TW584627B - The method for purifying vitamin D derivatives and its crystalline products - Google Patents

Description

584627 A7 B7五、發明説明（1 ) 技術領域 - 本發明係有關一種新穎維他命D衍生物結晶，更詳而 言係有關經可逆性層析予以精製所得之維他命D衍生物， 再經有機溶媒結晶化所得新穎維他命D衍生物結晶者。又 本發明亦爲有關包含結晶化工程在內的維他命D衍生物之 精製方法。 背景技術 已知各種維他命D衍生物均具有生理活性，例如日本 特公平6 - 2 3 1 8 5號所載列之一般式； (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 〔1^爲胺基或〇R> ，（R /可爲被羥基、鹵素原子、 氰基、醯化胺基所取代或不取代之碳數在1〜7之烷基， )R2爲氫原子或羥基。〕所示1 α —羥基維他命D3衍生 物、並記載做爲鈣代謝異常引起之疾病的治療藥物、或是 作爲抗癌藥物極爲有用。 又屬於上述化合物之一的Ια，25 —二羥基一2石 一（3 -羥基丙氧基）維他命D3(又稱ED - 7 1 )是 一種能促進骨質再生作用的活性維他命D衍生物，正被開 發作爲骨質疏鬆症之治療藥物。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -4 - 584627 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 _ _B7___五、發明説明（2 ) 另一方面，在製造活性化合物之製造用先質物過程中 ，需要大量且安定地製造高品質之先質物，因此必需及早 確定先質物的製造方法。 尤其是E D — 7 1在目HU爲止，只能以非晶質的狀態 獲得，並無可得ED - 7 1結晶之報告。 發明椹示 本發明是以確立可大量且安定地供給維他命D衍生物 、尤其是E D - 7 1高純度精製物之方法爲目的。 本發明之另一目的係在於提供將維他命D衍生物之未 精製物或粗精製物精製後得到維他命D衍生物結晶。 本發明之其他目的係提供包含結晶化工程在內的維他 命D衍生物之精製方法。 本發明之其他目的係在於提供包含結晶化工程在內的 ED - 7 1原維他命D化合物之精製方法及由此法所得被 精製之原體化合物。 本發明之又一目的係在於提供在維他命D衍生物之合 成及精製過程中副生所得之新穎化合物。 本發明人等係首先矚目於就（1) ED - 7 1之 Η P L C分離精製時維他命D衍生物原體（原維他命D ) (Pro Vi tD)中雜質之影響；（2)維他命D衍 生物前體（Pre Vi tD)及ED - 71對熱、光、 氧之安定性；（3)微量高生理活性物質ED - 71之處 理方式，以及（4)結晶化精製之可能性等觀點，進而從 本紙張又度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） '~ - 5 _ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ^84627 A7 ____B7 _ __ 五、發明説明（3 ) 事研究自原體到ED—71之合成精製工程。結果發現’ 使用甲醇再結晶化所得之原體，在低溫下進行光反應、熱 異構化反應後，藉可逆性層析法HP L C精製、濃縮後， 用乙酸乙酯結晶化之後，可得到以公克爲單位之E D-7 1結晶、遂而完成本發明。又，本發明人等係解析出原 體及光反應的副產物之結構、並鑑定出其爲新穎化合物。 本發明乃提供如式（I )所示之化合物結晶。

本發明係提供維他命D衍生物之未精製物或粗精製物 經可逆性層析法精製後以有機溶媒結晶化所得維他命D衍 生物結晶。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ------------ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 4 本發明更進一步提出藉由可逆性層析法精製維他命D 衍生物之精製方法。 本發明更提供維他命D衍生物之未精製物或粗精製物 經可逆性層析精製後，以有機溶媒結晶化的維他命D衍生 物之精製方法。 本發明係提供式（I I )所示化合物之未精製物或粗 精製物經醇類再結晶爲如式（I I )所示化合式之精製方 法。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X297公釐） 一 一 6 - 584627 A7 B7 五、發明説明（4 )

(II) 本發明係提供式（II)所示化合物之未精製物或粗 精製物經醇類再結晶後精製而得式（II)化合物

(II) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

(II) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本發明係提供將式（I I )所示化合物之未精製物或 粗精製物用醇類再結晶精製後所得之式（I I)化合物， 經紫外線照射及熱異構化反應後得到式（I)所示維他命 D衍生物；接著，將上述所得未精製物或粗精製物經可逆 性層析法精製，有機溶媒結晶化後可得到精製維他命D衍 生物的製造方法。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 7 - 丨84627 A7 B7 五、發明説明（5 ) H〇、，

本發明係提供式（I I I )及式（I V )所示化合物 。此等化合物是在ED-71原體經紫外線照射及熱異構 化反應後，反應液中存在之化合物， (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

(III)

、1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

(IV) 實施發明之最佳條件 本說明書中之維他命D衍生物係指具有式（V)部分 結構之化合物 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -8 - 五、 發明説明（6 ) 式（V )

A7B7 (V) 維他命D衍生物係較佳爲以式（V (V I C)所示化合物 A )

(V I B H〇、、、、.

