UA124466C2 - Спосіб аналізу глікозаміногліканів, гепарину та їх похідних методом ямр - Google Patents
Спосіб аналізу глікозаміногліканів, гепарину та їх похідних методом ямр Download PDFInfo
- Publication number
- UA124466C2 UA124466C2 UAA201900263A UAA201900263A UA124466C2 UA 124466 C2 UA124466 C2 UA 124466C2 UA A201900263 A UAA201900263 A UA A201900263A UA A201900263 A UAA201900263 A UA A201900263A UA 124466 C2 UA124466 C2 UA 124466C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- nmr
- signals
- sulfo
- acid
- ppm
- Prior art date
Links
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 title claims abstract description 64
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 title claims abstract description 53
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 title claims abstract description 41
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 72
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 title abstract description 23
- 229940127215 low-molecular weight heparin Drugs 0.000 claims abstract description 23
- 150000002772 monosaccharides Chemical group 0.000 claims description 33
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical group OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 29
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 20
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 claims description 20
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 claims description 15
- 229960005153 enoxaparin sodium Drugs 0.000 claims description 12
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 claims description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 11
- CIJQTPFWFXOSEO-NDMITSJXSA-J tetrasodium;(2r,3r,4s)-2-[(2r,3s,4r,5r,6s)-5-acetamido-6-[(1r,2r,3r,4r)-4-[(2r,3s,4r,5r,6r)-5-acetamido-6-[(4r,5r,6r)-2-carboxylato-4,5-dihydroxy-6-[[(1r,3r,4r,5r)-3-hydroxy-4-(sulfonatoamino)-6,8-dioxabicyclo[3.2.1]octan-2-yl]oxy]oxan-3-yl]oxy-2-(hydroxy Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].O([C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]([C@@H]([C@H]1O)NC(C)=O)O[C@@H]1C(C[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](OC2C(O[C@@H](OC3[C@@H]([C@@H](NS([O-])(=O)=O)[C@@H]4OC[C@H]3O4)O)[C@H](O)[C@H]2O)C([O-])=O)[C@H](NC(C)=O)[C@H]1C)C([O-])=O)[C@@H]1OC(C([O-])=O)=C[C@H](O)[C@H]1O CIJQTPFWFXOSEO-NDMITSJXSA-J 0.000 claims description 11
- OREAFAJWWJHCOT-UHFFFAOYSA-N dimethylmalonic acid Chemical compound OC(=O)C(C)(C)C(O)=O OREAFAJWWJHCOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 10
- 239000003055 low molecular weight heparin Substances 0.000 claims description 9
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 claims description 8
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 claims description 8
- 229940110519 bemiparin sodium Drugs 0.000 claims description 7
- 229940018872 dalteparin sodium Drugs 0.000 claims description 6
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 claims description 6
- 229940064689 tinzaparin sodium Drugs 0.000 claims description 6
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 claims description 5
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- PURMPUDWXOWORS-LECHCGJUSA-N (2s,3r,4r,5s)-2,3,4-trihydroxy-6-oxo-5-sulfooxyhexanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](OS(O)(=O)=O)C=O PURMPUDWXOWORS-LECHCGJUSA-N 0.000 claims description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 2
- WURBVZBTWMNKQT-UHFFFAOYSA-N 1-(4-chlorophenoxy)-3,3-dimethyl-1-(1,2,4-triazol-1-yl)butan-2-one Chemical compound C1=NC=NN1C(C(=O)C(C)(C)C)OC1=CC=C(Cl)C=C1 WURBVZBTWMNKQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- PFFIDZXUXFLSSR-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-N-[2-(4-methylpentan-2-yl)-3-thienyl]-3-(trifluoromethyl)pyrazole-4-carboxamide Chemical compound S1C=CC(NC(=O)C=2C(=NN(C)C=2)C(F)(F)F)=C1C(C)CC(C)C PFFIDZXUXFLSSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 241000219112 Cucumis Species 0.000 claims 1
- 235000015510 Cucumis melo subsp melo Nutrition 0.000 claims 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-YMDCURPLSA-N D-galactopyranuronic acid Chemical compound OC1O[C@H](C(O)=O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-YMDCURPLSA-N 0.000 claims 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N D-glucopyranuronic acid Chemical compound OC1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N 0.000 claims 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-HNFCZKTMSA-N L-idopyranuronic acid Chemical compound OC1O[C@@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-HNFCZKTMSA-N 0.000 claims 1
- DUKURNFHYQXCJG-UHFFFAOYSA-N Lewis A pentasaccharide Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OC1C(OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)C(NC(C)=O)C(OC2C(C(OC3C(OC(O)C(O)C3O)CO)OC(CO)C2O)O)OC1CO DUKURNFHYQXCJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 208000007256 Nevus Diseases 0.000 claims 1
- 241000548599 Omma Species 0.000 claims 1
- FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N [4,6-bis(cyanoamino)-1,3,5-triazin-2-yl]cyanamide Chemical compound N#CNC1=NC(NC#N)=NC(NC#N)=N1 FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 244000309464 bull Species 0.000 claims 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 claims 1
- OEHAYUOVELTAPG-UHFFFAOYSA-N methoxyphenamine Chemical compound CNC(C)CC1=CC=CC=C1OC OEHAYUOVELTAPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 abstract description 22
- 238000005570 heteronuclear single quantum coherence Methods 0.000 abstract 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 18
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 15
- 230000008569 process Effects 0.000 description 12
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 7
- IAJILQKETJEXLJ-LECHCGJUSA-N iduronic acid Chemical compound O=C[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-LECHCGJUSA-N 0.000 description 7
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 6
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 6
- 238000012565 NMR experiment Methods 0.000 description 5
- IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N aldehydo-D-glucuronic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N 0.000 description 5
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 5
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 5
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N Heavy water Chemical compound [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 4
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 4
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 3
- IAJILQKETJEXLJ-RSJOWCBRSA-N aldehydo-D-galacturonic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-RSJOWCBRSA-N 0.000 description 3
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 3
- -1 benzyl ester Chemical class 0.000 description 3
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 3
- 238000010966 qNMR Methods 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 3
- SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-(trifluoromethoxy)pyridine Chemical compound FC(F)(F)OC1=CC=C(Br)C=N1 SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001287 Chondroitin sulfate Polymers 0.000 description 2
- 229920000045 Dermatan sulfate Polymers 0.000 description 2
- 108010022901 Heparin Lyase Proteins 0.000 description 2
- 229920000288 Keratan sulfate Polymers 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 2
- 229960000106 biosimilars Drugs 0.000 description 2
- 229940059329 chondroitin sulfate Drugs 0.000 description 2
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 description 2
- AVJBPWGFOQAPRH-FWMKGIEWSA-L dermatan sulfate Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H](OS([O-])(=O)=O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](C([O-])=O)O1 AVJBPWGFOQAPRH-FWMKGIEWSA-L 0.000 description 2
- 229940051593 dermatan sulfate Drugs 0.000 description 2
- 125000000600 disaccharide group Chemical group 0.000 description 2
- 238000006345 epimerization reaction Methods 0.000 description 2
- KXCLCNHUUKTANI-RBIYJLQWSA-N keratan Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](O[C@H]3[C@H]([C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H](O)[C@@H]3O)O)[C@H](NC(C)=O)[C@H]2O)COS(O)(=O)=O)O[C@H](COS(O)(=O)=O)[C@@H]1O KXCLCNHUUKTANI-RBIYJLQWSA-N 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 2
- KYZAJWXTXOPVRA-RKGTWFHHSA-N (2R,3S,4S,5R)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal (2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal (2R,3S,4R)-2,3,4,5-tetrahydroxypentanal Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O.OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O.OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O KYZAJWXTXOPVRA-RKGTWFHHSA-N 0.000 description 1
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- MCHWWJLLPNDHGL-KVTDHHQDSA-N (2r,3s,4s,5r)-2,5-bis(hydroxymethyl)oxolane-3,4-diol Chemical group OC[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MCHWWJLLPNDHGL-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- XIOZDVXGJDHYED-GASJEMHNSA-N (3R,4R,5S,6R)-3-amino-2,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxane-2-sulfonic acid Chemical compound S(=O)(=O)(O)C1(O)[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO XIOZDVXGJDHYED-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-CBPJZXOFSA-N 2-amino-2-deoxy-D-mannopyranose Chemical compound N[C@@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-CBPJZXOFSA-N 0.000 description 1
- MTDHILKWIRSIHB-IVMDWMLBSA-N 6-O-sulfo-D-glucosamine Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](COS(O)(=O)=O)[C@@H](O)[C@@H]1O MTDHILKWIRSIHB-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-OUBTZVSYSA-N Carbon-13 Chemical compound [13C] OKTJSMMVPCPJKN-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102100029001 Heparan sulfate 2-O-sulfotransferase 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710096984 Heparan sulfate 2-O-sulfotransferase 1 Proteins 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000657469 Spermacoce capitata Species 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 description 1
- 230000002785 anti-thrombosis Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000005100 correlation spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229960000610 enoxaparin Drugs 0.000 description 1
- 150000002118 epoxides Chemical class 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 150000002337 glycosamines Chemical class 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000000147 hypnotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000025078 regulation of biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000010972 statistical evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 150000004044 tetrasaccharides Chemical group 0.000 description 1
- 238000001551 total correlation spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N24/00—Investigating or analyzing materials by the use of nuclear magnetic resonance, electron paramagnetic resonance or other spin effects
- G01N24/08—Investigating or analyzing materials by the use of nuclear magnetic resonance, electron paramagnetic resonance or other spin effects by using nuclear magnetic resonance
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N24/00—Investigating or analyzing materials by the use of nuclear magnetic resonance, electron paramagnetic resonance or other spin effects
- G01N24/08—Investigating or analyzing materials by the use of nuclear magnetic resonance, electron paramagnetic resonance or other spin effects by using nuclear magnetic resonance
- G01N24/087—Structure determination of a chemical compound, e.g. of a biomolecule such as a protein
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01R—MEASURING ELECTRIC VARIABLES; MEASURING MAGNETIC VARIABLES
- G01R33/00—Arrangements or instruments for measuring magnetic variables
- G01R33/20—Arrangements or instruments for measuring magnetic variables involving magnetic resonance
- G01R33/44—Arrangements or instruments for measuring magnetic variables involving magnetic resonance using nuclear magnetic resonance [NMR]
- G01R33/46—NMR spectroscopy
- G01R33/4625—Processing of acquired signals, e.g. elimination of phase errors, baseline fitting, chemometric analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01R—MEASURING ELECTRIC VARIABLES; MEASURING MAGNETIC VARIABLES
- G01R33/00—Arrangements or instruments for measuring magnetic variables
- G01R33/20—Arrangements or instruments for measuring magnetic variables involving magnetic resonance
- G01R33/44—Arrangements or instruments for measuring magnetic variables involving magnetic resonance using nuclear magnetic resonance [NMR]
- G01R33/46—NMR spectroscopy
- G01R33/4633—Sequences for multi-dimensional NMR
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- High Energy & Nuclear Physics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Condensed Matter Physics & Semiconductors (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Signal Processing (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
(54) СПОСІБ АНАЛІЗУ ГЛІКОЗАМІНОГЛІКАНІВ, ГЕПАРИНУ ТА ЇХ ПОХІДНИХ МЕТОДОМ ЯМР (57) Реферат:
Даний винахід описує аналітичний метод ядерного магнітного резонансу глікозаміногліканів в цілому та гепаринів і низькомолекулярних гепаринів, а також їх похідних, зокрема, що дозволяє ідентифікувати їх і зробити відносне кількісне визначення їх характерних сигналів за допомогою "Н-ЯМР і'н-зс НБЗОС.
