TWI289602B - Surfactant system - Google Patents
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Description
1289602 A7 —______!L___ 五、發明説明(1 ) ^ 技術領域 本發明係關於一種供用於水性組成物之界面活性劑系 統,且更特別地(或除此之外)係為一種供用於清潔製品之 以水性酵素為主的界面活性劑系統。當被使用作為供用於 清潔醫療器具之以水性酵素為主的清潔製品内時,本發明 將具有特別之優點。 背景技藝 於本說明書全文中所討論之任何一種習知技藝,應無 論如何都被認定是對此習知技藝為普遍所已知,或形成該 領域中部分的常用基本知識的一種揭露。 本發明在此所述係特別是關於供用於清潔醫療器具之 組成物,但不僅限於該用途。本案所使用之術語“醫療器具” 係欲廣泛地包含外科手術儀器:例如解剖刀、切片器且、 夾箝、及類似物;内視鏡、直腸内視鏡、腹腔内視鏡及其 他外科手術檢視或處理所用的器材;以及其他在醫藥、外 科手術、及牙科工作上所使用之需要清潔、消毒及滅菌之 器具。同時該術語係意欲包含具有類似清潔需求之器具: 例如美髮、化妝處理、刺青、在身體上穿洞等,以及其他 需要移除人類/動物皮脂及/或身體分泌物之應用上。許多 醫療器具係以(或包含有)各種不同的架構材料製造,而使 清潔組成物必須是不會損害該等材料者。 於-名病患使用後及治療另-病患前,以擦洗來移除 醫療器具上之血液、組織、解離蛋白質性及其他污物,接 而將之浸泡於-種會進-步消化或鬆解任一種殘留在該器 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) --- -4 - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂— #,· r 1289602 A7 ____ B7_ 五、發明説明(2 ) ^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 具表面上之蛋白質性材料的酵素製劑歷時一段預定之時 間’這是清潔醫療器具之一般操作。該器具接而被洗務清 潔,並引至進一步的消毒或滅菌操作程序。為使交叉感染 之可能降至最低,所希望的是將被使用於一名病患之且 與那些被另一名病患所使用者作分開清潔。 供用於清潔醫療器具之製劑通常係由一個濃縮液所構 成,該濃縮液包含有一或數種界面活性劑組合以—或數種 蛋白質分解酵素。於使用前,該濃縮液被稀釋至一個使用 強度(通常是一百倍稀釋)。一個此種配方已被描述於1^〇乂〇 NORDISK (“Novo-配方”)。就此目的在國際上被使用的三 種製劑是:EPIZYME⑧(3M的一項產品)、MEDIZYME® (Whiteley Industries Pty Ltd·,Sydney Australia的一項產 品)、ENDOZYME® (Ruholf Corporation,NY,USA的一項產 品)。雖然在大致上此等產品是有效用且被廣泛使用,然而 仍需要有更有效的產品,且特別是對該等能夠在一個較目 前所使用者更短的時間内達到一個預定位准之效能的製 劑。 該濃縮液必須在使用前之運送及儲存中是足夠安定 的,俾以滿足商業之需求。能夠選擇被配方在濃縮之水性 溶液内的界面活性劑是受限制的。界面活性劑可能會受限 於:濃縮液之儲存安定性、在稀釋時所產生的起泡問題、 其所造成之表面張力下降不足、系統内其他成份(例如:酵 素)之不安定性、或蒙受其他缺點。大致上,配方人員會使 用之界面活性劑係選自已被發現可滿足此種用途之傳統且 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1289602
五、發明説明(3 熟知的非離子性界面活性劑所組成的一個群組,但對改善 效用仍存有一個未被滿足之需求。 本發明的一個目標係提供一個改良之界面活性劑系 統,且本發明之較佳具體例係提供一種以酵素為主之清潔 組成物,其能夠避免諸等習知技藝中的問題,及/或提供改 善之效用。 發明内容之描述 依據本發明之第一個方面係提供一種水性組成物,其 包含有呈組合形式之一種烷基吡咯酮及一種烷基多醣。 較佳的烷基咄咯酮是一個C8-C18烷基咄咯酮。N-十二 烧基吼嘻酮(“N-DP”)是最佳的。所欲地,該烷基多醣是一 種烷基聚葡萄糖苷(“APG”)。 依據本發明之第二個方面,提供一種用以增進一種供 用於清潔醫療器具之含有酵素組成物的效用的方法,該方 法包含之步驟為包含使有一種烧基^比略酮及一種烧基多 醣。 較佳地,該組成物是一種濃縮液,其依據本發明之第 一個方面係包含有界面活性劑作為其配方之一部分,但該 界面活性劑系統可被隨後地添加至該濃縮液或使用溶液 中0 依據本發明之第三個方面,提供一種用以清潔醫療器 具之方法,該方法包含之步驟為以一種含有至少一種酵 素、一種烷基咄咯酮及一種烷基多醣之組成物來處理該器 具。 本紙張尺度適用中國國家標準(0^1) A4規格(210X297公釐) 6 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、一t— Φ0 1289602 A7 B7 五、發明説明(4 ) , (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 除非在前後文中清楚地需要,否則在描述内容及申請 專利範圍之全文中,該用辭"包含〃、〃包含有"以及類似用 辭要被解釋為是涵概性含意,而非為一種排除或絕對性之 含意;亦即,係為“包含,但不限制於”之含意。 