TWI353851B - Use of anti-tnfα antibodies and another drug - Google Patents

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1353851 玖、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於以皮下投藥方式每兩週組合投用人類抗體 (較佳者為重組性人類抗體，其可專一性結合至人類腫瘤壞 疽因子a (hTNFa))及另一種用於治療疾病之藥物，以治療 因TNFa有害活性造成之疾病之方法，本發明抗體為全長的 抗體或其抗原-結合部分，本發明亦包括含有醫藥組合物及 投藥說明書之套組。 【先前技術】 腫瘤壞疽因子a (TNFa)是許多種類細胞（包括單細胞及巨 嗜細胞）所產生的一種細胞激素，原本是依據其誘發某種老 鼠腫瘤壞疽的能力而鑑定出來的（參考，例如，歐得（Old), L. (1985)科學2M:630-632)。其後，一種與癌症惡病質有關而 名為惡液質素的因子證實與TNFa為相同的分子。TNFa已被 認為與媒介休克有關（參考，例如，布特勒（Beutler)，B.及 瑟瑞米（Cerami)，A. (1988)生物化學年刊11:505-518;布特勒， B.及瑟瑞米，A (1989)免疫學年刊2_:625-65 5)，除此之外， TNFa已被認為與許多其他人類疾病及病症的病理學有 關，包括敗金症、感染症、自體免疫疾病、移植物對抗宿 主的疾病（參考，例如，瓦西利（Vasilli)，P. (1992)免疫學年 刊11:41 1-452;崔西（Tracey)，K. J.及瑟瑞米，A (1994)醫學年 刊 11:491-503)。 因為人類TNFa (hTNFa)在許多人類病症上扮演有害的作 用，因此，咸欲設計抑制或抵消掉hTNFa活性之治療策略， 84711 明確言之，是探索可與hTNFa結合或中和之抗體，以作為 抑制hTNFa活性之方法。此最早期的某些抗體為老鼠單株 抗體（m人bs)，其係經hTNFa免疫化之老鼠的淋巴細胞所製備 的融合瘤所分泌（參考，哈恩（Hahn) T;等人（1985)美國國家 科學院會議記錄雜誌仏:3814-3818 ;廉恩（Liang), C-M.等人 (1986)生物化學生物物理研究通訊UU47-854 ;西瑞（Hirai)， Μ.等人（1987)免疫學方法雜誌M:57-62 ;福瑞利（Fendly)， B.M.等人（1987)融合瘤 i:359-370;莫樂（Moller), A.等人 (1990)細胞激素1:162-169;莫伊樂（Moeller)等人申請之美國 專利案5,231,024;瓦勒許（％&11&(：11)，〇.申請之歐洲專利申請 公開案1 86 833 B1 ;歐得等人申請之歐洲專利申請公開案 218 868 A1 ;莫伊樂，A.等人申請之歐洲專利公開案260 610 B1)。雖然這些老鼠抗-hTNFa抗體與hTNFa常顯示出具有高 的親合力（例如，KW1 (V9M)，且可以中和hTNFa之活性，但 是其在活體内的用途卻因人類投用老鼠抗體後所產生有關 問題而受到限制，諸如，短暫的血清半衰期、無法驅動某 些人類效應子的功能及會謗發人體内對抗老鼠抗體的不想 要之免疫反應（”人類抗-老鼠抗體”（HAMA)反應）。 為了克服人體使用完全-老鼠抗體所帶來的問題，因此， 以遺傳工程方式處理老鼠抗-hTNFa抗體，使其更為”人類化” ，例如，已經製備出崁合性抗體，其中該抗體鏈的可變區 域衍生自老鼠，而抗體鏈的固定區域則衍生自人類（奈特 (Knight), D.M.等人（1993)分子免疫學扭:1443-1453 ;達多那 (Daddona), P.E.等人申請之PC 丁公開案世界專利WO 92/16553) 84711 1353851 ，除此之外，也已經製備出人類化抗體，其中該抗體可變 區域的超變化區域衍生自老鼠，而可變區域之其餘區域及 抗體固定區域則衍生自人類（阿達爾（Adair), J.R.等人申請 之PCT公開案世界專利W0 92/11383)。然而，因為這些崁合 性及人類化抗體仍保有某些老鼠的序列，因此，其仍會引 發不想要的免疫反應（人類抗-崁合抗體（HACA)反應），特別 是長期投用時（例如，慢性用藥），諸如類風濕性關節炎（參 考，例如，伊利歐特（Elliott), M.J.等人（1994)刺肋針雜誌 344:1 125-1 127 :伊利歐特，M.J.等人（1994)刺肋針雜誌 344:1105-1110)。 較老鼠mAbs為佳之hTNFa抑制劑或其衍生物（例如，戾合 性或人類化抗體）是完全地人類抗-hTNFa抗體，因為，此種 物質即使在長期使用後也不會引發HAMA反應。利用人類 融合瘤技術已製備出抗hTNFa之人類單株抗體（波伊爾 (Boyle), P.，等人（1993)細胞免疫學 111:556-568;波伊爾，P. 等人（1993)細胞免疫學m:569-581;波伊爾等人申請之歐洲 專利申請公開案614 984 A2)。然而，因為報告指出這些衍 生自融合瘤的單株自體抗體對hTNFa親合力太低，難以以 慣用方法求出，無法結合至可溶性hTNFa且無法中和 hTNFa-誘發的細胞毒性（參考，波伊爾等人；上述），另外， 人類融合瘤技術成功與否端視能否產生對hTNFa具有專一 性自體抗體之人類週邊血液淋巴細胞中存在的自然物質而 定，某些研究發現在人類個體血清中可偵測到對抗hTNFa 的自體抗體（福斯格得（？〇111583&1<1)，八.等人（19 89)北歐免疫 84711 -8 ' 1353851 學雜誌尬:219-223;貝茲恩（3611(^611),【等人（1990)革新白 血球細胞生物學Μ旦：447-452)，而在其他則偵測不到（劉許 (Leusch); Η-G.等人（1991)免疫學方法雜誌 ϋ£: 145-147)。 另一種替代天然存在之人類抗-hTNFa抗體者為重組性 hTNFa抗體，業已揭示與hTNFa具有相當低結合親合力（換 言之，Kd〜i〇-7m)及快速解離率（換言之，KQff〜10_2秒―1)之 重組性人類抗體（格利菲斯（Griffiths), A.D.等人（1993) EMBO雜誌11:725-734)，然而，因為其相當快速的解離動力 學，因此這些抗體並不適合作為治療用，除此之外，所揭 示的重組性人類抗-hTNFa不會中和hTNFa活性，而是會促 進hTNFa結合至細胞表面上，並促進hTNFa的内飲作用（利 柏力（Lidbury)，A.等人（1994)生物技術治療學i:27-45 ;阿斯 頓（Aston)，R.等人申請之PCT公開案世界專利W0 92/03145)。 業已揭示與可溶性hTNFa具有高親合力及低解離動力學 之重組性人類抗體，且該抗體具有中和hTNFa活性的能 力，包括hTNFa-誘發的細胞毒性（活體外及活體内）及 hTNFa-謗發之細胞活化作用（參考，美國專利案6,090,382) ，投用該抗體之代表性步驟是以每週為基礎以靜脈内方式 進行，但每週投用抗體及/或任何藥物所需經費高、麻煩， 且會因為投用的頻率而導致副作用的次數增加，靜脈内方 式投藥亦有限制性，在投藥時通常需要具有醫學訓練的人 員參與。 【發明内容】 本發明提供組合投用抗-TNFa抗體及一或多種藥物，以治 84711 1353851 療TNFa相關疾病之方法，例如，敗血症、自體免疫疾病（例 如，類風濕性關節炎、過敏、多發性硬化症、自體免疫糖 尿病、€體免疫葡萄膜炎及腎徵候群）、感染性疾病、惡性 腫瘤、移植物對抗宿主疾病、肺臟疾病、骨頭疾病、小腸 疾病、中樞神經系統疾病、心臟疾病。較佳的治療自體免 疫疾病為類風濕性關節炎。 抗體可在投用其他藥物之前投用，或一起投用或之後投 用。本發明方法包括任何抗體及其他藥物之投用順序，及 任何投藥之方法，較佳係以每兩週投用抗體之方式治療 TNFa相關疾病之療法，較佳係經皮下途徑投用。 較佳的其他藥物為疾病改善抗-風濕藥（DMARD)或非類 固醇性抗發炎藥物（NSAID)或類固醇或其任何之組合藥 物。DMARD較佳的實例為經基氯啥（hydroxychloroquine)、 來氟米特（leflunomide)、甲氨蝶呤（methotrexate)、非經腸金 製劑、口服製劑及柳氮續p比淀（sulfasalazine)。這些方法包 括利用組合治療，其中人類抗體係與另一治療藥劑投與受 體，諸如一或多種額外之可結合其他標的物的抗體（例如， 結合其他細胞激素或結合細胞表面分子之抗體）、一或多種 細胞激素、可溶性TNFct受體（參考，例如，PCT公開案世界 專利W0 94/06476)、購自Immunex公司之衣特諾西特 (etanercept)(ENBRELTM)及購自Centocor公司之因福西馬 (infliximab)(REMICADETM)及 / 或一或多種可抑制 hTNFa 產 生或活性之化學藥物（諸如PCT公開案世界專利W0 93/19751中所揭示之環己烷-亞基衍生物）。 84711 -10 - 1353851 本發明另一個主旨係關於醫藥组合物，其包括一種抗 -TNFa抗體及一或多種可用以治療自體免疫疾病.之藥物，及 一種醫藥學上可接受之載劑。 本發明另一個主旨係關於包括醫藥组合物之套組，該醫 藥組合物包括一種抗-TNFa抗體及一種醫藥學上可接受之 載劑，及一或多種醫藥組合物，每一醫藥組合物中包括可 用以治療自體免疫疾病之藥物及一種醫藥學上可接受之載 劑。另一種情形是，該套組中包括一種單一醫藥組合物， 該醫藥組合物中包括一種抗-TNFa抗體、一或多種可用以治 療自體免疫疾病之藥物及一種醫藥學上可接受之載劑。該 套組中包括投與對治療疾病（諸如自體免疫疾病，特別是類 風濕性關節炎）是有利之抗-TNFa抗體之醫藥組合物之說明 書。 抗體或其抗原-結合部分較佳是可專一性結合至人類 TNFa之重組性人類抗體，抗體較佳為可專一性結合至人類 TNFa之重組性人類抗體。本發明抗體的特徵在於可以高親 合力結合至hTNFa，而具有低解離動力，且可中和hTNFa 活性，包括hTNFa-謗發的細胞毒性（活體外及活體内）及 hTNFa-誘發的細胞活化作用。抗體或其抗原-結合部分較佳 自人類TNFa解離之Kd為1 X 1(Τ8 Μ或更低，而Kw率常數為1 X :^^秒」或更低，兩者係由表面電漿共振所測定，而以標 準活體外L929分析法所測之中和人類TNFa細胞毒性之IC50 為lxl(T7M或更低，而更佳者，經分離人類抗體或其抗原結 合部分自人類TNFa解離之K^f為5 X 1(Τ4秒―1或更低，甚至更 84711 -11 - 1353851 佳者之KaffS 1 X 10 4秒1或更低。更佳者，經分離人類抗體 或其抗原結合部分以標準活體外L929分析所得之中和人類 TNFa細胞毒性之ICm為1 χ1(Τ8 μ或更低，甚至更佳者之1(：5〇 為1 xlO·9 Μ或更低，而更佳者之^:⑺為！ χ1〇-1〇 M或更低。 抗體可為全長（例如，IgGl或IgG4抗體）或僅包括抗原-結合 部分（例如’ Fab、F(ab，：h、scFv片段或單一區域）。本發明 最佳重組性抗體名為D2E7，其具有包括SEQ ID NO: 3胺基 酸序列之輕鏈CDR3區域及包括SEQ ID NO: 4胺基酸序列之 重鏈CDR3區域，較佳地，D2E7抗體是具有包括SEQ IDN〇: 1胺基酸序列之輕鏈可變區域（LCVR)及包括SEQ ID NO: 2 胺基酸序列之重鏈可變區域（HCVR)。這些抗體揭示於美國 專利案6,090,382中，該案内容一併併入本專利參考。 較佳.地’抗體或其抗原_結合部分具有下列的特性： a) 以表面電漿共振測定，自人類tnFci解離之K^f為1 X HT3秒J或更低； b) 具有輕鏈CDR3區域，其包括SEQ ID NO: 3胺基酸序 列’或在位置1、4、5、7或8經一個丙胺酸取代作用，或在 位置1、3、4、6、7、8及/或9經一至五個保守胺基酸取代作 用之SEQ ID NO: 3胺基酸序列； c) 具有重鏈CDR3區域，其包括SEQ ID NO: 4胺基酸序 列，或在位置2、3、4、5、6' 8、9、10或11經一個丙胺酸 取代作用，或在位置2、3、4、5、6、8、9、10' 11及/或12 經一至五個保守胺基酸取代作用之SEQ ID NO: 4胺基酸序 列。 84711 -12 - 1353851 更佳地，抗體或其抗原-結合部分自人類TNFα解離之K〇ff 為5 x 10·4秒―1或更低，更佳地，抗體或其抗原-結合部分自 人類TNF—α解離之Kw為1 X 1(Τ4秒_1或更低。 抗體或其抗原-結合部分較佳含有CDR3區域之LC VR ’其 包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列，或在位置1、4、5、7或8 經一個丙胺酸取代作用之SEQ ID NO: 3胺基酸序列，及含 有CDR3區域之HCVR，其包括SEQ ID NO: 4胺基酸序列， 或在位置2、3、4、5、6、8、9、10或11經一個丙胺酸取代 作用之SEQ ID NO: 4胺基酸序列。更佳地，LCVR另外具有 包括SEQ ID NO: 5胺基酸序列之CDR2區域，而HCVR另外 具有包括SEQ ID NO: 6胺基酸序列之CDR2區域，更佳地， LCVR另夕卜具有包括SEQ ID NO: 7胺基酸序列之CDR1區 域，而HCVR另外具有包括SEQ ID NO: 8胺基酸序列之CDR1 區域。 抗體及其抗原結合部分較佳含有包括SEQ ID NO: 1胺基 酸序列之LCVR及包括SEQ ID NO: 2胺基酸序列之HCVR。 在某些具體實例中，抗體具有IgGl重鏈固定區域或IgG4重 鏈固定區域，在另一個具體實例中，抗體為Fab片段、F(ab’)2 片段或單鍵Fv片段》 在另一個具體實例中，本發明提供投與對治療疾病有利 之抗-TNFot抗體之方法》其中係每兩週以皮下投藥方式投與 受體一或多種抗-TNFa抗體或其抗原-結合部分。抗體或其 抗原-結合部分較佳含有具有包括CDR3區域（其包括由選自 SEQ ID NO: 3 ' SEQ ID NO: 11 ' SEQ ID NO: 12 ' SEQ ID NO: 84711 -13 - 1353851 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20、 SEQ ID NO: 21' SEQ ID NO: 22' SEQ ID NO: 23' SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26胺基酸序列所組成之群） 之LCVR或具有CDR3區域（其包括由選自SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、 SEQ ID NO: 3 卜 SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 34及SEQ ID NO: 35胺基酸序列所組成之群）之HCVR。 本發明前述最佳之具體實例是每兩週以皮下投藥方式投 與40毫克之D2E7抗體，一或多種其他藥物之劑量係根據其 有效劑量而定。 【實施方式】 本發明係關於投與對治療疾病有利之抗-TNFa抗體之方 法，其包括與一或多種其他藥物組合投用可以高親合力結 合至人類TNFot、且具有低解離力並具有高度中和能力之經 分離人類抗體，或其抗原-結合部分，以便治療疾病。 為使本發明更易了解，某些名詞先給予定義。 本專利說明書中所用"投用"係指投與某一種物質（例如， 一種抗-TNFa抗體），以達到治療的目的（例如，治療TNFa-相關的疾病）。 本專利說明書中所用"每兩週投藥療程"、”每兩週投用” 及”每兩週投藥”係指將物質（例如，抗-TNFa抗體）投與受體 的時間過程，以達到治療的目的（例如，治療TNFa-相關的 疾病）。每兩週投用療程非意欲包括每週投用療程，較佳 84711 -14- 1353851 地，該物質係每9-19天，更佳者係每11-17天，甚至更佳者 每13-15天，而最佳者則為每14天投用之。 本專利說明書中所用”組合療法”係指投用兩或多種治療 物質，例如，抗-TNFa抗體及其他藥物，諸如DMARD或 NSAID。其他藥物可與抗-TNFa抗體共同投用，或在之前或 之後投用。 本專利說明書中所用”人類TNFa”（本專利說明書縮寫為 hTNFa或簡單以hTNF表示）意指一種人類細胞激素，其係以 17 Kd分泌形式及26 kD膜結合形式存在，其生物活性形式 是由三個非共價結合的17 kD分子所組成。TNFa結構進一步 於，例如，潘尼卡（Pennica)，D.等人（1984)自然312:724-729 ;戴維斯（Davis), J.M.等人（1987)生物化學拉:1322-1326 ;及瓊恩斯（Jones)，E.Y.等人（1989)自然 33 8:225-228 中 說明。人類TNFa—詞意欲包括重組性人類TNFa(rhTNFa)， 其可利用標準重組表現方法製備之，或購買取得（R & D系 統，目錄編號210-TA，明尼阿波里斯市，MN)。 本專利說明書中所用”抗體”意指由四條聚肽鏈（兩條重（H) 鏈及兩條輕（L)键，彼此以雙硫键結合在一起）組成之免疫球 蛋白分子。每個重鏈係由重鏈可變區域（本專利說明書所寫 為HCVR或VH)及重鏈固定區域所組成，重鏈固定區域係由 三個區域（CHI、CH2及CH3)所組成。每個輕鏈係由輕鏈可 變區域（本專利說明書所寫為LCVR或VL)及輕鏈固定區域 所組成，輕鏈固定區域係由一個區域CL所組成。VH及VL 區域可進一步次分為超可變區域（名為互補決定區域 84711 -15 - 1353851 (CDR))，其散置在更為保守而名為架構區域（FR)之間°辛 個VH及VL係由三個CDRs及四個FRs%組成’從胺基端至叛 基端的排列順序為：FIU、CDIU、FR2、CDR2、FR3、CDR3、 FR4。 本專利說明書中所指抗體之"抗原-結合部分"（或簡稱為 "抗體部分"）係指一或多個仍具有專一性結合至抗原（例 如，hTNFa)能力之抗體片段。咸已證明抗體之抗原-結合功 能係由全長抗體之片段執行的。