TWI405570B - 口服活性１，２，４-二唑於無義突變抑制療法之用途 - Google Patents

口服活性１，２，４-二唑於無義突變抑制療法之用途 Download PDF

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TWI405570B
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Samit Hirawat
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Description

口服活性1,2,4- 二唑於無義突變抑制療法之用途
本發明係關於使用1,2,4－二唑苯甲酸化合物治療或預防與無義突變相關之疾病的特定劑量及服用方案。具體而言，本發明係關於在患有與無義突變相關之疾病的哺乳動物中使用3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸之特定劑量及服用方案。
一類新穎的1,2,4－二唑化合物及其治療、預防或控制可藉由調節過早轉譯終止或無義介導之mRNA衰變改善之疾病的用途在於2006年1月31日頒佈之標題為"1,2,4－Oxadiazole Benzoic Acid Compounds and Their Use For Nonsense Suppression and the Treatment of Disease"的美國專利第6,992,096 B1號中予以闡述，其全文以引用方式併入本文中。一種此類化合物係3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸。對於所有藥物而言，其治療患有疾病(例如囊性纖維化及迪謝內(Duchenne)肌營養不良)之患者的正確劑量及服用方案對達成期望或最佳治療效果而無不利或有害作用皆係非常關鍵的。
因此，當前需要防止或減少任何不利或有害作用或提供最佳治療效果或二者(即提供期望治療性質)之安全、有效且無毒之劑量及服用方案。
本發明涵蓋服用方案，其中以特定時間間隔投與特定劑量之3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物以調節過早轉譯終止或無義介導之mRNA衰變或改善一或多種與之相關之症狀，同時減少或避免不利作用或有害作用。本發明進一步涵蓋3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之特定劑量及單位劑型。
在一實施例中，本發明係關於在24小時之時間段內向需要其之患者投與一次、兩次或三次有效量之3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物的方法。本發明亦係關於在24小時之時間段內向需要其之患者投與一次、兩次或三次包含有效量的3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之醫藥組合物的方法。在24小時之時間段期間每次投與之劑量可係相同或不同的。在一實施例中，當在24小時之時間段內實施三次投與時，最初兩次投與之劑量係相同的且第三次劑量係第一次劑量的兩倍。在另一實施例中，全部三次劑量皆係相同的。
在另一實施例中，本發明係關於治療、預防或控制可藉由調節過早轉譯終止或無義介導之mRNA衰變改善之疾病的方法，其包括在24小時之時間段內向需要其之患者投與一次、兩次或三次有效量的3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物。較佳地，該投與連續或伴有停藥期每天三次實施數天、數週、數月或數年。
本發明亦係關於治療、預防或控制可藉由調節過早轉譯終止或無義介導之mRNA衰變改善之疾病的方法，其包括在24小時之時間段內向需要其之患者投與一次、兩次或三次包含有效量的3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之醫藥組合物。較佳地，該投與連續或伴有停藥期每天三次實施數天、數週、數月或數年。
在一實施例中，本發明係關於治療、預防或減輕咳嗽之方法，其包括向需要其之患者投與有效量的3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物。
在一實施例中，本發明係關於使抗肌營養不良蛋白在肌中之表現增加的方法，其包括向需要其之患者投與有效量的3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物。
在一實施例中，本發明係關於投與3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之方法，其中在24小時時間段內向需要其之患者投與一次、兩次或三次該活性藥劑，其中每次投與較佳間隔約4－14小時。在一特定實施例中，活性藥劑之劑量自第一次至第三次劑量係逐步增加的。
在另一實施例中，本發明係關於連續療法，其中向需要其之患者投與3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物一段時間(例如5、7、10、14、20、24、28、60或120天或更長)。
在另一實施例中，本發明係關於以以下單次或分次(例如每天三次)劑量向需要其之患者投與3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物：介於0.1毫克/公斤與500毫克/公斤之間、1毫克/公斤與250毫克/公斤之間、1毫克/公斤與150毫克/公斤之間、1毫克/公斤與100毫克/公斤之間、1毫克/公斤與50毫克/公斤之間、1毫克/公斤與25毫克/公斤之間、1毫克/公斤與10毫克/公斤之間或2毫克/公斤與10毫克/公斤之間。在一特定實施例中，以以下劑量投與3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物：約4毫克/公斤、約7毫克/公斤、約8毫克/公斤、約10毫克/公斤、約14毫克/公斤或約20毫克/公斤。在另一實施例中，在24小時之時間段內投與一次、兩次或三次任何劑量的在前述實施例中所闡述之3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物。
在另一實施例中，本發明係關於包含以下量之3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物的單位劑量調配物：介於約35毫克與約1400毫克之間、約125毫克與約1000毫克之間、約250毫克與約1000毫克之間或約500毫克與約1000毫克之間。
在另一實施例中，本發明係關於包含以下量之3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物的單位劑量調配物：35毫克、50毫克、70毫克、100毫克、125毫克、140毫克、175毫克、200毫克、250毫克、280毫克、350毫克、500毫克、560毫克、700毫克、750毫克、1000毫克或1400毫克。在一較佳實施例中，本發明係關於包含125毫克、250毫克或1000毫克之3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物的單位劑量調配物。在另一實施例中，本發明係關於保持患者中3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之血漿濃度大於以下量至少約1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、8、12或24小時或更長之方法：約0.1微克/毫升、0.5微克/毫升、1微克/毫升、2微克/毫升、約5微克/毫升、約10微克/毫升、約20微克/毫升、約25微克/毫升、約40微克/毫升、約50微克/毫升、100微克/毫升、200微克/毫升、300微克/毫升、400微克/毫升或500微克/毫升，其包括向需要其之患者投與有效量之3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物。
 定義
本文所用"過早轉譯終止"係指將與胺基酸對應之密碼子變為終止密碼子之突變結果。
本文所用"無義介導之mRNA衰變"係指介導包含過早轉譯終止密碼子之mRNA衰變的任何機制。在一特定實施例中，無義介導之mRNA衰變由DNA之無義突變引起。
本文所用"過早終止密碼子(premature termination codon或premature stop codon)"係指應為與胺基酸對應之密碼子之處出現終止密碼子。
本文所用"無義突變"係將與胺基酸對應之密碼子變為終止密碼子之點突變。在一特定實施例中，無義突變係在DNA中發生並然後轉錄至mRNA中之突變。
本文所用"無義抑制"係指抑制(inhibition或suppression)過早轉譯終止及/或無義介導之mRNA衰變。在一特定實施例中，mRNA衰變由DNA之無義突變引起。
本文所用"調節過早轉譯終止及/或無義介導之mRNA衰變"係指藉由改變無義抑制之含量調節基因表現。例如，若期望提高由含有過早終止密碼子之基因編碼之缺陷蛋白質的產量，即允許疾病基因之過早終止密碼子之連讀從而可發生該基因之轉譯，則調節過早轉譯終止及/或無義介導之mRNA衰變會引起無義抑制之上調。
本文所用術語"不利作用"或"副作用"包括(但不限於)噁心、嘔吐、腹瀉、頭痛、血清丙胺酸轉胺酶(ALT)升高、血清天冬胺酸轉胺酶(AST)升高、頭暈、血清肌酸激酶(CK)升高、腹痛、腹內脹氣、眼痛、眼腫脹、眼灼熱、乳頭敏感、乳房壓痛、肌肉骨骼性胸痛、疹、瘙癢、疼痛性頜下淋巴結、血清乳酸脫氫酶(LDH)升高、血清醛縮酶升高及血清甘油三酯升高。
本文所用術語"活性藥劑"、"藥物"及"原料藥"係指3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物。
本文所用術語"劑量"意指擬同時投與之活性藥劑的量。
本文所用術語"單位劑型"包括錠劑；膜衣錠；膠囊，例如軟彈性明膠膠囊；藥囊；藥丸；片劑；菱形錠劑；分散液；粉末；溶液；凝膠；適於口服或黏膜投與患者之液體劑型，包括懸浮液(例如水性或非水性液體懸浮液)、乳液(例如水包油乳液或油包水液體乳液)、溶液及酏劑；及無菌固體(例如晶體或非晶形固體)，其可經重構提供適於口服或非經腸投與患者之液體劑型。單位劑型未必一定以單次劑量投與。
本文所用術語"服用方案"及"劑量"意指每時間單位所給出活性藥劑的量及投與之持續時間。
本文所用術語"患者"意指動物(例如牛、馬、羊、豬、雞、火雞、鵪鶉、貓、狗、小鼠、大鼠、兔、天竺鼠等)，較佳者係哺乳動物，例如非靈長類及靈長類動物(例如猴及人類)，最佳者係人類。在某些實施例中，患者係胎兒、胚胎、嬰兒、兒童、青少年或成人。在一實施例中，已通過預篩選確定患者具有無義突變。在另一實施例中，已通過預篩選確定患者具有何種無義突變(即UAA、UGA或UAG)。
本文所用"有效量"係指足以在疾病之治療或控制中提供治療益處或延遲或最小化與疾病相關之症狀之3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物的量。在一實施例中，術語"有效量"係指在某段時間內足以達成期望血漿含量之3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物的量。本文對較佳有效量予以具體闡述。
本文所用術語"控制(manage,managing及management)"係指患者自投與3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物(其沒有達成疾病治癒)獲得之有益效果。
本文所用術語"預防(prevent,preventing及prevention)"係指藉由投與3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物來預防患者中疾病或其症狀之發作、復發、擴散或惡化。因為與無義突變相關之疾病可遺傳，所以可針對是否存在無義突變對患者實施篩選。在通過篩選確定患者具有無義突變之情形下，可向該患者投與有效量的3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物來預防該疾病或其症狀之發作、復發、擴散或惡化。
本文所用術語"治療(treat,treating及treatment)"係指消除或改善疾病或與該疾病相關之症狀。在某些實施例中，該等術語係指由向患有此疾病之患者投與3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物所達成之該疾病擴散或惡化之最小化。
本文所用術語"醫藥上可接受之鹽"係指自醫藥上可接受之無毒酸或鹼(包括無機酸及鹼及有機酸及鹼)製備之鹽。3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸之適宜的醫藥上可接受之鹼加成鹽包括(但不限於)用鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉及鋅製成之金屬鹽或用離胺酸、N,N'－二苄基乙二胺、氯普魯卡因(chloroprocaine)、膽鹼、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N－甲基葡萄糖胺)及普魯卡因(procaine)製成之有機鹽。適宜無毒酸包括(但不限於)無機及有機酸，例如乙酸、海藻酸、鄰胺基苯甲酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙二磺酸、甲酸、富馬酸、糠酸、半乳糖醛酸、葡萄糖酸、葡萄糖醛酸、麩胺酸、乙醇酸、氫溴酸、氫氯酸、羥乙磺酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、黏酸、硝酸、巴莫酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、丙酸、水楊酸、硬脂酸、琥珀酸、磺胺酸、硫酸、酒石酸及對甲苯磺酸。特定無毒酸包括氫氯酸、氫溴酸、磷酸、硫酸及甲磺酸。特定鹽之實例因此包括氫氯酸鹽及甲磺酸鹽。鹽之其他實例已為熟習此項技術者所熟知，參見(例如)Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版.,Mack Publishing,Easton PA(1990)。