烧基吼17各酮被已知可隨其在水中濃度增高而逐漸降低 表面張力,藉此在對應於不同咄咯酮溶於水中之最高濃度 的0.1%之十二烷基咄咯酮及0.002%之辛基吡咯酮的個例 中,達到一個最低之表面張力(最高之效力)。由於當溶於 一種水性系統中的最高濃度被稀釋成任何一種實質濃度 時,其無可避免地會比作為一種界面活性劑之全效低,而 在早期使其在濃縮液中的用途受限制。 實現本發明之最佳模式 添加一種依據本發明包含有組合有烷基聚葡萄糖苷 ("APG")之η-十二烷基吡咯酮("n-DP")至製備自三種商業 上可購得之酵素的清潔製劑濃縮液的溶液中。這些是 EPIZYME®、MEDIZYME®及ENDOZYME® 〇 — 個第四種 濃縮液"NOVO配方",是一個由NOVO INDUSTRIES於Novo Nordisk Publications Application Sheet B-613,"Application of Enzymes in Detergents for Endoscope Cleaning"中所描述 之產品,也同時被製備及測試。於表1所描述之測試中,每 一個包含有0.2% w/w之十二烧基吼洛酮("n-DP")及0.1% w/w之辛基咄咯酮("APG")的添加物個例係以濃縮液之重 量計。 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210X297公釐) 1289602 A7 B7 五、發明説明(5 ) NOVO配方(濃縮液)係如下述: 成份 % w/w 非離子性界面活性劑(Teric BL9) 12 丙二醇 22 三乙醇胺 7 硼酸 4 氯化鈣 0.1
Savinase 16.0 公升(蛋白酶) 13
Termamyl (澱粉酶) 7 水 至100 酸鹼值 7
Epizyme組成物配方(濃縮液)係如下述: 成份 % w/w 自來水 19.0
Teric BL9 (非離子性界面活性劑) 10.0 保存劑 0.15 酵素安定劑 6.0 50%苛性鈉 2.5 丙二醇 6.0 蛋白酶 10.0 脂肪酶 0.2 澱粉酶 1.5 纖維素酶 0.5 香水 0.15 水 至100.0 舉例而言該蛋白酶可以是枯草桿菌蛋白酶 (subtilisin)、殿粉酶是α·殿粉酶、纖維素酶是内切-1,4-β-葡 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X297公釐) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)
1289602 A7 ____B7_ 五、發明説明(6 ) " 萄糖答酶,且脂肪酶是甘油三S旨(Triacylglycerol)。然而,其 他酵素或酵素組合可以取代此等。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 每一種清潔組成物濃縮液是以1份的濃縮液對比100份 的標準硬水[每1公升之蒸餾水有0.304克氯化鈣與0.065克 氯化鎂]之比例被稀釋。醫療物品管制條例54及指引,1996, 第17頁]。此時每一種產品之效力的測試係以製備於載玻片 上之標準污物製備物:(1)無添加的’及(2)添加有一種依據 本發明之添加物。製劑之效力(達到一個給定之計分所需的 時間)是在各種不同的溫度下予以測定。與含有依據本發明 添加物之組成物做比較的結果被顯示於表1。 加速的老化試驗被概述於表2。標準污物製備物之詳細 内容被顯不於表3及"Methods for Ascertaining the Cleaning Performance of Dishwasher Detergents" (SOFW-Journal,126. Jahrgang 3-2000)中 0 表1 帶有污物之顯微鏡玻片 燒焦之碎肉。達到計分8所需要的接觸時間(分鐘)。
Novo-配方 EPIZYME MEDIZYME ENDOZYME 無添加的 添加APG + n-DP 無添加 的 添加 APG + n-DP 無添加 的 添加APG + n-DP 無添加 的 添加APG + n-DP 25〇C 95 68 67 47 120 93 >480 241 40°C 60 46 52 37 87 71 212 157 50°C 42 33 30 19 65 53 170 140 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) .9 1289602 A7 _________B7 五、發明説明(7 ) ^ 微波加熱之牛奶。達到計分1〇(完全移除)所需要的接觸時 間(分鐘)。
