EA034978B1 - Производные моно- или дизамещенных индолов в качестве ингибиторов репликации вирусов денге - Google Patents

Производные моно- или дизамещенных индолов в качестве ингибиторов репликации вирусов денге Download PDF

Info

Publication number
EA034978B1
EA034978B1 EA201792429A EA201792429A EA034978B1 EA 034978 B1 EA034978 B1 EA 034978B1 EA 201792429 A EA201792429 A EA 201792429A EA 201792429 A EA201792429 A EA 201792429A EA 034978 B1 EA034978 B1 EA 034978B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
compounds
compound
dengue
denv
virus
Prior art date
Application number
EA201792429A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201792429A1 (ru
Inventor
Барт Рудольф Романи Кестелейн
Жан-Франсуа Бонфанти
Тим Хьюго Мария Йонкерс
Пьер Жан-Мари Бернар Рабуассон
Дороте Алис Мари-Эв Бардио
Арно Дидье М Маршан
Original Assignee
Янссен Фармасьютикалз, Инк.
Католике Университейт Левен
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Янссен Фармасьютикалз, Инк., Католике Университейт Левен filed Critical Янссен Фармасьютикалз, Инк.
Publication of EA201792429A1 publication Critical patent/EA201792429A1/ru
Publication of EA034978B1 publication Critical patent/EA034978B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/10—Indoles; Hydrogenated indoles with substituted hydrocarbon radicals attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/14—Radicals substituted by nitrogen atoms, not forming part of a nitro radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/10—Indoles; Hydrogenated indoles with substituted hydrocarbon radicals attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/12—Radicals substituted by oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/08—Bridged systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/08—Bridged systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D513/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00
    • C07D513/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D513/08—Bridged systems
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Indole Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Изобретение относится к соединениям моно- или дизамещенных индолов формулы (I), способам предупреждения или лечения вирусной инфекции денге посредством применения указанных соединений, а также относится к указанным соединениям для применения в качестве лекарственного средства, более предпочтительно для применения в качестве лекарственного средства для лечения или предупреждения вирусной инфекции денге. Изобретение дополнительно относится к фармацевтическим композициям или комбинированным препаратам на основе соединений, к композициям или препаратам для применения в качестве лекарственного средства, более предпочтительно для предупреждения или лечения вирусной инфекции денге. Изобретение также относится к способам получения таких соединений.

Description

Изобретение относится к соединениям моно- или дизамещенных индолов, к применению указанных соединений в качестве лекарственного средства, более предпочтительно для применения в качестве лекарственного средства для лечения или предупреждения вирусной инфекции денге. Изобретение дополнительно относится к фармацевтическим композициям или комбинированным препаратам на основе соединений, к композициям или препаратам для применения в качестве лекарственного средства, более предпочтительно для предупреждения или лечения вирусной инфекции денге.
Предпосылки изобретения
Флавивирусы, которые переносятся комарами или клещами, являются причиной опасных для жизни инфекций у человека, таких как энцефалит и геморрагическая лихорадка. Известны четыре различных, но тесно связанных серотипа флавивируса, вызывающего денге, так называемые DENV-1, -2, -3 и -4. Денге характерна для большинства тропических и субтропических регионов всего мира, преимущественно в городских и полугородских районах. Согласно Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) 2,5 миллиарда людей, из которых 1 миллиард детей, подвержены риску инфицирования DENV (ВОЗ, 2002). По оценкам, ежегодно во всем мире происходит от 50 до 100 миллионов случаев лихорадки денге [DF], полмиллиона случаев заболевания денге в тяжелой форме (т.е. геморрагической лихорадкой денге [DHF] и синдромом шока денге [DSS]) и более чем 20000 смертей. DHF стала основной причиной госпитализации и смерти среди детей в эндемических регионах. В целом денге является наиболее распространенной причиной заболевания, вызванного арбовирусами. Благодаря недавним крупным вспышкам в странах, расположенных в Латинской Америке, Юго-Восточной Азии и Западной части Тихого Океана (в том числе в Бразилии, Пуэрто-Рико, Венесуэле, Камбодже, Индонезии, Вьетнаме, Таиланде), количество случаев денге сильно возросло за последние годы. Число случаев денге не только увеличивается по мере распространения заболевания в новых районах, но и вспышки имеют склонность становиться более тяжелыми.
Для предупреждения и/или контроля заболевания, ассоциированного с вирусной инфекцией денге, в настоящее время единственными доступными способами являются стратегии, направленные на уничтожение комаров с целью контроля переносчика инфекции. Хотя и имеет место прогресс в разработке вакцин против денге, существует много трудностей. Они включают существование явления, называемого зависимым от антитела усилением (ADE). Выздоровление от инфекции, вызванной одним серотипом, обеспечивает пожизненный иммунитет против данного серотипа, однако придает лишь частичную и временную защиту против последующей инфекции, вызванной одним из трех остальных серотипов. При последующем инфицировании другим серотипом уже существующие гетерологичные антитела формируют комплексы с вновь инфицирующим серотипом вируса денге, однако не нейтрализуют патоген. Вместе с тем предполагают, что облегчается вхождение вируса в клетки, что приводит к неконтролируемой репликации вируса и повышению пика титров вирусов. Как при первичной, так и при вторичной инфекциях повышение титров вируса ассоциировано с заболеванием денге в более тяжелой форме. Одной из причин того, что дети более подвержены заболеванию денге в тяжелой форме, чем взрослые, может быть факт того, что материнские антитела могут легко передаваться младенцам при грудном вскармливании.
В местах с двумя или несколькими серотипами, которые циркулируют одновременно, также называемыми регионами с повышенной эндемичностью, риск заболевания денге в тяжелой форме значительно выше из-за повышенного риска перенести вторичную, более тяжелую инфекцию. Более того, в условиях повышенной эндемичности вероятность появления более вирулентных штаммов является повышенной, что в свою очередь повышает вероятность геморрагической лихорадки денге (DHF) или синдрома шока денге.
Комары, которые переносят возбудителей денге, в том числе Aedes aegypti и Aedes albopictus (желтолихорадочный комар), движутся на север земного шара. Согласно Центрам по контролю и профилактике заболеваний (CDC) Соединенных Штатов (США) оба вида комаров в настоящее время являются повсеместными в южном Техасе. Распространение на север комаров, переносящих возбудителей денге, не ограничено распространением в США, но наблюдается также и в Европе.
Недавно (декабрь 2015 года), вакцина против вируса денге, полученная Sanofi Pasteur, была впервые одобрена в Мексике. Вакцина также была одобрена в Бразилии, Филиппинах и Сальвадоре. Регуляционное тестирование продолжается в других странах, где денге является приоритетом общественного здравоохранения. Тем не менее, вакцина оставляет широкие возможности для улучшения в связи с ограниченной эффективностью, особенно против DENV-1 и -2, низкой эффективностью у субъектов, ранее не обработанных флавивирусами, и длительной схемой приема препарата.
Несмотря на эти недостатки, вакцина представляет собой кардинальную перемену в эндемической ситуации, поскольку она предоставляет защиту большой части населения, но вероятно не младенцам, которые больше всех страдают от денге. Кроме того, схема приема препарата и очень ограниченная эффективность у субъектов, ранее не обработанных флавивирусами, делает ее непригодной и нецелесообразной/нерентабельной для путешественников из не эндемических областей в денге-эндемические области. Упомянутые выше недостатки вакцин против вируса денге являются причиной, почему существует потребность в противовирусном средстве от возбудителя денге для прединфекционной профилактики.
- 1 034978
Более того, в настоящее время отсутствуют конкретные противовирусные лекарственные средства для лечения или предупреждения инфекции, вызванной вирусом лихорадки денге. Очевидно, что все еще существует большая неудовлетворенная потребность медицины в терапевтических средствах для предупреждения или лечения вирусных инфекций у животных, более конкретно у людей, а особенно для вирусных инфекций, вызванных флавивирусами, более конкретно вирусом денге. Чрезвычайно необходимыми являются соединения с хорошей противовирусной активностью, которые не имеют побочных эффектов или имеют низкие уровни побочных эффектов, характеризуются широким спектром активности против множества серотипов вируса денге, низкой токсичностью и/или подходящими фармакокинетическими или динамическими свойствами.
В настоящем изобретении представлены соединения, являющиеся производными моно- или дизамещенных индолов, которые проявляют высокую активность против всех четырех (4) серотипов вируса денге. Также соединения в соответствии с настоящим изобретением обладают хорошим фармакокинетическим профилем и, неожиданно, данные конкретные соединения проявляют улучшенную хиральную стабильность.
Краткое описание изобретения
Изобретение основано на неожиданном обнаружении того, что по меньшей мере одна из вышеупомянутых проблем может быть решена с помощью представленных соединений по изобретению.
В изобретении представлено соединение, которое, как было показано, обладает высокой противовирусной активностью против всех четырех (4) серотипов, известных на сегодняшний день. Более того, в изобретении продемонстрировано, что это соединение эффективно ингибируют пролиферацию вируса денге (DENV). Следовательно, это соединение является сильнодействующим соединением, которое можно применять при лечении и/или предупреждении вирусных инфекций у животных, млекопитающих и людей, более конкретно для лечения и/или предупреждения инфекций, вызванных вирусами денге.
Более того, настоящее изобретение относится к применению такого соединения в качестве лекарственных препаратов и к его применению для изготовления лекарственных препаратов для лечения и/или предупреждения вирусных инфекций, в частности вызванных вирусами, принадлежащими к семейству вирусов денге, у животных или млекопитающих, в частности у людей. Настоящее изобретение также относится к способам получения такого соединения и к фармацевтическим композициям, включающим его в эффективном количестве.