本文所用術語"水合物"意指進一步包括由非共價分子間作用力結合之化學計量或非化學計量的水的3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽。
本文所用術語"溶合物"意指進一步包括由非共價分子間作用力結合之化學計量或非化學計量的溶劑的3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽。
與過早轉譯終止相關之疾病
本發明涵蓋治療、預防或控制可藉由抑制過早轉譯終止及/或無義介導之mRNA衰變改善之患者中疾病或病症的方法，其包括根據本文所述之劑量及/或服用方案向需要其之患者投與有效量的口服生物可利用性化合物(即3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物)。
在一實施例中，本發明涵蓋治療、預防或控制任一與顯示過早轉譯終止及/或無義介導之mRNA衰變之基因相關之疾病。在一實施例中，該疾病部分歸因於由過早終止密碼子引起之基因表現缺乏。可顯示過早轉譯終止及/或無義介導之mRNA衰變的基因及與過早轉譯終止及/或無義介導之mRNA衰變相關之疾病的具體實例可見於2002年6月21日提出申請之美國專利申請案第60/390,747號，其標題為：Methods For Identifying Small Molecules That Modulate Premature Translation Termination And Nonsense Mediated mRNA Decay，其全文以引用方式併入本文中。
在一具體實施例中，本文提供之該等方法、組合物、劑量、單位劑型及服用方案可用於治療、預防或控制胚胎或胎兒中與基因中無義突變相關之疾病，該胚胎或胎兒患有或易患或易感染與基因中無義突變相關之疾病，例如彼等本文所述者。根據該實施例，向妊娠女性投與有效量之3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物，其通過胎盤至胚胎或胎兒。在一特定實施例中，將有效量之3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物口服投與給妊娠女性。
與過早轉譯終止及/或無義介導之mRNA衰變相關或可藉由抑制其而改善之疾病或病症包括(但不限於)：遺傳疾病、癌症、自體免疫疾病、血液疾病、膠原性疾病、糖尿病、神經退化性疾病、增生型疾病、心血管疾病、肺部疾病、炎症性疾病或中樞神經系統疾病。
在本發明方法範圍內之具體遺傳疾病包括(但不限於)多發性內分泌瘤病(1、2及3型)、澱粉樣變性病、黏多糖增多症(I及III型)、先天性腎上腺發育不良、腺瘤性結腸息肉病、腦視網膜血管瘤病、門克斯(Menkes)綜合症、血友病A、血友病B、膠原VII性疾病、Alagille綜合症、Townes－Brocks綜合症、橫紋肌樣瘤、大皰性表皮松解、胡爾勒氏(Hurler's)綜合症、科－勒二氏(Coffin－Lowry)綜合症、無虹膜症、恰克－馬利－杜斯氏(Charcot－Maria－Tooth)症、肌管性肌病、X－連鎖之肌管性肌病、X－連鎖之軟骨發育不全、X－連鎖之無丙球蛋白血症、多囊性腎病、脊髓性肌萎縮、家族性腺瘤性息肉病、丙酮酸脫氫酶缺乏症、苯丙酮尿症、神經纖維瘤病1、神經纖維瘤病2、阿茲海默氏(Alzheimer's)症、泰－薩克斯(Tay Sachs)病、瑞特(Rett)綜合症、赫曼斯基－普德拉克(Hermansky－Pudlak)綜合症、外胚層發育不良/皮膚脆性綜合症、Leri－Weill軟骨骨生成障礙、佝僂病、低磷酸酶血症、腎上腺腦白質營養不良、腦回狀萎縮、動脈粥樣硬化、感覺神經性聾、肌張力障礙、登特(Dent)病、急性間歇性卟啉病、考登(Cowden)病、赫利茲(Herlitz)型大皰性表皮松解、威爾遜(Wilson)病、特雷歇－柯林斯氏(Treacher－Collins)綜合症、丙酮酸激酶缺乏症、巨人症、侏儒症、甲狀腺功能減退症、甲狀腺功能充進症、老化症、肥胖症、帕金森氏(Parkinson's)病、尼曼－匹克(Niemann Pick's)病C、囊性纖維化、肌營養不良、心臟病、腎結石、共濟失調性毛細血管擴張症、家族性高膽固醇血症、色素性視網膜炎、溶酶體貯積症、結節性硬化症、迪謝內肌營養不良及馬凡(Marfan)綜合症。
在另一實施例中，遺傳疾病係自體免疫疾病。在一較佳實施例中，自體免疫疾病係類風濕性關節炎或移植物抗宿主病。
在另一實施例中，遺傳疾病係血液疾病。在一較佳實施例中，血液疾病係血友病A、馮維勒布蘭德氏(Von Willebrand)病(3型)、共濟失調性毛細血管擴張症、b－地中海貧血或腎結石。
在另一實施例中，遺傳疾病係膠原性疾病。在一實施例中，膠原性疾病係成骨不全(osteogenesis imperfecta)或肝硬化。
在另一實施例中，遺傳疾病係糖尿病。
在另一實施例中，遺傳疾病係炎症性疾病。在一較佳實施例中，炎症性疾病係關節炎。
在另一實施例中，遺傳疾病係中樞神經系統疾病。在一實施例中，中樞神經系統疾病係神經退化性疾病。在一較佳實施例中，中樞神經系統疾病係多發性硬化症、肌營養不良、迪謝內肌營養不良、阿茲海默氏症、泰－薩克斯病、晚期幼兒神經元蠟樣脂褐質積存症(LINCL)或帕金森氏病。
在另一實施例中，遺傳疾病係癌症。在一較佳實施例中，癌症係頭頸癌、眼癌、皮膚癌、口腔癌、咽喉癌、食道癌、胸癌、骨癌、肺癌、結腸癌、乙狀結腸癌、直腸癌、胃癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、腎癌、肝癌、胰腺癌、腦癌、腸癌、心臟癌或腎上腺癌。癌症可係原發性或轉移性的。癌症包括實體腫瘤、血液癌症及其他瘤形成。
在另一較佳實施例中，癌症與腫瘤抑制基因有關(參見(例如)Garinis等人，2002,Hum Gen 111：115－117；Meyers 等人，1998,Proc.Natl.Acad.Sci,USA,95：15587－15591；Kung等人，2000,Nature Medicine 6(12)：1335－1340)。此等腫瘤抑制基因包括(但不限於)APC、ATM、BRAC1、BRAC2、MSH1、pTEN、Rb、CDKN2、NF1、NF2、WT1及p53。
在一尤佳實施例中，腫瘤抑制基因係p53基因。在p53基因中已鑑別出無義突變且其與癌症有關。已在p53基因中鑑別出數種無義突變(參見(例如)Masuda等人，2000,Tokai J Exp Clin Med.25(2)：69－77；Oh等人，2000,Mol Cells 10(3)：275－80；Li等人，2000,Lab Invest.80(4)：493－9；Yang等人，1999,Zhonghua Zhong Liu Za Zhi 21(2)：114－8；Finkelstein等人，1998,Mol Diagn.3(1)：37－41；Kajiyama等人，1998,Dis Esophagus.11(4)：279－83；Kawamura等人，1999,Leuk Res.23(2)：115－26；Radig等人，1998,Hum Pathol.29(11)：1310－6；Schuyer等人，1998,Int J Cancer 76(3)：299－303；Wang－Gohrke等人，1998,Oncol Rep.5(1)：65－8；Fulop等人，1998,J Reprod Med.43(2)：119－27；Ninomiya等人，1997,J Dermatol Sci.14(3)：173－8；Hsieh等人，1996,Cancer Lett.100(1－2)：107－13；Rall等人，1996,Pancreas.12(1)：10－7；Fukutomi等人，1995,Nippon Rinsho.53(11)：2764－8；Frebourg等人，1995,Am J Hum Genet.56(3)：608－15；Dove等人，1995,Cancer Surv.25：335－55；Adamson等人，1995,Br J Haematol.89(1)：61－6；Grayson等人，1994,Am J Pediatr Hematol Oncol.16(4)：341－7；Lepelley等人，1994,Leukemia.8(8)：1342－9；McIntyre等人，1994,J Clin Oncol.12(5)：925－30；Horio等人，1994,Oncogene.9(4)：1231－5；Nakamura等人，1992,Jpn J Cancer Res.83(12)：1293－8；Davidoff等人，1992,Oncogene.7(1)：127－33；及Ishioka等人，1991,Biochem Biophys Res Commun.177(3)：901－6；其全文揭示內容以引用方式併入本文中)。
在其他實施例中，欲藉由向需要其之患者投與有效量之3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物來治療、預防或控制之疾病包括(但不限於)實體腫瘤、肉瘤、癌、纖維肉瘤、黏液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、骨源性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管內皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤因氏(Ewing's)瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結腸癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鱗狀細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊腺癌、髓樣癌、支氣管癌、腎細胞癌、肝瘤、膽管癌、絨毛膜癌、精原細胞瘤、胚胎性癌、維爾姆斯氏(Wilms')腫瘤、子宮頸癌、睾丸腫瘤、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、表皮癌、神經膠質瘤、星形細胞瘤、髓母細胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、卡波西氏(Kaposi's)肉瘤、松果體瘤、血管母細胞瘤、聽神經瘤、少突神經膠質瘤、menangioma、黑色素細胞瘤、神經母細胞瘤、成視網膜細胞瘤、血源性腫瘤、急性淋巴細胞性白血病、急性淋巴細胞性B－細胞白血病、急性淋巴細胞性T－細胞白血病、急性成髓細胞性白血病、急性前髓細胞性白血病、急性成單核細胞性白血病、急性紅白血病、急性成巨核細胞白血病、急性骨髓單核細胞性白血病、急性非淋巴細胞性白血病、急性未分化性白血病、慢性髓細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、毛細胞性白血病或多發性骨髓瘤。參見(例如)Harrison's Principles of Internal Medicine,Eugene Braunwald等人編輯，第491－762頁(2001年第15版)。
在一實施例中，本發明係關於治療、預防或減輕咳嗽之方法，其包括向需要其之患者投與有效量的3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物。在一特定實施例中，患者患有囊性纖維化。在另一實施例中，咳嗽係慢性咳嗽。在另一實施例中，以本文提供之劑型或根據本文提供之服用方案投與3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物。
在一實施例中，本發明係關於使抗肌營養不良蛋白在肌中之表現增加的方法，其包括向需要其之患者投與有效量的3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物。在一特定實施例中，本發明係關於使抗肌營養不良蛋白在肌細胞中之表現增加的方法，其包括使該等肌細胞與有效量的3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物接觸。在一實施例中，對該等肌細胞實施活體外接觸。在一具體實施例中，患者患有迪謝內肌營養不良。在另一實施例中，以本文提供之劑型或根據本文提供之服用方案投與3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物。
劑量及服用方案
不受限於理論，本發明部分涵蓋使過早轉譯終止及/或無義介導之mRNA衰變抑制最佳化之3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物的特定劑量及服用方案。在一較佳實施例中，無義介導之mRNA衰變由DNA之無義突變引起。
本發明之新穎方法涵蓋治療、預防及控制可藉由抑制過早轉譯終止及/或無義介導之mRNA衰變而治療或預防之疾病或其症狀，同時減輕或避免不利或有害作用，例如毒性或副作用。本文所述劑量及服用方案之較佳投與途徑係口服(即攝取其濃度高於活性藥劑飽和濃度之溶液、膠體溶液或含有額外活性藥劑之溶液)。
由於本文所述之劑量及服用方案能夠達成並保持活性藥劑之期望血漿濃度，因此吾人認為其係有用的。不受限於理論，吾人認為在(例如)24小時之時間段或更長時間內達成並保持活性藥劑之相對穩定的血漿濃度(例如彼等在段落4.4中所述者)可向患者提供有益療效。本文所述之劑量及服用方案可用於達成並保持活性藥劑之此治療血漿濃度。
