 1:1 МеОН/ΤΗΡ (1 л) перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь охлаждали до 0°С и НСООН (20 мл) медленно добавляли. Смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 1 ч. Смесь фильтровали и объединяли с другой, полученной по методике, описанной выше. Полученную смесь концентрировали. Остаток растворяли в ОСМ. Органическую смесь промывали (насыщ. ΝΗ4Ο), сушили (Να28Ο4) и концентрировали с получением желаемого продукта.
1.2.5. Стадия ν: (6-бром-1-метил-1Н-бензоимидазол-4-ил)-бис-(4-метоксибензил)амин.
5-Бром-^^бис-(4-метоксибензил)-№'-метил-бензол-1,2,3-триамин (170 ммоль) растворяли в смеси
НС(ОЕ1)3 (100 моль) и МеСN (500 мл). Смесь перемешивали при температуре 85°С в течение 0,5 ч и затем при комнатной температуре в течение приблизительно 16 ч. Смесь объединяли с другой, полученной следуя той же процедуре, описанной выше. Полученную смесь концентрировали и остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (8Ю2, 15:85-60:40 ЕЮЛс/петролейный эфир) для получения желаемого продукта.
1.3. Синтез 5-{7-[бис-(4-метоксибензил)амино]-3-метил-3Н-бензоимидазол-5-илокси}-4метилпиридин-2-карбонитрила (промежуточное соединение 3)
1.3.1. Стадия ΐ: бис-(4-метоксибензил)-[1-метил-6-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)1Н-бензоимидазол-4-ил]амин.
Смесь (6-бром-1-метил-1Н-бензоимидазол-4-ил)-бис-(4-метоксибензил)амина (54 ммоль), бис(пинаколато)диборона (81 ммоль), РбС12 (бррЦЮСМ (2,71 ммоль) и ЕОЛс (162,5 ммоль) в ΌΜΡ (150 мл) обрабатывали ультразвуком в течение 5 мин в токе азота. Полученную смесь затем перемешивали при 110°С в круглодонной колбе, оборудованной холодильником в течение 1 ч. Смесь фильтровали через подушку целита и фильтрат концентрировали. Остаток растворяли в ЕЮЛс и органический слой промы- 36 029827
вали (Н2О), сушили Ща28О4) и концентрировали с получением желаемого продукта.
1.3.2. Стадия и: 5-{7-[бис-(4-метоксибензил)амино]-3-метил-3Н-бензоимидазол-5-илокси}-4метилпиридин-2-карбонитрил.
Н2О2 30 мас.% в Н2О (20 мл) добавляли к раствору Н^бис-(4-метоксибензил)-1-метил-6-(4,4,5,5тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-бензо[й]имидазол-4-амина (58,5 ммоль) в ΌΜΕ (600 мл) и смесь перемешивали в течение приблизительно 16 ч при комнатной температуре. Реакцию гасили 5%ным водным раствором №28О3. Смесь экстрагировали ЕЮЛс. Органический слой промывали (Н2О), сушили Ща28О4) и концентрировали с получением желаемого продукта.
1.4. Общий способ: орто-направленное йодирование
где может представлять собой: -Ν=, -СН=, -С(С1)=; Υ может представлять собой: -Ν=, -С(СЦ)=.
1.4.1. Способ А1.
Смесь аминоароматического или гетероароматического исходного материала (1 экв.), Ад28О4 (1 экв.) и 12 (1 экв.) в ЕЮН перемешивали при температуре в интервале от комнатной температуры до 50°С в течение периода времени, который может варьироваться от 1 до приблизительно 16 ч. Смесь фильтровали, концентрировали и разбавляли в органическом растворителе. Органическую смесь подвергали водной обработке. Растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографией с получением желаемого продукта.
1.4.2. Иллюстративный пример способа А1: синтез 4-амино-3-фтор-5-йод-бензонитрила (промежуточное соединение 4).
Смесь 4-амино-3-фторбензонитрила (147 ммоль), 12 (147 ммоль) и Ад28О4 (147 ммоль) в ЕЮН (700 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Смесь фильтровали и концентрировали. Остаток растворяли в ЕЮАс и промывали (насыщ. №282О3х3). Органический слой сушили (№28О4) и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (8Ю2, 95:5-70:30 циклогексан/ЕЮАс) с получением желаемого продукта.
1.4.3. Способ А2.
Смесь аминоароматического или гетероароматического исходного материала (1 экв.), Ад28О4 (3-4 экв.) и 12 (3-4 экв.) в ЕЮН перемешивали при температуре 70°С в течение 16 ч. Дополнительные эквиваленты 12 и Ад28О4 могут быть добавлены для увеличения конверсии. Смесь фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографией с получением желаемого продукта.
1.5. Иллюстративный пример способа А2: синтез 5-амино-6-фтор-4-иод-пиридин-2-карбонитрила (промежуточное соединение 5).
р р
Смесь промежуточного соединения 11 (3,62 ммоль), 12 (14,5 ммоль) и Ад28О4 (14,5 ммоль) в ЕЮН (200 мл) перемешивали при 70°С в течение 16 ч. Добавляли 5 дополнительных эквивалентов 12 и Ад28О4 и реакционную смесь перемешивали при 70°С в течение дополнительных 72 ч. Смесь фильтровали, концентрировали и очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (8Ю2, 20:80-40:60
ЕЮАс/циклогексан) с получением желаемого продукта.
1.6. Общий способ: введение нитрильной группы с помощью реакции Негиши
?А
N
где КА может представлять собой арил и гетероарил и X может представлять собой С1, Вг или I.
1.6.1. Способ В.
Смесь арил/гетероарил галогенида (1 экв.), цианида цинка (1-3 экв.), Рй(РРй3)4 (0,1-0,2 экв.) в ΌΜΕ, нагревали при 150°С в микроволновом аппарате в течение периода времени от 5 мин до 0,5 ч. Смесь фильтровали и концентрировали. Остаток разбавляли органическим растворителем. Органическую смесь подвергали обработке и растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток растирали в порошок или очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии с получением желаемого продукта.
- 37 029827
1.6.2. Иллюстративный пример способа В: синтез 5-фтор-4-метилпиридин-2-карбонитрила (промежуточное соединение 7)
Пробирку для проведения реакций под воздействием микроволнового излучения наполняли 2-хлор5-фтор-4-метилпиридином (5,5 ммоль), Ζη(ΟΝ)2 (16, 6 ммоль), Р6(РРй3)4 (1,1 ммоль) в ΌΜΡ (20 мл). Смесь перемешивали при температуре 15°С в течение 5 мин в микроволновом реакторе. Смесь объединяли с другими сырыми продуктами, полученными описанным выше способом. Полученную смесь фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток разбавляли ЕЮАс, промывали (насыщ. ИН4С1), сушили (Να2δΘ4) и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (δΐθ2, 5:95-15:85 ЕЮАс/петролейный эфир) с получением желаемого продукта.
1.1. Общий способ: сочетание Сузуки с метил бороновой кислотой
где может представлять собой -Ν=, -СН=, -С(С1)=; и Υ может представлять собой -Ν=, -С(СЫ)=; и X может представлять собой -I или -Вг.
1.7.1. Способ С.
Смесь ароматического/гетероароматического галогенида (1 экв.), метил бороновой кислоты (1,3-3 экв.), Р6(6рр1)С12.БСМ (0,11-0,2 экв.) и Сз2СО3 (3-5 экв.) в 1,4-диоксане перемешивали при 100°С. Смесь разбавляли органическим растворителем. Органическую смесь подвергали водной обработке, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэшхроматографией с получением желаемого продукта.
1.7.2. Иллюстративный пример способа С: синтез 5-амино-6-фтор-4-метилпиридин-2-карбонитрила (промежуточное соединение 12)
Смесь промежуточного соединения 5 (3 ммоль), метил бороновой кислоты (9,1 ммоль), Р6(6рр1)С12.БСМ (0,32 ммоль) и Сз2СО3 (15,2 ммоль) в 1,4-диоксане (8 мл) перемешивали при 105°С в течение 5 ч. Смесь разбавляли (ЕЮАс), промывали (насыщ. ΝαΙ 1СО3), сушили (Να2δΟ4) и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (διΟ2, 10:90-50:50 ЕЮАс/петролейный эфир) с получением желаемого продукта.
1.8. Синтез 6-бром-2-фтор-пиридин-3-иламина (промежуточное соединение 15)
Смесь 2-фторпиридин-3-амина (44,6 ммоль) и КОАс (44,6 ммоль) в АсОН перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь охлаждали до 0°С и добавляли по каплям Вг2 (44,6 ммоль). Смесь перемешивали при 0°С в течение 15 мин. Смесь концентрировали, и остаток растворяли в ЕЮАс/МеОН. Органический раствор промывали (насыщ. ΝαΙ 1СО3, насыщ. Иа^2О3), сушили (Να^δΟ,) и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии ^1О2, 100:0-80:20 петролейный эфир/ЕЮАс) с получением желаемого продукта.
1.9. Синтез 2-бром-6-фтор-4-метансульфонилфениламина (промежуточное соединение 16).
Смесь 2-фтор-4-метилсульфониланилина (22,76 ммоль) и КОАс (22,7 ммоль) в АсОН перемешивали при комнатной температуре.
Смесь охлаждали до 0°С и добавляли по каплям Вг2 (22,7 ммоль).
Смесь перемешивали в течение 30 мин при температуре 0°С.
Смесь концентрировали, и остаток растворяли в ЕЮАс.
Органическую смесь промывали (насыщ. ИаНСО3, насыщ. Иа^2О3), сушили (Иа^О4) и концентрировали с получением желаемого продукта.
1.10. Синтез 4-амино-3-этил-5-фтор-бензонитрила (промежуточное соединение 17).
- 38 029827
Смесь Ск2СО3 (46 ммоль) и Рб(брр1)С12.БСМ (0,76 ммоль) суспендировали в БМЕ (35 мл) и дегазировали азотом. Н2О (400 мкл), 1 М Εί3Β в ΤΗΕ (11,5 мл) и раствор промежуточного соединения 4 (7,63 ммоль) в БМЕ (5 мл) добавляли к смеси и реакционную смесь перемешивали при 60°С в течение 30 мин. Смесь концентрировали, и остаток растворяли в промывали (насыщ. №11СО3, Н2О), сушили
(№28О4) и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (8Ю2, 100:0-95:5 петролейный эфир/ΕίОΛс) с получением желаемого продукта.
1.11. Общий способ: превращение ИН2 в йодид
где К10 может представлять собой Ме или Εί.
1.11.1. Способ Б.
Концентрированную НС1 (6 экв.) добавляли по каплям к смеси аминоароматического/гетероароматического соединения (1 экв.) в Н2О при 0°С. Раствор NаNО2 (1,05 экв.) в Н2О добавляли по каплям. Полученную смесь перемешивали при 0°С в течение 15 мин. Раствор XI (1,05 экв.) в Н2О добавляли по каплям. Смесь перемешивали при 0°С в течение 15 мин и в течение 1 ч при комнатной температуре. Смесь экстрагировали органическим растворителем. После водной обработки и удаления растворителя при пониженном давлении, остаток подвергали растиранию или хроматографии с получением желаемого продукта.
1.11.2. Иллюстративный пример способа Б: синтез 5-йод-4-метилпиридин-2-карбонитрила (промежуточное соединение 18)
Концентрированную НС1 (0,9 мл) добавляли по каплям к смеси промежуточного соединения 8 (1,88 ммоль) в Н2О (10 мл) при 0°С с последующим добавлением по каплям раствора NаNО2 (1,97 ммоль) в Н2О (0,5 мл). Полученную смесь перемешивали при 0°С в течение 15 мин. Раствор Κ (1,97 ммоль) в Н2О (1 мл) добавляли по каплям. Полученную смесь перемешивали при 0°С в течение 15 мин и в течение 1 ч при комнатной температуре. Смесь экстрагировали ΕίОΛс. Органический слой промывали (Н2О), сушили и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (8Ю2, 100:0-75:25 циклогексан/ΕίОΛс) с получением желаемого продукта.
1.12. Синтез 6-бром-4-метилпиридин-3-иламина (промежуточное соединение 20)
Вг N Вг N
Смесь ИН4С1 (14,9 ммоль) и порошок железа (18,4 ммоль) в Н2О (5 мл) перемешивали при температуре 90°С. Добавляли порциями 2-бром-4-метил-5-нитропиридин (2,3 ммоль). Смесь перемешивали при температуре 90°С в течение 1 ч и 15 мин. Реакцию останавливали и экстрагировали ΕίОΛс. Органический слой сушили (№28О4) и концентрировали с получением желаемого продукта.
1.13. Синтез 4-амино-3-хлор-5-фтор-бензонитрила (промежуточное соединение 21)
-ΝΗ2 ΐ
Ν Ν'
Смесь 4-амино-3-фторбензонитрила (184 ммоль) и NС8 (276 ммоль) в АсОН (300 мл) перемешивали при температуре 70°С в течение приблизительно 16 ч. Смесь концентрировали. Н2О добавляли к остатку, и твердый продукт отфильтровывали и промывали (насыщ. №11СО3 и Н2О). Для удаления Н2О добавляли Τ Ί ΙΕ и удаляли при пониженном давлении с получением желаемого продукта.
1.14. Синтез 3-этил-4-гидрокси-бензонитрила (промежуточное соединение 22)
Концентрированную Н28О4 (3,4 мл) добавляли по каплям к раствору 4-амино-3-этилбензонитрила
- 39 029827
(6,84 ммоль) в Н2О (12 мл) при температуре 0°С. Раствор ΝαΝΟ2 (7,52 ммоль) в Н2О (δ мл) добавляли по каплям при 0°С к полученной смеси. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 30 мин и при 100°С в течение 2 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры и экстрагировали ЕЮАс. Органический слой промывали (Н2О), сушили и концентрировали с получением желаемого продукта.
1.15. Синтез 2-хлор-3-фтор-пиридин-4-иламина (промежуточное соединение 23)
1.15.1. Стадия 1: трет-бутил Ν- (2-хлор-3-фтор-4-пиридил)карбамат.
Дифенилфосфорилазид (ΏΡΡΑ) (129 ммоль) добавляли к смеси 2-хлор-3-фтор-пиридин-4карбоновой кислоты (85,7 ммоль), Εί3Ν (257 ммоль) в 1:1 трет-ВиОН/толуол (200 мл). Смесь нагревали при 110°С в течение 4 ч. Смесь разбавляли Н2О и экстрагировали ОСМ. Органический слой сушили (№28О4) и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (8Ю2, 100:0-80:20 ИСМ/ЕЮАс) с получением желаемого продукта трет-бутил \-(2-\_юр-3-фтор-4пиридил)карбамата.
1.15.2. Стадия ΐΐ: 2-хлор-3-фтор-пиридин-4-иламин.
Раствор трет-бутил ^(2-хлор-3-фтор-4-пиридил)карбамата (20,2 ммоль) в 1:2 ТРА/ИСМ (45 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч. Реакционную смесь концентрировали, и остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (8Ю2, 100:0-90:10 ИСМ/7н. ΝΙ13 в МеОН) с получением желаемого продукта.
1.16. Общий способ: реакция сочетания Бухвальда с (6-бром-1-метил-1Н-бензоимидазол-4-ил)-бис(4-метоксибензил)амином (промежуточное соединение 2)
где КА может представлять собой необязательно замещенный арил и гетероарил.
1.16.1. Способ Е1.
Смесь промежуточного соединения 2 (1 экв.), соответствующего анилина (1,1 экв.), С§2СО3 (2 экв.) и ΧΡΙιοδ (0,3 экв.) в сухом толуоле продували инертным газом перед добавлением Рй(ОЛс)2 (0,1-0,15 экв.). Смесь перемешивали при температуре 110°С в течение приблизительно 16 ч. Смесь разделяли между органическим растворителем и водной фазой. Два слоя разделяли и органический слой сушили и концентрировали. В качестве альтернативы реакционную смесь можно фильтровать и концентрировать. Остаток оставляли без дополнительной очистки или очищали с помощью хроматографии с получением желаемого продукта.
1.16.2. Иллюстративный пример способа Е1: синтез 5-{7-[бис-(4-метоксибензил)амино]-3-метил3Н-бензоимидазол-5-иламино}-4-этилпиридин-2-карбонитрила (промежуточное соединение 24)
Смесь промежуточного соединения 2 (0,75 ммоль), промежуточного соединения 10 (0,79 ммоль), С§2СО3 (1,5 ммоль) и ΧΡΙιοδ (0,225 ммоль) в сухом толуоле (6,3 мл) продували аргоном перед добавлением Рй(ОАс)2 (0,075 ммоль). Смесь перемешивали при 110°С в течение приблизительно 16 ч. Смесь разбавляли Н2О и экстрагировали ИСМ. Органический слой промывали (насыщенный солевой раствор), сушили (№28О4) и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (8Ю2, 100:0-50:50 циклогексан/ЕЮАс) с получением желаемого продукта.
1.16.3. Способ Е2.
Смесь промежуточного соединения 2 (1 экв.), соответствующего анилина (1,1 экв.), Сδ2СΟ3 (4-5 экв.) и ΧρΙιοδ (0,4 экв.) в сухом толуоле продували инертным газом перед добавлением Ρά(ΟΑс)2 (0,2-0,3 экв.). Смесь перемешивали при 110°С в течение периода времени в интервале от 1 ч до 24 ч. Смесь разделяли между органическим растворителем и водной фазой. Два слоя разделяли и органический слой сушили и концентрировали. В качестве альтернативы реакционную смесь можно фильтровать и концентрировать. Остаток оставляли без дополнительной очистки или очищали с помощью хроматографии с получением желаемого продукта.
1.16.4. Иллюстративный пример способа Е2: синтез 5-{7-[бис-(4-метоксибензил)амино]-3-метил3Н-бензоимидазол-5-иламино}-4-метилпиридин-2-карбонитрила (промежуточное соединение 27)
- 40 029827
Смесь промежуточного соединения 2 (4 ммоль), промежуточного соединения 8 (4,3 ммоль), С§2СО3 (20 ммоль) и ХРЬо§ (1,6 ммоль) в сухом толуоле (35 мл) продували аргоном в течение 10 мин перед добавлением Рй(ОАс)2 (1,2 ммоль). Смесь перемешивали при температуре 110°С в течение приблизительно 16 ч. Смесь фильтровали через подушку целита и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (δΑΚ 98:2-25:75 циклогексан/ЕЮАс) с получением желаемого продукта.
1.16.5. Способ Е3.
Смесь промежуточного соединения 2 (1 экв.), анилина (1,1 экв.), ΒΙΝΑΡ (0,3 экв.), С§2СО3 (4 экв.) и Рй(ОАс)2 (0,2 экв.) в сухом 1,4-диоксане дегазировали инертным газом. Реакционную смесь перемешивали в течение периода времени от 4 до приблизительно 16 ч при температуре 100-110°С. Смесь разделяли между органическим растворителем и водной фазой. Два слоя разделяли и органический слой сушили и концентрировали. В качестве альтернативы реакционную смесь можно фильтровать и концентрировать. Остаток оставляли без дополнительной очистки или очищали с помощью хроматографии с получением желаемого продукта.
1.16.6. Иллюстративный пример способа Е3: синтез №-(2-фтор-4-метансульфонилфенил)-Ж,Жбис-(4-метоксибензил)-1-метил-1Н-бензоимидазол-4,6-диамина (промежуточное соединение 34)
Смесь промежуточного соединения 2 (1,48 ммоль), 2-фтор-4-метилсульфониланилина (1,58 ммоль), ΒΙΝΑΡ (0,47 ммоль), С§2СО3 (6,32 ммоль) и Рй(ОАс)2 (0,32 ммоль) в сухом 1,4-диоксане (15 мл) дегазировали азотом. Реакционную смесь перемешивали при 100°С в течение приблизительно 16 ч. Смесь разбавляли ЕЮАс и органический слой промывали (Н2О), сушили (№^О4) и концентрировали с получением желаемого продукта.
1.16.7. Способ Е4.
Смесь промежуточного соединения 2 (1 экв.), анилина (1,1 экв.), ВгеЦрйоз (0,1 экв.), С§2СО3 (5 экв.) и Рй(ОАс)2 (0,05 экв.) в сухом 1,4-диоксане дегазировали инертным газом. Реакционную смесь перемешивали в течение периода времени от 2 до приблизительно 8 ч при температуре 85-95°С. Смесь разделяли между органическим растворителем и водной фазой. Два слоя разделяли и органический слой сушили и концентрировали. В качестве альтернативы реакционную смесь можно фильтровать и концентрировать. Остаток оставляли без дополнительной очистки или очищали с помощью хроматографии с получением желаемого продукта.
1.16.8. Иллюстративный пример способа Е4: синтез №-(2,3-дигидро-1,4-бензодиоксин-6-ил)№,№-бис-[(4-метоксифенил)метил]-1-метилбензимидазол-4, 6-диамина (промежуточное соединение 78)
Смесь промежуточного соединения 2 (1,17 ммоль), 2,3-дигидро-1,4-бензодиоксин-6-амина (1,29 ммоль), ВгеЦрйоз (0,117 ммоль), С§2СО3 (6,32 ммоль) и Рй(ОАс)2 (0,058 ммоль) в сухом 1,4-диоксане (15 мл) дегазировали азотом. Реакционную смесь перемешивали при 90°С в течение приблизительно 5 ч. Смесь разбавляли ЕЮАс и органический слой промывали (Н2О), сушили (№^О4) и концентрировали с получением желаемого продукта.
1.17. Общий способ: метилирование продукта реакции Бухвальда
где КА может представлять собой необязательно замешенный арил и гетероарил.
1.17.1. Способ Г.
\аИ (60% в минеральном масле, 1,1-3 экв.) добавляли к раствору промежуточного соединения, полученного из реакции сочетания Бухвальда (1 экв.) в ТНР или ОМЕ при температуре 0°С. Смесь перемешивали при температуре 0°С в течение 30 мин. Добавляли МеI (1,1-3 экв.) и смесь перемешивали при
- 41 029827
комнатной температуре в течение периода времени в интервале от 1 до приблизительно 16 ч. Смесь разделяли между органическим растворителем и водной фазой. Два слоя разделяли и органический слой сушили и концентрировали. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле или использовали как таковой без дополнительной очистки.
1.17.2. Иллюстративный пример способа Р: синтез №-(2-фтор-4-метансульфонил-6-метилфенил)№,№-бис-(4-метоксибензил)-1,№-диметил-1Н-бензоимидазол-4,6-диамина (промежуточное соединение 37)
NаΗ (60% в минеральном масле, 6,76 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения 35 (2,25 ммоль) в ТНР (10 мл) при температуре 0°С. Смесь перемешивали при температуре 0°С в течение 30 мин. Добавляли МеХ (6,76 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение приблизительно 16 ч. Смесь разбавляли ЕЮАс и промывали Н20. Органический слой сушили (№2804) и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (8Ю2, 20:80-80:20 ЕЮАс/петролейный эфир) с получением желаемого продукта.
1.17.3. Иллюстративный пример способа Р: синтез №,№-бис-[(4-метоксифенил)метил]-№,1диметил^6-(2-метил-4-метилсульфонилфенил)бензимидазол-4,6-диамина (промежуточное соединение 49А) и №-(4-этилсульфонил-2-метилфенил)-№,№-бис-[(4-метоксифенил)метил]^6,1диметилбензимидазол-4,6-диамина (промежуточное соединение 49В)
NаΗ (60% в минеральном масле, 4,86 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения 36 (1,62 ммоль) в ТНР (10 мл) при 0°С. Смесь перемешивали при температуре 0°С в течение 30 мин. Добавляли МеТ (4,86 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь разбавляли ЕЮАс и промывали Н20. Органический слой сушили (№2804) и концентрировали. Колоночная флэшхроматография (8Ю2, 20:80-80:20 ЕЮАс/петролейный эфир) давала смесь целевого продукта (промежуточное соединение 49А, основной продукт) вместе с побочным продуктом (промежуточное соединение 49В, минорный продукт).
1.18. Синтез 4-{7- [бис-(4-метоксибензил)амино]-3 -метил-3Н-бензоимидазол-5-илокси}-3 -этилбензонитрила (промежуточное соединение 50).
Смесь промежуточного соединения 2 (0,4 ммоль), промежуточного соединения 22 (0,4 ммоль), Си! (0,06 ммоль) и С§2С03 (1 ммоль) в пиридине (2 мл) продували аргоном, закрывали герметично и нагревали в микроволновом реакторе в течение 3 ч при 200°С. Смесь разбавляли Н20 и экстрагировали ЕЮАс. Органический слой сушили и концентрировали с получением желаемого продукта.
1.19. Общий способ: реакция сочетания Ульмана между 5-{7-[бис-(4-метоксибензил)амино]-3метил-3Н-бензоимидазол-5-илокси}-4-метилпиридин-2-карбонитрилом (промежуточное соединение 3) и ароматическими или гетероароматическими галогенидами
где КА может представлять собой необязательно замещенный арил и гетероарил.
1.19.1. Способ О.
Смесь промежуточного соединения 3 (1 экв.), арилгалогенида (1,2-1,3 экв.), Си! (0,1-0,2 экв.), Ν,Νдиметилглицина (0,3-0,5 экв.) и С§2С03 (3 экв.) в 1:1 ОМР/1,4-диоксане продували инертным газом и перемешивали при 110°С в течение периода времени в интервале от 4,5 до 16 ч. Смесь фильтровали, разделяли между органическим растворителем и водной фазой. Два слоя разделяли и органический слой сушили и концентрировали. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле.
- 42 029827
1.19.2. Иллюстративный пример способа О: синтез 5-{7-[бис-(4-метоксибензил)амино]-3-метил-3Нбензоимидазол-5-илокси}-4-метилпиридин-2-карбонитрила (промежуточное соединение 51)
Смесь промежуточного соединения 3 (0,39 ммоль), промежуточного соединения 18 (0,47 ммоль), Си1 (0,08 ммоль), Ν,Ν-диметилглицина (0,2 ммоль) и Сз2СО3 (1,17 ммоль) в 1:1 ИМР/1,4-диоксане (4 мл) продували аргоном и перемешивали при температуре 110°С в течение приблизительно 16 ч в запаянной трубке. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через подушку целита. Фильтрат концентрировали. Добавляли воду и смесь экстрагировали ΕΏΛο. Органический слой промывали водой, сушили и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (8Ю2, 100:0-40:60 циклогексан^ЮЛс) с получением желаемого продукта.
1.20. Общий способ: реакция 8ΝΆγ между 5-{7-[бис-(4-метоксибензил)амино]-3-метил-3Нбензоимидазол-5-илокси}-4-метилпиридин-2-карбонитрилом (промежуточное соединение 3) и ароматическими или гетероароматическими галогенидами
где КА может представлять собой необязательно замещенный арил и гетероарил.
1.20.1. Способ Н.
Смесь промежуточного соединения 3 (1 экв.), арил/гетероарил галогенида (1,2-1,5 экв.) и К2СО3 (2 экв.) в ИМР перемешивали при 100°С в течение периода времени от 3 до приблизительно 16 ч. Смесь разбавляли ΕΏΑβ, промывали несколько раз Н2О, сушили и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии.
