UA121332C2

UA121332C2 - Похідні моно- або дизаміщених індолів як інгібітори реплікації вірусів денге

Info

Publication number: UA121332C2
Application number: UAA201711845A
Authority: UA
Inventors: Барт Рудольф Романі Кестелейн; Барт Рудольф Романи Кестелейн; Жан-Франсуа Бонфанті; Жан-Франсуа Бонфанти; Тім Хьюґо Марія Йонкерс; Тим Хьюго Мария Йонкерс; П'єр Жан-Марі Бернар Рабуасон; Пьер Жан-Мари Бернар Рабуасон; Дороте Аліс Марі-Ев Бардіо; Дороте Алис Мари-Ев Бардио; Арно Дідьє М. Маршан; Арно Дидье М Маршан
Original assignee: Янссен Фармасьютікалз, Інк.; Янссен Фармасьютикалз, Инк.; Католіке Універсітейт Левен; Католике Университейт Левен
Priority date: 2015-05-08
Filing date: 2016-05-04
Publication date: 2020-05-12
Also published as: EP3896072B1; TWI744963B; KR102610493B1; US10696632B2; CN111303000B; KR20210048578A; HK1252446A1; PL3294738T3; IL272814B; IL255430A0; EA034978B1; UY36674A; IL255430B; JP2022166289A; PE20221579A1; CA2981845A1; HRP20210675T1; KR102610491B1; ECSP22023220A; SG10201900315SA

Abstract

Даний винахід стосується моно- або дизаміщених індольних сполук, способів попередження або лікування вірусних інфекцій, які спричиняються вірусом денге, із застосуванням вказаних сполук, а також стосується вказаних сполук для застосування як лікарського засобу, більш переважно для застосування як лікарського засобу для лікування або попередження вірусних інфекцій, які спричиняються вірусом денге. Даний винахід додатково стосується фармацевтичних композицій або комбінованих препаратів на основі таких сполук, композицій або препаратів для застосування як лікарського засобу, більш переважно для попередження або лікування вірусних інфекцій, які спричиняються вірусом денге. Даний винахід також стосується способів одержання таких сполук.

Description

ПЕРЕДУМОВИ СТВОРЕННЯ ВИНАХОДУ

Флавівіруси, які переносяться комарами або кліщами, спричиняють інфекції у людини, які становлять загрозу життю, такі як енцефаліт і геморагічна гарячка. Відомо чотири різних, але тісно пов'язаних серотипи флавівірусу, який спричиняє денге, так званих ОЕММ-1, -2, -3 та -4.

Денге є характерною для більшості тропічних і субтропічних регіонів усього світу, переважно в міських і напівміських районах. Згідно з даними Всесвітньої організації охорони здоров'я (МУНО), 2,5 мільярда людей, з яких 1 мільярд дітей, наражаються на ризик інфікування ОЕММ (МУНО, 2002). За оцінками, щорічно в усьому світі відбувається від 50 до 100 мільйонів випадків гарячки денге (ОРІ, півмільйона випадків захворювання денге в важкій формі (тобто геморагічної гарячки денге (ОНЕ)| і синдрому шоку під час геморагічної гарячки денге (0551), а також більш ніж 20000 смертей. ОНЕ стала основною причиною госпіталізації та смерті серед дітей в ендемічних регіонах. Загалом денге є найбільш поширеним арбовірусним захворюванням. Через нещодавні великі спалахи у країнах, розташованих у Латинській Америці, Південно-Східній Азії і західній частині Тихого океану (у тому числі в Бразилії, Пуерто-Рико, Венесуєлі, Камбоджі, Індонезії,

В'єтнамі, Таїланді), кількість випадків денге за останні роки значно збільшилася. Число випадків денге не лише збільшується по мірі поширення захворювання в нових районах, але спалахи мають тенденцію ставати більш важкими.

Для попередження та/або контролю захворювання, пов'язаного з вірусною інфекцією денге, в даний час єдиними доступними способами є стратегії, спрямовані на знищення комарів з метою контролю чисельності переносника інфекції. Хоча й у розробці вакцин проти денге має

Зо місце наявний прогрес, існує багато труднощів. Вони включають існування явища, що називається антитілозалежним підсиленням (АОЕ). Одужання після інфекції, спричиненої одним серотипом, забезпечує довічний імунітет проти даного серотипу, однак надає тільки частковий і тимчасовий захист проти наступної інфекції, спричиненої одним із трьох інших серотипів. При наступному інфікуванні іншим серотипом попередньо наявні гетерологічні антитіла формують комплекси із серотипом вірусу денге, що знову інфікує, але не нейтралізують патоген. При цьому передбачається, що полегшується проникнення вірусу в клітини, що призводить до неконтрольованої реплікації вірусу та підвищення піку титрів вірусів. Як під час первинної, так і під час вторинної інфекції підвищення титрів вірусу пов'язане із захворюванням денге в більш важкій формі. Оскільки материнські антитіла можуть легко передаватися немовлятам під час грудного годування, - це може бути однією з причин того, що діти є більш схильними до захворювання денге у важкій формі порівняно з дорослими.

У місцевостях із двома або більше серотипами, котрі циркулюють одночасно, які називаються також регіонами з підвищеною ендемічністю, ризик захворювання денге в серйозній формі значно вищий через підвищений ризик перенесення вторинної, більш важкої інфекції. Крім того, в умовах підвищеної ендемічності ймовірність появи більш вірулентних штамів є підвищеною, що в свою чергу підвищує ймовірність геморагічної гарячки денге (ОНЕ) або синдрому шоку денге.

Комарі, які переносять вірус денге, у тому числі Аєдез аеадурії та Аєдез аіІрорісіи5 (тигровий комар), рухаються по земній кулі на північ. Згідно з даними Центрами контролю і профілактики захворювань (СОС) Сполучених Штатів (США), обидва види комарів в даний час є поширеними в південному Техасі. Поширення на північ комарів, які переносять вірус денге, не обмежується поширенням у США, а спостерігається також і в Європі.

Нещодавно (грудень 2015 року) вакцина проти вірусу денге, одержана Запоїї Равзіеиг, була вперше схвалена в Мексиці. Вакцина також була схвалена в Бразилії, Філіппінах і Сальвадорі.

Процеси регуляційного тестування продовжуються в інших країнах, де денге є пріоритетом громадської охорони здоров'я. | все ж, вакцина залишає широкі можливості для покращення у зв'язку з обмеженою ефективністю, особливо проти ЮЕММ-1 ії -2, низькою ефективністю в суб'єктів, які раніше не були заражені флавівірусами, і тривалою схемою прийому препарату.

Незважаючи на ці недоліки, вакцина являє собою кардинальну зміну в ендемічній ситуації, 60 оскільки вона забезпечує захист для більшої частини населення, але ймовірно не для немовлят, які страждають від денге більше за всіх. Крім того, схема прийому препарату та дуже обмежена ефективність у суб'єктів, які раніше не були заражені флавівірусами, робить її непридатною та недоцільною/нерентабельною для мандрівників з неендемічних районів у денге-ендемічні райони. Вищезгадані недоліки вакцин проти вірусу денге є причиною того, чому існує потреба в противірусному засобі проти збудника денге для передінфекційної профілактики.

До того ж у поточний час відсутні конкретні противірусні лікарські речовини для лікування або попередження вірусної інфекції денге. Очевидно, що все ще існує велика нереалізована потреба медицини в терапевтичних засобах для попередження або лікування вірусних інфекцій у тварин, більш конкретно в людей, а особливо вірусних інфекцій, спричинених флавівірусами, більш конкретно вірусом денге. Надзвичайно необхідними є сполуки з доброю противірусною активністю, які не мають побічних ефектів або мають низькі ступені прояву побічних ефектів, характеризуються широким спектром активності проти багатьох серотипів вірусу денге, низькою токсичністю та/або добрими фармакокінетичними або фармакодинамічними властивостями.

Даний винахід передбачає сполуки, похідні моно- або дизаміщених індолів, які проявляють високу ефективну активність проти всіх чотирьох (4) серотипів вірусу денге. Також сполуки згідно з даним винаходом мають добрий фармакокінетичний профіль, і несподівано ці конкретні сполуки проявляють покращену хіральну стійкість.

КОРОТКИЙ ОПИС ВИНАХОДУ

Даний винахід заснований на несподіваному відкритті того, що щонайменше одна з вищезгаданих проблем може бути розв'язана за допомогою наявних сполук за даним винаходом.

В даному винаході представлені сполуки, які, як було показано, мають високу противірусну активність проти всіх чотирьох (4) серотипів, відомих на сьогоднішній день. До того ж у даному винаході продемонстровано, що всі ці сполуки ефективно інгібують проліферацію вірусу денге (ОЕММ). Таким чином, дані сполуки являють собою придатний клас високоактивних сполук, які можна застосовувати в лікуванні та/"або попередженні вірусних інфекцій у тварин, ссавців і людей, більш конкретно для лікування та/або попередження інфекцій, спричинених вірусами денге.

Зо До того ж даний винахід стосується застосування таких сполук як лікарських засобів і їх застосування для виготовлення лікарських препаратів для лікування та/або попередження вірусних інфекцій, які зокрема спричиняються вірусами, що належать до родини вірусів денге, у тварин або ссавців, більш конкретно в людей. Даний винахід також стосується способів одержання всіх таких сполук і фармацевтичних композицій, що включають їх в ефективній кількості.

Даний винахід також стосується способу лікування або попередження вірусної інфекції денге в людей за допомогою введення ефективної кількості однієї або декількох таких сполук або їхніх фармацевтично прийнятних солей необов'язково в комбінації з одним або кількома іншими лікарськими засобами, наприклад з іншим противірусним засобом або вакциною проти вірусу денге, або обома, пацієнту, який потребує цього.

Одним аспектом даного винаходу є забезпечення сполук формули (1):

СІ о) Осн» «А ко, (С я г; М ох й (), їх стереоїзомерної форми, фармацевтично прийнятної солі, сольвату або поліморфу, які містять моно- або дизаміщену індольну групу; при цьому вказана сполука вибрана з групи, де:

А: являє собою Н, Е» являє собою ЕК, і Ез являє собою Н або СНз,

Ві являє собою Н, СНз або Е, Е2 являє собою ОСН», і Ез являє собою Н,

А: являє собою Н, Е2 являє собою ОСН», і Ез являє собою СНз,

Ві являє собою СН», В2 являє собою БЕ, і Ез являє собою Н,

Ві являє собою СЕз або ОСЕ», В: являє собою Н, і Ез являє собою Н,

БО Ві являє собою ОСЕ», В2 являє собою ОСН», і Ез являє собою Н, і

Ві являє собою ОСЕ:», Рг являє собою Н, і Ез являє собою СН.

Зокрема, сполуки за даним винаходом або їхня стереоізомерна форма, фармацевтично прийнятна сіль, сольват або поліморф вибрані з групи:

СІ СІ

МеОо ФВ, ОМе Мео ФВ ОМе іа; У

М М й й 3 Зх й 2-37 ох М (о) 5

Е М () Е Н сі сі

МмеО ФВ, ОМе мМмеО (5 ОМе (в) (в

М М

Фі У о Фі У о

У У

М є) М є)

Мео Н Мео Н

СІ СІ мео Фі ОМе Мео Фі ОМе о ща

М

Е М х й З З й 2537 го М о ГК меО М є) мео їх

Ге сі

Ммео ФВ ОМе МеО ФВ ОМе іа и

М ЕЗС. М

З ол рол

Го о

Е М в) М (в)

Н Н сі сі

Ме ФВ, ОМе мМео: ФВ, ОМе в) (і (6)

ЕЗзЗСО М ЕЗСО М

У У

М є) М (в

Н Мео Н

СІ

Мео ФВ, ОМе (о,

ЕзСО М

Щі У о

І

М (в)

Н

Іншим аспектом даного винаходу є застосування сполуки, представленої наступною структурною формулою (1): сі в , (в) Осн»

В. х ко, (Я М 54 о Н о У з (І),

її стереоїзомерної форми, фармацевтично прийнятної солі, сольвату або поліморфу, що містять моно- або дизаміщену індольну групу; при цьому вказана сполука вибрана з групи, де:

Ві являє собою Н, СНз або Е, Р2 являє собою ОСН», і Ез являє собою Н, і

Ві являє собою ОСЕ», В2 являє собою ОСН», і Ез являє собою Н, і

Ві являє собою ОСЕ:», Рг являє собою Н, і Ез являє собою СН, для інгібування реплікації вірусус(-ів) денге в біологічному зразку або у пацієнта.

Частиною даного винаходу також є фармацевтична композиція, що містить сполуку формули (І) або її стереоїзомерну форму, фармацевтично прийнятну сіль, сольват або поліморф разом з однією або кількома фармацевтично прийнятними допоміжними речовинами, розріджувачами або носіями.

Фармацевтично прийнятні солі сполук формули (І) включають їхні солі приєднання кислот та основні солі. Придатні солі приєднання кислот утворюються з кислот, які утворюють нетоксичні солі. Придатні основні солі утворюються з основ, які утворюють нетоксичні солі.

Сполуки за даним винаходом також можуть існувати в несольватованій і сольватованій формах. Термін "сольват" застосовується в даному документі для опису молекулярного комплексу, що містить сполуку за даним винаходом і одну або декілька молекул фармацевтично прийнятного розчинника, наприклад етанолу.

Термін "поліморф" стосується здатності сполуки за даним винаходом існувати в більш ніж одній формі або кристалічній структурі.

Сполуки за даним винаходом можна вводити у вигляді кристалічних або аморфних продуктів. Вони можуть бути одержані, наприклад, у вигляді твердої пресованої маси, порошків або плівок за допомогою таких способів як осадження, кристалізація, сублімаційне висушування, висушування розпиленням або висушування випарюванням. Їх можна вводити окремо або в комбінації з однією або кількома іншими сполуками за даним винаходом або в комбінації з одним або кількома іншими лікарськими речовинами. Як правило, їх будуть вводити

Зо у вигляді складу з однією або кількома фармацевтично прийнятними допоміжними речовинами.

Термін "допоміжна речовина" використовується в даному документі для опису будь-якого інгредієнта, відмінного від сполуки(сполук)у за даним винаходом. Вибір допоміжної речовини значною мірою залежить від таких факторів як конкретний спосіб уведення, вплив допоміжної речовини на розчинність і стабільність, а також природа лікарської форми.

Сполуки за даним винаходом або будь-яка їхня підгрупа можуть бути складені в різні фармацевтичні форми для цілей введення. Як придатні композиції можуть бути згадані всі композиції, які зазвичай застосовуються для лікарських речовин, що вводяться системно. Для одержання фармацевтичних композицій за даним винаходом ефективну кількість конкретної сполуки, необов'язково у формі солі приєднання, як активний інгредієнт об'єднують в однорідну суміш із фармацевтично прийнятним носієм, при цьому носій може набувати великого різноманіття форм залежно від форми препарату, потрібного для введення. Дані фармацевтичні композиції переважно представлені у вигляді одиничної лікарської форми, придатної наприклад для перорального або ректального введення. Наприклад, під час одержання композицій у пероральній лікарській формі може застосовуватися будь-яке зі звичайних фармацевтичних середовищ, таких як, наприклад, вода, гліколі, масла, спирти тощо, у випадку рідких препаратів для перорального введення, таких як суспензії, сиропи, настоянки, емульсії та розчини; або твердих носіїв, таких як крохмалі, цукри, каолін, розріджувачі, змащувальні засоби, зв'язуючі речовини, розпушувачі тощо, у випадку порошків, пігулок, капсул і таблеток. Завдяки простоті їх введення таблетки і капсули є найбільш переважними одиничними лікарськими формами для перорального введення, у випадку застосування яких безумовно використовуються тверді фармацевтичні носії. Також включені препарати у твердій формі, які можуть бути перетворені безпосередньо перед застосуванням у рідкі форми.

Особливо переважним є складання вищезгаданих фармацевтичних композицій у вигляді одиничної лікарської форми для простоти введення та рівномірності дозування. Одинична лікарська форма, застосовувана в даному документі, стосується фізично окремих одиниць, придатних як одиничні дози, при цьому кожна одиниця містить попередньо задану кількість активного інгредієнта, розраховану для одержання потрібного терапевтичного ефекту, у поєднанні з необхідним фармацевтичним носієм. Прикладами таких одиничних лікарських форм є таблетки (у тому числі подільні або вкриті оболонкою таблетки), капсули, пігулки, пакетики з порошком, пластинки, супозиторії, розчини або суспензії для ін'єкцій тощо, а також окремі сукупності з них.

Фахівці в галузі лікування таких захворювань зможуть визначити ефективну кількість з урахуванням результатів тестів, представлених у даному документі далі. Загалом передбачається, що ефективна добова кількість буде становити від 0,01 мг/кг до 50 мг/кг ваги тіла, більш переважно від 0,1 мг/кг до 10 мг/кг ваги тіла. Доцільним може бути введення необхідної дози у вигляді двох, трьох, чотирьох або більше частин дози через відповідні інтервали протягом доби. Вказані частини дози можуть бути складені у вигляді одиничних лікарських форм, наприклад таких, що містять від 1 до 1000 мг і, зокрема, від 5 до 200 мг активного інгредієнта на одиничну лікарську форму.

Точне дозування і частота введення залежать від конкретної застосовуваної сполуки формули (І), конкретного стану, лікування якого здійснюють, важкості стану, лікування якого здійснюють, віку, ваги і загального фізичного стану конкретного пацієнта, а також від іншого медикаментозного лікування, яке індивідуум може одержувати, що добре відомо фахівцям у даній галузі техніки. До того ж очевидно, що ефективну кількість може бути знижено або збільшено залежно від реакції суб'єкта, лікування якого здійснюють, та/або залежно від оцінки лікаря, який призначає сполуки за даним винаходом. Таким чином, вищевказані діапазони ефективної кількості є лише рекомендаціями і не призначені для обмеження в тій чи іншій мірі обсягу або застосування даного винаходу.

Мається на увазі, що дане розкриття також включає в себе будь-які ізотопи атомів, що наявні в сполуках за даним винаходом. Наприклад, ізотопи водню включають тритій і дейтерій, а ізотопи вуглецю включають С-13 і С-14.

Дані сполуки, що застосовуються в даному винаході, можуть також існувати в їхній стереохімічно ізомерній формі, охоплюючи всі можливі сполуки, складені з тих самих атомів, які зв'язані за допомогою такої ж послідовності зв'язків, однак мають різні просторові структури, які не є взаємозамінними. Якщо не згадано або не вказано інше, то хімічне позначення сполук охоплює суміш усіх можливих стереохімічно ізомерних форм, які можуть мати вказані сполуки.

Вказана суміш може містити всі діастереомери та/або енантіомери з основною молекулярною структурою вказаної сполуки. Передбачається, що всі стереохімічно ізомерні

Зо форми сполук, застосовувані в даному винаході або в чистому вигляді, або в суміші одна з одною, призначені для включення в обсяг даного винаходу, у тому числі будь-які рацемічні суміші або рацемати.

Чисті стереоізомерні форми сполук і проміжних сполук, вказаних у даному документі, визначаються як ізомери, які практично не містять інших енантіомерних або діастереомерних форм тієї ж основної молекулярної структури вказаних сполук або проміжних сполук. Зокрема, термін "стереоїзомерно чистий" стосується сполук або проміжних продуктів, що характеризуються стереоїзомерним надлишком, що становить щонайменше від 8095 (тобто мінімум 9095 одного ізомеру і максимум 1095 інших можливих ізомерів) до стереоізомерного надлишку, що становить 10095 (тобто 10095 одного ізомеру і відсутність іншого), більш конкретно, сполук або проміжних продуктів, що характеризуються стереоїзомерним надлишком від 9095 до 10095, ще більш конкретно, що характеризуються стереоїзомерним надлишком від 9495 до 10095, і найбільш конкретно, що характеризуються стереоізомерним надлишком від 9790 до 10095. Терміни "енантіомерно чистий" і "діастереомерно чистий" потрібно розуміти подібним чином, але в такому разі щодо відповідно енантіомерного надлишку та діастереомерного надлишку суміші, що становить інтерес.