抗體”抗原-結合部分"一詞 中所包括之結合片段實例包括⑴Fab片段，由VL、VH、CL 及CH1區域所组成之單價片段；（i〇 FUb1)〗片段，包括由雙 硫鍵橋於樞紐區域連結之兩個Fab片段之雙價片段；（iii)由 VH及CH1區域所組成之Fd片段；（iv)由抗體單臂之VL及VH 所組成之Fv片段，（v) dAb片段（瓦德（Ward)等人（1989)自然 341:544-546)，其係由VH區域所組成；及（vi)經分離之互補 決定區域（CDR)。除此之外，雖然Fv片段兩個區域VL及VH 係由個別的基因所編碼，但是利用重組方法，以合成連結 子可將其接合在一起，製成其中VL及VH區域配對形成單價 分子之單一蛋白鏈（已知為單鏈Fv (scFv);參考，例如，柏 德（Bird)等人（1988)科學 211:423-426 ;及哈斯頓（Huston)等 人（1988)美國國家學院科學USAM:5879-5883)。此單鏈抗體 亦意欲包含於抗體"抗原-結合部分"一詞中。其他形式的單 鏈抗體，諸如二價抗體亦包括其中。二價抗體為雙價，雙 專一性之抗體，其中因為VH及VL區域係表現於單一聚肽鏈 上，但是利用連結子太短以致難以讓同一蛋白鏈上的兩個 84711 -16- 1353851 區域間互相配對，因此，強力讓區域與另一蛋白鏈上的互 補區域互相配對而產生兩個抗原結合位置（參考，例如何力 格（Holliger)，P_等人（1993)美國國家科學院會議記錄雜誌 迎·:6444_6448;柏捷克（Poljak)，R.J·等人（1S>94)結構 2_:112ΐ· 1123)。 另外’抗體或其抗原-結合部分可為較大免疫黏附分子之 部分，該免疫黏附分子係抗體或其抗體部分與一或多種其 他蛋白質或肽以共價或非共價方式結合而成的◊此種免疫 黏附刀子之貫例包括利用抗生蛋白鏈菌素核心區域所製備 之四體scFv分子（奇利亞諾夫（Kipriyan〇v)，s M等人（1995) 人類抗體及融合瘤L93-101)，及利用半胱胺酸殘基、標記 肽及c-端聚组胺酸標誌所製備之雙價或生物素化scFv分子 (奇利亞諾夫，S.M.等人（1994)分子免疫學^4 047-1058)。利 用抗體慣用的技術（諸如木瓜酵素或胃蛋白酶個別分解完 整的抗體）可自冗整抗體製備出抗體部分（諸如Fab&F(ab,)2 片段）。除此之外’利用本專利說明書中所揭示之標準重組 DNA技術可製備抗體、抗體部分及免疫黏附分子。 本專利說明書中所用’’人類抗體”意指包括具有源自人類 種系免疫球蛋白之可變及固定區域之抗體^本發明人類抗 體包括非人類種系免疫球蛋白序列編碼之胺基酸殘基（例 如’於活體外利用隨機性或位置專一性突變作用或於活體 内體細胞突變作用所引入之突變），例如Cdrs中，明確言 〈，係CDR3。然而，本專利說明書中所用，，人類抗體”非意 和包括其中CDR序列係源自其他已經移植人類架構序列之 84711 -17- 1353851 哺乳類種系（諸如，老鼠）之抗體。 本專利說明書中所用”重組性人類抗體'’意指包括所有以 重組方式製備、表現、產生或分離之人類抗體，諸如，利 用重組表現載體轉植至宿主細胞（於後文Section II中進一 步說明）所表現之抗體、自重組性及組合人類抗體庫所分離 之抗體（於後文Section III中進一步說明）、自人類免疫球蛋 白基因轉植基因動物（例如，老鼠）中分離之抗體（參考，例 如，泰勒（Taylor)，L.D.等人（1992)核酸研究社；6287- 6295) 或利用其他將人類免疫球蛋白基因序列切除接合至其他 DNA序列之方法所製備、表現、產生或分離之抗體，此種 重組性人類抗體具有源自人類種系免疫球蛋白序列之可變 及固定區域。然而，在某些具體實例中，此種重組性人類 抗體需要經過活體外突變作用（或當使用經人類Ig序列基因 轉植之動物時，需經活體内體細胞突變作用），因此，當源 自及與人類種系VH及VL序列有關時，重組性抗體VH及VL 區域之胺基酸序列非自然存於人類抗體種系中。 本專利說明書中所用”經分離抗體”意指一種抗體，其實 質上不含其他具有不同抗原性專一性之抗體（例如，專一性 結合hTNFa之經分離抗體實質上不含有專一性結合hTNFa 以外之抗原之抗體）。然而，專一性結合hTNFa之經分離抗 體與其他抗原（諸如，其他物種hTNFa分子（於後文進一步說 明））之間具有交互反應性，除此之外，經分離抗體實質上不 含有其他細胞物質及/或化學物質。 本專利說明書中所用"中和抗體M (或"可中和hTNFa活性 84711 -18 - 1353851 之抗體"）意指可結合至hTNFa而抑制hTNFa生物活性之抗 體。此hTNFa生物活性之抑制作用係測定一或多種hTNFa 生物活性指標而評估定之，諸如hTNFa-誘發細胞毒性作用 (不論是活體外或活體内試驗）、hTNFa-誘發細胞活性作用 及hTNFa結合至hTNFa受體之作用。這些hTNFa生物活性指 標可根據技藝中所熟知的一或多種標準活體外或活體内分 析法評估之（參考，美國專利案6,090,382)，較佳地，抗體中 和hTNFa活性的能力係以L929細胞中hTNFa-謗發細胞毒性 之抑制作用評估定之。當作為其他或另一種hTNFa活性的參 數時，可評估抗體抑制HUVEC中ELAM-1的hTNFa-誘發表 現作用，以測定hTNFa-誘發細胞活化作用。 本專利說明書中”表面電漿共振”係指一種光學現象，其 係利用偵測蛋白質濃度在生物感應器母質（例如，利用 BIAcore系統（法瑪西亞生物感應器AB，烏普薩拉，瑞典及 巴斯卡拉威，NJ)的改變，以分析實際時間生物專一性相互 作用。進一步說明，可參考實例1及瓊森（J6nsson)，U.等人 (1993)生物臨床年刊11:19-26 ;瓊森，U.等人（1991)生物技術 11:620-627 ;強生，B.等人（1995)認識分子學雜誌1125-131 ;及強生，B.等人（1991)生化學分析121:268-277。 本專利說明書中所用'’KQff"意指抗體自抗體/抗原複合物 解離之速率常數。 本專利說明書中所用nKdn意指特定抗體-抗原相互作用之 解離常數。 本專利說明書中所用”核酸分子”意指包括DNA分子及 84711 -19 - 1353851 RNA分子。核酸分子可為單股或雙股，但較佳者為雙股 DNA。 本專利說明書中所用”經分離核酸分子”係有關編碼可結 合至hTNFa抗體或抗體部分（例如，VH、VL、CDR3)之核酸， 其意指該核酸分子中編碼抗體或抗體部分之核苷酸序列不 含有編碼其他可結合hTNFa以外抗原抗體或抗體部分之核 芬酸序列，這些其他序列可自然位於人類基因體DN A的兩 側，因此，例如，編碼抗-hTNFa抗體之VH區域之本發明經 分離核酸不含有其他編碼可結合至hTNFa以外抗原之其他 VH區域序列。 本專利說明書中所用”載體”意指核酸分子，其能夠傳送 其所連結之其他核酸分子。其中一種載體的形式為''質體”， 其係指雙股DNA環狀物，其可將另外的DNA片段接合起 來。另一種載體形式為病毒載體，其中額外的DNA片段可 接合至病毒基因體上。某些載體能夠在所引入的宿主細胞 中自行複製（例如，具有細菌複製源頭之細菌性載體及質體 形式之哺乳動物載體），而其他的載體（例如，非-質體形式 之哺乳動物載體）可在引入至宿主細胞時插入至宿主細胞 的基因體中，因此可隨著宿主基因體而複製。除此之外， 某些載體可以引導其以人工方式接合基因之表現作用，本 專利說明書將此種載體稱為"重組性表現載體（或簡稱為''表 現載體”）。一般而言，重組性DNA技術中所用的表現載體 常為質體形式，在本專利說明書中，''質體"及''載體”可互換 使用，因為質體是最常用的載體形式。然而，本發明意欲 84711 -20- 1353851 包括其他形式具有相等功能的表現載體，諸如病毒載體（例 如，複製有缺陷的反轉錄病毒及與腺病毒相關之病毒）。 本專利說明書中所用”重組性宿主細胞"（或簡稱為”宿主 細胞"）意指已引入重組性表現載體之細胞。咸欲了解的是 此一名詞不只是特定的受體細胞，亦包括此細胞之子代。 因為在後續的子代中由於發生突變作用或環境的影響而造 成某些改變，因此，事實上細胞子代可能與親代不會相同， 但此仍為本專利說明書中所用"宿主細胞''的範疇内。 本發明各項主旨相於後文進一步詳細說明。 本發明提供投與對治療疾病有利之抗-TNFa抗體之方 法，這些方法包括每兩週以皮下投藥方式组合投用可高親 合力結合至人類TNFa、且具有低解離力並具有高度中和能 力之經分離人類抗體，或其抗原-結合部分及一或多種可用 以治療自體免疫疾病（特別是類風濕性關節炎）之其他藥 物，較佳地，本發明人類抗體為重組性中和人類抗-hTNFa 抗體。本發明最佳的重組性中和抗體係指本專利說明書中 名為D2E7者（D2E7 VL區域的胺基酸序列如SEQ ID NO: 1所 示；D2E7 VH區域的胺基酸序列如SEQ ID NO: 2所示），其 投藥劑量為40毫克。D2E7特性已揭示於薩爾菲德（Salfeld) 等人所申請之美國專利案6,090,382中，該申請案内容一併 併入本專利說明書參考。 本發明一個主旨係關於治療疾病，其中投與抗-TNFa抗體 及一或多種藥物係對治療自體免疫疾病有利的。這些治療 包括每兩週以皮下投藥方式投與D2E7抗體及其抗體部分、 84711 -21 - 1353851 D2E7-相關抗體及其抗體部分及與D2E7具有等同效力之其 他人類抗體及其抗體部分，諸如，具有低解離動力且可高 親合力結合至hTNFa及高度中和能力者。在一個具體實例 中，本發明提供係以經分離人類抗體或其抗原-結合部扮之 治療法，該抗體或抗體部分自人類TNFa解離之Kd為1 X 1(Γ8 Μ或更低，而KQff率常數為1 X :^^秒“或更低，兩者係由表 面電漿共振所測定，而以標準活體外L929分析法所測之中 和人類TNFa细胞毒性之IC5G為1x1 〇_7 Μ或更低，而更佳者， 經分離人類抗體或其抗原結合部分自人類TNFa解離之K〇ff 為5 X 10_4秒―1或更低，甚至更佳者之KQff為1 X 10_4秒」或更 低。更佳者，經分離人類抗體或其抗原結合部分以標準活 體外L929分析所得之中和人類TNFa細胞毒性之IC5G為1 乂10_8河或更低，甚至更佳者之1(：5()為1\10_9：^或更低，而更 佳者之IC5G為1 xl(T1G Μ或更低。在一個較佳具體實例中， 抗體為經分離人類重组性抗體或其抗原-結合部分。 技藝中已咸熟知抗體重鏈及輕鏈CDR3區域在抗體對抗 原之結合專一性/親合力上扮演著重要的角色，因此，本發 明另一個主旨是關於投與對治療疾病有利之抗-TNFa抗體 之方法，其t係每兩週以皮下投藥方式投用與hTNFa具有 低解離動力之抗體，該抗體具有結構性與D2E7相同或相關 * 之輕鏈或重鏈CDR3區域，D2E7 VL CDR3位置9可為Ala或 Thr所佔據而實質上不會影響Koff，因此，D2E7 VL CDR3的 一致性位置包括胺基酸序列：Q-R-Y-N-R-A-P-Y-(T/A)(SEQ ID NO: 3)，另夕卜，D2E7 VH CDR3位置12可為Tyr或Asn佔據 84711 -22- 1353851 而實質上不會影響Kw，因此，D2E7 VH CDR3的一致性位 置包括胺基酸序列：V-S-Y-L-S-T-A-S-S-L-D-(Y/N)(SEQID NO: 4)。-除此之外’如實例2中所述，D2E7重鏈及輕鏈之 CDR3區域經一個丙胺酸殘基取代（在VL CDR3的位置1、4、 5、7 或 8 ’ 或在 V H C D R 3 的位置2、3、4、5、6、8、9、10 或11)實質上不會影響KQff，另外，熟識技藝者了解的是（由 於D2E7 VL及VH的CDR3區域經丙胺酸取代仍具有功能 性），CDR3區域中經其他胺基酸之取代作用而仍保有抗體低 的解離速率常數是可能的，特別是以保守性胺基酸之取代 作用。本專利說明書中所用”保守性胺基酸取代作用"係指 以另一種具有相似側鏈胺基酸取代胺基酸之作用。具有相 似側鏈的胺基酸殘基族如技藝中所定義者，包括驗性侧鏈 者（例如，離胺酸、精胺酸、組胺酸）、酸性側鏈者（例如， 天門冬胺酸、麩胺酸）、不帶電極性侧鏈者（例如，甘胺酸、 天門東醯胺、麩醯胺、絲胺酸、酥胺酸、酪胺酸、半胱胺 酸）、非極性側鏈者（例如，丙胺酸、纈胺酸、白胺酸 '異白 胺酸、脯胺酸、苯基丙胺酸、甲硫胺酸、色胺酸）、貝它-分支侧鏈者（例如，酥胺酸、纈胺酸、白胺酸）及芳基侧鏈者 (例如，酪胺酸、苯基丙胺酸、色胺酸、組胺酸）。較佳者， 在D2E7 VL及/或VH CDR3區域中不超過1至5個保守性胺基 酸取代作用，更佳者，在D2E7 VL及/或VH CDR3區域中不 超過1至3個保守性胺基酸取代作用，除此之外，保守性胺 基酸取代作用不應位於結合至hTNFa的重要胺基酸位置。 D2E7 VL CDR3位置2及5及D2E7 VH CDR3位置1及7顯為與 84711 -23 - 1353851 hTNFa相互作用的重要位置，因此，保守性胺基酸取代作 用較佳不位於這些位置（雖然如前所述，D2E7 VL CDR3位 置5上的丙胺酸取代作用是可以接受的）（參考，美國專利案 6,090,382) 〇 因此’在另一個具體實例中，本發明提供治療疾病的方 法’其中係投與對治療疾病是有利的抗_TNFa抗體及用於治 療自體免疫疾病之一或多種其他藥物，其係每兩週以皮下 投藥方式投與經分離人類抗體，或其抗原_結合部分◊抗體 或其抗原-結合部分較佳包含下列特徵： a) 以表面電漿共振測定，自人類TNFa解離之〖。汀為i χ 1(Γ3秒“或更低； b) 具有輕鏈CDR3區域，其包括SEq m Ν〇: 3胺基酸序 列，或在位置1、4、5、7或8經一個丙胺酸取代作用，或在 位置1、3、4、6、7、8及/或9經一至五個保守胺基酸取代作 用之SEQ ID NO: 3胺基酸序列； c) 具有重鏈CDR3區域，其包括SEQ ID NO: 4胺基酸序 列’或在位置2、3、4、5、6、8、9、10或U經一個丙胺酸 取代作用，或在位置2、3、4、5、6、8、9、10、11及/或12 經一至五個保守胺基酸取代作用之SEQ ID N〇 : 4胺基酸序 列。 更佳者，人類抗體或其抗原結合部分自人類TNFa解離之 Koff為5 X 1(Τ4秒或更低，甚至更佳者，人類抗體或其抗原. 結合部分自人類丁NFa解離之之〖听為i χ ! 〇-4秒·！或更低。 在另一個具體實例中，抗體或其抗原_結合部分較佳含有 84711 -24- 1353851 包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列CDR3區域之輕鏈可變區域 (LCVR)，或在位置1、4、5、7或8經一個丙胺酸取代作用之 SEQ ID NO: 3胺基酸序列，及含有包括SEQ ID N0: 4胺基酸 序列CDR3區域之重鏈可變區域（HC VR)，或在位置2、3 ' 4 ' 5、6、8、9、10或11經一個丙胺酸取代作用之SEQ ID N〇: 4 胺基酸序列。更佳地，LCVR另外具有包括SEQ ID N0: 5胺 基酸序列之CDR2區域（也就是，D2E7 VL CDR2)，而HCVR 另外具有包括SEQ ID NO: 6胺基酸序列之CDR2區域（也就 是，D2E7 VH CDR2)，更佳地，LC VR另外具有包括SEQ ID NO: 7胺基酸序列之CDR1區域（也就是’ D2E7 VL CDR1)， 而HCVR另外具有包括SEQ ID NO: 8胺基酸序列之CDR1區 域（也就是，D2E7 VH CDR1)。VL的架構區域較佳為源自VkI 人類種系群，更佳者為A20人類種系Vk基因，而D2E7 VL 架構序列最佳者示於美國專利案6,090,382中的圖1A及1B 中，VH架構區域較佳為VH3人類種系群，更佳者為DP-31 人類種系VH基因，D2E7 VL架構序列最佳者示於美國專利 案6,090,382中的圖2A及2B*。 在另一個具體實例中，抗體或其抗原-結合部分較佳包含 包括胺基酸序列SEQ ID NO: 1之輕鏈可變區域（LCVR)(也 就是，D2E7 VL)，及包含包括胺基酸序列SEQ ID NO: 2之 重鏈可變區域（HC VR)(也就是，D2E7 VH)。在某些具體實 例中，抗體包括重鏈固定區域，諸如，IgGl、IgG2、IgG3、 IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD之固定區域，較佳地，重鏈固 定區域為IgGl重鏈固定區域，或IgG4重鏈固定區域，除此 84711 •25 - 1353851 之外，抗體包括輕鏈固定區域，為/C輕鏈固定區域或又輕 鏈固定區域，較佳地，抗體包括/C輕键固定區域’另一種 選擇是，-抗體部分可為，例如，Fab片段或單鏈Fv片段。 在另一個具體實例中，抗體或其抗原-結合部分較佳含有 D2E7相關VL及VH CDR3區域，例如，抗體或其抗原結合部 分具有包括CDR3區域（其包括由選自SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14、 SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 25、 SEQ ID NO: 26胺基酸序列所組成之群）之輕鏈可變區域 (LCVR)或具有CDR3區域（其包括由選自SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、 SEQ ID NO: 3 卜 SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 34及SEQ ID NO: 35胺基酸序列所组成之群）之重鏈可變區 域（HCVR)。 本發明抗體或其抗體部分可衍生化或連結至另一個功能 性分子上（例如，另一個肽或蛋白質）。因此，本發明抗體或 其抗體部分意指包括本專利說明書所揭示之人類抗-hTNFa 抗體之衍生化及修飾的形式，包括免疫黏附分子。例如， 本發明抗體或其抗體部分可功能性連結（利用化學偶合作 .