JP2012072409A - 界面活性剤系 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】C8〜C18の線形アルキルピロリドンのようなアルキルピロリドンと、アルキルポリグルコシドのようなアルキルポリサッカリドとの組み合わせを含む水性組成物、及び、医療器具の洗浄に用いるための酵素含有組成物の効力を高める方法であって、前記組成物にアルキルピロリドンとアルキルポリサッカリドとを含ませるステップを含む方法に関する。本発明の方法及び組成物は、プロテアーゼ、リパーゼ、アミラーゼ、及びセルラーゼのような、少なくとも1種類の酵素をさらに含んでいてもよい。
【選択図】なし
Description
成分 %w/w
非イオン界面活性剤(テリック(Teric) BL9) 12
プロピレングリコール 22
トリエタノールアミン 7
ホウ酸 4
塩化カルシウム 0.1
サビナーゼ(Savinase) 16.0L(プロテアーゼ) 13
ターマミル(Termamyl)(アミラーゼ) 7
水 100とするまで
pH 7
成分 %w/w
水道水 19.0
テリック BL9(非イオン界面活性剤) 10.0
防腐剤 0.15
酵素安定剤 6.0
50%苛性ソーダ 2.5
プロピレングリコール 6.0
プロテアーゼ 10.0
リパーゼ 0.2
アミラーゼ 1.5
セルラーゼ 0.5
香料 0.15
水 100とするまで
汚れの組成及び洗剤の酵素活性度試験
電子レンジで加熱した牛乳:・牛乳60ml
・ビーカー6個
・450Wに設定した電子レンジ
・80℃に設定したオーブンヒーター
水を満たした6個のビーカーをガラス製のターンテーブル上に輪になるように置き、「高温」(900W)で10分間放置することによって、電子レンジを予熱した。次に、これらの水の入ったビーカーを、それぞれ牛乳が10ml入ったビーカーに置き換えた。この牛乳を、450Wで10分間加熱した後、冷却して、膜を形成させ、80℃のオーブンに2時間入れた。
ひき肉:・牛ひき肉20グラム
・卵黄及び卵白7.5グラム
・水8.0グラム
・30×30mmの極性基体(セラミックタイル)
ハンドブレンダーを用いて、ひき肉を卵黄及び水と混ぜ合わせた。均質化した混合物1gを、3×3cmのセラミックタイルの滑面側に、スプーンですくって載せた。次に、このタイルを10分間オーブンに入れておいた。
エディンバラの土:・卵黄20g
・水20g
・コレステロール0.5g
・牛ゼラチン3g
・豚ムチン0.45g
牛ゼラチンと水とを混ぜ合わせ、この混合物が均質になるまで加熱した。このゼラチンを30℃まで冷却した後、これに、コレステロール、豚ムチン、及び卵黄を混ぜ入れた。この汚物0.1gを、顕微鏡用スライドの表面上に付着させた。各組のスライドに対して、この付着物を均一な厚さにした。即ち、付着させる器具の各縁に沿って貼ってある粘着テープの縁によって、厚さを調整した。内視鏡洗浄の状態をシミュレートするために、このスライドを20℃の開放空気に20分間放置して乾燥させた。
ノボ・ノルディスク B 863b−GB
酵素製剤及び洗剤(アゾカゼイン基質)におけるタンパク質分解活性度を測定するための手順
プロテアーゼによって、アゾカゼインを40℃で30分間加水分解させる。蒸解されなかったタンパク質をトリクロロ酢酸で沈殿させ、蒸解された生成物の量を分光測光法によって測定する。
・酵素単位の定義
別の単位は定義しない。活性度は、既知の活性度の標準に関して測定し、その結果は、この標準に対して用いられたのと同じ単位で示す。
・検定条件
pH: 8.5(0.2Mのトリス−SO4緩衝液)
温度: 40℃
基質: 0.5%のアゾカゼイン(反応混合物中)
反応時間: 30分間
・装置
390nmにおける吸光度を読み取るための分光光度計
pH計