Чисті стереоїзомерні форми сполук і проміжних сполук, що застосовуються згідно з даним винаходом, можна одержати за допомогою процедур, відомих із рівня техніки. Наприклад, енантіомери можна відокремлювати один від одного шляхом селективної кристалізації їхніх діастереомерних солей з оптично активними кислотами або основами. Їхніми прикладами є винна кислота, дибензоїлвинна кислота, дитолуоїлвинна кислота та камфорсульфонова кислота. Як альтернатива, енантіомери можна відокремлювати за допомогою хроматографічних методик із застосуванням хіральних нерухомих фаз. Вказані чисті стереохімічно ізомерні форми також можна одержувати з відповідних чистих стереохімічно ізомерних форм придатних вихідних матеріалів за умови, що реакція перебігає стереоспецифічно. Переважно, якщо потрібний конкретний стереоіїзомер, то вказана сполука буде синтезована за допомогою стереоспецифічних способів одержання. У даних способах переважно застосовують енантіомерно чисті вихідні матеріали.

Загальні підходи синтезу

Синтез сполук загальної формули І можна здійснювати, як викладено на схемі 1. 2-(4-Хлор- бо 2-метоксифеніл)уоцтова кислота (І) може бути перетворена на відповідний 2-(4-хлор-2-

метоксифеніл)ацетилхлорид (ІІ) із використанням реагенту для хлорування, наприклад такого як тіонілхлорид. Реакцію Фріделя-Крафтса хлориду кислоти ІІ із заміщеним індолом загальної формули ІМ можна здійснювати із застосуванням реагенту, що являє собою кислоту Льюїса, наприклад такого як ЕСАЇСІ або ТісСіх, у придатному розчиннику, наприклад такому як СНеСі» або 1,2-дихлоретан, і за придатних умов реакції, які зазвичай (але не виключно) включають охолодження, з одержанням З-ацильованого індолу загальної формули М. Введення в карбонільний фрагмент сполук загальної формули М анілінового фрагмента в альфа-положенні можна здійснювати за допомогою послідовності реакцій, яка включає наприклад бромування М реагентом, наприклад таким як трибромід фенілтриметиламонію, у придатному розчиннику, наприклад такому як ТНЕ, з одержанням сполук загальної формули Мі, і наступне введення в реакцію сполук загальної формули МІ з З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліном (МІ). у придатному розчиннику, наприклад такому як СНзСМ, і зазвичай із застосуванням основи, наприклад такої як ТЕА або ОІРЕА, з одержанням сполук загальної формули І у вигляді рацемічних сумішей. Хіральне розділення сполук загальної формули І можна здійснювати за допомогою, наприклад, хіральної хроматографії з одержанням енантіомерів А і В загальної формули І. сі

Во щ-й ср» т»

Ве - щої От се . їн о. болю В фа у я 7 ос ост ' Тв жду

І : АКА АААААААААннх я ї І - ( -щЖ-- -4 :к ОК пня кннннкнйке їй АХ щи 4 А ДК лили 3 ! КЯ нал км шо М гом

В ВІ Гея м т чи с ко з й "о ЩІ КК с М ми й К- щи аж ЩІ ай а. і «им З, й Ж й ть ва ЧИ:

Вл і шо Ванни ТК

Осо вн ЧИ хдрх ше ши се па соди я А с Ше ШЕ ве МЕ Пе вом в і

ЩІ розділення

Еначтіомери ВАНЯ

Схема 1

У деяких випадках синтез проміжної сполуки загальної формули М за методом синтезу

Фріделя-Крафтса залежить від наявності захисної групи (РО) в індолі-М на стадії реакції

Фріделя-Крафтса, як вказано на схемі 2. З даною метою заміщений індол загальної формули ІМ може бути спочатку перетворений на М-захищену проміжну сполуку загальної формули МІ, наприклад таку як М-тозильована проміжна сполука загальної формули МІ (РО - Т5), із застосуванням реагенту, наприклад такого як тозилхлорид, за присутності основи, наприклад такої як гідрид натрію. Реакцію Фріделя-Крафтса заміщеного індолу загальної формули ІМ з хлоридом кислоти ЇЇ можна здійснювати із застосуванням реагенту, що являє собою кислоту

Льюїса, наприклад такого як ЕСАЇСІ або Тісії, у придатному розчиннику, наприклад такому як

СНеСіг або 1,2-дихлоретан, і за придатних умов реакції, які зазвичай (але не виключно) включають охолодження, з одержанням З-ацильованого М-захищеного індолу загальної

Зо формули ІХ. Видалення захисної групи РО індолу-М проміжної сполуки загальної формули ІХ може здійснюватися за допомогою реагенту, наприклад такого як ГІОН (для РО - Т5), у суміші розчинників, наприклад такій як ТНЕ/вода, і при прийнятній температурі реакції з одержанням 3- ацильованого індолу загальної формули М.

сі СІ добо що що сі Ге (о) оо -05 - в. Н в М в; М ке Й "з т.з Ро вз РО Ез

М М Іх М

Схема 2

Як альтернативний підхід, проміжну сполуку загальної формули М також можна одержати так, як викладено на схемі 3. М-Вос-захищений заміщений індол-З-карбальдегід загальної формули Х можна перетворити на відповідну проміжну сполуку за типом сполуки з реакції

Штрекера загальної формули ХІ шляхом проведення реакції з морфоліном у присутності реагентів, наприклад таких як ціанід натрію та бісульфіт натрію, і в придатному розчиннику, наприклад такому як суміш води і органічного розчинника, змішуваного з водою, наприклад такого як діоксан. Алкілювання сполуки загальної формули ЇХ 4-хлор-2-метоксибензилхлоридом можна здійснювати за присутності основи, наприклад такої як гексаметилдисилазан калію, і в придатному розчиннику, наприклад такому як ОМЕ, з одержанням сполуки загальної формули

Х. Дія на сполуку загальної формули Х придатного водного кислого гідролітичного фактора, наприклад такого як обробка водним розчином хлороводневої кислоти, при підвищеній температурі дає проміжну сполуку загальної формули М.

СІ о о

Он НМ о см С С 0, вогі Со оо сі в. Ф / ск в. М в. М йо дно гом | йо до й Ка оо х Х- хі Х- ХИ Х- сі чо-ї З о, т

ВХ ве Ф М й М

Схема З

Приклади

Способи І С/М5

Вимірювання під час здійснення високоефективної рідинної хроматографії (НРІС) проводили за допомогою насоса для І С, детектора на діодній матриці (БАС) або УФ-детектора та колонки, як описано у відповідних способах. За необхідності використовували додаткові детектори (див. наведену нижче таблицю способів).

Потік із колонки спрямовували до мас-спектрометра (М5), який був оснащений джерелом іонізації при атмосферному тиску. У компетенції фахівця в даній галузі знаходиться встановлення настроюваних параметрів (наприклад, діапазону сканування, часу витримки тощо) з метою одержання йонів, які забезпечують визначення номінальної моноізотопної молекулярної ваги (ММ/) сполуки. Збір даних здійснювали за допомогою відповідного програмного забезпечення.

Сполуки описували за їхніми значеннями експериментального часу утримування (К.) і

Зо йонами. Якщо не вказано інше, то в таблиці даних вказаний молекулярний іон відповідає (МАНІ (протонована молекула) та/або ІМ-НІ (депротонована молекула). У випадку якщо сполука не була безпосередньо здатна до йонізації, - вказують тип аддукту (тобто ІМАМНА!", (МАНСООГТ тощо). Для молекул зі складними ізотопними розподілами (Вг, СІ) описане значення є таким значенням, яке одержане для найменшої ізотопної маси. Усі результати одержували з експериментальними похибками, які зазвичай пов'язані із застосовуваним способом.

Далі в даному документі "БОЮ" означає одиничний квадрупольний детектор, "МБО" означає мас-селективний детектор, "КТ" означає кімнатну температуру, "ВЕН" означає містковий гібрид етилсилоксану/діоксиду кремнію, "САЮ" означає детектор на діодній матриці, "Нее5" означає діоксид кремнію підвищеної міцності.

Коди способів І! СМ5 (потік виражений у мл/хв.; температура колонки (Т) в"С; час аналізу в хвилинах).

обу пек | жжне/пюте | пеню сш ШИ

Прилад Колонка Рухома фаза Градієнт тт аналізу способу

Т колонки | (хв.)

А: 10 мМ .

Маїегв: УМагегв: ВЕН СНЗСООМНа в Від 9595 А до 595 А 0,8 мл/хв.

І б-А Асдийує С18 (1,7 9Бо НО 4 595 за 1,3 хв., п 2

ОРІ С2 -ОАО- | мкм, 2,1 х 50 утримування о

ОО мм) СизоМ протягом 0,7 хв 55 с

В: СНзЗСМ ' І , , А: 10 мМ Від 10095 А до дод тп НОВ сСНІСООМН: / 596 А за 2,10 хв., | 0,7 мл/хв.

І 6-в РІС -БА0-| 24 Х 100 "| в 9595 Нг2О -- 595| до 095 А за 0,90 тт 3,5 «оо " ММ) СНнЗСМ ХВ., 55"

Омцацто 100 мм) в: СНСМ знову до 84,295 А 402с

Містотм мя за 0,73 хв., утримування протягом 0,73 хв.

Маїегв: , А: 10 мМ . о

Асдийує Тв СНЗСООМНа «Аз КД 0,5 мл/хв.

І6-о ОРІ Се - ОАО- "| (доведено до рн слзавохви со 5 . мкм, 2,1 х 50 утримування о

Асдціує ТО ММ) 10) протягом 1,5 хв 407 детектор В: СНзЗСМ " Й

Способи ЗЕС-М5

Вимірювання під час 5ЕС проводили із застосуванням аналітичної системи хроматографії з надкритичною рухомою фазою, укомплектованою бінарним насосом для доставки діоксиду вуглецю (СО2) і модифікатором, автоматичним дозатором, термостатом для колонок, детектором на діодній матриці, обладнаним проточною кюветою для роботи під високим тиском, що витримує значення до 400 бар. За умови оснащення мас-спектрометром (М5) потік із колонки спрямовували до (М5). У компетенції фахівця в даній галузі знаходиться встановлення настроюваних параметрів (наприклад, діапазону сканування, часу витримки тощо) з метою одержання йонів, що забезпечують визначення номінальної моноізотопної молекулярної ваги (МУ) сполуки. Збір даних здійснювали за допомогою відповідного програмного забезпечення.

Аналітичні способи 5ЕС-М5 (швидкість потоку, виражена в мл/хв.; температура колонки (Т) в"С; протитиск (ВРЕ) в барах).

Потік Час аналізу

Код способу Колонка Рухома фаза Градієнт тяттнтня птн

Т колонки ВРА 5095 В з З 7

МУНЕГ-К-О1 (5,5) 5 мкм А: СО

ЗЕС-А ! , утримуванням тя тя

Уся МБИШМЙШИ"| бибн ртуті | що

Колонка Оаїсе| д: СО» 4095 В з З 7

ЗЕС-В СпігаІракф ІС-Н (5 мкм, в: меОн утримуванням тя тя 150 х 4,6 мм) І 7 хв. 35 100 6095 В з З 9

МУНЕГ-К-О1 (5,5) 5 мкм А: СО

ЗЕо-б : , утримуванням тттнння тттнння со | МИШАХ" мн трутні хв

Колонка Оаїсе| д: СО» 5095 В з З 7

ЗЕС-0 СпігаІракф ІА-Н (5 мкм, в: меОн утримуванням тя ттяянння 250 х 4,6 мм) І 7 хв. 35 100 . (9) о

Колонка Оаїсеї в'КОн 10 й М "В за 2,5 9,5

ЗЕОС-Е Спігаїракф АЗЗ (3,0 мкм, бу/: й тятяння тятяння 150 х 4,6 мм) 0,296 ІРИМН» |утримуванням 40 110 " -395 НгО 3,5 хв.

Потік Час аналізу

Т колонки ВРА

Колонка Оаїсеї А: СО» 3095 В з З 7

ЗЕС-Е СпігаїракФф АБ-Н (5,0 В: ІРОН утримуванням тя тя мкм, 150 х 4,6 мм -0, Зо ІРТМН» 7 хв. 35 100

Точки плавлення

Значення являють собою або максимальні значення, або діапазони температур плавлення, і їх одержують з експериментальними похибками, які зазвичай пов'язані з даним аналітичним способом. рЗСО823е (позначений як ОС)

Для ряду сполук точки плавлення визначали за допомогою О5С823Зе (Мешег-ТоїІедо). Точки плавлення вимірювали з градієнтом температури 10 "С/хвилина. Максимальна температура становила 300 "С.

Кути оптичного обертання

Кути оптичного обертання вимірювали на поляриметрі Регкіп-ЕІтег 341 з натрієвою лампою і позначали наступним чином: |Ф12 (ХА, с г100 мл, розчинник, ТС).

ІФ" - (1000) / (І х с), де І означає довжину пробігу в дм і с означає концентрацію в г/100 мл для зразка при температурі Т (С) і довжині хвилі А (в нм). Якщо використовувана довжина хвилі світла становить 589 нм (О-лінія натрію), то замість цього можна використовувати символ 0.

Завжди необхідно наводити знак напрямку обертання (ж або -). У випадку застосування цього рівняння концентрацію і розчинник завжди наводять в круглих дужках після кута обертання. Кут обертання вказують у градусах, а одиниці концентрації не наводять (вважають, що вони виражені в г/100 мл).

Приклад 1. Синтез 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(б-фтор-1Н-індол-З-іл)-2-(З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 1) і хіральне розділення на енантіомери ТА і 18

КІ іКУ в дей щ зо Й той 5-й» й меш що дю до уки а и 3 щооовичивеу и ї В У р-н -- заоч подія веБАКУ Е Я тм Е Явні в пейльпізтод то пдедоктЇзгя 0 Й жк ше я 5 с -й хіральне розділення

У що ше Кк І; сдевевтвтееееееететеюненсняю ЕНОНТовери 1511 пРЛЬЕ Що М ши сНАЕТНЕ. МО, гігод тн ' й

Синтез проміжної сполуки Та 2-(4-Хлор-2-метоксифеніл)оцтову кислоту |(САБ 170737-95-81| (5,68 г, 28,9 ммоль) додавали невеликими порціями до тіонілхлориду (50 мл) і одержаний розчин перемішували протягом ночі при 60 "С. Розчинник концентрували при зниженому тиску і випарювали спільно з толуолом з одержанням 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)яуацетилхлориду та (6,5 г) у вигляді маслянистого залишку, який застосовували без додаткового очищення на наступній стадії.

Синтез проміжної сполуки 16

Додавали по краплях 1 М дієтилалюмінійхлорид у гексані (37,1 мл, 37,1 ммоль) при 0 "С до розчину 6-фтор-1Н-індолу |(ІСАЗ 399-51-9| (3,34 г, 24,76 ммоль) у СНеСі» (100 мл). За 30 хв. при 0 С розчин 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)ацетилхлориду Та (6,3 г, 28,76 ммоль) у СНоСі» (100 мл) повільно додавали при 0 "С. Реакційну суміш перемішували при 0 "С протягом З год. Додавали воду з льодом і осад відфільтровували, промивали водою та невеликою кількістю СНесСі».

Тверді речовини висушували під вакуумом при 70 "С протягом ночі з одержанням 2-(4-хлор-2- метоксифеніл)-1-(6-фтор-1 Н-індол-З3-іл)етанону 15 (4,9 г).

Синтез проміжної сполуки 1с

Додавали по краплях розчин триброміду фенілтриметиламонію |(САЗ 4207-56-1| при 0"С (5,8 г, 15,4 ммоль) у ТНЕ (65 мл) до суміші 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(б-фтор-1Н-індол-3-

іл)етанону 165 (4,9 г, 15,4 ммоль) у ТНЕ (60 мл). Суміш перемішували при 0 "С протягом 1 год. і при кімнатній температурі протягом 2,5 год. Осад відфільтровували і промивали за допомогою

ЕТАс. Об'єднані фільтрати концентрували при зниженому тиску. Залишок поглинали за допомогою ЕТОАс і промивали водою. В органічному шарі з'являвся осад і його відфільтровували та висушували з одержанням першої партії 2-бром-2-(4-хлор-2- метоксифеніл)-1-(6-фтор-1Н-індол-З-іл)уетанону 1с (4,6 г). Органічний шар відокремлювали, висушували над Ма5О5, фільтрували і розчинник випарювали при зниженому тиску. Залишок кристалізували з ЕІОАс, осад відфільтровували, промивали ЕСО і висушували під вакуумом з одержанням другої фракції 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(6-фтор-1Н-індол-З3-іл)уетанону 1с (1,6 г).

Синтез сполуки 1 і хіральне розділення енантіомерів ТЛ і 18

Суміш 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(б-фтор-1Н-індол-З-іл)оетанону с (3 г, 7,56 ммоль), З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліну ІСАБ 62606-02-4| (2,28 мг, 11,35 ммоль) і дізопропілетиламіну (1,95 мл, 11,35 ммоль) у СНІСМ (60 мл) і ТНЕ (30 мл) перемішували при 70 7С протягом 24 год. Реакційну суміш розбавляли Е(Ас. Органічний шар промивали 1 н. НСІ (двічі) та водою, висушували над Му5О»:, фільтрували і розчинник концентрували при зниженому тиску. Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі (15-40 мкм, 80 г, рухома фаза: СНоСіІг/Меон 99,5/0,5)3. Виконували друге очищення за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі (15-40 мкм, 80 г, рухома фаза: СНоСІг/Меон 99,7/0,3). Чисті фракції об'єднували та концентрували при зниженому тиску з одержанням 2-(4-хлор-2- метоксифеніл)-1-(6-фтор-1Н-індол-З-іл)-2-((З-метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 1, 2 г) у вигляді рацемічної суміші.

Енантіомери сполуки 1 розділяли за допомогою хіральної 5ЕС (нерухома фаза: Спігаїракт?

А0Р-Н 5 мкм 20 х 250 мм, рухома фаза: 5095 СО», 50906 МеонН) з одержанням 740 мг першого елюйованого енантіомеру та 720 мг другого елюйованого енантіомеру. Перший елюйований енантіомер кристалізували з СНЗСМ/ЕСО. Осад відфільтровували і висушували з одержанням енантіомеру ТА (645 мг). Другий елюйований енантіомер кристалізували з СНЗСМ/Е2гО. Осад відфільтровували і висушували з одержанням енантіомеру 18 (632 мг).

Сполука 1

Коо) ІН ЯМР (500 МГц, ОМ50О-ав) б ррт 3,09 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 4,00 (5, З Н) 6,24 (й, 9-7,9 Гц, 1

Н) 6,58 (5, 2 Н) 6,91 (5, 1 Н) 6,97 (а49, 9-8,7, 1,9 Гц, 1 Н) 7,02 - 7,09 (т, 2 Н) 7,12 (а, 9-1,9 Гц, 1 Н) 7,27 (да, 9-9,5, 1,9 Гц, 1 Н) 7,35 (а, У-8,5 Гц, 1 Н) 8,14 (ад, 9-8,7, 5,5 Гу, 1 Н) 8,44 (5, 1 Н) 12,10 (Бг. 5.,1 Н)

І.С/М5 (Спосіб ГС-С): В. 3,08 хв., МН" 517

Температура плавлення: 174 С

Енантіомер ТА

ІН ЯМР (500 МГц, ОМ5О-ав) 6 ррт 3,09 (в, З Н) 3,72 (в, З Н) 4,00 (в, З Н) 6,24 (й, У-7,9 Гц, 1

Н) 6,59 (5, 2 Н) 6,91 (5, 1 Н) 6,97 (аа, 9-8,68, 2,2 Гц, 1 Н) 7,02 - 7,10 (т, 2 Н) 7,12 (а, 9-22 Гц, 1 Н) 7,27 (аа, 9-96, 2,2 Гу, 1 Н) 7,35 (9, 9-82 Гц, 1 Н) 8,14 (да, 2-8,8, 5,7 Гц, 1 Н) 8,44 (5,1 Н) 1210 (Бг. 5.,1 Н)

І.С/М5 (Спосіб ГС-С): Вк 3,09 хв., МН" 517

ІФо2о: 130,32 (с 0,277, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб БЕС-0): Ве 3,41 хв., МН" 517, хіральна чистота 10095.