Novo-配方 EPIZYME MEDIZYME ENDOZYME 無添加 的 添加 APG + n-DP 無添加 的 添加 APG + n-DP 無添加 的 添加 APG + n-DP 無添加 的 添加APG + n-DP 25〇C 53 38 35 25 39 30 69 51 40°C 39 31 24 19 29 23 50 35 50°C 27 22 12 10 19 16 31 28 愛丁堡污物(Edinburgh Soil)。達到計分1 〇(完全移除 要的接觸時間(分鐘)。 )所需 Novo-配方 EPIZYME MEDIZYME ENDOZYME 無添加 的 添加 APG + n-DP 無添加 的 添加 APG + n-DP 無添加 的 添加 APG + n-DP 無添加 的 添加 APG + n-DP 25〇C 28 25 21 19 26 23 32 28 40°C 21 20 11 10 17 11.5 25 35 50°C 18 15 9 9 11 10 18 16 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) N-DP : η-十二烧基口比洛 _ (購自 International Speciality Products之Surfadone LP 300), APG :烧基聚葡萄糖菩(購自Huntsman Corporation Australia 之 ALKADET 15) 添加比例:對濃縮液添加0.2 w/w% N-DP及0·1 w/w% APG。 稀釋比例:以1份濃縮液對比100份標準硬水 如表1所證實的,添加之本發明添加物降低該等組成物 達到給定計分所需的時間,且是在每一種溫度下。本發明 添加物在低溫下特別有效。 雖然表1所顯示之結果是使用對濃縮液添加〇·2 w/w% 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) -10 - 1289602 A7 B7 五、發明説明(8 ) ^ N-DP及0.1 w/w% APG而得到。N-DP對比APG之比例是可 以改變的。較佳的比例是介於以烷基咄咯酮之重量計為1 份對比以烷基聚葡萄糖苷之重量計為3份及以烷基咄咯酮 之重量計為3份對比以烷基聚葡萄糖苷之重量計為1份之 間,較佳的是介於以烧基吼洛酮之重量計為3份對比以烧基 聚葡萄糖苷之重量計為1份及以烧基咄咯酮之重量計為1份 對比烷基聚葡萄糖苷之重量計為1份之間。 較佳地N-DP及APG之濃度是低於該濃縮液之7.5% w/w(即在該濃縮液以1份濃縮液:100份水稀釋時,係低於 大約0.0075%)且更佳的是低於3% w/w。實際所使用的濃度 會隨所需之表面張力特性而改變:烷基多醣之親水性及配 方中其他賦形劑所提供給烷基多醣的親水程度,以及視個 別配方而產生之其他因子。 表2顯示本發明添加物在加速老化測試中的效力。其結 果證實本發明添加物可略微地改善儲存安定性,或至少對 其不會有不利地影響。 表2 以儲存歷時21天之濃縮配方之%表示的殘留之蛋白酶活性 (於第0天為100%):
Novo-配方 EPIZYME MEDIZYME ENDOZYME 無添加 的 添加 APG + n-DP 無添加 的 添加 APG + n-DP 無添加 的 添加 APG + n-DP 無添加 的 添加APG + n-DP 25〇C 95 95 96 98 95 95 93 93 40°C 89 89 91 91 85 85 80 83 50°C 77 84 85 87 69 74 73 78 11 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1289602 A7 _B7_ 五、發明説明(9 ) ' 使用NOVO NORDISK之B 863b測試方法(附加於本案為附 件1)予以評估。添加物是依據本發明,稀釋則如同表1。 表3顯示各種不同濃度及比例之烷基吡咯酮及烷基多 醣的效力。可見的是該組成物在一個烷基咄咯酮對比烷基 多醣之寬廣範圍内,對減少用以清除之接觸時間上的效力。 表3 帶有污物之顯微鏡玻片 燒焦之碎肉。達到計分8所需要的接觸時間(分鐘)。
No vo-配方 EPIZYME 無添加的 添加APG + SURF 無添加的 添加APG + SURF 25 °C 95 66 67 48 40°C 60 49 52 39 50°C 42 32 30 22 微波加熱之牛奶。達到計分10(完全移除)所需要的接觸時 間(分鐘)。
Novo-配方 EPIZYME 無添加的 添加APG SURF 無添加的 添加APG + SURF 25〇C 53 34 35 21 40°C 39 29 24 17 50°C 27 20 12 8 12 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1289602 A7 B7 五、發明説明(10) 愛丁堡污物(Edinburgh Soil)。達到計分10(完全移除)所需 要的接觸時間(分鐘)。
Novo-配方 EPIZYME 無添加的 添加APG + SURF 無添加的 添加APG + SURF 25〇C 28 22 21 19 40°C 21 16 11 9 5(TC 18 19 9 8 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) SURF : η·十二烧基口比卩各 _ (購自 International Speciality Products之Surfadone LP 300), APG :烧基聚葡萄糖苷(購自Huntsman Corporation Australia 之 ALKADET 15) 添加比例:對濃縮液添加0.2 w/w% SURF及1% APG。 稀釋比例:以1份濃縮液對比100份標準硬水 結果 帶有污物之顯微鏡玻片 燒焦之碎肉。達到計分8所需要的接觸時間(分鐘)。