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 〔式中：尺1爲（1)胺基；（2) — 〇R5(R5可爲低 碳數烷基、低碳數烯基、低碳數炔基；其中 上述各基亦可被羥基、鹵素原子、氰基、胺 基、醯化胺基、低碳數烷氧基所取代。）或 可爲（3 )低碳數烷基、低碳數烯基、低碳 數炔基、其中亦可被羥基、鹵素原子、氰基 、胺基、醯化胺基、低碳數烷氧基所取代。 R2、R3及R4爲碳數1〜1 〇之烷基、碳數2 〜1 0之烯基或是碳數2〜1 0之炔基，碳 之炔基，其中R2、R3、R4可含1個以上 的羥基取代基。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210Χ297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

-9 一 584627 A7 B7 五、發明説明（7 ) A爲硫原子或氧原子〕。 又，前述之低碳數的定義在烷基時乃指碳數在1〜7 間；使用於烯基、炔基時係碳數則在2〜7間；烷氧基的 碳數在1〜7之間® 較佳維他命D衍生物爲1 α -羥基維他命D3、1 α ，2 5 —二羥基維他命D3、24、2 5-二羥基維他命 D3、或是下式（VI IA)、或（VI IB)所示。

亦或爲下式（V

A 或

V B )所示 I - I I - - - - - —1! ϋ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

(式中的A表硫原子或氧原子） 更佳維他命D衍生物爲式（v I I A)所示 d 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇χ297公釐） -10 一 584627^ A7 B7 五、發明説明（9 ) (4) 熔點：用DSC測定爲1 3 0°C以上。 (5) 吸光常數：40//g/mL乙醇溶液、265 nm、所測得的ε在1 6000以上。

(6 ) Η P L C 純度：Η P L C ( DIACHR0MA 〇 D S Ν — 20 5 ^ m 4 . 6x25〇mm、45 %乙睛一水、流速lmL/分，22〇nm、 lmg/mL 10#L、4〜90分）的峰 值面積在9 7%以上。 本發明係提供維他命D衍生物之未精製物或粗精製物 經可逆性層析法精製後，以有機溶媒結晶化所得維他命D 衍生物結晶以及可逆性層析法及/或用有機溶媒結晶化之 維他命D衍生物精製方法。 本說明書中所用「未精製物或粗精製物」一詞係指維 他命衍生物合成反應剛結束時未精製之生成物或指以慣用 精製法粗精製後的維他命D衍生物而言，這些生成物通常 以非晶質形態存在。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本說明書中所用「可逆性層析法」一詞與通常所指的 意思相同、固定相的極性比移動相小的層析法。可逆性層 析法以高速液相層析法（HP L C )的效果較佳。 欲達到以高效率分離出目的物之目標，必需選擇適當 的分離溶劑、填充劑的種類以及對層析管柱的負荷量。 以分離溶劑爲例，並不是只限於上述所提到乙睛/水 系及甲醇/乙睛/水系。又，使用上述溶劑時，其混合比 並無特別規定乃視精製目的物之種類，填充劑之種類而選 本&張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21GX297公釐) ' 一 _ 12 - 584627 A7 __B7__ 五、發明説明（10 ) 擇最適當混合比。一般而言，乙睛爲2 0〜6 0重量份、 甲醇0〜4 0重量份、水0〜8 0重量份。 填充劑的種類以粒徑、孔徑等爲指標，並考慮所使用 之層析管柱或精製目的物之合適性等以便選擇適當填充劑 .〇 層析管柱的負荷量乃視層析管柱的內徑大小調節，例 如內徑爲50mm時，25从g〜10g、以25//g〜 3g的負荷量較佳。 上記層析法所得的部分在結晶化之前，必須將目的物 先單獨分離。單獨分離法可用蒸發器濃縮、凍結乾燥、抽 出法、過濾法等。考慮精製目的物性質等、自上述方法中 選擇出最適當的方法。以精製ED — 7 1爲例，選用蒸發 器濃縮不但操作便利，再現性高且ED - 7 1並不因此分 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 維他命D衍生物結晶化使用的有機溶媒以非質子性有 機溶媒有佳。非質子性有機溶媒如乙酸乙酯等酯類、丙酮 等酮類、二乙醚、二異丙醚等醚類或是乙睛、或是上述有 機溶媒之混合溶液等。但以乙酸乙酯、丙酮、乙睛或者前 述溶媒之混合溶媒爲佳。 晶析條件因精製目的物、晶析溶媒等而做適當選擇； 一般來說，粗維他命D衍生物以1〜1 〇 〇倍有機溶媒， 但以5〜1 0倍有機溶媒爲佳，在3 0 °C以下晶析；但以 一 1 0 °C以下爲佳。 本發明係提供式（I I )所示化合物之未精製物或粗 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐) " - ^ 一 13 - 58462? 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（11 ) 精製物經醇類再結晶之精製方法，並由此精製方法所得式 (I I )所示化合物。