Температура плавлення: 220 С

Енантіомер 18

І"Н ЯМР (400 МГц, ОМ5О-дв) б ррт 3,09 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 4,00 (в, З Н) 6,24 (й, 9-76 Гц, 1

Н) 6,53 - 6,65 (т, 2 Н) 6,91 (5, 1 Н) 6,97 (аа, 9-8,6, 2,0 Гу, 1 Н) 7,01 - 7,09 (т, 2 Н) 7,12 (й, 9-2,0

Гц, 1 Н) 7,27 (да, 2-9,6, 2,0 Гц, 1 Н) 7,35 (а, 9-81 Гц, 1 Н) 8,14 (ад, 9-86, 5,6 Гц, 1 Н) 8,43 (5,1 Н) 12,09 (Брг. в5., 1 Н)

І.С/М5 (Спосіб ГС-С): Вк 3,09 хв., МН" 517

ІФого: -135,37 (с 0,283, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб БЕС-0): В. 4,89 хв., МН" 517, хіральна чистота 99,35965.

Температура плавлення: 2187

Приклад 1,1. Хіральна стійкість енантіомеру 1А при рН 7,4

Хіральну стійкість енантіомеру ТА (К - ОМе) оцінювали шляхом визначення енантіомерного надлишку (е.н.9У5) після інкубування протягом 24 год. і 48 год. у буферному розчині при рН 7,4 при 40 "С і 60 "С. Для оцінки впливу метокси-замісника енантіомеру 1А (К - ОМе) на стійкість до рацемізації тестували хіральну стійкість енантіомеру ТА (К - Н) за тих самих умов.

З даною метою одержували 5 мкМ буферні (рН-7,4) розчини ТА ії ТА за допомогою 60 змішування 25 мкл 100 мкМ розчину ТА або ТА в ЮОМ5О з 475 мкл водного буфера рН 7,4.

Зразки поміщали на 24 год. і 48 год. після інкубування при 40 "С і 60 "С. Аналітичні зразки аналізували за допомогою хіральної ЕС (визначення М5) і хіральну чистоту виражали як енантіомерний надлишок (е.н.Уо - Уеенантіомеру А - 9енантіомеру В). Обидва енантіомери ТА і

ТА до їх інкубування характеризувалися хіральною чистотою 10095.

СІ

У в-

О, ж м

Х 28- ї сь

Р Н

1А (К - ОМе)

ТА (КН)

Сполука Температура Моменти часу відбору проб (год.)

ТА

ТА нт а о о о

Приклад 2. Синтез 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(6-фтор-7-метил-1Н-індол-З3-іл)-2-((3- метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 2) і хіральне розділення на енантіомери 2А і 28

А р с ср тюй ш-й ей ел ше « йо ; . й ох ет т Й тв бу ще Ву пр

І А вх й в. й (г й ПН хі

Е Її я пеАКу че шк тек, од к- как сно, с З гол, й 7 па та тв нен й п ЗК я Хіральне розділення Ензнтіомери зд ЗВ нин сти ДАК снаеМ. Те В і Бе -й

КВкроканявове ЗВ рУбУКакнауі мн в ЖЕ -м з - З

НЕ, 5 хе: ї М

Синтез проміжної сполуки 2а

Додавали по краплях 1 М дієтилалюмінійхлорид у гексані (20 г, 20,0 ммоль) при 0 "С до розчину 6-фтор-7-метил-1 Н-індолу |(СА5 57817-10-4| (1,50 г, 10,1 ммоль) у СНеСіг (45 мл). Через 30 хв. при 0 "С повільно додавали розчин 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)ацетилхлориду (3,30 г, 15,1 ммоль, синтез: див. приклад 1) у дихлорметані (30 мл). Реакційну суміш перемішували при 0 С протягом З год. Потім додавали 1 М розчин сегнетової солі (50 мл) і реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 1 год. Тверді речовини відфільтровували та розподіляли між ЕОАс і 1 н. НСІ. Фази розділяли. Водну фазу екстрагували за допомогою

ЕАс. Органічні фази об'єднували, промивали сольовим розчином, висушували над Ма5Оха, фільтрували і концентрували при зниженому тиску. Залишок розтирали в порошок з ЕІЮАС і гептаном. Осад відфільтровували з одержанням 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(б-фтор-7-метил- 1Н-індол-З3-іл)етанону га (2,00 г).

Синтез проміжної сполуки 25

Додавали по краплях при 0 "С розчин триброміду фенілтриметиламонію (ІСА5 4207-56-11 (2,49 г, 6,6 ммоль) у ТНЕ (45 мл) до розчину 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(б-фтор-7-метил-1 Н- індол-З-іл)/етанону 2а (2,00 г, 6,0 ммоль) у ТНЕ (65 мл). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ночі. Осад відфільтровували і промивали за допомогою ЕОАс. Об'єднані фільтрати концентрували при зниженому тиску. Залишок поглинали за допомогою мінімальної кількості ацетонітрилу. Осад відфільтровували, промивали ацетонітрилом і висушували під вакуумом з одержанням першої партії 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(6-фтор-7-метил-1 Н- індол-З-іл)уетанону 25 (1,51 г). Фільтрат концентрували при зниженому тиску. Залишок поглинали за допомогою мінімальної кількості ацетонітрилу. Осад відфільтровували, промивали ацетонітрилом і висушували під вакуумом з одержанням другої фракції 2-бром-2-(4-хлор-2- метоксифеніл)-1-(6-фтор-7-метил-1 Н-індол-З3-іл)/етанону 25 (0,70 г).

Синтез сполуки 2 і хіральне розділення енантіомерів 2А і 28

Суміш 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(6-фтор-7-метил-1Н-індол-З-іл)уетанону 26 (1,8 г, 4,36 ммоль) і З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліну (СА5 62606-02-4) (2,6 г, 13,0 ммоль) у ТНЕ (9 мл) і СНІСМ (9 мл) нагрівали під дією мікрохвильового випромінювання при 100 "С протягом 50 хв. Реакційну суміш розбавляли ЕІОАс і промивали 1 н. НСІ. Фази розділяли. Органічну фазу промивали водним насиченим розчином Мансоз і сольовим розчином, висушували над Ма5О», фільтрували та концентрували при зниженому тиску. Залишок поглинали за допомогою мінімальної кількості ацетонітрилу. Осад відфільтровували, промивали ацетонітрилом і висушували під вакуумом з одержанням 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(6-фтор-7-метил-1Н-індол-

З-іл)-2-((З-метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполуки 2, 1,7 г) у вигляді рацемічної суміші.

Хіральне розділення енантіомерів сполуки 2 (1,59 г) здійснювали за допомогою

Зо препаративної 5ЕС (нерухома фаза: (5,5)-М/пеіКк-О1 5 мкм 250 х 21,1 мм, рухома фаза: 5095

Со», 5095 Меон). Фракції, що містять продукт, об'єднували і випарювали при зниженому тиску.

Перший елюйований енантіомер (746 мг) додатково очищали за допомогою колонкової хроматографії на силікагелі (15-40 мкм, 24 г, рухома фаза: СН-СІг/Меон 99,5/0,5). Чисті фракції об'єднували і випарювали при зниженому тиску (560 мг). Залишок отверджували за допомогою розтирання із сумішшю ЕСО і декількох крапель СНІзСМ. Тверді речовини відфільтровували і висушували під вакуумом з одержанням енантіомеру 2А (473 мг). Другий елюйований енантіомер (732 мг) додатково очищали за допомогою колонкової хроматографії на силікагелі (15-40 мкм, 24 г, рухома фаза: СН»СІг/Меон 99,5/0,5). Чисті фракції об'єднували і випарювали при зниженому тиску (550 мг). Залишок отверджували за допомогою розтирання із сумішшю

ЕСО і декількох крапель СНІСМ. Тверді речовини відфільтровували і висушували під вакуумом з одержанням енантіомеру 2В (457 мг).

Сполука 2

І"Н ЯМР (300 МГц, ОМ5О-дв) б ррт 2,38 (9, 9У-1,5 Гц, З Н) 3,10 (5, З Н) 3,73 (5, З Н) 4,01 (5, З

НІ 6,27 (а, 9-7,9 Гц, 1 Н) 6,55 - 6,63 (т, 2 Н) 6,93 (т, 1 Н) 6,94 - 7,09 (т, З Н) 7,13 (а, 9-1,9 Гц, 1

Н) 7,35 (а, 9У-8,3 Гц, 1 Н) 7,97 (да, У-8,7, 5,3 Гц, 1 Н) 8,45 (5, 1Н) 12,23 (Брг. 5, 1 Н)

І С/М5 (Спосіб І С-0): В: 1,68 хв., МН" 531

Енантіомер 2А

ІН ЯМР (500 МГц, ОМ50-дв) 5 ррт 2,397 - 2,39 (т, З Н) 3,09 (в, З Н) 3,72 (5, З Н) 4,01 (в, З Н) 6,26 (а, 97,9 Гу, 1 Н) 6,54 - 6,63 (т, 2 Н) 6,92 (5, 1 Н) 6,97 (ай, 9У-8,4, 1,9 Гу, 1 Н) 7,02 (да, 9-9,9, 9,0 Гц, 1 Н) 7,07 (а, 9-7,9 Гц, 1 Н) 7,13 (а, 9-1,9 Гц, 1 Н) 7,35 (й, 9-84 Гу, 1 Н) 7,96 (аа, 9-8,5, 5,4

Гц, 1 Н) 8,45 (5, 1 Н) 12,24 (бБг. 5., 1 Н)

І.С/М5 (Спосіб ГС-С): Ве 3,20 хв., МН" 531

Іо: 104,57 (с 002545, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5БЕС-А): В: 4,22 хв., МН" 531, хіральна чистота 10095.

Енантіомер 28

І"Н ЯМР (500 МГц, ОМ5О-ав) 6 ррт 2,36 - 2,41 (т, З Н) 3,09 (в, З Н) 3,72 (в, З Н) 4,01 (5, З Н) 6,26 (а, 9-7,9 Гц, 1 Н) 6,57 - 6,64 (т, 2 Н) 6,92 (5, 1 Н) 6,97 (а9, 9У-8,2, 1,9 Гу, 1 Н) 6,99 - 7,04 (т, 1

Н) 7,07 (а, 97,9 Гц, 1 Н) 7,13 (й, 9-1,9 Гу, 1 Н) 7,35 (а, 9-8,2 Гц, 1 Н) 7,96 (ай, 9-8,7, 5,2 Гц, 1 Н) 8,45 (5, 1 Н) 12,24 (рг. 5., 1 Н) (510) І.С/М5 (Спосіб ГС-С): Ве 3,20 хв., МН" 531

ІФо-о: -104,17 (с 02536, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5ЕС-А): В, 5,12 хв., МН" 531, хіральна чистота 99,53965.

Приклад 3. Синтез 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(6-метокси-1Н-індол-3-іл)-2-(З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 3) і хіральне розділення на енантіомери ЗА і ЗВ во щи в ШИ Метт ї З чі -е ще 1 путем тк Її й о ИН: пре й прог м - ка т ВКМ, МАНИМОї . ря сл ЧЕМ ме вся тк й-ооокаідніо зо ОМевідвсдокт тд зо ше з у одне ї В в ї і схили ков у ма ! їй дюн Ж дісксан, вода ей ТНЕ, 0 С.,4 год., : Її Я ? ба с,агоди Ос год. ЖЖ кот. 4,5 год, ромевт я ТИ

ЖЖ ни з: за ва ФО й Жральне розділення нення етно ри й Ї Яни ред Енаніомери ЗА 38 смушн, во ЗТ ГФфЬ ноту шк

Синтез проміжної сполуки За

Розчин Манзоз (5,7 г, 54,5 ммоль) у воді (45 мл) додавали до перемішуваного розчину трет- бутил-3-форміл-б-метокси-1Н-індол-1-карбоксилату |(СА5 847448-73-1| (10 г, 36,3 ммоль) у діоксані (45 мл). Через 15 хв. додавали морфолін (4,8 мл, 54,5 ммоль) і через 35 хв. додавали ціанід натрію (Масм) (1,96 г, 40 ммоль). Одержану в результаті суспензію перемішували при кімнатній температурі протягом З днів до завершення реакції. Продукт відфільтровували і промивали сумішшю 1/1 діоксан/вода (Зх 35 мл) і потім водою (Зх 45 мл), і висушували під вакуумом при 60 "С. Тверді речовини збовтували в ЕСО (125 мл), відфільтровували, промивали за допомогою ЕС2О (3 х) і висушували під вакуумом при 50 "С з одержанням трет-бутил-3- (ціано(морфоліно)метил)-б-метокси-1 Н-індол-1-карбоксилату За (12,3 г).

Синтез проміжної сполуки ЗБ

Суміш трет-бутил-3-(ціано(морфоліно)метил)-6-метокси-1Н-індол-1-карбоксилату За (6,0 г, 16,2 ммоль) у сухому ОМЕ (80 мл) перемішували в атмосфері М2 при охолодженні на льодяній бані. Додавали по краплях розчин 0,5 М КНМОЗ5 у толуолі (35,5 мл, 17,8 ммоль) протягом 10 хв.

Після перемішування протягом додаткових 10 хв. додавали 4-хлор-1-(хлорметил)-2- метоксибензол ІСАЗ 101079-84-9| (3,09 г, 16,2 ммоль) і одержану в результаті суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 20 год. Реакційну суміш виливали в холодну воду (400 мл) і продукт екстрагували за допомогою ЕТО (2х). Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином, висушували над Мо95О»., фільтрували, випарювали при зниженому тиску і випарювали спільно з ксилолом. Залишок очищали за допомогою флеш- хроматографії (нерухома фаза: силікагель сгасе КемеїегізФ 120 г, рухома фаза: гептан/Ег!ОАс,

Зо градієнт від 100/0 до 20/80). Потрібні фракції об'єднували, випарювали при зниженому тиску та випарювали спільно з діоксаном з одержанням трет-бутил-3-(2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-ціано- 1-морфоліноетил)-6-метокси-1Н-індол-1-карбоксилату ЗЬ (7,75 г).

Синтез проміжної сполуки Зс

До перемішуваної суспензії трет-бутил-3-(2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-ціано-1- морфоліноетил)-6-метокси-1Н-індол-1-карбоксилату ЗБ (7,75 г, 14,7 ммоль) у діоксані (40 мл) і воді (20 мл) додавали розчин НСІ 6 М в ізопропанолі (36,8 мл, 220 ммоль). Одержану в результаті суміш перемішували при 60 "С протягом 4 год. і потім при 80 "С протягом 1 год. Після охолодження до кімнатної температури суміш залишали на 20 год. для забезпечення кристалізації продукту реакції. Продукт відфільтровували, промивали сумішшю 1/1/1

ІРОН/НгО/діоксан (2 х 15 мл) і висушували під вакуумом при 50 "С з одержанням 2-(4-хлор-2- метоксифеніл)-1-(6-метокси-1 Н-індол-З-іл)етанону Зс (3,67 г).

Синтез сполуки З і хіральне розділення енантіомерів ЗА і ЗВ

Перемішувану суміш 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(6-метокси-1Н-індол-з-іл)етанону Зс (2 г, 6,07 ммоль) у ТНЕ (80 мл) охолоджували на льодяній бані в атмосфері М». Додавали трибромід фенілтриметиламонію ІСА5 4207-56-11 (2,39 г, 6,37 ммоль) і перемішували реакційну суміш при 0 "С протягом 1 год., а потім при кімнатній температурі протягом 1,5 год. Додавали З3-метокси-5- (метилсульфоніл)анілін (СА 62606-02-4| (3,66 г, 18,2 ммоль) і випарювали розчинник при зниженому тиску. Залишок розчиняли в СНзСМ (100 мл). Додавали діїзопропілетиламін (2,09 мл, 12,1 ммоль) і нагрівали реакційну суміш при 55 "С протягом 27 год. Забезпечували охолодження реакційної суміші до кімнатної температури і виливали у воду з перемішуванням (400 мл).

Продукт екстрагували за допомогою 2-МетНЕ (2х). Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином, висушували над Ма5О5, фільтрували і випарювали при зниженому тиску.

Залишок (8 г) очищали за допомогою флеш-хроматографії (нерухома фаза: силікагель Сгасе

КемеїегієФ 120 г, рухома фаза: гептан/Е(ОАс, градієнт від 100/0 до 0/100). Потрібні фракції об'єднували і випарювали при зниженому тиску. Залишок (5,4 г) додатково очищали за допомогою препаративної НРІ С (нерухома фаза: КР ХВгідде? Ргер С18 ОВО - 10 мкм, 50 х 150 мм, рухома фаза: 0,2595 розчин МНАНСОз у воді, СНзСМ). Фракції, що містять продукт, об'єднували і випарювали при зниженому тиску, а потім випарювали спільно з МеОН. Залишок кристалізували із суміші ЕЮАс (15 мл), СНІСМ (2 мл) і Меон (2 мл). Тверді речовини відфільтровували, промивали за допомогою ЕОАс (З х) і висушували під вакуумом при 50 "С з одержанням 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(6-метокси-1 Н-індол-З3-іл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 3, 681 мг) у вигляді рацемічної суміші.

Хіральне розділення енантіомерів сполуки З (0,63 г) здійснювали за допомогою хірального розділення з використанням нормальної фази (нерухома фаза: А5 20 мкм, рухома фаза: 10095 метанол). Фракції, що містять продукт, об'єднували і випарювали при зниженому тиску. Перший елюйований енантіомер очищали за допомогою колонкової хроматографії (нерухома фаза: силікагель Сгасе КемеїегізФ 12 г, рухома фаза: гептан/кі(ОАсС/ЕЮН, градієнт від 100/0/0 до 40/45/15). Потрібні фракції об'єднували, випарювали, а потім випарювали спільно з ЕОАс.

Масло, що залишилось, отверджували шляхом перемішування в Н2гО (4 мл) і повільного додавання Меон (1,6 мл). Після перемішування протягом 20 хвилин продукт відфільтровували, промивали (Зх) сумішшю 1/2 Меон/нго і висушували під вакуумом при 50 "С з одержанням енантіомеру ЗА (168 мг) у вигляді аморфної твердої речовини. Другий елюйований енантіомер очищали за допомогою флеш-хроматографії (нерухома фаза: силікагель сгасе КемеїегізФ 12 г, рухома фаза: гептан/Е(Ас/ЕЮН, градієнт від 100/0/0 до 40/45/15). Потрібні фракції об'єднували, випарювали при зниженому тиску і випарювали спільно з ЕТОАс. Піну, що залишилась, отверджували шляхом перемішування в НегО (4 мл) і повільного додавання МЕеОН (2 мл). Після перемішування протягом 15 хвилин продукт відфільтровували, промивали (зх) сумішшю 1/2 Меон/нго і висушували при 50 "С під вакуумом з одержанням енантіомеру ЗВ (146 мг) у вигляді аморфної твердої речовини.

Сполука З "Н ЯМР (400 МГц, ОМ5О-4дв) б ррт 3,09 (в, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,77 (в, З Н) 4,01 (в, З Н) 6,21 (а, уеТ7,9 Гу, 1 Н) 6,54 - 6,64 (т, 2 Н) 6,83 (09, 9-8,7, 2,3 Гц, 1 Н) 6,91 (І, 9-1,4 Гу, 1 Н) 6,94 - 6,99 (т, 2 Н) 7,04 (а, 9-7,7 Гц, 1 Н) 7,12 (а, 9-52,0 Гц, 1 Н) 7,35 (а, 9-81 Гу, 1 Н) 8,02 (а, 9-8,8 Гц, 1 Н) 8,30 (5, 1 Н) 11,84 (5, 1 Н) І С/М5 (Спосіб І С-А): Ві 1,20 хв., МН" 529

Енантіомер ЗА "Н ЯМР (360 МГц, ОМ50О-ав) 6 ррт 3,09 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,77 (5, З Н) 4,01 (5, З Н) 6,22 (й, уе8И Гу, 1 Н) 6,55 - 6,61 (т, 2 Н) 6,84 (9, 9У-8,8, 2,2 Гц, 1 Н) 6,91 (І, 9-1,8 Гу, 1 Н) 6,94 - 7,00 (т, 2 Н) 7,07 (а, 97,0 Гц, 1 Н) 7,13 (а, 9-1,8 Гц, 1 Н) 7,35 (а, 9-8,4 Гу, 1 Н) 8,02 (а, 9-8,8 Гц, 1 Н) 8,32 (9, 9-2,9 Гц, 1 Н) 11,87 (а, 9-2,6 Гц, 1 Н)

І С/М5 (Спосіб І С-А): В: 1,08 хв., МН" 529

ІФЧого: 134,92 (с 0,545, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб БЕС-Е): В: 4,31 хв., МН" 529, хіральна чистота 10095.

