TWI737687B - 具有硫酸基及/或磷酸基之糖之製造方法 - Google Patents

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Abstract

本發明以提供一種均一且有效率地製造於分子內具有硫酸基及/或磷酸基之糖、或包含前述糖之化合物的方法。

本發明提供一種製造具有硫酸基及/或磷酸基之糖的方法。前述方法包含：(a)調製「具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的第1糖」與「具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的第2糖」的步驟，及(b)使於上述步驟(a)所調製之第1糖與第2糖相互縮合的步驟。

Description

具有硫酸基及/或磷酸基之糖之製造方法
本發明係關於具有硫酸基及/或磷酸基之糖、或包含前述糖之化合物之製造方法。
已知於分子內含有硫酸基的糖可具有各種生理作用。例如，已知為醣胺聚醣之一種的硫酸軟骨素或硫酸皮膚素，作為蛋白多醣的側鏈存在於細胞表面或胞外基質，依硫酸化雙醣單位序列的差異形成各種機能結構域，而發揮多種生理機能。認為此等硫酸化糖與在活體內以極少量即顯示各種生理活性之多數的細胞介素或增殖因子間親和性高，發生此等因子的局部化，促進各種的生理作用。
到目前為止，作為如此之硫酸化糖之製造方法，開發有自鯊魚軟骨等之天然物回收的方法、使用硫酸化試藥的方法(專利文獻1~4)、使用酵素的方法(專利文獻5~7)、藉由化學合成的方法(專利文獻8及9)等。但是，此等方法在所製造之硫酸化糖結構的均一性、製造效率等之點上，皆未必十分充分。
例如，自天然物回收硫酸化糖時，一般而 言，認為所得之硫酸化糖的結構不均一，又，混在其中之雜質的控制亦為困難。使用硫酸化試藥的方法，反應性低，有效率的硫酸化為困難。
使用酵素的方法，有硫酸基之導入位置或所使用之基質被限定等的問題，又，由於所使用之酵素亦為高價，不能說是經濟的方法。又，由具有硫酸基之糖藉由化學合成來調製時，硫酸基的保護為必要之外，硫酸基的保護及去保護為困難，特別是，硫酸基的去保護，在目的之糖越是高分子變得越是困難。
[先前技術文獻] [專利文獻]
[專利文獻1]日本特開2008-007643號
[專利文獻2]日本特開2007-332226號
[專利文獻3]日本特開2005-232064號
[專利文獻4]日本特開平06-065273號
[專利文獻5]日本再表02/103025號
[專利文獻6]日本特開2001-019698號
[專利文獻7]日本特開平09-263595號
[專利文獻8]日本特開2014-047155號
[專利文獻9]再表2013/141350號
本發明係以提供一種有效率地製造於分子內具有硫酸基及/或磷酸基之糖、或包含前述糖之化合物的方法為目的。
本發明又以提供一種有效率地製造於分子內具有硫酸基及/或磷酸基之均一結構的糖之方法為目的。
本發明特別是以提供一種能夠有效率地製造以往難以合成之包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的長鏈化合物之方法為目的。
本發明者們，為了解決前述課題進行深入研究。使用化學合成之以往方法，由於調製合成在希望的位置具有硫酸基的糖供體及糖受體，故可控制製造之硫酸化糖的結構，因此對於製造均一結構的硫酸化糖為有效。但是，化學合成中，糖供體或糖受體之至少一者中將具有硫酸基之糖使用於縮合(醣苷化)時，認為硫酸基的保護為必要。這使以往方法變複雜，限制了含有硫酸化糖之化合物的製造路徑、可製造之化合物的變異。因此，結構經制御之長鏈的含有硫酸化糖之化合物的製造在實質上為不可能。又，由於被保護硫酸基具有電子吸引性，故亦有作為脫離基之機能，有限制可使用的保護基、反應路徑的問題。
因此，本發明者們敢於使用於分子內具有無保護之硫酸基的糖進行縮合反應，意外發現即使直接將無 保護的硫酸基使用於反應，可製造結構上經控制之硫酸化糖或含有此之化合物，終至完成本發明。
本發明之製造方法，與利用以往之保護硫酸基的方法相比較，由於硫酸基不具有作為脫離基之機能，可利用的保護基、反應路徑飛躍地增加。因此，可較以往簡便且效率好地製造硫酸化糖或含有此之化合物，以往難以合成之類型的硫酸化糖或含有此之化合物的合成亦成為可能。本發明之製造方法，進一步在合成長鏈(例如10糖~100糖左右)之均一結構的硫酸化糖或含有此之化合物上為有用。
又，不僅僅是具有硫酸基之糖，本發明可直接應用於由具有無保護之磷酸基的糖供體或糖受體調製具有磷酸基之糖的方法。
因此，本發明在一態樣中，提供一種製造具有硫酸基及/或磷酸基之糖的方法。此製造方法在一實施形態中，特徵為包含以下步驟：(a)調製「具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的第1糖」、與「具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的第2糖」的步驟，及(b)使上述步驟(a)所調製之第1糖與第2糖互相縮合的步驟。
又，本發明之一實施形態中，特徵為前述第1糖及前述第2糖，於糖之1位碳原子具有脫離基，且為具有親核性基之糖。
又，本發明之一實施形態中，特徵為前述第1糖及前述第2糖為相同的糖。
又，本發明之一實施形態中，特徵為親核性基係選自羥基、胺基、及硫醇基中。
又，本發明之一實施形態中，特徵為前述第1糖及前述第2糖為構成6員環的糖，於糖之1位碳原子具有脫離基，至少於糖之2位、3位、4位、或6位之任一者具有親核性基，至少於糖之2位、3位、4位、或6位之任一者具有至少一個無保護之硫酸基。
又，本發明之一實施形態中，特徵為前述第1糖及前述第2糖為構成6員環的糖，於糖之1位碳原子具有脫離基，至少於糖之3位或4位之任一者具有親核性基，至少於糖之2位、4位、或6位之任一者具有無保護之硫酸基。
又，本發明之一實施形態中，特徵為前述第1糖及前述第2糖為下述式所示。
Figure 106107418-A0202-12-0005-1
[式中，L為脫離基； A係選自由氫原子、保護或無保護之羧基、保護或無保護之醯胺基、及-CH2-R4所成群組中；R1~R4係各自獨立地選自由氫原子、無保護之硫酸基、無保護之磷酸基、保護或無保護之羥基、保護或無保護之胺基、保護或無保護之硫醇基、及糖殘基所成群組中；R1~R4之至少1個為無保護之硫酸基或無保護之磷酸基；且R1~R4之至少1個為選自羥基、胺基、及硫醇基中之親核性基]。
又，本發明之一實施形態中，特徵為前述式中，A為-CH2-R4；R2~R4係選自無保護之硫酸基、無保護之磷酸基、保護或無保護之羥基、及糖殘基中，惟，R2~R4之至少一個為無保護之硫酸基或無保護之磷酸基；R1為保護或無保護之胺基。
又，本發明之一實施形態中，特徵為前述糖殘基為葡萄糖醛酸殘基。本發明之另一實施形態中，特徵為前述糖殘基為於糖之2位碳原子具有硫酸基的葡萄糖醛酸殘基。
又，本發明之另一實施形態中，特徵為前述第1糖及前述第2糖為下述式所示，
Figure 106107418-A0202-12-0007-31
[式中，L為脫離基；A及B係各自獨立地選自由氫原子、保護或無保護之羧基、保護或無保護之醯胺基、及-CH2-R6所成群組中；R1~R6係各自獨立地選自由氫原子、無保護之硫酸基、無保護之磷酸基、保護或無保護之羥基、保護或無保護之胺基、保護或無保護之硫醇基、及糖殘基所成群組中；R1~R6之至少1個為無保護之硫酸基或無保護之磷酸基；且 R1~R6之至少1個為選自羥基、胺基、及硫醇基中之親核性基]。
又，本發明之一實施形態中，特徵為前述式中，A為-CH2-R6；B為保護或無保護之羧基；R2~R6係各自獨立地選自無保護之硫酸基、無保護之磷酸基、及保護或無保護之羥基、及糖殘基中，惟，R2~R6之至少一個為無保護之硫酸基或無保護之磷酸基；R1為保護或無保護之胺基。
又，本發明之一實施形態中，特徵為本發明之製造方法為2~100糖的多醣之製造方法。
又，本發明之一實施形態中，特徵為本發明之製造方法為硫酸軟骨素或硫酸乙醯肝素之製造方法。
另一態樣中，本發明係關於製造包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合物之方法。特徵為製造方法包含以下步驟：(a1)調製「具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的第1糖」的步驟、及(b1)使上述步驟(a1)所調製的第1糖與「具有親核性基之化合物」縮合的步驟。
又，本發明之一實施形態中，特徵為前述第1糖為於糖之1位具有脫離基的糖。
又，本發明之一實施形態中，特徵為包含(c1)使前述步驟(b1)所調製之「包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合物」，與選自「具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的糖」、「具有親核性基之化合物」及前述步驟(b1)所調製之「包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合物」中之化合物進一步縮合的步驟。
又，本發明之一實施形態中，特徵為前述親核性基係選自羥基、胺基、及硫醇基中。又，本發明之一實施形態中，特徵為前述具有親核性基之化合物係選自糖、胺基酸、胜肽、蛋白質、及此等之衍生物中。
又，本發明之一實施形態中，特徵為前述「具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的糖」為構成6員環的糖，於糖之1位碳原子具有脫離基，至少於糖之2位、3位、4位、或6位之任一者具有親核性基，至少於糖之2位、3位、4位、或6位之任一者具有至少一個無保護之硫酸基。
又，本發明之一實施形態中，特徵為前述第1糖為構成6員環的糖，於糖之1位碳原子具有脫離基，至少於糖之3位或4位之任一者具有親核性基，至少於糖之2位、4位、或6位之任一者具有無保護之硫酸基。
又，本發明之一實施形態中，特徵為前述第1糖為具有下述式所示結構的化合物，
Figure 106107418-A0202-12-0010-4
[式中，L為脫離基；A係選自由氫原子、保護或無保護之羧基、保護或無保護之醯胺基、及-CH2-R4所成群組中；R1~R4係各自獨立地選自由氫原子、無保護之硫酸基、無保護之磷酸基、保護或無保護之羥基、保護或無保護之胺基、保護或無保護之硫醇基、及糖殘基所成群組中；R1~R4之至少1個為無保護之硫酸基或無保護之磷酸基；且R1~R4之至少1個具有選自羥基、胺基、及硫醇基中之親核性基]。
又，本發明之一實施形態中，特徵為前述式中，A為-CH2-R4；R3係選自無保護之硫酸基、無保護之磷酸基、保護或無保護之羥基、及糖殘基中；R4係選自無保護之硫酸基、無保護之磷酸基、及保護 或無保護之羥基中，惟，R4及R3之至少一者為無保護之硫酸基或無保護之磷酸基；R1為保護或無保護之胺基；及R2為無保護之羥基或糖殘基。
該業者可理解任意組合以上所述本發明之一或複數的特徵之發明，亦包含於本發明之範圍。
依據本發明之製造方法，可有效率地製造具有硫酸基及/或磷酸基之糖、或包含前述糖之化合物。
又，依據本發明之製造方法，可有效率地製造於分子內具有硫酸基及/或磷酸基之均一結構的糖。
進而，依據本發明之製造方法，由於用以製造具有硫酸基及/或磷酸基之糖、或包含前述糖之化合物的反應路徑、及可利用的保護基飛躍地增加，故可較以往更簡便且效率良好地製造含有硫酸化糖及/或磷酸化糖的化合物。依據本發明之製造方法，進而，在合成以往難以製造之長鏈的均一結構的硫酸化糖及/或磷酸化糖、或含有此之化合物上為有用。
本說明書中，所謂「糖」或「糖殘基」，係指單位糖(單糖及/或其衍生物)連接1個以上而成的化合物 (本說明書中亦稱為「糖鏈」)。單位糖連接2個以上時，各個單位糖彼此之間，藉由以糖苷鍵之脫水縮合來鍵結。作為如此之糖鏈，雖可舉例例如活體中所含有之單糖類及多醣類(葡萄糖、半乳糖、甘露糖、岩藻糖(fucose)、木糖、N-乙醯葡萄胺糖、N-乙醯半乳胺糖、唾液酸以及該等之複合體及衍生物)之外，自經分解之多醣、糖蛋白質、蛋白多醣、醣胺聚醣、糖脂質等之複合生物分子分解或衍生而成的糖鏈等廣範圍者，但不限定於該等。糖鏈可為直鏈型亦可為支鏈型。