上述再結晶所使用的醇類爲甲醇。 上述用醇類再結晶精製式（I I )化合物之性質並未 特別限定，但以滿足下列條件爲佳。 (1) 性狀（外觀）：用肉眼及螢光顯微鏡觀察爲白 色〜黃色結晶性粉末。 (2) 溶解度：2mg/mL乙醇溶液。白色〜黃色 透明溶液。 (3) 確認：以IR或NMR確認結構式。 (4 )水分：用卡爾一費歇法測定。樣品1 0 0 m g 、水分在3 . 0 %以下。 (5)吸光係數·· 100//g/mL乙醇溶液， 2 8 2 n m，所測得的ε在1 0 0 0 0以上。 (6 ) Η P L C 純度：Η P L C ( DIACHROMA 0 D S Ν — 2 0 5 从 m 4. 6\25〇111111、55%乙睛一 水、流速 lmL/分、22〇nm、lmg/mL 1 〇 以L、4〜70分）峰值在85%以上，原體化合物和 u η P 4之間沒有明顯的峰。

(7)含量：HPLC(YMC Pack ODS 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） " " 一 14 一 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 4 584627 A7 B7 五 '發明説明（12 ) A - 3 0 3 5 β m 4 . 6x25〇mm、55% 乙睛 —水、流速lmg/mL、220nm、內部標準法）含 8 5 %以上。 以下爲本發明實施例之說明；但本發明並不侷限於下 列實施例。 實施例 實施例1 : 2^3 - (3 > —羥基丙氧基）一 5 , 7 — 膽巢二烯一 Ια，3/3 -三醇（原體）之合成及精製方法 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

，第三丁氧基鉀（0· 75g，6. 68mmol)及 1 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ，3 -丙二醇（2 Om 1 )之混合物在室溫下攪拌1 〇分 鐘後，內溫9 5 °C攪拌5小時。一邊攪拌再一邊徐徐加入 40mj?飽和氨水。在室溫（25〜35°C)下攪拌1 0 分後，濾取結晶後用蒸餾水沖洗3回。所得含水粗結晶（ 6. 3g)在乙腈（20ml)中、室溫下（27〜22 °C )攪拌1小時。濾取結晶後，用乙睛（5 m 1 )沖洗2 次，乾燥後得到原體化合物K〇. 96g，產率81% 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X297公釐） - 15 - 584627 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（13 ) 由上記方法所得原體化合物_2_(29. 0 g )，先用 氬氣洗淨後再以甲醇2 9 Om 1加熱溶解，趁熱過濾（桐 山濾紙4號）、室溫下徐冷，加入晶種使結晶析出。 一 1 0°C冷卻後，濾取結晶並用冷甲醇2 9m 1清洗2次 。室溫下減壓乾燥得精製原體22. 9g。（回收率 7 9. 1%，淨回收率92. 1%) 此精製原體化合物之理化性質如下： NMR (CD3OD)及I R :確認結構式 TLC ( C H 2 C 1 2 ： C 2Η 5 〇 Η = 9 · 1) 1 點（ R f = Ο . 5 ) HPLC 純度（220nm) :98. 7% 含量：97. 1% (內部標準法） DSC:最低峰（peak min. ) :95· 6 〇C、1 6 3 · 2 〇C。 最高峰（peak max. ) · 1 2 Ο 2 °C。 實施例 2: (1R，2R) - 1，25 -二羥基一 2 -（ 3 / —羥基丙氧基）一維他命D3; 2)3 —（3 / —羥基 丙氧基）一(1“，3)9，52，7£)—9，10—開 環膽巢烷基一5，7，10 (19)-三烯一 1 ，3， 2 5 —三醇（ED - 7 1 )之合成及精製方法 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -16 - 584627 A7 B7 五、發明説明（14 )