Даний винахід описує спосіб аналізу із застосуванням ядерного магнітного резонансу (СН
ЯМР ї "Н-з3б Н5БОС) для характеристики глікозаміногліканів в цілому, та гепаринів і низькомолекулярних гепаринів, а також їх похідних, зокрема, спосіб дозволяє провести їх кількісний аналіз.
ПЕРЕДУМОВИ СТВОРЕННЯ ВИНАХОДУ
Спектроскопія ядерного магнітного резонансу (ЯМР) є однією з найбільш важливих і широко поширених аналітичних методик, які використовуються для визначення характеристики глікозаміногліканів в цілому, та гепаринів і низькомолекулярних гепаринів, а також їх похідних, зокрема.
Можливість проведення як одновимірних, так і двовимірних експериментів робить цей метод дуже чутливим при визначенні незначних змін в молекулярній структурі, що робить його кращим способом визначення відповідної характеристики цих сполук.
Глікозаміноглікани (ЗАС) представляють собою лінійні і негативно заряджені полісахариди із середньою молекулярною масою від 10 до 100 кДа (Те 5ігисійге ої Сіусозатіподіусапе апа
ІПеїк Іпіегасійопе м/йй Ргоїєїп5. Сапані М5 апа Мапсега ВІ. Спет Віо! Огид Оев 2008; 72: 455-482).
Існують дві великі групи глікозаміногліканів: несульфатовані (як наприклад, гіалуронова кислота) і сульфатовані (як наприклад, хондроїтинсульфат, дерматансульфат, кератансульфат, гепарин і гепарансульфат). Ланцюги глікозаміногліканів утворені окремими дисахаридами або сполуками дисахаридів, що складаються з уронової кислоти (О-глюкуронової кислоти або І - ідуронової кислоти) і аміноцукрів (О-галактозамін або ЮО-глюкозамін).
Палуронова кислота: Хондроїтинсульфат: ни ин фе и ши Ши ШК ан ме Б Еш М -тко, т й шо а | я ЕЕ Шен ши НЯ: ШКО як. НА б т шк ше ши ше,
Ж як Ж ниКосн, т ее нн пає ЗОНИ но ов У В нео,
Дерматансульфат: Гепарин: внен В я снами.
У Кз Є й нан ж. в ши нон зе, носом но ме.
Гепарансульфат: Кератансульфат: ща Ї Ка ва. шо ша ще сн? ВН : ВУ демон Ка бе нанх ер шк. ши ре З а ї м. осв м Зв "не,
Формула 1: Загальна структура дисахаридної одиниці для різних типів глікозаміногліканів
Гепарин є полісахаридом із сімейства глікозаміногліканів, сполукою уронової кислоти (І - ідуронової або О-глюкуронової кислоти) і О-глюкозаміну, пов'язаних поперемінно. І -ідуронова кислота може бути 2-О-сульфатованою, а ЮО-глюкозамін може бути М-сульфатованим та/або 6-
О-сульфатованим і рідше М-ацетильованим або 3-О-сульфатованим (Марріпд апа дпапійісаєноп ої Ше тайог оїїдозасснагіде5 сотропепі ої НПерагіп. І іпнагаї Ву), Вісе КО, Кіт У5 евї а. Віоснет У 1988; 254:781-787). Основною повторюваною одиницею дисахариду є трисульфатований дисахарид, 2-О-сульфо-! -ідуронова кислота (1--4) 2-М-сульфо-6-0О-сульфо-О-глюкозамін.
Походження цієї структурної варіативності, яка присутня в ланцюгах олігосахаридів
Зо гепарину, виявляється при їх біосинтезі і в механізмі регуляції біосинтезу. Так, на першій стадії біосинтезу тетрасахаридний фрагмент, утворений глюкозо-галактозо-галактозо-ксилозою, зв'язується з білюювою серцевиною, починаючи процес біосинтезу глікопротеїнового ланцюга.
Потім залишки глюкуронової кислоти (СісА) і залишки М-ацетилглюкозаміну (СИІсСМАс) поперемінно об'єднуються, формуючи полісахаридний ланцюг довжиною приблизно в 300 одиниць. При цьому відбувається подовження ланцюга, і під дією різних ферментів в ньому відбуваються зміни. Таким чином, дія ферментів М-деацетилази/М-сульфотрансферази викликає М-деацетилювання і М-сульфатування блоків (3ІсСМАс, перетворюючи їх в М-
сульфоглюкозамін (СісМе). С5-епімераза каталізує трансформацію певних одиниць Сс1ІСА в ідуронову кислоту (ІдоА), за чим йде 2-0О-сульфатування під впливом 2-О-сульфотрансферази.
Далі, 6-0О-сульфотрансфераза переносить 6-О-сульфогрупу на окремі одиниці СІСМ5 і СісМАс.
Нарешті, 3-О-сульфотрансфераза діє на певні одиниці М-сульфо-6-0О-сульфоглюкозаміну (СісМ565), утворюючи залишки М-сульфо-3,6-ді-О-сульфоглюкозаміну (СсІСМ53565).
Ймовірно, випадковий і частковий характер початкового М-деацетилювання в основному і відповідає за формування структурної гетерогенності в гепарині в першій фазі його біосинтезу.
Структурна варіативність щодо ступеня і положення сульфатування є наслідком часткового характеру модифікацій біосинтетичних ферментів, які призводять до вироблення молекул гепарин натрію зі змінною моделлю заміщення дисахаридів.
Гепарин переважно використовується як натрієва сіль, але його також можна використовувати як солі інших лужних або лужноземельних металів, і в основному він використовується в антитромботичній і антикоагулятивній медицині (Апіісоаашапі Іпегару г таїйог апепгіа! апа мепои5 ІШгтотроетрБбоїїзт. Ттап НАМ, Сіперега 95. Вавіс ргіпсірієз апа сіїіпіса ргасіїсе. Соїтап ВМУ, Магаєтг МУ, Сіоше5 АМУ, Сеогде УМ, Сюоїднабег 57 (Еа). Гірріпсой УМ/Патв апа МЛІКіпе; 2006:1 6733-1688).
Гепарини можна класифікувати залежно від їх молекулярної маси, а саме: нефракціонований гепарин (ШЕН), низькомолекулярний гепарин (І ММУН), середня молекулярна маса яких менше 8000 Да, та ультранизькомолекулярний гепарин (Ш!/ММУН), середня молекулярна маса яких менша 3000 Да (Спетоепгутаїйс зупіпезіз ої пПотодепоив Ша Ім тоіесшаг меїдні пераїгіпв. Хи У. егаї. 5сіепсе 2011; 334: 498-501). | ММУН і ОЇ ММУН походять від деполімеризації вихідної молекули ШЕН, і процес її отримання може вводити певні характеристики в структуру молекули. Таким чином, отримана структура молекули походить, з одного боку, зі структури гепарину, використовуваного як вихідний матеріал, а з іншого боку - з характерних залишків, що генеруються і властиві використовуваному способу отримання.
Процес отримання еноксапарин натрію (В-елімінація бензилового ефіру гепарину у водному середовищі під дією лугу) і беміпарин натрію (В-елімінація в безводному середовищі під дією лугу) генерує на кінцях більшості видів сполук 4,5-ненасичену 2-О-сульфоуронову кислоту (ДО25) на невідновлювальному кінці ії 2-М-сульфо-6-О-сульфоглюкозамін на відновлювальному
Зо кінці молекули. Крім того, невідновлювальний кінець може мати структури 4,5-ненасиченої 2-0- уронової кислоти (ДІ). На відновлювальному кінці вищезгаданого залишку можна знайти 2-М- сульфо-6-О-сульфоманозамін (лужна обробка каталізує епімерізацію в С2) на додаток до інших двох видів 1,6-ангідропохідних: 2-М-сульфо-1 ,6-ангідроглюкозамін (1,6-ап.А) і 2-М-сульфо-1,6- ангідроманозамін (1,6-ап.М).
Формула 2: Структури, присутні на відновлювальному і невідновлювальному кінцях в еноксапарин і беміпарин натрію.
се СНО, стей рен б з - че га БУ ке
Ки аа ки и и НН 2, я аю ОМ и я и С сей у са с нний їн песня МНК осені ах А
РУК ВК Б я Ка: я ач; ; еВ є. і г Кн
КК АЙ щн СЯ
Ї долях ню І и, ер; ВІЗ
Ук че чн не я ЧК І Новая
Фон оч ще Е вч «й й а - СНУ
Кссееесіч Моседу
С ее Мой іА і І інше
У процесі отримання в інших НМГ також утворюються залишки. Наприклад, на невідновлювальному кінці тінзапарин натрію, який отримують способом В-елімінації шляхом обробки гепариназами, присутня 4,5-ненасичена 2-О-сульфоуронова кислота (ДО25). сек ше и СН, п ох а с
Ед ско км их чия Х И щі А са шнясе
Б С ви
Формула 3: Структури, присутні на відновлювальному і невідновлювальному кінцях в тінзапарин натрію
Дальтепарин натрію отримують шляхом обробки азотною кислотою, яка утворює залишок 2,5-ангідроманітолу на відновлювальному кінці молекули.
СНО /й жов М, - убн цк ї в
ОА й г Щі - - - -
Формула 4: Структури, присутні на відновлювальному і невідновлювальному кінцях в дальтепарин натрію
У цьому описі "моносахаридний залишок, присутній в ланцюгах гепарину" означає ті моносахаридні залишки або компоненти, які зазвичай присутні в ланцюгах ГМУМН/ШЕН/ЗАО.
Список цих залишків включає 4,5-ненасичену 2-О-сульфоуронову кислоту (АО25), 4,5- ненасичену уронову кислоту (ДІ), 2-М-сульфо-1,6-ангідроглюкозамін (1,6-ап.А), 2-М-сульфо-1,6- ангідроманозамін (1,6-ап.М), 2-М-сульфо-6-О-сульфоглюкозамін (АМ565), 2,5-ангідроманіт, М- сульфоглюкозамін, глюкуронову кислоту, М-сульфо-6-О-сульфоглюкозамін, 2-0- сульфоїдуронову кислоту, ідуронову кислоту, М-сульфо-3-О-сульфоглюкозамін, М-сульфо-3,6- ді-О-сульфоглюкозамін, галактуронову кислоту, ксилозу, М-ацетилглюкозамін і М-ацетил-6-0О- сульфоглюкозамін.