Енантіомер ЗВ "Н ЯМР (360 МГц, ОМ5О-4дв) б ррт 3,09 (в, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,77 (в, З Н) 4,01 (в, З Н) 6,21 (а, 9-81 Гу, 1 Н) 6,54 - 6,62 (т, 2 Н) 6,83 (ай, У-8,6, 2,4 Гц, 1 Н) 6,91 (1, 9-1,5 Гц, 1 Н) 6,94 - 6,99 (т, 2 Н) 7,07 (а, 9-7,0 Гц, 1 Н) 7,13 (а, 9-1,8 Гц, 1 Н) 7,35 (а, 9-81 Гц, 1 Н) 8,02 (а, 9У-8,8 Гц, 1 Н) 8,32 (510) (а, 9-29 Гц, 1 Н) 11,87 (бг а, 9-22 Гц, 1 Н)

І С/М5 (Спосіб І С-А): В: 1,08 хв., МН" 529

ІФЧого: -116,77 (с 0,51, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб БЕС-Е): В: 4,63 хв., МН" 529, хіральна чистота 94,7965.

Приклад 4. Синтез 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(б-метокси-5-метил-1Н-індол-З-іл)етанону (сполука 4) і хіральне розділення на енантіомери 4А і 48 : Не а

А ее У , ой їх Ше - М Кт? сирих о, М ІЙ з о І СА кит ї шо іш ші Ве й та веАісї зом ІМ: зален сесії о З год, й пс годи кт, ВК код, й

Ай «Б 7 в

А Я шт

Ї І а А ей ат ва май ВИ як, ш й . М - ня ві ки Крольне розділення вні Енантіомерн 44 і 46

СЕРЕ ши пошеві Її В снасма не Я, тод, Ма

Синтез проміжної сполуки 4а

Додавали по краплях 1 М дієтилалюмінійхлорид у гексані (13,5 мл, 13,5 ммоль) при 0 "С до розчину б-метокси-5-метил-1Н-індолу |(СА5 1071973-95-9| (1,45 г, 9 ммоль) у СНеСіг (45 мл).

Через 30 хв. при 0 "С повільно додавали розчин 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)ацетилхлориду Та (2,4 г, 10,9 ммоль) у СНеСі»г (45 мл) при 0 "С. Реакційну суміш перемішували при 0 "С протягом З год. Додавали воду з льодом і осад відфільтровували та промивали водою. Тверду речовину висушували під вакуумом з одержанням 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(6-метокси-5-метил-1 Н- індол-З-іл)етанону 4а (2,1 г).

Синтез проміжної сполуки 4Б

Додавали по краплях при 0 "С розчин триброміду фенілтриметиламонію (ІСА5 4207-56-11 (2,4 г, 6,4 ммоль) у ТНЕ (65 мл) до суміші 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(6-метокси-5-метил-1 Н- індол-З-іл)етанону 4а (2,1 г, 6,1 ммоль) у ТНЕ (60 мл). Суміш перемішували при 0 "С протягом 1 год. і при кімнатній температурі протягом 2,5 год. Осад відфільтровували і промивали за допомогою ЕАс. Фільтрат концентрували при зниженому тиску. Залишок поглинали за допомогою мінімальної кількості дізопропілового етеру. Осад відфільтровували і висушували під вакуумом з одержанням 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(б-метокси-5-метил-1Н-індол-3- іл)етанону 45 (2,36 г).

Синтез сполуки 4 і хіральне розділення енантіомерів 4А і 48

Суміш 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(6-метокси-5-метил-1 Н-індол-З3-іл)уетанону 45 (4,0

Зо г, 9,46 ммоль), З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліну (СА5 62606-02-4) (2,86 г, 14,2 ммоль) і дізопропілетиламіну (2,44 мл, 14,2 ммоль) у СНІСМ/ТНЕ (1/1) (100 мл) перемішували при 4570 протягом 72 год. Розчинники видаляли при зниженому тиску. Залишок розчиняли в ЕОАс.

Органічний шар двічі промивали 1 н. НСІ, промивали водою, висушували над Мазох, фільтрували і концентрували при зниженому тиску. Сполуку кристалізували з

СНасСМ/діїзопропілового етеру з одержанням /2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-2-((3З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(6-метокси-5-метил-1 Н-індол-3-іл)уетанону (сполука 4, 1,1 г) у вигляді рацемічної суміші.

Хіральне розділення енантіомерів сполуки 4 здійснювали за допомогою препаративної хіральної 5ЕС (нерухома фаза: (5,5)-М/пеіКк-О1 5 мкм 250 х 21,1 мм, рухома фаза: 4595 СО», 5596 МеонН) з одержанням 500 мг першого елюйованого енантіомеру і 531 мг другого елюйованого енантіомеру. Перший елюйований енантіомер кристалізували з СНзСМ/ЕРО з одержанням енантіомеру 4А (401 мг). Другий елюйований енантіомер кристалізували з

СНіІСМ/ЕБО з одержанням енантіомеру 48 (396 мг).

Сполука 4

І"Н ЯМР (500 МГц, ОМ50О-ав) б ррт 2,21 (5, З Н) 3,09 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,79 (5, З Н) 4,01 (5,

З Н) 6,20 (а, 9-7,9 Гц, 1 Н) 6,58 (5,2 Н) 6,88 - 6,93 (т, 2 Н) 6,96 (аа, У-8,5, 1,9 Гц, 1 Н) 7,02 (а, уУ7,9 Гу, 1 Н) 7,12 (а, 9-1,9 Гц, 1 Н) 7,34 (а, 9-8,5 Гц, 1 Н) 7,89 (5, 1 Н) 8,24 (5, 1 Н) 11,78 (бБг. 5.,1

Н)

Ї С/М5 (Спосіб І С-0): В; 3,16 хв., МН" 543

Температура плавлення: 2087

Енантіомер 4А "Н ЯМР (500 МГц, ОМ5О-дв) б ррт 2,21 (в, З Н) 3,09 (в, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,79 (в, З Н) 4,01 (в,

З Н) 6.20 (а, 90-7,6 Гц, 1 Н) 6,58 (а, 9У-1,6 Гц, 2 Н) 6,87 - 6,93 (т, 2 Н) 6,96 (аа, У-8,2, 1,9 Гц, 1 Н) 7,02 (а, 9-76 Гц, 1 Н) 7,12 (а, 9-1,9 Гу, 1 Н) 7,34 (а, 9У-8,2 Гц, 1 Н) 7,89 (5, 1 Н) 8,25 (5, 1 Н) 11,78 (Бг. 5.,1 Н)

Ї С/М5 (Спосіб І С-0): В; 3,15 хв., МН" 543

ІФого: я141,87 (с 0,3936, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб БЕС-О): В. 4,95 хв., МН" 543, хіральна чистота 10095.

Температура плавлення: 173 С

Енантіомер 48

ІН ЯМР (500 МГц, ОМ50О-дв) 6 ррт 2,21 (5, З Н) 3,09 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,79 (5, З Н) 4,01 (в,

З Н) 6,20 (а, 9-7,9 Гц, 1 Н) 6,58 (5,2 Н) 6,88 - 6,93 (т, 2 Н) 6,96 (аа, У-8,2, 1,9 Гц, 1 Н) 7,02 (а, уУ7,9 Гу, 1 Н) 7,12 (а, 9-1,9 Гц, 1 Н) 7,34 (а, 9-82 Гц, 1 Н) 7,90 (5, 1 Н) 8,25 (5, 1 Н) 11,79 (бБг. 5.,1

Н)

Ї С/М5 (Спосіб І С-С): В 3,15 хв., МН" 543

ІФо-о: -142,27 (с 0,3909, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5БЕС-0): В. 6,84 хв., МН" 543, хіральна чистота 10095.

Температура плавлення: 174 "С

Приклад 5. Синтез 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(5-фтор-6б-метокси-1Н-індол-3-іл)-2-((3- метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 5) і хіральне розділення на енантіомери 5А і 5В

Й «З с т ск о І и й о шо :

Р. Клим, Я - І як Як те а, я ЗА ОХ Є -- Н лях Еш оч Кі ЗЕ зал у ЕБАКІ зе двкеці тне зд айву снась пох год; Й п й с, 1 годе Кк Та 4 год. в

Ба БВ

ЩО Р г А . я я

Ї й а Ж а

Ва пев пр Па Хіральне розділення нн Ред МА Енантіомери ЗА В пед що ох

Зо СВТ. БОС 10 днів і в

Синтез проміжної сполуки 5а

Додавали по краплях 1 М дієтилалюмінійхлорид у гексані (15,7 мл, 15,7 ммоль) при 0 "С до розчину 5-фтор-6-метокси-1Н-індолу |(САЗ 1211595-72-0) (2 г, 12,1 ммоль) у СНоСїі» (50 мл).

Через 30 хв. при 0 "С повільно додавали розчин 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)ацетилхлориду Та (3,2 г, 14,6 ммоль) у СНесСі»г (50 мл) при 0 "С. Реакційну суміш перемішували при 0 "С протягом З год. Додавали воду з льодом і осад відфільтровували, промивали водою та за допомогою мінімальної кількості СН2СіІ». Тверду речовину висушували під вакуумом з одержанням 2-(4- хлор-2-метоксифеніл)-1-(5-фтор-6-метокси-1 Н-індол-З3-іл)етанону 5а (2,82 г).

Синтез проміжної сполуки 5Б

Додавали по краплях при 0 "С розчин триброміду фенілтриметиламонію (ІСА5 4207-56-11 (3,5 г, 8,1 ммоль) у ТНЕ (20 мл) до розчину 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(5-фтор-6-метокси-1 Н-

індол-З-іл)етанону 5а (2,82 г, 8,1 ммоль) у ТНЕ (46 мл). Суміш перемішували при 0 "С протягом 1 год. і при кімнатній температурі протягом 4 год. Осад відфільтровували і промивали за допомогою ЕОАс. Фільтрат концентрували при зниженому тиску. Залишок розчиняли в Е(Ас і промивали водою. Органічну фазу висушували над МоеБзО»., фільтрували і розчинник випарювали при зниженому тиску. Залишок поглинали за допомогою мінімальної кількості

ЕЮАс. Осад відфільтровували і висушували під вакуумом з одержанням 2-бром-2-(4-хлор-2- метоксифеніл)-1-(5-фтор-б-метокси-1Н-індол-З-іл)етанону 56 (2,5 г).

Синтез сполуки 5 і хіральне розділення енантіомерів 5А і 5В

Суміш 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(5-фтор-6-метокси-1Н-індол-З-іл)етанону 556 (2,5 г, 5,86 ммоль), З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліну (ІСА5 62606-02-4) (1,415 г, 7,03 ммоль) і дізопропілетиламіну (1,515 мл, 8,79 ммоль) у СНІСМ (55 мл) і ТНЕ (100 мл) перемішували при 50 "С протягом 10 днів. Розчинники видаляли при зниженому тиску. Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі (15-40 мкм, 80 г, рухома фаза: СНгСІ/СнНЗОнН 99,25/0,75). Чисті фракції об'єднували і випарювали. Сполуку розчиняли в ЕОАс і перемішували з 1 н. НСІ протягом 15 хв. З'являвся осад і його відфільтровували та висушували під вакуумом з одержанням 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(5-фтор-6б-метокси-1 Н-індол-З-іл)-2-((3- метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 5, 1,3 г) у вигляді рацемічної суміші.

Хіральне розділення енантіомерів сполуки 5 здійснювали за допомогою препаративної хіральної ЕС (нерухома фаза: Спігаіракф ІС 5 мкм, 250 х 20 мм, рухома фаза: 5595 СО», 4595

Меон). Фракції, що містять продукт, об'єднували і випарювали. Перший елюйований енантіомер отверджували шляхом розтирання за допомогою гептану/діїззопропілового етеру.

Тверді речовини відфільтровували і висушували під вакуумом з одержанням енантіомеру 5А (502 мг) у вигляді аморфного білого порошку. Другий елюйований енантіомер отверджували шляхом розтирання за допомогою гептану/дізопропілового етеру. Тверді речовини відфільтровували і висушували під вакуумом з одержанням енантіомеру 58 (490 мг) у вигляді аморфного білого порошку.

Сполука 5

ІН ЯМР (500 МГц, ОМ50О-дв) б ррт 3,09 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,85 (5, З Н) 4,00 (5, З Н) 6,21 (а, уУ7,9 Гц, 1 Н) 6,58 (а, 9-1,3 Гц, 2 Н) 6,90 (5, 1 Н) 6,97 (да, 9-82, 1,9 Гц, 1 Н) 7,06 (й, 9-7,9 Гу, 1

Зо Н) 7,10 - 7,18 (т, 2 Н) 7,34 (а, 9-8,2 Гу, 1 Н) 7,82 (й, 9-12,0 Гц, 1 Н) 8,35 (5, 1 Н) 11,98 (бБг. 5., 1 Н)

І.С/М5 (Спосіб ГС-С): Вк 3,01 хв., МН" 547

Температура плавлення: 1827

Енантіомер 5А "Н ЯМР (500 МГц, ОМ5О-адв) б ррт 3,09 (в, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,85 (5, З Н) 4,00 (5, З Н) 6,21 (а, 9У-7,9 Гц, 1 Н) 6,58 (9, 9У-1,3 Гц, 2 Н) 6,90 (5, 1 Н) 6,97 (да, 9-82, 2,0 Гц, 1 Н) 7,07 (а, 9-7,9 Гц, 1

Н) 7,11 - 7,17 (т, 2 Н) 7,34 (а, 9-8,2 Гц, 1 Н) 7,682 (й, 9-11,7 Гц, 1 Н) 8,35 (5, 1 Н) 11,98 (Брі. 5., 1 Н)

І.С/М5 (Спосіб ГС-С): Вк 3,00 хв., МН" 547 (Фо: 136,42 (с 0,28, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5ЕС-В): Вк 3,43 хв., МН" 547, хіральна чистота 10095.

Енантіомер 5В

ІН ЯМР (500 МГц, ОМ50О-дв) б ррт 3,09 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,85 (5, З Н) 4,00 (5, З Н) 6,21 (а, уУе7,9 Гц, 1 Н) 6,58 (а, 9-1,3 Гц, 2 Н) 6,90 (5, 1 Н) 6,97 (да, 9-8,2, 2,0 Гц, 1 Н) 7,07 (а, 9-7,9 Гу, 1

Н) 7,11 - 7,19 (т, 2 Н) 7,34 (а, 9-8,2 Гу, 1 Н) 7,82 (й, 9-11,7 Гц, 1 Н) 8,35 (5, 1 Н) 11,95 (бБг. 5., 1 Н)

І.С/М5 (Спосіб ГС-С): Вк 3,00 хв., МН" 547

ІФого: -126,37 (с 02755, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5ЕС-В): В: 4,80 хв., МН" 547, хіральна чистота 98,06965.

Приклад 6. Синтез 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(6-метокси-7-метил-1Н-індол-З-іл)етанону (сполука 6) і хіральне розділення на енантіомери 6А і 6В с СІ 4 Кк ц я, ! . Гак - А ШІ й і: р щі и чий Ї 2 орні ра ЧИ й Та з Ц й Ву пу де зала где й и чне що ши

Ї Н ЕБАКІ зем НУ чули

ОНосСЬ СТ гоДеКНО ГОД! 070000 відесдокт. г год. я ва що я а Ге д- вияв і лі Ви кА що Й птн сла ОКО Ме роеННЯрнзнуіоцерн А ГЕ

СЕЖА АХ ее с ее ен ВИ ВИН:

Синтез проміжної сполуки ба 5 Додавали по краплях 1 М діетилалюмінійхлорид у гексані (32,8 мл, 32,8 ммоль) до охолодженого (-30 С) розчину б-метокси-7-метил-1Н-індолу |(ІСА5 19500-05-1| (3,53 г, 21,9 ммоль) у СНоСі» (150 мл). Після перемішування протягом 15 хв. при -30 "С повільно додавали розчин 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)ацетилхлориду Та (6,71 г, 30,6 ммоль) у СНоСі» (150 мл) при - 30 "С. Реакційну суміш перемішували при -30 "С протягом 1 год. і забезпечували нагрівання до кімнатної температури при перемішуванні протягом 2 год. Реакційну суміш виливали в воду з льодом/розчин сегнетової солі. Суміш фільтрували через тонкий шар бОісаїйкеф і осад на фільтрі декілька разів промивали за допомогою ТНЕ. Шари розділяли. Водний шар екстрагували за допомогою ТНЕ. Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином, водою, висушували над Мо95оО5», фільтрували і випарювали при зниженому тиску. Твердий залишок суспендували в 15. СНеосСі» (50 мл) і тверді речовини відфільтровували та промивали невеликою кількістю СНесСір», і висушували під вакуумом при 50 "С з одержанням 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(6-метокси-7- метил-1Н-індол-З-іл)/етанону ба (6,85 г) у вигляді біло-сірої твердої речовини.

Синтез проміжної сполуки бр

Додавали по краплях при 0 "С розчин триброміду фенілтриметиламонію ІСАЗ 4207-56-11 (8,2 г, 21,8 ммоль) у ТНЕ (150 мл) до розчину 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(6-метокси-7-метил- 1Н-індол-З3-іл)етанону ба (6,8 г, 19,8 ммоль) у ТНЕ (250 мл). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 2 год. Осад відфільтровували і промивали за допомогою ТНЕ. Фільтрат концентрували при зниженому тиску. Залишок кристалізували з СНоСі». Осад відфільтровували, промивали СНесСі» (2 х) і висушували під вакуумом при 50 "С з одержанням 2-бром-2-(4-хлор-2- метоксифеніл)-1-(6-метокси-7-метил-1 Н-індол-З3-іл)етанону бЬ (5,38 г).

Синтез сполуки 6 і хіральне розділення енантіомерів 6бА і 6В

Суміш /2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(6-метокси-7-метил-1Н-індол-З-іл)оетанону б (1,96 г, 4,65 ммоль), З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліну (СА 62606-02-4) (1,40 г, 6,97 ммоль) і діізопропілетиламіну (1,20 мл, 6,97 ммоль) у СНзСМ (50 мл) нагрівали зі зворотним холодильником протягом ночі. Розчинники видаляли при зниженому тиску. Залишок розчиняли в СНесСі» і промивали 0,5 н. НСІ і водою, висушували над Ма5О5, фільтрували і випарювали при зниженому тиску. Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі (нерухома фаза: ВіоїадеФ 5МАР ШОкКга 100 г, рухома фаза: ЕІАс : ЕН (3:1)/гептан, градієнт від 0/100 до 50/50). Чисті фракції об'єднували і випарювали при зниженому тиску з одержанням 2-(4-хлор-2- метоксифеніл)-2-((З-метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(6-метокси-7-метил-1 Н-індол-3- іл)етанону (сполука 6, 1,0 г) у вигляді рацемічної суміші.

Хіральне розділення енантіомерів сполуки б (1,0 г) здійснювали за допомогою препаративної хіральної ЕС (нерухома фаза: СпПігаісе!Ф Оіасе! 00 20 х 250 мм, рухома фаза:

СО», ЕЮН, що містить 0,295 ІРГМН»г). Фракції, що містять продукт, об'єднували і випарювали.

Перший елюйований енантіомер отверджували шляхом розтирання за допомогою суміші

МеонН/вода (1/1). Тверді речовини відфільтровували і висушували під вакуумом при 50 С з одержанням енантіомеру бА (368 мг) у вигляді аморфного білого порошку. Другий елюйований енантіомер отверджували шляхом розтирання за допомогою суміші МеОН/вода (1/1). Тверді речовини відфільтровували і висушували під вакуумом при 50 "С з одержанням енантіомеру 6В (303 мг) у вигляді аморфного білого порошку.

Енантіомер бА

"Н ЯМР (360 МГц, ОМ5О-4дв) 5 ррт 2,29 (в, З Н) 3,10 (в, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,80 (5, З Н) 4,02 (в,

З Н) 6,24 (а, 20-77 Гу, 1 Н) 6,56 - 6,59 (т, 1 Н) 6,59 - 6,62 (т, 1 Н) 6,92 (І, 9-1,6 Гц, 1 Н) 6,93 - 6,99 (т, 2 Н) 7,06 (й, 97,7 Гц, 1 Н) 7,13 (а, 9-1,8 Гц, 1 Н) 7,35 (й, 9-84 Гц, 1 Н) 7,94 (а, 2-8,4 Гц, 1 Н) 8,35 (5, 1 Н) 11,91 (ре 5, 1 Н)

Ї С/М5 (Спосіб І С-А): Ві 1,18 хв., МН" 543

ІФого: 122,92 (с 0,48, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5ЕС-Е): В: 4,15 хв. МН" 543, хіральна чистота 10095.