原體 2 ( ProvitaminD) 前體（PrevitaminD)

(請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) E D - 7 1 在1 L容器中，以THF/L溶解實施例1所得精製 原體化合物2_(6_ 0 2 g )，氬氣洗淨，冷卻狀態（內 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 溫一 1 3 °C以下），以4 0 0 W高壓水銀燈（Vycor filter)紫外線照射1 5 0分。反應液徐冷至室溫時，以 THF (lOOmL)沖洗，倒入2L茄子型燒瓶加熱還 流1 80分。反應液濃縮後以甲醇（8 OmL)溶解。甲 醇溶液2 OmL (前體換算量1 . 5 g )注入層析管柱分 離裝置中（內徑5 0 X長度3 0 mm，填充劑DIACHR0MA ODS N — 20’二菱加工機出品；粒徑5//m)，展 開溶媒45%乙睛一水溶液（60mL/分），UV( 220，305nm)監測、得ED-71層析部分約 2. 4L (約130〜170分）。同樣操作重複三次， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 一 17 - 584627 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、 發明説明（15 ) 1 I 4 回層析部分約9 L 用 1 0 L 蒸發器濃縮 ο 用乙醇溶解 1 殘渣 ，再次濃縮乾燥 〇 乙酸乙酯 ( 2 0 m L ) 溶解濃縮殘 1 1 渣 室溫攪拌下析出結晶 冷卻至 一 1 5 °C 以 下 攪拌 l· I 請 1 I 1 5 分後濾取結晶 用冷乙酸乙酯 ( 6 m L ) 洗淨 3 次。 先 閱 1 I 讀 1 I 室溫下減壓乾燥1 晚 > 得 E D 一 7 1 ( 2 1 7 g ϊ 產率 背 1 I 之 1 3 6 .1 % ) 注 意 1 I 事 1 Η P L C純度 9 9 8 % ( 2 2 0 n m ) y 項 再 填 寫 本 1 9 9 .9 % ( 2 6 5 η m ) % 頁 1 U V (乙醇） : λ m a X 2 6 5 4 η m ( e 1 1 7 10 0) 1 1 DSC: 13 5 3 °C (peak m in ) 1 2 2 m J / 1 1 訂 | m g 殘存溶劑（G C 法 ) ; 1 2 4 % ( 乙酸乙酯） 1 I 0 2 4 (乙醇） 1 1 I I R (cm-1): 3 5 3 3 3 4 1 7 y 3 3 3 6 1 A 2 9 4 3 2 9 1 8 2 8 6 2 贅 w 1 1 6 4 9 1 4 7 0 1 4 4 4 1 1 1 4 1 6 1 3 8 1 > 1 3 7 7 > 1 1 1 3 4 2 9 1 2 3 2 > 1 1 1 3 ί I 1 0 7 8 > 1 0 7 2 > 1 0 4 5 贅 1 ί I 9 9 9 f 9 7 4 9 5 7 > 9 5 5 > 1 1 9 2 4 9 9 1 0 > 8 9 5 y 8 6 8 1 1 8 3 3 7 9 6 贅 7 6 4 y 6 6 3 1 1 6 3 4 J 5 9 4 4 7 2 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -18 - 584627 A7 B7 五、發明説明（16 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 實 施 例 3 • 相 關 化 合 物 之 理 化 性 質 在 光 熱 異 構 化 反 izfe Ιί惠 時 單 離 一 些 Cls^t 與 產 物 結構相 近 化合 物 、 測 得 其 結 構 式 理 化 性 質 0 另 實 施 例 1、2 中 之原 贼 m 及 Ε D 一 7 1 之 詳 細 理 化 性 質 也 併 述 如 下 。測定 用 樣品 均 爲 再 結 晶 後 之 精 製 化 合 物 〇 熔 點 未 經 補 正 0 I R 光 譜 乃 用 K B r 錠 劑法， J Ε 0 L J I R — 6 0 0 0 所 測 〇 1 Η - -Ν MR， ► 1 3 C 一 Ν Μ R 光 譜 以 Τ Μ S 爲 內 部 標 準 、 C Η C 1 3吸收峰爲 基 準 J Ε 0 L J N Μ — 2 7 0 E X 所 測 〇 U V 所 用溶 媒 爲 乙 醇 、 在 室 溫 下 由 Η I Τ A C Η I U - 3 2 10 所 測 0 原 體 ( 實 施 例 1 ) 之 理 化 性 質 數 據 1 Η - -N M R (ppm) 0 • 6 3 ( 3 Η S ) 0 9 6 ( 3 Η 赘 d J 2 0 一 2 1 = =6 . 3 ；Η ζ )， 1 • 0 7 ( 3 Η s ) 1 2 2 ( 6 Η 贅 s ) 3 6 一 4 0 ( 7 Η m ) > 5 • 3 6 — 5 4 0 ( 1 Η j m ) 5 7 0 — 5 • 7 3 ( 1 Η j m ) 〇 13 C — Ν Μ R ( P P m ) : 1 4 1 1 j 1 3 6 6 > 1 2 0 8 9 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) - 19 - 584627 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（17 ) 115. 1，82· 2，71. 0*70. 9，68. 3 ，66. 7，59. 8，55. 7，54. 4，44. 1 ，42. 9，41. 3，39. 0，38· 3，36. 3 ，36. 0，34. 6，32. 0，28· 8，28. 7 ，27. 9，22. 9，20. 7，20. 5，18_ 6 -15. 8，1 1 . 7 〇 U V ； λ m a X ( ε ): 294.2nm(6550)， 282，2nm(11300)， 2 7 1. 9nm(10500)， 2 0 4. 