TWI427077B - 吡唑化合物及其用途和含有彼之藥學組成物 - Google Patents

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Description

吡唑化合物及其用途和含有彼之藥學組成物
本發明係關於抑制或調節依賴細胞週期素的激酶(CDK)、肝糖合成酶激酶(GSK)以及奧若拉激酶(Aurora kinases)的吡唑化合物、該化合物用於治療或預防由彼等激酶所介導之疾病狀態或病況的用途、以及具有激酶抑制或調節活性的新穎化合物。本發明還提供了含有前述化合物的藥學組成物以及新穎的化學中間物。
發明之背景
蛋白質激酶係由一大族群在細胞內負責控制種類廣泛之轉導程序的結構上有關聯的酶所構成的(Hardie,G.and Hanks,S.(1995)The Protein Kinase Facts Book.I and II, Academic Press,San Diego,CA)。激酶可依照彼等所磷酸化的受質(例如，蛋白質－酪氨酸、蛋白質－絲氨酸/蘇氨酸、脂質類等等)，來分類成多個族群。通常對應至各個此等激酶族群的順序再現單位已被鑑定出來(例如，Hanks,S.K.,Hunter,T.,FASEB J .,9：576－596(1995)；Knightonet al. ,Science ,253：407－414(1991)；Hiles,et al.,Cell, 70：419－429(1992)；Kunz,et al .,Cell ,73：585－596(1993)；Garcia－Buston,et al.,EMBO J., 13：2352－2361(1994))。
蛋白質激酶可藉由彼等的調控機轉，予以特性化。此等機轉包括，例如，自身磷酸化、藉由其他激酶所進行的轉磷酸化、蛋白質－蛋白質相互作用、蛋白質－脂質相互作用、以及蛋白質－多核苷酸相互作用。一個單獨的蛋白質激酶可被一個以上的機轉所調控。
激酶係藉由將磷酸基團添加至標靶蛋白質，來調控多種不同的細胞過程，包括(但不侷限於)：增生、分化、細胞凋亡、動力、轉錄、轉譯以及其他傳訊息過程。此等磷酸化事件(events)係作為細胞的開通/隔斷開關，其可調節或調控標靶蛋白質的生理作用。標靶蛋白質的磷酸化係回應各式各樣的細胞外訊息(激素、神經遞質、生長及分化因子等等)、細胞週期事件、環境或營養壓力等等，而發生的。適當的蛋白質激酶在傳訊息路徑內作用，而(直接或間接)使，例如，新陳代謝酶、調控蛋白質、細胞骨架蛋白質、離子通道或幫浦活化或失活化。由於蛋白質磷酸化有缺陷所造成之未受控制的傳訊息與多種疾病有關聯，彼等疾病包括，例如，炎症、癌症、過敏/氣喘、免疫系統的疾病及病況、中樞神經系統的疾病及病況、以及血管生成。
依賴細胞週期素的激酶
真核細胞分化的過程可廣泛地細分為一系列命名為G1、S、G2以及M的連續階段。經證實，透過細胞週期之各階段正確的行進係精確地依賴一群稱為細胞週期素激酶(cdks)之蛋白質以及另一組稱作為細胞週期素之彼等的關聯蛋白質夥伴的空間及時間上的調控。Cdks係cdc2(亦稱作為cdk1)同系絲氨酸－蘇氨酸激酶蛋白質，彼等能夠在順序依存背景下，在各種多肽的磷酸化中，利用ATP作為受質。細胞週期素乃一族群以具有同質性區域(含有大約100個胺基酸，稱作為「細胞週期素盒(cyclin box)」，其係用來與特定cdk夥伴蛋白質結合以及定義對於該蛋白質的選擇性)為特徵的蛋白質。
在整個細胞週期內，對於表現程度、降解速率、以及各種cdks及細胞週期素之活化程度的調節，會導致一系列cdk/細胞週期素錯合物週期地形成，其中cdks係具有酶促活性的。此等錯合物的形成可控制經過分開的細胞週期關卡的通行，因而能夠使細胞分化持續進行。未能符合特定細胞週期關卡的先決必備的生化標準的結果，亦即，無法形成必須的cdk/細胞週期素錯合物，會導致細胞週期停止及/或細胞凋亡。脫軌的細胞增生(如癌症所顯現的)通常會助長正確細胞週期控制的損失。因此，cdk酶促活性的抑制可提供一使異常分裂之細胞的分裂停止及/或將該異常分裂之細胞殺死的方法。Cdks及cdk錯合物的多樣性、以及彼等在介導細胞週期上所扮演的重要角色，提供了範圍廣泛之根據既定生化理論基礎所選定之有可能治療的標的。
由G1階段至S階段的行進主要係由cdk2、cdk3、cdk4以及cdk6聯合D及E類型細胞週期素的成員來調控的。該D類型細胞週期素似乎有助於超越G1限制點的通行，而cdk2/細胞週期素E錯合物乃由G1至S階段之轉變的關鍵。後續之行進通過S階段以及進入G2階段，被認為係需要cdk2/細胞週期素A錯合物的。有絲分裂以及觸發有絲分裂之由G2至M階段的轉變係由cdk1以及A與B類型細胞週期素來調控的。
在G1階段期間，視網膜胚細胞瘤蛋白質(Rb)以及相關的袋形蛋白質(pocket protein)(諸如，p130)乃cdk(2、4及6)/細胞週期素錯合物的受質。通過G1的行進部分係由過磷酸化所促進的，因此，cdk(4/6)/細胞週期素－D錯合物會使Rb及p130失去活性。Rb及p130的過磷酸化會造成轉錄因子(諸如，E2F)的釋離，因而，使得行進通過G1以及進入S－階段所需的基因(諸如，細胞週期素E的基因)表現。週期素E的表現會促使cdk2/細胞週期素E錯合物的形成，而該錯合物會經由Rb的進一步磷酸化，而擴大或維持E2F的量。該cdk2/細胞週期素E錯合物亦會將DNA複製所需的其他蛋白質(諸如，NPAT，其與組織蛋白的生物合成有關)磷酸化。經由有絲分裂原所刺激的Myc路徑(其係供給至cdk2/細胞週期素E路徑)，亦可調控G1行進及G1/S轉換。cdk2亦可經由p21量的p53調控，連接至p53所介導的DNA損傷反應路徑。p21乃cdk2/週期素E的蛋白質抑制劑，因而能夠阻斷或延緩G1/S轉變。因此，cdk2/細胞週期素E錯合物表示來自Rb、Myc及p53路徑之生化刺激整合至一定程度的點。cdk2及/或cdk2/細胞週期素E錯合物因而可為設計用來使脫軌分裂細胞的細胞週期停止或恢復對該週期之控制的治療的良好標的。
cdk3在細胞週期內的角色尚不清楚。雖然直至目前為止，尚未有關聯細胞週期素夥伴被鑑定出來，但是，cdk3之一佔優勢的負面形式會延緩G1的細胞，因此，暗示cdk3參與了G1/S轉換的調控。
雖然，大多數的cdks皆與細胞週期有關聯，但是，有證據顯示cdk族群的某些成員亦涉及其他生化過程。這可由cdk5獲得證實，cdk5係正確的神經元發展所需者且已經確認與多個神經元蛋白質[諸如，Tau、NUDE－1、突觸蛋白1(synapsin 1)、DARPP32以及Munc 18/Syntaxin 1A錯合物]的磷酸化有關聯。神經cdk5可藉由結合至p35/p39蛋白質，而輕易地被活化。然而，cdk5活性可藉由p25(p35的截短版本)的結合，而被去調控(deregulated)。絕血、興奮毒性(excitotoxicity)、以及β－澱粉樣肽可誘發p35至p25的轉換以及後續之cdk5活性的去調控。因此，p25被認為與神經變性疾病(諸如，阿耳茲海默氏症)的發病原理有關，且因而就針對於此等疾病的治療而言，乃重要的標的。
cdk7係一種核蛋白質，其具有cdc2 CAK活性且係結合至細胞週期素H。cdk7已被鑑定出為TFIIH轉錄錯合物的組成份，該錯合物具有RNA聚合酶II C－末端功能部位(CTD)活性。這已被與經由Tat介導之生化路徑的HIV－1轉錄聯想在一起。cdk8結合至細胞週期素C且與RNA聚合酶II之CTD的磷酸化有關。同樣地，cdk9/細胞週期素－T1錯合物(P－TEFb錯合物)與RNA聚合酶II的延長控制有關。PTEF－b亦為HIV－1基因組藉由病毒轉活化因子Tat透過其與細胞週期素T1之相互反應所進行之轉錄的活化所需的。因此，cdk7、cdk8、cdk9以及P－TEFb錯合物乃抗病毒治療之有潛力的標的。
在分子等級，cdk/細胞週期素錯合物活性的介導需要一系列激發及抑制的磷酸化或去磷酸化事件。cdk磷酸化係由一群cdk活化激酶(CAKs)及/或諸如wee 1、Myt 1及Mik 1的激酶所進行的。去磷酸化則係由磷酸酶(諸如，cdc 25(a & c)、pp2a或KAP)所進行的。
cdk/細胞週期素錯合物活性可進一步被二個族群的內源細胞蛋白質類抑制劑所調控：Kip/Cip族群，或INK族群。該INK蛋白質族群係專一地與cdk4及cdk6結合。p16i n k 4 (亦稱為MTS1)乃有潛力的腫瘤抑制劑基因，其會使多數的原發癌突變或予以去除。Kip/Cip族群含有諸如下列的蛋白質：p21C i p , W a f 1 、p27K i p 1 以及p57K i p 2 。如前文所討論到的，p21係被p53所誘發且能夠使cdk2/細胞週期素(E/A)以及cdk4/細胞週期素(D1/D2/D3)錯合物失去活性。在乳癌、結腸癌及前列腺癌中，已發現到非典型的低量p27表現。相反地，固體腫瘤內之細胞週期素E的過度表現已被證實與病患的預後不佳有關。細胞週期素D1的過度表現與食管、乳房、鳞狀、以及非小細胞肺癌瘤有關。
cdks以及彼等之相關蛋白質在增生細胞內所扮演之協調及推動細胞週期的重要角色已略述於前文。而cdks在其中扮演了重要角色的一些生化路徑亦已記述了。因此，採用一般性地以cdks為標靶或以特定cdks為標靶之治療來治療增生性疾病(諸如，癌症)之單一療法的發展可能具有高度需求的。cdk抑制劑可想見亦可用於治療其他病況，特別是，諸如，病毒感染、自動免疫疾病以及神經變性疾病。以cdk為標靶治療在與其他既存或新治療藥劑併用時，在治療前文所提及之疾病上，亦可提供臨床上的益處。以cdk為標靶之抗癌療法可能具有優於許多目前所使用的抗腫瘤劑的優點，因為彼等不是直接與DNA相互作用，因此，應該能夠降低繼發腫瘤發展的危險性。
擴散性大B－細胞淋巴瘤(DLBCL)
細胞週期素的行進係由細胞週期素、依賴細胞週期素的激酶(CDKs)以及CDK－抑制劑(CDKi)(彼等乃負面細胞週期調控劑)的合併作用來調控的。p27KIP1係細胞週期調控的CKDi鍵，其降解係Gl/S轉變所需的。儘管增生淋巴細胞內並沒有p27KIP1的表現，但是有報告證實某些攻擊性B－細胞淋巴瘤顯示出異常的p27KIP1染色。在此類型淋巴瘤內發現到p27KIP1的異常高表現。對此等發現所進行之臨床關聯性的分析(單變項以及多變項分析)顯示，此類型腫瘤內的高水平p27KIP1表現乃不利的預後標記。此等結果顯示，擴散性大B－細胞淋巴瘤(DLBCL)內有異常的p27KIP1表現(具有不利的臨床上意義)，這暗示該異常的p27KIP1蛋白質可藉由與其他細胞週期調控劑相互反應，而變成不具功能。(Br.J.Cancer,1999 Jul；80(9)：1427－34。p27KIP1 is abnormally expressed in Diffuse Large B－cell Lymphomas and is associated with an adverse clinical out come.Saez A,Sanchez E,Sanchez－Beato M,Cruz M A,ChaconI,Munoz E,Camacho FI,Martinez－Montero JC,Mollejo M,Garcia JF,Piris MA.Department of Pathology,Virgen de la Salud Hospital,Toledo,Spain。)
慢性淋巴細胞性白血病
在西半球，B－細胞慢性淋巴細胞性白血病(CLL)係最普遍的白血病，每年有大約10,000個新病歷被診斷出(Parker SL,Tong T.Bolden S,Wingo Pa：Cancer statistics,1997,Ca.Cancer.J.Clin.47：5,(1997))。相較於其他形式的白血病，CLL的整體預後情況係良好的，即使是最惡化階段之病患的平均活存期間也有3年。
與以前所使用之以烷化基藥劑為主的療法相較之下，添加福達樂(fludarabine)作為徵狀CLL病患的初期療法，可得到較高的完全反應速率(27% v3%)以及較長之病情未進行的活存期間(33v17個月)。雖然在治療後得到完全的臨床反應乃朝向改善CLL之活存率的第一步，但是，大多數的病患不是無法得到完全的緩解，就是對於福達樂沒有反應。此外，用福達樂治療的所有CLL病患最後還是復發，使得福達樂在作為單一藥劑的角色變成純粹是姑息性的(Rai KR,Peterson B,Elias L,Shepherd L,Hines J.Nelson D,Cheson B,Kolitz J,Schiffer CA：Arandomized comparison of fludarabine and chlorambucil for patients with previously untreated chronic lymphocytic leukemia.A CALGB SWOG,CTG/NCI－C and ECOG Inter－Group Study.Blood 88：141a,1996(abstr 552,suppl 1)。因此，若欲實現此疾病在治療上的進展，則需要鑑別出具有新穎作用機轉而可補助福達樂的細胞毒性且消除內源CLL抗藥性因子所誘發之抗藥性的新穎藥物。
造成CLL病患對於治療之反應不佳以及存活率不良之最被廣泛研究的均一前兆因子係畸型的p53功能，其特徵在於單點突變或染色體17p13刪除。確實，不論是對於烷化基藥劑或嘌呤類似物治療的反應，實際上並沒有在複數個單一醫院設施之帶有異常p53功能的CLL病患的個案系列，進行考證。導入能夠克服與CLL之p53突變有關之抗藥性的治療藥劑，有可能成為該疾病之治療的重要進展。
福拉凡皮朵(Flavopiridol)以及CYC 202(依賴細胞週期素的激酶)在活體外，會誘發B－細胞慢性淋巴細胞性白血病(B－CLL)之惡性細胞的凋亡。
暴露於福拉凡皮朵會造成凋亡蛋白酶3(caspase 3)活性的誘發以及p27(kip 1)之依賴凋亡蛋白酶的分裂，p27乃細胞週期的負面調控劑，其在B－CLL內過度表現(Blood.1998 Nov.15；92(10)：3804－16，在慢性淋巴細胞性白血病細胞內，福拉凡皮朵經由凋亡蛋白酶－3的活化，誘發細胞凋亡，但未有bc1－2調節的證據或是對於功能p53的依賴性。Byrd JC,Shinn C,Waselenko JK,Fuchs EJ,Lehman TA,Nguyen PL,Flinn IW,Diehl LF,Sausville E,Grever MR)。
奧若拉激酶
最近，有一群新的稱作為奧若拉激酶的絲氨酸/蘇氨酸激酶被發現出來，彼等係涉及細胞週期的G2及M期且為有絲分裂的重要調控劑。
奧若拉激酶的確切角色雖然尚待闡明，但是彼等參與了有絲分裂關卡控制、染色體動力學及胞質分裂(Adamset al.,Trends Cell Biol., 11：49－54(2001))。奧若拉激酶係位於間期細胞的中心體、兩極紡錘絲的極端以及有絲分裂體的中體內。
目前已在哺乳動物體內發現到奧若拉激酶族群的三個成員(E.A.Nigg,Nat.Rev.Mol.Cell Biol. 2：21－32,(2001))。彼等為：奧若拉A(在文獻中亦稱作為奧若拉2)；奧若拉B(在文獻中亦稱作為奧若拉1)；以及奧若拉C(在文獻中亦稱作為奧若拉3)。
奧若拉激酶具有高度同系的催化功能部位，但是在N－末端部分則相當不同(Katayama H,Brinkley WR,Sen S.；The Aurora Kinases：role in cell transformation and tumorigenesis；Cancer Metastasis Rev.2003 Dec；22(4)：451－64)。
奧若拉激酶A及B的受質已被鑑定出來，包括似運動素的運動蛋白質、紡錘絲體蛋白質、組織蛋白H3蛋白質、著絲點蛋白質及腫瘤抑制蛋白質p53。
奧若拉A激酶被認為涉及了紡錘絲形成且在早期的G2期的期間會定位在中心體，而在該期間彼等會將與紡錘絲有關的蛋白質磷酸化(Prigentet al .,Cell ,114：531－535(2003))。Hirotaet al,Cell, 114：585－598,(2003)發現到，耗盡奧若拉A蛋白質激酶的細胞不能夠進入有絲分裂。此外，經發現(Adams,2001)，各種物種內之奧若拉A基因的突變或瓦解會導致有絲分裂異常，包括中心體脫離及突變缺陷、紡錘絲畸形以及染色體分離缺陷。
在大多數的正常組織內，通常奧若拉激酶的表現量係低的，但是例外者為帶有高比例分裂細胞的組織，諸如，胸腺及睪丸。然而，在許多人類癌症中可發現到奧若拉激酶的量增加(Gietet al.,J.Cell.Sci. 112：3591－361,(1999)以及Katayama(2003))。此外，奧若拉A激酶的基因圖譜係對應至染色體20q13區域，該區域常被發現到在許多人類癌症中有擴大的現象。
因此，例如，在人類乳癌、卵巢癌以及胰臟癌中，可偵測到顯著的奧若拉A過度表現(參見，Zhouet al.,Nat.Genet. 20：189－193,(1998),Tanakaet al.,Cancer Res., 59：2041－2044,(1999)以及Hanet al.,Cancer Res., 62：2890－2896,(2002))。
此外，Isola,American Journal of Pathology 147,905－911(1995)發表，奧若拉A所在地(20q13)的擴大與淋巴結呈陰性之乳癌的預後不佳有關。
在人類膀胱癌中，可發現到奧若拉－A的擴大及/或過度表現，且奧若拉－A的擴大與非倍數染色體及攻擊的臨床行為有關，參見Senet al.,J.Natl.Cancer Inst, 94：1320－1329(2002)。
在超過50%的結腸直腸癌(參見Bischoffet al.,EMBO J., 17：3052－3065,(1998)以及Takahashi et al.,Jpn.J.Cancer Res. ,91：1007－1014(2000))、卵巢癌(參見Gritskoet al.,Clin.Cancer Res., 9：1420－1426(2003))以及胃瘤(Sakakuraet al.,British Journal of Cancer ,84：824－831(2001))中，可偵測到奧若拉－A的表現增加。
Tanakaet al.Cancer Research, 59：2041－2044(1999)發現到奧若拉A在94%乳房侵入性導管腺癌過度表現的證據。
在腎、子宮頸、神經母細胞、黑色瘤、淋巴瘤、胰臟及前列腺腫瘤細胞系亦發現到高含量的奧若拉A激酶[Bishchoffet al. (1998),EMBO J.,17：3052－3065(1998)；Kimura et al.J.Biol.Chem.,274：7334－7340(1999)；Zou et al.,Nature Genetics,20：189－193(1998)；Li et al.,Clin Cancer Res.9(3)：991－7(2003)]。
奧若拉－B高度表現於多數人類腫瘤細胞系中，包括白血病細胞[Katayama et al.,Gene 244：1－7]。在原發結腸直腸癌中，該酶之量的增加係呈杜克氏階段(Duke’s stage)的函數[Katayama et al.,J.Natl.Cancer Inst.,91：1160－1162(1999)]。
雖然奧若拉－3(奧若拉－C)激酶傾向於限制在正常組織的胚芽細胞內，但是在多種腫瘤細胞系中，已偵測到高含量的奧若拉－3(奧若拉－C)(參見Kimuraet al.,Journal of Biological Chemistry ,274：7334－7340(1999))。在Takahashiet al.,Jpn J.Cancer Res. 91：1007－1014(2001)的論文中亦已發表：在大約50%結腸直腸癌中有奧若拉－3過度表現的現象。
奧若拉激酶在增生性疾病中所扮演之角色的其他報告可見Bischoffet al.,Trends in Cell Biology 9：454－459(1999)；Gietet al.,Journal of Cell Science ,112：3591－3601(1999)以及Dutertre,et al.Oncogene, 21：6175－6183(2002)。
Rocyeet al 的報告指出，在大約四分之一原發性乳房腫瘤中，可發現到奧若拉2基因(已知為STK15或BTAK)的表現。(Royce ME,Xia W,Sahin AA,Katayama H,Johnston DA,Hortobagyi G,Sen S,Hung MC；STK15/Aurora－A expression in primary breast tumours is correlated with nuclear grad but not with prognosis；Cancer .2004 Jan 1；100(1)：12－9)。
子宮內膜的癌瘤(EC)包括至少二種類型的癌症：子宮內膜樣的癌瘤(EECs)係與雌激素有關的腫瘤，彼等常為倍數染色體的且預後良好。非子宮內膜樣的癌瘤(NEECs；漿液性且清楚的細胞形式)係與雌激素無關的，常為非倍數染色體的且係臨床上有攻擊性的。經發現，奧若位在55.5%的NEECs中有擴大，而在任何的EECs中皆無擴大(P<或＝0.001)(Moreno－Bueno G,Sanchez－Estevez C,Cassia R,Rodriguez－Perales S,Diaz－Uriarte R,Dominguez O,Hardisson D,Andujar M,Prat J,Matias－Guiu X,Cigudosa JC,PalaciosJ.Cancer Res .2003 Sep 15；63(18)：5697－702)。
Reichardtet al(Oncol Rep. 2003 Sep－Oct；10(5)：1275－9)報告指出，藉由以PCR所進行的定量DNA分析來搜尋神經膠瘤內的奧若拉擴大，結果顯示在16個腫瘤中有5個(31%)不同WHO等級的腫瘤(II級1個、III級1個、IV級3個)顯示出奧若拉2基因的DNA擴大。奧若拉2基因的擴大被假設可為人類神經膠瘤內之一非隨意的基因改變，而在腫瘤發生的基因路徑中扮演了一個角色。
Hamadaet al(Br.J.Haematal. 2003 May；121(3)：439－47)的研究結果亦提出，奧若拉2係同時表示非霍奇金氏淋巴瘤之疾病活性及腫瘤發生的有效候補者。由該基因功能之限制所產生之腫瘤細胞生長的延緩能夠成為非霍奇金氏淋巴瘤的治療手段之一。
在Gritskoet al(Clin Cancer Res. 2003 Apr；9(4)：1420－6)的研究中，對患有原發性卵巢腫瘤的92個病患，進行奧若拉A之激酶活性及蛋白質量的檢視。體外的激酶分析顯示，在44個案例(48%)中，奧若拉A激酶活性增加了。在52個樣本(57%)中，偵測到奧若拉A蛋白質量增加。高蛋白質量的奧若拉A與激酶活性的增加非常有關係。
Liet al(Clin.Cancer Res. 2003 Mar；9(3)：991－7)所得到的結果顯示，在胰臟腫瘤及癌瘤細胞胞系中，奧若拉A基因過度表現，且提出奧若A的過度表現參與了胰臟癌瘤的生成。
同樣地，奧若A基因擴大以及相關之其所編碼之有絲分裂激酶的表現增加與人類膀胱癌的非倍數染色體及攻擊性臨床行為有關。(J.Natl.Cancer Inst .2002 Sep 4；94(17)：1320－9)。
數個小組的研究調查(Dutertre S,Prigent C.,Aurora－A overexpression leads to override of microtubule－kinetochore attachment checkpoint；Mol.lnterv. 2003 May；3(3)：127－30以及Anand S,Penrhyn－Lowe S,Venkitaraman AR.,Aurora－A amplification overrides the mitotic spindle assembly checkpoint,inducing resistance to Taxol,Cancer Cell .2003 Jan；3(1)：51－62)提出，奧若拉激酶活性的過度表現與某些現存癌症療法的抗性有關。例如，老鼠胚胎纖維母細胞內的奧若拉A過度表現可降低此等細胞對於紫杉烷衍生物之細胞毒性效果的敏感性。因此，奧若拉激酶抑制劑在對於既存療法已發展出抗性的病患身上，有其特別的用途。
基於截至目前的研究結果，可想見對於奧若拉激酶(特別是奧若拉激酶A及奧若拉激酶B)的抑制作用將被證明為遏止腫瘤發展的有效手段之一。
Harrington et al(Natl Med .2004 Mar；10(30)：262－7)已證實，在活體內，奧若拉激酶的抑制劑可抑制腫瘤生長且誘發腫瘤的倒退。在該研究中，奧若拉激酶抑制劑阻斷癌細胞的增生，且在一定範圍的細胞系(包括白血病、結腸直腸及乳房細胞系)內，亦會啟動細胞死亡。此外，藉由誘發白血病細胞的細胞凋亡來治療白血病，已被證明出係具有潛力的。VX－680可有效地殺死病患之難醫的原發性急性骨髓性白血病(AML)細胞(Andrews,Oncogene ,2005,24,5005－5015)。
對奧若拉抑制劑特別順從的癌症包括：乳癌、結腸直腸癌、胰臟癌、卵巢癌、非霍奇金氏淋巴瘤、神經膠瘤及非子宮內膜樣的子宮內膜癌瘤。對於奧若拉抑制劑特別順從的白血病包括：急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、B－細胞淋巴瘤(套膜細胞(Mantle cell))、以及急性淋巴胚細胞的白血病(ALL)。
肝糖合成酶激酶
肝糖合成酶激酶－3(GSK3)係一種絲氨酸－蘇氨酸激酶，其在人體內係以二種同時遍在地表現的亞型存在(GSK3 α以及β GSK3 β)。GSK3被認為參與在胚胎的發展、蛋白質合成、細胞增生、細胞分裂、微管動力、細胞運動以及細胞凋亡。因此GSK3與疾病狀態(諸如，糖尿病、阿耳茲海默氏症、中風、癲癇、運動神經疾病及/或頭部創傷)的進展有關。種系發生的GSK與依賴細胞週期素的激酶(CDKs)最緊緊相關。
GSK3所識別的共同肽受質順序(consensus peptide substrate sequence)為(Ser/Thr)－X－X－X－(pSer/pThr)，其中X為任何胺基酸(在(n＋1)、(n＋2)、(n＋3)位置上)，且pSer及pThr則分別為磷酸基－絲氨酸及磷酸基－蘇氨酸(n＋4)。GSK3會將在位置(n)上的第一個絲氨酸或蘇氨酸磷酸化。在(n＋4)位置上的磷酸基－絲氨酸或磷酸基－蘇氨酸似乎為引導GSK3以產生最大的受質轉換所必須的。將Ser21上的GSK3 α或在Ser9上的GSK3 β磷酸化，會導致產生GSK3的抑制。基因突變及肽競爭的研究已得到一個模式，亦即GSK3之磷酸化的N－末端能夠經由自動抑制機轉，與磷酸基－肽受質(STXXXpS/pT)競爭。亦有數據顯示GSK3 α及GSK3 β可分別被酪氨酸279及216的磷酸化所微妙地調控。此等Phe之殘基的突變會造成活體內激酶活性降低。GSK3 β的X射線結晶學結構有助於闡明GSK3活化及調控的全貌。
GSK構成哺乳動物胰島素反應路徑的一部分且能夠磷酸化肝糖合成酶，且因而能夠使肝糖合成酶失去活性。藉由抑制GSK3來增強肝糖合成酶活性以及因而增加肝糖的合成，已被視為對抗第II型或非胰島素依賴性糖尿病(NIDDM)(身體組織對於胰島素刺激產生抗性的病況)之有潛力的方式。在肝臟、脂肪組織或肌肉組織內的細胞胰島素反應係由結合至細胞外胰島素受體的胰島素所啟動的。這會造成胰島素受體受質(IRS)蛋白質的磷酸化以及後續之對血漿膜所進行之該蛋白質的補充。該IRS蛋白質的進一步磷酸會起始磷酸肝醇－3激酶(PI3K)補充至血漿膜，在該處，該激酶會釋離出第二個信使，磷脂醯肌醇基3,4,5－三磷酸酯(PIP3)。這會促使依賴3－磷酸肌醇的蛋白質激酶(PDK1)及蛋白質激酶B(PKB或Akt)聯合定位至細胞膜，在該處，PDK1會活化PKB。PKG能夠分別透過Ser9或Ser21的磷酸化而磷酸化且因而抑制GSK3 α及/或GSK β。然後，GSK3的抑制會啟動肝糖合成酶活性的增強。因此，能夠抑制GSK3的治療藥劑能夠誘發與胰島素刺激時所見及者類似的細胞反應。GSK3之另一活體內受質係真核蛋白質合成抑制因子2B(eIF2B)。eIF2B經由磷酸化會失去活性，因此能夠壓抑蛋白質生物合成。因此，GSK3的抑制，例如，藉由「雷帕黴素(rapamycin)蛋白質之哺乳動物標靶(mTOR)」的失活性所產生者，可增強蛋白質生物合成。最後，有一些證據支持經由有絲分裂原所活化之蛋白質激酶(MAPK)路徑來調控GSK3活性，該路徑係透過借助激酶(諸如，經有絲分裂原活化之蛋白質激酶所活化的蛋白質激酶1(MAPKAP－K1或RSK)來進行之GSK3的磷酸化。此等數據提出，GSK3活性可由有絲分裂的、胰島素及/或胺基酸刺激來調節。
GSK3 β亦已被證實為脊椎動物Wnt傳訊息路徑的一重要成分。該生化路徑已經證實對於正常胚胎發展而言係緊要的，且可在正常組織內調控細胞增生。GSK3會因應Wnt刺激而被抑制。這會導致GSK3受質(諸如Axin)、大腸腺瘤的息肉病基因產物以及β－連環蛋白的去磷酸化。Wnt路徑之脫軌的調控與許多癌症有關聯。APC及/或β－連環蛋白的突變常見於結腸直腸癌以及其他腫瘤。β－連環蛋白亦已經證實對於細胞黏連具有重要性。因此，GSK3亦可調節細胞黏連過程至某些程度。除了已敘述的生化路徑之外，有數據說明GSK涉及經由細胞週期素－D1之細胞分裂的調控，在轉錄因子(諸如，c－Jun、CCAAT/促進結合蛋白質α(C/EBP α)、c－Myc及/或其他受質(諸如，活化T－細胞的核因子(NFATc))、熱休克因子－1(HSF－1)以及c－AMP反應要素結合蛋白質(response element binding protein(CREB))的磷酸化中。雖然對於組織有專一性，但是GSK似乎亦在細胞凋亡的調控中扮演了一個腳色。GSK3在經由促凋亡機轉進行之細胞凋亡的調節中所扮演的腳色與其中發生了神經細胞凋亡的醫學狀況特別有關聯。此等病況的例子有：頭部創傷、中風、癲癇、阿耳茲海默氏症以及運動神經元疾病、進行性核上的麻痺、皮質基底的變性以及畢克氏病(Pick’s disease)。在活體外，已證明GSK3能夠將與小管有關聯的蛋白質Tau高磷酸化。Tau的高磷酸化會瓦解其與小管的正常結合且亦會導致細胞內Tau絲狀體的形成。此等絲狀體的進行性聚積被認為最終會導致神經障礙及變性。因此，透過對於GSK3的抑制來抑制Tau的磷酸化，可提供一限制及/或預防神經變性的手段。
Du Pont的WO 02/34721揭示了一群作為依賴細胞週期素之激酶的抑制劑的茚並[1,2－c]吡唑－4－酮類。
Bristol Myers Squibb的WO 01/81348記載了5－硫基、亞磺醯基－及磺醯基吡唑並[3,4－b]－吡啶類作為依賴細胞週期素之激酶的抑制劑的用途。
Britol Myers Squibb的WO 00/62778揭示了一群蛋白質酪氨酸激酶抑制劑。
Cyclacel的WO 01/72745A1記載了2－經取代的4－雜芳基－嘧啶類以及彼等之製備、含有彼等的藥學組成物以及彼等作為依賴細胞週期素之激酶(cdks)的抑制劑的用途，還有彼等用於治療增生性病症(諸如，癌症、白血病、牛皮癬等)的用途。
Agouron的WO 99/21845記載了用於抑制依賴細胞週期素之激酶(cdks)(諸如，CDK1、CDK2、CDK4以及CDK6)的4－胺基噻唑衍生物。該發明還關於含有如是化合物之藥學組成物的治療或預防用途以及藉由投服有效量之如是化合物來治療惡性腫瘤及其他病症的方法。
Agouron的WO 01/53274揭示了一群作為CDK激酶抑制劑的化合物，彼等包含了連接至含N之雜環基團的經醯胺取代的苯環。
WO 01/98290(Pharmacia & Upjohn)揭示了一群作為蛋白質激酶抑制劑之3－胺基羰基－2－甲醯胺基噻吩衍生物。根據記載，彼等化合物具有多重蛋白質激酶活性。
Agouron的WO 01/53268以及WO 01/02369揭示了透過蛋白質激酶(諸如，依賴細胞週期素的激酶或酪氨酸激酶)的抑制來介導或抑制細胞增生的化合物。
WO 00/39108以及WO 02/00651(二者皆屬於Du Pont Pharmaceuticals)記述了種類廣泛的雜環化合物，彼等為似胰蛋白酶之絲氨酸蛋白酶酵素(尤指因子Xa及凝血酶)的抑制劑。根據記載，彼等化合物可用作為制凝藥或用於預防血栓性插塞病症。
US 2002/0091116(Zhuet al .)、WO 01/1978以及WO 01/64642各揭示了不同組之具有對抗因子Xa之活性的雜環化合物。
WO 03/035065(Aventis)揭示了一組範圍廣泛之作為蛋白質激酶抑制劑的苯並咪唑衍生物，但是並未揭示對抗CDK激酶或GSK激酶的活性。
WO 97/36585及US 5,874,452(皆屬於Merck)揭示了作為法呢基轉移酶之抑制劑的雜芳基化合物。
WO 03/066629(Vertex)揭示了作為GSK－3抑制劑的苯並咪唑基吡唑胺類。
WO 97/12615(Warner Lambert)揭示了作為15－脂肪氧基合酶抑制劑的苯並咪唑類。
WO 2004/54515(SmithKline Beecham Corporation)揭示了一群作為血小板生成模仿劑的苯並咪唑類。
WO 2004/41277(Merck)揭示了一群作為雄激素受體調節劑的胺基－苯並咪唑類。
WO 2005/028624(Plexxikon)揭示了具有對抗蛋白質激酶活性之化合物的染色體移去組織蛋白後的分子骨架。
本申請人之較早的國際專利申請案PCT/GB2004/002824(WO 2005/002552)揭示了一群作為CDK、奧若拉激酶及GSK激酶抑制劑之經取代的1H－苯並咪唑－2－)－1H－吡唑－4－基]脲類。其中之一經特別命名且例示於WO 2005/002552的化合物為1－(2,6－二氟苯基)－N－[3－(5－嗎襠啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]脲。在WO 2005/002552的實驗部分，記載了呈自由鹼形式之1－(2,6－二氟苯基)－N－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基)－1H－苯並咪唑－2－基]－1H－吡唑－4－基]－脲的製備。
 發明之總論
本發明提供了具有依賴細胞週期素之激酶抑制或調節活性以及肝糖合成酶激酶－3(GSK3)抑制或調節活性、以及/或奧若拉激酶抑制或調節活性的化合物，且可想見如是之化合物可用於預防或治療由彼等激酶所介導的疾病狀態或病況。
因此，例如，可想見本發明的化合物可用於減輕或降低癌症的發生率。
在第一個態樣中，本發明係提供式(I)化合物、或其鹽類、溶劑化物、互變異構物或N－氧化物， 其中M係選自D1基團及D2基團： 且其中：(A)當M為D1基團時：X係選自O、NH及NCH3 ；A係選自一鍵結以及NR2 基團，其中R2 示氫或甲基；E係選自一鍵結、CH2 、CH(CN)以及C(CH3 )2 ；R1 係選自：(i)具有3至5個環成員之環烷基，其任意經羥基、氟、胺基、甲胺基、甲基或乙基所取代；(ii)含有1或2個選自O、N、S及SO2 之雜原子環成員的具有4至6個環成員、飽和的雜環基團，該雜環基團係任意經C1 － 4 烷基、胺基或羥基所取代；但是排除未經取代的4－嗎福啉基、未經取代的四氫吡喃－4－基、未經取代的2－吡咯啶基、以及未經取代與1－經取代的哌啶－4－基；(iii)下式所示的2,5－經取代的苯基：
其中，(a)當X示NH或N－CH3 時，R3 係選自氯及氰基；以及(b)當X示O時，R3 示CN；(iv)CR6 R7 R8 基團，其中R6 及R7 各選自氫及甲基，且R8 係選自氫、甲基、C1 － 4 烷磺醯基甲基、羥甲基以及氰基；(v)嗒嗪－4－基，其任意經一或二個選自下列的取代基所取代：甲基、乙基、甲氧基及乙氧基；(vi)經取代的咪唑並噻唑基團，其中該取代基係選自甲基、乙基、胺基、氟、氯、胺基以及甲胺基；以及(vii)任意經取代的1,3－二氫－異吲哚－2－基或任意經取代的2,3－二氫－吲哚－1－基，其中，在各情況下，該任意取代基係選自：鹵素、氰基、胺基、C1 － 4 －單－及二烷胺基、CONH2 或CONH－C1 － 4 烷基、C1 － 4 烷基及C1 － 4 烷氧基，其中該C1 － 4 烷基及C1 － 4 烷氧基係任意經羥基、甲氧基或胺基所取代；(viii)3－吡啶基，其任意經一或二個選自下列的取代基所取代：羥基、鹵素、氰基、胺基、C1 － 4 單－及二烷基胺基、CONH2 或CONH－C1 － 4 烷基、C1 － 4 烷基及C1 － 4 烷氧基，其中該C1 － 4 烷基及C1 － 4 烷氧基係任意經羥基、甲氧基或胺基所取代；但是排除化合物2－酮基－1,2－二氫－吡啶－3－羧酸[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－醯胺以及2,6－二甲氧基－N－[3－(5－嗎襠啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－菸鹼醯胺；(ix)四氫－1,4－噻嗪或是其S－氧化物或S,S－二氧化物，彼等任意經一或二個選自下列的取代基所取代：鹵素、氰基、胺基、C1 － 4 單－及二烷基胺基、CONH2 或CONH－C1 － 4 烷基、C1 － 4 烷基及C1 － 4 烷氧基，其中該C1 － 4 烷基及C1 － 4 烷氧基係任意經羥基、甲氧基或胺基所取代；且當E－A示NR2 時，R1 另外選自：(x)2－氟苯基、3－氟苯基、4－氟苯基、2,4－二氟苯基、3,4－二氟苯基、2,5－二氟苯基、3,5－二氟苯基、2,4,6－三氟苯基、2－甲氧基苯基、5－氯基－2－甲氧基苯基、環己基、未經取代的4－四氫吡喃基以及第三丁基；(xi)NR1 0 R1 1 基團，其中R1 0 及R1 1 各示C1 － 4 烷基或是R1 0 及R1 1 連接在一起而使得NR1 0 R1 1 形成具有4至6個環成員、任意含有選自O、N、S及SO2 之第二個雜原子成員的飽和雜環基，該雜環基係任意經C1 － 4 烷基、胺基或羥基所取代；(xii)吡啶酮，其任意經一或二個選自下列的取代基所取代：羥基、鹵素、氰基、胺基、C1 － 4 單一及二烷基胺基、CONH2 、CONH－C1 － 4 烷基、C1 － 4 烷基及C1 － 4 烷氧基，其中該C1 － 4 烷基及C1 － 4 烷氧基係任意經羥基、甲氧基或胺基所取代；當E－A示C(CH3 )2 NR2 或CH2 －NR2 時，R1 另外選自：(xiii)未經取代的2－呋喃基及2,6－二氟苯基；且當E－A示C(CH3 )2 NR2 時，R1 另外選自：(xiv)未經取代的苯基；且當E示CH2 時，R1 另外選自：(xv)未經取代的四氫吡喃－4－基；且(B)當M示D2基團時：A係選自一鍵結以及NR2 基團，其中R2 示氫或甲基；E係選自一鍵結、CH2 、CH(CN)以及C(CH3 )2 ；R1 係選自：(xvi)下式所示之2－經取代的3－呋喃基：
其中R4 及R5 係相同或互異且係選自氫及C1 － 4 烷基，或是R4 與R5 連接在一起而使得NR4 R5 形成5－或6－員、任意含有選自O、NH、NMe、S或SO2 之第二個雜原子或基團的飽和雜環基團，該5－或6－員飽和環係任意經羥基、氟、胺基、甲胺基、甲基或乙基所取代；(xvii)下式所示之5－經取代的2－呋喃基：
其中R4 及R5 係相同或互異且係選自氫及C1 － 4 烷基，或是R4 及R5 連接在一起而使得NR4 R5 形成5－或6－員、任意含有選自O、NH、NMe、S或SO2 之第二個雜原子或基團的飽和雜環基團，該5－或6－員飽和環係任意經羥基、氟、胺基、甲胺基、甲基或乙基所取代；先決條件為：該化合物不為5－哌啶－1－基甲基－呋喃－2－羧酸[3－(5,6－二甲氧基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－]－醯胺；(xviii)下式所示的基團：
其中R9 示氫、甲基、乙基或異丙基；G示CH、O、S、SO、SO2 或NH且該基團係任意經一、二或三個選自下列的取代基所取代：C1 － 4 烴基、羥基、C1 － 4 烴氧基、氟、胺基、單－及二－C1 － 4 烷基胺基且其中該C1 － 4 烴基及C1 － 4 烴氧基各任意經羥基、氟、胺基、單－或二－C1 － 4 烷基胺基所取代；以及(xix)下式所示之3,5－經二取代的苯基：
其中X係選自O、NH及NCH3 ；且(C)當M示D1基團：且X示O；A示NR2 基團(其中R2 示氫)；E為一鍵結；而R1 示2,6－二氟苯基；則式(I)化合物係酸加成鹽，其係選自與下列之酸所形成的鹽類：乙酸、己二酸、褐藻酸、抗壞血酸(例如，L－抗壞血酸)、天冬胺酸(例如，L－天冬胺酸)、苯磺酸、苯甲酸、樟腦二酸(例如，(＋)樟腦二酸)、癸酸、辛酸、碳酸、檸檬酸、環己基磺酸、十二烷酸、十二烷基硫酸、乙烷－1,2－二磺酸、乙烷磺酸、反丁烯二酸、半乳糖二酸、龍膽酸、葡萄糖庚酸、D－葡萄糖酸、葡萄糖醛酸(例如，D－葡萄糖醛酸)、穀胺酸(例如，L－榖胺酸)、α－酮基戊二酸、乙醇酸、馬尿酸、氫氯酸、2－羥基乙烷磺酸、異丁酸、乳酸(例如，(＋)－L－乳酸以及(±)－DL－乳酸)、乳糖酸、月桂基磺酸、順丁烯二酸、蘋果酸、(－)－L－蘋果酸、丙二酸、甲烷磺酸、黏液酸、萘磺酸(例如，素－2－磺酸)、素－1,5－二磺酸、菸鹼酸、油酸、乳清酸、草酸、軟脂酸、雙羥萘酸、磷酸、丙酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸(例如，(＋)－L－酒石酸)、硫氰酸、甲苯磺酸(例如，對甲苯磺酸)、戊酸及羥基－2－萘酸。
在一體系中，M基團為前述式(I)之子群(A)及(B)中所定義的D1或D2基團。
在另一體系中，M基團為D1基團且該式(I)化合物為1－(2,6－二氟苯基)－N－[3－(5－嗎襠啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的酸加成鹽，如前述式(I)之子群(C)中所定義者。
在一特定的體系中，本發明提供了1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的鹽類或自由鹼，尤指其乳酸鹽。
本發明還提供了1－環丙基－3－[3－(5－嗎襠啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲及其鹽類(例如，酸加成鹽類)、溶劑化物、互變異構物或N－氧化物。
本發明亦特別提供了：．本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例的化合物用於製造藥物的用途，該藥物係用於預防或治療由依賴細胞週期素之激酶或肝糖合成酶激酶－3所介導的疾病狀態或病況。
．一種用於預防或治療由依賴細胞週期素之激酶或肝糖合成酶激酶－3所介導的疾病狀態或病況的方法，該方法包含將本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例的化合物，投予有所需的患者。
．一種減輕或降低由依賴細胞週期素之激酶或肝糖合成酶激酶－3所介導的疾病狀態或病況之發生率的方法，該方法包含將本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例的化合物，投予有所需的患者。
．一種供治療哺乳動物之包含或起源自異常細胞生長之疾病或病況的方法，該方法包含將可有效抑制異常細胞生長之本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例的化合物，投予該哺乳動物。
．一種供減輕或降低哺乳動物之包含或起源自異常細胞生長之疾病或病況的發生率的方法，該方法包含將可有效抑制異常細胞生長之本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例的化合物，投予該哺乳動物。