Енантіомер 68 "Н ЯМР (360 МГц, ОМ5О-дв) 6 ррт 2,29 (в, З Н) 3,10 (в, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,80 (5, З Н) 4,02 (в, з Н) 6,24 (а, 0Ш-7,7 Гц, 1 Н) 6,57 - 6,59 (т, 1 Н) 6,59 - 6,62 (т, 1 Н) 6,92 (І, 9У-1,8 Гц, 1 Н) 6,93 - 7,00 (т, 2 Н) 7,06 (а, У-7,7 Гц, 1 Н) 7,13 (а, 9-1,68 Гц, 1 Н) 7,35 (й, 9-81 Гц, 1 Н) 7,94 (а, -8,8 Гц, 1 Н) 8,35 (й, 9-22 Гц, 1 Н) 11,91 (рг 5, 1 Н)

Ї С/М5 (Спосіб І С-А): Ві 1,22 хв., МН" 543

ІФЧого: -120,67 (с 02755, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб БЕС-Е): В. 4,50 хв., МН" 543, хіральна чистота 99,3595.

Приклад 7. Синтез 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(6-фтор-5-метил-1Н-індол-З-іл)-2-((3- метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 7) і хіральне розділення на енантіомери 7А і 78 : й й прі ть, що ні т» п Ко туя ст щу ук мчч | їа - Ї я Ех а 5 нн НН с пинннннн рр

Ту БІС вияві тн ден

Свіжі, В Я С до кт. З год, г відо Є дек. ти? год, й їа 7» от й в оо і т Хіральне розділення нн кеди ванн, тА нення Бнантіомерн ТА ТВ пІРЕД Е А дян оту сном, В55С протягом ночі Мт

Синтез проміжної сполуки 7а

Розчин б-фтор-5-метил-1 Н-індолу |(САЗ 162100-95-ОІ (1,7 г, 11,4 ммоль) у СНоСї» (100 мл) охолоджували до 0 "С в атмосфері М2. Додавали по краплях 1 М розчин діеєтилалюмінійхлориду в гексані (17,1 мл, 17,1 ммоль) і одержану в результаті суміш витримували при 0 "С протягом 15 хв. Додавали по краплях розчин 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)ацетилхлориду Та (3,50 г, 16 ммоль) у СНоСі» (50 мл). Перемішування продовжували при 0 С протягом 1 год. і при кімнатній температурі протягом 2 год. Реакційну суміш овиливали в перемішуваний розчин

Зо льоду/сегнетової солі. Після того, як лід розтанув, суміш фільтрували через Оісаїйеф і осад на фільтрі декілька разів промивали за допомогою ТНЕ. Фільтрати об'єднували. Шари розділяли і органічний шар промивали сольовим розчином, висушували над Мо9зоО»4, фільтрували і випарювали при зниженому тиску. Твердий залишок суспендували в СНеоСіг (30 мл), осад відфільтровували і висушували під вакуумом при 50"С з одержанням 2-(4-хлор-2- метоксифеніл)-1-(6-фтор-5-метил-1 Н-індол-З3-іл)уетанону 7а (2,76 г).

Синтез проміжної сполуки 7Б

Перемішуваний розчин 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(6-фтор-5-метил-1 Н-індол-3-іл)етанону 7а (2,76 г, 8,32 ммоль) у ТНЕ (350 мл) охолоджували до 0 "С. Додавали по краплях розчин триброміду фенілтриметиламонію |ІСАЗ 4207-56-11 (3,44 г, 9,15 ммоль) у ТНЕ (50 мл). Реакційну суміш перемішували при 0 "С протягом 2 год. і при кімнатній температурі протягом 2 год. Тверді речовини видаляли за допомогою фільтрації і промивали за допомогою ТНЕ. Об'єднані фільтрати випарювали при зниженому тиску. Залишок змішували з ЕЮАс (50 мл). Тверді речовини виділяли за допомогою фільтрації промивали невеликою кількістю ЕАс і висушували під вакуумом при 50 "С з одержанням 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(6б-фтор-

Б-метил-1Н-індол-З-іл)летанону 7Б (3,21 г) у вигляді білої твердої речовини, яку застосовували без додаткового очищення на наступній стадії.

Синтез сполуки 7 і хіральне розділення енантіомерів 7А і 7В

Суміш 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(6-фтор-5-метил-1Н-індол-З-ілуетанону 760 (1,6 г, 3,90 ммоль), З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліну (СА 62606-02-4| (1,18 г, 5,84 ммоль) і діїізопропілетиламіну (671 мкл, 3,90 ммоль) у СНЗСМ (100 мл) перемішували протягом ночі при 85 "С. Реакційну суміш концентрували при зниженому тиску. Залишок розчиняли в СНесСіг (100 мл), промивали 1 н. НСІ (100 мл) і водою (100 мл), висушували над Мда5О», фільтрували і випарювали при зниженому тиску. Залишок очищали за допомогою колонкової хроматографії (нерухома фаза: силікагель Сгасе КемеїегізФ 120 г, рухома фаза: ЕЮАс : ЕН (3:1)/гептан, градієнт від 0/100 до 50/50). Потрібні фракції об'єднували і випарювали при зниженому тиску.

Залишок осаджували з СНоСі» / гептану. Тверді речовини виділяли за допомогою фільтрації і промивали СНеоСі» / гептаном (1/1). Неочищений продукт додатково очищали за допомогою препаративної НРІ С (нерухома фаза: Оріїзрпеге? С18 ОВ - 10 мкм, 200 г, 5 см, рухома фаза: 0,2595 розчин МНаАНСО: у воді, СНІСМ). Фракції, що містять продукт, об'єднували і випарювали при зниженому тиску. Твердий залишок змішували з ЕІЮАсС (20 мл) і тверді речовини виділяли за допомогою фільтрації та промивали невеликою кількістю ЕЮАс з одержанням 2-(4-хлор-2- метоксифеніл)-1-(6-фтор-5-метил-1 Н-індол-З3-іл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 7, 341 мг) у вигляді рацемічної суміші. Фільтрат випарювали при зниженому тиску і залишок поглинали за допомогою МеонН. Після перемішування протягом 30 хв. тверді речовини виділяли за допомогою фільтрації з одержанням другого виходу сполуки 7 (92 мг).

Хіральне розділення енантіомерів сполуки 7 (402 мг) здійснювали за допомогою хірального розділення з використанням нормальної фази (нерухома фаза: (5,5)-М/пеіІКк-О1, рухома фаза: 10095 метанол). Фракції, що містять продукт, об'єднували і випарювали з одержанням енантіомеру 7А як першого елюйованого продукту та енантіомеру 7В як другого елюйованого продукту. Енантіомер 7А додатково очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі (нерухома фаза: силікагель Сгасе КемеїегізФ 12 г, рухома фаза: гептан/г(ОАсС/ЕЮН від 100/0/0 до 40/45/15). Потрібні фракції об'єднували і випарювали при зниженому тиску. Залишок розтирали в порошок з Н2гО (1,75 мл) і МеОнН (0,75 мл). Тверді речовини відфільтровували, промивали НгО/Меон 7/3 (2х) і висушували під вакуумом при 50 "С з одержанням енантіомеру

Зо ТА (48 мг). Енантіомер 7В додатково очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі (нерухома фаза: силікагель Сгасе КемеїегізФ 12 г, рухома фаза: гептан/ЕЮАСсС/ЕЮН від 100/0/0 до 40/45/15). Потрібні фракції об'єднували і випарювали при зниженому тиску. Залишок розтирали в порошок з Н2гО (1,75 мл) і МеОнН (0,75 мл). Тверді речовини відфільтровували, промивали НгО/Меон 7/3 (2х) і висушували під вакуумом при 50 "С з одержанням енантіомеру 7В (43 мг/г).

Сполука 7

І"Н ЯМР (400 МГц, ОМ5О-дв) б ррт 2,30 (а, 9У-0,9 Гц, З Н) 3,09 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 4,00 (5, З

Н) 6,22 (й, 9-7,7 Гц, 1 Н) 6,54 - 6,63 (т, 2 Н) 6,92 (Її, 9-1,5 Гу, 1 Н) 6,97 (аа, 9У-8,3, 1,9 Гц, 1 Н) 7,01 (а, 97,7 Гц, 1 Н) 7,12 (а, 9-1,8 Гц, 1 Н) 7,22 (а, 9-10,2 Гц, 1 Н) 7,35 (а, У-8,4 Гц, 1 Н) 8,02 (а, уеТ,7 Гц, 1 Н) 8,37 (5, 1 Н) 11,97 (Бг 5, 1 Н)

І С/М5 (Спосіб І С-А): Ві 1,19 хв., МН" 531

Енантіомер 7А "Н ЯМР (400 МГц, ОМ50О-ав) б ррт 2,30 (а, 9У-1,5 Гц, З Н) 3,09 (в, З Н) 3,72 (в, З Н) 4,00 (5, З

Н) 6.22 (а, 20-7,9 Гц, 1 Н) 6,56 - 6,60 (т, 2 Н) 6,91 (1, 9У-1,7 Гц, 1 Н) 6,97 (да, У-8,5, 2,1 Гц, 1 Н) 7,01 (а, ю-7,7 Гц, 1 Н) 7,12 (а, 90-2,0 Гц, 1 Н) 7,22 (а, 9-10,1 Гц, 1 Н) 7,34 (а, 9-8,1 Гц, 1 Н) 8,02 (а, 9-7,7 Гц, 1 Н) 8,37 (5, 1 Н) 11,96 (5,1 Н)

І С/М5 (Спосіб І С-А): В1,15 хв., МН" 531

ІЩО2О: -163,27 (с 0,435, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5ЕС-Е): ВН: 4,26 хв., МН" 531, хіральна чистота 10095.

Енантіомер 7В "Н ЯМР (400 МГц, ОМ50О-ав) б ррт 2,30 (й, У-1,5 Гц, З Н) 3,09 (5, З Н) 3,72 (в, З Н) 4,00 (в, З

Н) 6,22 (а, 92-7,7 Гц, 1 Н) 6,57 - 6,61 (т, 2 Н) 6,92 (І, 9-1,68 Гц, 1 Н) 6,97 (аа, 9-81, 2,0 Гц, 1 Н) 7,01 (а, ю-7,7 Гц, 1 Н) 7,12 (а, 90-2,0 Гц, 1 Н) 7,22 (а, 9У-10,0 Гц, 1 Н) 7,35 (а, У-8,4 Гц, 1 Н) 8,02 (а, 9-7,9 Гц, 1 Н) 8,37 (й, 9-2,4 Гц, 1 Н) 11,97 (5,1 Н)

І С/М5 (Спосіб І С-А): В1,15 хв., МН" 531

ІФЧо-о: 166,6 (с 0,5, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5БЕС-Е): Ве 3,78 хв., МН" 531, хіральна чистота 10095.

Приклад 8. Синтез 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(5-(трифторметил)-1Н-індол-3-іл)етанону (сполука 8) і хіральне бо розділення на енантіомери 8А і 886

Но й дов Ж де вот В ші

Е -й З свожі в со дя ЕН м Щі

Кк некя я чен її кі дин їз г ок й кт, нЙ ся що Май се т Тс бот й ГМЕ, кт. З ГОД. га те 1,2-дихлоретан, к. т., 2 год. я тв сі ї заг й Що щи у щі а щ ік Е: а ВИ ІЙ й Ву Ве і пен АЙ Й г їх Е Ж птн Ві

ТНЕЖО, За год, Й ї й З тн пт 1 содою. те Я ГОД, Ї ее , де їй щі ге СІ

С те п, Ба Хіральне розділення унтіонерн яд і В

ІК» й се НОти сік ти сяк З жи МН ШИК

СНУсМ.О ТНК, 7 З год, Гн

Синтез проміжної сполуки ва

Гідрид натрію додавали частинами при 0 "С в потоці М» (2,48 г, 64,8 ммоль) до суміші 5- (трифторметил)-1Н-індолу |(ІСА5 100846-24-0| (10 г, 54,0 ммоль) у ОМЕ (150 мл) і суміш перемішували при 0 "С протягом 30 хв. По краплях додавали розчин тозилхлориду (11,3 г, 59,4 ммоль) у ОМЕ (50 мл) і одержану в результаті суміш перемішували при кімнатній температурі протягом З год. При 0 "С суміш гасили за допомогою додавання води. Осад відфільтровували і висушували протягом ночі під вакуумом при 70 "С з одержанням 1-тозил-5-(трифторметил)-1Н- індолу ва (18.4 г).

Синтез проміжної сполуки 8Б

По краплях додавали хлорид титану(ІМ) (2,4 мл, 21,9 ммоль) при кімнатній температурі до розчину 1-тозил-5-(трифторметил)-іН-індолу ва (3,7 г, 10,95 ммоль) і 2-(4-хлор-2- метоксифеніл)ацетилхлориду Та (4,8 г, 21,9 ммоль, синтез: див. приклад 1) в 1,2-дихлоретані (120 мл). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 2 год. Додавали воду з льодом. Реакційну суміш екстрагували за допомогою ЕІОАс. Органічний шар висушували над Моа50О5, фільтрували і розчинник концентрували при зниженому тиску. Залишок очищали за допомогою колонкової хроматографії на силікагелі (15-40 мкм, 80 г, рухома фаза: СН-СІ/МеОон 99,5/0,5). Фракції, що містять сполуку 80, об'єднували і розчинник випарювали при зниженому тиску. Сполуку поглинали СНзСМ/діїзопропіловим етером. Осад відфільтровували і висушували з одержанням 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(1-тозил-5-(трифторметил)-1Н-індол-З-іл)етанону 8р (2,8 г).

Синтез проміжної сполуки 8с

Додавали гідроксид літію (0,64 г, 15,3 ммоль) до розчину 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(1- тозил-5-(трифторметил)-1Н-індол-З3-іл)етанону 86 (3,2 г, 6,13 ммоль) у ТНЕ (18 мл) і воді (6 мл).

Суміш перемішували при 30 С протягом 1 год. Додавали воду та ЕІАс. Органічний шар відокремлювали, висушували над Ма5О5», фільтрували і розчинник випарювали при зниженому

Зо тиску. Тверду речовину поглинали діїззопропіловим етером. Осад відфільтровували і висушували З одержанням 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(5-(«трифторметил)-1Н-індол-3- іл)етанону 8с (2,1 г).

Синтез проміжної сполуки 8а

Додавали по краплях при 0 "С розчин триброміду фенілтриметиламонію |ІСА5 4207-56-11 (21 г, 5,7 ммоль) у ТНЕ (60 мл) до суміші 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(5-(трифторметил)-1Н- індол-З-іл)етанону 8с (2,15 г, 5,7 ммоль) у ТНЕ (60 мл). Суміш перемішували при 0 "С протягом 1 год. і при кімнатній температурі протягом 4 год. Осад відфільтровували і промивали за допомогою ЕОДАс. Об'єднані фільтрати концентрували при зниженому тиску. Залишок розчиняли в ЕІОАс. Органічний шар промивали водою, висушували над Мод5О», фільтрували і розчинник випарювали при зниженому тиску. Залишок поглинали діїзопропіловим етером. Осад відфільтровували і висушували з одержанням 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(5- (трифторметил)-1Н-індол-З3-іл)етанону 8а (2,5 г).

Синтез сполуки 8 і хіральне розділення енантіомерів 8А і 88

Суміш 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(5-(трифторметил)-1Н-індол-3-іл)етанону 84 (1 г, 2,24 ммоль), З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліну І(ІСАБ 62606-02-4| (496 мг, 2,46 ммоль) і дізопропілетиламіну (0,38 мл, 2,24 ммоль) у СНІСМ (50 мл) і ТНЕ (25 мл) перемішували при 70 С протягом 24 год. Розчин концентрували при зниженому тиску. Залишок розчиняли в ЕЮАс і розчин промивали 1 н. НСЇ. Органічний шар відокремлювали, висушували над Мозох, фільтрували і розчинник випарювали при зниженому тиску. Сполуку кристалізували з діізопропілового етеру/СНз3СМ з одержанням /2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(5-(трифторметил)-1Н-індол-з3-іл)етанону (сполука 8, 310 мг) у вигляді рацемічної суміші.

Енантіомери сполуки 8 розділяли за допомогою препаративної хіральної ЕС (нерухома фаза: Спігаїракте АБ-Н 5 мкм 250 х 20 мм, рухома фаза: 7095 СО», 3095 ІРГОН --0,395 ІР/МН») з одержанням після кристалізації в петролейному етері/дізопропіловому етері 122 мг першого елюйованого енантіомеру 8А і 128 мг другого елюйованого енантіомеру 88.

Сполука 8

ІН ЯМР (500 МГц, ОМ50О-ав) б ррт 3,10 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,99 (5, З Н) 6,29 (й, 9-7,9 Гц, 1

Н) 6,56 - 6,62 (т, 2 Н) 6,92 (5, 1 Н) 6,98 (ай, 9-8,4, 2,0 Гц, 1 Н) 7,09 (а, 9-7,9 Гц, 1 Н) 7,13 (а, 9у-1,9 Гц, 1 Н) 7,36 (а, 9-8,5 Гу, 1 Н) 7,54 (аа, У-8,5, 1,6 Гц, 1 Н) 7,69 (а, 9-8,5 Гу, 1 Н) 8,48 (5, 1

Н) 8,61 (5, 1 Н) 12,45 (рг 5, 1 Н)

І.С/М5 (Спосіб ГС-С): В. 3,19 хв., МН" 567

Температура плавлення: 168 "С

Енантіомер вА "Н ЯМР (400 МГц, ОМ50-адв) б ррт 3,09 (5, З Н) 3,73 (5, З Н) 3,99 (5, З Н) 6,29 (а, У-7,6 Гц, 1

Н) 6,60 (ріг 5, 2 Н) 6,92 (5, 1 Н) 6,98 (аа, 9У-8,3, 1,68 Гц, 1 Н) 7,07 (а, 9-8,1 Гу, 1 Н) 7,13 (а, 9-1,5 Гц, 1 нН) 7,36 (а, 9У-8,1 Гц, 1 Н) 7,54 (а, 9-81 Гу, 1 Н) 7,69 (а, 2-8,6 Гц, 1 Н) 8,49 (в, 1 Н) 8,60 (5, 1 Н) 12,41 (рг 5,1 Н)

Коо) І.С/М5 (Спосіб ГС-С): Ве 3,25 хв., МН" 567

ІФого: -119,27 (с 02727, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5БЕС-РЕ): Ве 2,64 хв., МН" 567, хіральна чистота 10095.

Енантіомер 88

І"Н ЯМР (400 МГц, ОМ5О-адв) б ррт 3,09 (5, З Н) 3,73 (5, З Н) 3,99 (5, З Н) 6,29 (й, 9-81 Гц, 1

Н) 6,60 (5, 2 Н) 6,92 (5, 1 Н) 6,98 (аа, 9-86, 2,0 Гц, 1 Н) 7,07 (а, 9-8,1 Гу, 1 Н) 7,13 (а, У-2,0 Гц, 1

Н) 7,36 (й, 9-8,6 Гц, 1 Н) 7,54 (да, 2-86, 1,5 Гу, 1 Н) 7,69 (а, 9У-8,6 Гц, 1 Н) 8,49 (5, 1 Н) 8,60 (5, 1

Н) 12,40 (рг 5, 1 Н)

І.С/М5 (Спосіб ГС-С): Ве 3,25 хв., МН" 567

Іо: 125,12 (с 02455, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5ЕС-РЕ): В, 3,44 хв., МН" 567, хіральна чистота 10095.