又，本說明書中，「糖」或「糖殘基」中亦包含糖的衍生物。作為糖的衍生物，包含糖之任意碳原子的羥基經其他取代基取代者，藉由保護基或其他取代基鍵結而經衍生物化者，例如，構成糖鏈之糖雖可舉例具有羧基之糖(例如，C-1位經氧化成為羧酸而成之醛醣酸(例如，D-葡萄糖經氧化而成之D-葡萄糖酸)、末端之C原子成為羧酸而成之尿羰基酸(例如，D-葡萄糖經氧化而成之D-葡萄糖醛酸))、具有胺基或胺基之衍生物(例如，經乙醯基化之胺基)的糖(例如，N-乙醯基-D-葡萄胺糖、N-乙醯基-D-半乳胺糖等)、具有胺基及羧基兩者的糖(例如，N-乙醯基神經胺糖酸(唾液酸)、N-乙醯基胞壁酸等)、經去氧化而成之糖(例如，2-去氧-D-核糖)、包含硫酸基之硫酸化糖、包含磷酸基之磷酸化糖等糖鏈，但不限定於此等。
本說明書中，包含硫酸基之糖亦記載為「硫酸化糖」，包含磷酸基之糖亦記載為「磷酸化糖」。又， 具有硫酸基與磷酸基兩者之糖亦記載為「硫酸化/磷酸化糖」。
本發明中，特別是，關於製造對象之硫酸化糖、磷酸化糖、及硫酸化/磷酸化糖使用之所謂「均一的結構」，係指經縮合(或聚合)之此等糖或化合物的結構單元之糖骨架的硫酸基之位置及數目、構成之糖的種類、及糖間的鍵結樣式為相同。
此外，本說明書中，關於「糖」、「糖殘基」及「胺基酸」，未區分D-體及L-體記載之情形，解釋為包含所有的立體異構物者。
以下詳細說明本發明。
本發明，一態樣中，關於製造具有硫酸基及/或磷酸基之糖的方法，其特徵為該方法包含以下的步驟：(a)調製「具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的第1糖」與「具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的第2糖」的步驟，及(b)使於上述步驟(a)所調製之第1糖與第2糖相互縮合的步驟。
本說明書中，作為本發明之製造方法的原料使用之「具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的糖」，係指於任意之碳原子的取代基，以不含保護基的狀態具有至少1個經硫酸化之羥基(-O-SO3H、-O-SO3 -、-O-SO3Na、或-O-SO3metal)或經磷酸化之羥基(-O-PO3H2或-O-PO3 2-)的任意之糖。此外，本說明書中，「硫酸基」與「經硫酸 化之羥基」及「磷酸基」與「經磷酸化之羥基」可相互交換使用。
本發明之方法中，第1糖及第2糖，定義為任一者作為糖供體發揮機能，任一者作為糖受體發揮機能者。關於此，可為第1糖作為糖供體發揮機能，且第2糖作為糖受體發揮機能，或者其相反亦可。又，第1糖及第2糖可分別為單糖，亦可為具有雙醣、三糖、四糖或其以上之糖骨架者。
作為糖供體之機能，藉由糖於其任意之碳原子的位置具有脫離基來保持。本發明之特定之實施形態中，作為糖供體發揮機能之「具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的(第1或第2)糖」為於1位之碳原子的位置具有脫離基的糖。此實施形態中，作為糖供體發揮機能之前述糖，具有雙醣以上之糖骨架之情形中，前述糖供體於還原末端之1位之碳原子的位置含有脫離基。
另一方面，作為糖受體之機能，藉由糖於其任意之碳原子的位置具有親核性基來保持。所謂本發明中所稱之親核性，係指易與路易斯酸之陽離子元素反應的性質。本發明中，親核性基只要是具有如此之性質的官能基便無特別限制。本發明中，前述親核性基特別是選自羥基、胺基或硫醇基中之官能基。
本發明之一實施形態中，「具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的(第1或第2)糖」，亦可具有作為糖供體之機能與作為糖受體之機能兩者。此時，「具 有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的(第1或第2)糖」，具有脫離基與親核性基兩者。本發明之一實施形態中，「具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的(第1或第2)糖」，為於1位之碳原子的位置具有脫離基，且具有親核性基的糖。
本發明中，第1糖與第2糖可為相同的糖，亦可為不同的糖。
本發明之較佳實施形態中，第1糖與第2糖分別具有以下的性質：-構成6員環；-於糖之1位碳原子具有脫離基；-至少於糖之2位、3位、4位、或6位之任一者具有親核性基；及-至少於糖之2位、3位、4位、或6位之任一者具有至少一個無保護之硫酸基或無保護之磷酸基。
較佳為第1糖及第2糖於糖之3位或4位之任一者具有親核性基，及/或，至少於糖之2位、4位、或6位之任一者具有無保護之硫酸基或無保護之磷酸基。
本發明之更佳的實施形態中，第1糖與第2糖分別為下述式所示之糖。
Figure 106107418-A0202-12-0016-5
上述式中：L為脫離基；A係選自由氫原子、保護或無保護之羧基、保護或無保護之醯胺基、及-CH2-R4所成群組中；R1~R4係各自獨立地選自由氫原子、無保護之硫酸基、無保護之磷酸基、保護或無保護之羥基、保護或無保護之胺基、保護或無保護之硫醇基、及糖殘基所成群組中；R1~R4之至少1個為無保護之硫酸基或無保護之磷酸基；且R1~R4之至少1個為選自羥基、胺基、及硫醇基中之親核性基。
較佳的實施形態中，A為-CH2-R4，R3及R4之任一者為無保護之硫酸基或無保護之磷酸基。另一較佳的實施形態中，A為-CH2-R4，R3及R4兩者為無保護之硫酸基或無保護之磷酸基。
較佳的實施形態中，式中之R1為保護或無保護之胺基。
較佳的實施形態中，式中之R2為無保護之羥基或糖殘基。
特佳的實施形態中，上述式中：A為-CH2-R4；R3係選自無保護之硫酸基、無保護之磷酸基、保護或無保護之羥基、及糖殘基中；R4係選自無保護之硫酸基、無保護之磷酸基、及保護或無保護之羥基中，惟，R4及R3之至少一者為無保護之硫酸基或無保護之磷酸基；R1為保護或無保護之胺基；且R2為無保護之羥基或糖殘基。
如此之糖雖不限定於此，但包含例如包含無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基之葡萄胺糖、半乳胺糖、及任意之糖殘基鍵結於此等而成的化合物。
本發明之特佳的實施形態中，R2為葡萄糖醛酸殘基。如此之糖雖不限定於此，但包含例如選自軟骨素4-硫酸(硫酸軟骨素A)、軟骨素6-硫酸(硫酸軟骨素C)、硫酸皮膚素(硫酸軟骨素B)、及硫酸乙醯肝素中之醣胺聚醣之結構單元的雙醣。
本發明之另一較佳的實施形態中，R2為於糖之2位碳原子具有硫酸基之葡萄糖醛酸殘基。如此之糖雖不限定於此，但包含例如硫酸軟骨素D等之醣胺聚醣之結構單元的雙醣。
本發明之更佳的實施形態中，第1糖與第2糖為相同的糖。
本發明之另一較佳的實施形態中，第1糖與第2糖分別為下述式所示之糖。
Figure 106107418-A0202-12-0018-30
式中，L為脫離基；A及B係各自獨立地選自由氫原子、保護或無保護之羧基、保護或無保護之醯胺基、及-CH2-R6所成群組中；R1~R6係各自獨立地選自由氫原子、無保護之硫酸基、無保護之磷酸基、保護或無保護之羥基、保護或無保 護之胺基、保護或無保護之硫醇基、及糖殘基所成群組中；R1~R6之至少1個為無保護之硫酸基或無保護之磷酸基；且R1~R6之至少1個為選自羥基、胺基、及硫醇基中之親核性基。
此外，上述實施形態中，A及B兩者為-CH2-R6之情形中，A中之R6與B中之R6可相同，亦可不同。
較佳的實施形態中，A為-CH2-R6，及/或，B為保護或無保護之羧基。較佳為A為-CH2-R6，且R2、R3及R6之任1個或2個為無保護之硫酸基或無保護之磷酸基。較佳為R4及R5為保護或無保護之羥基。
另一較佳的實施形態中，A為保護或無保護之羧基，及/或，B為-CH2-R6。較佳為B為-CH2-R6，且R1、R5及R6之任1個或2個為無保護之硫酸基或無保護之磷酸基。較佳為R4或R5為保護或無保護之羥基。
另一較佳的實施形態中，上述式中：A為-CH2-R6；B為保護或無保護之羧基；R2~R6係各自獨立地選自無保護之硫酸基、無保護之磷酸基、及保護或無保護之羥基、及糖殘基中，惟，R2~R6之至少一個為無保護之硫酸基或無保護之磷酸基；且R1為保護或無保護之胺基。
另一較佳的實施形態中，上述式中：A為保護或無保護之羧基；B為-CH2-R6；R2~R6係各自獨立地選自無保護之硫酸基、無保護之磷酸基、及保護或無保護之羥基、及糖殘基中，惟，R2~R6之至少一個為無保護之硫酸基或無保護之磷酸基；且R3為保護或無保護之胺基。
特佳的實施形態中，上述式中：A為-CH2-R6；B為保護或無保護之羧基；R2、R3及R6之任1個或2個為無保護之硫酸基或無保護之磷酸基；R4及R5為保護或無保護之羥基；且R1為保護或無保護之胺基。
特佳的另一實施形態中，上述式中：A為保護或無保護之羧基；B為-CH2-R6；R1、R5及R6之任1個或2個為無保護之硫酸基或無保護之磷酸基；R4或R5為保護或無保護之羥基；且R3為保護或無保護之胺基。
作為上述之糖，雖不限定於此，但包含例如選自軟骨素4-硫酸(硫酸軟骨素A)、軟骨素6-硫酸(硫酸軟骨素 C)、硫酸皮膚素(硫酸軟骨素B)、硫酸軟骨素D及硫酸乙醯肝素中之醣胺聚醣之結構單元的雙醣。
本發明之製造方法，可包含(c)使藉由步驟(b)縮合而成之糖與第3糖進一步縮合的步驟。「第3糖」可作為糖供體使用，亦可作為糖受體使用，又，可為與藉由步驟(b)縮合而成之糖相同的糖亦可為不同的糖。
「藉由步驟(b)縮合而成之糖」及「第3糖」皆不具有脫離基之情形中，為了進一步的縮合，可進行於任一糖導入脫離基之處理。
較佳的實施形態中，步驟(c)實施複數次。藉由進行複數次步驟(c)，可一邊控制結構，一邊調製希望長度的糖。
本發明之製造方法包含單次或複數次的步驟(c)時，步驟(b)與單次或複數次的步驟(c)可同時進行，亦可不同時候進行。步驟(b)與複數次的步驟(c)同時進行時，為了可連續地縮合(聚合)，作為「第1糖」、「第2糖」及「第3糖」，使用於其還原末端1位之碳原子的位置具有脫離基，且具有親核性基的糖較佳。此實施形態中，由製造結構經控制之糖的觀點來看，「第1糖」、「第2糖」及「第3糖」中使用具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的相同之糖更佳。例如，於相同的位置，調製分別具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基、脫離基、及親核性基之相同結構的單糖之均一的集團，藉由使此等單糖分別縮合(聚合)，可製造結構經控制之長鏈的糖。
例示性的實施形態中，本發明之製造方法為：作為「第1糖」、「第2糖」及「第3糖」之糖，調製由軟骨素A、軟骨素C、軟骨素D、軟骨素E、或硫酸乙醯肝素之結構單元的雙醣骨架構成之均一的集團，藉由使此等縮合(聚合)，製造下述式所示之硫酸軟骨素或硫酸乙醯肝素的方法。
Figure 106107418-A0202-12-0022-9
Figure 106107418-A0202-12-0022-10
Figure 106107418-A0202-12-0023-11
Figure 106107418-A0202-12-0023-12
Figure 106107418-A0202-12-0023-13
此外，上所示之軟骨素A、軟骨素C、軟骨素D、軟骨素E、或硫酸乙醯肝素之結構單元的雙醣骨架中，構成該雙醣骨架之胺基糖及尿羰基酸的位置相反亦可為不用多說的。
例示性的，本發明之製造方法當然地意圖包含製造下述所示之硫酸乙醯肝素的方法。
Figure 106107418-A0202-12-0024-14
上述式中之n為1~50，較佳為1~25，更佳為1~10。
因此，一實施形態中，本發明之製造方法為製造2糖~100糖，較佳為2糖~50糖，更佳為2糖~20糖之硫酸化糖、磷酸化糖、或硫酸化/磷酸化糖的方法。
另一態樣中，本發明之製造方法係關於製造包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合物之方法。此態樣中，「具有親核性基之化合物」代替前述「第2糖」而使用，與前述「第1糖」縮合。
因此，此態樣中，本發明之製造方法之特徵為包含：(a1)調製「具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的糖」的步驟，及(b1)使於上述步驟(a1)所調製之「具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的糖」與「具有親核性基之化合物」縮合的步驟。
