TWI485149B - ５－胺基－４－羥基－戊醯基醯胺 - Google Patents

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Bengt Bertil Samuelsson
Wim Bert Griet Schepens
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Joerg Kurt Wegner
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Description

5-胺基-4-羥基-戊醯基醯胺
本發明係有關具有HIV(人類免疫缺乏病毒)複製抑制性質之5-胺基-4-羥基-戊醯基醯胺、其製備及包含這些化合物之醫藥組成物。
最初，HIV感染之治療由用核苷衍生物之單一治療組成且雖然在抑制病毒複製方面成功，但這些藥物由於抗藥性菌株的出現而很快地喪失其效力。顯然，高突變率結合快速複製成為HIV之抗病毒治療的特定挑戰性目標採用數種抗HIV劑的組合治療改良治療的結果。現在照料的標準為所謂的HAART(高活性抗反轉錄病毒治療)，其提供很有效且持續的病毒抑制。HAART典型地包括核苷或核苷酸反轉錄酶抑制劑(分別為NRTIs或NtRTIs)與非核苷反轉錄酶抑制劑(NNRTI)或蛋白酶抑制劑(PI)的組合。目前用於抗反轉錄病毒治療的指引推薦該三重組合治療方案，即使是對於初步治療。雖然HAART能夠抑制HIV達檢測不到的程度，但由於順從性問題會出現抵抗。也已顯示抵抗性病毒轉至新感染者，造成嚴重限制這些非藥物(drug-naive)病人的治療選項。
因此持續需要可用作抗HIV藥物之新穎且有效的化合物。特別地，需要在抗野生型病毒之活性方面更有效，且亦可對抗突變株(特別是對目前核准的蛋白酶抑制劑所選定的突變菌株)之另外的HIV蛋白酶抑制劑。需要在其藥物動力學輪廓方面為有利的，特別是顯示減少血漿蛋白質結合之蛋白酶抑制劑。
本發明旨在提供具有HIV複製抑制性能之特別新穎系列的5-胺基-4-羥基-戊醯基醯胺。
本發明之化合物在結構、藥理活性及/或藥理效力上與先前技藝化合物不同。頃發現它們不僅抗野生型病毒非常有效且亦可抗突變菌株，特別是抗已變為抗一或多種已知蛋白酶抑制劑的菌株，該等菌株係稱為抗藥或抗多藥HIV菌株。
因此，一方面，本發明係有關式I之化合物，包括其立體化學異構形式，其可以式I表示：，其中R1 為鹵基、C1-4 烷氧基、三氟甲氧基；R2 為下式之基團：
R3 為下式之基團：
R4 為下式之基團：
n為0或1；各A獨立為CH或N；R5 及R6 獨立為氫、C1-4 烷基或鹵基；R7 為C1-4 烷基或C1-4 烷氧基C1-4 烷基；R8 為C1-4 烷基或C1-4 烷氧基C1-4 烷基；各R9 獨立為C1-4 烷基、環丙基、三氟甲基、C1-4 烷氧基或二甲胺基；R10 為氫、C1-4 烷基、環丙基、三氟甲基、C1-4 烷氧基或二甲胺基；R11 為氫或C1-4 烷基；其醫藥上可接受的加成鹽類和醫藥上可接受的溶劑合物。
每當使用於分子的片段或基團，具有星號之鍵(－*)表示連接該片段或基團與分子的剩餘部分之鍵。
如使用在本文中，C1-4 烷基作為基團或基團之部分定義具有從1至4個碳原子之直鏈或支鏈飽和烴基諸如甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、1-丁基、2-丁基、2-甲基-丙基、第三丁基。C1-4 烷基中感興趣者為C1-3 烷基或C1-2 烷基；C1-3 烷基定義具有從1至3個碳原子之直鏈或支鏈飽和烴基；C1-2 烷基定義甲基或乙基。
術語「鹵基」一般為氟基、氯基、溴基或碘基，特別是氟基或氯基。
每當基團發生於本文中所指定之式I化合物或在式I化合物之任何子群的定義中，該基團獨立地如上述在式I化合物之定義或如下述所指定的更多限制之定義中所指定。
應注意在用於定義之任何分子部分的基團位置可能在該部分的任何地方，只要其為化學穩定的。例如基R1 可在其所連接之苯基的任何位置上。
當任何變數(例如鹵素、C1-4 烷基)在任何部分中發生超過一次時，各定義為獨立的。本文中所指示基團之任何限制定義表示可適用於式I化合物之群組以及本文中所定義或所提及之任何子群。從取代基進入環系統的畫線指示可連接至任何適當環原子之鍵。
醫藥上可接受的加成鹽形式，其可形成本發明之化合物，習知上可使用適當酸類，諸如，例如，無機酸類諸如氫鹵酸類，例如：鹽酸或氫溴酸、硫酸、半硫酸、硝酸、磷酸、等等酸類；或有機酸類諸如，例如，乙酸、天門冬胺酸、十二基-硫酸、庚酸、己酸、菸鹼酸、丙酸、羥基乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、順丁烯二酸、反丁烯二酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、環拉酸(cyclamic)、水楊酸、對-胺基-水楊酸、雙羥萘酸、等等酸類製備。反之，該酸加成鹽形式可藉由用適當鹼處理而轉化成游離鹼形式。
含有酸性質子之式I化合物可藉由以適當有機及無機鹼處理而轉化成其醫藥上可接受的金屬或胺加成鹽形式。適當鹼鹽形式包含例如銨鹽類、鹼金屬及鹼土金屬鹽類(例如鋰、鈉、鉀、鎂、鈣鹽、等等)、與有機鹼類例如一級、二級和二級脂族和芳族胺類諸如甲胺、乙胺、丙胺、異丙胺、四種丁胺異構物、二甲胺、二乙胺、二乙醇胺、二丙胺、二異丙胺、二正丁胺、吡咯啶、哌啶、嗎福啉、三甲胺、三乙胺、三丙胺、啶、吡啶、喹啉和異喹啉、苄星、N-甲基-D-還原葡糖胺、2-胺基-2-(羥甲基)-1,3-丙二醇、海巴胺鹽類之鹽類、及與胺基酸諸如，例如，精胺酸、離胺酸、等等之鹽。反之，該鹽形式可藉由用適當酸處理而轉化成游離酸形式。
術語「醫藥上可接受的溶劑合物」意謂包含可形成式I化合物(包括立體異構形成)之水合物和溶劑加成形式。該等溶劑合物之例子為例如水合物、醇合物，諸如乙醇合物、異丙醇合物、正丙醇合物、等等。
式I化合物其可包含一或多個掌性中心且可以立體化學異構形式存在。特別感興趣者為該等純立體化學之式I化合物。術語「立體化學異構形式」如使用於本文中定義式I化合物、其醫藥上可接受的加成鹽和其醫藥上可接受的溶劑合物之所有可能的立體異構形式。除非特別說明或指明，化合物之化學名稱表示所有可能的立體化學異構形式之混合物，該包含基本分子結構的所有非鏡像異構物和鏡像異構物以及式I、其醫藥上可接受的加成鹽和其醫藥上可接受的溶劑合物之每一個別異構形式的混合物實質上無(也就是與小於10%，較佳小於5%，特別是小於2%和最佳小於1%相關的)其他異構物。立體異構中心可具有R-或S-組態；二價環(部份地)飽和基上之取代基可具有順-或反-組態；雙鍵可具有E(異側(entgegen))及Z(同側(zusammen))-立體化學。
一些式I之化合物也可以互變異構物存在，該等雖未被明確指示於上述化學式中之形式意欲包括在本發明的範圍內。
本發明也意欲包括存在於本發明化合物中的原子之任何同位素。例如，氫的同位素包括氚和氘和碳的同位素包括13 C和14 C。
每當使用於前後文中時，術語「式I化合物」、「本發明化合物」、「本發明之化合物」或任何同等術語，和同樣地，術語「式I化合物之子群」、「本發明化合物之子群」、「本發明之化合物之子群」或任何同等術語，意謂包括通式I化合物或通式I化合物之子群，以及其鹽類、溶劑合物和立體異構物。
每當在前後文中提及時，取代基可各自獨立地選自定義之名單，諸如例如對於R1 或R2 ，意欲包含任何化學上可能的或導致可以標準藥學步驟處理的該化學穩定性之分子的可能組合。
式I化合物之特定子群或本文中所指定的式I化合物之任何子群，其中
(a)R1 為鹵基；或R1 為氟基或氯基；該鹵基(或氟基或氯基)特別是在鄰位被取代；或
(b)R1 為甲氧基；該甲氧基特別是在間位被取代。
式I化合物之特定子群或本文中所指定的式I化合物之任何子群，其中
(a)R2 為下式之基團
(b)或其中R2 為下式之基團：
本發明之進一步具體實例為該等式I之化合物或式I化合物之任何子群，其中R5 為氫，及R6 為鹵基或C1-4 烷基；R5 為鹵基及R6 為氫；R5 為鹵基或C1-4 烷基，及R6 為氫；或R5 及R6 皆為氫或皆為鹵基。
本發明之進一步具體實例為該等式I之化合物或式I化合物之任何子群，其中在R5 及R6 之定義中，鹵基為氟基或氯基，和C1-4 烷基為甲基。
本發明之特定具體實例為該等式I之化合物或式I化合物之任何子群，包括其中R2 如上述(a)或(b)項所定義之化合物，其中R5 為氫及R6 為氟基或氯基；R5 為氟基或氯基及R6 為氫；R5 為氫及R6 為甲基；R5 及R6 皆為氫或R5 為氯基及R6 為氟基；更特別是其中R5 為氫及R6 為氟基；R5 為氯基及R6 為氫；R5 為氫及R6 為甲基；R5 及R6 皆為氫，R5 為氯基及R6 為氟基、R5 為甲基及R6 為氟基或R5 為氟基及R6 為甲基。
本發明之具體實例為該等式I之化合物或式I化合物之任何子群，其中R3 為下式之基團
另一具體實例係關於本發明之化合物，其中R3 為下式之基團
本發明之具體實例為該等式I之化合物或式I化合物之任何子群，其中R8 為甲基或2-甲氧基乙基；或其中R8 為甲基。
本發明之具體實例為該等式I之化合物或式I化合物之任何子群，其中R9 為C1-2 烷氧基或二甲胺基；或R9 為甲氧基或二甲胺基；或R9 為甲氧基。
本發明之具體實例為該等式I之化合物或式I化合物之任何子群，其中R4 為具有上述指定之化學結構的基團，但其中在第一基中R9 為R9a ，在第二基中R9 為R9b ，在第三基中R9 為R9c ，在第四基中R9 為R9d ，在第五和六基中R9 為R9e ；該等基因此可表示如下：
其中各A獨立為CH或N；或其中各A為CH；R9a 為C1-4 烷氧基或二甲胺基；R9b 為C1-4 烷氧基或二甲胺基；R9c 為C1-4 烷氧基或二甲胺基；R9d 為C1-4 烷基、環丙基、三氟甲基；R10 為氫、C1-4 烷基、環丙基或三氟甲基；或R10 為氫、甲基、環丙基或三氟甲基；各R9e 獨立為C1-4 烷基、環丙基、C1-4 烷氧基或二甲胺基。
特別感興趣者為該等其中在R9a 、R9b 、R9c 、R9d 或R9e 中C1-4 烷氧基為甲氧基和C1-4 烷基為甲基之化合物。
在進一步的具體實例中R4 為具有下列化學結構之基團：
其中A為CH及R9a 為甲氧基或二甲胺基。
本發明之具體實例為該等式I之化合物或式I化合物之任何子群，其中R11 為C1-4 烷基；或其中R11 為甲基。
一具體實例係關於在實驗部份結尾之表I中所列的化合物1-102，包括其醫藥上可接受的鹽類和溶劑合物。特定具體實例係關於表I中所列化合物1-102的游離形式(非醫藥上可接受的鹽類和溶劑合物)。
特別感興趣者為在實驗結尾之表中所列的具有編號7、8、52、67、91、93、96、101和102之化合物，包括其醫藥上可接受的鹽類和溶劑合物。
式I之化合物，其中R3 為下式之基團：
該化合物以式I-a表示，可藉由在醯胺形成反應中偶合式II之中間物與式III之羧酸衍生物而製得。此醯胺成反應之反應條件為該等在肽合成中用以偶合胺基酸類者。可使用之偶合劑可選自N-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二氫喹啉(EEDQ)、N-異丁氧羰基-2-異丁氧基-1,2-二氫喹啉(IIDQ)、N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)脲鎓六氟磷酸鹽(HATU)、苯并三唑-1-基-氧基-叁-(二甲胺基)-鏻六氟磷酸鹽(BOP)、苯并三唑-1-基-氧基-參(吡咯啶基)鏻六氟磷酸鹽()、二環己基碳二亞胺(DCC)、3-乙基-1(N,N-二甲基)胺基丙基碳二亞胺(EDCI)或1,3-二異丙基碳二亞胺。可添加觸媒，例如1-羥基苯并三唑(HOBt)或4-二甲胺基吡啶(DMAP)。反應通常在鹼(特別是諸如三級胺，例如三乙胺、N-甲基嗎福啉、N,N-二異丙基乙胺，(後者也稱為Hnig鹼、DIPEA或DIEA))存在下進行。可使用之溶劑包括雙極性非質子溶劑諸如DMA、DMF或乙腈、鹵化烴類諸如CH2 Cl2 或CHCl3 、醚溶劑諸如THF。在一具體實例中，偶合反應係使用三乙胺作為鹼在DMF中與HATU進行。
式I之化合物，其中R3 為，在本文中係以式I-b表示，可藉由式II之中間物與式IV之適當親電子羰基化合物諸如氯甲酸酯或活化2,5-二側氧基吡咯啶-1-醇鹽、對-硝基酚鹽或碳酸2-吡啶酯的胺甲酸酯形成反應製得。
Lg在上述流程中為脫離基諸如氯基、溴基、2,5-二側氧基吡咯啶-1-醇鹽、對-硝基酚鹽。
式II之中間物依次可如下列反應流程所概略說明般製備：
在上述流程中M表示-B(ORa )2 基或-Sn(Rb )3 基，其中Ra 表示氫或烷基或烷二基，例如2,3-二甲基-2,3-丁二基及Rb 表示烷基諸如甲基或丁基。PG表示在Boc基存在下可選擇性裂解之羥基-保護基。Y表示溴基、碘基或三氟甲磺醯基(三氟甲磺酸根或TfO-)基。X表示氯基、溴基或碘基。
三氟甲磺酸根基可藉由使具有羥基的式X之中間物在溴基之位置與三氟甲磺醯亞胺，在鹼存在下於溶劑諸如二氯甲烷中反應而引入。具有羥基的式X之中間物依次可依照後述用於將XI轉化成X之步驟，接著去保護步驟而從在Y基之位置具有經保護的羥基之中間物XIb製備。可使用於此步驟中之保護基可為苯甲基，其可在觸媒存在下用氫除去。
在第一步驟中，用鹵化苯甲基將内酯XI烷基化成苯甲基化内酯X。此反應係在低溫下(例如在-78℃下)、在非質子溶劑諸如THF中，用例如雙(三甲矽基)醯胺鋰、雙(三甲矽基)醯胺鈉或二異丙基醯胺鋰之鹼進行，接著添加鹵化苯甲基。藉由使用諸如LiOH、NaOH或KOH之鹼，在水性溶劑諸如DMF、DMA、二烷、THF和水的混合物中水解，將中間物X中之内酯開環。此水解產生中間物IX，其中隨後在該技藝已知條件下將醇官能用適當保護基PG保護，例如用矽基，諸如二異丙矽基、第三丁基-二甲矽基或類似者，以產生式VIII之中間物。藉由中間物VIII與R2 -NH2 之一級胺的偶合反應將羧基官能基轉化成VII中之對應醯胺。此反應之條件係如上所述。視需要R2 -NH2 可以消旋形式使用且例如藉由色層分析可分離所得中間物VII的非鏡像異構混合物。