40℃・0.5℃の水浴
秒針の付いたタイマー
ボルテックス・ミキサー
16・125mmの試験管
5ml容量の反復ディスペンサー
ワットマン(Whatman)no.3又はそれと同等の小型漏斗及び濾紙
・試薬
1)2.0Mのトリス緩衝原液
脱イオン水700〜800mlに、トリスヒドロキシメチルアミノメタン(シグマ(Sigma)「トリズマベース(Trizma Base)」T−1503又はそれと同等のもの)242gを溶解させる。
10NのH2SO4を用いて、pHを8.5に調整する。
容量を1リットルに調整する。
この濃縮物は、0.2Mのトリス緩衝液を含む全ての最終稀釈物100ml容量に対し、10mlの割合で用いるべきである。
2)50%の尿素溶液
温かい脱イオン水50mlに、尿素(分析用)50gを溶解させる。
容量を1リットルに調整する。
3)10%のトリクロロ酢酸溶液(停止試薬)
脱イオン水200mlに、トリクロロ酢酸(TCA)100gを溶解させる。
容量を1リットルに調整する。
4)アゾカゼイン(基質溶液)
250mlビーカーを毎日きれいにする。つまり、使用しなかった基質はいずれも廃棄する。
アゾカゼイン(シグマ A−2765)0.6gを計量する。
50%の尿素溶液10mlを添加し、溶解するまで混合する。
2.0Mのトリス緩衝原液10mlを添加する。
脱イオン水30〜50mlを添加し、粒子が無くなるまで攪拌を続ける。
稀釈したH2SO4を用いて、pHを8.5に調整する。容量を100mlに調整し、完全に混合する。
検定を始められる状態になるまで、冷却しておく。
5)酵素試料及び標準
アルカラーゼ(Alcalase)(登録商標)については付録Iを、エスペラーゼ(Esperase)(登録商標)及びサビナーゼ(登録商標)については付録IIを、デュラザイム(Durazym)(登録商標)については付録IIIを参照。
プロテアーゼ検定のための洗剤試料を溶解した後、この溶液のpHを確認し、必要であれば、8.5・0.1単位に調整することを強く推奨する。
洗剤におけるプロテアーゼの正確な活性レベルが知りたいのであれば、使用されている特定の製剤がプロテアーゼの活性度に全く影響を及ぼさないということが既にわかっている場合を除き、洗剤の基剤は標準液に含めるべきである。洗剤の基剤の濃度は、プロテアーゼを含む洗剤の試料液において用いられる濃度に等しいのがよい。
溶液中にNTA又はEDTAのような強キレート化剤が含まれていると、検定のために様々な材料を調製するのに必要な時間にわたって、プロテアーゼが失活することがある。この失活は、試料液にカルシウムを余分に加えることによって克服することができる。
・手順
1)水浴を40℃±0.5℃に予熱する(およそ1時間)。
2)検定を始める前のおよそ10分間、基質溶液を40℃の水浴に入れて平衡させる。
3)適切にラベルが貼られた試験管に、試料又は酵素標準液1mlをピペットで入れ、水浴において40℃に平衡させる(およそ1分間)。
4)反応開始:
正確な時間間隔で、試料又は標準液の入った各試験管に基質溶液5mlを添加し、渦動し、水浴に30分間戻す。
試料ブランク:
試料ブランクに10%のTCA5mlを添加して渦動し、次に、基質溶液5mlを添加して渦動し、濾過できる状態になるまで室温で放置しておく。
5)反応停止:
きっかり30分後、即ち、前と同じ時間間隔で、試料又は標準液の入った各試験管に10%のTCA5mlを添加して渦動し、室温で放置しておく。
6)15〜20分後、全ての試験管の溶液を、重力濾過により、濾紙を通して、新しくて乾いており且つ適切にラベルが貼られた試験管に濾過する。
7)脱イオン水ブランクに対し、390nmにおける吸光度を読み取る。
・計算
1.標準曲線:
a)標準ブランク(blank)(A0、E0、又はS0)>0.16である場合、検定は新しい基質でやり直すべきである。