此態樣中，「具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的糖」作為對「具有親核性基之化合物」的糖供體而使用。因此，「具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的糖」為具有脫離基的糖，典型的為於糖之1位之碳原子的位置具有脫離基的糖。
「具有親核性基之化合物」之「親核性基」，與上面定義者相同，係指具有易與路易斯酸之陽離子元素反應的性質之任意的官能基。一實施形態中，如此之官能基係選自羥基、胺基、及硫醇基中。「具有親核性基之化合物」只要是具有親核性基之化合物便無特別限制，例如，糖之外，亦包含胺基酸、胜肽、及蛋白質等。
本發明中，所謂「胺基酸」，使用其範圍最廣的意思，不僅包含天然之胺基酸，例如絲胺酸(Ser)、天冬醯胺(Asn)、纈胺酸(Val)、白胺酸(Leu)、異白胺酸(Ile)、丙胺酸(Ala)、酪胺酸(Tyr)、甘胺酸(Gly)、離胺酸(Lys)、精胺酸(Arg)、組胺酸(His)、天冬胺酸(Asp)、麩胺酸(Glu)、麩醯胺(Gln)、蘇胺酸(Thr)、半胱胺酸(Cys)、甲硫胺酸(Met)、苯丙胺酸(Phe)、色胺酸(Trp)、脯胺酸 (Pro)，亦包含胺基酸變異體及衍生物之非天然胺基酸。若為該業者可理解：考慮此寬廣的定義，作為本發明中之胺基酸，可舉例例如L-胺基酸；D-胺基酸；胺基酸變異體及衍生物等之經化學修飾的胺基酸；正白胺酸、β-丙胺酸、鳥胺酸等在活體內不為蛋白質之構成材料的胺基酸；及具有該業者周知之胺基酸的特性之化學合成的化合物等。
本說明書中，胺基酸衍生物包含：胺基酸之側鏈取代基為進一步藉由其他取代基取代者、對胺基或羧基等之官能基有保護基或其他取代基鍵結而衍生物化者。即，本說明書中，由於胺基酸衍生物為用以總稱包含如此等例般衍生物化者之胺基酸所使用者，並沒有排除未衍生物化之胺基酸之意。
本說明書中，胜肽或蛋白質之衍生物中包含：包含胺基酸衍生物之胜肽、蛋白質之外，亦包含將胜肽、蛋白質以酸、鹼或酵素部分水解而得之蛋白質水解物、或此等之陽離子化物、醯基化物、烷基酯化物、聚矽氧化物等之衍生物。
本發明之例示性的實施形態中，於步驟(b1)所調製之「包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合物」中，構成該化合物之分子的數目可為2、3、4、5或其以上。
本發明之製造方法，較佳的實施形態中，包含(c1)使於前述步驟(b1)所調製之「包含具有硫酸基及/ 或磷酸基之糖的化合物」，與選自「具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的糖」、「具有親核性基之化合物」、及於前述步驟(b1)所調製之「包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合物」中之化合物進一步縮合的步驟。此實施形態中，供於進一步縮合之前述「包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合物」中的硫酸基及/或磷酸基為無保護。
步驟(c1)為使於前述步驟(b1)所調製之「包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合物」與「具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的糖」縮合的步驟之情形中，「包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合物」可作為糖供體來使用，亦可作為糖受體來使用。「包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合物」及「具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的糖」皆不具有脫離基之情形中，為了進一步縮合，可對任一者進行導入脫離基的處理。
步驟(c1)為使於前述步驟(b1)所調製之「包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合物」與「具有親核性基之化合物」縮合的步驟之情形中，「包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合物」可作為糖供體來使用。「包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合物」不具有脫離基之情形中，為了進一步縮合，可進行導入脫離基的處理。
步驟(c1)為使於前述步驟(b1)所調製之「包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合物」與於前述步驟(b1) 所調製之「包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合物」縮合的步驟之情形中，作為前述「包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合物」，使用具有脫離基且具有親核性基之化合物。「包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合物」不具有脫離基之情形中，為了進一步縮合，可進行導入脫離基的處理。
較佳的實施形態中，步驟(c1)實施複數次。藉由進行複數次步驟(c1)，可調製結構經控制之希望長度的化合物。步驟(c1)可同時進行複數次，亦可不同時間進行。
本發明之製造方法中，同時進行複數次的步驟(c1)之情形中，由製造結構經控制之化合物的觀點來看，步驟(c1)為使於步驟(b1)所調製之「包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合物」與於步驟(b1)所調製之「包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合物」縮合的步驟較佳。例如，藉由調製於相同的位置分別具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基、脫離基、及親核性基之相同結構的化合物之均一的集團，並使此等化合物分別縮合(聚合)，可製造結構經控制之長鏈的化合物。
本發明之例示性的實施形態中，於步驟(b1)所調製之「包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合物」為2糖、4糖、6糖、8糖、10糖或其以上之糖。
本發明之其他例示性的實施形態中，於步驟(b1)所調製之「包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合 物」為軟骨素A、軟骨素C、軟骨素D、軟骨素E、或硫酸乙醯肝素之結構單元的2糖骨架。
本發明之例示性的實施形態中，於步驟(b1)所調製之「包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合物」為含有具有2分子骨架之硫酸化糖、磷酸化糖、硫酸化/磷酸化糖的化合物，步驟(c1)中，製造將該2分子骨架作為縮合或聚合單位之4分子、6分子、8分子、10分子或其以上之長度的化合物。
本發明之其他例示性的實施形態中，於步驟(b1)所調製之「包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合物」為軟骨素A、軟骨素C、軟骨素D、軟骨素E、或硫酸乙醯肝素之結構單元的2糖、4糖、6糖、8糖、10糖或其以上之糖，步驟(c1)中，將此等糖作為縮合或聚合單位，進一步製造長鏈之醣胺聚醣。
本發明之其他例示性的實施形態中，於步驟(b1)所調製之「包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合物」為軟骨素A、軟骨素C、軟骨素D、軟骨素E、或硫酸乙醯肝素之結構單元的2糖，步驟(c1)中，製造將前述2糖作為縮合或聚合單位之4糖、6糖、8糖、10糖或其以上之長度的醣胺聚醣。
本發明之原料即「具有無保護之硫酸基的糖」可藉由該業者周知的任意方法來調製。例如，雖不限定於此，但可藉由使硫酸化劑對具有無保護之羥基的既定的糖作用來調製。具體而言，藉由將具有無保護之羥基之 既定的糖作為原料，使硫酸化劑在例如DMF等之適當的溶劑中，適當的當量(1至100當量)，適當的反應溫度(0至100℃)及反應時間(10分鐘至2日)的條件下進行反應，可合成羥基經硫酸化的糖。
作為硫酸化劑，雖只要是用於糖質化合物之硫酸化者任何皆可，但可舉例例如三氧化硫-吡啶錯合物、三氧化硫-三甲胺錯合物、氯磺酸-吡啶錯合物、二環己基碳二亞胺-硫酸等，較佳為可舉例三氧化硫-吡啶錯合物、三氧化硫-三甲胺錯合物。
於選擇之位置導入硫酸基的方法亦為該業者所周知。例如，在與硫酸化劑反應之前，藉由選擇性的保護未硫酸化之羥基，可調製僅特定之羥基經硫酸化的糖。另外，藉由使用可於糖之特定的位置導入硫酸基之酵素，亦可於特定之位置導入硫酸基。
又，本發明之原料即「具有無保護之磷酸基的糖」，一般而言，可與硫酸化同樣地進行。即，對具有無保護之羥基的既定的糖，可藉由使磷酸化劑作用來調製。作為適當的磷酸化劑，雖不限定於此，但可舉例例如磷酸、聚磷酸、五氧化二磷、POCl3等。
所得之化合物，應需要可使用利用二氧化矽凝膠等之高性能薄層色層分析法、或者、利用醯胺管柱等之高性能液體色層分析法等來分離‧純化。
本發明中，縮合反應可依循該業者周知的方法來進行。例如，本發明中，縮合反應可藉由使用使糖供 體與糖受體在酸的存在下反應的方法來進行。
可使用於本發明之製造方法中的酸，雖不限定於此，但可舉例硫酸等之無機酸，三氟化硼二乙基醚(BF3‧OEt2)、三氟甲磺酸二甲基(甲基硫)鋶(DMTST)、三氟甲磺酸三甲基矽烷酯、三氟甲磺酸三乙基矽烷酯、三氟甲磺酸三丙基矽烷酯、三氟甲磺酸二甲基乙基矽烷酯、三氟甲磺酸三苄基矽烷酯、三氟甲磺酸三萘基矽烷酯或三氟甲磺酸三苄基甲基矽烷酯、三氟甲磺酸銀、環戊二烯基氯化鉿、環戊二烯基氯化鋯、氯化錫等之路易斯酸，甲酸、乙酸、三氟乙酸、三氟乙酸酐、三氟甲磺酸、四氟甲磺酸等之有機酸等。
此等之酸，可使用1種或併用2種以上。又，酸的使用量，相對於糖供體為0.1~5當量，可成為例如0.2~1.5當量。作為糖供體使用之糖或化合物，與作為糖受體使用之糖或化合物為彼此不同的化合物之情形中，糖供體與糖受體之使用比例可成為任意之比例。例如，相對於糖供體1莫耳，糖受體可成為0.2~10莫耳，較佳為可成為0.7~4莫耳。
本發明之一實施形態中，縮合反應中，N-碘琥珀醯亞胺等之活性劑為單獨使用，或與四氟甲磺酸三氟甲磺酸三甲基矽烷酯等之路易斯酸組合使用。於路易斯酸併用活性化劑時的使用比例，可例如相對於糖供體，路易斯酸成為0.1~2當量左右，活性化劑成為1~5當量左右。
使用於縮合反應之溶劑，只要是於反應中不 活性的溶劑便無限制。可舉例例如己烷、庚烷、戊烷等之脂肪族烴類，環己烷等之脂環式烴類，苯、甲苯、二甲苯等之芳香族烴類，二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、1,1,1-三氯乙烷、四氯乙烯、三氯乙烯、四氯化碳、氯苯、o-二氯苯等之鹵化烴類，二乙基醚、異丙基醚、四氫呋喃、二
Figure 106107418-A0202-12-0032-28
烷、單乙二醇二甲醚等之醚類，N,N-二甲基甲醯胺、N,N-二甲基乙醯胺、1,3-二甲基咪唑啶酮等之醯胺類，二甲基亞碸等之亞碸類，乙腈、丙烷腈等之腈類或此等之混合溶劑等。
使用於縮合反應的溫度為-80℃~40℃，例如-40℃~25℃之範圍。
本發明之製造方法中，如下述實施例所示，藉由控制縮合反應時的反應溫度，可控制所製造之糖的立體結構。具體而言，縮合反應時的溫度在上述溫度範圍內較低的情形中，有取得以β-糖苷鍵鍵結之糖或包含糖之化合物的傾向，縮合反應時的溫度在上述溫度範圍內較高的情形中，有取得以α-糖苷鍵鍵結的糖或包含糖之化合物的傾向。
又，在縮合反應之前，先除去系統內的水及氫鹵酸等較佳。為了此目的，例如可使用分子篩等之捕捉體。
本發明之製造方法，可任意地包含於「具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的糖」或「包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合物」導入脫離基的步驟。本發明所使用之脫離基，在糖供體與糖受體之縮合反 應條件下，較所取代之原子或原子團親核性低，只要具有脫離之機能者便無特別限定。