．一種供治療哺乳動物之包含或起源自異常細胞生長之疾病或病況的方法，該方法包含將可有效抑制cdk激酶(諸如，cdk1或cdk2)或肝糖合成酶激酶－3活性之量的本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例的化合物，投予該哺乳動物。
．一種供減輕或降低哺乳動物之包含或起源自異常細胞生長之疾病或病況的發生率的方法，該方法包含將可有效抑制cdk激酶(諸如，cdk1或cdk2)或肝糖合成酶激酶－3活性之量的本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例的化合物，投予該哺乳動物。
．一種供抑制依賴細胞週期素之激酶或肝糖合成酶激酶－3的方法，該方法包含令該激酶，與本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例的抑制激酶的化合物接觸。
．一種藉由抑制依賴細胞週期素之激酶或肝糖合成酶激酶－3的活性來調節細胞過程(例如，細胞分裂)的方法，其係使用本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例的化合物。
．本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例的化合物用於製造藥物的用途，該藥物係供預防或治療以奧若拉激酶(例如，奧若拉A激酶及/或奧若拉B激酶)的向上調控為特徵之疾病或病況。
．本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例的化合物用於製造供預防或治療癌症之藥物的用途，該癌症係以奧若拉激酶(例如，奧若拉A激酶及/或奧若拉B激酶)的向上調控為特徵者。
．本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例的化合物用於製造藥物的用途，該藥物係供預防或治療選自具有奧若拉A基因之Ile31變型的亞群病患的癌症。
．本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例的化合物用於製造藥物的用途，該藥物係供預防或治療被診斷出為形成具有奧若拉A基因之Ile31變型的亞群之部分的病患的癌症。
．一種供預防或治療以奧若拉激酶(例如，奧若拉A激酶及/或奧若拉B激酶)的向上調控為特徵之疾病或病況的方法，該方法包含投用本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例的化合物。
．一種供減輕或降低以奧若拉激酶(例如，奧若拉A激酶及/或奧若拉B激酶)的向上調控為特徵之疾病或病況的方法，該方法包含投用本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例的化合物。
．一種供預防或治療患有或被懷疑患有癌症之病人的癌症(或是供減輕或降低該病人之癌症發生率)的方法，該方法包含(i)對病患進行診斷試驗，以確定其是否具有奧若拉A基因的Ile31變型；以及(ii)在該病患確實具有該變型的情況下，將本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例之具有奧若拉激酶抑制活性的化合物，投予該病患。
．一種供預防或治療以奧若拉激酶(例如，奧若拉A激酶及/或奧若拉B激酶)的向上調控為特徵之疾病狀態或病況(或是供減輕或降低該疾病狀態或病況之發生率)的方法，該方法包含(i)對病患進行診斷試驗，以偵測奧若拉激酶向上調節的標記特徵；以及(ii)在該診斷試驗標示出奧若拉激酶的向上調控的情況下，將本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例之具有奧若拉激酶抑制活性的化合物，投予該病患。
．一種供預防或治療以(a)CDK激酶的過度活化；及/或(b)通往正常CDK活性之路徑的敏化；及/或細胞週期素E之向上調節為特徵之及疾病狀態或病況(或是減輕或降低該疾病狀態或病況之發生率)的方法，該方法包含(i)對病患進行診斷試驗，以偵測(a)及/或(b)及/或(c)的標記特徵；以及(ii)在該診斷試驗標示出(a)及/或(b)及/或(c)的情況下，將本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例之具有CDK激酶抑制活性的化合物，投予該病患。
．一種治療方法、醫藥用途或化合物用途，其中本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例的化合物，係投予(例如，以治療上有效的用量)經本文所述之一或多種診斷試驗鑑別出為患有應該用該化合物來治療之疾病或病況的亞群病患。
．本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例的化合物用於製造藥物的用途，該藥物係供預防或治療本文所記載的疾病狀態。
．用於預防或治療本文所記載之疾病狀態的本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例的化合物。
．一種供預防或治療本文所記載之疾病狀態或病況(或是供減輕或降低該疾病狀態或病況之發生率)的方法，該方法係包含將治療有效量之本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例的化合物，投予哺乳動物。
．一種藥學組成物，其包含本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例的化合物以及藥學上可接受的載體。
．一種以水溶液形式投藥的藥學組成物，該藥學組成物包含呈鹽形式之本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例的化合物，其在水中的溶解度大於1 mg/ml，通常係大於5 mg/ml，更通常係大於15 mg/ml，再更通常係大於20 mg/ml，而較佳係大於25 mg/ml。
．用於醫藥之本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例的化合物。
．用於前文以及本文之任何其他部分所述之任何用途及方法的化合物。
．用於治療B－細胞淋巴瘤之本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例的化合物或其鹽類(例如，酸加成鹽)、溶劑化物、互變異構物或N－氧化物。
．用於治療慢性淋巴細胞性白血病之本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例的化合物或其鹽類(例如，酸加成鹽)、溶劑化物、互變異構物或N－氧化物。
．用於治療擴散性大B細胞淋巴瘤之本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例的化合物或其鹽類(例如，酸加成鹽)、溶劑化物、互變異構物或N－氧化物。
．一種供治療B－細胞瘤巴瘤、擴散性大B細胞淋巴瘤或慢性淋巴細胞性白血病的方法，其係藉由將本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例的化合物或其鹽類(例如，酸加成鹽)、溶劑化物、互變異構物或N－氧化物，投予需要如是治療的病患來進行的。
．用於治療白血病之本文所定義之式(I)、(II)、(III)或(XXX)或是彼等之任何子群或實施例的化合物或其鹽類(例如，酸加成鹽)、溶劑化物、互變異構物或N－氧化物，該白血病尤指復發或難醫的急性骨髓性白血病、脊髓發育不良症候群、急性淋巴細胞性白血病及慢性骨髓性白血病。
．1－環丙基－3－[3－(5－嗎襠啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的酸加成鹽或自由鹼，其係用於前文所述以及本文之任何其他部分所記載之任何用途及方法。
概括性的較佳選擇及定義
下文之通用較佳選擇及定義宜適用於各D1、D2、A、E、X、Xa 及R1 至R9 基團，以及彼等之各種子群、子定義、實施例及體系，除非文中另有指定。
任何對於本文所述之式(I)而言為較佳選擇者皆應適用於式(II)至(VIII)以及在式(I)範圍內的任何其他子群的化合物，除非文中另有要求。
本文所採用之「奧若拉激酶的向上調控」一詞定義為包括奧若拉激酶的表現增加或過度表現，包括基因擴大(亦即多重基因複製)以及轉錄效果所造成的表現增加；以及奧若拉激酶的高活性及活化，包括突變所造成的活化。
本文所用的「飽和」一詞係係指環原子之間無多鍵的環。
本文所用的「烴基」一詞無論係單獨或為複合名詞的一部分(諸如，烴氧基)的情況下，皆係為一屬名，涵蓋了具有全碳骨架的脂族及脂環族基團。烴基的例子包括：烷基、環烷基、環烯基、烯基、炔基、環烷基烷基、環烯基烷基。特定的烴基為飽和的基團，諸如，烷基及環烷基。
烴氧基的例子包括：烷氧基、環烷氧基、環烯氧基、烯氧基、炔氧基、環烷基烷氧基、環烯基烷氧基。特定的烴氧基為飽和的基團，諸如，烷氧基。
本文所用之字首「C1 － n 」(其中n為整數)係指某一基團的碳原子數。因此，C1 － 4 烴基含有1至4個碳原子，而C1 － 3 烴氧基則含有1至3個碳原子等等。
C1 － 4 烴基的例子包括C1 － 3 烴基或C1 － 2 烴基，特定的例子為選自C1 、C2 、C3 及C4 烴基的個別基團或彼等之組合。
「烷基」一詞同時涵蓋直鏈及支鏈的烷基。烷基的例子有：甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基以及第三丁基。
環烷基之例子為衍生自環丙烷、環丁烷及環戊烷者。
烯基的例子有：乙烯基、1－丙烯基、2－丙烯基(烯丙基)、異丙烯基、丁烯基以及丁－1,4－二烯基。
環烯基的例子有：環丙烯基及環丁烯基。
炔基的例子有：乙炔基以及2－丙炔基(炔丙基)。
環烷基烷基及環烯基烷基的例子包括有：環丙基甲基。
烷氧基的例子有：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基以及第三丁氧基。
當烷基形成單烷胺基或二烷胺基的一部分時，該烷基可為前文所列之任何烷基例。特定的烷胺基及二烷胺基有：甲胺基、二甲胺基、乙胺基、二乙胺基、正丙胺基、異丙胺基、丁胺基、異丁胺基以及第三丁胺基。特定的烷基－及二烷基胺基有：甲胺基及二甲胺基。
本文所用的「飽和雜環基」一詞係指在相鄰的環成員之間含有多鍵的雜環基。該飽和的雜環基可含有1或2個選自O、S及N的雜原子環成員。
根據狀況，雜環基團可含有，例如，環狀醚原子團(例如，如在四氫呋喃及二噁烷中)、環狀硫醚原子團(例如，如在四氫噻吩及二硫環己烷中)、環狀胺原子團(例如，如在吡咯啶中)、環狀醯胺原子團(例如，如在吡咯啶酮中)、環狀硫醯胺類、環狀硫酯類、環狀碸類(例如，如在環丁碸及1,1－二酮基－2,5－二氫噻吩)、環狀亞碸類、環狀磺醯胺類以及彼等之組合(例如，四氫－1,4－噻嗪)。
飽和的雜環基團一般為單環的且常含有4、5或6個環成員，除非另有說明。
含有4個環成員之飽和雜環基團的特定例為氧雜環丁烷基團。
含有5個環成員之飽和雜環基團的例子包括：吡咯啶(例如，1－吡咯啶基、2－吡咯啶基以及3－吡咯啶基)、吡咯啶酮、四氫呋喃、以及四氫噻吩。
含有6個環成員之飽和雜環基團的例子包括：嗎福啉、四氫－1,4－噻嗪、四氫－1,4－噻嗪S－氧化物、四氫－1,4－噻嗪S,S－二氧化物、哌啶(例如，1－哌啶基、2－哌啶基、3－哌啶基以及4－哌啶基)、哌啶酮、二噁烷、四氫吡喃(例如，4－四氫吡喃基)、六氫吡嗪酮、六氫吡嗪、以及N－烷基六氫吡嗪類(諸如，N－甲基六氫吡嗪)。
式(I)之子群(A)及(B)中之D1、D2、A、E、R1 至R9 及X的特定體系及較佳選擇在一概括性的體系中，M示D1基團。
在另一概括性的體系中，M示D2基團。
X係選自O、NH及NHCH3 。在一特定體系中，X示O。
A係選自一鍵結及NR2 基團，其中R2 示氫或甲基。
在一體系中，A示一鍵結。
在另一體系中，A示NR2 基團，其中R2 示氫或甲基。
E係選自一鍵結、CH2 、CH(CN)及C(CH3 )2 。
在一化合物子群中，E示一鍵結。
在另一化合物子群中，E示CH2 。
在又一另外的化合物子群中，E示CH(CN)。
在另一化合物的子群中，E示C(CH3 )2 。
當M示D1基團時，R1 可選自基團(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(v)、(vi)、(vii)、(viii)、(ix)、(x)、(xi)及(xii)。
當M示D1基團，且E－A示C(CH3 )2 NR2 或CH2 －NR2 時，R1 還可另外選自：(xiii)未經取代的2－呋喃基及2,6－二氟苯基。
當M示D1基團，且E－A示C(CH3 )2 NR2 時，R1 還可另外選自：(xiv)未經取代的苯基。
當M示D1基團，且E示CH2 時，R1 還可另外選自：(xv)未經取代的四氫吡喃－4－基。
在基團(i)至(xv)之清單中的各個單獨基團代表本發明之各別的體系。
在體系(i)中，R1 示3至5環成員的環烷基，其任意經羥基、氟、胺基、甲胺基、甲基或乙基所取代。
特定的環烷基為任意經取代的環丙基及環丁基，更特定的是任意經取代的環丙基。在一較佳體系中，R1 係未經取代的環丙基。
在體系(ii)中，R1 示4至6個環成員、含有1或2個選自O、N、S及SO2 之雜原子環成員的飽和雜環基，該雜環基任意經C1 － 4 烷基、胺基或羥基所取代；但是排除未經取代的4－嗎福啉基、未經取代的四氫吡喃－4－基、未經取代的2－吡咯啶基、以及未經取代與1－經取代的哌啶－4－基。
飽和雜環基的例子係如前文之概括性的較佳選擇及定義段落中所列出者。
飽和雜環基之特定例子包括：．含有選自O、N及S之單一雜原子環成員的五員環(不包括2－吡咯啶基)；．含有選自O、N及S二個雜原子環成員的六員環(不包括4－嗎福啉基)。
該飽和的雜環基可為經取代或未經取代的。在一體系中，彼等係未經取代的。在另一體系中，彼等係經1或2個C1 － 4 烷基(例如，1或2個甲基)所取代。
一特定飽和雜環基係任意經取代的四氫呋喃基(例如，四氫呋喃－2－基以及四氫呋喃－3－基)，更佳者為未經取代的四氫呋喃基。
在體系(iii)中，R1 示下式所示的2,5－經取代的苯基： 其中(a)當X示NH或N－CH3 時，R3 係選自氯及氰基；以及(b)當X示O時，R3 示CN。
在體系(iii)範圍內的一化合物子群中，X示N－CH3 且R3 係選自氯及氰基。
在體系(iii)範圍內的另一化合物子群中，X示O且R3 示CN。
在體系(iv)中，R1 示CR6 R7 R8 基團，其中，R6 及R7 各自選自氫及甲基，且R8 係選自氫、甲基、C1 － 4 烷磺醯基甲基、羥甲基及氰基。
在體系(iv)中，R1 之特定例子為甲基、氰甲基、HOCH2 C(CH3 )2 －及2－甲基磺醯基乙基。
在體系(iv)中，R1 之更加特定的例子為甲基及異丙基。
在體系(v)中，R1 示嗒嗪－4－基，其任意經一或二個選自下列的取代基所取代：甲基、乙基、甲氧基及乙氧基。該嗒嗪基可為嗒嗪－3－基或嗒嗪－4－基，但是通常為嗒嗪－4－基。特定的取代基為甲氧基且，例如，該嗒嗪基可帶有二個甲氧基取代基。
在體系(vi)中，R1 示經取代的咪唑並噻唑基，其中該取代基係選自甲基、乙基、胺基、氟、氯、胺基及甲胺基。特定的取代基為甲基。
在體系(vii)中，R1 示任意經取代的1,3－二氫基－異吲哚－2－基或是任意經取代的2,3－二氫－吲哚－1－基，其中在各情況下，該任意的取代基係選自鹵素、氰基、胺基、C1 － 4 單－及二烷基胺基、CONH2 或CONH－C1 － 4 烷基、C1 － 4 烷基及C1 － 4 烷氧基，其中該C1 － 4 烷基及C1 － 4 烷氧基係任意經羥基、甲氧基或胺基所取代。
特定的取代基係選自甲基、乙基、氟、氯(宜僅在二氫吲哚或二氫異吲哚的芳基環上)、CONH2 、胺基、甲胺基、二甲胺基及甲氧基。
在體系(vii)內的一化合物子群中，該二氫異吲哚或二氫吲哚各為經取代的。
在體系(viii)中，R1 示3－吡啶基，其任意經一或二個選自下列的取代基所取代：羥基、鹵素、氰基、胺基、C1 － 4 單－及二烷胺基、CONH2 或CONH－C1 － 4 烷基、C1 － 4 烷基及C1 － 4 烷氧基，其中該C1 － 4 烷基及C1 － 4 烷氧基係任意經羥基、甲氧基或胺基所取代；但是先決條件為不形成化合物2,6－二甲氧基－N－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－菸鹼醯胺。
在一體系中，R3 示3－吡啶基，其任一經一或二個選自下列的取代基所取代：羥基、鹵素、氰基、胺基、C1 － 4 單－及二烷胺基、CONH2 或CONH－C1 － 4 烷基、C1 － 4 烷基及C1 － 4 烷氧基，其中該C1 － 4 烷基及C1 － 4 烷氧基係任意經羥基、甲氧基或胺基所取代；但是，當R1 示3－吡啶基、X示O、A是一鍵結且E示一鍵結時，該吡啶基具有一或二個選自下列的取代基：羥基、鹵素、氰基、胺基、C1 － 4 單－及二烷胺基、CONH2 或CONH－C1 － 4 烷基、C1 － 4 烷基及C1 － 4 烷氧基，其中該C1 － 4 烷基及C1 － 4 烷氧基係任意經羥基、甲氧基或胺基所取代。
特定的取代基係選自甲基、乙基、氟、氯、CONH2 、胺基、甲胺基、二甲胺基以及甲氧基。更特定的取代基係選自甲基、乙基、氟、氯、CONH2 、胺基、甲胺基、以及二甲胺基。
在一化合物子群中，該3－吡啶基係未經取代的。
在體系(ix)中，R1 示四氫－1,4－噻嗪或其S－氧化物或S,S－二氧化物，其任意經一或二個選自下列的取代基所取代：鹵素、氰基、胺基、C1 － 4 單－及二烷胺基、CONH2 或CONH－C1 － 4 烷基、C1 － 4 烷基及C1 － 4 烷氧基，其中該C1 － 4 烷基及C1 － 4 烷氧基係任意經羥基、甲氧基或胺基所取代。
在一化合物子群中，該四氫－1,4－噻嗪或其S－氧化物或S,S－二氧化物係未經取代的。
在體系(x)中，E－A示NR2 且R1 係選自：2－氟苯基、3－氟苯基、4－氟苯基、2,4－二氟苯基、3,4－二氟苯基、2,5－二氟苯基、3,5－二氟苯基、2,4,6－三氟苯基、2－甲氧基苯基、5－氯基－2－甲氧基苯基、環己基、未經取代的4－四氫吡喃以及第三丁基。
在體系(xi)中，E－A示NR2 且R1 示NR1 0 R1 1 基團，其中R1 0 及R1 1 各示C1 － 4 烷基或是R1 0 及R1 1 連結在一起而使NR1 0 R1 1 形成含有選自O、N、S及SO2 之第二個雜原子環成員、具有4至6個環成員的飽和雜環基，該雜環基係任意經C1 － 4 烷基、胺基或羥基所取代。
在該體系範圍內之一化合物子群為其中R1 0 及R1 1 各示C1 － 4 烷基(尤指甲基)的化合物。
另一化合物子群係具有下列定義的化合物群：其中R1 0 及R1 1 連結在一起而使NR1 0 R1 1 形成含有選自O、N、S及SO2 之第二個雜原子環成員、具有4至6個環成員的飽和雜環基，該雜環基係任意經C1 － 4 烷基、胺基或羥基所取代。該飽和的雜環基可為前文之概括性較佳選擇及定義段落中所列之任何含氮的飽和雜環基，但是，特定的飽和雜環基包括：吡咯啶基、嗎襠啉基、六氰吡嗪基及N－C1 － 4 烷基－六氫吡嗪基。如是基團通常係未經取代或經一或二個甲基所取代，而在一特定體系中係未經取代的。
在體系(xii)中，E－A示NR2 ，且R1 示任意經一或二個選自下列之取代基所取代的吡啶酮：羥基、鹵素、氰基、胺基、C1 － 4 單－及二烷胺基、CONH2 、CONH－C1 － 4 烷基、C1 － 4 烷基及C1 － 4 烷氧基，其中該C1 － 4 烷基及C1 － 4 烷氧基係任意經羥基、甲氧基或胺基所取代。
該吡啶酮基可為N－經取代的，例如，經烷基(諸如，甲基)所取代，且亦可為未經取代的。
在體系(xiii)中，E－A示C(CH3 )2 NR2 或CH2 －NR2 且R1 係選自未經取代2－呋喃基及2,6－二氟苯基。
在體系(xiv)中，E－A示C(CH3 )2 NR2 且R1 示未經取代的苯基。
在體系(xv)中，E示CH2 且R1 示未經取代的四氫吡喃－4－基。
當M示D2基團時，R1 可選自(xvi)、(xvii)、(xviii)及(xix)基團。
在(xvi)至(xix)基團之清單中的各單獨基團代表本發明之各別的體系。
在體系(xvi)中，R1 示下式所示之2－經取代的3－呋喃基： 其中R4 及R5 係相同或互異且選自氫及C1 － 4 烷基，或是R4 及R5 係連結在一起而使NR4 R5 形成任意含有選自O、NH、NMe、S或SO2 之第二個雜原子或基團之5－或6－員飽和的雜環基，該5－或6－員的飽和環係任意經羥基、氟、胺基、甲胺基、甲基或乙基；先決條件為該化合物不形成5－哌啶－1－基甲基－呋喃－2－羧酸[3－(5,6－二甲氧基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－醯胺。
在一體系中，R1 示下式所示之2－經取代的3－呋喃基： 其中R4 及R5 係相同或互異且係選自氫及C1 － 4 烷基，或是R4 及R5 連結在一起使得NR4 R5 形成任意含有第二個選自O、NH、NMe、S或SO2 之雜原子或基團的5－或6－員飽和雜環基，該5－或6－員飽和環任意經羥基、氟、胺基、甲胺基、甲基或乙基所取代，但是當A示一鍵結且E示一鍵結時，R4 及R5 不連結在一起而使得NR4 R5 形成未經取代的哌啶基。
特定的飽和雜環基團係如前文之概括性較佳選自及定義的段落中所列出的，但是特定的飽和雜環基可包含：吡咯啶基、嗎福啉基、六氫吡嗪基以及N－C1 － 4 烷基－六氫吡嗪基。如是之基團通常係未經取代或經一或二個甲基所取代的，且在一特定體系中，係未經取代的。
其中之R4 及R5 係選自氫及C1 － 4 烷基之化合物的特定例子為甲胺基及二甲胺基，更佳者為二甲胺基。
在體系(xvii)中，R1 係下式所示之5－經取代的2－呋喃基：
其中R4 及R5 係相同或互異且係選自氫及C1 － 4 烷基，或是R4 及R5 連結在一起使得NR4 R5 形成任意含有選自O、NH、NMe、S或SO2 之第二個雜原子或基團的5－或6－員飽和雜環基，該5－或6－員飽和雜環基係任意經羥基、氟、胺基、甲胺基、甲基或乙基。
特定的飽和雜環基團係列於概括性較佳選擇及定義的段落，但是特別較佳的飽和雜環基包括：吡咯啶基、嗎福啉基、六氫吡嗪基以及N－C1 － 4 烷基－六氫吡嗪基。如是之基團通常係未經取代或經一或二個甲基所取代，且在一特定體系中，係未經取代的。
在體系(xviii)中，R1 係下式所示的基團：
其中R9 示氫、甲基、乙基或異丙基；G示CH、O、S、SO、SO2 或NH且該基團係任意經一、二或三個選自下列的取代基所取代：C1 － 4 烴基、羥基、C1 － 4 烴氧基、氟、胺基、單－及二－C1 － 4 烷胺基且其中該C1 － 4 烴基及C1 － 4 烴氧基係任意經羥基、氟、胺基、單－或二－C1 － 4 烷胺基。
體系(xix)內之一化合物子群中，G係選自O及CH。
在體系(xviii)中，R1 基團一般係未經取代或是經一或二個甲基所取代，且更佳者係未經取代。
在體系(xix)中，R1 係下式所示之3,5－經二取代的苯基：
其中，Xa 與X一樣地係選自O、NH及NCH3 。
Xa 宜為N－CH3 。
R1 －A－原子團的特定範例係示於表1，＊ 星號係表示與R1 －E－A－(C＝O)－NH－基團內之羰基C＝O的連接點。
在表1中，較佳的R1 －E－A－基團包括：A1、A4、A10、A11、A13、A20、A22、A23、A24、A29、A30、A31、A32、A38、A42、A43、A44、A46、A47、A49、A54及A56。
在另一體系中，R1 －E－A為A57、A58或A59。
較佳的R1 －E－A基團子群包括：A1、A4、A20、A24、A30、A44、A46以及A54。在該子群中，一特定的R1 －E－A基團為A24基團。
本發明之一化合物子群係如式(II)所示：
其中R1 、E、A及X係如本文所定義者。
在式(II)中，一化合物子群為其中之X示O的子群。
式(II)化合物之一子群、以及彼等之鹽類(尤指乳酸鹽類)係如式(III)所示：
在式(III)中，一化合物子群係其中之E示一鍵結的子群。
式(III)範圍內之另一化合物子群係其中之E示CH2 或C(CH3 )2 的子群。
式(III)範圍內之一特定較佳體系中，E示一鍵結，R2 示H且R1 式如本文所定義的環烷基(i)。在一體系中，環烷基可為環丙基或環丁基。更佳的是，R1 示環丙基。
為了避免懷疑起見，應瞭解到R1 基團之各概括性及特定較佳選擇、體系及範例可與R2 及/或R3 及/或R4 及/或R5 及/或R6 及/或R7 及/或R8 及/或R9 及/或R1 0 及/或R1 1 及/或D1及/或D2及/或A及/或E及/或X及/或Xa 基團以及本文所定義之任何彼等之子群的各概括性及特定較佳選擇、體系及範例組合，除非文章中另有說明，而且所有如是之組合皆涵蓋在本案中。
構成式(I)化合物之各種官能基及取代基通常係經過選擇而使得式(I)化合物的分子量不超過1000。更通常的是，該化合物之分子量小於750，例如，小於700，或是小於650，或是小於600，或是小於550。更佳的是，該分子量小於525，例如，為500或更少。
本發明之特定化合物係例示於下文的實施例中。
本發明之較佳化合物之一為1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲以及其鹽類、溶劑化物與互變異構物。
式(I)之子群(A)及(B)之化合物以及彼等之子群與體系的鹽類、溶劑化物、互變異構物、異構物、N－氧化物、酯類、前藥及同位素除非另有特別限定，提及一特定化合物時，同時亦包括其離子、鹽類、溶劑化物及經保護的形式，例如，如下文所討論者。
許多式(I)化合物可以鹽類形式存在，例如，酸加成鹽類或是(在某些情況下)有機及無機鹼類，諸如，羧酸鹽、磺酸鹽以及磷酸鹽。所有如是之鹽類皆屬本發明之範圍，且提及式(I)化合物時，亦包括該化合物的鹽形式。如在本文之前面的段落中，當提及式(I)時，應亦包括本文所定義之式(II)、(III)及彼等之子群，除非文中另有說明。
本發明之鹽類可由含有鹼性或酸性原子團的母化合物，經由慣用的化學方法，諸如，Pharmaceutical Salts：Properties,Selection,and Use, P.Heinrich Stahl(Editor),Camille G.Wermuth(Editor),ISBN：3－90639－026－8,Harcover,388 pages,August 2002所記載的方法，合成得。一般而言，如是之鹽類可藉令此等化合物之自由酸或鹼形式與適當的鹼或酸在水或有機溶劑或是該二者的混合物中反應，而製備得；一般而言係使用非含水介質，諸如，乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或是丙酮。
酸加成鹽類可由種類廣泛的酸類(同時包括無機及有機的)形成。酸加成鹽之範例包括用選自下列之酸類所形成的鹽類：乙酸、2,2－二氯乙酸、己二酸、褐藻酸、抗壞血酸(例如，L－抗壞血酸)、L－天冬胺酸、苯磺酸、苯甲酸、4－乙醯胺基苯甲酸、丁酸、(＋)樟腦二酸、樟腦－磺酸、(＋)－(1S)－樟腦－10－磺酸、癸酸、己酸、辛酸、桂皮酸、檸檬酸、環己基磺酸、十二烷基硫酸、乙烷－1,2－二磺酸、乙烷磺酸、2－羥基乙烷磺酸、甲酸、反丁烯二酸、半乳糖酸、龍膽酸、葡萄庚糖酸、D－葡萄糖酸、葡萄糖醛酸(例如，D－葡萄糖醛酸)、穀胺酸(例如，L－穀胺酸)、α－酮基戊二酸、乙醇酸、馬尿酸、氫溴酸、氫氯酸、氫碘酸、2－羥基乙烷磺酸、(＋)－L－乳酸、(±)－DL－乳酸、乳糖酸、順丁烯二酸、蘋果酸、(－)－L－蘋果酸、丙二酸、(±)－DL－苯乙醇酸、甲烷磺酸、萘－2－磺酸、萘－1,5－二磺酸、1－羥基－2－萘酸、菸鹼酸、硝酸、油酸、乳清酸、草酸、軟脂酸、雙羥萘酸、磷酸、丙酸、L－焦穀胺酸、水楊酸、4－胺基－水楊酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、單寧酸、(＋)－L－酒石酸、硫氰酸、對甲苯磺酸、十一碳烯酸以及戊酸，還有醯化的胺基酸類及陽離子交換樹脂。
該酸加成鹽亦可選自：天冬胺酸(例如，D－天冬胺酸)、碳酸、十二碳烷酸、異丁酸、月桂基磺酸、黏液酸、萘磺酸、萘磺酸(例如，素－2－磺酸)、甲苯磺酸(例如，對甲苯磺酸)、以及羥基－2－萘酸。
特定的鹽類群係由下列酸類所形成的的酸類組成的：氫氯酸、氫碘酸、磷酸、硝酸、硫酸、檸檬酸、乳酸、琥珀酸、順丁烯二酸、蘋果酸、2－羥基乙烷磺酸、反丁烯二酸、苯磺酸、甲苯磺酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、萘磺酸、戊酸、乙酸、丙酸、丁酸、丙二酸、葡萄糖醛酸以及乳清酸。
一鹽類子群係由下列酸類所形成的鹽類組成的：氫氯酸、乙酸、己二酸、L－天冬胺酸以及DL－乳酸類。
另一鹽類子群係由下列鹽類所組成：乙酸鹽、甲烷磺酸鹽、乙烷磺酸鹽、DL－乳酸鹽、己二酸鹽、D－葡萄糖醛酸鹽、葡萄糖酸鹽以及氫氯酸鹽類。
鹽類(諸如，酸加成鹽類)與彼等之對應自由鹼相較之下，具有許多優點。例如，鹽類因為下列原因，而較自由鹼享有一或多個下列優點：．溶解性較佳，因而較適用於經靜脈投藥(例如，藉由輸注法)，且具有較好的藥物動力性質；．安定性較佳(例如，儲存期限獲改善)；．具有較佳的熱安定性；．鹼性較低，因此較適用於經靜脈投藥；．具有製造上的優點；．具有改善的新陳代謝性質；以及．在病患之間呈現出較少的臨床差異。
適用於製備式如本文所記載之(I)、(II)、(III)、(XXX)以及彼等之子群及範例的化合物的液體(例如，含水的)組成物的較佳鹽類，係在一既定液態載體(例如，水)中的溶解度大於25 mg/ml(液態載體，例如，水)的鹽類，該溶解度通常係大於50 mg/ml，而較佳的是大於100 mg/ml。
在另一體系中，適用於製備式如本文所記載之(I)、(II)、(III)、(XXX)以及彼等之子群及範例的化合物的液體(例如，含水的)組成物的較佳鹽類，係在一既定液態載體(例如，水或緩衝系統)中的溶解度大於1 mg/ml(液體載體，例如，水)的鹽類，該溶解度通常係大於15 mg/ml，更通常係大於20 mg/ml，且較佳係大於25 mg/ml。
在另一體系中，較佳的酸加成鹽類為甲烷磺酸鹽、乙烷磺酸鹽、D－或L－乳酸鹽、以及氫氯酸鹽類。在一特定體系中，該酸加成鹽係乳酸鹽，尤指L－乳酸鹽或D－乳酸鹽，以L－乳酸鹽較佳。
在本發明之一體系中，提供了一種包含水溶液的藥學組成物，該水溶液含有呈鹽形式之如本文所記載之(I)、(II)、(III)、(XXX)以及彼等之子群及範例的化合物，其濃度係大於25 mg/ml，通常係大於50 mg/ml，且以大於100 mg/ml較佳。
在本發明之另一體系中，提供了一種包含水溶液的藥學組成物，該水溶液含有呈鹽形式之如本文所記載之(I)、(II)、(III)、(XXX)以及彼等之子群及範例的化合物，其濃度係大於1 mg/ml，通常係大於5 mg/ml(液態載體，例如，水)，更通常係大15 mg/ml，再更通常係大於20 mg/ml，且以大於25 mg/ml較佳。
若該化合物係陰離子性或是具有可為陰離子性的官能基(例如，－COOH可為－COO－ )，則鹽類可藉由與適當的陽離子反應生成。適當之無機陽離子的範例包括(但不侷限於)：鹼金屬離子(諸如，Na＋ 及K＋ )、鹼土金屬離子(諸如，Ca2 ＋ 及Mg2 ＋ )、以及其他的陽離子(諸如，Al3 ＋ )。適當之有機陽離子的範例包括(但不侷限於)：銨離子(亦即，NH4 ＋ )以及經取代的銨離子(例如，NH3 R＋ 、NH2 R2 ＋ 、NHR3 ＋ 、NR4 ＋ )。某些適當之經取代銨離子的範例係衍生自下列者：乙胺、二乙胺、二環己胺、三乙胺、丁胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、六氫吡嗪、苄胺、苯基苄基胺、膽鹼、N－甲基葡萄糖胺、以及三(羥甲基)胺基甲烷，還有胺基酸，諸如，賴胺酸以及精氨酸。常用之第四級銨離子的一例為N(CH3 )4 ＋ 。
當式(I)化合物含有胺官能時，彼等可，例如，藉由根據習於此藝之士已熟知的方法，與烷化劑所反應，而形成第四級銨鹽類。如是之第四級銨化合物係落在式(I)的範圍內。
本發明化合物之鹽形式通常係藥學上可接受的鹽類，而有關藥學上可接受之鹽類的範例的討論可見於Bergeet al. ,1977,"Pharmaceutically Acceptable Salts,"J.Pharm.Sci. ,Vol.66,pp.1－19。然而，非為藥學上可接受的鹽類亦可以中間物的形式被製備出來，然後，將彼等轉化為藥學上可接受的鹽類。如是之非藥學上可皆受之鹽類形式可用於，例如，本發明之化合物的純化或分離，因此，亦為本發明之一部分。
含有胺官能之式(I)化合物亦可形成N－氧化物。在本文中，當提及含有胺官能之式(I)化合物時，亦包括其N－氧化物。
當化合物含有多個胺官能時，有一個或一個以上的氮原子可被氧化而形成N－氧化物。N－氧化物之特定範例係第三級胺或含氮雜環之氮原子的N－氧化物。
N－氧化物可藉由用氧化劑(諸如，過氧化氫或過氧酸(例如，過氧基羧酸))處理對應的胺而製備得，參見，例如，Advanced Organic Chemistry, by Jerry March,4t h Edition,Wiley Interscience,pages。詳而言之，N－氧化物可藉由L.W.Deady(Syn.Comm. 1977,7,509－514)的程序製備得，在該程序中，胺化合物係與間氯基過氧基苯甲酸(MCPBA)在，例如，惰性溶劑(諸如，二氯甲烷)中反應。
式(I)化合物可以多種不同的幾何異構及互變異構的形式存在，且提到式(I)化合物時，亦包括所有如是的形式。為了避免疑念，當化合物可以多種幾何異構或互變異構形式中之一種形式存在且僅描述或顯示出一種形式時，即使如此，所有的其他形式皆包括在式(I)中。
例如，在式(I)化合物中，苯並咪唑基可呈任一下列二互變異構形式A，A’以及B，B’。為了簡化起見，通式(I)僅例示形式A及A’，但是該通式理應包涵所有的四種互變異構形式。
該吡唑環亦可呈現出互變異構現象且可以下列二種互變異構形式C及D存在。
互變異構形式的其他範例包括，例如，酮－、烯醇－、以及烯醇基－形式，如在，例如，下列互變異構對：酮/烯醇(例示於下文)、亞胺/烯胺、醯胺/亞胺基醇、脒/脒、亞硝基/肟、硫酮/烯硫醇、硝基/酸－硝基。
若式(I)化合物含有一或多個不對稱中心，且可以二或多個光學異構物的形式存在，別提到式(I)化合物時，應包括呈單獨之光學異構物或是二或多種光學異構物之混合物(例如，消旋混合物)之其所有的光學異構形式(例如，鏡像異構物、表異構物以及非鏡相異構物)，除非文章中另有其他指定。
例如，A基團可包括一或多個不對稱中心。因此，當E及R1 皆連接至連結基團A之相同碳原子上時，該碳原子通常係不對稱的且因此，式(I)化合物可以一對鏡像異構物(或是一對以上的鏡像異構物，若化合物內有一對以上的不對稱中心)的形式存在。
光學異構物可藉由彼等的光學活性來特性化及鑑別(亦即，＋及－異構物，或是d 及l 異構物)，或是彼等可根據彼等之絕對立體化學，使用Cahn,Ingold and Prolog所開發出來的”R”及”S”命名法，來特性化，參見Advanced Organic Chemistry by Jerry March,4t h Edition,John Wiley & Sons,New York,1992,pages 109－114，以及參見Cahn Ingold & Prelog,Angew,Chem.Int.Ed.Engl., 1966,5,385－415。
光學異構物可藉由許多技術(包括光學層析法，於不對稱載體上所進行的層析法)來進行分離，且如是之技術係習於此藝之士已熟知者。
除了不對稱層析法之外，光學異構物亦可藉由與不對稱酸類(諸如，(＋)－酒石酸、(－)－焦榖胺酸、(－)－二－甲苯甲醯基－L－酒石酸、(＋)－苯乙醇酸、(－)－蘋果酸、以及(－)－樟腦磺酸)形成非鏡像異構的鹽類，藉由優先結晶法分離出該非鏡像異構物，然後，將該鹽類解離而得到該自由鹼的單獨鏡像異構物。
若式(I)化合物係以二或多種光學異構形式存在，則成對之鏡像異構物中的一鏡像異構物可能呈現出優於其他鏡像異構物的優點，例如，就生物活性來看。因此，在某些情況下，會想要使用成對鏡像異構物中的僅僅一者或是數個非鏡像異構物中的僅僅一者，來作為治療劑。因此，本發明提供了一種藥學組成物，其含有具有一或多個不對稱中心的式(I)化合物，其中，該式(I)化合物的至少55%(例如，至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%)係呈單一光學異構物(例如，鏡像異構物或非鏡像異構物)。在一通用體系中，式(I)化合物之總量的99%或99%以上(例如，實質上全部)可呈單一光學異構物(例如，鏡像異構物或非鏡像異構物)。
本發明之化合物包括帶有一或多個同位素取代的化合物，且提到某一特定元素，其範圍應包括該元素之所有同位素。例如，提到氫時，其範圍應包括1 H、2 H(D)及3 H(T)。同樣地，提到碳及氧時，彼等之範圍應分別包括1 2 C、1 3 C與1 4 C以及1 6 O與1 8 O。
彼等同位素可為具放射性者或不具放射性者。在本發明之體系中，該化合物含有不具放射性的同位素。對於治療用途而言，如是之化合物係較佳者。然而，在另一體系中，該化合物可含有一或多個放射性同位素。含有如是放射性同位素的化合物可用於診斷。
帶有羧酸基或羥基之式(I)化合物的酯類(諸如，羧酸酯類以及醯氧基酯類)亦涵蓋在式(I)的範圍內。酯類的範例為含有－C(＝O)OR基團的化合物，其中R示酯取代基，例如，C1 － 7 烷基、C3 － 2 0 雜環基、或C5 － 2 0 芳基，以C1 － 7 烷基較佳。酯基的特定範例包括(但是不侷限於)：－C(＝O)OCH3 、－C(＝O)OCH2 CH3 、－C(＝O)OC(CH3 )3 及－C(＝O)OPH。醯氧基(反向酯(reverse ester))係如－OC(＝O)R所示，其中R示醯氧基取代基，例如，C1 － 7 烷基、C3 － 2 0 雜環基、或是C5 － 2 0 芳基，以C1 － 7 烷基較佳。醯氧基的特定範例包括(但是不侷限於)：－OC(＝O)CH3 (乙醯氧基)、－OC(＝O)CH2 CH3 、－OC(＝O)C(CH3 )3 、－OC(＝O)Ph及－OC(＝O)CH2 Ph。
式(I)化合物還包含了化合物的任何同質異形、化合物之溶劑化物(例如，水合物)、錯合物(例如，包涵錯合物或是與諸如環糊精之化合物形成的晶籠化合物、或是與金屬所形成的錯合物)、以及化合物的前藥。「前藥」係指，例如，在活體內會轉化為式(I)之具生物活性之化合物的任何化合物。
例如，某些前藥係活性化合物的酯類(例如，生理上可接受之易於代謝的酯)。在代謝期間，酯基(－C(＝O)OR)會裂解而產生活性藥物。如是之酯類可藉由，例如，母化合物上之任何羧酸基(－C(＝O)OH)的酯化而形成，視需要，母化合物內之任何其他具反應性的基團可先經過保護，然後，若需要再進行去保護。
如是易於代謝之酯類的範例包括式C(＝O)OR所示者，其中R示：C1 － 7 烷基(例如，－甲基、－乙基、－正丙基、－異丙基、－正丁基、－第二丁基、－異丁基、－第三丁基)；C1 － 7 胺烷基(例如，胺乙基；2－(N,N－二乙胺基)乙基；2－(4－嗎襠啉基)乙基)；以及醯氧基－C1 － 7 烷基(例如，醯氧基甲基；醯氧基乙基；三甲基乙醯氧基甲基；乙醯氧基甲基；1－乙醯氧基乙基；1－(1－甲氧基－1－甲基)乙基－羰氧基乙基；1－(苄醯氧基)乙基；異丙氧基－羰氧基甲基；1－異丙氧基－羰氧基乙基；環己基－羰氧基甲基；1－環己基－羰氧基乙基；環己氧基－羰氧基甲基；1－環己氧基－羰氧基乙基；(4－四氫吡喃氧基)羰氧基甲基；1－(4－四氫吡喃氧基)羰氧基乙基；(4－四氫吡喃基)羰氧基甲基；以及1－(4－四氫吡喃基)羰氧基乙基)。
某些前藥亦可被酶促活化而產生活性化合物或是經進一步化學反應後會產生活性化合物(例如，如在ADEPT、GDEPT、LIDEPT等等者)。例如，該前藥可為一糖衍生物或是其他葡萄糖苷結合體(conjugate)，或是可為胺基酸酯衍生物。
1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲及其鹽類一特定的式(I)之子群(A)化合物係1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲。
因此，在一較佳體系中，本發明係提供1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的自由鹼或酸加成鹽。
1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲之自由鹼(鹽類係由其衍生得的)具有式(XXX)：
在本文中提到式(XXX)化合物時，可使用其化學名，1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲，或是為了方便起見，使用「化合物XXX」、「式(XXX)化合物」或是實施例24的化合物。各個此等同義詞係指前文之式(XXX)所示的化合物，且該化合物具有下列化學名稱：1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲。
提到化合物1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲自由鹼及其酸加成鹽類時，彼等之範圍應包括彼等之所有溶劑化物、互變異構物以及同位素以及若環境允許，還包括N－氧化物、其他離子形式及前藥。因此，若提到式(XXX)之替換互變異構物，1－環丙基－3－[3－(6－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲，應被瞭解為係指化合物(XXX)。
式(XXX)之酸加成鹽可選自與各式各樣之酸類(無機及有機者皆包括)所形成的鹽類。酸加成鹽類的範例包括與選自下列之酸所形成的鹽類：乙酸、2,2－二氯乙酸、己二酸、褐藻酸、抗壞血酸(例如，L－抗壞血酸)、天冬胺酸(例如，L－天冬胺酸)、苯磺酸、苯甲酸、4－乙醯胺基苯甲酸、丁酸、樟腦二酸(例如，(＋)－樟腦二酸)、樟腦磺酸、(＋)－(1S)－樟腦－10－磺酸、癸酸、己酸、辛酸、碳酸、桂皮酸、檸檬酸、環己基磺酸、十二碳烷酸、十二烷基硫酸、乙烷－1,2－二磺酸、乙烷磺酸、2－羥基乙烷磺酸、甲酸、反丁烯二酸、半乳糖酸、龍膽酸、葡萄庚糖酸、D－葡萄糖酸、葡萄糖醛酸(例如，D－葡萄糖醛酸)、穀胺酸(例如，L－穀胺酸)、α－酮基戊二酸、乙醇酸、馬尿酸、氫溴酸、氫氯酸、氫碘酸、2－羥基乙烷磺酸、(＋)－L－乳酸(例如，(＋)－DL－乳酸及(－)－乳酸)、乳糖酸、月桂基磺酸、順丁烯二酸、蘋果酸、(－)－L－蘋果酸、丙二酸、(±)－DL－苯乙醇酸、甲烷磺酸、黏液酸、萘磺酸(例如，萘－2－磺酸)、萘－1,5－二磺酸、1－羥基－2－萘酸、菸鹼酸、硝酸、油酸、乳清酸、草酸、軟脂酸、雙羥萘酸、磷酸、丙酸、L－焦榖胺酸、水楊酸、4－胺基－水楊酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、單寧酸、酒石酸(例如，(＋)－L－酒石酸)、硫氰酸、甲苯磺酸(例如，對甲苯磺酸)、十一碳烯酸以及戊酸，還有醯化的胺基酸類及陽離子交換樹脂。
鹽類之一特定群係由下列酸類所形成的鹽類所組成：氫氯酸、氫碘酸、磷酸、硝酸、硫酸、檸檬酸、乳酸、琥珀酸、順丁烯二酸、蘋果酸、2－羥基乙烷磺酸、反丁烯二酸、苯磺酸、甲苯磺酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、萘磺酸、戊酸、乙酸、丙酸、丁酸、丙二酸、葡萄糖醛酸以及乳清酸。