Одним аспектом настоящего изобретения является предоставление соединения формулы (I)
CI
его стереоизомерной формы, фармацевтически приемлемой соли Частью настоящего изобретения также является фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы (I) или его стереоизомерную форму или фармацевтически приемлемую соль вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми наполнителями, разбавителями или носителями.
Фармацевтически приемлемые соли соединения формулы (I) включают его соли присоединения кислоты и основные соли. Подходящие соли присоединения кислоты образуются из кислот, которые образуют нетоксичные соли. Подходящие основные соли образуются из оснований, которые образуют нетоксичные соли.
Соединение по настоящему изобретению можно вводить в виде кристаллических или аморфных продуктов. Они могут быть получены, например, в виде твердой прессованной массы, порошков или пленок посредством таких способов, как осаждение, кристаллизация, сублимационная сушка, сушка распылением или сушка выпариванием. Их можно вводить отдельно или в комбинации с одним или несколькими другими соединениями по настоящему изобретению, или в комбинации с одним или несколькими другими лекарственными средствами. Как правило, их будут вводить в виде состава в сочетании с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми наполнителями. Термин наполнитель используется в данном документе для описания любого ингредиента, отличного от соединения (соединений) по настоящему изобретению. Выбор наполнителя в большой степени зависит от таких факторов, как конкретный способ введения, влияние наполнителя на растворимость и стабильность, а также природа лекарственной формы.
Соединения по настоящему изобретению или любая их подгруппа могут быть составлены в различные фармацевтические формы для целей введения. В качестве подходящих композиций могут быть упомянуты все композиции, обычно применяемые для системно вводимых лекарственных средств. Для получения фармацевтических композиций по настоящему изобретению эффективное количество конкретного соединения, необязательно в форме соли присоединения, в качестве активного ингредиента объединяют в однородную смесь с фармацевтически приемлемым носителем, при этом носитель может прини
- 2 034978 мать широкое разнообразие форм в зависимости от формы препарата, требующегося для введения. Эти фармацевтические композиции желательно представлены в виде единичной лекарственной формы, подходящей, например, для перорального или ректального введения. Например, при получении композиций в пероральной лекарственной форме может использоваться любая из общепринятых фармацевтических сред, такая как, например, вода, гликоли, масла, спирты и т.п. в случае пероральных жидких препаратов, таких как суспензии, сиропы, настойки, эмульсии и растворы; или твердых носителей, таких как крахмалы, сахара, каолин, разбавители, смазывающие средства, связующие средства, разрыхлители и т.п. в случае порошков, пилюль, капсул и таблеток. Благодаря своей простоте введения таблетки и капсулы представляют собой наиболее предпочтительные пероральные единичные лекарственные формы, в случае которых очевидно используются твердые фармацевтические носители. Также включены препараты в твердой форме, которые можно преобразовать непосредственно перед применением в жидкие формы.
Особенно предпочтительным является составление вышеупомянутых фармацевтических композиций в виде единичной лекарственной формы для простоты введения и равномерности дозирования. Единичная лекарственная форма, используемая в данном документе, относится к физически отдельным единицам, подходящим в качестве единичных доз, при этом каждая единица содержит предварительно установленное количество активного ингредиента, рассчитанное для получения необходимого терапевтического эффекта, в сочетании с требующимся фармацевтическим носителем. Примерами таких единичных лекарственных форм являются таблетки (в том числе делимые или покрытые оболочкой таблетки), капсулы, пилюли, пакетики с порошком, пластинки, суппозитории, растворы или суспензии для инъекций и т.п., а также их отдельные множества.
Специалисты в области лечения инфекционных заболеваний смогут определить эффективное количество, исходя из результатов тестов, представленных в данном документе ниже. В целом, предполагается, что эффективное суточное количество будет составлять от 0,01 до 50 мг/кг веса тела, более предпочтительно от 0,1 до 10 мг/кг веса тела. Может оказаться целесообразным вводить требуемую дозу в виде двух, трех, четырех или более частей дозы с соответствующими интервалами на протяжении дня. Указанные части дозы можно составлять в виде единичных лекарственных форм, например содержащих от 1 до 1000 мг и, в частности, от 5 до 200 мг активного ингредиента на единичную лекарственную форму.
Точная дозировка и частота введения зависят от конкретного применяемого соединения формулы (I), конкретного состояния, подлежащего лечению, тяжести состояния, подлежащего лечению, возраста, веса и общего физического состояния конкретного пациента, а также другого медикаментозного лечения, которое может получать индивидуум, что хорошо известно специалистам в данной области. Более того, очевидно, что эффективное количество может быть снижено или увеличено в зависимости от реакции подвергаемого лечению субъекта и/или в зависимости от оценки врача, назначающего соединения по настоящему изобретению. Таким образом, вышеупомянутые диапазоны эффективного количества являются лишь рекомендациями и не предназначены для ограничения в той или иной мере объема или применения настоящего изобретения.
Подразумевается, что настоящее раскрытие также включает в себя любые изотопы атомов, присутствующие в соединениях по настоящему изобретению. Например, изотопы водорода включают тритий и дейтерий, а изотопы углерода включают в себя C-13 и C-14.
Соединения, применяемые в настоящем изобретении, могут также существовать в стереохимически изомерной форме, охватывая все возможные соединения, составленные из одних и тех же атомов, связанных с помощью такой же последовательности связей, однако имеющие разные пространственные структуры, которые не являются взаимозаменяемыми. Если не упомянуто или не указано иное, то химическое обозначение соединений охватывает смесь всех возможных стереохимически изомерных форм, которыми могут обладать указанные соединения.
Указанная смесь может содержать все диастереомеры и/или энантиомеры с основной молекулярной структурой указанного соединения. Подразумевается, что все стереохимически изомерные формы соединений, применяемые по настоящему изобретению либо в чистом виде, либо в смеси друг с другом, предназначены для включения в объем настоящего изобретения, в том числе любые рацемические смеси или рацематы.
Чистые стереоизомерные формы упомянутых в настоящем документе соединений и промежуточных соединений определяются как изомеры, по сути не содержащие других энантиомерных или диастереомерных форм одной и той же основной молекулярной структуры указанных соединений или промежуточных продуктов. В частности, термин стереоизомерно чистый относится к соединениям или промежуточным соединениям, характеризующимся стереоизомерным избытком от по меньшей мере 80% (т.е. минимум 90% одного изомера и максимум 10% других возможных изомеров) до стереоизомерного избытка 100% (т.е. 100% одного изомера и отсутствие другого), более конкретно, к соединениям или промежуточным соединениям, характеризующимся стереоизомерным избытком от 90 до 100%, еще более конкретно, характеризующимся стереоизомерным избытком от 94 до 100%, и наиболее конкретно, характеризующимся стереоизомерным избытком от 97 до 100%. Термины энантиомерно чистый и диастереомерно чистый следует понимать подобным образом, но в таком случае в отношении соответственно энантиомерного избытка и диастереомерного избытка смеси, представляющей интерес.
- 3 034978
Чистые стереоизомерные формы соединений и промежуточных соединений, применяемые в соответствии с настоящим изобретением, можно получить при применении процедур, известных из уровня техники. Например, энантиомеры можно разделять друг от друга с помощью селективной кристаллизации их диастереомерных солей с оптически активными кислотами или основаниями. Их примерами являются винная кислота, дибензоилвинная кислота, дитолуоилвинная кислота и камфорсульфоновая кислота. В качестве альтернативы энантиомеры можно разделять с помощью хроматографических методик с применением хиральных неподвижных фаз. Указанные чистые стереохимически изомерные формы можно также получить из соответствующих чистых стереохимически изомерных форм соответствующих исходных веществ при условии, что реакция протекает стереоспецифически. Предпочтительно, если требуется определенный стереоизомер, указанное соединение будет синтезировано с помощью стереоспецифических способов получения. В данных способах преимущественно применяют энантиомерно чистые исходные вещества.
Общие подходы синтеза.
Синтез соединения формулы I можно осуществлять как изложено на схеме 1. 2-(4-Хлор-2метоксифенил)уксусная кислота (II) может быть превращена в соответствующий 2-(4-хлор-2метоксифенил)ацетилхлорид (III) с применением реактива для хлорирования, такого как, например, тионилхлорид. Реакцию Фриделя-Крафтса хлорангидрида III с замещенным индолом общей формулы IV можно осуществлять с применением реактива, представляющего собой кислоту Льюиса, например такого как Et2AlCl или TiCl4, в подходящем растворителе, например таком как CH2Cl2 или 1,2-дихлорэтан, и при подходящих условиях реакции, которые, как правило (но не исключительно), включают охлаждение, с получением 3-ацилированного индола общей формулы V. Введение анилинового фрагмента в альфаположение по отношению к карбонильному фрагменту соединения общей формулы V можно осуществлять с помощью последовательности реакций, которая включает, например, бромирование V реактивом, например, таким как трибромид фенилтриметиламмоний, в подходящем растворителе, например, таком как THF, с получением соединений общей формулы VI, и последующее приведение в реакцию соединений общей формулы VI 3-метокси-5-(метилсульфонил)анилина (VII) в подходящем растворителе, например, таком как CH3CN, и, как правило, с применением основания, например, такого как TEA или DIPEA, с получением соединений общей формулы I в виде рацемических смесей. Хиральное разделение соединений общей формулы I можно осуществлять с помощью, например, хиральной хроматографии для получения энантиомеров А и В общей формулы I.