在一實施例中，本發明係關於投與3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之方法，其中在12或24小時之時間段內向需要其之患者投與一次該活性藥劑。
在另一實施例中，本發明係關於投與3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之方法，其中在12或24小時之時間段內向需要其之患者投與兩次該活性藥劑，其中每次投與較佳間隔約4－14小時，在一實施例中間隔12小時。在該等實施例中，可(例如)在進餐時間(例如早餐及晚餐)投與該活性藥劑。
在另一實施例中，本發明係關於投與3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之方法，其中在12或24小時之時間段內向需要其之患者投與三次該活性藥劑，其中每次投與較佳間隔約4－14小時。在一特定實施例中，在早晨、下午及晚上分別投與一次該活性藥劑。較佳服藥間隔包括4、5、6、7、8、9、10、11、12、13及14小時。
在一實施例中，活性藥劑之劑量在24小時之時段期間逐步增加。在另一實施例中，第二次投與劑量係增加的(例如加倍)。在另一實施例中，第一次及第二次投與劑量保持不變且第三次投與劑量增加(例如加倍)。在一特定實施例中，在24小時之時間段內按照下式投與該三次劑量：1X、1X、2X，其中X係特定初始劑量(例如4毫克/公斤、7毫克/公斤、10毫克/公斤、20毫克/公斤、25毫克/公斤、30毫克/公斤、35毫克/公斤、40毫克/公斤或50毫克/公斤)。在另一實施例中，在患者進食約10、15、30、45或60分鐘之內(即之前或之後)投與該活性藥劑。在一實施例中，將有效量之活性藥劑噴灑在食物上或混入食物中。在另一實施例中，在無食物之情形下投與該活性藥劑。
尤佳之服用方案係在餐後30分鐘之內以約6小時、6小時及12小時為間隔(例如在早餐後約7：00 AM、午餐後約1：00 PM及在晚餐後約7：00 PM)向患者投與該活性藥劑之服用方案。
在又一實施例中，本發明係關於以以下單次或分次(例如在24小時之時間段內三次)劑量向需要其之患者投與3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物：介於0.1毫克/公斤與500毫克/公斤之間、1毫克/公斤與250毫克/公斤之間、1毫克/公斤與150毫克/公斤之間、1毫克/公斤與100毫克/公斤之間、1毫克/公斤與50毫克/公斤之間、1毫克/公斤與25毫克/公斤之間、1毫克/公斤與10毫克/公斤之間或2毫克/公斤與10毫克/公斤之間。在一特定實施例中，以以下劑量投與3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物：約2－6毫克/公斤、約5－9毫克/公斤、約6－10毫克/公斤、約8－12毫克/公斤、約12－16毫克/公斤或約18－22毫克/公斤。在一特定實施例中，以以下劑量投與3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物：約4毫克/公斤、約7毫克/公斤、約8毫克/公斤、約10毫克/公斤、約14毫克/公斤、約20毫克/公斤、約25毫克/公斤、約30毫克/公斤、約35毫克/公斤、約40毫克/公斤或約50毫克/公斤。在另一實施例中，在24小時之時間段內投與三次在前述實施例中闡述之任何劑量3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物。
在另一實施例中，本發明係關於連續療法，其中向需要其之患者每天投與3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物一段時間(例如5、7、10、14、20、24、28、60或120天或更長)。在一實施例中，每24小時時間段三次連續投與該活性藥劑。在另一實施例中，每天、每週、每月或每年連續投與該活性藥劑。在一具體實施例中，以約4毫克/公斤、約4毫克/公斤及約8毫克/公斤之劑量每24小時時間段三次連續投與該活性藥劑數天、數週、數月或數年。在一具體實施例中，以約7毫克/公斤、約7毫克/公斤及約14毫克/公斤之劑量每24小時時間段三次連續投與該活性藥劑數天、數週、數月或數年。在一具體實施例中，以約10毫克/公斤、約10毫克/公斤及約20毫克/公斤之劑量每24小時時間段三次連續投與該活性藥劑數天、數週、數月或數年。在一具體實施例中，以約30毫克/公斤、約30毫克/公斤及約60毫克/公斤之劑量每24小時時間段三次連續投與該活性藥劑數天、數週、數月或數年。在一具體實施例中，以約10毫克/公斤、約10毫克/公斤及約20毫克/公斤之劑量每24小時時間段三次連續投與該活性藥劑數天、數週、數月或數年。在一具體實施例中，以約40毫克/公斤、約40毫克/公斤及約80毫克/公斤之劑量每24小時時間段三次連續投與該活性藥劑數天、數週、數月或數年。在投與該活性藥劑之每一24小時時間段內，較佳以約6小時、6小時及12小時為間隔(例如在早餐後約7：00 AM、午餐後約1：00 PM及在晚餐後約7：00 PM)實施三次投與。連續療法較佳用於治療、預防或控制囊性纖維化及迪謝內肌營養不良。
一個療程之治療期可持續一週、兩週、三週、四週、五週、六週、七週、八週、九週、十週、十一週、十二週、十三週、十四週、四個月、五個月、六個月、七個月、八個月、九個月、十個月、十一個月、一年、兩年、三年、四年、五年或更長。該等治療期可由停藥期中斷，該等停藥期可持續一天、一週、兩週、三週、四週、五週、六週、七週、八週、九週、十週、十一週、十二週、十三週、十四週、四個月、五個月、六個月、七個月、八個月、九個月、十個月、十一個月、一年、兩年、三年、四年、五年或更長。可由熟習此項技術者(例如醫師)作出此等決定。
在一特定實施例中，連續實施治療14天，隨後的14天不實施治療，隨後再連續實施治療14天。在一實施例中，在第二個治療14天期間所給之劑量大於在第一個治療14天期間所給之劑量。作為非限制性實例，連續14天在24小時之時間段內向需要其之患者投與三次劑量的3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物(例如4毫克/公斤、4毫克/公斤及8毫克/公斤)，隨後的14天不實施治療，隨後再連續14天在24小時之時間段內投與三次劑量的3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物(例如10毫克/公斤、10毫克/公斤及20毫克/公斤)。
在另一實施例中，連續28天實施治療。連續治療可由一或多天、月、週或年中斷。連續治療亦可隨後為持續一或多天、月、週或年之停藥期，然後在停藥期後重新開始連續治療。
在某些實施例中，按照本文所述劑量及服用時間方案與第二活性藥劑結合(例如同時或順序)對3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物實施投與。在特定實施例中，按照本文所述劑量及服用時間方案與胺基糖苷、皮質類固醇、胰酶、抗生素、胰島素、降血糖藥、ω－3脂肪酸、化學治療劑或酵素替代療法結合對3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物實施投與。第二活性藥劑之投與可係局部投與、經腸(例如口服、經十二指腸、經直腸)投與、非經腸(例如靜脈內、動脈內、肌內、皮下、皮內或腹腔內)投與或鞘內投與。在某些實施例中，按照本文所述劑量及服用時間方案與輻射療法結合對3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物實施投與。
應瞭解，向需要其之患者所投與活性藥劑的量係或可基於所討論患者之實際重量或所討論患者群體(例如白人男性、白人女性、美洲黑人男性、美洲黑人女性、亞洲人男性或亞洲人女性，包括成人及兒童)之平均重量計算。
血漿濃度
在一實施例中，本發明係關於保持患者中3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之血漿濃度大於以下量至少約2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、8、12或24小時或更長之方法：約0.1微克/毫升、約0.5微克/毫升、約2微克/毫升、約5微克/毫升、約10微克/毫升、約20微克/毫升、約25微克/毫升、約40微克/毫升、約50微克/毫升、約100微克/毫升、約150微克/毫升、約200微克/毫升、約250微克/毫升或約500微克/毫升，其包括向需要其之患者投與有效量之3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物。在一特定實施例中，該投與係口服。可(例如)藉由高效液相層析(HPLC)對血漿中3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之含量實施量測。
在另一實施例中，本發明係關於使患者中3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物的血漿濃度保持約0.1微克/毫升至約500微克/毫升或約2微克/毫升至約10微克/毫升至少約2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、8、12或24小時或更長時間的方法，其包括向需要其之患者以相同或逐步增加之劑量(例如如本文所述之1X、1X、2X)每天投與一次、兩次或三次有效量的3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物。在一特定實施例中，該投與係口服。
在一特定實施例中，藉由向需要其之患者每天投與一次、兩次或三次該活性藥劑，使患者之3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物的血漿含量保持在約2微克/毫升之上至少約2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、8、12或24小時或更長時間。在另一實施例中，藉由向需要其之患者每天投與一次、兩次或三次該活性藥劑，使患者之3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物的血漿含量保持在約2微克/毫升至約10微克/毫升之間至少約2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、8、12或24小時或更長時間。在一特定實施例中，藉由向需要其之患者每天投與一次、兩次或三次該活性藥劑，使患者之3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物的血漿含量保持在約10微克/毫升之上至少約2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、8、12或24小時或更長時間。在一特定實施例中，該投與係口服。
在一特定實施例中，本文提供達成患者中3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之Cmax 為以下量之方法：1微克/毫升至1000微克/毫升、1微克/毫升至750微克/毫升、1微克/毫升至500微克/毫升、1微克/毫升至400微克/毫升、1微克/毫升至300微克/毫升、1微克/毫升至250微克/毫升、1微克/毫升至200微克/毫升、1微克/毫升至150微克/毫升、1微克/毫升至100微克/毫升、1微克/毫升至50微克/毫升、1微克/毫升至40微克/毫升、1微克/毫升至30微克/毫升、1微克/毫升至20微克/毫升、1微克/毫升至10微克/毫升或10微克/毫升至30微克/毫升，其包括向需要其之患者每天投與一次、兩次或三次有效量的3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物。
在一特定實施例中，本文提供達成患者中3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之AUC0－24 為以下量之方法：50微克．小時/毫升至1000微克．小時/毫升、50微克．小時/毫升至750微克．小時/毫升、50微克．小時/毫升至500微克．小時/毫升、50微克．小時/毫升至400微克．小時/毫升、50微克．小時/毫升至300微克．小毫升、50微克．小時/毫升至250微克．小時/毫升、50微克．小時/毫升至200微克．小毫升、50微克．小時/毫升至150微克．小時/毫升或50微克．小時/毫升至100微克．小時/毫升，其包括向需要其之患者每天投與一次、兩次或三次有效量的3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物。
在另一實施例中，本發明係關於向需要其之患者投與3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之方法，該投與可提供置信區間(CI)為90%、自然對數轉換比在80%至125%、90%至115%或95%至110%之內之至少一個下述生物可利用度參數的3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之活體內血漿特性曲線：(a)平均AUC0－24 在投與第1天為87微克．小時/毫升或在投與第28天為91微克．小時/毫升；(b)平均Cmax 在投與第1天為10微克/毫升或在投與第28天為11微克/毫升；且(c)平均Cmin 在投與第1天為0.5微克/毫升或在投與第28天為0.6微克/毫升。