一鹽類子群係由下列酸所形成的鹽類所組成：氫氯酸、乙酸、己二酸、L－天冬胺酸以及D－或L－乳酸。
另一鹽類子群係由下列鹽類所組成：乙酸鹽、甲烷磺酸鹽、乙烷磺酸鹽、D－或L－乳酸鹽、己二酸鹽、D－葡萄糖醛酸鹽、葡萄糖酸鹽以及鹽酸鹽。在另一體系中，較佳的酸加成鹽類為甲烷磺酸鹽、乙烷磺酸鹽、D－或L－乳酸鹽、以及氫氯酸鹽。
在一特定體系中，酸加成鹽類為DL－乳酸鹽，尤指L－乳酸鹽或D－乳酸鹽，以L－乳酸鹽較佳。
在另一體系中，式(XXX)化合物之自由鹼或鹽類係選自L－乳酸鹽、自由鹼脫水物、乙烷磺酸鹽、自由鹼及氫氯酸鹽。
在另一且較佳的體系中，式(XXX)化合物的鹽類係選自：乳酸鹽及檸檬酸鹽以及彼等之混合物，且更佳者係選自L－乳酸鹽及檸檬酸鹽以及彼等之混合物，以L－乳酸鹽特別較佳。在下文中，將更詳盡地陳述及說明關於1－環丙基－3－[3－(5－嗎襠啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲之L－乳酸鹽及檸檬酸鹽之本發明的特定且較佳體系。
在另一體系中，式(XXX)化合物係一自由鹼。
本發明之鹽類，諸如，乳酸鹽(例如，L－乳酸鹽)及檸檬酸鹽，可由母化合物1－環丙基－3－[3－(5－嗎襠啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲，藉由習用的化學方法，諸如，Pharmaceutical Salts：Properties,Selection,and Use ,P.Heinrich Stahl(Editor),Camille G.Wermuth(Editor)，ISBN：3－90639－026－8,Hardcover,388 pages,August 2002所記載的方法，製備而得。一般而言，如是鹽類可藉令母化合物1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲在水或有機溶劑或是二者的混合物中，與適當的酸反應而製備得；通常係使用非水性的介質，諸如，乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈。
在另一態樣中，本發明係提供製備1－環丙基－3－[3－(5－嗎襠啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲之酸加成鹽(諸如，乳酸鹽(例如，L－乳酸鹽)及檸檬酸鹽)的方法，該方法包含：形成1－環丙基－3－[3－(5－嗎襠啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲於一溶劑(通常為有機溶劑)或溶劑混合物中的溶液，並且用酸處理該溶液，而形成酸加成鹽的沉澱。
該酸可以在溶劑中的溶液形式來添加，而該溶劑係與自由鹼溶解於其中的溶劑互溶的。自由鹼最初溶解於其中的溶劑可為酸加成鹽無法溶解於其中的溶劑。另外，自由鹼最初溶解於其中的溶劑可為酸加成鹽於其中之溶解度較低者，而在後來添加該溶劑時，該鹽會自溶液沉澱析出。
在形成酸加成鹽類(諸如，乳酸鹽(例如，L－乳酸鹽)及檸檬酸鹽)之另一可行方法中，係將1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲溶解於包含了揮發性酸以及非必要之輔溶劑，因而形成了酸加成鹽與揮發性酸的溶液，然後將所得到的溶液濃縮或蒸發，以單離出該鹽。可藉有此一方式來製備之另一酸加成鹽的例子為乙酸鹽。
在另一態樣中，本發明提供了形成本文所定義之1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的酸加成鹽(諸如，乳酸鹽(例如，L－乳酸鹽)及檸檬酸鹽)的方法，該方法包含：於有機溶劑中，用本文所定義的有機或無機酸類來處理式(XXX)化合物： 而得到1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲與有機或無機酸的酸加成鹽，以及視需要，單離出如此所形成的酸加成鹽。
該鹽類通常係在其一形成後就自有機溶劑沉澱析出，因此，可藉由自溶液分離出固體的方法(例如，過濾法)，予以單離。
藉由習於此藝之式所熟知的方法，可將本發明之一鹽形式轉化為自由鹼以及視需要，轉化為另一鹽形式。例如，藉令鹽溶液通過含有胺固定相的層柱(例如，Strata－NH2 層柱)，可形成自由鹼。另外，可用碳酸氫鈉處理該鹽的水溶液，以將該鹽分解並且使自由鹼沉澱析出。然後，該自由鹼可藉由前文或本文之其他部分所記載的方法之一，與另一個酸結合。
較佳的鹽類，諸如，酸加成鹽類(例如，乳酸鹽(例如，L－乳酸鹽)及檸檬酸鹽)具有許多優點。例如，彼等鹽類享有一或多個下列優點：．彼等較為可溶，尤其是彼等在水溶液中的溶解度獲得改良，因此較適用於經靜脈投藥(例如，藉由輸注法)；．使得溶液pH獲控制，因而較適用於經靜脈投藥；．可具有改善的抗癌活性；以及．可具有改善的治療指數。
該鹽類的其他優點在於：．具有較佳的安定性，例如，熱安定性(例如，改善的儲存期限)；．具有製造上的優點；以及．具有較佳的物理化學性質。
本發明之乳酸鹽(例如，L－乳酸鹽)係特別有利的，因為其在水中的溶解度佳且在緩衝系統中具有較佳的溶解度。
可用於製備液態(例如，含水)藥學組成物的較佳鹽類係具有下列溶解度的酸加成鹽，在某一既定液體載體(例如，水)的溶解度大於1 mg/ml(液體載體，例如，水)，通常為大於5 mg/ml，更通常為大於15 mg/ml，再更通常係大於20 mg/ml且較佳者係大於25 mg/ml。
該鹽類的水溶液(例如，呈藥學組成物的形式)係本發明之另一態樣。如是溶液可經過緩衝或未經緩衝。在溶液中，該鹽類通常會解離形成呈質子化形式的1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲連同一或多個平衡離子。因此，在另一態樣中，本發明係提供呈質子化形式的1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲連同一或多個平衡離子以及非必要之一或多個其他平衡離子(例如，衍生自其他鹽類，諸如，氯化鈉或緩衝劑的平衡離子)的溶液。
1－環丙基－3－[3－(5－嗎襠啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的鹽類通常係藥學上可接受的鹽類，且藥學上可接受之鹽類的範例係討論於Bergeet al. ,1977,"Pharmaceutically Acceptable Salts,"J.Pharm.Sci. Vol.66,pp.1－19。然而，非藥學上可接受的鹽類亦可以中間物的形式被製備出來，然後予以轉化為藥學上可接受的鹽類。因此，如是之非藥學上可接受之鹽類形式亦構成本發明之一部分。
化合物1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲亦可形成N－氧化物。N－氧化物可藉由前文所述的方法得到。
如同本發明之其他化合物，化合物1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲及其酸加成鹽類可以許多不同的互變異構形式存在，且提到本案之化合物時，亦包括如是形式。
詳而言之，在1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲及其鹽類中，苯並咪唑基團可採下文所示之二互變異構形式A”及B”中之任一者的形式。簡而言之，通式(I)係顯示形式A”，但是該通式應包括所有的互變異構形式。
因此，提到替換的互變異構物時，1－環丙基－3－[3－(6－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲所指的化合物明顯地係與1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲所者的相同。
該吡唑環亦可呈現出互變異構現象且可以下列二種互變異構形式C”及D”存在。
此外，脲的順式及反式構型係有可能的，如下文所示。
提到1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲及其鹽類時，亦包括帶有一或多個同位素取代的變形，且提到某一特定元素，其範圍應包括該元素之所有同位素。例如，提到氫時，其範圍應包括1 H、2 H(D)及3 H(T)。同樣地，提到碳及氧時，彼等之範圍應分別包括1 2 C、1 3 C與1 4 C以及1 6 O與1 8 O。
彼等同位素可為具放射性者或不具放射性者。在本發明之體系中，該化合物含有不具放射性的同位素。對於治療用途而言，如是之化合物係較佳者。然而，在另一體系中，該化合物可含有一或多個放射性同位素。含有如是放射性同位素的化合物可用於診斷。
提到1－環丙基－3－[3－(5－嗎襠啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲及其鹽類時，亦包括彼等之任何同質異形、溶劑化物(例如，水合物)、錯合物(例如，包涵錯合物或是與諸如環糊精之化合物形成的晶籠化合物、或是與金屬所形成的錯合物)。
乳酸鹽及檸檬酸鹽、彼等的混合物及晶體
如由本案之前述段落明顯可知者，1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲之較佳鹽類為與乳酸(更佳者為L－乳酸)、檸檬酸或彼等之混合物所形成的酸加成鹽類。
在本文中，為了方便起見，由乳酸、L－乳酸及檸檬酸所形成的鹽類可分別稱作為乳酸鹽、L－乳酸鹽及檸檬酸鹽。
在一特定體系中，該鹽係L－乳酸鹽或D－乳酸鹽，以L－乳酸鹽較佳。
在另一體系中，該鹽係與檸檬酸所形成的鹽。
更特別地，該鹽類可為L－乳酸鹽與檸檬酸鹽的混合物。
在固體狀態下，本發明之乳酸鹽(尤指L－乳酸鹽)或檸檬酸鹽可為晶體或非晶體或彼等之混合物。
在一體系中，該乳酸鹽(尤指L－乳酸鹽)或檸檬酸鹽係非晶性的。
在非晶性的固體內，通常存在於晶性形式內的立體的結構並不存在，且在非晶性形式內，分子相互之間的位置基本上係無規則的，參見，例如，Hancocket al.,J.Pharm.Sci. (1977),86,1)。
在另一體系中，該乳酸(尤指L－乳酸)或檸檬酸鹽實質上係晶性的，亦即，彼等係50%至100%晶性，且更特別地，彼等係至少50%晶性，或是至少60%晶性，或是至少70%晶性，或是至少80%晶性，或是至少90%晶性，或是至少95%晶性，或是至少98%晶性，或是至少99%晶性，或是至少99.5%晶性，或是至少99.9%晶性，例如，100%晶性。
在另一體系中，該乳酸鹽(尤指L－乳酸鹽)或檸檬酸鹽係選自：50%至100%晶性的乳酸鹽(尤指L－乳酸鹽)或檸檬酸鹽，例如，至少50%晶性、至少60%晶性、至少70%晶性、至少80%晶性、至少90%晶性、至少95%晶性、至少98%晶性、至少99%晶性、至少99.5%晶性、以及至少99.9%晶性，例如，100%晶性。
更特定的是，該乳酸鹽(尤指L－乳酸鹽)或檸檬酸鹽可為(或可選自)95%至100%晶性者，例如至少98%晶性，或至少99%晶性，或至少99.5%晶性，或是至少99.6%晶性，或是至少99.6%晶性，或是至少99.7%晶性，或是至少99.8%晶性或是至少99.9%晶性，例如，100%晶性。
實質上晶性鹽的一例係與L－乳酸所形成的晶性鹽。
實質上晶性鹽的另一例為與檸檬酸所形成的晶性鹽。
呈固態之本發明的鹽類可經溶劑化(例如，水合的)或未經溶劑化的(例如，無水的)。
在一體系中，該鹽類係未經溶劑化的(例如，無水的)。
未經溶劑化之鹽的另一例係與本文所定義之乳酸(尤指L－乳酸)所形成的晶性鹽。
本文所用的「無水的」一詞不排除在該鹽(例如，該鹽的晶體)上或之內有水存在的可能性。例如，可能會有一些水出現在該鹽(例如，鹽晶體)的表面上，或是在該鹽(例如，晶體)的本體內會有少量水。一般而言，無水形式含有少於0.4分子的水(相對於每一分子化合物而言)，且更佳的是，含有少於0.1分子的水(就每一分子的化合物而言)，例如，0分子的水。
在另一體系中，該乳酸鹽(尤指L－乳酸鹽)或檸檬酸鹽係經溶劑化的。當該鹽類係水合時，彼等可含有，例如，至多3分子的結晶水，更通常的是含有至多2分子的水，例如，1分子水或2分子水。亦可形成非化學計量的水合物，其中所存在的水分子數係小於1或非為整數。例如，當每一分子中有少於1分子的水存在時，可有，例如，0.4、或0.5、或0.6、或0.7、或0.8、或0.9分子的水存在。
其他的溶劑化物包括醇化物，諸如，乙醇化物及異丙醇化物。
在一體系中，該乳酸鹽(尤指L－乳酸鹽)係經溶劑化的，例如，經水及/或乙醇溶劑化。
根據本案之前面的段落及任何其他部分所記載的方法，可製備得該L－乳酸鹽及檸檬酸鹽。
該L－乳酸鹽及檸檬酸鹽的優點包括本案之前面段落中所陳述的一般優點。然而，本發明之晶性乳酸鹽係特別有利的，原因在於其：．非吸水性的；．係無水的且不會形成水合物；．呈單晶的形式且被認為會呈現出同質異形現象；．係晶性的；．儲存安定；．具有鮮明的熔點且在用DSC進行分析時，未呈現出形式的變化；．水中的溶解度佳；以及．在緩衝系統中的溶解度較佳。
因此，L－乳酸鹽可以安定的晶形存在，不會形成水合物且在通常的處理、加工及儲存條件下，不會有形式的變化。
本文所用的「安定」或「安定性」等詞係包括化學安定性及固體狀態(物理)安定性。「化學安定性」一詞係指化合物可單離的形式、或是以調配物的形式(其中該化合物係以與，例如，本文所記載之藥學上可接受的載體、稀釋劑或佐劑摻和在一起呈摻合物的形式提供)，儲存在普通的儲存條件下，而僅有少量或無化學降解或分解的現象。「固態安定性」係指化合物可以單離的固態形式，或是以調配物的形式(其中該化合物係以與，例如，本文所記載之藥學上可接受的載體、稀釋劑或佐劑摻和在一起呈摻合物的形式提供)，儲存在普通的儲存條件下，而僅有些微或無固體狀態轉換(例如，水合、去水合、溶劑化、去溶劑化、晶化、再結晶化或固態相轉移)。
該乳酸鹽及檸檬酸鹽以及彼等之混合物具有良好的水溶解度且因此，可用於製備含有相對高濃度之該鹽類的水溶液。因此，在另一體系中，提供了含有1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲之L－乳酸鹽或檸檬酸鹽或彼等之混合物的水溶液(例如，呈藥學組成物的形式)，其濃度係大於1 mg/ml(液態載體，例如，水或緩衝系統)，通常大於5 mg/ml，更通常為大於15 mg/ml，再更通常係大於20 mg/ml且較佳為大於25 mg/ml。在此體系中，特別較佳者係含有(i)該乳酸鹽或(ii)L－乳酸鹽與檸檬酸鹽之混合物的水溶液(例如，呈藥學組成物的形式)。
該L－乳酸或檸檬酸鹽或是彼等之混合物的水溶液可為pH再2－6範圍內的水溶液，例如，2至5，更特定的是4至6，諸如，4至5。
該L－乳酸鹽或檸檬酸鹽或是彼等之混合物的水溶液可經緩衝或未經緩衝，但是在一體系中，係經緩衝至，例如，前文所列的pH範圍內。
較佳的緩衝劑為能夠將該溶液緩衝至pH大約4.5且在用於冷凍乾燥該溶液的條件下不會揮發者。
在與L－乳酸所形成的鹽情況下，較佳的緩衝劑係由檸檬酸所形成且用氫氧化鈉或氯化氫校正至正確pH(例如，大約4.5的溶液pH)的緩衝劑。在該pH下及該檸檬酸緩衝劑中，自由鹼的溶解度為約80mg/ml。
該L-乳酸鹽或檸檬酸鹽或是彼等之混合物的水溶液含有呈質子化形式的1-環丙基-3-[3-(5-嗎福啉-4-基甲基-1H-苯並咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-脲連同L-乳酸根及/或檸檬酸根平衡離子。亦可能出現有其他抗衡離子且彼等可衍生自，例如，滲透壓調節劑(諸如，鹽水，亦即，氯化物平衡離子)及/或緩衝劑(諸如，檸檬酸鹽緩衝劑)。例如，當該L-乳酸鹽係與檸檬酸鹽緩衝劑混合於水溶液中時，會同時出現L-乳酸根及檸檬酸根平衡離子，檸檬酸根平衡離子的性質係取決於該溶液的pH。此外，L-乳酸鹽或檸檬酸鹽或是彼等之混合物的水溶液可含有一或多種其他常見於I.V.調配物的賦形劑，諸如，滲透壓調劑，彼等的範例詳述於United States Pharmacopeia以及National Formulary且包括己糖類，諸如，葡萄糖，例如，右旋糖(D-葡萄糖)。
因此，在另一體系中，本發明提供了一含水溶液，其含有呈質子化的1-環丙基-3-[3-(5-嗎福啉-4-基甲基-1H-苯並咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-脲連同一或多個選自L-乳酸根及檸檬酸根以及彼等之混合物的平衡離子；以及非必要之(i)一或多個其他平衡離子，諸如，氯離子，及/或(ii)一或多個I.V.賦形劑，諸如，滲透壓調節劑(例如，己糖類，諸如，葡萄糖，以D-葡萄糖較佳)。
該水溶液特別可藉由將乳酸鹽溶於檸檬酸根離子的溶液(例如，檸檬酸鹽緩衝劑)，或將檸檬酸鹽溶於乳酸根離子的溶液，而形成。該乳酸根及檸檬酸根離子可以下列乳酸根：檸檬酸根比例存在於該溶液中：10：1或更小，例如，10：1至1：10，更佳為小於8：1，或小於7：1，或小於6：1，或小於5：1，或小於4：1，或小於3：1，或小於2：1，或小於1：1，更特定的是1：1至1：10。在一體系中，該乳酸根及檸檬酸根離子係以下列乳酸鹽：檸檬酸鹽比出現在該溶液中：1：1至1：10，例如，1：1至1：8，或1：1至1：7，或1：1至1：6，或1：1至1：5，例如，大約1：4.4。
在本案之此段落及本文之任何其他部分所記載的各水溶液可進行冷凍乾燥，以提供固體調配物，其在需要時，可藉由添加水(宜為無菌水)或含有I.V.賦形劑(諸如，鹽水及/或右旋糖)的含水介質，輕易地恢復原狀，而形成一水溶液(宜為無菌溶液)。
因此，本發明亦提供了一冷凍乾燥調配物(例如，呈藥學組成物的形式)，其包含如本文所定義的L－乳酸鹽或檸檬酸鹽或是彼等的混合物，例如，該調配物在溶於水，pH為2至6，例如，2至5，且更特定為4至6，諸如，4至5。
在另一體系中，本發明提供了一冷凍乾燥的調配物(例如，呈藥學組成物的形式)，其包含呈質子化的1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-脲連同一或多個選自L-乳酸鹽及檸檬酸鹽以及彼等之混合物的平衡離子；以及非必要之(i)一或多個其他平衡離子，諸如，氯離子，及/或(ii)一或多個經靜脈的賦形劑，諸如，滲透壓調節劑(例如，己糖類，諸如，葡萄糖，以D-葡萄糖較佳)。
在各冷凍乾燥調配物中的L-乳酸鹽相對於檸檬酸鹽的比例係如前述水溶液部分所陳述者。
1-環丙基-3-[3-(5-嗎福啉-4-基甲基-1H-苯並咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-脲及其鹽類的晶體結構
如前文所述者，1-環丙基-3-[3-(5-嗎福啉-4-基甲基-1H-苯並咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-脲的乳酸鹽(尤指L-乳酸鹽)或檸檬酸鹽可為非晶性或實質上晶性的。在一體系中，該乳酸鹽(尤指L-乳酸鹽)或檸檬酸鹽係實質上晶性的，「實質上晶性的」一詞係如前文所定義者。特別是，1-環丙基-3-[3-(5-嗎福啉-4-基甲基-1H-苯並咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-脲的乳酸鹽(尤指L-乳酸鹽)係實質上晶性的。
1-環丙基-3-[3-(5-嗎福啉-4-基甲基-1H-苯並咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-脲的自由鹼亦可為非晶性的或實質上晶性的。在一特定體系中，該自由鹼係實質上晶性的，該「實質上晶性的」一詞係如前文所定義的。在一體系中，1－環丙基－3－[3－(5－嗎襠啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的自由鹼可以二水合物晶性形存在。
本文所述的晶體及晶體結構形成本發明之進一步的態樣。
如前文已指出者，本發明的乳酸鹽被認為係以具有本文所陳述之特性的單晶形式存在。該單晶形式乃本發明之一較佳體系。然而，若有其他晶形亦存在時，彼等並不被排除在本發明之範圍之外。
因此，當1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的乳酸鹽(尤指L－乳酸鹽)係實質上晶性時，有一單晶形(例如，本文所定義及特性化的晶形)可能佔優勢，即使亦有少量(宜為可忽略的量)的其他晶形存在。
1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲(或其鹽類)的晶形含有少於或等於約5重量%之1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲(或其鹽類)的其他晶形，尤其係指含有少於或等於約1重量%之其他晶形(或其鹽類)。
在一較佳體系中，本發明提供了1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲之一實質上晶性的鹽(例如，乳酸鹽，諸如，本文所定義的的L－乳酸鹽)，其含有單晶形(例如，本文所定義及特性化的晶形)的鹽以及不大於5重量%之該鹽的任何其他晶形的該鹽。
較佳的是，該單晶形(例如，本文所定義及特性化的晶形)伴有少於4%、或少於3%、或少於2%的其他晶形，且尤其是含有少於或等於約1重量%的其他晶形。更佳的是，該單晶形(例如，本文所定義且特性化的晶形)伴有少於0.9重量%，或少於0.8重量%，或少於0.7重量%，或少於0.6重量%，或少於0.5重量%，或少於0.4重量%，或少於0.3重量%，或少於0.2重量%，或少於0.1重量%，或少於0.05重量%，或少於0.01重量%之其他晶形，例如，0重量%之其他晶形。
有多種方法，包括單晶X－射線晶體學、X－射線粉末繞射法(XRPD)、示差掃描熱量分析儀(DSC)以及紅外線光譜儀(例如，變溫紅外線光譜儀)，可用來特性化晶體及彼等的晶體結構。在各種不同溼度之條件下的晶體行為可藉由比重測定蒸汽吸收研究(gravimetric vapour sorption study)以及藉由XRPD，來分析。
化合物之晶體結構可藉由根據諸如本文所記載及下列文獻所記載的習用方法所進行的X－射線晶體學來測定：Fundamentals of Crystallography,C.Giacovazzo,H.L.Monaco,D.Viterbo,F.Scordari,G.Gilli,G.Zanotti and M.Catt.,(International Union of Crystallography/Oxford University Press,1992 ISBN 0－19－855578－4(p/b),0－19－85579－2(h/b)。該技術涉及單晶之X－射線繞射的分析及解釋。
1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲之自由鹼二水合物及L－乳酸鹽的晶體結構已藉由X－射線晶體學測定出，分別參見下文的實施例69及71。
實施例69及71的表2及4分別提供了1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲及其L－乳酸鹽之晶體的座標數據，呈晶體學資料檔案(CIF)格式(Crystallographic Information File(CIF)Format)(參見Hall,Allen and Brown,Acta Cryst .(1991).A47,655－685；http：//www.iucr.ac.uk/iucr－top/cif/home.html)。對於其他習於此藝之士，另類的檔案格式，諸如，PDB檔案格式(例如，與EBI巨分子結構資料庫(Hinxton,UK)一致的格式)亦可使用或為較佳的。然而，使用不同的檔案格式來呈現或處理表中座標的明顯地係屬本發明的範圍內。表中之括號內的數字係代表偏差(s.u.標準不確定度)。乳酸鹽的晶體結構係例示於第4及5圖。
在一體系中，本發明提供了1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲之二水合物自由鹼，其係晶性的且(i)具有如本文之表2內的座標所定義的晶體結構；以及/或(ii)其中該晶體係屬於單斜空間群P2 1 /n (#14)，具有晶格參數係a ＝7.66(10)，b ＝15.18(10)，c ＝17.71(10)，β＝98.53(2)°，α＝γ＝90°。
在另一體系中，本發明提供了1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的L－乳酸鹽，其係晶性的且具有如本文之表4內的座標所定義的晶體結構。
在另一體系中，本發明提供了1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的L－乳酸鹽，其係晶性的且具有如第4及5圖所示的晶體結構。
在另一體系中，本發明提供了1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的L－乳酸鹽，其係晶性的且具有屬於正交空間群P2 1 2 1 2 1 (#19)的晶體結構且具有晶格參數97(2)Ka ＝9.94(10)，b ＝15.03(10)，c ＝16.18(10)，α＝β＝γ＝90°。
在另一體系中，本發明提供了1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的L－乳酸鹽，其係晶性的且具有下列在室溫下的晶格參數，a ＝10.08(10)，b ＝15.22(10)，c ＝16.22(10)，α＝β＝γ＝90°。
因此，在另一體系中，本發明提供了1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的L－乳酸鹽，其係晶性的且(a)具有如第4及5圖所示的晶體結構；及/或(b)具有本文之表4內的座標所定義的晶體結構；及/或(c)具有晶格參數97(2)Ka ＝9.94(10)，b ＝15.03(10)，c ＝16.18(10)，α＝β＝γ＝90°；及/或(d)具有在室溫下的晶格參數a ＝10.08(10)，b ＝15.22(10)，c ＝16.22(10)，α＝β＝γ＝90°；及/或(e)具有屬於正交空間群P2 1 2 1 2 1 (#19)的晶體結構。
另外，化合物的晶體結構可藉由X－射線粉末繞射(XRPD)的固態技術來分析。XRPD可根據本文(參見實施例70及72)以及Introduction to X－ray Powder Diffraction,Ron Jenkins and Robert L.Snyder(John Wiley & Sons,New York,1996)所記載的習用方法，來進行。XPRD繞射圖譜內界定峰(與不規則的背景雜訊相反的)的出現，表示該化合物具有一定的結晶度。
化合物之X－射線粉末圖型係藉由X－射線繞射圖譜的繞射角(2 θ)以及平面間距(d)參數來特性化的。彼等係與Bragg’s方程式，n λ＝2d Sin θ相關(其中n＝1；λ＝所用之陰極的波長；d＝平面間距；且θ＝繞射角)。在本文中，基於數據的特性，平面間距、繞射角已及整個圖型對於在X－射線粉末繞射中鑑別晶體而言係重要的。由於相對強度會隨著晶體生長的方向、粒子大小及測量條件而變化，所以對於相對強度必須嚴格地加以解析。此外，繞射角通常係指符合2θ±0.2°範圍的角度。峰係指主峰且包括在前文所述繞射角之外的角度下之不大於中等的峰。
1－環丙基－3－[3－(5－嗎襠啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的L－乳酸鹽及自由鹼形式皆已藉由XRPD予以特性化。在各情況下，粉末X－射線繞射圖型係以繞射角(2 θ)、平面間距(d)及/或相對強度來表示。實施例70及72內的表3、5及6示對應於1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲之自由鹼、L－乳酸鹽及二水合物自由鹼形式之X－射線繞射光譜的平面間距(d)數值。
因此，1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲及其鹽類具有基本上如第3、6、7或8圖及/或實施例70及72之表3、5或6所示的X－射線粉末繞射圖型。
因此，在一體系中，本發明提供了1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲自由鹼或其L－乳酸鹽的晶體，其所呈現出的X－射線粉末繞射圖型含有在與第3、6、7或8圖及/或表3及/或表5及/或表6所示之X－射線粉末繞射圖型相同之繞射角度下的峰，且其中，該峰非必要地具有相同的相對強度。更詳而言之，該鹽類的晶體係具有實質上如第3、6、7或8圖所示之X－射線粉末繞射圖型的晶體。
在一較佳體系中，本發明提供了1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲L－乳酸鹽的晶體，其具有基本上如第6圖所示的X－射線粉末繞射圖型。
在另一體系中，本發明提供了1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲之實質上晶性的L－乳酸鹽，其呈現出在與第6圖所示之X－射線粉末繞射圖型相同之繞射角度下的峰。較佳的是，該峰具有與第6圖內之峰相同的相對強度。
本發明亦提供了1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲之實質上晶性的L－乳酸鹽，其具有實質上如第6圖所示的X－射線繞射圖型。
L－乳酸鹽的X－射線繞射圖型可藉由實施例72之表5所式的繞射角(2 θ)與平面間距(d)，以及較佳之強度來特性化。
因此，本發明提供了1－環丙基－3－[3－(6－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲L－乳酸鹽的晶體，其所顯示出的X－射線粉末繞射圖型具有在實施例72之表5的繞射角(2 θ±1.0°，諸如，±0.2°，尤指±0.1°)下的特性峰。
本發明亦提供了1－環丙基－3－[3－(6－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲L－乳酸鹽的晶體，其所具有的X－射線粉末繞射圖型顯示出在繞射角2 θ，17.50、18.30、19.30、19.60及21.85±1.0°(諸如，±0.2°，尤指±0.1°)下的主要峰。該晶體可藉由在12.40、15.20、15.60、17.50、18.30、18.50、19.30、19.60、21.85及27.30±1.0° 2 θ之X－射線繞射圖型內的峰，獲進一步特性化。
1－環丙基－3－[3－(6－嗎襠啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲L－乳酸鹽的晶體還具有下列特性：特性化的X－射線粉末繞射圖型係以實施例72之表5內的晶格平面間距來表示。
在另一體系中，本發明提供了1－環丙基－3－[3－(6－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲乳酸鹽的晶體，其所具有的X－射線粉末繞射圖型包含了以在5.06、4.85、4.60、4.53及4.07之粉末X－射線繞射的晶格間隔(d)出現的特性峰，且更特定地，包含了以在7.13、5.83、5.68、5.06、4.85、4.79、4.60、4.53、4.07及3.26之粉末X－射線繞射的晶格間距(d)出現的特性峰。
在另一體系中，本發明提供了1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－1－基]脲之實質上晶性的L－乳酸鹽，其所具有的X－射線粉末繞射圖型的特徵在於其主要峰出現於：繞射角(2 θ)17.5、18.30、19.30、19.60以及21.85°(更特定的是，12.40、15.20、15.60、17.50、18.30、18.50、19.30、19.60、21.85、以及27.30°)，以及平面間距(d)5.06、4.85、4.60、4.53以及4.07(更特定的是，7.13、5.83、5.68、5.06、4.85、4.79、4.60、4.53、4.07及3.26)。
在更進一步的體系中，本發明提供了1－環丙基－3－[3－(5－嗎襠啉－4－基甲基－1H－苯並咪咪－2－基)－1H－吡唑－1－基]脲之實質上晶性的L－乳酸鹽，其所具有的X－射線粉末繞射圖型之特徵在於：在實施例72之表5內的繞射角(2 θ)與平面間距(d)以及在(較佳之)強度下有峰出現。
本發明之晶性鹽類亦可藉由示差掃描熱量分析儀(DSC)，予以特性化。
L－乳酸鹽已經過DSC的分析且在190℃下呈現出一峰(熔點及分解)。
因此，在另一態樣中，本發明提供了1－環丙基－3－[3－(5－嗎襠啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－1－基]脲之的L－乳酸鹽，其係無水的且在進行DSC時，會在190℃呈現出一吸熱峰。
本發明之另一態樣係1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－1－基]脲之的L－乳酸鹽，其在與第6、7或8圖所示之X－射線粉末繞射圖型相同的繞射角度下，有峰出現，且根據熱分析(DSC)，在190℃附近，呈現出吸熱峰(伴隨分解)。
本發明之鹽類在高溼度條件下的行為可藉由標準重量氣體吸附(GVS)方法來分析，例如，如實施例68之段落E所敘述者。
在相對高溼度的條件下，L－乳酸鹽可以安定無水的晶性形式存在，且在如是之條件下，不會有晶體結構上的變化。
1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－1－基]脲之的鹽類還可利用紅外線光譜，例如，FTIR，予以進一步特性化。L－乳酸鹽的紅外線光譜(KBr圓薄片法)含有在3229、2972及1660 cm－ 1 的特性峰。
因此，在進一步的體系中，本發明提供了1－環丙基－3－[3－(5－嗎襠啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－1－基]脲(宜為實質上晶性的)，當用KBr圓薄片法分析時，其所呈現出的紅外線光譜含有在3229、2927及1660 cm－ 1 的特性峰。
由前述段落可明白，本發明之L－乳酸鹽可藉由數種不同的物化參數予以特性化。因此，在一較佳體系中，本發明提供了1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－1－基]脲之L－乳酸鹽，其係晶性的且係由一或多種(以任何組合)或所有的下列參數所特性化，亦即，該鹽類係：(a)具有第4及第5圖所示的晶體結構；及/或(b)具有本文實施例71之表5內的座標所定義的晶體結構；及/或(c)具有晶格參數97(2)Ka ＝9.94(10)，b ＝15.03(10)，c ＝16.18(10)，α＝β＝γ＝90°；及/或(d)具有在室溫下的晶格參數a ＝10.08(10)，b ＝15.22(10)，c ＝16.22(10)，α＝β＝γ＝90°；及/或(e)具有屬於正交空間群P2 1 2 1 2 1 (#19)的晶體結構；及/或(f)所具有的X－射線粉末繞射圖型的特徵在於其主要峰出現於：繞射角(2 θ)17.5、18.30、19.30、19.60以及21.85°(更特定的還有12.40、15.20、15.60、17.50、18.30、18.50、19.30、19.60、21.85、以及27.30°)，以及平面間距(d)5.06、4.85、4.60、4.53以及4.07(更特定的還有7.13、5.83、5.68、5.06、4.85、4.79、4.60、4.53、4.07及3.26)；及/或(g)在與第6圖或實施例72之表5所示之X－射線粉末繞射圖型者相同的繞射角度下呈現出峰，以及非必要地，其中該峰具有與第6圖或表5的峰相同的相對強度；及/或(h)具有實質上如第6圖所示之X－射線粉末繞射圖型；及/或(i)無水的且在進行DSC時，於190℃下呈現出吸熱峰；及/或(j)當使用KBr圓薄片法進行分析時，所呈現出的紅外線光譜含有在3229、2972及1660 cm－ 1 的特性峰。
式(I)之子群(C)化合物
在式(I)之一化合物子群(亦即，式(I)之子群(C))中，M示D1基團；X示O；A示NR2 基團(其中R2 示氫)；E示一鍵結；R1 示2,6－二氟苯基；且該化合物係由選自下列之酸類所形成的酸加成鹽。
因此，於一體系中，本發明提供了1－(2,6－二氟苯基)－N－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基)－1H－苯並咪唑－2－基]－1H－吡唑－4－基]－脲的酸加成鹽，其係由選自下列之酸所形成的鹽：乙酸、己二酸、褐藻酸、抗壞血酸(例如，L－抗壞血酸)、天冬胺酸(例如，L－天冬胺酸)、苯磺酸、苯甲酸、樟腦二酸(例如，(＋)－樟腦二酸)、癸酸、辛酸、碳酸、檸檬酸、環己基磺酸、十二碳烷酸、十二烷基硫酸、乙烷－1,2－二磺酸、乙烷磺酸、反丁烯二酸、半乳糖酸、龍膽酸、葡萄庚糖酸、D－葡萄糖酸、葡萄糖醛酸(例如，D－葡萄糖醛酸)、穀胺酸(例如，L－穀胺酸)、α－酮基戊二酸、乙醇酸、馬尿酸、氫氯酸、2－羥基乙烷磺酸、異丁酸、L－乳酸(例如，(＋)－L－乳酸及(±)－DL－乳酸)、乳糖酸、月桂基磺酸、順丁烯二酸、蘋果酸、(－)－L－蘋果酸、丙二酸、甲烷磺酸、黏液酸、萘磺酸(例如，萘－2－磺酸)、萘－1,5－二磺酸、菸鹼酸、油酸、乳清酸、草酸、軟脂酸、雙羥萘酸、磷酸、丙酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸(例如，(＋)－L－酒石酸)、硫氰酸、甲苯磺酸(例如，對甲苯磺酸)、戊酸以及羥基－2－萘酸。
在一體系中，該酸加成鹽係由選自下列的酸所形成的：己二酸、褐藻酸、抗壞血酸(例如，L－抗壞血酸)、天冬胺酸(例如，L－天冬胺酸)、苯甲酸、樟腦二酸(例如，(＋)－樟腦二酸)、癸酸、辛酸、碳酸、環己基磺酸、十二碳烷酸、十二烷基硫酸、乙烷－1,2－二磺酸、半乳糖酸、龍膽酸、葡萄庚糖酸、D－葡萄糖酸、穀胺酸(例如，L－穀胺酸)、α－酮基戊二酸、乙醇酸、馬尿酸、異丁酸、月桂基磺酸、黏液酸、素－1,5－二磺酸、菸鹼酸、油酸、乳清酸、草酸、軟脂酸、雙羥萘酸、癸二酸、硬脂酸、酒石酸(例如，(＋)－L－酒石酸)、硫氰酸及羥基－2－萘酸。
在另一體系中，該酸加成鹽係由選自下列的酸所形成的：乙酸、己二酸、抗壞血酸、天冬胺酸、檸檬酸、DL－乳酸、反丁烯二酸、葡萄糖酸、葡萄糖醛酸、馬尿酸、氫氯酸、榖胺酸、DL－蘋果酸、對甲苯磺酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸以及酒石酸。
在更進一步的體系中，該酸加成鹽係由選自下列的酸所形成的：己二酸、抗壞血酸、天冬胺酸、葡萄糖酸、馬尿酸、穀胺酸、癸二酸、硬脂酸以及酒石酸。
在另一特定的體系中，該化合物係由氫氯酸所形成的酸加成鹽。
較佳的鹽類係具有下列溶解度的鹽類：在某一既定液體載體(例如，水)的溶解度大於25 mg/ml(液體載體，例如，水)，更通常為大於50 mg/ml，且較佳者係大於100 mg/ml。如是之鹽類特別有利於以液體形式來投藥，例如，藉由注射或輸注。
在本發明之另一態樣中，提供了一種組成物(例如，藥學組成物)，其包含了含有濃度大於25 mg/ml(通常大於50 mg/ml且較佳為大於100 mg/ml)之本文所述之鹽類的水溶液。
本發明之溶解度大於25 mg/ml的鹽類包括：D－葡萄糖醛酸鹽、甲烷磺酸鹽、乙烷磺酸以及DL－乳酸鹽，後三者的溶解度超過100 mg/ml。
因此，在一特定的體系中，提供了1－(2,6－二氟苯基)－N－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的甲烷磺酸鹽。
在另一特定的體系中，提供了1－(2,6－二氟苯基)－N－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的乙烷磺酸鹽。
在更進一步的特定體系中，提供了1－(2,6－二氟苯基)－N－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的DL－乳酸鹽。在一體系中，該乳酸鹽係L－乳酸鹽。
式(I)之子群(C)化合物(亦即，酸加成鹽)的自由鹼或母化合物具有下式：
化合物(IA)的鹽類可為非晶性的或晶性的。
在一體系中，該鹽係非晶形的。
在另一體系中，該化合物係晶形的。
該化合物可未經溶劑化的(例如，無水的)或經溶劑化的。
在一體系中，該鹽類係未經溶劑化的。
在另一體系中，該鹽類係溶劑化的，例如，水合的。
當該化合物係水合的場合，彼等可含有，例如，至多3個結晶水分子，更通常為至多2個水分子，例如，1個水分子或2個水分子。
本發明之鹽類具有優於1－(2,6－二氟苯基)－N－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲之自由鹼形式的優點。
例如，該鹽類具有較大的水中溶解度，因此，較適用於製備用於注射或輸注(例如，經靜脈輸注)的非經腸調配物。本發明之鹽類亦具有一或多個選自下列的優點：．改善的藥物動力學；．安定性較佳，例如，儲存期間改善；．鹼性較低，而使得彼等適用於靜脈內用途；．製造上的優點；．改善的新陳代謝性質；以及．病患之間的臨床差異較小。
該鹽類可藉由本案前述有關式(I)之子群(A)及(B)化合物的鹽類說明之段落中所列出的方法，製備而得。
式(I)之子群(C)化合物通常係藥學上可接受的鹽類。然而，非藥學上可接受的鹽類亦可以中間物的形式被製備出來，然後，予以轉化為藥學上可接受的鹽類。可用於本發明化合物之純化或分離的如是非藥學上可接受的鹽類形式，亦構成本發明之一部分。
式(I)之子群(C)化合物可以多種不同的互變異構形式存在，且提到本發明之化合物時，亦包括所有如是的形式。為了避免疑念，當化合物可以多種幾何異構或互變異構形式中之一種形式存在且僅描述或顯示出一種形式時，即使如此，所有的其他形式皆包括在本案中。
例如，在本發明之化合物中，該苯並咪唑基團可採前文所列之二互變異構形式A”及B”中之任一者的形式。
吡唑環亦可呈現互變異構現象且可以下列二種互變異構形式C”’及D”’存在。
本發明之化合物包括帶有一或多個同位素取代的化合物，且提到某一特定元素，其範圍應包括該元素之所有同位素。例如，提到氫時，其範圍應包括1 H、2 H(D)及3 H(T)。同樣地，提到碳及氧時，彼等之範圍應分別包括1 2 C、1 3 C與1 4 C以及1 6 O與1 8 O。
彼等同位素可為具放射性者或不具放射性者。在本發明之體系中，該化合物含有不具放射性的同位素。對於治療用途而言，如是之化合物係較佳者。然而，在另一體系中，該化合物可含有一或多個放射性同位素。含有如是放射性同位素的化合物可用於診斷。
本發明還包含了化合物的任何同質異形、化合物之溶劑化物(例如，水合物)、還有錯合物(例如，包涵錯合物或是與諸如環糊精之化合物形成的晶籠化合物、或是與金屬所形成的錯合物)、以及化合物的前藥。「前藥」係指，例如，在活體內會轉化為本發明之具生物活性化合物的任何化合物。
生物活性
本發明之化合物具有依賴細胞週期素之激酶抑制或調節活性以及肝糖合成酶激酶－3(GSK3)抑制或調節活性、及/或奧若拉激酶抑制或調節活性，且可想見彼等化合物可用於預防或治療由彼等激酶所介導的疾病狀態或病況。
因此，例如，可想見本發明之化合物可用於減輕或降低癌症的發生。