具體而言，本發明所使用之脫離基雖不限定於此，但可舉例鹵素原子、取代或未取代之-O-烷基、取代或未取代之-O-烯基、取代或未取代之-O-炔基、取代或未取代之-O-芳基、取代或未取代之-O-雜芳基、取代或未取代之-S-烷基、取代或未取代之-S-烯基、取代或未取代之-S-炔基、取代或未取代之-S-芳基、或、取代或未取代之-S-雜芳基。
脫離基的導入，可依循常法來進行。例如可藉由利用鹵化劑之鹵化反應、在酸或鹼的存在下之與硫醇化合物的反應來進行。
作為本發明中可使用之鹵化劑，可舉例氯、溴、碘、N-氯琥珀醯亞胺、N-溴琥珀醯亞胺、溴化氫等。
作為使用於鹵化反應之溶劑，可舉例例如二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、氯仿、四氯化碳等之鹵化烴系溶劑，二乙基醚、四氫呋喃、1,4-二
Figure 106107418-A0202-12-0033-29
烷等之醚系溶劑，乙酸、水等。此等之溶劑，可單獨使用1種，亦可混合複數種使用。
作為硫醇化合物，可舉例甲基硫醇、異丙基硫醇、硫酚、p-甲苯硫醇等。
作為酸，可舉例三氟化硼二乙基醚(BF3‧OEt2)等之路易斯酸。又，作為鹼，可舉例1,3-二甲基咪唑鎓氯化物、三乙胺等。
作為與硫醇化合物的反應所使用之溶劑，雖不限定於此，但可舉例二氯甲烷、乙腈、甲苯等，可單獨使用此等溶劑或組合此等溶劑來使用。
本發明之製造方法，亦可任意地包含將「具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的糖」、或「包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合物」中之側鏈的羥基、胺基等保護及去保護的步驟。
該業者由該技術領域周知的保護基，對應所選擇之反應路徑，可選擇適宜適當的保護基。
本發明之製造方法中，作為羥基之保護基，可舉例例如甲基、苄基、苯甲醯基、乙醯(Ac)基、三甲基矽烷(TMS)基、三乙基矽烷(TES)基、tert-丁基二甲基矽烷(TBS或TBDMS)基等。作為胺基之保護基，例如作為脂溶性保護基，可舉例9-茀基甲氧基羰(Fmoc)基、t-丁基氧基羰(Boc)基、苄基、烯丙基氧基羰(Alloc)基、2,2,2-三氯乙氧基羰(troc)基、烯丙基氧基羰基、乙醯基等之碳酸酯系或醯胺系的保護基等。
依據本發明之製造方法，由於與以往的合成方法不同，不必進行硫酸基或磷酸基之保護‧去保護，可更簡便地製造結構經控制的硫酸化糖、磷酸化糖、及硫酸化/磷酸化糖。又，由於不必進行硫酸基或磷酸基之保護‧去保護，可不考慮硫酸基或磷酸基之保護來設計反應路徑。藉此，於反應路徑中可利用的保護基、反應路徑飛躍地增加，可較以往更簡便且效率好地製造硫酸化糖、磷酸 化糖、及硫酸化/磷酸化糖或含有此之化合物，以往為合成困難之類型的硫酸化糖、磷酸化糖、及硫酸化/磷酸化糖或含有此之化合物的合成變為可能。依據本發明之製造方法，進而在合成長鏈之均一結構的硫酸化糖、磷酸化糖、及硫酸化/磷酸化糖或含有此之化合物上極為有用。
此外，本說明書中所使用之用語為用以說明特定之實施形態者，並非限定發明之意圖。
又，本說明書中所使用之「包含」的用語，除了可從文章脈絡中理解其明顯不同之外，是意指記述之事項(構件、步驟、要素、數字等)存在，不排除其以外之事項(構件、步驟、要素、數字等)存在。
除非有不同的定義，此處所使用之所有用語(包含技術用語及科學用語)與被本發明所屬技術的該業者所廣泛理解者具有相同的意思。此處所使用的用語，除非有明示不同的定義，應解釋成具有與本說明書及關連技術領域中之意思整合性的意思，而不應解釋成經理想化或過度形式性的意思。
有時使用第一、第二等之用語用以表達各種要素之情形，可理解此等要素不應受此等用語限定。此等用語僅使用於用以將一個要素與其他要素區分，例如可在不脫離本發明之範圍下，將第一要素記為第二要素，同樣地，將第二要素記為第一要素。
以下，雖藉由實施例更具體地說明本發明，然而，本發明可藉由各種形態具體化，並不解釋成限定於 此處所記載之實施例者。
[實施例] 實施例1(藉由硫酸化單糖之縮合的硫酸化糖之製造)
如以下之反應式所表示，調製於5位之碳原子的位置具有無保護之硫酸基，且於1位之碳原子的位置具有脫離基的單糖。調製例中之化合物名稱後所記載之化合物編號表示下述反應式所記載之化合物編號。
Figure 106107418-A0202-12-0036-15
硫苷(Thioglycoside)2
氬氛圍下，將原料1(4.0g 8.4mmol)溶於經乾燥之DCM。之後，進行冰冷。加入BF3‧OEt2(3.5mL 28mmol)與p-甲苯硫醇(1.4g 11mmol)，回到室溫，使其反應20小時。加入Et3N(3.5mL 25mmol)使反應驟冷，將反應溶液以DCM稀釋，以飽和NaHCO3水溶液與飽和NaCl水溶液清 洗。將有機層以硫酸鈉乾燥後，進行過濾，濃縮。藉由二氧化矽凝膠管柱(1/2 AcOEt/Hex to 2/1 AcOEt/Hex)去除試藥，由熱乙醇進行再結晶，得到作為白色固體之硫苷2。1H NMR(400MHz CDCl3)7.87(m,2H),7.76(m,2H),7.30(d,2H,J=7.8Hz),7.08(d,2H,J=7.8Hz),5.78(t,1H,J=9.7Hz),5.65(d,1H,J=10.7Hz),5.12(5,1H,9.7Hz),4.36-4.25(m,2H),4.20(dd,1H,J=1.3Hz,J=12.2Hz),3.88(m,1H),2.33(s,3H),2.11(s,3H),2.02(s,3H),1.83(s,3H),ESI-MS[M+Na]+ calcd for C27H27NO9SNa：564.1 found 564.1。
1-STol-2-NPhth-Gulcose 3
氬氛圍下，將硫苷2(462mg 0.85mmol)溶於甲醇。在其中加入甲氧鈉(10.3mg 0.19mmol)攪拌60分鐘。加入DOWEX 50Wx8使反應驟冷，藉由過濾取出去除DOWEX 50Wx8。濃縮濾液，得到作為白色固體之目標物3。不進行進一步的純化而使用接下來的反應。1H NMR(400MHz MeOD)7.94-7.82(m,4H),7.28(d,2H,J=8.2Hz),7.05(d,2H,J=8.2Hz),5.52(d,1H,J=10.4Hz),4.24(dd,1H,J=8.1Hz,J=10.2Hz),4.08(t,1H,J=10.2Hz),3.94(dd,1H,J=1.8Hz,J=12.0Hz),3.75(dd,1H,J=5.3Hz,J=12.0Hz),3.48-3.39(m,2H),2.28(s,3H),ESI-MS[M+Na]+ calcd for C21H21NO6SNa：438.1 found 438.1。
1-STol-2-NPhth-6-OSO3Na-Gulcose 4
氬氛圍下，將1-STol-2-NPhth-Gulcose 3(186mg 0.45mmol)及SO3‧Py(76.6mg 0.48mmol)溶於DMF(9.6mL)，攪拌3小時半。加入過量的飽和NaHCO3水溶液，激烈攪拌1小時後，濃縮反應溶液。進行二氧化矽凝膠管柱純化(6/2/1 AcOEt/MeOH/H2O)得到原料3(82.5mg 44%)與目標物4(88.9mg 38%)。1H NMR(400MHz D2O)7.95-7.75(m,4H),7.25(d,2H,J=8.1Hz),7.08(d,2H,J=8.1Hz),5.64(d,1H,J=10.2Hz),4.42(dd,1H,J=1.8Hz,J=11.4Hz),4.33-4.36(m,2H),4.13(t,1H,10.28Hz),3.93(m,1H),3.62(t,1H,J=9.55Hz),2.23(s,3H),ESI-MS[M-Na]- calcd for C21H20NO9S2：494.1 found 493.7。
如以下之反應式所表示，由硫酸化糖4調製硫酸化雙醣5。
Figure 106107418-A0202-12-0039-16
聚合(Polymerization)
氬氛圍下，將硫酸化糖4(117mg 0.23mmol)溶於乙腈，加入分子篩3A進行冰冷。將TfOH(1.9μL)與N-碘琥珀醯亞胺(51.2mg)溶於乙腈(1mL)，滴入之前的糖溶液中攪拌30分鐘。回到常溫，攪拌一晚後，直接將反應溶液放入二氧化矽凝膠管柱(3/1 AcOEt/MeOH)中，取出去除原料與試藥。之後藉由HPLC單離硫酸化2糖5。1H NMR(400MHz D2O)7.97-7.60(m,8H),5.34(d,1H,J=8.42Hz),5.27(d,1H,J=8.60Hz),4.59(dd,1H,J=8.4Hz,J=10.9Hz),4.46-4.21(m,4H),4.10(dd,1H,J=8.7Hz,J=10.6Hz),4.05-3.93(m,2H),3.86(m,2H),3.70(t,1H,J=9.0Hz),3.58(t, 1H,J=9.3Hz),ESI-MS[M-2Na+H]- calcd for C28H27N2O19S2 -：759.1 found：758.7。
實施例2(藉由硫酸化雙醣之縮合的硫酸化糖之製造)
如以下之反應式所表示，調製於還原末端之6位之碳原子的位置具有無保護之硫酸基，且於1位之碳原子的位置具有脫離基的雙醣。調製例中之化合物名稱後所記載之化合物編號表示下述反應式所記載之化合物編號。
Figure 106107418-A0202-12-0041-17
軟骨糖胺乙酸酯1(Chondrosamin acetate 1)
軟骨糖胺1(Chondrosamin 1)依循以往報導(Jean-Claude Jacquinet,et al.,Angew.Chem.Int.Ed.2006,45,2574-2578)來調製。
2-NHTroc軟骨糖胺甲基酯過乙酸酯2(2-NHTroc Chondrosamin methyl ester per acetate 2)
氬氛圍下，將氯化乙醯(120μL 1.6mmol)加至甲醇(13mL)中在冰浴中攪拌30分鐘。加入軟骨糖胺乙酸酯1(Chondrosamin acetate 1)(340mg 0.82mmol)，攪拌20小時。濃縮反應溶液，加入甲醇，重複濃縮複數次。將濃縮殘渣與NaHCO3(240mg 2.85mmol)溶於水(7.4mL)，激烈攪拌30分鐘。緩慢滴入氯甲酸2,2,2-三氯乙酯(2,2,2-trichloroethyl chloro-formate)(260μL 1.9mmol)，攪拌2小時。於其中加入DOWEX 50Wx8使反應驟冷，藉由過濾去除DOWEX 50Wx8。以甲醇洗淨DOWEX 50Wx8 3次。濃縮濾液，進行二氧化矽凝膠管柱純化(6/2/1 AcOEt/MeOH/H2O)，得到N-Troc軟骨糖胺甲基酯(N-Troc Chondrosamin methylester)(353mg 79%)。氬氛圍下，將N-Troc軟骨糖胺甲基酯(N-Troc Chondrosamin methylester)(350mg 0.65mmol)溶於Ac2O/吡啶(1/1 7mL)。加入N,N-二甲基-4-胺基吡啶(N,N-dimethyl-4-aminopyridine)(7.9mg 0.065mmol)，於室溫攪拌3小時。之後，將反應溶液進行冰 冷，緩慢加入過量的甲醇，使反應驟冷。濃縮反應溶液，藉由二氧化矽凝膠純化(1/1 AcOEt/Hex)得到目標物2(470mg 3steps 72% α/β~1：1)1H NMR(400Hz CDCl3)6.57(d,J=6.8Hz,β-變旋異構物),6.32(d,J=3.04,α-anomer),5.80(t,J=8.6Hz),5.44-4.96(m),4.89-4.54(m),4.34(dt,J=3.5Hz,J=10.5Hz),4.30-3.95(m),ESI-MS[M+Na]+ calcd for C28H36 35Cl3NO19Na：818.1 found 818.1。
1-STol-2-NHTroc軟骨糖胺甲基酯過乙酸酯3(1-STol-2-NHTroc chondrosamin methyl ester per acetate 3)
