ES2275718T3

ES2275718T3 - Sistema tensioactivo.

Info

Publication number: ES2275718T3
Application number: ES01964733T
Authority: ES
Inventors: Steven Kritzler; Alex Sava
Original assignee: Novapharm Research Australia Pty Ltd
Current assignee: Novapharm Research Australia Pty Ltd
Priority date: 2000-09-01
Filing date: 2001-08-30
Publication date: 2007-06-16
Anticipated expiration: 2021-08-30
Also published as: US6939836B2; BR0113783A; PT1313832E; CN1247754C; KR100894491B1; US20030220222A1; AUPQ984400A0; KR20080042943A; EP1313832A4; HK1055604A1; TWI289602B; MY140244A; AU2005100493A4; WO2002018530A9; EP1313832B1; DK1313832T3; JP2012072409A; DE60123812T2; WO2002018530A1; BR0113783B1

Abstract

Composición acuosa que comprende en combinación una alquilpirrolidona y un alquilpolisacárido.

Description

Sistema tensioactivo.

Campo técnico

La invención se refiere a un sistema tensioactivo para su uso en composiciones acuosas y más particularmente a un sistema tensioactivo para su uso en, o su adición a, preparaciones de limpiezas acuosas a base de enzimas. La invención tiene una ventaja particular cuando se emplea en preparaciones de limpieza a base de enzimas concebidas para su uso para limpiar instrumental médico.

Antecedentes de la técnica

La invención se describe en el presente documento con referencia particular a composiciones para limpiar instrumental médico, pero no se limita a ese uso. Tal como se utiliza en el presente documento el término "instrumental médico" pretende incluir en términos generales instrumental quirúrgico tal como bisturíes, instrumental para biopsia, pinzas, endoscopios, colonoscopios, laparoscopios y otra parafernalia utilizada para la intervención o investigación quirúrgica; y otro instrumental utilizado en la práctica de la medicina, cirugía y odontología que requieren limpieza, desinfección o esterilización. El término también pretende incluir instrumental que tiene necesidades de limpieza similares tales como los utilizados en peluquería, tratamientos cosméticos, tatuajes, piercings corporales así como otras aplicaciones en las que se requiere la eliminación de sebo humano/animal y/o de una secreción corporal. Mucho instrumental médico está compuesto por o incorporan una variedad de materiales de construcción y las composiciones de limpieza deben ser de un tipo tal que no ataquen ninguno de tales materiales.

Es una práctica común limpiar el instrumental médico tras su uso con un paciente y antes del tratamiento de otro mediante lavado químico para eliminar sangre, tejido, materia de naturaleza proteica laxa y otras suciedades, y después empaparlos durante un periodo predeterminado en una preparación enzimática adaptada para soltar o digerir adicionalmente cualquier material proteico restante sobre la superficie del instrumento. Entonces los instrumentos se aclaran hasta que estén limpios y se someten a procedimientos de esterilización o desinfección adicional. Para minimizar la posibilidad de infección cruzada, los instrumentos utilizados con un paciente se limpian de manera deseable por separado de aquellos utilizados con otro.

Las preparaciones para su uso en la limpieza de instrumental médico consisten generalmente en un concentrado que comprende uno o más tensioactivos en combinación con una o más enzimas proteolíticas. Se diluye el concentrado hasta una concentración de trabajo (normalmente una dilución de cien veces) antes de su uso. Una formulación de este tipo se ha descrito por NOVO NORDISK ("formulación Novo"). Tres preparaciones utilizadas internacionalmente para este fin son EPIZYME® un producto de 3M, MEDIZIME® (un producto de Whiteley Industries Pty Ltd., Sydney, Australia) y ENDOZYME® (un producto de Ruholf Corporation, NY, EE.UU.). Aunque los productos de este tipo son generalmente eficaces y se utilizan ampliamente, sigue habiendo una necesidad de productos que sean más eficaces, y especialmente de preparaciones que puedan conseguir un nivel predeterminado de eficacia en el transcurso de un periodo de tiempo más corto que los disponibles actualmente.