詳而言之，式(I)及其子群的化合物係依賴細胞週期素之激酶的抑制劑。例如，本發明之化合物具有對抗CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK5、CDK6及CDK7激酶(尤指選自CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK5以及CDK6之依賴細胞週期素的激酶)的活性。
較佳的化合物乃抑制一或多種選自下列之CDK激酶的化合物：CDK1、CDK2、CDK4及CDK5，例如，CDK1及/或CDK2)。
此外，受到注目的是CDK4、CDK8及/或CDK9。
1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的乳酸鹽或檸檬酸鹽類具有對抗CDK2、CDK4、CDK5、CDK6及CDK9激酶(尤指CDK2)的活性。
本發明之化合物亦具有對抗肝糖合成酶激酶－3(GSK－3)的活性。
本發明之化合物亦具有對抗奧若拉激酶的活性。較佳的本發明化合物係IC5 0 值小於0.1 μ M者。
尤其是，1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的乳酸鹽或檸檬酸鹽類乃奧若拉激酶的抑制劑且，例如，可抑制奧若拉A及/或奧若拉B。
有許多本發明化合物對於奧若拉A激酶呈現出選擇性(相較於CDK1及CDK2)，且如是化合物代表本發明之較佳體系。例如，有許多本發明化合物對抗奧若拉A的IC5 0 值係在對抗CDK1及CDK2之IC5 0 值的十分之一至百分之一之間。因此，1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的乳酸鹽或檸檬酸鹽類對於奧若拉激酶(相較於CDK1及CDK2)呈現出選擇性。例如，彼等對抗奧若拉A的IC5 0 值係在對抗CDK1及CDK2之IC5 0 值的1/10至1/100之間。
基於本發明化合物之調節或抑制CDK及奧若拉激酶及肝糖合成酶激酶的活性，彼等被期待可用於提供遏止或恢復控制異常分裂細胞內的細胞週期。因此，彼等化合物預期將被證實可用於治療或預防增生性疾病(諸如，癌症)。亦可想見本發明之化合物可用於治療諸如下列之病況：病毒感染、第II型或非胰島素依賴性糖尿病、自動免疫疾病、頭部創傷、中風、癲癇、神經變性疾病(諸如，阿耳茲海默氏症)、運動神經元疾病、進行性核上的麻痺、皮質基底的變性以及畢克氏病(Pick’s disease)，例如，自動免疫疾病以及神經變性疾病。
想見可使用本發明之化合物的疾病狀態及病況的一子群係包括：病毒感染、自動免疫疾病以及神經變性疾病。
CDKs參與了細胞週期、細胞凋亡、轉錄、分化及CNS功能。因此，CDK抑制劑可用於治療涉及增生、細胞凋亡或細胞分化的疾病，諸如，癌症。尤其，RB+ve腫瘤對於CDK抑制劑特別敏感。RB-ve腫瘤亦對於CDK抑制劑敏感。
可被抑制的癌症例子包括(但不侷限於)：癌瘤，例如，膀胱、乳房、結腸(例如，結腸直腸癌瘤，諸如，結腸腺癌及結長腺瘤)、腎、表皮、肝、肺(例如，腺癌、小細胞肺癌以及非小細胞肺癌瘤)、食道、膽囊、卵巢、胰臟(例如，外分泌胰臟癌瘤)、胃、子宮頸、甲狀腺、前列腺或皮膚的癌瘤(例如，鱗狀細胞癌瘤)；淋巴系的造血腫瘤，例如，白血病、急性淋巴細胞係白血病、B-細胞淋巴瘤、T-細胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma)、非霍奇金氏淋巴瘤、有毛細胞淋巴瘤、或勃克特氏淋巴瘤(Burkett’s lymphoma)；骨髓系的造血腫瘤，例如，急性及慢性的骨髓性白血病、骨髓發育不良症候群、或是前骨髓細胞性白血病；甲狀腺濾泡癌；間葉來源的腫瘤，例如，纖維肉瘤或腹部肉瘤(rabdomyosarcoma)；中樞或末梢神經系統的腫瘤，例如，黑細胞瘤、神經母細胞瘤、神經膠瘤或神經鞘瘤；黑色瘤；生殖細胞瘤；畸胎瘤；骨肉瘤；著色性乾皮症；角質棘皮瘤；甲狀腺濾泡癌；或卡波西氏肉瘤。
彼等癌症可為對於一或多種選自下列之依賴細胞週期素之激酶的抑制敏感者：CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK5以及CDK6，例如，一或多種選自CDK1、CDK2、CDK4及CDK5的CDK激酶，例如，CDK1及/或CDK2。
藉助下文之實施例79及80所示的細胞生長分析或是藉由標題為「診斷方法」之段落所陳述的方法，可測定出一特定癌症是否為對於藉由依賴細胞週期素之激酶或奧若拉激酶之抑制敏感的癌症。
CDKs亦已知參與了細胞凋亡、增生、分化及轉錄，因此，CDK抑制劑亦可用於治療下列非癌症的疾病：病毒感染，例如，疱疹病毒、水痘病毒、非洲淋巴細胞瘤病毒、新德比斯病毒(Sindbis virus)、腺病毒、HIV、HPV、HCV以及HCMV；預防已感染HIV的個體內的AIDS進展；慢性炎性疾病，例如，全身性紅斑性狼瘡、自動免疫所介導的絲球體性腎炎、風濕性關節炎、牛皮癬、炎性腸病、以及自動免疫性糖尿病；心血管疾病，例如，心臟肥大、再狹窄、動脈硬化；神經變性病症，例如，阿耳茲海默氏症、與AIDS有關的痴呆、巴金生氏症、肌萎縮性側索硬化、色素性視網膜炎；脊肌萎縮以及小腦變性；絲球體性腎炎；骨髓發育不良症候群；與心肌梗塞有關聯的絕血、中風以及再灌流損傷、心律不整、動脈硬化、毒素所引發或與酒精有關的肝病、血液疾病(例如，慢性貧血及再生不能性貧血)；肌與骨系統的變性疾病，例如，骨質疏鬆症及關節炎、對於阿斯匹靈敏感的鼻竇炎、囊腫纖維變性、多發性硬化、腎疾病以及癌症疼痛。
有某些依賴細胞週期素的激酶抑制劑已被發現到可與其他抗癌劑合併使用。例如，依賴細胞週期素的激酶抑制劑福拉凡皮朵(flavopiridol)已和其他抗癌劑一起用於合併療法。
因此，本發明之藥學組成物的用途或使用方法係在於治療涉及異常細胞生長的疾病或病況，在一體系中，該涉及異常細胞生長的疾病或病況係癌症。
癌症之一族群包括：人類乳癌(例如，原發性乳房腫瘤、淋巴節呈陰性的乳癌、乳房的侵入性導管腺瘤、非子宮內膜樣的乳癌)；以及套膜細胞(mantle cell)淋巴瘤。此外，其他的癌症有：結腸直腸及子宮內膜癌。
癌症之另一子集包括：乳癌、卵巢癌、結腸癌、前列腺癌、食道癌、鱗狀細胞癌以及非小細胞肺癌瘤。
在具有對抗奧若拉激酶之活性的化合物情況下，想見本發明之奧若拉激酶抑制化合物可能對其有效之癌症的特定例子包括：人類乳房癌(例如，原發性乳房腫瘤、淋巴結呈陰性的乳癌、乳房的侵入性導管腺瘤、非子宮模樣的乳癌)；卵巢癌(例如，原發性卵巢腫瘤)；人類膀胱癌；結腸直腸癌(例如，原發性結腸直腸癌)；胃腫瘤；腎癌；子宮頸癌；神經母細胞瘤；黑色瘤；淋巴瘤；前列腺瘤；白血病；非子宮內膜樣的子宮內膜癌瘤；神經膠瘤；非霍奇金氏淋巴瘤。
對於奧若拉抑制劑特別順從的癌症包括：乳癌、膀胱癌、結腸直腸癌、前列腺癌、卵巢癌、非霍奇金氏淋巴瘤、神經膠瘤以及非子宮內膜樣的子宮內膜癌瘤。
對於奧若拉抑制劑特別順從之一特定的癌症子集係由乳癌、卵巢癌、肝癌、胃癌及前列腺癌所組成的。
對於奧若拉抑制劑特別順從之另一癌症子集係血液癌症，尤指白血病。因此，在進一步的體系中，式(I)化合物係用於治療血液癌症，尤指白血病。特定的白血病係選自：急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、B－細胞淋巴瘤(套膜細胞)、以及急性神經母細胞白血病(ALL)(亦稱作為急性淋巴細胞性白血病)。在一體系中，該白血病係選自：再發性或難醫的急性骨髓性白血病、骨髓發育不良症候群、以及慢性骨髓性白血病。
癌症的一族群包括：人類乳癌(例如，原發性乳房腫瘤、淋巴結呈陰性的乳癌、乳房的侵入性導管腺癌、非子宮內膜樣的乳癌)；以及套膜細胞淋巴瘤。此外，其他癌症為結腸直腸及子宮內膜癌。
癌症之另一子集包括：淋巴系的造血腫瘤，例如，白血病、慢性淋巴細胞性白血病、套膜細胞淋巴瘤以及B－細胞淋巴瘤(諸如，瀰漫性大B細胞淋巴瘤)。
一特定的癌症係慢性淋巴細胞性白血病。
另一特定的癌症係套膜細胞淋巴瘤。
另一特定的癌症係擴散性大B細胞淋巴瘤。
進一步可想見本發明的化合物，尤指具有奧若拉激酶抑制活性的化合物，特別有用於治療或預防與高量奧若拉激酶之出現有關或以其為特徵之類型的癌症，例如，在本案之導論段落中就此方面提到的癌症。
本發明之化合物作為依賴細胞週期素之激酶、奧若拉激酶以及肝糖合成酶激酶－3之抑制劑的活性，可藉由採用下文之實施例中所提到的分析法來測量，且一既定化合物所呈現出的活性水平可以IC5 0 值來定義。較佳之本發明化合物係IC5 0 值小於1 μ M者，更佳者細小於0.1 μ M。
本發明化合物之優點
本發明之化合物(例如，實施例24、62、63及64的化合物)較先前技藝的化合物具有許多優點。例如，本發明之化合物(表A)尤其對於奧若拉A及B激酶，具有增加的選擇性及對抗效力。
活體外的激酶活性係根據實施例75及76所記載的實驗計畫來測定的。
本發明之化合物由於對於P450酶具有不同的感受性，因此較先前技藝的化合物有利(參見下文的表B及實施例81)。
此外，本發明之化合物因為在藥物代謝及藥物動力學性質上呈現出改良，因此亦較先前技藝的化合物有利。尤其是，本發明之化合物具有低的血蛋白質結合。在所有受試物種中，實施例24、62、63及64之化合物與血蛋白質的結合係相對中等的，在大鼠血漿中的61%至在小鼠血漿中的82%之間變動。這能夠產生一優點，亦即在全身循環系統中有更多的藥物能夠到適當的作用部位以展現其治療效果。低的PPB能夠導致極優良的腫瘤穿透性質。較大的腫瘤穿透性會產生較長的腫瘤半衰期且可能對於功效有所貢獻，而使得投藥劑量降低且因而在臨床上，可觀察到毒性的明顯降低。
此外，本發明之化合物所呈現出之劑量需求減少。本發明之化合物(例如，實施例24、62、63及64)亦在對抗較廣範圍之固體腫瘤細胞系的增生及群落(clonogenic)分析中，呈現出改良的細胞活性，因而顯示出改良的抗癌活性(表C)。數據說明相較於正常細胞，化合物治療對於腫瘤細胞有不同的影響。在關卡遭到危害的腫瘤細胞中，由於透過奧若拉激酶抑制所造成之有絲分裂的崩潰、細胞漿移動的抑制以及紡錘絲關卡的分歧，化合物治療會導致多核化。此一多核化被認為會導致細胞死亡。反之，在經化合物治療之正常關卡充足的細胞中，有較少的細胞會變成多核化或是在化合物治療24小時後死亡，取而代之的是較大比例的細胞會進行可逆的G2/M遏止，然後一旦化合物去除後，會再進入細胞週期。此等效果上的差異能夠反應出下列事實：若是精確的染色體分離未能發生，正常細胞會有適當的關卡來使細胞週期暫停，諸如，有絲分裂後依賴p53的關卡。在腫瘤細胞中，此等關卡不存在，而讓有絲分裂繼續進行且讓多核化發生。
此外，本發明之化合物的鹽形式呈現出改良的水溶液中溶解度以及較佳的物理化學性質，例如，較低的logD。
式(I)化合物的製備方法
在此段落中，如同本案之所有其他段落，除非有特別說明，提到式(I)化合物時，亦應包括本文所定義之式(II)、式(III)、式(XXX)以及彼等之所有子群以及實施例。
式(I)化合物可根據習於此藝之士已熟知的合成方法，製備而得。
例如，其中A示一鍵結(亦即其中A及羰基形成一醯胺鍵)的式(I)化合物可藉令式(X)所示之化合物 與羧酸R1 －E－CO2 H或其具反應性的衍生物，在標準的醯胺形成條件下反應，而製備得。
該羧酸與該胺(X)之間的偶合反應可在常用於形成肽鍵聯之種類的試劑存在下，來進行。如是之試劑包括：1,3－二環己基碳化二亞胺(DCC)(Sheehanet al,J.Amer.Chem.Soc. 1955,77,1067)、1－乙基－3－(3’－二甲胺基丙基)－碳化二亞胺(EDC)(Sheehanet al,J.Org.Chem.,1961,26,2525) 、以脲鹽(uronium)為主的偶合劑，諸如六氟磷O －(7－氮雜苯並三唑－1－肌)－N,N,N’,N’ －四甲基基脲鹽(HATU)(L.A.Carpino,J.Amre.Chem.Soc., 1993,115,4397)以及以鏻(phosphonium)為主的偶合劑，諸如六氟磷酸1－苯並三唑基氧基參(吡咯啶基)鏻(PyBOP)(Castroet al,Tetrahedron Letters ,1990,31,205)。以碳化二亞胺為主的偶合劑與1－羥基氮雜苯並三唑(HOAt)或1－羥基苯並三唑(HOBt)併用系有利的(Koniget al,Chem.Ber., 103,708,2024－2034)。較佳的偶合劑包括與HOAt或HOBt併合的EDC及DCC。
該偶合反應通常係在非水性、非質子性的溶劑(諸如，乙腈、二噁烷、二甲亞碸、二氯甲烷、二甲基甲醯胺或N－吡咯啶酮)中或於水性溶劑(任意連同一或多個互溶的輔溶劑)中進行。該反應可在室溫下進行或是，當反應物反應性較低時(例如，在缺乏電子的苯胺類帶有吸電子基團(諸如，磺醯胺基)的情況下)，則在適當提高的溫度下進行。該反應係在非干擾性鹼(例如，三級胺，諸如，三乙胺或N,N－二異丙基乙基胺)存在下進行。
取而代之地，可使用羧酸的反應性衍生物，例如，酸酐或醯基氯。與反應性衍生物(諸如，酸酐)所進行的反應通常係藉由在室溫下、鹼(諸如，吡啶)存在下，將該胺及酸酐攪拌來完成的。
式(X)的胺類可藉由在標準條件下，將對應之式(XI)硝基化合物還原而製備得。該還原反應可藉由，例如，在觸媒(諸如，載於碳上的鈀)存在下、於極性溶劑中(諸如，乙醇或二甲基甲醯胺)、室溫下所進行的催化性氫化反應來執行。
式(XI)的硝基化合物可藉令式(XII)的硝基吡唑羧酸與4－嗎福啉－4－基甲基－苯－1,2－二胺反應(形成其中M為D1的化合物)或與4,5－二甲氧基－苯－1,2－二胺反應(形成其中M示D2的化合物)，而製備得：
該二胺與該羧酸(XII)之間的反應可在試劑(諸如，如前文所述之與HOBt併合之DCC或EDC)存在下、於前述醯胺偶合條件下進行，而產生中間物鄰胺基苯基醯胺(未顯示出)，然後，將該中間物環化而形成苯並咪唑環。最後的環化步驟通常係藉由加熱回流，在乙酸存在下進行的。
顯示式(X)化合物(其中M示基團D1)之製備方法的例示反應流程陳述於流程1。
流程1各步驟的典型條件可見於下文之實施例部分。
其中M示D2基團的化合物可依照與流程1類似的方式，但是採用4,5－二甲氧基－苯－1,2－二胺取代二胺(XVI)，而製備得。
在其中A示一鍵結之式(I)化合物的另一替代合成法中，該二胺類，4－嗎福啉－4－基甲基－苯－1,2－二胺以及4,5－二甲氧基－苯－1,2－二胺可與其中A示一鍵結的式(XVII)羧酸類反應，而生成式(I)化合物。
該二胺與羧酸(XVII)的反應可在與前述用於製備硝基化合物(XI)類似的條件下進行。式(XVII)的羧酸類可藉由流程2所示的反應順序製備而得。
如流程2所示者，經取代或未經取代的4－硝基－3－吡唑羧酸(XVIII)可藉由先後與亞磺醯氯中間物及乙醇反應而酯化形成乙酯(XIX)。另外，該酯化反應可藉令該醇與羧酸在酸性觸媒(其例之一為亞磺醯氯)存在下反應來進行。該反應通常係在室溫下，採用酯化醇(諸如，乙醇)作為溶劑來進行。然後，根據標準的方法，採用載於碳上的鈀，將該硝基還原，而得到胺(XX)。該胺(XX)在與前述相同或類似的適當醯胺形成條件下，與適當的羧酸R1 －E－CO2 H反應，而得到醯胺(XXI)。然後，採用鹼金屬羥氧化物(諸如，氫氧化鈉)、於極性之水可互溶的溶劑(諸如，甲醇)且通常在室溫下，將醯胺(XXI)的酯基水解。
採用脲類合成所用的標準方法，來製備其中A示NR2 的式(I)化合物。例如，如是之化合物可藉令式(X)之胺基吡唑化合物與適當經取代之式R1 －E－N＝C－O所示異氰酸酯，在極性溶劑(諸如，DMF)下反應而製備得。該反應宜在室溫下進行。
另外，式(I)之脲類可藉令式(X)之胺與式R1 －E－NH2 之胺，在羰基二咪唑(CDI)存在下反應而製備得。該反應通常係在極性溶劑(諸如，THF)中，於加熱(例如，使用微波加熱器)到高至約150℃的溫度下，來進行的。
除了使用CDI之外，該二胺的偶合反應形成脲的反應可採用光氣(雙(二甲基)碳酸酯)，在非干擾性鹼(諸如，三乙胺)存在下、於一溶劑中(諸如，二氯甲烷)、室溫或室溫以下的溫度下來執行。
可使用光氣來取代三光氣，以作為CDI的替代物。
在前述的許多反應中，可能需要對一或多個基團進行保護，以預防在分子的非所要位置上發生反應。保護基的例子以及對官能基進行保護與去保護的方法可見於Protective Groups in Organic Synthesis (T.Green and P.Wuts；3 rd Edition；John Wiley and Sons,1999)。羥基可被保護成，例如，醚(－OR)或酯(－OC(＝O)R)，諸如，第三丁醚；苄基、二苯甲基或三苯甲基醚；三甲基矽烷基或第三丁基二甲基矽烷基醚；或醯基酯(－OC(＝O)CH3 、－OAc)。醛或酮基可分別被保護成，例如，縮醛(R－CH(OR)2 )或縮酮，其中該羰基(>C＝O)可藉由與，例如，一級醇反應，而被轉化為二醚(>C(OR)2 )。藉由在酸存在下、採用大量過量的水所進行的水解反應，可輕易地將該醛或酮基再生。胺基可被保護成，例如，醯胺(－NRCO－R)或胺甲酸酯(－NRCO－OR)，諸如：甲基醯胺(－NH－CO－CH3 )；苄氧基醯胺(－NHCO－OCH2 C6 H5 、－NH－Cbz)；第三丁氧基醯胺(－NHCO－OC(CH3 )2 、－NH－Boc)；2－聯苯基－2－丙氧基醯胺(－NHCO－OC(CH3 )2 C6 H5 ，－NH－Bpoc)、9－茀基甲氧基醯胺(－NH－Fmoc)、6－硝基藜蘆醯基氧基醯胺(－NH－Nvoc)、2－三甲基矽烷基乙氧基醯胺(－NH－Teoc)、2,2,2－三氯乙氧基醯胺(－NH－Troc)、烯丙氧基醯胺(－NH－Alloc)、或是2－(苯磺醯基)乙氧基醯胺(－NH－Psec)。胺類(諸如，環狀胺類及雜環的N－H基團)的其他保護基包括：甲苯磺醯基及甲烷磺醯基以及苄醯基，諸如，對甲氧基苄基(PMB)。羧酸基可被保護成酯，例如，保護成C1 － 7 烷基酯(例如，甲酯、第三丁酯)；C1 － 7 鹵烷基酯(例如，C1 － 7 三鹵基烷基酯)；三C1 － 7 烷基矽烷基C1 － 7 烷基酯)；或是C5 － 2 0 芳基－C1 － 7 烷基酯(例如，苄酯、硝基苄酯)；或是醯胺，例如，甲醯胺。硫醇基可被保護成，例如，硫醚(－SR)，諸如：苄基硫醚；或是乙醯胺基甲基醚(－S－CH2 NHC(＝O)CH3 )。
構成式(I)之子群(C)的酸加成鹽類，可在母化合物1－(2,6－二氟苯基)－N－[3－(5－嗎襠啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的合成過程中、或是藉由母化合物之自由鹼的轉化、或是藉由由母化合物之一鹽至母化合物轉化為另一所企求之鹽的轉化，而形成。母化合物1－(2,6－二氟苯基)－N－[3－(5－嗎襠啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲(式(IA)化合物)可藉由下文之流程3所示的方法製備而得。
如流程3所示者，3,4－二硝基羧酸(XIII)(市面上可購得的化合物)係轉化為N－二硝基苯醯基嗎福啉(XXI)。醯胺的形成可藉由採用標準方法將該酸化合物(XIII)轉化為一活性衍生物，諸如，醯基氯，而完成。例如，該醯基氯可藉由與過量的亞磺醯氯，在亞磺醯氯的回流溫度下－起加熱，然後，藉由與甲苯共沸蒸餾去除過量的亞磺醯氯，而形成。
N－二硝基苯醯基嗎福啉(XXI)可藉由適當還原劑(諸如，硼氫化鈉與三氟化硼的組合)的處理，而還原為二硝基苄基嗎襠啉(XXIII)。該還原反應通常係於無水溶劑(諸如，四氫呋喃)中、低溫(例如，0－5℃)下進行的。然後，該二硝基苄基嗎福啉(XXIII)可在標準的條件下，例如，藉由於觸媒(諸如，載於碳上的鈀)存在下、在極性溶劑中(諸如，乙醇)、室溫下所進行的催化性氫化反應，還原為二胺基苄基嗎福啉(XXIV)。
然後，該二胺基苄基嗎福啉(XXIV)可與市售的4－硝基吡唑－3－羧酸反應，而生成該硝基吡唑基苯並咪唑(XXV)。該硝基吡唑基－苯並咪唑(XXV)的形成可藉由下列方式來完成：首先，採用肽偶合劑，諸如，能夠促使與芳族胺基形成醯胺鍵的四氟硼酸O－(苯並三唑－1－基)－N,N,N’,N’－四甲基脲鹽(TBTU)，在羧酸與該二胺基苄基化合物(XXIV)之間形成一醯胺鍵，然後，藉由在過量的冰醋酸中、於例如大約65℃的溫度下進行加熱，而將中間物醯胺(未顯示出)環化為硝基吡唑基－苯並咪唑(XXV)。
該硝基吡唑基－苯並咪唑(XXV)可在標準的條件下，還原為對應的胺(XXVI)。該還原反應可藉由，例如，於觸媒(諸如，載於碳上的鈀)存在下、在極性溶劑(諸如，乙醇或二甲基甲醯胺)中、室溫下所進行的催化氫化反應，來執行。
採用供合成脲的標準方法，例如，藉令胺(XXVI)與2,6－二氟苯基－異氰酸酯，在極性溶劑中(諸如，THF)、於室溫或室溫以下的溫度(例如，0－5℃的溫度)進行反應，可依次將胺(XXVI)轉化為脲(IA)。
脲(IA)的自由鹼形式可用來製備本發明的酸加成鹽類。
藉由習用的方法，諸如，Pharmaceutical Salts：Properties,Selection,and Use, P.Heinrich Stahl(Editor),Camille G.Wermuth(Editor),ISBN：3－90639－026－8,Hardcover,388 pages,August 2002所記載的方法，可由自由鹼製備得本發明之鹽類。例如，彼等鹽類可藉令自由鹼與適當的酸於水或有機溶劑或該二者之混合物中反應而製備得，通常係使用非水性的介質，諸如，乙醚、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、異丙醇或乙腈。
於另一態樣中，本發明係提供一製備1－(2,6－二氟苯基)－N－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲之酸加成鹽的方法，該方法包含：形成1－(2,6－二氟苯基)－N－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲自由鹼於溶劑(通常為有機溶劑)或溶劑混合物中的溶液，以及用酸處理該溶液，而形成酸加成鹽的沉澱。
該酸通常係以在溶劑內的溶液形式添加的，而該溶劑係與其中溶有自由鹼的溶劑互溶的。
自由鹼最初溶解於其中的溶劑可為酸加成鹽無法溶解於其中的溶劑。另外，自由鹼最初溶解於其中的溶劑可為酸加成鹽可至少部分溶解於其中者；可為酸加成鹽於其中之溶解度較低的不同溶劑而在後來添加該溶劑時，該鹽會自溶液沉澱析出者。
例如，在製備本發明之鹽類的一方法中，自由鹼係溶解於第一個溶劑(其可為乙酸乙酯或乙酸乙酯與醇(諸如，甲醇)的混合物)，然後，添加酸(諸如，氫氯酸)於第二個溶劑(其可為醚(諸如，乙醚或二氧雜環己烯)所形成的溶液(例如，濃縮或飽和的溶液)，而產生酸加成鹽的沉澱物，接著，藉由過濾法，收集該沉澱物。
製備1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的方法在本案之申請人的申請案WO 2005/002552的實施例以及前文之流程1及3中，揭示了[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－醯胺可藉由包括下列的一系列步驟製備得：(i)令4－嗎福啉－4－基甲基－苯－1,2－二胺與4－硝基－1H－吡唑－3－羧酸，在1－乙基－3－(3’－二甲胺基丙基)－碳化二亞胺(EDC)及1－羥基苯並三唑(HOBt)存在下、於N,N－二甲基甲醯胺(DMF)中，進行反應，而得到5－嗎福啉－4－基甲基－2－(4－硝基－1H－吡唑－3－基)－1H－苯並咪唑；以及(ii)於氫氣氛下，藉助載於碳上之鈀的處理，將硝基還原；或是(i)令4－胺基－1H－吡唑－3－羧酸與適當的羧酸，在1－乙基－3－(3’－二甲胺基丙基)－碳化二亞胺(EDC)及1－羥基苯並三唑(HOBt)存在下、N,N－二甲基甲醯胺(DMF)中進行反應，或是適當的醯基氯，在三乙胺存在下，進行反應，而生成4－醯胺－1H－吡唑羧酸；以及(ii)令4－嗎襠啉－4－基甲基－苯－1,2－二胺與適當的4－醯胺－1H－吡唑羧酸，於1－乙基－3－(3’－二甲胺基丙基)－碳化二亞胺(EDC)及1－羥基苯並三唑(HOBt)存在下、在二甲基甲醯胺(DMF)中，進行反應，而得到[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－醯胺。
經發現，在胺基吡唑的胺基已經適當保護的取代的情況下，可令該胺基吡唑與二胺反應，以取代硝基吡唑化合物與二胺的反應，或是醯胺－吡唑與二胺的反應。然後，可將該反應的產物環化形成苯並咪唑。此外，經發現，胺保護基的去除以及環化為苯並咪唑的反應可在一個步驟中完成。
因此，在另一態樣中，本發明係提供製備式(XXVII)或(XXVIII)或彼等之鹽類的方法： 該方法包含：(i)令式(XXIX)化合物
其中PG為胺保護基團，與(ii)式(XXXI)化合物
在有機溶劑中、於偶合劑(諸如，EDC及HOBt)存在下反應。
該胺保護基PG可為用於前述反應之條件下的任何用於保護胺基的保護基，參見，例如，前文所引述的Greenet al. 。因此，例如，氮可保護成醯胺(NCO－R)或是胺甲酸酯(NCO－OR)，諸如；甲基醯胺(NCO－CH3 )；苄氧基醯胺(NCO－OCH2 C6 H5 ，－NH－Cbz)；第三丁氧基醯胺(－NCO－OC(CH3 )3 ，N－Boc)；2－聯苯基－2－丙氧基醯胺(NCO－OC(CH3 )2 C6 H4 C6 H5 ，N－Bpoc)；9－茀基甲氧基醯胺(N－Fmoc)；6－硝基藜蘆基氧基醯胺(N－Nvoc)；2－三甲基矽烷基乙氧基醯胺(N－Teoc)；2,2,2－三氯基乙氧基醯胺(N－Troc)；烯丙氧基醯胺(N－Alloc)；或是2－(苯磺醯基)乙氧基醯胺(－N－Psec)。胺類的其他保護基包括苄基，諸如，對甲氧基苄基(PMB)基團。較佳的胺保護基為胺甲酸酯(NCO－OR)，例如，苄氧基醯胺(NCO－OCH2 C6 H5 ，－NH－Cbz)，或是第三丁氧基醯胺(－NCO－OC(CH3 )3 ，N－Boc)；或是烯丙氧基醯胺(N－Alloc)。在一體系中，該保護基PG示保護基APG，其係在酸性條件下可被去除的胺保護基團。如是之基團包括脲類。一特別較佳的脲保護基係可在酸性條件下被去除的第三丁氧基羰基。
在一體系中，接著係自式(XXVII)或(XXVIII)化合物去除該保護基PG並且用一保護基，APG，予以取代，而形成式(XXVIIa)或(XXVIIIa)化合物。
一特別較佳的的式(XXIX)化合物係下文所示的式(XXXII)化合物：
本發明還提供了式(XXXII)所示之新穎化學中間物本身。
本發明亦提供了式(XXVII)或(XXVIII)所示的新穎化學中間物本身，例如，下文之式(XXVIIa)或(XXVIIIa)所示的新穎化學中間物。因此，本發明提供了4－胺基－1H－吡唑－3－羧酸(2－胺基－4－嗎福啉－4－基甲基－苯基)－醯胺或4－胺基－1H－吡唑－3－羧酸(2－胺基－5－嗎福啉－4－基甲基苯基)－醯胺以及彼等之經保護的形式，該經保護的形式係為新穎的化學中間物。式(XXVII)所示一之特別較佳的新穎化學中間物為[3－(2－胺基－4－嗎福啉－4－基甲基－苯基胺甲醯基)－1H－吡唑－4－基]－胺甲酸第三丁酯。式(XXVIII)所示之－特別較佳的新穎化學中間物為[3－[2－胺基－5－嗎福啉－4－基甲基苯基胺甲醯基]－1H－吡唑－4－基]－胺甲酸第三丁酯。
當該保護基PG為第三丁氧羰基時，該製備方法的總產率係超過85%。此外，該製備方法的優點在於其係利用相對較單純且不貴的的藥劑及溶劑，而且還有產物的純化簡單的優點。
在另一態樣中，本發明提供了製備3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基胺或其鹽類的方法，該方法包含：(i)令式(XXVIIa)或(XXVIIIa)化合物： 在溶劑中，於酸反應，非必要地予以加熱；以及(ii)將反應液中和。
該胺保護基APG係已知可用於前文所定義之與式(XXVII)或(XXVIII)有關的保護胺基基團的任何保護基，且其可在前述製備方法所採用的條件下被去除。
在步驟(i)中，與酸所進行的反應可在加熱的條件下進行，例如，加熱至80至100℃之範圍內的溫度。步驟(i)進行所用的溶劑係醇溶劑，且其可為，例如，乙醇。
在步驟(i)中，該保護基宜為可藉由酸的處理被去除者，諸如，Boc基團，所選用的酸必須適用於將中間物質子化，以將環化反應所需的羰基活化。適當的酸類包括強酸類，諸如，硫酸、甲烷磺酸或氫氯酸，且一特較佳的酸為氫氯酸。
在步驟(i)的反應完成之後(例如，由起始物(XIIIa)的消失來判斷)，可將該反應液中和。
在步驟(ii)中，係使用非干擾性鹼。在本文中，「非干擾性鹼」一詞係指不會與所產生之化合物反應的鹼，諸如，碳酸鈉。步驟(ii)通常係在室溫下進行的。
在步驟(ii)中，該反應液係中和至，例如，該反應液被中和劑飽和且pH達8.5為止。
在步驟(ii)之後，化合物可與羰基化劑(諸如，1,1’－羰基二咪唑(CDI)或是光氣的同功物)反應，然後，再與環丙胺反應。光氣同功物包括三光器及光氣。較佳的羰基化劑係1,1’－羰基二咪唑(CDI)。
另外，該脲亦可藉由下列步驟製備得：令該胺基吡唑，3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基胺，在鹼(諸如，吡啶)存在下、於溶劑中(例如，THF)，與氯甲酸苯酯反應生成環狀脲，然後與環丙胺反應；或是令該胺基吡唑與環丙基異氰酸酯反應，該環丙基異氰酸酯可藉由環丙烷羧酸疊氯化物的柯堤士重組反應(Curtius rearrangement)製得(如US 4,313,755及US 4,299,778所述者)。
因此，本發明之進一步態樣係關於供製備1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲或其鹽類的方法，該方法包含：(i)令式(XXVIIa)化合物在溶劑中，於酸反應，非必要地予以加熱；(ii)將反應液中和；(iii)令步驟(ii)的產物與羰基化劑反應；(iv)令步驟(iii)的產物與環丙胺反應。
步驟(iii)通常係於回流的情況下進行的，例如，加熱達至約100℃的溫度下進行，更通常係達至70－75℃。在步驟(ii)中，該反應可在極性溶劑(諸如，四氫呋喃)中進行。羰基化劑可為諸如下列的化合物：1,1’－羰基二咪唑(CDI)或光氣同功物(諸如，三光氣或光氣)。較佳的羰基化劑為1,1’－羰基二咪唑(CDI)。
步驟(v)通常係在加熱的情況下進行，例如，加熱至達約100℃的溫度下進行。
在步驟(v)之後，該產物可進行鹽類轉化反應或再結晶(例如，採用2－丙醇或乙醇作為溶劑)，以增加純度及生成晶體形式。
前文的步驟(iii)產生式(XXXIII)的中間化合物及/或其位向異構物(XXXIIIa)：
然後，式(XXXIII)及(XXXIIIa)中間物(彼等視需要可被單離出)與環丙胺反應，而產生式(XXX)化合物。
因此，在另一態樣中，本發明提供了製備本文所定義之式(XXX)化合物的方法，該方法包含：令式(XXXIII)或(XXXIIIa)化合物與環丙胺反應，然後，非必要地形成式(XXX)化合物的酸加成鹽。該反應通常係於極性溶劑(諸如，N－甲基吡咯啶酮)中且宜在高溫下進行，諸如，超過80℃的溫度，更通常超過90℃，例如，95－105℃。
前述方法亦可用於製備其中式(I)內的A原子團示NH基團之其他本文所定義的式(I)及其子群之化合物。
因此，在另一態樣中，本發明提供了製備其中式(I)中的A原子團示NH基團之本文所定義的式(I)化合物的方法，該方法包含：令(i)式(XXXIII)化合物及/或其位向異構物(XXXIIIa)，或是(ii)式(XXXIV)化合物及/或其位向異構物(XXXIVa)：
與式R1 －E－NH2 化合物進行反應，該反應宜在極性溶劑(諸如，N－甲基吡咯啶酮)、宜於高溫下(諸如，超過80℃的溫度下，更通常為超過90℃，例如，95℃至105℃)進行，然後，非必要地形成式(I)化合物之酸加成鹽。
本發明還提供式(XXXIII)、(XXXIIIa)、(XXXIV)及(XXXIVa)所示的新穎化學中間物。
在進一步的體系中，用於3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基胺或其鹽類之製備方法或是1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲或其鹽類之製備方法的式(XXVIIa)化合物，可藉由包含下列步驟的方法製備得：(i)令式(XXIX)之化合物，其中，PG示可用酸去除的胺保護基，APG；(ii)與式(XXXI)化合物在有機溶劑中、於偶合劑(諸如，EDC及HOBt)存在下反應。
非必要地，在此所述的方法包含將該鹽再結晶為晶體形式(例如，本文所定義的晶體形式)的另一步驟。
純化方法
本發明之化合物可藉由習於此藝之士已熟知之多種方法予以單離及純化，如是方法之例包括：色層分析技術，諸如，層柱層析法(例如，快速層析法)以及HPLC。製備型LC－MS乃用於純化小有機分子(諸如，本文所定義的化合物)之標準且有效的方法。液相層析(LC)及質譜分析(MS)的方法可加以變更，以提供較佳的粗製物分離以及改良的MS試樣偵測。製備型梯度LC方法的最佳化包括變更層柱、揮發性洗提劑以及修飾劑、以及梯度。將製備型LC－MS方法最佳化，然後，予以用於純化化合物的方法係技藝上已熟知的。如是方法已記載於Rosentreter U,Huber U.；Optimal fraction collecting in preparative LC/MS；J Comb Chem. ；2004；6(2),159－4以及Leister W,Strauss K,Wisnoski D,Zhao Z,Lindsley C.,Development of a custom high－throughput preparative liquid chromatography/mass spectrometer platform for the preparative purification and analytical analysis of compound libraries；J.Comb Chem. ；2003；5(3)；322－9。
經由製備型LC－MS來純化化合物如是系統之一係記載於下文的實驗部分，雖然習於此藝之士可瞭解到，亦可使用替代系統及方法來取代所敘述者。詳而言之，基於標準相製備型LC的方法可能用於取代在此所敘述的逆相方法。大多數的製備型LC－MS系統皆係利用逆相LC以及揮發性的酸性修飾劑，因為此一手段對於小分子的純化係非常有效的且因為洗提劑係與正離子電漿質譜分析法互容的。其他層析溶液(例如，前述分析方法中所列出的標準相LC、選擇緩衝的移動相、鹼性修飾劑等)的使用可能選擇地用於純化該化合物。
再結晶
式(I)化合物及其鹽類(尤指1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲及其鹽類)的再結晶方法，可藉由習於此藝之士已熟知的方法來進行，參見，例如，P.Heinrich Stahl(Editor),Camille G.Wermuth(Editor),ISBN：3－90636－026－8,Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties,Selection,and Use, Chapter 8,Publisher Wiley－VCH。由有機反應所得到的產物當係直接自反應混合物單離出來時，甚少為純的。若該化合物(或其鹽類)為固體時，其可藉由自適當的溶劑再結晶析出，而獲純化及/或晶化。優良的再結晶溶劑應可在高溫下，溶解適度量之待純化的物質，但是在較低的溫度下，僅能溶解少量的該物質。其在低溫下，應可輕易地溶解雜質或是完全無法溶解。最後，該溶劑應可輕易地自經純化的產物去除。這通常係指其具有相對較低的沸點且習於此藝之士可知道某一特定物質的再結晶溶劑，若該資訊係無法得知時，可藉由試驗數個溶劑而得知。為了得到良好產率的純化物質，可用最少量的熱溶劑來溶解所有的不純物質。在實施時，係使用較需要者多3－5%的溶劑，以使得該溶液呈不飽和。若不純的化合物含有不溶於溶劑的雜質，則其可藉由過濾法來移除，然後，令該溶液結晶化。此外，若不純的化合物含有微量之非該化合物所固有的有色物質時，可藉由添加少量的脫色炭至該熱溶液中，進行過濾，然後進行結晶化，而予以去除。通常，結晶化係在溶液冷卻的同時發生的。若不然，可藉由將溶液冷卻至室溫以下或是藉由添加純物質的一單晶(晶種)，來誘發結晶化。可藉由抗－溶劑(anti－solvent)的使用，來進行再結晶化及/或使產率最佳化。在此情況下，該化合物係溶解於在高溫下的溶劑中，進行過濾，然後添加所需之化合物於其中之溶解度低的另一溶劑，以幫助結晶化。然後，通常可使用真空過濾法，將晶體單離出，予以清洗並且予以乾燥，例如，於烘箱中或經由脫水。
結晶化之方法的其他例子包括：自蒸氣結晶析出(其包括，例如，在密封試管或氣流中的蒸發步驟，以及自熔化物結晶析出(Crystallization Technology Handbook 2nd Edition,edited by A.Mersmann,2001)。
詳而言之，式(I)化合物可進行在結晶化(例如，採用2－丙醇或乙醇作為溶劑)，以增加純度且產生晶體形式。
一般而言，所得到的晶體可藉由X－射線繞射法，諸如，X－射線粉末繞射法(XRPD)或是X－射線晶體繞射法，來進行分析。
藥學調配物
當活性化合物或其鹽類有可能單獨投藥時，宜將彼等呈現為藥學組成物(調配物)形式，該組成物包含至少一種本發明之活性化合物連同一或多種藥學上可接受的載體、佐劑、賦形劑、稀釋劑、填料、緩衝劑、安定劑、防腐劑、潤滑劑或是習於此藝之士已知的其他物質以及非必要之其他治療或預防藥劑，例如，可減少或減輕一些與化療有關之副作用的藥劑。如是藥劑的特定例子包括：止吐藥以及預防或減少與化療有關之嗜中性白血球減少症的期間及預防因紅血球細胞或白血球細胞(例如，促紅血球生成素(EPO)、粒性細胞巨噬細胞－群落刺激因子(GM－CSF)、以及粒性細胞－群落刺激因子(G－CSF))之量減少所發生之併發症的藥劑。
因此，本發明還提供了如前文所定義的藥學組成物，以及製造藥學組成物的方法，該方法包含：將至少一種如前文所定義的活性化合物，連同一或多種藥學上可接受的載體、賦形劑、緩衝劑、佐劑、安定劑或如本文所定義之其他物質，摻和在一起。
本文所用的「藥學上可接受的」一詞係指在適當醫藥判斷範圍內被認為適用於與病患(例如，人類)的組織接觸而無過量毒性、刺激性、過敏反應或其他問題或併發症(相當於合理的利益/風險比)的化合物、物質、組成物及/或劑型。根據與調和物中的其他成份相容的觀點來看，各載體、賦形劑等亦必須為「可接受的」。
因此，在另一態樣中，本發明提供了呈藥學組成物形式之本文所定義式(I)及其子群(諸如，式(II)及(III)以及如是子群的子群)的化合物。
藥學組成物可呈任何適用於經口、非經腸、局部、經鼻、經眼、經耳、經直腸、陰道內或經皮投藥的形式。當該組成物係計劃用於非經腸投藥時，彼等可經調配以供靜脈內、肌內、腹膜內、皮下投藥或是藉由注射、輸注或其他遞送方式，直接遞送至目標器官或組織。該遞送可藉由快速濃注、短期輸注或較長期的輸注來進行，還可經由被動遞送法或透過適當的輸液幫浦來進行。
適用於非經腸投藥的藥學調和物包括：水性及非水性的無菌注射溶液，彼等可含有抗氧化劑、緩衝劑、制菌劑以及可使調配物與預定接受者的血液呈等滲的溶質；水性及非水性無菌懸浮液，彼等可包括懸浮劑以及增稠劑。此等調配物的例子係記載於R.G.Strickly,Solubilizing Excipients in oral and injectable formulations,Pharmaceutical Research,Vol 21(2)2004,p 201－230。此外，彼等可含有輔溶劑、有機溶劑混合物、環糊精錯合劑、乳化劑(供形成及安定乳液調配物)、供形成微脂粒的微脂粒成分、供形成聚合凝膠的可凝膠的聚合物、冷凍乾燥保護劑以及特別供安定呈可溶形式之活性成分以及使調配物與預定接受者的血液等滲之藥劑的組合物。該調配物可呈現於單位劑量或多劑量的容器內，例如，密封的針藥管或管形瓶，且可儲存於冷凍乾燥的條件下，在使用前，僅需添加無菌液態載體(例如，注射用水)。
若藥物的pKa係充分地遠離調配物pH值，則可離子化的藥物分子可藉由pH的調整，溶解至所藥的濃度。就靜脈內及肌內投藥而言，可接受的範圍係pH 2－12，但是，對於皮下投藥而言，該範圍則為pH 2.7－9.0。溶液pH係由藥物的鹽形式(強酸類/鹼類，諸如，氫氯酸或氫氧化鈉)來控制，或是由緩衝液的溶液(其包括(但不侷限於)：由甘胺酸、檸檬酸鹽、乙酸鹽、順丁烯二酸鹽、琥珀酸鹽、組織胺酸、磷酸鹽、參(羥甲基)胺基甲烷(TRIS)、或碳酸鹽所形成的緩衝溶液)。
水溶液與水溶性有機溶劑/界面活性劑(例如，輔溶劑)的組合常用於注射用調配物。該用於注射用調配物的水溶性有機溶劑及界面活性劑包括(但不侷限於)：丙二醇、乙醇、聚乙二醇300、聚乙二醇400、甘油、二甲基甲醯胺(DMA)、N－甲基－2－吡咯啶酮(NMP；Pharmasolve)、二甲亞碸(DMSO)、Solutol HS 15、Cremophor EL、Cremophor RH 60以及聚山梨糖醇酐脂肪酸酯80。在注射前，如是之調配物通常(但不一定是)係加以稀釋的。
聚丙二醇、PEG 300、乙醇、Cremophor EL、Cremophor RH60以及聚山梨糖醇酐脂肪酸酯80乃用於市售注射用調配物之完全有機的、水可互溶溶劑及界面活性劑且可相互併用。結果所得到的有機調配物在靜脈內快速濃注或靜脈內輸注之前，通常係稀釋至少2倍。
另外，透過與糊精的分子錯合，亦可達到水溶解度的增加。
微脂粒係由外部的脂質雙層膜及內部的含水核心所組成的密閉球形小囊胞且總直徑係<100 μ m。視疏水性的程度，適度疏水的藥物可被微脂粒溶解，如果該藥物係包封於或間插於微脂粒內。疏水性藥物亦可被微脂粒溶解，若該藥物分子成為該脂質雙層膜之一不可缺的部分，且在此情況下，該疏水性藥物係溶解於該脂質雙層的脂質部分。一典型的微脂粒調配物含有水連同5－20 mg/ml的磷脂、等滲化劑、pH 5－8緩衝劑、以及非必要的膽固醇。
該調配物可呈現在單位劑量或多劑量容器內，例如，密封的針藥管及管形瓶，且可儲存於冷凍乾燥的條件下，在使用前，僅需添加無菌的液態載體(例如，注射用水)。
該藥學組成物可藉由將式(I)化合物或其酸加成鹽冷凍乾燥而製備得。冷凍乾燥係指將一組成物冷凍乾燥的方法過程。典型的方法係將該化合物溶化且如此所得到的調配物係澄清、經滅菌過濾的且無菌地轉移至適用於冷凍乾燥的容器(例如，管形瓶)內。在管形瓶的情況下，彼等係用凍乾膠塞(lyo-stoppers)予以部分塞住。該調配物可被冷卻至冰凍並且在標準條件下進行冷凍乾燥，然後，予以密封加蓋，而形成一安定、乾燥的凍乾調配物。該組成物通常具有低的殘留水量，例如，少於5重量%，例如，少於1重量%(基於該凍乾物的量)。
該冷凍乾燥調配物可含有其他賦形劑，例如，增稠劑、分散劑、緩衝劑、抗氧化劑、防腐劑、以及滲透壓調節劑。典型的緩衝劑包括：磷酸鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽以及甘胺酸。抗氧化劑的例子包括：抗壞血酸、亞硫酸氫鈉、偏亞硫酸氫鈉、單硫代甘油、硫脲、丁基化羥基甲苯、丁基化羥基甲氧苯、以及乙二胺四乙酸鹽類。防腐劑可包括：苯甲酸及其鹽類、山梨酸及其鹽類、對羥基苯甲酸的烷基酯類、酚、氯基丁醇、苄醇、乙汞硫柳、氯化苯二甲羥銨以及氯化鯨蠟基鈚錠(cetylpyridinium chloride)。前面所提到的緩衝劑，還有右旋糖以及氯化鈉，視需要可用於張力的調節。
填充劑通常可用於冷凍乾燥技術，以加速該過程及/或為凍乾的餅狀物提供容積及/或機械完整性。填充劑係指自由地溶於水、固態的微粒稀釋劑，當彼等與化合物或其鹽類一同冷凍乾燥時，可提供物理上安定的凍乾餅狀物、更加理想的冷凍乾燥過程以及快速且完全的回復原狀。該填充劑亦可用於使該溶液等滲。