Приклад 9. Синтез 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(5-(трифторметокси)-1Н-індол-З-іл)етанону (сполука 9) і хіральне розділення на енантіомери 9А і 98 , сі ій о Ура ть : У с ХА турні Кк са м тні

СО дв й ЕВ ту В; Щ ваш БО. ЩІ в

В ма ЕСАЮІ щи що ТМЕ ї еще

СМ, від й С до к. т., 4 год. 84 Н відоб дат год, че наве чи ше . а й Кільне розділення Енантіонери А ї ов паА І ей вик снусм, заго протягом ночі он 5 й

Синтез проміжної сполуки За

Розчин 5-(трифторметокси)-1Н-індолу |(САЗ 262593-63-5) (З г, 14,9 ммоль) у СНоСі» (150 мл) охолоджували до 0 "С в атмосфері М2. Додавали по краплях 1 М розчин діеєтилалюмінійхлориду в гексані (22,4 мл, 22,4 ммоль) і одержану в результаті суміш витримували при 0 "С протягом 15 хв. Додавали по краплях розчин 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)ацетилхлориду Та (4,57 г, 20,9 ммоль) у СНеаСі» (100 мл). Перемішування продовжували при 0 С протягом 1 год. і потім реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 4 год. Реакційну суміш виливали в перемішуваний розчин льоду/сегнетової солі. Після того, як лід розтанув, суміш фільтрували через ОісайефФ і осад на фільтрі декілька разів промивали за допомогою ТНЕ.

Фільтрати об'єднували. Шари розділяли і органічний шар промивали сольовим розчином, висушували над Мд5О5, фільтрували і випарювали при зниженому тиску. Залишок розтирали в порошок з СНеСі» (50 мл). Одержаний у результаті осад відфільтровували і висушували під вакуумом при 50 "С з одержанням 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(5-(«трифторметокси)-1Н-індол-3- іл)етанону 9а (4,39 г).

Синтез проміжної сполуки 90

Перемішуваний розчин 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(5-(трифторметокси)-1Н-індол-3- іл)етанону 9а (4,39 г, 11,4 ммоль) у ТНЕ (200 мл) охолоджували до 0 "С.

Додавали по краплях розчин триброміду фенілтриметиламонію (САЗ 4207-56-11 (4,73 г, 12,6 ммоль) у ТНЕ (100 мл). Одержану в результаті суспензію перемішували при кімнатній температурі протягом 2 год. Тверді речовини видаляли за допомогою фільтрації і промивали за допомогою ТНЕ. Об'єднані фільтрати випарювали при зниженому тиску. Залишок змішували з

ЕТАс (30 мл). Тверді речовини виділяли за допомогою фільтрації, промивали невеликою кількістю ЕТОАс і висушували під вакуумом при 50"С з одержанням 2-бром-2-(4-хлор-2- метоксифеніл)-1-(5-(трифторметокси)-1Н-індол-З-іл)уетанону 95 (5,0 г) у вигляді білої твердої речовини, яку без додаткового очищення застосовували на наступній стадії.

Синтез сполуки 9 і хіральне розділення енантіомерів 9А і 98

Суміш 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(5-«трифторметокси)-1Н-індол-З-іл)етанону 95 (2,5 г, 5,40 ммоль), З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліну (СА5 62606-02-4| (1,49 г, 7,38 ммоль) і дізопропілетиламіну (931 мкл, 5,40 ммоль) у СНІСМ (100 мл) перемішували протягом ночі при

Зо 90 "С. Реакційну суміш концентрували при зниженому тиску. Залишок розчиняли в СНесСіг (100 мл), промивали 1 н. НСІ (100 мл) і водою (100 мл), висушували над Мо5О», фільтрували і випарювали при зниженому тиску. Залишок очищали за допомогою колонкової хроматографії (нерухома фаза: силікагель Сгасе КемеїегізФ 120 г, рухома фаза: ЕЮАс : ЕН (3:1)/гептан, градієнт від 0/100 до 50/50). Потрібні фракції об'єднували і випарювали при зниженому тиску.

Залишок осаджували з ЕТОАс (10 мл) при перемішуванні. Тверді речовини виділяли за допомогою фільтрації і промивали невеликою кількістю ЕТОАс з одержанням 2-(4-хлор-2- метоксифеніл)-2-((З-метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(5-(трифторметокси)-1 Н-індол-

З-іл)етанону (сполука 9, 477 мг) у вигляді рацемічної суміші. Фільтрат випарювали при зниженому тиску і залишок поглинали за допомогою ЕОАс (5 мл). Після перемішування протягом ночі тверді речовини виділяли за допомогою фільтрації та промивали за допомогою

ЕКОДАс з одержанням другого виходу сполуки 9 (216 мг).

Хіральне розділення енантіомерів сполуки 9 (663 мг) здійснювали за допомогою хірального розділення з використанням нормальної фази (нерухома фаза: А5 20 мкм, рухома фаза: 10090 метанол). Фракції, що містять продукт, об'єднували і випарювали з одержанням енантіомеру ЗА як першого елюйованого продукту та енантіомеру 9В як другого елюйованого продукту.

Енантіомер ЗА перемішували в Н2О (2 мл) і МеонН (3 мл) при 40 "С. Тверді речовини відфільтровували, промивали НгО/МеоН 1/1 (Зх) і висушували під вакуумом при 45"С з одержанням енантіомеру 9А (151 мг). Енантіомер 9В додатково очищали за допомогою флеш- хроматографії на силікагелі (нерухома фаза: силікагель Сгасе КемеїегізФ 12 г, рухома фаза: гептан/иЕ(ОАсС/ЕОН від 100/0/0 до 40/45/15). Потрібні фракції об'єднували, випарювали при зниженому тиску і випарювали спільно з ЕТОАс. Залишок перемішували в Меон (5 мл) і осаджували за допомогою повільного додавання Н2гО (4 мл). Тверді речовини відфільтровували, промивали НгО/МеоН 1/1 (Зх) і висушували під вакуумом при 50"С з одержанням енантіомеру 9В (132 мг).

Сполука 9

І"Н ЯМР (400 МГц, ОМ5О-адв) б ррт 3,09 (5, З Н) 3,73 (5, З Н) 3,99 (5, З Н) 6,26 (а, 9-7,9 Гц, 1

Н) 6,57 - 6,62 (т, 2 Н) 6,91 (І, 9-1,9 Гц, 1 Н) 6,98 (аа, 9У-8,4, 2,0 Гц, 1 Н) 7,07 (а, 9-7,9 Гц, 1 Н) 7,13 (9, 9-2,0 Гу, 1 Н) 7,22 (аа, 9-8,6, 2,2 Гу, 1 Н) 7,36 (а, 9У-8,4 Гц, 1 Н) 7,59 (а, 9-88 Гц, 1 Н) 8,06 (а, 90,9 Гц, 1 Н) 8,55 (5, 1 Н) 12,28 (Бг 5, 1 Н) (510) Ї С/мМ5 (Спосіб І С-А): Ві 1,31 хв., МН" 583

Енантіомер 9А "Н ЯМР (400 МГц, ОМ50О-ав) б ррт 3,09 (в, З Н) 3,73 (в, З Н) 3,99 (5, З Н) 6,26 (а, У-7,9 Гц, 1

Н) 6,55 - 6,62 (т, 2 Н) 6,91 (1, 9У-1,5 Гц, 1 Н) 6,98 (ад, 9У-8,4, 2,0 Гц, 1 Н) 7,07 (а, У-7,9 Гц, 1 Н) 7,13 (9, У-2,0 Гу, 1 Н) 7,21 (ад, У-8,8, 1,8 Гу, 1 Н) 7,36 (а, 9-8,4 Гц, 1 Н) 7,59 (а, 9-8,8 Гц, 1 Н) 8,07 (а, 9У-0,9 Гц, 1 Н) 8,55 (5, 1 Н) 12,29 (Бг 5,1 Н)

І С/М5 (Спосіб І С-А): В: 1,20 хв., МН" 583

ІФЧого: 130,32 (с 0,555, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5ЕС-Е): Ве 3,10 хв., МН" 583, хіральна чистота 10095.

Енантіомер 98 "Н ЯМР (400 МГц, ОМ50О-ав) б ррт 3,09 (в, З Н) 3,73 (в, З Н) 3,99 (5, З Н) 6,26 (а, У-7,9 Гц, 1

Н) 6,56 - 6,62 (т, 2 Н) 6,92 (1, 9-20 Гц, 1 Н) 6,98 (аа, У-8,1, 2,0 Гц, 1 Н) 7,07 (а, У-7,9 Гц, 1 Н) 7,13 (9, У-2,0 Гу, 1 Н) 7,22 (ад, У-8,8, 1,8 Гу, 1 Н) 7,36 (а, 9-8,4 Гц, 1 Н) 7,59 (а, 9-8,8 Гц, 1 Н) 8,07 (а, 9У-0,9 Гц, 1 Н) 8,55 (5, 1 Н) 12,30 (Біг 5, 1 Н)

І С/М5 (Спосіб І С-А): В: 1,20 хв., МН" 583

ІФЧого: -133,27 (с 0,5, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5БЕС-Е): Не 3,50 хв., МН" 583, хіральна чистота 10095.

Приклад 10. Синтез 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(б-метокси-5-(трифторметокси)-1Н-індол-З-іл)етанону (сполука 10) ї хіральне розділення на енантіомери 10А і 108

Мем г щи ; мідетннй

КИ ж ак а с чн енле КИ они До пен

Й р. й арок у. а ра -ЖНлен. й Ї пий меснле меш и ю ЕН, Маю, М ТИ ї що ран зи ух

С, года Кк; та 1 Кодь ше У веранко хонездааяннюкем, їв о ша зв ге ій ки о ги; хі Н кше я т прі я В хоть 000 бурйноліно бу 0000 битий п дю ек змУднно те доку ве шо -я щі тне Й з 1а сяк ВВС зе 00 васдект, ЇВ,

Й й ну 0 Хіральне розділення в а и и Ко кененнннннсннняя ЕНаНТіОВерн ОА і ОВ шоб я ШРКА меш Ха си ке снусмк.т.. 2 дні в

Синтез проміжної сполуки 1ба

Розчин Маокї (0,69 моль, одержаний із 15,9 г Ма і 700 мл ЕН) протягом періоду 2 год. додавали по краплях до охолодженого (-1575) розчину З-метокси-4- (трифторметокси)бензальдегіду |(САЗ 8537 71-90-1| (50 г, 230 ммоль) і етилазидоацетату (89 г, 690 ммоль) в ЕН (400 мл). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ночі. Після охолодження на льодяній бані реакційну суміш гасили насиченим розчином МНС

Зо (1,2 л) і перемішували протягом 10 хв. Осад відфільтровували, промивали водою і висушували з одержанням (7)-етил-2-азидо-3-(З-метокси-4-«трифторметокси)феніл)акрилату 10а (32 г) У вигляді жовтуватої твердої речовини.

Синтез проміжної сполуки 106

Розчин (2)-етил-2-азидо-3-(3-метокси-4--трифторметокси)феніл)акрилату 10а (З г, 10 ммоль) у ксилолі (40 мл) нагрівали зі зворотним холодильником протягом ночі. Після охолодження до кімнатної температури розчинник випарювали до сухого стану. Залишок розтирали в порошок із гексаном (50 мл) і осад відфільтровували з одержанням метил б-метокси-5-(трифторметокси)- 1Н-індол-2-карбоксилату 105 (вихід: 1,4-1,6 г) у вигляді жовтої твердої речовини.

Синтез проміжної сполуки 10с

До суміші метил-б6-метокси-5-(трифторметокси)-1Н-індол-2-карбоксилату 106 (25 г, 87 ммоль) у Меон/НгО (2/1, 300 мл) додавали Маон (7 г, 175 ммоль) і суміш нагрівали зі зворотним холодильником до одержання прозорого розчину. Після охолодження до кімнатної температури більшу частину метанолу видаляли при зниженому тиску і водний розчин, що залишився, підкислювали конц. НСІ до рН 3-4. Продукт екстрагували за допомогою ЕОАс (2х 250 мл). Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином, висушували і випарювали при зниженому тиску з одержанням б-метокси-5-(трифторметокси)-1Н-індол-2-карбонової кислоти 10с (22,7 г) у вигляді сірої твердої речовини.

Синтез проміжної сполуки 10а

Суспензію б-метокси-5-(трифторметокси)-1Н-індол-2-карбонової кислоти 10с (7,5 г, 27 ммоль) і Си (1,22 г, 0,7 екв.) у хіноліні (150 мл) нагрівали до 220-230 "С в інертній атмосфері протягом 12 год. Після охолодження до кімнатної температури суміш розбавляли метил-трет- бутиловим етером (МТВЕ, 400 мл) і промивали насиченим водним розчином Манзох (2 х 500 мл). Органічний шар висушували над М95О5, фільтрували через тонкий шар силікагелю і випарювали при зниженому тиску. Залишок очищали за допомогою колонкової хроматографії з одержанням б-метокси-5-(трифторметокси)-1Н-індолу 10а (3,75 г) у вигляді жовтої твердої речовини.

Синтез проміжної сполуки 10е

Розчин б-метокси-5-(трифторметокси)-1Н-індолу 10а (1,61 г, 6,96 ммоль) у СНоСі» (150 мл) охолоджували до 0 "С в атмосфері М2. Додавали по краплях 1 М розчин діетилалюмінійхлориду в гексані (10,4 мл, 10,4 ммоль) і одержану в результаті суміш витримували при 0 "С протягом 30 хв. Додавали по краплях розчин 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)ацетилхлориду Та (2,28 г, 10,4 ммоль) у СНоСі» (75 мл). Перемішування продовжували при 0 "С протягом 1 год. і при кімнатній температурі протягом 1 год. Реакційну суміш охолоджували до 0 "С і додавали по краплях розчин тартрату калію-натрію тетрагідрату (сегнетова сіль, 3,93 г, 13,9 ммоль) у воді (6 мл).

Реакційну суміш перемішували протягом 30 хв. при 0 "С. Додавали ТНЕ (200 мл) і реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 20 хв. Додавали Ма»50Ох (25 г), суміш перемішували протягом ночі, фільтрували через Оісайефтф і осад на фільтрі декілька разів промивали за допомогою ТНЕ (4х 150 мл). Фільтрати об'єднували і випарювали при зниженому тиску. Твердий залишок перемішували в суміші діїізопропілового етеру (25 мл) і ЕЮАсС (2 мл).

Тверді речовини відфільтровували, промивали за допомогою СІРЕ (3 х) і висушували під

Зо вакуумом при 50 "С з одержанням 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(б-метокси-5-«трифторметокси)- 1Н-індол-З3-іл)етанону 10е (3,6 г).

Синтез проміжної сполуки 10

Перемішуваний розчин /2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(6б-метокси-5-(трифторметокси)-1 Н- індол-З-іл)етанону 10е (3,6 г, 6,53 ммоль) у ТНЕ (130 мл) охолоджували до 0 "С в атмосфері Ме».

Додавали трибромід фенілтриметиламонію |(САЗ 4207-56-1| (2,58 г, 6,85 ммоль) і реакційну суміш перемішували при 0 "С протягом 45 хв. і при кімнатній температурі протягом 1,5 год.

Тверді речовини видаляли за допомогою фільтрації і промивали за допомогою ТНЕ (2х).

Об'єднані фільтрати випарювали при зниженому тиску з одержанням 2-бром-2-(4-хлор-2- метоксифеніл)-1-(6-метокси-5-(трифторметокси)-1Н-індол-З-іл)уетанону 101 (4,16 г), який застосовували без додаткового очищення на наступній стадії.

Синтез сполуки 10 і хіральне розділення енантіомерів 10А і 108

Суміш 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(6-метокси-5-(трифторметокси)-1 Н-індол-3- іл)етанону 10 (4,16 г, 6,50 ммоль), З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліну (СА 62606-02-41 (2,62 г, 13,0 ммоль) і дізопропілетиламіну (2,24 мл, 13,0 ммоль) у СНЗСМ перемішували при кімнатній температурі протягом 2 днів у атмосфері азоту Мг. Додавали воду (250 мл) і продукт екстрагували за допомогою ЕТО (2х). Об'єднані органічні шари висушували над Мозох, фільтрували і випарювали при зниженому тиску. Залишок очищали за допомогою колонкової хроматографії (нерухома фаза: силікагель Сгасе КемеїЇегізФ 100 г, рухома фаза: гептан/Е(ОАСсС/ЕКН, градієнт від 100/0/0 до 40/45/15). Потрібні фракції об'єднували і випарювали при зниженому тиску. Залишок додатково очищали за допомогою препаративної НРІС (нерухома фаза: КР ХВгіддефФ Ргер С18 ОВО - 10 мкм, 50 х 150 мм, рухома фаза: 0,2595 розчин

МНаАНСО:» у воді, СНзСМ). Потрібні фракції об'єднували і випарювали при зниженому тиску.

Залишок, що містить рацемічний 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(6-метокси-5-«трифторметокси)-1Н-індол-З-іл)іетанон (сполука 10, 380 мг), піддавали хіральному розділенню за допомогою препаративної ЕС (нерухома фаза: Спігаїрак? Оіасеї! А5 20 х 250 мм, рухома фаза: СО», ЕІЮН -- 0,495 іІРІМН»). Фракції, що містять продукт, об'єднували, випарювали при зниженому тиску і потім випарювали спільно з

Меон із одержанням енантіомеру 10А як першого елюйованого продукту та енантіомеру 108 як другого елюйованого продукту. Обидва енантіомери осаджували із суміші розчинників Мен і води, відфільтровували і висушували при 50 "С під вакуумом з одержанням енантіомеру 10А (135 мг) та енантіомеру 108 (144 мгГ).

Енантіомер Т0А

ІН ЯМР (360 МГц, ОМ50О-дв) б ррт 3,09 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,87 (5, З Н) 3,99 (5, З Н) 6,22 (а, ут, Гц, 1 Н) 6,55 - 6,59 (т, 2 Н) 6,88 - 6,91 (т, 1 Н) 6,98 (ай, 9-81, 1,8 Гу, 1 Н) 7,08 (а, 9-7,7 Гц, 1 Н) 7,13 (а, 9-22 Гц, 1 Н) 7,21 (5, 1 Н) 7,34 (а, 9-81 Гц, 1 Н) 8,02 (а, 9-1,5 Гц, 1 Н) 8,41 (5,1 Н) 12,05 (рг 5, 1 Н)

Ї С/М5 (Спосіб Спосіб І С-А): Ві 1,20 хв., МН" 613

ІФо-о: ї81,47 (с 0,29, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5ЕС-Е): В; 3,34 хв., МН" 613, хіральна чистота 10095.

Енантіомер 108 "Н ЯМР (360 МГц, ОМ50-ав) б ррт 3,09 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,687 (5, З Н) 3,99 (5, З Н) 6,22 (й,

УТ, Гц, 1 Н) 6,55 - 6,60 (т, 2 Н) 6,90 (ї, 9У-1,6 Гу, 1 Н) 6,98 (ай, У-8,2, 2,0 Гц, 1 Н) 7,08 (а, У-7,8

Гц, 1 Н) 7,13 (й, 9-22 Гу, 1 Н) 7,21 (5, 1 Н) 7,34 (й, 2-84 Гц, 1 Н) 8,01 (а, 9-11 Гц, 1 Н) 8,41 (5,1

Н) 12,08 (Біг 5, 1 Н)

Ї С/М5 (Спосіб Спосіб І С-А): Ві 1,20 хв., МН" 613

ІФого: -99,67 (с 0,261, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5ЕС-Е): В; 3,69 хв., МН" 613, хіральна чистота 10095.

Приклад 11. Синтез 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(7-метил-5-(трифторметокси)-1Н-індол-З-іл)етанону (сполука 11) ї хіральне розділення на енантіомери 114А і 118 х БАК п т «Ко ї ще ва: ще ні; | (вн ОКО НІ мк Божа уперения нн, Нв яко Вк год, в пови й го Не танк - сти й - з г ча се не те ВІД СД КТ ТО ОД, в піРЕа ТАС в іє їв св ке 7 ДН ! " рівне росдінення

Енантіонерн Лів

Синтез проміжної сполуки 11а

Суміш 1 М хлориду бору) у СНоСі» (25,5 мл, 25,5 ммоль) і хлориду алюмінію(!) (3,40 г, 25,5 ммоль) розбавляли СНеСіг (20 мл) і охолоджували на льодяній бані в атмосфері М».

Додавали по краплях розчин 2-метил-4-(трифторметокси)аніліну ІСА5 86256-59-9| (4,88 г, 25,5

Зо ммоль) і хлорацетонітрилу (3,24 мл, 51,0 ммоль) у СНоСіг (7,5 мл). Після додавання, льодяну баню прибирали і суміш нагрівали зі зворотним холодильником протягом 8 год. Суміш знову охолоджували до 0 "С із застосуванням льодяної бані. Додавали по краплях 2 н. НСІ (75 мл), що викликало сильне осадження. Одержану в результаті суспензію нагрівали зі зворотним холодильником протягом 90 хв. і охолоджували до кімнатної температури. Тверді речовини видаляли за допомогою фільтрації. Осад на фільтрі промивали за допомогою СНеСі» (4Х).