El concentrado debe ser suficientemente estable en el transporte y almacenamiento antes de su uso para satisfacer las necesidades del comercio. La selección de tensioactivos que en la práctica pueden formularse en soluciones acuosas concentradas es limitada. O bien los tensioactivos limitan la estabilidad en almacenamiento del concentrado, dando como resultado problemas de formación de espuma al diluirse, proporcionan una reducción insuficiente en la tensión superficial, desestabilizan otros componentes del sistema tal como las enzimas, o bien sufren otras desventajas. En la mayoría de los casos, los formuladores utilizan tensioactivos seleccionados de un grupo pequeño de tensioactivos no iónicos convencionales y muy conocidos que se ha encontrado que son satisfactorios para tales usos, pero sigue habiendo una demanda insatisfecha de formulaciones de eficacia mejorada.

Es un objeto de la invención proporcionar un sistema tensioactivo mejorado, y de las realizaciones preferidas de la invención proporcionar una composición de limpieza a base de enzimas que evita los problemas de la técnica anterior y/o proporciona un rendimiento mejorado.

Descripción de la invención

Según un primer aspecto, la invención proporciona una composición acuosa que comprende en combinación una alquilpirrolidona y un alquilpolisacárido.

Preferiblemente, la alquilpirrolidona es una alquilpirrolidona lineal C8 - C18. Se prefiere enormemente N-dodecilpirrolidona ("N-DP"). De manera deseable, el alquilpolisacárido es un alquilpoliglucósido ("APG").

Según un segundo aspecto, la invención proporciona un método para aumentar la eficacia de una composición que contiene enzimas para su uso en la limpieza de instrumental médico que comprende la etapa de incluir una alquilpirrolidona y un alquilpolisacárido.

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Preferiblemente, la composición es un concentrado que contiene un tensioactivo según el primer aspecto como parte de su formulación, pero el sistema tensioactivo puede añadirse posteriormente o bien al concentrado o bien a la solución de trabajo.

Según un tercer aspecto, la invención proporciona un método para limpiar un instrumento médico que incluye la etapa de tratar el instrumento con una composición que incluye al menos una enzima, una alquilpirrolidona y un alquilpolisacárido.

A menos que el contexto claramente requiera lo contrario, a lo largo de la descripción y de las reivindicaciones, las palabras "comprende" y, "que comprende" deben interpretarse en un sentido inclusivo en oposición a un sentido exclusivo o exhaustivo; es decir, en el sentido de "que incluye, pero que no se limita a".

Se sabe que las alquilpirrolidonas reducen la tensión superficial progresivamente con una concentración creciente en agua, consiguiendo una tensión superficial mínima (eficacia máxima) a una concentración de aproximadamente el 0,1% en el caso de dodecilpirrolidona y de aproximadamente el 0,002% en el caso de octilpirrolidona, concentraciones que corresponden a la solubilidad máxima de las pirrolidonas respectivas en agua. Esto ha inhibido en el pasado su uso en concentrados, ya que la concentración máxima en un sistema acuoso es inevitablemente menos que completamente eficaz como tensioactivo cuando se diluye hasta cualquier grado sustancial.

Mejores modos para llevar a cabo la invención

Se añade un aditivo según la invención que consiste en N-dodecilpirrolidona ("N-DP") en combinación con alquilpoliglucósido ("APG") a soluciones preparadas a partir de cada uno de los tres concentrados de preparación de limpieza con enzimas disponibles comercialmente.

Éstos eran MEDIZYME®, ENDOZYME® y EPIZYME®. También se preparó un cuarto concentrado "formulación NOVO", un producto descrito por NOVO INDUSTRIES en la hoja de aplicación B-613 de las publicaciones de Novo Nordisk, "Application of Enzymes in Detergents for Endoscope Cleaning", y se sometió a prueba. En las pruebas descritas en la tabla 1 el aditivo consistía en el 0,2% p/p de N-dodecilpirrolidona ("N-DP") y el 0,1% p/p de alquilpoliglucósido ("APG") en cada caso basado en el peso del concentrado.

La formulación NOVO (concentrado) es tal como sigue:

Componente	% p/p

Tensioactivo no iónico (Teric BL9)	12
Propilenglicol	22
Trietanolamina	7
Ácido bórico	4
Cloruro de calcio	0,1
Savinase 16,0L (proteasa)	13
Termamyl (amilasa)	7
Agua	hasta 100
pH	7

La composición Epizyme (concentrado) es tal como sigue:

Componente	% p/p

Agua de grifo	19,0
Teric BL9 (tensioactivo no iónico)	10,0
Conservante	0,15
Estabilizador de enzimas	6,0
Sosa cáustica al 50%	2,5
Propilenglicol	6,0
Proteasa	10,0
Lipasa	0,2
Amilasa	1,5
Celulasa	0,5
Perfume	0,15
Agua	hasta 100,0

A modo de ejemplo la proteasa puede ser subtilisina, la amilasa alfa-amilasa, la celulasa puede ser endo-1,4-beta-glucanasa y la lipasa puede ser triacilglicerol. Sin embargo, pueden sustituirse éstas por otras enzimas o combinaciones de enzimas.