該水溶性填充劑可為通常用於冷凍乾燥之任何藥學上可接受的惰性固體物質。如是之填充劑包括，例如：糖類，葡萄糖、麥芽糖、蔗糖以及乳糖；多元醇類，諸如，山梨糖醇或甘露糖醇；胺基酸類，諸如，甘胺酸；聚合物，諸如，聚乙烯基吡咯啶酮；以及多醣類，諸如，葡聚糖。
填充劑的重量與活性化合物脂重量的比通常係在約1至約5的範圍內，例如，約1至約3，例如，約1至2的範圍內。
另外，彼等亦可呈濃縮且密封於適當管形瓶內的溶液形式。劑量形式的滅菌可經由過濾或是管形瓶以及彼等之內容物在調配過程之適當階段的高壓消毒，來進行。在遞送之前，所供應的調配物可能需要進一步稀釋或準備，例如，稀釋為適當的無菌輸注包。
臨時的注射溶液及懸浮液可由無菌粉末、粒劑或片劑製備得。
在本發明之一較佳體系中，藥學組成物係呈適於經靜脈投藥(例如，藉由注射或輸注法)的形式。
用於非經腸注射之本發明藥學組成物亦可包含藥學上可接受之無菌水性或非水性溶液、分散液、懸浮液或乳液，還有供使用前回復原狀為無菌注射用溶液的無菌粉末。適當之水性及非水性載體、稀釋劑、溶劑或賦形劑的例子包括：水、乙醇、多元醇類(諸如，甘油、丙二醇、聚乙二醇等等)、羧甲基纖維素以及彼等之適當混合物、植物油類(諸如，橄欖油)、以及可注射的有機酯類(諸如，油酸乙酯)。藉由，例如，使用塗覆物質(諸如，卵磷脂)，維持所需要的粒徑(在分散液的情況下)、以及使用界面活性劑，可維持適當的流動性。
本發明之組成物亦可含有佐劑，諸如，防腐劑、潤濕劑、乳化劑、以及分散劑。藉由併入各種抗菌及抗黴菌劑，例如，苯甲酸酯類、丁基丁醇、酚山梨酸等等，可確保防止微生物的作用。亦可併入等滲劑，諸如，糖類、氯化鈉等等。藉由併入可延緩吸收的藥劑(諸如，單硬脂酸鋁以及明膠)，可延長注射用藥學形式的吸收。
若一化合物在水介質中不安定或是在水介質內的溶解度低，則其可調配成在有機溶劑內的濃體形式。然後，可在水性系統中，將該濃體稀釋為較低的濃度，且在給藥期間的短暫時間內為充分安定的。因此，在另一態樣中，本發明提供一藥學組成物，其包含了完全由一或多種有機溶劑所組成的非水性溶液，其可以其原來的形式給藥或是更通常地，在投藥之前，用適當的靜脈用賦形劑(鹽水、右旋糖；經過緩衝或未經緩衝)予以稀釋(Solubilizing excipients in oral and injectable formulations,Pharmaceutical Research,21(2),2004,p201－230)。溶劑及界面活性劑的例子有：丙二醇、PEG300、PEG400、乙醇、二甲基乙醯胺(DMA)、N－甲基－2－吡咯啶酮(NMP，Pharmasolve)、甘油、Cremophor EL、Cremophor RH60以及聚山梨糖醇酐脂肪酸酯。特定的非水性溶液係由70－80%丙二醇、以及20－30%乙醇所構成。一特定的非水性溶液係由70%丙二醇、以及30%乙醇所組成。另一者係由80%丙二醇以及20%乙醇所組成。通常，此等溶劑係併合使用且通常在靜脈推注或靜脈輸注之前，稀釋至少2倍。就甘油、丙二醇、PEG300、PEG400而言，用於靜脈快速濃注調配物之典型量為~50%，且就乙醇而言，為~20%。用於靜脈輸注調配物之典型量，就甘油而言，為~15%，就DMA而言，為3%，而就丙二醇、PEG300、PEG400及乙醇而言，為~10%。
在本發明之一較佳體系中，藥學組成物係呈適用於經靜脈投藥(例如，藉由注射或輸注法)的形式。就經靜脈投藥而言，該溶液可以其本來的形式來給藥，或是可在投藥之前，注射至輸注袋(含有藥學上可接受的賦形劑，諸如，0.9%鹽水或5%右旋糖)。
在另一較佳體系中，藥學組成物係呈適用於皮下(s.c.)投藥的形式。
適用於經口投藥的藥學劑形包括：片劑、囊劑、膜衣錠、丸劑、錠劑、糖漿、溶液、粉末、粒劑、酏劑以及懸浮液、舌下片劑、雙層扁片或貼片及頰貼片。
含有式(I)化合物之藥學上可接受的藥學組成物可根據已知的技術來調配，參見，例如，Remington’s Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Company,Easton,PA,USA。
因此，片劑組成物可含有單位劑量的活性化合物連同惰性稀釋劑或載體，諸如，糖或糖醇(例如，乳糖、蔗糖、山梨糖醇或甘露糖醇)；及/或由非糖所衍生的稀釋劑[諸如，碳酸鈉、磷酸鈣、碳酸鈣、或是纖維素或其衍生物(諸如，甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素)以及澱粉類(諸如，玉米澱粉)]。片劑亦可含有諸如下列之標準成分：黏合及成粒劑(諸如，聚乙烯基吡咯啶酮)、崩解劑(例如，可膨脹的交聯聚合物(諸如，交聯的羥甲基纖維素)、潤滑劑(例如，硬脂酸酯類)、防腐劑(例如，苯甲酸酯類)、抗氧化劑(例如，BHT)、緩衝劑(例如，磷酸鹽或檸檬酸鹽緩衝劑)、以及起泡劑(諸如，檸檬酸鹽/碳酸氫鹽混合物)。如是賦形劑係已熟知者且無需在此進一步詳細討論。
囊劑調配物可有硬明膠或軟明膠的變化，且可含有呈固態、半固態或液態形式的活性成分。明膠囊可由動物明膠或是合成的或由植物所衍生的同功物。
固態劑型(例如，片劑、囊劑等等)可為塗衣者或未經塗衣者，但是一般係具有塗衣的，例如，保護的薄膜塗衣(例如，蠟或清漆)或是釋控塗衣。該塗衣(例如，EudragitT M 類型的聚合物)可被設計用來在胃腸道內的所企求部位釋出活性組成份。因此，該塗衣可加以選擇使其在胃腸道內的某些pH條件下會降解，因而可在胃內或在迴腸內或在十二指腸內，選擇性地釋離化合物。
除了塗衣之外，藥物亦可呈現於固相擔體(solid matrix)內，該固相擔體包含了釋控劑，例如，延緩釋離劑，其可適合用來在胃腸到內的各種酸性或鹼性條件下，選擇性釋離化合物。另外，該擔體物質或延緩釋離劑亦可呈可食用聚合物的形式(例如，順丁烯二酸酐聚合物)，其隨著劑型的通過胃腸道，會實質上連續地被侵蝕。又另一替代方式係，活性化合物可被調配於提供了化合物之滲透釋控的遞送系統內。滲透釋離以及其他延緩釋離或持續釋離調配物可根據習於此藝之士已熟知的方法來製備。
該藥學組成物包含大約1%至大約95%(宜為大約20%至大約90%)之活性化合物。根據本發明之藥學組成可呈，例如，單位劑型，諸如，針藥劑、管瓶劑、栓劑、糖衣丸劑、片劑或囊劑的形式。
用於經口投藥的藥學組成物可藉由下列方法得到：將活性化合物與固體載體併合在一起，視需要，將所得到的混合物粒化，以及視需要，在添加適當的賦形劑後，將該混合物加工為片劑、糖衣丸劑核心或囊劑。亦可將彼等併入塑膠載體內，以使活性成分以測定量擴散或釋離。
供局部用途的組成物包括：軟膏、乳霜、噴劑、貼片、凝膠、液態滴劑以及插入物(例如，眼內插入物)。如是之組成物可根據已知的方法來調配。
供非經腸投藥的組成物通常係呈現為無菌水性或油性溶液或微細的懸浮液，或是可提供為細粒的粉末形式，供臨時與無菌水調和用於注射。
供直腸或陰道內投藥之調配物的例子包括陰道栓劑及栓劑，彼等可，例如，由含有活性化合物之成型的可模壓或蠟狀物質形成。
供藉由吸入法來投藥之組成物可採吸入用粉末組成物或是液態或粉末噴劑的形式，且可採用粉末吸入裝置或氣溶膠分配裝置，以標準形式來投藥。就吸入投藥而言，粉末狀的調配物通常包含活性化合物連同惰性的固體粉末狀稀釋劑(諸如，乳糖)。
藥學調配物可以「病患用包裝」的形式提供給病患，其在單一包裝內含有一整個療程，且通常為呈囊包狀的包裝。病患用包裝優於傳統處方(其中藥劑師自整批的藥物中分出病患用者)的優點在於：病患隨時都可取得病患包裝內所附加的包裝說明書，而在病患處方的情況下，該說明書通常都會遺失。包裝說明書的附加已經過證明可改良病患對於醫師指示的依從。
本發明之化合物通常係呈現為單位劑量形式且因而，通常含有充足的化合物，以提供所企求之程度的生物活性。例如，預定用於經口投藥的調配物可含有0.1 mg至2 g的活性化合物，例如，1ng至2 mg活性化合物。符合此一範圍，化合物之特定子範圍係0.1 mg至2 g活性成分(更通常為10 mg至1 g)，例如，50 mg至500 mg或1 μ g至20 mg(例如，1 μ g至10 mg)，例如，0.1 mg至2 mg活性成分。
就口服組成物而言，單位劑型可含有1 mg至2 g活性化合物，更通常為10 mg至1 g(例如，50 mg至1 g)，例如，100 mg至1 g活性化合物。
活性化合物係以足以達到所要之治療效果的量，投予有所需的病患(例如，人類或動物病患)。
治療方法
本文所定義之式(I)、(II)、(III)、(XXX)以及子群之化合物想見可用於預防或治療由依賴細胞週期素之激酶、肝糖合成酶激酶－3以及奧若拉激酶所介導之疾病狀態或病況。如是疾病狀態及病況已陳述於前文中。
化合物通常係投予需要如是投藥的患者，例如，人類或動物病患，宜為人類。
化合物通常係以治療上或預防上有用的量來投藥，而該用量通常係無毒性的。然而，在某些情況下(例如，在對於生命有威脅性之疾病的情況下)，投服式(I)化合物的利益可能比任何毒性作用或副作用來得有價值，在此情況下，投予與一定程度之毒性有關聯之量的化合物可被視為需要的。
化合物可長期投藥以維持有利的治療效果，或是僅短期投藥。另外，彼等亦可以跳躍或連續的方式來投藥。
化合物之典型每日劑量可在100 pg至100 mg/kg(體重)，更典型為5 ng至25 mg/kg(體重)，且更通常為10 ng至15 mg/kg(體重)(例如，10 ng/kg(體重)至10 mg/kg(體重)，且更通常為1 μ g/kg(體重)至20 mg/kg(體重)，諸如，1 μ g/kg(體重)至10 mg/kg(體重))，然而，視需要，亦可投用更高或更低的劑量。
本發明之化合物(例如，化合物1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲或其鹽類，諸如，乳酸鹽或檸檬酸鹽)可以每日基準或是以每，例如，2、或3、或4、或5、或6、或7、或10、或14、或21、或28天的重複基準，來進行投藥。然而，根本上，所投用之化合物的量以及所使用之組成物的類型將因應所治療之疾病的性質或生理狀況，且取決於醫師的判斷。
化合物1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲或其鹽類(諸如，乳酸鹽(尤指L－乳酸鹽)或檸檬酸鹽)之每日給藥方式的一例係包含：以1 mg/m2 /天至100/mg/m2 /天的起始劑量(尤指1 mg/m2 /天至10 mg/m2 /天，更特定為3至6 mg/m2 /天(相當於2.5－5 mg自由鹼/m2 /天))，或是以2.5 mg/m2 /天至1.5 g/m2 /天之乳酸鹽的有效劑量(尤指25 mg/m2 /天至600 mg/m2 /天，更特定的為200－500 mg/m2 /天，諸如250 mg/m2 /天或45－200 mg/m2 /天，例如，45－150 mg/m2 /天或是56－185 mg/m2 /天)(相當於45－150 mg自由鹼/m2 /天)，來投用該化合物，然而，視需要，亦可投用更高或更低的劑量。
在一特定的給藥計劃表中，係於2小時至120小時期間(例如，2至96小時，尤指24至72小時期間)，病患係給予1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲或其鹽類(諸如，乳酸鹽(尤指L－乳酸鹽)或檸檬酸鹽)的連續靜脈輸注，且該治療係以所企求的間隔(諸如，每一至三星期)重複進行。
更特定地，可在每天24小時的5天期間，給予病患1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲或其鹽類(諸如，乳酸鹽(尤指L－乳酸鹽)或檸檬酸鹽)的連續靜脈輸注，且該治療可每星期進行，或是在48小時期間進行治療且每二個星期進行一次，或是在72小時期間進行治療且每三個星期進行一次。
在另一特定給藥計劃表中，係每天2小時持續1星期但間隔1、2或3星期，或每隔1、2或3星期在2小時期間，給予病患1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲或其鹽類(諸如，乳酸鹽(尤指L－乳酸鹽)或檸檬酸鹽)的靜脈快速濃注。
採用停止治療期間頻繁的給藥方式(諸如，每一至二星期之24至48小時的連續靜脈輸注)，可投用較高的劑量，諸如，1.5 g/m2 /天。採用給藥更加持續的給藥方式(但是仍然為循環式的斷續)，諸如，每二至三星期進行48至72小時的連續靜脈輸注，可投用較低的劑量。
詳而言之，式(I’)化合物或1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲或其鹽類(諸如，乳酸鹽或檸檬酸鹽，尤指乳酸鹽)可以250 mg/m2 /天之劑量，經由連續靜脈輸注，每三星期進行一次72小時的投藥。
在另一體系中，式(I’)化合物或1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲或其鹽類(諸如，乳酸鹽或檸檬酸鹽，尤指乳酸鹽)可以5天的治療循環，投藥給病患。
根本上，所投用之化合物的量以及所使用之組成物的類型將因應所治療之疾病的性質或生理狀況，且取決於醫師的判斷。
本文所定義之式(I)、(II)、(III)、(XXX)及子群之化合物可以單一治療劑的方式來投藥，或是可與一或多種其他供治療某特定疾病狀態(例如，贅生疾病，諸如前文所定義的癌症)的化合物一起，以合併用藥療法的方式來投藥。可與本發明之化合物一起投藥或一起使用(不論是同時或以不同的間隔)之其他治療藥劑或療法包括(但不侷限於)：拓樸異構酶(topoisomerase)抑制劑、烷基化劑、抗代謝物、DNA結合劑、微小管抑制劑(微管蛋白目標劑)，特定的例子有：順式鉑、環磷醯胺、艾黴素(doxorubicin)、依利替康(irinotecan)、福達樂(fludarabine)、5FU、紫杉醇類(taxanes)、絲裂黴素C及放射療法。
可與本文所定義之式(I)、(II)、(III)、(XXX)及子群之化合物一起投藥(不論是同時或以不同的間隔)之治療劑的其他例子包括：單株抗體以及訊息傳導抑制劑。
就與其他療法合併之CDK或奧若拉抑制劑的情況而言，該二或多種療法可以分別不同的給藥計劃且經由不同的途徑來進行。
當式(I)化合物係與一、二、三、四或多種其他治療劑(宜為一或二種，更佳者為一種)一起以合併用藥療法的方式來投藥時，彼等化合物可同時(不論係在相同或互異的藥學調配物中皆可)或連續給藥。當係連續給藥時，彼等可以緊密的間隔(例如，在5－10分鐘期間)或以較長的間隔(例如，間隔1、2、3、4或更多小時，或是是需要，更長的間隔)，來進行投藥；精確的給藥方式係相稱於治療劑的性質。
本發明之化合物亦可與非化學治療的治療一同投藥，諸如，放射療法、光力療法(photodynamic therapy)、基因療法、外科手術及飲食控制。
就與另一化學治療劑一起用於合併用藥療法而言，式(I)化合物與一、二、三、四或更多種其他治療劑可，例如，一起調配於含有二、三、四或更多種治療劑的劑型中。在一替代方式中，各別的治療劑可分開調配且以組套的形式(是需要附加有彼等的使用指示)一起呈現。
習於此藝之士透過彼等之普通的一般性知識，可知道給藥方式以及所使用的合併療法。
診斷方法
在式(I)化合物的投藥之前，病患可經過篩選，以確定彼等所患有或可能患有的疾病或病況，是否對於具有奧若拉及/或依賴細胞週期素之激酶對抗活性之化合物的治療敏感。
例如，可對取自病患的生物樣本進行分析，以測定該病患所患有或可能患有之病況或疾病(諸如，癌症)，是否有基因異常或異常蛋白質表現的特徵，該基因異常或異常蛋白質表現會導致CDKs的過度活化或導致通向正常CDK活性的路徑敏化。會導致CDK2訊息之活化或敏化之如是異常的例子包括細胞週期素的向上調控(Harwell RM,Mull BB,Porter DC,Keyomarsi K.；J Biol Chem.2004 Mar 26；279(13)：12695－703)或是p21或p27的喪失，或是CDC4變型的出現(Rajagopalan H,Jallepalli PV,Rago C,Velculescu VE,Kinzler KW,Vogelstein B,Lengauer C.；Nature.2004 Mar 4；428(6978)：77－81)。帶有CDC4之突變型或細胞週期素E之向上調控(尤指過度表現)或是p21或p27之喪失的腫瘤對於CDK抑制劑特別敏感。此外，取自病患的生物樣本可進行分析，以測定該病患所患有或可能患有之病況或疾病(諸如，癌症)，是否係以奧若拉激酶之向上調控為特徵且因此對於奧若拉抑制劑特別敏感。「向上調控」一詞係包括：表現增加或過度表現[包括基因擴大(亦即，多重基因複製)以及因轉錄作用所造成的表現增加]、以及高活性與活化(包括突變所造成的活性)。
因此，病患可進行診斷試驗，以偵測奧若拉激酶之過度表現、向上調控或活性所特有的標記，或是病患可進行診斷試驗，以偵測細胞週期素E之向上調控、或是p21或p27喪失、或是CDC4變型之出現所特有的標記。該「診斷」－詞包括篩選。所謂標記，其係包括基因標記，包含了由DNA組成來鑑定奧若拉或CDC4之突變的測定。該「標記」一詞亦包括奧若拉或細胞週期素E之向上調控所特有的標記，包括酶活性、酶量、酶狀態(例如，是否為磷酸化)以及前述蛋白質的mRNA量。帶有細胞週期素E之向上調控、或是p21或p27之喪失的腫瘤對於CDK抑制劑特別敏感。在治療前，腫瘤宜進行細胞週期素E之向上調控、或是p21或p27之喪失的篩選。因此，病患可進行診斷試驗，以偵測細胞週期素E之向上調控、或是p21或p27之喪失所特有的標記。
該診斷試驗通常可在生物樣本上進行，該生物樣本係選自：腫瘤活體檢視樣本、血液樣本(脫落腫瘤細胞的分離及增殖)、糞便檢體、痰、染色體分析、胸膜液、腹膜液或尿液。
經發現(參見Ewart－Toland et al.,Nat Genet.2003 Aug；34(4)：403－12)，具有STK基因(奧若拉激酶A之基因)變型之人口亞群中的部分個體可能對於某些形式的癌症，具有高感病性。因此，可想見患有癌症之如是個體可因投服具有奧若拉激酶抑制活性的化合物，而受益。因此，患有或被懷疑患有癌症的病患可進行篩選，以測定該病患是否為Ile31變型人口亞群中的一員。此外，經發現(Rajagopalan et al,Nature.2004 Mar 4；428(6978)：77－81)，在人類結腸直腸癌以及子宮內膜癌(Spruk et,Cancer Res.2002 Aug 15；62(16)：4535－9)中，CDC4(亦稱作為Fbw7或)出現有突變的現象。若鑑定出個體在CDC4內帶有突變，則表示該病患特別適合用CDK抑制劑予以治療。在治療前，腫瘤宜進行是否有CDC4變型存在的篩選。該篩選過程通常包含：直接定順序、低聚核苷酸微晶片(microarray)分析、或是突變型特異抗體。
帶有奧若拉之活化突變型或奧若拉(包括其任何亞型)之向上調控的腫瘤，對於奧若拉抑制劑特別敏感。在治療前，腫瘤宜進行奧若拉之向上調控或具有Ile31變型之奧若拉的篩選(Ewart－Toland et al.,Nat Genet.2003 Aug；34(4)：403－12)。Ewart－Toland等人鑑定出在STK15內的一共通基因變型(造成胺基酸取代F31I)，其宜被擴大且與人類結腸腫瘤的染色體非整倍性程度有關。此等結果係與STK15之Ile31變型在人類癌症感病性上所扮演的腳色一致。詳而言之，此奧若拉A內的多形現象被認為是發展乳房癌瘤的基因修飾成分(sunet al ,Carcinogenesis,2004,25(11),2225－2230)。
奧若拉A激酶的基因圖譜係對應至染色體20q13區域，該區域常被現在許多人類癌症(例如，乳房、膀胱、結腸、卵巢、胰臟癌症)中係被擴大了。患有具有該基因擴大現象的病患，可能對予以奧若拉激酶抑制為目標的治療特別敏感。
對於蛋白質之突變及向上調控(例如，奧若拉亞型及染色體20q13擴大)的鑑定及分析方法，乃習於此藝之士所熟知的。篩選方法可包括(但不侷限於)標準方法，諸如，逆轉錄酶聚合酶鏈反應(RT－PCR)或原位雜交。
在藉由RT－PCR來進行篩選時，腫瘤內的mRNA量係藉由製造出mRNA的cDNA複體，然後藉由PCR，將該cDNA擴大，來評估的。PCR擴大的方法、引子的選擇、以及擴大的條件皆係習於此藝之士已知者。核酸操作以及PCR係藉由標準方法來進行的，例如，如Ausubel,F.M.et al.,eds.Current Protocols in Molecular Biology,2004,John Wiley & Sons Inc.,或是Innis,M.A.et al.,eds.PCR Protocols：a guide to methods and application,1990,Academic Press,Sandiego中所記載者。涉及核酸技術的反應及操作亦記載於Sambrook et al.,2001 3r d Ed,Molecular Cloning：A Laboratory Mannual,Cold Spring Harbor Laboratory Press。另外，亦可使用市售的RT－PCR組套(例如，Roche Molecular Biochemicals)，或是美國專利第4,666,828號；第4,683,202號；第4,801,531號；第5,192,659號；第5,272,057號；第5,882,864號以及第6,218,529號所記載的方法亦可使用，彼等專利併於本文作為參考。
用於評估mRNA表現之原位雜交技術的一例係螢光原位雜交(FISH)(參見Angerer,1987 Meth.EnzymoJ.,152：649)。
一般而言，原位雜交包含了下列主要步驟：(1)將待分析的組織固定；(2)對樣本進行預雜交處理，以增加標靶核酸的可接觸性(accessibility)，以及減少非專一性的結合；(3)將該核酸混合物雜交至生物結構或組織內的核酸；(4)進行雜交後的清洗，以去在雜交時未結合的核酸片段；以及(5)偵測雜交的核酸片段。用於如是應用的探針通常係經過標記的，例如，用放射性同位素或螢光報告物(reporters)予以標記。較佳的探針係夠長的，例如，約50、100或200個核苷酸至約1000個或更多的核苷酸，俾便在迫切條件下進行與標靶核酸的專一性雜交。進行FISH的標準方法係記載於Ausubel,F.M.et al.,eds.Current Protocols in Molecular Biology,2004,John Wiley & Sons Inc and Fluorescence In Situ Hybridization：Technical Overview by John M.S.Barlett in Molecular Diagosis of Cancer,Methods and Protocols,2nd ed.；ISBN：1－59259－760－2；March 2004,pps.077－088；Series：Methods in Molecular Medicine。
另外，由mRNAs表現出來的蛋白質產物可藉由腫瘤樣本的免疫組織化學、使用microtiter plates的固相免疫分析、西方轉印法(Western blotting)、二維SDS－聚丙烯基醯胺膠體電泳法、ELISA、流式細胞技術(flow cytometry)以及其他技藝上已知之供偵測專一性蛋白質的方法，來進行評估。偵測方法包括部位專一性抗體的使用。習於此藝之士可認知到，供偵測細胞週期素E之向上調控、p21或p27之喪失或CDC4變型之存在的所有如是廣為熟知的技術，可應用於本發明的情況。
因此，所有此等技術亦可用於鑑定出特別適合用本發明之化合物來治療的腫瘤。
帶有CDC4之變型或向上調控(尤指細胞週期素E的過度表現或是p21或p27的喪失)之腫瘤對於CDK抑制劑特別敏感。在治療之前，腫瘤宜對於向上調控(尤指細胞週期素E的過度表現)(Harwell RM,Mull BB,Porter DC,Keyomarsi K.；J Biol Chem.2004 Mar 26；279(13)：1269－705)、或是p21或p27的喪失或是CDC4變型，進行篩選(Rajagopalan H,Jallepalli PV,Rago C,Velculescu VE,Kinzler KW,Vogelstein B.Lengauer C.；Nature.2004 Mar 4；428(6978)：77－81)。
可使用本文所列舉的診斷試驗，選擇出可用本發明之化合物治療之患有套膜細胞淋巴瘤(MCL)的病患。MCL乃非霍奇金氏淋巴瘤之不同的臨床病理學實體，其特徵在於：由小至中等大小之淋巴細胞的增生連同CD5及CD20的共表現(co－expression)(此乃具攻擊性且無法醫治的臨床過程)，以及頻繁的t(11；14)(q13；q32)移位。在套膜細胞淋巴瘤(MCL)內所發現到之細胞週期素D1 mRNA的過度表現乃一重要的診斷標記。Yatabe等人(Blood,2000 Apr 1；95(7)：2253－61)提議，細胞週期素D1－實証(positivity)應被算作為MCL的標準規範，且該無法醫治之疾病的創新療法應以該新規範為基礎來開發。Jones等人(J.Mol Diagn.2004 May；6(2)：84－9)發展出一供分析細胞週期素D1(CCND1)的即時、定量、逆轉錄PCR分析法，以幫助套膜細胞淋巴瘤(MCL)的診斷。Howe等人(Clin Chem.2004 Jan；50(1)：80－7)使用即時定量RT－PCR來評估週期細胞素D1 mRNA表現且發現到，數值調整化至CD19 mRNA之細胞週期素D1 mRNA的定量RT－PCR可用於診斷血液、骨髓及組織內的MCL。另外，使用前文所列舉的診斷試驗，亦可選擇出可用CDK抑制劑治療之患有乳癌的病患。腫瘤細胞一般會過度表現細胞週期素E，且已經證實，細胞週期素E會在乳癌內過度表現(Harwell et al,Cancer Res,2000,60,481－489)。因此，乳癌特別可用如本文所提供之CDK抑制劑治療。
抗黴菌用途
在進一步的態樣中，本發明提供了本文所定義之式(I)、(II)、(III)、(XXX)以及彼等之子群的化合物用作為抗黴菌劑的用途。
本文所定義之式(I)、(II)、(III)、(XXX)以及彼等之子群的化合物可用於動物醫學(例如，用於治療哺乳動物，諸如人類)、或是用於治療植物(例如，用於農業及園藝)、或是作為全般性的抗黴菌劑，例如，作為防腐劑及消毒劑。
在一體系中，本發明提供了用於預防或治療哺乳動物(諸如人類)之黴菌感染之本文所定義之式(I)、(II)、(III)、(XXX)以及彼等之子群的化合物。
還提供了本文所定義之式(I)、(II)、(III)、(XXX)以及彼等之子群的化合物的用途，該用途係製造用於預防或治療哺乳動物(諸如人類)之黴菌感染的藥物。
例如，本發明之化合物可投藥給患有或是有感染下列感染症之危險性的人類病患：尤其是由下列生物所造成之局部黴菌感染症：念珠菌屬、毛癬菌屬、小芽孢菌屬或表皮癬菌屬，或是由白念珠菌所造成的黏膜感染症(例如，鵝口瘡以及陰道白念珠菌病)。本發明之化合物亦可投藥以治療或預防由，例如，白念珠菌、新型隱球菌、黃麴菌、薰烟色麴菌、球黴菌屬、副球黴菌屬、組織胞漿菌屬或芽生菌屬所造成的全身性黴菌感染症。
在另一態樣中，本發明提供用於農業(包括園藝)用途的抗黴菌組成物，其包含本文所定義之式(I)、(II)、(III)、(XXX)及彼等之子群的化合物，連同農業上可接受的稀釋劑或載體。
本發明還提供了供治療有黴菌感染症之動物(包括哺乳動物，諸如，人類)、植物或種子的方法，其包含用有效量之本文所定義之式(I)、(II)、(III)、(XXX)及彼等之子群的化合物，來處理該動物、植物或種子、或是該植物或種子的所在場所。
本發明亦提供一種供治療植物或種子之黴菌感染症的方法，其包含用抗黴菌有效量之含有本文所定義之式(I)、(II)、(III)、(XXX)及彼等之子群的化合物的組成物，來處理該植物或種子。
可使用差異性篩選(differential screening)分析法選擇對於非人類CDK酶具有專一性的本發明化合物。專一地作用於真核性病原之CDK酶的化合物可用作為抗黴菌劑或抗寄生蟲劑。念珠菌CDK激酶的抑制劑，CKSI，可用於治療念珠菌病。抗黴菌劑可用來對抗前文所述種類的感染症，或是常發生於衰弱及免疫抑制病患(諸如，患有白血病及淋巴瘤的病患、接受免疫抑制治療的人、以及在易於罹病之狀況下的病患(例如，糖尿病或AIDS病患，還有非免疫抑制的病患)的伺機性感染症。
記載於技藝上的分析法可用來篩選化合物是否可用於抑制至少一種涉及諸如下列之黴菌病的黴菌：念珠菌病、麴菌病、白黴菌病、芽生菌病、土毛菌病、囊球菌病、產色黴菌病、球黴菌病、頂端芽胞菌病、組織漿菌病、馬度拉足腫、鼻芽胞蟲病、土壤絲菌病、副放線菌病、青黴素病、串珠菌病或胞子絲菌病。差異性篩選分析法可用來鑑定出，在利用自諸如下列之酵母選殖出的CDK基因來治療麴菌病的方法上具有治療價值的抗黴菌劑：薰烟色麴菌、黃麴菌、黑麴菌、小巢狀麴菌或土麴菌，或是當該黴菌感染症係白黴菌病時，該CDK分析可衍生自諸如下列的酵母：鬚根黴菌、稻根黴菌、棘子鬚黴菌、分棘狀棘子鬚黴菌或微小毛黴菌。其他CDK酶的來源包括病原卡氏肺囊蟲。
舉例而言，化合物之抗黴菌活性的體外評估，可藉由測定最小的抑制濃度(M.I.C.)來進行，該濃度係在適當培養基內特定微生物之生長無法發生時的受試化合物濃度。在實施時，係用，例如，白念珠菌的標準培養物，來培養一系列瓊脂平盤(各併有在特定濃度下的受試化合物)，然後，在37℃下，將各平盤培養適當的期間。然後，檢視平盤內有或無黴菌的生長，並且記下M.I.C.值。另外，亦可進行在液態培養物內的濁度分析，而此概述此分析法之一例的實驗計畫可見於實施例64。
化合物的體內評估可藉由腹膜內或靜脈內注射或藉由口服，將一系列劑量投予接種了黴菌(例如，白念珠菌或黃麴菌株)的小鼠來進行。藉由追蹤觀察經投藥及末經投藥組之小鼠的黴菌感染生長(利用組織學或自感染部未取得黴菌)，來評估本發明化合物的活性。活性係以化合物提供對抗感染症之致死作用的50%保護時的劑量(PD5 0 )，測量得的。
就人類的抗黴菌用途而言，本文所定義之式(I)、(II)、(III)、(XXX)以及彼等之子群的化合物可單獨投藥或是與藥學上可接受的載體(根據預定的投藥途徑及標準的藥學實務選定的)摻和在一起投藥。因此，例如，彼等可藉助在前述標題為「藥學調和物」之段落所記載的調和物，經口、非經腸、經靜脈內、肌內或皮下投藥。
就人類病患之經口及非經腸投藥而言，本發明之抗黴菌化合物的每日劑量可為0.01至10 mg/kg(攤分劑量)，尤其係取決於化合物經口或非經腸途徑投藥時的效力。化合物的片劑或囊劑含有，例如，5 mg至0.5 g活性化合物，此乃供單次投藥用或是視需要，一次投服二或更多劑。在任何情況下，醫師都會根據特定病患的年齡、體重及反應，來決定對於各病人最適當的確切劑量(有效量)。
另外，抗黴菌化合物亦可以栓劑或陰道栓劑的形式來投藥，或是彼等可以洗劑、溶液、乳霜或撒粉的形式，來局部塗藥。例如，彼等可併入由聚乙二醇或液態石蠟所組成的乳霜；或是彼等可以1至10%之間的濃度，併入由白蠟或是白軟石蠟基質連同有所需之安定劑及防腐劑所組成的軟膏中。
除了前述治療用途之外，以如是差異性篩選分析法開發出來的抗黴菌劑可用於，例如，作為食品的防腐劑、促使家禽重量增加的飼料補充劑、或是供處理非生物之消毒劑調配物(例如，供醫院設備及房間的去污染之用)。以類似的方式，哺乳動物CDK與昆蟲CDK(諸如，蜂蠅屬CDK5基因[Hellmich et al.(1994)FEBS Lett 356：317－21])之抑制作用的並排比較，可在本文的化合物之中，選擇出可區別人類/哺乳動物以及昆蟲酶的抑制劑。因此，本發明特別地企圖包括本發明化合物及調配物用於殺蟲劑的用途，諸如，用於處理昆蟲，諸如，果蠅。
在另一體系中，某些主題CDK抑制劑可基於相對於哺乳動物酶之對於植物CDKs的抑制專一性，來進行選擇。例如，植物CDK可與一或多種類酶一同排列於一差異性篩選，以選擇出對於抑制植物酶具有對大選擇性的化合物。因此，本發明特別企圖包括用於農業用途之主題CDK抑制劑的調配物(諸如，呈就農業及園藝目的而言，本發明之化合物可呈根據特定用途及預定目的適當調配之組成物的形式。因此，本發明之化合物可以撒粉、或顆粒劑、浸種劑、水溶液、分散液或乳液、浸劑、噴霧劑、氣溶膠或薰蒸劑的形式來施用。化合物亦可以可分散的粉劑、顆粒或粒狀物、或是使用前加以稀釋的濃體形式供應。如是組成物可含有農業及園藝上已知且可接受的習用載體、稀釋劑或佐劑，且彼等可根據習用程序來製造。該組成物亦可併有其他活性成分，例如，具有除草或殺蟲活性的化合物或是另一種的抗黴菌劑。該化合物及組成物可以多種方式來施用，例如，彼等可直接施用於植物的葉、莖、分枝、種子或根或是施用於土壤或其他生長介質，而且彼等不僅可用於根除疾病，還可預防性地用於保護植物或種子不受到攻擊。舉例而言，該組成物可含有0.01至1重量%之活性化合物。就田間使用而言，活性化合物之適當施用量可為50至5000公克/公頃。
本發明亦包括如本文所定義之式(I)、(II)、(III)、(XXX)及彼等之子群的化合物用於控制使木材腐朽的黴菌以及用於處理植物生長之土壤、水稻之秧田或灌溉用水的用途。本發明還涵蓋了如本文所定義之式(I)、(II)、(III)、(XXX)及彼等之子群之化合物用於保護儲存穀物以及其他非植物之場所不受黴菌感染的用途。
 實施例
藉由參考下面實施例所記載的特定體系，可進一步例示本發明，但是本發明不受限於彼等體系。
在實施例中，使用了下列縮寫。
AcOH 乙酸BOC 第三丁氧基羰基CDI 1,1’－羰基二咪唑DMA W90 溶劑混合物：DCM：MeoH，AcOH，H2 O(90：18：3.2)DMA W120 溶劑混合物：DCM：MeOH，AcOH，H2 O(120：18：3.2)DMA W240 溶劑混合物：DCM：MeOH，AcOH，H2 O(240：20：3.2)DCM 二氯甲烷DMF 二甲基甲醯胺DMSO 二甲亞碸EDC 1－乙基－3－(3’－二甲胺基丙基)－碳化二亞胺Et3 N 三乙胺EtOAc 乙酸乙酯Et2 O 乙醚HOAt 1－羥基氮雜苯並三唑HOBt 1－羥基苯並三唑MeCN 乙腈MeOH 甲醇SiO2 氧化矽TBTU 四氟硼酸N,N,N’,N’－四甲基－O－(苯並三唑－1－基)脲鹽THF 四氫呋喃
分析LC－MS系統以及方法敘述
在實施例中，製備得的化合物係採用下文所列的系統以及操作條件，藉由液態層析法以及質量光譜分析法來定性的。當有帶著不同之同位素的原子出現且引述單一質量時，所引述之化合物的質量係單同位素質量(亦即，3 5 Cl；7 9 Br等)。如下文所述地，使用了多種系統，且彼等係經裝備且經設定，俾便可在非常類似之操作條件下進行。所用的操作條件亦記載於下文。
Waters Plateform LC－MS系統：HPLC系統：Waters 2795質譜偵測器：Micromass Platform LC PDA偵測器：Waters 2996 PDA
分析用酸性條件：洗提劑A：H2 O(0.1%甲酸)洗提劑B：CH3 CN(0.1%甲酸)梯度：5－95%洗提劑B，在3.5分鐘期間流速：0.8 ml/分鐘層柱：Phenomenex Synergi 4 μ MAX－RP 80A，20×50 mm
分析用鹼性條件：洗提劑A：H2 O(10 mM NH4 HCO3 緩衝劑，經NH4 OH調整至pH＝9.2)洗提劑B：CH3 CN梯度：05－95%洗提劑B，在3.5分鐘期間流速：0.8 ml/分鐘層柱：Phenomenex Luna C18(2)5 μ m 2.0×50 mm
分析用極性條件：洗提劑A：H2 O(0.1%甲酸)洗提劑B：CH3 CN(0.1%甲酸)梯度：00－95%洗提劑B，在3分鐘期間流速：0.8 ml/分鐘層柱：Phenomenex Synergi 4 μ MAX－RP 80A，2.0×50 mm
分析用親脂條件：洗提劑A：H2 O(0.1甲酸)洗提劑B：CH3 CN(0.1甲酸)梯度：55－95%洗提劑B，在3.5分鐘期間流速：0.8 ml/分鐘層柱：Phenomenex Synergi 4 μMAX－RP 80A，2.0×50 mm
分析用長酸性條件：洗提劑A：H2 O(0.1%甲酸)洗提劑B：CH3 CN(0.1%甲酸)梯度：05－95%洗提劑B，在15分鐘期間流速：0.4 ml/分鐘層柱：Phenomenex Synergi 4 μ MAX－RP 80A，2.0×150 mm
分析用長鹼性條件：洗提劑A：H2 O(10 mM NH4 HCO3 緩衝劑，經NH4 OH調整至pH＝9.2)洗提劑B：CH3 CN梯度：05－95%洗提劑B，在15分鐘期間流速：0.8 ml/分鐘層柱：Phenomenex Luna C18(2)5 μ m 2.0×50 mm
平台MS條件：毛細管電壓：3.6 kV(ES負模式為3.40 kV)錐電壓：25 V來源溫度：120℃掃描範圍：100－800 amu離子化模式：電噴灑正模式或是電噴灑負模式或是電噴灑正&負模式
Waters Fractionlynx LC－MS系統：HPLC系統：2767自動取樣機－2525二元梯度幫浦質譜偵測器：Waters ZQ PDA偵測器：Waters 2996 PDA
分析用酸性條件：洗提劑A：H2 O(0.1%甲酸)洗提劑B：CH3 CN(0.1%甲酸)梯度：5－95%洗提劑，在4分鐘期間流速：2.0 ml/分鐘層柱：Phenomenex Synergi 4 μ MAX－RP 80A，4.6×50 mm
分析用極性條件：洗提劑A：H2 O(0.1%甲酸)洗提劑B：CH3 CN(0.1%甲酸)梯度：00－50%洗提劑B，在4分鐘期間流速：2.0 ml/分鐘層柱：Phenomenex Synergi 4 μ MAX－RP 80A，4.6×50 mm
分析用親脂條件：洗提劑A：H2 O(0.1%甲酸)洗提劑B：CH3 CN(0.1%甲酸)梯度：55－95%洗提劑B，在4分鐘期間流速：2.0 ml/分鐘層柱：Phenomenex Synergi 4 μ MAX－RP 80A，4.6×50 mm
Fractionlynx MS條件：毛細管電壓：3.5 kV(ES負模式為3.2 kV)錐電壓：2.5 V(ES負模式為30 V)來源溫度：120℃掃描範圍：100－800 amu離子化模式：電噴灑正模式或是電噴灑負模式或是電噴灑正&負模式
質量導向純化LC－MS系統
製備型LC－MS乃用於純化小有機分子(諸如，本文所記載之化合物)的標準且有效的方法。液相層析(LC)以及質量光譜分析法(MS)可加以改變，以提供較佳的粗製物分離以及改良之MS的樣本偵測。製備梯度LC分法的最佳化涉及了層柱、揮發性溶劑及修飾劑、以及梯度的改變。將製備型LC－MS方法最佳化然後用於純化化合物的方法在技藝上係已熟知者。如是之方法係記載於Rosentreter U,Huber U.；Optimal fraction collecting in preparative LC/MS；J.Comb Chem. ；2004；6(2),159－64以及Leister W,Strauss K,Wisnoski D,Zhao Z,Lindsley C.,Development of a custom high－throughput preparative liquid chromatography/mass spectrometer platform for the preparative purification and analytical analysis of compound libraries；J.Comb Chem. ；2003；5(3)；322－9。
雖然下文中記載了經由製備型LC－MS來純化化合物的如是系統之一，但是習於此藝之士可了解到，亦可使用彼等所述者的替代系統及方法。詳而言之，基於正常相製備LC的方法可用於取代本文所述之逆相方法。大多數的製備型LC－MS係利用逆相LC以及揮發性酸性修飾劑，因為此一方式對於小分子的純化係非常有效的而且因為洗提劑係與正離子電噴灑質量光譜分析法相容的。其他層析溶液的採用，例如，前述分析方法中所列出的正常相LC、可替代的緩衝移動相、鹼性修飾劑等，可替代地用來純化化合物。
製備型LC－MS系統
Waters Fractionlynx System：．硬體2767 Dual Loop Autosampler/Fraction Collector 2525製備型幫浦CFO(層柱流動組織裝置)，供選擇層柱之用RMA(Waters化學藥劑管理裝置，)，作為外加幫浦(make up pump)Waters ZQ質譜儀Waters 2996光二極體陣列式(Photo Diode Array)檢測器Waters ZQ質譜儀．軟體Masslynx 4.0．Waters MS進行條件：毛細管電壓：3.5 kV(ES負模式為3.2 kV)錐電壓：25V來源溫度：120℃倍增器(multiplier)：500V掃描範圍：125－800 amu離子化模式：電噴灑正模式或電噴灑負模式或
Agilent 1100 LC－MS製備型系統：．硬體自動取樣器：1100系列「prepALS」幫浦：1100系列「PrepPump」(用於製備型流體梯度)以及1100系列「QuatPump」(用於抽取製備型流體內的修飾劑)UV檢測器：1100系列「MWD」多波長檢測器MS檢測器：1100系列「LC－MSD VL」級份收集器：2 x「Prep－Fc」外加幫浦：「Waters RMA」
Agilent活性分選儀(Active Splitter)．軟體Chemstation：Chem 32．Agilent MS進行條件：毛細管電壓：4000V(ES負模式為3500V)碎片機(fragmentor)/粒狀物150/1乾燥氣體流：13.0 L/分鐘氣體溫度：350℃噴霧器壓力：50 psig掃描範圍：125－800 amu離子化模式：電噴灑正模式或電噴灑負模式
層析條件：
．層柱1.低pH層析法：Phenomenex Synergy MAX－RP，10 μ，100×21.2 mm(對於極性較高的化合物，可使用Thermo Hypersil－Keystone HyPurity Aquastar，5 μ，100×21.2 mm予以替代)2.高pH層析法：Phenomenex Luna C18(2)，10 μ，100×21.2 mm(可替代使用的是Phenomenex Gemini，5 μ，100×21.2 mm)
．洗提劑：1.低pH層析法：溶劑A：H2 O＋0.1%甲酸，pH~1.5溶劑B：CH3 CN＋0.1%甲酸2.高pH層析法：溶劑A：H2 O＋10 mM NH4 HCO3 ＋NH4 OH，pH＝9.2溶劑B：CH3 CN 3.外加溶劑(make up solvent)：甲醇＋0.2%甲酸(對於該二層析類型而言)
．方法根據分析痕量來選擇最適當的製備型層析類型。典型的例行過程係使用最適於化合物結構的層析類型(低或高pH)，來進行分析LC－MS。一旦分析痕量顯示出良好的層析，即選擇相同類型的適當製備型方法。同時可用於低及高pH層析方法的典型進行條件為：流速：24 ml/分鐘梯度：通常所有的梯度皆有以95%＋5% B來進行的起始0.4分鐘步驟。然後，根據分析痕量，選擇3.6分鐘的梯度，以便達到良好的分離(例如，就早期留存的化合物，使用5%至50% B；就中期留存的化合物，使用35%至80% B)清洗：在梯度結束後，進行1.2分鐘清洗步驟再平衡：進行2.1分鐘的再平衡步驟，以讓系統準備進行下一次的分析外加流速度：1 ml/分鐘
．溶劑所有的化合物皆溶解於100%甲醇或100% DMSO由所提供的資料，習於此藝之士能夠利用製備型LC－MS來純化本文所記載的化合物。
各實施例的起始物皆係市售的，除非另有特別說明。
實施例1
5－氰基－2－甲氧基－N－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－苄醯胺的合成1A.(3,4－二硝基－苯基)－嗎福啉－4－基－甲酮的合成