在另一實施例中，本發明係關於向需要其之患者投與3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之方法，該投與可提供置信區間(CI)為90%、自然對數轉換比在80%至125%、90%至115%或95%至110%之內且達成至少一個下述生物可利用度參數的3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之活體內血漿特性曲線：(a)平均AUC0－24 在投與第1天為291微克．小時/毫升或在投與第28天為235微克．小時/毫升；(b)平均Cmax 在投與第1天為27微克/毫升或在投與第28天為22微克/毫升；且(c)平均Cmin 在投與第1天為3.8微克/毫升或在投與第28天為3.4微克/毫升。
在另一實施例中，本發明係關於向需要其之患者投與3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之方法，該投與可提供置信區間(CI)為90%、自然對數轉換比在80%至125%、90%至115%或95%至110%之內且達成至少一個下述生物可利用度參數的3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之活體內血漿特性曲線：(a)平均AUC0－24 在投與第1天為866微克．小時/毫升或在投與第28天為490微克．小時/毫升；(b)平均Cmax 在投與第1天為76微克/毫升或在投與第28天為46微克/毫升；且(c)平均Cmin 在投與第1天為9.6微克/毫升或在投與第28天為6.7微克/毫升。
患者群體
本發明方法及組合物可用於之特定患者群體包括患有或易感染(例如由於環境或遺傳因素)與無義突變相關之疾病(例如彼等本文所述者)之成人及兒童。
在一實施例中，已通過預篩選確定患者或患者親屬具有無義突變(即UAA、UGA或UAG)。
醫藥組合物及單位劑量調配物
本發明亦涵蓋包含3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之醫藥組合物及單一單位劑型。本發明之單獨劑型可適於口服、黏膜(包括舌下、口腔、直腸、鼻或陰道)或非經腸(包括皮下、肌內、濃注、動脈內或靜脈內)投與。較佳醫藥組合物及單一單位劑型適於口服投與。
在一實施例中，該醫藥組合物係固體口服劑型。在一實施例中，該醫藥組合物係液體口服劑型。在一特定實施例中，本發明提供劑量、單位劑量調配物及醫藥組合物，其中3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物係口服生物可利用性的。口服投與之優點可包括易於投與、對服用方案之較高患者依從性、臨床功效、較少併發症、較短住院時間及節省總成本。
在另一實施例中，本發明係關於包含以下量之3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之單位劑量調配物：介於約35毫克與約1400毫克之間、約125毫克與約1000毫克之間、約250毫克與約1000毫克之間或約500毫克與約1000毫克之間。在一實施例中，該單位劑量調配物包含3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物及一或多種適於懸浮在於瓶中之醫藥上可接受之溶劑(例如水、乳、碳酸飲料、汁液、果醬、嬰兒食品或嬰兒代乳品)中的載劑或賦形劑。
在另一實施例中，本發明係關於包含以下量之3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物的單位劑量調配物：35毫克、50毫克、70毫克、100毫克、125毫克、140毫克、175毫克、200毫克、250毫克、280毫克、350毫克、500毫克、560毫克、700毫克、750毫克、1000毫克或1400毫克。較佳單位劑量調配物包含約125毫克、約250或約1000毫克的3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物。在一實施例中，該單位劑量調配物包含3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物及一或多種適於懸浮在於瓶中之醫藥上可接受之溶劑(例如水、乳、碳酸飲料、汁液、果醬、嬰兒食品或嬰兒代乳品)中的載劑或賦形劑。較佳單位劑量調配物係粉末及藥囊。
在一實施例中，本發明係關於包含250毫克、500毫克、750毫克或1000毫克3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之固體劑型，當將其分別以4毫克/公斤、4毫克/公斤及8毫克/公斤之三個日劑量投與給需要其之患者時，可提供置信區間(CI)為90%、自然對數轉換比在80%至125%、90%至115%或95%至110%之內且達成至少一個下述生物可利用度參數的3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之活體內血漿特性曲線：(a)平均AUC0－24 在投與第1天為87微克．小時/毫升或在投與第28天為91微克．小時/毫升；(b)平均Cmax 在投與第1天為10微克/毫升或在投與第28天為11微克/毫升；且(c)平均Cmin 在投與第1天為0.5微克/毫升或在投與第28天為0.6微克/毫升。
在一實施例中，本發明係關於包含250毫克、500毫克、750毫克或1000毫克3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之固體劑型，當將其分別以10毫克/公斤、10毫克/公斤及20毫克/公斤之三個日劑量投與給需要其之患者時，可提供置信區間(CI)為90%、自然對數轉換比在80%至125%、90%至115%或95%至110%之內且達成至少一個下述生物可利用度參數的3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之活體內血漿特性曲線：(a)平均AUC0－24 在投與第1天為291微克．小時/毫升或在投與第28天為235微克．小時/毫升；(b)平均Cmax 在投與第1天為27微克/毫升或在投與第28天為22微克/毫升；且(c)平均Cmin 在投與第1天為3.8微克/毫升或在投與第28天為3.4微克/毫升。
在一實施例中，本發明係關於包含250毫克、500毫克、750毫克或1000毫克3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之固體劑型，當將其分別以20毫克/公斤、20毫克/公斤及40毫克/公斤之三個日劑量投與給需要其之患者時，可提供置信區間(CI)為90%、自然對數轉換比在80%至125%、90%至115%或95%至110%之內且達成至少一個下述生物可利用度參數的3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之活體內血漿特性曲線：(a)平均AUC0－24 在投與第1天為866微克．小時/毫升或在投與第28天為490微克．小時/毫升；(b)平均Cmax 在投與第1天為76微克/毫升或在投與第28天為46微克/毫升；且(c)平均Cmin 在投與第1天為9.6微克/毫升或在投與第28天為6.7微克/毫升。
雖然吾人建議將本文所述之單位劑量調配物儲存在約2℃至約8℃下，但亦可將該等單位劑量調配物在重構之前於室溫下儲存約48小時。在一實施例中，藉由將約10毫升水直接添加至含有3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之瓶中以達成在懸浮液總體積中濃度為約25毫克/毫升對3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之250毫克單位劑量調配物實施重構。對於3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物的1000毫克單位劑量調配物，將約20毫升水直接添加至含有3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之瓶中以達成在懸浮液總體積中濃度為約50毫克/毫升。在添加水後，立即將該瓶蓋上瓶蓋並用手輕輕搖動至少約30秒以達成均勻懸浮液。雖然該重構懸浮液可在原塑料瓶中停留至多24小時後攝取，但吾人建議在重構後立刻攝取該藥物。若在重構與服用之間有大於約15分鐘之延遲，則吾人建議應將該瓶用手輕輕再搖動至少約30秒。吾人建議直接自該瓶對懸浮液實施投與。若擬投與整個單位劑型，則吾人進一步建議用水將該瓶沖洗一次且攝取該沖洗水以確保無粉末殘留於該瓶中。若擬投與部分量單位劑型，則可使用匙或注射器來獲得合適劑量。
適於口服投與給患者之本發明單一單位劑型包括(但不限於)：藥囊；藥丸；錠劑；膜衣錠；膠囊，例如軟彈性明膠膠囊；片劑；菱形錠劑；分散液；粉末；溶液；液體劑型，包括懸浮液(例如水性或非水性液體懸浮液)；乳液(例如水包油乳液或油包水液體乳液)；及酏劑。在一實施例中，本發明係關於其濃度大於飽和濃度的膠體溶液或含有額外活性藥劑之溶液。本發明所涵蓋特定劑型彼此會有所不同之該等及其他方式對彼等熟悉該項技術者係顯而易見的。參見(例如)Remington's Pharmaceutical Sciences，第18版.,Mack Publishing，Easton PA(1990)。
本發明進一步涵蓋包含3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之無水醫藥組合物及劑型。可使用無水或含低水分之成份在低水分或低濕氣條件下製備本發明之無水醫藥組合物及劑型。
本發明之典型口服劑型可根據習用藥物配合技術，藉由在一均勻混合物中使該(等)活性成份與至少一種載劑或賦形劑結合來製備。端視期望投與製劑之形式而定，可採用各種形式之賦形劑。舉例而言，適用於口服液體或氣溶膠劑型之賦形劑包括(但不限於)水、乙二醇、油、醇、矯味劑(例如香草提取物)、防腐劑及著色劑。適用於固體口服劑型(例如粉末、錠劑、藥囊、膠囊及膜衣錠)之賦形劑的實例包括(但不限於)澱粉、糖、微晶纖維素、稀釋劑、造粒劑、潤滑劑、黏結劑及崩解劑。
尤佳之單位劑量調配物係包含有效量的適於在醫藥上可接受之溶劑(例如水、乳、碳酸飲料、汁液、果醬、嬰兒食品或嬰兒代乳品)中重構且隨後口服投與之活性藥劑的粉末調配物。在一特定實施例中，該粉末可視情況包含一或多種與活性藥劑結合之載劑或賦形劑。在另一實施例中，可在投與或重構之前將該粉末儲存在密閉容器中。在又一實施例中，可將該粉末包入膠囊(例如包入明膠膠囊中)。
實例
提供以下實例以實施舉例說明而非予以限制。
實例1：3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4] 二唑－3－基]－苯甲酸之製備
製備3－[5－(2－氟苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸之方法在2006年1月31號頒佈之美國專利第6,992,096 B2號及2007年9月9號提出申請之美國專利申請案第11/899,813號中予以闡述，二者全文均以引用方式併入本文中。製備3－[5－(2－氟苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸之方法的代表性實例在下文予以闡述。
向3－氰基苯甲酸(44.14克，300毫莫耳)存於DMF(0.6公升)中之溶液添加K2 CO3 (62.19克，450毫莫耳)並隨後在室溫下攪拌30分鐘。在20分鐘內向該懸浮液添加碘甲烷(28毫升，450毫莫耳)，並將反應混合物在室溫下再攪拌4小時。將該反應混合物倒入1.2公升冰水中並攪拌30分鐘，並且過濾出沉澱。將白色濾餅溶解在甲醇(70毫升)中，並隨後在冰水中實施再沉澱。以79%之產率獲得白色粉末狀期望產物(38克，藉由LC/UV 99%純度)。1 H－NMR(CDCl3 )δ 8.85(2H),8.28(1H),8.02(1H),4.17(3H)。
在室溫下，向3－氰基苯甲酸甲酯(50克，310毫莫耳)存於乙醇(500毫升)中之溶液添加50%水性羥胺(41毫升，620毫莫耳)。將反應混合物在100℃下攪拌1小時並在減壓下移除溶劑。將油狀殘留物溶解在20/80乙醇/甲苯(50毫升×2)中並隨後再次濃縮。獲得白色粉末狀98%純度(LC/UV)之期望酯(61克，產量)。1 H－NMR(CDCl3 )δ 9.76(1H),8.24(1H),7.82(2H),7.51(1H),5.92(2H),3.82(3H)。
在5℃下，向3－(N－羥基甲脒基)－苯甲酸甲酯(60克，310毫莫耳)存於無水THF(200毫升)中之溶液添加二異丙基乙胺(75毫升，434毫莫耳)，並隨後在20分鐘內向混合物添加2－氟苯甲醯氯(48.1毫升，403毫莫耳)。將反應混合物在室溫下攪拌1小時。過濾出沉澱並在減壓下濃縮濾液。將殘留物溶解在乙酸乙酯(400毫升)中並隨後用水(200毫升×2)洗滌。在減壓下移除溶劑並在存於己烷中之60%乙酸乙酯中對期望產物實施重結晶獲得白色固體狀期望產物(81克，83%產率)。1 H－NMR(CDCl3 )δ 8.18(1H),8.03(3H),7.48(2H),7.18(2H),5.61(2H),3.82(3H)。
將44克存於甲苯(500毫升)中之3－(N－2－氟苯甲醯基甲脒基)－苯甲酸甲酯在130℃下使用Dean－Stark裝置回流4小時。將反應混合物在5℃下攪拌18小時。過濾出白色沉澱並濃縮濾液，在甲苯中再次結晶。獲得白色固體狀99%純度(LC/UV)之期望二唑(38克，92%產率)。1 H－NMR(CDCl3 )δ 8.91(1H),8.38(1H),8.15(2H),7.62(2H),7.35(2H),3.95(3H)。