ЯМР-спектроскопія дозволяє ідентифікувати залишки, типові для процесів отримання гепарину і низькомолекулярного гепарину.
Однією з переваг використання ЯМР для структурної характеристики є те, що для його аналізу зразки не вимагають попередньої дериватизації або хроматографічного фракціонування. Іншими словами, зразок безпосередньо аналізують за допомогою ЯМР без необхідності проведення проміжних обробок.
Спектроскопія ядерного магнітного резонансу використовується для визначення послідовності моносахаридних залишків, присутніх в цих сполуках, і однозначно визначає точки
М-ацетилювання і М- і О-сульфатування по всьому олігосахаридному ланцюгу. Крім того, цей спосіб дозволяє конкретно визначити орієнтацію аномерних зв'язків і провести відмінність між ідуроновою кислотою і епімером глюкуронової кислоти. (Адмапсіпд Апаїуїїса! Меїйойв5 ог
Спагасієгігайоп ої Апіопіс Сапропуагаїе Віороїутег5. Іапдевіау О0.У. РИО Тпевзів ОС. Вімегвіде 2013). Однак, з огляду на високий ступінь мікрогетерогенності і полідисперсності цих сполук, комплексна характеристика гепаринів і низькомолекулярних гепаринів в даний час залишається проблемою.
Крім того, цей спосіб може бути використаний для отримання інформації про ті структурні залишки, що утворюються в процесі отримання гепаринів і низькомолекулярних гепаринів, як наприклад, стан епімерізації уронових кислот (ідуронова кислота проти глюкуронової кислоти), співвідношення сульфатованих (Веї несульфатованих 4,5-уронатних залишків на невідновлювальному кінці (для низькомолекулярних гепаринів, які продукуються способом В- елімінації або шляхом обробки гепариназами).
Аналогічно, і завдяки своїй високій чутливості, цей спосіб використовувався як метод скринінгу для визначення домішок, присутніх в глікозаміногліканах (Апаїузі5 апа спагасіегіганоп оїГПераїп ітринііев. Вепі 5. єї а). Апа! Віоапа! Спет 2011, 399:527-539).
Останнім досягненням науки було розкриття різних способів і експериментів із задіянням
ЯМР для структурної характеристики глікозаміногліканів в цілому, а також гепаринів і низькомолекулярних гепаринів, зокрема. Так, наприклад, "ЗС-ЯМР-спектроскопія була використана для визначення ступеня сульфатування в гепарин натрію різного тваринного походження (СПагасіегігайоп ої З!иМайоп Райегп5 ої Вееї апа Рід МисозаІНерагіп5 ру Мисівєаг
Мадпеїйс Незопапсе. Сази В. єї а. Аг2гпеїт.-Рогзсп./Огид Вевз. 1996.46:472-477). "Н-ЯМР-спектроскопія була найбільш широко використовуваною методикою для вивчення цих сполук, оскільки вона задіює велику кількість ядер і має високе гіромагнітне відношення.
Діапазон від 1,8 до 2,1 м.ч. містить сигнали, що відповідають М-ацетильним групам або метильним групам відновлювальних кінців, які можуть бути синтезовані. Діапазон від 2,8 до 4,6 м.ч. містить більшість сигналів сахаридного кільця і має високий ступінь накладення між сигналами, що перешкоджає видаленню структурної інформації безпосередньо з цієї області. У діапазоні від 4,6 до 6,0 м.ч. - це сигнали, що відповідають аномерним протонам. Так як це область, яка має набагато меншу заповненість сигналами, з неї можна витягти багато інформації. Крім того, в разі ГМУМН, отриманих з використанням механізму В-елімінації, вона також містить сигнали, що відповідають НА на невідновлювальних кінцях молекули.
Двовимірні експерименти (20 ЯМР) дозволяють подолати проблеми одновимірних експериментів, в основному завдяки накладенню сигналів, а також тому, що спектри мають два частотні вимірювання та іншу інтенсивність сигналу, що дозволяє їм стати потужним інструментом для позначення олігосахаридних структур, отриманих з гепарину (Спагасієгігайоп ої ситепцу таїКеїєй Пераїп ргодисів: сотрозйіоп апаїувзіз бу 20-ММА. Кеїге О.А. еї аї. Апаї.
Меїштоаз 2013.5:2984-2994).
Спектри ТОС5У (ТОга! Соітеїайоп Зресіго5сору, повна кореляційна спектроскопія) є чудовою відправною точкою для структурного аналізу олігосахаридів, оскільки отримана в результаті інформація дозволяє зіставити ядра, знайдені в одній і тій же спіновій системі, а в цьому випадку всі протони в одному і тому ж моносахариді.
Іншим двовимірним експериментом, що має особливе значення для структурної характеристики цього типу з'єднань, є "Н-30 НБОС (Неїегописієаг Зіпдіеє-Оцапішт Соітеїайоп, гетероядерна одноквантова кореляція), яка корелює хімічні зсуви протонів з хімічними зсувами вуглецю 13 і дозволяє призначати первинні структури олігосахаридів, отриманих з САС і моносахаридних сполук (Зігисіига! еисіданйоп ойпе Іеігазассвагіде роої іп епохарагіп 5зодійт.
О2ци9 9. єї аї. Апаї. Віоапаї. Снет. 2002.403:2733-2744; Зіписіига! Теаїшгев ої ому тоЇІесцаг меїдні
Перагіпо5 апесіїпу Неї апйіпну тю апійпготріп. Вівіо А. еї аІ. Тптотбь. Нетозві. 2009.102:865-873).
Збільшення спектральної дисперсії, що досягається за допомогою цього двовимірного методу, дозволяє кількісно визначати інтеграли сигналів, які накладаються у відповідні одномірні спектри (І ом-тоїіесціаг-меїдні Перагпв: вігисішга! ашегепіайоп Бу їмо-дітепвзіопаї! писієаг тадпеїїс гезопапсе 5ресігозсору. Сишегтіпі М. еї аіІ. ЗХетіп Тиготь Нетові 2007.33:478- 487).
Ядерний магнітний резонанс, за визначенням, є методом кількісної спектроскопії, оскільки інтенсивність резонансних ліній прямо пропорційна числу резонансних ядер (спінів). Це теоретично дозволяє з точністю визначити кількість молекулярних структур.
Збільшення інтенсивності магнітних полів, використовуваних в ЯМР, дозволило значно знизити межі виявлення. Однак відсутність точних методів, які розглядають і контролюють як експериментальні методи, так і обробку і оцінку спектрів, означає, що вимірювання, проведені на ідентичних зразках в різних лабораторіях, можуть істотно відрізнятися (Маїїдайопо ої диапійайме ММА. Маї!? Р. апа ЧапсКе Н. ЧЧоштаї! ої РНпаптасешіса! апа Віотедіса! Апаїувібв 2005.38:813-823).
Складність спектрів ядерного магнітного резонансу глікозаміногліканів в цілому, та гепаринів і низькомолекулярних гепаринів, а також їх похідних, зокрема, означала, що до теперішнього часу не були розроблені спеціальні методи валідації, які дозволяють кількісно визначати його характерні сигнали, і, отже, відповідну характеристику і диференціацію цих сполук.
Отже, автори винаходу змогли подолати цю перешкоду сучасної науки, зумівши розробити метод, який дозволяє однозначно диференціювати гепарини один від одного. Завдяки способу, розробленому в рамках цього винаходу, процентні значення отриманого моносахаридного складу дозволяють диференціювати низькомолекулярні гепарини, отримані в ході різних процесів, а також гепарин натрію та інші глікозаміноглікани.
СУТЬ ВИНАХОДУ
Автори винаходу розробили спосіб, який дозволяє кількісно визначати характерні сигнали глікозаміногліканів в цілому, та гепаринів і низькомолекулярних гепаринів, а також їх похідних, зокрема, з використанням одновимірного ядерного магнітного резонансу "Н ЯМР і/або двовимірного ядерного магнітного резонансу "Н-3С НБОС. Кількісне визначення цих сигналів дозволяє визначити моносахаридний склад олігосахаридних ланцюгів кожної з цих сполук, що є характерною особливістю для сполук.
Отже, щодо першого аспекту винахід забезпечує спосіб аналізу складу, що містить моносахаридні залишки, присутні в ланцюгах гепарину або що виходять з них, за допомогою одновимірного ядерного магнітного резонансу "Н ЯМР і/або двовимірного ядерного магнітного резонансу "Н-ЗС НБОС, який складається з наступних етапів:
Зо а) Отримання складу, що включає, щонайменше, один моносахаридний залишок, присутній в ланцюгах гепарину, і отримання його спектра шляхом одновимірного ядерного магнітного резонансу 1 ЯМР і/або двовимірного ядерного магнітного резонансу 1Н-13С НБЗОС з використанням диметилмалонової кислоти (ОММА) як внутрішнього еталону, і потім р) Виявлення в спектрі ЯМР факту присутності або відсутності хоча б одного сигналу як мінімум одного залишку, вибраного з групи, що складається з: 4,5-ненасиченої 2-0- сульфоуронової кислоти (ДО25), 4,5-ненасиченої уронової кислоти (ДІ), 2-М-сульфо-1,6- ангідроглюкозаміну (1,6-ап.А), 2-М-сульфо-1,6-ангідроманозаміну (1,6-ап.М), 2-М-сульфо-6-0- сульфоглюкозаміну (АМ565), 2,5-ангідроманіту, М-сульфоглюкозаміну, глюкуронової кислоти, М- сульфо-6-0О- сульфоглюкозаміну, 2-О-сульфоідуронової кислоти, ідуронової кислоти, М-сульфо- 3-О-сульфоглюкозаміну, /М-сульфо-3,6-ди-О-сульфоглюкозаміну, галактуронової кислоти, ксилози, М-ацетилглюкозаміну і М-ацетил-6-О-сульфоглюкозаміну, відрізняється тим, що наявність зазначених сигналів в певній відносній пропорції її нормалізованих інтегралів відносно ОММА або їх відсутність становить зразок, який дозволяє ідентифікувати гепарин, який являє собою моносахаридний залишок, шляхом порівняння моделі, отриманої в аналізі, з еталоном, раніше отриманим для різних гепаринів при тих же умовах.
Відповідна кількісна оцінка характерних сигналів цих продуктів і їх моносахаридних сполук або характерних залишків дозволяє відповідним чином диференціювати полісахариди один від одного і визначити їх походження, а в разі низькомолекулярних гепаринів - підтвердити, що продукти були виготовлені відповідно до оголошеного методу.
Це кількісне визначення залишків вимірюється у відсотках і у відносній формі відносно повної структури кожного гепарину. Отримання характерної "картини" кожної зі структур, яка дозволяє однозначно виводити і ідентифікувати як аналізований гепарин, так і процес, за допомогою якого він був отриманий. Таким чином, спосіб винаходу може використовуватися як система або як методика контролю якості (для оцінки того, чи відповідають аналізовані гепарини певному еталону або фальсифіковані), так і як метод аналізу і визначення характерних сигналів нових структур гепарину, для яких згодом той самий метод може використовуватися як система або методика контролю якості.