Novo-配方 EPIZYME 無添加的 添加APG + SURF 無添加的 添加APG + SURF 25〇C 95 64 67 44 40°C 60 47 52 37 50°C 42 31 30 22 本紙張尺度適用中國國家標準(⑽)A4規格(210X297公爱) 13 - 1289602 A7 B7 五、發明説明(u) ' 微波加熱之牛奶。達到計分ιο(完全移除)所需要的接觸時 間(分鐘)。 Novo-配方 EPIZYME 無添加的 添加APG + SURF 無添加的 添加APG + SURF 25〇C 53 34 35 21 40°C 39 28 24 16 50°C 27 20 12 7 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 愛丁堡污物(Edinburgh Soil)。達到計分10 (完全移除)所需 要的接觸時間(分鐘)。 Novo -配方 EPIZYME 無添加的 添加APG + SURF 無添加的 添加APG + SURF 25〇C 28 21 21 19 40°C 21 15 11 9 50°C 18 14 9 7 SURF : η-十二烧基吼 口各酮(購自 International Speciality Products之Surfadone LP 300), APG :烷基聚葡萄糖苷(購自Huntsman Corporation Australia 之 ALKADET 15) 添加比例:對濃縮液添加〇.2w/w% SURF及7.5% APG。 稀釋比例:以1份濃縮液對比100份標準硬水 14 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210X297公釐) 1289602 A7 B7 五、發明説明(12 ) 結果 載於顯微鏡玻片之污物 燒焦之碎肉。達到計分8所需要的接觸時間(分鐘)。
Novo-配方 EPIZYME 無添加 6¾ 添加APG + SURF 無添加 ή 添加APG + SURF 25〇C 95 67 67 44 40°C 60 44 52 41 50°C 42 30 30 20 微波加熱之牛奶。達到計分1〇(完全移除)所需要的接觸時 間(分鐘)。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)
Novo-配方 EPIZYME 無添加的 添加APG + SURF 無添加的 添加APG + SURF 25〇C 53 37 35 24 40°C 39 26 24 15 50°C 27 18 12 12 訂丨 愛丁堡污物(Edinburgh Soil)。達到計分10(完全移除)所需 要的接觸時間(分鐘)。
Novo-配方 EPIZYME 無添加的 添加APG + SURF 無添加的 添加APG + SURF 25〇C 28 18 21 19 40°C 21 15 11 12 50°C 18 12 9 7 SURF : η-十二烧基吼略 _ (購自 International Speciality Products之Surfadone LP 300), 15 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1289602 A7 ___B7_ 五、發明説明(13) ^ APG :烧基聚葡萄糖苷(購自Huntsman Corporation Australia 之 ALKADET 15) 添加比例:對濃縮液添加l%w/w% SURF及0.1% APG。 稀釋比例:以1份濃縮液對比100份標準硬水 結果 載於顯微鏡玻片之污物 燒焦之碎肉。達到計分8所需要的接觸時間(分鐘)。
No vo-配方 EPIZYME 無添加的 添加APG + SURF 無添加的 添加APG + SURF 25〇C 95 63 67 49 40°C 60 52 52 37 50°C 42 35 30 23 微波加熱之牛奶。達到計分1〇(完全移除)所需要的接觸時 間(分鐘)。
Novo-配方 EPIZYME 無添加的 添加APG + SURF 無添加的 添加APG + SURF 25〇C 53 35 35 24 40°C 39 27, 24 16 50°C 27 24 12 9 16 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210X297公釐) Ϊ289602 A7 ^________B7_ 五、發明説明(14) " 愛丁堡污物(Edinburgh Soil)。達到計分10(完全移除)所需 要的接觸時間(分鐘)。
Novo-配方 EPIZYME 無添加的 添加APG + SURF 無添加的 添加APG + SURF 25〇C 28 23 21 20 40°C 21 17 11 9 50°C 18 12 9 7 SURF : η-十二烧基吼嘻酮(購自 International Speciality Products之Surfadone LP 300), APG :烧基聚葡萄糖苷(購自Huntsman Corporation Australia 之 ALKADET 15) 添加比例:對濃縮液添加7.5%w/w%SURF及0.1%APG。 稀釋比例:以1份濃縮液對比1〇〇份標準硬水 表4 污物組成物及清潔劑酵素活性測試 微波加熱之牛奶 —60毫升的牛奶 —6個燒杯