b)標準ブランク<0.16である場合、標準からそのA390読取り値を引いて、・吸光度を得る。
c)・吸光度対タンパク質分解活性度(AU又はKNPU/管=AU又はKNPU/最終稀釈物のml)の曲線を描く。
2.試料(sample)管:
・吸光度=Asample−Ablank
標準曲線を用いて、試料/管の活性度を測定する。
アルカラーゼ(登録商標)
単位の定義:アンソン単位(AU:Anson Unit)
1アンソン単位=フェノール試薬で1ミリ当量のチロシンと同じ色をもたらすTCA可溶生成物の量が1分当たり遊離されるような初速度で、ヘモグロビンAを蒸解する酵素*の量
*NNAS法 AF4/5−GB、即ち、タンパク質分解活性度の測定のための改良アンソン−ヘモグロビン法(Modified Anson-Haemoglobin Method for the Determination of Proteolytic Activity)において規定された反応条件に基づく。
アンソン単位における活性度がわかっている酵素を用いて、標準曲線を作製する。
次に、活性度がわかっていないものを、この曲線と比較する。
緩衝液:0.2Mのトリス、pH8.5
試料活性度範囲:5・10-5〜15・10-5AU/ml
標準ブランク:0.2Mのトリス緩衝液1ml、pH8.5=A0
基質:アゾカゼイン溶液、0.5%、pH8.5
試料の調製:
溶液の活性度が5・10-5〜15・10-5AU/mlとなり且つ溶液のpHが8.5となるように、正確にわかっている容量の0.2Mのトリス緩衝液に、正確に計量した量の試料を溶解させる。
N.B.活性度がわかっていないものに対してそれぞれ、1つの試料ブランクと、(必要に応じて)1つ以上の複製とを調製する。
検定できる状態になるまで、溶液を氷上に放置する。
標準曲線
酵素標準原液:活性度が2.6・10-3AU/mlとなるように、0.2Mのトリス緩衝液(pH8.5)100mlに、正確に計量したアルカラーゼ標準液を溶解させる。
以下のように、原液を稀釈する。
サビナーゼ(登録商標)/エスペラーゼ(登録商標)
単位の定義:キロ・ノボ・プロテアーゼ単位(KNPU:Kilo Novo Protease Unit)
1KNPU=1000NIPU
1ノボ・プロテアーゼ単位(NPU)=1分当たりのペプチド生成初速度が1分当たりグリシン1マイクロモルに相当するような速度で、カゼインを加水分解する酵素*の量
*NNAS法 162/3−GB、即ち、タンパク質分解活性度の測定のための手動DMC法(Manual DMC Method for the Determination of ProteolyticActivity)において規定された標準条件
KNPU単位における活性度がわかっている酵素を用いて、標準曲線を作製する。
次に、活性度がわかっていないものを、この曲線と比較する。
緩衝液:0.2Mのトリス、pH8.5
試料活性度範囲:2・10-4〜6・10-4KNPU/ml
標準ブランク:0.2Mのトリス緩衝液1ml、pH8.5=E0又はS0
基質:アゾカゼイン溶液、0.5%、pH8.5
試料の調製:
溶液の活性度が2・10-4〜6・10-4KNPU/mlとなり且つ溶液のpHが8.5となるように、正確にわかっている容量の0.2Mのトリス緩衝液に、正確に計量した量の試料を溶解させる。
N.B.活性度がわかっていないものに対してそれぞれ、1つの試料ブランクと、(必要に応じて)1つ以上の複製とを調製する。
検定できる状態になるまで、溶液を氷上に放置する。
標準曲線
酵素標準原液:活性度が1・10-2KNPU/mlとなるように、0.2Mのトリス緩衝液(pH8.5)100mlに、正確に計量したサビナーゼ又はエスペラーゼ標準液を溶解させる。
以下のように、原液を稀釈する。
デュラザイム(登録商標)