向3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸甲酯(3.3克，11毫莫耳)存於THF(40毫升)中之溶液添加1.5 M NaOH水溶液(10毫升，14毫莫耳)。將反應混合物在100℃下回流2小時。移除有機溶劑並用水(50毫升)稀釋水性溶液，並隨後用HCl水溶液酸化。過濾出白色沉澱並用冷水洗滌白色濾餅並隨後使用冷凍乾燥器乾燥。獲得白色粉末狀98%純度(LC/UV)之期望酸(3.0克，96%產率)。熔點為242℃；IR 3000(芳香族C－H)，1710(C＝O)；1 H－NMR(D6 －DMSO)δ 8.31(1H),8.18(2H),8.08(1H),7.88(2H),7.51(2H)；13 C－NMR(D6 －DMSO)δ.172.71,167.38,166.48,161.25,135.80,132.24,131.79,131.79,131.08,130.91,129.81,127.76,125.48,117.38,111.70；19 F－NMR(D6 －DMSO)δ.109.7。
3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸之醫藥上可接受之鹽可使用彼等熟習此項技術者熟知之方法製備。可如下製備鈉鹽。向3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸甲酯(33克，111毫莫耳)存於THF(400毫升)中之溶液添加1.5 M NaOH水溶液(100毫升，144毫莫耳)。將反應混合物在100℃下回流2小時。在減壓下移除有機溶劑並將水性溶液在5℃下攪拌2小時。過濾出白色沉澱並濃縮濾液並在水中再次實施沉澱。用冷水洗滌白色濾餅並隨後使用冷凍乾燥器實施乾燥。獲得白色粉末狀98.6%純度(LC/UV)之期望鹽(33克，96%產率)。
實例2：口服治療無義突製介導之囊性纖維化
本實例闡述可用於治療無義突變介導之囊性纖維化的示例性服用方案。
以經香草矯味之粉末形式提供3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物以用於懸浮液。在現行優良製造規範(cGMP)條件下製造藥物。調配物可包含有助於製造方法之黏合劑及懸浮劑、表面活性劑及各種少量賦形劑。可將該混合物包裝在40毫升塑料(高密度聚乙烯[HDPE])瓶中，用箔封條及白色塑料製成之不危害兒童的蓋對該等塑料瓶實施密封。每只瓶可含有佔總調配物重量25.0%之125、250或1000毫克原料藥。或者，可以藥囊調配物形式提供混合物，例如在實例6中所給出者。賦形劑(及其佔總調配物重量之比例)包括懸浮劑(LitesseUltra[精製聚葡萄糖]－25.7%)、亦可提供遮味之黏合劑(甘露醇－25.0%)、表面活性劑(聚乙二醇3350－12.8%及Lutrolmicro F127[泊洛沙姆(poloxamer)407粉末]－3.7%)、崩解劑(交聯聚維酮－5.0%)及其他賦形劑(每一種(羥乙基纖維素、香草香料、硬脂酸鎂[非牛源]及膠質二氧化矽)皆可以小於2%存在)。瓶標籤簡要說明該原料藥之特性、批號、原料藥的量及儲存條件(例如室溫或在5℃－8℃下冷藏)。
原料藥服用係基於毫克藥物/公斤患者體重。可使原料藥之劑量恰好符合瓶之可用尺寸。服用方案應確保所給出之總實際劑量決不小於預期劑量以下50毫克或大於預期劑量以上250毫克(即始終在指定劑量水準之5毫克/公斤之內)。例如，用4毫克/公斤劑量治療之重40公斤的患者應具有160毫克之計算劑量。該患者應得到一250毫克的瓶(總250毫克)或6.25毫克/公斤/劑量。當晚上用8毫克/公斤劑量治療時，此患者應具有320毫克之計算劑量並應得到兩隻250毫克的瓶(總500毫克)或12.5毫克/公斤。用10毫克/公斤劑量治療時，此患者應具有400毫克之計算劑量並應得到兩隻250毫克的瓶(總500毫克)或12.5毫克/公斤。當晚上用20毫克/公斤劑量治療時，此患者應具有800毫克之計算劑量並應得到一隻1000毫克的瓶(總1000毫克)或25毫克/公斤。
在室溫下對藥物產品實施重構及服用。在重構前，無需對藥物產品實施特別加熱。可用任何醫藥上可接受之溶劑(例如水、乳、碳酸飲料、汁液、果醬、嬰兒食品或嬰兒代乳品)對該藥物產品實施重構。對於提供之每一250毫克的瓶，添加約10毫升水或其他醫藥上可接受之溶劑以達成在總懸浮液體積中濃度為約25毫克/毫升。對於提供之每一1000毫克的瓶，添加約20毫升水或其他醫藥上可接受之溶劑以達成在總懸浮液體積中濃度為約50毫克/毫升。在將水或其他醫藥上可接受之溶劑添加至乾燥研究藥物後，立即將該(等)瓶蓋上瓶蓋並用手劇烈搖動約60秒以達成懸浮液之均勻性。雖然該懸浮液可在原塑料瓶中停留至多24小時後攝取，但吾人建議在重構後立刻攝取該藥物。若在重構與服用之間有大於15分鐘之延遲，則應將該瓶用手劇烈再搖動至少約60秒。
可對患有或易感染囊性纖維化之患者按需要長期連續實施治療。表1給出3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之示例性日服用方案，其中以6小時、6小時及12小時為間隔(例如約7：00 AM、約1：00 PM及約7：00 PM)與食物一起每天實施三次投與。在一特定實施例中，如表1所示如下向患者投與3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物：連續投與14天，隨後的14天不實施治療，隨後再投與14天，隨後再14天不實施治療。在另一特定實施例中，如表1所示如下向患者投與3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物：以4毫克/公斤、4毫克/公斤及8毫克/公斤之三個日劑量連續投與14天，隨後的14天不實施治療，隨後再以10毫克/公斤、10毫克/公斤及20毫克/公斤之三個日劑量投與14天，隨後再14天不實施治療。在某些實施例中，每天遵守表1中所示之單一日服用方案。在其他實施例中，可在不同天遵守表1中所示之不同服用方案。
患者較佳在餐後30分鐘內服用藥物；理想地，以約6小時、6小時及12小時為間隔(例如在早餐後約7：00 AM、午餐後約1：00 PM及在晚餐後約7：00 PM)服用藥物。患者如下攝取藥物：將每只瓶裝滿所需量的水或其他醫藥上可接受之溶劑，將每只瓶蓋上瓶蓋並搖動約60秒，並隨後攝取每劑量所需數量及大小之瓶的容納物。應同時服用重構藥物之全部劑量。在攝取後，將每只服用瓶半裝滿水或另一醫藥上可接受之溶劑、包覆頂端並搖動，並由患者自瓶中攝取該水或其他醫藥上可接受之溶劑。實施一次此沖洗程序。在某些實施例中，以藥囊形式提供該藥物。在該等實施例中，可對合適量之該藥物實施稱重或量測並與合適的醫藥上可接受之溶劑結合後投與。
實例3：口服治療無義突變介導之迪謝內肌營養不良
本實例給出可用於治療無義突變介導之迪謝內肌營養不良的示例性服用方案。
以經香草矯味之粉末形式提供3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物以用於懸浮液。在現行優良製造規範(cGMP)條件下製造藥物。調配物可包含有助於製造方法之黏合劑及懸浮劑、表面活性劑及各種少量賦形劑。可將該混合物包裝在40毫升塑料(高密度聚乙烯[HDPE])瓶中，用箔封條及白色塑料製成之不危害兒童的蓋對該等塑料瓶實施密封。每只瓶可含有佔總調配物重量25.0%之125、250或1000毫克原料藥。或者，可以藥囊調配物形式提供混合物，例如在實例6中所給出者。賦形劑(及其佔總調配物重量之比例)包括懸浮劑(LitesseUltra[精製聚葡萄糖]－25.7%)、亦可提供遮味之黏合劑(甘露醇－25.0%)、表面活性劑(聚乙二醇3350－12.8%及Lutrolmicro F127[泊洛沙姆407粉末]－3.7%)、崩解劑(交聯聚維酮－5.0%)及其他賦形劑(每一種(羥乙基纖維素、香草香料、硬脂酸鎂[非牛源]及膠質二氧化矽)皆可以小於2%存在)。瓶標籤簡要說明該原料藥之特性、批號、原料藥的量及儲存條件(例如室溫或在5℃－8℃下冷藏)。
藥物服用係基於毫克藥物/公斤患者體重。應計算與擬向患者投與之藥物的總毫克量對應之總體積。例如，若一30公斤患者擬獲得4毫克/公斤，則擬遞送之劑量應為30×4＝120毫克。此患者應使用250毫克之劑量瓶服用。由於在250毫克劑量瓶中之每毫升懸浮液含有250/10＝25毫克藥物，因此對於每一4毫克/公斤劑量，該患者應服用120/25＝約5毫升懸浮液。當晚上用8毫克/公斤劑量治療時，此患者應具有240毫克之計算劑量並應得到一隻250毫克的瓶(10毫升懸浮液)。應使用口服用塑料注射器自藥瓶抽取各自劑量之該等體積的懸浮液。對於轉移小於10(對於250毫克瓶)或小於20毫升(對於1000毫克瓶)之部分體積，應自研究藥瓶抽取期望量至合適類型及大小之服用注射器(例如Baxa、Exacta－Med、已校準的、不含乳膠的、塑料的、口服用注射器)中並使用該注射器服用。在於重構後之該24小時期間，可自該瓶懸浮液中取出大於1個劑量，然而，不應為了以多個劑量將該物質再次用於同一患者而將重構藥物儲存超過24小時。若在1天內擬服用藥物之總量超過重構藥物10毫升(對於250毫克瓶)或20毫升(對於1000毫克瓶)，則每次服用應使用一新藥瓶。
在室溫下對藥物產品實施重構及服用。在重構前，無需對藥物產品實施特別加熱。可用任何醫藥上可接受之溶劑(例如水、乳、碳酸飲料、汁液、果醬、嬰兒食品或嬰兒代乳品)對該藥物實施重構。對於提供之每一250毫克的瓶，添加約10毫升水或其他醫藥上可接受之溶劑以達成在總懸浮液體積中濃度為約25毫克/毫升。對於提供之每一1000毫克的瓶，添加約20毫升水或其他醫藥上可接受之溶劑以達成在總懸浮液體積中濃度為約50毫克/毫升。在將水或其他醫藥上可接受之溶劑添加至乾燥研究藥物後，立即將該瓶蓋上瓶蓋並用手劇烈搖動約60秒以達成懸浮液之均勻性。雖然該懸浮液可在原塑料瓶中停留至多24小時後攝取，但吾人建議在重構後立刻服用該藥物。若在重構與服用之間有大於15分鐘之延遲，則應將該瓶用手劇烈再搖動至少約60秒。
可對患有或易感染迪謝內肌營養不良之患者按需要長期連續實施治療。表2給出3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之示例性日服用方案，其中以6小時、6小時及12小時為間隔(例如約7：00 AM、約1：00 PM及約7：00 PM)與食物一起每天實施三次投與。在一特定實施例中，以在表2中所示之一服用方案向患者連續投與3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物28天。在某些實施例中，每天遵守表2中所示之單一日服用方案。在其他實施例中，可在不同天遵守表2中所示之不同服用方案。在某些實施例中，以藥囊形式提供該藥物。在該等實施例中，可對合適量之該藥物實施稱重或量測並與合適的醫藥上可接受之溶劑結合後投與。
在餐後30分鐘內向患者投與藥物；理想地，以約6小時、6小時及12小時為間隔(例如在早餐後約7：00 AM、午餐後約1：00 PM及在晚餐後約7：00 PM)服用藥物。患者如下攝取藥物：將每只瓶裝滿所需量的水或其他醫藥上可接受之溶劑，將每只瓶蓋上瓶蓋並搖動約60秒，使用口服用注射器自瓶中抽取合適量體積並直接自該服用注射器攝取容納物。應同時服用與該劑量對應之全部計算體積的重構藥物。在攝取藥物後，應將服用注射器裝滿與劑量體積相同之體積的水或其他醫藥上可接受之溶劑並應由患者攝取。應實施一次此沖洗程序。
治療功效可藉由量測在足肌趾短伸肌(EDB)之活組織檢查中抗肌營養不良蛋白含量之基線量測值的變化測定。
實例4：3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4] 二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之無味劑量的製備
以粉末形式提供3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物以用於懸浮液。在現行優良製造規範(cGMP)條件下製造該藥物。可將藥物直接與有助於製造方法之黏合劑及懸浮劑、表面活性劑及各種少量賦形劑混合。將該混合物包裝在40毫升塑料(高密度聚乙烯[HDPE])瓶中，用箔封條及白色塑料製成之不危害兒童的蓋對該塑料瓶實施密封。每只瓶可含有約35毫克、約70毫克、約125毫克、約140毫克、約175毫克、約250毫克、約280毫克、約350毫克、約560毫克、約700毫克、約1000毫克或約1400毫克3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物。賦形劑(及其佔總調配物重量之比例)視情況包括懸浮劑(LitesseUltra[精製聚葡萄糖]－25.7%)、亦可提供遮味性之黏合劑(甘露醇－25.0%)、表面活性劑(聚乙二醇3350－12.8%及Lutrolmicro F127[泊洛沙姆407粉末]－3.7%)、崩解劑(交聯聚維酮－5.0%)及其他賦形劑(每一種(膠態矽膠、羥乙基纖維素、硬脂酸鎂[非牛源]及膠質二氧化矽可以小於2%存在)。隨後將該瓶貼上標籤以簡要說明該原料藥之特性、批號、原料藥的量及儲存條件(例如在5℃－8℃下冷藏)。在投與之前，在合適體積之醫藥上可接受之溶劑(例如水、乳、碳酸飲料、汁液、果醬、嬰兒食品或嬰兒代乳品)中對該藥物產品實施重構。
實例5：3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4] 二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之矯味處方的製備