一台微波爐設定在450瓦 一台烤箱設定在80°C 預熱微波爐是以環狀置放6個裝滿水之燒杯於玻璃轉 盤上,令其在”強微波"(900瓦)下歷時10分鐘。然後,該盛 水之燒杯被置換成裝有亳升之牛奶。該牛奶在450瓦被加 熱10分鐘,再允其冷卻,形成一層表皮,並置放至一台設 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) -17 - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)
1289602 A7 r——-~——___£7__ 五、發明説明(~" 一 定在80°C烤箱中歷時2小時。 燒焦之碎肉:-20公克之碎牛肉 -7.5公克之蛋黃及蛋白 -8.0公克之水 30 x 30公釐之極性基材(磁磚) 冑用-具手動_器將該碎肉與蛋黃及水混合“公克 之均質混合物被§在3x3公分之磁碑的平滑面上。然後, 放置該磁磚於一台烤箱中,歷時1〇分鐘。 愛丁堡污物(Edinburgh Soil) -20公克之蛋黃 •20公克之水 -〇·5公克之膽固醇 -3克之牛肉明膠 -0.45單位之豬的黏蛋白 牛肉明膠及水被攪拌在一起,然後被加熱至得到一個 均質的混合物為止。俟明膠冷卻至3(rc後,攪拌入膽固醇、 ㈣黏蛋白及蛋黃。G.1克之污物被置放在顯微鏡玻片之表 面上。對每一組玻片而言,該抹片是以均一的厚度製成; 料度是藉由-沿每-個抹片H具之邊緣的膠帶邊緣予以 調控。為了模擬-個内視鏡清潔之條件,該玻片被置放於 流通之20°C的空氣中乾燥,歷時2〇分鐘。 I 不希望文理淪所束缚,該烷基多醣顯現可安定咄咯 酮,其組合更容易溶解於濃縮液中,而產生實質降低使用 稀釋液之表面張力的改善。 雖然本發明測試結果使用的是二烷基咄咯酮,但 I----------------- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐)"^" ---- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)
1289602 A7 B7 五、發明説明(l6) 也可以其他之烷基咄咯酮取代,特別是(:8至(::18的烷基吡 嘻酮。添加之數量可以藉由簡單之試驗予以決定,但通常 濃度增加至顯著高於本案所使用之位准時,會傾向於產生 一個較差之優點。類似地,可以其他之烷基多醣取代APG。 舉例而言,可以其他之糖單元及糖單元之衍生物取代葡萄 糖單元。再次地,一個最佳濃度是當高於此濃度時,增高 濃度會相對地具有較少之利益。雖然組合有APG2n-十二 燒基吼洛酮是較佳的,但有利之效用可以藉由於分離當中 添加至少某些污物而得到。最佳之N-dp對比apG之比例可 以藉由簡單的試驗對一個給定之濃度予以決定。本發明組 合長:供一種改良之界面活性劑系統,其被期望的是可應用 在許多最後-使用上。在供醫療器具使用之清潔劑的領域 中’本發明界面活性劑可簡單地被添加至商業上可購得之 酵素清潔產品的濃縮液中,或於使用前以一個適合之稀釋 被添加至使用溶液中。然而較佳地,本發明添加物是在製 造濃縮液期間被併入一個濃縮液中,其後該濃縮液只需在 使用前予以稀釋即可。 依據本發明之添加物可以被添加至洗碗精、手洗及其 他表面清潔組成物中。本發明具體例可以被改變,且可 在不偏離本案所揭露之本發明理念下,從本案之教示中 個對那些熟習此項技藝人士是顯易的程度添加或取代 其他化學物質。 以 以 以 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
、盯| 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210><297公董) 19 1289602 A7 B7 五、發明説明(⑺ ^ 附件1
NOVO NORDISK B 836b-GB 測定於酵素製劑及清潔劑中蛋白質分解活性之實驗方法 (含氮酪蛋白受質) 此方法之說明圖被顯示於第1圖中。 原理 一個蛋白酶被允於40°C下水解含氮蛋白,歷時30分 鐘。未分解之蛋白質以三氯乙酸沉澱,然後以分光光度計 測定分解之產物的數量。 酵素單位之定義 沒有分別之單位定義。活性是以相對於一種標準已知 活性予以測定,且所產生之結果給予與標準相同之單位。 分析條件 酸鹼值: 8.5(0.2 M Tds-S04缓衝液)
溫度: 40°C 受質: 0.5%含氮酪蛋白 反應時間:30分鐘 儀器 用以讀取390 nm吸光值之分光光度計 酸鹼值測定儀 溫度40°C · 〇.5°C之水浴槽 具有秒針之計時器 振盪混合器 16 · 125釐米之試管 20 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1289602 A7 B7 五、發明説明(18) " 重複式分裝器,容量5毫升 小漏斗及濾紙,惠特曼(Whatman)3號或對等物 試劑 1.20 Μ之Tris缓衝液儲備溶液 溶解242克之三經基甲基胺基甲烧(Sigma"Trizma Base" T-1503或對等物)於700-800毫升的去離子水中。 以10N硫酸(H2S04)調整酸鹼值至8.5。 調整體積至1公升。 