Схема 1
В некоторых случаях синтез промежуточного соединения общей формулы V по методу синтеза Фриделя-Крафтса зависит от наличия защитной группы (PG) при индол-N на стадии реакции ФриделяКрафтса, как указано на схеме 2. С этой целью замещенный индол общей формулы IV может быть сначала превращен в N-защищенное промежуточное соединение общей формулы VIII, например, такое как N-тозилированное промежуточное соединение общей формулы VIII (PG=Ts) с применением реагента, например, такого как тозилхлорид, в присутствии основания, например, такого как гидрид натрия. Реакцию Фриделя-Крафтса замещенного индола общей формулы IV с хлорангидридом III можно осуществлять с применением реактива, представляющего собой кислоту Льюиса, например, такого как Et2AlCl или TiCl4, в подходящем растворителе, например, таком как CH2Cl2 или 1,2-дихлорэтан, и при подходящих условиях реакции, которые, как правило (но не исключительно), включают охлаждение, с получением 3-ацилированного N-защищенного индола общей формулы IX. Удаление защитной группы PG индол- 4 034978
N промежуточного соединения общей формулы IX может быть осуществлено с помощью реактива, например, такого как LiOH (для PG=Ts), в смеси растворителей, например, такой как THF/вода, и при подходящей температуре реакции с получением 3-ацилированного индола общей формулы V.
Схема 2
В качестве альтернативного подхода промежуточное соединение общей формулы V также можно получить как изложено на схеме 3. N-Boc-защищенный замещенный индол-3-карбальдегид общей формулы X можно превратить в соответствующее промежуточное соединение по типу соединения из реакции Штрекера общей формулы XI посредством проведения реакции с морфолином в присутствии реагентов, таких как, например, цианид натрия и бисульфит натрия, и в подходящем растворителе, таком как, например, смесь воды и смешиваемого с водой органического растворителя, такого как, например, диоксан. Алкилирование соединения общей формулы XI 4-хлор-2-метоксибензилхлоридом можно осу ществлять в присутствии основания, такого как, например, гексаметилдисилазан калия, и в подходящем растворителе, таком как, например, DMF, с получением соединения общей формулы XII. Воздействие на соединение общей формулы XII подходящего водного кислотного гидролитического условия, такого как, например, обработка водным раствором хлористоводородной кислоты при повышенной температуре, дает промежуточное соединение общей формулы V.
Схема 3
Примеры
Способы LC/MS.
Измерения в ходе осуществления высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC) проводили с помощью насоса для LC, детектора на диодной матрице (DAD) или УФ-детектора и колонки, как описано в соответствующих способах. При необходимости использовали дополнительные детекторы (см. приведенную ниже таблицу способов).
Поток из колонки направляли в масс-спектрометр (МС), который был оснащен источником ионизации при атмосферном давлении. В компетенции специалиста в данной области техники находится установка настраиваемых параметров (например, диапазона сканирования, времени выдержки и т.п.) с целью получения ионов, позволяющих определить номинальный моноизотопный молекулярный вес (MW) соединения. Сбор данных проводили с помощью соответствующего программного обеспечения.
Соединение описывали по его экспериментальному времени удерживания (Rt) и ионам. Если не указано иное, то в таблице данных указанный молекулярный ион представляет собой [M+H] (протонированную молекулу) и/или [M-H]- (депротонированную молекулу). В случае, если соединение не было непосредственно способно к ионизации, указывают тип аддукта (т.е. [M+NH4] , [M+HCOO]- и т.д.). Для молекул со сложными изотопными распределениями (Br, Cl) описанное значение является таким значением, которое получено для наименьшей массы изотопа. Все результаты получали с экспериментальными погрешностями, которые обычно связаны с применяемым способом.
Далее в данном документе SQD означает одиночный квадрупольный детектор, MSD означает масс-селективный детектор, RT означает комнатную температуру, ВЕН означает мостиковый гибрид этилсилоксана/диоксида кремния, DAD означает детектор на диодной матрице, HSS означает диок- 5 034978 сид кремния повышенной прочности.
Коды способов LCMS (поток выражен в мл/мин; температура колонки (Т) в °С; время анализа в минутах) _____________________________________________________________________________
Код способа Прибор Колонка Подвижная фаза Градиент Поток т колонки Время анализа (мин.)
LC-A Waters: Acquity® UPLC® - DAD-SQD Waters : ВЕН C18 (1,7 мкм, 2,1x50 мм) А: 10 мМ CH3COONH4 в 95% Н2О+5% CH3CN В: CH3CN От 95% А до 5% А за 1,3 мин, удерживание в течение 0,7 мин 0,8 мл/мин 55°С 2
LC-B Waters : Acquity® UPLC® DAD-SQD Waters : HSS ТЗ (1,8 мкм, 2,1x100 мм) А: 10 мМ CH3COONH4 в 95% Н2О+5% CH3CN В: CH3CN От 100% А до 5% А за 2,10 мин. , до 0% А за 0,90 мин., до 5% А за 0,5 мин. 0,7 мл/мин 55°С 3,5
LC-C Waters : Acquity® UPLC® - DADQuattro Micro™ Waters : ВЕН С18 (1,7 мкм, 2,1x100 мм) А: 95% 7 мМ CH3COONH4/ 5% CH3CN, В: CH3CN 84,2% А в течение 0,49 мин до 10,5% А через 2,18 мин, удерживание в течение 1,94 мин, снова до 84,2% А через 0,73 мин, удерживание в течение 0,73 мин. 0,343 мл/мин 4 0°С 6,2
LC-D Waters : Acquity® UPLC® DAD- Acquity® TQ детектор Waters: ВЕН С18 (1,7 мкм, 2,1x50 мм) А: 10 мМ CH3COONH4 (доведено до pH 10) В: CH3CN От 50% А до 10% А за 3,5 мин. , удерживание в течение 1,5 мин. 0,5 мл/мин 4 0°С 5
Способы SFC-MS.
Измерения в ходе SFC проводили с применением аналитической системы хроматографии (SFC) со сверхкритической подвижной фазой, укомплектованной насосом для двухкомпонентных смесей для доставки диоксида углерода (CO2) и модификатора, автоматическим дозатором, термостатом для колонок, детектором на диодной матрице, оснащенным проточной кюветой для работы под высоким давлением, выдерживающим значения до 400 бар. При оснащении масс-спектрометром (MS) поток из колонки направляли в (MS). В компетенции специалиста в данной области техники находится установка настраиваемых параметров (например, диапазона сканирования, времени выдержки и т.п.) с целью получения ионов, позволяющих определить номинальный моноизотопный молекулярный вес (MW) соединения. Сбор данных проводили с помощью соответствующего программного обеспечения.
Аналитические способы SFC-MS (скорость потока выражена в мл/мин; температура колонки (Т) в °С; противодавление (BPR) в барах).
- 6 034978
Код способа Колонка Подвижная фаза Градиент Поток Т колонки Время анализа BPR
SFC-A WHELK-01 (S,S) 5 мкм 250x4,6 мм Regis А: СО2 В: МеОН 50% В с удержанием 7 мин. 3 7
35 100
SFC-B Колонка Daicel Chiralpak® IC-H (5 мкм, 150x4,6 мм) А: СО2 В: МеОН 40% В с удержанием 7 мин. 3 7
35 100
SFC-C WHELK-01 (S,S) 5 мкм 250x4,6 мм Regis А: СО2 В: МеОН 60% В с удержанием 9 мин. 3 9
35 100
SFC-D Колонка Daicel Chiralpak® ΙΑ-Η (5 мкм, 250x4,6 мм) А: СО2 В: МеОН 50% В с удержанием 7 мин. 3 7
35 100
SFC-E Колонка Daicel Chiralpak® AS3 (3,0 мкм, 150x4,6 мм) А: СО2 В: EtOH + 0,2% iPrNH2 +3% Н2О 10% - 50% В за 6 мин., удерживание 3,5 мин. 2,5 9,5
40 110
SFC-F Колонка Daicel Chiralpak® AD-H (5,0 мкм, 150x4,6 мм) А: СО2 В: iPrOH + 0,3% iPrNH2 30% В с удержанием 7 мин. 3 7
35 100
Точки плавления.
Значения представляют собой либо максимальные значения, либо диапазоны точек плавления, и их получают с экспериментальными погрешностями, которые обычно связаны с данным аналитическим способом.
DSC823e (обозначен как DSC).
Для ряда соединений точки плавления определяли с помощью DSC823e (Mettler-Toledo). Точки плавления измеряли при градиенте температуры 10°С/мин. Максимальная температура составляла 300°С.
Углы оптического вращения.
Углы оптического вращения измеряли на поляриметре Perkin-Elmer 341 с натриевой лампой и обозначали следующим образом: [α]° (λ, с г/100 мл, растворитель, Т°С).
[α]λ I=(100α)/(lxс), где l означает длину пробега в дм, а с означает концентрацию в г/100 мл для образца при температуре T (°С) и длине волны λ (в нм). Если используемая длина волны света составляет 589 нм (D-линия натрия), то вместо этого можно использовать символ D. Всегда следует приводить знак направления вращения (+ или -). В случае применения данного уравнения концентрацию и растворитель всегда приводят в круглых скобках после угла вращения. Угол вращения указывают в градусах, а единицы концентрации не приводят (принято, что они представлены в г/100 мл).