単位の定義:デュラザイム・プロテアーゼ単位(DPU:Durazym Protease Unit)
デュラザイム標準液に関し、試料と同じ単位、即ちDPUで、活性度を測定する。
DPUにおける活性度がわかっている酵素を用いて、標準曲線を作製する。
次に、活性度がわかっていないものを、この曲線と比較する。
緩衝液:0.2Mのトリス、pH8.5
試料活性度範囲:6・10-4〜18・10-4DPU/ml
標準ブランク:0.2Mのトリス緩衝液1ml、pH8.5=D0
基質:アゾカゼイン溶液、0.5%、pH8.5
試料の調製:
溶液の活性度が6・10-4〜18・10-4DPU/mlとなり且つ溶液のpHが8.5となるように、正確にわかっている容量の0.2Mのトリス緩衝液に、正確に計量した量の試料を溶解させる。
N.B.活性度がわかっていないものに対してそれぞれ、1つの試料ブランクと、(必要に応じて)1つ以上の複製とを調製する。
検定できる状態になるまで、溶液を氷上に放置する。
標準曲線
酵素標準原液:活性度が1・10-2DPU/mlとなるように、0.2Mのトリス緩衝液(pH8.5)100mlに、正確に計量したデュラザイム標準液を溶解させる。
以下のように、原液を稀釈する。
サビナーゼ(登録商標)/エスペラーゼ(登録商標)
単位の定義:キロ・ノボ・プロテアーゼ単位(KNPU:Kilo Novo Protease Unit)
1KNPU=1000NPU
1ノボ・プロテアーゼ単位(NPU)=1分当たりのペプチド生成初速度が1分当たりグリシン1マイクロモルに相当するような速度で、カゼインを加水分解する酵素*の量
*NNAS法 162/3−GB、即ち、タンパク質分解活性度の測定のための手動DMC法(Manual DMC Method for the Determination of Proteolytic Activity)において規定された標準条件
KNPU単位における活性度がわかっている酵素を用いて、標準曲線を作製する。
次に、活性度がわかっていないものを、この曲線と比較する。
緩衝液:0.2Mのトリス、pH8.5
試料活性度範囲:2・10-4〜6・10-4KNPU/ml
標準ブランク:0.2Mのトリス緩衝液1ml、pH8.5=E0又はS0
基質:アゾカゼイン溶液、0.5%、pH8.5
試料の調製:
溶液の活性度が2・10-4〜6・10-4KNPU/mlとなり且つ溶液のpHが8.5となるように、正確にわかっている容量の0.2Mのトリス緩衝液に、正確に計量した量の試料を溶解させる。
N.B.活性度がわかっていないものに対してそれぞれ、1つの試料ブランクと、(必要に応じて)1つ以上の複製とを調製する。
検定できる状態になるまで、溶液を氷上に放置する。
標準曲線
酵素標準原液:活性度が1・10-2KNPU/mlとなるように、0.2Mのトリス緩衝液(pH8.5)100mlに、正確に計量したサビナーゼ又はエスペラーゼ標準液を溶解させる。
以下のように、原液を稀釈する。
Claims (29)
- アルキルピロリドンとアルキルポリサッカリドとの組み合わせを含む水性組成物。
- 前記アルキルピロリドンが、C8〜C18の線形アルキルピロリドンである、請求項1に記載の組成物。
- 前記アルキルポリサッカリドが、アルキルポリグルコシド(「APG」)である、請求項1又は2に記載の組成物。
- 前記アルキルピロリドンが、n−ドデシルピロリドン(「n−DP」)である、請求項1〜3のうちのいずれか一項に記載の組成物。
- 前記アルキルピロリドンと前記アルキルポリサッカリドの割合が、アルキルピロリドン1重量部:アルキルポリグルコシド3重量部〜アルキルピロリドン3重量部:アルキルポリグルコシド1重量部である、請求項1〜4のうちのいずれか一項に記載の組成物。