此濃度將以10毫升/100毫升體積被使用於所有以0.2M Tris緩衝液稀釋之最終稀釋液中。 2.5%之尿素溶液 溶解50克尿素(分析級)於50毫升之溫熱的去離子水 中。 調整體積至1公升。 3· 10%之三氣乙酸溶液(終止試劑) 溶解100克之三氣乙酸(TCA)於200毫升之去離子水 中。 調整體積至1公升。, 4.含氮酪蛋白(受質溶液) 每日製備新鮮的,丟棄任何未使用之受質。 於一個250毫升之燒杯内: 稱重0.6克之酪蛋白(Sigma A-2765)。 添加10毫升之50%的尿素溶液,並混合直至溶解。 添加10毫升之2M的Tds緩衝液儲備溶液。 21 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1289602 A7 ----- B7_ 五、發明説明(19) . 添加30-50毫升的去離子水,並持續攪拌直至顆粒清 除。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 使用稀釋之硫酸調整酸驗值至8·5。調整體積至毫 升,並完全地混合。 保持冰冷直至開始分析。 5·酵素樣品及標準液 參閱附錄I之Alcalase®、附錄π之Esperase®及 SaVinase㊣、以及附錄niiDurazym㊣。 於溶解用以於蛋白酶分析法之清潔劑後,建議最好是 檢測此溶液之酸驗值’如為所需,予以調整至8·5 〇·ι單 元。 設若需要知道一個清潔劑中確實之蛋白酶活性位 准,除非已知所使用之該特定配方對該蛋白酶活性沒有作 用’否則該清潔劑之鹼基應該被包含於標準溶液中。鹼性 清潔劑之濃度應該等於被使用於包含蛋白酶之清潔劑之樣 品溶液者。 溶液中存在有強螯合劑:例如ΝΤΑ或EDTA時,可能會 導致該蛋白酶在製備供用於分析法之各種不同材料所需經 歷的期間内去活性。此去活性之原因可以藉由添加過多的 鈣至樣品溶液中予以克服。 方法 1·預熱水浴槽至40°c± 0.5°C (大約1小時)。 2·於分析前大約1小時,置放受質溶液至4〇°C水浴槽中予 本紙張尺度適用中國國家標準(哪)A4規格(210X297公釐) -22 - 1289602
以平衡。 3·吸取1毫升之樣品或酵素標準液至適當標記之試管 内,然後於水浴槽中平衡至4〇。〔:(大約i分鐘卜 4·開始反應: 在準確的時間間隔’添加5毫升受質溶液至每-個包含 有樣品或標準液之試管内,振盪並送回水浴中置放3〇 分鐘。 空白樣品: 對空白樣品添加5亳升之1〇%三氯乙酸(TCA)並振盪;然 後添加5亳升之受質溶液,振盪並令其靜置於室溫下, 直至過渡。 5 ·終止反應: 於歷時準30分鐘後,與之前相同的時間間隔下,添加5 亳升之10%三氣乙酸(TCA)並振盪;然後令其靜置於室 溫下。 6·於歷時15·20分鐘後,以重力過濾法通過濾紙過濾所有 的試管至乾淨、乾燥並適當標記之試管中。 7·頃取對比去離子水空白樣品之39〇 nm的吸光值。 計算 1 ·標準曲線·· a) 5又右標準空白樣品(A〇、E〇或So) > 0.16,則分析法 必須以新鮮的受質重新操作。 )β又右4示準空白樣品< 〇· 16,則由標準樣品扣除 讀值來得到•吸光值。 23 、、張尺度適用中國國家檩準(⑽)Μ規格(之獻撕公楚) r1289602 A7 B7 五、發明説明( 以•吸光值對比蛋白質分解活性作圖(AU或KNPU/ 試管=AU或KNPU/最終稀釋之毫升數)。 2·樣品試管: 空白 使用標準曲線,決定每一個樣品/試管之活^活忖/公克—(活性/試管)·(稀釋倍數) 樣品之公克數 性 圖式之簡單說明 第1圖係顯示用於測定酵素製劑及清潔劑中蛋 解活性之實驗方法。 白質分 m* In— » m^l IP - ϋϋ ml .....ϋ— I s (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} 、11 舞 經濟部口芡工消費合作社印製 智慧財產局 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(210X297公釐) 24 1289602 A7 B7 五、發明説明(22) 附錄I Alcalase® (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 單位定義:Anson單位(AU) 1 Anson單位=以每分鐘釋放與百萬分之一當量之酷胺 酸與酚紅試劑所產生之顏色相同之可溶於TCA產物的 起始速率切割血紅素A之酵素數量*。 *於NNSA方法AF4/5-GB :修改之用以測定蛋白質活性 的Anson-血紅素方法所給定之反應條件下。 一個標準曲線之製備是使用一種活性之Anson單位為 已知者。再將未知與此曲線比較。 缓衝液:0.2 M Tris,酸鹼值8.5 樣品活性範圍:5 · 10·5—15 · 10_5 AU/毫升 標準空白:1毫升之0.2厘1^3緩衝液酸鹼值=8.5=八〇 受質:含氮酪蛋白溶液,0.5%,酸鹼值8.5 樣品製備: 溶解精確稱量之樣品數量至一個確實已知體積之0.2 M Tris緩衝液中,藉此使該溶液包含有居於5 · 10_5 -15 · 10·5 AU/毫升,且具有一個酸鹼值是8.5 〇 N.B.對每一個未知活性,製備一個空白樣品及一個或 數個重複(如為所需)。 保持該溶液在冰上,直至分析。 