1.20.2. Иллюстративный пример способа Н: синтез 5-(7-[бис-(4-метоксибензил)амино]-3-метил-3Нбензоимидазол-5-илокси}-4-метилпиридин-2-карбонитрила (промежуточное соединение 51)
Смесь промежуточного соединения 3 (58 ммоль), промежуточного соединения 7 (70 ммоль) и К2СО3 (116 ммоль) в ИМР (160 мл) перемешивали при температуре 100°С. Через 3 ч дополнительно добавляли 7,35 ммоль промежуточного соединения 7 к реакционной смеси и смесь перемешивали в течение дополнительного 1 ч при 100°С. Полученную смесь разбавляли ΕΏΑβ, промывали несколько раз Н2О, сушили (Ыа28О4) и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (8Ю2, 15:85-35:75 ΕΐΟΑс/петролейный эфир) с получением желаемого продукта.
1.21. Общий способ: снятие защиты бис-РМВ
где КА может представлять собой необязательно замещенный арил и гетероарил; и -Ь- может представлять собой -ΝΙΙ-, -ЫМе- или -О-.
1.21.1. Способ 11.
Смесь защищенного бис-РМВ амина (1 экв.) в ТРА перемешивали при комнатной температуре в течение периода времени от 30 мин до приблизительно 16 ч. Температуру повышали до 50 или 60°С, и смесь дополнительно перемешивали в течение периода времени в интервале от 0,5 до 3 ч. Смесь подвергали обработке с использованием основного водного раствора и органического растворителя. Две фазы разделяли, и органический слой сушили и концентрировали. В качестве альтернативы, реакционную смесь можно сначала концентрировать и затем остаток подвергать вышеописанной обработке. Остаток, полученный от обработки, может быть очищен с помощью хроматографии на силикагеле или с помощью ТзоЫе® 8СХ-3 (ВиШ-ще) с ионообменной смолой, или храниться как таковой.
- 43 029827
1.21.2. Иллюстративный пример способа И: синтез Иб-(2-фтор-4-метансульфонил-6-метилфенил)1,Иб-диметил-1Н-бензоимидазол-4,6-диамина (промежуточное соединение 53)
Смесь промежуточного соединения 37 (0,33 ммоль) в ТРА (5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч и при 50°С в течение 0,5 ч. Смесь концентрировали. Остаток разделяли между насыщ. ИаНСО3 и ИСМ. Две фазы разделяли, и органический слой сушили (Иа28О4) и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (8Ю2, 20:80-100:0 ЕЮАс/петролейный эфир) с получением желаемого продукта.
1.21.3. Иллюстративный пример способа И: синтез И6,1-диметил-И6-(2-метил-4метилсульфонилфенил)бензимидазол-4,6-диамина (промежуточное соединение 56А) и Ν6-(4этилсульфонил-2-метилфенил)-И6,1 -диметилбензимидазол-4,6-диамина (промежуточное соединение 56В)
Смесь промежуточного соединения 49А и 49В (приблизительно 0,61 ммоль в целом) в ТРА (5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение приблизительно 16 ч и при температуре 50°С в течение 3 ч. Смесь концентрировали. Остаток разделяли между насыщ. ΝαΙ 1С(О и ИСМ. Две фазы разделяли и органический слой сушили (№28О4) и концентрировали. Колоночная флэш-хроматография (8Ю2, 20:80-100:0 ЕЮАс/петролейный эфир) давала смесь целевого продукта (промежуточное соединение 56А, основной продукт) вместе с побочным продуктом (промежуточное соединение 56В, минорный продукт), полученным при снятии защиты промежуточного соединения 49В.
1.21.4. Способ П.
Смесь защищенного бис-РМВ амина (1 экв.) в ИСМ/ТРА (отношение 3:1-1:1) перемешивали при комнатной температуре в течение периода времени от 20 мин до 3 ч. Смесь подвергали обработке с использованием основного водного раствора и органического растворителя. Две фазы разделяли, и органический слой сушили и концентрировали. В качестве альтернативы, реакционную смесь можно сначала концентрировать и затем остаток подвергать вышеописанной обработке. Остаток, полученный от обработки, может быть очищен с помощью хроматографии на силикагеле или с помощью ЬоЫе® 8СХ-3 (Вю1а§е) с ионообменной смолой, или храниться как таковой.
1.21.5. Иллюстративный пример способа П: синтез 5-(7-амино-3-метилбензимидазол-5-ил)окси-4метилпиридин-2-карбонитрила (соединение 28)
ТРА (55 мл) добавляли к раствору промежуточного соединения 51 (23,1 ммоль) в ОСМ (55 мл) при 0°С. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 мин. Добавляли толуол и смесь концентрировали. Остаток разделяли между ОСМ и насыщ. ΝαΙ 1СО3. Две фазы разделяли, и органический слой сушили (№25О4) и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной флэшхроматографии (8Ю2, 100:0-95:5 ЕЮАс/МеОН). Продукт, полученный из колонки, промывали ТНР с получением желаемого продукта (промежуточное соединение 79).
1.21.6. Способ В.
Смесь защищенного бис-РМВ амина (1 экв.) в ТРА перемешивали при комнатной температуре в течение периода времени от 30 мин до приблизительно 16 ч. Смесь разбавляли в органическом растворителе, и промывали с помощью основного водного раствора. Две фазы разделяли и органический слой сушили и концентрировали. Альтернативно, перед промыванием, реакционную смесь можно сначала концентрировать. Органический слой затем концентрировали, и остаток или очищали с помощью хроматографии на силикагеле или с помощью КОШТЕ® 8СХ-3 (Вю1а§е) с ионообменной смолой или исполь- 44 029827
зовали как таковой, без дополнительной очистки.
1.21.7. Иллюстративный пример способа 13: синтез 5-[(7-амино-3-метил-3Н-бензоимидазол-5ил)метиламино]-4-метилпиридин-2-карбонитрила (промежуточное соединение 62)
Раствор промежуточного соединения 41 (2,4 ммоль) в ТРА (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Смесь разбавляли (ЭСМ), промывали насыщ. \а11СО3 и затем 5н. \аО1 Н Два слоя разделяли и водный слой дополнительно экстрагировали ЭСМ. Органические слои объединяли, сушили (фильтрация через фазовый сепаратор) и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (8Ю2, 100:0-90:10 ЕЮАс/МеОН) с получением желаемого продукта.
1.22. Синтез 4-этил-6-метансульфонилпиридин-3-иламина (промежуточное соединение 70)
1.22.1. Стадия ΐ: 4-этил-2-метилсульфонил-5-нитро-пиридин.
Смесь 2-бром-4-этил-5-нитро-пиридина (4,35 ммоль) и метансульфината натрия (4,35 ммоль) в ДМСО (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Смесь выливали в воду со льдом и перемешивали до тех пор, пока лед не растает. Смесь фильтровали и твердое вещество (целевой продукт) собирали.
1.22.2. Стадия ίί: 4-этил-6-метилсульфонилпиридин-3-амин.
Смесь 4-этил-2-метилсульфонил-5-нитро-пиридина (4,1 ммоль), ΝΗ4Ο (26,65 ммоль) и порошок железа (33 ммоль) в Н2О (10 мл) перемешивали при температуре 90°С в течение 1 ч. Реакцию останавливали, фильтровали и экстрагировали ЕЮАс. Органический слой сушили (№28О4) и концентрировали с получением желаемого продукта.
1.23. Синтез 4-этил-5-йод-2-метилсульфонилпиридина (промежуточное соединение 74)
Раствор ΚΙ (15 ммоль) и NаNΟ2 (12 ммоль) в Н2О (1,8 мл) добавляли по каплям к смеси промежуточного соединения 70 (6 ммоль) и р-ТЮН-Н2О (18 ммоль) в МеСN (12 мл) поддерживая температуру от 10 до 15°С. Смесь перемешивали в течение 10 мин при температуре 10-15°С и затем при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь охлаждали до 0°С, нейтрализовали (насыщ. №НСО3) и экстрагировали (ОСМ). Органический слой сушили (№28О4) и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (8£О2, 70:30 петролейный эфир/ЕЮАс) с получением желаемого продукта.
Пример 2. Синтез соединений по настоящему изобретению.
2.1. Общий способ: ацилирование промежуточного амина с производным карбонилхлорида с получением конечного соединения
где КА может представлять собой необязательно замещенный арил и гетероарил; Б может представлять собой Ν^ NМе или О; Кв может представлять собой циклоалкил, ОМе.
2.1.1. Способ Л.
КвСОС1 (1 экв.) добавляли к раствору промежуточного амина (1 экв.) в ЭСМ/пиридине (соотношение от 2:1 до 5:1) при температуре 0°С. Смесь перемешивали в течение периода времени от 40 мин до 2 ч. Смесь разделяли между органическим растворителем и водным раствором. Две фазы разделяли, и органический слой сушили и концентрировали. Альтернативно, реакционную смесь можно концентрировать, не подвергая обработке. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле или препаративной ВЭЖХ или осаждением с использованием соответствующей смеси растворителей.
2.1.2. Иллюстративный пример способа Л: синтез ^(6-((6-циано-4-этилпиридин-3ил)(метил)амино)-1 -метил-1 Н-бензо[б]имидазол-4-ил)циклопропанкарбоксамида (соединение 1)
- 45 029827
Циклопропанкарбонил хлорид (0,39 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения 63 (0,39 ммоль) в соотношении 1:2 пиридин/ЭСМ (2,55 мл) при температуре 0°С. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 40 мин. Реакционную смесь концентрировали, и остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (δΐθ2, 100:0-97:3 ЭСМ/МеОН) с получением желаемого продукта.
2.1.3. Способ 12.
КВС(=О)С1 (1,5-3 экв.) добавляли к раствору промежуточного амина (1 экв.) в ЭСМ, затем пиридин (1,5-3 экв.). Смесь перемешивали в течение периода времени от 2 до приблизительно 16 ч. Смесь разделяли между органическим растворителем и водным раствором. Две фазы разделяли и органический слой сушили и концентрировали. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле, с помощью препаративной ВЭЖХ или осаждением с помощью соответствующей смеси растворителей.
2.1.4. Иллюстративный пример способа 12: синтез метил 6-((6-циано-4-этилпиридин-3ил)(метил)амино)-1-метил-1Н-бензо[б]имидазол-4-илкарбамата (соединение 4)
Метилхлорформиат (0,33 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения 63 (0,22 ммоль) в сухом ЭСМ (2,2 мл), затем пиридин (0,33 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь разделяли между Н2О и ЭСМ. Две фазы разделяли и органический слой промывали (насыщ. ЫаНСО3), сушили (Να2δΟ4) и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии ^1О2, 100:0-95:5 ЭСМ/МеОН) с получением желаемого продукта.
2.2. Общий способ: ацилирование промежуточного амина с производным карбоновой кислоты с получением конечного соединения
где может представлять собой необязательно замещенный арил и гетероарил; Ь может представлять собой: ИН, NМе или О; и КС может представлять собой циклоалкил, замещенный циклоалкил.
2.2.1. Способ К1.
(СОС1)2 (1,4-2 экв.) добавляли к раствору карбоновой кислоты (1,5-2 экв.) в ЭСМ при 0°С. Добавляли каталитическое количество диметилформамида, и реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение периода времени в интервале от 30 мин до 1 ч. Раствор промежуточного амина (1 экв.) и пиридина (2-4 экв.) в ЭСМ добавляли к смеси. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение периода времени от 30 мин до 2 ч. Смесь разделяли между органическим растворителем и водным раствором. Две фазы разделяли, и органический слой сушили и концентрировали. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле, с помощью препаративной ВЭЖХ или осаждением с помощью соответствующей смеси растворителей.
2.2.2. Иллюстративный пример способа К1: синтез (1К,2К)-^[6-[(6-циано-4-этил-3-пиридил)окси]1 -метилбензимидазол-4-ил]-2-фторциклопропанкарбоксамида (соединение 6)
(СОС1)2 (0,186 ммоль) добавляли к раствору ((1К,2К)-(-)-цис-2-фторциклопропанкарбоновой кислоты (СРешСо11ес1, лот п. 1241399, 0,186 ммоль) в ЭСМ (1 мл), с последующим добавлением ЭМР (2 кап- 46 029827
ли). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при 0°С в течение 1 ч. Раствор промежуточного соединения 65 (0,093 ммоль) и пиридина (0,186 ммоль) в ОСМ (1 мл) добавляли к смеси и реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Добавляли насыщ. NаΗСΟ3 и две фазы разделяли. Органический слой концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной флэшхроматографии (8ΐΟ2, 100:0-95:5 ^СМ/МеΟΗ) с получением желаемого продукта.
2.2.3. Иллюстративный пример способа К1: синтез (1К,2К')А'-|6-(Х,2-ди\1ети.ч-4метилсульфониланилино)-1 -метилбензимидазол-4-ил] -2-фторциклопропанкарбоксамида (соединение 26) и (1К,2К)-^[6-(4-этилсульфонил-^2-диметиланилино)-1 -метилбензимидазол-4-ил]-2фторциклопропанкарбоксамида (соединение 27)
(СЮСОг (0,82 ммоль) добавляли к раствору ((1К,2К)-(-)-цис-2-фторциклопропанкарбоновой кислоты (АВСК, лот п. 1242863, 0,92 ммоль) в ОСМ (1 мл), с последующим добавлением ОМЕ (1 капля). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при 0°С в течение 45 мин. Раствор смеси промежуточного соединения 56А и промежуточного соединения 56В (приблизительно 0,46 ммоль в целом) и пиридина (1,85 ммоль) в ОСМ (1 мл) добавляли к смеси и реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Смесь разбавляли ОСМ, промывали (Η2Ο) и две фазы разделяли. Органический слой сушили (№28Ο4) и концентрировали. Колоночная флэш-хроматография (8ΐΟ2, 20:80
ΕΐΟАс/петролейный эфир до 90:10 ΕΐΟАс/МеΟΗ) давала смесь соединения 26 и соединения 27. Два компонента разделяли преп. ВЭЖХ.
2.2.4. Способ К2.
(ΟΟΟ1)2 (1,35-2,5 экв.) добавляли к раствору карбоновой кислоты (1,4-3 экв.) в ОСМ при 0°С. Добавляли каталитическое количество диметилформамида, и реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение периода времени в интервале от 30 мин до 1 ч. Раствор промежуточного амина (1 экв.) и пиридина (1,7-4 экв.) в NМΡ или NМР/^СМ получали отдельно, убедившись, что промежуточный амин полностью растворяется. Чтобы помочь растворению, может быть использовано нагревание (температуры до 70°С). Последний раствор добавляли по каплям к раствору, содержащему новообразованный хлористый ацил при 0°С. Полученную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение периода времени в интервале от 1 до 2 ч. Смесь разделяли между органическим растворителем и водным раствором. Две фазы разделяли, и органический слой сушили и концентрировали. Остаток может быть очищен с помощью хроматографии на силикагеле, с помощью препаративной ВЭЖХ или осаждением с помощью соответствующей смеси растворителей.
2.2.5. Иллюстративный пример способа К2: синтез (1К,2К)-^[6-[(6-циано-4-метил-3пиридил)окси]-1-метилбензимидазол-4-ил]-2-фторциклопропанкарбоксамида (соединение 20)
(ΟΟΟ1)2 (16,6 ммоль) добавляли к раствору ((1К,2К)-(-)-цис-2-фторциклопропанкарбоновой кислоты (АВСК, лот п. 1242863, 17,5 ммоль) в ОСМ (70 мл), с последующим добавлением ЭМР (200 мкл). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при 0°С в течение 45 мин. Раствор соединения 28 (12,5 ммоль) и пиридина (21,3 ммоль) в NМΡ (15 мл) нагревали при 65°С, чтобы помочь растворению, и давали остыть до комнатной температуры. Раствор, содержащий соединение 28 и пиридин добавляли к смеси, содержащей активированное производное карбоновой кислоты, при 0°С и реакционную смесь перемешивали в течение 45 мин при комнатной температуре. Смесь разделяли между ΕΐΟΑο и насыщ. NаΗСΟ3. Две фазы разделяли, и органический слой промывали далее (насыщ. NаΗСΟ3, N^01, Η2Ο), сушили (№28Ο4) и концентрировали. Сырой продукт очищали путем осаждения из ОСМ/ϊΡγΟΗ, и полученное твердое вещество промывали Εΐ2Ο и сушили в вакууме с получением желаемого продукта.
- 47 029827
2.3. Общий способ: гидролиз нитрильной группы для получения конечного соединения
где Б представляет собой ΝΗ, ИМе или О; КС представляет собой циклоалкил, замещенный циклоалкил; Ζ представляет собой N или СН и К10 представляет собой Ме или Εί.
2.3.1. Способ Б.
Раствор исходного нитрила (1 экв.) растворяли в смеси 4:1 ΕίΟΗ/ДМСО. Полученный органический раствор смешивали с 30% Н2О2/Н2О и 1н. ΝηΟΗ, со следующими соотношениями 10:2:1 органический раствор/Н2О2/1н. ΝηΟΙ I. Смесь перемешивали при 50°С в течение 1 ч. Смесь разделяли между органическим растворителем и водным раствором. Две фазы разделяли, и органический слой сушили и концентрировали. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле, с помощью препаративной ВЭЖХ или осаждением, используя соответствующую смесь растворителя.
2.3.2. Иллюстративный пример способа Б: синтез 5-((4-(циклопропанкарбоксамидо)-1-метил-1Нбензо[б]имидазол-6-ил)(метил)амино)-4-этилпиколинамида (соединение 24)
Раствор соединения 1 (0,19 ммоль) растворяли в смеси 4:1 ΕίΟΗ/ДМСО (2,3 мл). Полученный органический раствор смешивали с 30% Н2О2/Н2О (0,4 мл) и 1н. ΝηΟΙ I (0,23 мл). Смесь перемешивали при температуре 50°С в течение 1 ч. Реакционную смесь разделяли между дихлорметаном и водой. Слои разделяли, и органический слой фильтровали через фазовый сепаратор и концентрировали. Остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением желаемого продукта.
2.3.3. Способ М: общий способ синтеза мочевины
Карбонилдитриазол (1,5 экв.) добавляли к смеси соединения 28 (1,0 экв.) и пиридина (5 экв.) в ЭСМ. Затем смесь перемешивали при 50°С в течение 1 ч. Без какой-либо дополнительной обработки требуемого амина ΚΗΝΗ2 добавляли к раствору при 50°С и перемешивали в течение еще 1 ч. После завершения реакции с помощью СВЭЖХ, реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли ЭСМ, и смесь затем разделяли в воде. Две фазы разделяли, и органический слой промывали раствором 0,25 М Ю, раствором бикарбоната натрия, сушили и концентрировали. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле, с помощью препаративной ВЭЖХ или осаждением, используя соответствующую смесь растворителя.
2.3.4. Иллюстративный пример способа М: синтез 1-[6-[(6-циано-4-метил-3-пиридил)окси]-1метилбензимидазол-4-ил]-3-изопропил-мочевины (соединение 33).
Карбонилдитриазол (1,07 ммоль) добавляли к смеси соединения 28 (0,71 ммоль) и пиридина (3,55 ммоль) в ЭСМ (3 мл) и полученную смесь перемешивали при 50°С. Образовывался осадок через 2 мин и смесь дополнительно перемешивали в течение 1 ч. Метиламин (2 М раствор в ΤΗΡ) (2,84 ммоль) затем добавляли к раствору при 50°С и перемешивали в течение еще 1 ч. После завершения реакции с помощью СВЭЖХ, реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли ЭСМ, и разделяли в воде. Две фазы разделяли, и органический слой промывали раствором 0,25 М Ю, раствором бикарбоната натрия, сушили и концентрировали. Остаток использовали без дополнительной очистки.
- 48 029827
2.4. Синтез 5-[7-[[(1 К,2К)-2-фторциклопропанкарбонил] амино] -3 -метилбензимидазол-5-ил] окси-4метилпиридин-2-карбоксамида (соединение 32)
Смесь соединения 20 (0,27 ммоль) и ДМСО (0,5 мл) в Н2О (рН 13, 10 мл) перемешивали при 50°С в течение 72 ч. Смесь фильтровали. Твердое вещество собирали и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением желаемого продукта.
2.5. Синтез 4-метил-5-[3-метил-7-(метиламино)бензимидазол-5-ил]оксипиридин-2-карбонитрила (соединение 34) и 5-[7-(диметиламино)-3-метилбензимидазол-5-ил]окси-4-метилпиридин-2карбонитрила (соединение 35).
ЧаН добавляли к смеси соединения 28 (0,3б ммоль) в ΤΠΡ (10 мл) при 0°С. Через 30 мин, добавляли МеГ (0,3б ммоль) и реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали до завершения. После завершения, контролируемого СВЭЖХ, реакционную смесь разбавляли этилацетатом и промывали водой. Органический слой сушили над №28О4, фильтровали и упаривали. Соединение 34 и соединение 35 выделяли с помощью препаративной ВЭЖХ.
Иллюстративные соединения по настоящему изобретению перечислены в табл. ГГГ ниже, и сравнительные примеры, которые были получены согласно способам синтеза, описанным в настоящем описании, с использованием промежуточных соединений, перечисленных в табл. ГГ. Данные спектров ЯМР соединений по настоящему изобретению и некоторых сравнительных примеров приведены в табл. ГУ.
Таблица ГГ
Иллюстративные промежуточные соединения по отношению к соединениям по настоящему изобретению
Промежуточное соединение Νο Структура Исходное вещество Способ ММ МС опр.
1 РМВхкГРМВ N Н 4-Метокси бензиламин полностью описанный выше 257,3 258,1 (М+1)
2 РМВ. ГРМВ ,,Д’ Промежуточное соединение 1+5бром- З-фтор-И-ме тил- 2 -нитроанилин полностью описанный выше - 466, 4 465,9/467,9 (М+1)
3 РМВ-..РМВ Аа ΗΟ'^^'Ν Промежуточное соединение 2 полностью описанный выше - 403,5 404,4 (М+1)
4 Ρ ^ΛγΝΗ2 4-амино-3-фтор-бензонитрил А1 262,0 261,5 (М-1)
5 Ρ ν%νη2 νΥ"1'1 Промежуточное соединение 11 А2 263,0 263,9 (М+1)
- 49 029827
- 50 029827
19 ΓϊΤ' χΑ Промежуточное соединение 10 ϋ 258,1 259,1 (М+1)
,χ Ν
.νη2 ПОЛНОСТЬЮ описанный 187,0/189,0
20 χ 2-бром-4-метил-5-нитро-пиридин выше 187,0 (М+1)
Вг" Ν
Масса не
Ρ может быть
Υ \χΝΗ2 полностью описанный обнаружена с
21 4-амино-З-фтор-бензонитрил 170,6
χΥ выше помощью
"ΟΙ
Ν различных
методов
γΟΗ полностью описанный
22 Ас/ 4-амино-З-этил-бензонитрил выше 147,2 146, 1 (М-1)
Ν Α .Ρ 2-хлор-3-фтор-пиридин-4- полностью описанный
23 Ί 146, 6 147,0 (М+1)
ι 'νη2 карбоновая кислота выше
ρμβ^,ρμβ
Νκ 4+
Ау Промежуточное соединение
24 1 к Г ч> Е1 532,6 533,2 (М+1)
χ/ н \ 2+Промежуточное соединение 10
РМВ-. ,РМВ г X
-Ρ /γ-Ν Промежуточное соединение
25 1 Г ч> Е1 549,6 550,4 (М+1)
%χ 2+Промежуточное соединение 17
н \
ΡΜΒ.,ΡΜΒ N
ρ Γ|ΓΝ\> Промежуточное соединение 2+6-
26 Е1 511,6 512,5 (М+1)
1 τ - ΑχΥ, фтор- 4 -метил-пиридин-3- амин
й 1
I
РМВ. ,РМВ
ύ>Ν> 1
Лл Промежуточное соединение
27 ί Ιι Е2 518,6 519,4 (М+1)
Χχ 2+Промежуточное соединение 8
н \
РМВхкГРМВ N с 1
Νχ
Χ+\, χΡ χ4χΝ Промежуточное соединение
28 τ π М ) Е2 556, 0 556,3 (М+1)
V 2+Промежуточное соединение 21
С1
ΡΜΒ. ,ΡΜΒ Ν
Ρχ. ΑχΝ Промежуточное соединение
29 Η Τ χ> Е2 515,6 516, 4 (М+1)
Ν'^^Ν 2+2,6-дифторпиридин-З-амин
η \
Ρ
ΡΜΒ. -ΡΜΒ Α
Ν-$χ
ΎΥ /4χΝ Промежуточное соединение
30 Η Τ 4> Е2 522,6 523,3 (М+1)
Ν<Υ 2+Промежуточное соединение 11
Ρ Η \
- 51 029827
31 ΡΜΒ- ,ΡΜΒ Промежуточное 2+Промежуточнс соединение эе соединение 12 Е2 536, 6 537,0 (М+1)
Vх Ν-χ, Ρ г Ал
Η \
ΡΜΒ- ,ΡΜΒ
и 5 X Λ Промежуточное соединение
32 Ν" ίιΝ Е2 536, 6 537,0 (М+1)
Α X Ν^Χ "Ν 2+Промежуточное соединение 9
1 Η \
ΡΜΒ- ,ΡΜΒ
Ν
ΝΥ Υ^-Ν Промежуточное соединение 2+4-
33 II Η Ύ”\ Е2 521,6 522,4 (М+1)
Α Λ Λ ΑΧ амино-3-фтор-бензонитрил
Ν Ν
Η \
ΡΜΒ- ,ΡΜΒ
η Ν
1
Υ > Α υ-ν, Промежуточное соединение 2+2-
34 0 Γ ϊ Γ Γ χ> ЕЗ 574,7 575,0 (М+1)
4 лгА Α"ν фтор-4-метилсульфонил-анилин
τ \
Ρ
ΡΜΒ- ,ΡΜΒ
Ν 1
'Ρ' Υ κ Υί Промежуточное соединение
35 0 Τ I ί Α ЕЗ 588,7 589,2 (М+1)
Ύ ΛΝ^ 2+Промежуточное соединение 14
I Ρ \
ΡΜΒ-, ,ΡΜΒ
„ ,ο Ν
Υ > Α Промежуточное соединение 2+2-
36 ο Γ η \ II χ> ЕЗ 570,7 571,4 (М+1)
X ΑΧ фтор-4-метилсульфонил-анилин
\
ΡΜΒ-, ΡΜΒ
0 Ν
I
37 Λ Γ г Α 0 Промежуточное соединение 35 Е 602,7 603,3 (М+1)
Υ/
Ύ Ν " \
ΡΜΒ.Ν I -ΡΜΒ
,Ν- Ί Г У\
38 ^ΝΧ 1 Α Промежуточное соединение 24 Е 546, 7 547,2 (М+1)
ΡΜΒ-, , Ν ,_ ι ΡΜΒ
Г л ' Γ'Ν
39 с χ. Ο Промежуточное соединение 25 Е 563,7 564,3 (М+1)
τ Ν Ν \
ΡΜΒ-,,ΡΜΒ Ν
40 X Α Α Промежуточное соединение 26 Е 525,6 526,4 (М+1)
X Υ- / V \
1 Ν
ΡΜΒ- ,ΡΜΒ
Ν
I
> Α
41 γ χχ X/ \ Промежуточное соединение 27 Е 532,6 533,5 (М+1)
ΡΜΒ- ,ΡΜΒ
Ν
ΝΥ Υρ Υ
42 Α V χ> \ Промежуточное соединение 28 Е 570,1 570,4 (М+1)
С1 1
- 52 029827
43 Ρ ΡΜΒ. .ΡΜΒ Ν Промежуточное соединение 29 Г 529,6 530,5 (М+1)
м3 Α Ν \
ΡΜΒ. -ΡΜΒ
I
Ν^.