Se diluyó cada uno de los concentrados de composición de limpieza a una proporción de 1 parte de concentrado en 100 partes de agua dura normal (0,304 g de cloruro de calcio y 0,065 g de cloruro de magnesio por 1 l de agua destilada. Therapeutic Goods Order 54 & Guidelines, 1996, pág. 17). Se sometió entonces a prueba la eficacia de cada producto frente a preparaciones de suciedad normales sobre portaobjetos de vidrio, (1) puro y (2) con la adición de un aditivo según la invención. Se midió la eficacia de la preparación (tiempo requerido para conseguir una puntuación dada) a varias temperaturas. Se muestran los resultados en la tabla 1 en comparación con los resultados de composiciones que incluyen el aditivo según la invención.

Se resumen las pruebas de envejecimiento en condiciones aceleradas en la tabla 2. Se dan detalles de la preparación de suciedades normales en la tabla 3 y "Methods for Ascertaining the Cleaning Performance of Dishwater Detergents" (SOFW-Journal, 126. Jahrgang 3-2000).

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TABLA 1

1

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Tal como es evidente a partir de la tabla 1, la adición del aditivo reduce el tiempo requerido para que la composición consiga una puntuación dada y hace lo mismo a cada temperatura. El aditivo es especialmente eficaz a temperaturas más bajas.

Aunque los resultados mostrados en la tabla 1 se obtuvieron utilizando el 0,2% p/p de N-DP y el 0,1% p/p de APG con respecto al concentrado, puede variarse la razón de N-DP con respecto a APG. Se prefiere que la razón esté entre 1 parte en peso de alquilpirrolidona con respecto a 3 partes en peso de alquilpoliglucósido y 3 partes en peso de alquilpirrolidona con respecto a 1 parte en peso de alquilpoliglucósido, más preferiblemente entre 3 partes en peso de alquilpirrolidona con respecto a 1 parte en peso de alquilpoliglucósido y 1 parte en peso de alquilpirrolidona con respecto a 1 parte en peso de alquilpoliglucósido.

La concentración de N-DP y APG es cada una preferiblemente inferior al 7,5% p/p del concentrado (es decir inferior a aproximadamente el 0,0075% en el concentrado a una dilución de 1 parte de concentrado : 100 partes de agua) y más preferiblemente es inferior al 3% p/p. Las concentraciones reales empleadas dependerán de las propiedades requeridas de tensión superficial, la hidrofilicidad de los alquilpoliglucósidos y el grado de formación de hidrótropos proporcionado por otros excipientes en la formulación al alquilpoliglucósido, así como otros factores que pueden producirse con respecto a formulaciones individuales.

La tabla 2 muestra el efecto del aditivo en las pruebas de envejecimiento en condiciones aceleradas. Los resultados demuestran que el aditivo mejora ligeramente la estabilidad en almacenamiento, o, al menos, no la afecta de manera adversa.

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TABLA 2

3

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Evaluado utilizando el método de prueba B 863b de NOVO NORDISK (adjuntado con el presente documento como Anexo 1). El aditivo según la invención y la dilución fueron los mismos que para la tabla 1.

La tabla 3 muestra los efectos de variar la concentración y la razón de la alquilpirrolidona y el alquilpoliglucósido. Puede observarse que la composición es eficaz en reducir los tiempos de contacto para la limpieza a lo largo de un intervalo amplio de razones de alquilpirrolidona con respecto a alquilpoliglucósido.

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(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 3

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Resultados Portador de suciedad: portaobjetos para microscopio de vidrio

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Resultados Portador de suciedad: portaobjetos para microscopio de vidrio

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Resultados Portador de suciedad: portaobjetos para microscopio de vidrio

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TABLA 4 Composición de la suciedad y prueba de actividad enzimática detergente

Leche en el microondas:	- 60 ml de leche
	- 6 vasos de precipitados
\hskip0,2cm - un microondas ajustado a 450 W
\hskip0,2cm - un horno/calentador ajustado a 80ºC

Se precalentó el microondas colocando 6 vasos de precipitados llenos de agua en un círculo sobre la placa giratoria de vidrio y dejándolo en "fuerte" (900 W) durante 10 minutos. Entonces, se sustituyeron los vasos de precipitados con agua por vasos de precipitados con 10 ml de leche. Se calentó la leche durante 10 minutos a 450 W, entonces se dejó que se enfriara, formando una película delgada, y se colocó en un horno durante 2 horas a 80ºC.