將3,4－二硝基苯甲酸(10.0 g)以及亞磺醯氯(30 ml)的混合物加熱回流2小時，冷卻至周溫並且藉由與甲苯共沸，以去除過量的亞磺醯氯。將所得到的殘留物納入THF(100 ml)及嗎福啉(4.1 ml)中，並且同時將三乙胺(7.2 ml)添加至該0℃的混合物中。將該混合物攪拌3小時，添加水(100 ml)，然後，用乙酸乙酯予以萃取。用鹽水清洗有機的部分，予以乾燥(硫酸鎂)並且於真空中濃縮。令所得到的殘留物自甲醇再結晶析出，而得到呈黃色固體之(3,4－二硝基苯基)－嗎福啉－4－基－甲酮(8.23 g)。1 H NMR(300MHz，DMSO－d6 )δ 8.3(d，1H)，8.3(s，1H)，8.0(d，1H)，3.7－3.5(m，8H)。
1B.(3,4－二胺基－苯基)－嗎福啉－4－基－甲酮的合成
於氫氣氛中、周溫下，將(3,4－二硝基苯基)－嗎福啉－4－基－甲酮(1.0 g)及10% Pd/C(150 mg)於甲醇(30 ml)所形成的混合物搖晃10小時，然後，令其過濾通過矽藻土充填物並且於真空中濃縮，可得到(3,4－二胺基－苯基)－嗎福啉－4－基]－甲酮(900 mg)。1 H NMR(300 MHz，DMSO－d6 )δ 6.6(s，1H)，6.5(s，2H)，4.8(s，1.5H)，4.6(s，1.5H)，4.1(s，1H)，3.6(m，4H)，3.4(m，4H)。
1C. 4－嗎福啉－4－基甲基－苯－1,2－二胺的合成
將NaBH4 (954 mg)添加至(3,4－二硝基－苯基)－嗎福啉－4－基]－甲酮(2.84 g)於無水THF(50 ml)所形成的混合物中，接著逐滴地添加BF3 .Et2 O(3.2 ml)。在周溫下，將該混合物攪拌3小時，然後，透過甲醇的添加，予以驟熄。於真空中，將該混合物濃縮，令其分溶於乙酸乙酯及水中，並且用鹽水清洗有機的部分，予以乾燥(硫酸鎂)並且於真空中濃縮。利用快速層柱層析法(用乙酸乙酯洗提)，將所得到的殘留物純化，可得到4－(3,4－二硝基－苄基)－嗎福啉(1.08g)。
於氫氣氛中、周溫下，將4－(3,4－二硝基－苄基)－嗎福啉(550 mg)及10% Pd/C(75 mg)於甲醇(10 ml)所形成的混合物搖晃4小時，然後令其過濾通過矽藻土充填物並且於真空中進行濃縮，可得到4－嗎福啉－4－基甲基－苯－1,2－二胺(483 mg)，其乃混合物中的主要組成份。
1D. 5－嗎福啉－4－基甲基－2－(4－硝基－1H－吡唑－3－基)－1H－苯並咪唑的合成
在周溫下，將4－嗎福啉－4－基甲基－苯－1,2－二胺(2.30 g，11.1 mmol)、4－硝基－1H－吡唑－3－羧酸(1.57 g，10.0 mmol)、EDC(2.13 g，11.1 mmol)以及HOBt(1.50 g，11.1 mmol)於無水DMF(25 ml)所形成的混合物攪拌24小時。於真空中，將該混合物濃縮，並且將所得到的殘留物溶於乙酸(40 ml)中且予以加熱回流3小時。於真空中，將溶劑去除並且利用快速層柱層析法(用0－20%於乙酸乙酯內的甲醇洗提)，將所得到的殘留物純化，可得到呈黃色固體的5－嗎福啉－4－基甲基－2－(4－硝基－1H－吡唑－3－基)－1H－苯並咪唑(1.0 g，61%)。(LC/MS：Rt 1.83，[M＋H]＋ 329)。
1E. 3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基胺的合成
在氮氣氛中，將載於碳上的鈀(10%，0.8 g)添加至5－嗎福啉－4－基甲基－2－(4－硝基－1H－吡唑－3－基)－1H－苯並咪唑(0.82 g，2.5 mmol)於DMF(30 ml)所形成的溶液中。於氫氣氛下，將該混合物搖晃4小時，然後，令其過濾通過矽藻土，用甲醇清洗。於真空中，將濾液濃縮，而得到呈棕色固體的3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基胺(530 mg，71%)。(LC/MS：Rt 1.94，[M＋H]＋ 299)。
1F. 5－氰基－2－甲氧基－苯甲酸的合成
將甲基碘(0.7 ml，5.6 mmol)添加至2－羥基－5－氰基－苯甲酸甲酯(2 g，5.6 mmol)、K2 CO3 (4.68 g，16.8 mmol)於丙酮(50 ml)所形成的混合物中。在65℃下，將該反應液加熱一整夜，而導致一固體的形成；趁熱過濾出該固體，並且用丙酮予以清洗，而得到5－氰基－2－甲氧基－苯甲酸甲酯(0.45 g)。將該粗製的產物溶於THF(5 ml)中，然後，用LiOH(0.108 g，0.26 mmol)(於5 ml水中)予以處理，並且於室溫下，予以攪拌一整夜。用2M HCl將該反應液酸化並且用乙酸乙酯(x2)予以萃取。將有機的部分乾燥(硫酸鎂)，並且於真空中予以濃縮，而得到5－氰基－2－甲氧基－苯甲酸(0.277 g)。(LC/MS酸性：Rt 2.92，[M＋H]＋ 178)。
1G. 5－氰基－2－甲氧基－N－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－苄醯胺的合成(醯基氯方法)
將5－氰基－苯甲酸(實施例1F)(40 mg，0.22 mmol)溶解於DCM(5 ml)中，並且逐滴地添加草醯氯(34.4 g，0.264 mmol)，然後添加DMF(1滴)。在周溫下，將該反應混合物攪拌1小時，於真空下濃縮，然後，用甲苯(x2)進行再蒸發。在0℃下，攪拌3－(5－嗎福啉－4－基甲基－lH－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基胺(100 mg，o.33 mmol)、5－氰基－2－甲氧基－苄醯氯以及二異丙基乙基胺(1.83 μ l，0.9 mmol)於THF(5 ml)所形成的混合物，然後，令其於2小時期間溫熱至室溫。於真空中，將該反應混合物濃縮。利用快速層柱層析法(SiO2 ，5－7%甲醇－DCM)，將所得到的殘留物純化，而得到5－氰基－2－甲氧基－N－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－苄醯胺(12 mg)。(LC/MS酸性：Rt 2.02分鐘[M－H]＋ 458)。
實施例2
6－甲基－咪唑並[2.1－b]噻唑－5－羧酸[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－醯胺的合成
在80℃下，將6－甲基－咪唑並[2.1－b]噻唑－5－羧酸(Bionet)(61 mg，0.33 mmol)、3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基胺(100 mg，0.33 mmol)、EDC(77 mg，0.39 mmol)及HOAt(54 mg，0.39 mmol)的混合物置於DMF(3 ml)中攪拌1小時，然後，在周溫下，予以攪拌20小時。在真空中，將該混合物濃縮，並且令殘留物分溶於乙酸乙酯以及飽和的碳酸氫鈉。用鹽水清洗有機的部分，予以乾燥(硫酸鎂)並且於真空中進行濃縮。利用製備型LC/MS，將所得到的殘留物純化，而得到6－甲基－咪唑並[2.1－b]噻唑－5－羧酸[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－醯胺(29 mg)。(LC/MS鹼性：Rt 2.56[M＋H]＋ 463)。
實施例3
2－氰基－N－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－乙醯胺的合成
在25℃下，將氰基乙酸(23 mg，0.28 mmol)、3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基胺(70%，100 mg，0.23 mmol)、TBTU(89 mg，0.28 mmol)以及DMF(2 ml)的混合物攪拌一整夜。然後，於真空中，將該混合物蒸發。進行快速層析(以DCM－6%甲醇/DCM洗提)，可得到呈黃色固體的2－氰基－N－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－乙醯胺(65 mg，77%)。(LC/MS(酸性方法/最終產物)：Rt 4.61，[M＋H]＋ 366)。
實施例4
2－氰基－2－環丙基－N－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－乙醯胺4A.氰基－環丙基－乙酸的合成
將NaOH(3.26 ml，3.26 mmol)添加至氰基－環丙基－乙酸乙酯(0.5 g，3.26 mmol)於THF(15 ml)所形成的溶液中。於25℃下攪拌4小時後，於真空中，將該反應混合物蒸發，將其再溶於水(20 ml)中並且藉由添加1N HCl溶液(3.26 ml)，予以中和。然後，用乙酸乙酯(3×20 ml)萃取該混合物並且將萃出物合併，在真空中，將經過硫酸鈉乾燥的有機物蒸發，可得到呈澄清油狀物的不純氰基－環丙基－乙酸。該物質無需進一步純化，即可用於實施例4B的製備。
4B. 2－氰基－2－環丙基－N－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－乙醯胺的合成
根據實施例3所記載的方法，令實施例4A的產物與3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基胺反應，但是，令所得到的粗製產物分溶於DCM及飽和的碳酸氫鈉水溶液中，然後，藉由用乙醚所進行的研製，於以純化。LC/MS(酸性方法)Rt 1.79[M＋H]＋ 406。
實施例5－14
藉由依照實施例1、2及3的方法(有修改的部分示於下表)，製備得實施例5－14的化合物。
實施例15
N－[3－(5,6－二甲氧基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－消旋－2－嗎福啉甲醯胺－三氟乙酸鹽的合成15A. 5,6－二甲氧基－2－(4－硝基－1H－吡唑－3－基)－1H－苯並咪唑的合成
將4－硝基－1H－吡唑－3－羧酸(3.63 g，23.09 mmol)及4,5－二甲氧基－苯－1,2－二胺二氫氯化物(5.06 g，20.99 mmol)，添加至EDC(4.81 g，25 mmol)、HOBt(3.40 g，25 mmol)以及三乙胺(4.67 g，46 mmol)於DMF(100 mg)所形成的溶液中，並且在室溫下，將該混合物攪拌一整夜。於真空中，將溶劑移除並且令所得到的固體分溶於乙酸乙酯(50 ml)及飽和的碳酸氫鈉水溶液(50 ml)中。有沉澱物形成並且利用過濾法，予以移除。先後用水及乙醚清洗濾液，然後令其與甲醇及甲苯共沸蒸餾，而得到4－硝基－1H－吡唑－3－羧酸(2－胺基－4,5－二甲氧基－苯基)－醯胺(2.35 g，36 %)。將4－硝基－1H－吡唑－3－羧酸(2－胺基－4,5－二甲氧基－苯基)－醯胺(2.35 g，7.65 mmol)溶於乙酸(150 ml)並且在150℃下回流5小時。讓該溶液冷卻並且於真空中，將溶劑移除。令結果所得到的固體分溶於乙酸乙酯(25 ml)及鹽水(25 ml)中。分離出有機層，予以乾燥(硫酸鎂)、過濾並且於真空中，將溶劑移除，而得到5,6－二甲氧基－2－(4－硝基－1H－吡唑－3－基)－1H－苯並咪唑(2.08 g，94%)。
15B. 3－(5,6－二甲氧基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基胺的合成
在室溫及室內壓力下，將5,6－二甲氧基－2－(4－硝基－1H－吡唑－3－基)－1H－苯並咪唑(2.08 g，7.2 mmol)及10%載於碳上的鈀(200 mg)於乙醇(150 ml)及DMF(50 ml)所形成的混合物氫化一整夜。令該反應混合物過濾通過矽藻土並且於真空中，將溶劑移除。令所得到的固體與甲醇及甲苯共沸蒸餾，並且於真空中，將溶劑移除。利用快速層析法(先後用DCM：MeOH：乙酸：水(120：18：3：2)[DMAW 120]以及DCM：MeOH：乙酸：水(90：18：3：2)[DMAW 90]洗提)，將粗製的物質純化。將產物級份合併，並且於真空中，將溶劑移除，可得到3－(5,6－二甲氧基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基胺(~1g，53%)。
15C. N－[3－(5,6－二甲氧基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－消旋－4－BOC－2－嗎福啉甲醯胺的合成
將3－(5,6－二甲氧基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基胺(117 mg，0.45 mmol)(實施例15B)以及(消旋)－BOC－2－羧基嗎福啉(125 mg，0.54 mmol)，添加至EDC(125 mg，0.54 mmol)及HOAt(74 mg，0.54 mmol)於DMF(2 ml)所形成的溶液中，並且在室溫下，將該混合物攪拌一整夜。然後，令該混合物分溶於乙酸乙酯及水中。然後，依序用飽和的碳酸氫鈉水溶液、鹽水清洗有機層，然後，予以乾燥(硫酸鎂)。在真空中，將該溶液蒸發至乾，並且利用快速層柱層析法[SiO2 ，梯度洗提：乙酸乙酯－己烷類(1：1)－乙酸乙酯－甲醇(80：20)]，將所得到的殘留物純化，而得到呈無色固體的N－[3－(5,6－二甲氧基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－消旋－4－BOC－2－嗎福啉甲醯胺(65 mg)。(LC/MS(酸性方法)：Rt 2.65分鐘，[M＋H]＋ 473)。
15D. N－[3－(5,6－二甲氧基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－消旋－2－嗎福啉甲醯胺－三氟乙酸鹽的合成
將N－[3－(5,6－二甲氧基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－消旋－4－BOC－2－嗎福啉甲醯胺(65 mg，0.14 mmol)以及甲氧苯(60 μ l，0.56 mmol)溶解於三氟乙酸及二氯甲烷的混合物(1：1，2 ml)。於室溫下待了3小時後，將該混合物蒸發至乾，可得到呈無色固體的N－[3－(5,6－二甲氧基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－消旋－2－嗎福啉甲醯胺－三氟乙酸鹽(73 mg)。(LC/MS(酸性方法)：Rt 1.42分鐘，[M－H＋ ]－ 371。
實施例16
N－[3－(5,6－二甲氧基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－消旋－4－異丙基－2－嗎福啉甲醯胺的合成
將2－碘基丙烷(17 μ l，0.15 mmol)添加至在MeCN(1 ml)內的N－[3－(5,6－二甲氧基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－消旋－2－嗎福啉甲醯胺－三氟乙酸鹽(實施例15D)(34 mg，0.07 mmol)以及K2 CO3 (20 mg，0.14 mmol)。在80℃下，將該混合物攪拌大約48小時，然後，將該混合物濃縮並且用快速層析法[SiO2 ，梯度洗提：DCM：MeOH(98：2)至DCM：MeOH：濃的含水NH3 (90：10：1)]，將殘留物純化，而得到呈無色膠狀物的N－[3－(5,6－二甲氧基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－消旋－4－異丙基－2－嗎福啉甲醯胺(12 mg)。LC/MS(鹼性方法)：Rt 2.52分鐘[M＋H]＋ 415。
實施例17
N－[3－(5,6－二甲氧基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－消旋－1－甲基－哌啶－3－甲醯胺的合成
將TBTU(97 mg，0.30 mmol)，添加至3－(5,6－二甲氧基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基胺(65 mg，0.25 mmol)(實施例15B)、(消旋)－1－甲基－哌啶－3－羧酸－氫氯酸鹽(50 mg，0.27 mmol)及異丙基乙基胺(50 μ l，0.27 mmol)於DMF(1 ml)所形成的溶液。在室溫下，將該混合物攪拌大約16小時，然後，添加1N含水的氫氧化鈉(1 ml)，並且將該混合物再攪拌另外一小時。然後。在真空中，將該混合物蒸發至乾，並且利用快速層柱層析法[SiO2 ，洗提梯度：DCM：MeOH(98：2)至DCM：MeOH：濃的含水NH3 (70：30：3)]，將所得到的殘留物純化，而得到呈無色膠狀物的N－[3－(5,6－二甲氧基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－消旋－1－甲基－哌啶－3－甲醯胺(20 mg)。LC/MS(鹼性方法)：Rt 2.35分鐘，(M＋H)＋ 385。
實施例18
3－氯基－N－(5,6－二甲氧基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基－5－(4－甲基－哌啶－1－基)－苄醯胺的合成18A. 3－氯基－5－(4－甲基－六氫吡嗪－1－基)－苄腈的合成
將5－氟基－3－氯基－苄腈(1 g，6.4 mmol)溶於DMSO(20 ml)中，接著添加K2 CO3 (1.3 g，9.5 mmol)及1－甲基六氫吡嗪(1.4 ml，12.8 mmol)。在80℃下，將該反應混合物加熱20小時。將乙醚添加至該粗製物(10 ml)中，然後，用1N HCl予以酸化。由粗製的反應混合物過濾出沉澱物，而得到呈白色固體的3－氯基－5－(4－甲基－六氫吡嗪－1－基)－苄腈(1.4 g，產率93%)。LC/MS：Rt 1.83[M＋H]＋ 236，酸性方法。
18B. 3－氯基－5－(4－甲基－六氫吡嗪－1－基)－苯甲酸的合成
將2M NaOH(20 ml)添加至溶於乙醇(10 ml)的3－氯基－5－(4－甲基－六氫吡嗪－1－基)－苄腈(1.4 g，5.9 mmol)，並且將該反應混合物加熱回流20小時。於真空中，將該混合物濃縮，並且用1N HCl，將所得到的粗製產物酸化至pH6，並且令其分溶於乙酸乙酯及水中。在真空中，將有機層蒸發至乾，可得到0.7g呈白色固體的標題化合物(LC/MS：Rt 1.67，[M＋H]＋ 256，酸性方法)。
18C.[3－氯基－N－[3－(5,6－二甲氧基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－5－(4－甲基－六氫吡嗪－1－基)－苄醯胺的合成
依照與實施例15C類似的方式，來製造此化合物，但是用3－氯基－5－(4－甲基－六氫吡嗪－1－基)－苯甲酸(200 mg，0.78 mmol)作為取代實施例15C之(消旋)－BOC－2－羧酸嗎福啉的藥劑。利用快速層柱層析法[SiO2 ，用DMAW240－90洗提]，將粗製產物純化，而得到92m g(產率25%)呈淺棕色固體的標題化合物(LC/MS：Rt 2.07[M＋H]＋ 496)。
實施例19－21
藉由依照實施例15所陳述的步驟(有修改的部分已指出)，製備得實施例19－1的化合物。
實施例22
5－氯基－2－甲氧基－N－{3－[5－(4－甲基－六氫吡嗪－1－基甲基)－1H－苯並咪唑－2－基]－1H－吡唑－4－基}－苄醯胺的合成22A.(3,4－二硝基苯基)－(4－甲基六氫吡嗪－1－基)－甲酮的合成
在SOCl2 (160 ml)中，將3,4－二硝基苯甲酸(50 g，0.24 mol)加熱回流6小時。然後，在真空中，將該混合物蒸發至乾。將該產物溶於THF中並且予以冷卻至5℃。於該溶液中，添加N－甲基六氫吡嗪(26.2 ml，0.24 mol)及Et3 N(42 ml)於THF(50 ml)所形成的溶液。於室溫下攪拌一整夜後，將該溶液倒入水中(1.5L)，並且在大約5℃下，予以攪拌0.5小時。收集所產生的固體沉澱物，並且予以乾燥，而得到呈黃色固體的(3,4－二硝基苯基)－(4－甲基吡嗪－1－基)－甲酮(40 g)。
22B.1－(3,4－二胺基苄基)－4－甲基六氫吡嗪的合成
將粉末狀的NaBH4 添加至(3,4－二硝基苯基)－(4－甲基六氫吡嗪－1－基)－甲酮(12.2 g，0.041 mol)於THF所形成的冷卻溶液(5℃)，接著在將溫度維持在低於5℃的情況下，逐滴地添加BF3 .OEt2 。令該混合物在2小時的期間，冷卻至室溫，然後，在室溫下，再予以攪拌2小時。然後，小心地將甲醇添加至該混合物中(會造成冒泡現象)，持續攪拌10分鐘，然後，將該混合物濃縮。令所得到的殘留物分溶於乙酸乙酯及飽和的碳酸氫鈉水溶液中。用水、鹽水清洗有機層，然後，予以乾燥(硫酸鎂)。於真空中，將該溶液蒸發並且利用快速層析法[SiO2 ，洗提梯度：DCM：MeOH(98：2)至DCM：MeOH：濃的含水NH3 (90：10：1)]，將所得到的殘留物純化，而得到一橘色晶狀固體(3.7 g)。自甲醇再結晶析出後，可得到呈橘色晶狀固體的1－(3,4－二硝基苄基)－4－甲基六氫吡嗪(1 g)。
22C. 1－(3,4－二胺基苄基)－4－甲基六氫吡嗪的合成
將1－(3,4－二硝基苄基)－4－甲基六氫吡嗪(1 g)溶於DMF：MeOH(1：1，20 ml)中，並且在氫氣氛下，令其與10% Pd/C(50 mg)一起攪動6小時。然後，將該混合物過濾並且予以蒸發，而得到一深色固體，其可立即使用，無需任何進一步的純化。
22D. 5－氯基－2－甲氧基－N－{3－[5－(4－甲基－六氫吡嗪－1－基甲基)－1H－苯並咪唑－2－基]－1H－吡唑－4－基}－苄醯胺的合成
將4－(5－氯基－2－甲氧基－苄醯胺基)－1H－吡唑－3－羧酸(1.17 g)；該粗製的二胺，1－(3,4－二胺基苄基)－4－甲基六氫吡嗪(0.87 g)；以及TBTU(1.52 g)溶於DMF(15 ml)中，並且予以攪拌大約16小時。然後，將該混合物蒸發至乾，而得到一深色的固體。將該深色的固體溶於乙醇(4 ml)中，並且在80℃下，將該混合物加熱3小時。於真空中，將該反應混合物蒸發並且利用快速層析法(SiO2 ，以DMAW120洗提)，將所得到的殘留物純化，而得到呈二乙酸鹽形式的5－氯基－2－甲氧基－N－{3－[5－(4－甲基－六氫吡嗪－1－基甲基)－1H－苯並咪唑－2－基]－1H－吡唑－4－基}－苄醯胺(35 mg)。LC/MS(酸性方法/最終化合物)：Rt 6.63[M＋H]＋ 480。
實施例23
1－(2,6－二氟基苄基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的合成
對3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基胺(實施例1E)(100 mg，0.33 mmol)、以及(217 mg，1.34 mol)於THF(2 ml)所形成的混合物，進行15分鐘的微波照射(150℃，150W)。然後，添加2,6－二氟基苄胺(384 mg，2.68 mmol)，並且在相同的條件下，將該反應混合物照射另外的15分鐘。冷卻後，將該異質的混合物過濾，將濾液濃縮並且利用層柱層析法(SiO2 ，洗提梯度－DCM：MeOH：AcOH：H2 O(240：20：3：2)(DMAW240)至(120：18：3：2)(DMAW120))，將所得到的殘留物純化，而得到1－(2,6－二氟苄基)－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲(30 mg，19%)。(LC/MS酸性：Rt 1.84[M＋H]＋ 468)。
實施例24－34
藉由依照實施例23所陳述的通用方法(但是做了如下表所列的修正)，製備得實施例24至34的化合物。
實施例35
1－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－3－吡啶－3－基－脲的合成
將3－胺基吡啶(31.5 mg，0.33 mmol)、三乙胺(0.195 ml，1.32 mmol)於DCM(3 ml)的混合物冷卻至0℃，然後用三光氣(85 mg，0.28 mmol)予以處理。在周溫下，將該反應液攪拌1小時，然後，添加3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基胺(100 mg，0.33 mmol)並且在周溫下攪拌至反應完全為止。用2M氫氧化鈉(於甲醇中)處理該混合物30分鐘，然後，於真空中予以濃縮。利用快速層柱層析法[SiO2 ，2－20%甲醇/DCM]，將所得到的殘留物純化，然後，先後用DCM及乙醚進行研製，而得到1－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－3－吡啶－3－基－脲(20 mg)。(LC/MS鹼性：Rt 2.29，[M＋H]＋ 419)。
實施例36
四氫－1,4－噻嗪－4－羧酸[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－醯胺的合成
在0℃下，將光氣(於20%甲苯中)(0.3 ml)添加至3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基胺(100 mg，0.33 mmol)於甲苯/DCM(1：1)混合物所形成的溶液中。在周溫下，將該反應液攪拌1小時，然後，藉由氮氣流，將過剩的光氣放出。添加四氫－1,4－噻嗪(35 mg，0.33 mmol)，並且在周溫下，將該反應液攪拌1小時，然後在60℃下攪拌1小時。然後，於真空中，將該混合物濃縮，並且利用製備型LC/MS，將所得到的殘留物純化，而得到四氫－1,4－噻嗪－4－羧酸[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－醯胺(LC/MS極性：Rt 2.58，[M＋H]＋ 428)。
實施例37
1－(4－氟苯基)－1－甲基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的合成
使用與實施例35所述者類似的程序，來製備標題化合物，但是用4－氟基－N－甲基苯胺取代3－胺基吡啶，並且反應係在50℃下進行2小時。自冷卻的反應混合物中，單離出呈沉澱物的粗製產物，然後，利用快速層柱層析法[SiO2 ，用DCM：MeOH：AcOH：水(240：20：3：2)洗提]，進行純化，可得到呈無色固體的1－(4－氟苯基)－1－甲基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲(3 mg)。(LC/MS酸性：Rt 2.12，[M＋H]＋ 450)。
實施例38－43
藉由依照實施例35及37所陳述的通用方法(但是做了如下表所列的修正)，製備得實施例38至43的化合物。
實施例44
1－(4－氟苯基)－N－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的合成
將4－氟苯基異氰酸酯添加至3－(5－嗎福啉－1H－吡唑－1－基胺)(實施例1E)(100 mg，0.33 mmol)(於2 ml THF中)，並且在室溫下，將該混合物攪拌約16小時。添加載於樹脂上的參胺(800 mg，4 mmol/g)，並且將該混合物再攪動4小時。利用過濾，將該樹脂去除，並且用1N KOH(2 ml，MeOH：THF：1：3)處理濾液，將該溶液攪拌大約16小時。令該混合物分溶於乙酸乙酯及水中。用乙酸乙酯進一步萃取水層，然後用鹽水清洗合併的有機部分，予以乾燥(硫酸鎂)並且予以蒸發至乾。將所得到的粗製固體溶於DCM且用己烷類予以研製，可得到由過濾收集到的固體。利用快速層柱層析法[SiO2 ，乙酸乙酯－甲醇(90：10)]，將該固體純化，可得到呈黃色固體之1－(4－氟苯基)－N－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲(30 mg，20%)。(LC/MS(酸性方法)：R1 2.01分鐘，[M－H]＋ 434)。
實施例45－56
藉由依照實施例44所陳述的通用方法(但是做了如下表所列的修正)，製備得實施例45至56的化合物。
實施例57－59
藉由依照實施例23所陳述的通用方法(但是做了如下表所列的修正)，製備得實施例57至59的化合物。
實施例60
1－(2,6－二氟苯基)－N－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲－氫氯酸鹽的合成60A.(3,4－二硝基苯基)－嗎福啉－4－基－甲酮的合成
將3,4－二硝基苯甲酸(1莫耳當量)以及亞磺醯氯(9.2莫耳當量)的混合物加熱回流6小時，予以冷卻至周溫並且藉由與甲苯共沸，以去除過量的亞磺醯氯。將所得到的殘留物納入THF(8體積)，然後，在0－5℃下，同時將嗎福啉(1.0莫耳當量)以及三乙胺(1.1莫耳當量)添加至該混合物中。在周溫下，將該混合物攪拌1小時，然後將其倒入水中(25體積)。將該混合物冷卻至3－7℃，並且令其靜置0.5小時，在該期間，產物會以沉澱形式產生。利用過濾法，來收集沉澱物，用水予以清洗並且予以乾燥，而得到呈黃色固體之(3,4－二硝基苯基)－嗎福啉－4－基－甲酮(75%)。1 H NMR(300 MHz，DMSO－d6 )δ 8.3(d，1H)，8.3(s，1H)，8.0(d，1H)，3.7－3.5(m，8H)。
60B. 4－(3,4－二硝基苄基)－嗎福啉的合成
在0℃下，將NaBH4 (2莫耳當量)添加至(3,4－二硝基苯基)－嗎福啉－4－基－甲酮(1莫耳當量)於無水四氫呋喃(THF)(25體積)所形成的混合物中，然後，逐滴地添加BF3 .Et2 O(1.01莫耳當量)，以便將溫度維持在0－5℃。然後，在周溫下，將該混合物攪拌3小時，接著，藉由添加甲醇，予以驟熄。然後，在真空中，將該混合物濃縮，令其分溶於乙酸乙酯及飽和的碳酸氫鈉水溶液。將混合物快速地攪拌30分鐘，然後，將各層分離。依序用水及鹽水清洗有機層，然後，於真空中進行濃縮。令產物自甲醇結晶析出，而得到4－(3,4－二硝基苄基)－嗎福啉(85 %)。(LC/MS(鹼性方法)：Rt 2.80，[M＋H]＋ 268)。
60C. 4－嗎福啉－4－基甲基－苯－1,2－二胺的合成
在將氫氣裝填入反應容器的同時，於0－5℃下，攪拌4－(3,4－二硝基苄基)－嗎福啉(1莫耳當量)以及5% Pd/C(0.05重量當量)於IMS(33體積)所形成的混合物。一邊攪拌一邊小心地將該混合物溫熱至15－20℃，直至反應完全為止(<24小時)。將該混合物過濾並且將濾液蒸發至乾，可得到4－嗎福啉－4－基甲基－苯－1,2－二胺(90%)。該物質係立即用於下一個步驟。(LC/MS(鹼性方法)：Rt 1.64，[M－N(CH2 CH2 )2 O－ ]＋ 121)。
60D. 5－嗎福啉－4－基甲基－2－(4－硝基－1H－吡唑－3－基)－1H－苯並咪唑的合成
將4－嗎福啉－4－基甲基－苯－1,2－二胺(1莫耳當量)以及4－硝基－1H－吡唑－3－羧酸(1莫耳當量)溶於二甲基甲醯胺(DMF)(10體積)。添加四氟硼酸O－(苯並三唑－1－基)－N,N,N’,N’－四甲基脲鹽(TBTU)(1.2莫耳當量)，並且在周溫下，將該混合物攪拌24小時。於真空中，將該混合物濃縮到再也沒有溶劑被蒸餾出為止。然後，將所得到的殘留物溶解於冰乙酸(10體積)並且於65℃下加熱~12小時。於真空中，將該混合物濃縮，然後，將其溶於75℃下的水(6體積)。在2小時期間，令所得到的黑色溶液冷卻至0－5℃，在這期間，會有固體形成。利用過濾法，將固體去除並且用乙酸乙酯(4體積)及四氫呋喃(2體積)稀釋含水的濾液。將固體碳酸氫鈉緩慢地添加至已攪拌過混合物中，直到未觀察到進一步的冒泡且pH達到6.8為止。然後，將該混合物攪拌至觀察到沉澱析出現像為止。令該混合物於0－5℃下靜置2小時後，利用過濾法，收集固體並且用水(2體積)以及乙酸乙酯(2體積)予以清洗，並且進行乾燥，可得到呈棕色固體的5－嗎福啉－4－基甲基－2－(4－硝基－1H－吡唑－3－基)－1H－苯並咪唑(40%)。(LC/MS(鹼性方法)：Rt 1.93，[M＋H＋ ]－ 327)。
60E. 3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基胺的合成
在氮氣氛下，將5% Pd/C(0.1重量當量)添加至5－嗎福啉－4－基甲基－2－(4－硝基－1H－吡唑－3－基)－1H－苯並咪唑(1莫耳當量)(於36體積的DMF中)。將氫氣裝填入反應器中並且在周溫下，攪拌24小時。然後，令該混合物過濾通過矽藻土，用甲醇清洗。於真空中，將濾液濃縮，可得到呈棕色固體的3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基胺(90%)。LC/MS(鹼性方法)：Rt 1.94，[M－H＋ ]－ 297。該產物無需任何進一步純化即可使用。
60E. 1－(2,6－二氟苯基)－N－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲－氫氯酸鹽的合成
在0－5℃下，於攪拌的同時，將2,6－二氟苯基異氰酸酯(1.3莫耳當量)添加至3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基胺(1莫耳當量)於THF(10體積)所形成的混合物中。然後，在周溫下，將該混合物攪拌16小時，接著用1M含水KOH(4體積)處理該混合物。在多攪拌了2小時之後，於真空中，將該混合物濃縮並且令其分溶於乙酸乙酯及飽和的碳酸氫鈉水溶液中。用飽和的鹽水清洗有機層，予以乾燥(硫酸鎂)、蒸發至乾，然後，利用快速層柱層析法[SiO2 ，洗提梯度CH2 Cl2 －MeOH(98：2)－(90：10)]，將所得到的殘留物純化，而得到1－(2,6－二氟苯基)－N－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲。
60G.自由鹼的再結晶及特性化在實施例60E內所述之在氧化矽上所進行的層析之後，將產物溶於最少量的乙酸乙酯中，予以過濾並且令其冷卻。如此所得到的自由鹼係微細的晶狀固體。
化合物1－(2,6－二氟苯基)－N－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲具有下列物化參數。
pKa值－3.42、6.92 & 10.97 logP－3.24 log P離 子 －0.36 logD(pH＝6)2.27 (pH＝6.5)2.68(pH＝7.4)3.11
60H.氫氯酸鹽的形成將產物溶於乙酸乙酯中並且用過量的飽和HCl(於乙醚中)予以處理。利用過濾法，收集所得到的沉澱，用乙醚予以清洗並且進行乾燥，可得到成無色固體的1－(2,6－二氟苯基)－N－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲－氫氯酸鹽(59%)。(LC/MS(酸性方法)：Rt 1.80，[M＋H]＋ 454)。
用其他的酸類(例如，DL乳酸、乙烷磺酸以及甲烷磺酸)取代氫氯酸並且視需要改變溶劑的組成，可製備得1－(2,6－二氟苯基)－N－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的其他鹽類。
60J.自由鹼與氫氯酸鹽之溶解度比較測定自由鹼及氫氯酸鹽的溶解度並且進行比較。經發現，自由鹼在pH 7.4(於經緩衝的水溶液)的溶解度<0.001 mg/ml，而氫氯酸鹽在pH 7.1(於經緩衝的水溶液中)的溶解度為0.093 mg/ml。因此，就溶解度來看，氫氯酸鹽較自由鹼具有顯著的優點。
實施例61
1－(2,6－二氟苯基)－N－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲之酸加成鹽類的溶解度的測定藉由下文所述的程序，令1－(2,6－二氟苯基)－N－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的自由鹼形式與各種酸類併合，以評估結果所得到之加成鹽類的溶解度。
程序
將自由鹼(59 mg，0.13 mmol)及水(0.59 ml)添加至管形瓶。將適當的酸(1當量，0.13 mmol)添加至該管形瓶內並且在周溫下，將該管形瓶搖晃16小時。然後，用肉眼來檢視該管形瓶。若觀察到均質的溶液，則終止實驗，且可斷定如是所形成的鹽類的溶解度大於100 mg/ml。
若尚有固體餘留下來，則添加另外0.59 ml的水並且將該管形瓶搖晃4小時。若是在此階段均質的溶液形成了，則可斷定該鹽的溶解度大於50 mg/ml。
若在此時刻尚餘留有固體，則添加另外1.18 ml的水並且在周溫下，搖晃該管形瓶。若是在此刻，仍有固體餘留下來，則添加另外1.18 ml的水並且在周溫下，搖晃該管形瓶。若是此一操作產生了均質溶液，則可斷定溶解度大25 mg/ml。若還是有固體留下來，則可斷定該鹽的溶解度係小於25 mg/ml。
可令鹽溶液通過Strata－NH2 層柱，來回收自由鹼。
此實驗的結果示於下表。
根據表中所列的結果，可斷定甲烷磺酸鹽、乙烷磺酸鹽以及DL－乳酸鹽應證明為特別有用於製備含水的液體組成物，例如，用於經腸投藥者。
實施例62
1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－尿之自由鹼鹽類藉由下文所述的方法或與其類似的方法，可單離出呈自由鹼或酸加成鹽形式之實施例24化合物，1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲。
自由鹼
在氧化矽上所進行的矽膠層析法之後(參見實施例24)，將實施例24的產物溶於最小體積的熱甲醇中，予以過濾並且令其冷卻。在~16小時後，可收集得呈無色晶狀固體的產物。
氫氯酸鹽(一般性程序)
在氧化矽上所進行的矽膠層析法之後，將產物(2.05 g)溶解於甲醇：乙酸乙酯(1：10；100 ml)，並且用在二噁烷中的4N HCl(1.1莫耳當量)予以處理。利用過濾法，來收集結果所得到的沉澱物並且予以乾燥，可得到1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲氫氯酸鹽(1.5 g)。將該產物溶於最少量的甲醇中，然後用乙醚予以研製，直到雲狀花紋持續了數秒為止。在冷卻了一整夜之後，可收集得呈無色晶狀固體的產物。
甲烷磺酸鹽
採用前述之一般性程序，但是用甲烷磺酸鹽取代氫氯酸鹽，可收集得成無色晶狀固體的產物。
其他鹽類
可預見其他受注目之鹽類可藉由前述一般性程序製備而得。
實施例63
1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲之自由鹼及鹽類之溶解度的測定藉由下文所述的程序，令實施例24化合物，1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲與各種酸類併合，以評估結果所得到之加成鹽類的溶解度。
程序
將實施例24化合物的自由鹼(50mg，0.131mmol)及水(0.5 ml)添加至管形瓶。將適當的酸(1當量，0.131 mmol)添加至該管形瓶內並且在周溫下，將該管形瓶搖晃14－16小時。然後，用肉眼來檢視該管形瓶。若觀察到均質的溶液，則終止實驗，且可斷定如是所形成的鹽類的溶解度大於100 mg/ml。
若尚有固體餘留下來，則添加另外0.5 ml的水並且將該管形瓶搖晃4小時。若是在此階段均質的溶液形成了，則可斷定該鹽的溶解度大於50 mg/ml。
若在此時刻尚餘留有固體，則添加另外1 ml的水並且在周溫下，搖晃該管形瓶。若是在此刻，仍有固體餘留下來，則添加另外1 ml的水並且在周溫下，搖晃該管形瓶。若是此一操作產生了均質溶液，則可斷定溶解度大25 mg/ml。若還是有固體留下來，則可斷定該鹽的溶解度係小於25 mg/ml。
可令鹽溶液通過Strata－NH2 層柱，來回收自由鹼。
此實驗的結果示於下表。
根據表中所列的結果，可斷定乙酸鹽、甲烷磺酸鹽、乙烷磺酸鹽、DL－乳酸鹽、己二酸鹽、D－葡萄糖醛酸鹽、D－葡萄糖酸鹽以及氫氯酸鹽應證明為特別有用於製備含水的液體組成物，例如，用於經腸投藥者。
由目前所收集到的數據，可想見本發明之化合物以及尤其是1－環丙基－3－[3－(5－嗎襠啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲(尤指L－乳酸鹽)具有許多優於先前技藝化合物的優點。詳而言之，如是優點包含－或多個下文所列出者：．水溶液內的溶解度獲改善；．物化性質較佳，尤指低logD；．對於P450酶之感受性差異；．藥物的新陳代謝及藥物動力性質獲改善；．安定性獲改善，例如，改善的儲存期限及/或改善的熱安定性；．劑量的需要降低；．對於治療標靶(尤指奧若拉A及B)的效力獲改善；．在增生以及群落分析內的細胞活性獲改善；．抗癌活性獲改善；以及．治療指數獲改善。
實施例64
1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲乳酸鹽的製備將L－乳酸(166 mg，1.85 mmol)添加至1－環丙基－3－[3－[5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基]－1H－吡唑－4－基]－脲(0.7 g，1.83 mmol)於乙酸乙酯－甲醇內所形成的溶液。在周溫下，攪拌該混合物，然後，在真空下予以濃縮。利用自沸騰的乙醇(20 mL)再結晶析出，將所得到固體純化，在乾燥後可得到1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲，L－乳酸鹽(0.48 g)。
實施例65
1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲之L－乳酸鹽的合成1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲之L－乳酸鹽可藉由下列流程所示的合成途徑，製備而得。
階段1：(3,4－二硝基苯基)－嗎福啉－4－基－甲酮的合成
用亞磺醯氯(4.5 mL，62 mmol，1.3當量)處理3,4－二硝基苯甲酸(10 g，47 mmol)及DMF(0.1 mL)於THF(100 mL)所形成的溶液中，然後，予以加熱至回流2.5小時。於冰上，將該混合物冷卻，然後在20分鐘期間，添加三乙胺(10 mL，71 mmol，1.1當量)，並且將內部溫度維持<5℃。在15分鐘期間，將嗎福啉(6.2 mL，71 mmol，1.5當量)添加至所得到的濃稠黃色懸浮液中，將內部溫度維持<10℃。移除冰浴並且令該混合物溫熱至室溫。在15分鐘後，添加另外一份的嗎福啉(1 mL，11 mmol，0.24當量)並且將該混合物攪拌一整夜。用水(250 mL)稀釋該混合物並且於冰上予以冷卻。抽氣過濾出一米黃色的固體，用另一份冰水(25 mL)予以清洗並且於真空中乾燥，可得到標題化合物(12.7 g，96%)。
階段2：4－(3,4－二硝基苄基)－嗎福啉的合成
將硼氫化鈉(3.36 g，89 mmol，2.1當量)磨碎，置於經過氮沖洗的燒瓶內並且懸浮於THF(120 mL)中。在冷卻至~0℃後，經由注射器，添加三氟化硼乙醚化物(11.3 mL，89 mmol，2.1當量)。此一反應係溫和放熱的且可觀察到一些氫氣的冒出。一次添加呈固態的4－(3,4－二硝基苄基)嗎福啉(11.91 g，42 mmol，1.0當量)，用額外的THF(20 mL)清洗反應器。移除冰浴並且在室溫下，將該懸浮液攪拌3小時，然後，再次於冰中冷卻。小心地添加甲醇(100 mL)(有氫氣冒出)，然後，使該混合物回流1小時。於真空中，將該混合物濃縮，然後，令殘留物分溶於乙酸乙酯(100 mL)及1：1飽和的碳酸氫鈉溶液/水(100 mL)。分離出有機相，先後用水(50 mL)及鹽水(100 mL)予以清洗，並且予以乾燥(硫酸鎂)。用乙酸乙酯(50 mL)，將最初的碳酸氫鹽洗液萃取第二次，然後，以與用於第一次萃取者相同的含水洗液，清洗該萃出物，然後，予以乾燥(硫酸鎂)，併合及濃縮後，可得到10.97 g粗製物。自甲醇(45 mL，10 mL洗液)再結晶析出後，可得到標題化合物(9.34 g，83%)。