Крім того, схвалення з боку органів охорони здоров'я біосиміларів і/або дженериків деяких 60 НМГ, як і в випадку з еноксапарин натрієм, відбувається після належним чином виконаного зіставлення між біосиміларом/дженериком та еталонною молекулою, яка повинна продемонструвати, серед інших аспектів, відповідний ступінь структурної подібності між обома продуктами. Одним з основних аспектів структурного рівня, який необхідно продемонструвати, є те, що відносна частка моносахаридів, які утворюють свої олігосахаридні ланцюги, після статистичної оцінки відповідають критеріям біоподібності. Для них спосіб винаходу є особливо селективним.
Автори винаходу підтвердили, що, хоча структурна характеристика за допомогою ядерного магнітного резонансу широко використовується для характеристики цих сполук, проте в літературі немає методів кількісного аналізу глікозаміноглікану за допомогою ЯМР. Відсутність цих методів перешкоджає належній порівнянності між ідентичними зразками, які були вивчені і оцінені в умовах, які не відповідають встановленим експериментальним умовам.
Таким чином, в літературних публікаціях можна знайти, що значення відносної пропорції, які надаються для різних залишків компонентів цих сполук, значно відрізняються один від одного, що ясно вказує на те, що вони є недостатньо коректними методами (Сепегіс мегвіоп5 ої епохарагіп амаїйабіє ог сііпіса! изе іп Вгагі! аге вітіїаг о їйе огідіпа! ага. СПа!изег В.Р., Маїго В.С.,
Оїїмеїга С.Р.М., Сіпеїії Г.Р., Регеїга М.5. апа Мошгао Р.А.5. У Тиготр Наєтозві 2011.9:1419-1422).
З метою встановлення селективного кількісного методу для визначення частки сигналів, відповідних залишкам, присутнім в структурі цих сполук, що дозволяє зробити належне порівняння результатів і дозволяє уникнути помилки, викликаної умовами, в яких ЯМР- експерименти виконуються, автори винаходу виявили, що використання диметилмалонової кислоти (ОММА) як внутрішнього еталону в експериментах "Н ЯМР і НБОС для відносної кількісної оцінки сигналів, які відповідають різним компонентним моносахаридам, є прийнятним варіантом, оскільки, серед інших аспектів, час поздовжньої релаксації (Т1) становить менше 1 секунди, аналогічно Т1 аномерних протонів і вуглеців (МоІєсшаг М/еідні ої Нераїіп ивзіпд 130
Мисієаг Мадпеїїс Везопапсе бресігозсору. ЮОезаї ОВ апа І іпнагаї Ву), У Рпагт 5сі 1995.84 (2); 212-215), що дозволяє добре переносити поляризацію і, отже, збільшувати інтенсивність сигналів, що робить метод придатним для цієї мети.
Таким чином, процес ЯМР-аналізу цих сполук характеризується, в першу чергу, використанням диметилмалонової кислоти як внутрішнього еталону для кількісного визначення характерних сигналів цих продуктів, як з використанням "Н ЯМР, так і "Н-3С НбЗОС.
Несподівано було виявлено, що селекція диметилмалонової кислоти (ОММА) як внутрішнього стандарту при її застосуванні як для "Н ЯМР, так і для "Н-30 НБОС, дозволяє кількісно визначати процентне значення характерних сигналів в глікозаміногліканах, в основному пов'язаних з гепаринами, з високою специфічністю, точністю, повторюваністю і лінійністю, а також між сигналом спектра ЯМР і концентрацією характерних залишків аналізованого глікозаміноглікана, що дозволяє розробити метод кількісного аналізу зазначених глікозаміногліканів, якого не існує на сьогоднішній день.
КОРОТКИЙ ОПИС КРЕСЛЕНЬ
Фіг. 1: Діаграма процесу біосинтезу гепарину
Фіг. 2: Специфічність. "Н ЯМР-спектри
Фіг. 3: Специфічність. "Н-30 НБОС-спектри
Фіг. 4: "Н ЯМР лінійність
Фіг. 5: "Н-3С НЗОС лінійність
Фіг. 6: "Н ЯМР-спектр еноксапарин натрію
Фіг. 7: "Н-30 НБОС-спектр еноксапарин натрію
АБРЕВІАТУРИ І АКРОНІМИ
У цій специфікації використовуються наступні абревіатури і акроніми:
ЯМР: Ядерний магнітний резонанс нос: Гетероядерна одноквантова кореляція
А: Глікозаміноглікан
ОН: Нефракціонований гепарин
ГМУУН: Низькомолекулярний гепарин
ОСММУН: Ультранизькомолекулярний гепарин
Да: Дальтон ди25: 4,5-ненасичена 2-О-сульфоуронова кислота ди: 4,5-ненасичена уронова кислота 1,6-ап.А: 2-М-сульфо-1,6-ангідроклюкозамін 1,6-ап.М: 2-М-сульфо-1 ,6-ангідроманозамін тТОоС5У: Повна кореляційна спектроскопія
Тер: З-«триметилсиліл) пропіонова кислота-а4 натрієва сіль
ОММА: Диметилмалонова кислота
МГц: Мегагерц
М.ч. Мільйонна частка б: Хімічний зсув
ЗМУ: Спектральна ширина то: Проміжок часу тТ1: Час поздовжньої релаксації
АМ5: М-сульфоглюкозамін а: Глюкуронова кислота
АМ565: М-сульфо-6-О-сульфоглюкозамін 25: 2-О-сульфоідуронова кислота
І: Ідуронова кислота
АМ5З35: М-сульфо-3-О-сульфоглюкозамін
Саї!: Галактуронова кислота
Ху! Ксилоза
АМАс: М-ацетилглюкозамін
Або: 6-О-сульфоглюкозамін
АБОН: Глюкозамін пев: Сульфогулуронова 2-0 кислота
М: Манозамін
ММ565: М-сульфо-6-О-сульфоманозамін
Ерох: Епоксид агей: а-аномер
Вгед: В-аномер
ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ
Експериментальні випробування
Кількісні ЯМР-випробування були виконані з використанням спектрометра ядерного магнітного резонансу (ЯМР) фірми ВгиКег АМІИ-60ОО о АМІІ-800. Як внутрішній еталон використовували такі реагенти: оксид дейтерію (020) 99,9 95, З-(триметилсиліл) пропіонова кислота-а4 натрієва сіль (Т5Р) і диметилмалонова кислота (ОММА, еталон для кількісного ЯМР, ступінь чистоти ТтасесЕКТ). а) Інструментальні налаштування - Частота: 1Н: 600/800 МГц, 13С: 150,9 / 201,2 МГц - Температура: 298 К
Юр) Параметри поглинання (кількісний 1Н ЯМР) - 90" імпульс: визначається з якісного "Н-спектра - Спектр поглинання: 5МУ-10-12 м.ч./10-64-128К - Затримка інтервалу сканування 41 повинна задовольняти умові 41-АО220с - Кількість сканувань: 12 с) Параметри поглинання (НБОС) - 907 імпульс: визначається з якісного1Н-спектра - Спектр поглинання: ЗУМ2 (1Н) - 6 м.ч. / ТО(Е2) - 1К
ЗМУ1 (3) - 120 м.ч. / ТО(Е1) - 256-384 - Час між імпульсами а1-1,8-2 с - Кількість сканувань: 12 а) Параметри обробки (1Н) - Інтервал обробки: 5І-64-256К - Функція-вікно: Відсутня - Регулювання фази: ручне - Початкове налаштування: автоматичне (абз) е) Параметри обробки (НБОС) - Інтервал обробки: 5І(Е2) - 2К - Функція обробки: ОЗІМЕ, 558-2
Зо - Регулювання фази: ручне - Початкове налаштування: автоматичне
І) Для приготування зразка готують такі розчини: - Розчин А ІТ5РІ 1 мг/мл - Розчин В (020-Т5РІ 0,002 мг/мл: 40 мкл А (ТЗ5РІ «ж 19,96 мл 020, Загальний об'єм - 20 мл - Розчин С (ОММА) 1,2 мг/мл
- Випробувальний зразок: 50 мг досліджуваного продукту вміщують в 500 мкл розчину В
Ір2О-ТЗРІ і додають 100 мкл розчину С |ОММА)| диметилмалонової кислоти і вміщують в пробірку для ЯМР діаметром 5 мм. 9) Процес
ЯМР-пробірку, що містить зразок, вводять в спектрометр. Потім регулюють однорідність магнітного поля і гармонію хвилі оптимізують для ядер "Н і "3С. Потім виконується якісний "Н- спектр з параметрами, аналогічними зазначеним вище, за винятком наступного:
Час між імпульсами 41-1-2 с
Кількість сканувань: 1-4
Потім значення імпульсу 90" визначається за допомогою автоматичної імпульсної програми (ТОРБРІМ). Потім виконується кількісний'Н-спектр з параметрами, зазначеними в аналітичному методі, зі значенням імпульсу 907 (Р1), яке було визначено раніше. Після цього отримують спектр НБОС із зазначеними вище параметрами. Отримані спектри потім обробляють відповідно до вищезазначених параметрів, приймаючи в якості еталону хімічного зсуву сигнал
Т5Р-д4 при 0 м.ч.
Сигнал диметилмалонової кислоти з'являється при наступних хімічних зсувах: "ЛИН ЯМР: синглет, який з'являється при 1,2-1,4 м.ч. - НБОС: сигнал при 1,2-1,4 і 26-27 м.ч.
Параметри, що підлягають оцінці при визначенні валідації методу для кількісного ЯМР, були наступними:
Специфічність
З певністю встановлює придатність аналітичного методу для вимірювання і/або ідентифікації аналітів, що являють інтерес, одночасно або окремо в присутності інших хімічних речовин, які можуть бути присутніми в зразку.
Дані, отримані в спектрах "Н ЯМР в ході цих експериментів, були наступними: (Ш.еталонхімічногозсуву (020-Т5Р 77777777 Ї7771717171717171111000сСсСщС
Ї в'Н "30-НБОС спектрах:
Зо
Перевіряється відсутність перешкод між сигналами як в спектрах "Н ЯМР, так і в "Н 736-
НЗОС (Фіг. 2 і 3). Це демонструє, що метод здатний розрізняти без перешкод сигнали, що формують структуру досліджуваної сполуки, і сигнали інших продуктів, присутніх в зразку, таких як розчинник (оксид дейтерію, 020), внутрішній еталон (диметилмалонова кислота, ОММА) і еталонний хімічний зсув (Т5Р-а4).
Межа кількісної оцінки і лінійність
Відповідно до цих параметрів визначається, з одного боку, мінімальна кількість аналіту, яка може бути точно і безпомилково визначена кількісно, а з іншого боку, здатність методу отримувати результати в прямій пропорційності (за допомогою математичних перетворень) до концентрації аналіту в зразку в межах встановленого інтервалу.