7 n m ( 2 4 2 0 ) I R ( c m -1)： 3385，2 9 41，2872，1471， 1468，1381，1379，1327，1138’ 1082，1080，1053° ED - 7 1之理化性質數據 4 一 NMR(ppm) ·· 6 . 37(lH，d;11. 4Hz)， 6. 05(lH，d;ll· 4 Η z )， 5 . 50(lH，t;2. 1Hz)， 5. 08(lH，t，2. 1Hz)， 4. 32(lH，d，8· 9 H z )， 4 . 2 6 ( 1 H，m )， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 一 20 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 4 k. 584627 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、 發明説明（18 ) 1 1 3 • 8 8 — 3 9 6 ( 1 H m ) y 置 3 8 5 ( 2 Η > t 贅 5 7 H z ) I 1 3 6 9 一 3 7 7 ( 1 H 9 m ) 1 I 請 1 I 3 2 7 ( 1 Η d d ; 9 0 H z ，2 8 H z ) 先 閱 1 I 讀 1 | 2 7 8 一 2 8 3 ( 1 H 9 m ) 背 面 1 1 之 1 2 • 5 5 ( 1 Η d d ; 1 0 6 H z » 4 0 H z )， 注 素 1 1 事 1 2 4 2 ( 1 Η b d ; 1 3 6 H Z ) > 項 再 % 本 1 1 8 一 2 1 ( 5 H m ) 9 % 頁 1 1 2 2 ( 6 Η s ) 1 1 2 — 1 7 ( 1 1 H m ) 9 1 1 0 9 4 ( 3 Η 贅 d f 6 3 H Z ) > 1 1 0 9 — 1 • 1 ( 1 H m ) 9 訂 | 0 5 5 ( 3 Η > s ) 1 I 1 3 C — N Μ R ( Ρ P m ) ： 1 1 | 1 4 4 2 1 4 3 0 1 1 3 2 . 2 y 1 2 4 .9 1 A > 1 1 7 • 2 > 1 1 1 8 8 5 4， 7 1 6 擊 1 7 1 1 贅 6 8 3 6 6 6 6 1 . 1 > 5 6 6， 1 1 5 6 4 > 4 5 9 贅 4 4 4 > 4 0 . 5 3 6 4， 1 1 3 6 1 贅 3 1 9 2 9 3 y 2 9 . 2 > 2 9 1， 1、 I 2 7 7 2 3 7 > 2 2 4 9 2 0 . 8 1 8 8， 1 I 1 1 着 9 1 1 U V ( λ m a X ) ； 1 1 2 6 5 4 η m ( ε 1 7 9 0 0 ) 1 1 熔點 ： 1 3 4 8 1 3 5 8 ( 1 〇C / 分） $ 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -21 - 584627 A7 B7五、發明説明（19 ) D S C ·· 1 3 7 °C (最小峰值，1 1 5 m J / m g )， TG/DTA : 1 3 8°C (最小峰值，溶解時乾燥減量約 1%，使用量1. 96mg)。 1 R ( c m -1): 3533，3417，3336，2943， 2 918，2862，1649，1470，1444’ 1416，1381，1377，1342，1232, 1113，1078，1072，1045，9 99’ 974，957，955，924，910，895’ 868，833，796，764，663，634’ 5 9 4，4 7 2 光體（A $體）之結構式及理化性質數據 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 HPLC 純度：97. 5%(220nm) ^-NMR (ppm): 5 . 75(lH，d，J = 5· 3 Η z )， 5. 4 2 - 5. 44(lH，m)， 4 . 19 (1 Η > q > J = 2 . 9 Η ζ )， 3 . 8 - 4 . 0 ( 4 Η ，m )， 3 . 6 — 3 . 7 ( 1 Η ，m )， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -22 - 584627 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（20 ) 3· 25(lH，dd，J=2· 6Ηζ，9· 6 Η ζ ) ， 1 . 2 1 ( 6 Η，s )， Ο . 90(3H，d，J = 5· 6 Η ζ )， Ο . 8 2 ( 3 Η，s )， Ο . 5 8 ( 3 Η，s ) 13C — NMR(ppm) ·· 141. 9，136. 2，123. 3，115· 5 ，82. 8，77· 9*71. 1，67. 4，64· 9 ，61· 1，57. 2，49. 5，46· 7，44_ 4 ，43· 8，41. 4，37· 5，36. 2*35. 9 ，32. 0，29. 4，29· 2，28· 8，22· 6 ，21. 4，20. 9，18. 5，18. 3，8. 5 U V ( λ m a χ ) :273. 5nm(e9010) I R ( c m -1 ) 3437，3383，3309，3041， 2960，2935，2872，2787，1657, 1641，1470，1441，1375，1257, 1205，1203，1167，1128，1097, 1074，1039，1011，980，935， 908，885，820，781，779，723， 6 7 1，6 1 3 速體（夕牛體）之結構式及理化性質數據 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) •1^· 、11 J· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 一 23 - 584627 A7 B7 五、發明説明（21 )