Пример. Синтез 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-2-((3-метокси-5-(метилсульфонил)фенил)амино)-1-(5(трифторметокси)-1H-индол-3-ил)этанона (соединение 9) и хиральное разделение на энантиомеры 9А и 9В
- 7 034978
Синтез промежуточного соединения 9а.
Раствор 5-(трифторметокси)-1Н-индола [CAS 262593-63-5] (3 г, 14,9 ммоль) в CH2CI2 (150 мл) охлаждали до 0°С в атмосфере N2. Добавляли по каплям 1М раствор диэтилалюминия хлорида в гексане (22,4 мл, 22,4 ммоль) и полученную в результате смесь выдерживали при 0°С в течение 15 мин. Добавляли по каплям раствор 2-(4-хлор-2-метоксифенил)ацетилхлорида 1а (4,57 г, 20,9 ммоль) в CH2Cl2 (100 мл). Перемешивание продолжали при 0°С в течение 1 ч и реакционную смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакционную смесь выливали в перемешиваемый раствор льда/соли Рошеля. После того как лед растаял, смесь фильтровали через Dicalite® и осадок на фильтре несколько раз промывали THF. Фильтраты объединяли. Слои разделяли и органический слой промывали солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении. Остаток растирали в порошок с CH2Cl2 (50 мл). Полученный осадок отфильтровывали и высушивали под вакуумом при 50°С с получением 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(5-(трифторметокси)-1H-индол-3-ил)этанона 9а (4,39 г).
Синтез промежуточного соединения 9b.
Перемешиваемый раствор 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(5-(трифторметокси)-1H-индол-3ил)этанона 9а (4,39 г, 11,4 ммоль) в THF (200 мл) охлаждали до 0°С.
Добавляли по каплям раствор трибромида фенилтриметиламмония [CAS 4207-56-1] (4,73 г, 12,6 ммоль) в THF (100 мл). Полученную в результате суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Твердые вещества удаляли посредством фильтрации и промывали THF. Объединенные фильтраты выпаривали при пониженном давлении. Остаток смешивали с EtOAc (30 мл). Твердые вещества выделяли посредством фильтрации, промывали небольшим количеством EtOAc и высушивали под вакуумом при 50°С с получением 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(5-(трифторметокси)-1H-индол-3ил)этанона 9b (5,0 г) в виде белого твердого вещества, который применяли без дополнительной очистки на следующей стадии.
Синтез соединения 9 и хиральное разделение энантиомеров 9А и 9В.
Смесь 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(5-(трифторметокси)-1H-индол-3-ил)этанона 9b (2,5 г, 5,40 ммоль), 3-метокси-5-(метилсульфонил)анилина [CAS 62606-02-4] (1,49 г, 7,38 ммоль) и диизопропилэтиламина (931 мкл, 5,40 ммоль) в CH3CN (100 мл) перемешивали в течение ночи при 90°С. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в CH2Cl2 (100 мл), промывали 1н. HCl (100 мл) и водой (100 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии (неподвижная фаза: силикагель Grace Reveleris® 120 г, подвижная фаза: EtOAc:EtOH (3:1)/гептан, градиент от 0/100 до 50/50). Требуемые фракции объединяли и выпаривали при пониженном давлении. Остаток осаждали из EtOAc (10 мл) при перемешивании. Твердые вещества выделяли посредством фильтрации и промывали небольшим количеством EtOAc с получением 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-2-((3-метокси-5-(метилсульфонил)фенил)амино)-1-(5-(трифторметокси)-1H-индол-3-ил)этанона (соединение 9, 477 мг) в виде рацемической смеси. Фильтрат выпаривали при пониженном давлении и остаток поглощали EtOAc (5 мл). После перемешивания в течение ночи твердые вещества выделяли посредством фильтрации и промывали EtOAc с получением второго выхода соединения 9 (216 мг).
Хиральное разделение энантиомеров соединения 9 (663 мг) осуществляли посредством хирального разделения с использованием нормальной фазы (неподвижная фаза: AS 20 мкм, подвижная фаза: 100% метанол). Фракции, содержащие продукт, объединяли и выпаривали с получением энантиомера 9А в качестве первого элюированного продукта и энантиомера 9В в качестве второго элюированного продукта. Энантиомер 9А перемешивали в Н2О (2 мл) и МеОН (3 мл) при 40°С. Твердые вещества отфильтровывали, промывали Н2О/МеОН 1/1 (3х) и высушивали под вакуумом при 45°С с получением энантиомера 9А (151 мг). Энантиомер 9В дополнительно очищали посредством флеш-хроматографии на силикагеле (не- 8 034978 подвижная фаза: силикагель Grace Reveleris® 12 г, подвижная фаза: гептан/EtOAc/EtOH от 100/0/0 до
40/45/15). Требуемые фракции объединяли, выпаривали при пониженном давлении и выпаривали совместно с EtOAc. Остаток перемешивали в МеОН (5 мл) и осаждали посредством медленного добавления
Н2О (4 мл). Твердые вещества отфильтровывали, промывали Н2О/МеОН 1/1 (3х) и высушивали под вакуумом при 50°С с получением энантиомера 9В (132 мг).
Соединение 9.
1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ ppm 3,09 (s, 3H) 3,73 (s, 3H) 3,99 (s, 3H) 6,26 (d, J=7,9 Гц, 1H) 6,576,62 (m, 2H) 6,91 (t, J=1,9 Гц, 1H) 6,98 (dd, J=8,4, 2,0 Гц, 1H) 7,07 (d, J=7,9 Гц, 1H) 7,13 (d, J=2,0 Гц, 1H) 7,22 (dd, J=8,6, 2,2 Гц, 1H) 7,36 (d, J=8,4 Гц, 1H) 7,59 (d, J=8,8 Гц, 1H) 8,06 (d, J=0,9 Гц, 1H) 8,55 (s, 1H) 12,28 (br s, 1H).
LC/MS (способ LC-A): Rt 1,31 мин, МН+ 583.
Энантиомер 9А.^ ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ ppm 3,09 (s, 3H) 3,73 (s, 3H) 3,99 (s, 3H) 6,26 (d, J=7,9 Гц, 1H) 6,55-6,62 (m, 2H) 6,91 (t, J=1,5 Гц, 1H) 6,98 (dd, J=8,4, 2,0 Гц, 1H) 7,07 (d, J=7,9 Гц, 1H) 7,13 (d, J=2,0 Гц, 1H) 7,21 (dd, J=8,8, 1,8 Гц, 1H) 7,36 (d, J=8,4 Гц, 1H) 7,59 (d, J=8,8 Гц, 1H) 8,07 (d, J=0,9 Гц, 1H) 8,55 (s, 1H) 12,29 (br s, 1H) LC/MS (способ LC-A): Rt 1,20 мин, МН+ 583.
[a]D 20: +130,3° (с 0,555, DMF).
Хиральная SFC (способ SFC-E): Rt 3,10 мин, МН+ 583, хиральная чистота 100%.
Энантиомер 9В.
1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ ppm 3,09 (s, 3H) 3,73 (s, 3H) 3,99 (s, 3H) 6,26 (d, J=7,9 Гц, 1H) 6,566,62 (m, 2H) 6,92 (t, J=2,0 Гц, 1H) 6,98 (dd, J=8,1, 2,0 Гц, 1H) 7,07 (d, J=7,9 Гц, 1H) 7,13 (d, J=2,0 Гц, 1H) 7,22 (dd, J=8,8, 1,8 Гц, 1H) 7,36 (d, J=8,4 Гц, 1H) 7,59 (d, J=8,8 Гц, 1H) 8,07 (d, J=0,9 Гц, 1H) 8,55 (s, 1H) 12,30 (br s, 1H).
LC/MS (способ LC-A): Rt 1,20 мин, МН+ 583.
[a]D 20: -133,2° (с 0,5, DMF).
Хиральная SFC (способ SFC-E): Rt 3,50 мин, МН+ 583, хиральная чистота 100%.
Противовирусная активность соединений по изобретению
Анализ противовирусной активности в отношении DENV-2.
Тестировали противовирусную активность соединения по настоящему изобретению против штамма 16681 DENV-2, который метили усиленным зеленым флуоресцентным белком (eGFP, табл. 1). Среда для культивирования состояла из минимальной поддерживающей среды, дополненной 2% термически инактивированной фетальной телячьей сыворотки, 0,04% гентамицина (50 мг/мл) и 2 мМ L-глутамина. Клетки Vero, полученные из ЕСАСС, суспендировали в среде для культивирования и добавляли по 25 мкл в 384-луночные планшеты (2500 клеток/лунка), которые уже содержали противовирусные соединения. Как правило, эти планшеты содержали 5-кратное серийное разбавление, состоящее из 9 стадий разбавления тестируемого соединения при 200-кратной конечной концентрации в 100% DMSO (200 нл). Кроме того, концентрацию каждого соединения тестировали в четырех повторностях (диапазон конечной концентрации: 25 мкМ -0,000064 мкМ или 2,5 мкМ - 0,0000064 мкМ для наиболее активных соединений). В результате каждый планшет содержал лунки, которые принимали в качестве контролей с вирусом (содержащих клетки и вирус без соединения), контролей с клетками (содержащих клетки без вируса и соединения) и контролей со средой (содержащих среду без клеток, вируса и соединений). В лунки, которые принимали в качестве контролей со средой, добавляли 25 мкл среды для культивирования вместо клеток Vero. После того как клетки добавляли в планшеты, планшеты инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре, что позволило клеткам равномерно распространиться в лунках. Далее планшеты инкубировали в полностью увлажненном инкубаторе (37°С, 5% CO2) до следующего дня. Затем штамм 16681 DENV-2, меченый eGFP, добавляли при множественности инфекции (MOI), равной 0,5. Следовательно, 15 мкл вирусной суспензии добавляли во все лунки, содержащие тестируемое соединение, и во все лунки, которые принимали в качестве контроля с вирусом. Одновременно добавляли 15 мкл среды для культивирования к контролю со средой и контролям с клетками. Далее планшеты инкубировали в течение 3 дней в полностью увлажненном инкубаторе (37°С, 5% СО2). В день проведения считывания измеряли флуоресценцию eGFP с применением автоматизированного флуоресцентного микроскопа при 488 нм (голубой лазер). Применяя служебную систему LIMS, рассчитывали кривые зависимости ингибирования от дозы для каждого соединения и определяли полумаксимальную эффективную концентрацию (EC50). Следовательно, рассчитывали процент ингибирования (I) для каждой тестируемой концентрации с применением следующей формулы:
I=100X(S T -SCC)/(SVC-SCC),
ST, Scc и SVC представляют собой уровень сигнала eGFP в лунках с тестируемыми соединениями, контролями с клетками и контролями с вирусом соответственно. EC50 представляет собой концентрацию соединения, при которой репликация вируса ингибируется на 50%, что измерено с помощью 50% уменьшения интенсивности флуоресценции eGFP по сравнению с контролем с вирусом. Рассчитывали EC50 с применением линейной интерполяции.