階段3：4－嗎福啉－4－基甲基－苯－1,2－二胺的合成
將4－(3,4－二硝基苄基)嗎福啉(21 g，101 mmol)懸浮於乙醇(0.9 L)中，並且用氮洗淨反應器。將載於炭上的10%鈀(1.05)懸浮於乙醇(25 mL)中並且將其添加至基質中。於冰中，將該混合物冷卻，然後，將氮氣氛改變為氫氣氛。讓該混合物溫熱至15－20℃並且在周圍壓力下，持續氫化2天。用氮氣洗淨反應器，然後，令該混合物過濾通過矽藻土，逐份地用乙醇(0.3 L)予以清洗。濃縮後可得到標題化合物(15.8 g，97%)。
階段4：4－硝基－1H－吡唑－3－羧酸甲酯的合成
將4－硝基－1H－吡唑－3－羧酸(1.117 Kg，7.11 mol，1重量)以及甲醇(8.950L，8體積)裝入配備有數位溫度計以及攪拌器的20L反應器內。在氮氣氛下，攪拌該反應混合物，予以冷卻至0－5℃，在180分鐘期間，添加亞磺醯氯(0.581L，8.0mol，0.52體積)，並且令結果所產生的混合物溫熱至18至22℃且在該溫度下攪拌一整夜，之後，1 H NMR分析(d6 －DMSO)顯示反應已完成。在減壓、40－45℃下，將該反應混合物濃縮，用甲苯處理所得到的殘留物並且於減壓、40－45℃下，再次濃縮(3×2.250L，3×2體積)，而得到呈非純白色固體的4－硝基－1H－吡唑－3－羧酸甲酯(1.210Kg，99.5% th)。
階段5：4－胺基－1H－吡唑－3－羧酸甲酯的合成
於氮氣下，將載於炭上的鈀(10%濕糊狀物，0.179Kg，0.14重量)裝入配備有數位溫度計以及攪拌器的20L反應器中。在另外一個反應器中，將4－硝基－1H－吡唑－3－羧酸甲酯(1.210Kg，7.07 mol，1重量)於乙醇(12.10L，10體積)所形成的漿狀物溫熱至30－35℃，以執行溶解並且將所形成的溶液添加至在氮氣下的觸媒。在氮－氫洗淨順序之後，導入氫氣氛並且將該反應混合物維持在28－30℃下，直到藉由1 H NMR分析(d6 －DMSO)觀察到反應完成為止(5至10小時)。在一洗淨循環之後，將氮氣下的反應混合物過濾並且在減壓下，將液體濃縮，而得到4－胺基－1H－吡唑－3－羧酸甲酯(0.987Kg，98.9% th)。
階段6：4－第三丁氧羰基胺基－1H－吡唑－3－羧酸的合成
將2M氫氧化鈉水溶液(213 mL，426 mmol)添加至4－胺基－1H－吡唑－3－羧酸甲酯(50.0 g，355 mmol)於二噁烷(500 mL)所形成的混合物中，將該混合物加熱至50℃並且予以攪拌5小時。然後，將(BOC)2 O(81.4 g，373 mmol)添加至該混合物中，用二噁烷(100 mL)漂洗並且在50℃下，將該混合物再加熱5小時，然後，在周溫下予以攪拌14小時。於真空中，將二噁烷去除並且添加水(1L)。用濃氫氯酸水溶液，使該混合物的pH為~2，並且利用過濾法，來收集所形成的固體並且在濾器上予以乾燥。該固體透過與甲苯(x3)共沸以及在真空烘箱內乾燥，獲進一步乾燥，而得到呈紫羅蘭色固體的4－第三丁氧羰基胺基－1H－吡唑－3－羧酸(70.0 g，87 %)。
階段7：[3－(2－胺基－4－嗎襠啉－4－基甲基－苯基胺甲醯基)－1H－吡唑－4－基]－胺甲酸第三丁酯的合成
在周溫下，將4－第三丁氧羰基胺基－1H－吡唑－3－羧酸(10.0 g，44.1 mmol)、4－嗎福啉－4－基甲基－苯－1,2－二胺(10.0 g，48.5 mmol)、EDC(10.14 g，52.9 mmol)及HOBt(7.15 g,52.9 mmol)於DMF(150 mL)所形成的混合物攪拌20小時，然後，於真空中去除大多數的溶劑。令所得到的殘留物分溶於乙酸乙酯(150 mL)及含水的碳酸氫鈉(150 mL)，分離出各層並且用鹽水清洗有機部分，令其經硫酸鎂乾燥並且於真空中進行濃縮，可得到呈棕色固體的[3－(2－胺基－4－嗎福啉－4－基甲基－苯基胺甲醯基)－1H－吡唑－4－基]－胺甲酸第三丁酯(17.6 g，96%)。LC/MS分析指出產物含有~15%之該二醯胺。這在1 H NMR內顯示出大約5%量。二醯胺係在後續的步驟中裂解。
階段8：3－(5－嗎福啉－4－甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基胺的合成
在85℃下，將[3－(2－胺基－4－嗎福啉－4－基甲基－苯基胺甲醯基)－1H－吡唑－4－基]－胺甲酸第三丁酯(12.0 g，28.8 mmol)及2M氫氯酸水溶液(50 mL)的混合物加熱14小時，然後，令其冷卻至周溫。小心地添加固態碳酸鈉，直至該混合物的pH為~8.5且溶液呈飽和為止。有一深色膠狀液體形成。令該混合物靜置並且傾析掉溶劑。將乙醇(60 mL)添加至剩餘的殘留物中，將該混合物加熱回流1小時，然後趁熱過濾，用乙醇(2×20 mL)清洗，以去除無機殘留物。於真空中，將濾液濃縮，而得到一玻璃狀固體，然後，將其置於乙醚(60 mL)中攪拌1小時並且利用過濾法，收集所得到之紫色固體並且於真空中予以乾燥，而得到3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基胺(6.8 g，80%，~90%純度)。
階段9：7－嗎福啉－4－基甲基－2,4－二氫－1,2,4,5a,10－五氮雜環戊[a]茀－5－酮的合成
將1,1’－碳基二咪唑(1.78 g，11 mmol)添加至在周溫下攪拌中之3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基胺(3.2 g，10.7 mmol)於無水THF(50 mL)所形成的混合物。將該混合物加熱回流14小時，然後，予以冷卻至周溫。利用過濾法，來收集所形成的固體，用THF(20 mL)予以清洗並且於真空中乾燥，可得到呈粉紅色固體的7－嗎福啉－4－基甲基－2,4－二氫－1,2,4,5a,10－五氮雜環戊[a]茀－5－酮(2.34 g，67%)。
階段10：1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的合成
將環丙胺(6.9 mL，99 mmol)添加至7－嗎福啉－4－基甲基－2,4－二氫－1,2,4,5a,10－五氮雜環戊[a]茀－5－酮(10.7 g，32.9 mmol)於NMP(65 mL)所形成的混合物中。在100℃下，將該混合物加熱5小時。LC/MS分析指示轉化為產物的轉化率為~75%，因此，添加另外一份環丙胺(2.3 mL，33 mmol)，在100℃下，將該混合物加熱4小時，然後予以冷卻至周溫。用水(100 mL)稀釋該混合物並且用乙酸乙酯(100 mL)予以萃取。用飽和的含水氯化銨(2 x 50 mL)以及鹽水(50 mL)清洗有機部分，然後，用乙酸乙酯(3 x 100 mL)再萃取含水部分。令合併的有機部分經硫酸鎂乾燥並且於真空中進行濃縮，可得到呈橘色玻璃狀固體之1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲(9.10 g)。
階段11：1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲，L－乳酸鹽的合成
將L－乳酸(2.25 g，25 mmol)添加至1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲(9.10 g，24 mmol)於乙酸乙酯－異丙醇(1：1，90 mL)所形成的溶液中。在周溫下，將該混合物攪拌24小時，然後，於減壓下，予以濃縮。使用甲苯(100 mL)以及乙醚(100 mL)，使所得到的殘留物成為連續的漿狀物，並且過濾收集所形成的固體且予以乾燥(8.04g)。
藉由自沸騰的異丙醇(200 mL)再結晶析出，將該固體純化，而得到呈米黃色固體之1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基－1H－吡唑－4－基)－脲，L－乳酸鹽(5.7 g)。
實施例66
階段1：(3,4－二硝基苯基)－嗎福啉－4－基－甲酮的製備
於氮氣下，將3,4－二硝基苯甲酸(1.000Kg，4.71mol，10重量)、四氫呋喃(10.00L，10.0體積)以及二甲基甲醯胺(0.010L，0.01體積)裝入燒瓶內。在20－30℃下，添加亞磺醯氯(0.450L，6.16mol，0.45體積)並且將該反應混合物加熱至65－70℃。1 H NMR分析(d6 －DMSO)測得反應已完成，通常反應會在3小時內完成。將反應混合物冷卻至0－5℃，並且在0－10℃下，添加三乙胺(1.25L，8.97mol，1.25體積)。在0－10℃下，將嗎福啉(0.62L，7.07 mmo1，0.62體積)加入該反應混合物中，並且在0－10℃下，將所得到的漿狀物攪拌30分鐘。用1 H NMR分析(d6 －DMSO)來測定反應是否完成。將該反應混合物溫熱至15－20℃，並且添加水(4.00L，4.0體積)。然後，在15－25℃下，將該混合物裝入含有水(21.00L，21.0體積)的40L長頸燒瓶(flange flask)內，以沉澱出產物。將燒瓶的內容物冷卻0－5℃並且在該溫度下老化1小時，並且利用過濾法來收集固體。用水(4×5.00L，4×5.0體積)清洗濾餅且經發現，最終洗液的pH為7。利用1 H NMR，來分析該濕濾餅，以確定三乙胺氫氯酸鹽的存在。在40－45℃、真空下，將該濾餅乾燥至KF水含量<0.2重量%為止，可得到呈黃色固體之(3,4－二硝基苯基)－嗎福啉－4－基－甲酮(1.286Kg，97.0%，KF 0.069重量%)。
階段2：4－(3,4－二硝基苄基)－嗎福啉的製備
在氮氣下，將(3,4－二硝基苯基)－嗎福啉－4－基－甲酮(0.750Kg，2.67 mol，1.0重量)及四氫呋喃(7.50L，10.0體積)裝入一燒瓶中並且予以冷卻至0－5℃。在0－5℃下，添加三氟化硼乙醚化物(0.713L，5.63 mol，0.95體積)，並且在該溫度下，將所得到的懸浮液攪拌15至30分鐘。在90至120分鐘期間，將硼氫化鈉(0.212Kg，5.60mol，0.282重量)分成6等份來添加。(在添加第一份後的10－15分鐘時，可觀察到遲延的放熱。一旦此放熱開始且反應混合物已再被冷卻，在10至15分鐘期間添加其他的份，讓反應物在添加之間冷卻)。在0－5℃下，將該反應混合物攪拌30分鐘。1 H NMR分析(d6 －DMSO)測得反應已完成。在0－10℃下，逐滴地添加甲醇(6.30L，8.4體積)，以驟熄反應混合物(快速地氣體冒出，有一些起泡現象)。在0－10℃下，將已驟熄的反應混合物攪拌25至35分鐘，然後予以溫熱至20－30℃，並且在該溫度下予以攪拌(放熱，在固體溶解的同時有氣體/乙醚冒出)，直到氣體的冒出減緩為止。將混合物加熱至65－70℃並且在該溫度下攪拌1小時。將混合物冷卻至30－40℃並且於40－45℃、真空下，進行濃縮，可得到呈黃色/橘色固體之粗製的4－(3,4－二硝基苄基)－嗎福啉(0.702Kg，98.4%)。
在氮氣下，將4－(3,4－二硝基苄基)－嗎福啉(2.815Kg，10.53 mol，1.0重量)以及甲醇(12.00L，4.3體積)裝入一燒瓶中，並且予以加熱至65－70℃。維持在該溫度下直到溶解完成為止。然後，將該混合物冷卻至0－5℃，並且於該溫度下老化1小時。利用過濾法，單離出固體。用甲醇(2×1.50L，2×0.50體積)清洗濾餅並且在35－35℃、真空下進行乾燥，可得到呈黃色固體的4－(3,4－二硝基苄基)－嗎福啉(2.353Kg，83.5%(基於投入階段2的物質)，總產率82.5%(基於所有投入階段1的物質))。
階段3：4－嗎福啉－4－基甲基－苯－1,2－二胺的製備
將4－(3,4－二硝基苄基)－嗎福啉(0.800Kg，2.99mol，1.0重量)以及乙醇(11.20L，14.0體積)裝入適當的燒瓶內並且在15－25℃下予以攪拌，並且進行真空/氮氣洗淨循環三次。在乙醇(0.80L，1.0體積)中，將載於碳上的鈀(10% Pd/C，50%濕糊狀物，0.040Kg，0.05重量(濕重))漿化並且將其添加至反應液中。將該混合物冷卻至10－20℃並且進行真空/氮氣洗淨循環三次。進行真空/氫氣洗淨循環三次並且在氫氣氛、10－20℃下，攪拌該反應液。1 H NMR分析(d6 －DMSO)測定出反應已完成，通常係14至20小時。進行真空/氮氣洗淨循環三次並且在氮氣下，令該反應混合物過濾通過玻璃纖維紙。用乙醇(3×0.80L，3×1.0體積)清洗濾餅，並且於真空、35－45℃下，將合併的濾液及洗液濃縮至乾，而得到呈棕色固體的4－嗎福啉－4－基－甲基－苯－1,2－二胺(0.611Kg，98.6%)。
階段4：4－硝基－1H－吡唑－3－羧酸甲酯的製備
將4－硝基－1H－吡唑－3－羧酸(1.00Kg，6.37 mol，1.0重量)以及甲醇(8.00L，8.0體積)裝入配備有機械攪拌子、冷凝器以及溫度計的長頸燒瓶內。在氮氣下，將該懸浮液冷卻至0－5℃並且在該溫度下，添加亞磺醯氯(0.52L，7.12mol，0.52體積)。在16至24小時期間，將該混合物溫熱至15－25℃。1 HNMR分析(d6 －DMSO)測定出反應已完成。在35－45℃、真空下，將該混合物濃縮。將甲苯(2.00L，2.0體積)添加至殘留物並且在35－35℃、真空下，將甲苯去除。使用甲苯(2.00L，2.0體積)，重複共沸二次，可得到呈非純白色固體的4－硝基－1H－吡唑－3－羧酸甲酯(1.071Kg，98.3%)。
階段5：4－胺基－1H－吡唑－3－羧酸甲酯的製備
將4－硝基－1H－吡唑－3－羧酸甲酯(1.084Kg，6.33mol，1.0重量)及乙醇(10.84L，10.0體積)的懸浮液加熱至30－35℃並且維持在該溫度下，直至完全溶解為止。於氮氣下，將10%載於碳上的鈀(10% Pd/C濕糊狀物，0.152Kg，0.14重量)裝入另一燒瓶中並且進行真空/氮氣洗淨循環三次。將4－硝基－1H－吡唑－3－羧酸甲酯於之醇所形成的溶液添加至觸媒中並且進行真空/氮氣洗淨循環三次。進行真空/氫氣洗淨循環三次並且將反應液置於氫氣氛下。在28－30℃下，將該反應混合物攪拌至1 H NMR分析(d6 －DMSO)偵測出反應已完全為止。在氮氣下，將該混合物過濾並且在35－45℃、真空下，予以濃縮，可得到呈紫色固體的4－胺基－1H－吡唑－3－羧酸甲酯(0.883Kg，98.9%)。
階段6：4－第三丁氧羰基胺基－1H－吡唑－3－羧酸的製備
將4－胺基－1H－吡唑－3－羧酸甲酯(1.024Kg，7.16mol，1.0重量)及二噁烷(10.24L，10.0體積)裝入配備有機械攪拌子、冷凝器及溫度計的長頸燒瓶內。在15－25℃下，添加氫氧化鈉溶液(4.36L，8.72mo1，4.26體積)並且將該混合物加熱至45－55℃。將溫度維持在45－55℃，直到1 H NMR分析(d6 －DMSO)測定出反應已完全為止。在45－55℃下，添加二碳酸二第三丁酯(Boc酐，1.667Kg，7.64mo1，1.628重量)，並且在55－65℃下，攪拌該混合物。1 H NMR IPC分析(d6 －DMSO)指示有9%未反應的中間物存在。在55℃下，添加額外的二碳酸二第三丁酯(Boc酐，0.141Kg，0.64mol，0.14重量)，並且將該混合物攪拌55至65分鐘。1 H NMR分析(d6 －DMSO)測定出反應已完全。於真空、35－45℃下，將二噁烷移除並且添加水(17.60L，20.0體積)至殘留物。用2M含水氫氯酸(4.30L，4.20體積)，將pH調為pH2，並且將該混合物過濾。用水(10.00L，9.7體積)，將濾餅漿化20至30分鐘並且將該混合物過濾。用庚烷類(4.10L，4.0體積)清洗濾餅並且在濾墊上濾乾16至20小時。令所得到的固體與甲苯(5×4.00L，5×4.6體積)共沸，然後35－45℃、真空下，進行乾燥，而得到呈紫色固體的4－第三丁氧羰基胺基－1H－吡唑－3－羧酸(1.389Kg，85.4%)。
階段7：[3－(2－胺基－4－嗎福啉－4－基甲基－苯基胺甲醯基)－1H－吡唑－4－基]－胺甲酸第三丁酯的製備
在氮氣下，將4－第三丁氧羰基胺基－1H－吡唑－3－羧酸(0.750Kg，3.30mol，1.0重量)、4－嗎福啉－4－基－甲基－苯－1,2－二胺(0.752Kg，3.63mol，1.0重量)以及N,N’－二甲基甲醯胺(11.25L，15.0體積)裝入配備有機械攪拌子以及溫度計的長頸燒瓶。在15－25℃下，添加羥基苯並三唑(HOBT，0.549Kg，3.96mol，0.72重量)。在15－25℃下，添加N－(3－二甲胺基丙基)－N’－乙基碳化二亞胺(EDC，0.759Kg，3.96mol，1.01重量)，並且在該溫度下，將該混合物攪拌16至24小時。1 H NMR分析測定出反應已完全。在35－45℃、真空下，將反應混合物濃縮。令所得到的殘留物分溶於乙酸乙酯(7.50L，10.0體積)以及飽和的碳酸氫鈉水溶液(8.03L，10.7體積)，並且分離出各層。用鹽水(3.75L，5.0體積)清洗有機相，令其經硫酸鎂(1.00Kg，1.33重量)乾燥並且進行過濾。用乙酸乙酯(1.50L，2.0體積)清洗濾餅。在真空、35－45℃下，將合併的濾液及洗液濃縮，可得到呈深棕色固體的[3－(2－胺基－4－嗎福啉－4－基甲基－苯基胺甲醯基)－1H－吡唑－4－基]－胺甲酸第三丁酯(1.217Kg，88.6%)。
階段8：3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基胺的製備
將[3－(2－胺基－4－嗎福啉－4－基甲基－苯基胺甲醯基)－1H－吡唑－4－基]－胺甲酸第三丁酯(1.350Kg，3.24mol，1.0重量)以及乙醇(6.75L，5.0體積)裝入配備有機械攪拌子、冷凝器及溫度計的長頸燒瓶內。在15－30℃、氮氣下，添加濃氫氯酸水溶液(1.10L，13.2mol，0.80體積)，然後，將內容物加熱至70－80℃，並且維持在該溫度下16至24小時。在70－80℃下，添加第二份氫氯酸(0.11L，1.32mol，0.080體積)，並且將該反應液再加熱4小時。HPLC分析測定出反應已完全。將該反應混合物冷卻至10－20℃，並且在該溫度下，逐份地添加碳酸鉀(1.355Kg，9.08mol，1.0重量)。將所得到的懸浮液攪拌至氣體停止冒出，然後予以過濾。用乙醇(1.35L，1.0體積)清洗濾餅並且留下濾液。在15－25℃下，於乙醇(4.00L，3.0體積)中將濾餅漿化該濾餅20至40分鐘，並且將該混合物過濾。用乙醇(1.35L，1.0體積)清洗濾餅。在真空下、35－45℃下，將整個合併濾液濃縮。將乙醇(4.00L，3.0體積)添加至殘留物中並且在真空、35－45℃下，將乙醇去除。將四氫呋喃(5.90L，4.4體積)添加至殘留物並且在15－25℃下，予以攪拌20分鐘。將所得到的溶液過濾，用四氫呋喃(1.35L，1.0體積)清洗濾餅並且在真空、35－35℃下，將合併的濾液濃縮。將四氫呋喃(5.40L，4.0體積)添加至濃縮物並且在真空、35－45℃下，將四氫呋喃去除，而得到呈紫色泡沫狀物的3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基胺(0.924Kg，95.5%，82.84%(HPLC面積))。
階段9：7－嗎福啉－4－基甲基－2,4－二氫－1,2,4,5a,10－五氮雜環戊[a]茀－5－酮的製備
將3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－lH－吡唑－4－基胺(0.993Kg，3.33mol，1.0重量)以及四氫呋喃(14.0L，15.0體積)添加至配備有機械攪拌子、冷凝器及溫度計的長頸燒瓶。在氮氣中、15－25℃下，攪拌燒瓶的內容物並且添加1,1’－羰基二咪唑(0.596Kg，3.67mol，0.6重量)。然後，將內容物加熱至60－70℃並且再該溫度下攪拌16－24小時。TLC分析測定出反應已完成。將該混合物冷卻至15－20℃並且進行過濾。用四氫呋喃(4.00L，4.0體積)清洗濾餅並且予以濾乾15－30分鐘。於真空、35－35℃下，將該固體乾燥，可得到呈紫色固體之7－嗎福啉－4－基甲基－2,4－二氫－1,2,4,5a,10－五氮雜環戊[a]茀－5－酮(0.810Kg，75.0% th，92.19%(HPLC面積))。
階段10：1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的製備
將7－嗎福啉－4－基甲基－2,4－二氫－1,2,4,5a－五氮雜環戊[a]茀－5－酮(0.797Kg，2.46mol，1.0重量)及1－甲基－2－吡咯啶酮(2.40L，3.0體積)裝入配備有機械攪拌子、冷凝器及溫度計的長頸燒瓶中。於氮氣、15－30℃下，添加環丙胺(0.279Kg，4.88mol，0.351重量)。將燒瓶的內容物加熱至95－105℃，並且在此溫度下攪拌16至24小時。1 H NMR分析測定出反應已完全。將該反應混合物冷卻至10－20℃並且添加乙酸乙酯(8.00L，10.0體積)以及飽和的含水氯化鈉(2.50L，3.0體積)，將所得到的混合物攪拌2至5分鐘並且將各層分開。令有機相與飽和的含水氯化鈉(5.00L，6.0體積)一起攪拌25－35分鐘，將該混合物過濾並且用乙酸乙酯(0.40L，0.5體積)清洗濾餅。留下濾餅並且將濾液轉移至分液漏斗，將各層分離。重複該程序三次並且將留下來的固體與有機相併合，並且在真空、35－45℃下，將所得到的混合物濃縮至乾。將該濃縮物溶於在45－55℃下的丙－2－醇(8.00L，10.0體積)，然後，在45－55℃下，進行熱過濾。用丙－2－醇(0.40L，0.5體積)清洗濾餅。將活性碳(0.080L，0.1重量)添加至合併的濾液及洗液中，並且在45－55℃下，將該混合物攪拌30至40分鐘。在45－55℃下，對該混合物進行熱過濾並且用丙－2－醇(0.40L，0.5體積)清洗濾餅。在真空、35－45℃下，將該濾液及洗液濃縮。在25－35℃下，將乙酸乙酯(8.00L，10.0體積)及水(2.20L，3.0體積)添加至該濃縮物內並且將該混合物攪拌1至2分鐘。將各層分離並且於真空、35－35℃下，將有機相濃縮。將乙酸乙酯(4.00L，5.0體積)添加至殘留物中並且於真空、35－45℃下，進行濃縮。將乙酸乙酯(4.00L，5.0體積)添加至殘留物中並且在15－25℃下，將該混合物攪拌2至20小時。將該混合物冷卻並且令其於0至5℃下老化90至120分鐘，然後，進行過濾。用乙酸乙酯(0.80L，1.0體積)清洗濾餅並且予以濾乾15至30分鐘。於真空、35－45℃下，將該固體乾燥，而得到呈棕色固體的1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲(0.533Kg，56.8%，93.2%(HPLC面積))。
依此方式，製備得數批的階段9產物，各批次之起始物及產物之量的細節記載於表1A。
階段10：1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲L－乳酸鹽的製備
將1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲(1.859Kg，4.872mol，1.0重量)、丙－2－醇(9.00L，5.0體積)以及乙酸乙酯(8.00L，4.5體積)添加至配備有機械攪拌子及溫度計的長頸燒瓶內。在氮氣下，攪拌燒瓶的內容物並且於15－25℃下，添加L－乳酸(0.504Kg，5.59mol，0.269重量)，接著用乙酸乙酯(0.90L，0.5體積)進行一系列漂洗。在15－25℃下，將該混合物攪拌120至140分鐘。利用過濾法，單離出固體，用乙酸乙酯清洗濾餅(2×2.00L，2×1.0體積)並且予以濾乾20至40分鐘。將該濾餅溶於在75－85℃下的乙醇(33.00L，17.7體積)中，予以冷卻至65－70℃並且令該溶液通過玻璃微纖維紙，使其變澄清。將濾液冷卻至15－25℃並且令其在該溫度下老化2至3小時。利用過濾法，單離出晶狀固體，用乙醇(2×1.00L，2×0.5體積)清洗濾餅並且予以濾乾至少30分鐘。於真空、35－35℃下，將該固體乾燥，而得到呈深粉紅色均勻固體的1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲L－乳酸鹽(1.386Kg，58.7% th，99.47%(HPLC面積))。
該乳酸鹽之紅外線光譜(KBr圓薄片法)包括在3229、2972及1660 cm－ 1 的特性吸收峰。
在不受限於任何原理的情況下，吾人相信該紅外線吸收峰係標定為如下所示之該鹽類的結構組份：
實施例67
1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲之晶狀自由鹼及晶狀鹽形式的合成A. 1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲自由鹼的製備如實施例60所述者製備得粗製1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲自由鹼的樣本，並且利用層柱層析法(矽膠，用乙酸乙酯－甲醇(98：2－80：20)洗提)，予以初步純化。然後，令該自由鹼的一樣本自熱甲醇再結晶析出，可得到1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲自由鹼的晶狀物。
B. 1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲自由鹼二水合物的製備將粗製的1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲自由鹼樣本溶於THF中，然後，於真空中予以濃縮至最小體積(~4體積)。逐滴地將水(2－4體積)添加至該溶液中，直到該溶液變混濁為止。添加少量THF，以再次確立溶液的澄清度，並且令該混合物静置一整夜，而得到晶狀的物質，予以風乾，可得到1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲自由鹼二水合物。
C. 1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲氫氯酸鹽的製備將粗製1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲自由鹼的樣本溶於最少量的甲醇中，然後，用乙酸乙酯予以稀釋。將1.1當量之HCl(4M溶液，於二噁烷中)緩慢地添加至在0℃下之該溶液中。在添加後，有固體自溶液沉澱析出，用過濾法予以收集。將甲醇添加至該固體並且於真空中，將該混合物濃縮。令殘留物自水蒸餾出，以去除少量的殘餘甲醇，然後，在60℃/0.1毫巴下進行乾燥，而得到該氫氯酸鹽。
D. 1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲乙烷磺酸鹽的製備將1當量的乙烷磺酸添加至1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲自由鹼於甲醇－乙酸乙酯所形成的溶液中。在周溫下攪拌該混合物，然後，於真空中，進行濃縮。將所得到的殘留物納入甲醇中並且將乙醚添加至該溶液中。令該混合物静置72小時並且利用過濾法，來收集所形成的固體並且予以乾燥，而得到1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲乙烷磺酸鹽。
E. 1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲甲烷磺酸鹽的製備將1當量甲烷磺酸(67 μ l)添加至1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲自由鹼(394 mg)於甲醇－乙酸乙酯所形成的溶液中。有固體形成，用過濾法予以收集並且用乙酸乙酯清洗。將該固體溶於最少量的熱甲醇中，令其冷卻，然後用乙醚研製。令該固體静置72小時，然後，利用過濾法來收集並且用甲醇清洗，而得到1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲甲烷磺酸鹽。
實施例68
1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲自由鹼及鹽類的特性化對於各種形式的1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲進行了特性化分析。被選用來進行特性化的形式已經過主要係探查同質異形及鹽類安定性程度之研究的鑑定。被選用來進行進一步特性化的鹽類係L－乳酸鹽、自由鹼二水合物、乙烷磺酸鹽、自由鹼以及氫氯酸鹽。
A.示差掃描熱量分析法(DSC)：在裝配有50位置自動取樣器的TA Instrument Q1000上，收集熱譜圖(thermogram)。能量及溫度校正標準物為銦。以10℃/分鐘的速率，將樣本由10℃加熱至250℃。在樣本之上，維持30 ml/分鐘的氮氣吹氣。使用2至10 mg之間的樣本，而且所有的樣本皆係裝在蓋子上有一小孔的鋁製淺鍋中。
B.熱重分析(TGA)：在TA Instruments Q500上收集熱譜圖。以10℃/分鐘的速率加熱樣本。在樣本之上，維持100 ml/分鐘的氮氣吹氣。通常係將5－20 mg的樣本裝入量過皮重之未加蓋的鋁製淺鍋。
C.偏光顯微鏡在裝配有供捕捉影像之數位相機的Leica LM/DM偏光顯微鏡上，對樣本進行研究。將少量的樣本置放於載玻璃上的油鏡專用油內並且覆蓋上玻璃蓋片。讓各別的粒子盡可能地分散並且用50－500倍的放大倍率以及耦合至λ波片之部分直交的偏光來觀察。
D. XRPD(X－射線粉末繞射法)D5000在Siemens D5000繞射儀上，使用CuK α輻射(40 kV，40 mA)、θ－θ測角器、自動發散及接收狹縫、石墨的輔助單色儀以及閃爍計數器，進行XRPD研究。在連續掃描模式下，採用0.02° 2 θ或0.005° 2 θ的角度間隔以及1秒的時間間隔，在2°至30° 2 θ的角度範圍內，收集數據。
在周溫下運行的樣本係以收到時的粉末狀，在未磨碎的條件下，製成扁片。輕柔地將大約25－50 mg的樣本裝填於在一經過磨光、零背景(510)的矽扁片內所切割出之直徑12 mm、深0.5 mm的空洞中(The Gem Dugout,1652 Princeton Drive,Pennsylvania State College,PA 16803,USA)。
所有的XRPD分析皆係採用Diffrac Plus XRD Commande軟體v2.3.1來進行的。
Bruker AXS C2 GADDS繞射儀(用於回收自GVS的樣本)在Bruker AXS C2 GADDS繞射儀上，使用CuK α輻射(40 kV，40 mA)、自動化XYZ階段、用於自動樣本定位的雷射攝像顯微鏡以及HiStar二維區域檢視器，取得樣本的X射線粉末繞射圖型。X射線光學係由與一0.3 mm之針孔準直器聯結在一起的單一Gbel多層鏡所構成的。
射束發散，亦即，樣本上之X射線射束的有效大小，係大約4 mm。採用θ－θ連續掃描模式，樣本與檢測器的距離為20 cm，如此所產生的有效2 θ範圍係3.2－29.8°。樣本的典型暴露時間為120秒。
樣本係以收到時的粉末狀，在未磨碎的條件下，製成扁片。將大約1－2 mg的樣本輕壓至一玻璃片上，而得到一扁平的表面。
紀錄L－乳酸鹽以及自由鹼的XRPD痕量。痕量顯示出良好的訊號/雜訊比，且顯示為晶性物質。
E.重量氣體吸附(GVS)：在採用CFRSorp軟體的Hiden IGASorp吸濕分析儀上，檢視所有的樣本。樣本的大小為大約10－25 mg。如下所述地進行等溫吸濕/脫濕曲線。在室內溼度及室溫下(大約40 % RH，25℃)，裝置及去裝置樣本，然後利用XRPD(採用Bruker AXS C2 GADDS系統)，進行分析。
標準的等溫運行(run)係自40%RH開始的單一循環。
溼度的調整如下：40、50、60、70、80、9085、75、65、55、45、35、25、15、5、0 10、20、30、40
(i)乳酸鹽L－乳酸鹽的GVS等溫線顯示樣本並未呈現出吸濕行為且不會形成水合物。進行GVS實驗後之樣本的XRPD痕量與投入物質一致，表現在實驗期間並沒有相的變化。
(ii)自由鹼在實驗期間，0% RH至95% RH之間樣本的重量變化為大約9%。這表示樣本的本質具有吸水性。
實施例69
利用X－射線繞射測定1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲二水合物自由鹼的晶體結構用於繞射實驗的晶體係無色且具有不規則的形狀，尺寸為0.2×0.2×0.2 mm3 。該晶體係在液態－液態擴散實驗中，藉由乙烷磺酸鹽與THF之水溶液的沉澱反應所得到的。如是之樣本與由自由鹼所製得之相同晶體形式(使用水[作為抗溶劑]連同一系列的溶劑，諸如，醇類[例如，乙醇]、配類[諸如，甲基乙基酮]以及醚類[諸如，THF及二噁烷])，是否相等，係藉由比較該二樣本的X－設限粉末繞熱圖型來確定的。由Rigaku旋轉陽極RU3HR，Osmic藍色共軛聚焦光學(Osmic blue confocal optics)，AFC9χ測角器以及Rigaku Jupiter CCD檢視器，採用CuK α輻射(λ＝1.5418)，來收集晶體學數據。於四個ω掃描，一個在2 θ＝30°，三個在2 θ＝90°，來收集影像，檢視器與晶體的距離為67 mm。利用CrystalClear軟體，來控制數據的收集，且利用Dtrek來處理及放大縮小。即使吸收係數係中等的(μ＝0.82 mm－ 1 )，可採用4t h 級傅立葉吸收修正來修正數據，以補償膠及晶體容器(顯微載片)的吸收。經發現，該晶體係單斜空間群P21 /n(#14)，具有晶格參數係a＝7.66(10)，b＝15.18(10)，c＝17.71(10)，β＝98.53(2)°，α＝γ＝90°。括號內的數值係代表偏差(s.u.，標準不確定度)。
採用SHELXS－97所施行的直接方法，可解出晶體結構。在11.5－0.89(3.85<θ<60.01)之解析範圍內總共2822個獨特反射的強度數據可用於SHELXL－97所得到之274個晶體學參數的精算(refinement)。最終的統計參數為：wR2＝0.2416(所有的數據)，RF ＝0.0866(I>2 σ(I)的數據)，以及配適度S＝1.145。
在不對稱的單位內，發現到一個分子的自由鹼以及二個水分子。該不對稱單位的元素組成為C1 9 H2 6 N7 O4 且該晶體之計算的強度為1.36 mg/m3 。氫原子係產生於幾何基態(grounds)，而與雜原子鑑結之氫原子的位置則可藉由檢視FO －FC 差值映像(difference maps)，來確定。氫原子的位置及熱參數係受到壓縮而與對應的非氫原子部份重疊。非氫原子的熱運動係藉由非等向性熱因子來(參見第1圖)。
該晶體結構含有一個分子內(N22－H.....N14 1.898)以及7個分子內氫鍵(參見第2圖)。1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲分子係沿著晶體b軸，藉由二個H鍵連結成鏈：N7－1.....O24 2.761以及A25－H.....N2 3.310。來自二個鏈的苯並咪唑原子團以3.5－3.6的距離，堆積在一起。1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲分子的網狀組織形成了被四個水分子所佔居的凹處，兩兩相對於對稱中心。三個氫鍵將1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲分子與水分子連結在一起，一個氫鍵對第一個水分子(O1W1－H.....N16 2,845)，而剩餘的二個氫鍵係對第二個水分子(N1－H.....O1W2 2.875以及O1W2－H......O19 2.746)。水分子透過另二個氫鍵，涉入相互作用：O1W1－H.....O1W2 2.884以及O1W2－H....O1W1 2.771。
第1圖提供了由X－射線繞射研究所產生之結構的熱橢圓體圖，而堆積圖則可見於第2圖。
組成1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲自由鹼二水合物之結構的原子座標示於表2。括號內的數字代表偏差(s.u.，標準不確定度)。
實施例70
1－環丙基－3－[3－(5－嗎襠啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲自由鹼之XRPD圖型的測定利用大理石臼，將用於收集X－射線粉末繞射(XRPD)數據的樣本溫和地磨碎，並且裝置於結晶毛細管(購自Hampton Research,Quartz or Glass Type 10，直徑0.4或0.7 mm)。在室溫下，由Rigaku旋轉陽極RU3HR，Osmic藍色共軛聚焦光學(Osmic blue confocal optics)，AFC9χ測角器以及Rigaku Rigaku HTC影像片檢視器，採用CuK α輻射(λ＝1.5418)，來收集繞射圖型。收集2D影像，而旋轉φ軸之檢視器與晶體的距離為250 mm。利用CrystalClear軟體，來控制數據的收集並且藉由Datasqueeze(就2 θ範圍3－30°，0.01°或0.02°間距，方位角0<χ<360°的平均強度)，將2D影像轉化1D圖(2 θ強度)。使用自製程式AstexXRPD，來處理1DXRPD圖型且予以視覺化。
不同的晶化批次之間，XRPD圖型及峰的相對強度並沒有變化，這符合僅有一種晶體形式的存在。
1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲自由鹼之FBI形式的XRPD圖型係提供於第3圖，而主峰的詳細數據則列於表3。
實施例71
1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲乳酸鹽之晶體結構的測定單晶形式的1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲L－乳酸鹽已被鑑定出來。用於繞射試驗的結晶係無色斜方晶，尺寸0.1×0.1×0.1 mm3 ，藉由自乙醇蒸發出而得到的。由Rigaku旋轉陽極RU3HR，Osmic藍色共軛聚焦光學(Osmic blue confocal optics)，AFC9χ測角器以及Rigaku Jupiter CCD檢視器，採用CuK α輻射(λ＝1.5418)，在97K收集晶體學數據。於五個ω掃描，一個在2 θ＝15°，四個在2 θ＝90°，來收集影像，檢視器與晶體的距離為67 mm。利用CrystalClear軟體，來控制數據的收集，且利用Dtrek來處理及放大縮小。即使吸收係數係中等的(μ＝0.78 mm－ 1 )，可採用4t h 級傅立葉吸收修正來修正數據，以補償膠及晶體容器(顯微載片)的吸收。經發現，該晶體係屬正交空間群P21 21 21 (#19)的晶體結構且具有晶格參數a＝9.94(10)，b＝15.03(10)，c＝16.18(10)，α＝β＝γ＝90°。括號內的數值係代表偏差(s.u.，標準不確定度)。可用短的室溫掃描，來查驗晶格參數及對稱。經發現，對稱與在97(2)K者係相同的且晶格參數係類似的(室溫a＝10.08，b＝15.22，c＝16.22)。
採用SHELXS－97所施行的直接方法，可解出晶體結構。絕對構型係經過選擇以與結晶實驗所用之L－乳酸鹽構型相配。在11－0.9(4.01<θ<58.92)之解析範圍內總共3417個獨特反射的強度數據可用於SHELXL－97所得到之308個晶體學參數的精算(refinement)。最終的統計參數為：wR2＝0.2275(所有的數據)，RF ＝0.0817(I>2 σ(I)的數據)，以及配適度S＝1.076。
在不對稱單位內，發現到一分子質子化的自由鹼以及一個L－乳酸鹽陰離子。該不對稱單位的元素組成為C2 2 H2 9 N7 O5 ，且該晶體的計算強度為1.30 mg/m3 。氫原子係產生於幾何基態(grounds)，而與雜原子鑑結之氫原子的位置則可藉由檢視Fo－Fc差值映像(difference maps)，來確定。氫原子的位置及熱參數係受到壓縮而與對應的氫原子部份重疊。非氫原子的熱運動係藉由非等向性熱因子來(參見第4圖)。
該晶體結構含有一個分子內(N22－H....N14 2.852)以及7個分子內氫鍵，而形成錯合3D網狀組織(參見第5圖)。2個分子內氫鍵，N7－H.....O24 2.800以及N25－H....N2 3.004，將1－環丙基－3－[3－(5－嗎襠啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]脲分子，沿著晶體c軸，連結成鏈。L－乳酸鹽陰離子係藉由H－鍵O3L－H...O1L 2.626，沿著晶體a軸，連結成鏈。二個分叉的H鍵將1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]脲陽離子及L－乳酸鹽陰離子接合。質子化的嗎福啉氮原子與二個羧基氧原子(N16－H....O1L 3.125以及N16－H...O2L 2.625)同時作用，而吡唑N1氮係O2L及O3L(N1－H...O2L 2.882，N1－H....O3L 2.740)的H供體。
第4圖提供了由X－射線繞射研究所產生之結構的熱橢圓體圖，而堆積圖則可見於第5圖。
組成1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲乳酸鹽之結構的原子座標示於表4。括號內的數字代表偏差(s.u.，標準不確定度)。
實施例72
1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲鹽在40℃、75% RH的安定性用大理石臼，將用於安定性研究的15 mg樣本輕柔地研磨，並將其轉置於培養皿內，形成一薄層。然後，將樣本置於密封的容器內，該容器內含有飽和的氯化鈉溶液，帶有過量不溶的氯化鈉。然後，將該容器置於維持在40℃下的保溫箱內，以提供40℃及~75%相對溼度(RH)的環境。在規則的間隔下，用X－射線粉末繞射法(XRPD)，來分析樣本。
將用於收集X－射線粉末繞射(XRPD)數據的樣本裝置於結晶毛細管(購自Hampton Research,Quartz or Glass Type 10，直徑0.4 mm)。在室溫下，由Rigaku旋轉陽極RU3HR，Osmic藍色共軛聚焦光學(Osmic blue confocal optics)，AFC9χ測角器以及Rigaku Rigaku HTC影像片檢視器，採用CuK α輻射(λ＝1.5418)，來收集繞射圖型。收集2D影像，而旋轉φ軸之檢視器與晶體的距離為250 mm。利用CrystalClear軟體，來控制數據的收集並且藉由Datasqueeze(就2Θ範圍3－30°，0.01。間距，方位角0<χ<360°的平均強度)，將2D影像轉化1D圖(2 θ相對於強度)。使用自製程式AstexXRPD，來處理1D XRPD圖型且予以視覺化。
在暴露於40℃及75% RH下1－2個月期間，乳酸、自由鹼(FB1)及二水合物自由鹼(FB2)的XRPD圖型沒有改變。乳酸鹽、自由鹼(FB1)及二水合物自由鹼(FB2)之起始及安定受試樣本的XRPD圖型提供於第6至8圖。
1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲自由鹼之乳酸鹽的XRPD圖型係提供於第6圖，而主峰的詳細數據則示於表5。