44 £ Α Α Промежуточное соединение 30 Г 536, 6 536, 5 (М+1)
Ρ Ν 1 Ν\
ΡΜΒ. / I ΡΜΒ
ΝίΛ
Ά
45 Ιί Η 1 Ί Промежуточное соединение 31 Г 550,6 551,0 (М+1)
1 \
Ρ
ιΐΐ ΡΜΒ. .ΡΜΒ
1 ϊ
46 Λ -Ρ η Промежуточное соединение 32 Г 550,6 551,0 (М+1)
V ίΑα1 \
ρμβ ΡΜΒ
47 Νν τρ Ал Промежуточное соединение 33 Г 535,6 522,4 (М+1)
Αχ
ΡΜΒ. , ΡΜΒ
Λ
3ι Α''' ιΆ
48 0 I ΐ I Γ 4> Промежуточное соединение 34 Г 588,7 589,5 (М+1)
% .
τ Ν Ν\
Ρ
ΡΜΒ.. ΡΜΒ
,0 Ν
'''/Γ 1
4 9А /0 1 χ 0 Ν \ Промежуточное соединение 36 Г 584,7 585,1 (М+1)
ΡΜΒ. , .ΡΜΒ
Ь° Ν I
49В +ν 1 ? Α \ Промежуточное соединение 36 Г (побочный продукт) 598,8 599,1
ул (М+1)
ΡΜΒ. ΡΜΒ
Ν^. Α
Ίί Ρ ϊτΛ Промежуточное соединение ПОЛНОСТЬЮ описанный
50 к X ιΓ > 532,6 533,4 (М+1)
ΑοΑ^ 0 \ 2+Промежуточное соединение 22 выше
Промежуточное соединение
ΡΜΒ. . ΡΜΒ
Ν4 Μ Ν 1 З+Промежуточное соединение 18
51 1 Α (способ С) , Промежуточное С или Н 519,6 520,4 (М+1)
Α„Α^
ο \ соединение З+Промежуточное
соединение 7 способ Н)
ΡΜΒ.Ν. ΡΜΒ
Ν^. Μ
> Α 0 Промежуточное соединение
52 1 ί Γ 4> С 533,6 534,4 (М+1)
Α. Α0Α^ \ З+Промежуточное соединение 19
0 ΝΗ,
/Vх ,_ А г
53 0 ι I 1 Ο Промежуточное соединение 37 11 362,4 363,1 (М+1)
А. .0.
τ Ν Ν \
- 53 029827
54 να. 5 νη2 Промежуточное соединение 25 11 309,3 310,3 (М+1)
ζ Δ '9 "Ν \
νη2
А. ΑΥ ТО-Ν
55 "Ν^ X 4 \ Промежуточное соединение 43 11 289,3 290,0 (М+1)
Ρ
^/Р νη2
•Υ •ΎΥ 9то Υ
5 6А о 9 V кк χ> Ν \ Промежуточное соединение 4 9А 11 344,4 344,9 (М+1)
и° νη2
χΥγ ТОа- к
56В О Υ то кк ? \ Промежуточное соединение 49В 11 358,5 359,0 (М+1)
ργ νη2
γγγ того 'Υ
57 ^ρΓ кк \ Промежуточное соединение 45 11 310,3 311,0 (М+1)
Ρ
νη2
ТО Υυ Α ток- ν.
58 ι V кк χ> Ν \ Промежуточное соединение 47 11 295,3 296, 0 (М+1)
О νη2
1
γΥτ 'Υ
59 О 9 кг кк 7 \ Промежуточное соединение 48 11 348,4 349,0 (М+1)
Ρ
РА νη2 I Δ
ΎΥ /Р ΓΓ г
61 ТО кЛ Промежуточное соединение 39 12 323,4 324,3 (М+1)
Υ Ν
\
ργ .Νχ ΝΗ2
γΥ -Ν
62 99 9 кк Υ Промежуточное соединение 41 13 292,3 293,3 (М+1)
\
РА Λ< ΝΗ2 Λ- то
63 9α 9 кк Ύ Промежуточное соединение 38 13 306,4 307,1 (М+1)
\
РА ΝΗ2
-ато ΓΥ ТО
64 ТО9 то кк χ> ’Ν Промежуточное соединение 50 13 292,3 293,3 (М+1)
\
РА ΑΑ νη2
'' ТО ТО
65 9α к' кк " 9 Промежуточное соединение 52 13 293,3 294,2 (М+1)
\
Μ а νη2
то ТО ΥΡ Λ то
66 9 ^Ν' кк ? Промежуточное соединение 42 13 329,8 330,2 (М+1)
С1 I
- 54 029827
67 Υ Ν. ? νη2 Λλ Промежуточное соединение 40 13 285,3 286,2 (М+1)
Ν 1 Ν \
Ν<. νη2
XI. ,Ρ
68 ΑΧ υο Промежуточное соединение 44 13 296, 3 297,0 (М+1)
Ν 1 \
Ν 1 νη2
69 ιΈ ГЙ Промежуточное соединение 32 13 310,3 311,0 (М+1)
% (к
Ν I Ν \
к X γΝΗ2 ПОЛНОСТЬЮ описанный
70 Чх Α. 2-бром-4-этил- -5-нитро-пиридин 200,3 201,1 (М+1)
χΥ Ί выше
ο 1
ΡΜΒ. . ΡΜΒ
Ό Ν
Α' ί
4γΛ Промежуточное соединение
71 0 Е2 585,7 586, 0 (М+1)
V ΝΧ к\ 7О+Промежуточное соединение 2
У \
ΡΜΒ. ,ΡΜΒ
η Ν
\ '/ хк
1^
72 0 '1 Α ΑΑ Промежуточное соединение 71 Г 599,8 600,1 (М+1)
0 νη2
\ Ιι
Λλ
73 0 У α ΑΑ Промежуточное соединение 72 13 359,5 360,0 (М+1)
/1 описанный
г\ 1 ПОЛНОСТЬЮ
74 ν X <Αχ Промежуточное соединение 70 311,1 311,8 (М+1)
/¾ выше
Ο
ΡΜΒ. . ,ΡΜΒ
'% I
/Яа < Промежуточное соединение
75 ° Τ 1 Ρ I > с 586,7 587,3 (М+1)
к "ο ΧΝ \ З+Промежуточное соединение 74
\//° νη2
,5α Αλ
76 ο Ια* ΑΑ \ Промежуточное соединение 75 12 346, 4 347,0 (М+1)
ΡΜΒ.. ΡΜΒ Ν
.Α ΑΧ χΑχΝ Промежуточное соединение 2+2-
77 Ί № \ Е4 517,6 518,0 (М+1)
к Α (4-аминофенил)ацетонитрил
Η
ΡΜΒ. .ΡΜΒ
Ν Промежуточное соединение
78 °- -к ώ> 2+2,3-дигидро- -1,4- Е4 536, 6 537,33 (М+1)
к , Λα- )к
0 Ν Η τ бензодиоксинХ з-амин
νη2
," \χ^ Α<Ν
79 ίΆ Ί 1 η Промежуточное соединение 77 12 277,3 278,0 (М+1)
''"Ν
Η \ νη2
80 (°' г 1 £ΧΝχ> Промежуточное соединение 78 12 296,3 297,0 (М+1)
к -ку X. .Ν Η ^хкм \
- 55 029827
Таблица III
Иллюстративные соединения по настоящему изобретению
- 56 029827
- 57 029827
- 58 029827
- 59 029827
- 60 029827
Таблица IV
Данные ЯМР иллюстративных соединений по настоящему изобретению
Соед. Νο ЯМР
!н ЯМР (600 МГц, ДМСО-йб) : 0=0,69-0,77 ' (м, 4Н) , 1,04 (т, ЗН) ,
1 2,15-2,24 (м, 1Н), 2,34 (кв, 2Н), 3,34 (с, ЗН) , 3,74 (с, ЗН),
6,72 (д, 1Н), 7,49 (с, 1Н) , 7,94 (с, 1Н) , 8,04 (с, 1Н) , 8,48
(с, 1Н) , 10,05 (с, 1Н) .
Ш ЯМР (400 МГц, ДМСО-йб) : 8=0,70-0,80 (м, 4Н) , 1,09 (т , ЗН) ,
2 2,19-2,27 (м, 1Н), 2,64 (кв, 2Н), 3,68 (с, ЗН) , 6,42 (т, 1Н) ,
7,55 (д, 1Н) , 7,64 (дд, 1Н) , 7,67 (ушир. с, 1Н) , 7,92 (с, 1Н) ,
7,98 (с, 1Н), 10,01 (с, 1Н) .
ΐΗ ЯМР (300 МГц, ДМСО-Дб) : 0=9,93 (с, 1Н) , 7,96 (с, 1Н) , 7,81
(дд, 1Н), 7,74 (с, 1 Н), 7,29 (ушир.с 1Н), 6, 47 (д, тонкое
3 разделение, 1Н) , 3,73 (с, ЗН) , 3,21 (с, ЗН) , 2,54 -2,48 (м,
частично закрытый пиком растворителя, 2Н) , 2,17 (м, 1Н) , 1,09
(т, ЗН), 0,71-0,69 (м, 4Н).
1Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-Дб) : δ=1,05 (т, ЗН) , 2,36 (кв, 2Н) , 3,36
4 (с, ЗН) , 3,61 (с, ЗН) , 3,73 (с, ЗН) , 6,72 (д, 1Н) , 7,06 (д,
1Н) , 7,97 (с, 1Н) , 8,00 (дд, 1Н) , 8,5С ι (с, 1Н) , 8,91 (ушир.с,
1Н) .
ΐΗ ЯМР (300 МГц, ДМСО-Дб) : δ=1,10 (т, ЗН) , 2,52 (кв, 2Н) , 3,23
5 (с, ЗН) , 3,59 (с, ЗН) , 3,73 (с, ЗН) , 6, 51 (д, 1Н) , 6,86 (д,
1Н) , 7,76 (ушир.с, 1Н) , 7,82 (дд, 1Н), 7,92 (с, 1Н) , 8,75 (с,
1Н) .
ΐΗ ЯМР (400 МГц, ДМСО-Дб) : 0=1,14 (ддт, Н) , 1,24 (т, ЗН), 1 .,53-
£ 1,67 (м, 1Н), 2,51-2,55 (м, 1Н), 2,75 (кв, 2Н) , 3,79 (с, ЗН),
Ό 4,77-5,03 (м, 1Н) , 7,13 (д, 1Н) , 7,85 (д, 1Н) , 8,07 (с, 1Н),
8,11 (с, 1Н), 8,22 (с, 1Н), 10,43 (с, 1Н).
ΐΗ ЯМР (300 МГц, ДМСО-Дб) : 8=0,99-1,15 (м, 1Н) , 1,09 (т, ЗН),
7 1,54 (м, 1Н) , 2,39 (м, 1Н) , 2,52 (кв, 2Н) , 3,22 (с, ЗН) , 3,73
(с, ЗН) , 4,85 (м, 1Н) , 6,49 (д, 1Н) , 7,32 (с, 1Н) , 7,75 (с,
1Н), 7,82 (дд, 1Н), 7,96 (с, 1Н) , 9,96 (с, 1Н).
ΐΗ ЯМР (300 МГц, ДМСО-Дб) : 8=0,99-1,18 (м, 1Н) , 1,05 (т, ЗН) ,
8 1,56 (м, 1Н), 2,29-2,45 (м, 1Н),2,35 ( КВ, 2Н) , 3,35 (с, ЗН) ,
3,74 (с, ЗН) , 4,88 (м, 1Н) , 6,72 (д, 1Н) , 7,51 (ушир.с, 1Н) ,
7,95 (с, 1Н), 8,05 (с, 1Н), 8,49 (с, 1Н) , ю ,09 (ушир.< з, 1Н)
- 61 029827
9 ХН ЯМР (300 МГц, ДМСО-б6) : 6=10,13 (с, 1Н) , 8,49 (с, 1Н) , 8,07 (с, 1Н) , 7,87 (с, 1Н) , 7,55 (ушир.с, 1Н) , 6,79 (д, тонкое разделение, 1Н) , 5,0-4,7 (м, 1Н) , 3,75 (с, ЗН) , 3,38 (с, ЗН) , 2,5-2,3 (м, 1Н) , 1,97 (с, ЗН) , 1,6-1,5 (м, 1Н) , 1,2-1,0 (м, 1Н) .
10 1Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-б6) : 6=1,07-1,20 (м, 1Н) , 1,24 (т, ЗН) , 1,53-1,67 (м, 1Н), 2,43-2,48 (м, 1Н) , 2,75 (кв, 2Н) , 3,80 (с, ЗН) , 4,78-5,01 (м, 1Н) , 6,78 (д, 1Н), 7,11 (д, 1Н) , 7,59 (дд, 1Н), 7,78 (д, 1Н), 7,80 (д, 1Н), 8,22 (с, 1Н), 10,40 (с, 1Н).
11 ΐΗ ЯМР (400 МГц, ДМСО-бб) : 6=1,08 (ддт, 1Н), 1,41-1,67 (м, 1Н) , 2,41 (дт, 1Н), 3,27 (с, ЗН) , 3,75 (с, ЗН) , 4,65-5,05 (м, 1Н) , 6,61 (д, 1Н) , 7,42 (с, 1Н) , 8,00 (с, 1Н) , 8,04 (дд, 1Н) , 8,12 (τ, 1Н) , 10,04 (с, 1Н) .
12 ΐΗ ЯМР (500 МГц, ДМСО-бб) : δ=1,08 (ддт, 1Н) , 1,50-1,60 (м, 1Н), 2,12 (с, ЗН), 2,39 (дт, 1Н), 3,25 (с, ЗН), 3,73 (с, ЗН), 4,764,96 (м, 1Н), 6,49 (д, 1Н), 7,19 (с, 1Н) , 7,35 (с, 1Н) , 7,97 (с, 1Н), 8,00 (с, 1Н), 10,02 (с, 1Н).
13 ΐΗ ЯМР (300 МГц, ДМСО-бб) : 10,12 (с, 1Н) , 8,06-8,00 (м, 2Н), 7,96 (с, 1Н), 7,22-7,19 (м, 1Н) , 6,76 (с, 1Н) , 4,98-4,77 (д, 1Н) , 3,76 (с, ЗН) , 3,25 (с, ЗН), 2,45-2,42 (м, 1Н) , 1,59-1,52 (м, 1Н) , 1,27-1,10 (м, 1Н) .
14 ΐΗ ЯМР (400 МГц, ДМСО-бб) 10,30 (1 Н, с), 8,20 (1 Н, с), 7,92 (1 Н, дд), 7,85 (1 Н, д), 7,63 (1 Н, дд), 7,17 (1 Н, д), 4,92 (1Н, 6Г), 3,79 (3 Н, с), 3,40 (3 Н, с), 2,48-2,44 (1Н, м), 1,64-1,53 (1Н, м) , 1,19-1,15 (1Н, м) .
15 ХН ЯМР (300 МГц, ДМСО-бб): 10,22 (1Н, с), 8,16 (1Н, с), 7,80 (1Н, с), 7,70-7,67 (1Н, м) , 7,59-7,58 (1Н, д), 7,25-7,21 (1Н, м) , 7,07 (1Н, с), 4,99-4,81 (1Н, д) , 3,79 (ЗН, с, СНЗ), 3,38 (ЗН, с, СНЗ), 2,46-2,42 (1Н, м, СН), 1,61-1,55 (1Н, м) , 1,191,09 (1Н, м)
16 ΐΗ ЯМР (400 МГц, ДМСО-бб) :10,30 (1 Н, с), 7,95 (1 Н, с), 7,78 (1 Н, д), 7,74 (1 Н, дд), 7,36 (1 Н, д), 6,49 (1 Н, д), 4,87 (1Н, 6Г) , 3,78 (3 Н, с), 3,28 (3 Н, с), 3,21 (3 Н, с), 2,43-2,38 (1Н, м), 2,22 (3 Н, с), 1,62-1,51 (1Н, м) , 1,15-1,08 (1Н, м) .
17 ΐΗ ЯМР (400 МГц, ДМСО-бб): 10,84 (1 Н, с), 9,21 (1 Н, с), 7,79 (2 Н, дт), 7,55 (1 Н, т), 7,42 (1 Н, с), 7,26 (1 Н, д) , 4,95 (ΙΗ, 6Г) , 3,96 (3 Н, с), 3,43 (3 Н, с), 3,28 (3 Н, с), 2,432,38 (1 Н, м), 1,62-1,51 (1 Н, м), 1,15-1,08 (1 Н, м).
18 ΐΗ ЯМР (400 МГц, ДМСО-бб): 10,08 (1 Н, с), 8,53 (1 Н, с), 8,05 (1 Н, с), 7,93 (1 Н, с), 7,48 (1 Н, ушир.с), 6,69 (1 Н, д) , 3,75 (3 Н, с), 3,29 (3 Н, с), 3,21 (3 Н, с), 2,46 (2 Н, кв), 2,25-2,17 (1 Н, м), 1,08 (3 Н, т), 0,76-0,69 (4 Н, м).
- 62 029827
19 ΐΗ ЯМР (400 МГц, СОС13) : 9,55 (1 Н, ушир.с), 8,05-8,00 (2 Н, м) , 7,70 (1 Н, д) , 7,61 (1 Н, дд) , 6,01 (1 Н, д) , 3,78 (3 Н, с), 3,33 (3 Н, с), 3,13 (3 Н, с), 2,25 (3 Н, с), 1,97-1,92 (1 Н, м), 0,91-0,85 (4 Н, м).
20 ΐΗ ЯМР (500 МГц, ДМСО-Де) : Д=1,15 (ддт, 1Н), 1,54-1,66 (м, 1Н) , 2,36 (с, ЗН), 2,52-2,54 (м, 1Н) , 3,80 (с, ЗН), 4,77-5,03 (м, 1Н) , 7,12 (д, 1Н) , 7,86 (д, 1Н) , 8,08 (с, 1Н) , 8,12 (с, 1Н) , 8,23 (с, 1Н), 10,44 (с, 1Н) .
21 ХН ЯМР (400 МГц, ДМСО-Де) : 10,12 (1Н, с), 8,11 (1Н, с), 8,02 (1Н, с), 7,41 (1Н, с), 6,61 (1Н, д) , 4,88 (1Н, м) , 3,75 (ЗН, с), 3,26 (ЗН, с), 2,42 (1Н, м) , 2,22 (ЗН, с), 1,57 (1Н, м) , 1,09 (1Н, м).
22 ΐΗ ЯМР (400 МГц, ДМСО-Де) : 10,18 (1Н, с), 8,50 (1Н, с), 8,06 (1Н, с), 7,51 (1Н, с), 6,73 (1Н, д) , 4,87 (1Н, м) , 3,75 (ЗН, с), 3,32 (ЗН, с), 2,45 (1Н, м) , 2,11 (ЗН, с), 1,60 (1Н, м) , 1,11 (1Н, м).
23 ΐΗ ЯМР (400 МГц, ДМСО-Дб) : 10,39 (1 Н, с), 8,23 (1 Н, с), 8,11 (1 Н, с), 8,07 (1 Н, с), 7,84 (1 Н, д), 7,11 (1 Н, д) , 3,79 (3 Н, с), 2,35 (3 Н, с), 2,33- 2,27 (1 Н, м), 0,81-0,76 (4 Н, м).
24 ΐΗ ЯМР (600 МГц, ДМСО-Де) : 0=0,56-0,78 (м, 4Н) , 1,09 (т, ЗН) , 2,18 (ушир.с., 1Н), 2,46 (ушир.с., 2Н), 3,30 (ушир.с., ЗН), 3,73 (ушир.с., ЗН), 6,56 (ушир.с., 1Н), 7,38 (ушир.с., 1Н), 7,59 (ушир.с., 1Н), 7,98 (ушир.с., 2Н) , 8,05 (ушир.с.,1Н) , 8,33 (ушир. с., 1Н), 9,96 (ушир.с., 1Н).
25 ΐΗ ЯМР (600 МГц, ДМСО-Де) : 0=1,05-1,08 (м, 1Н) , 1,09 (т, ЗН) , 1,50-1,59 (м, 1Н) , 2,39 (дт, 1Н), 2,45-2,49 (м, 2Н), 3,31 (с, ЗН) , 3,73 (с, ЗН), 4,70-4,97 (м, 1Н) , 6,57 (д, 1Н) , 7,42 (с, 1Н) , 7,59 (д, 1Н) , 7,99 (с, 2Н) , 8,06 (д, 1Н) , 8,34 (с, 1Н) , 10,00 (с, 1Н).
26 ΐΗ ЯМР (400 МГц, ДМСО-Де) : 10,10 (1 Н, с), 8,04 (1 Н, с), 7,78(1 Н, с), 7,76 (1 Н, дд) , 7,51 (1 Н, д) , 7,35 (1 Н, д), 6,68 (1 Н, д) , 4,90 (1Н, д) , 3,75 (3 Н, с), 3,29 (3 Н, с), 3,21 (3 Н, с), 2,40 (1Н, т), 2,08 (3 Н, с), 1,64-1,53 (1Н, м) , 1,15-1,08 (1Н, м) .
27 ΐΗ ЯМР (400 МГц, ДМСО-Де) : 10,10 (1 Н, с), 8,03 (1 Н, с), 7,737,71 (2 Н, м) , 7,48 (1 Н, д) , 7,38 (1 Н, д) , 6,68 (1 Н, дд) , 4,90 (1Н, ДГ) , 3,74 (3 Н, с), 3,29 (3 Н, с), 3,23 (2 Н, кв), 2,40 (1Н, т), 2,07 (3 Н, с), 1,64-1,53 (1Н, м), 1,15-1,08 (1Н, м) 1,11 (3 Н, т).
28 ΐΗ ЯМР (400 МГц, ДМСО-Д6) : 8,09 (1 Н, с), 8,05 (1 Н, с), 7,95 (1 Н, с), 6,53 (1 Н, д) , 6,11 (1 Н, д), 5,60 (2 Н, ушир.с) 3,68 (3 Н, с) , 2,34 (3 Н, с) .
- 63 029827
29 ΐΗ ЯМР (400 МГц, ДМСО-Эб) : 10,42 (1 Н, с), 8,23 (1 Н, с), 8,13 (1 Н, с), 8,03 (1 Н, с), 7,86 (1 Н, д), 7,13 (1 Н, д), 3,80 (3 Н, с), 3,24 (3 Н, с), 2,83 (2 Н, кв), 2,33-2,27 (1 Н, м), 1,26 (3 Н, т), 0,81-0,76 (4 Н, м).
30 1Н ЯМР (400 МГц, СОС13) 8,81 (1 Н, с), 8,02 (1 Н, д) , 7,71 (1 Н, с), 7,17 (2 Н, д), 7,04 (2 Н, д), 6,83 (1 Н, д), 6,05 (1 Н, с), 3,73 (3 Н, с), 3,65 (2 Н, с), 1,73-1,66 (1 Н, м) , 1,10-1,06 (2 Н, м) , 0,87-0,82 (2 Н, м) .
31 ΐΗ ЯМР (400 МГц, СОС13) 8,77 (1 Н, с), 7,89 (1 Н, с), 7,66 (1 Н, с), 6,78 (1 Н, д) , 6,68 (2 Н, т), 6,63 (1 Н, дд) , 5,73 (1 Н, ушир.с), 4,25-4,21 (4 Н, м) , 3,69 (3 Н, с), 1,73-1,66 (1 Н, м) , 1,11-1,06 (2 Н, м), 0,87-0,82 (2 Н, м) .
32 ХН ЯМР (400 МГц, ДМСО-Эб) : 10,41 (1 Н, ушир.с), 8,20 (1 Н, с), 8,07 (1 Н, с), 8,03 (1 Н, с), 7,98 (1 Н, ушир.с), 7,84 (1 Н, д) , 7,55 (1 Н, ушир.с), 7,01 (1 Н, д), 5,02-4,80 (1 Н, м), 3,78 (3 Н, с), 2,34 (3 Н, с), 1,66-1,55 (1 Н, м) , 1,21-1,02 (2 Н, м) .
33 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-Дб) : 8,89 (1 Н, ушир.с), 8,23 (1 Н, ушир.с), 8,10 (2 Н, м), 7,72 (1 Н, ушир. м) , 6,4-6,8 (2 Н, м) , 3,78 (3 Н, с), 2,65 (3 Н, д), 2,36 (3 Н, с).
34 ΐΗ ЯМР (400 МГц, ДМСО-Дб) : 8,07 (1 Н, с), 8,05 (1 Н, с), 7,97 (1 Н, с), 6,47 (1 Н, д) , 6,10 (1 Н, м) , 6,01 (1 Н, д) , 3,69 (3 ή, с) , 2,77 (3 Н, д), 2,36 (3 Н, с)
35 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-Дб) : 8,07 (1 Н, с), 8,05 (1 Н, с), 8,01 (1 Н, с), 6,63 (1 Н, д), 6,16 (1 Н, д), 3,70 (3 Н, с), 3,19 (6Н, с), 2,36 (ЗН, с)
36 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-Дб) : 8,16 (1 Н, с), 8,10 (1 Н, с), 0,07 (1 Н, с),8,00 (1 Н, с), 7,62 (1 Н, д) , 6,99 (1 Н, д) , 5,68 (1 Н, м) , 4,45 (1 Н, м), 4,21 (2 Н, м), 3,78 (4 Н, м), 2,57 (3 Н, с)
37 ХН ЯМР (400 МГц, ДМСО-Дб) : 8,42 (1 Н, ушир.с), 8,16 (1 Н, с), 8,10 (1 Н, с), 8,07 (1 Н, с), 7,56 (1 Н, д) , 7,02 (1 Н, д) , 3,78 (3 Н, с), 3,61 (4 Н, м), 3,44 (4 Н, м), 2,36 (3 Н, с)
38 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-Дб) : 8,68 (1 Н, ушир.с), 8,13 (1 Н, с), 8,08 (1 Н, с), 8,06 (1 Н, с), 7,73 (1 Н, д) , 6,99 (1 Н, ушир. д), 6,89 (1 Н, д), 3,75 (3 Н, с), 3,72 (1 Н, м) , 2,35 (3 Н, с), 1,07 (6 Н, д)
Пример 3. Сравнительные соединения.
3.1. Соединение А 2-[4-[(3-метилбензимидазол-5-ил)амино]фенил]ацетонитрил
Смесь Рб2(бЬа)3 (0,01 ммоль) и ХаШрИоз (0,01 ммоль) в 1,4-диоксане (1 мл) обрабатывали ультразвуком и добавляли в атмосфере азота к смеси 6-бром-1-метилбензимидазола (0,45 ммоль), 2-(4аминофенил)ацетонитрила (0,58 ммоль) и Сз2СО3 (0,62 ммоль) в 1,4-диоксане (2 мл). Смесь перемешивали при температуре 110°С в течение 12 ч. Смесь разбавляли (ЭСМ), промывали (Н2О), сушили (фазовый сепаратор и концентрировали. Остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением желаемого продукта (соединение А).
ММ: 262,3. МС опр.: 263,2.
X ЯМР (400 МГц, ДМСО-Щ): δ=8,13 (1Н, с), 7,68 (1Н, дд), 7,60 (1Н, дд), 7,54 (1Н, д), 7,32 (1Н, д),
7,24 (1Н, т), 6,91 (1Н, дд), 3,77 (3Н, с), 3,39 (3Н, с).