以經香草矯味(例如藉由添加香草提取物)之粉末形式提供3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物用於懸浮液。在現行優良製造規範(cGMP)條件下製造藥物。可將藥物直接與有助於製造方法之黏合劑及懸浮劑、表面活性劑及各種少量賦形劑混合。將該混合物包裝在40毫升塑料(高密度聚乙烯[HDPE])瓶中，用箔封條及白色塑料製成之不危害兒童的蓋對該塑料瓶實施密封。每只瓶可含有以下量之3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物：約35毫克、約70毫克、約125毫克、約140毫克、約175毫克、約250毫克、約280毫克、約350毫克、約560毫克、約700毫克、約1000毫克或約1400毫克。賦形劑(及其佔總調配物重量之比例)視情況包括懸浮劑(LitesseUltra[精製聚葡萄糖]－25.7%)、亦可提供遮味性之黏合劑(甘露醇－25.0%)、表面活性劑(聚乙二醇3350－12.8%及Lutrolmicro F127[泊洛沙姆407粉末]－3.7%)、崩解劑(交聯聚維酮－5.0%)及其他賦形劑(每一種(膠態矽膠、羥乙基纖維素、香草香料、硬脂酸鎂[非牛源]及膠質二氧化矽)可以小於2%存在)。隨後將該瓶貼上標籤以簡要說明該原料藥之特性、批號、原料藥的量及儲存條件(例如在2℃－8℃下冷藏)。在投與之前，在合適體積之醫藥上可接受之溶劑(例如水、乳、碳酸飲料、汁液、果醬、嬰兒食品或嬰兒代乳品)中對該藥物產品實施重構。可將該藥物產品在重構之前於室溫下儲存至多48小時。
本文引用了許多文獻，該等文獻之整體揭示內容的全文以引用方式併入本文中。
實例6：3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4] 二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物之藥囊調配物
使用由可包括紙層、鋁箔層及沙林樹脂(surlyn)層之多層壓層組成的小藥袋或藥囊對混合物實施包裝。每一藥囊可包含約125毫克、約250毫克、約500毫克或約1000毫克的3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸或其醫藥上可接受之鹽、溶合物或水合物。賦形劑(及其佔總調配物重量之比例)視情況包括如在表3及表4中所示之任一以下者。
隨後將該藥囊貼上標籤以簡要說明該原料藥之特性、批號、原料藥的量及儲存條件(例如在2℃－8℃下冷藏)。在投與之前，在合適體積之醫藥上可接受之溶劑(例如水、乳、碳酸飲料、汁液、果醬、嬰兒食品或嬰兒代乳品)中對合適量之該藥物產品實施重構。可將該藥物產品在重構之前於室溫下儲存至多48小時。
實例7：跨上皮電位差(TEPD)分析
跨上皮電位差(TEPD)(亦稱為鼻內電位差)之量測可經由評估跨上皮生物電特性對鈉及氯在促分泌上皮細胞中之直接轉運提供敏感性評價(Knowles等人，1981,N.Engl.J.Med.305(25) ：1489－95；Knowles等人，1995,Hum.Gene Ther.6 ：445)。使用標準化技術在每一鼻孔中實施TEPD分析(Standaert等人，2004,Ped.Pulm.37 ：385－92)。在該程序中，使用小塑料導管評估跨鼻孔中鼻黏膜細胞之外層細胞膜的電位差。TEPD值以毫伏特(millivolt)或毫伏(mV)表示。通常認為等於－5.0毫伏或比－5.0毫伏更電負性之氯傳導在正常範圍內。在內襯下鼻甲之鼻上皮細胞上實施TEPD評估，因為該等細胞比內襯下氣道之呼吸道上皮細胞更容易接近，且已顯示具有相同之離子轉運特徵(Knowles等人，1981,Am.Rev.Respir.Dis.124(4) ：484－90)。亦可在直腸上皮細胞及下呼吸道上皮細胞上實施TEPD評估。由於CFTR蛋白質在氯離子跨細胞膜轉運中的作用且由於缺少該蛋白質，因此囊性纖維化患者具有異常之TEPD氯離子傳導。TEPD作為終點具有以下優點：其可檢測氯離子轉運變化，該等變化係在氣道細胞中CFTR之存在、功能活性及頂端位置的綜合量化結果。此外，其係CFTR活性之直接指標，其不可能受CF支持治療或姑息治療影響(全身性投與胺基糖苷抗生素可能除外)。重要地，有證據表明TEPD值可使肺部功能障礙程度與射線照相異常相關聯(Ho等人，1997,Eur.Respir.J.10(9) ：2018－22；Fajac等人，1998,Eur.Respir.J.12(6) ：1295－300；Sermet－Gaudelus等人，2005,Am.J.Respit.Crit.Care Med.171(9) ：1026－1031)。具體而言，在測定FEV1及放射評分中對異丙腎上腺素誘導之CFTR氯離子活性的TEPD評估已展示比基因型更好之預測值(Ho等人，1997,Eur Respir J.10(9) ：2018－22)。在基線條件下，TEPD評估之氯通道活性極不可能在患有CF之患者中自發正常化；期望任何觀察到的TEPD評估之氯通道活性的改良特定表示CFTR糾正療法之藥理學活性。因此，其已成為在以糾正CFTR功能障礙為目的之階段1－2藥理學及基因置換研究中之主要終點(Peckham等人，1995,AJ.Clin Sci(London).89(3) ：277－84；Wilschanski等人，2003,N.Engl.J.Med.349(15) ：1433－41)。
實例8：CFTR免疫螢光
對患者每一鼻孔的鼻黏膜刮除物實施收集及處理，以使用標準化技術藉由免疫螢光及藉由量化CFTR mRNA來量測CFTR蛋白質(Clancy等人，2001,Am.J.Respir.Crit.Care Med.163(7) ：1683－92；Amaral等人，2004,J.Cyst.Fibros.3 Suppl 2 ：17－23)。正常上皮細胞(例如，來自鼻黏膜刮除物)之免疫螢光染色揭示大部分CFTR蛋白質存在於頂面。在無義突變介導性CF之動物模型中或在患有無義突變介導性CF的患者中，CFTR染色不存在(例如在過早停止突變之同型患者中)或主要在核周區域觀察到(例如在具有阻礙正常CFTR細胞內運輸之△F508突變的患者中)。功能野生型或非野生型CFTR蛋白質在動物模型及患者二者中之成功產生已與頂部上皮CFTR蛋白質之再現相關聯，如藉由免疫螢光所評估(Clancy等人，2001 ,Am.J.Respir.Crit.Care Med.163(7) ：1683－92；Wilschanski等人，2003,N.Engl.J.Med.349(15) ：1433－41)。
實例9：肺功能試驗
使用標準呼吸量測定程序對肺功能試驗(包括FEV1 、FVC及MEF25－75 )實施量測。肺功能(包括MEF25－75 、FVC且尤其係FEV1 )評估已被認為是CF患者之確定性臨床終點(食品及藥品管理局，第62屆抗感染藥物專家委員會，Discussion of NDA for tobramycin solution for inhalation(Tobi)for the management of cystic fibrosis patients.1997年11月；Tiddens,2002,Pediatr.Pulmonol.34(3)： 228－31)。已顯示FEV1 及其他肺功能試驗量測值與疾病嚴重程度、根據衛生保健利用預測發病率及IV抗生素使用有關，並可指出CF相關性死亡率之風險(食品及藥品管理局，第62屆抗感染藥物專家委員會，Discussion of NDA for tobramycin solution for inhalation(Tobi)for the management of cystic fibrosis Patients.1997年11月)。肺功能試驗極容易實施(即使在年幼如7歲大之患者中)，且係使用普遍可用之標準化設備及技術。釋義係使用已經充分建立之計及患者年齡、身高及性別之標準公式實施。已將FEV1 之改良認為可量化論證有意義之CF臨床益處且其係阿法鏈道酶(dornase alfa)及吸入性妥布黴素(tobramycin)獲得規章性批准之依據(食品及藥品管理局，第62屆抗感染藥物專家委員會，Discussion of NDA for tobramycin solution for inhalation(Tobi)for the management of cystic fibrosis Patients.1997年11月)。
實例10：3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4] 二唑－3－基]－苯甲酸用於口服治療無義突變介導之囊性纖維化之階段2研究
患者須符合所有以下條件才適合登記參加本研究：1. CF診斷，該診斷應基於結論性異常汗液試驗(藉由毛果芸香鹼離子導入法之汗液氯離子含量>60毫當量/公升(LeGrys,Sweat testing：Sample collection and quantitative analysis：Approved guidelines－第二版。美國臨床實驗室標準國家委員會2000；第20卷：14))之文件記載證據；2.藉由TEPD所量測之氯離子分泌異常(用不含氯離子之阿米洛利(amiloride)及異丙腎上腺素實施氯離子分泌TEPD評估較－5毫伏更具電正性)；3.在cftr基因之等位基因之一中存在無義突變；4.已有完成cftr基因測序之文件記載；5.年齡18歲；6.體重40公斤；7.針對年齡、性別及身高預測FEV140%(Knudson標準)(Knudson,1983,Am.Rev.Respir.Dis.127：725－734)；8.室內空氣氧飽和度(藉由脈搏血氧定量法量測)92%；9.若未實施絕育手術，則男性患者及女性患者應願意在研究藥物投與及跟蹤時間段期間禁絕性交或使用避孕屏障或醫學方法；10.妊娠測試為陰性(對於育齡女性)；11.願意且能夠遵守預定調查、藥物投與計劃、研究程序(包括TEPD量測、臨床實驗室試驗及PK取樣)及研究限制；12.能夠提供書面知情同意；且13.本人簽名及注明日期之知情同意文件的證據，其表示該患者已被告知該試驗之所有相關方面。
存在任何以下情況皆拒絕患者登記參加本研究：1.研究者認為可對患者安全造成不利影響從而不可能完成治療或跟蹤過程或可影響研究結果評估的以前或當前治療狀況(例如伴隨疾病、精神病狀態、酒精中毒、藥物濫用)、病史、身體檢查、ECG檢查或實驗室異常；2.在開始研究治療之前2週內患有急性疾病，包括急性上或下呼吸道感染；3.在開始研究治療之前2個月內有肺病嚴重併發症(包括近期大量咯血或氣胸)史；4.表明非CF之臨床顯著活動性肺部疾病之胸部x－射線篩查異常，或新的可表明CF繼發性臨床顯著活動性肺部牽連之顯著異常(例如肺膨脹不全或胸膜積液)；5.陽性肝炎B表面抗原、肝炎C抗體試驗或人免疫缺陷病毒(HIV)試驗；6.血紅蛋白<10克/分升；7.血清白蛋白<2.5克/分升；8.肝功能異常(血清總膽紅素>正常上限值，或血清ALT、AST或GGT>2.0倍的正常上限值)；9.腎功能異常(血清肌酸酐>1.5倍的正常上限值)；10.妊娠或哺乳；11.實體器官或血液移植史；12.在開始研究治療之前14天內接受另一研究藥物；13.正參與任何其他治療臨床試驗；14.正使用噻唑啶二酮過氧化物酶體增殖子活化受體γ(PPAR γ)激動劑，例如羅格列酮(rosiglitazone)(Avandia或等效物)或吡格列酮(pioglitazone)(Actos或等效物)；15.在開始研究治療之前14天內改變鼻內藥劑(包括使用皮質類固醇、色甘酸鈉、異丙托溴銨、去氧腎上腺素或羥甲唑啉(oxymetazoline))；16.在開始研究治療之前14天內在用全身性或吸入式皮質類固醇治療方面有變化；17.在開始研究治療之前14天內或在研究治療期間使用或需要吸入式慶大黴素(gentamicin)或阿米卡星(amikacin)；或18.在開始研究治療之前14天內需要全身性胺基糖苷抗生素。
以本文所述之調配物形式提供3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸。根據以下56天時間方案向15名患者(12名來自正在以色列實施之階段2試驗且3名來自正在美國實施之階段2試驗；7名患者係男性且8名患者係女性；患者之平均年齡為22歲；且所有患者皆具有多個囊性纖維化症候及症狀，包括某種程度之肺功能障礙)口服投與3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸：以4毫克/公斤、4毫克/公斤及8毫克/公斤每天三次(TID)投與3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸14天，隨後的14天不實施治療(週期1，由28天組成)，隨後以10毫克/公斤、10毫克/公斤及20毫克/公斤每天三次(TID)投與3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸14天，隨後的14天不實施治療(週期2，由28天組成)。
使用上文所述之程序對臨床終點實施評價。在治療前及週期1和週期2之第14天及第28天實施TEPD量測。在治療前及週期1和週期2之第14天及第28天自每一患者之每一鼻孔中採集鼻黏膜刮除物。在正在以色列實施之研究中，於治療前、週期2之第1天、週期1之第13天或第14天及週期2之第13天或第14天對肺部試驗(包括FEV1 、FVC及MEF25－75 )實施量測且在正在美國實施之研究中於治療前及週期2之第13天或第14天對相同參數實施量測。
TEPD氯離子傳導之平均變化 。此係自治療週期開始至結束在每一研究參與者內TEPD氯離子傳導變化之平均值。例如，若在三名參與者之每一名內TEPD氯離子傳導之變化係－7.0毫伏、－2.0毫伏及－9.0毫伏，則該等參與者中之TEPD氯離子傳導之平均變化應係－6.0毫伏。
具有氯離子傳單響應之患者的百分此 。此係在用3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸治療結束時展示TEPD氯離子傳導響應之患者的百分比。就該等試驗之目的而言，將氯離子傳導響應定義為至少－5毫伏之TEPD氯離子傳導改良。例如，在初始時TEPD氯離子傳導值為＋1.0毫伏且治療結束時TEPD氯離子傳導值為－6.0毫伏之患者中，代表氯離子傳導響應之TEPD氯離子傳導改良應為－7.0毫伏。