Одновременно оценивали токсичность соединения на тех же планшетах. После считывания сигнала
- 9 034978 eGFP во все лунки 384-луночных планшетов добавляли 40 мкл ATPlite, красителя, показывающего жизнеспособность клеток. АТР присутствует во всех метаболически активных клетках, и когда клетки подвергаются некрозу или апоптозу, его уровень резко снижается. Система анализа ATPLite основана на выработке света, вызванного реакцией АТР с добавленной люциферазой и D-люциферином. Планшеты инкубировали в течение 10 мин при комнатной температуре. Затем планшеты измеряли на ViewLux. Также определяли полумаксимальную цитотоксическую концентрацию (CC50), определенную как концентрация, необходимая для уменьшения люминесцентного сигнала на 50% по сравнению с лунками контроля с клетками. В результате определяли индекс избирательности (SI) для соединений, который рассчитывали, как указано ниже si=cc50/ec50
Таблица 1. EC50, CC50 и SI для соединения по настоящему изобретению в анализе противовирусной активности в отношении DENV-2
№ соединения ЕС50 (мкМ) N СС50 (мкМ) N SI N
9 0,000074 6 3,1 8 >39100 6
9А 0,000067 9 2,9 9 >37500 9
9В 0,0038 5 6,2 6 1480 5
N - количество независимых экспериментов, в которых тестировали соединения.
Анализ с количественной ПЦР с обратной транскриптазой (RT-qPCR) в отношении квадривалентной вакцины. Протокол А.
Тестировали противовирусную активность соединения по настоящему изобретению против штамма ТС974#666 DENV-1 (NCPV; табл. 6), штамма 16681 DENV-2 (табл. 7), штамма Н87 DENV-3 (NCPV; табл. 8) и штаммов Н241 DENV-4 (NCPV; табл. 9А) и SG/06K2270DK1/2005 DENV-4 (EDEN; табл. 9В) в анализе с RT-qPCR. Следовательно, клетки Vero инфицировали либо штаммом DENV-1, либо -2, или -3, или -4, в присутствии или при отсутствии тестируемых соединений. На 3-й день после инфицирования клетки лизировали и клеточные лизаты применяли для получения кДНК как для вируса-мишени (3'UTR DENV; табл. 2), так и эталонного гена клетки (β-актин, табл. 2). Впоследствии осуществляли дуплексную ПЦР в режиме реального времени на приборе Lightcycler480. Генерируемый уровень Ср является обратно пропорциональным по отношению к количеству экспрессируемой РНК этих мишеней. Ингибирование репликации DENV с помощью тестируемого соединения привело к сдвигу Cp для гена 3'UTR. С другой стороны, если тестируемое соединение является токсичным по отношению к клеткам, то будет наблюдаться похожий эффект и в отношении экспрессии β-актина. Для вычисления EC50 применяют сравнительный способ ЛЛСр, который основан на относительной генной экспрессии гена-мишени (3'UTR), нормализованного конститутивным геном клетки (β-актином).
Таблица 2. Праймеры и зонды, применяемые для количественной RT-PCR в реальном времени
Праймер/Зонд Мишень Последовательность*' b
F3utr2 5 8 DENV 3'-UTR 5'-CGGTTAGAGGAGACCCCTC-3'
R3utr425 DENV 3'-UTR 5'-GAGACAGCAGGATCTCTGGTC-3'
P3utr343 DENV 3'-UTR FAM-5'-AAGGACTAG-ZEN-AGGTTAGAGGAGACCCCCC-3'- IABkFQ
Factin743 β-актин 5'-GGCCAGGTCATCACCATT-3'
Ractin876 β-актин 5'-ATGTCCACGTCACACTTCATG-3'
Pactin773 β-актин HEX-5’-TTCCGCTGC-ZEN-CCTGAGGCTCTC-3'-IABkFQ
а Элементы репортерных красителей (FAM, HEX) и гасителей люминесценции (ZEN и IABkFQ) выделены жирным и курсивом.
b Выбирали нуклеотидную последовательность праймеров и зондов из консервативной области в 3'UTR области генома вируса денге на основании выравнивания 300 нуклеотидных последовательностей четырех серотипов вируса денге, депонированных в Genbank (Gong et al., 2013, Methods Mol. Biol., Chapter 16).
Среда для культивирования состояла из минимальной поддерживающей среды, дополненной 2% термически инактивированной фетальной телячьей сыворотки, 0,04% гентамицина (50 мг/мл) и 2 мМ Lглутамина. Клетки Vero, полученные из ECACC, суспендировали в среде для культивирования и добавляли по 75 мкл/лунка в 96-луночные планшеты (10000 клеток/лунка), которые уже содержали противовирусные соединения. Как правило, эти планшеты содержали 5-кратное серийное разбавление, состоя
- 10 034978 щее из 9 стадий разбавления тестируемого соединения в 200-кратной конечной концентрации в 100% DMSO (500 нл; диапазон конечной концентрации: 25 - 0,000064 мкМ или 2,5 - 0,0000064 мкМ для наиболее активных соединений). Кроме того, каждый планшет содержал лунки, которые принимали в качестве контролей с вирусом (содержащих клетки и вирус без соединения) и контролей с клетками (содержащих клетки без вируса и соединения). После добавления клеток в планшеты планшеты инкубировали в полностью увлажненном инкубаторе (37°С, 5% СО2) до следующего дня. Серотипы 1, 2, 3 и 4 вируса денге разводили с целью получения Ср ~22-24 в анализе. Следовательно, 25 мкл вирусной суспензии добавля ли во все лунки, содержащие тестируемое соединение, и во все лунки, которые принимали в качестве контролей с вирусом. Одновременно к клеточным контролям добавляли 25 мкл среды для культивирования. Далее планшеты инкубировали в течение 3 дней в полностью увлажненном инкубаторе (37°С, 5% CO2). Через 3 дня удаляли надосадочную жидкость из лунок и дважды промывали клетки ледяным PBS (~100 мкл). Сгустки клеток в 96-луночных планшетах хранили при -80°С в течение по меньшей мере 1 дня. Далее экстрагировали РНК с применением набора для лизирования Cells-to-CT™ согласно инструкциям изготовителя (Life Technologies). Клеточные лизаты можно хранить при -80°С или сразу же применять на стадии с обратной транскрипцией.
При подготовке к стадии с обратной транскрипцией получали смесь А (табл. 3A) и распределяли по 7,57 мкл/лунка в 96-луночном планшете. После добавления 5 мкл клеточных лизатов осуществляли пятиминутную стадию денатурации при 75°С (табл. 3B). Позже добавляли 7,43 мкл смеси В (табл. 3C) и инициировали стадию обратной транскрипции (табл. 3D) для образования кДНК.
В результате получали смесь С (табл. 4А) - смесь для RT-qPCR - и распределяли по 22,02 мкл/лунка в 96-луночных планшетах для qPCR LightCycler, куда добавляли 3 мкл кДНК и осуществляли qPCR на LightCycler 480 согласно условиям в табл. 4В.
Кривые зависимости от дозы для каждого соединения рассчитывали с применением программного обеспечения LightCycler и служебной системы LIMS и определяли полумаксимальную эффективную концентрацию (EC50) и полумаксимальную цитотоксическую концентрацию (CC50).
Таблица 3. Синтез кДНК с применением смеси А, денатурации, смеси В и обратной транскрипции
A) Смесь A
Планшеты
Об.