3.2. Соединение В
Смесь Рб2(бЬа)3 (0,01 ммоль) и Хап1рНоз (0,01 ммоль) в 1,4-диоксане (1 мл) обрабатывали ультразвуком и добавляли в атмосфере азота к смеси 6-бром-1-метилбензимидазола (0,45 ммоль), 2,3-дигидро1,4-бензодиоксин-6-амина (0,58 ммоль) и Сз2СО3 (0,62 ммоль) в 1,4-диоксане (2 мл). Смесь перемешива- 64 029827
ли при температуре 110°С в течение 12 ч. Смесь разбавляли (ОСМ), промывали (Н2О), сушили (фазовый сепаратор) и концентрировали. Остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением желаемого продукта (соединение В).
ММ: 281,3. МС опр.: 282,1.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): δ=7,94 (1Н, с), 7,80 (1Н, ушир.с), 7,45 (1Н, д), 7,05 (1Н, д), 6,86 (1Н, дд), 6,73 (1Н, дд), 6,61-6,57 (2 Н, м), 4,22-4,16 (4 Н, м), 3,71 (3Н, с).
3.3. Соединение С 3-фтор-4-[метил-(3-метилбензимидазол-5-ил)амино]бензонитрил
3.3.1. Стадия ί: 3-фтор-4-[(3-метилбензимидазол-5-ил)амино]бензонитрил.
Смесь, содержащую 6-бром-1-метилбензимидазол (2,38 ммоль), 4-амино-3-фтор-бензонитрил (3,57 ммоль), ХРНоз (0,95 ммоль), Сз2СО3 (7,14 ммоль) и Рб(ОЛс)2 (0,71 ммоль) в сухом толуоле (8 мл), перемешивали при температуре 110°С в течение приблизительно 16 ч. Смесь разбавляли (ЕЮАс), промывали (Н2О), сушили (№28О4) и концентрировали с получением желаемого продукта 3-фтор-4-[(3метилбензимидазол-5-ил)амино]бензонитрила.
3.3.2. Стадия ίί: 3-фтор-4-[метил-(3-метилбензимидазол-5-ил)амино]бензонитрил (соединение С).
\а11 (7,14 ммоль) добавляли к раствору 3-фтор-4-[(3-метилбензимидазол-5-ил)амино]бензонитрила
(2,38 ммоль) в ΤΗΡ (10 мл) при температуре 0°С. Смесь перемешивали в течение 30 мин. Добавляли Ме1 (4,76 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Смесь разбавляли (ОСМ), промывали (Н2О) и концентрировали. Остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением желаемого продукта (соединение С).
ММ: 280,1. МС опр.: 281,0.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): δ=8,13 (1Н, с), 7,68 (1Н, дд), 7,60 (1Н, дд), 7,54 (1Н, д), 7,32 (1Н, д),
7,24 (1Н, т), 6,91 (1Н, дд), 3,77 (3Н, с), 3,39 (3Н, с).
3.4. Соединение I)
Синтез данного соединения описан в РСТ Ιηί.ΑρρΙ. (2013), УО 2013117645. (Меηеίеίа1.,2013)
Биологические примеры
Пример 4. Анализы ίη νίίΐΌ.
4.1. Анализ ингибирования 1ΑΚ1.
4.1.1. Анализ 1ΑΚ1 с субстратом ро1уОЕ
Каталитический домен рекомбинантной 1ΑΚ1 человека (аминокислоты 850-1154; номер по каталогу 08-144) закупали у Сата Вюзсченсез. 10 нг 1ΑΚ1 инкубировали с 12,5 мкг субстрата поли-ΟΤ (номер по каталогу 81дта Р0275) в киназном реакционном буфере (при конечных концентрациях: 15 мМ Τγι3НС1 рН 7,5, 1 мМ ΏΤΤ, 0,01% Твин-20, 10 мМ МдС12, 2 мкМ нерадиоактивного АТФ, 0,25 мкКи 33Ргамма-АТФ (ОЕ Неаййсаге, номер по каталогу АН9968) с или без 5 мкл, содержащими тестируемое соединение или наполнитель (ДМСО, конечная концентрация 1%), в суммарном объеме 25 мкл, в полипропиленовом 96-луночном планшете (Огетег, У-образные лунки). Через 45 мин при температуре 30°С реакции останавливали добавлением 25 мкл/лунка 150 мМ фосфорной кислоты. Все реакционные смеси после окончания реакции переносили в предварительно промытые (75 мМ фосфорная кислота) 96луночные фильтрационные планшеты (номер по каталогу Регкт Е1тег 6005177), используя харвестер клеток (Регкт Е1тег). Планшеты промывали 6 раз 300 мкл на лунку 75 мМ раствора фосфорной кислоты и дно планшетов герметизировали. Добавляли 40 мкл/лунка М1сгозст1-20 и верх планшетов герметизировали и осуществляли считывание, используя сцинтилляционный счетчик Τορсοиηί (Регкт Е1тег). Вычисляли киназную активность путем вычитания числа импульсов в мин (срт), полученных в присутствии положительного контрольного ингибитора (10 мкМ стауроспорина) из числа импульсов/мин (срт), полученных в присутствии наполнителя. Способность тестируемого соединения ингибировать эту активность определяли как:
Процент ингибирования=((КБи тестируемого соединения-ΚΡϋ контроля)/(КРи наполнителя - ΚΡϋ контроля))х100
где ΚΡϋ тестируемого соединения=КРи, определенные для образца в присутствии тестируемого соединения;
ΚΡϋ контроля=КРи, определенные для образца с положительным контрольным ингибитором;
ΚΡϋ наполнителя=КРи, определенные в присутствии наполнителя.
Получали серийные разведения доз для соединений, позволяющие исследовать зависимость доза- 65 029827
ответ в анализе ингибирования .ΙΑΚ1 и вычислить 1С50 для каждого соединения. Каждое соединение обычно тестировали при концентрации 20 мкМ с последующим 1/3 серийным разведением, 8 точек (20 мкМ - 6,67 мкМ - 2,22 мкМ - 740 нМ - 247 нМ - 82 нМ - 27 нМ - 9 нМ) при конечной концентрации ДМСО 1%. Когда активность ряда соединений увеличивалась, получали больше разведений и/или верхнюю концентрацию понижали (например, 5 мкМ, 1 мкМ).
4.2.1. Анализ ΙΑΚ1 с пептидом Ρ1ίΰ1ιΙ-.ΙΑΚ1.
Рекомбинантную .ΙΑΚ1 человека (каталитический домен, аминокислоты 866-1154; номер по каталогу РУ4774) получали от ΙηνίΐΐΌΰοη. Инкубировали 1 нг 3ΑΚ1 с 20 нМ пептида Ρ1ίΰ1ιΙ-.ΙΑΚ1 (1уг1023) (номер по каталогу Регкт Е1тег ΤΚΡ0121) в киназном реакционном буфере (25 мМ МОРЗ рН 6,8, 0,01% Вгу-35, 5 мМ МдС12, 2 мМ ΏΤΤ, 7 мкМ АТФ) с или без 4 мкл, содержащими тестируемое соединение или наполнитель (ДМСО, 1% конечная концентрация) в общем объеме 20 мкл на белом планшете 384 Ορίΐ (Регкт Е1тег, номер по каталогу 6007290). Через 60 мин при комнатной температуре реакции останавливали добавлением 20 мкл/лунку детекторной смеси (1 хдетекторный буфер (Регкт Е1тег, номер по каталогу СК97-100С), 0,5 нМ европий-анти-фосфотирозина (РТ66) (Регкт Е1тег, номер по каталогу ΑΏ0068), 10 мМ ЭДТА). Считывание осуществляли с использованием ЕпМзюп при возбуждении при 320 нм и определяя излучение при 615 нм (Регкт Е1тег). Киназную активность рассчитывали, вычитая относительные единицы флуоресценции (ΚΡυ), полученные в присутствии положительного контрольного ингибитора (10 мкМ стауроспорин) из ΚΡυ, полученных в присутствии наполнителя. Способность тестируемого соединения ингибировать данную активность определяли как:
процент ингибирования=((КРи, определенные для образца в присутствии тестируемого соединения - ΚΡυ, определенные для образца с положительным контрольным ингибитором), деленное на (ΚΡυ, определенные в присутствии наполнителя - ΚΡυ, определенные для образца с положительным контрольным ингибитором))х100.
Получали серийные разведения доз для соединений, что позволяет тестировать влияние доза-ответ в анализе .ΙΑΚ1 и вычислить 1С50 для соединения. Каждое соединение обычно тестировали при концентрации 20 мкМ с последующим серийным разведением 1/5, 10 точек при конечной концентрации 1% ДМСО. Когда активность ряда соединений увеличивалась, получали больше разведений и/или верхнюю концентрацию понижали (например, 5 мкМ, 1 мкМ). Данные представлены в виде среднего значения 1С50 из анализов±стандартная ошибка среднего значения.
Таблица V
Значения 1С50 иллюстративных соединений по настоящему изобретению по отношению к ΙΑΚ1
- 66 029827
**** 0,1-50 нМ.
Таблица VI
Значения 1С50 сравнительных соединений по отношению к .ΙΆΚ1
Соединение Νο 1С50 ТАК1
А
В
С
ϋ
4.1.3. Анализ на определение Κι .1/44 1.
Для определения Κι с ферментом смешивали различные количества ингибитора и следили за ферментативной реакцией как функцией концентрации АТФ. Κι определяли при помощи двойного взаимного графического отображения Κιπ относительно концентрации соединения (график 1 лпехуеатег-Вигк). 1 нг ,Ι/\.Κ1 (Ίηνί (годен, Ρν4774) использовали в анализе. Субстрат представлял собой 50 нМ ^1^дΗι-^ΆΚ-1 (Туг1023) пептид (Регкт Е1тег, ТКР0121). Реакцию проводили в 25 мМ МОР8 рН 6,8, 0,01%, 2 мМ ΏΤΤ, 5 мМ МдС12 Вгу-35 при различных концентрациях АТФ и соединения. Фосфорилированный субстрат измеряли, используя Еи-меченное антитело РТ66 против фосфотирозина (Регкт Е1тег, /4)0068), как описано в 1.1.2. Считывание осуществляли на приборе Епу15юп (Регкт Е1тег) при возбуждении при 320 нм и последующем испускании при 615 и 665 нм.
4.2. Анализ ингибирования .1/442.
4.2.1. Анализ с субстратом ро1уСТ.
Каталитический домен рекомбинантной человека (аминокислоты 808-1132; номер по каталогу Ρν4210) закупали у 1пуйгодеп. 0,025 мЕ .ΗΕ? инкубировали с 2,5 мкг субстрата ро1уСТ (номер по каталогу 8щта Р0275) в киназном реакционном буфере (конечные концентрации: 5 мМ МОР8 рН 7,5, 9 мМ МдАс, 0,3 мМ НОТА, 0,06% Вгу и 0,6 мМ ΏΤΤ, 1 мкМ нерадиоактивного АТР, 0,25 мкКи 33Р-гаммаАТР (СЕ Неа1Фсаге, номер по каталогу АН9968) с или без 5 мкл, содержащими тестируемое соединение или наполнитель (ДМСО, конечная концентрация 1%, в суммарном объеме 25 мкл, в полипропиленовом 96-луночном планшете (Сгетег, ν-образные лунки). Через 90 мин при температуре 30°С реакции останавливали добавлением 25 мкл/лунка 150 мМ фосфорной кислоты. Все реакционные смеси после окончания реакции переносили в предварительно промытые (75 мМ фосфорная кислота) 96-луночные фильтрационные планшеты (номер по каталогу Регкт Е1тег 6005177), используя харвестер клеток (Регкт Е1тег). Планшеты промывали 6 раз 300 мкл на лунку 75 мМ раствора фосфорной кислоты и дно планшетов герметизировали. Добавляли 40 мкл/лунка М1сгозс1п1-20, верх планшетов герметизировали и осуществляли считывание, используя сцинтилляционный счетчик Торсонн! (Регкт Е1тег). Вычисляли киназ- 67 029827
ную активность путем вычитания числа импульсов в 1 мин (срт), полученных в присутствии положительного контрольного ингибитора (10 мкМ стауроспорина) из числа импульсов/мин (срт), полученных в присутствии наполнителя. Способность тестируемого соединения ингибировать эту активность определяют как:
Процент ингибирования=((КРи тестируемого соединения-КРи контроля)/(КРи наполнителя - КРИ контроля))х100
где КРИ тестируемого соединения=КРИ, определенные для образца в присутствии тестируемого соединения;
КРИ контроля=КРи, определенные для образца с положительным контрольным ингибитором;
КРИ наполнителя=КРи, определенные в присутствии наполнителя.
Получали серийные разведения доз для соединений, позволяющие исследовать зависимость дозаответ в анализе ингибирования ΙΑΚ2 и вычислить КУ, для каждого соединения. Каждое соединение обычно тестировали при концентрации 20 мкМ с последующим 1/3 серийным разведением, 8 точек (20 мкМ - 6,67 мкМ - 2,22 мкМ - 740 нМ - 247 нМ - 82 нМ - 27 нМ - 9 нМ) при конечной концентрации ДМСО 1%. Когда активность ряда соединений увеличивалась, получали больше разведений и/или верхнюю концентрацию понижали (например, 5 мкМ, 1 мкМ).
4.2.2. Анализ ΙΑΚ2 с пептидом иНдРЫЛКБ
Рекомбинантную ΙΆΚ2 человека (каталитический домен, аминокислоты 866-1154; номер по каталогу РУ4210) получали от Ыуйгодеп. Инкубировали 0,0125 мЕ ΙΆΚ2 с 25 нМ пептида υΐΐ§Ρΐ-ΙΑΚ1 (1уг1023) (номер по каталогу Регкт Е1тег ТКР0121) в киназном реакционном буфере (25 мМ ПЕРЕЗ ρΗ 7,0, 0,01% Тгйоп Х-100, 7,5 мМ МдС12, 2 мМ ΌΤΤ, 7,5 мкМ АТФ) в присутствии или в отсутствие 4 мкл, содержащих тестируемое соединение или наполнитель (ДМСО, 1% конечная концентрация) в общем объеме 20 мкл на белом планшете 384 Ορΐϊ (Регкт Е1тег, номер по каталогу 6007290). Через 60 мин при комнатной температуре реакции останавливали добавлением 20 мкл/лунку детекторной смеси (1 хдетекторный буфер (Регкт Е1тег, номер по каталогу СК97-100С), 0,5 нМ европий-анти-фосфотирозина (РТ66) (Регкт Е1тег, номер по каталогу ΑΏ0068), 10 мМ ЭДТА). Считывание осуществляли с использованием Епу15юп при возбуждении при 320 нм и определяя излучение при 615 нм (Регкт Е1тег). Киназную активность рассчитывали, вычитая относительные единицы флуоресценции (КРи), полученные в присутствии положительного контрольного ингибитора (10 мкМ стауроспорин) из КРи, полученных в присутствии наполнителя. Способность тестируемого соединения ингибировать данную активность определяли как:
Процент ингибирования=((КРи, определенные для образца в присутствии тестируемого соединения - КРи, определенные для образца с положительным контрольным ингибитором), деленное на (КРи, определенные в присутствии наполнителя - КРи, определенные для образца с положительным контрольным ингибитором))х100.
Получали серийные разведения доз для соединений, позволяющие исследовать зависимость дозаответ в анализе ингибирования ΙΑΚ2 и вычислить КУ, для соединения. Каждое соединение обычно тестировали при концентрации 20 мкМ с последующим 1/5 серийным разведением, 10 точек при конечной концентрации ДМСО 1%. Когда активность ряда соединений увеличивалась, получали больше разведений и/или верхнюю концентрацию понижали (например, 5 мкМ, 1 мкМ). Данные представлены в виде среднего значения КУ, из анализов+стандартная ошибка среднего значения.
Следующие соединения были протестированы на их активность по отношению к ΙΑΚ2 и значения Κ50, как определено с помощью анализов, описанных в настоящем документе, приведены ниже в табл. VII.
Таблица VII
Значения КУ, иллюстративных соединений по настоящему изобретению по отношению к ΙΑΚ2
- 68 029827
**** 0,1-50 нМ.
Таблица VIII
Значения ГС50 сравнительных соединений по отношению к ΙΆΚ2
Соединение Νο ДАК2 1С50
А -Л-
В *
С -А-
ϋ Ά·
4.2.3. Анализ на определение Κά 1АК2.
1АК2 (!пу11гоцеп, Ρν4210) использовали при конечной концентрации 5 нМ. Опыт по связыванию осуществляли в 50 мМ Нерез рН 7,5, 0,01% Вгу-35, 10 мМ МдС12, 1 мМ ЕОТА, используя 25 нМ киназного индикатора 236 Цпуйгодеп, Ρν5592) и 2 нМ Еи-анти-О8Т (Ыуйгодеп, Ρν5594) при изменении концентраций соединений. Детектирование индикатора осуществляли согласно методике от производителей.
4.3. Анализ ингибирования 1АК3.
4.3.1. Анализ 1АК3 с пептидом иНдЫ-1АК1.
Каталитический домен рекомбинантной 1АК3 человека (аминокислоты 781-1124; номер по каталогу Ρν3855) закупали у Ыуйгодеп. 0,5 нг белка 1АК3 инкубировали с 2,5 мкг субстрата ро1уОТ (номер по каталогу 81дта Р0275) в киназном реакционном буфере (конечные концентрации: 25 мМ Трис рН 7,5, 0,5 мМ ЕОТА, 10 мМ МдС12, 2,5 мМ ΌΤΤ, 0,5 мМ NазVΟ4, 5 мМ Ь-глицерофосфат, 0,01% Тритон Х-100, 1 мкМ нерадиоактивного АТР, 0,25 мкКи 33Р-гамма-АТР (ОЕ Неаййсаге, номер по каталогу АН9968)) с или без 5 мкл, содержащими тестируемое соединение или наполнитель (ДМСО, конечная концентрация 1%), в суммарном объеме 25 мкл, в полипропиленовом 96-луночном планшете (Огетег, ν-образные лунки). Через 45 мин при температуре 30°С реакции останавливали добавлением 25 мкл/лунка 150 мМ фосфорной кислоты. Все реакционные смеси после окончания реакции переносили в предварительно промытые (75 мМ фосфорная кислота) 96-луночные фильтрационные планшеты (номер по каталогу Регкт Е1тег
- 69 029827
6005177), используя харвестер клеток (ΙΚ'ΐΤίιι Е1тег). Планшеты промывали 6 раз 300 мкл на лунку 75 мМ раствора фосфорной кислоты и дно планшетов герметизировали. Добавляли 40 мкл/лунка М1αΌδθΐηΙ-20, верх планшетов герметизировали и осуществляли считывание, используя сцинтилляционный счетчик ТорсошП (ΙΚΉπι Е1тег). Вычисляли киназную активность путем вычитания числа импульсов в минуту (срт), полученных в присутствии положительного контрольного ингибитора (10 мкМ стауроспорин) из импульсов в минуту, полученных в присутствии наполнителя. Способность тестируемого соединения ингибировать эту активность определяли как:
Процент ингибирования=((КРи тестируемого соединения-КН ’ контроля)/(КТи наполнителя - КТи контроля))х100,
где КТи тестируемого соединения=КТи, определенные для образца в присутствии тестируемого соединения;
КТи контроля КН определенные для образца с положительным контрольным ингибитором;
КТи наполнителя КН определенные в присутствии наполнителя.
Получали серийные разведения доз для соединений, позволяющие исследовать зависимость дозаответ в анализе ингибирования 1АК3 и вычислить 1С50 для каждого соединения. Каждое соединение обычно тестировали при концентрации 20 мкМ с последующим 1/5 серийным разведением, 10 точек при конечной концентрации ДМСО 1%. Когда активность ряда соединений увеличивалась, получали больше разведений и/или верхнюю концентрацию понижали (например, 5 мкМ, 1 мкМ).
Следующие соединения были протестированы на их активность по отношению к 1АК3 и значения 1С50, как определено с помощью анализов, описанных в настоящем документе, приведены ниже в табл. IX.
Таблица IX
Значения 1С50 иллюстративных соединений по настоящему изобретению по отношению к 1АК3
- 70 029827
**** 0,1-50 нМ.
Таблица X
Значения !С50 сравнительных соединений по отношению к ΙΆΚ3
Соединение Νο САКЗ 1С50
С
ϋ
4.3.2. Анализ на определение Κι ΙΆΚ3.
Для определения Κι с ферментом смешивали различные количества соединения и следили за ферментативной реакцией как функцией концентрации АТФ. Κι определяли при помощи двойного взаимного графического отображения Кт относительно концентрации соединения (график Ьте^еауег-Вигк). ΙΆΚ3 (Сагпа ВюзОеисез, 09СВ8-0625В) использовали при конечной концентрации 10 нг/мл. Субстрат представлял собой натриевую соль Ро1у(О1и,Туг) (4:1), М.м. 20000-50000 (8фта, Р0275). Реакцию проводили в 25 мМ Τπδ рН 7,5, 0,01% Тгйои Х-100, 0,5 мМ ЕОТА, 2,5 мМ ЭТТ, 0,5 мМ ХаЛЧК 5 мМ Ъглицерофосфата, 10 мМ МдС12 при различных концентрациях АТФ и соединения и останавливали добавлением 150 мМ фосфорной кислоты. Определение включенного фосфата в субстрате Ро1уОТ осуществляли, помещая образцы на фильтрующий планшет (с использованием харвестера, Регкт Е1тег) и с последующим промыванием. Включенный 33Р в ро1уОТ определяли на сцинцилляционном счетчике Торсоии! после добавления сцинцилляционной жидкости в фильтрующие планшеты (Регкт Е1тег).
4.4. Анализ ингибирования ΤΥΚ2.
4.4.1. Анализ ΤΥΚ2 с пептидом иЛдйМАКк
Каталитический домен рекомбинантной ΤΥΚ2 человека (аминокислоты 871-1187; номер по каталогу 08-147) закупали у Сагиа ЪюзОеисез. 5 нг ΤΥΚ2 инкубировали с 12,5 мкг субстрата ро1уОТ (номер по каталогу 81§та Р0275) в киназном реакционном буфере (конечные концентрации: 25 мМ Нерез рН 7,2, 50 мМ №С1, 0,5 мМ НОТА, 1 мМ БТТ, 5 мМ МиС12, 10 мМ МдС12, 0,1% Вгу-35, 0,1 мкМ нерадиоактивного АТР, 0,125 мкКи 33Р-гамма-АТР (ОЕ НеаНйсаге, номер по каталогу АН9968)) с или без 5 мкл, содержащими тестируемое соединение или наполнитель (ДМСО, конечная концентрация 1%), в суммарном объеме 25 мкл, в полипропиленовом 96-луночном планшете (Огетег, У-образные лунки). Через 90 мин при 30°С, реакции останавливали добавлением 25 мкл/лунку 150 мМ фосфорной кислоты. Все реакционные смеси после окончания реакции переносили в предварительно промытые (75 мМ фосфорная кислота) 96-луночные фильтрационные планшеты (номер по каталогу Регкт Е1тег 6005177), используя харвестер клеток (Регкт Е1тег). Планшеты промывали 6 раз 300 мкл на лунку 75 мМ раствора фосфорной кислоты и дно планшетов герметизировали. Добавляли 40 мкл/лунка М1сго§ст1-20, верх планшетов
- 71 029827
герметизировали и осуществляли считывание, используя сцинти.ияционный счетчик ТорсонШ (Регкт Е1тег). Вычисляли киназную активность путем вычитания числа импульсов в минуту (срт), полученных в присутствии положительного контрольного ингибитора (10 мкМ стауроспорин) из импульсов в минуту, полученных в присутствии наполнителя. Способность тестируемого соединения ингибировать эту активность определяли как:
Процент ингибирования=((срт, определенные для образца в присутствии тестируемого соединения - срт, определенные для образца с положительным контрольным ингибитором), деленное на
(срт, определенные в присутствии наполнителя - срт определенные для образца с положительным контрольным ингибитором))х100.
Получали серийные разведения доз для соединений, позволяющие исследовать зависимость дозаответ в анализе ТУК2 и вычислить К\0 для каждого соединения. Каждое соединение обычно тестировали при концентрации 20 мкМ с последующим 1/3 серийным разведением, 8 точек (20 мкМ - 6,67 мкМ 2,22 мкМ - 740 нМ -247 нМ - 82 нМ - 27 нМ - 9 нМ) при конечной концентрации ДМСО 1%. Когда активность ряда соединений увеличивалась, получали больше разведений и/или верхнюю концентрацию понижали (например, 5 мкМ, 1 мкМ).
Следующие соединения были протестированы на их активность по отношению к ТУК2; и значения !С50, как определено с помощью анализов, описанных в настоящем документе, приведены ниже в табл. XI.
Таблица XI
Значения К\0 иллюстративных соединений по настоящему изобретению по отношению к ТУК2
- 72 029827
** >100-500 нМ.
*** >50-100 нМ.
**** 0,1-50 нМ.
Таблица ХГГ
Значения ГС50 сравнительных соединений по отношению к ΤΥΊ\.2
Соединение Νο ΤΥΚ2 1С50
С
ϋ *
4.4.2. Анализ на определение Кй ΤΥ^.
ΤΥΊ42 (Сагпа Вюзщепсез, 09СВ8-09830) использовали при конечной концентрации 5 нМ. Опыт по связыванию осуществляли в 50 мМ Нерез рН 7,5, 0,01% Вгу-35, 10 мМ МдС12, 1 мМ БОГА, используя 50 нМ киназной метки 23б (Гпуйтодеп, РУ5592) и 2 нМ Еи-анти-ΟδΤ (ГпуЦтодеп, РУ5594) при изменении концентраций соединения. Детектирование метки осуществляли согласно методике производителей.
Пример 5. Клеточные анализы.
5.1. Клеточные анализы селективности 1АК1, 1АК2 и ΤΥΊ\.2.
5.1.1. Клеточный анализ селективного МК1, активация δΤ.ΆΊΊ ПУ'а в РВМС.
Мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) выделяли из лейкоцитарных пленок в стерильных условиях с помощью центрифугирования в градиенте плотности с использованием БутрБоРгер™ среды (Аххз-ЗЫеЫ), с последующими 3 последовательными стадиями промывки в ΡΒδ без Са++ Мд++. РВМС ресуспендировали в обычной среде КРМГ 1б40, содержащей 10% (об./об.) инактивированной нагреванием ΡΒδ, 1% Реп-8Гтер (100 Е/мл пеницилл и 100 мкг/мл стрептомицин) и далее культивировали в увлажненном инкубаторе при 37°С 5% СО2.
РВМС высевали в 24-луночные планшеты в количестве 5,0х10б клеток/лунку в объеме 200 мкл КРМГ 1б40 (Гпуйтодеп), содержащем 10% (об./об.) ΡΒδ и 1% Реп^1гер (Гпуйтодеп).
РВМС обрабатывали тестируемым соединением в течение 30 мин при 37°С 5% СО2. 25 мкл 10х концентрированного разведения соединения добавляли к среде. Через 30 мин предварительной обработ- 73 029827
ки тестируемое соединение/носитель, РВМС стимулировали в течение 30 мин при 37°С 5% СΟ2 с рекомбинантным человека (РергоТесЬ) при конечной концентрации 100 нг/мл путем добавления 25 мкл (10х концентрированный) цитокинового триггера для получения конечного объема 250 мкл на лунку.
Все соединения тестировали в отдельности, начиная от 20 мкМ с последующим 1/3 серийным разведением, 8 доз в целом (20 мкМ, 6,6 мкМ, 2,2 мкМ, 0,74 мкМ, 0,25 мкМ, 0,082 мкМ, 0,027 мкМ и 0,009 мкМ) при конечной концентрации ДМСО 0,2%.