用、基因融合、非共價結合或其他）至一或多種其他的分子_ 實體，諸如，另一個抗體（例如，雙專一性抗體或二價抗體）、 偵測劑、細胞毒性劑、藥劑及/或可媒介抗體或其抗體部分 84711 -26 - 1353851 與其他分子結合之蛋白質或肽，諸如抗生蛋白鏈菌素核心 區域或聚組胺酸標誌。 一種衍生化抗體形式係將兩或多種抗體（相同的類型或 不同的類型’以產生雙專一性抗體）交錯連結後而產生的。 適當的交錯連結子包括異雙功能性者（其具有被兩個適當 空間子分隔（例如，間-馬來亞醯胺基苯醯基羥基琥珀醯 亞胺§曰）之兩個不同的反應基團）或同雙功能者（例如，二琥 珀醯亞胺基受質），此種空間子可購自皮爾斯化學公司，洛 克斐洛，IL。 將本發明柷體或其抗體部分衍生化之有用偵測藥劑包括 螢光化合物，螢光偵測藥劑的實例包括螢光素、螢光素異 疏氯酸、羅丹Wrhodamine)、5_二甲基胺·卜伸蕃基橫酿基 氣、紅藻素及類似物，亦可用偵測酵素將抗體衍生化，諸 如鹼性磷酸酶、辣根過氧化酶、葡萄糖氧化酶及類似物。 當以偵測酵素將抗體衍生化時，則是另外添加當酵素利用 後會產生可偵測反應產物之藥劑，而後偵測之。例如，當 辣根過氧化酶存在時，添加過氧化氫及二胺基聯苯胺後备 產生有顏色的產物，其是可以偵測的，亦可以生物素將二 體何生化，並經由間接敎抗生物素蛋白或抗生蛋白鍵菌 素結合偵測到<5 利用免疫球蛋自輕鏈及姨基因在宿主纟讀巾重組性表 現可製備本發明抗體或抗體部分。為了以重組性方式表現 心先以-或多種帶有編碼抗體免疫球蛋白輕鏈及重鍵 疋DNA片段之重組性表現載體轉植宿主細胞，讓該輕鍵及 84711 -27- 1353851 重鏈基因於宿主細胞中表現，較佳者係可分泌至培養宿主 細胞之培養基中，再從該培養基中回收抗體。獲製抗體重 鏈及輕鏈基因、將該等基因併入至重組性表現載體及將載 體引入至宿主細胞之標準重组性DN A方法揭示於山姆布魯 克（Sambrook),菲力許（Fritsch)及曼尼阿替斯（Maniatis)(出 版），分子選殖；實驗室手冊，第二版，冷泉灣，N.Y.，（1989) ’ 阿薩伯爾（Ausubel)，F.M.等人（出版）分子生物學現今步驟， 格利恩（Greene)出版協會，（1989)及柏斯（Boss)等人申請之美 國專利案4,816,397中。 為表現D2E7或D2E7-相關之抗體，首先需要獲製編碼輕 鏈及重鏈可變區域之DNA片段，利用聚合酶結合反應（PCR) 將種系輕鏈及重鏈可變序列增幅及放大後可獲製該等 DNA。人類重鏈及輕鏈可變區域基因的種系DNA序列是技 藝中所熟知的（參考，例如，” Vbase”人類種系序列資料庫； 亦可參考卡貝特（Kabat)，E.A.等人（1991)感興趣免疫蛋白質 的序列，第五版，美國健康及人類服務，NIH公開案91-3242 ;湯姆利森（Tomlinson)，I.M.等人（1992)"人類種系VH序列 反應五組不同超可變曲段之VH片段"分子生物學雜誌 227:776- 798 ;及 nCox, J.P丄·等人（1994) ”人類種系 V78片段 顯示用途偏差之指引”歐洲免疫學雜誌21:827-836 ;該等文 獻内容一併併入本專利說明書參考）。為獲製編碼D2E7或 D2E7-相關抗體之重鏈可變區域之DNA片段，利用標準PCR 增幅一些人類種系VH基因之VH3族，最佳者，增幅DP-31 VH 種系序列。為獲製編碼D2E7或D2E7-相關抗體之輕鏈可變 84711 -28- 1353851 區域之DNA片段，利用標準PCR增幅一些人類種系VL基因 之VKI族，最佳者，增幅A20 VL種系序列。可利用標準方法 根據上列參考文獻中所揭示的核甞酸序列設計出適合用於 增幅DP-31種系VH及A20種系VL序列之PCR引子。 獲製種系VH及VL片段後，將該等序列突變成本專利說明 書中所揭示編碼D2E7或D2E7-相關胺基酸序列者。種系VH 及VL DNA序列所編碼之胺基酸序列首先先與D2E7或 D2E7-相關之VH及VL胺基酸序列比較，以確認D2E7或 D2E7-相關序列中的胺基酸殘基不同於種系者，而後，根據 基因密碼來決定應將何種核甞酸改變，將種系DNA序列中 適當的核苷酸突變，讓所突變的種系序列可編碼出D2E7或 D2E7-相關胺基酸序列。利用標準方法（諸如PCR-媒介突變 作用（其中突變核苷酸併入至PCR引子中，讓PCR產物含有 該突變）或位置導引突變作用）進行種系序列的突變作用。 當獲製編碼D2E7或D2E7-相關VH及VL段之DNA片段後 (利用前述的方法，將種系VH及VL基因增幅及突變），利用 標準重組性DNA技術將該等DNA片段進一步處理，例如， 將可變區域基因轉換至全長抗體鏈基因上，或轉換至Fab片 段或scFv基因上。在這些操作中，可將VL-或VH-編碼DNA 片段以人工方式連結至另一種編碼其他蛋白質的DNA片段 上，諸如抗體固定區域或彈性連結子上。本專利說明書中 所用''以人工方式連結”意指將兩個DNA片段接合起來，讓 該兩個DNA片段所編碼之胺基酸序列仍能正確讀取。 利用人工方式將VH-編碼DNA連結至另一種編碼重鏈固 84711 •29· 1353851 定區域（CHI、CH2及CH3) DNA分子之方法，可將編碼VH 區域之經分離DNA轉換至全長重鏈基因上。人類重鏈固定 區域基因的序列是技藝中所熟知的（參考，例如，卡貝特， E.A.等人（1991)免疫興趣蛋白質的序列，第五版，美國健康 及人類服務，NIH公開案91-3242)，並利用標準PCR增幅作 用製備包括該等區域之DNA片段。重鏈固定區域可為 IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或 IgD之固定區 域，但最佳者為IgGl或IgG4之固定區域。以Fab片段重鏈基 因而言，VH編碼DNA可以人工方式連結至另一個只編碼重 鏈CH1固定區域之DNA分子上。 利用人工方式將VL-編碼DNA連結至另一種編碼輕鏈固 定區域（CL)DNA分子之方法，可將編碼VL區域之經分離 DNA轉換至全長輕鏈基因上。人類輕鏈固定區域基因的序 列是技藝中所熟知的（參考，例如，卡貝特，E.A.等人（1991) 免疫興趣蛋白質的序列，第五版，美國健康及人類服務， NIH公開案91-3242)，並利用標準PCR增幅作用製備包括該 等區域之DNA片段。輕鏈固定區域可為/c或λ固定區域， 但最佳者/c固定區域。 為製備scFv基因，可以人工方式將VH-及VL-編碼DNA片 段連結至另一編碼彈性連結子（例如，編碼胺基酸序列（甘胺 酸4—絲胺酸）3)之片段上，如此VH及VL序列便可以含有以 彈性連結子連結VL及VH區域之連續性單鏈蛋白表現之（參 考，例如，柏德等人（1988)科學212:423-426 :哈斯頓等人 (1988)美國國家科學院會議紀錄雜誌5879-5883 ;馬克卡 84711 -30- 1353851 菲弟（McCafferty)等人’自然（1990) 348:552-554)。 為表現本發明抗體或抗體部分，可將前述所製備之編碼 部分或全長輕鏈及重鏈DNA插入至表現載體上’以便將該 等基因以人工方式連結至轉錄及轉譯控制序列上。在本專 利說明書中，"以人工方式連結”意指將抗體基因連結至載 體上，讓載體中的轉錄及轉譯控制序列仍具有調控抗體基 因轉錄作用及轉譯作用之原有功能。所選用的表現載體及 表現控制序列需與所用的表現宿主細胞相容。抗體輕鏈基 因及抗體重鏈基因可插入至個別載體中，或更為典型的 是，將兩基因插入至同一表現載體中。利用標準方法將抗 體基因插入至表現載體中（例如，將抗體基因片段及載體上 的互補限制酶位置接合起來，如無限制酶位置可進行純端 接合作.用）。插入D2E7或D2E7-相關輕鏈或重鏈序列之前， 該表現載體可以帶有抗體固定區域序列，例如，將D2E7或 D2E7-相關VH及VL序列轉換至全長抗體基因的方法是將其 插入至已經含有個別編碼重鏈固定及輕鏈固定區域之表現 載體中，因此，以人工方式將VH段連結至載體中之CH段及 以人工方式將VL段連結至載體中之CL段上。除此之外或另 一種方式是，重組性表現載體可編碼能幫助抗體鏈從宿主 細胞中分泌出來之訊息肽，將抗體鏈基因選殖至載體中， 讓該訊息肽以正常讀取之方式連結至抗體鏈基因的胺基端 上。訊息肽可為免疫球蛋白訊息肽或異性訊息肽（也就是， 非免疫球蛋白的訊息肽）。 除了抗體鏈基因外，本發明重組性表現載體可帶有控制 84711 -31 - 1353851 宿主細胞中抗體鏈基因的表現之調控序列，本專利說明書 中所用”碉控序列"係指可控制抗體鏈基因轉錄作用或轉譯 作用之啟動子、加強子或其他表現控制元素（例如，聚腺芬 酸序列訊息）’這些調控序列揭示於，例如，高德爾（G〇eddel) 所著之基因表現技術：酵素學方法185，學院印行，聖地牙 哥，CA (1990)。熟識技藝者咸欲了解表現載體的設計（包括 調控序列的選擇）端視所選用轉型宿主細胞、所欲蛋白質的 表現程度等因素而定。適合哺乳動物宿主細胞表現之較佳 凋控序列包括可引導哺乳動物細胞高程度蛋白質表現作用 之病毒元素，諸如這些啟動子及/或加強子源自巨細胞病毒 (CMV)(諸如CMV啟動子/加強子）、猿狼病毒4〇 (SV4〇)(SV4〇 啟動子/加強子）、腺病毒（例如，腺病毒主要後期啟動子 (AdMLP)及多瘤病毒^病毒調控元素及其序列的進一步說明 可參考，例如，西恩奇（Stinski)申請之美國專利案5，168,〇62 、Bell等人申請之美國專利案七則⑷、許飛納…讀㈣ 等人申請之美國專利案4,968,615。 除了抗體鏈基因及調控序列外，本發明重组性表現載體 可帶有額外的序列，諸如調控宿主細胞中載體複製作用的 序列（例如，複氣源頭）及篩選性標誌基因。篩選性標諸基因 可幫助篩選出已引入載體之宿主細胞（參考，例如，阿希爾 (Axel)等人申清之美國專利案4,399,216、及 5，179,〇17)。例如，典型地篩選性標誌基因可賦予已引入載 體之宿主對抗藥物之抗性，諸如，G418、潮黴素或甲氣蝶 呤。較佳的篩選性標誌基因包括二氫葉酸還原酶(丽_ 84711 •32· 1353851 因（以曱氮蝶呤篩選/增幅dhfr宿主細胞）及neo基因（G418篩 選之用）。 為表現輕鏈及重鏈，利用標準技術將編碼重鏈及輕鏈之 表現載體轉植至宿主細胞中。”轉植作用”各種用詞包括各 式常用以將外來DNA引入至原核或真核宿主細胞之技術， 例如，電穿孔法、磷酸鈣沉澱法、DEAE-糊精轉植作用及 類似作用等。雖然理論上可在原核或真核宿主細胞中表現 出本發明抗體，但是抗體的表現作用在真核細胞是最佳 的，及最佳者為哺乳動物宿主細胞，因為此真核細胞（特別 是哺乳動物細胞）較原核細胞能組合及分泌出適當摺疊及 具有免疫學活性之抗體。有報告指出在原核細胞中抗體基 因之表現無法有效產生高產量活性抗體（柏斯，M.A.及吳德 (Wood)，C.R. (1985)今日免疫學生 12-13)。 表現本發明重組性抗體之較佳哺乳動物宿主細胞包括中 國倉鼠卵巢細胞（CHO細胞）（包括dhfr-CHO細胞，揭示於爾 樂伯（Urlaub)及張新恩（Chasin)，（1980)美國國家科學院會議 記錄雜誌11:4216-4220，使用DHFR篩選性標誌者，例如， 揭示於R.J.古夫曼（Kaufman)及P.A.夏普（Sharp)(1982)分子 生物學112:601-621)、NSO骨髓瘤細胞、COS細胞及SP2細 胞。當編碼抗體基因的重組性表現載體引入至哺乳動物細 胞後，將宿主細胞培養一段足以讓抗體於宿主細胞中表現 的時間後而產生出抗體，更佳者，該抗體會分泌至宿主細 胞所生長之培養基中，利用標準蛋白質純化方法自培養基 中回收抗體。 84711 -33 - 1353851 宿主細胞亦可用以產生完整抗體之部分，諸如Fab片段或 scFv分子。咸欲了解改變上述步驟均為本發明範疇内，例 如，咸欲以編碼本發明抗體輕鏈或重鏈（但非兩者）之DNA 轉植宿主細胞。亦可利用重組性DN A技術將編碼輕鏈或/及 重鏈中非結合至hTNFa之某些或所有DNA序列去除，本發 明抗體亦包括此刪減DNA分子所表現的分子。除此之外， 利用標準化學交錯方法將本發明抗體與另一個抗體交錯連 結，可製備出雙功能性抗體，其中一重鏈及一輕鏈為根據 本發明之抗體，而另一重鏈及輕鏈則對hTNFa以外的抗原 具有專一性。 用以重組性表現本發明抗體或其抗原結合部分之較佳系 統，是利用磷酸鈣媒介沉澱法將編碼抗體重鏈及抗體輕鏈 兩者之重組性表現載體引入至dhfr-CHO細胞中，在重組性 表現載體中，抗體重鏈及輕鏈基因各以人工方式連接至 CMV加強子/AdMLP啟動子調控元素上，以驅動該基因能高 度進行轉錄作用，重组性表現載體中亦可帶有DHFR基因， 利用甲氮蝶呤篩選/增幅作用，該基因可篩選出經載體轉植 之CHO細胞，培養所篩選出的轉型宿主細胞，以表現抗體 重鏈及輕鏈，並自培養基中回收完整的抗體。利用標準分 子生物技術來製備重組性表現載體、轉植宿主細胞、篩選 轉型細胞體、培養細胞及自培養基中回收抗體。 除了本專利說明書所揭示的D2E7或其抗原結合部分或 D2E7-相關抗體外，利用篩選重組性組合性抗體庫（較佳為 scFv嗜菌體呈現庫），以人類之淋巴細胞所製出之人類VL及 84711 -34 - 1353851 VH cDNAs製備出本發明重组性人類抗體。製備及篩選此種 抗體庫的方法是技藝中所熟知的。除了市售可產生嗜菌體 呈現庫之套組外（例如，法瑪西亞重組性嗜菌體抗體系統， 目錄編號27-9400-01 ;及史特基因SurfZAPTM嗜菌體呈現套 组，目錄編號240612)，特別可用以生產及篩選抗體呈現庫 的方法及藥劑之實例揭示於，例如，勒納（Ladner)等人申請 之美國專利案5,223,409 ;凱（Kang)等人申請之PCT公開案 WO 92/18619 ;道爾（D〇wer)等人申請之PCT公開案WO 91/17271 ;溫特（Winter)等人申請之PCT公開案WO 92/20791 ;馬克藍（Markland)等人申請之PCT公開案WO 92/15679; 布瑞林（Breitling)等人申請之PCT公開案WO 93/01288;麥克 卡菲弟等人申請之PCT公開案WO 92/01047;格瑞德（Garrard) 等人申請之PCT公開案WO 92/09690;福許斯（Fuchs)等人 (1991)生物/技術兒:1370-1372 ;黑（Hay)等人（1992)人類抗體 融合瘤 1:81-85 ;休斯（Huse)等人（1989)科學 2M:1275-1281 ; 麥克卡菲弟等人，自然（1990) 348:552-554 ;格利菲斯等人 (1993) EMBO J 11:725-734;哈威斯（Hawkins)等人（1992) 分子生物學雜誌22^: 889-896 ;克勒森（Clackson)等人（1991) 自然 111:624-628 ;格蘭（Gram) 等人（1992)PNASϋ:3576-3 580 ;格瑞德等人（1991)生物/技術艺:1373-1377 ;胡吉柏姆 (Hoogenboom)等人（1991)核酸研究12:4133-4137;及巴巴斯 (Barbas)等人（1991) PNAS 88:7978-7982。 在一個較佳的具體實例中，為了分離對hTNFa具有高親 合力及低解離速率常數之人類抗體，利用揭示於胡吉柏姆 84711 -35- 1353851 等人申請之PCT公開案WO 93/06213中之抗原決定子壓印方 法，先用對hTNFa具有高親合力及低解離速率常數之老鼠 抗-hTNF-a(例如，MAK 195，該融合瘤存放編號ECACC 87 050801)來篩選對hTNFa具有相似結合活性之人類重鏈及輕 鏈序列。此方法所用的抗體庫較佳為scFv庫’其製備及篩 選方法揭示於麥克卡菲弟等人申請之PCT公開案W0 92/01047、麥克卡菲弟等人，自然（1990) Mi:552-5 54 ;及格 利菲斯等人（1993) EMBO J 12:725-734中。較佳係以重組性 人類TNFa為抗原來筛選scFv抗體庫。 一旦篩選出最初的人類VL及VH片段，進行”混合及配對" 實驗（篩選最初選出不同配對之VL及VH片段對hTNFa的結 合力），以篩選出較佳的VL/VH配對組合。另外，為了增進 對hTNFa結合的親合力及/或降低對hTNFa結合的解離常 數，較佳的VL/VH配對之VL及VH片段是經隨機性突變，較 佳係在VH及/或VL中的CDR3區域中，該突變發生於與自然 免疫反應期間負貴抗體親合力成熟化之活體内體細胞突變 過程相似之過程。利用分別互.補於VH CDR3或VL CDR3之 PCR引子，進行此活體外親合力成熟化作用，以增幅VH及 VL區域，該引子中於某些位置處外加入任意的四種核：y：酸 鹼基混合物，如此所得編碼VH及VL片段之PCR產物中會於 VH及/或VL CDR3區域中引入任意的突變作用。篩選這些任 意突變VH及VL片段對hTNFa的結合力，並將對hTNFa具有 高親合力結合且低解離速率者定序。 從重組性免疫球蛋白呈現庫中篩選及分離出本發明抗 84711 -36 - 1353851 -hTNFa抗體後，從呈現包裝體（例如，嗜菌體基因體）中回 收編碼所選出之核酸，並利用標準重組性DNA技術，將其 /入選殖至其他表現載體中，倘有需要，可進一步處理核酸， 以產生本發明其他抗體形式（例如，連結至編碼額外免疫球 蛋白區域之核酸，諸如額外固定區域）。為了表現以篩選組 合庫所分離之重组性人類抗體，將編碼抗體之dna選殖至 重组性表現载體中，並引人至哺乳動物宿主細胞中，進一 步詳述内容如Section II所述。 本發明抗體及抗體部分及用於治療自體免疫疾病之藥物 了個別或-起併人至以本專利說明書揭示方法投與受體之 藥13物十，典型地，醫藥組合物中包括本發明抗體（或 ㈣部分）及/或—或多種其他可用於治療自體免疫疾病之 藥物及醫藥學上可接受載#卜本專利說明書中所用"醫藥學 ^可接^載劑"包括任何及所有的溶劑、分散媒介質、塗覆 質、抗菌及抗黴劑、等張劑及延緩吸收劑及生理學上相容 且適合以根據本專利說明書方法投與受體之類似物。醫藥 =上可^載劑實例包括—或多種之水、鹽水、鱗酸緩衝 ::、匍萄糖、甘油、乙醇及類似物，及其組合物。在許 中·‘且合物中包括等張劑（例如，醣類 '聚醇，諸如 。露糖& 4醇或氯化納）是較佳的。醫藥學上可接受載劑 可另外包括次要含量的輔助物質，諸如，潮濕劑或乳化劑、