реакционной смеси (мкл)
Концентрация
Объем (мкл)
R3utr425
Ractin87 6
B) Стадия денатурации
Единица измерения
Исходная
образец
Объем смеси/лунка (мкл)
Клеточные лизаты
Стадия Температура Время
Денатурация 75°С 5 '
Удержание 4°С удержание
C) Смесь B
- 11 034978
Образцы 864
Элемент смеси Концентрация Объем (мкл)
Единица измерения Исходная Конечная 1 образец X образцов
Буфер 2 Expand HIFI X 10,00 1,00 2,00 1728,0
MgCl2 ММ 25,00 3,50 2,80 2419,2
dNTP мм 10,00 1,00 2,00 1728,0
Ингибитор РНК-азы U/мкл 40,00 1,00 0,50 432,0
Expand RT U/мкл 50,00 0,33 0,13 112,3
D) Протокол синтеза кДНК
Общий объем смеси (мкл)
7,43
Стадия Температура Время
Обратная транскрипция 42°С 30 '
Денатурация 99°С 5 '
Удержание 4°С удержание
Таблица 4. Смесь для qPCR и протокол A Смесь C
Образцы 833 Об. реакционной смеси (мкл) 25
Элемент смеси Концентрация Объем (мкл)
Единица измерения Исходная Конечная 1 образец X образцов
Н20 для PCR от Roche 7,74 6447,42
Смесь Roche 2хММ X 2 1 12,50 10412,50
F3utr258 мкМ 20 0,3 0,38 316,54
R3utr425 мкН 20 0,3 0,38 316,54
P3utr343 мкН 20 0,1 0,13 108,29
Factin7 4 3 мкН 20 0,3 0,38 316,54
Ractin87 6 мкН 20 0,3 0,38 316,54
Pactin77 3 мкН 20 0,1 0,13 108,29
Объем
смеси/пробирку 22,02
(мкл)
кДНК 3,00
B) Протокол qPCR3
- 12 034978
Скорость изменения
Стадия
Температура
Время
Предварительная инкуб./денат.
95°С мин
4,4
Денатурация
Отжиг
Элонгация
Охлаждение
95°С
58°С
72°С с
мин с
4,4
2,2
4,4
1,5 циклов
Анализ с количественной PCR с обратной транскриптазой (RT-qPCR) в отношении квадривалентной вакцины. Протокол В.
Тестировали противовирусную активность соединения по настоящему изобретению против штамма Djibouti DENV-1 (D1/H/IMTSSA/98/606; табл. 6), штамма NGC DENV-2 (табл. 7), штамма Н87 DENV-3 (табл. 8) и штамма SG/06K2270DK1/2005 DENV-4 (табл. 9В) в анализе с RT-qPCR. Клетки Vero-B или Vero-M (5х104) высевали в 96-луночные планшеты. Спустя один день среду для культивирования клеток заменяли 100 мкл среды для количественного определения, содержащей 2х, 3х или 5х серийное разведение соединения (диапазон концентрации: 50 - 0,00038 мкг/мл, 50 - 0,0076 мкг/мл и 50 - 0,00013 мкг/мл соответственно) и 100 мкл инокулята вируса денге (DENV). После 2-часового инкубационного периода 3 раза промывали клеточный монослой средой для количественного определения с удалением остаточного не адсорбированного вируса и дополнительно инкубировали в течение либо 4 дней (DENV-2 NGC) или 7 дней (штамм Djibouti D1/H/IMTSSA/98/606 DENV-1, прототип, представляющий собой штамм Н87 DENV-3, штамм Н241 DENV-4 и штамм EDEN DENV-4) в присутствии ингибитора. Собирали надосадочную жидкость и определяли РНК-нагрузку с помощью количественной RT-PCR в режиме реального времени. 50% эффективную концентрацию (EC50), которую определяют как концентрацию соединения, которая необходима для ингибирования репликации вирусной РНК на 50%, определяли с применением логарифмической интерполяции.
РНК выделяли из 100 мкл (или в некоторых случаях 150 мкл) надосадочной жидкости с помощью набора NucleoSpin 96 Virus (Filter Service, Дюрен, Германия) как описано производителем. Последовательности праймеров TaqMan (прямой праймер для DENV, обратный праймер для DENV; табл. 5) и зондов TaqMan (зонд для DENV, табл. 5) выбирали из неструктурного гена 3 (NS3) или NS5 соответствующих флавивирусов с применением программного обеспечения Primer Express (версия 2.0; Applied Biosystems, Ленник, Бельгия). Зонд TaqMan флуоресцентно метили с помощью 6-карбоксифлюоресцеина (FAM) на 5'-конце в качестве репортерного красителя и связывающегося с малой бороздкой ДНК вещества (MGB) на 3'-конце в качестве гасителя люминесценции (табл. 5). Проводили одноэтапную количественную RT-PCR в общем объеме 25 мкл с содержанием 13,9375 мкл Н2О, 6,25 мкл мастер-микса (Eurogentec, Серен, Бельгия), 0,375 мкл прямого праймера, 0,375 мкл обратного праймера, 1 мкл зонда, 0,0625 мкл обратной транскриптазы (Eurogentec) и 3 мкл образца. Проводили RT-PCR с применением ABI 7500 Fast Real-Time PCR System (Applied Biosystems, Бранчберг, Нью-Джерси, США) и с применением следующих условий: 30 мин при 48°С и 10 мин при 95°С с последующими 40 циклами 15 с при 95°С и 1 мин при 60°С. Данные анализировали с применением программного обеспечения ABI PRISM 7500 SDS (версия 1.3.1; Applied Biosystems). Для полного количественного анализа составляли стандартные кривые с применением 10-кратного разведения полученной матрицы с известными концентрациями.
- 13 034978
Таблица 5. Праймеры и зонды, применяемые для количественной RT-PCR в реальном времени
Праймер/Зонд Последовательность (5'->3') a Источник15 Мишень
Прямой праймер для DENV TCGGAGCCGGAGTTTACAAA (SEQ ID N.I) DENV 2 NGC NS3
Обратный праймер для DENV TCTTAACGTCCGCCCATGAT (SEQ ID N.2)
Зонд DENV FAM-ATTCCACACAATGTGGCAT-MGB (SEQ ID N.3)
DenS GGATAGACCAGAGATCCTGCTGT (SEQ ID N.4) DENV-1, -3, -4 NS5
DenASl-3 CATTCCATTTTCTGGCGTTC (SEQ ID N.5) DENV-1, -3
DenAS4 CAATCCATCTTGCGGCGCTC (SEQ ID N.6) DENV-4
Зонд DEN_l-3 FAM- CAGCATCATT CCAGGCACAG-MGB (SEQ ID N. 7) DENV-1, -3
Зонд DEN_4 FAM- CAACAT CAAT CCAGGCACAG-MGB (SEQ ID N. 8) DENV-4
а Элементы репортерного красителя (FAM) и гасителя люминесценции (MGB/TAMRA) выделены жирным и курсивом.
b Нуклеотидную последовательность и положение праймеров и зондов в геноме выводили из нуклеотидной последовательности NGC DENV 2 (номер доступа в GenBank M29095; Irie et al., 1989), штамма Djibouti D1/H/IMTSSA/98/606 серотипа 1 вируса денге (номер доступа в Genbank AF298808), прототипа, представляющего собой штамм Н87 серотипа 3 вируса денге (с93130), штамма Н241 серотипа 4 вируса денге (нет доступных последовательностей), штамма EDEN серотипа 4 вируса денге (нет доступных последовательностей).
Цитотоксический анализ.
Оценивали потенциальные цитотоксические эффекты соединений в неинфицированных покоящихся клетках Vero-B или Vero-M. Клетки высевали при 5х104 клеток/лунка в 96-луночный планшет при двух-, трех- или пятикратных серийных разведениях (в диапазоне 50 - 0,0038 мкг/мл, 50 - 0,0076 мкг/мл и 50 - 0,00013 мкг/мл соответственно) соединения и инкубировали в течение от 4 до 7 дней. Отбирали среду для культивирования и 100 мкл 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-5-(3-карбоксиметоксифенил)-2-(4-сульфофенил)-2H-тетразолия/феназинметосульфата (MTS/PMS; Promega, Лейден, Нидерланды) в PBS добавляли в каждую лунку. После 2-часового инкубационного периода при 37°С определяли плотность клеток при 498 нм. Рассчитывали цитотоксическую активность с применением следующей формулы:
% жизнеспособных клеток=100х(ODcoeдинeниe/ODCC), где ODcoe^eme и ODCC соответствуют оптической плотности при 498 нм неинфицированных культур клеток, обработанных с помощью соединения, и неинфицированных, необработанных культур клеток соответственно. 50% цитотоксическую концентрацию (т.е. концентрацию, которая уменьшает общее количество клеток на 50%; CC50) рассчитывали с применением линейной интерполяции.
Таблица 6. EC5q, CC50 и SI для соединений против серотипа 1 в анализах RT-qPCR
Протокол A Протокол В
RT-qPCR TC974#666 серотипа 1 RT-qPCR Djibouti серотипа 1
EC50 (mkM) N CC50 (mkM) N SI N ec50 N (mkM) cc50 N (mkM) SI N
0,00011 4 1,7 5 9 13300 4 H. O. H. O. H. O. H. O. 3 H. 0. H. 0.
N - количество независимых экспериментов, в которых тестировали соединения; Н. О. - не определено.
Таблица 7. EQp, CC50 и SI для соединений против серотипа 2 в анализах RT-qPCR
Протокол A Протокол В
RT-qPCR 16681 серотипа 2 RT-qPCR NGC-Tongalike серотипа 2
EC50 (mkM) N CC50 (mkM) N SI N EC50 (mkM) N CC50 (mkM) N SI N
0,000057 3 2,2 4 31700 3 H. O. H. O. H. O. H. O. H. O. H. O.
N - количество независимых экспериментов, в которых тестировали соединения; Н. О. - не опреде- 14 034978 лено.
Таблица . 8. EC5q, CC50 и SI для соединений против серотипа 3 в анализах RT-qPCR
Протокол А Протокол В
RT-qPCR Н87 серотипа 3 RT-qPCR Н87 серотипа 3
ЕС50 N (мкМ) СС50 N (мкМ) SI N ЕС50 N (мкМ) СС50 N (мкМ) SI N
0,0021 3 1,6 1 474 1 Н. О. Н. О. Н. О. Н. О. Н. О. Н. О.