氬氛圍下將N-Troc軟骨糖胺甲基酯過乙酸酯2(N-Troc Chondrosamin methyl ester per acetate 2)(717mg 0.90mmol)與p-甲苯硫醇(111mg 0.89mmol)溶於DCM，進行冰冷。滴入BF3‧OEt2(338μL 2.7mmol)，攪拌30分鐘。之後，於室溫攪拌一晚。加入Et3N(375μL 2.7mmol)使反應驟冷。於反應溶液中加入DCM進行稀釋，以飽和NaHCO3水溶液與飽和NaCl水溶液洗淨。有機層藉由硫酸鈉乾燥後，進行過濾，濃縮。藉由殘渣之二氧化矽凝膠管柱純化(1/2 AcOEt/Hex至1/1 AcOEt/Hex)，得到作為白色固體之目標化合物3。(436mg 56%)；1H NMR(400MHz CDCl3)7.41(d,2H,J=8.0Hz),7.11(d,2H,J=8.0Hz),5.41(d,1H,J=7.9Hz),5.38(d,1H,J=2.7Hz),5.22-5.13(m,2H),4.99-4.93(m,2H),4.86(d,1H,J=12.1Hz),4.73(d,1H,J=7.9Hz),4.64(d,1H,J=12.1Hz),4.31(dd,1H,J=3.1Hz, J=10.5Hz),4.19-3.95(m,3H),3.86(t,1H,J=6.42Hz),3.75(s,3H),3.65(m,1H),2.34(s,3H),2.08(s,3H),2.05(s,3H),2.04(s,3H),2.01(s,3H),1.99(s,3H)ESI-MS[M+Na]+ calcd for C33H40 35Cl3NO17SNa.882.1 found 882.1。
1-STol-2NHTroc軟骨糖胺甲基酯4(1-STol-2NHTroc chondrosamin methyl ester 4)
氬氛圍下，將1-STol-2-NHTroc軟骨糖胺甲基酯過乙酸酯3(1-STol-2-NHTroc chondrosamin methyl ester per acetate 3)(510mg 0.59mmol)溶於乾燥甲醇。加入甲氧鈉，於室溫攪拌1小時半。加入DOWEX 50Wx8使反應驟冷，進行過濾，濃縮。將殘渣進行二氧化矽凝膠管柱純化(50/3 AcOEt/MeOH)，得到作為白色固體之目標化合物4。；1H NMR(400MHz D2O)7.36(d,2H,J=8.1Hz),7.16(d,2H,J=8.1Hz),4.89(d,1H,J=12.4Hz),4.74(d,1H),4.59(d,1H,J=12.4Hz),4.54(d,1H,J=8.15Hz),4.07(d,1H,J=2.56Hz),3.96(d,1H,J=9.7Hz),3.73(s,3H),3.71-3.57(m,3H),3.48(t,1H,J=9.2Hz),3.41(t,1H,J=9.1Hz),3.28(dd,1H,J=7.92Hz,J=8.79Hz),2.24(s,3H),ESI-MS[M+Na]+ calcd for C23H30 35Cl3NO12SNa：672.0 found 672.0。
1-STol-2NHTroc-6-OSO3Na軟骨糖胺甲基酯5(1-STol-2NHTroc-6-OSO3Na chondrosamin methyl ester 5)
氬氛圍下，將1-STol-2NHTroc軟骨糖胺甲基酯4(1- STol-2NHTroc chondrosamin methyl ester 4)與SO3‧Py溶於DMF，於室溫攪拌一晚。之後，加入過量飽和NaHCO3，激烈攪拌30min。濃縮反應溶液，藉由二氧化矽凝膠管柱純化(6/1/1 AcOEt/MeOH/H2O)得到目標物5。1H NMR(400MHz MeOD)7.42(d,2H,J=8.1Hz),7.13(d,2H,J=8.1Hz),4.90(d,1H,J=12.1Hz),4.73(d,1H,J=10.3Hz),4.67(d,1H,J=12.1Hz),4.52(d,1H,J=7.5Hz),4.20(dd,1H,J=5.9Hz,J=10.7Hz),4.16(dd,1H,J=6.4Hz,J=10.6Hz),4.09(d,1H,2.7Hz),3.91(t,1H,J=10.3Hz),3.86-3.74(m,6H),3.55(5,1H,J=9.1Hz),3.40-3.26(m,2H),2.31(s,3H),ESI-MS[M-H]- calcd for C23H29 35Cl3NO15S2：728.0 found 727.8。
1-STol-2-NHTroc-6-OSO3Na-2’,3’-O-異丁軟骨糖胺甲基酯6(1-STol-2-NHTroc-6-OSO3Na-2’,3’-O-isop chondrosamin methylester 6)
氬氛圍下，將1-STol-2NHTroc-6-OSO3Na軟骨糖胺甲基酯5(1-STol-2NHTroc-6-OSO3Na chondrosamin methyl ester 5)溶於DMF。加入2-甲氧丙烯與吡啶鎓p-甲苯磺酸酯，於室溫攪拌30min。加入飽和NaHCO3使反應驟冷後，進行濃縮。將殘渣進行二氧化矽凝膠管柱純化(6/1/1 AcOEt/MeOH/H2O)，得到目標物6。1H NMR(400MHz DMSO)7.32(d,2H,J=8.2Hz),7.11(d,2H,J=8.2Hz),5.77(d,1H,J=5.6Hz),4.93(d,1H,J=7.9Hz),4.86(d,1H,J= 12.1Hz),4.77(d,1H,J=4.8Hz),4.68-4.60(m,2H),3.88-3.58(m,11H),3.43(t,1H,J=9.1Hz),3.26(t,1H,J=8.3Hz),2.27(s,3H),ESI-MS[M+Na]calcd for C26H33Cl3NO15S2：768.0 found 767.8。
接著，如下述之反應式所示，使硫酸化雙醣6聚合化。
Figure 106107418-A0202-12-0046-18
氬氛圍下，將1-STol-2-NHTroc-6-OSO3Na-2’,3’-O-異丁軟骨糖胺甲基酯6(1-STol-2-NHTroc-6-OSO3Na-2’,3’-O-isop chondrosamin methylester 6)溶於乙腈。於其中加入活性化之分子篩3A。加入DMTST開始反應。10分鐘後取出溶液的一部分，以Et3N驟冷後，測定ESI-MS。ESI-MS[M-2Na+H]calcd for C38H51Cl6N2O30S2 -：1289.0 found：1288.6。
藉由ESI-MS之結果，推定藉由上述聚合化反應合成之生成物具有下述結構。
Figure 106107418-A0202-12-0047-19
(實施例3)硫酸化雙醣(醣苷基o-己炔基苯甲酸酯)供體之合成
如以下之反應式所表示，調製於還原末端之6位之碳原子的位置具有無保護之硫酸基，且於1位之碳原子的位置具有脫離基的硫酸化雙醣供體6。調製例中之化合物名稱後所記載之化合物編號表示下述反應式所記載之化合物編號。
Figure 106107418-A0202-12-0048-20
p-甲苯基(甲基-β-D-葡萄哌喃糖基糖醛酸酯)-(1→3)-2-去氧-1-硫-2-(2,2,2-三氯乙氧基羰基胺基)-6-O-三苯基甲基-β-D-半乳吡喃糖苷2(p-Tolyl(Methyl-β-D-glucopyranosyluronate)-(1→3)-2-deoxy-1-thio-2-(2,2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-6-O-triphenylmethyl-β-D-galctopyranide 2)
將p-甲苯基(甲基-β-D-葡萄哌喃糖基糖醛酸酯)-(1→3)-2-去氧-1-硫-2-(2,2,2-三氯乙氧基羰基胺基)-β-D-半乳哌喃糖苷1(p-Tolyl(Methyl-β-D-glucopyranosyluronate)-(1→3)-2-deoxy-1-thio-2-(2,2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-β-D-galctopyranoside 1)(72mg、0.11mmol)與三苯基甲基氯化物(Triphenylmethyl Chloride)(34mg、0.12mmol)在氬 氛圍下，溶於吡啶(1.16mL)。於50℃攪拌一晚後，濃縮反應溶液。將濃縮殘渣藉由二氧化矽凝膠管柱(AcOEt：MeOH 50：3)進行純化，得到目標物2(90mg、0.09mmol,77%)。
1H NMR(400Hz CDCl3)7.45-7.37(m,7H),7.31-7.19(m,10H),7.04(d,J=8.0Hz,2H),5.51(d,J=8.1Hz,2H),5.40(d,J=2.85Hz,2H),5.22-5.12(m,2H),4.99-4.91(m,2H),4.85(d,J=12.2Hz,1H),4.73(d,J=7.9Hz,1H),4.64(d,J=12.2Hz,1H),4.24(dd,J=2.8Hz,J=10.8Hz,1H),3.99(d,J=9.3Hz,1H),3.76-3.61(m,5H),3.31(dd,J=6.9Hz,J=9.9Hz,1H),3.04(dd,J=5.7Hz,J=9.9Hz,3H),2.30(s,3H)ESI-MS[M+Na]+ calcd for C42H44 35Cl3NNaO12S：914.2 found 914.5
p-甲苯基(甲基-2,3,4-三-O-乙醯基-β-D-葡萄哌喃糖基糖醛酸酯)-(1→3)-4-O-乙醯基-2-去氧-1-硫-2-(2,2,2-三氯乙氧基羰基胺基)-6-O-三苯基甲基-β-D-半乳哌喃糖苷3(p-Tolyl(Methyl-2,3,4-tri-O-acetyl-β-D-glucopyranosyluronate)-(1→3)-4-O-acetyl-2-deoxy-1-thio-2-(2,2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-6-O-triphenylmethyl-β-D-galctopyranoside 3)
將p-甲苯基(甲基-β-D-葡萄哌喃糖基糖醛酸酯)-(1→3)-2-去氧-1-硫-2-(2,2,2-三氯乙氧基羰基胺基)-6-O-三苯基甲基-β-D-半乳哌喃糖苷2(p-Tolyl(Methyl-β-D- glucopyranosyluronate)-(1→3)-2-deoxy-1-thio-2-(2,2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-6-O-triphenylmethyl-β-D-galctopyranide 2)(150mg、0.168mmol)在氬氛圍下，溶於吡啶/乙酸酐1：1(3.3mL)。於室溫攪拌一晚後，將反應溶液進行冰冷，緩慢加入過量的甲醇使反應驟冷。濃縮反應溶液，藉由二氧化矽凝膠管柱(AcOEt：Hex 2：3)進行純化，得到目標物3(177mg 0.167mmol,99%)。
1H NMR(400Hz CDCl3)7.41(d,J=7.8Hz,8H),7.31-7.20(m,9H),7.04(d,J=7.7Hz,2H),5.43-5.38(m,2H),5.22-5.12(m,2H),4.99-4.91(m,2H),4.85(d,J=12.1Hz,1H),4.73(d,J=7.8Hz,1H),4.63(d,J=12.1Hz,1H),4.24(dd,J=3.0Hz,J=10.5Hz,1H),3.99(d,J=9.4Hz,1H),3.70-3.61(m,4H),3.31(dd,J=7.0Hz,J=9.8Hz,1H),3.04(dd,J=5.4Hz,J=9.5Hz,1H),2.31(s,3H),2.04(s,3H),2.01(s,3H),2.00(s,3H),1.88(s,3H)ESI-MS[M+Na]+ calcd for C50H52 35Cl3NNaO16S：1082.2 found 1082.2
(甲基-2,3,4-三-O-乙醯基-β-D-葡萄哌喃糖基糖醛酸酯)-(1→3)-4-O-乙醯基-2-去氧-1-硫-2-(2,2,2-三氯乙氧基羰基胺基)-6-O-三苯基甲基-β-D-半乳哌喃糖4(Methyl-2,3,4-tri-O-acetyl-β-D-glucopyranosyluronate)-(1→3)-4-O-acetyl-2-deoxy-1-thio-2-(2,2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-6-O-triphenylmethyl-β-D-galctopyranose 4)