=或緩衝劑’這些可增加抗體或抗體部分的 或有效性。 J 液態 本發月組合物可為各種的形式，這些包括，例如 84711 -37- 1353851 半固態及固態的劑量形式，諸如，液態溶液（例如，注射液 及灌注么液）、分散液或懸浮液、錠片、藥丸、粉末、脂小 體及坐劑，較佳的形式端視所欲投藥方式及治療應用方式 而定’典型較佳的組合物為注射液或灌注溶液形式，諸如， 與以其他抗體被動免疫人體時所用相似的組合物。較佳的 投藥方式為非經腸（例如，靜脈内、皮下、腹膜内、肌肉内 方式）。在一個較佳的具體實例中，包括抗體之醫藥組合物 係以注射方式投用，在另一個較佳的具體實例中，抗體係 以肌肉内注射方式投用’在特別佳的具體實例中，抗體係 以皮下注射方式投用。 重要的是醫藥組合物在製造及保存狀態下為無菌及穩定 的，組合物可調配成溶液、微乳化液、分散液、脂小體或 適合高.濃度藥物之其他有調理的結構。將活性化合物（也就 是抗體或抗體部分）與上述一或多種成分組合併入至所需 要量的適當溶劑中，而後以過滤法進行無菌作用，可製備 出播菌 >王射溶液。一般而言，將活性化合物併入至含有基 礎分散基質之無菌媒介質及所需上述之其他成分後，可製 備出分散液。以製備無菌注射溶液之無菌粉末而言，較佳 勺氣備方法是將活性成分加上任何前已無菌過濾溶液之任 何所需成分經真空乾燥或冷凍乾燥後得之。例如，利用即 7脂塗覆、保持分散液中所欲顆粒的大小及利用表面活性 叫可維持溶液的適當流動性。在組合物中添加延緩吸收之 物質（例如，單硬脂酸鹽及動物膠）可延長注射组合物的吸 84711 -38 - 1353851 以技藝中所熟知的各式方法均可 r j』用以投用本發明抗體及 抗體部分’雖料多治療應用中，較佳的投藥途徑/方式為 皮下注射法。熟識技藝者咸欲了解的是，投藥途徑及/或方 式端視所欲的結果而^。在某些具體實例中，活性成分可 與保護化合物抗快速釋放的載劑一起製備’諸如，控制性 釋放調配物，包括植人物、經皮貼片，及微膠囊傳送系統。 可使用生物分解性、生物相容性聚合物，諸如，乙婦醋酸 乙烯酷、m丙二醇(PEG)、聚酐、聚乙二醇酸、膠原蛋白、 聚原鱗自旨及聚乙酸等。許多製備此種調配物的方法業已申 請專利，或為熟識技藝者所熟知的，參考，例如，持續性 及控制性釋放藥物傳送系統，J.R羅賓森（R〇bms〇n)出版，馬 歇爾得克（Marcel Dekker)公司，紐約，1978。 在某些具體實例中，本發明抗體或抗體部分可與，例如， 一種惰性稀釋劑或可吸收食用之載劑一起以經口方式投用 之。化合物（倘有需要，及其他成分）亦可包覆於硬質或軟質 動物膠膠囊_、打鍵成鍵片，或直接併入至受體的飲食當 中。以口服治療投藥方式而言，化合物可併入賦形劑，並 以具消化性錠片、舌片、藥丸、膠囊、藥劑、坐劑、糖漿、 包藥糯米紙及類似物形式投用之。為以非經腸胃投藥法以 外方式投用本發明化合物，本發明化合物咸需以一可避免 該化合物失活之物質塗覆或與其一起投用之。 組合物中亦可併入補充性活性化合物。在某些具體實例 中’本發明抗體或抗體部分可與一或多種額外治療藥劑共 同調配及/或共同投用，例如，本發明抗_hTNFa抗體或抗體 84711 •39- 部分可與一或多種DMARD或一或多種NS AID或一或多種 额外可結合至其他標的（例如，可與其他細胞激素結合或結 合至細胞表現分子之抗體）、一或多種細胞激素、可溶性 TNFa受體（參考，例如PCT公開案W0 94/06476)之額外抗體 及/或一或多種可抑制hTNFa產生或活性之化學藥劑（諸 如，PCT公開案WO 93/19751中所揭示之環己烷-亞基衍生物） 或其任何組合物共同調配及/或共同投用之。除此之外，本 發明一或多種抗體可與兩或多種前述藥劑組合使用，此種 組合治療法具有降低投用治療藥劑的優點，因此，可避免 病患可能的副作用、併發症或各式單一療法的低度反應。 本發明醫藥組合物包括”有效治療量"或"有效預防量"之 本發明抗體或抗體部分及/或其他藥物。’'有效治療量”係指 在該劑量及所需的時間中，可達_到所欲治療結果之有效 量。有效治療量可根據一些因子（諸如疾病狀態、年齡、性 別及個體的重量，及抗體或抗體部分或用以治療自體免疫 疾病引發個體中所欲反應之藥劑的能力）而有所變化。有效 治療量亦包括抗體或其抗體部分或其他藥物之副作用高於 有利治療效果者。'’有效預防量”係指在該劑量及所需的時 間中，可達到所欲預防結果之有效量。典型地，因為受體 是在疾病發生之前或疾病早期使用預防劑量，因此，有效 預防量比有效治療量低。 劑量的多寡可調整至所欲的最佳反應（例如，治療或預防 反應）。例如，可一次單劑投藥、一段時間内分數次投用劑 量或根據治療狀況急迫狀況依據用藥指示比例增減劑量。 84711 -40 - 1353851 為方便投藥及藥劑的均勻性，特別有利的是以劑量單位形 式調配非經腸組合物。本專利說明書中所用劑量單位形式 係指完全分開的單位，適合欲治療哺乳動物受體單位劑量 用；每一單位中包括事前定量可產生所欲治療效果之活性 化合物及所欲之醫藥載劑。本發明劑量單位形式之規格係 以（a)活性化合物的獨特特性及所欲達到之特定治療或預防 效果，及（b)此活性化合物治療個體敏感度於技藝中固有特 性的限制而定。 具有效治療性或預防性之本發明抗體或抗體部分非限制 性實例為10-100毫克，更佳者為20-80毫克，而最佳者為約 40毫克。咸欲了解的是，劑量可根據欲舒緩的疾病病徵之 類型及嚴重性而有所不同，亦須了解的是，對任何特定的 受體，特別劑量療法應根據個體需要經時調整及投藥或監 督投用組合物之人員的專業判斷，且本專利說明書所設定 的劑量範圍只是實例而已，非欲以限制申請專利組合物的 範疇及實務。