Фільтрати об'єднували і фази розділяли. Органічний шар виділяли, промивали водним розчином МансСо»з, висушували над Мод5О5, фільтрували і випарювали при зниженому тиску.

Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії (нерухома фаза: силікагель Віоїаде?тб

ЗМАР ШОйга 100 г, рухома фаза: гептан/СНесСіг2, градієнт від 100/0 до 0/100). Потрібні фракції об'єднували і концентрували до залишкового об'єму 30 мл. Осад відфільтровували, промивали гептаном і СН2Сі»г і висушували під вакуумом при 50 "С з одержанням 1-(2-аміно-3-метил-5- (трифторметокси)феніл)-2-хлоретанону 11а (1,37 г). Фільтрат концентрували при зниженому тиску. Твердий залишок перемішували в суміші гептану (20 мл) і дізопропілового етеру (З мл), відфільтровували, промивали гептаном (Зх) і висушували під вакуумом при 50 "С з одержанням другої фракції 11а (0,24 г).

Синтез проміжної сполуки 116

Борогідрид натрію (326 мг, 8,61 ммоль) додавали до перемішуваного розчину 1-(2-аміно-3- метил-5-(трифторметокси)феніл)-2-хлоретанону 114 (1,92 г, 7,17 ммоль) у трет-бутанолі (50 мл) і воді (5 мл). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 30 хв. і при 90 "С протягом 2,5 год. Додавали воду (50 мл) і продукт екстрагували за допомогою діетилового етеру (2х). Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином, висушували над Ма5Оа, фільтрували і випарювали при зниженому тиску. Залишок очищали за допомогою флеш- хроматографії (нерухома фаза: силікагель ВіоїадежЖ БЗМАР ШКйга 25 г, рухома фаза: гептан/ЕОАс, градієнт від 100/0 до 20/80). Потрібні фракції об'єднували, концентрували при зниженому тиску, випарювали спільно з гептаном і висушували під вакуумом при 50 С з одержанням 7-метил-5-(трифторметокси)-1 Н-індолу 1165 (1,2 г).

Синтез проміжної сполуки 11с

Механічно перемішуваний розчин 7-метил-5-(трифторметокси)-1Н-індолу 116 (1,5 г, 6,97 ммоль) у СНоСі» (100 мл) охолоджували до 0 "С в атмосфері М». Додавали по краплях 1 М розчин діетилалюмінійхлориду в гексані (10,5 мл, 10,5 ммоль) і одержану в результаті суміш витримували при 0"С протягом 25 хв. Додавали по краплях розчин 2-(4-хлор-2- метоксифеніл)ацетилхлориду Та (2,29 г, 10,5 ммоль) у СНоСі» (40 мл) при підтриманні температури реакції нижче 6 "С. Перемішування продовжували при 0 С протягом 1 год. і реакційну суміш потім перемішували при кімнатній температурі протягом 1 год. Реакційну суміш охолоджували до 0 "С і додавали по краплях розчин сегнетової солі (СА 6100-16-91 (3,94 г, 13,9 ммоль) у воді (4 мл). Після перемішування протягом 1 год. реакційну суміш фільтрували через Рісаїйеф і осад на фільтрі промивали за допомогою ТНЕ (5х 100 мл). Об'єднані фільтрати випарювали при зниженому тиску. Залишок отверджували при відстоюванні протягом ночі.

Тверді речовини перемішували в СНзСМ (5 мл), відфільтровували, промивали за допомогою

СНаСМ (3 х 1,5 мл) і висушували під вакуумом при 50С з одержанням 2-(4-хлор-2- метоксифеніл)-1-(7-метил-5-(трифторметокси)-1Н-індол-з3-іл)етанону 11с (1,9 г).

Зо Синтез проміжної сполуки 114

Перемішуваний розчин 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(7-метил-5-«трифторметокси)-1 Н-індол-

З-іл)етанону 11с (2,13 г, 5,35 ммоль) у ТНЕ (80 мл) охолоджували до 0 "С в атмосфері М».

Додавали трибромід фенілтриметиламонію |(САЗ 4207-56-1| (2,11 г, 5,62 ммоль) і реакційну суміш перемішували при 0 "С протягом 40 хв., а також при кімнатній температурі протягом 2 год.

Тверді речовини видаляли за допомогою фільтрації і промивали за допомогою ТНЕ (25).

Об'єднані фільтрати випарювали при зниженому тиску з одержанням 2-бром-2-(4-хлор-2- метоксифеніл)-1-(7-метил-5-(трифторметокси)-1Н-індол-З-іл)оетанону 114 (3,45 г), який застосовували без додаткового очищення на наступній стадії.

Синтез сполуки 11 і хіральне розділення енантіомерів 11А і 118

Суміш 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифеніл)-1-(7-метил-5-(трифторметокси)-1Н-індол-3- іл)етанону 114 (3,45 г, 6,87 ммоль), З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліну (СА5 62606-02-4І (2,76 г, 13,7 ммоль) і дізопропілетиламіну (2,37 мл, 13,7 ммоль) у СНІСМ (60 мл) перемішували при кімнатній температурі протягом 2 днів у атмосфері М2. Додавали воду (125 мл) і продукт екстрагували за допомогою ЕСО (2х). Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином, висушували над Мд5О», фільтрували і випарювали при зниженому тиску. Залишок очищали за допомогою препаративної НРІ С (нерухома фаза: КР ХВгідде? Ргер С18 ОВО - 10 мкм, 50 х 150 мм, рухома фаза: 0,2595 розчин МНАНСОз у воді, СНзСМ). Фракції, що містять продукт, об'єднували і випарювали при зниженому тиску з одержанням рацемічного 2-(4-хлор-2- метоксифеніл)-2-((З-метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(7-метил-5-(трифторметокси)- 1Н-індол-З3-іл)етанону (сполука 11, 1,74 г). Хіральне розділення енантіомерів сполуки 11 (1,74 г) здійснювали за допомогою препаративної 5ЕС (нерухома фаза: СпігаІракФ Оіасеї! А5 20 х 250 мм, рухома фаза: СО», ЕН - 0,495 ІРИМН»). Фракції, що містять продукт, об'єднували і випарювали при зниженому тиску з одержанням енантіомеру 11А як першого елюйованого продукту та енантіомеру 118 як другого елюйованого продукту. Обидва енантіомери осаджували із суміші розчинників Месон і води, відфільтровували і висушували при 50 "С під вакуумом з одержанням енантіомеру 11А (777 мг) та енантіомеру 118 (712 мг).

Енантіомер 11А

І"Н ЯМР (600 МГц, ОМ50-ав) б ррт 2,50 (5, З Н) 3,09 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 4,00 (5, З Н) 6,28 (й, уУ7,68 Гц, 1 Н) 6,56 - 6,63 (т, 2 Н) 6,92 (рі 5, 1 Н) 6,97 (ай, 9У-8,4, 1,9 Гу, 1 Н) 7,05 (Бг 5, 1 Н) 7,07

(а, 9-7,9 Гц, 1 Н) 7,13 (а, 9-1,9 Гц, 1 Н) 7,35 (й, 9-84 Гу, 1 Н) 7,90 (Бг 5, 1 Н) 8,53 (5, 1 Н) 12,41 (бг 5, 1 Н)

Ї С/М5 (Спосіб Спосіб І С-А): Ві 1,26 хв., МН" 597 (Фо: 81,37 (с 0,3455, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5ЕС-Е): В: 2,96 хв., МН" 597, хіральна чистота 10095.

Енантіомер 118 "Н ЯМР (600 МГц, ОМ50О-дв) б ррт 2,51 (5, З Н) 3,09 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 4,00 (5, З Н) 6,28 (а, 97,9 Гу, 1 Н) 6,58 - 6,60 (т, 2 Н) 6,92 (І, 9-1,8 Гу, 1 Н) 6,97 (аа, 9У-8,4, 1,9 Гу, 1 Н) 7,05 (Брг 5, 1 Н) 7,06 (а, 9-7,9 Гц, 1 Н) 7,13 (а, 9-21 Гу, 1 Н) 7,35 (а, 9-8,2 Гц, 1 Н) 7,89 (Бг 5, 1 Н) 8,53 (5, 1 Н) 12,37 (рг 5,1 Н)

І С/М5 (Спосіб І С-А): Ві 1,26 хв., МН" 597

ІФЧог-о: -87,47 (с 0,342, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5БЕС-Е): Ве 3,44 хв., МН" 597, хіральна чистота 10095.

ПРОТИВІРУСНА АКТИВНІСТЬ СПОЛУК ЗА ДАНИМ ВИНАХОДОМ

Аналіз противірусної активності щодо ОЄММ-2

Тестували противірусну активність усіх сполук за даним винаходом проти штаму 16681

РЕММ-2, який мітили підсиленим зеленим флуоресцентним білком (есЕР, таблиця 1).

Середовище для культивування складалося з мінімального підтримувального середовища, доповненого 295 термічно інактивованої фетальної телячої сироватки, 0,0495 гентаміцину (50 мг/мл) ії 2 мМ Г-глутаміну. Клітини Мего, одержані з ЕСАСС, суспендували в середовищі для культивування та додавали по 25 мкл у 384-лункові планшети (2500 клітин/лунка), які вже містили противірусні сполуки. Зазвичай ці планшети містили 5-кратне серійне розбавляння, що складалося з 9 стадій розбавляння, тестованої сполуки при 200-кратній кінцевій концентрації в 100956 ОМ5О (200 нл). Крім того, концентрацію кожної сполуки тестували в чотирьох паралельних аналізах (діапазон кінцевої концентрації: 25 мкМ - 0,000064 мкМ або 2,5 мкМ - 0,0000064 мкМ для найбільш активних сполук). У результаті кожний планшет містив лунки, які визначали як контролі з вірусом (які містять клітини та вірус без сполуки), контролі з клітинами (що містять клітини без вірусу та сполуки) та контролі із середовищем (які містять середовище без клітин, вірусу та сполук). У лунки, які визначали як контролі із середовищем, додавали 25 мкл середовища для культивування замість клітин Мего. Після того, як клітини додавали у планшети, планшети інкубували протягом 30 хвилин при кімнатній температурі для забезпечення рівномірного розподілу клітин у лунках. Далі планшети інкубували у повністю зволоженому інкубаторі (37 "С, 595 СО») до наступного дня. Потім штам 16681 ОЕММ-2, мічений есСЕР, додавали при множинності зараження (МОЇ), що становила 0,5. Таким чином, 15 мкл вірусної суспензії додавали у всі лунки, що містили тестовану сполуку, і у всі лунки, які визначали як контролі з вірусом. Паралельно до контролів із середовищем та клітинами додавали 15 мкл середовища для культивування. Далі планшети інкубували протягом З днів у повністю зволоженому інкубаторі (37 "С, 595 СО»). У день проведення зчитування вимірювали флуоресценцію есЕР із застосуванням автоматизованого флуоресцентного мікроскопа при 488 нм (блакитний лазер). Застосовуючи службову систему ГІМ5, розраховували криві залежності інгібування від дози для кожної сполуки та визначали напівмаксимальну ефективну концентрацію (ЕСвхо). Таким чином, розраховували відсоток інгібування (І) для кожної тестованої концентрації із застосуванням наступної формули: І - 1005(5т-5сс)/(Змо-Осс); при цьому 5т, сс і

Зус являють собою рівень сигналу еСЕР у лунках із тестованими сполуками, контролями з клітинами та контролями з вірусом, відповідно. ЕСв5о являє собою концентрацію сполуки, при якій реплікація вірусу інгібується на 5095, що виміряно за допомогою 5095 відновлення інтенсивності флуоресценції есЕР порівняно з контролем із вірусом. Розраховували ЕсСбо із застосуванням лінійної інтерполяції.

Паралельно оцінювали токсичність сполук у тих самих планшетах. Після того, як проводили зчитування сигналу есЕР, у всі лунки 384-лункових планшетів додавали 40 мкл АТРІЇЙе, барвника, який є індикатором життєздатності клітин. АТР присутній у всіх метаболічно активних клітинах, і у випадку якщо клітини піддаються некрозу або апоптозу, - його рівень різко знижується. Система аналізу АТРІ Це грунтується на виробленні світла, викликаного реакцією

АТР із доданою люциферазою та ЮО-люциферином. Планшети інкубували протягом 10 хвилин при кімнатній температурі. Потім планшети вимірювали на Мієул/их. Також визначали напівмаксимальну ефективну концентрацію (ССвзо), визначену як концентрацію, необхідну для зменшення люмінесцентного сигналу на 5095 порівняно з лунками контролю з клітинами. У результаті визначали індекс вибірковості (5І) для сполук, який розраховували так, як вказано нижче: 5І - СС5о/ЕСво. (510)

Таблиця 1

ЕСво, ССбво і ЗІ для сполук за даним винаходом в аналізі противірусної активності щодо ОЕММ-2

Мо

ЛА | 0000206, | 8 | 43 | 8 | 19700 | 8 / 18 | 00121 6 | 65 | 6 | 530 | 6

З | 0бо00о58 17774111 | 76 17137700 | 4 бА | 0000068 | 8 | »25 | 8 | 565500 | 8 6 | 0019 2 щЩщ 4 | 7 | 4 1 63 | 4 7А | 00131. .3 | 68 | з | 538 | з 8 | боіз / 6 | 29 | 7 | з0400 | 6 9 | 0000074 | 6 | з | 8 | 53900 | 6 9А | 0000067 | 9 | 29 | 9 | 537500 | 9 9 | 000398. | 5 | 62 | 6 | 1480 | 5 / лов | 00039,4.1..юЮю.3 | 98 | з | 2530 | з /

М - кількість незалежних експериментів, у яких тестували сполуки.

Аналіз із кількісною ПЦР зі зворотною транскриптазою (КТ-ДРСК) щодо квадривалентної вакцини: протокол А.

Тестували противірусну активність сполук за даним винаходом проти штаму ТС9748666

РЕММ-1 (МСРУ; таблиця 6), штаму 16681 ЮЕММ-2 (таблиця 7), штаму НВ7 СЕММ-3 (МСРУ; таблиця 8) і штамів Н241 СЕММ-4 (МОСРУ; таблиця 9А) ії 565/06К22700К1/2005 СЕММ-4 (ЕОЕМ; таблиця 9В) в аналізі з КТ-ДРСК. Таким чином, клітини Мего інфікували або за допомогою штаму ОЕММ-Ї1, або -2, або -3, або -4 у присутності або відсутності тестованих сполук. На З день після інфікування клітини лізували і клітинні лізати застосовували для одержання кДНК як вірусу-мішені (З'ШТК ОЕММ; таблиця 2), так і еталонного гена клітини (В-актин, таблиця 2).

Згодом здійснювали дуплексну ПЦР у режимі реального часу на пристрої Гідпісусіег480.

Генерований рівень Ср є обернено пропорційним відносно кількості експресованої РНК цих мішеней. Інгібування реплікації ОЕММ за допомогою тестованої сполуки спричинило зсув Ср для гену З'ЮТК. З іншого боку, якщо тестована сполука є токсичною щодо клітин, то буде спостерігатися схожий ефект щодо експресії ВД-актину. Для обчислення ЕСхо застосовували порівняльний спосіб ДАсСр, який грунтується на відносній генній експресії гена-мішені (З'ОТЕ), нормалізованого конститутивним геном клітини (В-актином).

Таблиця 2

Праймери та зонди, застосовувані для кількісної КТ-РСК у режимі реального часу а Елементи репортерних барвників (ГАМ, НЕХ) і гасників люмінесценції (2ЕМ і ІАВКЕО) виділені жирним і курсивом. ь Вибирали нуклеотидну послідовність праймерів і зондів із консервативної ділянки в області

З'ОТЕК геному вірусу денге на підставі вирівнювання 300 нуклеотидних послідовностей чотирьох серотипів вірусу денге, депонованих у Сепбрапк (Сопо еї аї., 2013, Меїпоаз Мої Віої, Спаріег 16).

Середовище для культивування складалося з мінімального підтримувального середовища, доповненого 295 термічно інактивованої фетальної телячої сироватки, 0,0495 гентаміцину (50 мг/мл) ії 2 мМ Г-глутаміну. Клітини Мего, одержані з ЕСАСС, суспендували в середовищі для культивування і додавали по 75 мкл/лунка в 96-лункові планшети (10000 клітин/лунка), які вже містили противірусні сполуки. Зазвичай дані планшети містили 5-кратне серійне розбавляння, що складалося з 9 стадій розбавляння, тестованої сполуки у 200-кратній кінцевій концентрації у 10095 ОМ5О (500 нл; діапазон кінцевої концентрації: 25 мкМ - 0,000064 мкМ або 2,5 мкМ - 0,0000064 мкМ для найбільш активних сполук). Крім того, кожний планшет містив лунки, які визначали як контролі з вірусом (що містять клітини та вірус без сполуки) і контролі з клітинами (що містять клітини без вірусу та сполуки). Після додавання клітин у планшети, планшети інкубували у повністю зволоженому інкубаторі (37 "С, 595 СО») до наступного дня. Серотипи 1, 2, З і 4 вірусу денге розбавляли з метою одержання Ср «22-24 в аналізі. Таким чином, 25 мкл вірусної суспензії додавали в усі лунки, що містили тестовану сполуку, а також в усі лунки, які визначали як контролі з вірусом. Паралельно до контролів із клітинами додавали 25 мкл середовища для культивування. Потім планшети інкубували протягом З днів у повністю зволоженому інкубаторі (37 "С, 595 СО»). Після З днів видаляли надосадову рідину з лунок і двічі промивали клітини РВ5 із льодом (100 мкл). Згустки клітин у 96-лункових планшетах зберігали при -80 "С протягом щонайменше 1 дня. Потім екстрагували РНК із застосуванням набору для лізування СеїІ5-0о-СТ"М згідно з інструкціями виробника (Ге Тесппоіодібє5). Клітинні лізати можна зберігати при -80 "С або відразу ж застосовувати на стадії зі зворотною транскрипцією.

При підготовці до стадії зі зворотною транскрипцією одержували суміш А (таблиця ЗА) і розподіляли по 7,57 мкл/лунку в 9б6-лунковому планшеті. Після додавання 5 мкл клітинних лізатів здійснювали п'ятихвилинну стадію денатурації при 75 "С (таблиця ЗВ). Згодом додавали 7,43 мкл суміші В (таблиця ЗС) та ініціювали стадію зі зворотною транскрипцією (таблиця 30) з метою утворення кДНК.

У результаті одержували суміш С (таблиця 4А), - суміш для КТ-ДРСВ, - і розподіляли по 22,02 мкл/лунка в 96-лункових планшетах для ДРСК ГГ ідніСусієг, до яких додавали З мкл кКДНК і

Зо здійснювали ДРСЕ на ГідпіСусіег 480 згідно з умовами в таблиці 48.

Криві залежності від дози для кожної сполуки розраховували із застосуванням програмного забезпечення ГГ ідпіСусіег і службової системи ГІМ5, і визначали напівмаксимальну ефективну концентрацію (ЕСво) і напівмаксимальну цитотоксичну концентрацію (Ссво).

Зо

Таблиця З

Синтез КДНК із застосуванням суміші А, денатурації, суміші В і зворотної транскрипції

АЇ Суміша ЇЇ 7111Ї11111111111111Г11111111111г

Планшеи./// Її 77777871 ЇЇ

Ге в р 20И «| КМ |в суміші (мкл

Вк ПИ То хто ОН ПОН КОНЯ НО КО ДОН КОТ ЯБЯ взшшяе5 17777777 мкМ | 7777/7207 1 1027 | 2 щ-( 0577 | 1240

Васшивуб/// 777777 мкМ | 77/20 1 027 | щ-(0И5 771 120

З ПНЯ ПОЛ НС УЗ тес НН НИ НІЙ 11111111 Клітиннілватиїд/// | 5500... | ..ЄЮС

В| Стадіяденатурацї | //////7777777711Ї111111111111111111111111111Ї111111111111111Ї1

Стадя 777777 Темї//// | 77777 Час ЇЇ!