Для встановлення межі кількісної оцінки і лінійності кількісно підраховують інтеграли ЯМР- сигналів ОММА (тобто інтеграл області сигналу ЯМР, що відповідає ОММА) на еноксапарин натрії легованому на 7 рівнях концентрації внутрішнього еталону, шляхом незалежних зважувань трьох зразків. Ці рівні відповідають наступним робочим концентраціям: - 0,2 мМ: 13,5 95 робочої концентрації - 0,9 мМ: 20,3 95 робочої концентрації - 0,76 мМ: 50 95 робочої концентрації - 1,2 мМ: 80,1 95 робочої концентрації - 1,5 мм: 100 95 робочої концентрації - 1,8 мМ: 120 95 робочої концентрації - 2,27 ММ: 150,2 95 робочої концентрації
Критерії прийнятності, встановлені для виконання цього критерію лінійності, полягають в тому, що в отриманій лінії коефіцієнт кореляції для обох експериментів становить 2 0,99. На фіг. 4 ії 5 графічно представлені інтегральні значення сигналу ОММА залежно від концентрацій
ОММА (мМ) для спектрів "Н ЯМР і 'Н "З0-НБЗОС. Критерій прийнятності легко виконується для обох спектрів.
Межа кількісної оцінки встановлюється для концентрації ОММА в 0,20 мМ. Таким чином, сигнали зразків, досліджених з інтенсивністю, меншою, ніж інтенсивність сигналу ОММА, що відповідає цій концентрації, не можуть бути відповідно кількісно визначені і, отже, вони не можуть бути використані для визначення відносної частки залишків, присутніх в молекулі.
Точність
Метод висловлює близькість між значенням, яке приймається зазвичай як істинне або еталонне значення, і знайденим експериментальним значенням. Для розрахунку і оцінки експериментального значення концентрації зразків метод розглядає рівняння з лінією, отриманою в попередньому розділі (лінійність).
Точність виражається як відсоток відновлення при оцінці відомого кількості внутрішнього ота Відсотовідновлення (В) - Хт х100 ро де:
Хт: знайдене середнє значення, у: значення, прийняте як істинне.
Встановлені критерії прийнятності полягають в тому, що значення відновлення складають від 70,0 до 130,0 95 для концентрації, що відповідає межі концентрації, і від 80,0 до 120,0 95 для інших рівнів.
Дані, отримані для експериментів "Н ЯМР і НБОС, були наступними: а)'нН ЯМР р) НЗОС
Коо)
Висновок, зроблений з цього аналізу як для експерименту "Н ЯМР, так і для НбОС, відповідно до критеріїв прийнятності підтверджує придатність параметрів точності для тих сигналів, які відповідають зразку, з інтенсивністю, що перевищує інтенсивність межі кількісної оцінки.
Точність - Повторюваність
Варіабельність методу вивчається шляхом проведення серії аналізів на одному і тому ж зразку в одних і тих же умовах роботи в одній і тій же лабораторії і за короткий період часу.
Для цього для кожної концентрації проводили три послідовних аналізи. Повторюваність методу виражається як коефіцієнт варіації (СУМ) серії вимірювань і математично розраховується наступним чином:
М(90) - -х100 х з де: 5: стандартне відхилення,
Х: середнє арифметичне для результатів.
Критерії прийнятності, встановлені для виконання цих критеріїв точності, полягають в тому, що коефіцієнт варіації для всіх рівнів становить «7 905.
Дані, отримані для обох експериментів, були наступними: нн кт ли КС: ПОЯ ПОО ЕП
Висновок, зроблений з цього аналізу як для експерименту "Н ЯМР, так і для НбОС, відповідно до критеріїв прийнятності підтверджує придатність параметрів точності для тих сигналів, які відповідають зразку, з інтенсивністю, що перевищує інтенсивність межі кількісної оцінки.
ПРИКЛАДИ
Нижче наведені конкретні приклади служать для ілюстрації характеру винаходу. Ці приклади включені тільки для ілюстративних цілей і не повинні інтерпретуватися як будь-які заявлені обмеження винаходу.
ПРИКЛАД 1
Дослідження еноксапарин натрію методом "Н ЯМР. 50 мг еноксапарину натрію розчиняють в 500 мл розчину Ю2О-Т5Р (розчин В) і додають 100 мкл розчину ОММА (розчин С). Отриманий розчин вводять в пробірку діаметром 5 мм.
Отримана концентрація ОММА в розчині для аналізу становить 1,5 ММ.
Експерименти проводяться в ЯМР-спектрометрі фірми ВгиКег АМПІ-800.
Основні ідентифіковані сигнали: ні 17711111 4886 ЇЇ
Після того, як були отримані значення інтегралів сигналів як ОММА, так і решти залишків, отримують нормалізовані значення згаданих залишків шляхом ділення значення його інтегралів на значення інтеграла, що відповідає сигналу ОММА. Ця нормалізація може бути виконана, оскільки концентрація внутрішнього стандарту підтримується постійною стосовно концентрації
Зо залишку для всіх експериментів, що дозволяє уникнути міжексперементальної варіабельності, яка може виникнути при аналізі серії з декількох партій товарів.
Як тільки нормалізовані значення залишків будуть отримані, відносний відсоток кожного з них родраховується відкавідювяке завоірфевоиталух х100
У нормалізованезначеннявсіхсигналів
Для уточнення виконаних кроків отримані результати показані для серії з чотирьох зразків
МІ, М2, М3 ї МА еноксапарин натрію:
У проведених експериментах були отримані наступні інтегральні значення для кожного з обраних сигналів:
111 мі ме | мз | ма ( де М відповідає зразку.
Щоб отримати нормалізовані значення інтегралів досліджуваних сигналів, вони діляться на значення інтеграла ОММА: 1111111 мІ 17111 ме | о мз | 9 м4 (
І, нарешті, з цих нормалізованих значень розраховується відносна частка кожного з цих сигналів до сукупності всіх сигналів: 11111117 мМі Її мае | мз | м4 ( нітвапА ///17777710,65. | 073 | (РО | 069 2 Ф
Кількісне визначення характерних і добре диференційованих сигналів еноксапарин натрію (що, як правило, відповідають аномерним протонам, Ні) показано в таблиці нижче з отриманими значеннями відносної часткової пропорції:
Набір сигналів, відповідних пікам, знайденим в певному діапазоні ЯМР, чи то одновимірний "Н-ЯМР і/або двовимірний "Н-3С0 НБОС, або їх відсутність в відносних пропорціях його нормалізованих інтегралів, позначених параметром "відносна частка (90)" - це те, що в цій специфікації називається "модель сигналу" або просто "модель".
ПРИКЛАД 2
Таке ж рішення, яке використовується в прикладі 1, використовується для проведення дослідження з використанням "Н-ЗС Н5ЗОС. Основні ідентифіковані сигнали: бС4-Н4 АМ565(-с)//
С1-НІ АМ5 агеа//
Амеєєта 197 ро
Ці сигнали можуть бути асоційовані з моносахаридними компонентами молекули, так що кількісне визначення сигналів дозволяє визначити їх моносахаридний склад.
Інтеграли для кожного з цих сигналів були нормалізовані, виходячи із значення, встановленого для інтеграла ОММА, використовуючи той же процес, який був описаний для експериментів з використанням "Но ЯМР. Кількісне визначення характерних сигналів еноксапарин натрію показано в наступній таблиці:
Ці експерименти показують, що використовуючи описані вище експериментальні умови, за допомогою ядерного магнітного резонансу (Н-ЯМР та "Н-ЗС Н5БОС) можна отримати метод аналізу глікозаміногліканів в цілому, та гепаринів і низькомолекулярних гепаринів, а також їх похідних, зокрема, що дозволяє проводити їх кількісний аналіз.
ПРИКЛАД З
Дослідження беміпарин натрію методом "Н ЯМР.
Основні ідентифіковані сигнали: ні 7 Ї77717171114886Ї1111111111111111111Ї11
Кількісне визначення характерних і добре диференційованих сигналів беміпарин натрію (що, як правило, відповідають аномерним протонам, НІ) показано в таблиці нижче із значеннями відносної часткової пропорції, що спостерігається для серії з шести зразків.
ПРИКЛАД 4
Таке ж рішення, яке використовується в прикладі З, використовується для проведення дослідження з використанням "Н-ЗС Н5ЗОС. Основні ідентифіковані сигнали: б4-НА АМ565(-С/, 1,6-ап.М
С1-НІ1 АМ5 -агеа/
Ді ВСЕМ ОСТІ ПОЛЯ ПОН ПОН
Ці сигнали можуть бути асоційовані з моносахаридними компонентами молекули, так що кількісне визначення сигналів дозволяє визначити її моносахаридний склад.
Інтеграли кожного з цих сигналів були нормалізовані, починаючи зі значення, встановленого для інтеграла ОММА, використовуючи ту ж процедуру, яка була описана для експериментів із використанням "Н ЯМР. Кількісне визначення характеристики сигналів беміпарин натрію показано в наступній таблиці:
ПРИКЛАД 5
Дослідження дальтепарин натрію методом "Н ЯМР.
Основні ідентифіковані сигнали: інбАМ565 777 Ї777771711л4844 ЇЇ
Кількісне визначення характерних і добре диференційованих сигналів дальтепарин натрію (що, як правило, відповідають аномерним протонам, Ні) показано в таблиці нижче з значеннями відносної часткової пропорції, що спостерігається для серії з шести зразків.
ПРИКЛАД 6
Таке ж рішення, яке використовується в прикладі 5, використовується для проведення дослідження з використанням "Н-3С НЗОС. Основні ідентифіковані сигнали:
Ці сигнали можуть бути асоційовані з моносахаридними компонентами молекули, так що кількісне визначення сигналів дозволяє визначити їх моносахаридний склад.
Інтеграли кожного з цих сигналів були нормалізовані, починаючи зі значення, встановленого для інтеграла ОММА, використовуючи ту ж процедуру, яка була описана для експериментів із використанням "Н ЯМР. Кількісне визначення характеристики сигналів дельтепарин натрію показано в наступній таблиці:
ПРИКЛАД 7
Дослідження тінзапарин натрію методом "Н ЯМР.
Основні ідентифіковані сигнали: нта 77117711 468 Ї111111111111111111111Ї11
Кількісне визначення характерних і добре диференційованих сигналів тінзапарин натрію (як правило, відповідних аномерним протонам, Ні) показано в таблиці нижче з значеннями відносної часткової пропорції, що спостерігаються для серії з шести зразків.
ПРИКЛАД 8
Таке ж рішення, яке використовується в прикладі 7, використовується для проведення дослідження з використанням "Н-ЗС Н5ЗОС. Основні ідентифіковані сигнали: бС4-Н4 АМ565(-с)// б2-Н2 АМ565 гей//
С1-НІ АМ5 агеад//
Амвввтя 007 |в 11
Ці сигнали можуть бути асоційовані з моносахаридними компонентами молекули, так що кількісне визначення сигналів дозволяє визначити їх моносахаридний склад.