與本發明抗體或抗體部分組合投用之治療類風濕性關節 炎治療藥物之非限制性實例包括下列：非類固醇性抗發炎 藥物（NSAIDs);細胞激素抑制抗-發炎藥物（CSAIDs) ; CDP-571/BAY-10-3356 (人類化抗-TNFa抗體；細胞技術公司/拜 耳公司）；cA2 (崁合性抗-TNFa抗體；瑟特公司）；75 kd TNFR-IgG (75 kD TNF受體-IgG融合蛋白；依妙那克斯 (1111111111^乂）；參考，例如，關節炎&風濕病（1994) 11冊，5295; 醫學研究雜誌（1996) 41 冊，235A) ; 55 kd TNFR-IgG (55 kD 84711 -41 - 1353851 TNF受體-IgG融合蛋白；何夫曼-樂洛許（Hoffmann-LaRoche)) ;IDEC-CE9.1/SB 210396 (非刪減靈掌類化抗-CD4抗體； IDEC/史密斯克萊恩；參考，例如，關節炎&風濕病（1995) 11冊，S318); DAB 486-IL-2 及/或 DAB 389-IL-2(IL-2 融合蛋 白；瑟洛基因（Seragen);參考，例如，關節炎&風濕病（1993) Μ冊，1223);抗-Tac (人類化抗-IL-2Ra ;蛋白質設計實驗 室/羅氏）；IL-4 (抗-發炎細胞激素；DNAX/許林）；IL-10 (SCH 52000;重組性IL-10,抗-發炎細胞激素；DNAX/許林）；IL-4 ; IL-10及/或IL-4促進劑（例如，促進劑抗體）；IL-1RA (IL-1 受體拮抗劑；瑟洛基因/安進）；TNF-bp/s-TNFR (可溶性TNF 結合蛋白質；參考，例如，關節炎&風濕病（1996) 冊，9 卷（補充），S284 ;美國生理雜誌-心臟及循環生理學（1995) 冊，3 7-42頁）：R973401 (磷酸二酯酶第IV型抑制劑；參 考，例如，關節炎&風濕病（1996) 冊，9卷（補充），S282); MK-966 (COX-2抑制劑；參考，例如，關節炎&風濕病（1996) 处冊，9卷（補充），S81);依洛前列素（IIopr〇st)(參考，例如， 關節炎&風濕病（1996) 39冊，9卷（補充），S82);曱氮蝶呤 (methotrexate);沙利竇邁（參考，例如，關節炎&風濕病） (1996) ^_2_冊’ 9卷（補充），S282)及沙利竇邁-相關藥物（例如， 沙爾金（Celgen));來氟米特（抗-發炎及細胞激素抑制劑；參 考’例如，關節炎&風濕病（1996) 39冊，9卷（補充），S131); 發炎研究（1996) ϋ冊，103-107頁）；氨曱環酸（胞漿素原活 化作用之抑制劑；參考，例如關節炎&風濕病（丨996) &冊， 9卷（補充），S284) ; Τ-614 (細胞激素抑制劑，參考，例如， 84711 •42- 1353851 關節炎&風濕病（1996)过冊，9卷（補充），S282);前列腺素 E1 (參考，例如，關節炎&風濕病（1996)以冊，9卷（補充）， S282);替尼達普（Tenidap)(非類固醇性抗發炎藥物；參考， 例如，關節炎&風濕病（1996) ϋ冊，9卷（補充），S280);奈 普生（Naproxen)(非類固醇性抗發炎藥物；參考，例如，神 經報告（1996) 7冊，1209-1213 頁）；美洛昔康（]^1〇\&111)(非 類固醇性抗發炎藥物）；布洛芬（Ibuprofen)(非類固醇性抗發 炎藥物），比維昔康（Piroxicam)(非類固醇性抗發炎藥物）； 二克氯芬（Diclofenac)(非類固醇性抗發炎藥物）；4丨哚美辛 (Indomethacin)(非類固醇性抗發炎藥物）；柳氮磺吡啶（參 考’例如’關節炎&風濕病（1996)11冊，9卷（補充），S281); 硫唑嘌呤（Azathioprine)(參考，例如，關節炎&風濕病（1996) 冊’ 9卷（補充），S281) ; ICE抑制劑（酵素介白素-1/5轉換 酵素之抑制劑）；zap-70及/或lck抑制劑（酷胺酸激酶zap-70 或lck的抑制劑）；VEGF抑制劑及/或VEGF-R抑制劑（血管内 膜細胞生長因子或血管内膜細生長因子受體之抑制劑；血 管新生抑制劑）；潑尼松抗發炎藥物（例如SB2〇3580) : TNF_ 轉換酶抑制劑；抗-IL-12抗體；介白素-U (參考，例如，關 節炎&風濕病（1996)1£冊’9卷（補充），3296);介白素_13(參 考，例如’關節炎&風濕病（1996)ϋ冊，9卷（補充），S3〇8); 介白素-17抑制劑（參考，例如，關節炎&風濕病（i996) ^ 冊’ 9卷（補充）’ Si20);金製劑；盤林西胺；氣邊；經基氯 喹；氯氨布西（chlorambucU);環磷醯胺（Cycl〇ph〇sphamide); 環孢素；總量淋巴球放射處理；抗-胸腺細胞球蛋白；抗_CD4 84711 •43- 1353851 抗體；CD5-毒素；經口投用肽及膠原蛋白；氣苯札鈉 (lobenzarit disodium);細胞激素調節劑（CRAs) HP228 及 HP466 Γ何頓藥廠）；ICAM-1反向硫代磷酸寡去氧核：y：酸 (ISIS 2302 ;埃西斯藥廠）；可溶性補體受體1 (τΡ1〇 ; τ細胞 科學公司）；發尼松（prednisone);歐格特恩（orgotein);多硫 酸葡萄糖胺多醣；米諾環素（minocycline);抗-IL2R抗體； 老鼠及植物性脂（於類及植物飼料脂肪酸；參考，例如迪路. 卡（DeLuca)等人（1995)北美臨床類風濕疾病21:759-777);金 諾芬（auranofin);苯丁咬 g同（phenylbutazone);甲氯芬那酸 (meclofenamic acid);氟芬那酸（flufenamic acid);靜脈内免 疫球蛋白；奇留通（zileuton);黴驗酸（mycophenolic acid)(RS-61443);他克莫斯（tacrolimus)(FK-506);斥消靈（sir〇limus) (瑞普黴素）(rapamycin);胺米皮利.洛斯（amipril〇se)(瑟瑞芬 丁）（therafectin);克勒利冰（cladribine)(2-氯去氧腺替）；及 阿扎利平（azaribine)。 與本發明抗體或抗體部分組合投用治療發炎性腸疾病之 治療藥物之非限制性實例包括下列：布得諾塞（budenoside) ;上皮細胞生長因子、皮質類固醇、環孢素、柳氮磺吡啶； 胺基水楊酸；6-競基嘌呤；硫吐嘌呤；甲硝唆（metronidazole) ;脂肪氧化酶抑制劑；美沙拉胺（mesalamine);澳沙拉畊 (olsalazine);巴柳氮（balsalazide);抗氧化劑；血栓素抑制 劑；IL-1受體拮抗劑；抗-IL-lyS單株抗體；抗-IL-6單株抗 體；生長因子；彈力蛋白酶抑制劑；吡啶基-咪唑化合物； CDP-571/BAY-10-3356 (人類化抗-TNFa抗體；細胞技術公 84711 • 44- 1353851 司/拜耳）；cA2 (崁合性抗-TNFa抗體；瑟特公司）；75 kd TNFR-IgG (75 kD TNF受體-IgG融合蛋白；依妙那克斯；參 考，例如，關節炎&風濕病（1994) 12冊，S295 ;醫學研究 雜誌（1996) ϋ冊，235A) ; 55kd TNFR-IgG (55 kD TNF受體 -IgG融合蛋白；何夫曼-樂洛許）；介白素-l〇 (SCH 52000 ; 許林普羅（Schering Plough)); IL-4; IL-10 及/或 IL-4 促進劑（例 如，促進劑抗體）；介白素-11;發尼松、氟美松（dexamethasone) 或布得諾塞之葡萄糖醛苷或葡聚醣-共輛前藥；ICAM-1反向 硫代磷酸寡去氧核苷酸（ISIS 2302;埃西斯藥廠）；可溶性補 體受體1 (TP10 ; T細胞科學公司）；緩慢釋放美沙拉畊 (mesalazine);甲氮蝶吟；血小板活化因子（PAF)拮抗劑；環 丙沙辛（ciprofloxacin)及利多卡因（lignocaine) 〇 與本發明抗體或抗體部分組合投用之多發性硬化症治療 藥物之非限制性實例包括下列：皮質類固醇；潑尼松；曱 基潑尼松；硫唑嘌呤；環磷醯胺；環孢素；曱氮蝶呤；4-胺基p比咬；替札尼定（tizanidine);干擾素-yS 1 a (亞凡尼克斯TM (AvonexTM);拜歐進（Biogen));干擾素·点lb (比特羅恩TM (BetaseronTM);雪恩 / 伯樂克斯（Chiron/Berlex));共聚物 1 (Cop-Ι ;可普松 TM(CopaxoneTM);替凡（Teva)藥廠）；高壓氧； 靜脈免疫球蛋白；克勒利賓（clabribine); CDP-571/BAY-10-33 5 6 (人類化抗-TNFa抗體；細胞技術公司/拜耳）；cA2 (嵌 合性抗-TNFa抗體；瑟特公司）；75 kd TNFR-IgG (75 kD TNF 受體-IgG融合蛋白；依妙那克斯；參考，例如，關節炎&風 濕病（1994)11冊，3295;醫學研究雜誌（1996)41冊，235八）； 84711 -45 - 1353851 55 kd TNFR-IgG (55 kD TNF受體-IgG融合蛋白；何夫曼-樂 洛許）；IL-10 ; IL-4 ;及IL-10及/或IL-4促進劑（例如，促進 劑抗體广。 與本發明抗體或抗體部分組合投用之敗血症治療藥物之 非限制性實例包括下列：高張鹽溶液；抗生素；靜脈珈瑪 球蛋白；持續血液過遽；卡巴配能（carbapenems)(例如，美 洛配能（meropenem));細胞激素结抗劑（諸如TNFa、IL-1冷 、IL-6及/或 IL-8) ; CDP-571/BAY-10,3356 (人類化抗-TNFct 抗體；細胞技術公司/拜耳）；cA2 (嵌合性抗-TNFa抗體；瑟 特公司）；75 kd TNFR-IgG (75 kD TNF受體-IgG融合蛋白； 依妙那克斯；參考，例如，關節炎&風濕病（1994) 11冊，S295 ; 醫學研究雜誌（1996) 11 冊，235A) ; 55 kdTNFR-IgG (55 kD TNF受體-IgG融合蛋白，何夫曼-樂洛許）；細胞激素調節劑 (CRAs) HP228 及 HP466 (何頓藥廒）；SK&F 107647 (低分子 量肽；史密斯克萊恩比開姆）；四價胍基脒腙CNI-1493 (皮 卡爾研究院）；組織因子途徑抑制劑（TFPI ;雪恩）；PHP (化 學性修飾血紅素；APEX生物科'學公司）；鐵螯合劑及螯合 物，包括二乙烯三胺五乙酸-鐵（ΠΙ)複合物（DTPA鐵（III);摩 樂開姆醫藥公司）；來蘇非林（lisofylline)(合成性小分子曱基 黃嘌呤素；細胞治療公司）；PGG-葡聚糖（水溶性召1，3葡聚 糖；阿爾法-貝它技術公司）；以脂質重建之載體脂蛋白 A-1 ;掌性羥肪酸（抑制脂肪A生物合成作用之合成性殺菌 劑）；抗-内毒素抗體；E5531 (合成性脂肪A拮抗劑；依埃 (Eisai)美洲公司）；rBPI21 (人類殺菌劑/通透性-增加蛋白質 84711 -46- 之重組性N-端片段）；及合成性抗-内毒素肽（SAEP ;拜歐斯 (BiosYnth)研究實驗室）。 與本發明抗體或抗體部分組合投用之成人呼吸窘迫徵候 群（ARDS)治療藥物之非限制性實例包括下列：抗-IL-8抗 體；表面活性劑替代療法；CDP-571/BAY-10-3356 (人類化 抗-TNFa抗體；細胞技術公司/拜耳）；cA2 (嵌合性抗-TNFa 抗體；瑟特公司）；75 kd TNFR-IgG (75 kD TNF受體-IgG融 合蛋白；依妙那克斯；參考，例如，關節炎&風濕病（1994) 冊，S295 ;醫學研究雜誌（1996) 4生冊，235Α) ; 55kd TNFR-IgG (55 kD TNF受體-IgG融合蛋白，何夫曼-樂洛許）。 抗-TNFa抗體與一或多種其他藥物組合使用端視該疾病 是否會受TNFa抑制作用影響而定。如本專利說明書中所用 "一種投用對治療疾病有利之抗-TNFa抗體”中之疾病意欲 包括疾病或其他疾病，其中罹病受體中所存在的TNFa已被 證明或疑似為該疾病病生理學之原因，或為使得疾病惡化 之因子，或咸已證明其他抗-TNFa抗體或其生物活化部分已 成功地用以治療疾病。因此，因TNFa有害活性所導致之疾 病是種抑制TNFa活性可減缓該疾病症狀及/或進展之疾 病。例如，罹病受體之生物體液中發現TNFa濃度會增（例 如，受體血清、血漿、關節液等中TNFa濃度增加），其可利 用，例如，以前述之抗-TNFa抗體偵測之。有數種因有害 TNFa活性所導致疾病的實例： A.敗血症 腫瘤壞疽因子在敗血症的病理生理學中具有確立的作 84711 -47 - 1353851 用，其生物性效應包括高血壓、心肌衰弱、血管滲漏症狀、 器官壞疽、刺激釋放出毒性二級媒介物及活化凝血連串的 步驟（參考，例如，崔西，K.J.及瑟瑞米，A_(1994)醫學年刊 45:491-503 ;羅素（Russell)，D 及湯姆森（Thompson), R_C. (1993)生物技術現今觀點生:714-721)。因此，本發明人類抗 體及抗體部分可用以治療任何臨床疾病引起之敗血症，包 括敗血性休克、内毒素引起的休克、格蘭氏陰性細菌引起 的敗血症及毒素休克症狀。較佳的是抗體及抗體部分與其 他用以治療敗血症之藥物組合使用，更佳的抗體為D2E7， 更佳者是以皮下投藥方式每兩週與一或多種用於治療敗血 症之藥物組合投用40毫克之D2E7。 除此之外，為了治療敗血症，本發明抗-hTNFa抗體或抗 體部分可與一或多種額外能進一步舒緩敗血症之治療藥劑 同時投用，諸如介白素-1抑制劑（諸如PCT公開案世界專利 WO 92/16221及WO 92/17583)細胞素介白素-6 (例見PCT公 開案世界專利WO 93/11793)或血小板活化因子的拮抗劑（參 考，歐洲專利申請公開案EP 374 510)。 另外，在一個較佳的具體實例中，在治療的期間，本發 明抗-TNFa抗體或抗體部分投與分组敗血症病患之人類個 體時，其血清或血漿中IL-6濃度高於500皮克/毫升，更佳者 為1000皮克/毫升（參考，得姆（Daum), L.等人所揭示之PCT 公開案世界專利WO 95/20978)。 B.自體免疫疾病 腫瘤壞疽因子已被認為在各種自體免疫疾病之病理生理 84711 -48 - 1353851 卜$分、.言jgh — 朵—作用，例如，TNFa已證明會活化類風濕性關 即炎患者之紐·織發炎並造成關節壞損（參考，例如，崔西及 ^ ’則述；阿瑞德（Arend)，W.P.及德爾（Dayer)，j_m (1995)類風濕性關節炎11:151-160;弗瓦（Fava), R.a.等人 (1993)臨床實驗免疫學^1:261-266)。TNFot亦被認為會促進 糖尿病心者鳥細胞的死亡，並媒介糖尿病患者對胰島素之 杬性（參考，例如崔西及瑟瑞米，前述；PCT公開案世界專 利WO 94/〇86〇9)。TNFa已被認為會媒介_寡樹突膠質細胞 的細胞毒性，並誘發多發性硬化症之發炎斑（參考，例如， 隹西及瑟瑞米，前述）。崁合性及人類化老鼠抗-hTNFa抗體 已經進行了治療類風濕性關節炎的臨床試驗（參考，例如， 依利軋特’ M.J.等人（1994)刺肋針雜就344:1 125-1 1?7 ;依利 歐特，MJ.等人（1994)刺肋針雜誌iii:1105-lll〇 ;瑞金 (Rankm)，EC·等人（1995)英國風濕學雜誌 11:334-342)。 本發月人類杬體及抗體部分可用以治療自體免疫疾病， 較佳的是抗體及抗體部分與其他用以治療自體免疫疾病之 藥物組合使用，更佳的抗體為D2E7,更佳者是以皮下投藥 方式每兩週與一或多種用於治療自體免疫疾病之藥物組合 投用40¾克<D2E7’這些疾病特別是與發炎相關的疾病， 包括類風濕性關節炎、類風濕性脊椎炎、骨關節炎及痛風 關節炎、過敏、多發性硬化症、自體免疫糖尿病、自體免 疫葡萄膜炎及腎症候群。典型地，係以系统性方式投用抗 體或抗體部分，雖然某些疾病，於發炎位置以局部性投用 抗體或抗體部分是較有利的（例如，於類風濕性關節炎關節 84711 -49 - 1353851 處局部投藥或糖尿病潰瘍處局部投藥，可單獨投用或與pct 公開案世界專利WO 93/19751所揭示之環己烷-亞基衍生物 組合投甩）。 C.感染疾病 腫瘤壞疽因子已被認為與媒介許多感染症中所發現之生 物效應有關，例如，TNFa已被認為可媒介腦部發炎及微血 管栓塞及癔疾梗塞（參考，例如，崔西及瑟瑞米，前述）。 TNFct已被認為可媒介腦部發炎，包括血液-腦屏障的破壞、 驅動敗血症休克症狀及活化腦膜炎中靜脈梗塞（參考，例 如，崔西及瑟瑞米，前述）。TNFa已被認為會誘發惡病質、 刺激病毒增生及媒介後天免疫不全症（AIDS)患者之中樞神 經系統破壞（參考，例如，崔西及瑟瑞米，前述）。因此，本 發明抗體及抗體部分可用於治療感染疾病，較佳的抗體及 抗體部分係與其他用於治療感染疾病之藥物組合使用，更 佳者是其中的抗體為D2E7，更佳者是以皮下投藥方式每兩 週與一或多種用於治療感染疾病之藥物組合投用40毫克之 D2E7，明確言之，細菌性腦膜炎（參考，例如，歐洲專利申 請公開案EP 585 705)、腦癔疾、AIDS及AIDS-相關併發症 (ARC)(參考，例如，歐洲專利申請公開案EP 230 574)，及 移植作用後續發之巨細胞病毒感染（參考，例如，菲茲 (Fietze), E.等人（1994)移植^1:675-680)。本發明抗體及抗體 部分亦可用以舒緩與感染疾病有關之症狀，包括因感染（諸 如感冒）所引起的發燒及肌肉疼痛，及感染後續發的惡病質 (例如，AIDS或ARC續發症）。 84711 -50 - 1353851 D_移植 腫瘤壞疽因子已被認為是同種異體移植排斥作用及移植 物對抗宿主疾病（GVHD)的重要媒介子，且發現其會媒介當 使用老鼠抗體0KT3 (引導對抗T細胞受體CD3複合物）來抑 制腎臟移植的排斥作用時所造成的不良反應（參考，例如， 崔西及瑟瑞米，上述；依森（Eason)，J.D.等人（1995)移植作 用 £2_:3 00-3 05 ;紹斯瑞恩（Suthanthiran), M.及史多姆（Strom), T.B. (1994)新英格蘭醫學雜誌U1: 365-375)。因此，本發 明抗體及抗體部分可用於治療移植排斥，包括排斥同種異 體移植及異種異體移植及抑制GVHD。較佳的抗體及抗體部 分係與其他用於治療移植排斥之藥物組合使用，更佳者是 其中的抗體為D2E7，更佳者是以皮下投藥方式每兩週與一 或多種用於治療移植排斥之藥物組合投用40毫克之D2E7。 例如，在一個具體實例中，本發明抗體或抗體部分是與 OKT3組合使用，以抑制OKT3所謗發的反應。在另一個具 體實例中，本發明抗體或抗體部分是與一或多種引導對抗 其他與調控免疫反應有關之標的物（諸如，細胞表面分子 CD25 (介白素-2受體-a)、CDlla (LFA-1)、CD54 (ICAM-1) 、CD4、CD45、CD28/CTLA4、CD80 (B7-1)及/或 CD86 (B7-2)) 之抗體組合使用，在另一個具體實例中，本發明抗體或抗 體部分是與一或多種一般免疫抑制劑（諸如環孢素A或 FK506)組合使用。 E.惡性腫瘤 腫瘤壞疽因子已被認為會誘發惡病質、刺激腫瘤生長、 84711 -51 - 1353851 增進惡性腫瘤移轉可能性及媒介惡性腫瘤之細胞毒性（參 考’例如，崔西及瑟瑞米’上述因此，本發明抗體及抗 體部分可用於治療惡性腫瘤、抑制腫瘤生長或移轉作用及/ 或舒緩惡性腫瘤續發的惡病質。較佳的抗體及抗體部分係 與其他用於治療惡性腫瘤、抑制腫瘤生長或轉移作用及/或 舒緩惡性腫瘤續發的惡病質之藥物組合使用，更佳者是其 中的抗體為D2E7，更佳者是以皮下投藥方式每兩週與一或 夕種用於/台療之惡性腫瘤、抑制腫瘤生長或轉移作用及/或 舒緩惡性腫瘤續發的惡病質藥物組合投用4〇毫克冬D2E7。 本發明抗體或抗體部分係以全身性投藥或於局部腫瘤位置 投藥。 F·肺部疾病 腫瘤壞疽因子已被認為與成人呼吸窘迫症候群的病理生 理學有關，包括刺激白血球内膜細胞活化作用、引導對抗 肺臟細胞的細.胞毒性及一發血管沁漏症候群（參考，例如， 崔西及瑟瑞米，上述）。因此，本發明抗體及抗體部分可用 於冶療各式的肺部疾病，較佳的抗體及抗體部分係與其他 用於治療肺部疾狀藥物.组合使用，{佳者是其中的抗體 ^ D2E7 ’更佳者是以皮下投藥方式每兩週與—或多種用於 治療肺部疾病之藥物組合投用4〇毫克之D2E7，明確言之， 肺部疾病包括成人啤吸㈣症候群（參考，例如，pcT公開 案WO 91/_54)、休克肺、慢性肺發炎疾病、肺結節病' 肺纖維化切化。本發明抗體或抗料分可全身性投藥或 以’例如’氣膠局部投藥於肺表面。 84711 -52- 1353851 G.腸疾病 腫瘤壞疽因子已被認為與發炎性腸疾病之病理生理學有 關（參考，例如，崔西，K.J.等人（1986)科學211:470-474 ;桑 姆（Sun), X-M.等人（1988)臨床研究雜誌ϋ:1328-1331 ;麥當 勞（MacDonald)，T.T.等人（1990)臨床試驗免疫學肚:301-305) 。崁合性老鼠抗-hTNFa抗體已在進行治療克隆氏疾病之臨 床試驗中（凡得利曼（van Dullemen)，Η·Μ_等人（1995)腸胃學 1Μ: 129-135)。本發明人類抗體及抗體部分亦可用以治療腸 疾病，較佳的抗體及抗體部分係與其他用於治療腸疾病之 藥物組合使用，更佳者是其中的抗體為D2E7，更佳者是以 皮下投藥方式每兩週與一或多種用於治療腸疾病之藥物組 合投用40毫克之D2E7，明確言之，原發性發炎性腸疾病包 括兩種症狀，克隆氏疾病及潰癌性結腸炎。 Η.心臟疾病 本發明抗體及抗體部分亦可用以治療各式的心臟疾病， 包括心.臟缺血（參考，例如，歐洲專利申請公開案ΕΡ 453 898) 及心臟功能不全（心肌虛弱）（參考，例如，PCT公開案WO 94/20139)。較佳的抗體及抗體部分係與其他用於治療心臟 疾病之藥物組合使用，更佳者是其中的抗體為D2E7，更佳 者是以皮下投藥方式每兩週與一或多種用於治療心臟疾病 之藥物組合投用40毫克之D2E7。 I.神經性疾病 本發明抗體及抗體部分可用於治療神經性疾病，較佳的 抗體及抗體部分係與其他用於治療神經性疾病之藥物組合 84711 -53 - 1353851 使用’更佳者是其中的抗體為D2E7,更佳者是以皮下投藥 方式每兩週與一或多種用於治療神經性疾病之藥物組合投 用40毫克之D2E7。 實驗證據顯示釋放過多的TNF會傷害神經組織，因此， 使用拮抗劑可舒緩這些神經疾病症狀^於脫髓鞠疾 病、免疫疾病、發炎、創傷或壓迫所導致的神經性疾病（例 如，多發性硬化症）會有不同的臨床形式，端視結構位置及 病因及生理學問題的自然史而定。所有這些疾病的共通點 是其會造成永久性的神經傷害，這些傷害發生快速，且無 法恢復，目前這些疾病的治療並不令人滿意，常常需要進 行手術及/或使用到藥理學藥劑，而這些常不能完全的成功 治癒》這些神經性疾病包括及性脊髓創傷、脊髓壓迫、脊 髓血腫、脊髓挫傷（這些通常是創傷所造成的，諸如機車意 外或運動傷害）；神經壓迫，纟常見的是椎間盤造成的坐骨 神經壓迫、神經病變及疼痛、但亦包括頸椎間盤突出所造 成的頸部神經壓迫；腕隧症候群（非_RA);因癌症造成的魚 性或慢性脊髓壓迫（通常是因諸如前列腺癌、乳癌或肺癌= 轉至脊椎所造成的）；神經系統自體免疫疾病；及脫脊鞘疾 病’最常見者為多發性硬化症。 其他用以治療神經性疾病的藥物之實例為類固醇藥物， 諸如治療前述神經性疾病及症狀用之可體松。用於治療神 經性疾病、創傷、傷害及壓迫症而具有各式有機結構及代 謝功能之其他藥學化學藥劑、化合物及藥物揭示於，例如 美國專利案5,756,482及5,574，G22中，料利案實體内容一 84711 -54 - 1353851 併併入本專利說明書中參考，這些申請案中揭示利用組合 投與非-類固醇性抗-發炎物質（諸如叫卜呆美國辛（indomethacin)) 及類固醇荷爾蒙或類固醇前驅物（諸如，孕稀·醇酮 (pregnenolone)及硫酸孕烯醇酮），來減低受傷後對神經系統 及脊髓所造成的身體傷害之方法。 J.其他 本發明抗體及抗體部分亦可用以治療其他因TNFa有害 活性所造成之各種疾病，由於TNFa活性已被認為是其他疾 病及症狀病理生生理學之實例者，因此可用本發明抗體或 抗體部分治療者包括發炎性骨頭疾病及骨頭再吸收疾病 (參考’例如’柏特例尼（Bert〇lini)，D.R.等人（1986)自然 Hi: 516-518 ;可尼（Konig)，A.等人（1988)骨頭礦物質研究雜 誌1:621-627;勒納（1^〇^1')，1；.11.及歐林（0111111),八.（1993)骨 頭礦物質研究雜誌及:147-155 ;及雪克（Shankar), G.及史特恩 (Stern)，P.H. (1993)骨骼 1£:871-876)、肝炎，包括酒精性肝 炎（參考，例如麥克萊恩（McClain), C.J.及可恩（Cohen)，D.A. (1989)肝臟學之:349-351 ;非佛（Felver)，Μ.Ε·等人（1990)酒精 臨床貫驗研究1_^:255_259 ;及漢森（Hansen), J.等人（1994)肝 臟學2^_:4ό 1 -474)及病毒性肝炎（雪洛恩（Sheron), N.等人 (1991)肝臟學雜誌]2:241-245 ;及何森（Hussain), M.J.等人 (1994)臨床病理學雜誌虹:1112-1115)、凝血失調（參考，例 如，凡得博爾（van der Poll)，T.等人（1990)新英格蘭醫學雜語 111:1622-1627 ;及凡得博爾，T·等人（1991)臨床生物學研究 進展55-60)、燒傷（參考，例如，吉洛爾（Giroir)，B.P.等 84711 -55- 1353851 人（1994)美國生理學雜誌2^1:H118-124 ;及劉（Liu)，X.S.等 人（1994)燒燙傷雜誌2^:40-44)、再灌注傷害（參考，例如， 史卡爾斯（Scales), W.E.等人（1994)美國生理學雜誌尬. G1122-1127;瑟利克（serrick)，C.等人（1994)移植作用公； 1 158-1162 ;及右（Yao)，YM.等人（1995)復活 21:157-168)、 疤腫形成作用（參考，例如，麥克古利（McCauley), R丄.等人 (1992)臨床免疫學雜誌22:300-308)、傷疤組織形成及發燒。 較佳的抗體及抗體部分係與其他用於治療有關疾病或症狀 之藥物組合使用，更佳者是其中的抗體為D2E7，更佳者是 以皮下投藥方式每兩週與一或多種用於治療有關疾病及症 狀之藥物組合投用40毫克之D2E7。 本發明另以下列的非限制性之實例闡明之。本專利說明 書中所附註之所有的參考資料、專利案及專利申請案申請 案一併併入本專利參考。可以將前述及後所揭示者組合使 用，此種組合仍為本專利的範疇，即使這些組合不以原文 說明。 實例 設計一個研究計畫，並用以研究隔週投與罹患RA病患4〇 毫克D2E7之安全性及功效，該病患以其目前抗-風濕療法 (包括所接受的DMARDs、NS AIDs或類固醇）不足以治療該 疾病，該研究計畫是具有數個中心、隨機性分配病患、雙 盲、以安慰劑為控制組之研究，其中係以皮下注射投藥方. 式隔週投與罹患類風濕性關節炎（RA)病患（以其目前抗_風 濕療法不足以治療該疾病）4〇毫克D2E7，投藥時間高達24 84711 -56 - 1353851 週。研究期間准予使用抗-風濕療法，包括所接受的疾病改 善抗-風濕藥物（DMARDs)、非-類固醇性-發炎藥物（NSAIDs) 或類固酵。雖然使用抗_風濕療法’但是在師選訪視及基礎 訪視時，病患仍需有文件證明其罹患了活動性疾病。篩選 訪視之前，DMARDs及所共同投用的潑尼松（每日<10毫克） 及NS AIDs的劑量需穩定投用至少28天，除此之外，使用硫 唑嘌呤及/或環孢素病患者則必須中斷這些療法，並於進行 篩選之前經過28天的未用藥期。在基礎訪視時，將病患隨 機性分配分成D2E7或安慰劑組，此即表示開始24週的安慰 劑-控制期。在研究的第2、4、8、12、16、20及24週時檢視 病患，未符合或維持美國風濕病學學會20%改善（ACR20)反 應之病患准予一次增加其DMARD及/或類固醇療法之劑 量、參與研究3個月後另以DMARD治療，或與Knoll醫學監 控者諮·詢後另外調整劑量。 共有七百五十名（750)病患登記參與此研究，隨機性分配 6 3 6病患，5 7 8病患完成研究，分析6 3 6病患結果。 相反地，所有隨機性分配的病患均算入統計人口分析及 安全性分析中。 病患已診斷確認罹患RA (以1987修訂ACR標準為定義）至 少3個月，並處於ACR功能I、II或III狀態，以現有的抗-風 濕療法不足以治療該病患，且該病患具有活動性RA，腫脹 關節26處及一觸就痛關節29處，除此之外，倘若糖皮質激 素的等效劑量<10毫克/天潑尼松，且能保持不變至少28天 之條件下，病患准予於研究期間使用糖皮質激素。 84711 -57- 1353851 D2E7係以2-毫升玻璃小瓶供應（每一小瓶中D2E7的濃度 為25毫克/毫升（換言之，40毫克/1.6毫升）），每次注射含有 40毫克D2E7/1.6毫升溶液。D2E7係由奥地利阿特湖 (Unterach)之依比藥廠（Ebewe Arzneimittel GmbH)製造及供 應，美國MD，洛克斐爾市，HBOC生化科學公司包裝、標 示、保存並分送D2E7至每個研究地點的研究者。D2E7係以 皮下注射方式隔週自行投藥單劑，投藥期間24週，研究藥 物的濃度為25毫克/毫升，安慰劑/1.6毫升（擰檬酸-磷酸緩衝 溶液不用D2E7)以皮下注射方式隔週自行投藥單劑，投用期 間24週。 病患繼續接受其於研究前的抗-風濕療法劑量，研究期間 准予使用的抗-風濕療法包括DMARDs (羥基氯喹、來氟米 特、曱氮蝶呤、非經腸金製劑、口服金製劑及柳氮磺吡啶 或者些藥物的組合或與其他DMARDs藥物的組合）、NS AIOs 及類固醇。這些DMARDs與共同投用的潑尼松（每日<10毫克） 及NSAIDs的劑量於篩選之前必須穩定至少28天。 盡所有的努力讓病患能完成24週安慰劑控制期間的研 究。因為此研究方案係設計用以反應現有的臨床實務，因 此，准予進行下列的附屬治療及劑量調整： 在研究的前3個月准予有最多三次關節内類固醇注射；每 次注射後，檢視關節2 8天，所注射關節處不列入評估。 由於耐受性議題，在研究期間DMARD及/或類固醇或_ NSAID療法的背景劑量可調整一次；只有與Knoll醫學監控 者諮詢後，才可再次調整劑量。 84711 -58- 1353851 倘資料證明缺乏功效（換言之，與基礎訪視比較後，無法 達到ACR20反應）者，可進行下列步驟： - 單劑增加背景DMARD及/或類固醇療法之劑量（倘潑尼 松劑量維持S10毫克/每曰）。 - 在3個月或3個月之後，開始以上列的其他DMARD療法治 療。 - 經與Knoll醫學監控者事前核准另外調整背景抗-風濕藥 物劑量。 接受硫唑嘌呤及/或環孢素之病患必須中斷這些療法，並 於篩選訪視前進入28天的不用藥期。研究期間不可使用這 些療法。 共同投藥療法的定義是於研究之前所用的療法，並在研 究期間持續進行，或為研究開始時所用的療法。對所有隨 機性分配病患以較佳的方式及治療組別描述共同投藥療 法。 根據CRF研究者說明指示，共同投藥療法分為"RA-專一 性"及"非-RA-專一性"者，研究期間，所有的病患為某種形 式的RA-專一性共同投藥療法（DMARD或非-DMARD)。 RA-專一性共同投用DMARD療法： 對所有隨機性分配病患以較佳的方式及治療組別描述共 同投用DMARD療法，結果示於表1中。 84711 -59- 1353851 表1隨機性分配治療组（所有隨機性分配病患）中具有最 常報告a RA-專一性共同投用DMARD療法之病患數 目（％) D2E7 安慰劑 (N=318) (N=318) 261(82.1) 270(84.9) 178(56.0) 199(62.6) 75(23.6) 82(25.8) 42(13.2) 46(14.5) 29(9.1) 33(10.4) 19(6.0) 18(5.7)