Через 30 мин стимуляции цитокином, 250 мкл клеточной суспензии переносили в 96-луночный планшет с У-образным дном, центрифугировали в течение 5 мин при 1000 об/мин для осаждения клеток, с последующим удалением супернатанта. Сгусток клеток ресуспендировали в 100 мкл 1х буфера для лизиса, дополненного смесью ингибиторов протеаз без ΕΌΤΑ (КосЬе АррЬеб 8сгепсе8, номер продукта 11836170001), затем образец замораживали и хранили при -80°С. 1х Буфер для лизиса предоставляется с набором фосфо-8ТАТ1 БШа и содержит ингибиторы фосфатазы. Эндогенные уровни фосфорилированного 8ТАТ1 определяли количественно с использованием 96-луночного Ра(Ь8сап® набора для ББ18Аанализа сэндвич-типа фосфо-8ТАТ1 (Туг701) (Се11 8гдпа1ш§, номер продукта # 7234) в соответствии с инструкциями производителя.
Активность НКР (НКР конъюгировали со вторичным антителом) оценивали путем добавления 100 мкл свежеприготовленного субстрата люминола (хемилюминесцентный субстрат ВМ СЬешЛишгпексепсе ББ18А (ΡΟΌ), КосЬе, номер продукта 11582950001), инкубацией в течение 5 мин при комнатной температуре в темноте и оценивали в микропланшетном люминометре ТЬегто 8сгепШгс Ьишгпоккап А§сеп( (время интегрирования 200 мс).
5.1.2. Клеточный анализ селективного 1АК2, активация 8ТАТ5 ОМ-С8Р в РВМС.
Мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) выделяли из лейкоцитарных пленок в стерильных условиях с помощью центрифугирования в градиенте плотности с использованием ЬушрЬоРгер™ среды (Ахг8-8Ьге1б), с последующими 3 последовательными стадиями промывки в РВ8 без Са++ Мд++. РВМС ресуспендировали в обычной среде КРМ1 1640, содержащей 10% (об./об.) инактивированной нагреванием РВ8, 1% Реп-8(гер (100 Е/мл пеницилл и 100 мкг/мл стрептомицин) и далее культивировали в увлажненном инкубаторе при 37°С 5% СΟ2.
РВМС высевали в 24-луночные планшеты в количестве 5,0х106 клеток/лунку в объеме 200 мкл КРМ1 1640 (1пуг(годеп), содержащем 10% (об./об.) РВ8 и 1% Реп-8(гер (1пуЬгодеп).
РВМС обрабатывали тестируемым соединением, добавляя 25 мкл 10х концентрированного разведения соединения к среде, и инкубировали в течение 30 мин при температуре 37°С 5% СΟ2. Впоследствии РВМС стимулировали с рекомбинантным ОМ-С8Р человека (РергоТесЬ) при конечной концентрации 0,5 нг/мл путем добавления 25 мкл (10х концентрированный) цитокинового триггера на лунку для получения конечного объема 250 мкл. Клетки стимулировали в течение 30 мин при 37°С 5% СΟ2.
Все соединения тестировали в отдельности, начиная от 20 мкМ с последующим 1/3 серийным разведением, 8 доз в целом (20 мкМ, 6,6 мкМ, 2,2 мкМ, 0,74 мкМ, 0,25 мкМ, 0,082 мкМ, 0,027 мкМ и 0,009 мкМ) при конечной концентрации ДМСО 0,2%.
Через 30 мин стимуляции цитокином, 250 мкл клеточной суспензии переносили в 96-луночный планшет с У-образным дном, затем центрифугировали в течение 5 мин при 1000 об/мин для осаждения клеток. Клеточный супернатант удаляли и осадок ресуспендировали в 100 мкл 1 х буфера для лизиса, дополненного смесью ингибиторов протеаз без БЭТА (КосЬе АррЬеб 8сгепсе8, номер продукта 11836170001), затем образец замораживали и хранили при -80°С. 1х Буфер для лизиса предоставляется с набором БЩа фосфо-ЭТАТ5 и содержит ингибиторы фосфатазы. Эндогенные уровни фосфорилированного 8ТАТ5 определяли количественно с использованием 96-луночного Ра(Ь8сап® набора для ББ18Аанализа сэндвич-типа фосфо-ЭТАТ5 (Туг694) (Се11 8гдпа1ш§, номер продукта #7113) в соответствии с инструкциями производителя.
Активность НКР (НКР конъюгировали со вторичным антителом) оценивали путем добавления 100 мкл свежеприготовленного субстрата люминола (хемилюминесцентный субстрат ВМ СЬетЛитгпексепсе ББ18А (ΡΟΌ), КосЬе, номер продукта 11582950001), инкубацией в течение 5 мин при комнатной температуре в темноте и оценивали в микропланшетном люминометре ТЬегто 8сгепШгс Ьитгпоккап А§сеп( (время интегрирования 200 мс).
5.1.3. Клеточный анализ селективного ТУК2, активация 8ТАТ4 1Ь-12 в N<-92 клетках.
Клетки N<-92 (злокачественная неходжкинская лимфома человека, интерлейкин-2 (ББ-2) зависимой клеточной линии естественных киллеров, АТСС #СКЕ-2407).
Клетки N<-92 сохраняли в минимальной эссенциальной среде (МИМ) Альфа-среда без рибонуклеозидов и дезоксирибонуклеозидов, 2 мМ Ь-глутамина, 2,2 г/л бикарбоната натрия (1пуг(годеп, номер продукта 22561-021), содержащей 0,2 мМ мио-инозитол, 0,1 мМ 2-меркапто-ΕΐΟΗ, 0,1 мМ фолиевой кислоты, 12,5% инактивированной нагреванием лошадиной сыворотки (1пуг(годеп, номер продукта 26050-088), 12,5% инактивированной нагреванием РВ8, 1% Реп-8(гер (100 Ед/мл пеницилл и 100 мкг/мл стрептомицина) и 10 нг/мл рекомбинантного человеческого 1Ь-2 (Ρ&Ό 8у8(ет8). 1Ь-2 добавляли заново к среде с каждой стадией обновления среды.
- 74 029827
Клетки культивировали в увлажненном инкубаторе при 37°С 5% СО2.
Субкультивированную фракцию клеток ΝΚ-92 промывали один раз в обычной среде без гЫЕ-2 и высевали в 24-луночные планшеты в количестве 0,5Е06 клетки/лунку в объеме 400 мкл обычной альфасреды МЕМ без гИБ-2, содержащей 0,2 мМ мио-инозитол, 0,1 мМ 2-меркаптоэтанол, 0,1 мМ фолиевой кислоты, 12,5% инактивированной нагреванием лошадиной сыворотки (йхЕгодеп, номер продукта 26050-088), 12,5% инактивированной нагреванием РВ8, 1% Реп-81гер рпуйгодеп).
Клетки ΝΚ-92 обрабатывали тестируемыми соединениями в течение 30 мин перед гЫБ-12 стимуляцией путем добавления 50 мкл 10х концентрированного разведения соединения и инкубации при 37°С 5% СО2. Через 30 мин предварительной обработки соединение/носитель, клетки стимулировали рекомбинантным ГБ-12 человека (Κ&Ό §у81ет8, номер продукта 219-1Б) в конечной концентрации 25 нг/мл добавлением 50 мкл (10х концентрированный) цитокинового триггера для получения конечного объема 500 мкл на лунку. Клетки ΝΚ-92 стимулировали гЫБ-12 в течение 30 мин при 37°С 5% СО2.
Все соединения тестировали в отдельности, начиная от 20 мкМ с последующим 1/3 серийным разведением, 8 доз в целом (20 мкМ, 6,6 мкМ, 2,2 мкМ, 0,74 мкМ, 0,25 мкМ, 0,082 мкМ, 0,027 мкМ и 0,009 мкМ) при конечной концентрации ДМСО 0,2%.
Уровни фосфо-8ТАТ4 в гЫБ-12 стимулированных ΝΚ-92 клетках количественно определяли с помощью анализа методом проточной цитометрии на проточном цитометре ОаШоз™ (Весктап СоиЙег). Через 30 мин стимуляции цитокином клетки фиксировали добавлением 500 мкл предварительно подогретого буфера ВО Су1ойх Пхайоп (ВО РНозПож™, номер продукта 554655) непосредственно в лунки (фиксировать клетки немедленно для поддержания состояния фосфорилирования, а не осаждения клеток, рекомендуется, чтобы зафиксировать клетки, путем добавления равного объема предварительно подогретого буфера ВО Су1ойх к суспензии клеток). Клетки инкубировали в течение 10 мин при 37°С. Фракцию фиксированных клеток ресуспендировали (1 мл) и переносили в пробирки РАС8 с последующей стадией центрифугирования (300хд, 10 мин) и удаления супернатанта. Сгусток клеток смешивали (вихревая мешалка) и клетки пермеабилизировали путем добавления 1 мл пермиабилизирующего буфера ВО Р1о8Йо\ Регт Вийег III (ВО Р1о8Йо\™, номер продукта 558050) с последующей инкубацией на льду в течение 30 мин. После стадии пермеабилизации, клетки промывали два раза буфером ВО РйагтшдепТМ §1аш Вийег (ВО Рйагттдеп, номер продукта 554656) с промежуточным центрифугированием при 300хд в течение 10 мин и удалением супернатанта. Осадок (0,5Е06 клеток) ресуспендировали в 100 мкл буфера ВО Рйагттдеп™ §1ат Вийег и окрашивали путем смешивания 20 мкл РЕ мышиного антитела против 8ТАТ4 (рУ693) с клетками (ВО Р1о8Йо\™, РЕ Мои8е Апй-8ТАТ4 (рУ693), номер продукта 558249), затем инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре в темноте. Окрашенные клетки промывали один раз 2 мл буфера ВО Рйагттдеп™ §1ат Вийег и ресуспендировали в 500 мкл буфера ВО Рйагтшдеп™ §1аш Вийег и анализировали на проточном цитометре ОаШо8™ (Весктап СоиЙег).
Для всех анализов, мертвые клетки и дебрис исключали прямым светорассеянием (Р8С) и боковым светорассеянием (88С). Изменения в фосфорилировании белков 8ТАТ4 после цитокиновой стимуляции аппроксимируются из расчета Х-медиана или Х-средняя интенсивность флуоресценции (МИ) на клетку на 100% закрытой фракции для всех цитокин стимулированных, тестируемого соединения и нестимулированных образцов.
5.1.4. Результаты анализов ΙΆΚ1, ΙΆΚ2 и ТУК2: нестимулированные образцы (нет триггера/наполнитель (0,2% ДМСО) использовали в качестве положительного контроля (100% ингибирование). В качестве отрицательного контроля (0% ингибирование) использовали стимулированные образцы (триггера/наполнитель (0,2% ДМСО)). Положительные и отрицательные контроли используют для вычисления значений Ζ' и "процента ингибирования (РIN)".
Процент ингибирования вычисляли из
КС Ш (триггер/наполн. ) - КС Ы1(тест. соединение )
Процент ингибирования = -;- .--* 100
КС Ш (триггер/наполн.) - КС ИД нет триггер/наполн.)
где КСЕи(триггер/напол.): относительный хемилюминесцентный сигнал определяли в присутствии наполнителя и триггера;
КСББДтест. соединение): относительный хемилюминесцентный сигнал определяли в присутствии тестируемых соединений);
КСББДнет триггера/напол.): относительный хемилюминесцентный сигнал определяли в присутствии наполнителя без триггера.
В случае если сигнал считывания выражали в виде Х-средних значений (проточный цитометрический анализ уровней р8ТАТ4 в цитокин стимулированных ΝΚ-92 клетах), КСББ заменяли на Х-среднее значение.
Значения РШ наносят на график зависимости доза-ответ для тестируемых соединений и получают значения ЕС50, используя программное обеспечение ОгарйРай РЙ8т, используя нелинейную регрессию (сигмоидальную) кривой.
- 75 029827
5.2. 1АК1 мутации при раке легкого и анализ клеточных линий гепатоцеллюлярной карциномы.
5.2.1. 1АК1 мутация, индуцированная конститутивной передачей сигнала.
Линии раковых клеток с и без 1АК1 мутаций (табл. I линии раковых клеток легкого) культивировали с или без сыворотки в течение 4-6 ч, стимулировали или нет цитокиновым коктейлем (ΡΝΕγ, РР2, П.4 и ГЪ6) в течение 5, 10, 30 и 45 мин. Фосфорилирование 1АК1, 8ТАТ1, 8ТАТ3 и 8ТАТ5 оценивали с помощью иммуноблот-анализа (Се11 81дпа1т§ αηίΐϋο^δ).
5.2.2. Таргетинг мутаций 1АК1 с использованием ингибиторов 1АК.
5.2.2.1. Фосфорилирование пути 1АК-8ТАТ.
Линии раковых клеток с и без 1АК1 мутаций культивировали в присутствии или в отсутствие различных концентраций ингибиторов 1АК. Клетки анализировали через 24 и 48 ч на эффективность ингибирования пути 1АК-8ТАТ с помощью иммуноблот-анализа.
Таблица XIII
Иллюстративные клеточные линии рака легкого
Ген клеточная линия Ткань замена Домен белка Присутствует в первичной ткани
ИАК1 Ν6ΙΗ1915 легкое Ι62ν ЕЕКМ -
ИАК1 501 легкое N2263 ЕЕКМ -
ДАК1 НСС4006 легкое 3383С ЕЕКМ -
ИАК1 Ν6ΙΗ2066 легкое Ь423У интердомен (ЕЕКМ и 5Н2) -
ИАК1 ΝΟΙΗ1793 легкое Η525Υ ЗН2 -
ИАК1 НСС95 легкое N8333 Протеин киназа 1 да
ИАК1 УМКСЬСО легкое Е223* - -
ИАК1 ΝΟΙΗ1563 легкое 0161* - -
№Т ИАК1 А549 легкое - - -
ИАК1 -/- И4С фибросаркома - - -
*: усечение.
5.2.2.2. Жизнеспособность клетки.
2В-анализ: линии раковых клеток с и без 1АК1 мутаций культивировали в присутствии или в отсутствие возрастающих концентраций ингибиторов 1АК. Через 48-72 ч жизнеспособность клеток измеряли с помощью анализа на жизнеспособность клеток Се11 Тйег-ОЬ ^ит^ηеδсеη! се11 мхаЪШРу аδδау ^готе^а) или анализа МТТ. Альтернативно, линии раковых клеток в различные временные точки культивирования с фиксированной концентрацией ингибитора 1АК, анализировали на жизнеспособность клетки, используя анализ жизнеспособности клетки Се11 Тйег-ОФ ^ит^ηеδсеη! се11 мхаЪШРу аδδау ^готе^а) или анализ МТТ.
3В-анализ: линии раковых клеток с и без 1АК1 мутаций высевали в полутвердую агаровую среду. Формирование многоклеточных колоний измеряли путем определения жизнеспособности клеток с использованием флуоресцентного красителя в различные временные точки культивирования. Добавление потенциальных ингибиторов после посева клеток делает возможным анализ антитуморогенных эффектов.
5.2.3. Исследование мутаций 1АК1 человека в клетках Ва/Р3 мыши.
(Как показано в: Кап е! а1., 2013; 8!аегк е! а1., 2005; /епаШ е! а1., 2011).
Конструирование экспрессирующих векторов 1АК1: последовательности 1АК1 человека дикого типа и мутантные клонировали в ретровирусные векторы, и клоны проверяли секвенированием.
Ретровирусное инфицирование клеток Ва/Р3: клетки Ва/Р3 инфицировали ретровирусными супернатантами, полученными в клетках 293Т.
Клетки Ва/Р3, экспрессирующие 1АК1 человека дикого типа или мутантный, культивировали с использованием или без РР-3 в течение 4 ч и фосфорилирование пути 1АК-8ТАТ оценивали с помощью иммуноблот-анализа.
Трансформирующий потенциал 1АК1 мутаций оценивали путем измерения способности каждой мутации индуцировать автономный рост при экспрессии в цитокин-зависимые клетки Ва/Р3. Рост клетки оценивали в отсутствие цитокина П.-3.
Мутант 1АК1 трансдуцированные клеточные линии Ва/Р3 оценивали на предмет их чувствительности к ингибиторам 1АК культивированием их в присутствии или в отсутствие возрастающих концентраций ингибиторов 1АК. Через 48-72 ч, жизнеспособность клеток измеряли с помощью анализа на жизнеспособность клеток Се11 Тйег-ОЬ ^ит^ηеδсеη! се11 У1аЪШ!у аδδау ^готе^а) или анализа МТТ. Лльтернативно, линии раковых клеток в различные временные точки культивирования с фиксированной концен- 76 029827
трацией ингибитора ΙΑΚ, анализировали на жизнеспособность клетки, используя анализ жизнеспособности клетки Се11 ТЬег-С1о ЬиттексеШ: се11 хчаЪППу аккау (Рготеда) или анализ МТТ.
5.2.4. Ιη νίνο туморогенный потенциал мутаций ίΑΚ1.
5.2.4.1. Модель ксенотрансплантата.
Мутант ΙΑΚ1 экспрессирующие клетки вводили подкожно мышам линии СБ1 пи/пи или мышам Иад1-/- и оценивали на развитие опухоли. Устаналивали кривые роста объема подкожной опухоли. Определяли трансплантируемость первичных опухолей во вторичные животные-реципиенты.
5.2.4.2. Модель РБХ.
Ксенотрансплантаты, полученные из тканей пациентов (РБХ) основаны на переносе первичных опухолей (содержащих мутации ΙΑΚ1) непосредственно от пациента в организм иммунодефицитных мышей. Для достижения этой цели, опухоли пациента должны быть свежеполученными после операции, в результате чего они механически или химически усваиваются, с небольшим участком сохраненной в качестве основного запаса и пересаживаются мыши ΝΟΌ-ЗСГО. Модели РБХ поддерживали пассированием клеток непосредственно от мыши к мыши, как только бремя опухоли становится слишком высоким. Опухоли могут быть пересажены путем гетеротопической пересадки (имплантация опухоли в подкожную часть бока мыши) или ортотопической пересадки (непосредственно имплантация в выбранный орган мыши).
Фосфорилирование ΙΑΚ1, 3ΤΑΤ1, 3ΤΑΤ3 и 3ΤΑΤ5 в первичных и вторичных опухолях оценивали с помощью иммуноблот-анализа.
5.3. Анализ пролиферации РВЬ.
Лимфоциты периферической крови (РВЬ) человека стимулировали посредством 1Ь-2 и измеряли пролиферацию, используя метод включения ВтйБ. РВЬ сначала стимулировали в течение 72 ч посредством РНА, индуцируя рецептор 1Ь-2, затем их подвергали голоданию на протяжении 24 ч, приостанавливая тем самым пролиферацию клеток с последующей стимуляцией посредством 1Ь-2 на протяжении еще 72 ч (включая 24-часовое ВтйБ мечение). Клетки предварительно инкубировали с тестируемыми соединениями за 1 ч до введения 1Ь-2. Клетки культивировали в среде РРМ1 1640, содержащей 10% (об./об.) ΡΈδ.
5.4. Анализ цельной крови человека (Ь^ВЛ).
5.4.1. Протокол 1.
5.4.1.1. Протокол стимуляции 1Ь-6.
Для установления селективности соединения в отношении ΙΑΚ1 по сравнению с ίΑΚ2 был также проведен проточный цитометрический анализ ех νίνο с использованием цельной крови человека. Таким образом, кровь брали у людей-добровольцев, давших информированное согласие. После этого кровь приводили в равновесие в течение 30 мин при 37°С при осторожном качании, затем отбирали аликвоты в пробирки Эппендорфа. Добавляли соединение в различных концентрациях и инкубировали при 37°С в течение 30 мин при осторожном качании и затем стимулировали в течение 20 мин при 37°С при осторожном качании с интерлейкином 6 (1Ь-6) для стимуляции .1АК1-зависимого пути или СМ-СЕГ для стимуляции .1АК2-зависимого пути. После этого проводили оценку фосфо-ЗΤЛΤ1 и фосфо-ЗΤЛΤ5 при использовании анализа ΡЛСЗ.
5.4.1.2. Анализы фосфо-З^ТЬ
5.4.1.2.1. Получение реагентов.
5х буфер Ьуке/Ρίχ (ВБ РИо^о^, по каталогу № 558049) разбавляли в 5 раз дистиллированной водой и предварительно нагревали при 37°С. Оставшийся разбавленный буфер Ьуке/Ρίχ отбрасывали.
10 мкг тЫЬ-6 (В&Б ЗукЮтк. номер по каталогу 206-1Ь) растворяли в 1 мл РВЗ 0,1% ВЗЛ, получая 10 мкг/мл исходного раствора. Исходный раствор делили на аликвоты и хранили при -80°С.
Готовили 3-кратное серийное разбавление соединения в ДМСО (10 мМ исходного раствора). В образцы, обработанные контрольным веществом, добавляли ДМСО вместо соединения. Все образцы инкубировали при 1% конечной концентрации ДМСО.
5.4.1.2.2. Инкубирование крови с соединением и стимуляция 1Ь-6.
Кровь человека собирали в гепаринизированные пробирки. Кровь делили на аликвоты по 148,5 мкл. Затем к каждой аликвоте крови добавляли 1,5 мкл разбавления тестируемого соединения и инкубировали образцы крови в течение 30 мин при 37°С при осторожном качании. К образцам крови добавляли полтора микролитра 10-кратно разбавленного исходного раствора 1Ь-6 (1,5 мкл) (конечная концентрация 10 нг/мл) и образцы инкубировали при 37°С в течение 20 мин при осторожном качании.
5.4.1.2.3. Получение лейкоцитов.
В конце периода стимуляции к образцам крови немедленно добавляли 3 мл 1х предварительно нагретого буфера Ьуке/Ρίχ, быстро встряхивали и инкубировали в течение 15 мин при температуре 37°С на водяной бане для того, чтобы лизировать красные кровяные клетки и фиксировали лейкоциты.
Пробирки центрифугировали в течение 5 мин при 400хд при 4°С. Сгусток клеток промывали 3 мл холодного 1х РВЗ и после центрифугирования сгусток клеток ресуспендировали в 100 мкл ледяного 1х РВЗ и добавляли 900 мкл ледяного 100% МеОН. Клетки затем инкубировали при 4°С в течение 30 мин
- 77 029827
для пермеабилизации.
Пермеабилизированные клетки затем промывали 1х РВ8, содержащем 3% В8А, и, в заключение, ресуспендировали в 80 мкл 1х РВХ, содержащем 3% В8А.
5.4.1.2.4. Мечение клетки антителами против фосфо-8ΤΑΤ1 и против СЭ4.
20 мкл РЕ мышиного антитела против 8ΤΑΤ1 (рУ701) или РЕ мышиного 1дО2ак-изотипа контрольного антитела (ВО Вызспенсез. номер по каталогу 612564 и 559319 соответственно) и ЬГГСконъюгированного антитела против СЭ4 или контрольного Р1ТС-конъюгированного антитела изотипа добавляли и смешивали, затем инкубировали в течение 30 мин при температуре 4°С в темноте.
Затем клетки промывали один раз 1х РВ8 и анализировали на проточном цитометре РАС8СаШо II (ВО Вюзаеисез).
5.4.1.2.5. Флуоресцентный анализ на РАС8Сайо II.
50000 суммарных событий подсчитывали и фосфо-8ΤΑΤ1 положительные клетки измеряли после клеточного сортинга относительно СЭ4+ клеток, в лимфоцитарном окне. Данные анализировали, используя программное обеспечение РАС8Оща, и они соответствовали проценту ингибирования ГЬ-6 стимуляции, рассчитанному по процентному содержанию положительных клеток для фосфо-8ΤΑΤ1 относительно СЭ4+ клеток.
5.4.1.3. Анализ фосфо-8ΤΑΤ5.
Получение реагентов.
5х буфер Ьузе/Ρίχ (ВО РНозПого, по каталогу № 558049) разбавляли в 5 раз дистиллированной водой и предварительно нагревали при 37°С. Оставшийся разбавленный буфер Ьузе/Ρίχ отбрасывали.
10 мкг гНОМ-СЪЕ (АЬСуз 8.А., номер по каталогу Р300-03) растворяли в 100 мкл РВ8 0,1% В8А, получая 100 мкг/мл исходного раствора. Исходный раствор делили на аликвоты и хранили при -80°С.
Готовили 3-кратное серийное разбавление соединения в ДМСО (10 мМ исходного раствора). В образцы, обработанные контрольным веществом, добавляли ДМСО без тестируемого соединения. Все образцы инкубировали при 1% конечной концентрации ДМСО.
5.4.1.3.1. Инкубирование крови с соединением и стимуляция ОМ-С8Ρ.
Кровь человека собирали в гепаринизированные пробирки. Кровь делили на аликвоты по 148,5 мкл. Затем к каждой аликвоте крови добавляли 1,5 мкл разбавления соединения и инкубировали образцы крови в течение 30 мин при 37°С при осторожном качании. К образцам крови добавляли 5000-кратный разбавленный исходный раствор ОМ-С8Ρ (1,5 мкл) (конечная концентрация 20 пг/мл) и образцы инкубировали при 37°С в течение 20 мин при осторожном качании.
5.4.1.3.2. Получение лейкоцитов.
В конце периода стимуляции к образцам крови немедленно добавляли 3 мл 1х предварительно нагретого буфера Ьузе/Ρίχ, быстро встряхивали и инкубировали в течение 15 мин при температуре 37°С на водяной бане для того, чтобы лизировать красные кровяные клетки и фиксировали лейкоциты.
Пробирки центрифугировали в течение 5 мин при 400хд при температуре 4°С. Сгусток клеток промывали 3 мл холодного 1х РВ8 и после центрифугирования сгусток клеток ресуспендировали в 100 мкл ледяного 1х РВ8 и добавляли 900 мкл ледяного 100% МеОН. Клетки затем инкубировали при 4°С в течение 30 мин для пермеабилизации.
5.4.1.3.3. Мечение клетки антителами против фосфо-8ΤΑΤ5 и против СИ33.
20 мкл РЕ мышиного антитела против 8ΤΑΤ5 (рУ694) или РЕ мышиного !дО1к-изотипа контрольного антитела (ВИ ВОзОеисез, номер по каталогу 612567 и 554680, соответственно) и АРС мышиного антитела против СИ33 (ВИ ВюзОеисез #345800) или контрольного АРС мышиного ЦО1 изотипа антитела (ВИ ВюзОеисез #345818) добавляли, смешивали, затем инкубировали в течение 30 мин при температуре 4°С в темноте.
Затем клетки промывали один раз 1х РВ8 и анализировали на проточном цитометре ΡΑС8Саηίο II (ВИ Вюзаеисез).
5.4.1.3.4. Флуоресцентный анализ на ΡΑС8Саηίο II.
50000 суммарных событий подсчитывали и фосфо-8ΤΑΤ5 положительные клетки измеряли после клеточного сортинга относительно СИ33+ клеток. Данные анализировали, используя программное обеспечение ΡΑС8^^νа, и они соответствовали проценту ингибирования ОМ-С8Ρ стимуляции, рассчитанному по процентному содержанию положительных клеток для фосфо-8ΤΑΤ5 относительно СИ33+ клеток.
5.5. Протокол 2.
5.5.1. Протокол стимуляции.