在下個步驟中將VII中的O-保護基除去而產生中間物VI。例如在第三丁基-二甲矽基使用之情形中可由四丁基氟化銨(TBAF)或HF在乙腈中製造。中間物VI(其可為溴基、碘基或三氟甲磺酸酯(-OTf)衍生物)然後進行金屬催化(通常用Pd、Ni或Cu觸媒)之碳-碳交叉偶合反應諸如Suzuki、Stille、Heck或Negishi反應。該交叉偶合反應之一例為Suzuki反應，在該情形中VI係在鈀觸媒存在下、於高溫下與經取代之雜芳基硼酸或酯(例如頻哪醇基硼酸酯)反應。反應係在鹼諸如碳酸氫鈉、碳酸鈉、氫氧化鈉、碳酸鉀、碳酸銫、磷酸鉀、等等存在下進行。當無機鹼難以溶解在有機溶劑中時，其以水溶液使用。另一該交叉偶合反應為Stille反應，在該情形中VI係在鈀觸媒存在下、於高溫度下與經取代之雜芳基錫烷反應。金屬鹽像氯化鋰、溴化鋰或碘化鋰可用作添加劑。適合於Suzuki或Stille反應之鈀觸媒包含Pd(PPh3 )4 (Ph=苯基)、Pd2 (dba)3 (dba=二苯亞基丙酮)、Pd(OAc)2 、Pd(dppf)Cl2 (dppf=1,1'-雙(二苯膦基)二茂鐵)。在一些情況中可添加額外配位基(例如三-第三-丁基膦、1,1’-雙(二苯膦基)二茂鐵、三-鄰-甲苯基膦或類似者)以促進偶合反應。另一該類反應為Heck反應，其為不飽和鹵化物(或三氟甲磺酸酯)與烯和鹼及鈀觸媒以形成經取代之烯的反應。本例中其包括芳基鹵化物或三氟甲磺酸酯和噻唑之間的鈀催化之交叉偶合。用於此反應之適當觸媒為Pd(PPh3 )4 。用於此類型反應之適當有機溶劑包括四氫呋喃、1,4-二烷和1,2-二甲氧基乙烷、芳族溶劑諸如苯或甲苯、醇溶劑諸如甲醇或乙醇、乙腈、二甲基甲醯胺或這些溶劑的混合物。可使用之鹼為鹼金屬乙酸鹽，諸如乙酸鉀。
V中之Boc N-保護基的除去，例如藉由使用在鹵化溶劑諸如CH2 Cl2 之三氟乙酸或在異丙醇中之鹽酸的酸處理最後導致中間物II。Boc-去保護也可藉由用三甲矽基碘或三甲矽基氯和NaI的混合物在適當溶劑例如乙腈、CHCl3 或CH2 Cl2 中處理中間物V而完成。Boc-去保護反應較佳係在室溫下進行。
式XI之中間物可如下列反應流程製備，其中Y如上述所指定及PG為N-保護基諸如BOC-基。
在第一步驟中，在2-苯乙基醇XVII中之醇官能在2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧基(或TEMPO)存在下，使用弱氧化劑諸如次氯酸鈉(其為從一級醇類產生醛之選擇性氧化劑)被氧化成對應乙醛XVI。在下個步驟中乙醛XVI係與經保護之胺和與苯亞磺酸鹽反應。如此獲得之碸XV與内酯XIV的反應產生内酯衍生物XIII，其係用掌性色層分析分離成鏡像異構純XII，其中雙鍵(例如)在雷氏Ni存在下用氫還原。
需要時，在根據式II之化合物的製備中之合成步驟可以其他順序進行。例如，交叉偶合反應可在各種階段以在上述流程中的合成順序進行，諸如利用中間物VI、VII、VIII、IX和XI。交叉偶合甚至可在合成的較後階段進行，例如如下列反應流程中所舉例說般在合成結束時。在此流程中，M如上述所指定和交叉偶合反應條件也如上所述。中間物XVIII可依照用於製備中間物II的步驟，但有交叉偶合反應，接著引入R3 -CO-基之偶合反應而製得。
式I之化合物，其中R3 為下式之基團：
該化合物以式I-c表示，可如下列反應流程中所舉例說般藉由式XIX之中間物和氰基環丙基羧酸XX之間的醯胺形成反應製備。此反應之條件係如上所述，例如II轉化成I-a中之條件。
式XIX之中間物可如下列流程所概述般製備：
在第一步驟中，中間物II係在醯胺形成反應中與N-保護之第三丁基甘胺酸XXI，諸如Boc-第三丁基甘胺酸偶合，依照如上述在II轉化I-a之作用中的反應條件，產生中間物XXII。XXII中之Boc保護基可在如前述之該技藝已知的條件下除去，以獲得游離胺基中間物XIX。
式I之化合物，其中R3 為下式之基團：
該化合物以式I-d表示，可如下列反應流程中所說明般在合成結束時藉由胺甲酸酯形成反應、藉由式XIX之中間物與適當親電子羰基化合物(諸如氯甲酸酯)的縮合作用或活化碳酸丁二醯亞胺基、對-硝基苯基或吡啶酯製備。此反應特別適於製備其中R8 為C1-4 烷氧基C1-4 烷基之化合物。
式I之化合物，其中R3 為下式之基團：
該化合物以式I-e表示，可依照如上所述之反應條件，藉由在醯胺形成反應中與吡咯啶基乙酸之偶合反應製備。如下述反應流程中所舉例說明，化合物I-e也可藉由二-階段步驟製備，該二-階段步驟包括首先中間物XIX與氯乙醯氯在鹼(例如三級胺諸如三乙胺)存在下、於溶劑諸如二氯甲烷中之反應，產生中間物XXIII。此反應可例如起初在較低溫度下(諸如在0℃下)進行，接著在室溫下攪拌。中間物XXIII然後與吡咯啶在親核性觸媒(諸如碘化四丁銨或類似者)存在下、較佳地在雙極性非質子溶劑(例如DMA、DMF、N-甲基吡咯啶酮)中反應。此反應較佳地在室溫下進行。
其中R2 為3-羥基二氫苯并哌喃基之式I化合物也可藉由首先使用如前述用於形成醯胺鍵之條件偶合3-羥基-4-二氫苯并哌喃胺XXIV與3-芳基丙酸XXV，產生中間物XXVI而製備。隨後用2-甲氧基丙烯保護NH和OH官能，產生中間物XXVII。此轉化作用可使用鹵化溶劑(諸如)二氯甲烷於酸觸媒(諸如吡啶鎓對甲苯磺酸鹽)存在下、在介於0℃和室溫之間產生。所得醯胺類XXVII和環氧乙烷XXVIII係在介於-78℃和-25℃之間的溫度範圍下用強鹼(諸如正丁基鋰)處理以提供中間物XXIX。後者與硼酸鹽或錫衍生物XXX進行交叉偶合反應，如前所述，產生XXXI，其依次在酸性條件下被去保護成XXXII。後者對應於式II之中間物，且可如上所述進一步處理成式I之化合物。
式I之化合物也可藉由官能基轉化反應轉化成彼此。式I之化合物，其中R2 為，其中R5 及R6 之一或二者為氯基、溴基或碘基，可在觸媒(諸如鈀碳)存在下使用氫而轉化成對應化合物，其中R5 及R6 之一或二者為氫。反之亦然，其中R5 及R6 之一或二者為氫，這些化合物可使用鹵化劑諸如N-溴琥珀醯亞胺(NBS)或N-氯琥珀醯亞胺(NCS)在6-或8-位置被鹵化。這些轉化也可利用具有上述R2 基之中間物進行。
一些中間物和起始原料為已知化合物且為商業上可得或可根據該技藝已知的步驟製備。
式R2 -NH2 之中間物(其中R2 為二氫苯并哌喃醇基)可以5個合成步驟從酚XXXIII製備。在第一步驟中在水中、於鹼諸如NaOH存在下、在高溫度(諸如回流溫度)下用3-溴丙酸處理酚XXXIII。在第二步驟中，使用草醯氯和AlCl3 在溶劑諸如二氯甲烷中使所得3-苯氧基丙酸XXXIV進行Friedel Crafts醯化作用，以提供苯并二氫哌喃酮XXXV，其依序在鹵化溶劑(諸如二氯甲烷)中被溴化(用溴或CuBr2 )，以提供溴基苯并二氫哌喃酮XXXVI。在質子溶劑(諸如甲醇)中介於0℃和室溫之間用金屬氫化物試劑(諸如NaBH4 )還原提供溴基醇XXXVII。使用乙腈和強酸(諸如硫酸)之水溶液使溴基醇XXXVII進行Ritter反應，以提供中間物唑啉XXXVIII，其於稀酸中在介於80℃和120℃之間的溫度下水解以提供式XXXIX之消旋4-胺基二氫苯并哌喃醇。該4-胺基二氫苯并哌喃醇可使用該技藝已知的條件(諸如使用手性固定相之色層分析或藉由使用光純有機酸作為解析劑，諸如杏仁酸或類似物之非鏡像異構鹽形成)被分離成對應鏡像異構物。
4-胺基-二氫苯并哌喃醇XXXIX可在6-或8-位置(例如)用N-氯琥珀醯亞胺鹵化，以提供對應6-或8-鹵基取代之4-胺基-二氫苯并哌喃醇類。
式R2 -NH2 之中間物，其為可藉由在低溫度(諸如-78℃)下、於極性溶劑(諸如THF)中、在鹼(諸如雙(三甲矽基)醯胺鈉)存在下用(+)-(8,8-二氯-樟腦磺醯基)氧吖丙烷引入羥基而從6,7-二氫-5H-苯并[b]噻吩-4-酮製備。然後使用O-苯甲基羥胺在吡啶中將酮基轉化成對應苯甲基肟XLII，且在介於0℃和70℃之間的溫度範圍，使用例如硼烷在極性溶劑(諸如THF)中將該肟還原成對應胺XLIII。
式XLIVIII之環己醇胺可以4個步驟從3-(R)-甲基環己酮製備。在第一步驟中，乙酸酯XLVa係藉由在乙酸異丙烯酯中於100℃、酸觸媒(諸如對-甲苯磺酸)存在下處理獲得。對應硝基酮XLVI係藉由在介於室溫和50℃之間的溫度下在乙酸酐和濃硝酸的混合物中的反應獲得。酮基官能係藉由金屬氫化物試劑(諸如硼氫化鈉)、在醇溶劑(諸如甲醇)中在室溫下還原，以提供硝基醇XLVII。還原至胺基醇XLVIII係藉由在雷氏鎳存在下在乙酸乙酯中氫解達成。
在本發明中式I之化合物和大部分中間物包含不對稱碳原子。該化合物和該中間物之純立體化學異構物形式可藉由應用該技藝已知的步驟獲得。例如，非鏡像異構物可以物理方法，諸如選擇性結晶或色層分析技術，例如逆流分佈、液相色層分析、等等方法分離。鏡像異構物可首先藉由用適當解析劑(諸如，例如，掌性酸)將該消旋混合物轉化成非鏡像異構鹽類或化合物之混合物；然後藉由例如選擇性結晶或色層分析技術(例如液相色層分析等等方法)物理上分離該非鏡像異構鹽類或化合物之混合物；和最後將該分離之非鏡像異構鹽類或化合物轉化成對應鏡像異構物而從消旋混合物獲得。純立體化學異構物形式也可從適當中間物和起始原料之純立體化學異構物形式獲得，其條件為其間的反應發生且保留立體化學完整。分離式I化合物和中間物之鏡像異構物形式的替代方法包括液相色層分析，特別是使用手性固定相之液相色層分析，諸如高效液相色層分析或使用超臨界二氧化碳之色層分析。
式I之化合物顯示抗HIV性質，特別是它們表現為HIV蛋白酶抑制劑。HIV為人類後天免疫缺乏症候群(AIDS)和較佳地感染人T-4細胞之發病原因且破壞他們或改變他們的正常功能，特別是免疫系統的協調。結果，感染病人具有數量不斷下降的T-4細胞，其表現更為異常。因此，免疫防禦系統不能抗擊感染和瘤，且HIV感染之對象通常由於機會主義的感染諸如肺炎，或癌症而死亡。
本發明化合物也顯示抗耐藥性和多重耐藥性HIV菌株，特別是抗已獲得耐一或多種經核准之蛋白酶抑制劑性，特別是耐阿扎那韋(atazanavir)、洛匹那韋(lopinavir)、和利托那韋(ritonavir)性之HIV菌株的活性。
由於它們的抗HIV性質，式I之化合物、其醫藥上可接受的加成鹽類和溶劑合物，包括其任何立體異構物，在治療被HIV感染的個體或用於預防這些感染方面是有效的。可用本發明化合物預防或治療之病症，特別是HIV相關之病症，包括AIDS、AIDS-相關綜合症(ARC)、漸進式全身淋巴結病(PGL)以及由反轉錄病毒引起之慢性中樞神經系統疾病，諸如，例如：HIV媒介之痴呆與多發性硬化。
本發明之化合物因此可被用作抗任何上述病症之藥物。特別地，式I之化合物可用於製造治療或預防HIV感染用的藥物。
在另一方面本發明提供一種治療患有病毒感染(尤其HIV感染)之人的方法，或預防患有病毒感染(尤其HIV感染)之人的方法，該方法包含將有效量之式I化合物、其醫藥上可接受的加成鹽、醫藥上可接受的溶劑合物或其可能立異構形式，施用至人。該用作藥物之用途或治療之方法包含將有效對抗與HIV有關之病症和其他致病反轉錄病毒(尤其HIV-1)的量施用至HIV-感染對像。
本發明也提供用於治療HIV感染之組成物，其包含治療有效量之式I化合物和醫藥上可接受的載劑或稀釋劑。
本發明之化合物或其任何子群為了施用目的可調配成各種醫藥形式。關於適當組成物可引用通常用於全身性施用藥物之所有組成物。為了製備本發明之醫藥組成物，將有效量的作為活性成分之特定化合物(視需要於加成鹽形式)係與醫藥上可接受的載劑組合成緊密摻合物，該載劑可採取各式各樣的形式。這些醫藥組成物希望為適合於例如口服、直腸或經皮施用之單一劑型。例如，在製備口服劑型之組成物時，在口服液體製劑之情形中(例如，懸浮劑、糖漿劑、酏劑、乳液及溶液劑等)，可使用任何常用的醫藥介質，例如，水、二醇類、油類、醇類、等等；或在粉劑、丸劑、膠囊及錠劑之情形中，固體載劑諸如澱粉、糖，高嶺土、稀釋劑、潤滑劑、黏合劑、破碎劑、等等。因為錠劑和膠囊施用容易，所以它們代表最有利的口服劑量單位形式，在該情形中顯然要使用固體醫藥載劑。也包括者為可在使用前的短時間內才被轉變成液態型式之固體形式製劑。在適合於經皮施用之組成物中，載劑視需要包含滲透增強劑及/或適當潤濕劑，視需要併用較小比例的任何性質之適當添加劑，該添加劑不會對皮膚引入明顯有害作用。該等添加劑可有助於施用至皮膚及/或幫助製備所要之組成物。這些組成物可以各種方式施用，例如為經皮貼片、點貼片(spot-on)、軟膏。本發明化合物亦可藉該技藝中經由吸入或吹入施用所使用之方法及調配物而經由此方式施用。因此，通常本發明化合物可以溶液、懸浮液或乾粉形式施用於肺。
特別有利的是將上述醫藥組合物調配成施用容易且均一劑量之單位劑型。單位劑型如使用在本文中係指適合呈單位劑量之物理上分離單位，各單位包含經計算可產生所需醫療效果之預定量，與所需醫藥載劑結合。該等單位劑型之例子為錠劑(包括劃線或包衣錠劑)、膠囊、丸劑、粉劑包、薄片、栓劑、注射用溶液或懸浮液、等等，及其分隔多重劑。
熟習治療HIV-感染者將可以從以下所提出的測試結果決定有效數量。通常，預期有效每日量為0.01毫克/公斤至500毫克/公斤體重，更佳為0.1毫克/公斤至10毫克/公斤體重。所需之劑量適合在一天之適當時間間隔下施用2、3、4次或更多次亞劑量。該亞劑量可調配成單位劑型，例如：每單位劑型包含1至1000毫克，且特別是，5至200毫克的活性成份。
施用之精確劑量與頻率將視所使用之特定式I化合物、要治療之特定病症、要治療病症之嚴重性、特定患者之年齡、體重和一般身體狀況以及個體可能使用之其他藥物而定，如熟習此技藝者習知的。此外，該有效量顯然可視要治療個體之反應及/或視開立本發明化合物處方之醫師的評估來降低或提高。因此上述有效劑量範圍僅為準則且不意欲限制本發明之範圍或用途於任何程度。