N - количество независимых экспериментов, в которых тестировали соединения. Н.О. - не определено.
Таблица 9. EC50, CC50 и SI для соединений против серотипа 4 в анализах RT-qPCR
Протокол А
RT-qPCR Н241 серотипа 4
ЕС50 N (мкМ) СС50 N (мкМ) SI N
0,012 5 1,5 5 121 5
N - количество независимых экспериментов, в которых тестировали соединения.

Claims (8)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Соединение или его стереоизомерная форма или фармацевтически приемлемая соль, где указанное соединение представляет собой
    CI
  2. 2. Фармацевтическая композиция для лечения вирусной инфекции денге, содержащая соединение по п.1, или его стереоизомерную форму или фармацевтически приемлемую соль вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми наполнителями, разбавителями или носителями.
  3. 3. Применение соединения по п. 1 или его стереоизомерной формы или фармацевтически приемлемой соли в качестве лекарственного препарата для лечения вирусной инфекции денге.
  4. 4. Применение фармацевтической композиции по п.2 в качестве лекарственного препарата для лечения вирусной инфекции денге.
  5. 5. Применение соединения по п.1 или его стереоизомерной формы или фармацевтически приемлемой соли для лечения вирусной инфекции денге.
  6. 6. Применение фармацевтической композиции по п.2 для лечения вирусной инфекции денге.
  7. 7. Применение соединения, представленного следующей структурной формулой (I):
    CI
    R3 (!) его стереоизомерной формы или фармацевтически приемлемой соли, где R1 представляет собой OCF3, R2 представляет собой H и R3 представляет собой H, для ингибирования репликации вируса(вирусов) денге в биологическом образце или у пациента.
  8. 8. Применение соединения по п.7, дополнительно предусматривающее применение дополнительного терапевтического средства, где указанное дополнительное терапевтическое средство выбрано из противовирусного средства, или вакцины против вируса денге, или их обоих.
EA201792429A 2015-05-08 2016-05-04 Производные моно- или дизамещенных индолов в качестве ингибиторов репликации вирусов денге EA034978B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP15166900 2015-05-08
EP16163342 2016-03-31
PCT/EP2016/059975 WO2016180696A1 (en) 2015-05-08 2016-05-04 Mono- or di-substituted indole derivatives as dengue viral replication inhibitors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201792429A1 EA201792429A1 (ru) 2018-02-28
EA034978B1 true EA034978B1 (ru) 2020-04-14

Family

ID=56026812

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201792429A EA034978B1 (ru) 2015-05-08 2016-05-04 Производные моно- или дизамещенных индолов в качестве ингибиторов репликации вирусов денге

Country Status (38)

Country Link
US (4) US10696632B2 (ru)
EP (2) EP3896072B1 (ru)
JP (4) JP6752821B2 (ru)
KR (2) KR102610491B1 (ru)
CN (3) CN113045476B (ru)
AU (2) AU2016259677B2 (ru)
BR (1) BR112017023904A2 (ru)
CA (1) CA2981845C (ru)
CL (1) CL2017002817A1 (ru)
CO (1) CO2017012381A2 (ru)
CR (2) CR20170490A (ru)
CY (1) CY1124548T1 (ru)
DK (1) DK3294738T3 (ru)
EA (1) EA034978B1 (ru)
EC (2) ECSP17073878A (ru)
ES (2) ES2877404T3 (ru)
GT (1) GT201700234A (ru)
HK (2) HK1252446A1 (ru)
HR (1) HRP20210675T1 (ru)
HU (1) HUE054724T2 (ru)
IL (2) IL255430B (ru)
JO (2) JOP20160086B1 (ru)
LT (1) LT3294738T (ru)
MD (1) MD3294738T2 (ru)
MX (2) MX2020011156A (ru)
NI (1) NI201700137A (ru)
PE (2) PE20180232A1 (ru)
PH (1) PH12017502000B1 (ru)
PL (1) PL3294738T3 (ru)
RS (1) RS62029B1 (ru)
SG (1) SG10201900315SA (ru)
SI (1) SI3294738T1 (ru)
SV (1) SV2017005557A (ru)
TW (2) TWI725969B (ru)
UA (2) UA128183C2 (ru)
UY (2) UY36674A (ru)
WO (1) WO2016180696A1 (ru)
ZA (2) ZA201707524B (ru)

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201116559D0 (en) 2011-09-26 2011-11-09 Univ Leuven Kath Novel viral replication inhibitors
GB201305376D0 (en) 2013-03-25 2013-05-08 Univ Leuven Kath Novel viral replication inhibitors
JOP20160086B1 (ar) 2015-05-08 2021-08-17 2 Katholieke Univ Leuven Ku Leuven Research And Development مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JOP20160198B1 (ar) 2015-09-16 2022-03-14 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JO3633B1 (ar) 2015-09-16 2020-08-27 Katholieke Univ Leuven Ku Leuven Research & Development مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
SG11201808270PA (en) 2016-03-31 2018-10-30 Janssen Pharmaceuticals Inc Substituted indoline derivatives as dengue viral replication inhibitors
EP3436435B1 (en) 2016-03-31 2021-05-12 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Substituted indole derivatives as dengue viral replication inhibitors
MA44502A (fr) 2016-04-01 2019-02-06 Janssen Pharmaceuticals Inc Dérivés d'indole substitués utilisés en tant qu'inhibiteurs de réplication du virus de la dengue
JOP20170069B1 (ar) 2016-04-01 2021-08-17 1 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JOP20180026A1 (ar) 2017-03-31 2019-01-30 Univ Leuven Kath مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JOP20180025B1 (ar) 2017-03-31 2021-08-17 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
KR102625991B1 (ko) 2017-05-22 2024-01-16 얀센 파마슈티칼즈, 인코포레이티드 뎅기 바이러스 복제 억제제로서의 치환 인돌린 유도체
KR102625988B1 (ko) 2017-05-22 2024-01-16 얀센 파마슈티칼즈, 인코포레이티드 뎅기 바이러스 복제 억제제로서의 치환 인돌린 유도체
IL292970A (en) 2019-11-15 2022-07-01 Janssen Pharmaceuticals Inc Treatment and prevention of dengue disease
WO2022094816A1 (en) 2020-11-04 2022-05-12 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Solid formulation
WO2022094817A1 (en) * 2020-11-04 2022-05-12 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical formulation
CN113024440B (zh) * 2021-03-17 2023-05-16 凯莱英医药集团（天津）股份有限公司 连续化合成取代吲哚-2-羧酸的方法
EP4363403A1 (en) 2021-06-29 2024-05-08 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Processes for the preparation of (s)-2-(4-chloro-2-methoxyphenyl)-2-((3-methoxy-5-(methylsulfonyl)phenyl)amino)-1 -(1h-indol-3-yl)ethenone derivatives
WO2023218285A1 (en) 2022-05-12 2023-11-16 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Treatment or prevention of dengue viral infection
CN115521307B (zh) * 2022-09-30 2023-09-22 甘肃皓天医药科技有限责任公司 一种5-卤代-7-氮杂吲哚的制备方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013045516A1 (en) * 2011-09-26 2013-04-04 Katholieke Universiteit Leuven Viral replication inhibitors

Family Cites Families (47)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1039911B1 (en) 1997-10-27 2005-05-25 Eli Lilly And Company MORPHOLINO-N-ETHYL ESTER PRODRUGS OF INDOLE sPLA 2 INHIBITORS
GB0110832D0 (en) 2001-05-03 2001-06-27 Virogen Ltd Antiviral compounds
US20050074457A1 (en) 2001-12-12 2005-04-07 Adeela Kamal Assays and implements for determining and modulating hsp90 binding activity
GB0215293D0 (en) 2002-07-03 2002-08-14 Rega Foundation Viral inhibitors
WO2006076529A1 (en) 2005-01-14 2006-07-20 Genelabs Technologies, Inc. Indole derivatives for treating viral infections
JP2008530124A (ja) 2005-02-09 2008-08-07 ミジェニックス インコーポレイテッド フラビウイルス感染症を処置または予防するための組成物および方法
FR2928645A1 (fr) * 2008-03-14 2009-09-18 Sanofi Aventis Sa Nouveaux derives de carbazole inhibiteurs d'hsp90, compositions les contenant et utilisation
JP2011522054A (ja) 2008-06-03 2011-07-28 シガ・テクノロジーズ・インコーポレーテッド デングウイルス感染の処置または予防のための小分子インヒビター
BRPI0917394A2 (pt) * 2008-08-18 2019-09-24 Univ Yale moduladores de mif
WO2010021878A1 (en) * 2008-08-19 2010-02-25 Janssen Pharmaceutica Nv Cold menthol receptor antagonists
TWI453207B (zh) 2008-09-08 2014-09-21 Signal Pharm Llc 胺基三唑并吡啶，其組合物及使用其之治療方法
EP2393359A4 (en) 2009-02-09 2012-10-03 Enanta Pharm Inc COMPOUND DIBENZIMIDAZOLE DERIVATIVES
GB0910003D0 (en) 2009-06-11 2009-07-22 Univ Leuven Kath Novel compounds for the treatment of neurodegenerative diseases
US8993604B2 (en) 2009-06-30 2015-03-31 Siga Technologies, Inc. Treatment and prevention of dengue virus infections
KR20120123678A (ko) 2010-01-15 2012-11-09 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 플라비비리다에 바이러스의 억제제
WO2011120025A1 (en) 2010-03-26 2011-09-29 Glaxo Group Limited Indazolyl-pyrimidines as kinase inhibitors
JP5716205B2 (ja) 2011-03-29 2015-05-13 学校法人日本大学 グルコシダーゼ活性阻害用組成物及びそのスクリーニング方法
GB201305376D0 (en) 2013-03-25 2013-05-08 Univ Leuven Kath Novel viral replication inhibitors
ES2655518T3 (es) 2013-10-23 2018-02-20 Janssen Sciences Ireland Uc Derivados de carboxamida y su uso como medicamentos para el tratamiento de la hepatitis B
IL307212A (en) 2014-01-31 2023-11-01 Bristol Myers Squibb Co Macrocyclines with P2' heterocyclic groups as factor XIA inhibitors
JP6641299B2 (ja) 2014-06-04 2020-02-05 フレッド ハッチンソン キャンサー リサーチ センター Ｎｏｔｃｈ １および／またはＮｏｔｃｈ ２アゴニストを用いた幹細胞の増殖および生着
JP6695814B2 (ja) 2014-06-04 2020-05-20 アムジエン・インコーポレーテツド 哺乳類細胞培養物を回収するための方法
CN107001265B (zh) 2014-10-01 2021-06-15 杨森制药公司 作为登革热病毒复制抑制剂的经单取代的或二取代的吲哚
MX2017004299A (es) 2014-10-01 2017-07-19 Janssen Pharmaceuticals Inc Derivados de indol mono-o disustituidos como inhibidores de la replicacion del virus del dengue.