Інтеграли кожного з цих сигналів були нормалізовані, починаючи зі значення, встановленого для інтеграла ОММА, використовуючи ту ж процедуру, яка була описана для експериментів з використанням "Н ЯМР. Кількісне визначення характеристики сигналів тінзапарин натрію показано в наступній таблиці:
СіНІвАвОН77111111111111111Ї11111111111111111111110811111111с1 нава 111111111111111111Г111111111111111111111861сссСс21
Ці експерименти показують, що використовуючи описані вище експериментальні умови, за допомогою ядерного магнітного резонансу (Н-ЯМР у "Н-З3С Н5БОС) можна отримати метод аналізу глікозаміногліканів в цілому, та гепаринів і низькомолекулярних гепаринів, а також їх похідних, зокрема, що дозволяє проводити їх кількісний аналіз.
Claims (17)
1. Спосіб аналізу складу, що містить моносахаридні залишки, присутні в ланцюгах гепарину, за допомогою "Н-ЯМР одновимірного ядерного магнітного резонансу і/або '"Н-зЗСб нос двовимірного ядерного магнітного резонансу, що включає наступні етапи: а) отримання складу, що включає щонайменше один моносахаридний залишок, присутній в ланцюгах гепарину, і отримання його спектра шляхом одновимірного ядерного магнітного резонансу "Н-ЯМР і/або двовимірного ядерного магнітного резонансу "Н-ЗС НБЗОС з використанням диметилмалонової кислоти (ФОМІМА) як внутрішнього стандарту і 020 як розчинника, і потім р) виявлення в спектрі ЯМР факту присутності або відсутності хоча б одного сигналу принаймні одного залишку, вибраного з групи, що складається з: 4,5-ненасиченої 2-О-сульфоуронової кислоти (ДО25), 4,5-ненасиченої уронової кислоти (ДІ), 2-М-сульфо-1,6-ангідроглюкозаміну (1,6-ап.А),. 2-М-сульфо-1,6-ангідроманозаміну (1,6-ап.М), 2-М-сульфо-6-О-сульфоглюкозаміну (АМ565), 2,5-ангідроманіту, М-сульфоглюкозаміну, глюкуронової кислоти, М-сульфо-6-0- сульфоглюкозаміну, 2-О-сульфоідуронової кислоти, ідуронової кислоти, М-сульфо-3-0- сульфоглюкозаміну, М-сульфо-3,6-ди-О-сульфоглюкозаміну, галактуронової кислоти, ксилози, М-ацетилглюкозаміну і М-ацетил-6-О-сульфоглюкозаміну, який відрізняється тим, що наявність зазначених ЯМР сигналів в певній відносній пропорції її нормалізованих інтегралів відносно ОММА або їх відсутність складає зразок, який дозволяє ідентифікувати гепарин, який являє собою моносахаридний залишок, шляхом порівняння моделі, отриманої в аналізі, з еталоном, раніше отриманим для різних гепаринів при тих самих Зо умовах.
2. Спосіб за п. 1, де в спектрі "Н-ЯМР ідентифікують наступну структуру: Сигнал Хімічний зсув, м.ч. Відносна частка, 90 НА АО25 5,99 4,3-4,7 на ду 5,82 0,2 НІ 1,6-ап.А 5,62 0,7-0,9 НІ 1,6-ап.М 5,57 4,1-44 НІ АО25 5,51 5,7-6,0 НІ АМ56б5 5,40 16,1-16,7 НІ 125 5,23 13,1-144 Н5Ь 125 4,84 14,3-16,3 Н2 АМ5 3,23 24,3-26,6 МАс 2,05 12,0-15,3,
тим самим визначаючи, що моносахаридні залишки походять із еноксапарину натрію.
3. Спосіб за п. 1, де в спектрі "Н-ЗС НБОС-ЯМР ідентифікують наступну структуру: Сигнал Відносна частка, 95 С1-НІ АМ5-І25 25,6-26,9 С1-НІ АМ5-І 2,5-3,0 С1-НІ АМ5-С 5,1-5,5 С1-НІ АМ5.35 1,5-1,7 С1-НІ АМАс 2,7-3,5 С1-НІ АМАс-отєа «ІС С1-НІ АМ5-тєй 3,8-4,9 С1-НІ1 1,6-ап.А 1,2-1,5 С1-НІ1 1,6-ап.М 1,6-1,9 С1-НІ ММЗ-отєй 1,0-1,3 С1-НІ 125 24,5-27,5 С1-НІ І-Аб65 24-27 С1-НІ І-АвОН 0,3-0,4 С1-НІ 2С-АМ5.35 1,4-1,6 С1-НІ 2-АМ5 42-44 С1-НІ 2С-АМАс 1,9-2,6 С1-НІ с25 1,1-1,6 С1-НІ лО25 11,5-124 С1-НІ ХО 0,3-0,5 С1-НІ І25-гей 1,0-1,4 С5-Н5 Са!І-А -І06-0,5 Ерох «6-04, де "С" є "межею кількісної оцінки", тим самим визначаючи, що моносахаридні залишки походять із еноксапарину натрію.
4. Спосіб за п. 1, де в спектрі "Н-ЯМР ідентифікують наступну структуру: Сигнал Хімічний зсув, м.ч. Відносна частка, 90 НА АО25 5,99 3,7-5,7 НА А 5,82 0,2-2,5 НІ 1,6-ап.А 5,62 0,5-2,5 НІ 1,6-ап.мМ 5,57 2,5-6,0 НІ А025 5,51 7,0-10,7 НІ АМ565 5,40 19,0-21,3 НІ 125 5,23 13,8-18,5 Н2 АМ5 3,23 18,7-26,3 МАс 2,05 9,4-14, тим самим визначаючи, що моносахаридні залишки походять із беміпарину натрію.
5. Спосіб за п. 1, де в спектрі "Н-ЗС НБОС-ЯМР ідентифікують наступну структуру: Сигнал Відносна частка, 90 С1-НІ АМ5-І25 26,5-30,6 С1-НІ АМ5-І 1,7-5,3 С1-НІ АМ5-С 2,1-3,8 С1-НІ АМ5.35 0,6-2,5 С1-НІ АМАс 1,7-3,0 С1-НІ АМАс-отєа «ІС С1-НІ АМ5-тєй 2,6-5,4 С1-НІ1 1,6-ап.А «11 С1-НІ1 1,6-ап.М -1,0 С1-НІ ММЗ-отєй 0,9-2,3 С1-НІ1 125 30,4-34,9 С1-НІ І-Аб65 1,4-2,6 С1-НІ І-АвОН -02 С1-НІ 6-АМ5.35 «2,5
С1-НІ 6-АМ5 1,9-3,6 С1-НІ б-АМАс 0,4-1,4 С1-НІ 625 -0,5 С1-НІ лО25 10,9-14,9 С1-НІ ХО 0,6-1,6 С1-НІ1 125-гей -0,5 С5-Н5 баІ-А -0,3, тим самим визначаючи, що моносахаридні залишки походять із беміпарину натрію.
6. Спосіб за п. 1, де в спектрі "Н-ЯМР ідентифікують наступну структуру: Сигнал Хімічний зсув, м.ч. Відносна частка, 90 НІ АМ565 5,40 25,5-25,8 НІ 125 5,23 19,2-20,8 НІ 125-(АМ.ої) 5,18 9,5-9,8 Н2 АМ5 3,23 28,0-30,0 МАс 2,05 15,4-20,0, тим самим визначаючи, що моносахаридні залишки походять із дальтепарину натрію.
7. Спосіб за п. 1, де в спектрі "Н-"3С НБЗОС-ЯМР ідентифікують наступну структуру: Сигнал Відносна частка, 90 С1-НІ АМ5-І25 22,2-23,3 С1-НІ АМ5-І 3,0-3,2 С1-НІ АМ5-С 2,3-2,6 С1-НІ АМ5.35 2,1-2,9 С1-НІ АМАс 24-31 С1-НІ1 125 24,5-27,5 С1-НІ І-Аб65 3,6-4,0 С1-НІ 6-АМ5.35 1,8-2,3 С1-НІ 6-АМ5 2,5-3,5 С1-НІ С6-НбАМ.о1І-65 20,8-21,7, тим самим визначаючи, що моносахаридні залишки походять із дальтепарину натрію.
8. Спосіб за п. 1, де в спектрі "Н-ЯМР ідентифікують наступну структуру: Сигнал Хімічний зсув, м.ч. Відносна частка, 90 НА АО25 5,99 2,7 НІ АО25 5,51 5,3 НІ АМЗ6б5 5,40 23,6 НІ 125 5,23 21,0 Н2 АМ5 3,29 30,0 МАс 2,05 161, тим самим визначаючи, що моносахаридні залишки походять із тинзанарину натрію.
9. Спосіб за п. 1, де в спектрі "НАС НБЗОС-ЯМР ідентифікують наступну структуру: Сигнал Відносна частка, 90 С1-НІ АМ5-І25 27,2 С1-НІ АМ5-І 3,2 С1-НІ АМ5-С 3,4 С1-НІ АМ5.35 12 С1-НІ АМАс 3,7 С1-НІ АМАс-отєа «ІС С1-НІ АМ5-тєй 6,5 С1-НІ1 125 351 С1-НІ І-Аб65 31 С1-НІ І-АвОН 0,8 С1-НІ 6-АМ5.35 1,5 С1-НІ 6-АМ5 3,4
С1-НІ б-АМАс 2,2 С1-НІ лО25 8,6 С1-НІ1 125-гєй -01, тим самим визначаючи, що моносахаридні залишки походять із тинзапарину натрію.
10. Спосіб за будь-яким з попередніх пунктів, в якому сигнали, відповідні М-ацетильним групам, присутні в області від 1,8 до 2,1 м.ч. в "|Н-ЯМР-спектроскопії.
11. Спосіб за будь-яким з попередніх пунктів, в якому сигнали, відповідні сахаридному кільцю зазначених залишків, проявляються в області від 2,8 до 6,0 м.ч. в "Н-ЯМР-спектроскопії.
12. Спосіб за будь-яким з попередніх пунктів, в якому сигнали, відповідні аномерним протонам НІ ї протонам Ні невідновлювальних кінців одного із зазначених залишків, знаходяться в області між 4,6 та 6,0 м.ч. в "Н-ЯМР-спектроскопії.
13. Спосіб за будь-яким з попередніх пунктів, в якому в "Н-ЯМР-спектроскопії сигнали 4,5- ненасиченої 2-О-сульфоуронової кислоти (ЛШ25) з'являються в області між 5,99 і 5,51 м.ч. для Ні ії аномерних протонів, відповідно, а сигнал 4,5-ненасиченої уронової кислоти (ЛШ) з'являється в області 5,82 м.ч. для протона Н4, сигнал 2-М-сульфо-1,6-ангідроглюкозаміну (1,6-
ап.А) з'являється в області 5,62 м.ч. для аномерного протона, сигнал 2-М-сульфо-1,6- ангідроманозаміну (1,6-ап.М) з'являється в області 5,57 м.ч. для аномерного протона, а сигнали 2-М-сульфо-6-О-сульфоглюкозаміну з'являються в області між 5,41 і 4,21-4,34 м.ч. для протонів НІ її Нб ії НЄ" відповідно.