Carne picada:	- 20 gramos de carne picada de ternera
	- 7,5 gramos de claras y yemas de huevo
	- 8,0 gramos de agua
	sustrato polar de 30x30 mm (azulejos cerámicos)

Se mezcló la carne picada con la yema de huevo y el agua utilizando una mezcladora manual. Se roció 1 g de la mezcla homogeneizada sobre azulejos cerámicos de 3x3 cm, sobre el lado liso. Entonces se dejaron los azulejos en un horno durante 10 minutos.

Suciedad Edinburgh	- 20 g de yema de huevo
	- 20 g de agua
	- 0,5 g de colesterol
	- 3 g de gelatina de ternera
	- 0,45 g de mucina de cerdo

Se mezclaron juntas la gelatina de ternera y el agua y se calentaron hasta que la mezcla obtuvo una consistencia homogénea. Se añadieron a la mezcla el colesterol, la mucina de cerdo y la yema de huevo después de que la gelatina se enfriara hasta 30ºC. Se depositaron 0,1 gramos de suciedad sobre las superficies de los portaobjetos para microscopio. Se hicieron manchas de un espesor uniforme para cada conjunto de portaobjetos; se reguló el espesor mediante un borde de cinta adhesiva a lo largo de cada borde del instrumento de manchado. Con el fin de simular las condiciones de una limpieza de endoscopio, se dejaron secar los portaobjetos al aire libre a 20ºC durante 20 minutos.

Sin querer restringirse a una teoría, el polisacárido parece estabilizar la pirrolidona, siendo la combinación más soluble en el concentrado y dando como resultado una reducción sustancialmente mejorada de la tensión superficial en la dilución de trabajo.

Aunque los resultados de la prueba utilizan N-dodecilpirrolidona, podría sustituirse ésta por otras alquilpirrolidonas, y especialmente alquilpirrolidonas C8 a C18. Puede determinarse la cantidad que ha de añadirse mediante un ensayo sencillo pero en general aumentar la concentración significativamente por encima de los niveles empleados en el presente documento tiende a dar una ventaja decreciente. De manera similar, pueden sustituirse el APG por otros alquilpolisacáridos. Por ejemplo pueden sustituirse las unidades de glucosa por otras unidades de azúcar y derivados de unidades de azúcar. De nuevo hay una concentración óptima más allá de la cual el aumentar la concentración tiene relativamente poco beneficio. Aunque la combinación de N-alquilpirrolidona con APG se prefiere enormemente, pueden obtenerse efectos beneficiosos con al menos algunas suciedades añadiéndola en aislamiento. Puede determinarse la razón óptima de N-DP con respecto a APG mediante un ensayo sencillo para un concentrado dado.

La combinación de la invención proporciona un sistema tensioactivo mejorado que se espera que tenga aplicación en muchos usos finales. En el campo de los productos de limpieza para instrumental médico, el sistema tensioactivo de la invención puede añadirse simplemente a productos de limpieza con enzimas disponibles comercialmente o bien al concentrado o bien, a una dilución apropiada, a la solución de trabajo antes de su uso. Sin embargo, preferiblemente se incorporan los aditivos en un concentrado en el momento de la fabricación del concentrado que entonces meramente se diluye antes de su uso.

Pueden añadirse aditivos según la invención a composiciones de lavavajillas, de lavado a mano y otras composiciones de limpieza de superficies.

Pueden alterarse las realizaciones de esta invención y se le pueden añadir o sustituir por ellos otros productos químicos hasta una extensión que será evidente para aquellos expertos en la técnica a partir de la enseñanza del presente documento sin apartarse del concepto inventivo descrito en el presente documento.

Anexo 1

NOVO NORDISK B 863b-GB Procedimiento manual para la determinación de actividad proteolítica en preparaciones enzimáticas y detergentes (sustrato de azocaseína)

Se muestra una representación esquemática de este método en la figura 1.

Principio

Se permite que una proteasa hidrolice la azocaseína durante 30 minutos a 40ºC. Se hace precipitar la proteína sin digerir con ácido tricloroacético y se determina la cantidad de producto digerido mediante espectrofotometría.