標準曲線 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) -25 - 1289602 A7 B7 五、發明説明(23 ) 酵素標準儲備溶液:溶解精確稱量標準之Alcalase於 一個100毫升之0.2 M Tris緩衝液(酸鹼值8.5)中,俾 以產生2.6 · 10_3 AU/毫升 以下列稀釋該儲備溶液: 試管 標記 儲備 溶液 2Μ Tris緩衝液 的儲備溶液 最終體積 活性 A〇 〇毫升 10毫升 100毫升 0.0 · 10_5 AU/毫升 A! 1毫升 10毫升 100毫升 2.6 · 10·5 AU/毫升 a2 2毫升 10毫升 100毫升 5.2 · 1(T5 AU/毫升 a3 3毫升 10毫升 100毫升 7.8 · ΗΓ5 AU/毫升 A4 4毫升 10毫升 100毫升 10·4 · 10·5 AU/毫升 A5 5毫升 10毫升 100毫升 13.0 · 10-5 AU/毫升 Αό 6毫升 10毫升 100毫升 15·6 · 10·5 AU/毫升 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 26 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)
1289602 A7 B7 五、發明説明(24 )
附錄II
Savinase ⑧/Esperase® 單位定義:一千個Novo蛋白酶單位(KNPU)
1 KNPU= 1000 NIPU 1個Novo蛋白酶單位(NPU) =以相等於1微莫耳/分鐘之 形成胜六/分鐘的起始速率水解酪蛋白之酵素數量*。 *於NNSA方法162/3-GB :用以測定蛋白質切割活性之 手動DMC方法所給定之反應條件下。 一個標準曲線之製備是使用一種活性之KNPU為已知 者。再將未知與此曲線比較。 緩衝液:0.2 M Tris,酸鹼值8.5 樣品活性範圍:2 · 10·4-6 · 10_4 KNPU/毫升 標準空白:1毫升之0.2 M Tds緩衝液酸鹼值8·5 = Ε〇 或S〇 受質:含氮酪蛋白溶液,0.5%,酸鹼值8.5 樣品製備: 溶解精確稱量之樣品數量至一個確實已知體積之0.2 M Tris緩衝液中,藉此使該溶液包含有居於2 · 10·4-6 · 10·4 KNPU/毫升,且具有一個酸鹼值是8.5。 N.B.對每一個未知活性,製備一個空白樣品及一個或 數個t複(如為所需)。 保持該溶液在冰上,直至分析。 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 27 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
1289602 A7 _B7 _ 五、發明説明(25 ) 標準曲線 酵素標準儲備溶液:溶解精確稱量標準之Savinase或 Esperase於一個100毫升之0·2 M Tris緩衝液(酸驗值 8.5)中,俾以產生1 · 1(T2 KNPU/毫升 以下列稀釋儲備溶液: (請先閲讀背面之注意事項再勒寫本頁)
訂— §4 試管 標記 儲備 溶液 2M Tris緩衝液 的儲備溶叙 最終體積 活性 Ε〇 或 S〇 〇毫升 10毫升 100毫升 0.0 · 10_4 AU/毫升 E14S1 1毫升 10毫升 100亳升 1.0 · 10_4 AU/毫升 E2 或 S2 2毫升 10毫升 100毫升 2.0 · 10-4 AU/毫升 E3 或 S3 3毫升 10毫升 100毫升 3.0 · 10-4 AU/毫升 E4 或 S4 4毫升 10毫升 100毫升 4.0 · 10_4 AU/毫升 E5 或 S5 5毫升 10毫升 100毫升 5.0 · HT4 AU/毫升 E6 或 S6 6毫升 10毫升 100毫升 6.0 · 1(T4 AU/毫升 E = Esperase ,S = Savinase 28 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4规格(210X297公釐) 1289602 A7 _ B7 _ 五、發明説明(26 ) 附錄III Durazym® 單位定義:Durazym蛋白酶單位(DPU) 活性是以相對於一個Durazym標準測定,與樣品具有相 同單位(即DPU)。 一個標準曲線之製備是使用一種活性之DPU為已知 者。再將未知與此曲線比較。 缓衝液:0.2 M Tris,酸鹼值8.5 樣品活性範圍:6 · 10-4-18 · 10·4 DPU/毫升 標準空白:1毫升之0.2MTris緩衝液酸鹼值8.5 = D〇 受質:含氮酪蛋白溶液,0.5%,酸鹼值8.5 樣品製備: 溶解精確稱量之樣品數量至一個確實已知體積之0.2 M Tds緩衝液中,藉此使該溶液包含有居於6 · 10·4-18 · 10_4 DPU /毫升,且具有一個酸鹼值是8.5。 Ν.Β.對每一個未知活性,製備一個空白樣品及一個或 數個重複(如為所需)。 保持該溶液在冰上,直至分析。 標準曲線 酵素標準儲備溶液:溶解精確稱量之標準Alcalase於 一個100毫升之0.2 M Tds緩衝液(酸鹼值8.5)中,俾 以產生1 · 1〇-2 DPU/毫升 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 29 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)