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 584627 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（22 ) A7 B7 3 5 9 1 3 1 9 9 3 1 4 2 9 4 贅 2 9 2， 2 8 7 > 2 5 1 9 2 4 3 9 2 0 8 > 1 8 7， 1 5 • 1 1 1 2 U V ( λ m a X ) : 2 8 1 4 n m ( ε 2 6 1 0 0 ) I R ( C m -1 ) : 3 3 7 5 贅 2 9 4 5 9 2 8 7 5 9 1 6 6 4 贅 1 6 3 2 y 1 6 1 2 1 4 6 8 9 1 4 2 9 > 1 3 7 7， 1 2 1 5 j 1 1 5 7 y 1 0 9 5 9 1 0 6 8 > 9 5 7 9 0 8 8 7 9 > 7 6 4 9 7 1 0 f 6 4 6 前體（PrevitaminD)之結構式及理化性質數據

^-NMRCppm)： 5. 91，5. 78(lHx2，d，J = 12Hz)， 5 . 52(lH，d，J = 3· 3 Η z )， 4 . 0-4. 2(2H，m)， 3 . 7 - 4. 0(4H，m)， 3. 43(lH，dd)， 1 . 7 6 ( 3 H ，s )， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21 OX 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 —0 -25 - 584627 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（23 ) 1 . 2 2 ( 6 Η，s )， 0. 96(3H，d，J=6. 6 Η z )， 〇 . 7 〇 ( 3 Η，s ) U V ( λ m a x ) :206nm(el〇3〇〇) I R ( c m -1 ): 3377，2949，2947，2872， 1643，1470，1435，1406，1379, 1377，1263，1215，1140 ,1119, 1088，1063，1047，1032，1030, 962，937，935，756，735，542 實施例4 : ED — 7 1之X線結晶構造解析 從實施例3所用E D - 7 1中選出結晶進行X線結晶 槽造分析；本晶系爲斜方晶系，空間群P 、格 子係數a=10· 352(2) 、b=34. 058(2 )、c = 8· 231 (1)A、Z = 4、共測定 2520 個反射數據。 構造解析是以下列方式進行。由直接法（ SHE LX S 8 6 )求出位相、傅里葉分析求出非氫原子 位置。與碳原子結合之氫原子乃藉由碳原子位置求出。與 氧原子結合之氫原子乃在其他原子位置確定後由D合成求 出。 由最小自乘法之精密計算（非氫原子之位置及各向異 性溫度因子，只有和氧原子結合之氫原子位置精密化）， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 一 26 _ 584627 A7 B7 五、發明説明（24 ) 信賴度因子（R值）爲3. 9%、收斂。但絕對結構並不 是直接決定，13、14、17、20位的位置則藉由膽 固醇的結構來計算。 經由上述各項數據、可得出圖1〜圖4ED — 7 1之 結構式及氫鍵位置。 I考例1 : ED — 7 1結晶之安定性 就非結晶ED — 7 1及結晶ED — 7 1在l〇°C、 2 5 °C、4 0 °C比較其安定性。安定性的指標乃以 HP L C定量分析、吸光度及純度試驗（HP L C之峰值 )爲準。試驗方法如下所述。 (1 )安定性試驗方法 分別各取非晶質及結晶樣品約2mg，精密秤量後放 入有螺絲蓋容量1〇m1之透明試管中。 使用真空乾燥器及小型工具箱將試管中的空氣以氬氣 置換。（以1M (空氣）表示的試管不進行此步驟） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 將試管放入已設定溫度恒溫槽中遮光保存。經1週（ 1W) 、2週（2W) 、1個月（1M)後取出試管進行 下列試驗。 (2)HPLC定量分析 試管中加入無水酒精5m 1 (樣品溶液），精取1 m 1後加入1 m 1內標準溶液，再加入二氯甲烷使成 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（公釐） -27 - 584627 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（25 ) 20ml (溶液①）。