療法b___ 至少一種相關RA-專一性共同投用DMARD治療 曱氮蝶呤 抗癔藥 來氟米特 柳氮續p比咬 金製劑__ 其頻率發生25%整體病患。 病患可能出現於一種療法組別以上。

研究期間’大部分隨機性分配病患（636位中有53丨位，比 例為[83.5%])使用一或多種共同投用dmARD療法（318位接 觉D2E7治療者佔261位[82.1%]，而318位接受安慰劑治療著 佔270位[84.9%]);共有1〇5位病患（佔636位的16.5%)未使用 DMARDs(318位接受 D2E7治療者佔 57 位，[17.9%]，而 318 位接受安慰劑治療者佔48位[15.1%]) ; 356位病患（佔636位 的56.0%)使用一種DMARD(318位接受D2E7治療者佔184位 [57.9%]，而318位接受安慰劑治療者佔172位[54.1%]); 175 位病患（佔636位的27.5%)使用介於兩到四種不同的 DMARDs (318位接受D2E7治療者佔77位[24_2%]，而318位 接受安慰劑治療者佔98位[30.8%])。 研究期間，接受D2E7治療組使用平均〗丨〇不同的DMARDs 84711 •60- 1353851 ，而接受安慰劑治療者則使用平均1.21不同的DMARDs。 最常為報告使用的共同投用DMARD療法為甲氮蝶呤，其 在636位病患中有377位使用（比例59.3%)(318位接受D2E7治 療者佔178位[56.0%]，而318位接受安慰劑治療者佔199位 [62.6%])，次三個最常使用的共同投用DMARD療法為抗瘧 藥（換言之，氯4、羥基氯喹）(636位病患中有24.7%使用： 3 1 8位接受D2E7治療者有23.6%，而3 1 8位接受安慰劑治療者 有25.8%)、來氟米特（636位病患中有13.8%使用：31 8位接受 D2E7治療者有13.2%，而318位接受安慰劑治療者有14.5%) ，及柳氮磺吡啶（636位病患中有9.7%使用：318位接受D2E7 治療者有9.1%，而318位接受安慰劑治療者有10.4%)。接受 D2E7及安慰劑治療之病患在使用RA-專一性共同投用 DMARD療法的頻率上並無差異。 RA-專一性共同投用非-DMARD療法 對所有隨機性分配病患以較佳的方式及治療組別描述共 同投用DMARD療法，結果示於表2中。 84711 -61- 1353851 表2 隨機性分配治療组（所有隨機性分配病患）中具有最 常報告a RA-專一性共同投用非-DMARD療法之病 患數目（％) 共同投藥療法b D2E7 (N-318) 安慰劑 (N=318) 至少一種相關RA-專一性共同投藥非DMARD 治療 315(99.1) 304(95.6) 潑尼松 141(44.3) 146(45.9) 葉酸 88(27.7) 86(27.0) 塞來西布(Celecoxib) 77(24.2) 83(26.1) 羅非西布(Rofecoxib) 45(14.2) 39(12.3) 撲熱息痛(Paracetamol) 39(12.3) 49(15.4) 奈普生 33(10.4) 40(12.6) 布洛芬 28(8.8) 23(7.2) 曱基潑尼松 21(6.6) 27(8.5) 曲馬多(Tramadol) 17(5.3) 14(4.4) 狄-傑西(di-gesic) 17(5.3) 11(3.5) 二克氯芬(Diclofenac) 15(4.7) 18(5.7) 威可定(Vicodin) 14(4.4) 21(6.6). 曲胺縮酮(Triamcinolone) 13(4.1) 37(11.6) 利都卡因(Lidocaine) 10(3.1) 22(6.9) 其頻率發生25%整體病患 &病患可能出現於一種療法組別以上 研究期間，63 6位隨機性分配病患中共有619位（比例為 97.3%)使用一或多種RA-專一性非-DMARD共同投藥療法 (318位接受D2E7治療者佔315位[99.1%]，而318位接受安慰 劑治療者佔304位[95.6%])。 最常為報告使用的RA-專一性非-DMARD共同投藥療法 為潑尼松，其在636位病患中有287位使用（比例45.1%)(318 位接受D2E7治療者佔141位[44.3%]，而318位接受安慰劑治 84711 -62 - 1353851 療者佔146位[45.9%])，其次最常使用的非DMARD共同投藥 療法為葉酸（636位病患中有27.4%使用：318位接受D2E7治 療者有27.7°/。，而318位接受安慰劑治療者有27.0%，葉酸歸 類為RA-專一性非-DMARD療法或非-RA-專一性療法，端視 CRF中記載用藥指示而定，對RA以外的所有用藥指示而 言，葉酸被歸類為非-RA-專一性療法。塞來西布（636位病 患中有25.2%使用：31 8位接受D2E7治療者有24.2%，而31 8 位接受安慰劑治療者有26.1%)及羅非西布（636位病患中有 13.2%使用：318位接受D2E7治療者有14.2%，而318位接受 安慰劑治療者有12.3%)為第二常用之RA-專一性非-DMARD 共同投藥療法。接受D2E7及安慰劑治療之病患在使用RA-專一性非-DMARD共同投藥療法的頻率上並無差異。 非-RA-專一性共同投藥療法 對所有隨機性分配病患以較佳的方式及治療組別描述非 -RA-專一性共同投藥療法。 636位隨機性分配病患中共有614位（比例為96.5%)使用一 或多種非-RA-專一性共同投藥療法（318位接受D2E7治療者 佔306位[96.2°/。]，而318位接受安慰劑治療者佔308位 [96.9%])。 最常為報告使用的非-RA-專一性共同投藥療法為综合維 他命，其在636位病患中有166位使用（比例26.1%)(318位接 受D2E7治療者佔78位[24.5%]，而318位接受安慰劑治療者 佔88位[27.7%])，其次最常使用的三種共同投藥療法為鈣 (636位病患中有24.4%使用：318位接受D2E7治療者有 84711 •63 · 1353851 23.6%，而318位接受安慰劑治療者有25.2%)、葉酸（636位病 患中有22.2%使用：31 8位接受D2E7治療者有21.4%，而31 8 位接受安慰劑治療者有23.0%)及多價流感病毒疫苗（636位 病患中有14.2%使用：318位接受D2E7治療者有14.2%，而318 位接受安慰劑治療者有14.2 %)。（葉酸歸類為RA-專一性非 -DMARD療法或非-RA-專一性療法，端視CRF中記載用藥指 示而定，對RA以外的所有用藥指示而言，葉酸被歸類為非 -RA-專一性療法）。接受D2E7及安慰劑治療之病患在使用非 -RA-專一性共同投藥療法的頻率上並無差異。 功效指標包括：第24週的ACR20反應；第24週的ACR50 及ACR70 ;自研究開始時至第24週時之ACR20、ACR50及 ACR70的AUC (曲線下面積）；首次出現ACR20、ACR50及 ACR70反應的時間；數字ACR (ACR-N);自研究開始時至第 24週時有關ACR反應標準内容的變化（一觸就痛的關節數目 [TJC]、腫脹關節數目[SJC]、病患疼痛評估、病患及醫生對 疾病活動力之整體評估、HAQ及C-反應性蛋白[CRP]);以 SF-36、健康公用指標（HUI)及慢性疾病療法（FACIT)疲勞尺 度測定自研究開始時至第24週生理功能的變化；Euro-QoL 問卷；多維疲勞評估（MAF)尺度；受體總結調查；增加背景 DMARD及/或類固醇療法之發生率及時間；針對缺乏臨床反 應所建立之DMARD療法；類風濕性因子（RF);及晨起關節 僵硬。 以每100病患-年所發生的頻率、百分比及速率總結出不 良反應。利用皮爾森氏chi-平方（X2)檢定進行D2E7及安慰劑 84711 -64 - 1353851 組別的統計分析比較。利用統計分析特性及異數頻率說明 生理檢查、實驗參數及胸腔X-光結果，亦提供變換式表格， 利用統計特性說明重要的病徵。第24週的ACR20反應（自研 究開始時）定義為主要的功效變數，利用皮爾森氏；C 2檢定以 雙尾α=0.05之顯著水準比較D2E7及安慰劑組別的ACR20反 應速率，所有其他的功效變數分別說明（統計特性、頻率、 百分比、信賴區間），並以外插雙尾統計檢定法分析之。離 散數據係使用皮爾森氏I 2檢定，持續性數據則使用包括以 治療組為因子及相對研究開始時數值為協變量之協方差分 析（ANCOVA)模式。利用連續變數之魏克森（Wilcoxon)排序 加總檢定及個別變數之皮爾森氏χ 2檢定比較D2E7及安慰 劑組別之人口統計及研究開始時特性。 功效結果： 比較目前現有的抗-類風濕療法中加入D2E7之病患與加 入安慰劑的病患顯示，其主要的功效指標（ACR20)統計上明 顯的改善（D2E7為53.0%對安慰劑的34.9%)。 ACR D2E7 安慰劑 (Ν=315) (Ν=315) Ν(%) Ν(%) ACR20 167(53.0) 110(34.9) ACR50 92(29.2) 35(11.1) ACR70 47(14.9) 10(3.2) 在次要的ACR50、ACR70、ACR-N、一觸就痛關節數目、 腫脹關節數目、病患及醫生對疾病活動力之整體評估、病 患疼痛評估、HAQ行動不便指標、C-反應性蛋白、晨起關 84711 -65 - 1353851 節僵硬、晨起關節僵硬期間、FACIT疲勞尺度、SF-36 10個 範疇中的9個範疇及HUI 16個範疇中的7個範疇中，以D2E7 治療均在統計上具有明顯的改善。 以ACR20、ACR50及ACR70反應的指標時間；ACR20、 ACR50、ACR70及 ACR-N之 AUC ; Euro-QoL、RF及 MAF尺 度上而言，亦證明D2E7較安慰劑在治療反應上改善。 各分組分析證明接受共同投用甲氮蝶呤、抗瘧藥療法、 柳氮磺吡啶、其他DMARDs或共同投用數種DMARDs(換言 之，0、1、2或 23)者之D2E7病患中，其ACR20、ACR50、 ACR70、ACR-N 參數，ACR20、ACR50、ACR70 及 ACR-N 之 AUC均較接受安慰劑病患者明顯改善。以所有的檢定參數 而言，共同投用來氟米特則與安慰劑者相似。 表3 各分組在第24週時之ACR20分析 ACR20 D2E7 安慰劑 共同投藥藥劑 總計N %反應 總計N %反應 曱氮蝶呤 178 56.7 199 35.2 抗癔藥 75 50.7 82 32.9 來氟米特 42 33.3 46 37.0 柳氮績p比咬 29 58.6 33 24.2 其他DMARDs 25 52.0 25 44.0 無 DMARD 54 50.0 45 33.3 一種 DMARD 184 55.4 172 37.8 兩種DMARD 66 50.0 84 29.8 三或多種DMARD 11 45.5 14 35.7 抗瘧藥（例如，HCG、氣喳） 84711 -66- 1353851 表4: ACR50、ACR70及ACR-Ν反應速率：隨機性分配治 療組於24週時之病患反應 D2E7 (N=315) 安慰劑 (N=315) 時間點 N(%) N(%) ACR50 第24週 92(29.2)3 35(11.1) LOCF第24週 95(30.2) 35(11.1) ACR70 第24週 47(14.9)a 10(3.2) LOCF第24週 48(15.2) 10(3.2) 平均值土 SD 平均值土SD ACR-N 第24週 20.3±55.2 0·8±47.0 LOCF第24週 21.2±55.3 1.0±47_0 統計上明顯與安慰劑有差異（P<〇.001) 表5 各分組在第24週時之ACR50、ACR70及ACR-N分析 共同投藥藥劑 ACR50 ACR70 ACR-N D2E7 (N=315) 安慰劑 (N=315) D2E7 (N=315) 安慰劑 (N=315) 1 D2E7 [N=315) 安慰劑 (N=315) N % N % N % N % N 平均值土 SD N 平均值土 SD 甲氮蝶呤 178 30.9 199 12.1 178 15.2 199 2.0 178 26.5±42·3 199 3.2±43·0 抗瘧藥 75 29.3 82 13.4 75 12.0 82 2.4 75 20.0±45.5 82 3.4±43.4 來氟米特 42 14.3 46 10.9 42 0.0 46 8.7 42 -0.5±77.5 46 -4.5±57.3 柳氮靖w比啶 29 34.5 33 12.1 29 17.2 33 6.1 29 21.4±53.9 33 •1.7±41.5 其他DMARDs 25 24.0 25 8.0 25 16.0 25 4.0 25 25.3±33.9 25 6.7±49.1 無 DMARD 54 27.8 45 6.7 54 18.5 45 0.0 54 12.8±68.2 45 •7.5 ±54.6 —種 DMARD 184 31.0 172 12.2 184 16.3 712 5.2 184 22.8±56.0 172 4·2±45.6 兩種DMARD 66 27.3 S4 10.7 66 9.1 84 0.0 66 19.5±42.3 84 4_3±46·9 三或多種DMARD 11 18.2 14 14.3 11 9.1 14 7.1 11 20.1 ±37.2 14 16.5±30.5 抗瘧藥（例如，HCG、氣喹） -67- 84711 1353851 表6 產生ACR20、ACR50、ACR70之反應時間：以隨機性 分配治療組產生首次反應的病患數目（％)(完全分 析，不包括位置#7) ACR20 ACR50 ACR70 反應時間 D2E7 (N=315) 安慰劑 (N=315) D2E7 (N-315) 安慰劑 (N=315) D2E7 (N=315) 安慰劑 (N=315) N(°/〇) N(%) N(°/〇) N(%) N(%) N(%) 第2週 106(33.7) 27(8.6) 31(9.8) 3(1.0) 9(2.9) 0(0.0) 第4週 51(16.2) 43(13.7) 31(9.8) 7(2.2) 12(3.8) 1(0.3) 第8週 52(16.5) 40(12.7) 34(10.8) 12(3.8) 12(3.8) 2(0.6) 第12週 17(5.4) 32(10.2) 20(6.3) 13(4.1) 18(5.7) 5(1.6) 第16週 13(4.1) 20(6.3) 20(6.3) 15(4.8) 18(5.7) 7(2.2) 第20週 12(3.8) 15(4.8) 9(2.9) 13(4.1) 7(2.2) 6(1.9) 第24週 3(1.0) 10(3.2) 10(3.2) 11(3.5) 8(2.5) 3(10) 未反應者 61(19.4) 128(40.6) 160(50.8) 241(76.5) 231(73.3) 291(92.4) 結論： 當D2E7投與現經DMARD治療（例如，甲氮蝶呤、抗瘧藥 [氯4 /經基氯11奎]、來氟米特及柳氮續峨淀）之病患時，其通 常係為良好-耐受力的，其加入後與副作用發生率或方式主 要改變並無相關性，除此之外，副作用不會受到病患共同 投用DMARDs之總數量（換言之，0、1、2或23)影響。 整體而言，單獨投用40毫克之D2E7劑量或與其他 DMARDs組合投用是安全的。 D2E7治療明顯可改善病患（其疾病不足以現有的DAMRD 治療法治療）之RA。當與曱氮蝶呤、抗瘧藥、柳氮續p比啶、 其他DMARDs，或其他共同投用DAMADs數目（換言之，0、 84711 -68 - 1353851 1、2或>3)組合投用時，D2E7比安慰劑具有較高的反應’最 後’反應速率的改善通常端視所用DMARDs的種類及數目 而定。 等同效力 熟識技藝者將了魅 鮮或只有利用例行性實驗查證許多與本 發明專利說明書所鹿_ 竭不之特定具體實例具有相同效力者， 下列I申請專利範囹 ^拾此等同效力者。 84711 -69 - 1353851 序列表 <110> Fischkoff, Steven Chartash, Elliot <120〉抗-TNFa抗體及另一藥物之用途 <130> BBI-186 <140〉10/133, 715 <141> 2002-04-26 <160> 37 <170> FastSEQ視窗第4.0版 <210> 1 <211〉 107 <212〉蛋白質 <213〉人工序列 <220> <223> D2E7輕鏈可變區域 <400> 1