Definición de la unidad enzimática

No se define ninguna unidad individual. Se determina la actividad en relación a un patrón de actividad conocida y se da el resultado en las mismas unidades que se utilizaron para el patrón.

Condiciones del ensayo

	pH:	8,5 (tampón Tris-SO_{4} 0,2 M)
	Temperatura:	40ºC
	Sustrato:	Azocaseína al 0,5% (en mezcla de reacción)
	Tiempo de reacción:	30 minutos

Aparatos

: Espectrofotómetro para hacer una lectura de la absorbancia a 390 nm

: pHmetro

: Baño de agua a 40ºC \cdot 0,5ºC

: Temporizador con un segundero

: Mezcladora de vórtex

: Tubos de ensayo de 16 \cdot 125 mm

: Dispensador de repetición, 5 ml de capacidad

: Embudos pequeños y papel de filtro, Whatman nº 3 o equivalente

Reactivos 1. Solución madre de tampón Tris 2,0 M

: Disolver 242 g de trishidroximetilaminometano (Sigma "Trizma Base" T-1503 o equivalente) en 700-800 ml de agua desionizada.

: Ajustar el pH a 8,5 con H_{2}SO_{4} 10 N.

: Ajustar el volumen a 1 litro.

: Este concentrado debe utilizarse a 10 ml/100 ml de volumen para todas las diluciones finales con tampón Tris 0,2 M.

2. Solución de urea al 50%

: Disolver 50 g de urea (calidad analítica) en 50 ml de agua desionizada caliente.

: Ajustar el volumen a 1 litro.

3. Solución de ácido tricloroacético al 10% (reactivo de parada)

: Disolver 100 g de ácido tricloroacético (TCA) en 200 ml de agua desionizada.

: Ajustar el volumen a 1 litro.

4. Azocaseína (solución de sustrato)

: Preparar uno nuevo cada día - desechar cualquier sustrato sin utilizar

: En un vaso de precipitados de 250 ml:

: Pesar 0,6 g de azocaseína (Sigma A-2765).

: Añadir 10 ml de solución de urea al 50% y mezclar hasta que se disuelva.

: Añadir 10 ml de solución madre de tampón Tris 2,0 M.

: Añadir 30-50 ml de agua desionizada y continuar agitando hasta que desaparecen las partículas.

: Ajustar el pH a 8,5 utilizando H_{2}SO_{4} diluido. Ajustar el volumen a 100 ml y mezclar meticulosamente. Mantener frío hasta estar listo para comenzar el ensayo.

5. Patrones y muestras de enzima

: Ver el apéndice I para Alcalase®, el apéndice II para Esperase® y Savinase®, y el apéndice III para Durazym®.

Tras disolver una muestra de detergente para el ensayo de proteasa, se recomienda enormemente que se compruebe el pH de este solución y, si es necesario, que se ajuste a 8,5 \cdot 0,1 unidades.

Si se desea saber los niveles de actividad exactos de proteinasa en un detergente, deben incluirse las bases de detergente en las soluciones patrón a menos que se sepa ya que la formulación particular que se está utilizando no tiene ningún efecto sobre la actividad proteasa. La concentración del detergente base debe ser igual a la utilizada en la solución de muestra del detergente que contiene proteasa.

La presencia en la solución de quelantes fuertes tales como NTA o EDTA puede dar como resultado la desactivación de la proteasa durante el periodo de tiempo requerido para la preparación de los diversos materiales para el ensayo. Puede superarse esta causa de desactivación añadiendo calcio en exceso a las soluciones de muestra.

Procedimiento

1.: Precalentar el baño de agua hasta 40ºC \pm 0,5ºC (aproximadamente 1 h).

2.: Aproximadamente 10 minutos antes de comenzar el ensayo, colocar la solución de sustrato en el baño de agua a 40ºC para que se equilibre.

3.: A tubos de ensayo etiquetados de manera aproximada, pipetear 1 ml de muestra o patrón de enzima y equilibrar hasta 40ºC en baño de agua (aproximadamente 1 minuto).

4.: Comenzar la reacción:

: A intervalos temporizados de manera precisa, añadir 5 ml de solución de sustrato a cada tubo que contiene muestra o patrón, agitar con vórtex y devolver al baño de agua durante 30 minutos.