將p-甲苯基(甲基-2,3,4-三-O-乙醯基-β-D-葡萄哌喃糖 基糖醛酸酯)-(1→3)-4-O-乙醯基-2-去氧-1-硫-2-(2,2,2-三氯乙氧基羰基胺基)-6-O-三苯基甲基-β-D-半乳哌喃糖苷3(p-Tolyl(Methyl-2,3,4-tri-O-acetyl-β-D-glucopyranosyluronate)-(1→3)-4-O-acetyl-2-deoxy-1-thio-2-(2,2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-6-O-triphenylmethyl-β-D-galctopyranoside 3)(230mg、217mmol)溶於H2O/丙酮1：10(2.3mL)。將溶液冰冷，加入N-溴琥珀醯亞胺(116mg 0.65mmol)攪拌20分鐘。將反應溶液以AcOEt進行稀釋，將有機相以飽和碳酸氫鈉水、飽和食鹽水洗淨後，藉由硫酸鈉使其乾燥。藉由過濾去除硫酸鈉並進行減壓濃縮。將殘渣藉由二氧化矽凝膠管柱(AcOEt：Hex 1：1)進行純化，得到目標物4(159mg、0.166mmol、77%)。
1H NMR α-anomer(400Hz CDCl3)7.44-7.35(m,6H),7.31-7.19(m,9H),5.71(d,J=9.0Hz,1H),5.49(d,J=2.2Hz,1H)5.27-5.14(m,3H),4.88-4.70(m,2H),4.70-4.60(m,1H),4.33(t,J=6.6Hz,1H),4.21(dd,J=3.1Hz,J=10.5 1H),4.15-3.97(m,2H),3.74-3.65(m,4H),3.17(dd,J=6.6Hz,J=9.2Hz,1H),3.08-2.99(m,1H),2.10-2.00(m,12H)ESI-MS[M+Na]+ calcd for C43H46 35Cl3NNaO17：976.2 found 976.7
(甲基-2,3,4-三-O-乙醯基-β-D-葡萄哌喃糖基糖醛酸酯)-(1→3)-4-O-乙醯基-2-去氧-1-硫-2-(2,2,2-三氯乙氧基羰基胺基)-6-O-三苯基甲基-β-D-半乳哌喃糖基o-己炔基苯甲酸酯5((Methyl-2,3,4-tri-O-acetyl-β-D-glucopyranosyluronate)- (1→3)-4-O-acetyl-2-deoxy-1-thio-2-(2,2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-6-O-triphenylmethyl-β-D-galctopyranosyl o-hexynylbenzoate 5)
將甲基-2,3,4-三-O-乙醯基-β-D-葡萄哌喃糖基糖醛酸酯)-(1→3)-4-O-乙醯基-2-去氧-1-硫-2-(2,2,2-三氯乙氧基羰基胺基)-6-O-三苯基甲基-β-D-半乳哌喃糖4((Methyl-2,3,4-tri-O-acetyl-β-D-glucopyranosyluronate)-(1→3)-4-O-acetyl-2-deoxy-1-thio-2-(2,2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-6-O-triphenylmethyl-β-D-galctopyranose 4)(159mg,0.166mmol)與o-己炔基苯甲酸7(o-hexynylbenzoic acid 7)(101mg、0.499mmol)在氬氛圍下，溶於DCM(1.7mL)。加入N,N-二甲胺基吡啶(2mg、0.02mmol)與N,N’-二異丙基碳二亞胺(78uL、0.499mmol)於室溫攪拌一晚。將反應溶液以DCM稀釋，以飽和碳酸氫鈉水、飽和食鹽水洗淨後，藉由硫酸鈉使其乾燥。藉由過濾去除硫酸鈉，並進行減壓濃縮。將殘渣藉由二氧化矽凝膠管柱(AcOEt：Hex 2：3)進行純化，得到目標物5(126mg,0.11mmol,67%)。
1H NMR α-anomer(400Hz CDCl3)8.02(d,J=8,2Hz,1H),7.63(d,J=7.9Hz,1H),7.53(dt,J=1.3Hz,J=7.5Hz 1H),7.47-7.41(m,1H)7.40-7.35(m,7H),7.29-7.26(m,4H),7.21-7.15(m,4H),6.45(d,J=3.3Hz,1H),6.02(d,J=8.7Hz,1H),5.63(b,1H),5.26-5.19(m,2H),4.87(d,J=7.6Hz,1H),4.81(d,J=12.0Hz,H),4.54-4.49(m,2H),4.38-4.32(m,1H),4.29-4.24(m,1H),4.09(d,J=9.3Hz,1H),3.43(s,3H), 3.31(dd,J=5.5Hz,J=9.1Hz,1H),2.97(t,J=9.1Hz,1H),2.67-2.49(m,2H),2.16(s,3H),2.06(s,6H),1.85(s,3H),1.66-1.57(m,2H),1.51-1.47(m,2H),0.89(t,J=7.3Hz,3H)ESI-MS[M+Na]+ calcd for C56H58 35Cl3NNaO18：1160.3 found 1160.9
(甲基-2,3,4-三-O-乙醯基-β-D-葡萄哌喃糖基糖醛酸酯)-(1→3)-4-O-乙醯基-2-去氧-6-O-磺酸基-1-硫-2-(2,2,2-三氯乙氧基羰基胺基)-β-D-半乳哌喃糖基o-己炔基苯甲酸酯,單鈉鹽6((Methyl-2,3,4-tri-O-acetyl-β-D-glucopyranosyluronate)-(1→3)-4-O-acetyl-2-deoxy-6-O-sulfo-1-thio-2-(2,2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-β-D-galctopyranosyl o-hexynylbenzoate,monosodium salt 6)
將(甲基-2,3,4-三-O-乙醯基-β-D-葡萄哌喃糖基糖醛酸酯)-(1→3)-4-O-乙醯基-2-去氧-1-硫-2-(2,2,2-三氯乙氧基羰基胺基)-6-O-三苯基甲基-β-D-半乳哌喃糖基o-己炔基苯甲酸酯5((Methyl-2,3,4-tri-O-acetyl-β-D-glucopyranosyluronate)-(1→3)-4-O-acetyl-2-deoxy-1-thio-2-(2,2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-6-O-triphenylmethyl-β-D-galctopyranosyl o-hexynylbenzoate 5)(50.0mg 0.044mmol)溶於DCM(440uL)。加入三氟乙酸(44uL)與三異丙基矽烷(45uL)於室溫攪拌3分鐘。加入過量的飽和碳酸氫鈉水使反應驟冷後，以AcOEt進行萃取。將有機相以飽和食鹽水洗淨後，藉由硫酸鈉使其乾 燥。藉由過濾去除硫酸鈉，並進行減壓濃縮。將殘渣在氬氛圍氣下溶於DMF(440uL)，加入SO3‧Py(14mg 0.088mmol)進行攪拌。2小時後，於反應溶液中加入飽和碳酸氫鈉水(1.0mL)進而攪拌30分鐘。將反應溶液減壓濃縮後，藉由二氧化矽凝膠管柱(AcOEt：MeOH 10：1)進行純化，得到目標物6(29.8mg 0.030mmol 68%)。
1H NMR(α anomer)(400Hz MeOD)8.06-8.00(m,1H),7.55-7.49(m,2H),7.45-7.40(m,1H),6.50(d,J=2.47Hz,1H),5.60(b,1H),5.26(t,J=9.2Hz 1H),5.09(t,J=9.8Hz,1H),4.96-4.87(m,3H),4.65-4.58(m,2H),4.32-4.28(m,2H),4.20(d,J=9.8Hz,1H),4.13-4.07(m,1H),3.99-3.93(m,1H),3.73(s,3H),2.48(t,J=6.8,2H),2.15(s,3H),2.02(s,3H),1.99(s,3H),1.97(s,3H),1.67-1.50(m,4H),0.99(t,J=7.2Hz,3H)ESI-MS[M-H]- calcd for C37H43 35Cl3NO21S：974.1 found 973.9
雙醣受體之合成
依循以下之反應式調製雙醣受體11。調製例中之化合物名稱後所記載之化合物編號表示下述反應式所記載之化合物編號。
Figure 106107418-A0202-12-0055-21
p-甲苯基(甲基2,3-O-異亞丙基-β-D-葡萄哌喃糖基糖醛酸酯)-(1→3)-2-去氧-4,6-O-異亞丙基-1-硫-2-(2,2,2-三氯乙氧基羰基胺基)-β-D-半乳哌喃糖苷8(p-Tolyl(Methyl 2,3-O-isopropylydene-β-D-glucopyranosyluronate)-(1→3)-2-deoxy-4,6-O-isopropylydene-1-thio-2-(2,2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-β-D-galactopyranoside 8)
將p-甲苯基(甲基-β-D-葡萄哌喃糖基糖醛酸酯)-(1→3)-2-去氧-1-硫-2-(2,2,2-三氯乙氧基羰基胺基)-β-D-半乳哌喃糖苷1(p-Tolyl(Methyl-β-D-glucopyranosyluronate)-(1→3)-2-deoxy-1-thio-2-(2,2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-β-D-galactopyranoside 1)(332mg,0.51mmol)在氬氛圍下，溶於DMF(5.1mL)。加入 PPTS(64mg,0.25mmol)與2-methoxypropene(490uL,5.mmol)於室溫攪拌15分鐘。將反應系統以乙酸乙酯稀釋，以飽和碳酸氫鈉水、飽和食鹽水洗淨後，藉由硫酸鈉使其乾燥。藉由過濾去除硫酸鈉，並進行減壓濃縮。將殘渣藉由二氧化矽凝膠管柱(AcOEt/Hex 2：3)進行純化，得到目標物8(204mg,0.279mmol,55%)。
1H NMR(400Hz CDCl3)7.56(d,J=8.0Hz,2H),7.10(d,J=8.0Hz,2H),5.58(d,J=6.5Hz,1H),5.28(d,J=10.0Hz,1H),4.88(d,J=7.66Hz 1H),4.74(d,J=12.0Hz,1H),4.69(d,J=12.0Hz,1H),4.08-4.00(m,3H),3.84(s,3H),3.68(d,J=8.8Hz,1H),3.49-3.42(m,3H),3.37(dd,J=7.7Hz,J=9.1Hz 1H),2.33(s,3H),1.44-1.39(m,12H)ESI-MS[M+Na]+ calcd for C29H38 35Cl3NNaO12S：752.1 found 752.1
p-甲苯基(甲基2,3-O-異亞丙基-4-O-乙醯丙醯基-β-D-葡萄哌喃糖基糖醛酸酯)-(1→3)-2-去氧-4,6-O-異亞丙基-1-硫-2-(2,2,2-三氯乙氧基羰基胺基)-β-D-半乳哌喃糖苷9(p-Tolyl(Methyl 2,3-O-isopropylydene-4-O-levulinoyl-β-D-glucopyranosyluronate)-(1→3)-2-deoxy-4,6-O-isopropylydene-1-thio-2-(2,2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-β-D-galactopyranoside 9)