TEPD氯離子傳導值改度進入正常範圍內之患者的百分此 。如上所述，通常認為等於－5.0毫伏或比－5.0毫伏更具電負性之氯離子傳導在正常範圍內。因而，基線TEPD氯離子傳導值為＋1.0毫伏之患者應視為具有異常值，因為該值比－5.0毫伏更具電正性。若在治療結束時患者之TEPD氯離子傳導值改良為－6.0毫伏，則此應代表改良進入正常範圍，因為此改良值比－5.0毫伏更具電負性。
基於患者性別、年齡及身高，進入研究時之平均FEV1 值為正常值的66%且進入研究時之平均FVC值為正常值的80%。分析中包括之15名患者中的14名患者之氣道中存在綠膿假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)菌落，其係可在囊性纖維化患者中導致嚴重肺炎之常見細菌感染。15名患者中有14名患者亦患有胰功能不全且需要慢性胰酶替代療法。患者體重偏低，在進入研究時之平均重量為58.3公斤。
表5給出5名患者之TEPD結果。對於每一量測，皆基於鼻孔之最佳值及兩鼻孔之平均值給出結果。在歷史上，TEPD試驗結果一般基於鼻孔之最佳值給出。然而，由囊性纖維化治療研發網(Cystic Fibrosis Therapeutics Development Network)製定之當前指導原則建議TEPD結果基於二者給出。記錄在CFTR基因內具有不同類型無義突變之患者的TEPD氯離子傳導改良。
在較低及較高3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸劑量水準下之治療效果在統計學上不顯著，此表明可不必進一步增加劑量且甚至較低劑量之3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸可有效改良TEPD氯離子傳導。亦觀察到第二終點之統計學上顯著的結果及正向趨勢。具體而言，雖然該等試驗沒能夠檢測到第二終點之統計學上顯著的變化，但是觀察到自進入研究至較高劑量治療週期結束時患者平均FEV1 、FVC及體重之統計學上顯著的改良。表6給出該等結果。對於肺功能之變化，由於一名患者在較高劑量治療週期結束時沒有實施肺功能量測，因此該患者沒有包括在內。
另外，雖然沒有透過使用生活品質調查表對患者症狀之變化實施正式量測，但是要求試驗調查員詢問患者囊性纖維化症狀之變化。在本期分析所包括之15名患者中，6名報告健康狀況總體改良，6名報告咳嗽減輕且10名報告黏液稠度降低且容易清除黏液。
實例11：藉由免疫螢光及西方墨點法表現抗肌營養不良蛋白、肌糖蛋白及抗肌營養不良蛋白聚糖
一隻腳之EDB肌及上覆皮膚之活組織檢查在治療之前於局部麻醉及清醒鎮靜(在某些情形下，可能需要全身麻醉)下實施且另一隻腳之EDB肌及上覆皮膚之活組織檢查在治療最後一天實施。使用標準化技術實施活組織檢查程序(Stedman,2000,Human Gene Therapy 11：777－90)。在此程序中移除全部肌腹(只要可能)。在治療前採集活組織檢查物時，將肌肉樣本分成至少3個碎片且將在治療最後一天採集之活組織檢查樣本分成至少2個碎片。將活組織檢查樣本置於用林格(Ringer's)鹽水潤濕之telfa紗布海綿上。在立體解剖顯微鏡下以低倍數觀察活組織檢查樣本以確定纖維取向。然後使用銳利的解剖刀盡可能以橫截方式(垂直於纖維取向)對肌肉實施橫切並容許暫停2分鐘以容許停止痙攣。然後在經液氮冷卻之異戊烷中冷凍樣品、將其轉移至液氮儲存器中並將其保持在液態/蒸汽界面上方1英吋處以實施2分鐘緩慢冷卻及異戊烷蒸發，然後浸入液氮中並包入預冷卻(在液氮中並儲存在乾冰上)之標有研究編號、位置編號、患者編號、日期、患者姓名開首字母及腳側(右腳或左腳)之箔中。
以能識別受試者及採集日期之方式將所有樣品容器貼上清楚的標籤。以能防止標籤脫離之方式將標籤固定在樣品容器上。在實施該程序後立即將樣品送去分析/培養/集中檢查。對於抗肌營養不良蛋白之檢測，使用可辨認蛋白質C－末端、N－末端及杆狀域的3種市售抗體。對於肌糖蛋白及抗肌營養不良蛋白聚糖複合物之檢測，盡可能使用抗α－、β－、γ－及δ－肌糖蛋白及β－抗肌營養不良蛋白聚糖之市售抗體。此分析使用落射螢光顯微鏡；在對照正常肌肉樣本對螢光強度實施取准後，藉由CCD照相機捕獲圖像。將圖像數字化儲存並保存以便將來觀看及在研究完成時最後評價。亦對組織實施處理以藉由西方墨點法使用相同抗體檢測抗肌營養不良蛋白、肌糖蛋白及β－抗肌營養不良蛋白聚糖。捕獲顯微鏡圖像並保存以便將來觀看及在研究完成時最後評價。將剩餘肌組織樣品保存以用於與DMD有關之蛋白質及mRNA的確證分析。使用免疫染色及西方墨點法進行蛋白質檢測。
在調查研究之情況下，肌肉活組織檢查作為診斷之組成部分及作為治療效果之指標通常在DMD受試者上實施。選擇EDB係因為其不是日常活動之主要肌肉且因此取樣此肌肉不會對受試者造成不利之功能性後果。由於其很少使用，因此該EDB肌不可能展示真正的肌肉纖維替代且因此提供用於檢測抗肌營養不良蛋白產生之合適組織。由於EDB肌易於識別、可在局部麻醉下解剖且可提供足夠量組織以實施所需分析，因此對其實施取樣可提供額外之實際優點。免疫螢光及西方墨點法係在肌活組織檢查樣本土實施以確定全長抗肌營養不良蛋白存在或不存在之常規試驗。將不存在抗肌營養不良蛋白看作DMD診斷之確定。已將抗肌營養不良蛋白之修復與至肌膜之定位視為臨床前及臨床藥效活性之直接指標(Barton－Davis,1999,J.Clin.Invest.104(4) ：375－81；Politano,2003,Acta Myol.22(1) ：15－21)。
實例12：上肢及下肢肌力測定
使用手持式肌力計遵循標準化程序實施上肢及下肢肌力測定(Beenakker,2001,Neuromuscul.Disord.11(5) ：441－6；Hyde,2001,Neuromuscul.Disord.11(2) ：165－70)。吾人建議(端視受試者基線功能狀況而定)受評價之肌肉群包括髖外展肌、膝伸肌、肘屈肌及肘伸肌及手握肌。可實施雙側評估且可針對每一側上之每一肌肉群記錄三次量測值。在治療前、在治療第二天至最後一天及在治療後之跟蹤時間段期間對該等參數實施監測。在治療前及治療期間，在肌肉活組織檢查之前實施該肌力測定程序。
使用手持式測力計之肌力測定評估係行走及不行走受試者之肌肉強度的靈敏及可重複量測手段(Beenakker,2001,Neuromuscul.Disord.11(5) ：441－6；Hyde,2001,Neuromuscul.Disord.11(2) ：165－70)。患肌營養不良之受試者的評分者之間的可信度較高(Stuberg,1988,Phys.Ther.1988 68(6) ：977－82；Hyde,2001,Neuromuscul.Disord.11(2) ：165－70)。與手動肌肉強度試驗相比，肌力測定係更靈敏且較不複雜之肌功能量測手段(McDonald,1995,Am.J.Phys.Med.Rehabil.(5 Suppl) ：S70－92)。評價者(例如醫師或理療師)可容易地實施該試驗。
實例13：計時功能試驗
計時功能試驗包括自仰臥位置站起所花費之時間、步行10米所花費之時間及攀登4級標準尺寸階梯所花費之時間(Mendell,1989,N.Engl.J.Med.320(24) ：1592－7；Griggs,1991,Arch.Neurol.48(4) ：383－8)。在治療前、在治療第二天至最後一天及在治療後之跟蹤時間段期間對該等參數實施監測。在治療前及治療期間，在肌肉活組織檢查之前實施該計時功能試驗。
該等試驗(自仰臥位置站起所花費之時間、步行10米所花費之時間及攀登4級標準尺寸階梯所花費之時間)在行走受試者中提供功能能力之額外量測手段。該等試驗可重複，使用普遍，實施簡單且對類固醇治療干涉具有文件記載的響應(Mendell,1989,N.Engl.J.Med.320(24) ：1592－7；Griggs,1991,Arch.Neurol.48(4) ：383－8)。
實例14：血清CK含量
使用市售NADH－連接動力學分析計(Diagnostic Chemicals有限公司,Oxford,CT)對血清CK活性實施評估。在治療前、在治療期間之第1天(第一次劑量之前)、第7天、第14天、第21天及第27天及在治療後第42天及第56天對血清CK含量實施量測。在迪謝內肌營養不良患者中血清CK增高且因此其係該疾病之容易量測的診斷標誌且可對藥物之藥理學活性起潛在之生物標記物作用(Mendell等人，1989,New Eng.J.Med.320(24) ：1592－1597)。
血清CK提供全身肌肉整體性之指標。在患DMD之受試者中血清中該酵素之濃度增大50至100倍且其含量量測值可用於對該疾病作出早期診斷(Worton,The muscular dystrophies,In：Scriver C.R.,Beaudet A.L.,Sly W.S.,Valle D編輯，The metabolic and molecular basis of inherited disease.第8版，第4卷，New York：McGraw－Hill,2001：5493－523)。對血清CK含量實施量測以監測該疾病之進程並用作肌肉損傷之標誌。雖然鍛煉引起之變化會引入可變性(Politano,2003,Acta.Myol.22(1) ：15－21)，但是該標誌由於可容易地、重複地且經常地用廣泛可用及可靠的分析實施評估而具有其優勢。先前臨床研究已顯示在用類固醇治療期間血清CK之降低與肌肉強度之改良相一致(Reitter,1995,Brain Dev.17 Suppl ：39－43)。
實例15：真皮成纖維細胞及肌細胞培養
在患者之肌組織及皮膚上實施研究以確定患者主要肌培養物中之抗肌營養不良蛋白的產生是否與活體內抗肌營養不良蛋白的產生一致。該等實驗評價當來自患者之真皮成纖維細胞在活體外藉由用Myo－D－產生之表現構建體轉染分化為肌細胞時(Wang,2001,Development 128 ：4623－33)，是否響應於治療顯示抗肌營養不良蛋白之產生。皮膚細胞響應與臨床活性之相關性可在為療法選擇將來患者或為DMD治療篩選新穎試劑提供容易獲得之預測性試驗。如下培養細胞。在運輸期間將活組織檢查材料儲存在人類增殖培養基(或PBS)中及冰上(若需要儲存較長時間)。若在24小時之內對該組織不實施製備，則可將材料冷凍在包含10% DMSO之人類增殖培養基中並儲存於液氮(或乾冰)中。在擬製備該組織以開始對成肌細胞實施培養時，在PBS中洗滌活組織檢查材料。將足以保持該組織濕潤之PBS添加至培養皿中。用剃鬚刀片將該活組織檢查材料徹底切碎，以達成幾乎均勻之懸浮液。向每克組織添加約2毫升膠原酶/分散酶/CaCl2 溶液並連續實施切碎幾分鐘(例如對於一5×5×5毫米之肌活組織檢查物，使用1毫升酵素溶液)。將該懸浮液轉移至無菌管中並在37℃下於水浴中實施培育直至混合物係微細漿液(例如約20－30分鐘)。在培育期間，將該懸浮液藉由上下吸取幾次進一步均質化。若需要，可藉由用注射器上下吸取而實施額外再懸浮循環。將8毫升人類增殖培養基添加至該懸浮液中並混合。將混合物在1200 rpm下離心10分鐘。將細胞沉澱再懸浮於3毫升人類增殖培養基中。將細胞鋪板於膠原塗覆之6孔板之1個孔中或端視材料的量鋪板於T25膠原塗覆之燒瓶中。在37℃及5% CO2 下對細胞實施培養48小時。移除非貼壁細胞並轉移至另一膠原塗覆孔中(作為備用)。向第一個孔中添加新鮮增殖培養基(3毫升)。將來自第一個孔的細胞培養至鋪滿直至獲得兩個鋪滿的T75－燒瓶。儲存時，可將來自一個T75燒瓶的細胞冷凍於裝有1毫升冰冷培養基之4個冷凍管中。培養物之肌原細胞含量可藉由實施結蛋白染色測定。若結蛋白陽性細胞之百分比過低，則需要對培養物實施預鋪板。
實例16：3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4] 二唑－3－基]－苯甲酸用於口服治療迪謝內肌營養不良之階段2研究
受試者須符合所有以下條件才適合登記參加本研究：1.迪謝內肌營養不良(DMD)診斷，該診斷應基於5歲時呈現之臨床表現型、血清CK增高且在肌活組織檢查物上不存在抗肌營養不良蛋白(用抗體對抗肌營養不良蛋白蛋白質之C－末端部分實施肌纖維膜染色呈陰性)；2.在抗肌營養不良蛋白基因中存在無義突變；3.已有實施抗肌營養不良蛋白基因測序之文件記載，或若仍未實施測序，已有將血液樣品送去實施證實性抗肌營養不良蛋白基因測序之文件記載；4.雙腳EDB肌肉之物理檢查或射線照相圖像證據；5.能行走；6.男性；7.年齡5歲；8.已知性行為活躍之受試者願意在研究藥物投與及跟蹤時間段期間禁絕性交或使用避孕屏障或醫學方法；9.願意且能夠遵守預定調查、藥物投與計劃、實驗室試驗、研究限制及研究程序(包括肌活組織檢查、肌力測定及PK取樣)；10.能夠提供書面知情同意(若年齡18歲)或書面知情贊同(有父母親/監護人的同意)(若年齡7歲)。若受試者年齡<7歲，則僅父母/法定監護人同意即可；及11.表明受試者/父母/法定監護人已被告知應遵守該試驗之所有相關方面的本人簽名及注明日期之知情同意文件(對於年齡7歲之兒童，亦需要贊同)的證據。
存在任何以下情況皆拒絕受試者登記參加本研究：1.研究者認為可對受試者安全造成不利影響從而不可能完成治療或跟蹤過程或可影響研究結果評估的以前或當前治療狀況(例如伴隨疾病、精神病狀態、酒精中毒、藥物濫用)、病史、身體檢查、ECG檢查或實驗室異常；2.充血性心力衰竭之臨床症狀及症候(美國心臟學學院/美國心臟學會C期或D期)(Hunt,2001,J.Am.Coll.Cardiol.38 ：2101－13)；3.陽性肝炎B表面抗原、肝炎C抗體試驗或人免疫缺陷病毒(HIV)試驗；4.血紅蛋白<10克/分升；5.血清白蛋白<2.5克/分升；6.GGT或總膽紅素異常(>正常實驗室上限值)；7.腎功能異常(血清肌酸酐>1.5倍的正常實驗室上限值)；8.實體器官或血液移植史；9.正實施免疫抑制療法(非皮質類固醇)；10.在開始研究治療之前28天內接受另一研究藥物；11.正參與任何其他治療臨床試驗；12.正使用噻唑啶二酮過氧化物酶體增殖子活化受體γ(PPAR γ)激動劑，例如羅格列酮(Avandia或等效物)或吡格列酮(Actos或等效物)；13.在開始研究治療之前3個月內改變全身性皮質類固醇療法(例如開始治療；停止治療；改變劑量、時間方案或類固醇類型)；或14.在開始研究治療之前3個月內用全身性胺基糖苷抗生素實施治療。