且，一或多種額外抗反轉錄病毒化合物和一種式(I)之化合物的組合可用作藥物。因此，本發明也關於一種產品，其包含(a)一種式(I)之化合物，和(b)一或多種額外抗反轉錄病毒化合物，作為用於同時、分開或順序使用於抗HIV治療之組合製劑。不同的藥可與以分開製劑或以單一製劑，與醫藥上可接受的載劑組合。該等其他抗反轉錄病毒化合物可為任何已知的抗反轉錄病毒化合物諸如核苷反轉錄酶抑制劑(NRTIs)，例如齊多夫定(zidovudine)(AZT)、去羥肌苷(didanosine)(ddI)、扎西他濱(zalcitabine)(ddC)、拉米夫定(lamivudine)(3TC)、司他夫定(stavudine)(d4T)、恩曲他濱(emtricitabine)(FTC)、阿巴卡韋(abacaVir)(ABC)、氨多索韋(amdoxovir)(DAPD)、艾夫他濱(elvucitabine)(ACH-126,443)、阿立他濱(apricitabine)(AVX754,(-)-dOTC)、否紮瓦定替多斯(fozalvudine tidoxil)(FZT、HDP-990003)、疊氮膦(phosphazide)、KP-1461、拉西韋(racivir)(PSI-5004)、MIV-210和GS-9131；非核苷反轉錄酶抑制劑(NNRTIs)諸如地拉韋啶(delavirdine)(DLV)、依非韋倫(efavirenz)(EFV)、奈韋拉平(nevirapine)(NVP)、達比韋林(dapivirine)(TMC120)、依曲韋林(etravirine)(ETR、TMC125)、利皮韋林(rilpivirine)(TMC278)、IDX899、RDEA-806、UK-453601、RDEA-427和UC-781；核苷酸反轉錄酶抑制劑(NtRTIs)，例如泰諾福韋(tenofovir)及其前驅藥泰諾福韋酯富馬酸鹽(TDF)；蛋白酶抑制劑，例如利托那韋(ritonavir)(RTV)、沙奎那韋(saquinavir)(SQV)、洛匹那韋(lopinavir)(ABT-378、LPV)、茚地那韋(indinavir)(IDV)、氨普那韋(amprenavir)(VX-478)、奈非那韋(nelfinavir)(AG-1343)、 阿扎那韋(atazanavir)(BMS 232,632)、達蘆那韋(darunavir)(TMC114)、呋山那韋(fosamprenavir)(GW433908或VX-175)、貝卡那韋(brecanavir)(GW-640385、VX-385)、替拉那韋(tipranavir)(PNU-140690)、DG-17、SPI256、PPL-100(MK 8122),和TMC310911；侵入抑制劑，其包括融合抑制劑(例如恩夫韋肽(enfuvirtide)(T-20)西夫韋肽(sifuvirtide)、HRG-214、阿布威太(albuvirtide)、SUC-HAS和maC46/M87o)、附著抑制劑、細胞內膽固醇和皮質類固醇生物合成之調控劑(例如SP-01A)和共受體抑制劑，後者包含CCR5拮抗劑(例如CCR5mAb004、麻韋洛(maraviroc)(UK-427,857)、PRO-140、TAK-220、TAK-652、PF232798、菲韋洛(vicriviroc)(SCH-D、SCH-417,690)、GSK-706769、尼非韋羅(nifeviroc)和SCH-532706)及CXR4拮抗劑(例如AMD-070)、侵入抑制劑之進一步實例為TNX-355、INCB 9471、BMS-488043、諾拿金(nonakine)和VGV-1；成熟抑制劑，例如貝韋立馬(bevirimat)(PA-457)和威渥肯(vivecon)；和病毒整合酶之抑制劑，例如雷特格韋(raltegravir)(MK-0518)、抑特格韋(elvitegravir)(JTK-303、GS-9137)、BMS-538158、S-349572、JTK-656 S-247303和GS-265744。
下列實例意欲用於說明本發明且本發明之範圍不限制於其。
實例
分析薄層層析(TLC)係利用矽凝膠60 F254 片(Merck)用藉由紫外線、過錳酸鉀或磷鉬酸之顯影進行。矽凝膠管柱層析係利用(50微米)或(35-45微米)矽凝膠筒進行。1 H核磁共掁(NMR)光譜係記錄於400或500 MHz。化學位移δ以ppm給予，參考四甲基矽烷(TMS)和J值以Hz給予。多重性係使用下列縮寫表示：s用於單重線，br. s用於寬單重線，d用於雙重線，t用於三重線，q用於四重線，spt用於七重線和m用於多重線。旋光度s[α]20 D 以deg/dm報告和濃度c以在指定溶劑中之克/100毫升給予。紅外線(IR)和振動圓二色光譜分析(Vibrational Circular Dichroism，VCD)光係在具有CaF2 窗之0.09毫米室中，利用具有於4-cm-1 解析度之PMA-37模組的Bruker儀器(樣品係溶解在DMSO-d6 中)記錄。以各一小時收集時間收集VCD三次。除非另有說明，鏡像異構物過量(ee)係以超臨界流體層析法(SFC)利用ChiralpakAD-H管柱測定。化合物名稱係使用ChemDraw，9.0版()產生。
實例1：(S)-2-(4-溴苯基)-1-((S)-5-側氧四氫呋喃-2-基)乙基-胺甲酸第三-丁酯((-)-前驅物1)的合成
步驟1：將2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧基(TEMPO；1.6克，1.0毫莫耳，0.002當量)和NaBr(6克，500毫莫耳，1.0當量)在激烈攪拌下連續地加至在0℃下之含醇1-1([CAS號：4654-39-1]；100克，500毫莫耳，1.0當量)之二氯甲烷(2300毫升)溶液中。添加NaHCO3 的飽和水溶液和10%NaOCl(400毫升)。將混合物攪拌約十分鐘直到薄層層析(TLC)指示起始原料已經消失。將二氯甲烷層分離，用二乙醚快速地萃取水層。將合併之有機相用NaHSO3 (10%)和KI(4%)之水溶液、鹽水洗滌並用無水硫酸鈉乾燥。在真空下除去大部分揮發成份之後(保持溫度低於25℃)，將所得醛1-2在二氯甲烷(50毫升)中之溶液以該狀態直接使用於下一步驟中。
步驟2：在甲醇(250毫升)和水(500毫升)的混合物中，將含醛1-2(460毫莫耳，1.0當量)之二氯甲烷溶液、胺甲酸第三-丁酯(107.8克，920毫莫耳，2.0當量)、苯亞磺酸鈉(151.0克，920毫莫耳，2.0當量)和甲酸(42.3克，920毫莫耳，2.0當量)混合物在40℃下攪拌24小時(以TLC監測反應)。將反應混合物冷卻至室溫。過濾出所得沈澱物，用水和二乙醚洗滌，且在減壓下乾燥以提供150克(72%，從中間物1-1開始)的中間物(rac)-1-3。
步驟3：在氮氣下於-78℃將正丁基鋰(100毫升的2.5M溶液，250毫莫耳，1.1當量)逐滴加至含二異丙胺(26克，250毫莫耳，1.1當量)之無水四氫呋喃(THF；100毫升)混合物中。使混合物加熱至室溫並在室溫下攪拌30分鐘。將混合物再冷卻至-78℃，且逐滴添加含2(5H)-呋喃酮(21克，250毫莫耳，1.1當量)之無水THF(100毫升)溶液。在-78℃下攪拌另20分鐘之後，將反應混合物轉移到在-78℃下之含中間物(rac)-1-3(100克，227毫莫耳，1.0當量)之無水THF(800毫升)溶液。所將得混合物在-78℃下攪拌另20分鐘。將飽和水NaHCO3 溶液逐滴加至在-40℃下之反應混合物，用乙酸乙酯進行萃取。將合併之有機相用Na2 CO3 飽和水溶液和鹽水洗滌，用MgSO4 乾燥並在真空下濃縮。將所得殘餘物用二乙醚/甲醇(10：1)混合物洗滌並乾燥以提供40克的(rac)-1-4。將母液蒸發到乾，藉由製備型高效能液相層析法(HPLC)將所得殘餘物純化以提供10克的(rac)-1-4。總共，獲得50克(58%)的消旋產物。
步驟4：經由製備型超臨界流體層析(SFC)利用ChiralpakAD-20微米管柱(50×300毫米，流動相：等梯度(isocratic)30%丙-2-醇，流速：130毫升/分鐘)將消旋混合物(rac)-1-4分離。將所要之(1S,2S)-鏡像異構物1-4分離成第二部分，具有42%之產率。
步驟5：將中間物1-4(10克，26.2毫莫耳，1.0當量)在THF(200毫升)中的溶液在25℃下用作為觸媒之雷氏Ni(2克，20%質量比)氫化(1.0 atm的氫)三小時。氫(1.0當量)吸收之後，過濾出觸媒且將濾液蒸發。藉由矽凝膠管柱層析純化殘餘物以產生7.0克(70%，ee>95%)呈白色結晶之(-)-前驅物1。1 H NMR(400 MHz,CDCl3 )δppm 1.39(s,9 H)2.05-2.23(m,2 H)2.45-2.61(m,2 H)2.85(dd,J=13.5,8.6 Hz,1 H)2.91(dd,J=13.7,7.4 Hz,1 H)3.98(q,J=8.5 Hz,1 H)4.46(t,J=7.6 Hz,1 H)4.62(d,J=9.8 Hz,1 H)7.12(d,J=7.8 Hz,2 H)7.43(d,J=8.0 Hz,2 H)；[α]20 D =-23.4°(c 0.99,CH3 CN)。
步驟1：將碘(2.2克，8.0毫莫耳，0.03當量)加至在氮氣下之進料有鎂(79.8克，3282毫莫耳，12.3當量)和THF(2.7升)之反應燒瓶。將反應混合物加熱至30-35℃且維持在此溫度。經過二小時期間慢慢添加4-溴丁烯(361.4克，2677毫莫耳，10.0當量)，將反應之溫度保持在65℃以下。添加完成之後，將反應混合物在60-65℃下攪拌最少二小時且然後在冰浴中冷卻。經過至少一小時期間將醯胺1-5([CAS號：949885-93-2]；103.7克，267毫莫耳，1.0當量)在THF(560毫升)中的溶液逐滴加至反應混合物，將溫度保持在3℃以下。使反應混合物加熱至室溫並在此溫度下攪拌最少四小時。冷卻至-5℃之後，藉由慢慢地添加氯化銨水溶液停止反應。將有機層分離，用鹽水洗滌並在減壓下部分濃縮。添加庚烷，再次在減壓下將混合物部分濃縮及冷卻15℃。過濾出沈澱物和用庚烷洗滌。在45℃下乾燥16小時之後，獲得112.2克(重量%72%，80%產率)的粗製中間物1-6。
步驟2：將含RuCl3 .3H2 O(2.04克，7毫莫耳，0.03當量)之水(77毫升)溶液加至含NaIO4 (236克，1105毫莫耳，5.5當量)之水(1.9升)溶液。經過30分鐘將此反應混合物加至在室溫下含中間物1-6(107.7克(重量%71%)，201毫莫耳，1.0當量)之丙酮(1.9升)溶液。將反應混合物在室溫下攪拌直到轉化完(約一小時)。經過30分鐘將Na2 S2 O3 水溶液加至反應混合物。在減壓下濃縮反應混合物直到不再有丙酮出現。將水(1.9升)加至殘餘物，將懸浮液在室溫下攪拌30分鐘。過濾出沈澱物且將濕餅再成漿於水中。所得之濕餅在過濾和用水洗滌之後在45℃下乾燥以產生80.6克(重量%90%，90%產率)的粗製中間物1-7。
步驟3：將含中間物1-7(67.0克(重量%90%)，150毫莫耳，1.0當量)和KHCO3 (75.1克，750毫莫耳，5.0當量)之二甲基甲醯胺(DMF；1200毫升)混合物在室溫下攪拌20分鐘。經過20分鐘期間將碘甲烷(42.6克，300毫莫耳，2.0當量)加至反應混合物，將反應混合物在室溫下攪拌七小時。反應混合物通過矽藻土過濾之後，用溫度停留在25℃以下之速度添加氯化銨水溶液。接著添加第三-丁基甲基醚且混合物通過矽藻上過濾。將有機層分離，用鹽水洗滌且在減壓下濃縮。將庚烷加至殘餘物，將懸浮液在室溫下攪拌六小時之後，過濾出沈澱物，用庚烷洗滌和在真空烘箱中於40℃下乾燥16小時。獲得50.0克(重量%91%，73%產率)的中間物1-8。
步驟4：經過最少1.5小時將N-Selectride(135毫升的在THF中之1M溶液，135毫莫耳，1.24當量)逐滴加至在氮氣下於-65℃之含酯1-8(45克，109毫莫耳，1.0當量)之無水THF(900毫升)溶液。將反應混合物在-65℃下攪拌額外的一小時之後，將溫度升至-35℃且在此溫度下繼續攪拌30分鐘。後來在0至10℃下逐滴添加10%檸檬酸水溶液，接著添加第三-丁基甲基醚。將混合物攪拌30分鐘之後，將有機層分離，用NaHCO3 飽和水溶液和鹽水洗滌，並在減壓下濃縮。將殘餘物再溶解於第三-丁基甲基醚中且在減壓下再次濃縮。藉由急驟矽凝膠管柱層析純化粗製產物(溶析液：庚烷/第三-丁基甲基醚2：1)以產生37.0克(94%，ee>95%)的呈灰白色固體之(-)-前驅物1。[α]20 D =-20.9°(c 1.0，MeOH)
使用下述一級胺類作為代表如前述定義之式R2 -NH2 的實例之前驅物。該等為不是商業上所供應而可利用的，可根據文獻步驟(前驅物2、14a、15和17)或透過實例2-13(前驅物3-14b)中所述之步驟合成。
實例2：(3S,4S)-4-胺基-8-氯苯并二氫哌喃-3-醇((+)-前驅物3)
步驟1：經過90分鐘期間將含3-溴丙酸(298克，1.95莫耳，1.25當量)和NaOH(156克的50%水溶液，1.95莫耳，1.25當量)之水(500毫升)的冰冷溶液加至在回流溫度下之含2-氯酚([CAS號：95-57-8]；200克，1.56莫耳，1.0當量)和NaOH(124克的50%水溶液，1.56莫耳，1.0當量)之水(1升)混合物。將反應混合物在回流溫度下攪拌三小時。冷卻至室溫之後，用濃鹽酸水溶液將反應混合物酸化。過濾出沈澱物且用水洗滌以產生酸2-2之第一收穫物。將濾液用二氯甲烷萃取，隨後將合併之有機相用飽和NaHCO3 萃取。用濃鹽酸水溶液將水層酸化；過濾出沈澱物且用水洗滌以產生酸2-2之第二收穫物。在真空烘箱乾燥過週末之後，獲得112克(36%)的呈白色固體之中間物2-2。
步驟2：含酸2-2(112克，558毫莫耳，1.0當量)和數滴DMF之二氯甲烷(1.5升)溶液在冰浴中冷卻。逐滴添加草醯氯(142克，1.12莫耳，2.0當量)，使反應混合物加熱至室溫並攪拌過夜。在減壓下濃縮溶劑。將殘餘物在二氯甲烷(1.5升)中恢復原狀。逐部分添加三氯化鋁(89克，670毫莫耳，1.2當量)，並將反應混合物在室溫下攪拌過夜。將反應混合物慢慢地倒進冷卻1M鹽酸溶液。分離該等層且用二氯甲烷萃取水相。將合併之有機層用Na2 CO3 飽和水溶液和鹽水洗滌，用無水MgSO4 乾燥並在減壓下濃縮，獲得104克(102%)的粗製中間物2-3。
步驟3：將溴(30.7毫升，598毫莫耳，1.05當量)慢慢地加到在回流溫度下之含粗製中間物2-3(104克)之二氯甲烷溶液。添加完成之後，將所得混合物在回流溫度下攪拌30分鐘。將反應混合物冷卻至室溫，用偏亞硫酸氫鈉飽和水溶液和鹽水洗滌，用無水MgSO4 乾燥，並在真空下濃縮以產生二溴2-4和單溴2-5的混合物。將殘餘物溶解在乙酸(750毫升)中，和添加亞硫酸鈉(93克，740毫莫耳)。將反應混合在70℃下攪拌三小時。將反應混合物冷卻至室溫且部份地蒸發，添加水和二氯甲烷。將有機層分離並在減壓下濃縮。粗製中間物2-5係如此使用於下一步驟(沒有測定產率)。
步驟4：NaBH4 (21.7克，574毫莫耳)以數部分加至在0。C下之含粗製中間物2-5之甲醇(1.5升)溶液，並將混合物在室溫下攪拌30分鐘。在減壓下部分濃縮反應混合物，和用乙酸乙酯稀釋殘餘物，將有機相用鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥並在減壓下濃縮。將粗製產物以矽凝膠管柱層析純化(溶析液：二氯甲烷→ 二氯甲烷/甲醇96：4)以提供105.5克(67%從中間物2-3開始)的中間物2-6。
步驟5：將濃硫酸(16毫升，300毫莫耳，2.0當量)逐滴加至含中間物2-6(39.5克，150毫莫耳，1.0當量)之乙腈(800毫升)溶液。將反應在45-50℃下攪拌直到不再有起始原料存在(約五小時)，然後在減壓下濃縮。添加水(800毫升)和乙腈(200毫升)，將反應混合物在回流溫度下攪拌二天。然後將反應混合物冷卻到室溫，用二氯甲烷洗滌並用50%NaOH水溶液鹼化至pH~12-13。過濾出沈澱物，用水洗滌和在真空烘箱中乾燥以產生25.2克(84%)的消旋前驅物3。
經由製備型HPLC利用ChiralpakAD管柱(流動相：乙腈)分離消旋混合物，將所要之(3S,4S)-鏡像異構物((+)-前驅物3)分離為第一部分(ee>95%)。1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 )δppm 1.92(br. s.,2 H)3.84-3.92(m,2 H)4.14(dd,J=10.9,2.5 Hz,1 H)4.17(dd,J=11.1,5.5 Hz,1 H)5.17(br. s.,1 H)6.85(t,J=7.8 Hz,1 H)7.23(d,J=7.6 Hz,1 H)7.41(d,J=7.8 Hz,1 H)；[α]20 D =+59.2°(c 0.37，MeOH)。(+)-前驅物3之絕對組態係在氯之還原去除後(氫氣(1atm)，鈀碳作為觸媒)藉由與(+)-前驅物2比較旋光度([α]20 D =+45.8°(c 0.27，MeOH))確定。
實例3：(rac)-順-4-胺基-7-氯苯并二氫哌喃-3-醇((rac)-前驅物4)的合成
使用如(rac)-前驅物3的製備所例示之步驟從3-氯酚開始製備(rac)-前驅物4。1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 )δppm 1.83(br.s.,2 H)3.79-3.89(m,2 H)4.03-4.12(m,2 H)5.12(br.s.,1 H)6.76(d,J=2.0 Hz,1 H)6.90(dd,J=8.2,2.0 Hz,1 H)7.44(d,J=8.4 Hz,1 H)
實例4：(3S,4S)-4-胺基-6-氯苯并二氫哌喃-3-醇((-)-前驅物5)的合成
步驟1：將二碳酸二-第三-丁酯(14.5克，66.6毫莫耳，1.1當量)溶解在THF(100毫升)中，將溶液冷卻至0℃並攪拌。同時地添加(3S,4S)-4-胺基-苯并二氫哌喃-3-醇((+)-前驅物2)(10克，60.5毫莫耳，1.0當量)和NaHCO3 (5.1克，60.5毫莫耳，1.0當量)同時維持良好攪拌。將反應混合物在室溫下攪拌四小時。部份地蒸發溶劑，加水並將所得混合物用二乙醚萃取。將合併之有機萃取物用10%檸檬酸溶液和鹽水洗滌，用MgSO4 乾燥，過濾和蒸發到乾以產生21克的粗製胺甲酸酯4-1。
步驟2：將粗製胺甲酸酯4-1溶解在DMF(100毫升)中和添加N-氯琥珀醯亞胺(NCS；8.9克，66.6毫莫耳，1.1當量)。將反應混合物在80℃下攪拌一小時。將反應混合物冷卻至室溫，用二乙醚稀釋，用Na2 CO3 飽和水溶液和鹽水洗滌，用無水MgSO4 乾燥並在減壓下濃縮以產生16.3克(82%經過二步驟)的粗製中間物4-2。
步驟3：將4-2(16.3克，54.2毫莫耳，1.0當量)和三氟乙酸(TFA；124克，1084毫莫耳，20.0當量)在二氯甲烷(100毫升)中的溶液在室溫下攪拌一小時。反應混合物用Na2 CO3 飽和溶液鹼化並用二氯甲烷萃取，將合併之有機相用水和鹽水洗滌，且用MgSO4 乾燥。從乙酸乙酯再結晶粗製產物以產生6.8克(61%的(-)-前驅物5(ee>95%)。1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 )δppm 1.88(br. s.,2 H)3.79-3.90(m,2 H)4.05(dd,J=11.5,2.5 Hz,1 H)4.08(dd,J=11.0,4.8 Hz,1 H)5.12(br. s.,1 H)6.71(d,J=8.5 Hz,1 H)7.10(dd,J=8.7,2.6 Hz,1 H)7.47(d,J=2.3 Hz,1 H)；[α]20 D =-20.7°(c 0.36，MeOH)。
實例5：(3S,4S)-4-胺基-8-氟苯并二氫哌喃-3-醇((+)-前驅物6)的合成
使用如(rac)-前驅物3的製備所例示之步驟從商業上可得之8-氟二氫苯并哌喃-4-酮[CAS號：11141-00-5]開始製備(rac)-順-4-胺基-8-氟苯并二氫哌喃-3-醇。經由製備型SFC利用ChiralpakAD-H管柱(30×250毫米，流動相：等梯度32%甲醇(包含0.2%異丙胺)/68%CO2 ，流速：50毫升/分鐘)分離消旋混合物，將所要之(3S,4S)-鏡像異構物((+)-前驅物6)分離為第一部分(ee>95%)。1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 )δppm 1.90(br. s.,2 H)3.84-3.92(m,2 H)4.09(dd,J=11.1,2.7 Hz,1 H)4.14(dd,J=10.9,5.5 Hz,1 H)5.15(br. s.,1 H)6.82(td,J=7.9,5.1 Hz,1 H)7.01(ddd,J=11.3,8.2,1.4 Hz,1 H)7.24(d,J=7.8 Hz,1 H)；[α]20 D =+24.6°(c 0.43，MeOH)。使用VCD測定絕對立體化學組態。
實例6：(3S,4S)-4-胺基-7-氟苯并二氫哌喃-3-醇((+)-前驅物7)的合成
使用如(rac)-前驅物3的製備所例示之步驟製備(rac)-順-4-胺基-7-氟苯并二氫哌喃-3-醇。(rac)-順-4-胺基-7-氟苯并二氫哌喃-3-醇(31.8克，174毫莫耳，1.0當量)和(+)-(S)-杏仁酸(26.4克，174毫莫耳，1.0當量)的混合物在甲醇(600毫升)中回流直到獲得透明溶液。杏仁酸鹽，在結晶過夜之後獲得，藉由過濾收集並溶解在3M NaOH水溶液中。用乙酸乙酯萃取水層，將合併之有機相用無水MgSO4 乾燥並在減壓下濃縮以產生6.5克(21%)的鏡像異構濃化之(+)-前驅物7(ee>95%)。1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 )δppm 2.03(br.s.,2 H)3.81-3.86(m,2 H)4.01-4.10(m,2 H)5.09(br.s.,1 H)6.53(dd,J=10.6,2.6 Hz,1 H)6.68(td,J=8.5,2.6 Hz,1 H)7.43(dd,J=8.4,7.2 Hz,1 H)；[α]20 D =+36.0°(c 0.42,MeOH)。使用VCD測定絕對立體化學組態。
實例7：(3S,4S)-4-胺基-6-氟苯并二氫哌喃-3-醇((+)-前驅物8)的合成
使用如(rac)-前驅物3的製備所例示之步驟從商業上可得之6-氟二氫苯并哌喃-4-酮[CAS號：66892-34-0]開始製備(rac)-順-4-胺基-6-氟苯并二氫哌喃-3-醇。將(rac)-順-4-胺基-6-氟苯并二氫哌喃-3-醇(7.63克，41.7毫莫耳，1.0當量)溶解在乙醇(30毫升)中，同時加熱，逐部分添加(-)-(R)-杏仁酸(6.68克，45.8毫莫耳，1.1當量)並將溶液加熱至回流溫度。然後，逐滴添加庚烷(6毫升)。使所形成之懸浮液冷卻至室溫且靜置1小時。過濾產生呈白色固體之杏仁酸鹽，將其從乙醇再結晶。將所得鹽溶解在2M NaOH水溶液中。用乙酸乙酯萃取水相,將合併之有機相用無水MgSO4 乾燥並在減壓下濃縮以產生2.0克(26%)的鏡像異構濃化(+)-前驅物8(ee=82%)。1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 )δppm1.88(br.s.,2 H)3.79-3.89(m,2 H)4.01(ddd,J=11.1,2.6,1.0 Hz,1 H)4.06(dd,J=11.1,5.1 Hz,1 H)5.08(d,J=3.5 Hz,1H)6.69(dd,J=9.0,4.9 Hz,1 H)6.90(td,J=8.6,3.3 Hz,1 H)7.24(dd,J=9.7,3.2 Hz,1 H)；[α]20 D =+25.8°(c 0.50，MeOH)。使用VCD測定絕對立體化學組態。
實例8：(3S,4S)-4-胺基-6,8-二氟苯并二氫哌喃-3-醇((+)-前驅物9)的合成
使用如(rac)-前驅物3的製備所例示之步驟從2,4-二氟酚[CAS號：367-27-1]開始製備(rac)-順-4-胺基-6,8-二氟苯并二氫哌喃-3-醇。經由製備型SFC利用ChiralpakAD-H管柱(30×250毫米，流動相：等梯度50%甲醇(包含0.2%異丙胺)/50%CO2 ，流速：50毫升/分鐘)分離消旋混合物，將所要之(3S,4S)-鏡像異構物((+)-前驅物9)分離為第一部分(ee>95%)。1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 )δppm 1.92(br. s.,2 H)3.84-3.90(m,2 H)4.11(ddd,J=11.2,2.2,0.8 Hz,1H)4.16(dd,J=11.1,4.6 Hz,1 H)5.19(br. s.,1 H)7.06(ddd,J=11.3,8.5,3.1 Hz,1 H)7.14(dm,J=9.7 Hz,1 H)；[α]20 D =+9.7°(c 0.41，MeOH)。使用VCD測定絕對立體化學組態。
實例9a：(3S,4S)-4-胺基-8-氯-6-氟苯并二氫哌喃-3-醇((+)-前驅物10a)的合成
使用如(rac)-前驅物3的製備所例示之步驟從2-氯-4-氟酚[CAS號：1996-41-4]開始製備(rac)-順-4-胺基-8-氯-6-氟苯并二氫哌喃-3-醇。經由製備型SFC利用ChiralpakAD-H管柱(30×250毫米，流動相：等梯度40%甲醇(包含0.6%異丙胺)/60%CO2 ，流速：50毫升/分鐘)分離所要之(3S,4S)-鏡像異構物((+)-前驅物10a)，將所要之(3S,4S)-鏡像異構物((+)-前驅物10a)分離為第一部分(ee>95%)。1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 )δppm 2.03(br. s.,2 H)3.84-3.91(m,2 H)4.15(ddd,J=11.3,2.5,0.8 Hz,1 H)4.20(dd,J=11.3,4.4 Hz,1 H)5.21(br. s.,1 H)7.20(dd,J=8.2,3.1 Hz,1 H)7.30(ddd,J=9.5,3.1,0.9 Hz,1 H)；[α]20 D =+39.7°(c 1.0，MeOH)。使用VCD測定絕對立體化學組態。
實例9b：(3S,4S)-4-胺基-6-氟-8-甲基苯并二氫哌喃-3-醇((+)-前驅物10b)的合成
使用如(rac)-前驅物3的製備所例示之些微地修正的合成步驟從商業上可得之2-甲基-4-氟酚[CAS號：452-72-2](9b-1)開始製備(rac)-順-4-胺基-6-氟-8-甲基苯并二氫哌喃-3-醇。
步驟1：將含2-甲基-4-氟酚[CAS號：452-72-2]；25.0克，198毫莫耳，1.0當量)之DMF(40毫升)溶液在0℃下逐滴加至含NaH(9.1克的在油中之分散液60%，238毫莫耳，1.2當量)之DMF(300毫升)溶液。將懸浮液在室溫下攪拌30分鐘且再次冷卻至0℃，逐滴添加含1-氯-3-羥基丙烷(22.5克，238毫莫耳，1.2當量)之DMF(40毫升)溶液。將反應在60℃下加熱二小時(為了完成反應需要額外量的NaH和1-氯-3-羥基丙烷)。將反應混合物冷卻至室溫和加水，用二乙醚萃取水層，將合併之有機相用NaOH水溶液和鹽水洗滌，用無水MgSO4 乾燥並在減壓下濃縮。粗製產物如此使用於下一步驟。
步驟2：將中間物9b-2(12.9克，70毫莫耳)溶解在CH3 CN/H2 O(425毫升)之1：1混合物中。逐部分添加TEMPO(1094毫克，7毫莫耳，0.1當量)和雙(乙醯氧基)碘苯(BAIB；56.4克，175毫莫耳，2.5當量)，且將反應混合物在室溫下攪拌過夜(需要另外TEMPO和BAIB以完成氧化作用)。藉由添加Na2 S2 O3 水溶液停止反應，用DCM萃取水相且隨後用Na2 CO3 水溶液萃取合併之有機層。用1M鹽酸水溶液酸化之後，用DCM萃取水相。將合併之有機層用無水MgSO4 乾燥並在減壓下濃縮以提供13.2克(96%)的中間物9b-3。使用如實例2中所例示之步驟將後者進一步轉化成(rac)-順-4-胺基-6-氟-8-甲基苯并二氫哌喃-3-醇。經由製備型HPLC利用ChiralpakAD管柱(流動相：乙腈)將所要之(3S,4S)-鏡像異構物((+)-前驅物10b)分離為第一部分。1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 )δppm 1.89(br. s.,2 H)2.08(s,3 H)3.83(br. s.,2 H)4.04(d,J=10.9 Hz,1 H)4.09(dd,J=11.5,4.9 Hz,1 H)5.07(br. s.,1 H)6.82(d,J=9.6 Hz,1 H)7.07(d,J=9.6 Hz,1H)；[α]20 D=+50.3°(c 0.38，MeOH)。使用VCD測定絕對立體化學組態。
實例10a：(3S,4S)-4-胺基-6-氯-8-氟苯并二氫哌喃-3-醇((-)-前驅物11a)的合成
使用(rac)-前驅物3的製備所例示之步驟從4-氯-2-氟酚[CAS號：348-62-9]開始製備(rac)-順-4-胺基-6-氯-8-氟苯并二氫哌喃-3-醇。經由製備型SFC利用ChiralpakAD-H管柱(20×250毫米，流動相：等梯度40%甲醇(包含0.2%異丙胺)/60%CO2 ，流速：50毫升/分鐘)分離消旋混合物，將所要之(3S,4S)-鏡像異構物((-)-前驅物11a)分離為第一部分(ee>95%)。1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 )δppm 1.93(br. s.,2 H)3.88(br. s.,2 H)4.11-4.16(m,1 H)4.18(dd,J=11.3,4.3 Hz,1 H)5.22(d,J=3.1 Hz,1 H)7.22(dd,J=10.7,2.5 Hz,1 H)7.35(s,1 H)；[α]20 D =-32.0°(c 0.42，MeOH)。使用VCD測定絕對立體化學組態。
實例10b：(3S,4S)-4-胺基-8-氟-6-甲基苯并二氫哌喃-3-醇((+)-前驅物11b)的合成
使用如(rac)-前驅物10b的製備所例示之步驟從4-甲基-2-氟酚[CAS號：452-81-3]開始製備(rac)-順-4-胺基-8-氟-6-甲基苯并二氫哌喃-3-醇。經由製備型SFC利用ChiralpakAD-H管柱(30×250毫米，流動相：等梯度20%甲醇(與0.6%異丙胺)/20%CO2 ，流速：50毫升/分鐘)分離消旋混合物，將所要之(3S,4S)-鏡像異構物((+)-前驅物11b)分離為第一部分(ee>95%)。1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 )δppm 1.82(br. s.,2 H)2.20(s,3 H)3.84(br. s,2 H)4.04-4.12(m,2 H)5.10(br. s.,1 H)6.84(dd,J=12.1,2.0 Hz,1 H)7.05(br. s.,1 H)；[α]20 D =+88.8°(c 0.18，MeOH)。使用VCD測定絕對立體化學組態。
實例11：(3S,4S)-4-胺基-6-甲基苯并二氫哌喃-3-醇((-)-前驅物12)的合成
使用如(rac)-前驅物3的製備所例示之步驟從6-甲基-4-苯并二氫哌喃酮[CAS號：39513-75-2]開始製備(rac)-順-4-胺基-6-甲基苯并二氫哌喃-3-醇。經由製備型SFC利用ChiralpakAD-H管柱(30×250毫米，流動相：等梯度17%甲醇(與0.5%異丙胺)/83%CO2 ，流速：50毫升/分鐘)分離消旋混合物，將所要(3S,4S)-鏡像異構物((-)-前驅物12)分離為第二部分(ee>95%)。1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 )ppm 1.78(br. s.,2 H)2.20(s,3 H)3.77-3.84(m,2 H)3.94(ddd,J=10.7,2.4,1.3 Hz,1 H)3.96-4.03(m,1 H)5.00(br. s.,1 H)6.58(d,J=8.2 Hz,1 H)6.88(dd,J=8.2,2.0 Hz,1 H)7.19(d,J=2.0 Hz,1 H)；[α]20 D =-18.7°(c 0.43，MeOH)。使用VCD測定絕對立體化學組態。
實例12：(4S,5R)-4-胺基-4,5,6,7-四氫苯并[b]噻吩-5-醇((+)-前驅物13)的合成
步驟1：將含6,7-二氫-5H-苯并[b]噻吩-4-酮(起始原料12-1，[CAS號：13414-95-4]；39克，256毫莫耳，1.0當量)之THF(150毫升)溶液逐滴加至在氬氛圍下於-78℃之雙(三甲矽基)醯胺鈉(NHMDS；307毫升在THF中的1M溶液，307毫莫耳，1.2當量)和THF(200毫升)的混合物，將反應混合物在-78℃下攪拌另30分鐘。逐滴加至含(+)-(8,8-二氯-樟腦磺醯基)氧吖丙烷(94克，307毫莫耳，1.2當量)之THF(300毫升)溶液。在-78℃下攪拌二小時之後，藉由添加過量乙酸將反應混合物停止反應且使加熱至室溫。添加水和乙酸乙酯，並將水相分離和用乙酸乙酯萃取。將合併之有機相用無水MgSO4 乾燥並在減壓下濃縮。將殘餘物再溶解於二氯甲烷(300毫升)中，且與庚烷(500毫升)一起研磨，藉由過除去沈澱物和用二異丙醚洗滌。將濾液在減壓下濃縮，藉由矽凝膠管柱層析純化殘餘物(溶析液：庚烷→ 庚烷/乙酸乙酯4：6)以提供50克(116%)的不純中間物12-2。粗製產物如此使用於下一步驟。
步驟2：將O-苯甲基羥胺鹽酸鹽(41克，256毫莫耳，1.0當量)加至含粗製中間物12-2(50克)之吡啶(500毫升)溶液。反應混合物在室溫下攪拌過週末。將混合物蒸發且與甲苯共蒸發二次。將殘餘物再溶解於乙酸乙酯中，將有機相用5%檸檬酸水溶液和鹽水洗滌，用無水MgSO4 乾燥並在減壓下濃縮以產生72克的粗製中間物12-3。
步驟3：將含硼烷甲硫醚錯合物(198毫升，在THF中的1M溶液395毫莫耳，1.54當量)逐滴加至在0℃下之含粗製中間物12-3(72克)之THF(1升)溶液。將反應混合物在回流溫度下攪拌過夜。藉由蒸餾部分除去溶劑之後(反應燒瓶裝備有蒸餾冷凝器)，將反應在回流溫度下進一步攪拌直到完全轉化。反應混合物在冰浴中冷卻且藉由謹慎地加水停止反應。用NaCl使水相飽和且用甲基四氫呋喃萃取數次。將合併之有機相用無水MgSO4 乾燥並在減壓下濃縮以產生8：2順/反-異構混合物。經由矽凝膠管柱層析(溶析液：二氯甲烷→二氯甲烷/在甲醇中之7M氨96：4)分離所要之順-異構物，獲得17.8克(40%經過3步驟，60%ee(ee係在用(+)-(S)-杏仁酸)形成醯胺之後藉由液相層(LC)析測定)。(+)-前驅物13(17.7克，105毫莫耳，1.0當量)用含(+)-(S)-杏仁酸(16克，105毫莫耳，1.0當量)之甲醇再結晶過夜。過濾出白色固體。濃縮濾液且將所得殘餘物再結晶。合併二批次且溶解在3M NaOH水溶液中。用二氯甲烷萃取水相，將合併之有機層用無水MgSO4 乾燥並在減壓下濃縮以產生11.5克(65%)的純鏡像異構(+)-前驅物13(ee>95%)。1 H NMR(400 MHz，氯仿-d)δppm 1.78-2.03(m,2 H)2.20(br. s.,3 H)2.76(ddd,J=16.6,9.4,6.2 Hz,1 H)2.93(dd,J=16.6,5.3 Hz,1 H)3.80-4.00(m,2 H)6.94(d,J=5.0 Hz,1 H)7.13(d,J=5.3 Hz,1 H)；[α]20 D =+59.6°(c 0.49，MeOH)。使用VCD測定絕對立體化學組態。
實例13：(1S,2R,6R)-2-羥基-6-甲基環己胺鹽酸鹽((-)-前驅物14b)的合成
步驟1：將酮13-1([CAS號：13368-65-5]；430克，3.83莫耳，1.0當量)和對-甲苯磺酸單水合物(pTSA.H2 O；72.9克，0.38莫耳，0.1當量)在乙酸異丙烯酯(2.5升)中於100℃下回流6小時。將反應混合物冷卻至室溫之後，加水。將有機層分離和用NaHCO3 飽和水溶液和鹽水洗滌，用無水NaSO4 乾燥並在真空下濃縮以提供530克(90%)的所要之異構物13-2A和不要的異構物13-2B的7：10混合物(異構物比例係以1 H NMR測定)。此混合物如此使用於下一步驟。
步驟2：將異構混合物13-2A和13-2B(106.2克，0.95莫耳，1.0當量)溶解在乙酸酐(400毫升)中。以反應溫度維持在30。C和40℃之間的速率逐滴添加濃硝酸(61毫升，0.95莫耳，1.0當量)。添加完成之後，將反應在室溫下攪拌二小時。TLC顯示反應完成(溶析液：石油醚/乙酸乙酯5：1，Rf =0.4，二點，接近地)。將反應混合物逐滴加至NaHCO3 飽和水溶液(79.8克NaHCO3 在水中，0.95莫耳，1.0當量)。用乙酸乙酯萃取混合物，將合併之有機層用鹽水洗滌，用無水Na2 SO4 乾燥並在真空下濃縮。將粗製產物以矽凝膠管柱層析純化(溶析液：石油醚/乙酸乙酯97：3→91：9)以提供12.5克(11%)的中間物13-3(第二點)。
步驟3：將NaBH4 (40克，1.03莫耳，1.3當量)在室溫下逐部分加至含中間物13-3(125克，795毫莫耳，1.0當量)之無水甲醇(3.0升)溶液。將反應混合物在室溫下攪拌30分鐘。將混合物用10% KHSO4 水溶液中和至pH~7且在減壓下濃縮。加水並用乙酸乙酯萃取混合物。將合併之有機相用鹽水洗滌，用無水MgSO4 乾燥並在減壓下濃縮以產生中間物13-4和其表異構醇的1：1混合物。經由製備型SFC利用ChiralpakAD-5微米管柱(30×250毫米，流動相：等梯度20%異丙醇/80%CO2 ，流速60毫升/分鐘)分離二種表異構物，獲得29克(22%)的所要異構物13-4，為第一部分。1 H NMR(400 MHz,CDCl3 )δppm 0.99(d,J=6.8 Hz,3 H),1.10(m,1 H),1.50(m,2 H),1.75-1.91(m,2 H),2.01(m,1 H),2.50(m,1 H),2.85(br.s,1 H),4.20(dd,J=11.6,2.0 Hz,1H),4.51(s,1 H)。
步驟4：將含13-4(29克，169.6毫莫耳，1.0當量)之乙酸乙酯(1.25升)溶液與作為觸媒之雷氏Ni(32克)在大氣壓下於5℃氫化五小時。氫氣(3.0當量)吸收之後，過濾出觸媒。將在二烷中之鹽酸溶液加至在0℃下之濾液，將所得混合物攪拌30分鐘。在減壓下部份除去溶劑，藉由過濾收集沈澱物並用石油醚和二乙醚洗滌以產生20.9克(74%)之(-)-前驅物14b(ee>95%，ee係在用(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基-苯基乙醯氯形成醯胺之後以LC測定)。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 1.01(d,J=6.5 Hz,3 H)1.04-1.19(m,1 H)1.42-1.60(m,2 H)1.70-1.81(m,1 H)1.81-2.01(m,1 H)1.81-2.01(m,1 H)2.79(dd,J=10.8,3.0 Hz,1 H)4.02-4.06(m,1 H)；[α]20 D =-0.53°(c 1.01，MeOH)。
下述為作為導致引入如前述定義之R3 的結構單元所需要之羧酸和碳酸鹽前驅物。該等為不是商業上所供應而可利用的，可根據文獻步驟(前驅物23和24)或透過實例14中所述之步驟(前驅物22)合成。
實例14：(S)-2-(1-氰基環丙烷甲醯胺基)-3,3-二甲基-丁酸(前驅物22)的合成
根據文獻步驟從前驅物19開始合成胺14-1。
步驟1：將HATU(3.56克，9.35毫莫耳，1.15當量)加至在-20℃下之含14-1(1.8克，8.13毫莫耳，1.0當量)、1-氰基環丙烷羧酸(0.90克，8.13毫莫耳，1.0當量)和N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(DIPEA；3.15克，8.13毫莫耳，1.0當量)之DMF(80毫升)溶液。將反應混合物在室溫下攪拌一小時。添加乙酸乙酯，將有機相用NaHCO3 飽和溶液洗滌，用無水MgSO4 乾燥並在減壓下濃縮以產生1.83克(72%)的粗製中間物14-2。其如此使用於下一步驟。
步驟2：中間物14-2(1.83克，5.81毫莫耳，1.0當量)在甲醇中的溶液在大氣壓於25℃下用作為觸媒之Pd(Pd/C 10%)氫化3小時。反應混合物通過矽藻土過濾並在減壓下濃縮濾液。藉由矽凝膠管柱層析純化殘餘物(溶析液：二氯甲烷/甲醇/乙酸97：2：1)以產生0.75克(58%)的前驅物22。(觀察到在上述的合成順序的實行期間，已發生廣泛的消旋)1 H NMR(400 MHz，氯仿-d)δppm 1.07(s,9 H)1.56(d,J=3.7 Hz,2 H)1.63-1.79(m,2 H)4.41(d,J=9.0 Hz,1 H)6.87(d,J=8.8 Hz,1 H)11.12(br. s.,1 H)
下述為如前述定義之式R4 -M的前驅物代表實例，其用於Suzuki或Stille交叉偶合反應。該等為不是商業上所供應而可利用的，可根據文獻步驟(前驅物25和26)或藉由實例15和16中所述之步驟(前驅物27、28、36和37)合成。
實例15：2-異丙基-5-(第三丁基錫烷基)噻唑(前驅物27)的合成
經過二小時之期間將二異丙基醯胺鋰(LDA；245毫升的2.5 M溶液，613.2毫莫耳，1.2當量)加至在-78℃下之含2-異丙基噻唑([CAS號：15679-10-4]；65克，511毫莫耳，1.0當量)之無水THF(1.3升)溶液。在此溫度下攪拌一小時之後，逐滴添加氯化第三丁基錫(111毫升，408.8毫莫耳，0.8當量)。經過約三小時使反應混合物逐漸地加熱至室溫，隨之用NH4 Cl飽和水溶液將混合物停止反應且用二乙醚稀釋。將有機層分離和用二乙醚萃取水層。將合併之有機層用MgSO4 乾燥並在減壓下濃縮以提供51克(24%)的前驅物27。1 H NMR(300 MHz，氯仿-d)δppm 0.90(t,J=7.3 Hz,9 H)1.06-1.16(m,6 H)1.25-1.39(m,6 H)1.42(d,J=7.0 Hz,6 H)1.48-1.61(m,6 H)3.38(spt,J=6.9 Hz,1 H)7.60(s,1H)。
比照前驅物27從2-環丙基噻唑[CAS號：1159821-56-3]開始，但使用正丁基鋰作為鹼合成前驅物28。
實例16：2-環丙基-6-甲基-4-(4,4,5,5,-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-吡啶(前驅物36)的合成
將含2-環丙基-6-甲基吡啶([CAS號：41765-00-8]；1.99克，14.9毫莫耳，1.0當量)、雙(频哪醇合)二硼(Bis(pinacolato)diboron)(Pin2 B2 ；3.79克，14.9毫莫耳，1.0當量)和4,4’-二-第三丁基-2,2’-聯吡啶(dtbpy；0.08克，0.30毫莫耳，0.02當量)之辛烷(25毫升)混合物用氮沖洗。添加氯-1,5-環辛二烯銥(I)二聚物([IrCl(COD)]2 ；0.10克，0.149毫莫耳，0.01當量)，且將反應混合物在80℃下攪拌6小時。將反應混合物冷卻至室溫並用二氯甲烷稀釋。加水並將混合物攪拌15分鐘。用二氯甲烷萃取水相(6次)，將合併之有機相用無水MgSO4 乾燥並在減壓下濃縮以產生3.7克(95%)的粗製前驅物36。在沒有進一步純化下使用後者。
比照前驅物36從2,6-二甲基吡啶[CAS號：108-48-5]開始合成前驅物37。
下列實例舉例說明式I化合物之典型合成。對應NMR數據及/或熔點列在表2中。
實例17：化合物7的合成
步驟1：將含(-)-前驅物1(12.5克，32.5毫莫耳，1.0當量)之無水THF(100毫升)溶液在氮氣下冷卻至-78℃。慢慢地添加雙(三甲矽基)醯胺鋰(LHMDS；68.3毫升在THF中的1M溶液，68.3毫莫耳，2.1當量)。在-78℃下30分鐘之後，將2-氟苯甲溴(4.19毫升，34.2毫莫耳，1.05當量)以一整部分加至反應混合物。在-78℃下繼續攪拌90分鐘。添加乙酸(1毫升)和水，使混合物加熱至室溫。添加乙酸乙酯，將有機相分離且用10%檸檬酸溶液、NaHCO3 飽和水溶液和鹽水連續地洗滌，用無水MgSO4 乾燥並在減壓下濃縮。將粗製產物以矽凝膠管柱層析純化(溶析液：庚烷→庚烷/乙酸乙酯7：3)以提供10.7克(67%)的中間物17-1。
步驟2：將NaOH(33.5毫升的1M水溶液，33.5毫莫耳，5.0當量)加至含中間物17-1(3.3克，6.7毫莫耳，1.0當量)之甲醇(20毫升)溶液。將反應混合物在室溫下攪拌三小時。將反應混合物在減壓下部分濃縮，然後用10%檸檬酸溶液酸化至pH~2-3。過濾出白色的沈澱物，用水洗滌和在高真空下乾燥。粗製中間物17-2(3.33克，96%)如此使用於下一步驟。
步驟3：將咪唑(3.08克，45.2毫莫耳，7.0當量)和第三-丁基二甲矽基氯(4.87克，32.4毫莫耳，5.0當量)加至含中間物17-2(3.33克，6.47毫莫耳，1.0 eq)之DMF(650毫升)溶液。將反應在室溫下攪拌過夜。添加甲醇(30毫升)且繼續攪拌直到液相層析-質譜(LCMS)顯示羧酸之完全TBDMS-去保護。將乙酸乙酯和10%檸檬酸溶液加至反應混合物。將有機相分離，用鹽水洗滌，用無水乾燥MgSO4 並在減壓下濃縮。將粗製產物以矽凝膠管柱層析純化(溶析液：庚烷→庚烷/乙酸乙酯7：4)以提供3.7克(91%)的純中間物17-3。
步驟4：將三乙胺(0.89克，8.83毫莫耳，1.2當量)、HATU(2.94克，7.73毫莫耳，1.05當量)和(+)-前驅物2(1.54克，7.73毫莫耳，1.05當量)連續地加至含中間物17-3(4.60克，7.36毫莫耳，1.0當量)之DMF(70毫升)溶液。將反應混合物在室溫下攪拌一小時。添加氟化四丁基銨(TBAF，73.64毫升在THF中的1M溶液，73.64毫莫耳，10.0當量)，並將反應混合物在50℃下攪拌直到完成TBDMS-去保護。藉由將Na2 CO3 飽和水溶液加至反應混合物沈澱中間物17-4。過濾出沈澱物，用水洗滌且在高真空下乾燥。粗製產物如此使用於下一步驟。
步驟5：將含中間物17-4(400毫克，0.61毫莫耳，1.0當量)、前驅物34(303毫克，1.83毫莫耳，3.0當量)、肆(三苯膦)鈀(Pd(PPh3 )4 (141毫克，0.12毫莫耳，0.2當量)和Na2 CO3 (2.74毫升的2M水溶液，5.47毫莫耳，9.0當量)之二烷(3毫升)混合物在氬氣下於110℃攪拌30分鐘(為了防止副產物的形成，反應時間必須保持儘可能短)。然後在冰浴中將反應混合物快速地冷卻並添加Na2 CO3 飽和水溶液。用乙酸乙酯萃取水層，將合併之有機相用無水MgSO4 乾燥並在減壓下濃縮。粗製中間物17-5如此使用於下一步驟。
步驟6：將粗製中間物17-5溶解在於異丙醇中之5至6 M HCl溶液中，並在室溫下攪拌直到完成去保護(~30分鐘，為了防止副產物的形成，反應時間必須保持儘可能短)。將反應混合物用Na2 CO3 飽和水溶液鹼化和用乙酸乙酯萃取。將合併之有機相用水洗滌，用無水MgSO4 乾燥並在減壓下濃縮以產生粗製中間物17-6，其如此使用於下一步驟而沒有純化。
步驟7：將三乙胺(246毫克，2.43毫莫耳，4.0當量)和HATU(266毫克，0.69毫莫耳，1.15當量)連續地加至粗製中間物17-6和前驅物18(132毫克，0.69毫莫耳，1.15當量)在DMF(8毫升)中的混合物。將反應混合物在室溫下攪拌二小時。添加乙酸乙酯，將有機相用Na2 CO3 飽和溶液和水洗滌，用無水MgSO4 乾燥且在減壓下濃縮。藉由矽凝膠管柱層析純化殘餘物(溶析液：二氯甲烷→二氯甲烷/甲醇97：3)以產生144毫克(31%從中間物17-4開始)的化合物7。
比照化合物7製備化合物99和100。比照化合物7製備化合物8、10、13、16、26和27，但使用包括TFA媒介之Boc-去保護步驟的步驟6，其使用如實例27中的步驟2所述之步驟。比照化合物7製備化合物11，但使用如實例23中所述之Stille交叉偶合反應和實例27中的步驟2所述之TFA媒介之Boc-去保護步驟。
實例18：化合物33的合成
步驟1：將HATU(2.36克，6.22毫莫耳，1.1當量)加至含中間物17-3(3.53克，5.65毫莫耳，1.0當量)、(+)-前驅物8(1.04克，5.65毫莫耳，1.0當量)和三乙胺(1.72克，16.95毫莫耳，3.0當量)之DMF(25毫升)溶液。將反應混合物在室溫下攪拌一小時。將反應混合物用乙酸乙酯稀釋並用10%檸檬酸溶液洗滌，Na2 CO3 飽和溶液和鹽水，用MgSO4 乾燥並在減壓下濃縮以產生4.48克(96%)的粗製中間物18-1。粗製產物如此使用於下一步驟。
步驟2：將含中間物18-1(4.33克，5.48毫莫耳，1.0當量)、前驅物34(1.82克，10.96毫莫耳，2.0當量)、Pd(PPh3 )4 (0.63克，0.55毫莫耳，0.1當量)和Na2 CO3 (30毫升的2M水溶液，60.3毫莫耳，11.0當量)之二烷(100毫升)混合物在氮氣下於100℃攪拌50分鐘(為了防止副產物的形成，反應時間必須保持儘可能短)。然後在冰浴中將反應混合物快速地冷卻和添加Na2 CO3 飽和水溶液。用乙酸乙酯萃取水層，將合併之有機相用鹽水洗滌，用無水MgSO4 乾燥並在減壓下濃縮。藉由矽凝膠管柱層析純化殘餘物(溶析液：二氯甲烷→二氯甲烷/甲醇95：5)以產生4.95克(92%)的中間物18-2。
步驟3：將TBAF(10.9毫升在THF中的1M溶液，10.97毫莫耳，2.0當量)加至含中間物18-2(4.56克，5.49毫莫耳，1.0當量)之THF(30毫升)溶液。在50℃下攪拌反應混合物直到完成去保護。加水，過濾出沈澱物，用水徹底地洗滌且在高真空下乾燥以產生3.77克(86%)的中間物18-3。
根據實例17中的步驟6和步驟7所述之步驟將中間物18-3進一步轉化成化合物33。
比照化合物33製備化合物35。
實例19：化合物66的合成
使用如中間物17-5的製備所例示之步驟製備中間物19-1。
將NaI(984毫克，6.56毫莫耳，5.5當量)和氯三甲基矽烷(TMSCl；584毫克，5.37毫莫耳，4.5當量)加至含中間物19-1之乙腈(10毫升)溶液。將反應混合物在室溫下攪拌二小時。添加甲醇和NaOH水溶液(12毫升的1M NaOH溶液，11.9毫莫耳，10.0當量)，繼續攪拌另30分鐘。在減壓下部分濃縮反應混合物，添加乙酸乙酯和水。分離水層並用乙酸乙酯萃取，將合併之有機相用MgSO4 乾燥並在減壓下濃縮。藉由矽凝膠管柱層析純化殘餘物(溶析液：二氯甲烷→二氯甲烷/甲醇93：7)以產生360毫克(50%)的中間物19-2。
根據如實例17中的步驟7所述之步驟將中間物19-2轉化成化合物66。
比照化合物66製備化合物36、40、85和92。
實例20：化合物96的合成
步驟1：將含(-)-前驅物1(54.0克，131毫莫耳，1.0當量)之無水THF(1000毫升)溶液在氮氣下冷卻至-70℃。超過一小時期間逐滴添加雙(三甲矽基)醯胺鋰(306.8毫升之在THF中的1M溶液，307毫莫耳，2.35當量)，其後將反應混合物攪拌額外四小時。經過一小時將含2-氟苯甲碘(34.0克，144毫莫耳，1.1當量)之THF(100毫升)溶液加至反應混合物。在-70℃下持續攪拌60分鐘。添加丙酸和水，使混合物加熱至室溫。用乙酸乙酯萃取混合物，將有機相用水洗滌，用無水Na2 SO4 乾燥並在減壓下濃縮。將粗製產物以矽凝膠管柱層析純化(溶析液：石油醚/乙酸乙酯40：1)以提供46.3克(72%)的中間物20-1。
步驟2：將LiOH(1.4升之1M水溶液，1.4莫耳，5.0當量)逐滴加至在室溫下之含中間物20-1(140克，284毫莫耳，1.0當量)之甲醇(3.5升)溶液。將反應混合物在室溫下攪拌直到沒有起始原料留下。將反應混合物在減壓下濃縮和過濾。過濾出沈澱物，用水洗滌和在真空下於50℃乾燥以產生120克(82%)的中間物20-2。
步驟3：將3升反應燒瓶進料水且在N2 下於回流溫度攪拌30分鐘。將水冷卻至40℃之後，連續地添加甲醇(300毫升)，中間物20-2(100克，194毫莫耳，1.0當量)、Na2 CO3 (83克，783毫莫耳，4.0當量)、Pd(OAc)2 (661毫克，2.9毫莫耳，0.015當量)和前驅物30(60克，392毫莫耳，2.0當量)。用N2 將反應混合物除氣且加熱至75℃經過10分鐘。將反應混合物在75℃下攪拌30分鐘且然後冷卻到室溫。過濾出沈澱物，用水/甲醇混合物(3：1,100毫升)洗滌和在真空下於50℃乾燥以產生108克(99%)的中間物20-3。
步驟4：使用如實例17中步驟3所述之步驟將中間物20-3轉化成中間物20-4，具有70%產率。
步驟5：將三乙胺(2.67克，38.7毫莫耳，3.0當量)逐滴加至含中間物20-4(8.45克，12.9毫莫耳，1.0當量)、HATU(5.15克，13.6毫莫耳，1.05當量)和(-)-前驅物14(2.25克，13.6毫莫耳，1.05當量)之乙腈(20毫升)混合物。反應混合物在室溫下攪拌一小時之後，藉由添加Na2 CO3 /NaHCO3 水溶液將反應溶液之pH調整至8~9。用乙酸乙酯進行萃取，將合併之有機相用水洗滌，用Na2 SO4 乾燥且在減壓下濃縮以提供12.4克(86%)的中間物20-5。
步驟6：將含中間物20-5(12.44克，16.3毫莫耳，1.0當量)和NaI(15.86克，105.8毫莫耳，6.5當量)之乙腈(130毫升)混合物在0~5℃下攪拌。經過一小時期間逐滴添加TMSCl(9.76克，89.5毫莫耳，5.5當量)在乙腈(20毫升)中的溶液。繼續攪拌直到完成Boc-去保護(~90分鐘)。經過五小時將TBAF(163毫升之在THF中的2M溶液，326毫莫耳，20.0當量)在0~5℃下逐滴加至反應混合物。將反應混合物在30℃下攪拌過夜。藉由添加Na2 CO3 /NaHCO3 水溶液將pH調整至8~9。用二氯甲烷進行萃取，將合併之有機相用水洗滌，用Na2 SO4 乾燥並在減壓下濃縮。藉由矽凝膠管柱層析純化殘餘物(溶析液：二氯甲烷/甲醇50：1)以產生8.0克(90%)的中間物20-6。
步驟7：根據如實例17中步驟7所述之步驟將中間物20-6轉化成化合物96。
比照化合物96製備化合物45、52、93和67。
關於化合物52，結構為：
關於化合物93，其合成係與上述至步驟4之步驟相同，但至於步驟5，用中間物20-4開始，該合成如下：
步驟5：將三乙胺(31克，306毫莫耳，2.0當量)逐滴加至含中間物20-4(27.2克，153毫莫耳，1.0當量)、HATU(61.2克，161毫莫耳，1.05當量)和(+)-前驅物13(2.25克，13.6毫莫耳，1.05當量)之乙腈(700毫升)混合物。反應混合物在室溫下攪拌一小時之後，藉由添加Na2 CO3 /NaHCO3 水溶液將反應溶液之pH調整至8~9。用乙基甲基第三-丁基醚進行萃取，將合併之有機相用水洗滌，用Na2 SO4 乾燥，並在減壓下濃縮以提供122克(99%)的中間物20-7。
步驟6：將含中間物20-7(122克，152毫莫耳，1.0當量)和NaI(149克，996毫莫耳，6.5當量)之乙腈(1200毫升)混合物在0~5℃下攪拌。經過一小時期逐滴添加含TMSCl(91.5克，842毫莫耳，5.5當量)之乙腈(200毫升)溶液。繼續攪拌直到完成Boc-去保護(~30分鐘)。經過五小時在0~5℃下將TBAF(1600毫升在THF中的2M溶液，3.04莫耳，20.0當量)逐滴加至反應混合物。將反應混合物在25-30℃下攪拌過夜。藉由添加Na2 CO3 /NaHCO3 水溶液將pH調整至8~9。用二氯甲烷進行萃取，將合併之有機相用水洗滌，用Na2 SO4 乾燥並在減壓下濃縮。藉由矽凝膠管柱層析純化殘餘物(溶析液：二氯甲烷/甲醇50：1)以產生77克(86%)的中間物20-8。
步驟7：將三乙胺(26.4克，264毫莫耳，2.0當量)加至含HATU(52.2克，137毫莫耳，1.05當量)、中間物20-8(77克，131毫莫耳，1.0當量)和前驅物18(25.9克，137毫莫耳，1.05當量)之(770毫升)DMF混合物。將反應混合物在室溫下攪拌一小時。添加Na2 CO3 水溶液和水，將混合物攪拌30分鐘。過濾出沈澱物，用水洗滌和在真空下於50℃乾燥以產生83克之粗製化合物93。在水/乙醇混合物中再結晶之後，獲得78克(79%)的化合物93。
實例21　化合物64的合成
使用如中間物17-3的製備所例示之步驟製備中間物21-1。
步驟1：將三乙胺(119毫克，1.18毫莫耳，1.2當量)、HATU(412毫克，1.09毫莫耳，1.1當量)和(+)-前驅物8(199毫克，1.18毫莫耳，1.1當量)連續地加至含中間物21-1(681毫克，0.99毫莫耳，1.0當量)之乙腈(10毫升)溶液。將反應混合物在室溫下攪拌一小時。將NaI(961毫克，6.41毫莫耳，6.5當量)和TMSCl(589毫克，5.42毫莫耳，5.5當量)連續地加至反應混合物，繼續攪拌直到完成Boc-去保護(~2小時)。然後添加TBAF(11.8毫莫耳，11.8毫升在THF中的1M溶液，12.0當量)，並將反應混合物在60℃下攪拌過夜。添加Na2 CO3 飽和水溶液，過濾出沈澱物和用水徹底地洗滌。將粗製產物以矽凝膠管柱層析純化(溶析液：二氯甲烷→ 二氯甲烷/甲醇90：10)以產生288毫克(46%)的中間物21-2。
步驟2：將三乙胺(91毫克，0.90毫莫耳，2.0當量)和HATU(179毫克，0.47毫莫耳，1.05當量)連續地加至含中間物21-2(288毫克，0.45毫莫耳，1.0當量)和前驅物18(89毫克，0.47毫莫耳，1.05當量)之DMF(4毫升)混合物。將反應混合物在室溫下攪拌二小時。藉由添加Na2 CO3 飽和水溶液將中間物21-3沈澱。過濾出沈澱物，用水洗滌和在高真空下乾燥以產生330毫克(90%)的粗製中間物21-3。
步驟3：將含中間物21-3(165毫克，0.203毫莫耳，1.0當量)、前驅物30(62毫克，0.406毫莫耳，2.0當量)、Pd(PPh3 )4 (23毫克，0.020毫莫耳，0.1當量)和Na2 CO3 (0.91毫升的2M水溶液，1.83毫莫耳，9.0當量)之二烷(2毫升)混合物在氬氣下於110℃攪拌15分鐘。然後在冰浴中將反應混合物快速地冷卻並添加Na2 CO3 飽和水溶液。過濾出沈澱物，用水洗滌和在減壓下乾燥。將粗製產物以矽凝膠管柱.層析純化(溶析液：二氯甲烷→二氯甲烷/甲醇95：5)，以產生115毫克(67%)的化合物64。
比照化合物64製備化合物41、54、62、63、65和94。
實例22化合物44的合成
使用如中間物17-4的製備所例示之步驟製備中間物22-1。使用如實例19中所述之Boc-去保護步驟將中間物22-1轉化成中間物22-2。分別地使用來自如實例21中所述之步驟2和步驟3的步驟將後者經由中間物22-3轉化成化合物44。
比照化合物44製備化合物12、18、20、21、22、23、24、25、29、30、31、39、42、43、46、48、49和9。
實例23：化合物32的合成
將含中間物22-3(230毫克，0.301毫莫耳，4.0當量)、前驅物27(501毫克，1.21毫莫耳，4.0當量)、Pd(PPh3 )4 (35毫克，0.030毫莫耳，0.1當量)和LiCl(26毫克，0.603毫莫耳，2.0當量)之二烷(3毫升)混合物在氬氣下於85℃攪拌40分鐘。在冰浴中冷卻反應混合物且添加過量水。過濾出沈澱物，用水洗滌和在減壓下乾燥。將粗製產物以矽凝膠管柱層析純化(溶析液：二氯甲烷→二氯甲烷/甲醇96：4)以產生137毫克(56%)的化合物32.。
比照化合物32製備化合物14、28和29。
實例24：化合物38的合成
將含化合物32(50毫克，0.06毫莫耳，1.0當量)之甲醇(6毫升)溶液在25。C下用Pd(Pd/C 10%，50毫克)作為催化劑氫化(1.0 atm之氫)90分鐘。反應混合物通過矽藻土過濾，在減壓下濃縮濾液以產生31毫克(61%)的化合物3。
實例25：化合物17的合成
使用中間物17-3的製備所例示之步驟製備中間物25-1。
步驟1：將HATU(1.25克，3.30毫莫耳，1.05當量)加至含三乙胺(954毫克，9.42毫莫耳，3.0當量)、(+)-前驅物2(519毫克，3.14毫莫耳，1.0當量)和中間物25-1(2.0克，3.14毫莫耳，1.0當量)之DMF(10毫升)混合物。將反應混合物在室溫下攪拌30分鐘。添加乙酸乙酯，將有機相用Na2 CO3 飽和水溶液和鹽水洗滌，用MgSO4 乾燥並在減壓下濃縮。將粗製產物以矽凝膠管柱層析純化(溶析液：二氯甲烷→二氯甲烷/甲醇99：3)以產生1.67克(68%)的中間物25-2。
步驟2：將含中間物25-2(1.67克，2.13毫莫耳，1.0當量)和TBAF(32.0毫升在THF中的1M溶液，32.0毫莫耳，15.0當量)之THF(40毫升)混合物在室溫下攪拌過夜。將乙酸乙酯和鹽水加至反應混合物。將有機層分離，用水徹底地洗滌和乾燥以產生1.47克(100%)的粗製中間物25-3。粗製產物如此使用於下一步驟。
步驟3：使用如實例27中步驟2所述之步驟將中間物25-3轉化成中間物25-4，包括TFA媒介之Boc-去保護步驟。分別地使用來自如實例21中所述之步驟2和步驟3的步驟將後者轉化成化合物17。
比照化合物17製備化合物15和87。比照化合物17製備化合物37，但是包括如實例17中步驟6所述之HCl媒介的Boc-去保護步驟。
實例26：化合物51的合成
步驟1：將含(-)-前驅物1(10.0克，26.0毫莫耳，1.0當量)、前驅物34(6.5克，39.0毫莫耳，1.5當量)和NaHCO3 水溶液(21.9克在50毫升的水中，260.2毫莫耳，10當量)之二烷(200毫升)混合物在氬氣下於室溫攪拌。添加Pd(PPh3 )4 (1.5克，1.3毫莫耳，0.05當量)並將反應混合物在80℃下攪拌一小時且然後冷卻到室溫。添加乙酸乙酯，接著添加Na2 CO3 飽和水溶液。將有機層和水層分離，將有機層用鹽水洗滌，並用無水MgSO4 乾燥以產生第一批粗製中間物26-2。用2M HCl溶液將水層酸化至pH~2並用乙酸乙酯洗滌。隨後用Na2 CO3 粉將pH調整至pH~6並用乙酸乙酯進行萃取。將合併之有機相用無水MgSO4 乾燥，並在減壓下濃縮以產生粗製内酯水解副產物(中間物26-1)。此在甲苯中於Dean-Stark條件下回流直到再內酯化作用完全。在減壓下除去溶劑之後，獲得第二批的粗製中間物26-2。將二批次組合和藉由矽凝膠管柱層析純化(溶析液：庚烷/乙酸乙酯90：10→30：70)以產生7.9克(71%)的純中間物26-2。
步驟2：根據如實例17中步驟1所述之步驟將内酯26-2轉化成中間物26-3。藉由矽凝膠管柱層析(溶析液：庚烷→ 庚烷/乙酸乙酯5：5)之純化產生中間物26-3，具有73%產率。
步驟3：將NaOH(124.5毫升的1M水溶液，124.5毫莫耳，9.3當量)加至含中間物26-3(7.18克，13.5毫莫耳，1.0當量)之THF(120毫升)溶液。將反應混合物在室溫下攪拌一小時。將反應混合物在減壓下部分濃縮，然後用10%檸檬酸水溶液酸化直到pH~6。用二氯甲烷萃取水相，將合併之有機相用無水MgSO4 乾燥並在減壓下濃縮以產生7.40克(99%)的中間物26-4。
步驟4：根據如實例17中步驟3所述之步驟將中間物26-4轉化成中間物26-5。藉由矽凝膠管柱層析(溶析液：二氯甲烷→ 二氯甲烷/甲醇96：4)之純化產生中間物26-5，具有84%產率。
步驟5：使用如實例21中步驟1所述之步驟將中間物26-5轉化成中間物26-6。使用如實例17中步驟7所述之步驟將後者轉化成化合物51。
比照化合物51製備化合物50、58、59、80、89和95。根據如實例33中所述之步驟，化合物51的氯化產生化合物60。
實例27：化合物86的合成
步驟1：使用如實例17中步驟4所述之步驟使中間物26-5與消旋(rac)-前驅物4反應。將粗製反應產物懸浮在回流溫度下之乙腈和甲醇(1：1)的混合物中。冷卻至0℃之後，過濾出沈澱物以產生白色粉末之中間物27-1A和中間物27-1B的1：1混合物(71%)。此混合物如此使用於下一步驟。
步驟2：將TFA(10毫升，135毫莫耳，129當量)加至中間物27-1A和中間物27-1B(765毫克，1.04毫莫耳，1.0當量)在二氯甲烷(200毫升)中的1：1混合物。將反應混合物在室溫下攪拌直到LCMS顯示完全轉化(~30分鐘，為了防止副產物的形成，反應時間必須保持儘可能短)。添加Na2 CO3 飽和水溶液，分離該等層，用二氯甲烷萃取水層，合併之有機相用鹽水洗滌、用無水MgSO4 乾燥並在減壓下濃縮。藉由矽凝膠管柱層析(溶析液：二氯甲烷→二氯甲烷/甲醇93：7)分離二異構物以提供320毫克(48%)的中間物27-2A(第一部分)和298毫克(45%)的中間物27-2B(第二部分)。
使用如實例17中步驟7所述之步驟將中間物27-2A轉化成化合物86。
實例28：化合物61的合成
根據如實例17中步驟4所述之步驟使中間物28-1(比照中間物26-5製備)與(-)-前驅物11a反應，以產生中間物28-2。隨後應用如實例19中所述之步驟完成Boc-去保護。使用如實例17中步驟7所述之步驟將中間物28-3進一步轉化成化合物61。
比照化合物61製備化合物56、98、101和102。
實例29：化合物90的合成
步驟1：使用如實例17中步驟1所述之步驟將内酯29-1[CAS號：165453-05-4]轉化成中間物29-2，具有62%產率。
步驟2：將中間物29-2(290毫克，558毫莫耳，1.0當量)溶解在MeOH(15毫升)中和在在H-立方體中用呈催化筒之10%Pd/C氫化。氫化係藉由在大氣壓下以1毫升/分鐘之流速將反應溶液泵送通過H-立方體而實施。溶劑蒸發之後，獲得230毫克(96%)的中間物29-3。
步驟3：將中間物29-3(1.38克，3.36毫莫耳，1.0當量)溶解無水二氯甲烷在中。添加N-苯基-雙-(三氟甲烷磺醯亞胺)(1.44克，4.03毫莫耳，1.2當量)和Cs2 CO3 (1.31克，4.03毫莫耳，1.2當量)，且將所得懸浮液在室溫下攪拌16小時直到根據LCMS分析為完全轉化。將混合物用二氯甲烷稀釋和用NaHCO3 水溶液和鹽水洗滌，將有機相用Na2 SO4 乾燥並在減壓下濃縮。將粗製產物以矽凝膠管柱層析純化(溶析液：異己烷/乙酸乙酯)以產生1.74克(92%)的中間物29-4。
步驟4：將中間物29-4(1.55克，2.78毫莫耳，1.0當量)溶解在THF(25毫升)中，接著添加LiOH(5毫升的1M水溶液，5.0毫莫耳，1.8當量)和MeOH(10毫升)。使反應留在室溫下攪拌1小時。將溶劑與甲苯共蒸發且在真空中乾燥，將殘餘物和咪唑(3.79克，55.6毫莫耳，20.0當量)溶解在無水DMF(10毫升)中。添加TBDMSCl(4.19克，27.8毫莫耳，10.0當量)並將反應混合物在室溫下攪拌16小時。添加MeOH並繼續攪拌二小時直到LCMS顯示羧酸之完全TBMS-去保護。將混合物用乙酸乙酯稀釋和用鹽水洗滌。將有機相在減壓下濃縮及藉由矽凝膠管柱層析(溶析液：二氯甲烷/甲醇)純化產物以產生1.68克(87%)的中間物29-5。
步驟5：將DIPEA(1.5毫升，8.65毫莫耳，4.0當量)加至含中間物29-5(1.5克，2.16毫莫耳，1.0當量)、(-)-前驅物16(437毫克，3.03毫莫耳，1.4當量)和(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯啶基鏻六氟磷酸鹽(PyBOP，1.35克，2.59毫莫耳)之無水DMF(15毫升)的攪拌溶液中。二小時之後將混合物用二氯甲烷(50毫升)稀釋和用NaHCO3 水溶液洗滌、乾燥和濃縮至乾以產生粗製中間物29-6，其如此使用於下一步驟。
步驟6：將含粗製中間物29-6、前驅物34之HCl鹽(109毫克，0.55毫莫耳)、Pd(PPh3 )2 Cl2 (35毫克，0.055毫莫耳)和DIPEA(288毫克，2.23毫莫耳)之二甲氧基乙烷/水/乙醇7：3：1混合物的懸浮液在70℃下攪拌16小時。將反應混合物在減壓下濃縮，藉由矽凝膠管柱層析純化殘餘物(溶析液：己烷/乙酸乙酯93：7→40：60)以產生360毫克(21%經過二步驟)的中間物29-7。
步驟7：將HCl(1.25毫升的在二烷中之4M溶液)加至中間物29-7(180毫克，0.23毫莫耳，1.0當量)在二烷(5毫升)和甲醇(1毫升)中的溶液。在室溫下攪拌40分鐘之後，將混合物濃縮至乾且在真空下乾燥殘餘物。將殘餘物再溶解於DMF(10毫升)中，添加前驅物18(51毫克，0.27毫莫耳，1.2當量)，PyBOP(142毫克，0.27毫莫耳，1.2當量)和DIPEA(121毫克，0.94毫莫耳，4.0當量)。將反應混合物在室溫下攪拌四小時。添加二氯甲烷，將有機層用NaHCO3 水溶液洗滌，用MgSO4 乾燥並在減壓下濃縮。藉由製備型逆相HPLC之純化產生79毫克(46%)的化合物90。
實例30：化合物84的合成
步驟1：將溶解在N,N-二甲基乙醯胺(DMA；11毫升)中之中間物29-4(430毫克，0.765毫莫耳)與2-乙基噻唑([CAS號：15679-09-1]；433毫克，3.83毫莫耳，5.0當量)、KOAc(113毫克，1.17毫莫耳，1.5當量)和Pd(PPh3 )4 (44毫克，38.3微莫耳，0.05當量)一起裝入微波小瓶中。用N2 將反應混合物除氣且然後在微波爐中於150℃下加熱一小時。將反應混合物用二氯甲烷稀釋並用1M HCl水溶液、飽和NaHCO3 溶液和鹽水洗滌。將有機相用Na2 SO4 乾燥且在減壓下濃縮。藉由矽凝膠管柱層析純化殘餘物(溶析液：庚烷/乙酸乙酯)以產生169毫克(42%)的中間物30-1。
步驟2：將HCl(10毫升在二烷中的4M溶液)加至中間物30-1(169毫克，0.323毫莫耳，1.0當量)，將混合物在室溫下攪拌一小時。將反應混合物冷凍乾燥過夜。將殘餘物再溶解於二氯甲烷(10毫升)中，接著添加前驅物18(67毫克，0.355毫莫耳，1.1當量)和DIPEA(281微升，1.62毫莫耳，5.0當量)。將反應混合物冷卻至0℃，添加HATU(129毫克，0.339毫莫耳，1.05當量)且在室溫下繼續攪拌三小時。用1M HCl、NaHCO3 飽和水溶液和鹽水洗滌反應混合物。將有機相用Na2 SO4 乾燥，且在減壓下濃縮以產生185毫克(96%)的中間物30-2。
步驟3：根據如實例29中步驟4所述之步驟將中間物30-2轉化成中間物30-3(49%產率)。
步驟4：將HATU(74毫克，194微莫耳，1.1當量)加至在0℃下之中間物30-3(128毫克，176微莫耳，1.0當量)、(-)-前驅物16(38毫克，264微莫耳，1.5當量)和DIPEA(153微升，880微莫耳，5.0當量)在DCM(5毫升)的溶液。將反應混合物攪拌至室溫經二小時。將反應混合物用DCM稀釋並用1M HCl水溶液、NaHCO3 飽和水溶液和鹽水洗滌。將有機相用Na2 SO4 乾燥並在減壓下濃縮。藉由矽凝膠管柱層析純化殘餘物(溶析液：庚烷/乙酸乙酯)以產生35毫克(23%)的中間物30-4。
步驟5：將中間物30-4(35毫克，41微莫耳，1.0當量)在CH3 CN(3毫升)中的溶液冷卻至0℃。逐滴添加HF(170微升)且在室溫下繼續攪拌二小時。藉由小心添加NaHCO3 飽和水溶液接著乙酸乙酯停止反應。分離二相，將有機相用NaHCO3 飽和水溶液洗滌，用無水Na2 SO4 乾燥和在減壓下蒸發。藉由逆相製備型HPLC純化殘餘物，產生10毫克(31%)的化合物84。
實例31：化合物87的合成
步驟1：根據實例29中步驟6所述之步驟使中間物29-4與前驅物34反應。
步驟2：使用如實例29中步驟4所例示之步驟將中間物31-1轉化成中間物31-2。
步驟3：使用如實例29中步驟5所述之步驟使中間物31-2與(-)-前驅物15反應以產生中間物31-3。根據來自實例29中步驟7之步驟將後者轉化成化合物87。
比照化合物87製備化合物83，但使用如實例30步驟1中所述之Heck交叉偶合反應。
實例32：化合物4的合成
步驟1：將(+)-前驅物2(10.0克，60.5毫莫耳，1.0當量)加至在-10℃下之含3-(3-氯苯基)丙酸(11.2克，60.5毫莫耳，1.0當量)、三乙胺(12.3克，121毫莫耳，2.0當量)和HATU(10.0克，60.5毫莫耳，1.0當量)之DMF(120毫升)混合物。將反應混合物在0℃下攪拌二小時。添加乙酸乙酯和水。將有機層分離並用水、1M HCl溶液和Na2 CO3 飽和水溶液洗滌，用MgSO4乾燥及在減壓下濃縮。將粗製產物以矽凝膠管柱層析純化(溶析液：二氯甲烷→二氯甲烷/甲醇96：4)以產生15.8克(79%)的中間物32-1。
步驟2：經30分鐘期間將2-甲氧基丙烯(34.3克，476毫莫耳，10.0當量)逐滴加至在0℃下之含中間物32-1(15.8克，47.6毫莫耳，1.0當量)和吡啶鎓對-對甲苯磺酸鹽(PPTS，1.2克，4.8毫莫耳，0.1當量)之二氯甲烷溶液。將反應混合物在室溫下攪拌24小時。添加乙酸乙酯和水。將有機層分離，用水、1M HCl溶液和Na2 CO3 飽和水溶液洗滌，用MgSO4 乾燥及在減壓下濃縮。將粗製產物以矽凝膠管柱層析純化(溶析液：庚烷/乙酸乙酯80：20→ 40：60)以產生10.1克(57%)的中間物32-2。
步驟3：將正丁基鋰(17.4毫升在己烷中的2.5 M溶液，43.6毫莫耳，2.05當量)逐滴加至在-78℃下之含中間物32-2(7.9克，21.2毫莫耳，1.0當量)和環氧化物32-3([CAS號：1003871-37-1]；7.2克，21.2毫莫耳，1.0當量)之THF(200毫升)溶液。將反應混合物在-25℃下攪拌二小時。逐滴添加水，接著添加乙酸乙酯。將有機層分離，用MgSO4 乾燥並在減壓下濃縮。將粗製產物以矽凝膠管柱層析純化(溶析液：庚烷/乙酸乙酯12：88→ 40：60)以產生5.0克(33%)的中間物32-4。
使用如實例17中所述之步驟5、步驟6和步驟7的步驟將後者轉化成化合物4。
實例33：化合物5的合成
將含中間物32-4(3.6克，5.0毫莫耳，1.0當量)和N-氯琥珀醯亞胺(NCS；806毫克，6.0毫莫耳，1.2當量)之DMF溶液在80℃下攪拌直到不再有起始原料留下。使反應混合物冷卻至室溫之後，加水。將水相用乙酸乙酯萃取，將合併之有機相用1M NaOH溶液洗滌，用MgSO4 乾燥且在減壓下濃縮。藉由矽凝膠管柱層析純化殘餘物(溶析液：二氯甲烷→二氯甲烷/甲醇97.5：2.5)以產生3.1克(82%)的中間物33-1。分別地使用如實例32中步驟4、步驟5和步驟6所述之步驟將後者轉化成化合物5。
類似於化合物5製備化合物6，但使用如實例23中所述之Stille交叉偶合反應和實例27步驟2中所述之TFA媒介的去保護步驟。
實例34：化合物1的合成
使用如實例17中步驟6所述之步驟用HCl處理中間物32-4。藉由矽凝膠管柱層析純化粗製反應產物(溶析液：二氯甲烷→二氯甲烷/甲醇93：7)以產生中間物34-1(42%)。使用來自如實例21中所述之步驟2和步驟3的步驟將後者轉化成化合物1。
比照化合物1製備化合物2和3。
實例35：化合物79的合成
使用如中間物28-3的製備所例示之步驟製備胺35-1。將含中間物35-1(250毫克，0.39毫莫耳，1.0當量)和前驅物24(150毫克，0.55毫莫耳，1.4當量)之DMF(4毫升)溶液在室溫下攪拌一小時。將水及Na2 CO3 飽和水溶液加至反應混合物，過濾出沈澱物且用水洗滌。將粗製產物懸浮在沸騰乙腈中且接著使冷卻至室溫，獲得236毫克(73%)的呈白色粉末之化合物79。
比照化合物79製備化合物81。比照化合物79製備化合物68，但從胺18-4開始。在化合物70、71、72、73和76之情形中，適當胺係根據如實例19中所述之中間物19-2的合成製備。在化合物74、74、76、77和81之情形中，適當胺係根據如實例26中所述之中間物26-6的合成製備。在化合物69之情形中，適當胺(鹽酸鹽)係如實例29中所述製備。
實例36：化合物57的合成
胺36-1係使用中間物26-6的製備所例示之步驟製備。
步驟1：將胺36-1(164毫克，0.26毫莫耳，1.0當量)和前驅物19(67毫克，0.29毫莫耳，1.1當量)溶解在乙腈(15毫升)中。連續地添加三乙胺(55微升，0.40毫莫耳，1.5當量)和HATU(111毫克，0.29毫莫耳，1.1當量)。將反應混合物在室溫下攪拌30分鐘。添加NaI(436毫克，2.91毫莫耳，11.0當量)和TMSCl(287毫克，2.65毫莫耳，10.0當量)並繼續攪拌一小時。添加甲醇(10毫升)和NaOH水溶液(10毫升的1M NaOH溶液，10.0毫莫耳，38.0當量)，將反應混合物攪拌另30分鐘。添加過量水，過濾出沈澱物，用水洗滌和在高真空下乾燥以產生149毫克(69%)的粗製中間物36-2。
步驟2：將中間物36-2(149毫克，0.20毫莫耳，1.0當量)、前驅物23(66毫克，0.31毫莫耳，1.5當量)和三乙胺(41毫克，0.41毫莫耳，2.0當量)在DMF(15毫升)中的溶液在室溫下攪拌一小時。將水和Na2 CO3 飽和水溶液加至反應混合物，過濾出沈澱物且用水洗滌。以矽凝膠管柱層析純化(溶析液：二氯甲烷→二氯甲烷/甲醇96：4)之後，獲得62毫克(36%)的化合物57。
比照化合物57製備化合物55。比照化合物57但從胺18-4開始製備化合物34。
實例37：化合物97的合成
比照如實例26中所例示之中間物26-5製備中間物37-1。
步驟1：使用如實例36步驟1中所述之步驟將中間物37-1轉化成中間物37-2。
步驟2：將含中間物37-2(287毫克，0.43毫莫耳，1.0當量)之二氯甲烷(4毫升)溶液慢慢地加至在0℃下之含氯乙醯氯(73毫克，0.65毫莫耳，1.5當量)和三乙胺(0.18毫升，1.30毫莫耳，3.0當量)之二氯甲烷(4毫升)混合物。在室溫下攪拌反應混合物直到完全轉化，然後用NH4 Cl飽和水溶液洗滌，用無水MgSO4 乾燥並在減壓下濃縮以產生240毫克(77%)的粗製中間物37-3。
步驟3：將中間物37-3(240毫克，0.33毫莫耳，1.0當量)、吡咯啶(0.286毫升，3.25毫莫耳，10當量)和碘化四丁銨(TBAI；12毫克，0.03毫莫耳，0.1當量)在N-甲基吡咯啶酮(NMP；3毫升)中的混合物在室溫下攪拌直到完全轉化。將水加至反應混合物，過濾出沈澱物，用水洗滌和在高真空下乾燥。將粗製產物以矽凝膠管柱層析純化(溶析液：二氯甲烷→ 二氯甲烷/甲醇95：5)以產生216毫克(85%)的化合物97。
實例38：化合物9的合成
比照中間物17-6用包括如實例27步驟2中所述的TFA媒介之Boc-去保護步驟的步驟6製備中間物38-1。
步驟1：將中間物38-1(610毫克，0.96毫莫耳，1.0當量)和前驅物19(223毫克，0.96毫莫耳，1.0當量)溶解在DMF(4毫升)中。連續地添加DIPEA(374毫克，2.89毫莫耳，3.0當量)和HATU(385毫克，1.01毫莫耳，1.05當量)。將反應混合物在室溫下攪拌30分鐘。添加Na2 CO3 飽和水溶液，將水相用乙酸乙酯萃取。將合併之有機相用鹽水洗滌，用MgSO4 乾燥並在減壓下濃縮。將粗製產物以矽凝膠管柱層析純化(溶析液：二氯甲烷→ 二氯甲烷/甲醇93：7)以產生207毫克(25%)的中間物38-2。
步驟2：根據如實例27步驟2中所述的TFA媒介之Boc-去保護步驟將中間物38-2轉化成中間物38-3。
步驟3：將DIPEA(74毫克，0.57毫莫耳，3.0當量)和HATU(76毫克，0.20毫莫耳，1.05當量)連續地加至含中間物38-3(142毫克，0.19毫莫耳，1.0當量)和前驅物20(25毫克，0.19毫莫耳，1.0當量)之DMF(3毫升)溶液。將反應混合物在室溫下攪拌30分鐘。添加Na2 CO3 飽和水溶液，用乙酸乙酯萃取水相。將合併之有機相用鹽水洗滌並在減壓下濃縮。藉由製備型HPLC純化粗製產物以產生45毫克(26%經過二步驟)的化合物9。
使用實例38所例示之反應順序從中間物35-1開始合成化合物19，但步驟2包括如實例17步驟6中所述之HCl媒介之Boc-去保護步驟。
實例39：化合物53的合成
使用如實例36步驟1中所述之步驟從中間物18-4開始製備胺39-1。將中間物39-1(210毫克，0.29毫莫耳，1.0當量)和前驅物21(32毫克，0.29毫莫耳，1.0當量)溶解在DMF(10毫升)中。連續地添加三乙胺(58毫克，0.58毫莫耳，2.0當量)和HATU(115毫克，0.30毫莫耳，1.05當量)。將反應混合物在室溫下攪拌一小時。添加Na2 CO3 飽和水溶液，過濾出沈澱物，用水洗滌和在高真空下乾燥。將粗製產物以矽凝膠管柱層析純化(溶析液：二氯甲烷→ 二氯甲烷/甲醇97：3)以產生143毫克(59%)的化合物53。
在化合物47之情形中，用於醯胺偶合之胺係經由比照如中間物38-3的製備所述者的合成順序製備，但其中Boc-去保護係根據如實例19中所述步驟進行。
滯留時間(Rt )以分鐘給予且經由逆相UPLC(超效液體層析法)利用BEH C18管柱(1.7微米，2.1 x 50毫米，Waters Acquity)以0.7毫升/分鐘之流速及70℃之管柱溫度測定。二流動相(流動相A：MeOH；流動相B：在90%H2 O和10%CH3 CN中之10毫米NH4 OAc)用以操作在1.3分鐘內從5%A及95%B開始至95%A和5%B，固定0.2分鐘，然後在0.2分鐘內回到5%A和95%B及最後將這些絛件固定0.3分鐘之梯度條件。使用0.75微升之注射體積。用DSC1 STARe (Mettler-Toledo)測定熔點(m.p.)。用10℃/分鐘之溫度梯度測量熔點。開始溫度為30℃，最大溫度300℃。值為峰值。
表3
生物例 一般抗病毒分析
藉由以用於表現提高之綠色螢光蛋白(EGFP)的編碼HIV長終端重複區(LTR)序列之可選擇構造作為啟動子轉染MT4細胞，隨後選擇永久經轉染的細胞而獲得MT4-LTR-EGFP細胞。對不同HIV-1菌株之抗病毒活性，係在以細胞為主的病毒複製分析中測定。此處在有或沒有不同抑制劑濃度存在下感染MT4-LTR-EGFP細胞(150,000細胞/毫升)(0.0025之感染的多重性[MOI])。使用二種讀出之方法，在感染後第3天GFP-螢光之定量或在感染後第4天使用刃天青(Rezazurin)之細胞生存力的定量(如Fields,R. D.,和M. V. Lancaster(1993)在Am. Biotechnol. Lab. 11：48-50中所述)。二種方法顯示相似的劑量-反應曲線，從其可測定EC50。
一般毒性分析
對以CMV-EGFP報導基因穩定轉化且在有或沒有試驗化合物濃度下培養的模擬感染之MT4細胞(150,000細胞/毫升)平行測定抑制劑之毒性。使用二種讀出之方法，在第3天GFP-螢光之定量或在第4天使用刃天青之細胞生存力的定量。二種方法顯示相似的劑量-反應曲線，從其可測定CC50。
50%HS-刃天青
關於抗病毒分析，在50%人血清MT-4細胞存在下以0.001至0.01CCID50/細胞在RPMI1640培養基中之MOI用HIV-1 IIIB感染。培養1小時之後，洗滌細胞且覆於包含化合物在10%胎牛血清(FCS)或50%人血清存在下之連續稀釋液的96-井盤。4天培養之後，以使用刃天青之細胞生存力分析測定在50%人血清存在下之EC50。
表4
在下表中，菌株A、B和C為臨床分離物，其在蛋白酶域中包括下列蛋白酶抑制劑抗突變性(沒提到背景突變)。
最後一欄表列野生型菌株IIB在50%人血清MT-4細胞存在下之結果。

Claims (20)

  1. 一種式I之化合物，，其中R1 為鹵基、C1-4 烷氧基、三氟甲氧基；R2 為下式之基團： R3 為下式之基團： R4 為下式之基團： n為0或1；各A獨立為CH或N；R5 及R6 獨立為氫、C1-4 烷基或鹵基；R7 為C1-4 烷基或C1-4 烷氧基C1-4 烷基；R8 為C1-4 烷基或C1-4 烷氧基C1-4 烷基；各R9 獨立為C1-4 烷基、環丙基、三氟甲基、C1-4 烷氧基或二甲胺基；R10 為氫、C1-4 烷基、環丙基、三氟甲基、C1-4 烷氧基或二甲胺基；R11 為氫或C1-4 烷基；其醫藥上可接受的加成鹽類。
  2. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中R1 為鹵基或甲氧基。
  3. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中R1 為氟基或氯基；該氟基或氯基係取代於鄰位；或R1 為甲氧基；該甲氧基係取代於間位。
  4. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中R2 為下式之基 團
  5. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中R2 為下式之基團
  6. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中R5 為氫，及R6 為鹵基或C1-4 烷基；R5 為鹵基及R6 為氫；R5 為鹵基或C1-4 烷基，及R6 為氫；或R5 和R6 皆為氫或皆為鹵基；R11 為C1-4 烷基。
  7. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中R5 為氫及R6 為氟基或氯基；R5 為氟基或氯基及R6 為氫；R5 為氫及R6 為甲基；R5 和R6 皆為氫；或R5 為氯及R6 為氟； 及R11 為甲基。
  8. 如申請專利範圍第7項之化合物，其中R5 為氫及R6 為氟；R5 為氯及R6 為氫；R5 為氫及R6 為甲基；R5 和R6 皆為氫或R5 為氯及R6 為氟。
  9. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中R3 為下式之基團
  10. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中R3 為下式之基團
  11. 如申請專利範圍第10項之化合物，其中R8 為甲基或2-甲氧基乙基。
  12. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中R9 為C1-2 烷氧基 或二甲胺基。
  13. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中R4 為具有如申請專利範圍第1項中所界定之化學結構的基團，但其中在第一基團中R9 為R9a ，在第二基團中R9 為R9b ，在第三基團中R9 為R9c ，在第四基團中R9 為R9d ，在第五和在第六基團中R9 為R9e ；該等基團可列表示如下： 其中各A獨立為CH或N；或其中各A為CH；R9a 為C1-4 烷氧基或二甲胺基；R9b 為C1-4 烷氧基或二甲胺基；R9c 為C1-4 烷氧基或二甲胺基；R9d 為C1-4 烷基、環丙基、三氟甲基；R10 為氫、C1-4 烷基、環丙基或三氟甲基；或R10 為氫、甲基、環丙基或三氟甲基；各R9e 獨立為C1-4 烷基、環丙基、C1-4 烷氧基或二甲胺基。
  14. 如申請專利範圍第13項之化合物，其中在R9a 、R9b 、R9c 、R9d 或R9e 中C1-4 烷氧基為甲氧基及C1-4 烷基為甲 基。
  15. 如申請專利範圍第13項之化合物，其中R4 為： 其中A為CH及R9a 為甲氧基或二甲胺基。
  16. 如申請專利範圍第1項之化合物，其具有式
  17. 如申請專利範圍第1項之化合物，其具有式
  18. 如申請專利範圍第1項之化合物，其具有式
  19. 如申請專利範圍第18項之化合物，其係作為醫藥之用途。
  20. 一種醫藥組成物，其包含有效量之如申請專利範圍第1-18項中任一項所定義之化合物和載劑。
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