將p-甲苯基(甲基2,3-O-異亞丙基-β-D-葡萄哌喃糖基糖醛酸酯)-(1→3)-2-去氧-4,6-O-異亞丙基-1-硫-2-(2,2,2-三氯乙氧基羰基胺基)-β-D-半乳哌喃糖苷8(p-Tolyl(Methyl 2,3-O-isopropylydene-β-D-glucopyranosyluronate)-(1→3)-2-deoxy-4,6-O-isopropylydene-1-thio-2-(2,2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-β-D-galactopyranoside 8)(63mg 0.086mmol)在氬氛圍下，溶於DCM(862uL)。加入DMAP(2mg,0.02mmol),LevOH(26uL,0.26mmol),DIC(40uL,0.26mmol)於室溫攪拌一晚。將反應溶液以乙酸乙酯稀釋，以飽和碳酸氫鈉水與飽和食鹽水洗淨後，藉由硫酸鈉使其乾燥。藉由過濾去除硫酸鈉並進行減壓濃縮。將殘渣藉由二氧化矽凝膠管柱(AcOE/Hex3：2)進行純化得到目標物9(50mg 0.060mmol 70%)。
1H NMR(400Hz CDCl3)7.55(d,J=8.0Hz,2H),7.11(d,J=8.0Hz,2H),5.32-5.16(m,3H),4.83-4.78(m,2H),4.62(d,J=12.1Hz 1H),4.46(d,J=9.8Hz,1H),4.37(d,J=2.8Hz,1H),4.05-3.95(m,2H),3.88-3.78(m,2H),3.72(s,3H),3.58-3.47(m,2H),3.42(b,1H),2.79-2.59(m,4H),2.33(s,3H),2.20(s,3H),1.15(s,6H),1.13(s,6H)ESI-MS[M+K]+ calcd for C34H44 35Cl3KNO14S：866.1 found 866.0
p-甲苯基(甲基2,3-二-O-乙醯基-4-O-乙醯丙醯基-β-D-葡萄哌喃糖基糖醛酸酯)-(1→3)-4,6-二-O-乙醯基-2-去氧-1-硫-2-(2,2,2-三氯乙氧基羰基胺基)-β-D-半乳哌喃糖苷10(p-Tolyl(Methyl 2,3-di-O-acetyl-4-O-levulinoyl-β-D-glucopyranosyluronate)-(1→3)-4,6-di-O-acetyl-2-deoxy-1-thio-2-(2,2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-β-D- galactopyranoside 10)
將p-甲苯基(甲基2,3-O-異亞丙基-4-O-乙醯丙醯基-β-D-葡萄哌喃糖基糖醛酸酯)-(1→3)-2-去氧-4,6-O-異亞丙基-1-硫-2-(2,2,2-三氯乙氧基羰基胺基)-β-D-半乳哌喃糖苷9(p-Tolyl(Methyl 2,3-O-isopropylydene-4-O-levulinoyl-β-D-glucopyranosyluronate)-(1→3)-2-deoxy-4,6-O-isopropylydene-1-thio-2-(2,2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-β-D-galactopyranoside 9)(227mg,0.274mmol)溶於80%乙酸水溶液(2.74mL)，以2小時室溫進行攪拌。反應後，以飽和碳酸氫鈉水(ca.3mL)中和反應溶液，以乙酸乙酯萃取3次。將有機相以飽和食鹽水洗淨，藉由硫酸鈉使其乾燥。藉由過濾，去除硫酸鈉，並進行減壓濃縮。在氬氛圍下，將殘渣溶於乙酸酐(1.4mL)，吡啶(1.4mL)，加入DMAP(3mg,0.03mmol)於室溫攪拌。將反應溶液進行冰冷，加入過量的甲醇使反應驟冷。減壓濃縮後，藉由二氧化矽凝膠管柱(AcOEt/Hex 1：1)進行純化，得到目標物10(201mg 0.219mmol,80%)。
1H NMR(400Hz CDCl3)7.36(d,J=8.0Hz,2H),7.05(d,J=8.0Hz,2H),5.59(d,J=8.3Hz,1H),5.33(d,J=3.0Hz,1H),5.17-5.09(m,2H),4.96-4.87(m,2H),4.79(d,J=12.1Hz,1H),4.71(d,J=7.8Hz,1H),4.63(d,J=7.8Hz,1H),4.23(dd,J=3.0Hz,J=10.3Hz,1H),4.09(dd,J=5.3Hz,J=11.8Hz,1H),4.00-3.90(m,2H),3.81(dd,J=5.7Hz,J=6.8Hz,1H),3.72-3.61(m,4H),2.70-2.62(m,2H),2.47-2.40(m,2H),2.29(s, 3H),2.10(s,3H),2.03(s,3H),2.01(s,3H),2.00(s,3H),1.99(s,3H)ESI-MS[M+Na]+ calcd for C36H44 35Cl3NNaO18S：938.1 found 938.1
p-甲苯基(甲基2,3-二-O-乙醯基-β-D-葡萄哌喃糖基糖醛酸酯)-(1→3)-4,6-二-O-乙醯基-2-去氧-1-硫-2-(2,2,2-三氯乙氧基羰基胺基)-β-D-半乳哌喃糖苷11(p-Tolyl(Methyl 2,3-di-O-acetyl-β-D-glucopyranosyluronate)-(1→3)-4,6-di-O-acetyl-2-deoxy-1-thio-2-(2,2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-β-D-galactopyranoside 11)
將p-甲苯基(甲基2,3-二-O-乙醯基-4-O-乙醯丙醯基-β-D-葡萄哌喃糖基糖醛酸酯)-(1→3)-4,6-二-O-乙醯基-2-去氧-1-硫-2-(2,2,2-三氯乙氧基羰基胺基)-β-D-半乳哌喃糖苷10(p-Tolyl(Methyl 2,3-di-O-acetyl-4-O-levulinoyl-β-D-glucopyranosyluronate)-(1→3)-4,6-di-O-acetyl-2-deoxy-1-thio-2-(2,2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-β-D-galactopyranoside 10)(201mg、0.219mmol)在氬氛圍下，溶於pyrdine(1.09mL)，乙酸(1.09mL)。加入聯胺一水合物(13uL、0.263mmol)於室溫攪拌30分鐘。將反應溶液以乙酸乙酯稀釋，以飽和碳酸氫鈉水、飽和食鹽水洗淨後，以硫酸鈉使其乾燥。藉由過濾去除硫酸鈉，並進行減壓濃縮。將殘渣藉由二氧化矽凝膠管柱(AcOEt/Hex 3：2)進行純化，得到目標物11(121mg 0.148mmol 68%)。
1H NMR(400Hz CDCl3)7.41(d,J=8.0Hz,2H),7.11(d, J=8.0Hz,2H),5.44(d,J=2.8Hz,1H),5.05-4.99(m,2H),4.89-4.80(m,2H),4.71-4.65(m,2H),4.37-4.32(m,1H),4.18-4.02(m,2H),3.96-3.83(m,6H),3.62-3.52(m,1H),2.34(s,3H),2.07(s,3H),2.06(s,3H),2.05(s,3H),2.04(s,3H)ESI-MS[M+K]+ calcd for C31H38 35Cl3KNO16S：856.6 found 856.0
(合成例1)(硫酸化四糖之合成)
如上述使調製之硫酸化雙醣供體6與雙醣受體11如以下之反應式縮合，調製目標的硫酸化四糖12。調製例中之化合物名稱後所記載之化合物編號表示下述反應式所記載之化合物編號。
Figure 106107418-A0202-12-0060-22
將p-甲苯基(甲基2,3-二-O-乙醯基-β-D-葡萄哌喃糖基糖醛酸酯)-(1→3)-4,6-二-O-乙醯基-2-去氧-1-硫-2-(2,2,2-三氯乙氧基羰基胺基)-β-D-半乳哌喃糖苷11(p-Tolyl(Methyl 2,3-di-O-acetyl-β-D-glucopyranosyluronate)-(1→3)-4,6-di-O-acetyl-2-deoxy-1-thio-2-(2,2,2- trichloroethoxycarbonylamino)-β-D-galactopyranoside 11)(12.0mg 0.015mmol)與(甲基-2,3,4-三-O-乙醯基-β-D-葡萄哌喃糖基糖醛酸酯)-(1→3)-4-O-乙醯基-2-去氧-6-O-磺酸基-1-硫-2-(2,2,2-三氯乙氧基羰基胺基)-β-D-半乳哌喃糖基o-己炔基苯甲酸酯，單鈉鹽6((Methyl-2,3,4-tri-O-acetyl-β-D-glucopyranosyluronate)-(1→3)-4-O-acetyl-2-deoxy-6-O-sulfo-1-thio-2-(2,2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-β-D-galctopyranosyl o-hexynylbenzoate,monosodium salt 6)(12.6mg,0.013mmol)在氬氛圍下，溶於MeCN(126uL)。加入經活性化之MS-300(12mg)於室溫攪拌1小時。將反應溶液進行冰冷後，加入PPh3AuNTf2‧0.5Toluene(6mg 3.7umol)開始反應。於0℃攪拌15分鐘，將反應溶液直接放入二氧化矽凝膠管柱。於質量分析中觀察4糖12的離子波峰。(yield ca.5%)又，藉由NMR解析，可確認本反應所形成之醣苷基鍵結部位的變旋異構物部位(1位)之CH耦合定數(J值)為JCH=178Hz，教示以α鍵結連結所得之4糖的化合物12。ESI-MS[M-H]- calcd for C55H67 35Cl6N2O35S2：1589.1 found 1589.1
(合成例2)(硫酸化四糖之合成)
如上述使調製之硫酸化雙醣供體6與雙醣受體11如以下之反應式縮合，調製目標之硫酸化四糖13。調製例中之化合物名稱後所記載之化合物編號表示下述反應式所記載之化合物編號。
Figure 106107418-A0202-12-0062-23
將p-甲苯基(甲基2,3-二-O-乙醯基-β-D-葡萄哌喃糖基糖醛酸酯)-(1→3)-4,6-二-O-乙醯基-2-去氧-1-硫-2-(2,2,2-三氯乙氧基羰基胺基)-β-D-半乳哌喃糖苷11(p-Tolyl(Methyl 2,3-di-O-acetyl-β-D-glucopyranosyluronate)-(1→3)-4,6-di-O-acetyl-2-deoxy-1-thio-2-(2,2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-β-D-galactopyranoside 11)(28.0mg 0.034mmol)與(甲基-2,3,4-三-O-乙醯基-β-D-葡萄哌喃糖基糖醛酸酯)-(1→3)-4-O-乙醯基-2-去氧-6-O-磺酸基-1-硫-2-(2,2,2-三氯乙氧基羰基胺基)-β-D-半乳哌喃糖基o-己炔基苯甲酸酯，單鈉鹽6((Methyl-2,3,4-tri-O-acetyl-β-D-glucopyranosyluronate)-(1→3)-4-O-acetyl-2-deoxy-6-O-sulfo-1-thio-2-(2,2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-β-D-galctopyranosyl o-hexynylbenzoate,monosodium salt 6)(28.0mg,0.028mmol)在氬氛圍下，溶於MeCN(280uL)。加入經活性化之MS-300(12mg)於室溫攪拌1小時。將反應溶液冷卻至-5℃後，加入PPh3AuNTf2‧0.5Toluene(13mg 8.4umol)開始反應。於-5℃下攪拌3小時，將反應溶液直 接放入二氧化矽凝膠管柱。在質量分析中觀察4糖12之離子波峰。(yield ca.10%)又，藉由NMR解析，可確認本反應所形成之醣苷基鍵結部位的H-1與H-2之J值為J1,2=8.3Hz，教示以β鍵結連結所得之4糖的化合物13。ESI-MS[M-H]- calcd for C55H67 35Cl6N2O35S2：1589.1 found 1589.1

Claims (23)