以本文所述之調配物形式提供3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸。對於每一治療群組實施28天治療。每天以4毫克/公斤、4毫克/公斤及8毫克/公斤TID用3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸對初始患者群組(n＝6)實施28天治療。在檢查臨床安全結果後，每天以10毫克/公斤、10毫克/公斤及20毫克/公斤TID用3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸對第二患者群組(n＝20)實施28天治療。因此，每一患者接受總共84劑量之3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸。
在蛋白質C－末端域染色時，在兩種劑量水準下於第28天在某些患者中顯示足肌趾短伸肌(EDB)肌膜抗肌營養不良蛋白相對於基線之部分恢復或增多。自該研究所獲得之平均藥物動力學參數在下表7中給出且亦示於圖1中。
在每一調查之第二天於投藥前以及投與第一日劑量研究藥物之後3小時時即刻採集血液以用於3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸濃度測定。
記錄研究藥物之服用及樣品採集時間。若使用肝素化靜脈導管實施樣品採集以避免重複針刺，則在每一樣品採集之前應移除並丟棄至少2毫升血液以避免肝素污染樣品。儘量在預定時間或在預定時間±5分鐘內採集血液樣品。抽血時間與研究藥物服用時間相關。
每一樣品包括抽至含有K3 －EDTA作為抗凝血劑之5毫升Vacutainer或等效管中之2毫升靜脈血。在採集後，立即將該管輕輕顛倒8－10次以使抗凝血劑與血液樣品混合。將該管豎立儲存在冰上直至離心；在樣品採集1小時之內實施離心及樣品處理。藉由將該採集管置於冷凍離心機(4℃－8℃)中的水平轉子中(具有外開式頂部)於1500－1800相對離心力(RCF)下最少15分鐘以分離血漿部分。藉由移液管取出血漿部分並分至2個聚丙烯冷凍管中(每一管容納大約相等之分液)。以可識別受試者、研究時期及採集日期及時間之方式將所有樣品採集物及冷凍管貼上清楚的標籤。以可防止該標籤在冷凍後脫離之方式將標籤固定在冷凍管上。在處理後，將樣品置於約－20℃(或更低)下之冷凍機中。
為防止樣品損失，將該等樣品分成2批，每一批含有每一時間點之1等份血漿分液(1等份服用前分液及1等份服用後分液)。在採集後28－30天內對第一批分液樣品實施裝運。多個受試者之樣品可作為單次裝運之部分一起運送。在裝運之前，將樣品包裝在裝有足夠乾冰之絕熱容器中以確保在裝運期間樣品保持冷凍且防止其破損。經優先快遞將樣品過夜裝運。
儲存樣品以便在研究結束時使用有效高效液相層析與串聯質譜(HPLC/MS－MS)方法對3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸實施分析。其後，保留樣品以用於可能之隨後分析。
在該試驗中之主要終點係在用3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸治療之28天期間抗肌營養不良蛋白在肌肉中之表現增高之患者的比例。可自全部38名患者獲得EDB肌之治療前及治療後的免疫螢光分析數據。如表8所示，數據表明，在兩個劑量水準下患者均展示抗肌營養不良蛋白染色之定性改良。總之，以4毫克/公斤、4毫克/公斤、8毫克/公斤劑量水準治療之6名患者中的4名(67%)(90% CI 27－94%)、以10毫克/公斤、10毫克/公斤、20毫克/公斤劑量水準治療之20名患者中的10名(50%)(90% CI 30－70%)及以20毫克/公斤、20毫克/公斤、40毫克/公斤劑量水準治療之12名患者中的6名(50%)(90% CI 50－75%)展示治療後抗肌營養不良蛋白表現增加。響應似乎不依賴於治療前抗肌營養不良蛋白之表現(不存在對最小量)、年齡、類固醇使用或無義突變之位置或類型。
將在前2個群組中之26個男孩中的24個的治療前初始肌細胞用於活體外肌管培養。當在3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸存在下實施培養時，肌管培養物顯示響應於3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸治療之抗肌營養不良蛋白表現之劑量依賴性增加的證據。在10微克/毫升之濃度下，24名中之24名(100%)顯示產生全長抗肌營養不良蛋白，表明若達成足夠濃度在所有受試者中無義突變抑制之潛力。當對治療結束值與治療前值實施比較時，接受4毫克/公斤、4毫克/公斤、8毫克/公斤；10毫克/公斤、10毫克/公斤、20毫克/公斤；或20毫克/公斤、20毫克/公斤、40毫克/公斤劑量水準之大多數受試者之CK降低。該等改變係統計學上顯著的(對於低劑量、中劑量及高劑量分別為p＝0.03、p＝0.002、p＝0.001)。在治療停止時平均值朝基線返回為藥理學活性提供額外支持。
作為該方案之變更，在每一劑量水準下，吾人建議以6小時、6小時及12小時(±約30分鐘)為間隔TID服用3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸。理想地，在進餐後約30分鐘內(例如在早餐後約7：00 AM、午餐後約1：00 PM及在晚餐後約7：00 PM)服用每一劑量。雖然意識到在門診患者之情形下可能發生服用時間方案之變更，但吾人建議在PK樣品採集時期應嚴格遵守規定服用方案(包括服用間隔及服用與用餐之關係)。使用上文給出之程序對臨床終點實施評價。
實例17：定量咳嗽評估
人們普遍認為過量咳嗽會影響人們的感覺及機能。在美國，患者尋求主要保健治療之最常見原因之一係咳嗽(Hing等人，2006,Adv.Data 374 ：1－33)。患慢性咳嗽之患者表現為受挫、易怒、對咳嗽之破壞性性質惱火及對睡眠及社會交往有負面影響(Kuzniar等人，2007,Mayo Clin.Proc.82(1) ：56－60)。在患囊性纖維化(CF)之患者中，咳嗽係疾病相關症狀之最突出者，且日間及夜間咳嗽增加並伴隨痰生成增加係尋求不定期醫藥保健之最普遍原因(Sawicki等人，2006,Ped.Pulm.,Suppl.29 ：344(#388))。CF之咳嗽可能與黏液膿性分泌物阻塞氣道及與慢性氣道發炎有關；實質上咳嗽增加一般預示著肺部惡化且伴隨FEV1 降低及炎症性標誌增多(Smith等人，2006,Thorax 61(5) ：425－9)。在CF患者剛完成肺部惡化治療後，已有文件記載其具有2－5次咳嗽/小時之慢性日間咳嗽頻率(Id.)但在門診患者之情形下很可能更高；正常個體在一整天內通常僅有很少次咳嗽(Hsu等人，1994,Eur.Respir.J.7(7) ：1246－53)。主觀咳嗽評估通常因患者對事件之慢性適應及隨之發生的不能記起發生了多少咳嗽而受到影響；患者傾向於少報咳嗽情節且客觀與主觀咳嗽評估通常極少關聯Id.(Coyle等人，2005,Cough 1 ：3；Smith等人，2006,Thorax 61(5) ：425－9)。
VivoMetrics公司之LifeShirt將動作敏感傳感器、電極、喉麥克風、標準袋及3軸加速計引入年齡5歲之患者可用之輕重量可洗背心中(參見LifeShirt監測系統快速開始指南(Monitoring System QuickStart Guide)，其全文以引用方式併入本文中)。利用來自運動傳感器及麥克風之整體輸入可對咳嗽之頻率及強度實施量測。將時標數據儲存在封裝於記錄器內之微型閃存卡上且可將其上傳至製造商(VivoMetrics公司)以便使用專用軟體實施分析。可將數據轉移至Excel、Oracle或SAS。
當與慢性阻塞性肺部疾病患者之視頻/音頻評價比較時，該裝置已證明在咳嗽評估方面具有較高準確率(Coyle等人，2005,Cough 1 ：3)。使用該裝置可獲得圖2所示之數據且將在CF試驗之階段3期間提供關於3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸臨床益處之實質性補充數據。當前自3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸之階段2研究非正式採集的症狀數據支持此觀點。值得注意的是，數名患者表現為研究時咳嗽減少。不受限於理論，基於3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸－介導之CFTR功能誘導會減輕氣道阻塞及發炎之假設，咳嗽頻率之降低可作為該等藥理學效果之症狀性綜合效果且可提供比口頭患者報告更準確及量化之評估。
應瞭解，雖然為闡釋之目的本文已對本發明之具體實施例予以闡述，但本文所述之本發明範圍並不受限於本文所揭示之具體實施例。該等實施例皆意欲闡釋本發明之數個態樣。任何等效實施例皆意欲包括在本發明之範圍內。實際上，除彼等本文所示及所述者外，彼等熟習此項技術者根據上述闡述應易知本發明之各種修改。
圖1 提供在階段2迪謝內肌營養不良研究中在4毫克/公斤、4毫克/公斤及8毫克/公斤；10毫克/公斤、10毫克/公斤及20毫克/公斤；及20毫克/公斤、20毫克/公斤及40毫克/公斤之劑量水準下38名患者中37名的3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸血漿濃度－時間特性曲線及PK參數。一名患者的資料由於資料不充分排除在分析之外。
圖2 提供藉由向受試者投與3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸對24小時內平均咳嗽頻率的影響。該數據表明，投與3－[5－(2－氟－苯基)－[1,2,4]二唑－3－基]－苯甲酸提供平均咳嗽頻率之最初改良，隨後平均咳嗽頻率暫時增加，再隨後平均咳嗽頻率總體改良。
(無元件符號說明)

Claims (13)

  1. 一種3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]-苯甲酸之用途，其係用以製備用於治療、預防或控制有需要的人類患者中由CFTR 基因編碼之mRNA中過早終止密碼子(premature stop codon)引起之囊性纖維化(Cystic Fibrosis)或有需要的人類患者中由抗肌營養不良蛋白(dystrophin)基因編碼之mRNA中過早終止密碼子引起之迪謝內肌營養不良(Duchenne Muscular Dystrophy)之藥劑，其中該藥劑係視情況於餐後30分鐘以三次劑量口服投與，其中分別依據式1X、1X及2X於24小時期間內分別以6小時、6小時及12小時之間隔投與第一次劑量、第二次劑量及第三次劑量，其中X為18-22毫克/公斤，且其中各劑量會將3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]-苯甲酸之血漿濃度維持在大於2微克/毫升。
  2. 如請求項1之用途，其中以患者體重決定各劑量中3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]-苯甲酸之含量。
  3. 如請求項2之用途，其中以一或多個單位劑量調配物投與各劑量含量，各單位劑量調配物包含35毫克至1400毫克之範圍之3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]二唑-3-基]-苯甲酸之含量。
  4. 如請求項3之用途，其中各單位劑量調配物中之含量係選自35毫克、50毫克、70毫克、100毫克、125毫克、140毫克、150毫克、175毫克、200毫克、250毫克、280毫克、300毫克、350毫克、400毫克、450毫克、500毫 克、560毫克、600毫克、700毫克、750毫克、800毫克、900毫克、1000毫克或1400毫克。
  5. 如請求項3之用途，其中各單位劑量調配物中之含量係選自35毫克、50毫克、70毫克、100毫克、125毫克、140毫克、175毫克、200毫克、250毫克、280毫克、350毫克、400毫克、500毫克、560毫克、700毫克、750毫克、800毫克、1000毫克或1400毫克。
  6. 如請求項3之用途，其中各單位劑量調配物中之含量係選自125毫克、200毫克、250毫克、300毫克、450毫克、600毫克、750毫克、900毫克或1000毫克。
  7. 如請求項1之用途，其中肌肉中抗肌營養不良蛋白、肌糖蛋白(sarcoglycan)或抗肌營養不良蛋白聚糖(dystroglycan)表現增加，上肢或下肢肌力測定(upper or lower extremity myometry)經改善，血清肌酸激酶(CK)含量降低、或功能試驗之表現經改善。
  8. 如請求項7之用途，其中該功能試驗為計時行走功能試驗(timed ambulatory function test)。
  9. 如請求項1之用途，其中與囊性纖維化有關之咳嗽經治療、預防或控制。
  10. 如請求項1之用途，其中第一次投與劑量係20毫克/公斤，第二次投與劑量係20毫克/公斤，且第三次投與劑量係40毫克/公斤。
  11. 如請求項1之用途，其中在24小時期間內於早上投與該第一次劑量，於中午投與該第二次劑量，且於晚上投與 該第三次劑量。
  12. 如請求項1之用途，其中於連續療法中每天、每週、每月或每年投與該第一次劑量、第二次劑量及第三次劑量，該連續療法包含複數個24小時期間。
  13. 如請求項12之用途，其中用於次一24小時期間之第一次劑量係於前一24小時期間之第三次劑量經投與後12小時投與。
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