NO2721243T3 (ru) 2014-10-01 2018-10-20
RU2717655C2 (ru) 2014-10-10 2020-03-24 Рутгерс, Зе Стейт Юниверсити Оф Нью-Джерси Праймеры и зонды для полимеразной цепной реакции для обнаружения mycobacterium tuberculosis
JOP20150335B1 (ar) * 2015-01-16 2022-03-14 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندول بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
AR103680A1 (es) 2015-02-23 2017-05-24 Lilly Co Eli Inhibidores selectivos de bace1
JOP20160086B1 (ar) * 2015-05-08 2021-08-17 2 Katholieke Univ Leuven Ku Leuven Research And Development مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
AU2016296923B2 (en) 2015-07-22 2019-02-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Metabolically robust analogs of CYP-eicosanoids for the treatment of cardiac disease
JO3633B1 (ar) 2015-09-16 2020-08-27 Katholieke Univ Leuven Ku Leuven Research & Development مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JOP20160198B1 (ar) 2015-09-16 2022-03-14 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
AU2016350868B2 (en) 2015-11-03 2022-03-31 Zoetis Services Llc Sol-gel polymer composites and uses thereof
JP6788683B2 (ja) 2016-03-31 2020-11-25 武田薬品工業株式会社 複素環化合物
SG11201808270PA (en) 2016-03-31 2018-10-30 Janssen Pharmaceuticals Inc Substituted indoline derivatives as dengue viral replication inhibitors
EP3436435B1 (en) 2016-03-31 2021-05-12 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Substituted indole derivatives as dengue viral replication inhibitors
JOP20170069B1 (ar) 2016-04-01 2021-08-17 1 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
MA44502A (fr) 2016-04-01 2019-02-06 Janssen Pharmaceuticals Inc Dérivés d'indole substitués utilisés en tant qu'inhibiteurs de réplication du virus de la dengue
JP7034934B2 (ja) 2016-04-01 2022-03-14 カイト ファーマ インコーポレイテッド キメラ抗原及びｔ細胞受容体、並びに使用方法
IL262007B2 (en) 2016-04-01 2023-04-01 Signal Pharm Llc Modified aminopurine compounds, their compositions and methods of treatment using them
KR20230165383A (ko) 2016-04-01 2023-12-05 카이트 파마 인코포레이티드 키메라 수용체 및 그의 사용 방법
MY201207A (en) 2016-04-01 2024-02-09 Amgen Inc Chimeric receptors to flt3 and methods of use thereof
MX2018012016A (es) 2016-04-01 2019-01-24 Basf Se Compuestos biciclicos.
JOP20180026A1 (ar) 2017-03-31 2019-01-30 Univ Leuven Kath مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JOP20180025B1 (ar) 2017-03-31 2021-08-17 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
KR102625988B1 (ko) 2017-05-22 2024-01-16 얀센 파마슈티칼즈, 인코포레이티드 뎅기 바이러스 복제 억제제로서의 치환 인돌린 유도체
KR102625991B1 (ko) 2017-05-22 2024-01-16 얀센 파마슈티칼즈, 인코포레이티드 뎅기 바이러스 복제 억제제로서의 치환 인돌린 유도체

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013045516A1 (en) * 2011-09-26 2013-04-04 Katholieke Universiteit Leuven Viral replication inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
JP2021138752A (ja) 2021-09-16
US20210171462A1 (en) 2021-06-10
US20200270209A1 (en) 2020-08-27
IL255430B (en) 2020-03-31
AU2016259677B2 (en) 2020-10-01
UY36674A (es) 2016-11-30
CR20170490A (es) 2018-03-08
NI201700137A (es) 2019-05-07
ZA201707524B (en) 2024-06-26
JP7132399B2 (ja) 2022-09-06
IL255430A0 (en) 2017-12-31
TW201704208A (zh) 2017-02-01
CN113045476B (zh) 2024-07-16
US11827602B2 (en) 2023-11-28
PE20180232A1 (es) 2018-01-31
ECSP17073878A (es) 2018-02-28
JOP20210109A1 (ar) 2023-01-30
TWI744963B (zh) 2021-11-01
HRP20210675T1 (hr) 2021-06-25
RS62029B1 (sr) 2021-07-30
US10696632B2 (en) 2020-06-30
JP6752821B2 (ja) 2020-09-09
JOP20160086B1 (ar) 2021-08-17
DK3294738T3 (da) 2021-06-28
BR112017023904A2 (pt) 2018-07-17
JP7451626B2 (ja) 2024-03-18
US20180346419A1 (en) 2018-12-06
CN113045476A (zh) 2021-06-29
JP2020125316A (ja) 2020-08-20
HK1252496A1 (zh) 2019-05-31
US20240182414A1 (en) 2024-06-06
WO2016180696A1 (en) 2016-11-17
MX2020011156A (es) 2022-04-21
CO2017012381A2 (es) 2018-03-28
AU2020273314A1 (en) 2020-12-17
CR20200152A (es) 2020-09-08
CA2981845A1 (en) 2016-11-17
UA128183C2 (uk) 2024-05-01
TWI725969B (zh) 2021-05-01
CA2981845C (en) 2022-03-08
CN111303000A (zh) 2020-06-19
UA121332C2 (uk) 2020-05-12
KR20210048578A (ko) 2021-05-03
SV2017005557A (es) 2018-06-26
JP2018515495A (ja) 2018-06-14
AU2016259677A1 (en) 2017-10-26
PL3294738T3 (pl) 2021-12-13
CN111303000B (zh) 2023-11-28
MX2017014293A (es) 2018-08-09
CN107873022B (zh) 2021-03-12
JP6898493B2 (ja) 2021-07-07
EA201792429A1 (ru) 2018-02-28
SI3294738T1 (sl) 2021-08-31
US10919854B2 (en) 2021-02-16
EP3294738A1 (en) 2018-03-21
ES2941674T3 (es) 2023-05-24
KR102610491B1 (ko) 2023-12-06
KR20180002644A (ko) 2018-01-08
HUE054724T2 (hu) 2021-09-28
CY1124548T1 (el) 2022-07-22
IL272814B (en) 2021-02-28
ECSP22023220A (es) 2022-05-31
EP3896072A1 (en) 2021-10-20
PH12017502000A1 (en) 2018-03-26
LT3294738T (lt) 2021-08-25
EP3896072B1 (en) 2022-11-16
ES2877404T3 (es) 2021-11-16
UY39706A (es) 2022-05-31
AU2020273314B2 (en) 2021-10-21
HK1252446A1 (zh) 2019-05-24
PH12017502000B1 (en) 2018-03-26
CL2017002817A1 (es) 2018-05-11
NZ736934A (en) 2023-11-24
JP2022166289A (ja) 2022-11-01
SG10201900315SA (en) 2019-02-27
ZA202002435B (en) 2023-03-29
KR102610493B1 (ko) 2023-12-05
PE20221579A1 (es) 2022-10-06
GT201700234A (es) 2018-11-26
CN107873022A (zh) 2018-04-03
TW202041499A (zh) 2020-11-16
EP3294738B1 (en) 2021-04-07
IL272814A (en) 2020-04-30
MD3294738T2 (ro) 2021-08-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11827602B2 (en) Mono- or di-substituted indole derivatives as dengue viral replication inhibitors
KR102478311B1 (ko) 뎅기 바이러스 복제 억제제로서의 １치환 또는 ２치환 인돌 유도체
US10206902B2 (en) Mono- or di-substituted indoles as dengue viral replication inhibitors
US10765662B2 (en) Mono- or di-substituted indole derivatives as dengue viral replication inhibitors
US10786484B2 (en) Mono- or di-substituted indole derivatives as dengue viral replication inhibitors
US10646469B2 (en) Substituted indole derivatives as dengue viral replication inhibitors
EA040657B1 (ru) Производные моно- или дизамещенных индолов в качестве ингибиторов репликации вирусов денге
OA18459A (en) Mono-or di-substituted indole derivatives as dengue viral replication inhibitors