ОЇ Денатураця | -( 75 ОО |Ї77777/75111111111 Її

Утримування.д// | -: 4"С | о утримування./:.7/7/| ///:К/(/: / б о Сумшв //ї77111111111Ї11111111111111111111111111Ї11111111ї1г

ЇЇ Зраамм///ї77777717864 Ї11111111111111111111111111Ї111111111111ї1

Буфер2Ехрапанії!. ХГ 71000100 | 20077171 172850 77771 мось 17777777 мм | 77712500, 5,50 | що | ог 777 амтт 1777777 ммо | 71000100 | 777 2ьоо 1117171 17280 сінібіторРНКази | Од/мл. | 4000 2 2 00 | щ -05о 77777 4320

ОЇ Денатураця | (996 Ж КК | 5 | / Її

Утримування.ї | 4"С 00 | утримування | -:/ | !

Таблиця 4

Суміш для ДРУК і протокол

А|Сумішс Її 1111

Об. реакційної фени ве 00 шу 005

Елемент . ;

Бен 0001 100000 1 оди нин нені ян 0100хяв вимірювання

НО для

ПЦР (від 7,14 644742

Воспе

Суміш

Воспе Хх 2 1 12,50 10412,50

РУ о сРз3ШШе5В | мкм 20 | 03 | 038 | | 316,54 2 кеКе о ІвЗшя2г5 | мкм 20 | 03 | 038 | | 316,54 2 кфКх о сРЗМЗАЗ | мкм 120 | 01 | оз | | 70829 2 ж"ВМК о Расі743 | мкм 20 | 03 | 038 | | 316,54 щцКМ8 о Васіпвб | мкм 20 | 03 | 038 | | 316,54 (иИ ос Расіп/73 | мкм 20 | 01 | оз | | 70829 2 ж"Б 111 обєм | 2202

2 272 11 11200000 (мкл) 1 кднко ЇЇ з00 | | 77777777

В (ПротосюлдРСВ3.//-/ | 7 ЇЇ 11111111 о ЇСтадя 017 Темп. | Час 0 Швидкістьзмниї//:////СУНЄи! о |Поперед.інкуб/денат 95"С | їО0хв. | 44 о І|Денатураця | 95Є | ї0с | 44 о |Відпалювання.їд/// | 58'СЄ | о їхво | 22 | 40 циклів о ЗЕлонаця | 72"Є | ї7їс | 44 (| ТЇОхолоджування.д/// | 40"С | 10с | 15

Аналіз із кількісною ПЦР зі зворотною транскриптазою (КТ-ДРСК) щодо квадривалентної вакцини: протокол В.

Тестували противірусну активність сполук за даним винаходом проти штаму бііроші ОЕММ-1 (О1/НЛМТ55А/98/606; таблиця 6), штаму МОС ОЕММ-2 (таблиця 7), штаму Н8В7 ОЕММ-3 (таблиця 8) і штаму 565/06К22700К1/2005 РЕМУ-4 (таблиця 9В) в аналізі з КТ-ДРСВ. Клітини

Мего-В або Мего-М (5 х 107) висівали в 9б-лункові планшети. За день середовище для культивування клітин замінювали 100 мкл середовища для кількісного визначення, що містило 2х, Зх або 5х серійне розбавляння сполуки (діапазон концентрації: 50 мкг/мл - 0,00038 мкг/мл, 50 мкг/мл - 0,0076 мкг/мл і 50 мкг/мл - 0,00013 мкг/мл, відповідно) та 100 мкл інокуляту вірусу денге (ОЕММ). Після 2-годинного інкубаційного періоду З рази промивали клітинний моношар середовищем для кількісного визначення з видаленням залишкового неадсорбованого вірусу та додатково інкубували протягом або 4 днів (ФЕММ-2 МОСС), або 7 днів (штам біроції

Р1/НИЛМТ55А/98/606 ЮЕМУ-1, прототип, який являє собою штам НВ7 СЕММ-3, штам Н241 ОЕММ- 4 і штам ЕОЕМ ЮОЕММ-4) у присутності інгібітора. Збирали надосадову рідину та визначали РНК- навантаження за допомогою кількісної КТ-РСК у режимі реального часу. 5095 ефективну концентрацію (ЕСзо), яку визначали як концентрацію сполуки, що необхідна для інгібування реплікації вірусної РНК на 50595, визначали із застосуванням логарифмічної інтерполяції.

РНК виділяли зі 100 мкл (або в деяких випадках 150 мкл) надосадової рідини за допомогою набору Мисіеобріп 96 Міги5 (Рійег Зегмісе, Дюрен, Германія), як описано виробником.

Послідовності праймерів ТадмМап (прямий праймер для ОЕММ, зворотний праймер для ОЕММ; таблиця 5) і зондів ТадМап (зонд для ОЕММУ, таблиця 5) вибирали з неструктурного гена З (М53) або М55 відповідних флавівірусів із застосуванням програмного забезпечення Ргітег Ехрге55 (версія 2.0; Арріїей Віозузієет5, Леннік, Бельгія). Зонд ТадМап флуоресцентно мітили за допомогою б-карбоксифлуоресцеїну (РАМ) на 5'-кінці як репортерного барвника і речовини, яка зв'язується з малою борозною (МОВ), на 3'-кінці як гасника люмінесценції (таблиця 5).

Проводили одностадійну кількісну КТ-РСК у загальному об'ємі 25 мкл зі вмістом 13,9375 мкл

НгО, 6,25 мкл мастер-міксу (Еигодепіес, Серен, Бельгія), 0,375 мкл прямого праймера, 0,375 мкл

Зо зворотного праймера, 1 мкл зонду, 0,0625 мкл зворотної транскриптази (Еигодепіес) і З мкл зразка. Проводили КТ-РСК із застосуванням системи АВІ 7500 для швидкої ПЦР у режимі реального часу (Арріїєй Віозузіет5, Бренчбург, Нью-Джерсі, США) та із застосуванням наступних умов: 30 хв. при 48 "С і 10 хв. при 95 "С, з наступними 40 циклами по 15 с при 95"Сі 1 хв. при 60 "С. Дані аналізували з використанням програмного забезпечення АВІ РКІЗМ 7500

ЗО5 (версія 1.3.1; Арріїєй Віозувзієт5). Для повного кількісного аналізу складали стандартні криві із застосуванням 10-кратного розбавляння одержаної матриці з відомими концентраціями.

Таблиця 5

Праймери і зонди, застосовувані для кількісної КТ-РСК у режимі реального часу

Праймер/зонд Послідовність (5' -- 3) а

Прямий праймер ТосслоссосАСТТТАСААА (5БО 10 М.Л) | ОєММ 2 МОС МаЗ для ОЕММ

Зворотний праймер для ТСТТААСатТоСасссСАТОИАТ (5ЕО ІО М.2)

РЕМУ

Зонд ОЕММ РАМ-АТТОСАСАСААТОТОССАТ МОВ (ЗЕО М Ж

СОАТАСАССАСАСАТССТОСТОТ (5ЕО ОМ.) ОЕММ-1, -3, -4

ОепАБІ1-3 САТТССАТТТТСТОССОИТТС (5ЕО О М.5 ОЕММ-1,-3 1

ОепА54 СААТССАТСТТОаСОССОСТО (5ЕО ІЮ М.6 ОЕММ-4 | 00

Зонд ОЕМ. 1-3 ГАМ-САОСАТСАТТОСАСОСАСАВ-МОВ (ЗБОЇ оєму-1, 3 ЩІ

Зонд ОЕМ. 4 ГАМ-СААСАТСААТОСАСОСАСАО МОВ (ЗЕО ОЕМУ-4 ЩІ а Елементи репортерного барвника (РАМ) і гасника люмінесценції (МОВ/ТАМЕКА) виділені жирним і курсивом.

Ь Нуклеотидну послідовність і положення для праймерів і зондів у геномі виводили з нуклеотидної послідовності МОСС ОЕММ 2 (номер доступу в СепВапк М29095; Ігіе еї аї!., 1989), штаму біїйроші О1/НЛМТ5БЗА/98/606 серотипу 1 вірусу денге (номер доступу в Сепрапк

АР298808), прототипу, який являє собою штам Н8В7 серотипу З вірусу денге (с93130), штаму

НгА41 серотипу 4 вірусу денге (немає доступних послідовностей), штаму ЕОЕМ серотипу 4 вірусу денге (немає доступних послідовностей).

Аналіз на цитотоксичність

Оцінювали потенційні цитотоксичні ефекти сполук у неінфікованих клітинах Мего-В або Мего-

М, які перебували у стані спокою. Клітини висівали при 5 х 107 клітин/лунка в 96-лунковий планшет при двох-, трьох- або п'ятикратних серійних розбавляннях (у діапазоні відповідно 50 мкг/мл - 0,0038 мкг/мл, 50 мкг/мл - 0,0076 мкг/мл і 50 мкг/мл - 0,00013 мкг/мл) сполуки та інкубували протягом від 4 до 7 днів. Відбирали середовище для культивування і в кожну лунку додавали 100 мкл 3-(4,5-диметилтіазол-2-іл)-5-(3-карбоксиметоксифеніл)-2-(4-сульфофеніл)- 2Н-тетразолій/феназинметосульфату (МТ5/РМ5; Рготеда, Лейден, Нідерланди) в РВ5. Після 2- годинного періоду інкубування при 37 "С визначали оптичну густину при 498 нм. Розраховували цитотоксичну активність із застосуванням наступної формули: 95 життєздатних клітин - 100 х (ООсполук/ОЮсс), де ОЮсполукик і ОЮсс відповідають оптичній густині при 498 нм неінфікованих культур клітин, оброблених за допомогою сполуки, та неінфікованих, необроблених культур клітин, відповідно. 5095 цитотоксичну концентрацію (тобто концентрацію, яка зменшує загальну кількість клітин до 5090; ССво) розраховували із застосуванням лінійної інтерполяції.

Таблиця 6

ЕСово, ССво і ЗІ для сполук проти серотипу 1 в аналізах із застосуванням КТ-ЯРСВ 11111111 ПротоволАГ/////// | 7 ПротоюлВЗ-ГУЗСС-СУЗ-З ши ВТ-аРСВ. ТС9748666 серотипу 1 ВТ-аРСВ біїроції серотипу 1

Мо ЕСво ССво ЕСво ССво

ТА 0,0025| 9 5,0 9 1950 9 |«0,015| З 8 6 2533 З 2гА 0,0024| 6 53 6 2190 б |«0,014| 2 7,3 З 2523 2

ЗА 0,0042| 6 5,5 5 1360 5 Н.В. |нН.в.| Н.В. | Н.В. Н.В. | Н.В. 4А 0,00097 8 Б 8 4400 8 |«0,014| З 4,3 4 »306 З

БА 0,0036| 6 52 6 1460 б |«0,014| 2 9,2 2 »658 2 бА 0,0016| 6 510 б 58160) 6 |-0,014| 2 » 92 З |56571 2 7 0,00040Ї З 2,2 2 6600 2 Н.В. |нН.в.| Н.В. | Н.В. Н.В. | Н.В. 8 0,00045 5 1,9 6 3130 4 Н.В. |нН.в.| Н.В. | Н.В. Н.В. | Н.В.

ОА Ю0,00011| 4 1,7 5 |13300| 4 Н.В. |нН.в.| Н.В. | Н.В. Н.В. | Н.В.

ТА Ю00027 2 1,6 2 5670 2 Н.В. |нН.в.| Н.В. | Н.В. Н.В. | Н.В.

ТА 00013 2 »2,9 2 рг2100 2 Н.В. | Н.В. Н.В. | Н.В.| Н.В. | Н.В.

М - кількість незалежних експериментів, у яких тестували сполуки. Н. В.: не визначено.

Таблиця 7

ЕсСово, ССво і ЗІ для сполук проти серотипу 2 в аналізах із застосуванням ЕТ-Я9РСВ 10771111 ПротоюлА.ЇГ/////// | 7/7 ПротоюлВЗ- У ХСЗ:З(|З/З/С/С/С«З ши ВТ-ЯРСВ 16681 серотипу 2 ВТ-дРОВ МОс-Топааїїке серотипу 2

Мо ЕСБО Со50 ЕС5БО Со50 0,00028 15300 |8| «0,00027 »40470| 4 000024 |5| 4,9 2 |6/ 2150015 «0,00024 »45833| 1 000030 |6| 50 /6| 9970 6| н.в. |н.в. н.в. |н.в/ н.в. |нН.в. 0,00020 25400 |6| 000032 | 1 | 66 | 1 | 20339 000034 |5| 5,8 619000 |5/ «0,00023 000011 |7| 510 6р1423066| -0,00024| 1 592 | 1 5383333 1 0,00017 23600 000031 |4| 22 /6| 23400 0,000057 31700 0,000057 28200 0,000051 »69000

Таблиця 8

ЕСово, ССво і ЗІ для сполук проти серотипу З в аналізах із застосуванням ЕТ-Я9РСВ 11111111 ПротоволА/////77/ | 7 Протокл8..7/7/7/://3/|: ши ВТ-аРСЕ, Н87 серотипу З ВТ-аРСЕ, Н87 серотипу З

Мо ЕС5БО Со50 ЕСБО Со50 0,023 -0,0151 З | 80 | 6 |5533| З 0,019 -0,014 0,048 00151 6 | зи | 4 |195| 4 |«0,014

88 (00058 4 | 21 | з | 609 з | н.в.| Нв. нав. нав. нав. Н.В.

Таблиця 9

ЕСово, ССво і ЗІ для сполук проти серотипу 4 в аналізах із застосуванням КТ-ДРСВА 11111111 ПротоюлАГ/:///СССССС/С/:/3/-:КЗЯИС 11111111 вгарРСвнНоєісеротипує,//:/ (СС

ЛА | 0093 1 10 | 30 | 9 | 3 6 9 .72А 7 | 0083 16 | 37 | 6 | 42 | 6

ЗА 101 17711716 11138 14 | 9 6 щЩ 4 5А | 0ло 171716 | 40 | 6 | 93 | ДЮющ ж Б36 7 6А | 10095 1 ЮДщ (7 | 77 | 5 | 69 | 5 /

М « кількість незалежних експериментів, у яких тестували сполуки. в 11111111 ПротоюлАГ/://///СССС/:К/ оС: 11111111 ВТаРСВЕОЕМмМсеротипуї//-/:/ (С

ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ

«1105» Уапззеп Рпаптасецпшісаї!5, пс

КаїноїїеКе Опімегейей І еимеп «1205» ПОХІДНІ МОНО- АБО ДИЗАМІЩЕНИХ ІНДОЛІВ ЯК ІНГІБІТОРИ РЕПЛІКАЦІЇ ВІРУСІВ

ДЕНГЕ

-130» ТІР 328 РСТ «1505 ЕР1І5166900.9 -1515 2015-05-08 «1505 ЕРІ6163342.5 -1515 2016-03-31 -160» 14 -1705» ВІЗ5АР 1.2 «21051 «2115» 20 «212» ДНК

-213» вірус денге «221» джерело «222» 1...20 «223» /організм-"вірус денге" /лип молекули-:"невизначена ДНК" «4005 1

Ісддадсс99 адшасааа 20 «21052 «2115» 20 «212» ДНК -213» вірус денге «220» «221» джерело «222» 1...20 «223» /організм-"вірус денге" /лип молекули-:"невизначена ДНК" «40052

Існаасадіс содсссаюаї 20 «2105 3 «2115 19 «212» ДНК -213» вірус денге «220» «221» джерело «222» 1...19 «223» /організм-"вірус денге" /лип молекули-:"невизначена ДНК" «4005 З айссасаса аюдсаї 19 «2105» 4 «2115» 23

Коо) «212» ДНК -213» вірус денге «220» «221» джерело «222» 1...23 «223» /організм-"вірус денге" /лип молекули-:"невизначена ДНК" «4005» 4 ддаїадасса дадаїссідс щі 23 «21055 «2115» 20 «212» ДНК -213» вірус денге «220» «221» джерело «222» 1...20 «223» /організм-"вірус денге" /лип молекули-:"невизначена ДНК" «4005 5 сайссаш ісюдсонсе 20 «21056 «2115» 20 «212» ДНК -213» вірус денге «220» «221» джерело «222» 1...20 «223» /організм-"вірус денге" /лип молекули-:"невизначена ДНК" «4005 6 саагссаїсі їдсадсосіс 20 «2105 7 «2115» 20 (510) «212» ДНК

Зб

-213» вірус денге «221» джерело «222» 1...20 «223» /організм-"вірус денге" /лип молекули-:"невизначена ДНК" «4005 7 садсаїсай ссаддсасад 20 2105» 8 «2115» 20 «212» ДНК -213» вірус денге «220» «221» джерело «222» 1...20 «223» /організм-"вірус денге" /лип молекули-:"невизначена ДНК" «400» 8 саасаїсааї ссаддсасад 20 «2105 9 «2115 19 «212» ДНК -213» вірус денге «220» «221» джерело «222» 1...19 «223» /організм-"вірус денге" /лип молекули-:"невизначена ДНК" «4005» 9 сдонададо адассссіс 19 «210510 «2115 21

Коо) «212» ДНК -213» вірус денге «220» «221» джерело «222» 1...21 «223» /організм-"вірус денге" /лип молекули-:"невизначена ДНК" «4005 10 дадасадсазд даїсістюаі с 21 «2105 11 «2115» 28 «212» ДНК -213» вірус денге «220» «221» джерело «222» 1...28 «223» /організм-"вірус денге" /лип молекули-:"невизначена ДНК" «4005 11 ааддасіада ддапададда дассссосс 28 «210512 «211518 «212» ДНК -213» вірус денге «220» «221» джерело «222» 1...18 «223» /організм-"вірус денге" /лип молекули-:"невизначена ДНК" «4005 12 ддссаддіса Іісассай 18 «210513 «2115 21 (510) «212» ДНК

-213» вірус денге «020» «221» джерело «222» 1...21 «223» /організм-"вірус денге" /лип молекули-:"невизначена ДНК" «4005 13 ащіссасодї сасаснсаї 9 21 «-2105» 14 «2115 21 «212» ДНК -213» вірус денге «020» «221» джерело «222» 1...21 «223» /організм-"вірус денге" /лип молекули-:"невизначена ДНК" «400» 14 пссдсідсс сіасдасісі с 21

Claims

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Сполука або її стереоїзомерна форма, або фармацевтично прийнятна сіль, де вказана сполука являє собою: -й Ге ен оме а их 7 | ах й ке ШИ ШЕ Ше т ве У нн в- ша ше в .

2. Фармацевтична композиція, яка містить сполуку за п. 1 або її стереоїзомерну форму, або її фармацевтично прийнятну сіль разом з одним або кількома фармацевтично прийнятними наповнювачами, розріджувачами або носіями.

3. Сполука за п. 1 або її стереоїзомерна форма, або її фармацевтично прийнятна сіль або фармацевтична композиція за п. 2 для застосування як лікарського препарату. Ко)

4. Сполука за п. 1 або її стереоїзомерна форма, або її фармацевтично прийнятна сіль або фармацевтична композиція за п. 2 для застосування при лікуванні денге.

5. Застосування сполуки, представленої наступною структурною формулою (1): нний мк Я У На р. х й І а ря Осн» М і я рн КК, щ 7 х й й іх Ек 1 ши: ч шк У М В ХЕ / й У | НН г х Кк ; (І) її стереоіїзомерної форми або її фармацевтично прийнятної солі, де: Ві являє собою ОСЕ:», В2 являє собою Н, і Вз являє собою Н, для виробництва лікарського засобу для інгібування реплікації вірусу(ів) денге у пацієнта.

6. Застосування сполуки за п. 5, яке додатково передбачає спільне введення додаткового терапевтичного засобу.

7. Застосування за п. б, де вказаний додатковий терапевтичний засіб вибраний із противірусного засобу або вакцини проти вірусу денге або їх обох.

8. Застосування сполуки, представленої наступною структурною формулою (1): С но -Х З У щу о мн осн У /і шов, ) у Ж Е

В. них і меня к: а чи м ЧИ ї Х х Я? ІН х звання у ЩЕ я ТА Ко) ка КД мк М цк во Шк М сей ми о С і: й 0) її стереоізомерної форми або її фармацевтично прийнятної солі, де Ві являє собою ОСЕ:», В2 являє собою Н, і Вз являє собою Н, для інгібування реплікації вірусу(ів) денге в біологічному зразку.