: Blanco de muestra:

: Añadir al blanco de muestra 5 ml de TCA al 10% y agitar con vórtex; entonces añadir 5 ml de solución de sustrato, agitar con vórtex y dejar reposar a temperatura ambiente hasta estar lista para filtrarse.

5.: Parar la reacción:

: Tras 30 minutos exactamente, a los mismos intervalos de tiempo que antes, añadir 5 ml de TCA al 10% a cada tubo de muestra o patrón, agitar con vórtex y dejar reposar a temperatura ambiente.

6.: Tras 15-20 minutos, filtrar todos los tubos mediante gravedad a través de filtros de papel en tubos de ensayo limpios, secos y etiquetados de manera apropiada.

7.: Hacer una lectura de las absorbancias a 390 nm frente a un blanco de agua desionizada.

Cálculos

1.: Curva patrón:

a): Si el blanco patrón (A_{0}, E_{0} o S_{0}) > 0,16, debe volver a ejecutarse el ensayo con sustrato nuevo

b): Si el blanco patrón < 0,16, restar sus lecturas a A_{390} de los patrones para obtener la absorbancia

c): Representar una curva de absorbancia frente a actividad proteolítica (UA o UKNP/tubo = UA o UKNP/ml de dilución final).

2.: Tubos de muestra:

\cdot absorbancia = A_{muestra} - A_{blanco}

Utilizando la curva patrón, determinar la actividad de la muestra/del tubo,

Actividad/gramo = \frac{(actividad/tubo) \cdot (factor \ de \ dilución)}{\text{gramo de muestra}}

Apéndice 1

Alcalase®

Definición de unidad = Unidad Anson (UA)

1 unidad Anson = la cantidad de enzima* que digiere hemoglobina A con una proporción inicial tal que se libera por minuto una cantidad de producto soluble en TCA que da el mismo color con reactivo de fenol como un miliequivalente de tirosina.

* En condiciones de reacción dadas en el método NNAS AF-4/5-GB: Método de hemoglobina modificado de Anson para la determinación de actividad proteolítica.

Se prepara una curva patrón utilizando una enzima cuya actividad en unidades Anson es conocida. Las desconocidas se comparan entonces con esta curva.

: Tampón: Tris 0,2 M, pH 8,5

: Intervalo de actividad de la muestra: 5\cdot10^{-5} - 15\cdot10^{-5} UA/ml

: Blanco patrón: 1 ml de tampón Tris 0,2 M pH 8,5 = A_{0}

: Sustrato: solución de azocaseína, al 0,5%, pH 8,5

Preparación de la muestra

Disolver una cantidad de muestra pesada de manera precisa en un volumen conocido de manera precisa de tampón Tris 0,2 M de modo que la solución contiene entre 5 \cdot 10^{-5} y 15 \cdot 10^{-5} UA/ml y tiene un pH de 8,5.

N.B. Para cada desconocida, preparar un blanco de muestra y uno o más duplicados (según sea necesario).

Mantener las soluciones en hielo hasta estar listas para el ensayo.

Curva patrón

Solución madre de patrón enzimático: disolver patrón Alcalase pesado de manera precisa en 100 ml de tampón Tris 0,2 M (pH 8,5) para obtener 2,6 \cdot 10^{-3} UA/ml.

Diluir la solución madre tal como sigue:

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Etiqueta del tubo 1	Solución madre	Solución madre de	Volumen final	Actividad
		tampón Tris 2 M
A_{0}	0 ml	10 ml	100 ml	0,0\cdot10^{-5} UA/ml
A_{1}	1 ml	10 ml	100 ml	2,6\cdot10^{-5} UA/ml
A_{2}	2 ml	10 ml	100 ml	5,2\cdot10^{-5} UA/ml
A_{3}	3 ml	10 ml	100 ml	7,8\cdot10^{-5} UA/ml
A_{4}	4 ml	10 ml	100 ml	10,4\cdot10^{-5} UA/ml
A_{5}	5 ml	10 ml	100 ml	13,0\cdot10^{-5} UA/ml
A_{6}	6 ml	10 ml	100 ml	15,6\cdot10^{-5} UA/ml

Apéndice II

Savinase®/Esperase®

Definición de unidad: Unidad Kilo Novo Proteasa (UKNP)

1 UKNP = 1000 UNP

1 Unidad Novo Proteasa (UNP) = la cantidad de enzima* que hidroliza caseína a tal proporción que la proporción inicial de formación de péptidos/minuto corresponde a 1 micromol de glicina/minuto.