、可I :§4 試管 標記 儲備 溶液 2M Tris緩衝 液的儲備溶液 最終體積 活性 D〇 〇毫升 10毫升 100毫升 0·0 · 10-4 AU/毫升 D! 3毫升 10毫升 100毫升 3.0 · Hr4 AU/毫升 d2 6毫升 10毫升 100毫升 6.0 · 10·4 AU/毫升 d3 9毫升 10毫升 100毫升 9.0 · 10-4 AU/毫升 d4 12毫升 10毫升 100毫升 12.0 · 10-4 AU/毫升 d5 15毫升 10毫升 100毫升 15.0 · 1(T4 AU/毫升 d6 18毫升 10毫升 100毫升 18.0 · 10-4 AU/毫升 1289602 A7 __B7 五、發明説明(27 ) 以下列稀釋該儲備溶液: 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 30 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)
Claims (1)
1講 9a .應 六、申請專利範圍 第90121660號專利再審查案申請專利範圍修正本 修正日期:96年7月
1· 一種用以增進一供清洗醫療器具用之一含酵素清潔溶 液的效能的水性組成物,其包含有呈組合形式之一種烷 基吡咯酮及一種烷基多醣,其中該清潔溶液之效用係被 增進以供用於25-50C的溫度下’其中該烧基p比洛蒙J是 一個C8-C18直鏈烧基咄咯酮,而該烷基多醣是一個烷 基聚葡萄糖苷。 2·如申請專利範圍第1項之組成物,其中該烷基咄咯酮係 為η-十二烧基咄洛酮。 3 ·如申請專利範圍第1項之組成物,其中烧基吼洛酮相對 於烷基多醣之比例是介於1份重量計的烷基咄咯酮:3 份重量計的烷基多醣以及3份重量計的烷基吡咯酮:1 份重量計的烷基多醣之間。
4.如申請專利範圍第3項之組成物,其中烷基吡咯酮相對 於烷基多醣之比例是介於1份重量計的烷基吡咯酮:3 份重量計的烷基多醣以及1份重量計的烷基吡咯酮:1 份重量計的烷基多醣之間。 5·如申請專利範圍第4項之組成物,其包含1份重量計之烷 基吼咯酮·· 1份重量計之烷基多醣。 6.如申請專利範圍第1項之組成物,其又包含至少一種酵 素。 7·如申請專利範圍第6項之組成物,其包含至少一種酵素 選自於由蛋白酶、脂肪酶、澱粉酶及纖維素酶所組成的 31 1289602
六、申請專利範圍 群組中。 8·如申請專利範圍第7項之組成物,其包含至少兩種不同 的酵素各自選自於由蛋白酶、脂肪酶、澱粉酶及纖維素 峰所組成的群組中。 9·如申請專利範圍第6項之組成物,其又包含有丙二醇。 10·如申请專利範圍第6項之組成物,其又包含有一種非離 子性界面活性劑。 11 ·如申請專利範圍第6項之組成物,其中烷基多醣是以一 個低於7.5 %w/w之濃度存在。 12·如申請專利範圍第11項之組成物,其中烷基多醣是以一 個低於0.3 %w/w之濃度存在。 3 ·如申研專利範圍苐6項之組成物,其中烧基π比洛_是以 一個低於7.5 %w/w之濃度存在。 4.如申印專利範圍弟13項之組成物,其中烧基吼p各酮|是以 一個低於0.3 %w/w之濃度存在。 15·種用以增進一供清洗醫療器具用之含酵素組成物的 效用的方法,該方法包含之步驟為將一種烷基吡咯酮及 一種烷基多醣包含於該組成物内,其中該清潔組成物係 使用於25-50 C之溫度,且其中該烧基咄咯酮是一個 C8-C18直鏈烷基咄咯酮,而該烷基多醣是一個烷基聚 葡萄糖苷。 16·如申請專利範圍第15項之方法,其中該烷基咄咯酮是& 十二烷基吡咯酮。 17.如申请專利範圍第15項之方法,其中一種烧基吼哈嗣及
32 1289602
/、、申請專利範圍
組成物中。 至一種含有酵素之 其中一種烷基吡咯酮及 一種含有酵素之組成物 如申請專利範圍第15項之方法: 一種烷基多醣被分開地添加至 物是一種濃縮液,且該烷基咄咯酮及一 如申請專利範圍第17項之方法,其中該含有酵素之組成 一種烷基多醣是於 该濃縮液稀釋至一個使用強度之前被添加。 20·如申請專利範圍第15項之方法,其中一種坑基吼洛g同及 一種烷基多醣各自被配方成與一或數種酵素相組合,俾 以產生一種適合供用於稀釋以提供一種酵素清洗溶液 之濃縮液。 21·—種用以清潔一個醫療器具之方法,該方法包含之步驟 為以一種包含有至少一種酵素、一種烷基吡咯酮及一種 燒基多醣之組成物於25-5(TC之溫度處理該器具,其中 該烷基吼咯酮是一個C8-C18直鏈烷基吡咯酮,而該烷 基多醣是一個烷基聚葡萄糖苷。 22·如申請專利範圍第21項之方法,其中該烷基咄咯酮是一 個η-十二烷基吼咯酮。 23.如申請專利範圍第21項之方法,其中烷基吼咯酮相對於 烷基多醣之比例是介於1份重量計的烷基咄咯酮:3份重 量計的烧基多醣以及3份重量計的烧基吼α各酮:1份重量 計的烷基多醣之間。 24·如申請專利範圍第23項之方法,其中烷基吼咯酮相對於 33 1289602 六、申請專利範圍 烷基多醣之比例是介於1份重量計的烷基吼咯酮:3份重 量計的烷基多醣以及1份重量計的烷基咄咯酮:1份重量 計的烧基多SS之間。 25.如申請專利範圍第21項之方法,其包含1份重量計的烷 基吼洛酮:1份重量計的烧基多醣。 34
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