Для установления селективности соединения в отношении 1ΑΚ1 по сравнению с 1А1<2 был также проведен проточный цитометрический анализ ех νί\Ό с использованием цельной крови человека. Таким образом, кровь брали у людей-добровольцев, давших информированное согласие. После этого кровь приводили в равновесие в течение 30 мин при 37°С при осторожном качании, затем отбирали аликвоты в пробирки Эппендорфа. Добавляли соединение в различных концентрациях и инкубировали при 37°С в течение 30 мин при осторожном качании и затем стимулировали в течение 20 мин при 37°С при осторожном качании с интерлейкином 6 (ГЬ-6) для стимуляции 1А1<1-зависимого пути, интерфероном альфа
- 78 029827
(ΓΡΝα) для стимуляции ^ΆΚ1/ΤΥΚ2 пути, интерлейкином 2 (ГЦ-2) для стимуляции 1АК1/1АК3 пути или ОМ-С8Е для стимуляции 1АК2-зависимого пути. После этого проводили оценку уровней фосфо-8ТАТ1 (для Ш-6- и Ш^-стимулированных клеток) и фосфо-8ТАТ5 (для [Ц-2- и ОМ-С8Е-стимулированных клеток) при использовании анализа РАС8.
5.5.2. Анализы фосфо-8ТАТ.
5.5.2.1. Получение реагентов.
5х буфер Ьузе/Их (ΒΌ РйозИоте, номер по каталогу 558049) разбавляли в 5 раз дистиллированной водой и предварительно нагревали при 37°С. Оставшийся разбавленный буфер Ьузе/Их отбрасывали.
10 мкг гЫЬ-6 (Ρ&Ό 8уз!етз, номер по каталогу 206-!И) растворяли в 1 мл РВ8+0,1% В8А, получая 10 мкг/мл исходного раствора. Исходный раствор делили на аликвоты и хранили при -80°С.
10 мкг гЫЬ-2 (Ρ&Ό 8уз!етз, номер по каталогу 202-!И) растворяли в 1 мл РВ8+0,1% В8А, получая 10 мкг/мл исходного раствора. Исходный раствор делили на аликвоты и хранили при -80°С.
5 мкг ГЙОМ-С8Р (АЬСуз 8.А., номер по каталогу Р300-03) растворяли в 12,5 мл РВ8+0,1% В8А, получая 400 нг/мл исходного раствора. Исходный раствор делили на аликвоты и хранили при -80°С.
Готовили 3-кратное серийное разбавление соединения в ДМСО (10 мМ исходного раствора). В образцы, обработанные контрольным веществом, добавляли ДМСО вместо соединения. Все образцы инкубировали при 1% конечной концентрации ДМСО.
5.5.2.2. Инкубирование крови с соединением и стимуляция триггерами.
Кровь человека собирали в гепаринизированные пробирки. Кровь делили на аликвоты по 148,5 мкл. Затем к каждой аликвоте крови добавляли 1,5 мкл разбавления тестируемого соединения и инкубировали образцы крови в течение 30 мин при температуре 37°С при осторожном качании. К образцам крови добавляли полтора микролитра 10-кратно разбавленного исходного раствора Ш-6, 1,5 мкл исходного раствора иШ№/. (РВЬ ВютеФса1, номер по каталогу 11200-1), 1,5 мкл 25-кратно разбавленного исходного раствора Ш-2 или 1,5 мкл 200-кратно разбавленного исходного раствора ОМ-С8Р и образцы инкубировали при 37°С в течение 20 мин при осторожном качании.
5.5.2.3. Получение лейкоцитов.
В конце периода стимуляции к образцам крови немедленно добавляли 3 мл 1х предварительно нагретого буфера Ьузе/Είχ, быстро встряхивали и инкубировали в течение 15 мин при температуре 37°С на водяной бане для того, чтобы лизировать красные кровяные клетки и фиксировали лейкоциты.
Пробирки центрифугировали в течение 5 мин при 400хд при 4°С. Сгусток клеток промывали 3 мл холодного 1х РВ8 и после центрифугирования сгусток клеток ресуспендировали в 100 мкл ледяного 1х РВ8 и добавляли 900 мкл ледяного 100% МеОН. Клетки затем инкубировали при 4°С в течение 30 мин для пермеабилизации.
Пермеабилизированные клетки затем промывали 1х РВ8, содержащем 3% В8А, и, в заключение, ресуспендировали в 80 мкл 1х РВХ, содержащем 3% В8А.
5.5.2.4. Мечение клетки.
20 мкл РЕ мышиного антитела против 8ТАТ1 φΥ701) или РЕ мышиного IдО2аκ-изотипа контрольного антитела (ВО Вюзаеисез, номер по каталогу 612564 и 559319, соответственно) и АРСконъюгированного антитела против СЭ4 или контрольного АРС-конъюгированного антитела изотипа (ВО Вюзаеисез, номер по каталогу 555349 и 555751, соответственно) добавляли в !Ш-6- и ΕΝαстимулированные пробирки и смешивали, затем инкубировали в течение 20 мин при температуре 4°С в темноте.
20 мкл РЕ мышиного антитела против 8ТАТ5 φΥ694) или РЕ мышиного !дО1к-изотипа контрольного антитела (ВО Вюзаеисез, номер по каталогу 612567 и 554680, соответственно) и АРСконъюгированного антитела против СЭ4 или контрольного АРС-конъюгированного антитела изотипа (ВО Вюзаеисез, номер по каталогу 555349 и 555751, соответственно) добавляли в Ш-2-стимулированные пробирки, смешивали, затем инкубировали в течение 20 мин при температуре 4°С в темноте.
20 мкл РЕ мышиного антитела против 8ТАТ5 φΥ694) или РЕ мышиного !дО1к-изотипа контрольного антитела (ВО Вюзаеисез, номер по каталогу 612567 и 554680, соответственно) и АРС мышиного антитела против ί'.Ό33 (ВО Вюзаеисез #345800) или контрольного АРС мышиного ЦО1 изотипа антитела (ВО Вюзаеисез номер по каталогу 345818) добавляли в ОМ-С8Р-стимулированные пробирки, смешивали, затем инкубировали в течение 20 мин при температуре 4°С в темноте.
Затем клетки промывали один раз 1х РВ8 и анализировали на проточном цитометре РАС8СаШо II (ВО Вюзаеисез). 5.5.2.5. Флуоресцентный анализ на РАС8Саи!о II 50000 суммарных событий подсчитывали и фосфо-8ТАТ1 положительные клетки измеряли после клеточного сортинга относительно СЭ4' клеток, в лимфоцитарном окне для Ш-6- и Ш№/.-стимулированных клеток. Фосфо-8ТАТ5 положительные клетки измеряли после клеточного сортинга относительно СЭ4+ клеток, в лимфоцитарном окне для Ш-2-стимулированных клеток. Фосфо-8ТАТ5 положительные клетки измеряли после клеточного сортинга относительно СЭ33' клеток. Данные анализировали, используя программное обеспечение РАС8О|уа, и вычисляли процентное ингибирование Ш-6 или ΣΕΝα стимуляции по процентному содержанию положительных клеток для фосфо-8ТАТ1 относительно СЭ4' клеток. Для Ш-2-стимулированных
- 79 029827
клеток данные анализировали, используя программное обеспечение РЛСЗОка, и вычисляли процентное ингибирование ГГ-2 стимуляции по процентному содержанию положительных клеток для фосфо-ЗΤЛΤ1 относительно СЭ4+ клеток. Для ОМ-СЗР-стимулированных клеток вычисляли процентное ингибирование СМ-С8Р стимуляции, исходя из процентного содержания положительных клеток для фосфо-ЗΤΑΤ5 относительно СИ33+ клеток.
Пример 6. Модели ш νί\Ό.
6.1. Модель ΟΑ.
6.1.1. Материалы.
Полный адъювант Фрейнда (СРΑ) и неполный адъювант Фрейнда (ΓΤΑ) закупали у Эксо. Бычий коллаген II типа (СП), липополисахарид (ЬРЗ) и ЕпЬге1 получали от Скопйтех (ЩЮ ДАбеаи, Ргапсе); 8ί§та (Р4252, Ь'Ые ^^Ьеаи, Ргапсе), \Укуеи (25 мг шприц для инъекции, Ргапсе) Ο^§аη^с8 (Ра1о Α1φ, СΑ), соответственно. Все другие используемые реагенты отвечали реактивной чистоте, и все растворители имели аналитическую чистоту.
6.1.2. Животные.
Темных крыс Α^υύ (самцы, возраст 7-8 недель) получали из Шкап ЬаЬогаЮг1е5 (Ма^δοη-Л1ίοк, Ргапсе). Крыс выдерживали при 12-часовом свет/темнота цикле (07.00-19.00). Температуру поддерживали при 22°С и пищу и воду предоставляли по желанию.
6.1.3. Индуцируемый коллагеном артрит (СIΑ).
За один день до опыта получали раствор СИ (2 мг/мл) с 0,05 М уксусной кислоты и хранили при 4°С. Непосредственно перед иммунизацией равные объемы адъюванта (ΓΤΑ) и СИ смешивали при помощи гомогенизатора в предварительно охлажденном стеклянном сосуде на бане со смесью воды и льда. Если не образуется эмульсия, то может потребоваться экстраадъювант и продолжительная гомогенизация. На день 1 0,2 мл эмульсии инъецировали внутрикожно в основание хвоста каждой крысы, вторую ревакцинирующую внутрикожную инъекцию (раствор СИ при 2 мг/мл в СРΑ 0,1 мл физиологического раствора) проводили на день 9. Этот метод иммунизации скорректирован, исходя из опубликованных методов Цои еί а1., 2005; Зпге еί а1., 2004).
6.1.4. План исследования.
Терапевтические действия соединений испытывали на модели ΟΑ у крыс. Крыс случайным образом делили на равные группы, и каждая группа содержала по 10 крыс. Всех крыс подвергали иммунизации на день 1 и ревакцинизации на день 9. Терпевтическое дозирование осуществляли на протяжении периода времени, начиная с дня 16 по день 30. Отрицательную контрольную группу обрабатывали наполнителем (МС 0,5%) и положительную контрольную группу обрабатывали ЕпЬге1 (10 мг/кг, 3х неделя, подкожно). Соединение, представляющее интерес, обычно испытывали при 3 дозах, например, 3, 10, 30 мг/кг, перорально (р.о.).
6.1.5. Клиническая оценка артрита.
Артрит оценивали согласно методу 1<кас1и81ап (141^11181311 2006, Ып еί а1., 2007 апй ΝίκΗίόη еί а1., 2004). Припухлость каждой из четырех лап оценивали в соответствии со шкалой оценки артрита, которая выглядит следующим образом: 0 - нет симптомов; 1 - слабо выраженная, но определяемая краснота и припухлость одного типа сустава, такого как голеностопный сустав или запястье, или очевидное покраснение и припухлость, ограниченное отдельными пальцами, независимо от числа пораженных пальцев; 2 умеренная краснота и припухлость двух или большего числа типов суставов; 3 - серьезная краснота и припухлость всей лапы, включая пальцы; 4 - максимально воспаленная конечность с вовлечением в патологический процесс множественных суставов (максимальная кумулятивная клиническая оценка артрита 16 на одного животного) (Νίδΐιίώι еί а1., 2004).
Для того чтобы сделать возможным мета-анализ многочисленных исследований, значения клинической оценки нормализуют следующим образом:
Αυϋ клинической оценки (ΑυΤ' оценка): площадь под кривой (ΑυΟ), начиная с дня 1 и кончая днем 14, вычисляли для каждой индивидуальной крысы. ЛиС каждого животного делили на среднюю Αυϋ, полученную для наполнителя в исследовании, из которого получали данные по животному, и умножали на 100 (т.е. ЛиС выражают как процент средней ЛиС с наполнителем на исследование).
Увеличение клинической оценки со дня 1 до дня 14 (конечная точечная оценка): Различие клинической оценки для каждого животного делили на среднее различие клинической оценки, полученное для наполнителя в исследовании, из которого получали данные по животному, и умножали на 100 (т.е. различие выражали в виде процента среднего различия клинической оценки для наполнителя на исследование).
6.1.6. Изменение массы тела (%) после возникновения артрита.
Клинически потерю массы тела ассоциируют с артритом (Кай апй КоиЬепой", 2004; ЗкеНоп еί а1., 2005; ХУакткк еί а1., 2004). Отсюда, изменения массы тела после возникновения артрита могут быть использованы в качестве неспецифической конечной точки для оценки действия лечения на модели болезни у крыс. Изменение массы тела (%) после возникновения артрита вычисляли следующим образом:
- 80 029827
масса тела (6 недель) - масса тела (5недель) * ιθθ%
Мышь: масса тела(5неделЬ)
Масса ТеЛЭ(4 Недели) — Масса Тела ρ недели) 1дпо/
-χ 1 и и /о
Крысы : масса тела (3 недели)
6.1.7. Рентгенология.
Получали рентгеновские снимки задних лап каждого отдельного животного. Случайный слепой идентификационный номер присваивали каждому из снимков, и степень тяжести эрозии кости оценивали двумя независимыми оценщиками, исходя из радиологической системы оценки по Ларсену, которая выглядит следующим образом: 0 - нормальное состояние, отсутствие поврежденных костных очертаний и обычное состояние занимаемого суставом пространства; 1 - незначительная аномалия, касающаяся любой одной или двух из наружных плюсневых костей, демонстрирующая незначительную эрозию кости;
2 - определяемая ранняя аномалия, касающаяся любой из трех-пяти наружных плюсневых костей, демонстрирующая эрозию кости; 3 - средняя деструктивная аномалия, касающаяся всех наружных плюсневых костей, а также любой одной или двух из внутренних плюсневых костей, демонстрирующая определенную эрозию кости; 4 серьезная деструктивная аномалия, касающаяся всех плюсневых костей, демонстрирующая определенную эрозию кости и по меньшей мере одного из внутренних плюсневых суставов, находящегося в состоянии полного истончения, оставляя лишь некоторые очертания костного сустава частично сохраненными; 5 - калечащая аномалия состояния кости без каких-либо костных очертаний. Данная система оценок представляет собой модификацию от (ΙΠίδΙι еΐ а1., 2002; 1ои еΐ а1., 2005; δ31\Όΐηίηί еΐ а1., 2001; δίηΐδ еΐ а1., 2004).
6.1.8. Гистология.
После радиологического анализа задние лапы мышей фиксировали в 10% забуференном фосфатом формалине (рН 7,4), декальцинировали при помощи быстрого декальцификатора костей для высококачественного гистологического анализа (ПаЪопИопс^ ЕигоЪю) и погружали в парафин. Для обеспечения экстенсивной оценки суставов, пораженных артритом, делали по меньшей мере четыре серийных среза (толщиной 5 мкм), между каждой серией срезов делали промежутки по 100 мкм. Среды окрашивали гематоксилином и эозином (Н&Е). Гистологические исследования с целью выявления синовиального воспаления и поражения кости и хряща осуществляли, используя двойной слепой метод изучения. Для каждой лапы проводили оценку по четырем параметрам, используя четырехточечную шкалу оценок. Параметры представляли собой клеточную инфильтрацию, тяжесть симптомов паннуса, эрозию [истончение] хряща и эрозию кости. Оценку проводили согласно нижеследующему: 1 - нормальная, 2 - легкая степени,
3 средняя, 4 - заметная. Эти четыре оценки суммировали вместе и представляли в виде дополнительной оценки, т.е. "общая оценка КА".
6.1.9. Анализ калканеуса (пяточной кости) с помощью микрокомпьютерной томографии (мкСТ).
Разрушение кости, наблюдаемое при КА, происходит, главным образом, в кортикальном слое кости
и может быть обнаружено методом мкСТ анализа (Οδΐе еΐ а1., 2007; διιτίδ еΐ а1., 2004). После сканирования и трехмерной реконструкции пяточной кости костную деградацию измеряли в виде некоторого числа дискретных объектов предметов на предметном стекле, выделенных ΐη δ^I^со перпендикулярно к продольной оси кости. Чем больше кость разрушается, тем больше дискретных предметов определяют. Анализировали 1000 срезов, равномерно распределенных вдоль пяточной кости (расположенные на расстоянии около 10,8 мкм друг от друга).
6.1.10. Устойчивое состояние РК.
На день 7 или 11 образцы крови отбирали из ретроорбитальной пазухи в присутствии литий гепарина в качестве антикоагулянта в следующие моменты времени: перед дозой, 1, 3 и 6 ч. Образцы цельной крови центрифугировали и полученные образцы плазмы хранили при -20°С в ожидании анализа. Плазменные концентрации каждого испытуемого соединения определяли, используя комбинированный метод ЖХ-МС/МС, в котором масс-спектрометр функционирует в режиме тлектро-распылительной ионизации с регистрацией положительных ионов.
Фармакокинетические параметры вычисляли, используя \\дппоп1т® (Ρίκιΐ'δίρΐιΐ®, Γηίΐχχΐ δΐοΐ^δ), и предполагают, что преддозовые плазменные уровни равны 24-часовым плазменным уровням.
6.2. Онкологические модели.
Ιη у1уо модели, подтверждающие эффективность небольших молекул в отношении 1АК2стимулируемых миелопролиферативных заболеваний, описаны (Ослоп еΐ а1., 2008; \\'епид еΐ а1., 2008).
6.3. Модель ПИ) у мышей.
Модели ΐη νίΐΐΌ и ΐη у1уо, подтверждающие эффективность небольших молекул в отношении ПИ), описаны (\ΪΓΐζ аηά Хеигайи 2007).
6.4. Модель астмы у мыши.
Модели ΐη νίΐΐΌ и ΐη у1уо, подтверждающие эффективность небольших молекул в отношении астмы, описаны (Ιρ еΐ а1., 2006; ΚιιάΠ^ζ еΐ а1., 2008; \)аЬ ап! υάάΐη, 2008; Ре^η^δ аηά КоФтат 2002).
6.5. Мышиная модель псориазоподобной эпидермальной гиперплазии, индуцированной внутрикожными инъекциями ΙΠ22 или ΙΠ23.
- 81 029827
6.5.1. Материалы.
Рекомбинантный мышиный ГЬ22 (582-МЬ-СР), свободный от носителя получали от К&Э зузГетз. Рекомбинантный мышиный ГЬ23, свободный от носителя (14-8231, СР) получали от е-Вюзаепсе.
6.5.2. Животные.
Мышей Ва1Ь/с (самки, масса тела 18-20 г) получали из СЕКТ (Ргапсе). Мышей выдерживали при 12часовом свет/темнота цикле (07:00-19:00). Температуру поддерживали при 22°С, пищу и воду предоставляли по желанию.
6.5.3. План исследования.
План исследования заимствовали из Ы//о еГ а1., 2011.
В первый день (Д1), мышей брили вокруг двух ушей.
В течение 4 последовательных дней (Д1-Д4) мыши получали ежедневно внутрикожно дозу рекомбинантного ГЬ22 или ГЬ23 мыши (1 мкг/20 мкл в ΡΒδ/0,1% ΒδΛ) в правую ушную раковину и 20 мкл РΒδ/0,1%ΒδΛ в левую ушную раковины под анестезией, индуцированной при вдыхании изофлурана.
От Д1 до Д5 мышам вводили тест-соединение (10, 30 или 100 мг/кг, перорально, ежедневно в МС 0,5%), 1 ч до инъекции ГЬ23/ГЬ22 или с носителем.
6.5.4. Оценка заболевания.
Толщину обоих ушей измеряли ежедневно автоматическим калипером. Массу тела оценивали в начале исследования и после умерщвления. На пятый день, через 2 ч после последней дозы, мышей умерщвляли. Ушную раковину вырезали, за исключением хряща. Ушную раковину взвешивали, а затем, помещали в пробирку, содержащую 1 мл раствора для стабилизации РНК, или в формальдегид.
В Д4 образцы крови также собирали из ретро-орбитальной пазухи для профиля РК непосредственно перед введением доз (ТО) и через 1 час, 3 ч, б ч после введения доз.
В группе 8 мышей. Результаты выражены в виде среднего значения+стандартная ошибка среднего значения, и статистический анализ выполняли с использованием однофакторного дисперсионного анализа с последующим использованием апостериорного критерия Даннетта в отношении ГЬ22 или ГЬ23 групп с наполнителем.
6.5.5. Гистология.
После умерщвления, уши собирали и фиксировали в 3,7% формальдегиде, прежде чем помещали в парафин. Делали срезы, толщиной два мкм и окрашивали гематоксилином и эозином. Измеряли толщину эпидермиса уха с помощью анализа изображений (программное обеспечение δ^зNсот) с б изображениями на ухо, взятых при увеличении х20. Данные выражали в виде среднего значения+стандартная ошибка среднего значения, и статистический анализ выполняли с использованием однофакторного дисперсионного анализа с последующим ретроспективным тестом Даннетта в отношении ГЬ22 или ГЬ23 групп с наполнителем.
6.5.6. Экстракция РНК. ОТ-ПЦР и ПЦР в реальном времени ГЬ-17а, ГЬ-22, ГЬ-Щ БСШ и δ100Λ9 уровни транскриптов в ткани уха определяли с помощью количественной ПЦР в реальном времени.
Пример 7. Анализы фармакокинетических параметров, АОМЕ и токсичности.
7.1. Термодинамическая растворимость.
Тестируемое соединение добавляли в 0,2 М фосфатный буфер рН 7,4 или 0,1 М цитратный буфер рН 3,0 при комнатной температуре с концентрацией 1 мг/мл в стеклянной пробирке.
Образцы вращали во вращающем устройстве КоГаГог йпуе δΤΓ 4 (δΙικ-ιΠ δс^еηГ^ίϊс, В1ЬЬу) со скоростью 3,0 при комнатной температуре в течение 24 ч.
Через 24 ч 800 мкл образца переносили в пробирку Эппендорфа и центрифугировали 5 мин при 14000 об/мин. Затем 200 мкл супернатанта образца переносили в планшет МиШзсгеепК для измерения растворимости (МНИроге, Мδδ^ΒРС50) и супернатант фильтровали (10-12" Нд) с помощью вакуумного коллектора в чистый полипропиленовый 9б-луночный планшет Отешет с У-образными лунками (номер по каталогу б51201). 5 мкл фильтрата разводили в 95 мкл (Р20) буфера, который также использовали для инкубации в планшете, содержащем калибровочный раствор (Огешег, номер по каталогу б51201).
Стандартный калибровочный раствор для соединения получали в свежеприготовленном в ДМСО, исходя из 10 мМ базового раствора в ДМСО, разбавленного в 2 раза в ДМСО (5000 мкМ) и затем дополнительно разбавленного в ДМСО вплоть до 19,5 мкМ. 3 мкл разбавленного раствора, полученного в результате серии разведений, начиная с 5000 мкМ раствора, затем переносили в 97 мкл смеси ацетонитрилбуфер (50/50). Диапазон конечной концентрации составляет от 2,5 до 150 мкМ.
Планшет герметизировали при помощи герметизирующего материала (МΛ9бК^-04δ, №№№.к1пез1з.со.ик) и образцы измеряли при комнатной температуре методом ЖХ-МС (ΖΡ 1525 от \аГегз) в оптимизированных условиях с использованием Риапор11т1/е, для определения соответствующей массы молекулы.
Образцы анализировали на ЖХ-МС при скорости потока 1 мл/мин. Растворитель А представляет собой 15 мМ аммиак и растворитель В представляет собой ацетонитрил. Образец подвергали обработке в условиях распыления положительных ионов на колонке ХВпйде С18 (2,1 х30 мм), с частицами размером 3,5 мкМ от компании \аГегз. Градиент растворителя имеет общее время прохода 2 мин и изменяется от
- 82 029827
5% В до 95% В.
Площади пиков анализировали с помощью пакета программного обеспечения Ма881упх и для получения растворимости соединения строили кривую площадей пиков образцов в сравнении со стандартной кривой.
Значения растворимости представляют в мкМ или мкг/мл.
7.2. Растворимость в воде.
Исходя из 10 мМ исходного раствора в ДМСО получали ряд разведений соединения в ДМСО. Ряд разведений переносили в 96-луночный планшет ΝϋΝΟ Мах18огЬ с Р-образными лунками (номер по каталогу 442404) и добавляли 0,1 М фосфатный буфер рН 7,4 или 0,1 М цитратный буфер рН 3,0 при комнатной температуре.
Конечная концентрация колеблется от 300 мкМ до 18,75 мкМ на 5 ступенях равного разведения. Конечная концентрация ДМСО не превышала 3%. 200 мкМ Пирена добавляли в угловые точки каждого 96-луночного планшета и использовали в качестве исходной точки при калибровке Ζ-оси на микроскопе.
Аналитические планшеты герметизировали и инкубировали в течение 1 ч при температуре 37°С при встряхивании при 230 об/мин. Затем планшеты сканировали на оптическом микроскопе для просмотра в белом свете, получая индивидуальные картины осадка для каждой концентрации. Осадок анализировали и преобразовали в число с помощью программного средства, которое наносили на график. Первая концентрация, при которой соединение, по-видимому, полностью растворяется, представляет собой концентрацию, которую сообщают, тем не менее, истинная концентрация лежит где-нибудь между этой концентрацией и одной ступенью разведения выше.
Значения растворимости представляют в мкг/мл.
7.3. Связывание белка плазмы (равновесный диализ).
10-мМ исходный раствор соединения в ДМСО разбавляли в 5 раз в ДМСО. Этот раствор далее разводили в свежеразмороженной плазме человека, крысы, мыши или собаки (В1оКес1атайои ГИС) с конечной концентрацией 5 мкМ и конечной концентрацией ДМСО 0,5% (5,5 мкл в 1094,5 мкл плазмы в 96луночном планшете РР-Ма81егЬ1оск (Сгетег, (номер по каталогу 780285)).
Получали планшет со вставками Р1егсе Кеб Эе^се (Тйегто8с1епййс, (номер по каталогу 89809) и заполняли, помещая 750 мкл РВ8 в камеру для буферного раствора и 500 мкл раствора, обогащенного плазмой, в камеру для плазмы. Планшет инкубировали в течение 4 ч при 37°С при встряхивании при 230 об/мин. После инкубирования 120 мкл из обеих камер переносили с 360 мкл ацетонитрила в 96-луночные РР планшеты с грубокими, с круглым дном, лунками (Νιιικ. номер по каталогу 278743) и герметизировали крышечкой из алюминиевой фольги. Образцы смешивали и помещали на лед на 30 мин. Затем этот планшет центрифугировали 30 мин при 1200 гс£ при 4°С и супернатант переносили в 96-луночный РР планшет с ν-образными лунками (Сгетег, 651201) для анализа на ЖХ-МС.
Планшет герметизировали герметизирующим материалом (МА96КЭ-048) \\л\лу.кте818.со.ик и образцы измеряли при комнатной температуре на ЖХ-МС (ΖΟ 1525 от \Ма1ег8) в оптимизированных условиях, используя РиапорЦпп/е для определения соответствующей массы молекулы.
Образцы анализировали на ЖХ-МС при скорости потока 1 мл/мин. Растворитель А представляет собой 15 мМ аммиак и растворитель В представляет собой ацетонитрил. Образец подвергали обработке в условиях распыления положительных ионов на колонке ХВпбде С18 3,5 мкМ (2,1x30 мм) от \Уа1ег8. Градиент растворителя имеет общее время прохода 2 мин и изменяется от 5 В до 95% В.
Считается, что площадь пика соединения в буферной камере и камере для плазмы составляет 100% соединения. Из этих результатов получали процент соединения, связанного с плазмой, и эти данные сообщали как процент, связывания с плазмой.
Растворимость соединения при конечной тестовой концентрации в РВ8 исследовали при помощи микроскопа, чтобы показать, наблюдается ли осадок или нет.
7.4. Стабильность альдегидооксидазы.
10 мМ Исходного раствора тестируемого соединения в ДМСО сначала разбавляли водой (в 5 раз), для получения 50 мкМ рабочего раствора. Селективный ингибитор альдегидоксидазы (гидралазин) получали в воде в виде 5 мМ раствора.