Asp 工le Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr 工le Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg Asn Tyr 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 2 <211> 121 <212>蛋白質 <213>人工序列 84711 1353851 <220> <223> D2E7重鏈可變區域 <400> 2

Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Glv Leu Val Gin Pro Gly Arg 1 5 10* 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tvr 20 25 30 ^

Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Ala 工le Thr Trp Asn Ser Gly His 工le Asp Tyr Al.a Asp Ser Val 50 55 60

Glu Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 3 <211> 9 <212〉蛋白質 <213〉人工序列 <220> <223〉D2E7輕鏈可變區域CDR3 <221>變異體 <222> 9 <223〉Xaa=任何胺基酸 <400> 3

Gin Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Xaa 1 5 <210> 4 <211> 12 <212>蛋白質 <213>人工序列 <220> <223〉D2E7重鏈可變區域CDR3 <221>變異體 -2- 84711 1353851 <222> 12 <223〉（Xaa=任何胺基酸） <400> 4

Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Xaa 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212〉蛋白質 <213>人工序列 <220> <223〉D2E7輕鏈可變區域CDR2 <400> 5

Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser 1 5 <210> 6 <211> 17 <212〉蛋白質 <213>人工序列 <220> <223〉D2E7重鏈可變區域CDR2 <400> 6 lie Asp Tyr Ala Asp Ser Val Glu l〇' 15

Ala lie Thr Trp Asn Ser Gly His 1 5

Gly <210> 7 <211> 11 <212〉蛋白質 <213〉人工居列 <220〉 <223〉D2E7輕鏈可變區域CDR1 <400> 7

Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg Asn Tyr Leu Ala 15 10 84711 1353851 <210> 8 <211> 5 <212>蛋白質 <213>人工序列 <220> <223〉D2E7重鏈可變區域CDR1 <400> 8

Asp Tyr Ala Met His 1 5 <210> 9 <211〉 107 <212>蛋白質 <213>人工序列 <220> <223> 2SD4輕鏈可變區域 <400> 9

Asp 工le Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser He Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr 工le Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly He Arg Asn Tyr 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly .50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr A'sp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr 85 90 95

Ala Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu 工le Lys 100 105 <210> 10 <211> 121 <212〉蛋白質 <213〉人工4列 <220> <223> 2SD4重鏈可變區域 <400> 10 -4- 84711 1353851

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val 35 40 45

Ser Ala lie Thr Trp Asn Ser Gly His lie Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 .

Glu Gly Arg Phe Ala Val Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ala Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Thr Lys Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Asn Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120

<210> <211> <212>蛋白質 <213〉人工序列 <220> <223〉2SD4輕鏈可變區域CDR3 <400> 11

Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Ala 1 5 <210> 12 <211> 9 <212>蛋白質 <213〉人工 >列 <220> <223〉EPB12重鏈可變區域CDR3 <400> 12

Gin Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Ala 1 5 <210> 13 <211> 9 <212>蛋白質 <213>人工序列 84711 1353851 <220> <223> VL10E4輕鏈可變區域CDR3 <400> 13

Gin Lys Tyr Gin Arg Ala Pro Tyr Thr 1 5 <210> 14 <211> 9 <212>蛋白質 <213>人工厚列 <220> <223> VL100A9輕鏈可變區域CDR3 <400> 14

Gin Lys Tyr Ser Ser. Ala Pro Tyr Thr 1 5 <210> 15 <211> 9 <212〉蛋白質 <213〉人工序列 <220> <223〉VLL100D2輕鏈可變區域CDR3 <400> 15

Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Thr 1 5 <210> 16 <211> 9 <212〉蛋白質 <213〉人工序列 <220> <223〉VLL0F4輕鏈可變區域CDR3 <400> 16

Gin Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Thr 1 5 -6 - 84711 1353851 <210> 17 <211> 9 <212>蛋白質 <213〉人工序列 <220> <223〉LOE5輕鏈可變區域CDR3 <400> 17

Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Tyr 1 5 <210> 18 <211> 9 <212〉蛋白質 <213>人工序列 <220> <223> VLL0G7輕鏈可變區域CDR3 <400> 18

Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Asn 1 5 <210> 19 <211> 9 <212〉蛋白質 <213>人工序列 <220> <223〉VLL0G9輕鏈可變區域CDR3 <400> 19

Gin Lys Tyr Thr Ser Ala Pro Tyr Thr 1 5 <210> 20 <211> 9 <212>蛋白質 <213>人工序列 <220> <223〉VLLOH1輕鏈可變區域CDR3 <400> 20 84711 1353851

Gin Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tvr Asn 1 * 5 <210> 21 <211> 9 <212>蛋白質 <213>人工i列 <220> <223> VLLOHIO輕鏈可變區域CDR3 <400> 21

Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Ala Tyr Ser 1 5 <210> 22 <211> 9 <212>蛋白質 <213〉人工序列 <220> <223〉VL1B7輕鏈可變區域CDR3 <400> 22

Gin Gin Tvr Asn Ser Ala Pro Asp Thr 1 — 5 <210> 23 <211> 9 <212>蛋白質 <213〉人工序列 <220> <223> VL1C1輕鏈可變區域CDR3 <400> 23

Gin Lys Tyr Asn Ser Asd Pro Tyr Thr 1 5 ' <210> 24 <211> 9 <212〉蛋白質 <213>人工序列 -8- 84711 1353851 <220〉 <223〉VL0.1F4輕鏈可變區域CDR3 <400> 24

Gin Lys Tyr lie Ser Ala Pro Tyr Thr 1 5 <210> 25 <211> 9 <212〉蛋白質 <213〉人工序列 <220> <223〉VL0.1H8輕鏈可變區域CDR3 <400> 25

Gin Lys Tyr Asn Arg Pro Pro Tyr Thr 1 5 <210> 26 <211> 9 <212〉蛋白質 <213〉人工居列 <220> <223〉LOE7.A輕鏈可變區域CDR3 <400> 26

Gin Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Ala 1 5 <210> 27 <211> 12 <212>蛋白質 <213〉人工居列 <220> <223〉2SD4重鏈可變區域CDR3 <400> 27

Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Asn 1 5 l〇 <210> 28 <211> 12 84711 -9- 1353851 <212〉蛋白質 <213〉人工居列 <220> <223〉VH1B11重鏈可變區域CDR3 <400> 28

Ala Ser Tvr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Lys 1 ^ 5 l〇 <210> 29 <211> 12 <212〉蛋白質 <213>人工j列 <220> <223〉VH1D8重鏈可變區域CDR3 <400> 29

Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Tyr 1 5 l〇 <210> 30 <211> 12 <212>蛋白質 <213>人工g列 <220> <223> VL1A11重鏈可變區域CDR3 <400> 30

Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Asp 15 10 <210> 31 <211> 12 <212>蛋白質 <213>人工序列 <220> <223〉VH1B12重鏈可變區域CDR3 <400> 31

Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Phe Ser Leu Asp Tyr 15 10 84711 -10- 1353851 <210> 32 <211> 12 <212〉蛋白質 <213〉人工序列 <220> <223> VH1E4重鏈可變區域CDR3 <400> 32

Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu His Tyr 1 5 10 <210> 33 <211> 12 <212>蛋白質 <213〉人工居列 <220> <223〉VH1F6重鏈可變區域CDR3 <400> 33

Ala Ser Phe Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Glu Tyr 1 5 l〇 <210〉 34 <211> 12 <212>蛋白質 <213>人工婵列 <220> <223〉3C-H2重鏈可變區域CDR3 <400> 34

Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Glu Tyr 1 5 l〇 <210> 35 <211> 12 <212〉蛋白質 <213>人工序列 <220> <223〉VH1-D2.N重鏈可變區域CDR3 <400> 35 84711 -11 - 1353851

Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser S$r Leu Asp Asn 1 5 10 <210> 36 <211> 321 <212> DNA <213〉人工序列 <220> <223> D2E7輕鍵可變區域 <400> 36 o o o o 1 0 2 8 4 0 2 6 112 3 3 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc： ctgtctgcat ctgtagggga cagagtcacc atcacttgtc gggcaagtca gggcatcaga :eatt:acttag cctggtatca gcaaaaacca gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccactt tgcaatcagg ggtcccatct cggttcagtg gcagtggatc tgggacagat 'ttcactctca ccatcagcag cctacagcct gaagatgttg caacttatta ctgccaaagg- tataaccgtg caccgcatac ttttggccag gggaccaagg tggaaatcaa a <210> 37 <211> 363 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> D2E7重鏈可變區域 <400> 37 gaggtgcagc tggtggagtc tcctgtgcgg cctctggatt ccagggaagg gcctggaatg gcggactctg tggagggccg ctgcaaatga acagtctgag taccttagca ccgcgtcctc agt tgggggaggc cacctttgat ggtctcagct attcaccatc agctgaggat ccttgactat ttggtacagc ,-gattatgcca ；atcacttgga .tccagagaca acggccgtat. /.tggggccaag ccggcaggtc tgcactgggt atagtggtca acgccaagaa attactgtgc gtaccctggt cctgagactc ccggcaagct catagactat ctccctgtat gaaagtctcg caccgtctcg 0 0 0 0 0 3 0 2 8 4 0 6 6 6 112 3 3 3 -12- 84711

Claims (1)

1353851 第 092109743 號 中文申請專利範 0

4议請庫 拾、申請專範ST: 1. 一種用於治療個體之類風濕性關節炎的每兩週投藥療程 醫藥組合物，其包括經分離人類抗-TNFa抗體或其抗原結 合部分，其中該人類抗-TNFa抗體或其抗原結合部分自人 類TNFa解離之Kd為Ιχίο·8 Μ或更低，而Koff率常數為 lxl(Γ3秒_1或更低’兩者係由表面電漿共振所測得，且以 標準活體外L929分析法所測得之中和人類TNFa細胞毒性 之IC5〇為1x1 (Γ7 Μ或更低，其中該醫藥組合物係與下列藥 物共同投予： (1) 第一組合物，其包括選自由下列組成之群的類風濕性 關節炎（RA)專一性非疾病改善抗風濕藥（DMARD):潑 尼松（prednisone)、葉酸、塞來西布（ceiecoxib)、羅非 西布（rofecoxib)、撲熱息痛（paracetain〇l)、奈普生 (naproxen)、布洛芬（ibuprofen)、甲基潑尼松、曲馬多 (tramadol)、右旋丙氧芬（dextropropoxyphene)、鹽酸撲 熱息痛、二克氣芬（diclofenac)、氫可酮酒石酸氫鹽 (hydrocodone bitartrate)、乙醢胺基盼（acetaminophen)、 曲胺縮酮（triamcinolone)及利都卡因（lidocaine)，及 (2) 第二組合物，其包括選自由下列組成之群的非尺八專 一性藥物：綜合維他命、鈣及多價流感病毒疫苗。 2.根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物’其中該包括抗-TNFa抗體或其抗原結合部分之組合物係以皮下注射方式 投予。 3.根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物’其中該人類抗 84711-1000627.doc 1353851 -TNFa抗體或其抗原結合部分具有下列的特徵： a) 以表面電漿共振測定，自人類TNFa解離之Kw率常數 為1 X 10_3秒-1或更低； b) 具有輕鏈CDR3區域，其包括SEQIDNO: 3之胺基酸序 列，或在SEQ ID NO: 3位置1、4、5、7或8經一個丙胺 酸取代或在位置1、3 ' 4、6、7、8及/或9經一至五個 保寸胺基酸取代之胺基酸序列； c) 具有重鏈CDR3區域，其包括SEQ ID NO: 4之胺基酸序 列’或在 SEQ ID NO: 4位置 2、3、4、5、6、8、9、10 或11經一個丙胺酸取代或在位置2、3、4、5、6、8、9、 1 0、11及/或1 2經一至五個保守胺基酸取代之胺基酸序 列。 4. 根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該抗_TNFa 抗體或其抗原結合部分含有包括Seq id NO: 1之胺基酸 序列的輕鏈可變區域（LCVR)及包括SEQ ID N〇: 2之胺基 酸序列的重鏈可變區域（HCVR)。 5. 根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該人類抗_ TNFa抗體為D2E7。 6·根據申請專利範園第5項之醫藥組合物，其包括4〇毫克劑 量之D2E7。 7·根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該個體係經 該第一組合物及/或苐二組合物治療不佳，且具有活動性 RA，其定義為^6處腔脹關節及^9處觸痛關節。 8. —種經分離人類抗-TNFa抗體或其抗原結合部分之用 84711-1000627.doc .2- S 1353851 途，其係用於製備治療類風濕性關節炎之藥劑，其中該 藥劑係以每兩週投藥療程與下列藥物共同投予至人體： ⑴第-組合物，冑自由下列組成之群的ra專一性非 DMARD .潑尼松、葉酸、塞來西布、羅非西布撲 熱息痛、奈普生、布洛芬、甲基潑尼松、曲馬多、右 旋丙氧芬' 鹽酸撲熱息痛、二克氯芬、氫可酮酒石酸 氫鹽、乙醯胺基酚、曲胺縮酮及利都卡因；及 (2)第二組合物，選自由下列組成之群的非尺八專一性藥 物：综合維他命、鈣及多價流感病毒疫苗，且其中該馨 抗-TNFa抗體或其抗原結合部分自人類TNFa解離之 1為1乂10·8 Μ或更低，而K〇f#常數為1χ1〇-3秒-丨或更 低，兩者係由表面電漿共振所測得，且以標準活體外 L929分析法所測得之中和人類TNFa細胞毒性之ic5Q ' 為1χ10·7Μ或更低。 9.根據申請專利範圍第8項之用途，其中該抗_TNFa抗體或 其抗原結合部分具有下列的特徵： a) 以表面電漿共振測定，自人類TNFa解離之κ。汀率常數 籲 為1 X 1(Γ3秒“或更低； b) 具有輕鏈CDR3區域，其包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序 列’或在SEQ ID NO: 3位置1、4、5、7或8經一個丙胺 酸取代或在位置1、3、4、6、7、8及/或9經一至五個 保守胺基酸取代之胺基酸序列； c) 具有重鏈CDR3區域’其包括SEQIDNO: 4之胺基酸序 列’或在 SEQIDNO: 4位置2、3、4、5、6、8、9、10 S 84711-1000627.doc 1353851 或11經一個丙胺酸取代或在位置2、3、4、5、6、8、9、 10、11及/或12經一至五個保守胺基酸取代之胺基酸序 列。 W·根據申請專利範圍第8項之用途，其中該抗_TNFa抗體或 其抗原結合部分含有包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的 輕鏈可變區域及包括SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的重鏈 可變區域。 根據申請專利範圍第8項之用途，其中該人類抗體為 D2E7。 12. 根據申s青專利範圍第11項之用途，其中毫克之D2E7被 投予。 13. 根據申請專利範圍第8至12項中任一項之用途，其中該人 類抗- TNF a抗體或其抗原結合部分係以皮下投予。 14. 根據申請專利範圍第8至12項中任一項之用途，其中該抗 體係與細胞激素介白素-6(IL-6)—起被投予個體、或與血 清或血漿中濃度高於5〇〇皮克/毫升之IL_6 一起被投予個 BMk 體0 15. —種在患有類風濕性關節炎之人類個體抑制TNFa活性之 組合，其包括： (a)經分離人類抗_TNFa抗體或其抗原結合部分，其自人 類TNFa解離之^為！ χ 10·8μ或更低，而〖。作率常數為 1 X 1(Γ3秒-1或更低’兩者係由表面電漿共振所測定， 且以標準活體外L929分析法所測之中和人類TNFa細 胞毒性之ICm為ΐχΐ 〇·7μ或更低；且以每兩週投藥療程 8471l-1000627.doc Λ _ S 與下列藥物共同投予： (b) 第一組合物’其包括選自由下列組成之群的ra專一 性非DMARD :潑尼松、葉酸、塞來西布、羅非西布、 撲熱息痛、奈普生、布洛芬、甲基潑尼松、曲馬多、 右旋丙氧芬、鹽酸撲熱息痛、二克氯芬、氫可酮酒石 酸氫鹽、乙醯胺基酚、曲胺縮酮及利都卡因；及 (c) 第二組合物’其包括選自由下列組成之群的非ra專 一性藥物：综合維他命、鈣及多價流感病毒疫苗。 16. —種在患有類風濕性關節炎之人類個體抑制TNFa活性之 組合，其包括： (a) 經分離人類抗-TNFa抗體或其抗原結合部分，其中該 抗-TNFa抗體或其抗原結合部分具有下列特徵： (1) 以表面電漿共振測定，自人類TNFa解離之〖咐率 常數為1 X⑺一秒·1或更低； (2) 具有輕鏈CDR3區域，其包括SEQ ID NO: 3之胺基 酸序列，或在SEQ ID NO: 3位置1、4、5、7或8 經一個丙胺酸取代或在位置1、3、4、6、7、8及/ 或9經一至五個保守胺基酸取代之胺基酸序列； (3)具有重鏈CDR3區域，其包括SEQ ID NO: 4之胺基酸 序列，或在 SEQIDN0:4 位置 2' 3、4、5、6、8、9、 10或11經一個丙胺酸取代或在位置2、3、4、5、6、8、 9、10、11及/或12經一至五個保守胺基酸取代之胺基 酸序列；且以每兩週投藥療程與下列藥物共同投予： (b) 第一組合物，其包括選自由下列組成之群的RA專一 84711-1000627.doc 1353851 性非DMARD :潑尼松、葉酸、塞來西布、羅非西布、 撲熱息痛、奈普生、布洛芬、曱基潑尼松、曲馬多、 右旋丙氧芬、鹽酸撲熱息痛、二克氯芬、氫可酿|酒石 酸氫鹽、乙醯胺基酚、曲胺縮酮及利都卡因；及 (c)第二組合物’其包括選自由下列組成之群的非RA專 一性藥物：綜合維他命、鈣及多價流感病毒疫苗。 17. —種在患有類風濕性關節炎之人類個體抑制τΝρα活性之 組合，其包括： (a) 經分離人類抗_TNFa抗體或其抗原結合部分，其中該 人類抗-TNFa抗體或其抗原結合部分具有包括seq ID NO: 1之胺基酸序列的輕鏈可變區域及包括SEq m NO: 2之胺基酸序列的重鏈可變區域；且以每兩週投 藥療程與下列藥物共同投予： (b) 第一組合物’其包括選自由下列組成之群的RA專一 性非DMARD :潑尼松、葉酸、塞來西布、羅非西布、 撲熱息痛、奈普生、布洛芬、甲基潑尼松、曲馬多、 右旋丙氧芬、鹽酸撲熱息痛、二克氣芬、氫可酮酒石 酸氫鹽、乙醯胺基酚、曲胺縮酮及利都卡因；及 (c) 第二組合物’其包括選自由下列組成之群的非ra專 一性藥物：综合維他命、鈣及多價流感病毒疫苗。 1 8. —種在患有類風濕性關節炎之人類個體抑制TNFa活性之 組合’其包括： U)經分離人類抗_TNFa抗體或其抗原結合部分，其中該 人類抗-TNFa抗體為D2E7 ;且以每兩週投藥療程與下 84711-1000627.doc S 19. 20. 21. 22. 列藥物共同投予： (b) 第一組合物’其包括選自由下列組成之群的ra專一 性非DMARD :潑尼松、葉酸、塞來西布、羅非西布、 撲熱息痛、奈普生、布洛芬、曱基潑尼松、曲馬多、 右旋丙氧芬、鹽酸撲熱息痛、二克氣芬、氫可酮酒石 酸氫鹽、乙醯胺基酚、曲胺縮酮及利都卡因；及 (c) 第二組合物，其包括選自由下列組成之群的非ra專 一性藥物：综合維他命、鈣及多價流感病毒疫苗。 根據申請專利範圍第15至18項中任一項之組合，其中該 抗體或其抗原結合部分係經皮下投予。 根據申請專利範圍第15至18項中任一項之組合，其中該 抗體或其抗原結合部分係以4〇mg之劑量投予。 根據申請專利範圍第丨5至丨8項中任一項之組合，其中該 抗體係與細胞激素介白素_6(IL_6) 一起被投予個體、或與 A清或也漿中濃度高於5〇〇皮克/毫升之乩_6 一起被投予 個體。 一種用於治療類風濕性關節炎之套組，其包括： a)包括經分離人類抗_TNFa抗體或其抗原結合部分之醫 藥組合物，其中該人類抗-TNFa抗體或其抗原結合部 分自人類TNFa解離之Kd為1χ1〇·8Μ或更低，而K〇ff率常 數為lxlO·3秒-1或更低，兩者係由表面電漿共振所測 得，且以標準活體外L929分析法所測得之中和人類 TNFa細胞毒性之ICm為1x1(T7M或更低；且以每兩週投 藥療程與下列藥物共同投予： 84711-1000627.doc b)第一組合物，其包括選自由下列組成之群的RA專一性 非DMARD :潑尼松、葉酸、塞來西布 '羅非西布、撲 熱息痛、奈普生、布洛芬、曱基潑尼松、曲馬多、右 旋丙氧芬、鹽酸撲熱息痛、二克氯芬、氫可酮酒石酸 虱鹽、乙醯胺基齡、曲胺縮酮及利都卡因；及 (c)第二組合物，其包括選自由下列組成之群的非ra專一 性藥物：综合維他命、鈣及多價流感病毒疫苗。 3.根據申請專利範圍第22項之套組，其中該人類抗_ΤΝρα抗 體或其抗原結合部分具有下列的特徵： a) 以表面電漿共振測定，自人類TNFa解離之Kw率常數 為1 X 1(Γ3秒-1或更低； b) 具有輕鏈CDR3區域’其包括SEQ ID NO: 3之胺基酸 序列，或在SEQ ID NO: 3位置1、4、5、7或8經一個 丙胺酸取代或在位置1.、3、4、6、7、8及/或9經一至 .五個保守胺基酸取代之胺基酸序列； c) 具有重鏈CDR3區域，其包括SEQ ID NO: 4之胺基酸 序歹1J，或在 SEQ ID NO: 4位置2、3、4、5、6、8、9、 10或11經一個丙胺酸取代或在位置2、3、4、5、6、8、 9、10、11及/或12經一至五個保守胺基酸取代之胺基 酸序列。 24·根據申請專利範圍第22項之套組，其中該人類抗-TNFa抗 體或其抗原結合部分含有包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序 列的輕鏈可變區域及包括SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的 重鏈可變區域。 84711-l00Q627.doc -8 - 1353851 25. 26. 27. 28. 29. 30. 31. 根據申凊專利範圍第22項之套組，其中該人類抗_TNFa抗. 體為D2E7。 根據申請專利範圍第22至25項中任一項之套組，其中該 醫藥組合物包括40毫克的抗體。 根據申請專利範圍第22至25項中任一項之套組，其進一 步包括皮下投予該人類抗_TNFa抗體或其抗原結合部分 之用藥指示。 —種經分離人類抗_TNFa抗體或其抗原結合部分之用 返，其係用於製備在無法以先前抗_風濕療法治療之罹患 類風濕性關節炎（RA)之個體治療RA之藥劑，其中該人類 抗-TNFa抗體或其抗原結合部分自人類1^1?〇1解離之心為 lxl〇_8 Μ或更低，而尺⑽率常數為1χ1〇-3秒-!或更低，兩者 係由表面電漿共振所測得，且以標準活體外L929分析法 所測得之中和人類TNFa細胞毒性之^”為1χ1〇_7 M或更 低，且其中該藥劑係以每兩週投藥療程投予。 根據申請專利範圍第28項之用途，其中該先前抗·風濕療 法係選自由下列組成之群：疾病改善抗-風濕藥 (DMARD)、非類固醇性抗發炎藥物（NSAID)、類固醇或其 任何之組合》 根據申請專利範圍第28項之用途，其中該個體具有至少6 處腫脹關節及至少9處觸痛（tender)關節。 根據申請專利範圍第28至30項中任一項之用途，其中該 人類抗-T N F a抗體或其抗原結合部分具有下列的特徵： a)以表面電漿共振測定，自人類TNFa解離之κ。^率常數 84711-1000627.doc 1353851 為1 χ ΙΟ·3秒-1或更低； b) 具有輕鏈CDR3區域，其包括SEQ ID NO: 3之胺基酸 序列’或在SEQ ID NO: 3位置1、4、5、7或8經一個 丙胺酸取代或在位置1、3、4、6、7、8及/或9經一至 五個保守胺基酸取代之胺基酸序列； c) 具有重鏈CDR3區域，其包括SEQ ID NO: 4之胺基酸 序列，或在 SEQ ID NO: 4位置 2、3、4、5、6、8、9、 10或11經一個丙胺酸取代或在位置2、3、4、5、6、8、 9、10、11及/或12經一至五個保守胺基酸取代之胺基 酸序列。 32. 根據申請專利範圍第28至30項中任一項之用途，其中該 人類抗-TNFa抗體或其抗原結合部分具有含有CDR3區域 之輕鏈可變區域，其包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列，或 在SEQ ID NO: 3位置1、4、5、7或8經一個丙胺酸取代之 胺基酸序列；及含有CDR3區域之重鏈可變區域，其包括 SEQ ID NO: 4之胺基酸序列，或在SEQ ID NO: 4位置2、 3、4、5、6、8、9、10或11經一個丙胺酸取代之胺基酸 序列。 33. 根據申請專利範圍第28至30項中任一項之用途，其中該 人類抗-TNFa抗體或其抗原結合部分含有包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的輕鏈可變區域及包括SEQ ID NO: 2之胺 基酸序列的重鏈可變區域。 34. 根據申請專利範圍第28至30項中任一項之用途，其中該 人類抗-TNFa抗體為D2E7。 8471M000627.doc • 10· 1353851 3 5.根據申請專利範圍第28至30項中任一項之用途，其中該 藥劑包括40毫克的劑量。 3 6.根據申請專利範圍第28至30項中任一項之用途，其中該 藥劑係適用於皮下投藥。

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