  1. 一種製造具有硫酸基及/或磷酸基之糖的方法，其特徵為包含下述步驟：(a)調製「具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的第1糖」與「具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的第2糖」的步驟，及(b)在酸的存在下使於上述步驟(a)所調製之第1糖與第2糖相互縮合的步驟。
  2. 如請求項1之製造方法，其中前述第1糖及前述第2糖係於糖之1位碳原子具有脫離基，且具有親核性基的糖。
  3. 如請求項1之製造方法，其中前述第1糖及前述第2糖為相同的糖。
  4. 如請求項1之製造方法，其中親核性基係選自羥基、胺基、及硫醇基中。
  5. 如請求項1之製造方法，其中前述第1糖及前述第2糖為構成6員環的糖，於糖之1位碳原子具有脫離基，至少於糖之2位、3位、4位、或6位之任一者具有親核性基，至少於糖之2位、3 位、4位、或6位之任一者具有至少一個無保護之硫酸基或無保護之磷酸基。
  6. 如請求項1之製造方法，其中前述第1糖及前述第2糖為構成6員環的糖，於糖之1位碳原子具有脫離基，至少於糖之3位或4位之任一者具有親核性基，至少於糖之2位、4位、或6位之任一者具有無保護之硫酸基或無保護之磷酸基。
  7. 如請求項1之製造方法，其中前述第1糖及前述第2糖為下述式所示，
    Figure 106107418-A0305-02-0067-1
     [式中，L為脫離基；A係選自由氫原子、保護或無保護之羧基、保護或無保護之醯胺基、及-CH2-R4所成群組中；R1~R4係各自獨立地選自由氫原子、無保護之硫酸基、無保護之磷酸基、保護或無保護之羥基、保護或無保護之胺基、保護或無保護之硫醇基、及糖殘基所成群組 中；R1~R4之至少1個為無保護之硫酸基或無保護之磷酸基；且R1~R4之至少1個為選自羥基、胺基、及硫醇基中之親核性基]。
  8. 如請求項7之製造方法，其中式中，A為-CH2-R4；R2~R4係選自無保護之硫酸基、無保護之磷酸基、保護或無保護之羥基、及糖殘基中，惟，R2~R4之至少一個為無保護之硫酸基或無保護之磷酸基；R1為保護或無保護之胺基。
  9. 如請求項8之製造方法，其中前述糖殘基為葡萄糖醛酸殘基。
  10. 如請求項8之製造方法，其中前述糖殘基為於糖之2位碳原子具有硫酸基的葡萄糖醛酸殘基。
  11. 如請求項1~6中任1項之製造方法，前述第1糖及前述第2糖為下述式所示，
    Figure 106107418-A0305-02-0069-3
     [式中，L為脫離基；A及B係各自獨立地選自由氫原子、保護或無保護之羧基、保護或無保護之醯胺基、及-CH2-R6所成群組中；R1~R6係各自獨立地選自由氫原子、無保護之硫酸基、無保護之磷酸基、保護或無保護之羥基、保護或無保護之胺基、保護或無保護之硫醇基、及糖殘基所成群組中；R1~R6之至少1個為無保護之硫酸基或無保護之磷酸基；且 R1~R6之至少1個為選自羥基、胺基、及硫醇基中之親核性基]。
  12. 如請求項11之製造方法，其中式中，A為-CH2-R6；B為保護或無保護之羧基；R2~R6係各自獨立地選自無保護之硫酸基、無保護之磷酸基、及保護或無保護之羥基、及糖殘基中，惟，R2~R6之至少一個為無保護之硫酸基或無保護之磷酸基；R1為保護或無保護之胺基。
  13. 如請求項1之製造方法，其係2糖~100糖的多醣之製造方法。
  14. 如請求項1之製造方法，其係硫酸軟骨素或硫酸乙醯肝素之製造方法。
  15. 一種製造包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合物之方法，其特徵為包含下述步驟：(a1)調製「具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的第1糖」的步驟，及(b1)在酸的存在下使上述步驟(a1)所調製的第1糖與 「具有親核性基之化合物」縮合的步驟。
  16. 如請求項15之製造方法，其中前述第1糖為於糖之1位具有脫離基的糖。
  17. 如請求項15之製造方法，其中包含：(c1)使於前述步驟(b1)所調製之「包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合物」，與選自「具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的糖」、「具有親核性基之化合物」及於前述步驟(b1)所調製之「包含具有硫酸基及/或磷酸基之糖的化合物」中之化合物進一步縮合的步驟。
  18. 如請求項15之製造方法，其中親核性基係選自羥基、胺基、及硫醇基中。
  19. 如請求項15之製造方法，其中具有親核性基之化合物係選自糖、胺基酸、胜肽、蛋白質、及此等之衍生物中。
  20. 如請求項15之製造方法，其中前述「具有無保護之硫酸基及/或無保護之磷酸基的糖」為構成6員環的糖，於糖之1位碳原子具有脫離基，至少於糖之2位、3位、4位、或6位之任一者具有 親核性基，至少於糖之2位、3位、4位、或6位之任一者具有至少一個無保護之硫酸基或無保護之磷酸基。
  21. 如請求項15之製造方法，其中前述第1糖為構成6員環的糖，於糖之1位碳原子具有脫離基，至少於糖之3位或4位之任一者具有親核性基，至少於糖之2位、4位、或6位之任一者具有無保護之硫酸基或無保護之磷酸基。
  22. 如請求項15~21中任1項之製造方法，其中前述第1糖為具有下述式所示之結構的化合物，
    Figure 106107418-A0305-02-0072-4
     [式中，L為脫離基；A係選自由氫原子、保護或無保護之羧基、保護或無保護之醯胺基、及-CH2-R4所成群組中；R1~R4係各自獨立地選自由氫原子、無保護之硫酸基、無保護之磷酸基、保護或無保護之羥基、保護或無保護之胺基、保護或無保護之硫醇基、及糖殘基所成群組 中；R1~R4之至少1個為無保護之硫酸基或無保護之磷酸基；且R1~R4之至少1個具有選自羥基、胺基、及硫醇基中之親核性基]。
  23. 如請求項22之製造方法，式中，A為-CH2-R4；R3係選自無保護之硫酸基、無保護之磷酸基、保護或無保護之羥基、及糖殘基中；R4係選自無保護之硫酸基、無保護之磷酸基、及、保護或無保護之羥基中；惟，R4及R3之至少一者為無保護之硫酸基或無保護之磷酸基；R1為保護或無保護之胺基；及R2為無保護之羥基或糖殘基。
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Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2953702B2 (ja) * 1989-01-20 1999-09-27 生化学工業株式会社 合成コンドロイチン硫酸プロテオグリカンを含有する組織癒着防止剤
DE4021919C2 (de) 1990-07-10 1995-06-08 Heidenhain Gmbh Dr Johannes Maßverkörperung
IT1260136B (it) 1992-04-17 1996-03-28 Alfa Wassermann Spa Glicosaminoglicani semisintetici contenenti acido alfa-l-galatturonicosostituito con radicali nucleofili in posizione 3
JPH0665273A (ja) 1992-08-18 1994-03-08 Dainippon Ink & Chem Inc 硫酸化糖の製造方法
IT1264102B1 (it) * 1993-03-29 1996-09-10 Alfa Wassermann Spa Processo per la sintesi di glicosaminoglicani semisintetici contenenti acido alfa-l-galatturonico sostituito con radicali
IT1264101B1 (it) * 1993-03-29 1996-09-10 Alfa Wassermann Spa Processo per la sintesi di glicosaminoglicani semisintetici a struttura eparinica od eparanica modificati nella posizione 2
JP4023848B2 (ja) 1996-03-29 2007-12-19 生化学工業株式会社 硫酸化ラクトサミンオリゴ糖の製造方法
JP2001019698A (ja) 1999-07-05 2001-01-23 Japan Science & Technology Corp 硫酸化オリゴ糖化合物およびその合成法
KR100551497B1 (ko) 1999-08-30 2006-02-13 삼성전자주식회사 냉장고의 압축기 운전 제어방법
JP2002103025A (ja) 2000-10-03 2002-04-09 Office Nakamura:Kk ロストワックス鋳造後の鋳型からのジルコン分離法及び装置
EP1408116A4 (en) 2001-06-14 2006-11-08 Nat Inst Of Advanced Ind Scien NEW SULFATED SACCHARIDE AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF
US20050010044A1 (en) 2003-06-23 2005-01-13 Linhardt Robert J. Polysaccharides and methods and intermediates useful for their preparation
JP4675048B2 (ja) 2004-02-18 2011-04-20 公益財団法人野口研究所 硫酸糖ライブラリー
ATE438513T1 (de) 2005-05-30 2009-08-15 Agfa Graphics Nv Druckkopfmontageanordnung und verfahren zur montage eines druckkopfs auf einem trägerrahmen
JP5081401B2 (ja) 2006-06-13 2012-11-28 株式会社カネカ 硫酸化糖含有ポリウレタン誘導体およびその製造方法
JP5081406B2 (ja) 2006-06-29 2012-11-28 株式会社カネカ 硫酸化糖含有ポリウレタン誘導体およびその製造方法
US8470986B2 (en) 2007-03-09 2013-06-25 Tohoku University Method for production of sugar oxazoline derivative
EP2414371A4 (en) 2009-03-30 2014-06-25 Univ Georgia HEPARANSULFATSYNTHESE
JP5395861B2 (ja) 2011-09-09 2014-01-22 株式会社神戸製鋼所 流路構造体及び流路構造体の製造方法
JP6273199B2 (ja) 2012-03-22 2018-01-31 大塚製薬株式会社 オリゴ糖化合物及びその製造方法とその中間体
JP2014047155A (ja) 2012-08-30 2014-03-17 Tottori Univ 保護硫酸化オリゴ糖化合物及びその製造方法
US9246392B2 (en) 2013-03-13 2016-01-26 Power Integrations, Inc. Switched mode power converter controller with ramp time modulation
WO2015080603A1 (en) 2013-11-28 2015-06-04 Antony John Fairbanks Glycoproteins
JP6298805B2 (ja) 2015-12-01 2018-03-20 システムプラザ株式会社 電子証明書管理システム、電子証明書利用端末及び電子証明書管理方法

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