* Condiciones normales dadas en el método NNAS 162/3-GB: Método DMC manual para la determinación de actividad proteolítica.

Se prepara una curva patrón utilizando una enzima cuya actividad en UKNP es conocida. Se comparan entonces las desconocidas con esta curva.

: Tampón: Tris 0,2 M, pH 8,5

: Intervalo de actividad de la muestra: 2\cdot10^{-4} - 6\cdot10^{-4} UKNP/ml

: Blanco patrón: 1 ml de tampón Tris 0,2 M pH 8,5 = E_{0} o S_{0}

: Sustrato: solución de azocaseína, al 0,5%, pH 8,5

Preparación de la muestra

Disolver una cantidad de muestra pesada de manera precisa en un volumen conocido de manera precisa de tampón Tris 0,2 M de modo que la solución contiene entre 2\cdot10^{-4} - 6\cdot10^{-4} UKNP/ml y tiene un pH de 8,5.

Mantener las soluciones en hielo hasta estar listas para el ensayo.

Curva patrón

Solución madre de patrón enzimático: disolver patrón de Esperase o Savinase pesado de manera precisa en 100 ml de tampón Tris 0,2 M (pH 8,5) para obtener 1\cdot10^{-2} UKNP/ml.

Diluir la solución madre tal como sigue:

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Tubo	Solución madre	Solución madre de	Volumen final	Actividad
		tampón Tris 2 M
E_{0} o S_{0}	0 ml	10 ml	100 ml	0,0\cdot10^{-4} UKNP/ml
E_{1} o S_{1}	1 ml	10 ml	100 ml	1,0\cdot10^{-4} UKNP/ml
E_{2} o S_{2}	2 ml	10 ml	100 ml	2,0\cdot10^{-4} UKNP/ml
E_{3} o S_{3}	3 ml	10 ml	100 ml	3,0\cdot10^{-4} UKNP/ml
E_{4} o S_{4}	4 ml	10 ml	100 ml	4,0\cdot10^{-4} UKNP/ml
E_{5} o S_{5}	5 ml	10 ml	100 ml	5,0\cdot10^{-4} UKNP/ml
E_{6} o S_{6}	6 ml	10 ml	100 ml	6,0\cdot10^{-4} UKNP/ml

E = Esperase, S = Savinase

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Apéndice III

Durazym®

Definición de unidad = Unidad de proteasa Durazym (UPD)

Se mide la actividad en relación a un patrón de Durazym con las mismas unidades que la muestra, es decir, UPD.

Se prepara una curva patrón utilizando una enzima cuya actividad en UPD es conocida. Entonces se comparan las desconocidas con esta curva.

: Tampón: Tris 0,2 M, pH 8,5

: Intervalo de actividad de la muestra: 6\cdot10^{-4} - 18\cdot10^{-4} UPD/ml

: Blanco patrón: 1 ml de tampón Tris 0,2 M pH 8,5 = D_{0}

: Sustrato: solución de azocaseína, al 0,5%, pH 8,5

Preparación de la muestra

Disolver una cantidad de muestra pesada de manera precisa en un volumen conocido de manera precisa de tampón Tris 0,2 M de modo que la solución contiene entre 6\cdot10^{-4} - 18\cdot10^{-4} UPD/ml y tiene un pH de 8,5.

Mantener las soluciones en hielo hasta estar listas para el ensayo.

Curva patrón

Solución madre de patrón enzimático: disolver patrón de Durazym pesado de manera precisa en 100 ml de tampón Tris 0,2 M (pH 8,5) para obtener 1\cdot10^{-2} UPD/ml

Diluir la solución madre tal como sigue:

Etiqueta del tubo	Solución madre	Solución madre de	Volumen final	Actividad
		tampón Tris 2 M
D_{0}	0 ml	10 ml	100 ml	0,0\cdot10^{-4} UPD/ml
D_{1}	3 ml	10 ml	100 ml	3,0\cdot10^{-4} UPD/ml
D_{2}	6 ml	10 ml	100 ml	6,0\cdot10^{-4} UPD/ml
D_{3}	9 ml	10 ml	100 ml	9,0\cdot10^{-4} UPD/ml
D_{4}	12 ml	10 ml	100 ml	12,0\cdot10^{-4} UPD/ml
D_{5}	15 ml	10 ml	100 ml	15,0\cdot10^{-4} UPD/ml
D_{6}	18 ml	10 ml	100 ml	18,0\cdot10^{-4} UPD/ml

Claims

1. Composición acuosa que comprende en combinación una alquilpirrolidona y un alquilpolisacárido.

2. Composición según la reivindicación 1, en la que la alquilpirrolidona es una alquilpirrolidona lineal C8 - C18.

3. Composición según la reivindicación 1 o 2, en la que el alquilpolisacárido es un alquilpoliglucósido ("APG").

4. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la alquilpirrolidona es N-dodecilpirrolidona ("N-DP").

5. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la razón de alquilpirrolidona con respecto a alquilpolisacárido está entre una razón de 1 parte en peso de alquilpirrolidona con respecto a 3 partes en peso de alquilpoliglucósido y 3 partes en peso de alquilpirrolidona con respecto a 1 parte en peso de alquilpoliglucósido.

6. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la razón de alquilpirrolidona con respecto a alquilpolisacárido está entre una razón de 1 parte en peso de alquilpirrolidona con respecto a 3 partes en peso de alquilpoliglucósido y 1 parte en peso de alquilpirrolidona con respecto a 1 parte en peso de alquilpoliglucósido.

7. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende 1 parte en peso de N-dodecilpirrolidona con respecto a 1 parte en peso de alquilpoliglucósido.

8. Método para aumentar la eficacia de una composición que contiene enzimas para su uso en la limpieza de instrumental médico, que comprende la etapa de incluir en dicha composición una alquilpirrolidona y un alquilpolisacárido.

9. Método según la reivindicación 8, en el que se añade una combinación según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 a una composición que contiene enzimas.

10. Método según la reivindicación 9, en el que se añaden por separado una alquilpirrolidona y un alquilpolisacárido a una composición que contiene enzimas.

11. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 10, en el que la composición que contiene enzimas es un concentrado y se añaden la alquilpirrolidona y el alquilpolisacárido al concentrado antes de su dilución hasta una concentración de trabajo.

12. Método según la reivindicación 8, en el que se formulan una alquilpirrolidona y un alquilpolisacárido cada uno en combinación con una o más enzimas para producir un concentrado adecuado para su dilución para proporcionar una solución de limpieza con enzimas.

13. Método de limpieza de un instrumento médico que incluye la etapa de tratar el instrumento con una composición que incluye al menos una enzima, una alquilpirrolidona y un alquilpolisacárido.

14. Método según la reivindicación 13, en el que la alquilpirrolidona es una alquilpirrolidona lineal C8 - C18.

15. Método según la reivindicación 13 o 14, en el que el alquilpolisacárido es un alquilpoliglucósido ("APG").

16. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 15, en el que la alquilpirrolidona es N-dodecilpirrolidona ("N-DP").

17. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 16, en el que la razón de alquilpirrolidona con respecto a alquilpolisacárido está entre una razón de 1 parte en peso de alquilpirrolidona con respecto a 3 partes en peso de alquilpoliglucósido y 3 partes en peso de alquilpirrolidona con respecto a 1 parte en peso de alquilpoliglucósido.

18. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 17, en el que la razón de alquilpirrolidona con respecto a alquilpolisacárido está entre una razón de 1 parte en peso de alquilpirrolidona con respecto a 3 partes en peso de alquilpoliglucósido y 1 parte en peso de alquilpirrolidona con respecto a 1 parte en peso de alquilpoliglucósido.

19. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 18, que comprende 1 parte en peso de N-dodecilpirrolidona con respecto a 1 parte en peso de alquilpoliglucósido.

20. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, que incluye además al menos una enzima.

21. Composición según la reivindicación 20, que incluye al menos una enzima seleccionada del grupo que consiste en proteasas, lipasas, amilasas y celulasas.

22. Composición según la reivindicación 21, que incluye al menos dos enzimas diferentes seleccionadas cada una del grupo que consiste en proteasas, lipasas, amilasas y celulasas.

23. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 20 a 22, que comprende además propilenglicol.

24. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 20 a 23, que comprende además un tensioactivo no iónico.

25. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 20 a 24, en la que el APG está presente en una concentración inferior al 7,5% p/p.

26. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 20 a 25, en la que la N-DP está presente en una concentración inferior al 7,5% p/p.

27. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 20 a 26, en la que el APG está presente en una concentración inferior al 0,3% p/p.

28. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 20 a 27, en la que la N-DP está presente en una concentración inferior al 0,3% p/p.

29. Composición sustancialmente tal como se ha descrito en el presente documento con referencia a uno cualquiera de los ejemplos.