又內標準溶液爲2-氨基吡啶之甲 醇溶液0. 6mg/ml 。 定量用標準溶液（結晶ED - 7 1無水酒精溶液 0· 4mg/ml)1ml及1ml內標準溶液、再加入 二氯甲烷使成20ml (溶液②）。 溶液①、②各取2 0 #又進行Η P L C測定、分別以 內標準之峰值面積換算出ED-71之面積比。由溶液① 、②面積比再求出樣品溶液中E D - 7 1含量。 由各點的定量值與初期值之比可求得殘存率％。。 Η P L C條件 層析管柱：YMC A-004SIL (4. 6 x 3 0 0 mm) 移動相：二氯甲烷•甲醇混液（9 5/5 ) 流速：1m1/分 檢出：UV265nm (3 )吸光度 精取HPLC樣品溶液lml 、加入精取無水酒精 10ml ，在265nm以紫外光分光光度計測定吸光度 。由吸光度求出E 1%。E 1%乃由hambert-Beer定律導 出。下式： El% = A/ cb，A :吸光度，C :濃度 g/ 100ml ，b : cm爲樣品之光徑長度，通常爲1 ^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） - 28 - 584627 A7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 B7五、發明説明（26 ) (4 )純度試驗 (4 一 1)順相 HPLC 精取「HPLC定量」用樣品溶液lml ，藉減壓乾 燥除去溶媒無水酒精後加入二氯甲烷1 m 1溶解之。取 2 5 m 1做Η P L C測定 Η P L C條件 廣析管析：YMC A-004SIL (4. 6 X3 0 0 mm) 移動相：二氯甲烷、甲醇混液（9 6/4) 流速：1 _ 8 m 1 /分 檢出：UV265nm (4一2)逆相HPLC 取「HPLC定量」之樣本溶液25// 1做HPLC 測定。 Η P L C條件 廣析管柱：Inertsil OD S — 2 ( 5 X 2 5 〇mm ) 移動相：乙睛，水混液（5 5 / 4 5 ) 流速：1m1/分 檢出：UV 265nm及220nm HP L C定量分析及純度試驗均以2次數據之平均值 製成下表1〜5。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -29 - 584627 A7 B7 五、發明説明（27 ) 表1 HP L C定量分析結果（殘存率％) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 10 °C 2 5 °C 4 0 °C 非晶 結晶 非晶 結晶 非晶 結晶 質 質 質 初期值 100 100 100 100 100 100 1 W 99. 5 99. 4 94.4 99.5 2W 98. 5 96.8 94. 7 98. 8 88.8 102.9 1M 94.8 97. 0 1M(空氣） 97. 4 95.0 注：除了 1M (空氣）以外餘均經氬氣置換 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 584627 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（28 ) 表 2 : E 1 % 10 °C 2 5 °C 4 0 °C 非晶質 結晶 非晶質 結晶 非晶質 結晶 初期值 327.5 350. 2 327. 5 350. 2 327. 5 350.2 1W 323. 0 349. 5 313.2 349. 8 2W 324. 9 343.8 316. 9 341. 6 304.0 348. 7 1M 320. 5 342.7 1M(空氣） 316.3 341. 7 注：除了1M(空氣）以外餘均經氬氣置換 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） - 31 - 584627 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（29 ) 表 3:純度試驗：（265nm)順相 HPLC〔P*A*R(%)〕 1 0 °c 2 5 °C 4 0 °C 非晶質 結晶 非晶質 結晶 非晶質 結晶 初期值 ED-71 前體 其他 96.06 99.15 1.67 0.21 2. 27 0.63 96.06 99.15 1. 67 0.21 2. 27 0.63 96.06 99.15 1. 67 0. 21 2.27 0. 63 1 W ED-71 前體 其他 95.97 99.56 1. 88 0. 1 4 2. 14 0.30 94.47 99.55 2.53 0. 