14. Спосіб за будь-яким з попередніх пунктів, де в "Н-ЗС НБОС-ЯМР-спектроскопії сигнали 4,5- ненасиченої 2-О-сульфоуронової кислоти (425) з'являються при 6,0-109,0 м.ч. (Н4-С4), 5,5- 100,2 м.ч. (НІ1-С1), 4,6-77,4 м.ч. (Н2-С2) або 4,3-66,8 м.ч. (НЗ-С3), сигнали 4,5-ненасиченої уронової кислоти (ЛШ) з'являються при 5,8-110,7 м.ч. (Н4-С4) або 5,2-103,9 м.ч. (Н1-С1), сигнали 2-М-сульфо-1 ,6-ангідроглюкозаміну (1,6-ап.А) з'являються при 5,6-104,2 м.ч. (Н1-С1), 3,2-58,5 м.ч. (Н2-С2) або 3,8-67,5 м.ч. (Нб-Сб6), сигнали 2-М-сульфо-1,6-ангідроманозаміну (1,6-ап.М) з'являються при 5,6-103,9 м.ч. (НІ1-С1), 3,5-55,1 (Н2-С2) або 3,8-67,5 м.ч. (Нб-Сб), а сигнали 2-М- сульфо-6-О-сульфоглюкозаміну з'являються при 5,4-99,4 м.ч. (НІ1-С1), 3,8-80,9 м.ч. (Н4-С4), від 3,7 до 3,8 - від 42,3 до 72,5 м.ч. (НЗ-С3), 4,1 - від 70,6 до 71,7 м.ч. (Н5-С5) або від 3,3 до 60,5- 60,8 м.ч. (Н2-С2).
15. Спосіб за будь-яким з попередніх пунктів, в якому модель отримана в результаті аналізу моносахаридних залишків із нефракціонованого гепарину. Зо
16. Спосіб за будь-яким з пп. 1-8, в якому модель отримана при аналізі моносахаридних залишків із низькомолекулярного гепарину (ІГМУМН).
17. Спосіб за будь-яким з пп. 1-8, в якому модель отримана при аналізі моносахаридних залишків із ультранизькомолекулярного гепарину (ШЕМУУН).
МЕ Ж БМ ниж х Х Си жжюую ую 1 7 шчяеттстиєєєє Шоннялятжянннянях шах я ї Се ти ЩЕ Кк, Ффоіииииииииія пли,
х. ОККО ек авх Ж З Дахюнчахикилакмх мання й ин тЕЗ З вив 0 до поннноноя ТЕН сооохотяя БУВАЄ ок ху принти вх 5 питииииттиитии ВК що пииитиитистюовВв дян дн плн коже до ууух сут плляняння їх яко. пп акикт їх. й Ко сану ж у лиу их ко хзужх оку Опале Пт в уую имя, зиженне й ВКМ ВИН дн ТЛА І МЕ КІВ я МНК рю чл я, я ха з: ИЙ НЯ ІК БА. Е і НИЖ ден; : Б шу : А седжх х ї Ки ї У їх ЕХ жену у : ре Ох лаки вк ЗК рТБЕЧАНИ їх тку шк х Бех ВНТ МІ ЛЕ КН і У Ще ей ї ване гуХЕгу КЗ кт ї ЕМ сі їй ; тепанНе ке х ян х - 5 МеденцемаВя дюн онуку
Дт. в оо о То ПИ ДЯ схккчо ча пеуиких ї : па и дея НЕ и КУ ВВ їжи ЕВ Н ї КАХ неви : и ї : Н УЖ З с : Я зв ам Е Метали : воло ов З ї дн р-е-- : Щк ІН : Е ку «й х 3 В їн ж 7 З З й я шко Я МО І с о НИ НВ ше ве 1 йо дм о Ох І ке ЩІ СИ ТоОсху БК - охо до КО : Енн КВ х Ех 7 Бнннн Шана : : хе аши ї : ї х й Х : І м Я у л тенор НиМ о ер ецаая Ку пили лтиттттолттититтнто КУ ДУКІ Курія нтн : виш нин НК З ЗБ пуху : : ее ї Худ ї БИКА : : ТОК с : Яка. Її Жуни- К в Ж Я : те дюн ї дис їх в Хе г» ях : ши ЖУК ї ши їх г : ши : : ї х жу п ад ОЧОК х, КИМ Мою шо вн Кр Ки а о ІН ОА в, ще ко КОЗУ у я Ск : осно а їх с Мо: Я : сх. пи ї ХІМ, п І : Може КАККІ Хдююнююенюєнк ке екю м Дю юю юю ях кт кю ши й ДЕР КМКЮВМВЕМВИК 110 БИ, ВЕ НЕШН ОЛИВ ОРЕ ІКТ ОТ: сумо с ме жк жо их, : Ігри урт КЕ УВІ ЕР САМІ БІ: ЕПЦОКСАПАРЕНІ : ГУКА ЕТ УДО Я Я ШЕНЬ СУМ 1 ої шко ото Б т ЗКУ ко:0ОТуде КУ ота гад БВ БИ Ж ЛЮ КІ Я ді ЩО п Іо ЩО С дв
Фіг.2 х Не Ден ДИНЯ ї : -х Ще лют, шин дж, я ї пара ух Вид Унх шик н- 5 : даху ТЗ КПК КВК КИ КУКИ з уохидит НИ лях ткож» ТЕХ МОСК ЕЕ ; тУОКСАпАРиК пода Б ДЕК, МЕ АК КОТ ХУ КА КВК ЕМ ЗО і МА Дкое кидки ЕНН ек Межа Гая их : 7 ТОНКЕ. я ВЕ й - їж КЕПЖКОМНЯ ЛОТА Пе 7 ; ГЕ КВУ НЕ. и ж 7 : пе Михехк ме минув ЛЕ и ше зда, ХМК ВКМ х- у ще Ох о но ХНЕКМЕ Й х й до бе Бомосжне киучо ЗЕ - жо т одким» ЕКС Поу ни МКК т ок, ж хо їх : хх МВП пи й КО В веж кА - х Зк ДОКТ, ТМ у . НИК я КИЕВ ЖАН: МБ КАК й Б ВДЕ НУК ХХ й й Вде ПНЯ КК І Яце
«КТ. : т ее хх х ше НЕсуртм воок ПИВ -х бо Тв, : Мох ци пу те, си Е Не оса до ЯЗ й об ох НЯ Ук З Пома й їх Я : 7 же ау : 1к-пром : і ВЕБ: : : суми! КЗ : : ШОЕ А ше ї о ВЕН ше : : К : ек ї Год не В : ЩЕ И : де п ї Я ге Ї си ЖАВИ КК МІХ ї НИ УК са Опт В : : ше : : Н де : : Н Кз В : хока КУ ЗК ШОН ПИНЖх ж: ХохцихУ мк; КИУКИх : : ї КА З я о ху ІЗ и я : ' Гетевроядеврна спектроскопія й я УККТвК Же сх как их : Ії авюююте З ПДНОКЕВЯНУОВИМ ПОМ МКеСЕННУНЯ 1 Й ше Й " ке : т ж Кз . о знакам Кегераенціїчнеем м ! ї МЕХКНЕНЕИХ су : Тож диуадлади НК : ОМ ІЖАЖИХКНАХ ее : : у : ва «ех УМ у и КМ КАХ, : КОЖ дже ди НА в КИ и на Ши пз иИ : їх : т СЕНИК : ї ЖЕ АЖИ КЕ І С : : ХІДКЖКЖКІ до : Її ШИК ТИМ ТАЖЖХ ИЛМ КІ. БУМ ї ї Хелоуін мине Я й лем ско й токах ВКПЕВККИІЧ МНК МЕНІ
СКК. АЕОВ КОЖ КК : й Іжа, Ко В Н Н Кене МиХ Я : Н УБКУКНХИТУК ХМ и Н ХЮЕОКК ОМ КМ ж МЕЖ ЖеНХ 1 ї : КОВО ВК Ії їх : : ДИКУН САНУ ВКНЕ х її ї : : ХІЖЖКМАНСТи РИНКИ мя тої З : : ІЕМ ВКА ПІК КЕХ а ; ОО ОЇ В : МАТОК ух ЗЕ ї т. М ОБІ Її : ЗКОХІМУИНХХ. Я Ії ПОЛЕ БЕ її : ШЕ НЯ ФІ м ЩО КЕ ОЗ Н ук ін пс КОНЯ : ХЕНжтТИКХ ІЕКНЖЕКА КМТ КІ 3 й: РО ШУ КО: : І ЗВ УНо Я ВІ ЗОБІ ЕРНІ: Я БО В ОБ МІ МК 0 х : ї
З . Ма ОК: ше Ії : : ЩІ ПК о НЯ, о Я ПЕК ТКЕМН КИ ПКУ МУК Е ОШИ 0 ТО1Я ПИТ Ах, Ж Ж то аа ча 5Б о а о за вах ей вв ша ВИ КА
Фіг.б ї п. й М ї т : - й р - Н Кв Зкднекци х шк Уівлея КОКОН ВОВИХ ІВ Не ик ЕХ БОМ ІАЕ Н ІК И МадхаеНХ МБТ Не Под КХ І Там УКВ МО й ІНеПукК В КМ КОЮВМит КОВКИ ЩНОВЕИХ Що Кмин БЖ - Ше НИ Курт нан ТЕ ОТ НЯ схо ням: пен еаминХ У кн і МЕТР КНТ ГОЖКУЄН ЕВ ЖЕК ок То Мито нн ци ми ки 1 М й зшнвня : Ж ПМ вЕпику ВОЗ кофе Ж по ДЕ «ик Дон пе нн ОКУ а ТУ й го ау УнИЮІТЬ спе ІКТ БЕК, МЕ І ми ПИВ МКМ КИ ВХ : УКДКТИКОКУ ВНТУ. ТЯ Тр хм. - пи Моди пМОл у Мох м РЕККУТИМ ЕК ТК ЛКЖХ я НИ їх У ВУ 45 до Би ОВУ п ОО Бу Не К ' М.шШ і омп ютерна верстка . Шамоніна т ня т я - т ня ДП "Український інститут інтелектуальної власності", вул. Глазунова, 1, м. Київ - 42, 01601
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP16382350.3A EP3273239A1 (en) | 2016-07-19 | 2016-07-19 | Procedure of analysis of glycosaminoglycans, heparins and their derivatives by nuclear magnetic resonance |
| PCT/EP2017/068285 WO2018015463A1 (en) | 2016-07-19 | 2017-07-19 | Method for the analysis of glycosaminoglycans, heparins and their derivatives by nuclear magnetic resonance |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA124466C2 true UA124466C2 (uk) | 2021-09-22 |
Family
ID=56682072
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201900263A UA124466C2 (uk) | 2016-07-19 | 2017-07-19 | Спосіб аналізу глікозаміногліканів, гепарину та їх похідних методом ямр |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US10705037B2 (uk) |
| EP (2) | EP3273239A1 (uk) |
| JP (1) | JP7035007B2 (uk) |
| CN (1) | CN109477829B (uk) |
| AR (1) | AR109099A1 (uk) |
| AU (1) | AU2017299186C1 (uk) |
| BR (1) | BR112019000437A2 (uk) |
| CA (1) | CA3029924A1 (uk) |
| CL (1) | CL2019000038A1 (uk) |
| CO (1) | CO2019000087A2 (uk) |
| CR (1) | CR20190016A (uk) |
| CY (1) | CY1124817T1 (uk) |
| DK (1) | DK3452827T3 (uk) |
| DO (1) | DOP2019000003A (uk) |
| EA (1) | EA037102B1 (uk) |
| ES (1) | ES2894898T3 (uk) |
| HR (1) | HRP20211649T1 (uk) |
| HU (1) | HUE056604T2 (uk) |
| LT (1) | LT3452827T (uk) |
| MA (1) | MA44876A (uk) |
| PL (1) | PL3452827T3 (uk) |
| PT (1) | PT3452827T (uk) |
| SI (1) | SI3452827T1 (uk) |
| UA (1) | UA124466C2 (uk) |
| UY (1) | UY37337A (uk) |
| WO (1) | WO2018015463A1 (uk) |
| ZA (1) | ZA201900143B (uk) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE102018203434B4 (de) * | 2018-03-07 | 2019-12-05 | Bernd Willi Karl-Heinz Diehl | Verfahren zur heteronuklearen quantitativen Bestimmung mittels NMR-Spektroskopie, Referenzsubstanzen hierfür und Verfahren zur Bestimmung des Deuterierungsgrades einer deuterierten Verbindung |