Инкубационные смеси получали путем добавления 10 мкл суспензии 89 печени (человека и крысы, ΒΌ Вю8с1епсе Сеп1е81, 20 мг/мл) к 86 мкл 50 мМ калий-фосфатного буфера, рН 7,4 при температуре 37°С. Добавляли 2 мкл 5 мМ гидралазина (для инкубации с добавлением селективного ингибитора) или 2 мкл воды (для инкубации без добавления ингибитора).
После 5 мин предварительного нагрева, реакцию инициировали добавлением 2 мкл 50 мкМ тестируемого соединения к инкубационной смеси. После 0-, 3-, 6-, 12-, 18- и 30-минутной инкубации, реакцию (100 мкл) завершали с 300 мкл МеС№МеОН (2:1) с 1%-ной смеси уксусной кислоты, содержащей 10 нг/мл варфарина в качестве аналитического внутреннего стандарта.
Образцы смешивали, центрифугировали, и супернатант анализировали с помощью ЖХ-МС.
Тестируемые соединения рассматривали как субстрат альдегидоксидазы, если клиренс 89 ингибируется гидралазином. Видоспецифичный клиренс тестируемого соединения, может также указывать на метаболизм альдегидоксидазой.
- 83 029827
Фталазин включен в качестве положительного контроля.
Характеристики прибора (отношение площади пика тестируемого соединения и внутреннего стандарта) относятся к образцам нулевой временной точки (рассматриваемых как 100%) для того, чтобы определить процентное содержание оставшегося соединения. Графики процента оставшихся тестируемых соединений используют для определения периода полураспада (Т1/2) и собственный клиренс в 89 инкубации с использованием программного обеспечения СгарЪ Рай Рпзт.
Для расчета собственного клиренса ΐη νΐΐΓο (СИ|п, (мкл/мин/мг) использовали следующую формулу:
, 0,693 объем инкубации
С1лп1 =-*---* 1000
7Ί/2 количество белка
7.5. Стабильность в микросомах печени.
10 мМ исходного раствора соединения в ДМСО разводили до 6 мкМ в 105 мМ фосфатном буфере, рН 7,4 в 96-луночном планшете с глубокими лунками (Сгетег номер по каталогу 780285) и предварительно нагревали при 37°С.
Рабочий исходный раствор глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (С6РОН, КосЪе, 10127671001) 700 Ед/мл разбавляли с коэффициентом 1:700 в 105 мМ фосфатном буфере, рН 7,4. Кофактор, содержащий 0,528 М МдС12.6Н2О (Зфта, М2670), 0,528 М глюкозо-6-фосфат (Зфта, С-7879) и 0,208 М ΝΑΏΡ+ (81§та,Ы-0505), разбавляли с коэффициентом 1:8 в 105 мМ фосфатном буфере, рН 7,4.
Получали рабочий раствор, содержащий 1 мг/мл микросом печени (Хепо1есН) представляющего интерес биологического вида (человек, мышь, крыса, собака ...), 0,8 Ед/мл С6РОН и смесь кофактора (6,6 мМ МдС12, 6,6 мМ глюкозо-6-фосфат, 2,6 мМ ΝΑΏΡ+). Эту смесь предварительно инкубировали в течение 15 мин, но не более чем 20 мин, при комнатной температуре.
После предварительной инкубации, разведения соединения и смесь, содержащую микросомы, добавляли вместе в равном количестве и инкубировали в течение 30 мин при 300 об/мин. Для временной точки 0 мин, добавляли два объема МеОН к разведению соединения перед добавлением смеси микросом. Конечная концентрация во время инкубации составляла: 3 мкМ тестируемого соединения или контрольного соединения, 0,5 мг/мл микросом, 0,4 Е/мл С6РОН, 3,3 мМ МдС12, 3,3 мМ глюкозо-6-фосфата и 1,3 мМ Ν-ΏΡ+.
После 30 мин инкубации реакцию останавливали 2 объемами МеОН.
Из обеих временных точек образцы смешивали, центрифугировали и супернатант собирали для анализа на ЖХ-МС/МС. Характеристики прибора (т.е. высота пика) относятся к образцам в нулевой временной точке (при 100%) для того, чтобы определить процентное содержание оставшегося соединения. Стандартные соединения пропанолол и верапамил включали в способ анализа.
Данные по микросомальной стабильности выражали в виде процента от общего количества соединения, оставшегося после 30 мин.
7.6. Устойчивость гепатоцитов.
Модели для оценки метаболического клиренса в гепатоцитах описаны МсСиппЦу еΐ а1. Ι)πιρ МеΐаЪοНзт апй О1зрозгйоп 2008, 32, 11, 1247.
7.7. Проницаемость Сасо2.
Двунаправленные анализы Сасо-2 проводили, как описано ниже. Клетки Сасо-2 получали от Европейской ассоциации клеточных культур (Нигореап Со11есНоп о! Се11 СиНшез) (ЕСАСС, номер по каталогу 86010202) и использовали после 21-дневного культивирования клеток в 24-луночных планшетах Тгапз^е11 (ИзНег ТКТ-545-020В).
Высевали 2х105 клеток/лунку в планшетную среду, состоящую из [)\1Н\ГС1и1а\Г\ХГ1О/о ΝΕΑΑ+10% РВЗ (Ре1а1С1опе 11)+1% Реп/ЗЕер. Среду меняли каждые 2-3 дня.
Тестируемое и эталонное соединения (пропранолол и родамин 123 или винбластин, все из которых получены от Зщта) готовили в сбансированном солевом растворе Хэнкса, содержащем 25 мМ НΕРΕЗ (рН 7,4), и добавляли либо в апикальные (125 мкл), либо в базолатеральные (600 мкл) отсеки блока планшетов Тгапз\уе11 в концентрации 10 мкМ при конечной концентрации ДМСО, составляющей 0,25%.
В донорный буфер во всех лунках добавляли 50 мкМ люциферового желтого (Еисйег уе11о\у) (81§та), чтобы оценить целостность клеточных слоев путем мониторинга проникновения люциферового желтого. Люциферовый желтый (ΕΥ) не может свободно проникнуть через липофильные барьеры, при этом высокая скорость переноса ΕΥ свидетельствует о слабой целостности клеточного слоя.
Через 1 ч инкубации при 37°С при встряхивании на орбитальной качалке при 150 об/мин как из апикальных (А), так и из базальных (В) отсеков отбирали аликвоты по 70 мкл и добавляли в раствор 100 мкл ацетонитрил:вода 50:50, содержащий аналитический внутренний стандарт (0,5 мкМ карбамазепина) в 96-луночном планшете.
Люциферовый желтый определяли при помощи ЗресГатах Сетт1 ХЗ (возбуждение 426 нм и испускание 538 нм) в чистом 96-луночном планшете, содержащем 150 мкл жидкости с базолатеральной и апикальной сторон.
Концентрацию соединения в образцах определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии/масс-спектрометрии (ЖХ-МС/МС).
- 84 029827
Значения кажущейся проницаемости (Рарр) рассчитывали по уравнению:
Рарр= [ соединение ] конечный акцепторХУакцептор/ ( [ СОеДИНеНИе ] начальный
донорХ Удонор)/Тинк х Удонор/площадь поверхности X 60 х 10-6 см/с
где У=объем камеры;
Тинк=продолжительность инкубации; площадь поверхности=0,33 см2.
Соотношения вытекания как признака активного оттока с апикальной поверхности клетки рассчитывали с использованием соотношения Рарр В>А/Рарр А>В.
Используют следующие приемлемые для анализа критерии:
Пропанолол: значение РарР (А>В) > 20 (х10-6 см/с).
Родамин 123 или винбластин: значение Рарр (А>В) <5 (х10-6 см/с) при соотношении вытекания >5.
Проницаемость люциферового желтого: <100 нм/с.
7.8. Проницаемость МОСКИ-МЭКТ.
МОСКЛ-МЭК! клетки представляют собой эпителиальные клетки почки собаки Мабт-ЭагЬу, сверхэкспресирующие ген множественной лекарственной устойчивости (МРЖ1) человека, кодирующий Р-гликопротеин (Р-др). Клетки получали из института рака Нидерландов (№1Рег1апбз Сапсег 1пзй1и1е) и использовали после 3-4 дней культивирования клеток в 24-луночных планшетах МШ1се11 с вставкой клеточной культуры (МйИроге, ΡδΚΡ010Κ5). Двунаправленные анализы проницаемости МОСКИ-МЭКТ проводили, как описано ниже.
Высевали 3х105 клетки/мл (1,2х105 клетки/лунку) в планшетную среду, состоящую из ЭМЕМ+Р/о С1и1атах-100+1% АпйЫойс/Апйтусойс+10% ΡΒδ (ВюмеЧ, δ1810). Клетки оставляли в СО2 инкубаторе в течение 3-4 дней. Среду заменяли 24 ч после посева и в день эксперимента.
Тестируемое и эталонное соединения (ампренавир и пропранолол) получали в фосфатно-солевом буфере Дульбекко (ϋ-ΡΒδ, рН7,4) и добавляли либо в апикальные (400 мкл) либо в базолатеральные (800 мкл) отсеки блока планшетов с культуральной вставкой МйНсе11 в конечной концентрации 10 мкМ (0,5 мкМ в случае ампренавира) при конечной концентрации ДМСО, составляющей 1%.
100 мкМ люциферового желтого ^1§ша) добавляли ко всем донорным буферным растворам, чтобы оценить целостность клеточных монослоев путем мониторинга проникновения люциферового желтого. Люциферовый желтый представляет собой флуоресцентный маркер для парацеллюлярного пути, и он используется в качестве внутреннего контроля в каждом монослое, чтобы проверить целостность плотного соединения в течение анализа.
Через 1 ч инкубации при 37°С при встряхивании на орбитальной качалке при 150 об/мин, как из апикальных (А), так и из базальных (В) отсеков отбирали аликвоты по 75 мкл и добавляли в раствор 225 мкл ацетонитрил:вода (2:1), содержащий аналитический внутренний стандарт (10 нг/мл варфарин) в 96луночном планшете. Аликвоты также получали в начале эксперимента из растворов-доноров, чтобы получить начальную (Со) концентрацию.
Концентрацию соединения в образцах определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии/масс-спектрометрии (ЖХ-МС/МС).
Люциферовый желтый определяли при помощи Р1иогозсап Азсеп! РЧ ТРегто δс^епΐ^йс (возбуждение 485 нм и испускание 530 нм) в 96-луночном планшете, содержащем 150 мкл жидкости из всех заправленных лунок (базолатеральной и апикальной сторон).
7.9. Фармакокинетические исследования на грызунах.
7.9.1. Животные.
Крыс δр^аβие-^аΑ1еу (самцы, возраст 5-6 недель) получали от 1апу1ег (Ргапсе). Крыс подвергали акклиматизации в течение по меньшей мере 7 дней до начала лечения и их выдерживали при 12-часовом свет/темнота цикле (07.00-19.00). Температуру поддерживали при 22°С и пищу и воду предоставляли по желанию. За два дня до введения тестируемых соединений, крысы подвергались операции для того, чтобы поместить катетер в яремную вену под анестезией изофлураном. После операции, крыс размещали по отдельности. Крыс лишали пищи на протяжении по меньшей мере 16 ч до введения пероральной дозы и 6 ч после введения. Воду предоставляли по желанию.
7.9.2. Фармакокинетическое исследование.
Соединения получали в виде композиции в смеси РЕС200/физиологический раствор (60/40) для внутривенного пути введения и в смеси с 0,5% метилцеллюлозы и с 10% гидроксипропил-βциклодекстрина рН 3 в случае введения пероральным путем. Тестируемые соединения дозировали перорально, используя однократное введение через желудочный зонд в расчете 5 мг/кг при объеме дозирования 5 мл/кг, и дозировали внутривенным путем в виде болюса через хвостовую вену в расчете 1 мг/кг при объеме дозирования 5 мл/кг. Каждая группа состояла из 3 крыс. Образцы крови отбирали через яремную вену в присутствии литий гепарина в качестве антикоагулянта в следующие моменты времени: 0,05, 0,25, 0,5, 1, 3, 5 и 8 ч (внутривенный путь введения), и 0,25, 0,5, 1, 3, 5, 8 и 24 ч (пероральный путь введения). Альтернативно, образцы крови отбирали из ретро-орбитальной пазухи в присутствии литий гепарина в качестве антикоагулянта в следующие моменты времени: 0,25, 1, 3 и 6 ч (пероральный путь
- 85 029827
введения). Образцы цельной крови центрифугировали при 5000 об/мин в течение 10 мин и полученные образцы плазмы хранили при -20°С в ожидании анализа.
7.9.3. Количественное определение уровней соединения в плазме.
Плазменные концентрации каждого тестируемого соединения определяли, используя метод ЖХМС/МС, в котором масс-спектрометр функционирует в режиме электрораспылительной ионизации с регистрацией положительных ионов.
7.9.4. Определение фармакокинетических параметров.
Фармакокинетические параметры вычисляли, используя ^хииоиИи® (РЬагадЫ®, Ит1еб 81а1с5).
7.10. Исследование токсичности на 7 денв у крыс.
Для оценки токсического потенциала и токсикокинетических параметров тестируемых соединений проводят исследование на токсичность после 7-дневного перорального введения соединений крысам линии 8ргадие-Оа'№1еу, самцам, при суточных дозах 100, 300 и 500 мг/кг/день, с помощью зонда, при постоянном объеме дозирования 5 мл/кг/день.
Тестируемые соединения получали в виде композиций с 30% (об./об.) содержанием НРЗСЭ в очищенной воде. Каждая группа содержала 5 основных крыс-самцов, а также 3 второстепенных животных для токсикокинетики. Четвертая группа получала только 30% (об./об.) НРЗСЭ в воде с такой же частотой, таким же объемом дозирования и таким же путем введения и служила в качестве контрольной группы с наполнителем.
Цель исследования состоит в определении наименьшей дозы, которая не приведет к вредным воздействиям, которые могут быть идентифицированы (не наблюдаемый уровень вредного воздействия +0/43.).
7.11. Ответственность за пролонгирование интервала РТ.
Потенциал в отношении пролонгирования интервала ОТ оценивали в анализе ЬЕКО методом пэтчкламп (метод локальной фиксации потенциала).
Записи пэтч-кламп в конфигурации целой клетки осуществляли, используя усилитель ЕРС10, контролируемый программным обеспечением РиЕе ν8.77 (НЕКА). Последовательное сопротивление обычно меньше чем 10 МОм и корректируется больше чем на 60%, записи не учитывают утечку. Электроды изготавливают из стекла для пипеток ОС150ТР (Нагхагб).
Внешний проводящий раствор содержал: 135 мМ №С1, 5 мМ КС1, 1,8 мМ СаС12, 5 мМ глюкозу, 10 мМ НЕРЕ8, рН 7,4.
Внутренний раствор пэтч-пипетки содержал: 100 мМ К-глюконат, 20 мМ КС1, 1 мМ СаС12, 1 мМ МдС12, 5 мМ №2АТР, 2 мМ глутатион, 11 мМ ЕОТА, 10 мМ НЕРЕ8, рН 7,2.
Лекарственные средства вводили вливанием, используя систему для быстрой перфузии В1о1од1с МЕУ-9/ЕУН-9.
Все записи осуществляли на клетках НЕК293, стабильно экспрессирующих каналы ЬЕКО. Клетки культивировали на 12-мм покровных стеклах (стекло Оегтаи, Ве11со), закрепленных в камере для записи, используя два платиновых стержня (Сооб1с11о\у). Токи ЬЕКО вызывали, используя активирующий импульс до +40 мВ в течение 1000 мс с последующим импульсом тока с пологим срезом до -50 мВ в течение 2000 мс, удерживающий потенциал составлял -80 мВ. Импульсы прикладывали каждые 20 с и все эксперименты осуществляли при комнатной температуре.
Заключительные комментарии
Специалистам в данной области должно быть очевидно, что вышеприведенные описания являются иллюстративными и носят пояснительный характер, и, как предполагают, только иллюстрируют настоящее изобретение и предпочтительные варианты его осуществления. С помощью рутинных экспериментов среднему специалисту могут быть очевидны различные модификации и изменения, которые могут быть сделаны, не выходя за рамки существа настоящего изобретения. Все такие модификации, возникающие в рамках объема прилагаемой формулы изобретения, должны быть включены в настоящий документ. Таким образом, подразумевается, что настоящее изобретение определяется не только вышеприведенным описанием, но и нижеследующей формулой изобретения и их эквивалентами.
Все публикации, включая, но ими не ограничиваясь, патенты и патентные заявки, упоминаемые в настоящем описании, включены в настоящее описание в качестве ссылки так же, как если бы каждая отдельная публикация была конкретно и по отдельности обозначена как включенная в настоящее описание в качестве ссылки в ее полном объеме.
Должно быть очевидно, что факторы, такие как проникающая способность дифференцированных клеток в отношении различных соединений, могут внести расхождение в данные активности соединений, полученные в ш νίΙΐΌ биохимическом анализе и анализе с использованием клеточной культуры.
По меньшей мере, некоторые из химических названий соединений по данному изобретению, приведенных в настоящем описании, можно было генерировать на автоматизированной основе, используя коммерчески доступное программное обеспечение для присваивания названия химическим соединениям, и они не были независимо подтверждены. Репрезентативные программы, осуществляющие эту функцию, включают программу именования ЬехюЬет, поставляемую 0реи Еуе 8оП\уагс. Шс., и программу Аи- 86 029827
!опош δοΠ\\ΉΑ\ поставляемую МБЬ, 1пс. В случае, когда указанное химическое название и изображенная структура различаются, изображенная структура будет ключевой.
Ссылки
Випддаагд, Н., 1985. 0ез1дп ок ргодгидз. ΕΙεθνίθΓ.
ВизЬ, К.А., Вагтег, К.М., Ма1кег, Л.5., КтгкЬат, В.И.,
2002. Недиск1оп ок ^οίηί 1пк1аттак1оп апд Ьопе егоз1оп ίη гак асЦъ^апк агккг1к1з Ьу кгеактепк м1кЬ 1пкег1еик1п-17 гесерког 1д61 Вс £из1оп ргоке1п. АгкЬг1Ыз НЬеит. 46, 802-805. άοί:10.1002/агк.10173
СЬоу, Е.Н.5., Рапау1, 6.5., 2001, Сукок1пе РакЬмауз апд άοίηί 1п£1аттаЫоп ίη НЬеитако1д АгкЬг1Ыз. Ν. Епд1. ά. Мед.
344, 907-916. άοί:10.1056/ΝΕЗМ200103223441207
С1едд, Ώ.Ο., Неда, ϋ.ά., Наггтз, С.Ь., ΚΙθίη, М.А.,
ΟΌθΙΙ, З.Н. , Ноорег, М.М., Вгад1еу, 3.ϋ., ВтпдЬат, 6.0.
Иетзтап, М.Н. ., Заскзоп, 6.6., Ьапе, Ν.Ε ., бизк, 3.3., Моге1апд
Ь.И., ЗсЬитасЬег, Н.Н., 0дд1з, 6.Υ., Ио1ке, Е., МоИког, З.А. ,
Уосит, ϋ.Е., 5сЬп1кгег, Τ. ά. , Еигзк, ϋ. Е., Замткгке, Α.ϋ. , 5Ы
Н., Вгапдк, Κ.Ό., Мозкомткг , К.К., ИИИатз , Н.З., 2006
61исозат1пе, СЬопдго1Ып 5и1£аке, апд ЬЬе Тмо ίη СотЫпаИоп ког Ра1пки1 Кпее 0зкеоагкЬг1к1з. Ν. Епд1. ά. Мед. 354, 795-808. άοί:10.1056/ЫЕ0Моа052771
Сопзкапк1пезси, 5.Ν., б1гагдок, М., Ресдиек, С., 2008. М1п1пд ког ЬАК-ЗТАТ тикак1опз ίη сапсег. Тгепдз В1осЬет. 5οί. 33, 122-131, άοί:10.1016/д.к1Ьз.2007.12.002
В1гезке1п, 6.5., 2003. Ενοίνίηρ сопсеркз ок гЬеитако1д агкЬг1к1з. Ыакиге 423, 356-361, άοί:10.1038/пакиге01661
бегоп, I., АЬгаЬатззоп, А.Е., Ваггода, 6.В., Κάν3ΐθΓθΜΒ, Е., бокИЬ, ά., Ηοοά, ά.ϋ., ОигосЬег, ά., Мак, 6.6., ЫогопЬа, 6., 5о11, Н.М., Теккег1, А., КаизЬапзку, К., Заптезоп, 6.Н.М., 2008. Βθίθοίίνθ 1пЫЫк1оп ок 3ΑΚ2-θΓίνθη ЕгукЬго1д О1ккегепк1ак1оп ок Ро1усукЬет1а Уега Ргодеп1когз. бапсег 6е11 13, 321-330, άοί:10.1016/д.ссг.2008.02.017
1р, И.К., Иопд, 6.К., Ьат, 6.И.К., 2006. 1пкег1еик1п (1Ь)4 апд 1Ь-13 ир-геди1аке топосуке скетоаккгаскапк ргоке1п-1 ехргеззтоп ίη Ьитап ЬгопсЫа! ерткЬеИа! се11з: ^ηνο1νетеηк ок
- 87 029827
ρ38 т1кодеп-асЫмакеЬ ргоке1п Ыпазе, ехкгасе11и1аг з1дпа1геди1акеЬ Ыпазе 1/2 апЬ Ьапиз к1пазе-2 Ьик пок с-СГип ΝΗ2кегт1па1 к1пазе 1/2 з1дпа1Ипд ракЬмауз. СПп. Ехр. 1ттипо1. 145, 162-172. άοί:10.1111/з.1365-2249.2006.03085.х
Ьои, Ι.-Μ., ЗЫаи, А.-Ъ., СЬеп, 3.-Υ., Иапд, С.-К., ЗЫеЬ, ϋ.-Β., Тза1, С.-З., Ии, С.-Ъ., 2005. ТкготЪозропсИп 1 аз ап
θίίθοίίνθ депе кЬегареик1с зкгакеду ίη со11адеп-1пс1исе0 агкЬг1к13. АгкЬг1к1з КЬеит. 52, 339-344. άοί:10.1002/агк.20746
Кап, Ζ. , гЬепд, Н., Ыи, X., Ы, 3., ВагЬег, ТЫ., бопд, Ζ., бао, Н., Нао, К., ИИ1аг4, МЫ., Хи, ОТ., НаиркзсЬеЫ, К., Резко, Р.А., ЕегпапЬег, ОТ., Иапд, 6., бЬапд, ζ). , Иапд, В., СЬеп, К., Иапд, ОТ., Ъее, Ν.Ρ., бЬои, И., Ып, Ζ., Репд, Ζ., Υί, К., СЬеп, 3., Ы, Ы, Еап, X., Уапд, ОТ., Υθ, К., Эи, ОТ., Иапд, К., Езкге11а, Н., Оепд, 3., Ηθί, Р., <Ыи, М., Ии1иг, Ι.Η., Ыи, ОТ., ЕЬзап1, М.Е., бЬапд, С., ЬоЬоЬа, А., Зипд, И.К., Аддагма1, А., Рооп, Н.Т., Еап, З.Т., Иапд, ОТ., НагскЫск, ОТ., ВЫпЬагЬ, С., Оа1, Н., Ы, Υ., Ьик, 6.М., Мао, М., 2013. ИЬо1е-депоте зедиепЫпд тЬепЫЫез гесиггепк тикаЫопз ίη Ьеракосе11и1аг сагЫпота. бепоте Нез. 23, 1422-1433. άοί:10.1101/дг.154492.113
КЬасЫдтап, ЫМ., 2006. Со11адеп апЫЬодуЫпдисед агкЬЫЫз. Иак. Ргокос. 1, 2512-2516.
άοί:10.1038/пргок.2006.393
Корк, М., ВасЬтапп, М.Е., Μ3Γ3ΐ3ηά, ВЫ., 2010, АмегЫпд ЫЫаттаЫоп Ьу кагдеЫпд кЬе сукоЫпе ешпгоптепк. Ыак. Κβν. Огид Ызсом. 9, 703-718. άοί:10.1038/пгЬ2805
ЫЩ1асг, Е., Сопк1уп, Μ., ΑηάΓθ3θη, С., ИМкпеу-РЫкекк, С., СЬапдеЫап, Р., 2008. ТЬе ЬАК-3 ЫЫЫког СР-690550 Ы а
рокепк апЫЫпЫаттакогу адепк ίη а тиЫпе πιοάθΐ ок ри1топагу еозЫорЫЫа. Еиг. ά. РЬагтасо1. 582, 154-161,
άοί:10.1016/з.езрЬаг.2007.12.024
Ьее, Ώ.Μ., ИеЫЫакк, М.Е., 2001, КЬеитакоЫ агкЬЫЫз.
ТЬе Ьапсек 358, 903-911, άοί:10.1016/30140-6736(01)06075-5
ЬедепЬге, Ε., ОиЬЫа, ά., Ризо1, б.-Р., ВодЬапоЫсг, Ρ.,
2003. 6АК/ЗТАТ Ьик Νοί ЕКК1/ЕКК2 РакЬмау МеЬЬакез 1пкег1еиЫп (1Ь)-6/Зо1иЫе 1Ь-6К 0омп-геди1аЫоп ок Туре II Со11адеп, Аддгесап Соге, апЬ Ыпк РгокеЫ ТгапзсЫрЫоп ίη АгЫсиТаг
- 88 029827
СЬопагосуЬез Α5500ΙΑΤΙ0Ν И1ТН Α ΏΟΜΝ-ΚΕΟυΣΑΤΙΟΝ ОЕ 50X9 ΕΧΡΚΕ55ΙΟΝ. Э. ΒίοΙ. СЬет. 278, 2903-2912.
άοί:10.1074/зЬс.М110773200
Ьеуу, Ώ.Ε., Ьоот1з, С.А., 2007. 5ТАТЗ 51дпаИпд апЬ ЬЬе Нурег-1дЕ Зупскоте. Ν. Епд1. О. Меск 357, 1655-1658. άοί:10.1056/ΝΕСМеО78197
Ып, Н.-5., Ни, С.-Υ., СЬап, Η.-Υ., Ыем, Υ.-Υ., Ниапд,
H. -Р., ЬерезсНеих, Ь., ВазЫапеШ, Е., Вагоп, К., КамасИ, О.,
С1етеп1-Ьасго1х, Р., 2007. АпЫ-гНеитаЫс асЫуШез о£ ЫзЬопе Ьеасе1у1азе (ΗϋΑΟ) 1пЫЫ1огз ίη νίνο ίη со11адеп-1пс1исе0 агЬЬгШз ίη гоЬепЬз. Вг. 0. РНагтасо1. 150, 862-872.
άοί:10.1038/эз.Ъ^р.0707165
Ы, И.0., ОеНпаЬе, Е., гакагиЫаН, М., 2001, ОпсозкаЫп М1пЬисе0 Ма1г1х Ме1а11орго1е1пазе апЬ Ыззие 1пЫЫ1ог о£ Ме1а11орго1е1пазе-3 Оепез Ехргезз1оп ίη Скопскосукез Кеди1гез Напиз К1пазе/5ТАТ 51дпаИпд РаЫмау. О. 1ттипо1. 166, 34913498 .
