TWI579303B - 單株抗體 - Google Patents

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Description

單株抗體
本發明係關於用於治療由類澱粉蛋白或類澱粉樣蛋白引起或與其相關之疾病及病症(包括澱粉樣變性病，一群與類澱粉蛋白相關之病症及異常(諸如阿茲海默氏病(Alzheimer's disease))之治療及診斷用途中的方法及組合物。
澱粉樣變性病並非單一之疾病實體，而是一群多種以蠟狀澱粉樣蛋白(稱為類澱粉蛋白)(其在一或多個器官或身體系統中累積)之細胞外組織沈積物為特徵之進行性疾病過程。隨著類澱粉蛋白沈積物的堆積，其開始干擾器官或身體系統之正常功能。存在至少15種不同類型之澱粉樣變性病。主要形式為無已知前體之原發性澱粉樣變性病，在某些其他病狀後出現之繼發性澱粉樣變性病及遺傳性澱粉樣變性病。
繼發性澱粉樣變性病出現在患有慢性感染或發炎疾病(諸如結核病、稱為家族性地中海熱之細菌感染、骨感染(骨髓炎)、類風濕性關節炎、小腸發炎(肉芽腫性回腸炎)、霍奇金氏病(Hodgkin's disease)及麻風病)之人群中。
類澱粉蛋白沈積物通常含有三種組份。占類澱粉蛋白物質約90%之類澱粉蛋白原纖維包含數種不同類型蛋白質之一。此等蛋白能夠折疊成所謂"β折疊"片狀原纖維，此係一種顯示出與剛果紅(Congo red) 之結合位置從而產生類澱粉蛋白之獨特著色性質之獨特蛋白質結構。此外，類澱粉蛋白沈積物與類澱粉蛋白P(五邊形)組份(AP)(一種與正常血清類澱粉蛋白P(SAP)相關之糖蛋白)及硫酸化葡糖胺聚糖(GAG)(結締組織之複雜碳水化合物)緊密相關。
許多衰老疾病係基於類澱粉樣蛋白或與其相關，且其特徵部分為促進疾病之發病機理及疾病進程之類澱粉蛋白或類澱樣粉物質細胞外沈積物之堆積。此等疾病包括(但不限於)神經障礙症，諸如阿茲海默氏病(AD)，包括以認知記憶能力損失為特徵之疾病或病狀，諸如輕度認知障礙(MCI)、路易體性癡呆(Lewy body dementia)、唐氏症候群(Down's syndrome)、遺傳性腦出血併發澱粉樣變性病(荷蘭型)、關島帕金森-癡呆綜合症(Guam Parkinson-Dementia complex)。其他基於類澱粉樣蛋白或與其相關之疾病為進行性核上麻痹、多發性硬化症、庫賈氏病(Creutzfeld Jacob disease)、帕金森氏病(Parkinson's disease)、HIV相關之癡呆、ALS(肌萎縮性側索硬化)、包涵體肌炎(IBM)、成年發病型糖尿病、老年心臟澱粉樣變性病、內分泌腫瘤及其他疾病(包括黃斑退化)。
雖然此等疾病之發病機理可能不同，但其特徵化沈積物常含有多種共同之分子成份。在一定重要程度上，此可歸結於前發炎路徑之局部活化，從而導致活化補體組份、急性期反應物、免疫介體及其他發炎性介體之同時沈積(McGeer等人，1994)。
阿茲海默氏病(AD)係一種神經障礙症，主要認為其係由類澱粉蛋白斑(蛋白質異常沈積物在腦中之累積)引起。在患病個體之腦中發現的最常見之類澱粉蛋白類型主要包含Aβ原纖維。科學證據證明斑塊中β-類澱粉蛋白產生及累積之增加導致神經細胞死亡，而神經細胞死亡促進AD發展及進程。重要腦區域中神經細胞之損失繼而引起神經傳遞素之減少及記憶障礙。原則上造成斑塊堆積之蛋白質包括類澱 粉前驅蛋白(APP)及兩種早老素(早老素I及早老素II)。酵素β及γ分泌酶連續裂解類澱粉前驅體蛋白(APP)(其基本上在大部分細胞中表現及分解代謝)導致39至43胺基酸Aβ肽之釋放。APP降解可能增加其在斑塊中聚集之傾向。由於Aβ(1-42)片段之C端存在兩個極具疏水性之胺基酸殘基，因此Aβ(1-42)片段尤其具有高度增加聚集之傾向。因此，據信Aβ(1-42)片段主要涉及且造成AD中神經炎斑形成之起始且因此具有高病理潛力。因此，需要可以類澱粉蛋白斑形成為目標且可使其擴散之特異性抗體。
AD症狀出現緩慢，且第一症狀可能僅為輕度健忘。在此階段，個體可能忘記近來事件、活動、家人姓名或事情，且可能不會解答簡單的數學問題。隨著疾病發展，症狀更易察覺且變得足夠嚴重而使患有AD之人或其家人尋求醫學幫助。AD之中期症狀包括忘記如何做簡單的任務(諸如整理清潔)，且說話、理解、閱讀或書寫之問題逐漸顯現。在後期，AD患者可能變得焦慮或有攻擊性，可能離家出走且最終需要完全護理。
目前，診斷AD之唯一明確方法為在個體死亡後屍體解剖中鑑別腦組織中之斑塊及纏結。因此，在人仍然活著時，醫生僅能作出"可能"或"很可能"患有AD之診斷。使用目前之方法，醫師能在至多90%的時間使用數種用以診斷"很可能"AD之工具正確診斷AD。醫師詢問關於患者之一般健康、過去的醫學問題及患者進行每日活動之任何困難之歷史的問題。記憶、問題解決、注意力、計算及語言之行為測試提供有關認知退化之資訊，且醫學測試(諸如血液、尿或脊髓液之測試)及腦部掃描可提供一些其他資訊。
AD管理由基於藥物之治療與非基於藥物之治療組成。迄今為止，致力於改變疾病之根本過程(延遲或逆轉進程)之治療大部分都是不成功的。恢復神經細胞之化學訊息(神經傳遞素)不足(缺乏)或功能 障礙之藥物，尤其膽鹼酯酶抑制劑(ChEI)(諸如他克林(tacrine)及雷斯替明(rivastigmine))已顯示可改良症狀。ChEI阻止神經傳遞素之酶促降解，藉此增加腦中可用以傳遞神經信號之化學訊息之量。
對處於疾病早期及中期之一些人而言，藥物他克林(COGNEX®,Morris Plains,NJ)、多奈哌齊(donepezil)(ARICEPT®,Tokyo,JP)、雷斯替明(EXELON®,East Hanover,NJ)或加蘭他敏(galantamine)(REMINYL®,New Brunswick,NJ)可幫助預防在限制時間內某些症狀之加重。另一種藥物美金剛胺(memantine)(NAMENDA®,New York,NY)已獲批准用於治療中度至重度AD。藥物治療亦可用以解決AD之精神病學表現。某些藥物亦可幫助控制AD之行為症狀，諸如失眠、興奮、精神恍惚、焦慮及抑鬱。治療此等症狀常使患者更為舒適且使其更易於由護理者來護理。不幸的是儘管顯著的治療優勢表明此類藥劑可靠地優於安慰劑，但疾病仍繼續發展，且對精神功能之平均影響僅為有限的。用於AD藥物治療中之許多藥物(諸如ChEI)亦具有副作用，包括腸胃功能障礙、肝毒性及體重減輕。
其他基於類澱粉樣蛋白之累積及沈積或與其相關之疾病為輕度認知障礙、路易體性癡呆(LBD)、肌萎縮性側索硬化(ALS)、包涵體肌炎(IBM)及黃斑退化，尤其與年齡相關之黃斑退化(AMD)。
輕度認知障礙(MCI)係最常定義為輕微但可量測之記憶障礙的通用術語。雖然患有MCI之人經歷與伴隨年老通常所預期相比較為嚴重之記憶問題，但其不顯示癡呆之其他症狀，諸如判斷或推理障礙。MCI係通常反映AD臨床前階段之病狀。
據信內嗅皮質(EC)內之β-類澱粉蛋白沈積在老年人之輕度認知障礙(MCI)之發展中起關鍵作用。此與在AD之臨床症狀明顯後觀察到CSF-A Aβ(1-42)含量顯著下降相一致。與CSF-Aβ(1-42)相反，CSF-τ含量在MCI階段顯著增加，且此後此等值繼續升高，從而表明CSF-τ含 量增加可幫助偵測預測發展成AD之MCI受檢者。
路易體性癡呆(LBD)為一種可出現在65歲以上人群中的神經退化性病症，其通常引起認知(思考)障礙及異常行為變化之症狀。症狀可包括認知障礙、神經徵象、睡眠障礙及自主神經衰竭。認知障礙係LBD在大部分病例中呈現之特徵。患者之精神混亂反覆發作並逐漸加重。認知能力之波動常與注意力及警惕性之轉移程度相關。認知障礙及思考波動可在幾分鐘、幾小時或幾天內變化。
路易體自磷酸化及非磷酸化神經絲蛋白形成；它們含有突觸蛋白α-突觸核蛋白(synuclein)以及泛素(其與經損傷或異常蛋白質之消除有關)。除路易體外，亦可存在路易神經突，其係神經細胞之細胞突中的包涵體。類澱粉蛋白斑可形成於罹患DLB之患者的腦中，然而其在數量上往往比在患有阿茲海默氏病之患者中所見到之量少。AD之另一顯微病理學特點係神經原纖維纏結，其並非DLB之主要特徵，但除類澱粉蛋白斑外其亦通常存在。
肌萎縮性側索硬化(ALS)以上位運動神經元及下運動神經元之退化為特徵。在一些ALS患者中，可能存在癡呆或失語症(ALS-D)。癡呆中最常的為額顳葉型癡呆(FTD)，且此等病例中之許多在齒狀回及額葉及顳葉之淺層的神經元中具有泛素陽性、τ陰性包涵物。
包涵體肌炎(IBM)係一種常見於50歲以上人群中的癱瘓疾病，其中肌肉纖維發炎且開始萎縮，但其中腦未受傷且患者保持完全智力。在患有此老人中最常見之進行性肌肉疾病的患者之肌肉細胞內部，發現與類澱粉-β蛋白產生相關之兩種酵素增加，其中類澱粉蛋白-β亦增加。
另一種基於類澱粉樣蛋白之累積及沈積或與其相關之疾病為黃斑退化。
黃斑退化係一種引起視網膜(眼睛後部之薄紙樣組織，該處之感 光細胞將視覺信號傳遞至腦)中心區之黃斑退化的常見眼病。經黃斑處理產生清楚、明晰、"直線向前"之視覺。黃斑損傷導致盲點形成及視物模糊或變形。與年齡相關之黃斑退化(AMD)係美國及65歲以上人群之視覺障礙的主要原因，其為白種人中法定失明之主導原因。約180萬40歲及年齡更大的美國人患有晚期AMD，且另外730萬患有中度AMD的人處於視力損失之實質危險中。政府估計到2020年將有290萬人患有晚期AMD。AMD之受害者常驚奇且沮喪地發現對於此失明病狀之起因及治療的瞭解非常少。
存在兩種形式之黃斑退化：乾性黃斑退化及濕性黃斑退化。85%的黃斑退化病例診斷為乾性形式，其中黃斑細胞緩慢開始損壞。雖然一隻眼睛可能失去視力而另一隻眼睛保持不受影響，但通常雙眼均受到乾性AMD影響。玻璃膜疣係視網膜下之黃色沈積物，其為乾性AMD之常見早期徵象。隨著玻璃膜疣之數量或尺寸增加，發展成晚期乾性AMD或濕性AMD之危險增加。乾性AMD可能在不轉變成疾病之濕性形式的情況下發展且引起視力損失；然而，早期乾性AMD亦可能突然變成濕性形式。
雖然濕性形式僅占病例之15%，但其導致90%之失明且被認為係晚期AMD(無早期或中期濕性AMD)。濕性AMD之前總是出現疾病之乾性形式。隨著乾性形式加重，一些人開始具有在黃斑之後生長之異常血管。此等血管極脆且漏出流體及血液(因此為'濕性'黃斑退化)，從而對黃斑造成迅速損傷。
乾性形式之AMD最初常引起輕度視物模糊。接著視物中心可尤其變得模糊且隨著疾病發展此區域變大。若僅一隻眼睛受影響，則可能無法察覺症狀。在濕性AMD中，直線可呈現波狀且可迅速出現中心視力損失。
黃斑退化之診斷通常涉及擴張眼科檢驗、視敏度測試及使用用 以幫助診斷AMD稱為眼底鏡檢查之方法觀察眼睛後部，且若疑為濕性AMD則亦可進行螢光素血管造影術。若干性AMD達到晚期，目前尚無預防視力損失之治療。然而，特定高劑量的抗氧化劑及鋅之配方可延遲或預防中期AMD發展至晚期。Macugen®(哌加他尼鈉(pegaptanib sodium)注射劑)、雷射光凝法及光力學治療可控制黃斑中之異常血管生長及出血，此有助於患有濕性AMD之某些人；然而，此等技術不能恢復已損失之視力。若視力已損失，則可使用已存在之可幫助改良生活品質之低視力輔助設備。
與年齡相關之黃斑退化(AMD)之最早徵象之一為細胞外沈積物(稱為玻璃膜疣)在視網膜色素上皮(RPE)之基膜與布魯赫氏膜(Bruch's membrane)(BM)之間的累積。近來由Anderson等人進行之研究已證實玻璃膜疣含有β類澱粉蛋白。(Experimental Eye Research 78(2004)243-256)。
正在進行中之研究繼續研究探索可能促進AMD之環境、遺傳及飲食因素。亦正在探索新的治療策略，包括視網膜細胞移植物、預防或減緩疾病發展之藥物、放射治療、基因治療、植入視網膜中可幫助刺激視覺之電腦晶片及預防黃斑下新血管生長之藥劑。
研發新藥時所考慮的重要因素係目標患者使用之容易程度。口服藥物傳遞(特別是錠劑、膠囊及軟膠囊)因為患者便利性而占所有使用劑型之70%。藥物研發者認同患者青睞口服傳遞勝於接受注射或其他更具創傷性之藥物投與形式。導致較短給藥時間間隔(亦即每天一次或持續釋放)之調配物亦較佳。投與口服劑型之抗生素的容易性導致治療期間患者順應性之增加。
需要有效之方法及組合物用以產生高特異性及高效抗體，若欲以口服劑型提供抗體則抗體產生為先決條件。該等抗體較佳識別多種抗原(諸如類澱粉蛋白)上之特異性抗原決定基。
因此，亦需要有效之組合物及方法用以解決與由類澱粉蛋白或類澱粉樣蛋白引起或與其相關之疾病及病症相關的併發症，該等疾病及病症包括澱粉樣變性病，其係一群與類澱粉蛋白斑形成相關之包括繼發性澱粉樣變性病及與年齡相關之澱粉樣變性病的疾病及病症，包括(但不限於)神經障礙症，諸如阿茲海默氏病(AD)，包括以認知記憶能力損失為特徵之疾病或病狀，諸如輕度認知障礙(MCI)、路易體性癡呆、唐氏症候群、遺傳性腦出血併發澱粉樣變性病(荷蘭型)、關島帕金森-癡呆綜合症；以及其他基於類澱粉樣蛋白或與其相關之疾病，諸如進行性核上麻痹、多發性硬化症、庫賈氏病、帕金森氏病、HIV相關之癡呆、ALS(肌萎縮性側索硬化)、包涵體肌炎(IBM)、成年發病型糖尿病、老年心臟澱粉樣變性病、內分泌腫瘤及其他疾病(包括黃斑退化)。詳言之，需要能夠消除疾病之生理表現(諸如與類澱粉肽或類澱粉樣肽之纖維聚集相關之斑塊形成)的特異性及高效抗體。
對於人類阿茲海默氏病，藉由接種與弗氏(Freund)完全或不完全佐劑混合之Aβ1-42所引出的抗類澱粉蛋白抗體已證明能夠減少轉殖基因小鼠中之類澱粉蛋白負荷(Schenk等人，1999)。
將在脂質體中重構之四棕櫚醯化Aβ1-16腹膜內接種至NORBA轉殖基因小鼠引出抗類澱粉蛋白抗體之顯著力價，該等抗類澱粉蛋白抗體亦證明能夠在活體外及活體內溶解類澱粉蛋白纖維及斑塊(Nicolau等人，2002)。
已存在之類澱粉蛋白斑及纖維溶解之可能機制首先由Bard等人(2000)提出，他們基於資料得出結論抗體調理斑塊使其隨後由微神經膠質細胞之巨噬細胞破壞。De Mattos等人(2001)指出針對β-類澱粉蛋白中心結構域之MAb能夠結合且完全螫合血漿類澱粉蛋白。他們提出循環中此等mAb之存在移動Aβ在腦與血漿之間的平衡，從而有助於周邊清除及分解代謝使其不在腦中沈積。
本發明提供包含高特異性及高效抗體之新穎方法及組合物，該等抗體具有特異性識別且結合一系列β-類澱粉蛋白抗原之特異性抗原決定基的能力。由本發明之教示提供之抗體尤其適用於治療由類澱粉蛋白或類澱粉樣蛋白引起或與其相關之疾病及病症，該等疾病及病症包括澱粉樣變性病，其係一群與類澱粉蛋白斑形成相關之包括繼發性澱粉樣變性病及與年齡相關之澱粉樣變性病的疾病及病症，(舉例而言)包括(但不限於)神經障礙症，諸如阿茲海默氏病(AD)，包括以認知記憶能力損失為特徵之疾病或病狀，諸如輕度認知障礙(MCI)、路易體性癡呆、唐氏症候群、遺傳性腦出血併發澱粉樣變性病(荷蘭型)、關島帕金森-癡呆綜合症；以及其他基於類澱粉樣蛋白或與其相關之疾病，諸如進行性核上麻痹、多發性硬化症、庫賈氏病、遺傳性腦出血併發澱粉樣變性病荷蘭型、帕金森氏病、HIV相關之癡呆、ALS(肌萎縮性側索硬化)、包涵體肌炎(IBM)、成年發病型糖尿病、老年心臟澱粉樣變性病、內分泌腫瘤及其他疾病(包括黃斑退化)。
此外，本發明提供保持或增加顯示出與類澱粉蛋白相關之疾病或病狀之哺乳動物之認知記憶能力的新穎方法及組合物，該等方法包含向需該治療之動物，尤其哺乳動物，更尤其人類投與治療有效量之本發明之單株抗體。
圖1：自Aβ序列1-15、1-16及1-16(A14)、22-35及29-40衍生之肽；圖2：西方墨點法及點漬墨點法中mACI-01-Ab7 C2單株抗體(圖2a)及陽性對照6E10抗體(圖2b)與類澱粉蛋白物質之結合；圖3a及3b：透射電子顯微法中mACI-01-Ab7 C2單株抗體與類澱粉蛋白纖維之結合(圖3a中橫桿表100nm；圖3b中橫桿表67nm)； 圖4：U-13C Tyr10及Val12標記之β-類澱粉蛋白1-42肽之Th-T螢光檢定與固態NMR之間的並進實驗之結果。
本發明利用產生較佳抗原構形之增強暴露及穩定化以最終產生具有獨特性質之抗體的抗原遞呈作用。
在本發明之一實施例中，提供一種抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)，或更特定言之為單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)，該抗體係對抗包含對應於β-類澱粉肽，尤其是β-類澱粉肽Aβ1-15、Aβ1-16及Aβ1-16(△14)之胺基酸序列之抗原肽的超分子抗原構築體而產生，該抗原肽經疏水性部分(諸如棕櫚酸)或親水性部分(諸如聚乙二醇(PEG))或兩者之組合修飾，其中該疏水性部分及親水性部分分別經由至少一個，尤其一或兩個胺基酸(諸如離胺酸、麩胺酸及半胱胺酸或能夠充當用於使疏水性部分及親水性部分與肽片段偶合之連接裝置的任何其他適合胺基酸或胺基酸類似物)共價結合至抗原肽之各末端。當使用PEG作為親水性部分時，自由PEG末端共價結合至磷脂醯乙醇胺或適於充當固定元件之任何其他化合物以便(例如)將抗原構築體嵌入脂質體之雙層中。
在本發明之另一實施例中，提供一種抗體，尤其是單株抗體，包括任何功能等效抗體或其功能部分，該抗體識別類澱粉蛋白之天然構形，因為其特異性結合類澱粉蛋白寡聚物及纖維，但不結合非直鏈化類澱粉蛋白物質。
在本發明之另一實施例中，提供一種根據本發明及如先前本文所述之抗體，尤其是單株抗體，包括任何功能等效抗體或其功能部分，該抗體或片段以至少約1×10-6至至少約1×10-8，尤其至少約1×10-6至至少約1×10-7，更尤其至少約1×10-7至至少約1×10-8，甚至更尤其至少約1×10-7至至少約4×10-7之結合親和力結合Aβ單體，但較佳不顯示 與類澱粉前驅體蛋白(APP)之任何顯著交叉反應性。
在本發明之另一實施例中，提供一種根據本發明及如先前本文所述之抗體，尤其是單株抗體，包括任何功能等效抗體或其功能部分，該抗體或片段以至少約1×10-7至至少約1×10-9，尤其至少約1×10-7至至少約1×10-8，更尤其至少約1×10-8至至少約1×10-9，甚至更尤其至少約1×10-8至至少約5×10-8之結合親和力結合Aβ纖維、原纖維或長絲，但較佳不顯示與類澱粉前驅體蛋白(APP)之任何顯著交叉反應性。
在另一實施例中，根據本發明及如先前本文所述之抗體，尤其是單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)顯示出比與Aβ單體之結合親和力高至少5倍，尤其至少10倍，更尤其至少15倍的與Aβ纖維、原纖維或長絲之結合親和力。
本發明之抗體能夠在活體外及活體內抑制類澱粉蛋白生成單體肽，特別是β-類澱粉單體肽(諸如Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42單體肽)聚集成高分子聚合類澱粉蛋白原纖維或長絲。
在本發明之一特定實施例中，提供一種抗體，尤其是單株抗體，包括任何功能等效抗體或其功能部分，該抗體在與類澱粉單體肽，尤其是β-類澱粉單體肽(諸如Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42單體肽)共培育後抑制Aβ單體聚集成高分子聚合原纖維。
在本發明之另一實施例中，提供一種抗體，尤其是單株抗體，包括任何功能等效抗體或其功能部分，該抗體在與類澱粉單體肽，尤其是β-類澱粉單體肽(諸如Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42單體肽)共培育後，尤其以高達1：100之莫耳濃度比率，更尤其以1：30與1：100之間的莫耳濃度比率，但尤其以1：100之莫 耳濃度比率共培育後抑制Aβ單體聚集成高分子聚合原纖維。詳言之，該抑制作用達到與在緩衝液中培育之各別類澱粉肽單體(對照)相比之至少50%，尤其至少65%，更尤其至少75%，甚至更尤其至少80%，但尤其為至少85%-95%或更多。
詳言之，本發明之抗體與類澱粉單體肽的共培育係在28℃與40℃之間，尤其32℃與38℃之間，更尤其在37℃之溫度下進行24小時至60小時，尤其30小時至50小時，更尤其48小時。
在另一實施例中，本發明提供一種抗體，尤其是單株抗體，包括任何功能等效抗體或其功能部分，該抗體在與類澱粉單體肽，尤其是β-類澱粉單體肽(諸如Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42單體肽)以1：100之莫耳濃度比率在37℃下共培育48小時後能夠抑制類澱粉蛋白單體聚集，尤其是抑制β-類澱粉單體肽(諸如Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42單體肽)聚集成高分子聚合原纖維或長絲，與在緩衝液中培育之各別類澱粉肽單體(對照)相比抑制至少85%，尤其至少89%且更尤其至少95%。
在一特定實施例中，本發明提供一種抗體，尤其是單株抗體，包括任何功能等效抗體或其功能部分，該抗體對Aβ1-42單體肽顯示高特異性但對Aβ1-38、Aβ1-39、Aβ1-40及/或Aβ1-41單體肽顯示基本上無或僅較小的交叉反應性，尤其提供一種抗體，但尤其是單株抗體，包括任何功能等效抗體或其功能部分，該抗體對類澱粉肽Aβ1-42之敏感性與對Aβ1-38、Aβ1-39、Aβ1-40、Aβ1-41之敏感性相比為高達100倍，尤其50至100倍，更尤其80至100倍，但尤其為100倍，且對類澱粉肽Aβ1-42之敏感性與對Aβ1-38之敏感性相比為高達1000倍，尤其500至1000倍，更尤其800至1000倍，但尤其為1000倍，且因此能夠在活體外及活體內抑制類澱粉蛋白生成單體肽，但尤其是類澱粉肽Aβ1-42的聚集。
在本發明之另一特定實施例中，提供一種抗體，尤其是單株抗 體，包括任何功能等效抗體或其功能部分，該抗體具有對類澱粉肽Aβ1-42之高結合敏感性，且能夠偵測到低至至少0.001μg之濃度，但尤其在0.5μg與0.001μg之間，更尤其在0.1μg與0.001μg之間的濃度範圍內，但尤其為0.001μg之濃度的Aβ1-42纖維。
在本發明之一非常特定之實施例中，提供一種抗體，尤其是單株抗體，包括任何功能等效抗體或其功能部分，該抗體能夠偵測到低至至少0.001μg纖維量之最小濃度之Aβ1-42纖維且及低至0.1μg纖維量之最小濃度之Aβ1-40纖維及低至1μg纖維量之最小濃度之Aβ1-38纖維。
根據本發明及如先前本文所述之抗體與類澱粉蛋白生成單體肽，但尤其是與類澱粉蛋白形式(1-42)之結合導致抑制單體類澱粉蛋白生成肽聚集成高分子原纖維或長絲。本發明之抗體經由抑制類澱粉蛋白生成單體肽之聚集能夠預防或減緩類澱粉蛋白斑，尤其是類澱粉蛋白形式(1-42)之形成，已知類澱粉蛋白形式(1-42)經二級構形改變而變得不可溶且為患病動物或人類腦中類澱粉蛋白斑之主要部分。
本發明之抗體之聚集抑制潛力可藉由此項技術中已知之任何適合方法，尤其藉由密度-梯度超速離心隨後在預定梯度上進行SDS-PAGE沈積分析及/或硫代黃磺素T(Th-T)螢光檢定來測定。
本發明進一步提供抗體，該等抗體在與經類澱粉單體肽，特別是β-類澱粉單體肽(諸如Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42單體肽)聚集形成之預形成高分子聚合類澱粉蛋白原纖維或長絲共培育後能夠分解該等高分子聚合類澱粉蛋白原纖維或長絲。
在本發明之另一實施例中，提供一種抗體，但尤其是單株抗體，包括任何功能等效抗體或其功能部分，該抗體在與經類澱粉單體肽，尤其是β-類澱粉單體肽(諸如Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤是其Aβ1-42單體肽)聚集形成之預形成高分子聚合類澱粉蛋白原纖維或長絲以高達1：100之莫耳濃度比率，更尤其以1：30與1：100 之間的莫耳濃度比率，但尤其以1：100之莫耳濃度比率共培育後能夠將預形成聚合原纖維或長絲分解至少35%，尤其至少40%，更尤其至少50%，甚至更尤其至少60%，但尤其為至少70%或更多。
詳言之，將本發明之抗體與類澱粉蛋白預形成之高分子聚合類澱粉蛋白原纖維或長絲在28℃與40℃之間，尤其32℃與38℃之間，更尤其在37℃之溫度下共培育12小時至36小時，尤其18小時至30小時，更尤其24小時。
在一特定實施例中，本發明提供一種抗體，尤其是單株抗體，包括任何功能等效抗體或其功能部分，該抗體在與經類澱粉單體肽，尤其是β-類澱粉單體肽(諸如Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42單體肽)聚集形成之預形成高分子聚合類澱粉蛋白原纖維或長絲以1：100之莫耳濃度比率於37℃下共培育24小時後，與用對照媒劑培育之各別預形成類澱粉蛋白聚合原纖維或長絲(單獨類澱粉蛋白)(對照)相比能夠將該等預形成高分子聚合類澱粉蛋白原纖維或長絲分解至少35%，尤其至少40%，更尤其至少50%，甚至更尤其至少60%，但尤其為至少為70%或更多。
本發明之抗體之分解潛力可藉由此項技術中已知之任何適合方法，尤其藉由密度-梯度超速離心隨後在預定梯度上使用SDS-PAGE沈積分析及/或硫代黃磺素T(Th-T)螢光檢定來測定。
本發明進一步提供構形敏感性抗體或其功能部分。
在本發明之另一實施例中，提供一種抗體，尤其是單株抗體，包括任何功能等效抗體或其功能部分，該抗體在與經類澱粉單體肽，尤其是β-類澱粉單體肽(諸如Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42單體肽)聚集形成之預形成高分子聚合類澱粉蛋白原纖維或長絲共培育後能夠誘導β片狀構形向α-螺旋及/或無規捲曲構形，但尤其是無規捲曲構形轉變，甚至更尤其為分子中既定位置處 (尤其在Aβ蛋白之Val12環境中)之無規捲曲構形轉變，此導致在減少β-片狀構形的情況下使無規捲曲構形增加及預形成高分子聚合類澱粉蛋白原纖維或長絲之溶解改良。詳言之，β片狀構形之減少達到與在緩衝液中培育之各別預形成類澱粉蛋白聚合原纖維或長絲(對照)相比之至少30%，尤其至少35%且更尤其為至少40%及更多。
詳言之，將本發明之抗體與類澱粉蛋白預形成之高分子聚合類澱粉蛋白原纖維或長絲在28℃與40℃之間，尤其32℃與38℃之間，更尤其在37℃之溫度下共培育12小時至36小時，尤其18小時至30小時，更尤其24小時。
詳言之，本發明提供一種抗體，尤其是單株抗體，包括任何功能等效抗體或其功能部分，該抗體在與經類澱粉單體肽，尤其是β-類澱粉單體肽(諸如Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42單體肽)聚集形成之預形成高分子聚合類澱粉蛋白原纖維或長絲以1：100之莫耳濃度比率於37℃下共培育24小時後，與在緩衝液中培育之各別預形成類澱粉蛋白聚合原纖維或長絲(對照)相比能夠誘導β片狀構形向α-螺旋及/或無規捲曲構形，但尤其是無規捲曲構形轉變，甚至更尤其為分子中既定位置處(尤其在Aβ蛋白之Val12環境中)之無規捲曲構形轉變，此導致在減少β-片狀構形的情況下使無規捲曲構形增加，其中β-片狀構形減少至少30%，尤其至少35%且更尤其為至少40%及更多。
抗體誘導構形轉變之潛力可藉由此項技術中已知之任何適合方法，尤其藉由固態13C NMR光譜法，但尤其藉由量測Aβ肽(尤其是Aβ肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42單體肽)中Val 12 Cβ構形之積分強度來測定。
本發明之抗體經由分解類澱粉蛋白生成聚合原纖維或長絲能夠預防或減緩類澱粉蛋白斑之形成，此導致減輕與疾病相關之症狀且延 遲或逆轉疾病之進程。
因此，本發明之另一實施例提供一種如先前本文所述之抗體，尤其是單株抗體，包括任何功能等效抗體或其功能部分，該抗體能夠減少罹患導致腦中Aβ濃度增加之疾病或病狀的動物，尤其是哺乳動物，但尤其是人類腦中的Aβ總量。
在本發明之另一實施例中，提供一種如先前本文所述之抗體，尤其是單株抗體，包括任何功能等效抗體或其功能部分，該抗體能夠分裂罹患導致腦中斑塊負荷增加之疾病或病狀的動物，尤其是哺乳動物，但尤其是人類腦中的斑塊，因此減少其腦中斑塊負荷。本發明之抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)減少腦中之斑塊負荷至少20%，尤其至少25%，更尤其至少30%，甚至更尤其在30%以上。
在本發明之另一實施例中，提供一種如先前本文所述之抗體，尤其是單株抗體，包括任何功能等效抗體或其功能部分，該抗體能夠溶解罹患導致腦中斑塊負荷增加之疾病或病狀的動物，尤其是哺乳動物，但尤其是人類腦中的斑塊，從而導致減少其腦中斑塊量。本發明之抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)減少腦中之斑塊量至少10%，尤其至少15%，更尤其為至少20%。
應瞭解本發明之抗體可顯示一種、兩種或兩種以上各種組合之如先前本文所述之特定性質。
舉例而言，在一實施例中，本發明提供抗體，尤其是單株抗體，包括任何功能等效抗體或其功能部分，該等抗體具有雙功能性，因為其同時顯示如先前本文所定義之聚集抑制性質及分解性質，尤其配以高度構形敏感性。
在本發明之另一實施例中，提供一種雙功能抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)，但尤其是雙功能單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)，該抗體在與類澱粉單體肽，尤其是β-類澱粉 單體肽(諸如Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42單體肽)共培育後抑制Aβ單體聚集成高分子聚合原纖維或長絲，且此外在與經類澱粉單體肽，尤其是β-類澱粉單體肽(諸如Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42單體肽)聚集形成之預形成高分子聚合類澱粉蛋白原纖維或長絲共培育後能夠分解預形成聚合原纖維或長絲。
在本發明之一特定實施例中，本發明之雙功能抗體，但尤其是本發明之雙功能單株抗體與類澱粉單體肽及預形成高分子聚合類澱粉蛋白原纖維或長絲之共培育分別係以高達1：100之莫耳濃度比率，尤其以1：30與1：100之間的比率且更尤其以1：100之比率進行。
詳言之，本發明之抗體與類澱粉單體肽之共培育在28℃與40℃之間，尤其32℃與38℃之間，更尤其37℃之溫度下進行24小時至60小時，尤其30小時至50小時，更尤其48小時，而其與類澱粉蛋白預形成之高分子聚合類澱粉蛋白原纖維或長絲之共培育在28℃與40℃之間，尤其32℃與38℃之間，更尤其37℃之溫度下進行12小時至36小時，尤其18小時至30小時，更尤其24小時。
在本發明之另一特定實施例中，本發明之雙功能抗體，尤其是本發明之雙功能單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)能夠將預形成聚合原纖維或長絲分解至少10%，尤其至少25%，更尤其至少35%，甚至更尤其至少50%，但尤其為至少60-70%或更多。
在本發明之另一特定實施例中，本發明之雙功能抗體，尤其是本發明之雙功能單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)與緩衝液中培育之各別類澱粉肽單體(對照)相比抑制類澱粉單體肽，尤其是β-類澱粉單體肽(諸如Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42單體肽)之聚集至少50%，尤其至少65%，更尤其至少75%，甚至更尤其至少80%，但尤其為至少85-90%或更多。
詳言之，本發明提供一種抗體，尤其是雙功能抗體，但尤其是單株抗體，尤其是雙功能單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)，該抗體經由特異性且直接結合至Aβ纖維而導致二級構形轉變來介導類澱粉單體肽，尤其是β-類澱粉單體肽(諸如Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42單體肽)聚合之抑制且/或誘導經類澱粉單體肽，尤其是β-類澱粉單體肽(諸如Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42單體肽)聚集形成之預形成高分子聚合類澱粉蛋白原纖維或長絲的溶解。
本發明進一步提供一種抗體，尤其是雙功能抗體，但尤其是單株抗體，尤其是雙功能單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)，該抗體藉由定靶且特異性結合至β-類澱粉蛋白之抗原決定區，尤其是由胺基酸殘基aan-aam(其中n為2與16之間，尤其5與16之間，更尤其8與16之間，甚至更尤其10與16之間的整數，且m為3與25之間，尤其3與23之間，尤其3與20之間，尤其3與17之間，尤其6與17之間，更尤其9與17之間，甚至更尤其11與17之間的整數，其中n及m不可為相同數，且n必須總小於m，n與m之差大於等於2)限定之Aβ多肽之抗原決定區內的抗原決定基來直接且特異性結合至β-類澱粉蛋白纖維(諸如包含Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43之纖維，但尤其是包含Aβ1-42單體肽之纖維)且/或誘導經類澱粉單體肽，尤其是β-類澱粉單體肽(諸如Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42單體肽)聚集形成之預形成高分子聚合類澱粉蛋白原纖維或長絲的溶解。
在本發明之一特定實施例中，n為13與15之間的整數，但尤其為14，且m為22與24之間的整數，但尤其為23。
本發明之抗體的結合可誘導該蛋白質中之構形轉變，尤其是β片狀構形向α-螺旋及/或無規捲曲構形，但尤其是無規捲曲構形之轉 變，甚至更尤其為分子中既定位置處(尤其在Aβ蛋白之Val12環境中)之無規捲曲構形轉變。
在另一實施例，本發明提供一種抗體，尤其是單株抗體，包括任何功能等效抗體或其功能部分，該抗體併入至少一種先前本文所提及且選自由以下性質組成之群之性質：聚集抑制、分解、誘導構形轉變、識別且直接結合抗原決定基(尤其是14-23，尤其14-20區域內之構形非連續抗原決定基)、預防或減緩類澱粉蛋白斑之形成、減少腦中可溶Aβ之總量、減少腦中斑塊負荷、減少腦中斑塊量、保持或增加認知記憶能力，但尤其為該等性質中兩種或兩種以上之組合。
在特定實施例中，本發明係關於一種抗體，尤其是單株抗體，包括任何功能等效抗體或其功能部分，該抗體併入至少2種，尤其至少3種，更尤其至少4種，甚至更尤其至少5種、6種、7種或8種，但尤其所有以上提及之性質。
在一特定實施例中，本發明提供一種抗體，尤其是雙功能抗體，但尤其是單株抗體，尤其是雙功能單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)，該抗體對Aβ1-42單體肽顯示高特異性但對Aβ1-38、Aβ1-39、Aβ1-40及/或Aβ1-41單體肽顯示基本上無或僅較小的交叉反應性，尤其提供一種抗體，但尤其是單株抗體，包括任何功能等效抗體或其功能部分，該抗體對類澱粉肽Aβ1-42之敏感性與對Aβ1-38、Aβ1-39、Aβ1-40、Aβ1-41之敏感性相比為高達100倍，尤其50至100倍，更尤其80至100倍，但尤其為100倍，且對類澱粉肽Aβ1-42之敏感性與對Aβ1-38之敏感性相比為高達1000倍，尤其500至1000倍，更尤其800至1000倍，但尤其為1000倍，且因此能夠在活體外及活體內抑制類澱粉蛋白生成單體肽，但尤其是類澱粉肽Aβ1-42的聚集。
在本發明之另一特定實施例中，提供一種抗體，尤其是雙功能抗體，但尤其是單株抗體，尤其是雙功能單株抗體(包括任何功能等 效抗體或其功能部分)，該抗體具有對類澱粉肽Aβ1-42之高結合親和力，且能夠偵測到低至至少0.001μg之濃度，但尤其在0.5μg與0.001μg之間，更尤其在0.1μg與0.001μg之間的濃度範圍內，但尤其為0.001μg之濃度的Aβ1-42纖維。
在本發明之一非常特定之實施例中，提供一種抗體，尤其是雙功能抗體，但尤其是單株抗體，尤其是雙功能單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)，該抗體能夠偵測到低至至少0.001μg纖維量之最小濃度之Aβ1-42纖維且及低至0.1μg纖維量之最小濃度之Aβ1-40纖維及低至1μg纖維量之最小濃度之Aβ1-38纖維。
在一特定態樣中，本發明係關於一種抗體或其片段，其識別且結合β-類澱粉蛋白上之至少一個獨特結合位置，尤其至少兩個獨特結合位置。
在一特定實施例中，本發明係關於一種抗體，包括任何功能等效抗體或其功能部分，該抗體識別且結合β-類澱粉蛋白上之至少一個獨特結合位置，尤其至少兩個獨特結合位置，其中該至少一個或該至少兩個獨特結合位置分別包含主要與抗體結合相關之至少一個胺基酸殘基及至少兩個連續胺基酸殘基，其中在本發明之一特定實施例中，構成第一獨特結合位置之至少一個殘基為插在如下核心序列內之Leu且構成第二獨特結合位置之至少兩個連續胺基酸殘基為插在如下核心序列內之-Phe-Phe-：-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Leu-Xaa4-Phe-Phe-Xaa5-Xaa6-Xaa7-
其中Xaa1係選自包含His、Asn、Gln、Lys及Arg之群的胺基酸殘基；Xaa2係選自包含Asn及Gln之群的胺基酸殘基；Xaa3係選自包含Lys、His、Asn、Gln及Arg之群的胺基酸殘基；Xaa4係選自包含Ala、Val、Leu、正白胺酸、Met、Phe及Ile之群 的胺基酸殘基；Xaa5係選自包含Ala、Val、Leu、Ser及Ile之群的胺基酸殘基；Xaa6係選自包含Glu及Asp之群的胺基酸殘基；Xaa7係選自包含Glu及Asp之群的胺基酸殘基。
詳言之，本發明提供一種抗體或其片段，其識別且結合β-類澱粉蛋白上之至少一個獨特結合位置，尤其至少兩個獨特結合位置，其中該至少一個或該至少兩個獨特結合位置分別包含主要與抗體結合相關之至少一個胺基酸殘基及至少兩個連續胺基酸殘基，其中在本發明之一特定實施例中，構成第一獨特結合位置之至少一個殘基為插在如下核心序列內之Leu且構成第二獨特結合位置之至少兩個連續胺基酸殘基為插在如下核心序列內之-Phe-Phe-：-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Leu-Xaa4-Phe-Phe-Xaa5-Xaa6-Xaa7-
其中Xaa1係選自包含His、Asn、Gln、Lys及Arg之群的胺基酸殘基；Xaa2係選自包含Asn及Gln之群的胺基酸殘基；Xaa3係選自包含Lys、His、Asn、Gln及Arg之群的胺基酸殘基；Xaa4係選自包含Ala、Val、Leu、正白胺酸、Met、Phe及Ile之群的胺基酸殘基；Xaa5係選自包含Ala、Val、Leu、Ser及Ile之群的胺基酸殘基；Xaa6係選自包含Glu及Asp之群的胺基酸殘基；Xaa7係選自包含Glu及Asp之群的胺基酸殘基。
在本發明之另一實施例中，提供一種抗體或其片段，其中Xaa1為His或Arg，但尤其為His；Xaa2為Gln或Asn，但尤其為Gln；Xaa3為Lys或Arg，但尤其為Lys；Xaa4為Val或Leu，但尤其為Val； Xaa5為Ala或Val，但尤其為Ala；Xaa6為Glu或Asp，但尤其為Glu；且Xaa7為Asp或Glu，但尤其為Asp。
在另一態樣中，本發明係關於一種抗體或其片段，其識別且結合β-類澱粉蛋白上之至少一個獨特結合位置，尤其至少兩個獨特結合位置，更尤其至少三個獨特結合位置，其中該一個或至少兩個或至少三個獨特結合位置各自包含主要與抗體結合相關之至少一個，尤其至少兩個連續胺基酸殘基。
詳言之，本發明之抗體或其片段結合β-類澱粉蛋白上之至少兩個獨特結合位置，其中該至少兩個獨特結合位置各自包含主要與抗體結合相關之至少兩個連續胺基酸殘基，其中該至少兩個獨特結合位置彼此緊鄰定位於抗原上，由至少一個與抗體結合無關或與該至少兩個連續胺基酸殘基相比相關程度顯著較小之胺基酸殘基間隔，因此形成構形非連續抗原決定基。
在本發明之另一實施例中，提供一種根據本發明之抗體或其片段，其識別且結合β-類澱粉蛋白上之至少一個獨特結合位置，尤其至少兩個獨特結合位置，更尤其至少三個獨特結合位置，其中該等獨特結合位置分別包含主要與抗體結合相關之至少一個及至少兩個連續胺基酸殘基，其中由至少一個與抗體結合無關或與主要與抗體結合相關之胺基酸殘基相比相關程度顯著較小之胺基酸殘基間隔的至少一個及至少兩個連續胺基酸分別為插在如下核心序列內之-His-及-Lys-Leu-：-His-Xaa2-Lys-Leu-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-其中
Xaa2係選自包含Asn及Gln之群的胺基酸殘基；Xaa3係選自包含Ala、Val、Leu、正白胺酸、Met、Phe及Ile之群的胺基酸殘基； Xaa4係選自包含Ala、Val、Leu、正白胺酸、Met、Phe及Ile之群的胺基酸殘基；Xaa5係選自包含Ala、Val、Leu、正白胺酸、Met、Phe及Ile之群的胺基酸殘基；Xaa6係選自包含Ala、Val、Leu、Ser及Ile之群的胺基酸殘基；Xaa7係選自包含Glu及Asp之群的胺基酸殘基；Xaa8係選自包含Glu及Asp之群的胺基酸殘基；且其中該等胺基酸殘基Xaa2、Xaa3、Xaa6、Xaa7、Xaa8與抗體結合無頭或與-His-及-Lys-Leu-結合位置相比相關程度顯著較小。
在另一實施例中，提供一種抗體或其片段，其識別且結合β-類澱粉蛋白上之至少一個獨特結合位置，尤其至少兩個獨特結合位置，更尤其至少三個獨特結合位置，其中該等獨特結合位置分別包含主要與抗體結合相關之至少一個及至少兩個連續胺基酸殘基，其中代表第一結合位置之至少兩個連續胺基酸殘基為插在如下核心序列內之-Phe-Phe-，且至少一個胺基酸殘基為插在如下核心序列內之-His-：-Xaa1-His-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Phe-Phe-Xaa7-Xaa8-Xaa9-， 其中Xaa1係選自包含His、Asn、Gln、Lys及Arg之群的胺基酸殘基；Xaa3係選自包含Asn及Gln之群的胺基酸殘基；Xaa4係選自包含Lys、His、Asn、Gln及Arg之群的胺基酸殘基；Xaa5係選自包含Ala、Val、Leu、Ser及Ile之群的胺基酸殘基；Xaa6係選自包含Ala、Val、Leu及Ile之群的胺基酸殘基；Xaa7係選自包含Ala、Val、Leu及Ile之群的胺基酸殘基；Xaa8係選自包含Glu及Asp之群的胺基酸殘基；Xaa9係選自包含Glu及Asp之群的胺基酸殘基，且其中該等胺基酸殘基Xaa1、Xaa3、Xaa6、Xaa7、Xaa8及Xaa9與抗體結合無關或與His 及-Phe-Phe-結合位置相比相關程度顯著較小。
在本發明之一特定實施例中，主要與抗體結合相關之至少兩個連續胺基酸殘基中之第一種包括插在如下核心序列內之-Lys-及-Leu-，且至少兩個連續胺基酸殘基中之第二種包括插在如下核心序列內之-Phe-Phe-：-Xaa1-Xaa2-Lys-Leu-Xaa4-Phe-Phe-Xaa5-Xaa6-Xaa7-
其中Xaa1係選自包含His、Asn、Gln、Lys及Arg之群的胺基酸殘基；Xaa2係選自包含Asn及Gln之群的胺基酸殘基；Xaa4係選自包含Ala、Val、Leu、正白胺酸、Met、Phe及Ile之群的胺基酸殘基；Xaa5係選自包含Ala、Val、Leu、Ser及Ile之群的胺基酸殘基；Xaa6係選自包含Glu及Asp之群的胺基酸殘基；Xaa7係選自包含Glu及Asp之群的胺基酸殘基，且其中該等胺基酸殘基Xaa2、Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6、Xaa7與抗體結合無關或與-Lys-Leu及-Phe-Phe-結合位置相比相關程度顯著較小。
在本發明之另一實施例中，提供一種抗體或其片段，其中Xaa1為His或Arg，但尤其為His；Xaa2為Gln或Asn，但尤其為Gln；Xaa4為Val或Leu，但尤其為Val；Xaa5為Ala或Val，但尤其為Ala；Xaa6為Glu或Asp，但尤其為Glu；且Xaa7為Asp或Glu，但尤其為Asp。
在本發明之另一實施例中，本發明之抗體或其片段結合β-類澱粉蛋白上之至少三個獨特結合位置，其中該至少三個獨特結合位置分別包含至少一個胺基酸殘基及至少兩個連續胺基酸殘基，該等殘基主要 與抗體結合相關，其中該至少三個獨特結合位置彼此緊鄰定位於抗原上，由至少一個與抗體結合無關或分別與該至少一個胺基酸殘基及該至少兩個連續胺基酸殘基相比相關程度顯著較小之胺基酸殘基間隔，因此形成構形非連續抗原決定基。
在本發明之一特定實施例中，主要與抗體結合相關之至少兩個連續胺基酸殘基中之第一種包括插在如下核心序列內之-Lys-Leu-，且至少兩個連續胺基酸殘基中之第二種包括插在如下核心序列內之-Phe-Phe-，且第三種至少一個胺基殘基包括插在如下核心序列內之-His-：-His-Xaa2-Lys-Leu-Xaa4-Phe-Phe-Xaa5-Xaa6-Xaa7-
其中Xaa2係選自包含Asn及Gln之群的胺基酸殘基；Xaa4係選自包含Ala、Val、Leu、正白胺酸、Met、Phe及Ile之群的胺基酸殘基；Xaa5係選自包含Ala、Val、Leu、Ser及Ile之群的胺基酸殘基；Xaa6係選自包含Glu及Asp之群的胺基酸殘基；Xaa7係選自包含Glu及Asp之群的胺基酸殘基，且其中該等胺基酸殘基Xaa2、Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6、Xaa7與抗體結合無關或與-His-、-Lys-Leu及-Phe-Phe-結合位置相比相關程度顯著較小。
在本發明之另一實施例中，提供一種抗體或其片段，其中Xaa2為Gln或Asn，但尤其為Gln；Xaa4為Val或Leu，但尤其為Val；Xaa5為Ala或Val，但尤其為Ala；Xaa6為Glu或Asp，但尤其為Glu；且Xaa7為Asp或Glu，但尤其為Asp。
在本發明之一特定實施例中，主要與抗體結合相關之至少兩個 連續胺基酸殘基中之第一種包括插在如下核心序列內之-Lys-Leu-，且至少兩個連續胺基酸殘基中之第二種包括插在如下核心序列內之-Phe-Phe-，且第三種至少一個胺基殘基包括插在如下核心序列內之-Asp-：-Xaa1-Xaa2-Lys-Leu-Xaa4-Phe-Phe-Xaa5-Xaa6-Asp-
其中Xaa1係選自包含His、Asn、Gln Lys及Arg之群的胺基酸殘基；Xaa2係選自包含Asn及Gln之群的胺基酸殘基；Xaa4係選自包含Ala、Val、Leu、正白胺酸、Met、Phe及Ile之群的胺基酸殘基；Xaa5係選自包含Ala、Val、Leu、Ser及Ile之群的胺基酸殘基；Xaa6係選自包含Glu及Asp之群的胺基酸殘基，且其中該等胺基酸殘基Xaa2、Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6、Xaa7與抗體結合無關或與-Asp-、-Lys-Leu及-Phe-Phe-結合位置相比相關程度顯著較小。
在本發明之另一實施例中，提供一種抗體或其片段，其中Xaa1為His或Arg，但尤其為His；Xaa2為Gln或Asn，但尤其為Gln；Xaa4為Val或Leu，但尤其為Val；Xaa5為Ala或Val，但尤其為Ala；且Xaa6為Glu或Asp，但尤其為Glu。
在本發明之另一特定實施例中，提供一種根據本發明之抗體或其片段，其結合β-類澱粉蛋白上之4個獨特結合位置，其中該4個獨特結合位置分別包含一個胺基酸殘基及兩個連續胺基酸殘基，該等殘基主要與抗體結合相關，其中該4個獨特結合位置彼此緊鄰定位於抗原上，由至少一個與抗體結合無關或與4個獨特結合位置之該一個胺基酸殘基及該兩個連續胺基酸殘基相比相關程度顯著較小之胺基酸殘基 間隔，因此形成構形非連續抗原決定基。
詳言之，主要與抗體結合相關之至少兩個連續胺基酸殘基中之第一種為插在如下核心序列內之-Lys-Leu-，且至少兩個連續胺基酸殘基中之第二種為插在如下核心序列內之-Phe-Phe-，且單一胺基殘基中之第一種為插在如下核心序列內之-His-，且單一胺基殘基中之第二種為插在如下核心序列內之-Asp-：-His-Xaa2-Lys-Leu-Xaa4-Phe-Phe-Xaa5-Xaa6-Asp-
其中Xaa2係選自包含Asn及Gln之群的胺基酸殘基；Xaa4係選自包含Ala、Val、Leu、正白胺酸、Met、Phe及Ile之群的胺基酸殘基；Xaa5係選自包含Ala、Val、Leu、Ser及Ile之群的胺基酸殘基；Xaa6係選自包含Glu及Asp之群的胺基酸殘基，且其中該等胺基酸殘基Xaa2、Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6、Xaa7與抗體結合無關或與-His-、-Asp-、-Lys-Leu及-Phe-Phe-結合位置相比相關程度顯著較小。
在本發明之一特定實施例中，如先前本文所定義之識別及結合位置形成定位於胺基酸殘基12與24之間，尤其殘基14與23之間，更尤其胺基酸殘基14與20之間的β-類澱粉蛋白區域中之構形非連續抗原決定基，其中分別包含1及2個胺基酸殘基之三個獨特識別及結合位置分別位於16、17位處及19及20位處及14位處，該等殘基主要與β-類澱粉蛋白之結合相關，且其中該三個獨特識別及結合位置由分別位於15及18位之一個胺基酸殘基間隔，該等胺基酸與抗原之結合無關或至少相關程度實質上較小。
在一特定實施例中，主要與β-類澱粉蛋白之結合相關的該等連續胺基酸殘基，尤其是16及17位之-Lys-Leu-及19及20位之-Phe-Phe-係插在如下核心區中：
在另一特定實施例中，主要與β-類澱粉蛋白之結合相關的該等連續胺基酸殘基，尤其是16位之-Lys-、17位之Leu-及19及20位之-Phe-Phe-及14位之-His-係插在如下核心區中：
在本發明之一特定實施例中，本發明之抗體係對抗不含有該獨特結合位置之抗原片段而產生。
如下文免疫方法中所述，此抗原決定區之轉移可能至少部分係由使用包含對應於β-類澱粉肽，尤其是β-類澱粉肽Aβ1-16之胺基酸序列之抗原肽的超分子抗原構築體而引起，該抗原肽經親水性部分(諸如聚乙二醇(PEG))修飾，其中該親水性部分經由至少一個，尤其一或兩個胺基酸(諸如離胺酸、麩胺酸及半胱胺酸或能夠充當用於使親水性部分與肽片段偶合之連接裝置的任何其他適合胺基酸或胺基酸類似物)共價結合至抗原肽之各末端。如本文所述，當使用PEG作為親水性部分時，自由PEG末端共價結合至磷脂醯乙醇胺或適於充當固定元件之任何其他化合物以便(例如)將抗原構築體嵌入脂質體之雙層中。
使用脂質A作為免疫方案之部分亦可促進抗原決定區之轉移。
在本發明之一特定實施例中，提供一種包含SEQ ID NO：7之輕鏈可變區(LCVR)的抗體。
在另一特定實施例中，本發明係關於SEQ ID NO：7之輕鏈可變區(LCVR)。
在本發明之另一特定實施例中，提供一種包含SEQ ID NO：8之重鏈可變區(HCVR)的抗體。
在另一特定實施例中，本發明係關於SEQ ID NO：8之重鏈可變區 (HCVR)。
在一實施例中，本發明係關於一種包含SEQ ID NO：8之重鏈可變區及SEQ ID NO：7之輕鏈可變區的抗體。
一種包含輕鏈可變區(LCVR)或重鏈可變區(HCVR)或兩者(輕鏈可變區(LCVR)及重鏈可變區(HCVR))之抗體亦為本發明之部分，該抗體分別與SEQ ID NO：7及8中提供之任何肽同源。
詳言之，本發明係關於一種根據本發明及如先前本文所述之抗體或其片段，其中輕鏈可變區(LCVR)具有的胺基酸序列與SEQ ID NO：7之序列具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%之同一性。
此外，本發明係關於一種根據本發明及如先前本文所述之抗體或其片段，其中重鏈可變區(HCVR)具有的胺基酸序列與SEQ ID NO：8之序列具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%之同一性。
此外，本發明係關於一種根據本發明及如先前本文所述之抗體或其片段，其中輕鏈可變區(LCVR)及重鏈可變區(HCVR)一起具有的胺基酸序列與SEQ ID NO：7及8之序列具有85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%之同一性。
在另一特定實施例中，本發明係關於輕鏈可變區，其具有的胺基酸序列與SEQ ID NO：7之序列具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%之同一性。
在另一特定實施例中，本發明係關於重鏈可變區，其具有的胺基酸序列與SEQ ID NO：8之序列具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%之同一性。
在本發明之另一實施例中，提供一種包含編碼如先前本文所述 之本發明之抗體之核苷酸序列的聚核苷酸。
詳言之，本發明係關於一種包含編碼本發明之抗體之核苷酸序列的聚核苷酸，該聚核苷酸包含：a)至少SEQ ID NO：9之輕鏈可變區之核苷酸序列；b)由於遺傳密碼之簡併而在密碼子序列上不同於(a)核苷酸序列之核苷酸序列；c)(a)及(b)之互補序列；或d)(a)、(b)或(c)核苷酸序列之片段，其包含選自由以下各物組成之群的鄰近核苷酸鏈段：至少20個鄰近核苷酸、至少25個鄰近核苷酸、至少30個鄰近核苷酸、至少35個鄰近核苷酸、至少40個鄰近核苷酸、至少45個鄰近核苷酸及至少50個鄰近核苷酸。
在另一實施例中，本發明係關於一種包含編碼本發明之抗體之核苷酸序列的聚核苷酸，該聚核苷酸包含：a)至少SEQ ID NO：10之輕鏈之核苷酸序列；b)由於遺傳密碼之簡併而在密碼子序列上不同於(a)核苷酸序列之核苷酸序列；c)(a)及(b)之互補序列；或d)(a)、(b)或(c)核苷酸序列之片段，其包含選自由以下各物組成之群的鄰近核苷酸鏈段：至少20個鄰近核苷酸、至少25個鄰近核苷酸、至少30個鄰近核苷酸、至少35個鄰近核苷酸、至少40個鄰近核苷酸、至少45個鄰近核苷酸及至少50個鄰近核苷酸。
在另一實施例中，本發明係關於一種包含編碼本發明之抗體之核苷酸序列的聚核苷酸，該聚核苷酸包含：a)至少SEQ ID NO：11之重鏈可變區之核苷酸序列；b)由於遺傳密碼之簡併而在密碼子序列上不同於(a)核苷酸序列之核苷酸序列； c)(a)及(b)之互補序列；或d)(a)、(b)或(c)核苷酸序列之片段，其包含選自由以下各物組成之群的鄰近核苷酸鏈段：至少20個鄰近核苷酸、至少25個鄰近核苷酸、至少30個鄰近核苷酸、至少35個鄰近核苷酸、至少40個鄰近核苷酸、至少45個鄰近核苷酸及至少50個鄰近核苷酸。
在另一實施例中，本發明係關於一種包含編碼本發明之抗體之核苷酸序列的聚核苷酸，該聚核苷酸包含：a)至少SEQ ID NO：12之重鏈之核苷酸序列或互補序列；b)由於遺傳密碼之簡併而在密碼子序列上不同於(a)核苷酸序列之核苷酸序列；c)(a)及(b)之互補序列；或d)(a)、(b)或(c)核苷酸序列之片段，其包含選自由以下各物組成之群的鄰近核苷酸鏈段：至少20個鄰近核苷酸、至少25個鄰近核苷酸、至少30個鄰近核苷酸、至少35個鄰近核苷酸、至少40個鄰近核苷酸、至少45個鄰近核苷酸及至少50個鄰近核苷酸。
本發明亦包含一種如下聚核苷酸，其包含：a)編碼輕鏈可變區之SEQ ID NO：9之核苷酸序列；b)由於遺傳密碼之簡併而在密碼子序列上不同於(a)核苷酸序列之核苷酸序列；c)(a)及(b)之互補序列；或d)(a)、(b)或(c)核苷酸序列之片段，其包含選自由以下各物組成之群的鄰近核苷酸鏈段：至少20個鄰近核苷酸、至少25個鄰近核苷酸、至少30個鄰近核苷酸、至少35個鄰近核苷酸、至少40個鄰近核苷酸、至少45個鄰近核苷酸及至少50個鄰近核苷酸。
本發明亦包含一種如下聚核苷酸，其包含：a)編碼輕鏈之SEQ ID NO：10之核苷酸序列； b)由於遺傳密碼之簡併而在密碼子序列上不同於(a)核苷酸序列之核苷酸序列；c)(a)及(b)之互補序列；或d)(a)、(b)或(c)核苷酸序列之片段，其包含選自由以下各物組成之群的鄰近核苷酸鏈段：至少20個鄰近核苷酸、至少25個鄰近核苷酸、至少30個鄰近核苷酸、至少35個鄰近核苷酸、至少40個鄰近核苷酸、至少45個鄰近核苷酸及至少50個鄰近核苷酸。
本發明亦包含一種如下聚核苷酸，其包含：a)編碼重鏈可變區之SEQ ID NO：11之核苷酸序列；b)由於遺傳密碼之簡併而在密碼子序列上不同於(a)核苷酸序列之核苷酸序列；c)(a)及(b)之互補序列；或d)(a)、(b)或(c)核苷酸序列之片段，其包含選自由以下各物組成之群的鄰近核苷酸鏈段：至少20個鄰近核苷酸、至少25個鄰近核苷酸、至少30個鄰近核苷酸、至少35個鄰近核苷酸、至少40個鄰近核苷酸、至少45個鄰近核苷酸及至少50個鄰近核苷酸。
本發明亦包含一種如下聚核苷酸，其包含：a)編碼重鏈之SEQ ID NO：12之核苷酸序列；b)由於遺傳密碼之簡併而在密碼子序列上不同於(a)核苷酸序列之核苷酸序列；c)(a)及(b)之互補序列；或d)(a)、(b)或(c)核苷酸序列之片段，其包含選自由以下各物組成之群的鄰近核苷酸鏈段：至少20個鄰近核苷酸、至少25個鄰近核苷酸、至少30個鄰近核苷酸、至少35個鄰近核苷酸、至少40個鄰近核苷酸、至少45個鄰近核苷酸及至少50個鄰近核苷酸。
在另一實施例中，本發明係關於與以下序列雜交之任一種核苷 酸序列：a)根據本發明且如SEQ ID NO：9、10、11及12中分別給出之核苷酸序列；b)由於遺傳密碼之簡併而在密碼子序列上不同於(a)核苷酸序列之核苷酸序列；c)(a)及(b)之互補序列；或d)(a)、(b)或(c)核苷酸序列之片段，其包含選自由以下各物組成之群的鄰近核苷酸鏈段：至少20個鄰近核苷酸、至少25個鄰近核苷酸、至少30個鄰近核苷酸、至少35個鄰近核苷酸、至少40個鄰近核苷酸、至少45個鄰近核苷酸及至少50個鄰近核苷酸。
詳言之，本發明係關於在習知雜交條件下，尤其在嚴格雜交條件下與根據本發明及如SEQ ID NO：9、10、11及12中分別給出之核苷酸序列，尤其是其互補股雜交之任一種核苷酸序列。
在另一實施例中，本發明係關於在習知雜交條件下(其中使用5xSSPE、1% SDS、1xDenhardts溶液作為溶液且/或雜交溫度在35℃與70℃之間，較佳為65℃)與根據本發明及如SEQ ID NO：9、10、11及12中分別給出之核苷酸序列，尤其是其互補股雜交之任一種核苷酸序列。雜交後，較佳在35℃與70℃之間，較佳65℃之溫度下首先用2xSSC、1%SDS且接著用0.2×SSC進行洗滌(關於SSPE、SSC及Denhardts溶液之定義，參見上述引文中Sambrook等人)。
詳言之，本發明係關於在如(例如)Sambrook等人(上文)中所述之嚴格雜交條件下，更尤其在如上文說明之嚴格雜交條件下(其中雜交及洗滌在65℃下進行)與根據本發明及如SEQ ID NO：9、10、11及12中分別給出之核苷酸序列，尤其是其互補股雜交之任一種核苷酸序列。
在一特定實施例中，本發明提供一種抗體，尤其是雙功能抗 體，但尤其是單株抗體，尤其是雙功能單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)，該抗體具有由選自由以下各物組成之群之融合瘤細胞株產生之抗體的特徵性質：分別在2005年12月1日及2005年12月9日分別寄存為DSM ACC2752、DSM ACC2750及DSM ACC2751之FP 12H3、FP 12H3-C2及FP 12H3-G2。
更詳言之，本發明係關於一種由融合瘤細胞株FP 12H3(分別在2005年12月1日及2005年12月9日寄存為DSM ACC2752)產生之抗體，包括任何功能等效抗體或其功能部分。
更詳言之，本發明係關於一種由融合瘤細胞株FP 12H3-C2(分別在2005年12月1日及2005年12月9日寄存為DSM ACC2750)產生之單株抗體，包括任何功能等效抗體或其功能部分。
更詳言之，本發明係關於一種由融合瘤細胞株FP 12H3-G2(分別在2005年12月1日及2005年12月9日寄存為DSM ACC2751)產生之單株抗體，包括任何功能等效抗體或其功能部分。
在另一特定實施例中，本發明提供一種抗體，尤其是雙功能抗體，但尤其是單株抗體，尤其是雙功能單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)，該抗體具有由融合瘤細胞株ET 7E3(2005年12月8日寄存為DSM ACC2755)產生之抗體的特徵性質。
更詳言之，本發明係關於一種由融合瘤細胞株ET 7E3(2005年12月8日寄存為DSM ACC2755)產生之單株抗體，包括任何功能等效抗體或其功能部分。
在另一特定實施例中，本發明提供一種抗體，尤其是雙功能抗體，但尤其是單株抗體，尤其是雙功能單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)，該抗體具有由融合瘤細胞株EJ 7H3(2005年12月8日寄存為DSM ACC2756)產生之抗體的特徵性質。
更詳言之，本發明係關於一種由融合瘤細胞株EJ 7H3(2005年12 月8日寄存為DSM ACC2756)產生之單株抗體，包括任何功能等效抗體或其功能部分。
本發明之另一目標係提供包含根據本發明及如先前本文所述之抗體之方法及組合物，其係用於(例如)藉由根據用本發明及如先前本文所述之抗體對人類或動物進行被動免疫來預防及/或治療及/或減輕由類澱粉蛋白或類澱粉樣蛋白引起或與其相關之疾病及病症之效應，該等疾病及病症包括澱粉樣變性病，其係一群與類澱粉蛋白斑形成相關之包括繼發性澱粉樣變性病及與年齡相關之澱粉樣變性病的疾病及病症，諸如以下疾病，包括(但不限於)神經障礙症，諸如阿茲海默氏病(AD)，包括以認知記憶能力損失為特徵之疾病或病狀，諸如輕度認知障礙(MCI)、路易體性癡呆、唐氏症候群、遺傳性腦出血併發澱粉樣變性病(荷蘭型)、關島帕金森-癡呆綜合症；以及其他基於類澱粉樣蛋白或與其相關之疾病及病狀，諸如進行性核上麻痹、多發性硬化症、庫賈氏病、帕金森氏病、HIV相關之癡呆、ALS(肌萎縮性側索硬化)、包涵體肌炎(IBM)、成年發病型糖尿病、老年心臟澱粉樣變性病、內分泌腫瘤及其他疾病(包括黃斑退化)。
本發明之另一目標係提供一種使用本發明之單株抗體及/或其功能部分及包含根據本發明及如先前本文所述之抗體之組合物來診斷及治療性干預由類澱粉蛋白或類澱粉樣蛋白引起或與其相關之疾病及病症之方法，該等疾病及病症包括澱粉樣變性病，其係一群與類澱粉蛋白斑形成相關之包括繼發性澱粉樣變性病及與年齡相關之澱粉樣變性病的疾病及病症，諸如以下疾病，包括(但不限於)神經障礙症，諸如阿茲海默氏病(AD)，包括以認知記憶能力損失為特徵之疾病或病狀，諸如輕度認知障礙(MCI)、路易體性癡呆、唐氏症候群、遺傳性腦出血併發澱粉樣變性病(荷蘭型)、關島帕金森-癡呆綜合症；以及其他基於類澱粉樣蛋白或與其相關之疾病，諸如進行性核上麻痹、多發性硬 化症、庫賈氏病、帕金森氏病、HIV相關之癡呆、ALS(肌萎縮性側索硬化)、包涵體肌炎(IBM)、成年發病型糖尿病、老年心臟澱粉樣變性病、內分泌腫瘤及其他疾病(包括黃斑退化)。
詳言之，本發明之一目標係提供一種使用本發明之單株抗體及/或其功能部分及包含根據本發明及如先前本文所述之抗體，尤其是雙特異性或雙有效性抗體，但尤其是雙特異性或雙有效性單株抗體之組合物來減少及預防神經障礙症(包括(但不限於)阿茲海默氏病)之出現的方法。
本發明之組合物包含尤其治療有效量之根據本發明及如先前本文所述之抗體，尤其是雙特異性或雙有效性抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)，或更尤其為尤其治療有效量之根據本發明及如先前本文所述之單株抗體，尤其是雙特異性或雙有效性單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)及可選擇之醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑。
詳言之，本發明之組合物包含一種抗體，尤其是單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)及可選擇之醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑，該抗體能夠抑制類澱粉單體肽，特別是β-類澱粉單體肽(諸如Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42單體肽)聚集成高分子聚合類澱粉蛋白原纖維或長絲。
在本發明之另一實施例中，提供一種組合物，其包含一種抗體，尤其是單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)，該抗體在與類澱粉單體肽，尤其是β-類澱粉單體肽(諸如Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42單體肽)共培育後，尤其以高達1：100之莫耳濃度比率，更尤其以1：30與1：100之間的莫耳濃度比率，但尤其以1：100之莫耳濃度比率共培育後抑制Aβ單體聚集成高分子聚合原纖維或長絲。詳言之，該抑制作用達到與在緩衝液中培育之 各別類澱粉肽單體(對照)相比之至少50%，尤其至少65%，更尤其至少75%，甚至更尤其至少80%，但尤其為至少85%-90%或更多，且該組合物視情況包含醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑。
詳言之，本發明之抗體與類澱粉單體肽之共培育係在37℃之溫度下進行48小時。
本發明之抗體之聚集抑制潛力可藉由密度-梯度超速離心隨後在預定梯度上進行SDS-PAGE沈積分析及/或硫代黃磺素T(Th-T)螢光檢定來測定。
本發明進一步提供一種包含抗體及可選擇之醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑之組合物，該抗體能夠分解經類澱粉單體肽，特別是β-類澱粉單體肽(諸如Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42單體肽)聚集形成之高分子聚合類澱粉蛋白原纖維或長絲。
本發明之抗體經由分解類澱粉蛋白生成聚合原纖維或長絲能夠預防或減緩類澱粉蛋白斑之形成，此導致減輕與疾病相關之症狀且延遲或逆轉疾病之進程。
在本發明之另一實施例中，提供一種組合物，其包含一種抗體，但尤其是單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)及可選擇之醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑，該抗體在與經類澱粉單體肽，尤其是β-類澱粉單體肽(諸如Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤是其Aβ1-42單體肽)聚集形成之預形成高分子聚合類澱粉蛋白原纖維或長絲以1：30與1：100之間的莫耳濃度比率，尤其以1：100之莫耳濃度比率共培育後，尤其在37℃之溫度下共培育24小時後能夠將預形成聚合原纖維或長絲分解至少35%，尤其至少40%，更尤其至少50%，甚至更尤其至少60%，但尤其為至少70%或更多。
本發明之抗體之分解潛力可藉由密度-梯度超速離心隨後在預定 梯度上進行SDS-PAGE沈積分析及/或硫代黃磺素T(Th-T)螢光檢定來測定。
本發明進一步提供一種包含尤其有效量，更尤其治療有效量之抗體或其功能部分之組合物，該抗體具有構形敏感性。
在本發明之另一實施例中，提供一種組合物，其包含一種抗體，但尤其是單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)及可選擇之醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑，該抗體在與經類澱粉單體肽，尤其是β-類澱粉單體肽(諸如Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42單體肽)聚集形成之預形成高分子聚合類澱粉蛋白原纖維或長絲共培育後，尤其在37℃下共培育24小時後，能夠誘導β片狀構形向α-螺旋及/或無規捲曲構形，但尤其是無規捲曲構形轉變，甚至更尤其為分子中既定位置處(尤其在Aβ蛋白之Val12環境中)之無規捲曲構形轉變，此導致在減少β-片狀構形的情況下使無規捲曲構形增加及預形成高分子聚合類澱粉蛋白原纖維或長絲之溶解改良。詳言之，β片狀構形之減少達到與在緩衝液中培育之各別預形成類澱粉蛋白聚合原纖維或長絲(對照)相比之至少30%，尤其至少35%且更尤其為至少40%及更多。
抗體誘導二級結構轉變之潛力藉由固態13C NMR光譜法，但尤其藉由量測Aβ1-42肽中Val 12 Cβ構形之積分強度來測定。
本發明進一步提供一種組合物，其包含尤其治療有效量之抗體，尤其是單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)及可選擇之醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑，該抗體具有雙功能性，因為其同時顯示如先前本文所定義之聚集抑制性質及分解性質，較佳配以高度構形敏感性。
在本發明之另一實施例中，提供一種組合物，其包含雙功能抗體，但尤其是雙功能單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分) 及可選擇之醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑，該抗體在與類澱粉單體肽，尤其是β-類澱粉單體肽(諸如Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42單體肽)共培育後抑制Aβ單體聚集成高分子聚合原纖維，且此外在與經類澱粉單體肽，尤其是β-類澱粉單體肽(諸如Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42單體肽)聚集形成之預形成高分子聚合類澱粉蛋白原纖維或長絲共培育後能夠分解預形成聚合原纖維或長絲。
在本發明之一特定實施例中，本發明之雙功能抗體，但尤其是本發明之雙功能單株抗體與類澱粉單體肽及預形成高分子聚合類澱粉蛋白原纖維或長絲之共培育分別係以高達1：100之莫耳濃度比率，尤其以1：30與1：100之間的比率且更尤其以1：100之比率進行。
在本發明之另一特定實施例中，與類澱粉單體肽及預形成高分子聚合類澱粉蛋白原纖維或長絲之共培育係在37℃之溫度下分別進行48小時及24小時。
在本發明之另一特定實施例中，提供一種組合物，其包含本發明之雙功能抗體，但尤其是本發明之雙功能單株抗體及可選擇之醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑，該抗體能夠將預形成聚合原纖維或長絲分解至少10%，尤其至少25%，更尤其至少35%，甚至更尤其至少50%，但尤其為至少60-70%或更多。
在本發明之另一特定實施例中，提供一種組合物，其包含本發明之雙功能抗體，但尤其是本發明之雙功能單株抗體及可選擇之醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑，與緩衝液中培育之各別類澱粉肽單體(對照)相比該抗體抑制類澱粉單體肽，尤其是β-類澱粉單體肽(諸如Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42單體肽)之聚集至少50%，尤其至少65%，更尤其至少75%，甚至更尤其至少80%，但尤其為至少85-90%或更多。
詳言之，本發明提供一種組合物，其包含一種抗體，尤其是單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)及可選擇之醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑，該抗體經由特異性且直接結合至Aβ纖維而導致二級構形轉變來介導類澱粉單體肽，尤其是β-類澱粉單體肽(諸如Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42單體肽)聚合之抑制且/或誘導經類澱粉單體肽，尤其是β-類澱粉單體肽(諸如Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42單體肽)聚集形成之預形成高分子聚合類澱粉蛋白原纖維或長絲的溶解。
本發明進一步提供一種組合物，其包含一種抗體，尤其是單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)及可選擇之醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑，該抗體藉由定靶且特異性結合至β-類澱粉蛋白之抗原決定區，尤其是由胺基酸殘基aan-aam(其中n為2與15之間，尤其5與15之間，更尤其8與15之間，甚至更尤其10與15之間的整數，且m為3與17之間，尤其6與17之間，更尤其9與17之間，甚至更尤其11與17之間的整數，其中n及m不可為相同數，且n必須總小於m，n與m之差大於等於2)限定之Aβ多肽之抗原決定區來直接且特異性結合至β-類澱粉蛋白纖維(諸如包含Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43之纖維，但尤其是包含Aβ1-42單體肽之纖維)且/或誘導經類澱粉單體肽，尤其是β-類澱粉單體肽(諸如Aβ單體肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42單體肽)聚集形成之預形成高分子聚合類澱粉蛋白原纖維或長絲的溶解。
本發明之抗體的結合可誘導該蛋白質中之構形轉變，尤其是β片狀構形向α-螺旋及/或無規捲曲構形，但尤其是無規捲曲構形之轉變，甚至更尤其為分子中既定位置處(尤其在Aβ蛋白之Val12環境中)之無規捲曲構形轉變。
在另一實施例中，本發明提供一種組合物，其包含一種抗體，尤其是單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)及可選擇之醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑，該抗體併入至少一種先前本文所提及之性質(亦即抑制聚集、分解、誘導構形轉變、識別且直接結合4-16及/或14至23，但尤其14至20抗原決定區)，但尤其為該等性質中之兩種或兩種以上之組合。
在一特定實施例中，本發明提供一種組合物，其包含一種抗體，尤其是雙功能抗體，但尤其是單株抗體，尤其是雙功能單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)及可選擇之醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑，該抗體對Aβ1-42單體肽顯示高特異性但對Aβ1-38、Aβ1-39、Aβ1-40及/或Aβ1-41單體肽顯示基本上無或僅較小的交叉反應性，尤其提供一種抗體，但尤其是單株抗體，包括任何功能等效抗體或其功能部分，該抗體對類澱粉肽Aβ1-42之敏感性與對Aβ1-38、Aβ1-39、Aβ1-40、Aβ1-41之敏感性相比為高達100倍，尤其50至100倍，更尤其80至100倍，但尤其為100倍，且對類澱粉肽Aβ1-42之敏感性與對Aβ1-38之敏感性相比為高達1000倍，尤其500至1000倍，更尤其800至1000倍，但尤其為1000倍，且因此能夠在活體外及活體內抑制類澱粉蛋白生成單體肽，但尤其是類澱粉肽Aβ1-42的聚集。
在本發明之另一特定實施例中，提供一種組合物，其包含一種抗體，尤其是雙功能抗體，但尤其是單株抗體，尤其是雙功能單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)及可選擇之醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑，該抗體具有對類澱粉肽Aβ1-42之高結合敏感性，且能夠偵測到低至至少0.001μg之濃度，但尤其在0.5μg與0.001μg之間，更尤其在0.1μg與0.001μg之間的濃度範圍內，但尤其為0.001μg之濃度的Aβ1-42纖維。
在本發明之一非常特定之實施例中，提供一種組合物，其包含 一種抗體，尤其是雙功能抗體，但尤其是單株抗體，尤其是雙功能單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)及可選擇之醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑，該抗體能夠偵測到低至至少0.001μg纖維量之最小濃度之Aβ1-42纖維且及低至0.1μg纖維量之最小濃度之Aβ1-40纖維及低至1μg纖維量之最小濃度之Aβ1-38纖維。
在一特定實施例中，本發明係關於一種組合物，其包含一種單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)及可選擇之醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑，該抗體具有由選自由以下各物組成之群之融合瘤細胞株產生之抗體的特徵性質：在2005年12月1日及2005年12月9日分別寄存為DSM ACC2752、DSM ACC2750及DSM ACC2751之FP 12H3、FP 12H3-C2及FP 12H3-G2。
更詳言之，本發明係關於一種組合物，其包含由融合瘤細胞株FP 12H3(分別在2005年12月1日及2005年12月9日寄存為DSM ACC2752)產生之單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)及可選擇之醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑。
更詳言之，本發明係關於一種組合物，其包含由融合瘤細胞株FP 12H3-C2(分別在2005年12月1日及2005年12月9日寄存為DSM ACC2750)產生之單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)及可選擇之醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑。
本發明進一步係關於一種組合物，其包含由融合瘤細胞株FP 12H3-G2(分別在2005年12月1日及2005年12月9日寄存為DSM ACC2751)產生之單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)及可選擇之醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑。
在另一特定實施例中，本發明係關於一種組合物，其包含一種單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)及可選擇之醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑，該抗體具有由融合瘤細胞株 ET 7E3(在2005年12月8日寄存為DSM ACC2755)產生之抗體的特徵性質。
本發明進一步係關於一種組合物，其包含由融合瘤細胞株ET 7E3(在2005年12月8日寄存為DSM ACC2755)產生之單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)及可選擇之醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑。
在另一特定實施例中，本發明係關於一種組合物，其包含一種單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)及可選擇之醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑，該抗體具有由融合瘤細胞株EJ 7H3(在2005年12月8日寄存為DSM ACC2756)產生之抗體的特徵性質。
本發明進一步係關於一種組合物，其包含由融合瘤細胞株EJ 7H3(在2005年12月8日寄存為DSM ACC2756)產生之單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)及可選擇之醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑。
可將本發明之抗體，尤其是單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)與用於治療疾病之其他生物活性物質及方法組合投與。其他生物活性物質可為混合物形式之已包含本發明之抗體之相同組合物之部分，其中將抗體及其他生物活性物質在相同醫藥學上可接受之溶劑及/或載劑中或與其混合；或可作為單獨組合物之部分單獨提供，該單獨組合物可單獨提供或與以多部分套組之形式一起提供。
本發明之抗體，尤其是單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)可與其他生物活性物質同時、間歇或相繼投藥。舉例而言，本發明之單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)可與第一額外生物活性物質同時或相繼(在投與抗體之後或之前)投藥。若選擇將一種以上額外生物活性物質與至少一種本發明之抗體一起投藥的施用 方案，則化合物或物質可以多種組合部分同時，部分相繼投藥。
本發明之另一目標係提供包含至少一種本發明之抗體及可選擇之一或多種其他生物活性物質的抗體混合物以及使用個別抗體或其混合物(包括包含該等抗體或抗體混合物之組合物)預防及/或治療及/或減輕由類澱粉蛋白或類澱粉樣蛋白引起或與其相關之疾病及病症之效應的方法，該等疾病及病症包括澱粉樣變性病，其係一群與類澱粉蛋白斑形成相關之包括繼發性澱粉樣變性病及與年齡相關之澱粉樣變性病的疾病及病症，諸如以下疾病，包括(但不限於)神經障礙症，諸如阿茲海默氏病(AD)，包括以認知記憶能力損失為特徵之疾病或病狀，諸如輕度認知障礙(MCI)、路易體性癡呆、唐氏症候群、遺傳性腦出血併發澱粉樣變性病(荷蘭型)、關島帕金森-癡呆綜合症；以及其他基於類澱粉樣蛋白或與其相關之疾病，諸如進行性核上麻痹、多發性硬化症、庫賈氏病、帕金森氏病、HIV相關之癡呆、ALS(肌萎縮性側索硬化)、包涵體肌炎(IBM)、成年發病型糖尿病、老年心臟澱粉樣變性病、內分泌腫瘤及其他疾病(包括黃斑退化)。
本發明之混合物除本發明之抗體外亦可包含生物活性物質，諸如已知用於藥物治療由類澱粉蛋白或類澱粉樣蛋白引起或與其相關之疾病及病症(包括澱粉樣變性病，一群與類澱粉蛋白或類澱粉樣蛋白(諸如與阿茲海默氏病相關之Aβ蛋白)相關之疾病及病症)的化合物。
在本發明之另一實施例中，其他生物活性物質或化合物亦可為可用於治療由類澱粉蛋白或類澱粉樣蛋白引起或與其相關之疾病及病症(包括藉由類澱粉蛋白β引起之澱粉樣變性病)的治療劑，或可用於藥物治療其他神經障礙症。
其他生物活性物質或化合物可藉由與本發明之抗體相同或類似之機制或藉由不相關之作用機制或藉由多種相關及/或不相關之作用機制發揮其生物效應。
一般而言，其他生物活性化合物可包括中子透射增強劑、精神病治療藥物、乙醯膽鹼酯酶抑制劑、鈣通道阻斷劑、生物胺、苯幷二氮呯鎮定劑、乙醯膽鹼合成、儲存或釋放增強劑、乙醯膽鹼突觸後受體促效劑、單胺氧化酶A或B抑制劑、N-甲基-D-天門冬胺酸麩胺酸受體拮抗劑、非類固醇消炎藥、抗氧化劑及血清素能受體拮抗劑。
詳言之，本發明之混合物可包含本發明之抗體以及至少一種選自由以下各物組成之群的其他生物活性化合物及可選擇之醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑：對抗氧化應力之化合物、抗細胞凋亡之化合物、金屬螯合劑、DNA修復抑制劑(諸如哌侖西平(pirenzepin)及代謝物)、3-胺基-1-丙烷磺酸(3APS)、1,3-丙烷二磺酸(1,3PDS)、分泌酶活化劑、β-及γ-分泌酶抑制劑、τ蛋白、神經傳遞素、β片狀破壞劑、消炎分子或膽鹼酯酶抑制劑(ChEI)(諸如他克林、雷斯替明、多奈哌齊及/或加蘭他敏)及其他藥物及營養補充劑。
在另一實施例中，本發明之混合物可包含煙鹼酸或美金剛胺以及本發明之抗體及可選擇之醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑。
在本發明之另一實施例中，提供包含用於治療陽性及陰性精神病症狀(包括幻覺、錯覺、思考障礙(表現為顯著的語無倫次、思維出軌、答非所問)及異常或紊亂行為以及快感缺乏、情感單調、情感冷漠及社交能力喪失)的"非典型精神抑制劑"(諸如氯氮平(clozapine)、齊拉西酮(ziprasidone)、利培酮(risperidone)、阿立哌唑(aripiprazole)或奧氮平(olanzapine))以及本發明之抗體及可選擇之醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑的混合物。
在本發明之一特定實施例中，根據本發明及如先前本文所述之組合物及混合物包含分別為治療有效量之抗體及生物活性物質。
適用於混合物中可與本發明之抗體組合之其他化合物(例如)描述 於WO 2004/058258(尤其參見第16及17頁)中，包括治療藥物目標(第36-39頁)、烷基磺酸及烷醇硫酸(第39-51頁)、膽鹼酯酶抑制劑(第51-56頁)、NMDA受體拮抗劑(第56-58頁)、雌激素(第58-59頁)、非類固醇消炎藥(第60-61頁)、抗氧化劑(第61-62頁)、過氧化物酶體增生物活化受體(PPAR)促效劑(第63-67頁)、膽固醇降低劑(第68-75頁)、類澱粉蛋白抑制劑(第75-77頁)、類澱粉蛋白形成抑制劑(第77-78頁)、金屬螯合劑(第78-79頁)、精神病抑制劑及抗抑鬱劑(第80-82頁)、營養補充劑(第83-89頁)及增加腦中生物活性物質可用性的化合物(參見第89-93頁)及前藥(第93及94頁)，該文獻以引用的方式併入本文中。
本發明進一步提供一種用於產生抗體之方法，尤其是用於產生本發明之單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)之方法，該方法包含對抗包含對應於β-類澱粉肽，尤其是β-類澱粉肽Aβ1-15、Aβ1-16及Aβ1-16(△14)之胺基酸序列之抗原肽的超分子抗原構築體產生抗體，但尤其是單株抗體，該抗原肽經疏水性部分(諸如棕櫚酸)或親水性部分(諸如聚乙二醇(PEG))或兩者之組合修飾，其中該疏水性部分及親水性部分分別經由至少一個，尤其一或兩個胺基酸(諸如離胺酸或能夠充當用於偶合該疏水性部分及親水性部分之偶合裝置或連接分子的任何其他適合胺基酸或胺基酸類似物(諸如麩胺酸或半胱胺酸))共價結合至各末端。
根據本發明及如先前本文所述之單株抗體及/或其功能部分及/或包含該抗體之醫藥組合物或混合物用於製備治療或減輕由類澱粉蛋白或類澱粉樣蛋白引起或與其相關之疾病及病症之效應的藥劑之用途亦為本發明之部分，該等疾病及病症包括澱粉樣變性病，其係一群與類澱粉蛋白斑形成相關之包括繼發性澱粉樣變性病及與年齡相關之澱粉樣變性病的疾病及病症，諸如以下疾病，包括(但不限於)神經障礙症，諸如阿茲海默氏病(AD)及以認知記憶能力損失為特徵之疾病或病 狀，諸如輕度認知障礙(MCI)、路易體性癡呆、唐氏症候群、遺傳性腦出血併發澱粉樣變性病(荷蘭型)、關島帕金森-癡呆綜合症；以及其他基於類澱粉樣蛋白或與其相關之疾病，諸如進行性核上麻痹、多發性硬化症、庫賈氏病、帕金森氏病、HIV相關之癡呆、ALS(肌萎縮性側索硬化)、包涵體肌炎(IBM)、成年發病型糖尿病、老年心臟澱粉樣變性病、內分泌腫瘤及其他疾病(包括黃斑退化)。
在本發明之另一實施例中，提供一種使用本發明之抗體及/或其功能部分，但尤其是單株抗體及/或其功能部分或功能等效抗體製備醫藥組合物之方法，該醫藥組合物係用於治療或減輕由類澱粉蛋白或類澱粉樣蛋白引起或與其相關之疾病及病症之效應，該等疾病及病症包括澱粉樣變性病，其係一群與類澱粉蛋白斑形成相關之包括繼發性澱粉樣變性病及與年齡相關之澱粉樣變性病的疾病及病症，諸如以下疾病，包括(但不限於)神經障礙症，諸如阿茲海默氏病(AD)及以認知記憶能力損失為特徵之疾病或病狀，諸如輕度認知障礙(MCI)、路易體性癡呆、唐氏症候群、遺傳性腦出血併發澱粉樣變性病(荷蘭型)、關島帕金森-癡呆綜合症；以及其他基於類澱粉樣蛋白或與其相關之疾病，諸如進行性核上麻痹、多發性硬化症、庫賈氏病、帕金森氏病、HIV相關之癡呆、ALS(肌萎縮性側索硬化)、成年發病型糖尿病、老年心臟澱粉樣變性病、內分泌腫瘤及其他疾病(包括黃斑退化)，該方法包含以醫藥學上可接受之形式調配本發明之抗體。
本發明之抗體及/或其功能部分，但尤其是單株抗體及/或其功能部分或功能等效抗體及包含該抗體之組合物及混合物可用於製備預防、治療或減輕由類澱粉蛋白或類澱粉樣蛋白引起或與其相關之疾病及病症之效應的藥劑，該等疾病及病症包括澱粉樣變性病，其係一群與類澱粉蛋白斑形成相關之包括繼發性澱粉樣變性病及與年齡相關之澱粉樣變性病的疾病及病症，包括(但不限於)神經障礙症，諸如阿茲 海默氏病(AD)，包括以認知記憶能力損失為特徵之疾病或病狀，諸如輕度認知障礙(MCI)、路易體性癡呆、唐氏症候群、遺傳性腦出血併發澱粉樣變性病(荷蘭型)、關島帕金森-癡呆綜合症；以及其他基於類澱粉樣蛋白或與其相關之疾病，諸如進行性核上麻痹、多發性硬化症、庫賈氏病、帕金森氏病、HIV相關之癡呆、ALS(肌萎縮性側索硬化)、包涵體肌炎(IBM)、成年發病型糖尿病、老年心臟澱粉樣變性病、內分泌腫瘤及其他疾病(包括黃斑退化)。
在本發明之另一實施例中，提供一種用於減少罹患導致腦中斑塊負荷增加之疾病或病狀的動物，尤其是哺乳動物，但尤其是人類腦中之斑塊負荷的方法，該方法包含將治療有效量之根據本發明及如先前本文所述之抗體及/或其功能部分，但尤其是單株抗體及/或其功能部分或功能等效抗體或包含該抗體之組合物或混合物投與需該治療之動物，尤其是哺乳動物，更尤其為人類。
詳言之，斑塊負荷減少至少20%，尤其至少25%，更尤其至少30%，甚至更尤其在30%以上。
在本發明之另一實施例中，提供一種用於減少罹患導致腦中斑塊負荷增加之疾病或病狀的動物，尤其是哺乳動物，但尤其是人類腦中之斑塊量的方法，該方法包含將治療有效量之根據本發明及如先前本文所述之抗體及/或其功能部分，但尤其是單株抗體及/或其功能部分或功能等效抗體或包含該抗體之組合物或混合物投與需該治療之動物，尤其是哺乳動物，更尤其為人類。
詳言之，腦中斑塊量減少至少10%，尤其至少15%，更尤其在15%以上。
在本發明之另一實施例中，提供一種用於減少罹患導致腦中可溶Aβ濃度增加之疾病或病狀的動物，尤其是哺乳動物，但尤其是人類腦中之可溶Aβ總量的方法，該方法包含將治療有效量之根據本發 明及如先前本文所述之抗體及/或其功能部分，但尤其是單株抗體及/或其功能部分或功能等效抗體或包含該抗體之組合物或混合物投與需該治療之動物，尤其是哺乳動物，更尤其為人類。
本發明之一目標係提供一種藉由將本發明之抗體，但尤其是單株抗體或包含該抗體之組合物或混合物投與患有如下病症之動物或人類來預防、治療或減輕由類澱粉蛋白或類澱粉樣蛋白引起或與其相關之疾病及病症之效應的方法，該等疾病及病症包括澱粉樣變性病，其係一群與類澱粉蛋白斑形成相關之包括繼發性澱粉樣變性病及與年齡相關之澱粉樣變性病的疾病及病症，包括(但不限於)神經障礙症，諸如阿茲海默氏病(AD)，包括以認知記憶能力損失為特徵之疾病或病狀，諸如輕度認知障礙(MCI)、路易體性癡呆、唐氏症候群、遺傳性腦出血併發澱粉樣變性病(荷蘭型)、關島帕金森-癡呆綜合症；以及其他基於類澱粉樣蛋白或與其相關之疾病，諸如進行性核上麻痹、多發性硬化症、庫賈氏病、帕金森氏病、HIV相關之癡呆、ALS(肌萎縮性側索硬化)、包涵體肌炎(IBM)、成年發病型糖尿病、老年心臟澱粉樣變性病、內分泌腫瘤及其他疾病(包括黃斑退化)，該方法包含將治療有效量之根據本發明及如先前本文所述之抗體及/或其功能部分，但尤其是單株抗體及/或其功能部分或功能等效抗體或包含該抗體之組合物或混合物投與需該治療之動物，尤其是哺乳動物，更尤其為人類。
在一特定實施例中，本發明提供一種用於保持或增加罹患記憶障礙之動物，尤其是哺乳動物或人類之認知記憶能力的方法，其係藉由將本發明之抗體，但尤其是單株抗體或根據本發明及如先前本文所述之包含該抗體之組合物或混合物投與需該治療之動物，尤其是哺乳動物或人類。
在本發明之另一實施例中，提供一種使用本發明之抗體及/或其 功能部分，但尤其是單株抗體及/或其功能部分或功能等效抗體製備醫藥組合物之方法，該醫藥組合物係用於預防、治療或減輕由類澱粉蛋白或類澱粉樣蛋白引起或與其相關之疾病及病症之效應，該等疾病及病症包括澱粉樣變性病，其係一群與類澱粉蛋白斑形成相關之包括繼發性澱粉樣變性病及與年齡相關之澱粉樣變性病的疾病及病症，諸如以下疾病，包括(但不限於)神經障礙症，諸如阿茲海默氏病(AD)，包括以認知記憶能力損失為特徵之疾病或病狀，諸如輕度認知障礙(MCI)、路易體性癡呆、唐氏症候群、遺傳性腦出血併發澱粉樣變性病(荷蘭型)、關島帕金森-癡呆綜合症；以及其他基於類澱粉樣蛋白或與其相關之疾病，諸如進行性核上麻痹、多發性硬化症、庫賈氏病、帕金森氏病、HIV相關之癡呆、ALS(肌萎縮性側索硬化)、包涵體肌炎(IBM)、成年發病型糖尿病、老年心臟澱粉樣變性病、內分泌腫瘤及其他疾病(包括黃斑退化)。
在一特定實施例中，本發明提供一種使用本發明之抗體及/或其功能部分，但尤其是單株抗體及/或其功能部分或功能等效抗體製備醫藥組合物之方法，以便藉由將根據本發明及如先前本文所述之抗體，但尤其是單株抗體或包含該抗體之組合物或混合物投與動物，尤其是哺乳動物或人類來保持或增加罹患記憶障礙之動物，尤其是哺乳動物或人類之認知記憶能力。
在仔細閱讀以下對所揭示之實施例之詳細描述及所附申請專利範圍後將清楚瞭解本發明之此等及其他目標、特徵及優點。
如本文所用之術語"多肽"、"肽"及"蛋白質"可互換，且定義為意謂由肽鍵連接之胺基酸組成的生物分子。
除非上下文不適宜，否則如本文所用之術語"一"及"該"定義為意謂"一或多個"且包括複數。
如本文所用之術語"偵測"意謂使用已知之技術(諸如免疫化學或 組織學方法)偵測生物分子且係指定性或定量測定研究中之生物分子的存在或濃度。
"類澱粉蛋白β、Aβ或β類澱粉蛋白"係此項技術中認可之術語且係指類澱粉β蛋白及肽、類澱粉β前驅蛋白(APP)及其修飾物、片段及任何功能等效物。詳言之，如本文所用之類澱粉蛋白β意謂由APP之蛋白水解分裂而產生之任何片段，但尤其是類澱粉蛋白病理所涉及或與其相關之彼等片段，包括(但不限於)Aβ1-38、Aβ1-39、Aβ1-40、Aβ1-41、Aβ1-42及Aβ1-43。
如上文所提及之類澱粉β肽之結構及序列為熟習此項技術者所熟知且產生該等肽或將其自腦及其他組織中提取出來之方法描述於(例如)Glenner及Wong,Biochem Biophys Res Comm129,885-890(1984)中。此外，類澱粉β肽亦可以各種形式購得。
"Aβ原纖維"或"Aβ長絲"或"類澱粉蛋白原纖維"係形成具有恆定纖維直徑之個別或成束纖維的單體蛋白之聚合形式，其不溶於水性介質且其核中含有大量交叉β結構，其中大部分具有垂直於原纖維軸之β股123。
"單體Aβ"或"Aβ單體"係在水性介質中完全溶解而無聚集錯合物之類澱粉β蛋白。
"聚合可溶類澱粉蛋白"及"寡聚Aβ"及"Aβ寡聚物"係指形成寡聚或聚合結構之類澱粉肽或類澱粉樣肽或經修飾或截短之類澱粉肽或其他類澱粉肽之衍生物的多重聚集單體，其在活體外溶於水性介質且在活體內溶於哺乳動物身體或人體(更尤其是腦)中，但尤其係指類澱粉β(Aβ)肽或經修飾或截短之類澱粉β(Aβ)肽或其衍生物之多重聚集單體，其分別可溶於哺乳動物身體或人體(更尤其是腦)中。
"分離"意謂自生物分子除去至少一些與其一起天然存在之組份。
如本文所用之術語"抗體"係此項技術中認可之術語且應瞭解其係 指結合已知抗原之分子或分子之活性片段，尤其係指免疫球蛋白分子及免疫球蛋白分子之免疫活性部分，亦即含有免疫特異性結合抗原之結合位置的分子。本發明之免疫球蛋白可為任一種類型(IgG、IgM、IgD、IgE、IgA及IgY)及類別(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)或亞類之免疫球蛋白分子。
本發明之範疇內之"抗體"意欲包括單株抗體、多株、嵌合、單鏈、雙特異性或雙有效性、模擬、人類及人化抗體及其活性片段。結合已知抗原之分子之活性片段的實例包括Fab及F(ab')2片段，包括Fab免疫球蛋白表現文庫之產物及任一種上文提及之抗體及片段的抗原決定基結合片段。
此等活性片段可藉由多種技術自本發明之抗體衍生而得。舉例而言，可將經純化之單株抗體用酵素(諸如胃蛋白酶)裂解且使其經歷HPLC凝膠過濾。接著可收集含有Fab片段之適當溶離份且藉由膜過濾及其類似技術進行濃縮。對於用於分離抗體之活性片段之通用技術之進一步描述，例如參見Khaw,B.A.等人J.Nucl.Med.23：1011-1019(1982)；Rousseaux等人Methods Enzymology,121：663-69,Academic Press,1986。
"人化抗體"係指一種經基因工程設計之抗體類型，其CDR係衍生自非人類供體免疫球蛋白之，分子之其餘免疫球蛋白衍生部分係衍生自一(或多種)人類免疫球蛋白。此外，可改變構架支撐殘基以保持結合親和力。獲得"人化抗體"之方法為熟習此項技術者所熟知。(例如參見Queen等人，Proc.Natl Acad Sci USA,86：10029-10032(1989),Hodgson等人，Bio/Technoloy,9：421(1991))。
"人化抗體"亦可藉由新穎的基因工程設計方法獲得，該方法使得能夠在大動物(諸如兔)體內產生親和力成熟之類人多株抗體(http：//www.rctech.com/bioventures/therapeutic.php)。
術語"單株抗體"亦在此項技術得到充分認可且係指在實驗室中自單一純系大量產生且僅識別一個抗原之抗體。單株抗體一般藉由將通常短暫存活的產生抗體之B細胞與快速生長細胞(諸如癌細胞)(有時稱為"永生"細胞)融合來製得。所得雜交細胞或融合瘤快速繁殖，從而產生可產生大量抗體之純系。
對於本發明而言，應瞭解"單株抗體"亦包含由尚未達到完全單株性之母純系產生之抗體。
應瞭解在本發明之範疇內"功能等效抗體"係指與上文所提及及本文所述之抗體實質上共同具有至少一種主要功能性質的抗體，該等性質包含：對β類澱粉蛋白(尤其是Aβ1-42蛋白且更尤其是Aβ1-42蛋白之4-16抗原決定區)的結合特異性、活體外免疫反應性、抑制Aβ1-42單體聚集成高分子聚合原纖維及/或分解預形成之Aβ1-42聚合原纖維及/或β片狀破壞性質，且在預防或治療性投藥時減輕由類澱粉蛋白或類澱粉樣蛋白引起或與其相關之疾病及病症之效應，該等疾病及病症包括澱粉樣變性病，其係一群與類澱粉蛋白斑形成相關之包括繼發性澱粉樣變性病及與年齡相關之澱粉樣變性病的疾病及病症，諸如以下疾病，包括(但不限於)神經障礙症，諸如阿茲海默氏病(AD)，包括以認知記憶能力損失為特徵之疾病或病狀，諸如輕度認知障礙(MCI)、路易體性癡呆、唐氏症候群、遺傳性腦出血併發澱粉樣變性病(荷蘭型)、關島帕金森-癡呆綜合症；以及其他基於類澱粉樣蛋白或與其相關之疾病，諸如進行性核上麻痹、多發性硬化症、庫賈氏病、帕金森氏病、HIV相關之癡呆、ALS(肌萎縮性側索硬化)、包涵體肌炎(IBM)、成年發病型糖尿病、老年心臟澱粉樣變性病、內分泌腫瘤及其他疾病(包括黃斑退化)。抗體可為任一類別(諸如IgG、IgM或IgA等)或任一亞類(諸如IgG1、IgG2a等及以上本文所提及或此項技術中已知之其他亞類)，但尤其為IgG2類。此外，抗體可藉由任何方法(諸如噬菌體呈現) 產生，或可在任何有機體或細胞株中產生，包括細菌、昆蟲、哺乳動物或產生具有所需特徵之抗體(諸如人化抗體)的其他類型之細胞或細胞株。抗體亦可藉由組合來自不同物種之Fab部分與Fc區來形成。
術語"雙特異性"或"雙功能"及"雙有效性"在本申請案之範疇內同義使用，用以表徵同時顯示出類澱粉或類澱粉樣纖維形成之抑制性質及類澱粉或類澱粉樣纖維之分解性質的抗體。
術語"抗原"係指可在有機體，尤其是動物，更尤其是哺乳動物(包括人類)體內誘導免疫反應的實體或其片段。該術語包括免疫原及負責抗原性或抗原定子之區域。
如本文所用之術語"可溶"意謂部分或完全溶解於水溶液中。
亦如本文所用之術語"免疫原性之"係指引發或增強針對免疫原性劑之抗體、T細胞及其他反應性免疫細胞之產生且促進人類或動物體內之免疫反應的物質。
當個體產生足夠的對抗所投與之本發明之免疫原性組合物的抗體、T細胞及其他反應性免疫細胞時發生免疫反應而緩解或減輕所治療之病症。
"聚合可溶類澱粉蛋"白係指形成寡聚或聚合結構之類澱粉肽或類澱粉樣肽或經修飾或截短之類澱粉肽或其他類澱粉肽之衍生物的多重聚集單體，其可溶於哺乳動物身體或人體(更尤其是腦)中，但尤其係指類澱粉β(Aβ)肽或經修飾或截短之類澱粉β(Aβ)肽或其衍生物之多重聚集單體，其可溶於哺乳動物身體或人體(更尤其是腦)中。
術語"融合瘤"在此項技術中得到認可且一般技術者應瞭解其係指藉由將產生抗體之細胞與永生細胞(例如多發性骨髓瘤細胞)融合而產生之細胞。此雜交細胞能夠產生抗體之連續供給。參見上文"單株抗體"之定義及下文更詳細描述融合方法之實例。
如本文所用之術語"載體"意謂抗原肽或超分子構築體可併入其中 或可與其結合，藉此將抗原肽或肽部分呈現或暴露於人類或動物之免疫系統的結構。在本發明之範圍中，可適用於動物或人類治療劑中之任何粒子(諸如微脂粒、粒子或微粒體)均可用作載體。
術語"載體"進一步包含傳遞之方法，其中可將包含抗原肽之超分子抗原構築體組合物藉由傳遞機制傳送至所需位置。該傳遞系統之一實例係利用膠態金屬(諸如膠體金)。
此外，術語"載體"進一步包含熟習此項技術者已知之傳遞機制，包括(但不限於)透孔螺血藍蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)及其他佐劑。
在本發明之超分子抗原構築體中，脂質體可具有雙重功能，因為其可用作如先前本文所述之包含超分子構築體之載體，且同時充當佐劑用以增加或刺激待用本發明之治療性疫苗治療之目標動物或人類體內的免疫反應。亦應瞭解本發明之超分子抗原構築體組合物可進一步包含額外佐劑，諸如脂質A、礬、磷酸鈣、介白素1及/或多醣與蛋白質之微囊，但尤其為經解毒之脂質A(諸如單磷醯或雙磷醯脂質A)或礬，此外包含防腐劑、稀釋劑、乳化劑、穩定劑及其他已知及用於先前技術之疫苗中的組份。此外，任何此項技術中已知之佐劑系統均可用於本發明之組合物中。該等佐劑包括(但不限於)弗氏不完全佐劑、弗氏完全佐劑、多分散β-(1,4)連接乙醯化甘露聚糖(Acemannan)、Titermax®(來自CytRx Corporation之聚氧化乙烯-聚氧化丙烯共聚物佐劑)、來自Chiron Corporation之經改質之脂質佐劑、來自Cambridge Biotech之皂素衍生物佐劑、經殺滅之百日咳博德氏桿菌(Bordetella pertussis)、革蘭陰性細菌(gram-negative bacteria)之脂多醣(LPS)、大聚合陰離子(諸如硫酸葡聚糖)及無機凝膠(諸如礬、氫氧化鋁或磷酸鋁)。
可用於本發明之超分子抗原構築體組合物中之載體蛋白質包括 (但不限於)麥芽糖結合蛋白"MBP"、牛血清白蛋白"BSA"、透孔螺血藍蛋白"KLH"、卵白蛋白、鞭毛蛋白、甲狀腺球蛋白、任何物種之血清白蛋白、任何物種之γ球蛋白、同源細胞、具有Ia抗原之同源細胞及D-及/或L-胺基酸之聚合物。
此外，術語"治療有效量"係指在投與人類或動物時在該人或動物體內引發足以產生治療作用之免疫反應的抗體之量。熟習此項技術者可根據常規方法容易地判定有效量。
兩序列之間的"同源性"由序列同一性來判定。若待彼此進行比較之兩個序列的長度不同，則序列同一性較佳與較短序列之核苷酸殘基與較長序列之核苷酸殘基相同之百分比相關。通常使用諸如Bestfit程式(Wisconsin序列分析套件，版本8，Unix,Genetics Computer Group,University Research Park,575 Science Drive Madison,WI 53711))之電腦程式測定序列同一性。Bestfit利用Smith及Waterman,Advances in Applied Mathematics 2(1981),482-489之局部同源算法以找到兩序列之間具有最高序列同一性之區段。當使用Bestfit或另一序列對準程式判定特定序列是否與本發明之參考序列具有(例如)95%之同一性時，較佳將參數調整成使得同一性百分比在參考序列之整個長度上計算且允許至多參考序列中核苷酸總數之5%的同源間隙。當使用Bestfit時，所謂可選參數較佳設在其預定("預設")值。在既定序列與上文所述之本發明序列之間的比較中所出現之偏差可能由(例如)添加、缺失、取代、插入或重組引起。該序列比較較佳亦可使用程式"fasta20u66"(2.0u66版本，1998年9月，William R.Pearson及the University of Virginia；亦參見W.R.Pearson(1990),Methods in Enzymology 183,63-98，所附實例及http：//workbench.sdsc.edu/)來進行。為達成此目的，可使用"預設"參數設置。
所用之術語"雜交"係指習知雜交條件，較佳係指使用5xSSPE、 1%SDS、1xDenhardts溶液作為溶液且/或雜交溫度在35℃與70℃之間，較佳為65℃的雜交條件。雜交後，較佳在35℃與70℃之間，較佳65℃之溫度下首先用2xSSC、1%SDS且接著用0.2xSSC進行洗滌(關於SSPE、SSC及Denhardts溶液之定義，參見上述引文中Sambrook等人)。例如描述於Sambrook等人(上文)中之嚴格雜交條件尤其較佳。若如上文說明在65℃下進行雜交及洗滌，則(例如)實現尤其較佳之嚴格雜交條件。例如在45℃下進行雜交及洗滌之非嚴格雜交條件略為不佳且在35℃下更為不佳。
參考本文所包括之特定實施例之以下詳細描述，可更容易地瞭解本發明。雖然已參考本發明之某些實施例之特定細節描述本發明，但不意欲將該等細節視為對本發明之範疇的限制。
本發明提供抗體及其功能部分，該抗體係構形敏感性抗體。此等抗體識別多種類澱粉蛋白抗原上之特異性抗原決定基。該等抗體適用於診斷及治療性干預由類澱粉蛋白或類澱粉樣蛋白引起或與其相關之疾病及病症，該等疾病及病症包括澱粉樣變性病，其係一群與類澱粉蛋白或類澱粉樣蛋白(諸如與阿茲海默氏病相關之Aβ蛋白)相關之疾病及病症。
將抗體投與個體以對其進行被動免疫來對抗多種疾病或病症，包括(但不限於)與類澱粉蛋白相關之疾病，諸如阿茲海默氏病。
本文所提供之抗體係對代表與類澱粉蛋白相關之各種疾病(諸如阿茲海默氏病)之特徵之抗原肽具有結合特異性的單株或多株抗體。
本發明之抗體藉由用超分子抗原構築體組合物對動物(諸如小鼠、大鼠、兔或任何其他可產生天然或人類抗體之動物物種)進行免疫來製備。
如本文所揭示之超分子抗原構築體一般包含經修飾以增強抗原作用之肽，其中該等肽經由聚乙二醇化(使用聚乙二醇或經改質之聚 乙二醇)修飾，或經由其他方法(諸如經棕櫚酸、聚胺基酸(例如聚甘胺酸、聚組胺酸)、多醣(例如聚半乳糖醛酸、聚乳酸、聚乙交酯、甲殼素、聚葡萄胺糖)、合成聚合物(聚醯胺、聚胺基甲酸酯、聚酯)或共聚物(例如聚(甲基丙烯酸)及N-(2-羥基)丙基甲基丙烯醯胺))及其類似物)修飾。
雖然在脂質體雙層中向肽提供固定物，但棕櫚酸之修飾(棕櫚醯化)因C16：0脂肪酸部分之長度相對減短之原因而導致肽實際上位於脂質體表面之上。因此，處理抗原之細胞必須處理具有肽之整個脂質體，在大部分狀況下相對而言此導致免疫反應較慢。
在本發明之一實施例中，使用經修飾之類澱粉1-15肽製備本發明之抗體，尤其是單株抗體。經修飾之類澱粉1-15肽可根據Nicolau等人2002中報導之方法來合成。Nicolau等人報導之方法包括藉由使親脂性或疏水性部分樹脂上接枝至預形成肽的末端胺基酸殘基而產生相當高純度之產物來修飾抗原肽。詳言之，使用已知偶合化學使經保護之胺基酸，尤其是經Fmoc保護之胺基酸連接至樹脂。移除保護基團且偶合第二經保護之胺基酸殘基。接著使用標準自動肽合成(使用已知之保護化學，尤其是Fmoc/tBu化學及標準側鏈保護基團)藉由在類澱粉蛋白Aβ1-42之胺基酸1至15上偶合以產生具有SEQ ID NO：1中給出之序列之肽片段來合成Aβ1-15抗原肽。在最終步驟中，使兩個另外經保護之胺基酸偶合至生長中之肽片段。接著可選擇性裂解Mtt基團且偶合至棕櫚酸。洗滌樹脂後，移除保護基團且同時裂解樹脂，隨後使用標準方法進行側鏈去保護。接著獲得高純度之最終產物且由此項技術中已知之方法(諸如電噴霧質譜法)證實產物之鑑別。
本發明之親脂性或疏水性部分可為脂肪酸、三甘油酯或磷脂，其中脂肪酸碳主鏈具有至少10個碳原子。詳言之，親脂性或疏水性部分為碳主鏈具有至少約14個碳原子且至多約24個碳原子之脂肪酸，在 此範圍內之各個別碳原子數亦為本發明之部分。更詳言之，親脂性或疏水性部分具有至少14個碳原子之碳主鏈。疏水性部分之實例包括(但不限於)棕櫚酸、硬脂酸、肉豆蔻酸、月桂酸、油酸、亞麻油酸、次亞麻油酸及膽固醇或DSPE。在本發明之一特定實施例中，親脂性或疏水性部分為棕櫚酸。
為增強免疫反應，可適當使用另一固定物/間隔基以重構脂質體中之肽，例如聚乙二醇(PEG)。
PEG共價連接至肽之兩末端處結合之胺基酸殘基，尤其是Glu、Cys或Lys胺基酸殘基或任何其他可適用於使PEG共價結合至肽之胺基酸殘基。在鏈之另一端，可共價結合疏水性部分用以充當脂質體雙層中之固定元件，例如磷脂醯乙醇胺(PEA)。因此，脂質體仍充當佐劑且充分遠離雙層之肽可經單獨處理，且因此與棕櫚醯化抗原相比增加其免疫原性。
在某些實施例中，本發明之範疇內所使用之超分子抗原構築體包含共價連接至聚乙二醇化離胺酸(各末端一個)之肽序列。PEG(聚乙二醇)鏈之長度可自n=8至n=150,000或更多，尤其n=10至n=80,000，更尤其n=20至n=10,000變化。在本發明之一特定實施例中，PEG鏈之長度不超過n=45，尤其在n=5與n=40之間，更尤其在n=10與n=30之間且甚至更尤其n=10。
本文所述之超分子構築體可使用自動肽合成及已知之保護化學(尤其是Fmoc/tBu化學)及標準側鏈保護基團來合成。肽之聚乙二醇化通常產生幾何異構體之混合物。
為達成PEG-脂質結合物與Aβ之C-及N-末端之位置特異性連接，可使用經部分保護之肽。對於含有內部Lys或His殘基之彼等肽序列而言，將經正交保護之Lys(ivDde)添加至各末端。可將額外之Gly添加至C末端以促進合成。移除保護基團且使用乙酸酐進行N-乙醯化，隨後 選擇性裂解ivDde基團。
樹脂，尤其是2-氯三苯甲基樹脂係有利的，其具有酸敏感性且因此使得能夠分離經保護之肽。
在本發明之一特定實施例中，偶合反應在溶液相中進行。接著在溫和條件下自樹脂選擇性裂解而釋放內部經保護之肽。
成功達成自β類澱粉蛋白序列衍生之肽(諸如Aβ1-16(SEQ ID NO：2))與經脂肪酸-磷脂醯膽鹼(諸如DSPE)修飾之PEG分子的溶液相偶合。最終側鏈去保護前之單偶合產物與雙偶合產物的分離可藉由使用陽離子交換層析法來達成。隨後進行肽側鏈去保護而導致以可接受之純度分離所要結合物。可藉由此項技術中熟知之方法(諸如HPLC等)達成純化。
使用經保護之肽合成N-末端及C-末端脂質-PEG β類澱粉蛋白抗原的此方法可適用於多種肽序列。
接著可如Nicolau等人，2002中所述製備本發明之脂質體抗原。可將經修飾之類澱粉Aβ抗原肽，尤其是經PEG修飾及棕櫚醯化之Aβ1-15、Aβ1-16、Aβ1-16(△14)、Aβ22-35及Aβ29-40抗原肽在由脂質體，尤其是由雙肉豆蔻醯磷脂醯膽鹼(DMPC)、雙肉豆蔻醯磷脂醯乙醇胺(DMPEA)、雙肉豆蔻醯磷脂醯甘油(DMPG)及膽固醇製成之脂質體(視情況含有單磷醯脂質A)組成之構築體中重構。
在本發明之一特定實施例中，使用具有脂質A之脂質體作為佐劑來製備抗類澱粉蛋白之疫苗。將雙肉豆蔻醯磷脂醯膽鹼、雙肉豆蔻醯磷脂醯甘油及膽固醇尤其以0.9：1.0：0.7之莫耳比率混合。接著以適合濃度，尤其以30與50mg/mmol之間之濃度，更尤其以40mg/mmol磷脂A之濃度添加強免疫調節劑(諸如單磷脂醯脂質A)。接著以1：30與1：200之間的肽與磷脂之莫耳比率，尤其以1：50與1：120之間之莫耳比率，更尤其以1：100添加經修飾之抗原Aβ肽。例如經由蒸發移除溶 劑，且將所得薄膜用無菌緩衝溶液(諸如PBS)水合。
脂質體亦可藉由如描述於(例如)Wagner等人(2002)Journal of Liposome Research第12卷(3)，第259-270頁中之交叉流動注入技術來製備。在將脂質溶液注入水性緩衝液系統期間，脂質傾向於形成"沉澱物"，隨後自身排列成微脂粒。所得微脂粒尺寸視諸如脂質濃度、攪拌速率、注射速率及脂質選擇之因素而定。製備系統可由交叉流動注射模組、極性相(例如PBS緩衝溶液)之容器、乙醇/脂質溶液容器及壓力裝置(但尤其氮壓力裝置)組成。在經由交叉注射模組泵抽水性或極性溶液的同時，在施加變化壓力下將乙醇/脂質溶液注入極性相中。
脂質體仍充當佐劑且充分遠離雙層之肽可經單獨處理，且因此與棕櫚醯化抗原相比增加其免疫原性。
自由PEG末端共價連接至充當固定元件之磷脂醯乙醇胺之分子(其中脂肪酸可為肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸等或其組合)。可將此超分子結構藉由在由磷脂及膽固醇(各種莫耳比率之磷脂醯乙醇胺、磷脂醯甘油、膽固醇)組成之脂質體中重構來固定。可使用其他磷脂。以約40μg/pmol磷脂之濃度使用脂質A。
在某些實施例中，棕櫚醯化或聚乙二醇化超分子抗原構築體包含具有β類澱粉蛋白之胺基酸序列的肽。該等肽亦可包含或對應於整個類澱粉β肽及其活性片段。此外，適用於本發明之肽進一步包含Aβ1-16(SEQ ID NO：2)、Aβ1-16(△14)(SEQ ID NO：3)、Aβ1-15(SEQ ID NO：1)及其活性片段。
為引出及製備抗體且為測定經修飾之Aβ抗原構築體的免疫原性，用抗原肽對選自由以下動物組成之群的適合動物進行免疫：小鼠、大鼠、兔、豬、鳥等，但尤其是小鼠，尤其是C57BL/6小鼠。抗原構築體之免疫原性藉由在免疫後以適合時間間隔使用免疫檢定(諸 如ELISA檢定)探測血清樣本來測定。
可使用此項技術中熟知之傳統選殖及細胞融合技術來製備本發明之單株抗體。通常將所關注之免疫原(抗原)投與(例如腹膜內注射)野生型或近親配種之小鼠(例如BALB/c或尤其是C57BL/6小鼠)、大鼠、兔或其他可產生天然或人類抗體之動物物種或轉殖基因小鼠。免疫原可單獨投與或與佐劑混合或自載體(VEE複製子載體、牛痘)表現或表現為DNA或融合蛋白來誘導免疫反應。融合蛋白質包含與載體蛋白(諸如β-半乳糖苷酶、麩胱甘肽S轉移酶、透孔螺血藍蛋白(KLH)及牛血清蛋白)偶合之肽，對抗該肽產生所需之免疫反應。在此等狀況下，肽充當具有載體蛋白之半抗原。加強動物(例如)兩次或兩次以上之後，自經免疫動物採集脾細胞且藉由將致敏脾細胞與骨髓瘤細胞株(諸如鼠科SP2/O骨髓瘤細胞(ATCC,Manassas,VA))使用熟知之Kohler及Milstein之方法(Nature 256：495-497(1975))及Harlow及Lane之方法(Antibodies：A Laboratory Manual(Cold Spring Harbor Laboratory,New York 1988))融合來產生融合瘤。
在本發明之一特定實施例中，將本發明之抗原構築體，尤其是醫藥學上可接受之形式的包含該抗原構築體之疫苗組合物以1與10週之間的時間間隔，尤其1與6週之間的時間間隔，更尤其1與4週之間的時間間隔且甚至更尤其2與3週之間的時間間隔以重複劑量，尤其1至15次劑量，更尤其2至10次劑量，甚至更尤其3至7次劑量，但尤其為4至6次劑量投與。藉由在加強後適合之時間，尤其加強後3至10天，更尤其加強後4至8天且更尤其加強後5至6天採集血清樣本且使用已知之方法，尤其是通常所用之免疫檢定之一(諸如ELISA檢定)測定抗原構築體之免疫原性來監控免疫反應。
用本發明之抗原構築體，但尤其是用醫藥學上可接受之形式的包含本發明之抗原構築體之疫苗組合物進行免疫在受治療之動物體內 產生顯著免疫反應。選擇動物，但尤其是具有治療力價之小鼠用於將產生抗體之細胞(尤其是B-淋巴細胞)與連續生長或永生細胞株(諸如骨髓瘤細胞株)融合。藉由添加聚乙二醇來誘導細胞融合。治療力價係經1：4000與1：6000之間，尤其1：4500與1：5500之間，更尤其1：5000之稀釋在ELISA檢定中產生陽性結果之力價。
接著以習知方式(例如使用限制稀釋法)選殖所得雜交細胞，且培養所得純系以產生所需單株抗體。
藉由將細胞塗在含有次黃嘌呤、胺基蝶呤及胸苷(HAT)之選擇培養基中來化學選擇由此所得之融合瘤。
隨後根據產生對抗特定類澱粉蛋白相關疾病或病症之單株抗體之能力來篩選融合瘤。選殖產生所關注抗體之融合瘤，使其擴增且冷凍儲存以備將來產生抗體。較佳融合瘤產生具有IgG同型，更佳IgG2同型之單株抗體。
藉由用上文所述之本發明之超分子抗原構築體組合物對動物(諸如小鼠或兔或任何其他適合動物)進行免疫來製備多株抗體。隨後自動物收集血清，且根據對抗類澱粉蛋白抗原之結合反應性來篩選血清中之抗體。
可使用已知之技術將本發明之抗體製備成生理學上可接受之調配物且其可包含醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑及/或賦形劑。舉例而言，將根據本發明及如先前本文所述之抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)，尤其是單株抗體(包括任何功能等效抗體或其功能部分)與醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑及/或賦形劑組合以形成治療組合物。適合之醫藥載劑、稀釋劑及/或賦形劑在此項技術中熟知，且包括(例如)磷酸鹽緩衝生理食鹽水溶液、水、乳液(諸如油/水乳液)、各種類型之濕潤劑、無菌溶液等。
本發明之醫藥組合物之調配可根據熟習此項技術者已知之標準 方法來完成。
可將本發明之組合物以固體、液體或氣霧劑之形式以適合之醫藥學上有效之劑量投與受檢者。固體組合物之實例包括藥丸、乳膏及可植入劑量單位。藥丸可口服投與。治療軟膏可局部投與。可植入劑量單位可局部投與(例如腫瘤部位)或可經植入用於全身釋放治療組合物(例如經皮下)。液體組合物之實例包括適於肌肉內、皮下、靜脈內、動脈內注射之調配物及用於局部及眼內投藥之調配物。氣霧劑調配物之實例包括用於肺投藥之吸入調配物。
可藉由標準投藥途徑投與組合物。一般而言，可藉由局部、口服、直腸、鼻部、真皮內、腹膜內或非經腸(例如靜脈內、皮下或肌肉內)途徑投與組合物。此外，可將組合物併入持續釋放基質中，諸如生物可降解聚合物，將該聚合物在需要傳遞之點(例如腫瘤部位)附近植入。方法包括單劑量投藥，以預定時間間隔重複劑量投藥，及持續投藥歷經預定時間段。
如本文所用之持續釋放基質為由通常為可經酶促或酸/鹼水解或經溶解而降解之聚合物之物質製成的基質。在插入體內後，基質受到酵素及體液的作用。持續釋放基質理想選擇為生物相容物質，諸如脂質體、聚乳酸交酯(聚乳酸)、聚乙交酯(乙醇酸之聚合物)、聚乳酸交酯共乙交酯(乳酸與乙醇酸之共聚物)、聚酸酐、聚原酸酯、多肽、玻尿酸、膠原蛋白、硫酸軟骨素、羧酸、脂肪酸、磷脂、多醣、核酸、聚胺基酸、胺基酸(諸如苯丙胺酸、酪胺酸、異白胺酸)、聚核苷酸、聚乙烯基丙烯、聚乙烯吡咯啶酮及聚矽氧。較佳生物可降解基質為聚乳酸交酯、聚乙交酯或聚乳酸交酯共乙交酯(乳酸與乙醇酸之共聚物)之一之基質。
熟習相關技術者熟知組合物之劑量視各種因素而定，諸如所治療之病狀、所使用之特定組合物及其他臨床因素(諸如患者體重、尺 寸、性別及一般健康狀況、身體表面積、待投與之特定化合物或組合物、同時投與之其他藥物及投藥途徑)。
該組合物可與用於治療疾病之其他組合物及方法組合投與，該其他組合物包含生物活性物質或化合物，尤其是至少一種選自由以下各物組成之群之化合物：對抗氧化應力之化合物、抗細胞凋亡之化合物、金屬螯合劑、DNA修復抑制劑(諸如哌侖西平及代謝物)、3-胺基-1-丙烷磺酸(3APS)、1,3-丙烷二磺酸(1,3PDS)、分泌酶活化劑、β-及γ-分泌酶抑制劑、τ蛋白、神經傳遞素、β片狀破壞劑、消炎分子、"非典型精神抑制劑"(諸如氯氮平、齊拉西酮、利培酮、阿立哌唑或奧氮平)或膽鹼酯酶抑制劑(ChEI)(諸如他克林、雷斯替明、多奈哌齊及/或加蘭他敏)及其他藥物及營養補充劑(諸如維生素B12、半胱胺酸、乙醯膽鹼之前驅體、卵磷脂、膽鹼、銀杏(Ginkgo biloba)、乙醯基-L-肉鹼、艾地苯醌(idebenone)、丙戊茶鹼(propentofylline)或黃嘌呤衍生物)以及本發明之抗體及可選擇之醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑。
蛋白質醫藥活性物質可以每劑1ng與10mg之間的量存在。一般而言，投藥方案應在0.1μg與10mg之間的本發明之抗體之範圍內，尤其在1.0μg至1.0mg之範圍內且更尤其在1.0μg與100μg之間之範圍內，其中此等範圍內之所有個別數量亦為本發明之部分。若投藥經由連續輸注來進行，則更適合之劑量可在每小時每公斤體重0.01μg與10mg單位之間之範圍內，其中此等範圍內之所有個別數量亦為本發明之部分。
投藥一般為非經腸投藥，例如靜脈內投藥。用於非經腸投藥之製劑包括無菌水性或非水性溶液、懸浮液及乳液。非水性溶劑包括(不限於)丙二醇、聚乙二醇、植物油(諸如橄欖油)及注射用有機酯(諸如油酸乙酯)。水性溶劑可選自由以下各物組成之群：水、醇/水性溶 液、乳液或懸浮液(包括生理食鹽水及經緩衝之介質)。非經腸媒劑包括氯化鈉溶液、林格氏右旋糖(Ringer's dextrose)、右旋糖及氯化鈉、乳酸林格氏液或不揮發性油。靜脈內媒劑包括流體及營養補充物、電解質補充物(諸如基於林格氏右旋糖之補充物)及其他物質。亦可存在防腐劑，諸如抗菌劑、抗氧化劑、螯合劑、惰性氣體等。
醫藥組合物可進一步包含蛋白質載體，諸如尤其人類來源之血清白蛋白或免疫球蛋白。視本發明之醫藥組合物之目標用途而定，其中可存在其他生物活性劑。
在另一實施例中，本發明提供用於偵測及診斷類澱粉蛋白相關疾病或病狀，用於診斷類澱粉蛋白相關疾病或病狀之頃向或用於監控患者之微小殘留病或用於預測患者對根據本發明及如先前本文所述之抗體或疫苗組合物治療之反應的方法及套組。此等方法包括已知常用於偵測或定量生物樣本或原位條件中之物質的免疫學方法。
患者之類澱粉蛋白相關疾病或病狀或類澱粉蛋白相關疾病或病狀之頃向之診斷可藉由偵測單株抗體或其活性片段與樣本中或原位類澱粉蛋白之抗原決定基的免疫特異性結合來達成，其包括使懷疑含有類澱粉蛋白抗原之樣本或特定身體部分或身體區域接觸結合類澱粉蛋白之抗原決定基之抗體，使抗體結合類澱粉蛋白抗原以形成免疫複合物，偵測免疫複合物之形成，且將免疫複合物之存在或不存在與樣本或特定身體部分或區域中類澱粉蛋白抗原之存在或不存在相聯繫，視情況將該免疫複合物之量與正常對照值相比較，其中與正常對照值相比該聚集物之量增加說明該患者罹患類澱粉蛋白相關疾病或病狀或有發展成類澱粉蛋白相關疾病或病狀之危險。
在用本發明之抗體或疫苗組合物治療後對患者之微小殘留病之監控可藉由偵測單株抗體或其活性片段與樣本中或原位類澱粉蛋白之抗原決定基的免疫特異性結合來達成，其包括使懷疑含有類澱粉蛋白 抗原之樣本或特定身體部分或身體區域接觸結合類澱粉蛋白之抗原決定基之抗體，使抗體結合類澱粉蛋白抗原以形成免疫複合物，偵測免疫複合物之形成，且將免疫複合物之存在或不存在與樣本或特定身體部分或區域中類澱粉蛋白抗原之存在或不存在相聯繫，視情況將該免疫複合物之量與正常對照值相比較，其中與正常對照值相比該聚集物之量增加說明該患者仍患有微小殘留病。
預測患者對本發明之疫苗組合物治療之反應可藉由偵測單株抗體或其活性片段與樣本中或原位類澱粉蛋白之抗原決定基的免疫特異性結合來達成，其包括使懷疑含有類澱粉蛋白抗原之樣本或特定身體部分或身體區域接觸結合類澱粉蛋白之抗原決定基之抗體，使抗體結合類澱粉蛋白抗原以形成免疫複合物，偵測免疫複合物之形成，且將免疫複合物之存在或不存在與樣本或特定身體部分或區域中類澱粉蛋白抗原之存在或不存在相聯繫，視情況將治療開始之前與之後的該免疫複合物之量進行比較，其中該聚集物之量減少說明該患者具有對治療產生反應之高潛力。
可用於診斷類澱粉蛋白相關疾病或病狀，用於診斷類澱粉蛋白相關疾病或病狀之頃向或用於監控患者之微小殘留病或用於預測患者對根據本發明及如先前本文所述之抗體或疫苗組合物治療之反應的生物樣本為(例如)流體(諸如血清、血漿、唾液、胃分泌液、黏液、腦脊髓液、淋巴液及其類似物)或自有機體獲得之組織或細胞樣本(諸如神經、腦、心臟或血管組織)。可使用一般技術者已知之任何免疫檢定(參見Harlow及Lane,Antibodies：A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory,New York 1988 555-612)測定樣本中類澱粉蛋白抗原之存在或不存在，諸如利用使用用於偵測之第二試劑之間接偵測方法之檢定、ELISA及免疫沉澱反應及凝集檢定。此等檢定之詳細描述(例如)在頒與Maertens及Stuyver之WO 96/13590，Zrein等人(1998)及 WO 96/29605中給出。
為進行原位診斷，可將抗體或其任何活性及功能部分藉由此項技術中已知之方法(諸如靜脈內、鼻內、腹膜內、大腦內、動脈內注射)投與待診斷之有機體使得在本發明之抗體與類澱粉蛋白抗原上之抗原決定區之間可發生特異性結合。抗體/抗原複合物可經由連接至抗體或其功能片段之標記物來偵測。
用於診斷應用或用於診斷類澱粉蛋白相關疾病或病狀之頃向或用於監控患者之微小殘留病或用於預測患者對根據本發明及如先前本文所述之抗體或疫苗組合物治療之反應之應用的免疫檢定通常視經標記之抗原、抗體或用於偵測之第二試劑而定。可將此等蛋白質或試劑用熟習此項技術者一般已知之化合物來標記，該等化合物包括酵素、放射性同位素及螢光、發光及顯色物質(包括有色粒子，諸如膠體金及乳膠微珠)。在此等方法中，放射性標記可用於幾乎所有類型之檢定且具有最多變化。在必須避免放射性或需要快速結果時，與酵素結合之標記物尤其適用。雖然螢光染料在使用中需要昂貴之設備，但其提供非常靈敏之偵測方法。適用於此等檢定之抗體包括單株抗體、多株抗體及經親和純化之多株抗體。
或者，抗體可藉由與經標記之對免疫球蛋白具有親和力之物質(諸如蛋白A或蛋白G或第二抗體)反應而經間接標記。可使抗體與第二物質結合，且用經標記之對與抗體結合之第二物質具有親和力之第三物質來偵測。舉例而言，可使抗體與生物素結合且使用經標記之抗生物蛋白或抗生蛋白鏈菌素來偵測抗體-生物素結合物。類似地，可使抗體與半抗原結合且使用經標記之抗半抗原抗體來偵測抗體-半抗原結合物。
一般技術者應瞭解可用於本發明之此等及其他適合標記物。此等標記物與抗體或其片段之結合可使用一般技術者通常已知之標準技 術來完成。典型技術由Kennedy,J.H.等人，1976(Clin.Chim.Acta 70：1-31)及Schurs,A.H.W.M.等人，1977(Clin.Chim Acta 81：1-40)描述。後者中所提及之偶合技術為戊二醛方法、高碘酸鹽方法、雙馬來醯亞胺方法及其他方法，所有此等文獻均以引用的方式併入本文中。
目前之免疫檢定係利用雙抗體方法偵測分析物之存在，其中抗體藉由與已用可偵測標記物標記之第二抗體反應而經間接標記。第二抗體較佳為與單株抗體來源之動物之抗體結合的抗體。換言之，若單株抗體為小鼠抗體，則經標記之第二抗體為抗小鼠抗體。對下文所述之檢定中所用之單株抗體而言，此標記物較佳為塗佈抗體之微珠，尤其是磁性微珠。對本文所述之免疫檢定中所用之多株抗體而言，標記物較佳為可偵測分子，諸如放射性、螢光或電化學發光物質。
在本發明之內範疇內亦可使用常稱為快速格式系統(因為其適於快速測定分析物之存在)之另一雙抗體系統。該系統需要抗體與分析物之間的高親和力。根據本發明之一實施例，使用一對各自對類澱粉蛋白抗原具有特異性之抗體來測定類澱粉蛋白抗原之存在。該等抗體對之一在本文中稱為"偵測抗體"且該等抗體對中之另一者在本文中稱為"捕捉抗體"。本發明之單株抗體可用作捕捉抗體或偵測抗體。本發明之單株抗體亦可在同一檢定中同時用作捕捉抗體及偵測抗體。因此，本發明之一實施例使用雙抗體夾心法偵測生物液體樣本中之類澱粉蛋白抗原。在此方法中，使分析物(類澱粉蛋白抗原)夾在偵測抗體與捕捉抗體之間，將捕捉抗體不可逆地固定至固體支撐物上。偵測抗體含有可偵測標記物以便鑑別抗體-分析物夾心之存在且因此鑑別分析物之存在。
例示性固相物質包括(但不限於)微量滴定盤、聚苯乙烯測試管、磁性、塑料或玻璃微珠及放射免疫檢定及酶免疫檢定之領域中熟知之載片。使抗體偶合至固相之方法亦為熟習此項技術者所熟知。近來， 已使用多種多孔材料(諸如耐綸(nylon)、硝化纖維素、乙酸纖維素、玻璃纖維及其他多孔聚合物)作為固體支撐物。
本發明亦係關於一種用於偵測生物樣本中之類澱粉蛋白抗原之診斷套組，其包含如上文所定義之組合物。此外，本發明係關於除如上文所定義之組合物外亦包含如上文所定義之偵測試劑的後一診斷套組。術語"診斷套組"一般係指此項技術中已知之任何診斷套組。更詳言之，後一術語係指如Zrein等人(1998)所述之診斷套組。
本發明之另一目標係提供用於偵測及診斷類澱粉蛋白相關疾病及病狀之新穎免疫探針及測試套組，其包含本發明之抗體。對於免疫探針而言，使抗體直接或間接連接至適合之報導分子(例如酵素或放射性核種)。測試套組包括容納一或多種本發明之抗體之容器及針對使用抗體以達成結合類澱粉蛋白抗原而形成免疫複合物之目的及偵測免疫複合物之形成以便將免疫複合物之存在或不存在與類澱粉蛋白抗原之存在或不存在相聯繫的說明書。
實例
用於產生小鼠單株抗體之抗原
實例1：用於製備棕櫚醯化Aβ 1-15 超分子抗原構築體之方法 肆(棕櫚醯離胺酸)-Aβ1-15肽抗原之合成
棕櫚醯化類澱粉1-15肽可根據改進之先前報導之方法(Nicolau等人2002)來合成。此新穎方法包括使棕櫚酸樹脂上接枝至預形成肽之末端Lys殘基而非併入經修飾之胺基酸9-茀基甲氧羰基(Fmoc)-Lys(pal)-OH之逐步固相合成。此新穎方法提高偶合效率且產生相當更高純度之產物。因此，使用[六氟磷酸2-(1H-苯幷三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲](HBTU)偶合化學使經正交保護之胺基酸Fmoc-Lys(Mtt)-OH連接至王氏樹脂(Wang resin)。使用DMF中20%哌啶移除Fmoc基團且偶合第二殘基Fmoc-Lys(Mtt)-OH。接著使用標準自動肽合成(使用Fmoc/tBu化學及標準側鏈保護基團)在接下來的15個胺基酸上偶合以產生如SEQ ID NO：1中給出之肽序列。最終，經偶合之最後兩個胺基酸為Fmoc-Lys(Mtt)-OH。接著使用二氯甲烷中1%三氟乙酸(TFA)選擇性裂解Mtt基團以釋放肽片段，且接著使用HBTU使其偶合至棕櫚酸。在樹脂洗滌後，使用二甲基甲醯胺(DMF)中20%哌啶移除Fmoc基團，且最終使用TFA在標準條件下同時進行樹脂裂解及側鏈去保護。在冷乙醚中研磨產生呈白色固體狀之產物。電噴霧質譜法證實產物之鑑別(m/z預測值：1097.9([M]3+)；實驗值：1096.8([M-3H]3+)，其中未偵測到其他三-、二-或單-棕櫚醯化肽。
實例2：製備超分子抗原構築體之方法 聚乙二醇化β類澱粉肽抗原之合成
為增強免疫反應，已使用另一固定物/間隔基以重構脂質體中之肽，例如聚乙二醇(PEG)。PEG共價連接至肽之兩個末端處結合之離胺酸殘基。在鏈之另一末端(PEGn=70)，共價結合磷脂醯乙醇胺(PEA)以充當脂質體雙層中之固定元件。因此，脂質體仍充當佐劑且充分遠離雙層之肽可經單獨處理，且因此與棕櫚醯化抗原相比增加其免疫原性。
使用標準Fmoc/tBu胺基酸側鏈保護獨特合成本文所述之超分子構築體。肽之聚乙二醇化通常產生幾何異構體之混合物。本文中使用經部分保護之肽說明用於使PEG-脂質結合物與Aβ之C-及N-末端位置特異性連接之便利方法。
對於含有內部Lys或His殘基之彼等肽序列(1-16、1-16△14、22-35)而言，將經正交保護之Lys(ivDde)添加至各末端。將額外之Gly添加至C末端以促進合成。使用DMF中20%哌啶移除Fmoc基團，且使用乙酸酐進行N-乙醯化。使用DMF中3%水合肼達成ivDde基團之選擇性裂解歷經1小時。2-氯三苯甲基樹脂優於更廣泛使用之王氏樹脂，因為前者證明其更耐抗肼解作用。此外，2-氯三苯甲基樹脂對酸極為敏感，且因此不同於王氏樹脂而使得能夠分離經保護之肽。實際上，需要在溶液相中進行偶合反應，因為與樹脂結合之肽與預活化聚乙二醇化脂質試劑DSPE-PEG-SPA之偶合不產生任何偶合產物。因此，在溫和條件(乙酸/三氟乙醇/二氯甲烷，1：1：8，1h，室溫)下自樹脂選擇性裂解而產生內部經保護之肽。
在DMSO及過量鹼中成功達成自序列Aβ1-16(SEQ ID NO：2)衍生之肽與DSPE-PEG-SPA之溶液相偶合。接著藉由歷經2h添加過量乙醇胺來中止反應，且將溶液凍乾。
對於序列29-40，不需要特殊保護策略。
藉由HPLC(半預備逆相C4管柱)純化產生純度在50-70%之間的N-及C-末端PEG-脂質結合物，由MALDI(基質輔助雷射解吸離子化)證實PEG-脂質結合物之鑑別。各序列在偶合反應之容易度方面顯示出相當大之差異，且相應調整條件(溫度、DSPE-PEG-SPA莫耳當量數、時間)。為將過量DSPE-PEG-SPA與所要產物分離，使用HPLC純化。最終側鏈去保護前之單偶合產物與雙偶合產物的分離可藉由使用陽離子交換層析法來達成。隨後肽側鏈之去保護及分離過量中止之DSPE- PEG-SPA導致以可接受之純度分離所要結合物。
使用經保護之肽合成N-末端及C-末端脂質-PEG β類澱粉蛋白抗原的此方法可適用於多種肽序列。
實例3：由超分子抗原構築體引出之抗體 對抗棕櫚醯化Aβ 1-15 超分子抗原構築體而產生之mAb之製造：
以2週時間間隔，使用棕櫚醯化抗原(ACI-24,Aβ1-15)對C57BL/6小鼠進行免疫。使用各抗原(注射體積：200μl，含有8nmol肽)對10-12隻動物進行免疫。進行最後一次注射4天後處死動物。在5次加強後，選擇具有治療力價之小鼠(當血清之1：5000稀釋液在ELISA中呈陽性時)用於融合。自經免疫動物採集脾細胞，且藉由將致敏脾細胞與骨髓瘤細胞株融合來產生融合瘤。使用熟知之Kohler及Milstein之方法(Nature 256：495-497(1975))及Harlow及Lane之方法(Antibodies：A Laboratory Manual(Cold Spring Harbor Laboratory,New York 1988))進行來自脾之小鼠B淋巴細胞與骨髓瘤細胞株SP2-0.(ATCC,Manassas,VA)之細胞的融合。
藉由添加聚乙二醇來誘導細胞融合。接著以習知方式將所得雜交細胞培養10±14天以使純系生長。使用限制稀釋法進行最初純系選擇。選擇產生IgG之融合瘤純系且藉由ELISA測試其與Aβ1-42肽之特異性結合，且培養所得純系以產生所要單株抗體。
藉由將細胞塗在含有次黃嘌呤、胺基蝶呤及胸苷(HAT)之選擇培養基中來化學選擇由此所得之融合瘤。
隨後根據產生對抗特定類澱粉蛋白相關疾病或病症之單株抗體之能力來篩選融合瘤。鑑別母純系後，將其次選殖4次以確保單株性且使雜交體穩定。
選殖產生所關注抗體之融合瘤，使其擴增且冷凍儲存以備將來產生抗體。
以可購得之小鼠單株分型套組將抗體分型，且使穩定純系適應無血清之培養基且將其置於生物反應器中以產生抗體。
較佳融合瘤產生具有IgG同型，更佳IgG1同型之單株抗體。
對抗聚乙二醇化PEG-Aβ 1-16 、Aβ 4-11 、Aβ 22-35 及Aβ 29-40 超分子抗原構築體而產生之mAb之製造：
如Nicolau等人，2002,PNAS,99,2332-37所述製備脂質體抗原。將序列PEG-Aβ1-16、Aβ4-11、Aβ22-35及Aβ29-40(圖1)在由含有單磷醯脂質A(40mg/mM磷脂)之脂質體(由雙肉豆蔻醯磷脂醯膽鹼(DMPC)、雙肉豆蔻醯磷脂醯乙醇胺(DMPEA)、雙肉豆蔻醯磷脂醯甘油(DMPG)及膽固醇(0.9：0.1：0.1：0.7莫耳比率)製成)組成之構築體中重構。以2週時間間隔，使用此等抗原及聚乙二醇化Aβ1-16對C57BL/6小鼠進行免疫。使用各抗原對10-12隻動物進行免疫。在3至6次加強後，選擇具有治療力價之小鼠(當血清之1：5000稀釋物在ELISA中呈陽性時)用於融合。自經免疫動物採集脾細胞，且藉由將致敏脾細胞與骨髓瘤細胞株融合來產生融合瘤。使用熟知之Kohler及Milstein之方法(Nature 256：495-497(1975))及Harlow及Lane之方法(Antibodies：A Laboratory Manual(Cold Spring Harbor Laboratory,New York 1988))進行來自脾之小鼠B淋巴細胞與骨髓瘤細胞株SP2-0.(ATCC,Manassas,VA)之細胞的融合。
藉由添加聚乙二醇來誘導細胞融合。接著以習知方式(例如使用限制稀釋法)選殖所得雜交細胞。選擇產生IgG之融合瘤純系且藉由ELISA測試其與Aβ1-42肽之特異性結合，且培養所得純系以產生所要單株抗體。
藉由將細胞塗在含有次黃嘌呤、胺基蝶呤及胸苷(HAT)之選擇培養基中來化學選擇由此所得之融合瘤。
隨後根據產生對抗特定類澱粉蛋白相關疾病或病症之單株抗體 之能力來篩選融合瘤。選殖產生所關注抗體之融合瘤，使其擴增且冷凍儲存以備將來產生抗體。較佳融合瘤產生具有IgG同型，更佳IgG1同型之單株抗體。
實例4：抗體mACI-24-Ab4之特異性測定
為分析抗體mACI-24-Ab4之特異性，將多種濃度之預形成類澱粉蛋白1-42、1-40及1-38原纖維點至Hybond ECL硝化纖維素膜(Amersham Biosciences)上。用10%乳粉及0.7% Tween 20阻斷後，將膜與20μg/ml之初級抗體在室溫下一起培育2h。洗滌後，在室溫下將膜與辣根過氧化物酶結合之綿羊抗小鼠IgG抗體(Amersham Biosciences)一起培育1h，洗滌，且用化學發光溶液培育，隨後將膜暴露於X光薄膜。
為量測mAb mACI-24-Ab4與類澱粉蛋白β 1-42纖維之結合，在37℃下歷經7天預形成Aβ 1-42、1-40及1-38纖維且將其點至膜上。使用20μg/ml抗體來量測結合能力，且由辣根過氧化物酶結合之綿羊抗小鼠IgG抗體經20分鐘暴露來偵測結合抗體。
如由點漬墨點法分析所證明，抗體mACI-24-Ab4以不同敏感性結合不同預形成之Aβ纖維。抗體顯示出與Aβ1-40或Aβ1-38相比與Aβ1-42纖維之最高結合敏感性。能夠偵測到至少0.001μg Aβ1-42纖維，而對於Aβ1-40纖維而言抗體之偵測極限為至少0.1μg，且對於Aβ1-38纖維而言為1μg，此意謂相對於此等類型之類澱粉蛋白纖維，敏感性為100倍至低於1000倍。此等資料證明抗體ACI-24-Ab4對類澱粉蛋白形式(1-42)(已知其經二級構形改變而變得不可溶且為AD患者腦中類澱粉蛋白斑之主要部分)之敏感性為至少100倍。
實例5：西方墨點法及點漬墨點法中AC免疫單株抗體mACI-01-Ab7 C2與類澱粉蛋白物質之結合
為測定小鼠抗體mACI-01-Ab7 C2之結合是否視Aβ之天然構形而 定，藉由西方墨點法比較與直鏈化類澱粉蛋白之結合或經點漬墨點法比較與天然類澱粉蛋白之結合。(圖2a及2b)
藉由將Aβ1-42肽溶解於HFIP中來產生類澱粉蛋白單體，且在氬下蒸發溶劑。在-80℃下儲存經乾燥之肽薄膜直至使用。為製備單體，將肽薄膜再懸浮於DMSO中至2.75μg/μl之濃度，且在PBS中稀釋至1μg/μl。為製備寡聚體，將經乾燥之肽薄膜再懸浮於DMSO中至5mM，經超音波降解處理且添加PBS達到400μM類澱粉蛋白，隨後添加SDS至0.2%之最終濃度。在37℃下培育6小時後，將類澱粉蛋白在水中稀釋至100μM之最終濃度，且在37℃下再培育18h。在4℃下用冰冷的33%甲醇、4%乙酸溶液使類澱粉蛋白寡聚物沉澱歷經1h，以16200g旋轉10分鐘，且在將離心塊再懸浮於5mM Na2H2PO4、35mM NaCl(pH 7.4)中至1μg/μl之最終濃度。為製備纖維，將肽薄膜在Tris-HCl 50mM緩衝液中稀釋達到1mg/ml類澱粉蛋白之濃度，且在37℃下培育5天。將管以10000g旋轉5分鐘，且將離心塊再懸浮於0.1M碳酸鹽緩衝液(pH 9.6)中達到1μg/μl。
將1或5μg單體、寡聚物或纖維稀釋於PBS及上樣緩衝液中，且將其施加至12%之SDS-PAGE且將凝膠轉移至硝化纖維素膜。或者，將3或1μg或100及10ng類澱粉蛋白物質稀釋於PBS中，且直接點至硝化纖維素膜上且在室溫下將膜乾燥1小時。用酪蛋白溶液(載體)阻斷30分鐘後，將膜與mACI-01-Ab7 C2或6E10(Chemicon)抗體(在酪蛋白溶液中稀釋至1μg/ml)一起培育30分鐘。在酪蛋白溶液中洗滌3次後，在室溫下將膜與HRP-標記之山羊抗小鼠IgG(Dako Cytomation)(在酪蛋白溶液中稀釋)一起培育30分鐘，洗滌3次且用DAB基質(Dako Cytomation)顯影。
在點漬墨點法檢定中單株小鼠抗體mACI-01-Ab7 C2特異性結合單體、寡聚物及纖維，陽性對照抗體6E10同樣如此。相比之下，在西 方墨點法中mACI-01-Ab7C2抗體未偵測到直鏈化類澱粉蛋白物質，相反6E10抗體明顯識別所有直鏈化肽。此結果證明mACI-01-Ab7 C2與類澱粉蛋白之結合視類澱粉蛋白之天然構形而定。
實例6：mACI-01Ab7 C2-Aβ 1-42 相互作用
使用表面電漿共振研究AC免疫主要抗體mACI-01-Ab7 C2(mC2)與類澱粉肽Aβ1-42之間的相互作用。測定小鼠抗體mACI-01-Ab7 C2與Aβ1-42之單體或纖維之結合。
所有SPR實驗均在Biacore X儀器(Biacore AB)上進行。用於固定之試劑(EDC、NHS及乙醇胺)、感應器晶片CM5及SA以及操作緩衝液及樣本緩衝液HBS-EP均購自Biacore AB。使用乙酸鈉(10mM,pH 5.0)作為偶合緩衝液來增加偶合率。藉由將PBS緩衝液添加至Aβ1-42達到3mg/ml之最終濃度且將小瓶置於37℃下歷經7天來製備原纖維Aβ1-42(BAchem)。使原纖維Aβ1-42偶合至含有表面結合羧甲基葡聚糖基質之CM5感應器晶片。使經生物素標記之單體Aβ1-42(Bachem)偶合至由與抗生蛋白鏈菌素共價連接之羧甲基葡聚糖基質組成之感應器晶片SA。通常使用操作緩衝液藉由連續稀釋來檢定4或5個濃度之mAb。自最低濃度開始進行注射，且以30μL/min之流動速率歷經3分鐘經過fc 1及2。流槽2未衍生化，且自fc 1減去反應以校正儀器雜訊及總體折射率改變。注射完成後，立即用操作緩衝液洗滌表面5分鐘。為自Aβ1-42原纖維移除剩餘結合抗體，藉由注射10mM NaOH脈衝進行表面再生。使用用於數值積分及整體分析之算法使用BIAevaluation 3.0來進行動力學分析。覆蓋針對注射不同濃度之分析物所得之曲線，且將基線調整至零。對於曲線擬合，將所有資料同時擬合成均勻複變隨機函數。
測定小鼠mACI-01-Ab7 C2抗體與類澱粉蛋白之結合相對較強。如表2中所證明，小鼠抗體mACI-01-Ab7 C2特異性結合固定Aβ1-42纖 維，其中平均締合常數(ka)為3.8×10-4M/s，解離常數(kd)為1.1×10-3s-1，且因此所得平均KD為3.5×10-8M。mACI-01-Ab7 C2與Aβ單體之締合類似或略快，其中平均ka為1.6×10-4M/s，但解離更快，KD為2.5×10-7M。
實例7：mACI-01-Ab7 C2單株抗體與類澱粉蛋白纖維之結合
為分析預形成纖維上之抗體之分子受點，進行陰性對比透射電子顯微法(TEM)(圖3a及3b)。
根據4、5，使mACI-01-Ab7 C2抗體與8nm膠體金偶合。對於類澱粉蛋白1-42(Aβ1-42)纖維之共培育，在室溫下將6.65μM纖維與經金標記之抗體以1：100之莫耳比率一起培育24h。隨後將5μl樣本在覆蓋派羅啶(parlodium)/C薄膜之新鮮輝光放電Cu柵格(200目)上培育45秒鐘，用水洗滌3次且用2%新鮮經稀釋且經過濾之乙酸鈾醯基酯洗滌1次。將樣本在2%乙酸鈾醯基酯中染色15-20秒鐘。吸去柵格上之過量著色劑且因此空氣乾燥。製備各樣本之3個柵格。在透射電子顯微鏡Hitachi 7000中分析柵格。
單株抗體mACI-01-Ab7 C2直接結合Aβ1-42纖維。有趣的是抗體未顯示相對於單纖維軸之對稱結合而是結合纖維網之分枝的特定區域而非所有區域。似乎抗體以分枝內之特定區域為目標。可能之解釋為僅存在於此特定分枝內之特定二級結構。此假設得到NMR資料的支持，NMR資料證明抗體誘導構形轉變且因此抗體之結合很可能視包含β-片狀結構之類澱粉蛋白纖維之構形而定。
實例8：藉由密度-梯度超速離心之分級分離
單株抗體抑制Aβ1-42纖維聚合及分解Aβ1-42纖維之性質藉由密度-梯度超速離心(Rzepecki等人，2004)(該方法係基於分佈不同尺寸之間的用抗體及不用抗體培育後所得之肽纖維的原理)隨後在預定梯度上進行SDS-PAGE沈積分析(OptiPrepTM)來研究。同時分析預形成Aβ纖維之總量、共培育抗體之分解及抑制肽聚集之性質及抗體與纖維之結合係此方法之明顯優點。
在分解檢定中分析所有對抗Aβ1-16(mACI-01-Ab7 C2)、Aβ1-16(△14)(mACI-02-Ab6)、Aβ1-15(mACI-24-Ab4)、Aβ22-35(mACI-11-Ab9)及Aβ29-40(mACI-12-Ab11)而產生之單株抗體，而僅研究單株抗體mACI-02-Ab6、mACI-24-Ab4及mACI-01-Ab7 C2之聚集抑制性質。
對於Aβ1-42聚集之抑制，將Aβ1-42單體與mAb以兩種不同莫耳比率(單體Aβ1-42高於mAb 30或100倍之莫耳比率)在Aβ最終濃度為50μM下一起培育。在37℃下培育24小時後，在不連續梯度之OptiprepTM上覆蓋樣本且在4℃下以259000g將管旋轉3小時。採集15個部分(各為140μL)，部分1為梯度頂部密度最小之部分，且部分15為梯度底部密度最大之部分。亦提取離心塊。藉由SDS-PAGE用銀染色來分析所收集之部分。抑制檢定之Aβ1-42濃度比分解檢定之Aβ1-42濃度小5倍，此降低類澱粉蛋白聚集動力學且確保在線性相內量測。
對於藉由與mAb共培育(以mAb+單體Aβ1-42 1：30及1：100之兩種不 同莫耳比率，Aβ最終濃度為246μM)而分解預形成Aβ1-42原纖維而言，將樣本在37℃下培育24小時。24小時後，將樣本藉由超速離心分級分離且藉由如上文及先前(Rzepecki等人，2004)所述之SDS-PAGE分離。
抑制Aβ 1-42 聚集之檢定
可證明在不添加mAb之情況下，Aβ肽在培育24小時後聚集，且大部分蛋白質出現在部分13-15中，此證明Aβ肽單體完全聚合。成功及顯著抑制聚集應產生較小纖維或聚合可溶類澱粉β(Aβ)蛋白，其應出現在較低密度之部分(10-13)中。確切而言，此帶之轉移可在含有mACI-01-Ab7 C2之聚集檢定中得到證明，該檢定顯示Aβ肽分佈在部分11、12及13中。
在第二實驗中證實此情況，其中mACI-01-Ab7 C2再次引起大部分帶(最強帶)自14轉移至13及進入部分14至離心塊中之帶顯著溶解。此意謂mACI-01-Ab7 C2顯示出較強抑制Aβ肽單體聚合成纖維之能力且顯示其與Aβ纖維之特異性結合(在部分13中)。
在使用抗體mACI-24-Ab4及mACI-02-Ab6時，進行類似觀察。不添加mAb之情況下，Aβ肽在培育24小時後聚集，且大部分蛋白質出現在部分13至離心塊(離心塊，在12中極少)中，此證明Aβ肽單體完全聚合。成功及顯著抑制聚集應產生較小纖維或聚合可溶類澱粉β(Aβ)蛋白，其應出現在較低密度之部分中。在聚集抑制檢定中，mACI-24-Ab4引起大部分帶(最強帶)自13轉移至11及12及進入部分13至離心塊中之帶顯著溶解，而mACI-02-Ab6引起帶自13轉移至10但額外完全抑制較大纖維之形式(在13至離心塊中分級分離)。此等資料表明mACI-24-Ab4及mACI-02-Ab6均顯示出較強抑制Aβ肽單體聚合成纖維之能力且顯示其與Aβ纖維之特異性結合(在部分11及12中)。
相比之下，含有mACI-11-Ab9(1：30之莫耳比率)之聚集檢定顯示 散佈在部分12-15與離心塊之間的較大聚集物。在mACI-12-Ab11(1：30之莫耳比率)存在下，聚集物出現在部分11-15及離心塊中，但最強信號在部分11及12中。此意謂mACI-01-Ab7 C2及mACI-24-Ab4均顯示出最強抑制Aβ肽單體聚合成纖維之能力。mACI-12-Ab11具有顯著低於mACI-01-Ab7 C2之抑制性質，為獲得此弱抑制活性，需要高3倍之莫耳比率。當與不能抑制Aβ肽纖維聚集之mACI-11-Ab9相比時，仍可觀察到輕微抑制。所有mAb均顯示出與Aβ纖維之特異性結合(對於mACI-01-Ab7 C2，在部分11+12中；對於mACI-11-Ab9，在部分12中且在13中較弱，對於mACI-12-Ab11，在部分11及12中)。
在所有抑制檢定中，在底部部分中偵測到肽。未結合mAb(37kDa、95kDa及大於120kDa)出現在上半部分梯度中(分別為部分3-9及4-8)。
Aβ 1-42 纖維分解之檢定
由於纖維不完全聚合，單獨Aβ1-42原纖維表明分佈於較廣範圍之部分中(11-15)。因此，證明抗體在與預形成纖維共培育時之成功及顯著之分解性質與聚集分析中相比較為困難。僅大部分纖維轉移至較低密度部分中但仍在單獨類澱粉蛋白部分之範圍內才表明分解活性；對單獨類澱粉蛋白而言，主要帶為部分12。當與單獨類澱粉蛋白相比時，以1：100之莫耳比率添加mACI-01-Ab7 C2未顯示類澱粉蛋白纖維轉移至較低密度部分(仍在部分11-15之間)，但部分範圍內之最強信號自12轉移至11。雖然非纖維不完全形成之最佳環境，但mACI-01-Ab7 C2顯示出較低但可偵測之分解活性。
相比之下，當類似於mACI-01-Ab7 C2以相同類澱粉肽：抗體莫耳比率培育時，預形成Aβ1-42原纖維與mACI-02-Ab6之共培育未顯示出帶轉移較低密度部分。僅當使用高3倍之1：30莫耳比率時，類澱粉蛋白纖維自12-15(無抗體共培育下之單獨類澱粉蛋白)轉移至部分11- 15。因此，似乎mACI-01-Ab7 C2具有略高於mACI-02-Ab6之分解性質。
偵測到對應於mAb之帶在下半部梯度部分中證明mACI-02-Ab6及mACI-01-Ab7 C2與Aβ1-42原纖維之結合(對兩mAb而言均為部分11至15)。
可在另一實驗中證實mACI-01-Ab7 C2之分解性質，其中可藉由在無抗體存在下Aβ1-42原纖維分佈於部分13至P(離心快)中來證明完全纖維聚合。在此，纖維轉移至較低密度部分表明抗體在與預形成纖維共培育成時之分解活性。以1：100之莫耳比率添加mACI-01-Ab7 C2顯示大部分類澱粉蛋白纖維自13轉移至12，且此外最低密度之帶自13轉移至11。因此，mACI-01-Ab7 C2亦顯示出較強的分解活性。
偵測到對應於mAb之帶在下半部梯度部分中證明mACI-01-Ab7 C2與Aβ1-42原纖維之結合(部分11至P)，而對應於mAb之帶在部分4至7中表明抗體未結合。
總結此等結果，可成功證明以類澱粉Aβ肽為目標之單株抗體mACI-01-Ab7 C2結合預形成纖維，且能夠在活體外抑制單體Aβ肽聚集成纖維且分解預形成纖維。
在使用mACI-24-Ab4時進行類似觀察。類似於聚集檢定，完全纖維聚合可由單獨Aβ1-42原纖維分佈於部分12至P(離心塊)中來證明。在此，纖維轉移至較低密度部分表明抗體在與預形成纖維共培育成時之分解活性。以1：100之莫耳比率添加mACI-24-Ab4顯示大部分類澱粉蛋白纖維自12轉移至11。因此，mACI-24-Ab4亦顯示出較強的分解活性。
實例9：評定藉由與mAb共培育對Aβ 1-42 長絲聚集之抑制及對預形成Aβ 1-42 長絲之分解的螢光檢定 BIS-ANS螢光檢定
為評定mAb之抑制性質，使用特定偵測單體或非纖維狀Aβ 1-42 長絲群體之BIS-ANS(LeVine,2002)螢光檢定。在螢光量測前，將Aβ1-42單體與緩衝液(用作對照)或mAb(mAb與Aβ1-42肽之莫耳比率為1：100)在37℃下一起預培育14小時。自動記錄相對螢光單位且將結果表示為相對於對照組之變化百分比。
當與對照組相比時，mACI-02-Ab6顯示出輕微的抑制能力(125.8±28.5%對100±29.5%)。mACI-01-Ab7 C2似乎具有較弱的活性(108.0±30.0%)，且對於mAb mACI-11-Ab9及mACI-12-Ab11(93.5±21.9%及73.2±47.7%)與對照組相比未觀察到提高。此結果證實超速離心資料，其中mACI-01-Ab7 C2顯示出大於比mACI-11-Ab9及mACI-12-Ab11之抑制能力。
實例10：硫代黃磺素T(Th-T)螢光檢定
為量測mAb之聚集抑制及分解性質，使用硫代黃磺素(Th-T)螢光檢定，其特異性結合原纖維Aβ1-42分子且繼而螢光發射強度與溶液中存在之Aβ1-42長絲之量相聯繫。
在螢光量測前，將Aβ1-42單體與緩衝液(對照)或mAb(mAb與Aβ1-42肽之莫耳比率為1：100)在37℃下一起預培育48小時。自動記錄相對螢光單位且將結果表示為相對於對照組之變化百分比。
當與對照組相比時，mACI-01-Ab7 C2顯示出顯著的抑制能力(11.03±20.7%對100±40.5%)。此結果證實超速離心資料，其中mACI-01-Ab7 C2顯示出抑制能力。
為量測mAb之分解性質，使用硫代黃磺素(ThT)螢光檢定，其特異性結合原纖維Aβ1-42分子且繼而螢光發射強度與溶液中存在之Aβ1-42長絲之量相聯繫。在量測前，歷經7天預形成Aβ纖維(37℃下，在PBS中，pH 7.1)，且接著將其與mAb或緩衝液(陰性對照)以1：100之莫耳比率(mAb：Aβ1-42)在37℃下共培育24小時。以ELISA微量滴定盤讀取器 自動記錄相對螢光單位且將結果表示為相對於對照組之變化百分比。
與超速離心資料一致，mACI-01-Ab7 C2亦在兩個獨立實驗中在Th-T分解測試中顯示出最佳性質，其中分解能力分別以35±11%及64.57±13.58%(與100.0±15.37%相比)優於對照組。
在Th-T檢定中，mACI-24-Ab4亦顯示出顯著的分解性質(62.99±10.34%對100.0±10.03%，p<0.0001)。
mACI-11-Ab9活性略低(28±14%)，而ACI-02-Ab6及ACI-12-Ab11未顯示顯著的分解性質(分別為17±12%及13±11%)。
當總結超速離心及螢光檢定時，mACI-01-Ab7 C2、mACI-01-Ab6及mACI-24-Ab4均在離心實驗中顯示出抑制纖維聚集及減短預形成Aβ1-42長絲之雙功能能力，此得到螢光檢定的證實。此外，離心實驗證明mAb與類澱粉蛋白纖維之特異性結合。
當與mACI-01-Ab7 C2相比時，甚至高3倍濃縮，在超速離心中mACI-11-Ab9亦顯示出顯著較低的抑制能力，此得到BIS-ANS檢定的證實。對於分解分析，在離心分析及ThT檢定中mACI-01-Ab7 C2均顯示出減短預形成Aβ1-42長絲之性質。在離心實驗中高3倍濃縮之mACI-02-Ab6亦在兩檢定中呈陽性但在離心實驗中更強。
根據上文結果顯然mACI-01-Ab7 C2及mACI-02-Ab6係僅有的在與Aβ1-42長絲相互作用，抑制預形成纖維聚集及分解預形成纖維之雙功能性方面顯示出活性的抗體。
實例11：mACI-01-Ab7 C2單株抗體與 13 C標記之β類澱粉1-42肽相互作用之NMR及螢光表徵
為評估mAb溶解預形成纖維或抑制纖維形成之可能機制，進行U-13C Tyr10及Val12標記之β類澱粉1-42肽之Th-T螢光檢定與固態NMR之間的並進實驗(圖4)。因此，此研究之目標係藉由固態NMR光譜法追蹤β類澱粉肽中及在單株抗體存在下之β片狀轉變且將此與由Th-T螢光 檢定量測之分解能力進行直接比較。
固相NMR光譜法不僅偵測二級結構之轉變，而且亦定位支配結構轉變之Aβ1-42肽結構域。固態NMR已證明其對此問題之適用性，因為其有助於Aβ1-42纖維之結構測定(Petkova等人，2004,Petkova等人，2002)。詳言之，13Cα及13Cβ化學位移與二級結構之間的相關性(Cornilescu等人，1999,Luca等人，2001,Iwadate等人，1999)係測試肽內二級結構改變之有效工具。
經標記之肽(包括在12位經13C預標記之纈胺酸(12Val)及在10位經13C預標記之酪胺酸(10Tyr))的合成藉由Fmoc合成方案來進行。肽之鑑別及純度由MALDI質譜法證實。使用經標記之β類澱粉肽(1-42)藉由將肽溶液在PBS緩衝液中於37℃下培育1週來產生纖維。主要問題為類澱粉β肽在PBS緩衝液中較差之溶解性，其可以如下方式解決：以微量氨使PBS緩衝液之pH值暫時增加以溶解類澱粉β肽。利用氨之揮發性特徵藉由在更大PBS浴存在下培育樣本來重新獲得PBS緩衝液之原pH值。
為量測β片狀破壞抗體之作用，對於NMR及Th-T檢定均將纖維溶液與抗體在37℃下一起培育24小時。為進行即時比較，將相同溶液之等分試樣用於Th-T螢光檢定且凍乾剩餘溶液以備NMR量測。
首先藉由將mACI-01-Ab7 C2與預形成13C標記之類澱粉β纖維共培育使用Th-T螢光檢定來分析其分解能力後，可顯示mAb將纖維分解38%。接著進行NMR光譜分析。
為研究PBS(對照)與mAb培育之間的差異，使用PeakFit解卷各光譜(http：//www.systat.com/products/PeakFit)。藉由使用混合Lorentzian/Gaussian擬合程序使該等良好匹配，其結果顯示於圖4中。結果總結於表3中，但最明顯的差異是擬合30-33ppm附近之雙峰所需的兩群體之積分強度。c33ppm處之峰對應於纖維之β片狀構形，同時 30ppm處之峰係無規捲曲構形之結果。在PBS中培育之樣本顯示大部分β片狀構形中之標記(81.7%)(圖2頂部)，當樣本與mACI-01-Ab7 C2一起培育時，β片狀構形中之標記減少(53.5%)(圖4底部)。如Val 12 Cβ研究所測定，相對於無規捲曲構形β片狀構形之總量減少約35%，且因此與使用螢光所量測之減少總量接近一致。
如藉由密度梯度超速離心實驗及藉由Th-T螢光檢定所證明，總結此等結果，可成功證明以類澱粉Aβ肽之N-末端1-16區為目標之單株抗體mACI-01-Ab7 C2結合預形成纖維且能夠在活體外抑制單體Aβ肽聚集成纖維且分解預形成纖維。此抗體除結合預形成纖維外，亦可誘導Val12之β片狀多數構形轉變成無規捲曲二級構形環境。此可能係纖維可經結合單株mACI-01-Ab7 C2抗體而溶解的可能機制，亦因為Val 12 Cβ峰之詳細分析顯示β片狀組份減少35%，此與螢光資料接近一致(38%)。
實例12：mACI-01-Ab7 C2對類澱粉蛋白纖維之功能性 12.1 結合mACI-01-Ab7 C2抗體後Aβ1-42纖維構形之改變及分解之引發
為評估抗體能夠分解預形成β類澱粉蛋白(Aβ1-42)纖維之機制，進行硫代黃磺素-T(Th-T)螢光檢定(量測分解)與U-13C酪胺酸10及纈胺酸12標記之Aβ1-42肽之固態核磁共振(NMR)(分析二級構形)的並進比較。抗體溶解35.4%之預形成Aβ1-42纖維且同時誘導二級構形自β片狀轉變成無規捲曲。相對於無規捲曲β片狀構形之總量減少約35%，且因此與使用螢光Th-T檢定所量測之減少總量接近一致。此等資料表明抗體結合引發二級結構轉變，其可能引起β片狀之平行分子間排列不穩定，從而使伸長纖維斷裂成較小片段。
12.2 mACI-01-Ab7 C2抗體之構形依賴性結合親和力
由於在科學文獻中熟知一部分抗體-抗原結合能量可用以能量依賴性改變抗原構形6，因此進行mACI-01-Ab7 C2抗體對整個Aβ1-42蛋白質與對9個胺基酸長度之較小肽(包含抗體之抗原決定基)之結合親和力的比較實驗。為進行此比較，藉由ELISA使用經生物素標記之覆蓋mACI-01-Ab7 C2抗原決定基之完整胺基酸序列(Aβ1-42序列之胺基酸13-21，由Mimotopes製造及購自ANAWA Trading SA)之肽及經生物素標記之完整Aβ 1-42肽(Bachem)來分析抗體mACI-01-Ab7 C2之親和力。根據製造商(Mimotopes)說明進行分析。抗體與包含其特異性抗原決定基(Aβ1-42序列之胺基酸13-21)之肽的結合親和力比與整個Aβ 1-42蛋白的結合親和力高38.40%。因此，表明結合親和力能量之差用於類澱粉蛋白二級構形之能量消耗性轉變以在對於抗體相互作用而言更可接受之位置呈現抗原。此可解釋為何抗體對於天然抗原(整個類澱粉蛋白)之親和力低於對於經分離亞單位之親和力。
實例13：mACI-01-Ab7 C2與不同類別之類澱粉蛋白的構形特異性結合
為評估mACI-01-Ab7 C2對不同階段聚合類澱粉蛋白(單體及聚合可溶類澱粉蛋白，尤其是類澱粉β(Aβ)蛋白及原纖維類澱粉蛋白)之特 異性，進行用此等不同階段聚合β類澱粉蛋白塗佈之ELISA。根據經修改之由7公開之方法來製備單體，根據8製備聚合可溶類澱粉蛋白，尤其是類澱粉蛋白β(Aβ)，而纖維藉由將類澱粉蛋白(Bachem,Switzerland)在Tris/HCl(pH 7.4)中以1μg/μl之最終濃度在37℃下培育5天隨後進行離心步驟(以10,000rpm，5分鐘)來製備。接著將類澱粉蛋白聚合物以55μg/ml之最終濃度塗佈在ELISA盤上，且藉由使用經鹼性磷酸鹽標記之抗小鼠IgG單株抗體(Jackson ImmunoResearch Laboratories,Inc.)來進行結合親和力ELISA。抗體與聚合可溶類澱粉β(Aβ)蛋白之結合親和力(IC50=2.53nM)高於與纖維之結合親和力(IC50=5.27nM)且與單體之結合親和力最低(IC50=8.3nM)。此等資料表明抗體結合除受其抗原決定基影響外還受不同類澱粉蛋白聚集物之構形影響。
實例14：單株抗體mACI-01-Ab7 C2之抗原決定基定位
藉由ELISA使用三種不同肽文庫來進行單株抗體mACI-01-Ab7 C2之抗原決定基定位。一個文庫包含總共33個經生物素標記之覆蓋Aβ 1-42之完整胺基酸(aa)序列(由Mimotopes製造及購自ANAWA Trading SA)之肽，第二文庫含有經生物素標記之使用來自第一肽文庫之肽12(Aβ之aa12-20)且用丙胺酸取代序列中各胺基酸之肽(參見下表4)，且第三文庫含有經生物素標記之肽13、14或15(Aβ之aa 13-21、14-22或15-23)且在各狀況下將最後胺基酸取代成丙胺酸或對於已為丙胺酸之aa21而言取代成甘胺酸(參見下表5)。使用經生物素標記之完整Aβ 1-42肽作為陽性對照(Bachem)。根據製造商(Mimotopes)說明進行抗原決定基定位。簡言之，將經抗生蛋白鏈菌素塗佈之培養盤(NUNC)用PBS中0.1% BSA在4℃下阻斷隔夜。用PBS-0.05% Tween 20洗滌後，將培養盤用來自文庫之不同肽在室溫下塗佈1小時，該等肽在PBS中0.1%BSA、0.1%疊氮化鈉中稀釋至10μM之最終濃度。洗滌 後，將培養盤與mACI-01-Ab7 C2抗體或同型對照小鼠IgG2b抗體在室溫下一起培育1小時，該抗體在PBS中2%BSA、0.1%疊氮化鈉中稀釋至10μg/ml。再次洗滌培養盤且將其與鹼性磷酸酯酶結合之山羊抗小鼠IgG在室溫下一起培育1h。最終洗滌後，將培養盤與磷酸酯酶基質(pNPP)一起培育且在405nm下使用ELISA平板讀取器讀數。
表明單株抗體mACI-01-Ab7 C2特異性結合第一肽文庫之肽12、13、14及15。此等4個肽包含Aβ 1-42之aa 12-20(VHHQKLVFF)、13-21(HHQKLVFFA)、14-22(HQKLVFFAE)及15-23(QKLVFFAED)，此表明抗原決定基位於Aβ之12-23區域中。使用具有丙胺酸取代之第二文庫判定對於與肽12-20(VHHQKLVFF)結合而言之關鍵aa。當aa 16、17、19或20經丙胺酸取代時，mACI-01-Ab7 C2抗體之結合完全喪失，此表明此等aa對抗體與Aβ之結合係絕對關鍵的。當aa 15及18經取代時，mACI-01-Ab7 C2抗體之結合部分喪失。
當aa 14經丙胺酸取代時，結合亦幾乎完全喪失，此表明aa 14對結合亦非常重要。
最後，使用第三文庫用判定aa 21、22或23對抗原決定基結合是否係關鍵。當aa 23經丙胺酸取代時，抗體與aa 15-23之結合降低，此表明aa 23對結合亦為重要的。當aa 21經甘胺酸取代時，結合部分喪失，且當aa 22經丙胺酸取代時，結合輕微喪失。
實例15：用mACI-01-Ab7 C2被動接種對單轉殖基因hAPP小鼠腦中類澱粉蛋白負荷之影響
為評定活體內mACI-01-Ab7 C2單株抗體結合及將可溶類澱粉蛋白清除腦之能力，使用6月齡單hAPP小鼠9(性別及年齡匹配)進行不同劑量之被動免疫研究。在研究結束時藉由採集動物之腦且藉由進行Aβ 1-40及Aβ 1-42特異性ELISA(TGC,Germany)來分析可溶類澱粉蛋白負荷。
以一週時間間隔，每組8-13隻動物接受兩次200μl PBS中100、300及1000μg單株抗體之注射，而使用單獨PBS注射作為對照。第二次注射後一天，處死動物以生化分析可溶類澱粉蛋白部分。為定量腦 勻漿之可溶部分及/或腦脊髓液(CSF)中人類Aβ 1-40及人類Aβ 1-42之量，使用可購得之酶聯結免疫吸附劑檢定(ELISA)套組(h類澱粉蛋白β 40或β 42 ELISA，高靈敏性，TGC,Switzerland)。根據製造商之方案進行ELISA。簡言之，在無蛋白質結合能力之96孔聚丙烯培養盤(Greiner,Germany)中製備標準物(合成Aβ 1-40或Aβ 1-42之稀釋液)及樣本。在樣本稀釋劑中製備最終濃度為1000、500、250、125、62.5、31.3及15.6pg/ml之標準稀釋液及樣本，裝配ELISA套組，最終體積達60μl。由於類澱粉蛋白含量隨小鼠年齡增長而增加且由於實際評估要求樣本讀數在標準曲線之線性部分內，因此用於Aβ 40分析之樣本經2：3稀釋，用於Aβ 42分析之樣本不經稀釋。
將樣本、標準物及空白(50μl)添加至抗Aβ塗佈之聚苯乙烯培養盤(捕捉抗體選擇性識別抗原之C-末端)，另外添加具有選擇性抗Aβ抗體結合物(經生物素標記之偵測抗體)，且在4℃下培育隔夜以形成抗體-類澱粉蛋白-抗體-複合物。第二天，添加抗生蛋白鏈菌素-過氧化物酶-結合物，隨後30分鐘後添加TMB/過氧化物混合物，導致基質轉變成有色產物且藉助於光度測定法使用具有450nm濾光片之ELISA讀取器量測顏色強度。樣本Aβ含量之定量藉由將吸光率與以合成Aβ 1-40或Aβ 1-42形成之標準曲線相比較來獲得。將資料表示為相對於平均對照值之個別改變(相對於對照組之百分比)。
當藉由兩次以300μg之劑量腹膜內注射單株抗體ACI-01-Ab7 C2對單hAPP小鼠進行被動免疫時，腦勻漿中Aβ 40之總量顯著減少且Aβ 42總量之減少大致不顯著(Aβ 40：-27.3±13.9%，其中p<0.05；Aβ 42：-8.6±22.4，其中p=0.56；非配對Student T檢驗)，而100及1,000μg未達成顯著性。用100μg免疫導致腦勻漿中Aβ 40及Aβ 42增加(Aβ 40：32.3±36.8%；Aβ 42：38.3±51.4%)，而用1,000μg治療引發類澱粉蛋白負荷降低之正確趨勢且可在每組動物數量增加之情況下潛在有 效(Aβ 40：-2.2±26.0%；Aβ 42：-9.3±15.9%)。此等資料證明在急性免疫方案中抗體mACI-01-Ab7 C2能夠減少此鼠科動物AD模型腦中之可溶Aβ總量。有趣的是似乎劑量關係為瞬變的，但必須進行更大組之更多研究來獲得重要資料。
實例16：慢性被動投與mACI-01-Ab7 C2對雙轉殖基因hAPPxPS1小鼠斑塊負荷之影響
為評定活體內mACI-01-Ab7 C2單株抗體結合及減少腦中類澱粉蛋白斑之能力，使用3.5月齡雙轉殖基因hAPPxPS1小鼠10(性別及年齡匹配)進行4個月長之慢性被動免疫研究。在研究結束時，藉由動物腦之組織化學藉由結合硫代黃磺素S來分析類澱粉蛋白斑。
15隻轉殖基因動物接受16次PBS中500μg單株抗體的每週注射。給15隻動物單獨注射PBS，用作對照組。所有注射均腹膜內給與。處死時，將小鼠麻醉且用生理血清在4℃下經心臟沖洗以自腦血管中移除血液。隨後將腦自顱中移除，且將後腦與前腦以冠狀面/額狀面切割分離。藉由使用中線矢狀切割將前腦均勻分成左半球及右半球。將一半球後固定於組織學所用之4%聚甲醛中隔夜。切割矢狀振動切片機切片(40μm)以進行自浮培育且將其儲存在4℃下直至在PBS中用0.1%疊氮化鈉染色。對於緻密斑塊，將5個不同含量之切片用硫代黃磺素S染色。將所有所用動物之切片隨機染色且盲蔽定量。使用裝備Sony DXC-9100P相機之Leica DMR顯微鏡獲取影像且使用電腦以Leica Q-Win軟體進行分析。在整個影像獲取過程中，顯微鏡之光強度及聚光器設置保持恆定。使所有所得影像經歷相同電腦次常式處理以使研究者偏差降至最低。在整個分析期間均一施加密度分割定限。選擇岬下腳區域用於自動定量硫代黃磺素S染色中之類澱粉蛋白負荷。
當如上文所述對雙hAPP/PS1小鼠進行被動免疫4個月時，岬下腳 區域中總的斑塊負荷及斑塊量可顯著減少。可達成31%之顯著斑塊負荷減少(mACI-01-Ab7 C2：1.11±0.21%及對照：1.61±0.35%；p=0.003，Mann-Whitney U檢驗)，同時慢性被動免疫將斑塊量顯著減少19%(mACI-01-Ab7 C2：8.73±1.36及對照：10.78±1.36；p=0.006，Mann-Whitney U檢驗)，此表明發生略低於斑塊分裂之程度的斑塊溶解。
實例17：用mACI-01-Ab7 C2被動接種對單轉殖基因hAPP小鼠記憶能力之影響
為分析活體內mACI-01-Ab7 C2抗體改變或增加認知功能之能力，使用9月齡單hAPP小鼠(性別及年齡匹配)進行被動免疫研究。在免疫期結束時以新物體識別任務(ORT)量測非空間認知。
每組12隻動物接受兩次腹膜內注射200μl PBS中400μg單株抗體，而使用單獨PBS注射作為對照。第二次注射後一天，在新物體識別任務(ORT)12、13中研究認知能力。對於ORT起動，將小鼠置於行為場所中10分鐘且面對新的未知物體。記錄探索時間。三小時後，將相同動物重新置於相同場所中歷經第二段時間，但面對先前已探索之舊物體及另外之新物體。再記錄對兩種物體的探索時間，且所得認知指數根據對新物體之探索時間相對於總探索時間之比率來計算且表示為相對於對照組之比例變化。
用mACI-01-Ab7 C2被動接種導致單轉殖基因AD小鼠之認知記憶能力顯著增加(mACI-01-Ab7 C2：131.6±9.1%及對照：100.0±9.2%，其中p<0.05；非配對Student T檢驗，且各組n=12)。
寄存：
以下融合瘤細胞株在布達佩斯條約(Budapest Treaty)之條款下寄存於"Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH(DSMZ),Braunschweig,Mascheroder Weg 1 B,38124 Branuschweig"。
文獻
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上述引文中Sambrook等人
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WO 2004/058258
WO96/1359
WO96/29605
[序列簡單說明]
SEQ ID NO：1：抗原肽Aβ1-15
SEQ ID NO：2：抗原肽Aβ1-16
SEQ ID NO：3：抗原肽Aβ1-16(△14)
SEQ ID NO：4：抗原肽Aβ22-35
SEQ ID NO：5：抗原肽Aβ29-40
SEQ ID NO：6：抗原肽Aβ1-17
SEQ ID NO：7：小鼠C2輕鏈可變區之胺基酸序列
SEQ ID NO：8：小鼠C2重鏈可變區之胺基酸序列
SEQ ID NO：9：小鼠C2輕鏈可變區之核苷酸序列
SEQ ID NO：10：包括信號序列之小鼠C2輕鏈可變區之核苷酸序列
SEQ ID NO：11：小鼠C2重鏈可變區之核苷酸序列
SEQ ID NO：12：包括信號序列之小鼠C2重鏈可變區之核苷酸序列
SEQ ID NO：13-20：Aβ肽上抗原決定區之胺基酸序列變體
SEQ ID NO：21：小鼠C2輕鏈之胺基酸序列
SEQ ID NO：22：小鼠C2重鏈之胺基酸序列
<110> 瑞士商Ac免疫公司
<120> 單株抗體
<130> L3017 PCT
<140> 095146548
<141> 2006-12-12
<150> EP 05027092.5
<151> 2005-12-12
<150> EP 06014729.5
<151> 2006-07-14
<150> EP 06020766.9
<151> 2006-10-02
<160> 22
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
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<220>
<223> 抗原肽Aß1-16
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<211> 15
<212> PRT
<213> 人類
<220>
<223> 抗原肽Aß1-16(△14)
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<213> 人類
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<223> 抗原肽Aβ29-40
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<213> 人類
<220>
<223> 抗原肽Aβ1-17
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<213> 小鼠
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<212> PRT
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<212> PRT
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<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 22

Claims (28)

  1. 一種結合至類澱粉蛋白β之人化抗體或其功能部分，其中該抗體為IgG1，且其包含：(i)人化形式之輕鏈可變區(LCVR)，其中該LCVR包含SEQ ID NO：7所示之胺基酸序列；及(ii)人化形式之重鏈可變區(HCVR)，其中該HCVR包含SEQ ID NO：8所示之胺基酸序列。
  2. 一種結合至類澱粉蛋白β之人化抗體或其功能部分，其中該抗體為IgG4，且其包含：(i)人化形式之輕鏈可變區(LCVR)，其中該LCVR包含SEQ ID NO：7所示之胺基酸序列；及(ii)人化形式之重鏈可變區(HCVR)，其中該HCVR包含SEQ ID NO：8所示之胺基酸序列。
  3. 一種組合物，其包含如請求項1或2之抗體或其功能部分。
  4. 如請求項3之組合物，其進一步包含醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
  5. 如請求項4之組合物，其包含治療有效量之該抗體或其功能部分。
  6. 如請求項3至5中任一項之組合物，其係用於治療由類澱粉蛋白或類澱粉樣蛋白引起或與其相關之疾病或病症。
  7. 如請求項6之組合物，其中該疾病或病症係選自繼發性澱粉樣變性病、與年齡相關之澱粉樣變性病、神經障礙症，以認知記憶能力損失為特徵之疾病或病狀、輕度認知障礙(MCI)、路易體性癡呆、唐氏症候群、遺傳性腦出血併發澱粉樣變性病(荷蘭型)、關島帕金森-癡呆綜合症、基於或相關於類澱粉樣蛋白之疾病、 進行性核上麻痹、多發性硬化症、庫賈氏病、帕金森氏病、HIV相關之癡呆、ALS(肌萎縮性側索硬化)、包涵體肌炎(IBM)、成年發病型糖尿病、老年心臟澱粉樣變性病、內分泌腫瘤及黃斑退化。
  8. 如請求項3至5中任一項之組合物，其係用於治療或減輕阿茲海默氏病之效應。
  9. 一種如請求項1或2之抗體或其功能部分或如請求項3至5中任一項之組合物之用途，其係用於製備治療或減輕由類澱粉蛋白或類澱粉樣蛋白引起或與其相關之疾病及病症之效應的藥劑。
  10. 如請求項9之用途，其中該疾病及病症為繼發性澱粉樣變性病、與年齡相關之澱粉樣變性病、神經障礙症、以認知記憶能力損失為特徵之疾病或病狀、輕度認知障礙(MCI)、路易體性癡呆、唐氏症候群、遺傳性腦出血併發澱粉樣變性病(荷蘭型)、關島帕金森-癡呆綜合症、基於類澱粉樣蛋白或與其相關之疾病、進行性核上麻痹、多發性硬化症、庫賈氏病、帕金森氏病、HIV相關之癡呆、ALS(肌萎縮性側索硬化)、包涵體肌炎(IBM)、成年發病型糖尿病、老年心臟澱粉樣變性病、內分泌腫瘤或黃斑退化。
  11. 一種如請求項1或2之抗體或其功能部分或如請求項3至5中任一項之組合物之用途，其係用於製備治療阿茲海默氏病之藥劑。
  12. 一種如請求項1或2之抗體或其功能部分或如請求項3至5中任一項之組合物之用途，其係用於製備用於減少罹患導致腦中斑塊負荷增加之疾病或病狀的動物腦中之斑塊負荷的藥劑。
  13. 如請求項12之用途，其中該腦中之斑塊負荷減少至少20%、至少25%、至少30%或在30%以上。
  14. 一種如請求項1或2之抗體或其功能部分或如請求項3至5中任一 項之組合物之用途，其係用於製備用於減少罹患導致腦中斑塊負荷增加之疾病或病狀的動物腦中之斑塊量的藥劑。
  15. 如請求項14之用途，其中該腦中之斑塊量減少至少10%、至少15%或至少20%。
  16. 一種如請求項1或2之抗體或其功能部分或如請求項3至5中任一項之組合物之用途，其係用於製備用於減少罹患導致腦中可溶類澱粉蛋白β濃度增加之疾病或病狀的動物腦中之可溶類澱粉蛋白β總量的藥劑。
  17. 一種如請求項1或2之抗體或其功能部分或如請求項3至5中任一項之組合物之用途，其係用於製備用於保持或增加顯示類澱粉蛋白相關疾病或病狀之動物之認知記憶能力的藥劑。
  18. 如請求項17之用途，其中該抗體或其功能部分或包含該抗體或其功能部分之該組合物係以治療有效量投與。
  19. 如請求項12至18中任一項之用途，其中該動物為哺乳動物。
  20. 如請求項19之用途，其中該哺乳動物為人類。
  21. 一種診斷患者之類澱粉蛋白相關疾病或病狀的活體外方法，該方法包含偵測抗體或其功能部分與樣本中類澱粉蛋白β之抗原決定基的免疫特異性結合，其包括以列步驟：(a)使懷疑含有類澱粉蛋白β之該樣本與如請求項1或2之抗體或其功能部分接觸；(b)使該抗體或其功能部分與該類澱粉蛋白β結合以形成免疫複合物；(c)偵測該免疫複合物之形成；及(d)將該免疫複合物之存在或不存在與該樣本中類澱粉蛋白β之存在或不存在相聯繫。
  22. 一種測定一組織中類澱粉蛋白生成斑塊負荷程度之活體外方 法，該方法包含：(a)獲得代表所研究之該組織之特徵的樣本；(b)使用如請求項1或2之抗體或其功能部分測試該樣本中類澱粉蛋白β之存在；(c)測定該抗體或其功能部分與類澱粉蛋白β結合所形成免疫複合物的量；及(d)計算該組織中之斑塊負荷。
  23. 如請求項22之方法，其中該免疫複合物之存在或不存在與類澱粉蛋白β之存在或不存在相聯繫。
  24. 一種診斷患者之類澱粉蛋白相關疾病或病狀之頃向的活體外方法，該方法包含偵測抗體或其功能部分與樣本中類澱粉蛋白β之抗原決定基的免疫特異性結合，包括以列步驟：(a)使懷疑含有類澱粉蛋白β之該樣本與如請求項1或2之抗體或其功能部分接觸；(b)使該抗體或其功能部分與類澱粉蛋白β結合以形成免疫複合物；(c)偵測該免疫複合物之形成；(d)將該免疫複合物之存在或不存在與該樣本中類澱粉蛋白β之存在或不存在相聯繫；及(e)將該免疫複合物之量與正常對照值比較；其中與正常對照值相比，該免疫複合物之量增加表示該患者罹患類澱粉蛋白相關疾病或病狀或有發展成類澱粉蛋白相關疾病或病狀之危險。
  25. 一種用於監視在使用如請求項1或2之抗體或其功能部分或如請求項3至5中任一項之組合物治療後患者之微小殘留病的活體外方法，其中該方法包含： (a)使懷疑含有類澱粉蛋白β之該樣本與如請求項1或2之抗體或其功能部分接觸；(b)使該抗體或其功能部分與該類澱粉蛋白β結合以形成免疫複合物；(c)偵測該免疫複合物之形成；(d)將該免疫複合物之存在或不存在與該樣本或特定身體部分或區域中類澱粉蛋白β之存在或不存在相聯繫；及(e)將該免疫複合物之量與正常對照值比較；其中與正常對照值相比，該免疫複合物之量增加表明該患者仍患有微小殘留病。
  26. 一種用於預測患者對使用如請求項1或2之抗體或其功能部分或如請求項3至5中任一項之組合物之治療之反應的活體外方法，該方法包含：(a)使懷疑含有類澱粉蛋白β之該樣本與如請求項1或2之抗體或其功能部分接觸；(b)使該抗體或其功能部分與該類澱粉蛋白β結合以形成免疫複合物；(c)偵測該免疫複合物之形成；(d)將該免疫複合物之存在或不存在與該樣本中類澱粉蛋白β之存在或不存在相聯繫；及(e)將該治療開始之前與之後的該免疫複合物之量進行比較；其中該免疫複合物之量減少說明該患者具有對該治療產生反應之高潛力。
  27. 一種用於偵測及診斷類澱粉蛋白相關疾病及病狀之測試套組，其包含如請求項1或之抗體或其功能部分。
  28. 如請求項27之測試套組，其包含容納該抗體或其功能部分之容 器及針對使用該抗體或其功能部分以達成結合類澱粉蛋白β而形成免疫複合物之目的及偵測該免疫複合物之形成以便將該免疫複合物之存在或不存在與類澱粉蛋白β之存在或不存在相聯繫的說明書。
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