1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲自由鹼之二水合物自由鹼FB2形式的XRPD圖型係提供於第8圖，而主峰的詳細數據則示於表6。
生物活性 實施例73
活性化CDK2/細胞週期素A激酶抑制活性(IC5 0 )的測量分析使用下列的實驗計畫，對本發明之化合物進行激酶抑制活性的測試。
於2.5X強度之分析緩衝液中(50mM MOPS pH7.2，62.5 mM β－甘油基磷酸鹽，12.5mM EDTA，37.5mM氯化鎂，112.5mM ATP，2.5mM DTT，2.5mM正釩酸鈉，0.25 mg/ml胎牛血清蛋白素)，將活化的CDK2/細胞週期素A(Brown et al,Nat.Cell Biol.,1,pp438－443,1999；Lowe,E.D.,et al,Biochemistry,41,pp15625－15634,2002)稀釋至125pM，並且取10 μ l與10 μ l組織蛋白受質混合物(60 μ l胎牛組織蛋白H1[Upstate Biotechnology,5 mg/ml]、940 μ l H2 O、35 μ Ci γ3 3 P－ATP)混合，並且與5 μ l之受試化合物於DMSO內的各種稀釋液(達至2.5%)一起添加至96孔微量盤內。讓反應進行2至4小時，然後，用過量的正磷酸(5 μ l，2%)予以停止。在Millipore MAPH濾板上，自磷酸化的組織蛋白H1分離出保持未併入組織蛋白內的γ3 3 P－ATP。用0.5 %正磷酸，將MAPH濾板的孔潤濕，然後，用Millipore真空過濾單元，通過孔，過濾出反應的產生物。在過濾後，用200 μ l 0.5%正磷酸清洗殘留物二次。一旦濾器乾燥後，添加20 μ l Microscint 20閃爍體，然後，在Packard Topcount上，進行計數30秒。
計算CDK2活性的抑制%並且予以製圖，以便決定出抑制50%之CDK2活性所需之受試化合物的濃度(IC5 0 )。
在CDK2分析中，實施例1、10、11、18、20、22、30、31、32、46、47及54之化合物的IC5 0 值小於1 μ M，而實施例44、45、48、51及53之化合物的IC5 0 值則小於10 μ M。
實施例74
活化CDK1/細胞週期素B激酶抑制活性(IC5 0 )的測量分析CDK1/細胞週期素B分析係與前述CDK2/細胞週期素A所進行者相同，但是使用CDK1/細胞週期素B(Upstate Discovery)且酶係稀釋至6.25 nM。
在CDK1分析中，實施例1、4、6、10、11、13、22、42、47及54之化合物的IC5 0 值係小於1 μ M，而實施例3、8、9、16、17、20、24、28、29、31、32、34、39、41、45、46、48、49、50、51、52、53及56之化合物的IC5 0 值係小於10 μ M，且實施例2、23、26、27、33、37及43之化合物的IC5 0 值小於50 μ M。
實施例75
奧若拉A激酶分析採用Dissociative Enhanced Lanthanide Fluoro Immuno Assay(DELFIA)，以衍生自GSK3的生物素化肽，可測定出奧若拉A激酶活性。藉助磷酸專一的初級抗體以及經銪標記的抗兔子IgG抗體，使用λe x ＝337nm，λe m ＝620nm的時間解析性螢光，將所產生的磷酸化肽的量定量化。
激酶反應：分析反應係按裝於96孔微量盤，總反應體積為25 μ l，其中含有0.5nM奧若拉A(Upstate Discovery)、3 μ M生物素－CGPKGPGRRGRRRTSSFAEG、15 μ M ATP以及在10mM MOPS，pH7.0；0.1 mg/ml BSA；0.001% Brij－35；0.5%甘油；0.2 mM EDTA；10mM氯化鎂；0.01%氫硫基乙醇以及2.5% DMSO中之化合物的各種稀釋液。該反應係於室溫下進行60分鐘，然後用100 μ l STOP緩衝液(含有100 mM EDTA，0.05% Surfact－Amps20(Pierce)以及1x BlockerT M BSA(於TBS中，Pierce))，予以終止。
偵測步驟然後，將該反應混合物轉移至96孔之經Neutravidin塗覆的微量盤(Pierce)，並且予以培養30分鐘，以捕獲經生物素化的肽。在每一孔經200 μ l TBST緩衝液清洗五次後，將抗磷酸基－(Ser/Thr)－AKT受質抗體(Cell Signalling Technology)以及Eu－N1 抗兔子IgG(Perkin Elmer)的混合物，添加至所有的孔，然後，令其静置1小時。在進行另一清洗步驟後，將DELFIA強化溶液(Perkin Elmer)添加至所有的孔。在培養了5分鐘後，在Fusion微量盤讀出器上，對孔進行計數。
在前述分析中，實施例1至56之化合物的IC5 0 值係小於1 μ M。實施例60H之氫氯酸鹽的IC5 0 值係0.0025 μ M。
實施例76
奧若拉B激酶分析激酶反應：分析反應係建立於96孔微量盤，總反應體積為25 μ l，其中含有0.5nM奧若拉B(ProQinase)、3 μ M生物素－CGPKGPGRRGRRRTSSFAEG、15 μ M ATP以及在10mM TRIS，pH8.5；0.1 mg/ml BSA；0.025% Surfact－Amps 20；5mM氯化鎂；1mM DTT以及2.5% DMSO中之化合物的各種稀釋液。該反應係於室溫下進行90分鐘，然後用100 μ l STOP緩衝液(含有100 mM EDTA，0.05% Surfact－Amps20(Pierce)以及1x BlockerT M BSA(於TBS中，Pierce))，予以終止。
偵測步驟係如奧若拉A部分所述地進行。
在奧若拉B分析中，實施例60H之氫氯酸鹽在0.003 μ M的濃度下，呈現出75%抑制率。
實施例77
GSK3－β激酶抑制活性分析於25mM MOPS(pH7.00)、25 mg/ml BSA、0.0025 % Brij－35、1.25 %甘油、0.5mM EDTA、25mM MgCl2 、0.025 % β－氫硫基乙醇、37.5mM ATP中，將GSK3－β(Upstate Discovery)稀釋至7.5 nM，並且取10 μ l與10 μ l受質混合物混合。用於GSK3－β的受質混合物係在含有35 μ Ci γ3 3 P－ATP之1 ml水中的12.5 μ M磷酸肝糖合成酶肽－2(Upstate Discovery)。將酶以及受質連同5 μ l之受試化合物於DMSO內的各種稀釋液(達至2.5%)，添加至96孔微量盤內。讓該反應進行3小時(GSK3－β)，然後用過量的正磷酸(5 μ l，2%)予以終止。過濾程序係如如前述活化CDK2/細胞週期素A分析中者。
實施例78
CDK選擇性分析78A.實驗計畫A採用前述實施例3中所述之通用實驗計畫(但有如下之修改)，可試驗本發明化合物對抗多種不同激酶的激酶抑制活性。
於20mM MOPS(pH 7.0)、1mM EDTA、0.1% γ－硫基乙醇、0.01% Brij－35、5%甘油、1 mg/ml BSA中，將激酶稀釋為10倍的工作儲料(working stock)。一單位等於在30℃下，每一分鐘將1nmol磷酸鹽併入0.1 mg/ml組織蛋白H1或CDK7受質肽，最終ATP濃度為100 μ M。
用於所有CDK分析(除了CDK7之外)的受質係組織蛋白H1，其在使用之前係於20 mM MOPS(pH 7.0)中稀釋為10倍的工作儲料。
CDK1/細胞週期素B、CDK2/細胞週期素A、CDK2/細胞週期素E、CDK3/細胞週期素E、CDK5/p35、CDK/細胞週期素D3的分析步驟：在25 μ l的最終體積內，用8mM MOPS(pH 7.0)、0.2 mM EDTA、0.1 mg/ml組織蛋白H1、10mM乙酸鎂以及[γ－3 3 P－ATP](特異活性大約500 cpm/pmol，濃度係如所需的)，培養該酶(5－10mU)。藉由添加Mg2 ＋ [γ－3 3 P－ATP]，來起始反應。於室溫下培養40分鐘後，藉由添加5 μ l之3%磷酸溶液，將反應終止。將10 ml的反應液散落於P30濾墊上並且在乾燥及計數之前，於75 mM磷酸中清洗5分鐘，共清洗三次且於甲醇中清洗一次。
CDK7/細胞週期素H/MAT1的分析步驟在25 μ l的最終體積內，用8mM MOPS(pH 7.0)、0.2 mM EDTA、500 μ M肽、10mM乙酸鎂以及[γ－3 3 P－ATP](特異活性大約500 cpm/pmol，濃度係如所需的)，培養該酶(5－10mU)。藉由添加Mg2 ＋ [γ－3 3 P－ATP]，來起始反應。於室溫下培養40分鐘後，藉由添加5 μ l之3%磷酸溶液，將反應終止。將10 ml的反應液散落於P30濾墊上並且在乾燥及計數之前，於75 mM磷酸中清洗5分鐘，共清洗三次且於甲醇中清洗一次。
78A.實驗計畫B於Upstate Discovery有限公司，進行對抗此等酶的抑制活性。酶係製備呈10x最終濃度(於如下表中所記載的酶緩衝液中)。然後，於含有下表所述之各種受質以及3 3 P－ATP(~500 cpm/pmol)的分析緩衝液中，培養酶。
藉由添加Mg/ATP，來起始反應。令反應在室溫下進行40分鐘，然後，用5 μ l之3%磷酸溶液予以終止。將10 μ l反應混合物轉移至過濾墊A或P30濾墊，並且在乾燥及進行閃爍計數之前，於75 mM磷酸中清洗三次以及於甲醇中清洗一次。
受試化合物係於詳述於下文的濃度下，進行對抗所有激酶的試驗二次，且計算相對於對照物的活性%。當抑制率高時，則測定IC5 0 。
所用的酶緩衝液為：A：20mM MOPS(pH7.0)、0.1mM EDTA、0.1% β－氫硫基乙醇、0.01% Brij－35、5%甘油、1 mg/ml BSA
所使用的分析緩衝液為：A：8mM MOPS(pH7.0)、0.2mM EDTA、10mM乙酸鎂
實施例79
抗增生活性藉由測量本發明化合物抑制多種細胞系內的細胞生長能力，可測定得彼等化合物的抗增生活性。採用Alamar Blue分析法(Nociari,M.M,Shalev,A.,Benias,P.,Russo,C.Journal of Immunological Methods 1998,213,157－167)，來測量細胞生長的抑制。該方法係基於生存細胞將刃天青(resazurin)還原為其螢光產物試鹵靈(resorufin)的能力。就各增生分析而言，細胞係置於96孔微量盤內且在添加抑制劑化合物之前恢復(recover)16小時，添加之後，持續另外72小時。在培養期間結束後，添加10%(v/v)Alamar Blue，並且在測定(於535nM ex/590nM em)螢光產物之前，再繼續培養6小時。在非增生細胞分析的情況下，在添加抑制劑化合物之前，令細胞維持在高緻密度(confluence)，添加後，繼續維持72小時。利用如前所述之Alamar Blue分析法，來測定生存細胞數。此外，紀錄下任何形態學上的變化。細胞系係取自ECACC(European Collection of Cell Cultures)。
在使用HCT－116細胞系的分析中，實施例60H之氫氯酸鹽的IC5 0 為0.070 μ M。
詳而言之，本發明之化合物係進行對抗衍生自人類結腸癌瘤之HCT－116細胞系(ECACC Reference：91091005)的試驗。
經發現，在此分析中，許多本發明之化合物的IC5 0 值小於25 μ M，而較佳化合物之IC5 0 值係小於1 μ M。另外，經發現，許多本發明之化合物在觀察到多倍體或多核時的最小濃度係小於10 μ M，且較佳化合物的IC5 0 值係小於100 nM。
經發現，在此分析中，化合物1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的IC5 0 值小於1 μ M。此外，還發現到，該化合物在觀察到多倍體或多核時的最小濃度係小於100nM。
實施例80
A.一般性群落形成分析實驗計畫在群落分析中，評估化合物對於黏連腫瘤細胞的各種治療效果。
以75至100細胞/ml(相關培養基質)的濃度，將細胞播種於6或24孔組織培養微量盤中並且令其恢復(recover)16小時。
將化合物或賦形劑對照物(DMSO)添加至成雙份的孔中，最終DMSO濃度為0.1%。在添加化合物之後，讓群落生長10至14天，以達到最佳的分開群落計數。將群落個定於2 ml Carnoys固定劑(25%乙酸、75%甲醇)並且用2 ml 0.4 w/v%的水晶紫予以染色。計算各孔內的群落數。使用Prism Graphpad Software，利用S形劑量－反應曲線，計算出IC5 0 值。
B. 1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲的群落形成分析實驗計畫在群落分析中，評估1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲對於A2780、A549、HCT 116、HCT 116 N7、HT－29、MCF7、MIA－Pa－Ca－2、SW620細胞系的各種治療效果。
以75至100細胞/ml(相關培養基質)的濃度，將細胞播種於6或24孔組織培養微量盤並且令其恢復(recover)16小時。
將1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲或賦形劑對照物(DMSO)添加至成雙份的孔中，最終DMSO濃度為0.1%。在添加化合物之後，讓群落生長10至14天，以達到最佳的分開群落計數。將群落固定於2 mlCarnoys固定劑(25%乙酸、75%甲醇)並且用2 ml 0.4 w/v%的水晶紫予以染色。計算各孔內的群落數。僅記錄下顯示出單一細胞至一群落之多個細胞的增生(亦即，完全的細胞週期，包括成功的細胞質分裂)之有大約50個細胞或以上之細胞的多核群落。未記錄下單一多核化(多倍體)細胞。使用Prism Graphpad Software，利用S形劑量－反應曲線(變動斜度)，計算出IC5 0 值。
分析的結果陳述於標題為「本發明化合物之優點」的段落內的表C中。
實施例81
對抗細胞色素P450之效力的測定採用自Invitrogen(Paisley，UK)取得的Pan Vera Vivid Cyp450篩選組套，測定實施例24之化合物對抗CYP450s 1A2、2C9、2C19、3A4以及2D6的效力。CYPs以含有CYP450及NADPH還原酶的巴庫落體(baculosomes)形式提供的。受質為螢光性Vivid受質。
最終的反應混合物如下：1A2 100 mM磷酸鉀(pH 8)、1%甲醇、2 μ M 1A2 Blue Vivid受質、100 μ M NADP＋ 、4nM CYP450 1A2、2.66 mM葡萄糖－6－磷酸鹽、0.32 U/ml葡萄糖－6－磷酸酯脫氫酶。
2C9 50 mM磷酸鉀(pH 8)、1%甲醇、2 μ M Green Vivid受質、100 μ M NADP＋ 、8nM CYP450 2C9、2.66 mM葡萄糖－6－磷酸鹽、0.32 U/ml葡萄糖－6－磷酸酯脫氫酶。
2C19 50 mM磷酸鉀(pH 8)、1%甲醇、8 μ M Blue Vivid受質、100 μ M NADP＋ 、4nM CYP450 2C19、2.66mM葡萄糖－6－磷酸鹽、0.32 U/ml葡萄糖－6－磷酸酯脫氫酶。
3A4 100 mM磷酸鉀(pH 8)、1%甲醇、10 μ M 3A4 Blue Vivid受質、100 μ M NADP＋ 、2.5nM CYP450 3A4、2.66 mM葡萄糖－6－磷酸酯、0.32 U/ml葡萄糖－6－磷酸酯脫氫酶。
2D6 100 mM磷酸鉀(pH 8)、1%甲醇、5 μ M 2D6 Blue Vivid受質、100 μ M NADP＋ 、5nM CYP450 2D6、2.66 mM葡萄糖－6－磷酸酯、0.32 U/ml葡萄糖－6－磷酸酯脫氫酶。
於Molecular Devices Spectramax Gemini讀出器上，以30秒間隔，追蹤觀察螢光20分鐘。激發及發射波長如下：就1A2、2C19及3A4而言為390 nm及460 nm，對2D6而言為390 nm及485 nm，且對2C9而言為485 nm及530 nm。起始速率係由行進曲線(progress curve)測定得的。
受試化合物係調和於甲醇中且係於10 μ M的濃度下，就對抗CYP450s進行試驗。
藥學調配物 實施例82
(i)片劑調配物含有式(I)化合物之片劑組成物如下文所述者製備而得：將50 mg化合物與197 mg之作為稀釋劑的乳糖(BP)、以及3 mg之作為潤滑劑的硬脂酸鎂混合在一起，並且依已知的方法，予以壓製成片劑。
(ii)囊劑調配物囊劑調配物的製備方法如下：將100 mg式(I)化合物與100 mg乳糖混合在一起，並且將所得到的混合物填充入標準不透明的硬膠囊內。
(iii)注射用調配物I經注射投藥用之非經腸組成物的製備方法如下：將式(I)化合物(例如，呈鹽形式)溶於含有10%丙二醇的水中，使化合物的濃度為1.5重量%。然後，藉由過濾法，對該溶液進行殺菌，填充入針藥管並且予以密封。
(iv)注射用調配物II注射用非經腸組成物的製備方法如下：將式(I)化合物(例如，呈鹽形式)(2 mg/ml)溶於甘露糖醇(50 mg/ml)中，對該溶液進行殺菌過濾，並且將其填充入可密封的1 ml管形瓶或針藥管內。
(v)注射用調配物III藉由注射或輸注法經靜脈內投藥的調配物係如下文所述者製備而得：將式(I)化合物(例如，呈鹽形式)溶於水(20 mg/ml)。然後，將管形瓶密封並且藉由壓熱，予以滅菌。
(vi)注射用調配物IV藉由注射或輸注法經靜脈內投藥的調配物係如下文所述者製備而得：將式(I)化合物(例如，呈鹽形式)溶於含有緩衝劑(例如，0.2M乙酸鹽，pH 4.6)的水中，20 mg/ml。然後將管形瓶密封並且利用壓熱，予以滅菌。
(vii)冷凍乾燥調配物I將整份經調配之如本文所定義之式(I)化合物或其鹽類置於50 mL管形瓶中並且予以冷凍乾燥。在冷凍乾燥期間，採用在－45℃下所進行之一步冷凍實驗計畫，將該組成物冷凍。將溫度提升至－10℃，以進行退火，然後將溫度降低至－45℃，以進行冷凍，接著在＋25℃下進行初步乾燥大約3400分鐘，然後進行二次乾燥，若溫度到達50℃，則以增加的步驟來進行。初步及二次乾燥期間的壓力係設定在80毫托。
(viii)冷凍乾燥調配物II將整份經調配之如本文所定義之式(I)化合物或其鹽類置於50 mL管形瓶中並且予以冷凍乾燥。在冷凍乾燥期間，採用在－45℃下所進行之一步冷凍實驗計畫，將該組成物冷凍。將溫度提升至－10℃，以進行退火，然後將溫度降低至－45℃，以進行冷凍，接著在＋25℃下進行初步乾燥大約3400分鐘，然後進行二次乾燥，若溫度到達50℃，則以增加的步驟來進行。初步及二次乾燥期間的壓力係設定在80毫托。
(ix)用於經靜脈內投藥的冷凍乾燥調配物III如下所述地製備得經緩衝的水溶液：將1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲L－乳酸鹽溶於0.02M檸檬酸緩衝劑(用氫氧化鈉或氫氯酸修正至pH 4.5)，濃度為12.86 mg/ml。
在過濾以去除粒狀物質的同時，將該經緩衝的溶液填充入一容器(諸如，類別1的玻璃管形瓶)中，然後，予以部分密封(例如，藉助Florotec塞子)。若該化合物及調配物係充分安定的，則利用在121℃下壓熱一適當的期間，予以滅菌。若該調配物在壓熱條件下係不安定的，則可使用適當的濾器予以滅菌並且在無菌的條件下，將其填充至無菌管形瓶內。採用適當的循環，將該溶液冷凍乾燥，例如：冷凍－在2小時期間，冷凍至－20℃並且維持在－40℃下3小時。
初步乾燥－在8小時期間，由－40℃逐漸上升至－30℃並且維持在－30℃下7小時。
二次乾燥－在4小時期間，逐漸上升至＋30℃並且維持在＋30℃下8－10小時。
在該冷凍乾燥循環完成後，用氮反填充管形瓶至達大氣壓，用蓋子蓋住並且予以確實關緊(例如，用鋁捲曲線(aluminium crimp))。就經靜脈內投藥而言，該冷凍乾燥固體可在藥學上可接受的賦形劑(諸如，0.9%鹽水或5%右旋糖)內，恢復原狀。該溶液可以其本來的形式給藥，或是在投藥之前，注入一輸注袋(含有藥學上可接受的賦形劑，諸如，0.9%鹽水或5%右旋糖)。
(vii)皮下注射調配物皮下投藥用組成物的製備方法如下：將式(I)化合物與藥用級玉米油混合，以得到5 mg/ml的濃度。將該混合物滅菌並且裝填於適當的容器內。
實施例83
抗黴菌活性的測定採用下列實驗計畫，可測定出式(I)化合物的抗黴菌活性。
化合物係就對抗黴菌的集合(包括副口炎念珠菌、熱帶念珠菌、白色念珠菌－ATCC 35082以及新型隱球菌)進行試驗。將試驗用生物維持在4℃下的Sabourahd右旋糖瓊脂斜面。於以酵母－氮為主的培養基(YNB)內[含有胺基酸類(Difco，Detroit，Mich.)，pH 7，以及0.05M嗎福啉丙烷磺酸(MOPS)]，在旋轉盤上，於27℃下，將酵母培養一整夜，而製備得各生物的單一懸浮液。然後，將該懸浮液離心並且用0.85%氯化鈉予以清洗二次，接著以超音波震盪清洗過的細胞懸浮液4秒(Branson Sonifier，Model 350，Danbury，Conn.)。於血球計內，對該單一芽生孢子進行計數並且於0.85%氯化鈉內，將其調整至所要的濃度。
採用培養基微稀釋技術的的修正版，測定受試化合物的活性。於DMSO中，將受試化合物稀釋至1.0 mg/ml比例，然後，於YNB培養基(pH 7.0，含有MOPS)，稀釋至64 μ g/ml(使用氟康唑(Fluconazole)作為對照物)，以得到各化合物的工作溶液。使用96孔微量盤，孔1及3至12係用YNB培養基調製，化合物溶液的10倍稀釋液則製備於孔2至11(濃度範圍為64至0.123 μ g/ml)。孔1係作為光譜分析的無菌對照物及空白。孔12係作為生長對照物。用10 μ l之孔2至11的各內容物接種微量滴定盤(最終接種物大小為104 生物/ml)。在35℃下，將經過接種的滴定盤培養48小時。在用震盪混合器(Vorte－Genie 2 Mixer,Scientific Industries,Inc.,Bolemia,N.Y.)，將該滴定盤攪動2分鐘後，藉由測量在420 nm的吸收(Automatic Microplate Reader,DuPont Instruments,Wilmington,DEL)，以光譜的方法來測定IC5 0 值。該IC5 0 終點係定義為：與對照孔相較之下，呈現出大約50%(或更多)之生長減少的最低藥物濃度。由濁度分析來看，該IC5 0 值係定義為：孔內的濁度小於對照組的50%時最低藥物濃度。最小的細胞溶解濃度(MCC)係藉由如下方法來測定的：將該96孔微量盤的所有孔繼代培養Sabourahd右旋糖瓊脂(SDA)平盤，在35℃下，予以培養1至2天，然後，檢視活存度。
實施例84
活體內全植物黴菌感染之控制的生物評估實驗計畫將式(I)化合物溶於丙酮中，於丙酮內連續地一系列稀釋，以得到所要的濃度範圍。最終的處理體積係藉由將9體積的0.05%含水Tween－20T M 或0.01% Triton X－100T M (取決於病原體)而得到。
然後，使用下列的實驗計畫，將組成物用於試驗本發明化物對抗蕃茄疫病(晚疫病菌)的活性。令蕃茄(Rutgers栽培品種)於土壤較少之以泥炭為主的盆栽混合物土內，由種子生長至幼苗有10－20公分高為止。然後，用受試化合物，以100 ppm的速度，將植物噴灑至徑流(run－off)。24小時後，藉由用晚疫病菌之含水孢囊懸浮液進行噴灑，對受試植物進行接種，並且將植物置於露水室一整夜。然後，將植物轉移至溫室中，直到未受處理之對照植物發病為止。
可使用類似的實驗計畫，來試驗本發明化合物對抗小麥褐锈病(Puccinia)、小麥白粉病(Erysiphe graminis)、小麥(栽培品種Monon)、小麥葉斑病(Septoria tritici)、以及小麥穎枯病(Leptosphaeria nodorum)的活性。
均等物前述實施例係用來例示本發明且不應被解釋為強加任限制於本發明之範圍。顯而易見地，在不偏離本發明之根本方針的情況下，可對本發明之特定體系做無數的修正及變更。所有如是之修正及變更皆包括在本發明內。
第1圖係示實施例69所述之1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲之自由鹼二水合物的熱橢圓體圖(thermal ellipsoid plot)。
第2圖係示實施例69所述之1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲之自由鹼二水合物的堆積圖(packing diagram)。
第3圖係示實施例70所述之1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲之自由鹼的XRPD圖型。
第4圖係示實施例71所述之1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲之L－乳酸鹽的熱橢圓體圖。
第5圖係示實施例71所述之1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲之L－乳酸鹽的堆積圖。
第6圖係示實施例72所述之1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲之L－乳酸鹽的起始且安定受試樣本的XRPD圖型。
第7圖係示實施例72所述之1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲之自由鹼(FBI)的起始且安定受試樣本的XRPD圖型。
第8圖係示實施例72所述之1－環丙基－3－[3－(5－嗎福啉－4－基甲基－1H－苯並咪唑－2－基)－1H－吡唑－4－基]－脲之自由鹼二水合物(FB2)的起始且安定受試樣本的XRPD圖型。

Claims (84)

  1. 一種式(III)所示的化合物， 或其鹽類或互變異構物，其中E示一鍵結，R2 示H且R1 示-具有3至5個環成員之環烷基；或-環己基；或-CR6 R7 R8 基團，其中R6 及R7 均為甲基，且R8 係選自氫及甲基。
  2. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中R1 示環烷基。
  3. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中R1 示環丙基，該化合物係化合物1-環丙基-3-[3-(5-嗎福啉-4-基甲基-1H-苯並咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-脲或其鹽類。
  4. 如申請專利範圍第1項之化合物，其係為鹽的形式。
  5. 如申請專利範圍第4項之化合物，其中該化合物係呈選自下列的鹽形式：乙酸鹽、甲烷磺酸鹽、乙烷磺酸 鹽、DL-乳酸鹽、己二酸鹽、D-葡萄糖醛酸鹽、D-葡萄糖酸鹽以及氫氯酸鹽。
  6. 如申請專利範圍第3項之化合物，其係呈自由鹼的形式。
  7. 如申請專利範圍第6項之化合物，其係實質上晶性的。
  8. 如申請專利範圍第7項之化合物，其係晶性的且(i)具有下面表2內的座標所定義的晶體結構： ；及/或(ii)其中該晶體係屬於單斜空間群P2 1 /n (#14)，具有晶格參數a =7.66(10)，b =15.18(10)，c =17.71(10)Å，β=98.53(2)°，α=γ=90°。
  9. 如申請專利範圍第3項之化合物，其係呈鹽類的形式，選自乳酸鹽及檸檬酸鹽以及彼等之混合物。
  10. 如申請專利範圍第9項之化合物，其係L-乳酸盬。
  11. 如申請專利範圍第9項之化合物，其係檸檬酸盬。
  12. 如申請專利範圍第9項之化合物，其係L-乳酸鹽及檸檬酸鹽的混合物。
  13. 如申請專利範圍第9項之化合物，其中該乳酸鹽或檸檬酸鹽係實質上晶性的。
  14. 如申請專利範圍第13項之化合物，其中該乳酸鹽或檸檬酸鹽係95%至100%晶性者。
  15. 如申請專利範圍第13項之化合物，其中該乳酸鹽係L-乳酸鹽。
  16. 如申請專利範圍第9項之化合物，其係無水的。
  17. 如申請專利範圍第13項之化合物，該化合物係1-環丙基-3-[3-(5-嗎福啉-4-基甲基-1H-苯並咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-脲的L-乳酸鹽，其係晶性的且具有如下示之表4內的座標所定義的晶體結構
  18. 如申請專利範圍第13項之化合物，該化合物係1-環丙基-3-[3-(5-嗎福啉-4-基甲基-1H-苯並咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-脲的L-乳酸鹽，其係晶性的且具有屬於正交空間群P2 1 2 1 2 1 (#19)的晶體結構且具有晶格參數97(2)Ka =9.94(10)，b =15.03(10)，c =16.18(10)Å，α=β=γ=90°。
  19. 如申請專利範圍第13項之化合物，該化合物係1-環丙基-3-[3-(5-嗎福啉-4-基甲基-1H-苯並咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-脲的L-乳酸鹽，其係晶性的且具有下列在室溫下的晶格參數，a =10.08(10)，b =15.22(10)，c =16.22(10)Å，α=β=γ=90°。
  20. 如申請專利範圍第13項之化合物，該化合物係1-環丙基-3-[3-(5-嗎福啉-4-基甲基-1H-苯並咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-脲的L-乳酸鹽，其係晶性的且(a)具有如第4圖及第5圖所示的晶體結構；及/或(b)具有如下示之表4內的座標所定義的晶體結構； ；及/或(c)具有晶格參數97(2)Ka =9.94(10)，b =15.03(10)，c =16.18(10)Å，α=β=γ=90°；及/或(d)具有在室溫下的晶格參數a =10.08(10)，b =15.22(10)，c =16.22(10)Å，α=β=γ=90°；及/或(e)具有屬於正交空間群P2 1 2 1 2 1 (#19)的晶體結構。
  21. 如申請專利範圍第13項之化合物，該化合物係1-環丙基-3-[3-(5-嗎福啉-4-基甲基-1H-苯並咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-脲之L-乳酸鹽，其係晶性的且係由一或多種(以任何組合)或所有的下列參數所特性化，亦即，該鹽類係：(a)具有如第4圖及第5圖所示的晶體結構；及/或(b)具有下示之表4內的座標所定義的晶體結構； ；及/或(c)具有晶格參數97(2)Ka =9.94(10)，b =15.03(10)，c =16.18(10)Å，α=β=γ=90°；及/或(d)具有在室溫下的晶格參數a =10.08(10)，b =15.22(10)，c =16.22(10)Å，α=β=γ=90°；及/或(e)具有屬於正交空間群P2 1 2 1 2 1 (#19)的晶體結構；及/或(f)所具有的X-射線粉末繞射圖型的特徵在於其主要峰出現於：繞射角(2 θ)17.5、18.30、19.30、19.60以及21.85°，及/或平面間距(d)5.06、4.85、4.60、4.53以及4.07Å：及/或(g)在與如第6圖或表5所示之X-射線粉末繞射圖型者相同的繞射角度下呈現出峰 ；及/或(h)具有實質上如第6圖所示之X-射線粉末繞射圖型；及/或(i)無水的且在進行DSC時，於190℃下呈現出吸熱峰；及/或(j)當使用KBr圓薄片法進行分析時，所呈現出的紅外線光譜含有在3229、2972及1660cm-1 的特性峰。
  22. 如申請專利範圍第21項之化合物，其所具有的X-射線粉末繞射圖型的特徵在於其主要峰出現於：繞射角(2 θ)12.40、15.20、15.60、17.50、18.30、18.50、19.30、19.60、21.85、以及27.30°。
  23. 如申請專利範圍第21項之化合物，其所具有的X-射線粉末繞射圖型的特徵在於平面間距(d)7.13、5.83、5.68、5.06、4.85、4.79、4.60、4.53、407及3.26Å。
  24. 一種藥學組成物，其包含如申請專利範圍第1至23項中任一項之化合物和藥學上可接受之載體。
  25. 如申請專利範圍第24項之藥學組成物，其為含有濃度大於1mg/ml之1-環丙基-3-[3-(5-嗎福啉-4-基甲基-1H-苯並咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-脲的L-乳酸鹽或檸檬酸鹽或是彼等的混合物的水溶液。
  26. 如申請專利範圍第25項之藥學組成物，其含有濃度大於25mg/ml之1-環丙基-3-[3-(5-嗎福啉- 4-基甲基-1H-苯並咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-脲的L-乳酸鹽或檸檬酸鹽或是彼等的混合物。
  27. 如申請專利範圍第25項之藥學組成物，其含有(i)L-乳酸鹽或(ii)L-乳酸鹽及檸檬酸鹽的混合物。
  28. 如申請專利範圍第25項之藥學組成物，其具有在2至6範圍內的pH。
  29. 如申請專利範圍第28項之藥學組成物，其具有在4至5範圍內的pH。
  30. 如申請專利範圍第28項之藥學組成物，其係經過緩衝的。
  31. 如申請專利範圍第30項之藥學組成物，其含有1-環丙基-3-[3-(5-嗎福啉-4-基甲基-1H-苯並咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-脲的乳酸鹽以及檸檬酸鹽緩衝劑。
  32. 如申請專利範圍第31項之藥學組成物，其具有pH為4.5的溶液。
  33. 如申請專利範圍第24項之藥學組成物，其為水溶液，其中該化合物為呈質子化形式的1-環丙基-3-[3-(5-嗎福啉-4-基甲基-1H-苯並咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-脲連同一或多種選自L-乳酸根及檸檬酸根以及彼等之混合物的平衡離子；以及隨意的(i)一或多種其他平衡離子及/或(ii)一或多種靜脈內(I.V.)賦形劑。
  34. 如申請專利範圍第33項之藥學組成物，其中該 一或多種其他平衡離子為氯離子。
  35. 如申請專利範圍第33項之藥學組成物，其中該一或多種靜脈內賦形劑為滲透壓調節劑。
  36. 如申請專利範圍第33項之藥學組成物，其中該等乳酸根與檸檬酸根離子係以10：1至1：10之乳酸根：檸檬酸根比例存在於該溶液中。
  37. 如申請專利範圍第36項之藥學組成物，其中該等乳酸根與檸檬酸根離子係以1：1至1：10之乳酸根：檸檬酸根比例存在於該溶液中。
  38. 如申請專利範圍第37項之藥學組成物，其中該等乳酸根與檸檬酸根離子係以1：4.4之乳酸根：檸檬酸根比例存在於該溶液中。
  39. 一種呈冷凍乾燥調配物形式之藥學組成物，其係藉由將申請專利範圍第25項所定義的水溶液冷凍乾燥而形成的。
  40. 如申請專利範圍第24項之藥學組成物，其為包含下列之冷凍乾燥調配物：呈質子化形式的1-環丙基-3-[3-(5-嗎福啉-4-基甲基-1H-苯並咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-脲連同一或多種選自L-乳酸根及檸檬酸根以及彼等之混合物的平衡離子；以及隨意的(i)一或多種其他平衡離子及/或(ii)一或多種靜脈內賦形劑。
  41. 如申請專利範圍第40項之藥學組成物，其中該一或多種其他平衡離子為氯離子。
  42. 如申請專利範圍第40項之藥學組成物，其中該一或多種靜脈內賦形劑為滲透壓調節劑。
  43. 如申請專利範圍第24項之藥學組成物，其係用於治療哺乳動物之包含或起源自異常細胞生長之疾病或病況，其包含可有效抑制異常細胞生長之量的申請專利範圍第1至23項中任一項所定義的化合物。
  44. 如申請專利範圍第24項之藥學組成物，其係用於減輕或降低哺乳動物之包含或起源自異常細胞生長之疾病或病況發病率，其包含可有效抑制異常細胞生長之量的申請專利範圍第1至23項中任一項所定義的化合物。
  45. 如申請專利範圍第24項之藥學組成物，其係藉由抑制依賴細胞週期素之激酶或肝糖合成酶激酶-3之活性來調節細胞過程，其包含申請專利範圍第1至23項中任一項所定義的化合物。
  46. 如申請專利範圍第45項之藥學組成物，其中該細胞過程為細胞分裂。
  47. 一種如申請專利範圍第1至23項中任一項之化合物於製造治療癌症之藥物的用途。
  48. 如申請專利範圍第47項之化合物於製造治療癌症之藥物的用途，其中該癌症係以奧若拉激酶(Aurora kinase)的向上調控為特徵者。
  49. 如申請專利範圍第47項之化合物於製造治療癌症之藥物的用途，其係用於治療病患的癌症，該病患係選自具有奧若拉A基因Ile31變型之人口亞群。
  50. 如申請專利範圍第47項之化合物於製造治療癌症之藥物的用途，其係用於治療病患的癌症，該病患係已被診斷為構成具有奧若拉A基因Ile31變型之人口亞群的一部分。
  51. 如申請專利範圍第47項之化合物於製造治療癌症之藥物的用途，其係用於治療病患之疾病狀態或病況，該病患係已經篩檢且已確定罹患會對以具有對抗奧若拉激酶之活性的化合物所進行之治療有作用的疾病或病況，或有罹患該疾病或病況之風險者。
  52. 如申請專利範圍第47項之化合物於製造治療癌症之藥物的用途，其係用於治療病患之疾病狀態或病況，該病患係已經篩檢且已確定罹患會對以該化合物所進行之治療有作用的疾病或病況，或有罹患該疾病或病況之風險者。
  53. 如申請專利範圍第24項之藥學組成物，其係用於治療癌症。
  54. 如申請專利範圍第53項之藥學組成物，其中該癌症係選自下列者：選自下列的癌瘤：膀胱、乳房、結腸、腎、表皮、肝、肺、食道、膽囊、卵巢、胰臟、胃、子宮頸、甲狀腺、前列腺或皮膚的癌瘤；選自下列之淋巴系的造血腫瘤：白血病、急性淋巴細胞性白血病、B-細胞淋巴瘤、T-細胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma)、非霍奇金氏淋巴瘤、有毛細胞淋巴瘤、或勃克特氏淋巴瘤(Burkett’s lymphoma)；選自下列之骨髓 系的造血腫瘤：急性及慢性的骨髓性白血病、骨髓發育不良症候群、或前骨髓細胞性白血病；甲狀腺濾泡癌；選自下列之間葉來源的腫瘤：纖維肉瘤或橫紋肌肉瘤(rhabdomyosarcoma)；選自下列之中樞或末梢神經系統的腫瘤：黑細胞瘤、神經母細胞瘤、神經膠瘤或神經鞘瘤；黑色瘤；生殖細胞瘤；畸胎瘤；骨肉瘤；著色性乾皮症；角質棘皮瘤；甲狀腺濾泡癌；或卡波西氏肉瘤。
  55. 如申請專利範圍第53項之藥學組成物，其中該癌症為白血病。
  56. 如申請專利範圍第55項之藥學組成物，其中該白血病係選自復發或難醫的急性骨髓性白血病、脊髓發育不良症候群、急性淋巴細胞性白血病及慢性骨髓性白血病。
  57. 如申請專利範圍第53項之藥學組成物，其中該癌症係選自乳癌、卵巢癌、結腸癌、前列腺癌、食道癌、鱗狀細胞癌以及非小細胞肺癌瘤。
  58. 如申請專利範圍第53項之藥學組成物，其中該癌症係選自B-細胞瘤巴瘤、擴散性大B細胞淋巴瘤或慢性淋巴細胞性白血病。
  59. 如申請專利範圍第47項之化合物於製造治療癌症之藥物的用途，其係用於治療選自下列之癌症：B-細胞淋巴瘤、T-細胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、有毛細胞淋巴瘤、或勃克特氏淋巴瘤。
  60. 如申請專利範圍第24項之藥學組成物，其係以 水溶液形式投藥，該藥學組成物包含呈鹽類形式之化合物，該鹽類在水中的溶解度大於1mg/ml。
  61. 如申請專利範圍第24項之藥學組成物，其係以水溶液形式投藥，該藥學組成物包含呈鹽類形式之化合物，該鹽類在水中的溶解度大於25mg/ml。
  62. 如申請專利範圍第24項之藥學組成物，其係以水溶液形式投藥，該藥學組成物包含呈鹽類形式之化合物，該鹽類在水中的溶解度大於100mg/ml。
  63. 如申請專利範圍第24項之藥學組成物，其包含含有呈鹽類形式之化合物的水溶液，該鹽濃度係大於100mg/ml。
  64. 如申請專利範圍第24項之藥學組成物，其包含含有呈鹽類形式之化合物的水溶液，該鹽濃度係大於1mg/ml。
  65. 如申請專利範圍第60項之藥學組成物，其中該鹽類係選自：乙酸鹽、甲烷磺酸鹽、乙烷磺酸鹽、DL-乳酸鹽、己二酸鹽、D-葡萄糖醛酸鹽、D-葡萄糖酸鹽以及氫氯酸鹽。
  66. 如申請專利範圍第60項之藥學組成物，其中該鹽類係L-乳酸鹽。
  67. 如申請專利範圍第24項之藥學組成物，其係液態組成物。
  68. 如申請專利範圍第24項之藥學組成物，其係呈供溶於水之用的乾燥形式。
  69. 如申請專利範圍第24項之藥學組成物，其係適用於非經腸投藥。
  70. 如申請專利範圍第69項之藥學組成物，其係適用於藉由注射所進行的非經腸投藥。
  71. 如申請專利範圍第69項之藥學組成物，其係適用於藉由輸注法所進行的非經腸投藥。
  72. 一種製備申請專利範圍第1至23項中任一項之化合物的方法，該方法包含令式(X)化合物 與：(i)式R1 -E-N=C=O的異氰酸酯，在脲形成條件下反應，或是(ii)式R1 -E-NR2 H之胺，在含羰基之脲形成試劑存在下反應。
  73. 如申請專利範圍第72項的方法，其中該含羰基之脲形成試劑為羰基二咪唑(CDI)、光氣或三光氣。
  74. 一種製備1-環丙基-3-[3-(5-嗎福啉-4-基甲基-1H-苯並咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-脲或其鹽類的方法，該方法包含：(i)在溶劑中，以酸處理式(XXVIIa)化合物， 其中APG為可在酸性條件下予以移除之胺保護基，(ii)中和該反應；(iii)令步驟(ii)的產物與羰基化劑反應；以及(iv)令步驟(iii)的產物與環丙胺反應。
  75. 如申請專利範圍第74項的方法，其中該羰基化劑為1,1’-羰基二咪唑(CDI)或光氣同功物。
  76. 如申請專利範圍第75項的方法，其中該光氣同功物為三光氣或光氣。
  77. 一種製備1-環丙基-3-[3-(5-嗎福啉-4-基甲基-1H-苯並咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-脲的方法，該方法包含：令式(XXXIII)或(XXXIIIa)化合物： 與環丙胺反應；然後任意地形成酸加成鹽。
  78. 一種製備如申請專利範圍第1至23項中任一項之式(III)化合物的方法，該方法包含：令式(XXXIII) 化合物及/或其位向異構物(regioisomer)(XXXIIIa) 與式R1 -E-NH2 之化合物反應，然後任意地形成式(III)化合物之酸加成鹽。
  79. 如申請專利範圍第78項的方法，其中該反應係在極性非質子溶劑中進行。
  80. 如申請專利範圍第24項之藥學組成物，其係適用於非經腸投藥。
  81. 如申請專利範圍第80項之藥學組成物，其係以水溶液的形式投藥。
  82. 如申請專利範圍第81項之藥學組成物，其含有濃度係大於25mg/ml之該化合物。
  83. 如申請專利範圍第82項之藥學組成物，其含有濃度大於100mg/ml之該化合物。
  84. 如申請專利範圍第24項之藥學組成物，其係適用於經口投藥。
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