МепеЬ, С.ОГ.М., ЗсЬтШ, В.А., Сепеу, КЫШ, Ооу1е, КХ., РеасН, О., Ра1тег, РТЫ., ОГопез, 6.Р., НагЬу, ϋ., Ои££у, 0Г.Е.5., 2013. 1т1Ьаго [4, 5 -С] РугЫпе 0ег1уаЫуез изе£и1 £ог ЬНе
ТгеаЬтепЬ о£ ОедепегаЫуе апЬ 1п£1атта1огу 01зеа5е5. ИО2013117645 (А1) .
МиШдЬап, С.О., ЬНапд, О., Нагуеу, К.С., СоШпзипЬегмооЬ, ОГ.К., 5сЬи1тап, В.А., РЫШрз, Ь.А., Таз1ап, 5.К., ЬоН, М.Ь., 5и, X., Ыи, И., ОеуЬЬаз, М., АЫаз, 5.К., СЬеп, I.М., СИ££ог0, Κ.Η, ОегЬагсЦ ϋ.5., Сагго11, И.Ь., Кеатап, 6.Н., ЗтЫН, М., ОомпЬпд, НК., Нипдег, 5.Р., ИП1тап, С.Ь., 2009.
САК тиЬаЫопз ίη ЫдЬ-гЬзк οΜΙάΗοοά асиЬе 1утрНоЫазЫс 1еикет1а. Ргос. ЫаЫ. Асаск 5οί. и.5.А. 106, 9414-9418.
άοί:10.1073/рпаз.0811761106
Ыака, Т., ЫзМтоко, Ν., К1зЫто1о, Т., 2002. ТНе рагасНдт о£ 1Ь-6: кгот Ьаз1с зстепсе ко тесИоке. АгНИЫЫз Кез. 4, 5233-5242. άοί:10.1186/аг565
Ы1а15, А.Т., υάάίη, 5., 2008. Моизе то0е1з о£ а11егд1с
азННта: асике апс1 сИгопЫ а11егдеп сНа11епде. ϋίδ. Μοάθΐ. МесН.
I, 213-220, άοί: 10.1242/с1тт. 000323
- 89 029827
ШзЫск, К., Коттуата, Т., М1уагама, 5., ЗЬеп, Ζ.-Ν., Еигитакзи, Τ., ϋοί, Н., УозЫСа, А., Уатапа, Ь., Уататига, М., Шпоптуа, Υ., 1поие, Н., АзаЬага, Н., 2004 . Шзкопе ЗеасекуХазе ίηΙύΙοίίοΓ зирргезз1оп о£ аи-Ьоап-ЫЪоЗу-тесИа-ЬеЗ агОЬгШз ίη т1се У1а геди1ак1оп οί р161ЫК4а апЗ р21ИАЕ1/С1р1 ехргезз1оп. АгЬЬг1Ыз КЬеит. 50, 3365-3376. άοί:10.1002/агЬ.20709
Ο'ϋθΐΐ, СТ.К., 2004. ТЬегареиШс Зкгакед1ез ког НЬеита£о10
АгкЬг1к1з. Ν. Епд1. ά. Μθά. 350, 2591-2602.
άοί:10.105б/ΝΕЛМгаО4022 б
0зак1, Μ. , Тап, Ь., СЬоу, В.К., УозЫЗа, Υ., СЬеаЬ, К.З.Е., Аигоп, Р.Е., Со1с1г1пд, М.В., 2003. ТЬе ТАТА-сопка1п1пд
соге рготокег о£ кЬе куре II со11адеп депе (СОЬ2А1) 13 кЬе кагдек ок 1пкег£егоп-датта-те01аке0 ίηάίάίίίοη ίη Ьитап сЬопЬгосукез: геди1гетепк ког ЗкаЫ а1рЬа, Ьак1 апЬ Ьак2.
В1осЬет. Ь. 369, 103-115. άοί:10.1042/ВЬ20020928
О'ЗЬеа, Τ. Т. , Рези, М., Вог1е, ϋ.<3., СЬапдеИап, Р.З.,
2004. А пем тоЬаНку ког 1ттипозирргезз1оп: ЬагдеЫпд ЬЬе ЬАК/ЗТАТ ракЬмау. Ыак. Кеу. Огид ϋί3θον. 3, 555-564.
άοί: 10.1038/пгЫ441
Озке, Ь., За1топ, Ρ., ϋίχοη, 6., уап Котраеу, Ь., 2007. А
ЫдЬ кЬгоидЬрик текЬоЬ ок теазиг1пд Ьопе агсЫкескига1 ЫзкигЬапсе ίη а тиг1пе С1А тоЬе1 Ьу т1сго-СТ тогрЬотекгу.
О'ЗиШуап, Ь.А., Ыопдие, С., Ьем1з, К.З., ЗкерЬепзоп, З.Е.М., ИагЬ, А.С., 2007. Сукок1пе гесерког зкдпаИпд кЬгоидЬ
кЬе Ьак-Зкак-Зосз ракЬмау ίη сЬзеазе. Мо1. 1ттипо1. 44, 24972 506. άοί :10.101 б/ό .тоНтт. 2006.11.025
Окего, Μ., Ьадо, К., Ьадо, Е., Κθίηο, ά.ά.6., 6иаШ1о, О., 2005. 51дпаШпд ракЬмау ίηνοίνβά ίη ηίίΓίο οχΐάε зупкЬазе
куре II асЫуаЫоп ίη сЬопЬгосукез: зупегд1зЫс еккеск ок 1ерЫп м1кЬ 1пкег1еик1п-1, АгкЬг1Ыз Кез. ТЬег. 7, К581-К591.
άοί:10.118б/аг1708
Регп13, А.В., КокЬтап, Р.В., 2002. ЬАК-ЗТАТ з1дпаИпд ίη
азкЬта. Ь. СПп. 1пуезк. 109, 1279-1283. άοί:10.1172/ЬС115786
Ка11, Ь.С., КоиЪепокк, К., 2004. КЬеитако1Ь сасЬех1а:
текаЬоНс аЬпогтаНЫез, тесЬапгзтз апЬ гпкегуепЫопз.
- 90 029827
НЬеитако1оду 43, 1219-1223. άοί:10.1093/гЬеитако1оду/кеЬ321
КосИд, З.Ц., Мегаг, М.А., ИЫ£е, Ц.М., Ьатре, Р.А., КПеу, Ц.К., АгкЬиг, С.Р., К1пд, К.Ь., ЗЬееЬап, К.С.Г., Υίη, Ь., Репп1са, ϋ., ЬоЬпзоп Ьг., Е.М., ЗсЬге1Ьег, Κ.ϋ., 1998.
01згирк1оп ок РЬе Ьак1 бепе Ретопзкгакез ОЬИдакогу апЦ ЫопгеЦипЦапк Но1ез ок кЬе Ьакз ίη Сукок1пе-1пс1исе0 В1о1од1с Незропзез. Се11 93, 373-383. άοί:10.1016/30092-8674(00)81166-6
33ΐνθΐηίηί, ϋ., Маггоп, Е., Оидо, Ь., Зегга1по, I., ϋθ Зато, А., Сарик1, А.Р., Сиггосгеа, 3., 2001. АтеИогак1оп ок
3θίη£ сИзеазе ίη а гак то0е1 ок со11адеп-1пс1исе0 агкЬг1к1з Ьу М40403, а зирегох1Ье Ызтиказе т1тек1с. АгкЬг1к1з НЬеит. 44, 2909-2921 .
ЗЬе1коп, О.Ь., ΖθΙΙθγ, ά., Но, И.-Н., Ропз, И., НозепкЬа1, А., 2005. Иете дгомкЬ каског тесИакез Ьурега1дез1а апЬ
сасЬех1а ίη аикотттипе агкЬг1к1з. Ра1п 116, 8-16.
άοί:10.1016/з.ρηίη.2005.03.039
3ίπι.5, Ν.Α., бгееп, Ц.Н., 61акк, М., ЗсЬИск, 3., Магк1п,
Т.Ц., бП1езр1е, М.Т., Нотаз, Е., 2004. ТагдеЫпд озкеос1азкз
м1ЬЬ ζοΙθάΓοηίο ас1Ь ρΓθνθηί3 Ьопе ЬезкгисЫоп ίη со11адеп1пЬисеЬ агкЬг1к1з. АгкЬг1к1з НЬеит. 50, 2338-2346.
άοί:10.1002/агк.20382
Зто1еп, ЕТ. 3. , 5ке1пег, С., 2003. ТЬегареик1с зкгакед1ез
ког ΓΗθυΐΜίοίά агкЬг1к1з. Ыак. Ηβν. Огид ϋίεοον. 2, 473-488.
άοί:10.1038/ηΓά1109
Зкаегк, ά., Ка1Ип, А., ОетоиПп, ОТ.-В., УатсЬепкег, И., Сопзкапк1пезси, 3.Ν., 2005. 6АК1 3ηά Тук2 Асктак1оп Ьу ЬЬе Ното1одоиз Ро1усукЬет1а Уега 6АК2 У617Е Микактп СНОЗЗ-ТАЬК И1ТН Ι6Ε1 НЕСЕРТОН. ά. ΒίοΙ. СЬет. 280, 41893-41899. άοί:10.1074/зЬс.С500358200
Тат, Ь., Мс61упп, Ь.М., Тгаупог, Р., МикЬег^ее, К., Вагк1екк, 6.М.З., Εάν^τάε, ά., 2007. Ехргезз1оп 1βνθΐ3 ок кЬе
6АК/ЗТАТ ракЬмау ίη кЬе кгапз1к1оп кгот Ьогтопе-зепз1кте ко Ьогтопе-гекгаскогу ргозкаке сапсег. Вг. б. Сапсег 97, 378-383.
άοί:10.1038/эз.Ь]с.6603871
Уа1псЬепкег, И., Риза, А., Соп5капк1пезси, 3.Ν., 2008.
бАКз ίη ракЬо1оду: Но1е ок бапиз кгпазез ίη Ьетакорогекгс
- 91 029827
таПдпапсйез апд 1ттипо0е£1С1епс1ез. Зет1п. Се11 ϋθν. ΒίοΙ. 19, 385-393. άοί:10.1016/3.зетсДЬ.2008.07.002
Уап0едЫпз£е, Ν., Тотте, Р., М1сЫе1з, Е., Ма, Ъ., МП1еВакег, В., Уап, Е., 2005. Ме£Ьо0з апЦ Меапз £ог ТгеаЕтепЕ о£
ОзкеоагкЬгПАз. ИО2005124342 (А2).
Иа1зт1кк, ОТ., АЪас1, Ъ., КеЬауьаз, ОТ., НоиЬепо££, К., 2004. Титог песгозьз £ас£ог-а1рка ргосЬасЫоп 13 аззосьакеЦ мИаЬ 1езз Ьо0у се11 тазз ίη мотеп мИаЬ гЬеитаЕоьЦ агЕНгИМз. ОТ. Нкеита£о1. 31, 23-29.
Иегпьд, С., КЬагаз, М.С., ОкаЬе, И., Мооге, З.А., Ъеетап, Ώ.3., Си11еп, ϋ.Ε., Οοζο, М., МсОомеИ, Е.Р., Ъем1пе, Н.Ъ., Ооиказ, ОТ., Мак, С.С., ЕГогопЪа, 6., Магкьп, М., Ко, Υ.Ώ., Ъее, В.Н., Зо11, Н.М., Те££ег1, Α., Ηοοά, σ.ϋ., БПШапс}, О.С.,
2008. Е££1сасу о£ Т6101348, а 3θ1θθίίνθ ЛАК2 ίηΜΜίοτ, ίη кгеактепк о£ а тиг1пе тос1е1 о£ άΑΚ2ν617Ε-ίηάυοθά ро1усу£Ъет1а мега. Сапсег Се11 13, 311-320, άοί:10.1016/д.ссг.2008.02.009
И1е1ап0, Н.А., МьскаеНз, М., КьгзсЬЬаит, В. ά., ΒτιάοΙρΜ, К.А., 2005. ОзВеоагВЬгьВьз - ап ипВгеаВаЫе 01зеазе? Ыа£. Нем.
Огид ϋίΒΟον. 4, 331-344. άοί:10.1038/пг01б93
Μίτίζ, 3., ЫеигаЕЪ, М.Е., 2007. Моизе тсМе1з о£ 1п£1атта£огу Ьоме1 άΐ3θ33θ. Αάν. Огид ОеПм. Нем. 59, 10731083. άοί:10.1016/д·&άάΓ.2007.07.003
Х1апд, Ζ., ЪЪао, Υ., М1£акзом, V., ЕгетопЕ, ϋ.Η., Каза1, Υ., Μο1ίίθΓί3, А., Шез, Η.Ε., Мапег, Т.Ъ., МсЬеПап, Μ.ϋ., 01Регз1о, Л.Е., Ыпк, О.С., Раукоп, ά.Ε., СгаиЬегЕ, Т.А.,
ИаЕзоп, М., ЗЪаппоп, И., НеаЕЪ, З.Е., Ыадагазап, К., МаЫз, Е.Р., ИНзоп, Р.К., Ьеу, ТЫ., Тотаззоп, М.Н., 2008.
Ιάθηίίίίοηίίοη о£ зотаЕ1с ЛАК1 тикаЕ1опз ίη раЕ1епкз ЫЕЪ асике π^θίοίά 1еикет1а. Βίοοά 111, 4809-4812. άοί:10.1182/ά1οοά-200705-090308
ЪепаЕЕ!, Р.Р., Н1Ье1го, ϋ.,
М.С., Радапап, М., Тг1Еарое, ά.
Самого, В.А., ЗагтепЕо, Ъ.М.,
КоЬагд, ά., НогзЕтапп, Μ., Ρί ΕθΓΓ3ηάο, А.А., Ме1:ег1пк, СГ. Р . ,
ВагаЕа, СГ. Т. , 2011. Опсодеп1с 1Ъ7Н да1п-о£-£ипс£1оп тиЕаЕ1опз
ίη οΗίΙάΗοοά Т-се11 асиЕе 1утрЪоЫазЕ1с 1еикет1а. ЫаЕ. СепеЕ. 43, 932-939. άοί:10.1038/пд.924
ы, и., гиигЫег, Ъ., ЗШа
Ηίχοη, Л.А., ЗПуеАа, А.В.
Соггеьа, Ν. , ΤοτίΜο, М.Ъ.
Еегз, Н ., ΒΓ3ηά3ΐί3θ, З.Н.
Оигит, З.К., Типез, Л.А.

Claims (12)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Соединение в соответствии с формулой I
    где К1 представляет собой Ме;
    Щ представляет собой -N^2- или -Ο-;
    Су представляет собой фенил или пиридинил;
    К2 представляет собой Н или С1-4алкил;
    К3 представляет собой Н, галоген, Сщалкил, необязательно замещенный одним или несколькими галогенами, или Сщалкокси, необязательно замещенный одним или несколькими галогенами;
    К4 представляет собой Н или галоген;
    - 92 029827
    Κ5 представляет собой -СН, галоген или представляет собой -Ε2-Κ6;
    -Ь2 отсутствует или представляет собой -С(=О)-, -С(=О^Е7-, -ΝΚΎ(=Ο)-, -ЗО2-, ΑΟ^ΝΚ7- или АЕ7ЗО2-;
    Κ6 представляет собой Н или Сх-6алкил, необязательно замещенный одной или несколькими независимо выбранными группами Κ8;
    Κ7 представляет собой Н или С^алкил;
    Κ8 представляет собой ОН, СН галоген или Судалкокси;
    Ьа отсутствует или представляет собой -С(=О)-, -С(=О)О- или -С(=О)НН-;
    IV представляет собой:
    Н,
    Судалкил,
    С3-7 моноциклический циклоалкил, необязательно замещенный одной или более независимо выбранными группами IV, или
    4-7-членный моноциклический гетероциклоалкил, содержащий один или несколько гетероатомов, независимо выбранных из О, N и З;
    IV представляет собой: галоген,
    СН,
    ОН,
    С^алкил,
    -С(=О)ОН или -С( ООс1Г; и
    каждый ИЬ1, Κ2, IV'1 и IV2 независимо выбран из Н и Судалкила, или его фармацевтически приемлемая соль.
  2. 2. Соединение или фармацевтически приемлемая соль по п.1, где соединение соответствует формулам 11а, 1ГЬ или 11с:
    где Ь1, Κ3, Κ4, Ьа, IV и Κ5 являются такими, как описано в п.1.
  3. 3. Соединение или фармацевтически приемлемая соль по п.1, где соединение соответствует формулам ΐνβ, ГУЬ, ГУс, ΐνά, ГУе или ΐνί:
    где Κ3, Κ4, Κ5, V, и IV являются такими, как описано в п.1.
  4. 4. Соединение или фармацевтически приемлемая соль по п.1, где соединение соответствует формулам Vа, "УЬ, V' νά, Vе или νί:
    - 93 029827
    где К3, К4, К5, Ьа и Ка являются такими, как описано в п.1.
  5. 5. Соединение или фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1-4, где К4 представляет собой Н, Р или С1.
  6. 6. Соединение или фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1-5, где К3 представляет собой Н, Ме или ЕЕ
  7. 7. Соединение или фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1-6, где К5 представляет собой СН Р, С1, -802Ме или -802ЕЕ
  8. 8. Соединение или фармацевтически приемлемая соль по любому из пп.1-7, где Ка представляет собой:
  9. 9. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.1, где соединение представляет собой (1К,2К)-Ы-[6-[(6-циано-4-метил-3-пиридил)окси]-1-метилбензимидазол-4-ил]-2фторциклопропанкарбоксамид.
  10. 10. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и фармацевтически эффективное количество соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп.1-9.
  11. 11. Применение соединения по любому из пп.1-9 в лечении или профилактике аллергических заболеваний, воспалительных заболеваний, аутоиммунных заболеваний, пролиферативных заболеваний, отторжения при трансплантации, заболеваний, связанных с ухудшением обновления хряща, врожденных дефектов развития хряща, и/или заболеваний, связанных с гиперсекрецией П.6 или гиперсекрецией интерферонов.
  12. 12. Применение фармацевтической композиции по п.10 в лечении или профилактике аллергических заболеваний, воспалительных заболеваний, аутоиммунных заболеваний, пролиферативных заболеваний, отторжения при трансплантации, заболеваний, связанных с ухудшением обновления хряща, врожденных дефектов развития хряща, и/или заболеваний, связанных с гиперсекрецией П.6 или гиперсекрецией интерферонов.
EA201691468A 2014-01-23 2015-01-19 Производные бензимидазола и их фармацевтические композиции для лечения воспалительных заболеваний EA029827B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB1401086.2A GB201401086D0 (en) 2014-01-23 2014-01-23 Novel compounds and pharmaceutical compositions thereof for the treatment of inflammatory disorders
PCT/EP2015/050850 WO2015110378A1 (en) 2014-01-23 2015-01-19 Benzimidazole derivatives and pharmaceutical compositions thereof for the treatment of inflammatory disorders

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201691468A1 EA201691468A1 (ru) 2016-12-30
EA029827B1 true EA029827B1 (ru) 2018-05-31

Family

ID=50287405

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201691468A EA029827B1 (ru) 2014-01-23 2015-01-19 Производные бензимидазола и их фармацевтические композиции для лечения воспалительных заболеваний

Country Status (27)

Country Link
US (3) US9440929B2 (ru)
EP (2) EP3395802A1 (ru)
JP (1) JP6472454B2 (ru)
CN (1) CN106132934B (ru)
AR (1) AR099160A1 (ru)
AU (1) AU2015208269B2 (ru)
BR (1) BR112016016732B1 (ru)
CA (1) CA2941474A1 (ru)
CY (1) CY1120679T1 (ru)
DK (1) DK3097083T3 (ru)
EA (1) EA029827B1 (ru)
ES (1) ES2693019T3 (ru)
GB (1) GB201401086D0 (ru)
HR (1) HRP20181332T1 (ru)
HU (1) HUE039450T2 (ru)
IL (1) IL246823B (ru)
LT (1) LT3097083T (ru)
MX (1) MX370546B (ru)
MY (1) MY180363A (ru)
NZ (1) NZ723313A (ru)
PH (1) PH12016501677B1 (ru)
PL (1) PL3097083T3 (ru)
PT (1) PT3097083T (ru)
SG (1) SG11201606971XA (ru)
SI (1) SI3097083T1 (ru)
TW (1) TWI689496B (ru)
WO (1) WO2015110378A1 (ru)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AR105400A1 (es) * 2015-08-04 2017-09-27 Lilly Co Eli Inhibidores de jak1
CA3030697C (en) 2016-07-14 2021-02-23 Eli Lilly And Company Pyrazolylaminobenzimidazole derivatives as jak inhibitors
GB201717260D0 (en) * 2017-10-20 2017-12-06 Galapagos Nv Novel compounds and pharma ceutical compositions thereof for the treatment of inflammatory disorders
CN108355618B (zh) * 2018-02-27 2020-09-08 江南大学 牛来源透明质酸酶亲和介质及其吸附方法
CN108776121B (zh) * 2018-04-08 2021-07-30 广州卡马生物科技有限公司 一种基于荧光猝灭原理对药材中抗氧剂的高通量筛选方法
TWI826525B (zh) * 2018-09-18 2023-12-21 美商拓臻股份有限公司 用於治療特定白血病之化合物
WO2020092015A1 (en) 2018-11-02 2020-05-07 University Of Rochester Therapeutic mitigation of epithelial infection
GB201904373D0 (en) * 2019-03-29 2019-05-15 Galapagos Nv Novel compounds and pharamaceutical compositions thereof for the treatment of inflammatory disorders
CN114671858B (zh) * 2022-03-07 2023-08-08 华中师范大学 一种苯并咪唑系化合物及其制备方法与应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2226315A1 (en) * 2007-12-28 2010-09-08 Carna Biosciences Inc. 2-aminoquinazoline derivative
WO2012044090A2 (ko) * 2010-09-29 2012-04-05 크리스탈지노믹스(주) 단백질 키나제 억제 활성을 갖는 신규한 아미노퀴나졸린 화합물
WO2013117645A1 (en) * 2012-02-10 2013-08-15 Galapagos Nv Imidazo [4, 5 -c] pyridine derivatives useful for the treatment of degenerative and inflammatory diseases

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20070004658A1 (en) 2004-06-21 2007-01-04 Nick Vandeghinste Method and means for treatment of osteoarthritis
AU2009238590A1 (en) * 2008-04-22 2009-10-29 Portola Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of protein kinases

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2226315A1 (en) * 2007-12-28 2010-09-08 Carna Biosciences Inc. 2-aminoquinazoline derivative
WO2012044090A2 (ko) * 2010-09-29 2012-04-05 크리스탈지노믹스(주) 단백질 키나제 억제 활성을 갖는 신규한 아미노퀴나졸린 화합물
WO2013117645A1 (en) * 2012-02-10 2013-08-15 Galapagos Nv Imidazo [4, 5 -c] pyridine derivatives useful for the treatment of degenerative and inflammatory diseases

Also Published As

Publication number Publication date
US10179771B2 (en) 2019-01-15
TW201613873A (en) 2016-04-16
DK3097083T3 (en) 2018-10-01
US20190152922A1 (en) 2019-05-23
PL3097083T3 (pl) 2018-11-30
CN106132934A (zh) 2016-11-16
NZ723313A (en) 2019-11-29
TWI689496B (zh) 2020-04-01
IL246823A0 (en) 2016-08-31
SG11201606971XA (en) 2016-10-28
CA2941474A1 (en) 2015-07-30
LT3097083T (lt) 2018-11-26
JP2017503834A (ja) 2017-02-02
MX2016009442A (es) 2016-10-13
PH12016501677A1 (en) 2016-11-07
AU2015208269A1 (en) 2016-09-01
US9440929B2 (en) 2016-09-13
JP6472454B2 (ja) 2019-02-20
CY1120679T1 (el) 2019-12-11
EA201691468A1 (ru) 2016-12-30
US20170057928A1 (en) 2017-03-02
HRP20181332T1 (hr) 2018-10-19
CN106132934B (zh) 2019-04-02
US20150203455A1 (en) 2015-07-23
SI3097083T1 (sl) 2018-10-30
EP3097083B1 (en) 2018-08-08
PH12016501677B1 (en) 2016-11-07
PT3097083T (pt) 2018-10-26
ES2693019T3 (es) 2018-12-07
GB201401086D0 (en) 2014-03-12
EP3097083A1 (en) 2016-11-30
WO2015110378A1 (en) 2015-07-30
MY180363A (en) 2020-11-28
AU2015208269B2 (en) 2018-08-30
HUE039450T2 (hu) 2018-12-28
BR112016016732A8 (pt) 2020-06-16
BR112016016732B1 (pt) 2023-04-18
MX370546B (es) 2019-12-17
IL246823B (en) 2020-02-27
AR099160A1 (es) 2016-07-06
EP3395802A1 (en) 2018-10-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA029827B1 (ru) Производные бензимидазола и их фармацевтические композиции для лечения воспалительных заболеваний
JP6995623B2 (ja) Ｌｓｄ１阻害剤としてのヘテロ環式化合物
JP6790040B2 (ja) Ｆａｓｎを阻害するための新規化合物および組成物
CN106795139B (zh) 氨基吡啶基氧基吡唑化合物
CN103492386B (zh) 可用于治疗变性和炎性疾病的新化合物
KR101676391B1 (ko) 퇴행성 및 염증성 질병의 치료에 유용한 신규 화합물
UA124474C2 (ru) Бензизотіазольні, ізотіазоло[3,4-b]піридинові, хіназолінові, фталазинові, піридо[2,3-d]піридазинові й піридо[2,3-d]піримідинові похідні як інгібітори g12c kras для лікування раку легені, раку підшлункової залози або колоректального раку
EA021637B1 (ru) 5-фенил-[1,2,4]триазоло[1,5-a]пиридин-2-илкарбоксамиды в качестве ингибиторов jak
JP2016527296A (ja) Ｃｆｔｒモジュレーターとしてのチエノ［２，３−ｃ］ピラン
EA027563B1 (ru) Пиридопиразины, обладающие противораковой активностью через ингибирование fgfr киназ
JP2015520143A (ja) 癌を治療するためのｂｕｂ１阻害薬としての置換されているシクロアルケノピラゾール類
EA028599B1 (ru) Пиразолилхиноксалиновые ингибиторы киназы
JP6339241B2 (ja) Ａｌｋキナーゼ阻害剤並びにその調製方法及び使用
JP2016536311A (ja) ヘテロアリール置換ピラゾール類
UA127507C2 (uk) Селективні супресори рецепторів естрогенів
UA80571C2 (en) Quinolinyl-pyrrolopyrazoles
KR20150023048A (ko) 염증의 치료에 사용하기 위한 아미노트라이아졸로피리딘, 및 그의 약학 조성물
EA020111B1 (ru) {5-[4-(3,3-ДИМЕТИЛАЗЕТИДИН-1-КАРБОНИЛ)ФЕНИЛ]-[1,2,4]ТРИАЗОЛ[1,5-a]ПИРИДИН-2-ИЛ}АМИД ЦИКЛОПРОПАНКАРБОНОВОЙ КИСЛОТЫ
JP2022532850A (ja) ４ｈ－ピロロ［３，２－ｃ］ピリジン－４－オン化合物
TWI665203B (zh) 一種氮雜芳基衍生物、其製備方法和在藥學上的應用
TW201336844A (zh) 可用於治療退化及發炎疾病之新穎化合物
CN118055933A (zh) 选择性parp1抑制剂及其应用
EA029789B1 (ru) ПРОИЗВОДНЫЕ ИМИДАЗОПИРИДАЗИНА В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ PI3Kβ
CN113646305A (zh) 用于治疗炎性障碍的新化合物及其药物组合物
JP2022526553A (ja) 炎症性障害の治療のための新規化合物及びその医薬組成物

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM