UA126473C2 - Застосування d-псикози-3-епімерази для продукування d-псикози з d-фруктози - Google Patents
Застосування d-псикози-3-епімерази для продукування d-псикози з d-фруктози Download PDFInfo
- Publication number
- UA126473C2 UA126473C2 UAA201905494A UAA201905494A UA126473C2 UA 126473 C2 UA126473 C2 UA 126473C2 UA A201905494 A UAA201905494 A UA A201905494A UA A201905494 A UAA201905494 A UA A201905494A UA 126473 C2 UA126473 C2 UA 126473C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- psychosis
- epimerase
- fructose
- psicose
- amino acid
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 108030002106 D-psicose 3-epimerases Proteins 0.000 title abstract 2
- BJHIKXHVCXFQLS-PUFIMZNGSA-N D-psicose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C(=O)CO BJHIKXHVCXFQLS-PUFIMZNGSA-N 0.000 title 1
- 208000028017 Psychotic disease Diseases 0.000 claims description 83
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 claims description 38
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 34
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 32
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 32
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 31
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 24
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 18
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 18
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 5
- ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N Boron Chemical group [B] ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 claims 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 claims 1
- 241001467964 Ravavy Species 0.000 claims 1
- LKDRXBCSQODPBY-JDJSBBGDSA-N D-allulose Chemical compound OCC1(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O LKDRXBCSQODPBY-JDJSBBGDSA-N 0.000 abstract description 16
- 102000004879 Racemases and epimerases Human genes 0.000 description 33
- 108090001066 Racemases and epimerases Proteins 0.000 description 33
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 24
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 21
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 11
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 10
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 8
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 7
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- HMUNWXXNJPVALC-UHFFFAOYSA-N 1-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)C(CN1CC2=C(CC1)NN=N2)=O HMUNWXXNJPVALC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 5
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 3
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 3
- 238000004042 decolorization Methods 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000679 carrageenan Substances 0.000 description 1
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 description 1
- 229940113118 carrageenan Drugs 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 229940045110 chitosan Drugs 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 1
- 239000005417 food ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000001640 fractional crystallisation Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- -1 molybdate ions Chemical class 0.000 description 1
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N monoethanolamine hydrochloride Natural products NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 230000037432 silent mutation Effects 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/90—Isomerases (5.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y501/00—Racemaces and epimerases (5.1)
- C12Y501/03—Racemaces and epimerases (5.1) acting on carbohydrates and derivatives (5.1.3)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/02—Monosaccharides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/24—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of an isomerase, e.g. fructose
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Винахід стосується застосування О-псикози-3-епімерази для продукування ЮО-псикози з О- фруктози.
Також винахід стосується способу та композиції для отримання ЮО-псикози-3- епімерази.
Галузь техніки
ІЇ0001| Наступне розкриття стосується Ю-псикоза-3-епімерази та способу отримання 0- псикози з її використанням.
Передумови створення винаходу
І0002| О-псикоза (надалі називають "псикоза") - це моносахарид, відомий як рідкісний цукор, присутній в дуже невеликій кількості в природному світі. Вона має майже нульову калорійність, при цьому маючи майже 70 95 солодкость цукру, та отримує багато уваги як новий харчовий інгредієнт завдяки своїм функціональним можливостям, таким як інгібування глюкози в крові, інгібування синтезу ліпідів, тощо. 0003) Завдяки даним характеристикам, псикозу розглядають як таку, що використовують як замінник цукру в різних харчових продуктах. Однак, існує зростаюча потреба в способі ефективного отримання псикози, оскільки вона існує в дуже невеликій кількості в природному світі.
ІЇ0004| Відомий спосіб отримання псикози включає спосіб застосування каталізу іонів молібдату ВІК, М., ТіпіагікК, К., 1973, Кеасійоп ої Засспагіде5 СаїаІулеа Бу Моїурааїе Іопв. ІХ.
Ерітегігайоп ої Кеюпехозе5. Спет. 7мевії. 28:106-109|, хімічний спосіб отримання псикози з О- фруктози шляхом нагрівання разом етанолу та триетиламіну |Оопег, І ЛМУ., 1979, Ізотегігацноп ої
О-писюзе Бу Ваве: І ідшід-Спготаїодгарніс ЕмаїЇнцайоп апа Тне Ізоїайоп ої О-Рвісозе. Сагропуаг.
Вез. 70:209-216|, та біологічний спосіб отримання псикози з Ю-фруктози із застосуванням мікроорганізма, який продукує Ю-псикозу-3-епімеразу (Відкрита публікація Корейського патента
Мо 10-2011-0035805)|. Отримання псикози за хімічним способом має проблеми в тому, що виникає велика кількість побічних продуктів, та, таким чином, потрібним є проводити складну очистку. Крім того, біологічний спосіб також має проблеми, які полягають в тому, що вихід є дуже низьким та вартість отримання є високою.
І00051 За даних обставин, автори винаходу доклали багато зусиль для того, щоб розробити спосіб покращення виходу отримання псикози, та в результаті підтвердили, що коли використовувалась нова ЮО-псикоза-З-епімераза (далі в даному документі називається як "епімераза псикози") за винаходом, швидкість, з якою Ю-фруктоза перетворюється в псикозу (далі в даному документі, називається як коефіцієнт перетворення з Ю-фруктози на псикозу) збільшувалась, щоб, таким чином, була можливість значно збільшити вихід отримання псикози, та здійснити винахід.
Технічна проблема
І0006| Варіант здійснення винахода є спрямованим на забезпечення нової епімерази псикози, полінуклеотиду, який кодує епімеразу псикози, рекомбінантного вектора, який включає полінуклеотид, та мікроорганізму, в який вводиться вектор.
Ї0007| Інший варіант здійснення винахода є спрямованим на забезпечення композиції для отримання ЮО-псикози, яка включає епімеразу псикози, мікроорганізм, який експресує епімеразу псикози, або культуру мікроорганізма, та спосіб отримання ЮО-псикози з використанням епімерази псикози.
Технічне рішення 0008) Відповідно до ілюстративного варіанта здійснення винахода, передбаченою є 0- псикоза-3-епімераза, яка складається з амінокислотної послідовності 5ЕО ІЮ МО: 1.
І0009) В ілюстративному варіанті здійснення, епімераза псикози може включати поліпептид, який має щонайменше 80 95, 90 95, 95 95, 97 96 або 9995 гомологічність з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІО МО: 1. Очевидним є те, що амінокислотна послідовність, яка має активність перетворення Ю-фруктози в псикозу та описану вище гомологічність, може включати випадок, коли частина амінокислотної послідовності 5ЕС ІО МО: 1 є заміщеною, вставленою, модифікованою та/або видаленою. Крім того, поліпептиди, які мають активність епімерази псикози також можуть бути включені без обмеження як поліпептид, кодований полінуклеотидом, який гібридизується з комплементарною послідовністю до всієї або частини нуклеотидної послідовності, що кодує зонд, який може бути отриманий з відомої генної послідовності, наприклад, епімерази псикози за винаходом, в жорстких умовах. 0010) Термін "полінуклеотид", який використовується в даному документі, стосується полірибонуклеотиду або полідезоксирибонуклеотиду, в якому нуклеотидний мономер є немодифікований або модифікований до полімеру нуклеотидів, розширеного в довгому ланцюзі ковалентними зв'язками.
І0011) Термін "жорсткі умови", який використовується в даному документі, означає умови, які дозволяють здійснювати специфічну гібридизацію між полінуклеотидами. Умови залежать від довжини полінуклеотиду та ступеня комплементарності. Їх параметри є добре відомими в даній (610) галузі та конкретно описаними в документі (наприклад, у). затрьгоок еї аї., вище). Наприклад,
жорсткі умови можуть включати умови, за яких гени гібридизують один з одним, причому кожен має високу гомологічність у 80 9, 90 9», 95 9», 97 У, або 99 95 або більше, умови, за яких гени не гібридизують один з одним, причому кожен має більш низьку гомологічність, або загальні умови промивання саузерн-гібридизації, тобто умови для промивання один раз, конкретно два-три рази при концентрації солі та температурі, такій як 602С, 1х55С, 0,195 505, зокрема, 02С,
О01х55С, 0,195 5О5, та більш конкретно, 682С, 0,1х55С, 0,195 505. Зонд, який використовувався в гібридизації, може бути частиною комплементарної послідовності базової послідовності. Такий зонд може бути сконструйований з використанням ПЛР, застосовуючи фрагмент гена, який включає базову послідовність, як матрицю, з використанням олігонуклеотида, отриманого на основі відомої послідовності як праймера. Крім того, фахівець в даній галузі може регулювати температуру та концентрацію солі промивного розчину в міру необхідності в залежності від таких чинників, як довжина зонда.
І0012| Термін "гомологічність", який використовується в даному документі, стосується відсотка ідентичності між двома полінуклеотидними або поліпептгидними фрагментами.
Гомологічність між послідовностями від одного фрагмента до іншого фрагменту може бути визначена за відомими способами. Наприклад, гомологічність може бути визначена шляхом прямого вирівнювання параметрів інформації про послідовність між двома полінуклеотидними молекулами або двома поліпептидними молекулами, таких як оцінка, ідентичність та подібність тощо, з використанням комп'ютерної програми, яка сортує інформацію про послідовності та є легко доступною (наприклад, ВІ А5Т 2.0). Крім того, гомологічність між полінуклеотидами може бути визначена шляхом гібридизації полінуклеотиду в умовах, в яких між гомологічними ділянками утворюється стабільна дволанцюгова нитка, з подальшою деградацією однонитковою специфічною нуклеазою для того, щоб визначити розмір деградованого фрагмента. 0013) Крім того, за умови, що протеїн має активність, яка відповідає епімеразі псикози, яка складається з амінокислотної послідовності 560) ІЮ МО: 1 за винаходом, можливим є додавати несенсову послідовність перед та після амінокислотної послідовності ЗЕО ІЮ МО: 1, або включити мутацію, яка зустрічається в природі або її мовчазну мутацію. Протеїн, який включає амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 1 також є включеним в межі обсягу винаходу. 0014) Крім того, О-псикоза-3-епімераза за винаходом може кодуватися полінуклеотидною послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 2, або полінуклеотидною послідовністю, який має щонайменше 80 95, 90 Фо, 95 95, 97 95 або 99 95 гомологічність до неї, але винахід не обмежується цим. Крім того, очевидним є те, що полінуклеотид, який кодує Ю-псикоза-З-епімеразу за винаходом, полінуклеотид, який є здатним транслюватися в протеїн, який складається з амінокислотної послідовності 5ЕО ІО МО: 1, або протеїн, який має гомологічність до нього, за рахунок виродженості кодону також може бути включеним в межі діапазону полінуклеотидної послідовності за винаходом. Кваліфікованому фахівцю в даній галузі буде зрозуміло, що можливим є отримати полінуклеотид, який кодує фермент, який має по суті еквівалентний діапазон активності, шляхом заміщення, додавання, та/або делеції однієї або декількох нуклеотидних послідовностей 5ЕО ІЮ МО: 2 з використанням відомих рекомбінантних методик. 0015) В іншому ілюстративному варіанті здійснення, епімераза псикози за винаходом може бути отримана з мікроорганізму роду Каїхіа. Зокрема, епімераза псикози за винаходом може бути отримана з Каїзійа дгапиїї, та більш конкретно, може бути отримана з Каївійа дгапиїї КСТС 12575. 0016) В іншому ілюстративному варіанті здійснення, епімераза псикози за винаходом може мати молекулярну масу від 25 кДа до 37 кДа, від 27 кДа до 35 кДа, або від 30 кДа до 35 кДа, як вимірюється 3 використанням електрофорезу на поліакриламідному гелі з натрію додецилсульфатом (505-РАСЕ).
І0017| Відповідно до іншого ілюстративного варіанта здійснення винахода, передбаченим є полінуклеотид, який кодує Ю-псикоза-З-епімеразу, яка складається з амінокислотної послідовності 5ХЕО ІЮ МО: 1.
І0018| В ілюстративному варіанті здійснення, полінуклеотид, передбаченим в даному документі може бути полінуклеотид, яка складається із базової послідовності ЗЕО ІЮ МО: 2 або послідовності, яка має 80 95, 90 95, 95 95, 97 9», або 99 95 або більше гомологічність із базовою послідовністю ЗЕО ІЮ МО: 2. Крім того, очевидним є те, що полінуклеотид, передбачений в даному документі, полінуклеотид який є здатним транслюватися в протеїн, який складається з амінокислотної послідовності зХЕО ІЮ МО: 1, або протеїн, який має гомологічність до нього, за рахунок виродженості кодону також є включеним в межі діапазону за винаходом.
00191 Відповідно до іншого ілюстративного варіанта здійснення винахода, передбаченою є рекомбінантний вектор, який включає полінуклеотид, який кодує ЮО-псикоза-З-епімеразу за винаходом.
І0020| Рекомбінантний вектор за винаходом може мати форму, в якій полінуклеотид, який кодує епімеразу псикози, є вставленим в клонуючий вектор або вектор експресії, використовуючи відомі стандартні способи. Термін "клонуючий вектор", який використовується в даному документі, стосується вектора, здатного переносити фрагмент ДНК в клітину-господар та регенерувати його. Клонуючий вектор може додатково включати сигнал поліаденилювання, послідовність термінації транскрипції, та/або сайт багаторазового клонування. В даному документі, сайт багаторазового клонування може включати щонайменше одну з ендонуклеаз та рестрикцій ний ферментний сайт. В ілюстративному варіанті здійснення, полінуклеотид, який кодує епімеразу псикози може бути розташований вв зворотному напрямку сигнала поліаденилювання та послідовності термінації транскрипції. Термін "вектор експресії", який використовується в даному документі, стосується ДНК послідовності, необхідної для транскрипції та трансляції клонованої ДНК у відповідному господарі. Крім того, "вектор експресії"? який використовується в даному документі, стосується генного конструкта, який включає необхідний регуляторний елемент, функціонально зв'язаний зі вставкою, таким чином, що вставка експресується, коли є присутньою в клітині суб'єкта. Термін "функціонально зв'язаний" означає, що одна функція регулюється іншою функцією за рахунок асоціації полінуклеотидної послідовності на полінуклеотиді. Вектор експресії може бути отриманий та очищений, використовуючи стандартні рекомбінантні ДНК методики. Вектор експресії може включати щонайменше будь-який один з промотора, кодона ініціації, гена, який кодує цитозинепімеразу, та кодона термінації. 00211 Відповідно до іншого ілюстративного варіанта здійснення винахода, передбаченим є мікроорганізм, в який вводиться рекомбінантний вектор, як описано вище.
І0022| В ілюстративному варіанті здійснення, мікроорганізм, в який вводиться рекомбінантний вектор за винаходом, може бути мікроорганізмом, який трансформується рекомбінантним вектором, який включає полінуклеотид, який кодує епімеразу псикози, який включає амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 1, або рекомбінантним вектором, який включає полінуклеотид, який складається із базової послідовності 5ЕО ІО МО: 2. (0023) Термін "трансформація", який застосовано в даному документі, означає, що ген або рекомбінантний вектор, який включає ген, вводиться в клітину-господар таким чином, що ген є здатним експресуватися в клітині-господарі. винахід включає будь-який трансформований ген за умови, що трансформований ген є здатним експресуватися в клітину-господар, без обмеження, незалежно від того, чи є вставленим в хромосому клітини-господара або чи є розташованим поза хромосоми клітини-господаря. Спосіб трансформації за винаходом включає тимчасову трансформацію, мікроін'єкцію, трансдукцію, клітинне злиття, осадження фосфатом кальцію, опосередковану ліпосомою трансфекцію, опосередковану ОЕАЕ декстраном трансфекцію, електричну перфорацію, електричну ін'єкцію, хімічну обробку, тощо, але винахід не обмежується цим. Клітина-господар, яка є здатною бути трансформованою з рекомбінантним вектором, може включати прокаріотичну клітину, рослинну клітину, тваринну клітину, тощо.
Використовуваною може бути клітина-господар, яка має високу ефективність введення ДНК та високий показник експресії введеної ДНК. Наприклад, клітиною-хазяїном може бути Е. соїї, штам роду Васіїйй5, штам роду Согупебасіегійт, штам роду зЗаїЇтопеїйа, тощо, та, наприклад, може бути БЕ. соїї, таку як МУ3110, ВІ 21, УМ109, К-12, ЇЕ392, КА1 та ОНба, тощо. Більш конкретно, мікроорганізм за винаходом може бути Е. соїї В 21 (0ЕЗУКСОРЕ, депонованою з КССМ11918Р.
І0024| Відповідно до іншого ілюстративного варіанта здійснення винахода, передбаченою є композиція для отримання ЮО-псикози, яка включає: Ю-псикоза-3-епімеразу, яка включає амінокислотну послідовність ЗЕО 10 МО: 1, мікроорганізм, який експресує ЮО-псикозу 3- епімеразу, культури мікроорганізма. (0025) В ілюстративному варіанті здійснення, мікроорганізмом за винаходом може бути сам штам, його культура або фрагмент руйнування мікроорганізму. Культура або фрагмент руйнування за винаходом може включати ЮО-псикоза-3З-епімеразу за винаходом. Крім того, культура мікроорганізма за винаходом може включати або може не включати мікроорганізм.
Крім того, фрагментом руйнування мікроорганізму за винаходом може бути фрагмент руйнування, отриманий шляхом руйнування мікроорганізму або його культури, або супернатант, отриманий центрифугуванням фрагмента руйнування. (0026) В іншому ілюстративному варіанті здійснення, композиція для отримання О-псикози за винаходом може додатково включати Ю-фруктозу як субстрат епімерази псикози.
І0027| В іншому ілюстративному варіанті здійснення, мікроорганізм за винаходом може бути іммобілізований на носії який буде використовуватися. Приклад носія, який може використовуватися в винаході включає, але не обмежується цим, агар, агарозу, К-карагенан, альгінат або хітозан.
І0028| Крім того, композиція для отримання Ю-псикози за винаходом може додатково включати будь-який компонент, здатний підтримувати отримання псикози. Зокрема, композиція для отримання Ю-псикози за винаходом може додатково включати метал. Більш конкретно, металом за винаходом може бути щонайменше один метал, вибраний з групи, яка складається з мангану, кальцію, магнію, заліза, літію та натрію. Крім того, металом за винаходом може бути іон металу або сіль металу. Метал за винаходом може знаходитись в концентрації від 0,1 мМ до 10 мМ, від 0,1 мМ до 7 мМ, від 0,1 мМ до 4 мМ, від 0,5 мМ до 10 мМ, від 0,5 мМ до 7 мМ, від 0,5
ММ до 4 мМ, від 1 мМ до 10 мМ, від 1 мМ до 7 мМ, від 1 мМ до 4 мМ, від 2 мМ до 10 мМ, від 2
ММ до 7 мМ, або від 2 мМ до 4 мМ. Більш конкретно, сіллю металу за винаходом може бути щонайменше одна сіль металу, вибрана з групи, що складається з ГіСІ, Ма2504, Мосіг2, масі,
Ее504, Мо504, Мпсі2, Мп50О4, та Сасіг. 00291) Відповідно до іншого ілюстративного варіанта здійснення винахода, передбаченим є спосіб отримання Ю-псикози, який включає: контактування Ю-псикоза-З-епімерази, яка складається з амінокислотної послідовності БЕ ІЮ МО: 1, мікроорганізму, який експресує Ю- псикоза-3-епімеразу, або культури мікроорганізма з О-фруктозою.
І0030| В ілюстративному варіанті здійснення, спосіб отримання може додатково включати, перед, після або одночасно з контактуванням з О-фруктозою, додавання металу. 0031) В іншому ілюстративному варіанті здійснення, спосіб отримання може додатково включати, після контактування з О-фруктозою або додавання металу, виділення та/або очистку результата контакту, який включає псикозу. Виділення та/або очистка може здійснюватися за одним або декількома відомими способами, такими як діаліз, осадження, адсорбція, електрофорез, іонообмінна хроматографія та фракційна кристалізація, тощо, але не обмежується цим. 00321 Крім того, спосіб отримання за винаходом може додатково включати, перед або після виділення та/або очистки, здійснення знебарвлення та/або знесолення. При здійсненні знебарвлення та/"або знесолення, можливим є отримувати більш рафіновану псикозу без домішок. 0033) В іншому ілюстративному варіанті здійснення, спосіб отримання за винаходом може додатково включати, після контактування з Ю-фруктозою, додавання металу, виділення та/або очистку, або здійснення знебарвлення та/(або знесолення, кристалізацію ЮО-псикози.
Кристалізація може здійснюватися, використовуючи спосіб кристалізації, який звичайно використовується. Наприклад, кристалізація може здійснюватися, застосовуючи спосіб кристалізації з охолодженням. (0034) В іншому ілюстративному варіанті здійснення, спосіб отримання за винаходом може додатково включати, перед кристалізацією, концентрування псикози. Концентрування може підвищувати ефективність кристалізації.
І0035| В іншому варіанті здійснення, спосіб отримання за винаходом може додатково включати, після виділення та/або очистки, контактування Ю-фруктози, яка не провзаємодіяла, з епімеразою псикози, або може додатково включати, після кристалізації, повторне використання маточного розчину, з якого здійснюється кристалізація в процесі виділення та/або очистки, або їх комбінації. Із застосуванням додаткових стадій, псикоза може бути отримана з більш високим виходом та кількість Ю-фруктози, яку потрібно відкинути, може бути знижена, тим самим забезпечуючи економічні переваги.
І0036| В ілюстративному варіанті здійснення, контактування за винаходом може здійснюватися при рН від 5,0 до 9,0, при від 40 до 902С, та/або протягом від 0,5 до 48 годин.
І0037| Конкретно, контактування за винаходом може здійснюватися при рнН від 6,0 до 8,5, при рН від 6,0 до 8,0 або при рН від 7,0 до 8,0.
І0ООЗ81І Крім того, контактування за винаходом може здійснюватися при температурі від 402С до 802С, від 402 до 752С, від 402С до 652С, від 502С до 902С, від 502С до 802С, від 502 до 752С, від 502С до 652С, від 552 до 902С, від 552С до 802С, від 552С до 752С, від 552С до 652С, від 602 до 902С, від 602С до 802С, від 602С до 752С, від 602С до 652С, від 652С до 902С, від 652С до 802С або від 652С до 7526. 00391 Крім того, контактування за винаходом може здійснюватися протягом 0,5 години або більше, 1 години або більше, З годин або більше, 5 годин або більше, або 6 годин або більше, та/або 48 годин або менше, 36 годин або менше, 24 годин або менше, 12 годин або менше, 9 10) годин або менше.
І0040| Епімераза псикози, метал та носій, описані в способі отримання ЮО-псикози за винаходом є такими самим, як описано в ілюстративних варіантах здійснення, описаних вище.
Ї0041| Відповідно до ще одного ілюстративного варіанта здійснення винахода, передбаченим є застосування епімерази псикози, мікроорганізм, який експресує епімеразу псикози, або культуру мікроорганізма, як описано в даному документі, для перетворення Ю- фруктози в отриманні псикози.
Ефект винаходу (0042) Епімераза псикози за винаходом є виключною в активності перетворення Ю-фруктози в псикозу, має стабільність при високій температурі в тій мірі, в якій вона є промислово доступною, та має високу швидкість реакції перетворення. Відповідно, коли епімераза псикози за винаходом використовується для отримання псикози, можливим є отримати псикозу з високою ефективністю та високим виходом.
Короткий опис креслень 00431 Фіг. 1 - схема рекомбінантного вектора для експресії епімерази псикози (КООРЕ), який складається з амінокислотної послідовності БЕО ІЮО МО: 1 за винаходом. (0044) Фіг. 2 - дані аналізу ВЕРХ щодо отриманої в результаті псикоза, де в отриманні використовують Ю-фруктозу як субстрат із застосуванням КООРЕ за винаходом.
І0045| Фіг. ЗА та Фіг. ЗВ - графіки, які показують відносну ферментативну активність епімерази псикози в залежності від температурі, де Фіг. ЗА показує активність Ю-псикоза-3- епімерази (АТРЕ), отриманої з Адгобасіегішт їшптеїасієп5 в попередньому рівні техніки, та Фіг.
ЗВ показує активність КООРЕ у винаході. 0046) Фіг. 4 - графік, який показує відносну ферментативну активність КООРЕ за винаходом відповідно до зміни рН.
І0047| Фіг. 5 - графік, який показує відносну ферментативну активність КООРЕ за винаходом в залежності від додавання різних металів.
Детальний опис варіантів здійснення
І0048| Далі в даному документі, винахід буде більш детально описано наступними прикладами. Однак, винахід не обмежується наведеними нижче Прикладами, та слід розуміти, що різні модифікації та зміни можуть бути зроблені кваліфікованими фахівцями в даній галузі в межах обсягу та сутності винаходу. 0049) У всьому описі винаходу, якщо не зазначено інше, "96" що використовується для позначення концентрації конкретного матеріалу стосується твердої речовини/твердої речовини (маса/маса) 95, твердої речовини/рідини (маса/об'єм) 95, та рідини/рідини (об'єм/об'єм) 95.
І0О50)| Приклади
І0О51| Приклад 1. Отримання трансформованого штаму, який продукує епімеразу псикози, отриманого з мікроорганізму роду Каї5іа.
ІЇ0052| Вибирали ген, який, як очікувалося, мав активність епімерази псикози, яка перетворює Ю-фруктозу в псикозу з мікроорганізму роду Каївііа, та отримували рекомбінантний вектор експресії, який включає ген та трансформований мікроорганізм. 0053) Конкретно, ген Кдадре з Каїна дгапиїї КСТСО 12575, який, як очікувалося, є епімеразою псикози, був вибраний з генних послідовностей мікроорганізму роду Каївііа, зареєстрованих в
СепрапК, та прямий праймер (ЗЕО ІО МО: 3) та зворотний праймер (ЗЕО ІЮ МО: 4) були сконструйовані та синтезовані на основі амінокислотної послідовності (ЗЕО ІЮО МО: 1) та нуклеотидної послідовності (ЗЕО ІЮО МО: 2) гена. При використанні синтезованого праймер, ген ампліфікували шляхом здійснення реакції ПЛР (33 цикли: 1 цикл, який включає 942С протягом 1 хвилини, 582С протягом 30 секунд, та 722С протягом 1 хвилини), використовуючи геномну ДНК
Каїснца дгапиї КСТС 12575 як шаблон. Ампліфікований ген чистили, використовуючи набору
ПЛР для очищення (Оціадеп) та вставляли в рЕТ24а(ж) (помадеп, ОБА) використовуючи рестрикційні ферменти Має! та поїїЇ для конструювання рекомбінантного вектора рЕТ24асю)-
КООРЕ (Фіг. 1).
ІЇ0054| Рекомбінантний вектор трансформували в Езспегіспіа соїї ВІ21 (ОЕЗ) шляхом трансформації теплового шоку (ЗатьгоокК та Киззеїї: МоїІесціаг Сіопіпду, 2001), та потім зберігали в замороженому вигляді в 50 95 гліцерині та використовували. Трансформований штам був названий Е. соїї ВІ 21 (0ОЕЗУКООРЕ, депонований 20 жовтня 2016 року в Корейському центрі мікроорганізмів культури (КСОСМ), який є міжнародним депозитарієм згідно з Будапештським договором, та отримав номер доступу КССМ11918Р. 0055) Приклад 2. Отримання та очистка епімерази псикози 0056) Для того, щоб отримати епімеразу псикози з Е. соїї ВІ 21 (0ОЕЗУКООРЕ, отриману в
Прикладі 1, Е. сої ВІ21(0ЕЗУКОаОРЕ інокулювали в 5 мл середовища ІВ-канаміцину та (610) піддавали культивуванню з перемішуванням при 372С, 200 об./хв. доки поглинання, виміряне на
600 нм, не досягало 1,5. Потім, культуральну рідину, культивовану з перемішуванням інокулювали в 500 мл середовища І В-канаміцину, та коли поглинання на 600 нм становило 0,7, додавали 0,5 мМ ізопропіл В-0-1-тіогалактопіранозида (РТС), та клітини головним чином культивували при 162С та 150 об./хв. протягом 16 годин.
І0057| Культуральну рідину, головним чином культивовану, центрифугували на 8000 об./хв. протягом 20 хвилин для того, щоб регенерувати тільки клітини, та клітини промивали двічі 0,85 95 (мас./об.) Масі та потім лізували в буфері для лізису (50 мМ Ттгі5-НСЇІ, рН 7,0 300 мМ
Масі), та руйнували при 49С протягом 20 хвилин, використовуючи звукового вібратора.
Зруйновану рідину центрифугували при 42С, на 13 000 об./хв. протягом 20 хвилин для того, щоб регенерувати супернатант. Потім, супернатант застосовували до колонки Мі-МТА (Мі-МТА зирепшом, Сіадеп) попередньо врівноважену вищезазначеним буфером для лізису, та буферний розчин (50 мМ Тті5-НСІ, 300 мМ масі, рН 7,0), який містить 250 мМ імідазолу, послідовно протікав для того, щоб отримати очищену епімеразу псикози (далі в даному документі, називається як КООРЕ). 505-РАСЕ з КООРЕ підтвердив, що розмір мономеру становив приблизно 32 кДа. 0058) Приклад 3. Підтвердження активності КООРЕ 0059) 3-1. Підтвердження активності перетворення Ю-фруктози в псикозу
І0060) Для підтвердження того, чи КООРЕ продукує псикозу, використовуючи Ю-фруктозу як субстрат, де КООРЕ (50 мМ Ттгі5-НСІ, рН 7,0) отриманий в Прикладі 2, додавали до 50 мМ буфера Тті5-НСІ (рН 8,0), який містить 50 мас. 925 Ю-фруктози та З мМ Мп5О4, та піддавали взаємодії при 552С протягом 6 годин. Потім, реакцію зупиняли нагріванням при 1002С протягом 5 хвилин, та потім отримання псикози підтверджували, застосовуючи аналіз ВЕРХ. Аналіз ВЕРХ проводили, використовуючи ВЕРХ (Адіїепі, ОА), детектор рефракційного індексу (Адіїепі 1260
ВІВ), оснащений колонкою Атіпех НРХ-87С (ВІО-КАБ), де розчинник рухомої фази був водою, температура становила 802С, та швидкість потоку становила 0,6 мл/хв.
І00О61| В результаті було підтверджено, що псикоза може утворюватися з Ю-фруктози з використанням КООРЕ (Фіг. 2). 0062) 3-2. Підтвердження активності перетворення Ю-фруктози в псикозу
І0063| Для підтвердження того, чи здатність отримання з КООРЕ є вищою за здатність звичайної епімерази псикози (АТРЕ, ЗЕО ІЮО МО: 5, Відкрита публікація Корейського патента Мо 10-2011-0035805), яку використовували в отриманні псикози, підтверджували коефіцієнт перетворення Ю-фруктози в псикозу.
І0064| Зокрема, Е. соїї ВГ 21 (ОЕЗ3), трансформовану рекомбінантним вектором експресії рЕТ24а-АТРЕ, інокулювали в середовище І В, яке містить канаміцин, що має концентрацію 10 мкг/мл, та потім фермент експресували та чистили таким самим способом, як зазначено в
Прикладі 2. Отриманий фермент додавали до 50 мМ буфера Ттгі5-НСЇІ (рН 8,0), який містить 50 мас. 95 Ю-фруктози та З мМ Мп5О» та піддавали взаємодії при 552С протягом 6 годин. Потім, реакцію зупиняли нагріванням при 1002С протягом 5 хвилин, та потім отримання псикози підтверджували застосовуючи аналіз ВЕРХ. Аналіз ВЕРХ проводили в таких самих умовах, що і в Прикладі 3-1. Коефіцієнт перетворення псикози розраховували як кількість (мг/хв.) псикози, яку отримують за хвилину з використанням фермента, та швидкість реакції КООРЕ була показана як відносна величина, причому значення швидкості реакції АТРЕ встановлювалося за 100 б. 0065) В результаті було підтверджено, що кількість псикози, яку отримують за хвилину при використанні КООРЕ становила 117,6 95 порівняно з використанням АТРЕ, та таким чином, коефіцієнт перетворення Ю-фруктози в псикозу був значно більшим, коли використовувався
КООРЕ (Таблиця 1). 0066)
Таблиця 1
І0067| Приклад 4. Аналіз характеристик КООРЕ 0068) 4-1. Аналіз ферментативної активності в залежності від температури
І(0069| КООРЕ та Ю-фруктозний субстрат піддавали взаємодії протягом 2 годин в різних температурних умовах (402, 4520, 5020, 5520, 602, 652С, 702С та 7522), та порівнювали ферментативні активності в залежності від температур. Зазначені вище реакції проводили за таким самим способом, як зазначено в Приклад 3-1, за виключенням температури та часу реакції, та ферментативні активності вимірювали як коефіцієнт перетворення Ю-фруктози в псикозу. Коефіцієнт перетворення розраховували як відсоток маси псикози, отриманої після реакції по відношенню до маси субстрату (О-фруктози) перед реакцією.
І0070| В результаті, КООРЕ демонстрував високу активність перетворення у 25 95 або більше в усіх діапазонах температур вимірювання, та було підтверджено, що з підвищенням температури активність збільшувалася, та максимальний коефіцієнт перетворення спостерігався при максимальній температурі 752С (Таблиця 2). 00711
Таблиця 2 ннн"н":ИиИи жжнннинншинннншшшш 00721 4-2. Аналіз термічної стабільності фермента 0073) Для порівняння термічної стабільності КСООРЕ зі стабільністю звичайного фермента
АТРЕ, відповідні ферменти піддавали обробці нагріванням при різних температурах (552С, 602 та 652С), та відбирали зразки ферментативно оброблених розчинів для кожного часу обробки нагріванням (0,5 години, 1 година, 2 години, З години, 4 години, 5 годин та 6 годин) для того, щоб визначити залишкову активність кожного фермента. Реакцію проводили протягом 30 хвилин змінюючи час реакції тільки за таким самим способом, як зазначено в Приклад 3-1, та залишкову активність фермента вимірювали за коефіцієнтом перетворення ЮО-фруктози в псикозу. (0074) В результаті, скорочення періоду напіврозпаду КООРЕ в залежності від підвищення температури було значно меншим, ніж із АТРЕ, та таким чином, було підтверджено, що КООРЕ мав високу термічну стабільність (Фіг. ЗА та Фіг. 3В). 0075) 4-3. Аналіз ферментатисної активності в залежності від рН
І0076| Для визначення ферментативної активності в залежності від рН, ЮО-фруктозний субстрат піддавали взаємодії з КООРЕ при різних рН. В цей час, реакцію проводили за таким самим способом, як зазначено в Прикладі 3-1 за виключенням часу реакції та рН.
І0077| Зокрема, ферментативну реакцію проводили при 552С протягом 30 хвилин, використовуючи 50 мМ розчин калію фосфату при рН 5,0, рН, рН 6,5, рН 7,0, рН 7,5, та рн 8,0, та використовуючи 50 мМ буфер Ттгіє-НСІ при рН 8,0, рн 8,5, та рН 9,0. Потім, ферментативну активність вимірювали як коефіцієнт перетворення Ю-фруктози в псикозу. 0078) В результаті було підтверджено, що КООРЕ демонструє активність 70 95 або більше в порівнянні з максимальною активністю при від рН 6 до рН 8,5, та демонструє найбільш високу активність при рН 8,0 (Таблиця 3, Фіг. 4).
І0О79
Таблиця З 61
ММ калію фосфату 81991111 81111176 50 мМ Ттів-НСЇ шик: нишшшш
0080) 4-4. Аналіз активності фермента в залежності від додавання металу
І0081) Для підтвердження активності КООРЕ в залежності від додавання металу, в таких самих умовах, що і в Прикладі 3-1, Мп5О4 замінювали різними солями металів (ГіСІ, Ма»5Оа,
Масіг, Масі, Реб5О»х та Сасі») та додавали до кінцевої концентрації З мМ. Потім, вимірювали ферментативну активність. Контрольну групу не обробляли солями металів. (0082) В результаті було підтверджено, що додавання іі, Ма, Мо, Бе та Са, а також Мп підвищувало активність КООРЕ в порівнянні з контрольною групою, та між ними, це могло б бути підтвердженням, що Мп підвищував ферментативну активність найбільше (Таблиця 4 та
Фіг. 5).
І0О83ЗІ
Таблиця 4
МеазОї 11111180 баб 11111196 (0084) З наведеного вище опису, кваліфікованому фахівцю в даній галузі буде зрозуміло, що винахід може бути здійснений в інших конкретних формах без зміни технічної ідеї або її суттєвих характеристик. У зв'язку з цим слід розуміти, що варіанти здійснення, описані вище, є ілюстративними у всіх аспектах і не є обмежувальними. Обсяг винаходу слід інтерпретувати так, щоб охоплювались всі модифікації або варіації, які випливають із значення та обсягу формули винаходу, яка додається, та їх еквівалентів, а не детального опису
Claims (8)
1. Застосування ЮО-псикози-3-епімерази, яка складається з амінокислотної послідовності зЗЕО ІЮ МО: 1, для продукування Ю-псикози з О-фруктози.
2. Застосування Ю-псикози-З-епімерази за п. 1, в якій О-псикоза-3З-епімераза кодована полінуклеотидною послідовністю ЗЕО ІЮ МО: 2.
3. Застосування полінуклеотиду, що складається з нуклеотидної послідовності зБЕО ІЮ МО: 2 або її виродженої послідовності, які кодують Ю-псикозу-З-епімеразу, що складається з амінокислотної послідовності 562 10 МО: 1, для продукування Ю-псикози з О-фруктози.
4. Застосування рекомбінантного вектора, який містить полінуклеотид за п. 3, для продукування О-псикози з О-фруктози.
5. Застосування мікроорганізму, в який вводять рекомбінантний вектор за п. 4, для продукування Ю-псикози з О-фруктози.
6. Композиція для отримання Ю-псикози, яка містить: О-фруктозу ії О-псикозу-3-епімеразу, що складається з амінокислотної послідовності зЕОО ІО МО: 1, мікроорганізм, який експресує О- псикозу-3-епімеразу, що складається з амінокислотної послідовності ЗЕО ІЮО МО: 1, або культуру мікроорганізму, що експресує ЮО-псикозу-3-епімеразу, що складається з амінокислотної послідовності зЕО ІЮ МО: 1.
7. Спосіб отримання ЮО-псикози, який включає: контактування ЮО-псикози-3-епімерази, що складається з амінокислотної послідовності БЕО ІЮ МО: 1, мікроорганізму, який експресує О- псикозу-3-епімеразу, що складається з амінокислотної послідовності 5ЕБЕО ІО МО: 1, або культури мікроорганізму, що експресує ЮО-псикозу-3-епімеразу, що складається з амінокислотної послідовності зБЕО ІЮ МО: 1, з О-фруктозою.
8. Спосіб за п. 7, в якому контактування здійснюють при рн від 5,0 до 9,0, при температурі від 40 до 90 "С або протягом від 0,5 до 48 годин.
9. Спосіб за п. 7, який додатково включає: перед, після або одночасно з контактуванням з О- фруктозою, контактування ЮО-псикози-З-епімерази, що складається з амінокислотної послідовності 5ЕО 10 МО: 1, мікроорганізму, який експресує ЮО-псикозу-3-епімеразу, або культури мікроорганізму з металом.
Тс ТУ тврицнатор «петИТрех сну МОЇ і Х і НН і АЄПОДШВННЯЯ бух пе ди тих вставка сич де ку де п шо ! й ше каст рен от Ши я ситні ти й кА ТОВ) й Ки й промотар -КЇ ху -- ГНН М ще ї І я ПТК е ка ВН Неї Її пита Е ї Х КЗ їх КО М Я
У й. у у я х Е. щі іх от я ее й Ше сх мит . х ее я : А Н Я (і їх Мои ох, ви я Ще: Зеуую, Я нд т фіг. 1 детектор Відповідь ( МА ЛИ - г ; 6ОО0О З п фруктоза ьОО0О 40000 5 20000 5 боро | І б-псикоза я ' У мя / Ля (о) прути тн тттнносттнотопттрноонннн ККЗ ккккнкккннннктапоіааюветі яхт ннно те зання дн о а го 15 2 дО Час утримання (хв.
Фіг. 2
6473 С2 - фе х ше; ! І - : ж 5 дж ж НУ Бу Ва й оте Е са щі ик гЗ УеЕш Кз) щ хх т: З Мі Її в СО ау о щ і Шеф сій -нн ВО кі сне па : ще во ї я ЕВ т і з хооооЩЙ зенсикввввй те й Щ 75 : в ' в. й - т с й х равави | 7 о с ни КК й Й ! ) ; гу З , у 3 й і СУ ха ху 5; В ій І і
: й. Ж ЕМ часі Е їастов і А їді «і З а ста Б дНЙ : Що КІ кх Ка СН: і «жк 23 Ф ШО Ж ою Не що о А К сени гою : і 7 т дак шу Н х Ме ее М а дк. х М човнах Я : і І й Ф й я . Ж - Ше Е ши Ше то Я І І : еще -в ЖЕ КО: ше ет й - | гос
8. Й прош . ча І р се ке щ ! в ж и ще ; - ВО Ж т : Ше пен до : нн сгеттни ке що Й ; х - ав лишь і КІ Е й. ще | р Яку Й Й й І Е : В в Я ежех оф ут Часігодиі гі У ФІГ ріг. З
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR20160152947 | 2016-11-16 | ||
| PCT/KR2017/012970 WO2018093153A1 (ko) | 2016-11-16 | 2017-11-15 | 신규한 d-사이코스 3-에피머화 효소 및 이를 이용한 d-사이코스의 제조 방법 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA126473C2 true UA126473C2 (uk) | 2022-10-12 |
Family
ID=62145632
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201905494A UA126473C2 (uk) | 2016-11-16 | 2017-11-15 | Застосування d-псикози-3-епімерази для продукування d-псикози з d-фруктози |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US11174475B2 (uk) |
| EP (1) | EP3543336A4 (uk) |
| JP (1) | JP6967599B2 (uk) |
| KR (1) | KR101919713B1 (uk) |
| CN (1) | CN110462036B (uk) |
| AR (1) | AR110093A1 (uk) |
| RU (1) | RU2727903C1 (uk) |
| TW (1) | TWI666323B (uk) |
| UA (1) | UA126473C2 (uk) |
| WO (1) | WO2018093153A1 (uk) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101965509B1 (ko) * | 2017-11-15 | 2019-04-03 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 d-사이코스 3-에피머화 효소 및 이를 이용한 d-사이코스의 제조 방법 |
| CN110904132B (zh) * | 2019-11-05 | 2022-08-16 | 吉林中粮生化有限公司 | D-阿洛酮糖3-差向异构酶的编码基因、载体、重组细胞以及它们的应用 |
| CN110862980B (zh) * | 2019-11-29 | 2021-05-04 | 浙江工业大学 | 一种d-阿洛酮糖3-差向异构酶突变体及其应用 |
| CN111019928B (zh) * | 2019-12-11 | 2022-08-16 | 吉林中粮生化有限公司 | D-阿洛酮糖3-差向异构酶的编码基因、载体、重组细胞以及它们的应用 |
| KR102254411B1 (ko) * | 2019-12-19 | 2021-05-24 | 대상 주식회사 | 알룰로스 에피머화 효소 변이체, 이의 제조방법 및 이를 이용한 알룰로스의 제조방법 |
| KR102682846B1 (ko) * | 2021-11-19 | 2024-07-08 | 대상 주식회사 | 열 안정성이 우수한 알룰로스 에피머화 효소 변이체, 이의 제조방법 및 이를 이용한 알룰로스의 제조방법 |
| EP4257689A4 (en) | 2021-12-29 | 2024-09-11 | Daesang Corp | NEW PROMOTER VARIANT FOR CONSTITUTIVE EXPRESSION AND ITS USE |
| CN114262703A (zh) * | 2021-12-31 | 2022-04-01 | 保龄宝生物股份有限公司 | 一种利用膜富集d-阿洛酮糖3-差向异构酶的方法及应用 |
| KR102691596B1 (ko) | 2022-12-20 | 2024-08-06 | 대상 주식회사 | 항시발현용 신규 프로모터 변이체 및 이의 용도 |
Family Cites Families (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1956088B1 (en) * | 2005-11-15 | 2013-10-23 | Hayashibara Co., Ltd. | Ketose 3-epimerase, process for production thereof, and use thereof |
| GB0822937D0 (en) * | 2008-12-16 | 2009-01-21 | Terranol As | Microorganism |
| KR20110035805A (ko) | 2009-09-30 | 2011-04-06 | 씨제이제일제당 (주) | 사이코스-에피머화 효소의 고정화 및 이를 이용한 사이코스의 제조방법 |
| KR101203856B1 (ko) * | 2011-08-24 | 2012-11-21 | 씨제이제일제당 (주) | 열 안정성이 향상된 사이코스 에피머화 효소 변이체 및 이를 이용한 사이코스의 연속적 생산 |
| CN104769125B (zh) * | 2012-08-10 | 2018-10-23 | 株式会社三养社 | 阿洛酮糖差向异构酶及使用其的用于转变为阿洛酮糖的组合物 |
| CN108315316B (zh) * | 2013-01-08 | 2021-07-20 | 松谷化学工业株式会社 | 球形节杆菌生产的酮糖3-差向异构酶 |
| KR101455624B1 (ko) * | 2013-04-12 | 2014-10-28 | 주식회사한국야쿠르트 | 기능성 희귀당 사이코스의 생산능을 지닌 신규 클로스트리디움 볼티에 유래의 사이코스-3-에피머화 효소 및 이를 이용한 사이코스 생산방법 |
| KR101455759B1 (ko) * | 2013-04-23 | 2014-10-28 | 씨제이제일제당(주) | 사이코스 에피머화 효소 변이체 및 이를 이용한 사이코스의 제조 방법 |
| CN105637089B (zh) * | 2013-09-03 | 2021-06-15 | 罗盖特兄弟公司 | D-阿洛酮糖3-差向异构酶的改进的变体及其用途 |
| KR101539097B1 (ko) * | 2013-12-26 | 2015-07-23 | 주식회사 삼양제넥스 | 사이코스 에피머화 효소를 암호화 하는 폴리뉴클레오타이드, 및 이를 이용하는 사이코스 생산방법 |
| CN103710330B (zh) * | 2014-01-03 | 2015-04-22 | 江南大学 | 一种高催化活性的d-阿洛酮糖 3-差向异构酶的突变体酶及其应用 |
| CN103849613A (zh) * | 2014-01-03 | 2014-06-11 | 江南大学 | 一种热稳定性提高的d-阿洛酮糖 3-差向异构酶的突变体酶及其应用 |
| US10550414B2 (en) * | 2015-12-23 | 2020-02-04 | Cj Cheiljedang Corporation | Composition for producing D-psicose comprising D-psicose 3-epimerase and salt and method for producing D-psicose using same |
| CN105602879B (zh) * | 2016-01-26 | 2019-09-03 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 一株高效分泌d-阿洛酮糖 3-差向异构酶的基因工程菌株、构建方法及其应用 |
| CN105802897B (zh) * | 2016-05-26 | 2019-02-12 | 江南大学 | 一种d-阿洛酮糖-3-差向异构酶生产菌株及其应用 |
-
2017
- 2017-11-15 CN CN201780077035.7A patent/CN110462036B/zh active Active
- 2017-11-15 RU RU2019116720A patent/RU2727903C1/ru active
- 2017-11-15 EP EP17871550.4A patent/EP3543336A4/en active Pending
- 2017-11-15 US US16/461,286 patent/US11174475B2/en active Active
- 2017-11-15 UA UAA201905494A patent/UA126473C2/uk unknown
- 2017-11-15 JP JP2019547057A patent/JP6967599B2/ja active Active
- 2017-11-15 WO PCT/KR2017/012970 patent/WO2018093153A1/ko unknown
- 2017-11-15 KR KR1020170152620A patent/KR101919713B1/ko active IP Right Grant
- 2017-11-16 AR ARP170103190A patent/AR110093A1/es unknown
- 2017-11-16 TW TW106139740A patent/TWI666323B/zh active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20200063117A1 (en) | 2020-02-27 |
| CN110462036A (zh) | 2019-11-15 |
| TWI666323B (zh) | 2019-07-21 |
| JP2019535320A (ja) | 2019-12-12 |
| WO2018093153A1 (ko) | 2018-05-24 |
| JP6967599B2 (ja) | 2021-11-17 |
| AR110093A1 (es) | 2019-02-20 |
| KR101919713B1 (ko) | 2018-11-19 |
| KR20180055736A (ko) | 2018-05-25 |
| US11174475B2 (en) | 2021-11-16 |
| EP3543336A4 (en) | 2020-06-17 |
| RU2727903C1 (ru) | 2020-07-24 |
| EP3543336A1 (en) | 2019-09-25 |
| TW201823456A (zh) | 2018-07-01 |
| CN110462036B (zh) | 2023-07-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| UA126473C2 (uk) | Застосування d-псикози-3-епімерази для продукування d-псикози з d-фруктози | |
| JP6320621B2 (ja) | プシコースエピマー化酵素及びこれを利用したプシコースの製造方法 | |
| CN110016467B (zh) | 羰基还原酶ChKRED20突变体及其用途 | |
| TWI700370B (zh) | 用於生產塔格糖的組成物及利用其生產塔格糖的方法 | |
| JP2017510302A5 (uk) | ||
| JP7094449B2 (ja) | アルロースエピマー化酵素変異体、その製造方法及びこれを用いたアルロースの製造方法 | |
| KR20060125971A (ko) | 사이코스 에피머화 효소에 의한 사이코스의 생산 방법 | |
| JP7404537B2 (ja) | アルロースエピマー化酵素変異体、その製造方法及びそれを利用したアルロースの製造方法 | |
| TWI704227B (zh) | 用於生產塔格糖的組成物及利用其生產塔格糖的方法 | |
| KR101455624B1 (ko) | 기능성 희귀당 사이코스의 생산능을 지닌 신규 클로스트리디움 볼티에 유래의 사이코스-3-에피머화 효소 및 이를 이용한 사이코스 생산방법 | |
| CN107267471A (zh) | 双功能谷胱甘肽合成酶突变体、核苷酸序列及其制备方法和应用 | |
| Morimoto et al. | Cloning and characterization of the L-ribose isomerase gene from Cellulomonas parahominis MB426 | |
| US11485963B2 (en) | D-Psicose 3-epimerase and method for producing D-Psicose using the same | |
| EP3865574B1 (en) | Allulose epimerase variant, method for producing same, and method for producing allulose using same | |
| CN106119235A (zh) | 一种来源于伯克霍尔德氏菌的dpe及其应用 | |
| JP7535192B2 (ja) | 熱安定性に優れたアルロースエピマー化酵素変異体、その製造方法およびこれを用いたアルロースの製造方法 | |
| JP7445947B2 (ja) | アラビノースイソメラーゼ変異体 | |
| CN110684761B (zh) | 一种l-核糖异构酶及其在生物法制备l-核糖中的应用 | |
| KR101134119B1 (ko) | 릭소스 이성화효소를 이용한 과당으로부터 만노스의 제조방법 | |
| KR20110092881A (ko) | 신규 이성화효소 및 이를 이용한 ｌ-람뉼로오스 생산방법 |