- 前記アルキルピロリドンと前記アルキルポリサッカリドの割合が、アルキルピロリドン1重量部:アルキルポリグルコシド3重量部〜アルキルピロリドン1重量部:アルキルポリグルコシド1重量部である、請求項1〜5のうちのいずれか一項に記載の組成物。
- n−ドデシルピロリドン約1重量部とアルキルポリグルコシド約1重量部とを含む、請求項1〜6のうちのいずれか一項に記載の組成物。
- 医療器具の洗浄に用いるための酵素含有組成物の効力を高める方法であって、前記組成物にアルキルピロリドンとアルキルポリサッカリドとを含ませるステップを含む方法。
- 請求項1〜6のうちのいずれか一項に記載の組み合わせを酵素含有組成物に添加する、請求項8に記載の方法。
- アルキルピロリドンとアルキルポリサッカリドとを酵素含有組成物に別々に添加する、請求項9に記載の方法。
- 前記酵素含有組成物が濃縮物であり、前記アルキルピロリドン及び前記アルキルポリサッカリドを前記濃縮物に、使用強さに稀釈する前に添加する、請求項9〜10のうちのいずれか一項に記載の方法。
- アルキルピロリドンとアルキルポリサッカリドとをそれぞれ1種類以上の酵素と組み合わせて調合し、稀釈に適した濃縮物を生成することによって、酵素洗浄液をもたらす、請求項8に記載の方法。
- 少なくとも1種類の酵素、アルキルピロリドン、及びアルキルポリサッカリドを含有する組成物で、医療器具を処理するステップを含む、医療器具洗浄方法。
- 前記アルキルピロリドンが、C8〜C18の線形アルキルピロリドンである、請求項13に記載の方法。
- 前記アルキルポリサッカリドが、アルキルポリグルコシド(「APG」)である、請求項13又は14に記載の方法。
- 前記アルキルピロリドンが、n−ドデシルピロリドン(「n−DP」)である、請求項13〜15のうちのいずれか一項に記載の方法。
- 前記アルキルピロリドンと前記アルキルポリサッカリドの割合が、アルキルピロリドン1重量部:アルキルポリグルコシド3重量部〜アルキルピロリドン3重量部:アルキルポリグルコシド1重量部である、請求項13〜16のうちのいずれか一項に記載の方法。
- 前記アルキルピロリドンと前記アルキルポリサッカリドの割合が、アルキルピロリドン1重量部:アルキルポリグルコシド3重量部〜アルキルピロリドン1重量部:アルキルポリグルコシド1重量部である、請求項13〜17のうちのいずれか一項に記載の方法。
- n−ドデシルピロリドン約1重量部とアルキルポリグルコシド約1重量部とを含む、請求項12〜15のうちのいずれか一項に記載の方法。
- 少なくとも1種類の酵素をさらに含む、請求項1〜7のうちのいずれか一項に記載の組成物。
- プロテアーゼ、リパーゼ、アミラーゼ、及びセルラーゼから成る群から選択される、少なくとも1種類の酵素を含む、請求項20に記載の組成物。
- プロテアーゼ、リパーゼ、アミラーゼ、及びセルラーゼから成る群からそれぞれ選択される、少なくとも2種類の異なる酵素を含む、請求項21に記載の組成物。
- プロピレングリコールをさらに含む、請求項20〜22のうちのいずれか一項に記載の組成物。
- 非イオン界面活性剤をさらに含む、請求項20〜23のうちのいずれか一項に記載の組成物。
- APGが7.5%w/w未満の濃度で含まれている、請求項20〜24のうちのいずれか一項に記載の組成物。
- n−DPが7.5%w/w未満の濃度で含まれている、請求項20〜25のうちのいずれか一項に記載の組成物。
- APGが0.3%w/w未満の濃度で含まれている、請求項20〜26のうちのいずれか一項に記載の組成物。
- n−DPが0.3%w/w未満の濃度で含まれている、請求項20〜27のうちのいずれか一項に記載の組成物。
- 本明細書中において例のうちのいずれか1つに関して実質的に説明した組成物。
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