| CN112816566A (zh) * | 2019-11-17 | 2021-05-18 | 烟台东诚药业集团股份有限公司 | 一种那屈肝素钙末端结构确认方法 |
| CN111337529B (zh) * | 2020-03-12 | 2023-06-16 | 青岛科技大学 | 一种降低粘度、使水峰偏移的多糖样品制备和测试方法 |
| JP7377937B2 (ja) * | 2021-10-20 | 2023-11-10 | シオノギヘルスケア株式会社 | オリゴ糖の還元末端糖の定量的分析方法 |
| CN114018965A (zh) * | 2021-11-04 | 2022-02-08 | 五源本草(山东)健康科技有限公司 | 一种多糖核磁共振氢谱法定量检测技术 |
| CN117990732B (zh) * | 2024-04-02 | 2024-06-25 | 浙江大学 | 一种基于分离的分段同源多糖组的多糖结构解析方法 |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20020071931A (ko) | 2000-01-07 | 2002-09-13 | 트렌스폼 파마수티컬스 인코퍼레이티드 | 다양한 고체-형태들의 고도의 자료 처리 편성, 확인 및분석 |
| CA2486456C (en) | 2002-05-20 | 2012-07-17 | Massachusetts Institute Of Technology | Method for sequence determination using nmr |
| JP2004339083A (ja) | 2003-05-13 | 2004-12-02 | Bioserentack Co Ltd | ムコ多糖類製剤 |
| JP2005337958A (ja) | 2004-05-28 | 2005-12-08 | Kao Corp | 水溶性の糖骨格を有する化合物の分析法 |
| JP2005345193A (ja) | 2004-06-01 | 2005-12-15 | Shiseido Co Ltd | 核磁気共鳴法及び／又は核磁気共鳴による拡散係数測定法を用いた定量方法 |
| JP2006291028A (ja) | 2005-04-11 | 2006-10-26 | Q P Corp | 低分子ヘパリンまたはその塩、ならびにその製造方法 |
| US7968082B1 (en) * | 2007-01-26 | 2011-06-28 | Momenta Pharmaceuticals, Inc. | Evaluating mixtures of low molecular weight heparins by NMR |
| EP2213282A1 (en) | 2009-01-30 | 2010-08-04 | Laboratorios Farmaceuticos Rovi, S.A. | Pharmaceutical forms for the release of active compounds |
| US8802156B2 (en) | 2007-11-14 | 2014-08-12 | Laboratorios Farmacéuticos Rovi, S.A. | Pharmaceutical forms for the release of active compounds |
| ES2340902B1 (es) | 2008-07-01 | 2011-05-03 | Laboratorios Farmaceuticos Rovi, S.A. | Composicion farmaceutica con glicosaminoglicanos y su uso en tratamiento de ulceras cronicas. |
| ES2336297B1 (es) | 2008-10-08 | 2011-01-24 | Laboratorios Farmaceuticos Rovi, S.A. | Procedimiento de sintesis de pentasacaridos desprotegidos a partir deun pentasacarido precursos protegido. |
| JP5372696B2 (ja) | 2009-10-20 | 2013-12-18 | 杏林製薬株式会社 | ジメチルアミノエチルメタクリレート含有共重合体の定量法 |
| CN105452479B (zh) | 2013-06-17 | 2021-05-18 | 北卡罗来纳大学查珀尔希尔分校 | 可逆肝素分子 |
-
2016
- 2016-07-19 EP EP16382350.3A patent/EP3273239A1/en not_active Ceased
-
2017
- 2017-07-19 PT PT177491321T patent/PT3452827T/pt unknown
- 2017-07-19 CR CR20190016A patent/CR20190016A/es unknown
- 2017-07-19 DK DK17749132.1T patent/DK3452827T3/da active
- 2017-07-19 ES ES17749132T patent/ES2894898T3/es active Active
- 2017-07-19 EP EP17749132.1A patent/EP3452827B1/en active Active
- 2017-07-19 PL PL17749132T patent/PL3452827T3/pl unknown
- 2017-07-19 HR HRP20211649TT patent/HRP20211649T1/hr unknown
- 2017-07-19 AU AU2017299186A patent/AU2017299186C1/en active Active
- 2017-07-19 CN CN201780041954.9A patent/CN109477829B/zh active Active
- 2017-07-19 LT LTEPPCT/EP2017/068285T patent/LT3452827T/lt unknown
- 2017-07-19 SI SI201730971T patent/SI3452827T1/sl unknown
- 2017-07-19 BR BR112019000437-8A patent/BR112019000437A2/pt unknown
- 2017-07-19 WO PCT/EP2017/068285 patent/WO2018015463A1/en unknown
- 2017-07-19 AR ARP170102020A patent/AR109099A1/es unknown
- 2017-07-19 CA CA3029924A patent/CA3029924A1/en active Pending
- 2017-07-19 HU HUE17749132A patent/HUE056604T2/hu unknown
- 2017-07-19 MA MA044876A patent/MA44876A/fr unknown
- 2017-07-19 UY UY0001037337A patent/UY37337A/es active IP Right Grant
- 2017-07-19 UA UAA201900263A patent/UA124466C2/uk unknown
- 2017-07-19 EA EA201990005A patent/EA037102B1/ru unknown
- 2017-07-19 JP JP2019500842A patent/JP7035007B2/ja active Active
-
2019
- 2019-01-04 DO DO2019000003A patent/DOP2019000003A/es unknown
- 2019-01-07 CL CL2019000038A patent/CL2019000038A1/es unknown
- 2019-01-08 CO CONC2019/0000087A patent/CO2019000087A2/es unknown
- 2019-01-09 ZA ZA2019/00143A patent/ZA201900143B/en unknown
- 2019-01-18 US US16/251,909 patent/US10705037B2/en active Active
-
2020
- 2020-03-20 US US16/824,895 patent/US10809212B2/en active Active
-
2021
- 2021-10-26 CY CY20211100927T patent/CY1124817T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| UA124466C2 (uk) | Спосіб аналізу глікозаміногліканів, гепарину та їх похідних методом ямр | |
| Mauri et al. | Qualification of HSQC methods for quantitative composition of heparin and low molecular weight heparins | |
| Beyer et al. | Quality assessment of unfractionated heparin using 1H nuclear magnetic resonance spectroscopy | |
| Hügle et al. | Synovial fluid metabolomics in different forms of arthritis assessed by nuclear magnetic resonance spectroscopy | |
| Khanal et al. | Cryogenic IR spectroscopy combined with ion mobility spectrometry for the analysis of human milk oligosaccharides | |
| US7570357B2 (en) | Visible/near-infrared spectrometry and its device | |
| Sassaki et al. | Monosaccharide composition of glycans based on Q-HSQC NMR | |
| Höpfner et al. | Medium resolution 1H‐NMR at 62 MHz as a new chemically sensitive online detector for size‐exclusion chromatography (SEC–NMR) | |
| Alexandersson et al. | Complete 1H and 13C NMR spectral assignment of d-glucofuranose | |
| Franco et al. | Purity determination of a new antifungal drug candidate using quantitative 1H NMR spectroscopy: Method validation and comparison of calibration approaches | |
| Chuang et al. | Determination of the primary structures of heparin-and heparan sulfate-derived oligosaccharides using band-selective homonuclear-decoupled two-dimensional 1H NMR experiments | |
| Rudd et al. | How to find a needle (or anything else) in a haystack: two-dimensional correlation spectroscopy-filtering with iterative random sampling applied to pharmaceutical heparin | |
| Rhee et al. | Detection of honey adulteration using benchtop 1 H NMR spectroscopy | |
| Johnson et al. | Kinetic and J-resolved statistical total correlation NMR spectroscopy approaches to structural information recovery in complex reacting mixtures: application to acyl glucuronide intramolecular transacylation reactions | |
| Ruiz-Calero et al. | Estimation of the composition of heparin mixtures from various origins using proton nuclear magnetic resonance and multivariate calibration methods | |
| EP2850447B1 (en) | Method for deciding whether a sample is consistent with an established production norm for heterogeneous products | |
| Sannikova et al. | Measurement of kinetic isotope effects by continuously monitoring isotopologue ratios using NMR spectroscopy | |
| Gerwig et al. | Analysis of Carbohydrates by Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy | |
| CN113406135A (zh) | 基于非挥发物质采用核磁共振和偏最小二乘法鉴定特定品牌酱香白酒的方法 | |
| Maiwald et al. | Quantitative high-resolution online NMR spectroscopy in pharmaceutical reaction and process monitoring | |
| EP3599475A1 (en) | Methods for pre-processing magnetic resonance 2-d correlation spectroscopy (cosy) signals to enhance data quality | |
| Wang et al. | A Precise qNMR Method for the Rapid Quantification of Lot-to-Lot Variations in Multiple Quality Attributes of Pentosan Polysulfate Sodium | |
| Huckerby et al. | Keratan sulfates from bovine tracheal cartilage: Structural studies of intact polymer chains using 1H and 13C NMR spectroscopy | |
| Furusjö et al. | Uncertainty in rate constants estimated from spectral data with baseline drift | |
| CN101769872B (zh) | 一种虫草制品中虫草酸含量的检测方法 |