1 4 3.00 0.31 2W ED-71 前體 其他 95.46 99.06 2. 27 0. 66 2. 28 0.27 94.74 98.95 2. 25 0.67 3. 01 0.38 92.12 98.92 2. 99 0. 67 4.89 0.41 1M ED-71 前體. 其他 94. 58 98.91 2.33 0.65 3. 0 9 0. 44 1M(空氣） ED-71 前體 其他 95.26 98.88 2. 31 0.66 2.42 0.46 注：除1M (空氣）外餘均經氬氣置換 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T _· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） - 32 - 584627 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（30 ) 表 4:純度試驗：（265nm)逆相 HPLC〔P*A_R(%)〕 1 0 °c 2 5 °C 4 0 °C 非晶質 結晶 非晶質 結晶 非晶質 結晶 初期值 ED-71 前體 其他 95.38 99.04 1.16 0.36 3.47 0.60 95. 38 99. 04 1.16 0.36 3.47 0.60 95.38 99.04 1.16 0.36 3.47 0. 60 1 W ED-71 前體 其他 94.78 99.35 1.27 0.28 3. 95 0.38 92.47 99.40 1.98 0.29 5. 55 0. 31 2W ED-71 前體 其他 94. 48 98.84 1. 75 0.83 3. 77 0. 32 94. 20 98.78 1.72 0.85 4. 08 0. 37 90. 68 98.75 2. 53 0. 85 6. 78 0. 40 1M ED-71 前體. 其他 9 3. 0 5 98. 77 1.88 0.86 5. 07 0. 37 1M(空氣） ED-71 前體 其他 94. 1 1 98.72 1. 82 0. 86 4.07 0. 42 注：除1M (空氣）外餘均經氬氣置換 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T j·. 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 一 33 - 584627 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（31 ) 表 5 : 220 nm (%) 1 0 V 2 5 V 4 0 °C 非晶質 結晶 非晶質 結晶 非晶質 結晶 初期值 ED-71 前體 其他 93.95 97.44 1. 35 0.52 4. 70 2.04 93.95 97.44 1. 35 0. 52 4.70 2.04 93. 95 97.44 1. 35 0.52 4.70 2.04 1 W ED-71 前體 其他 93.37 98. 1 7 1.50 0.44 5. 13 1.40 90.00 98.18 2.29 0. 47 7. 71 1. 35 2W ED-71 前體 其他 92.85 97.91 2.02 1.01 5.13 1.09 92.39 97.56 1. 93 1.01 5.68 1.43 87.40 97. 65 2.88 1.02 9.72 1. 33 1M ED-71 前體 其他 92.85 97.44 2. 02 1.05 5.13 1.51 1M(空氣） ED-71 前體 其他 92.07 97.09 2.04 1.09 5.88 1.82 注：除1M(空氣）外餘均經氬氣置換 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T • Lr . 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） - 34 - 584627 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（32 ) 由以上的結果明顯可知，在2 5 °C保存2週及4 0°C 保在2週的條件下結晶的安定性遠較非晶質爲高。 產業上之可利用件 本發明係提高維他命D衍生物結晶之純度，安定性及 品質之安定化，當製造含該維他命D衍生物醫藥品時具有 產業上利用價值。由本發明之維他命D衍生物之精製方法 可以大量（以克爲單位）製造安定高品質維他命D衍生物 〇 本發明之ED-7 1類似化合物（速體）及ED — 7 1原體類似化合物（光體）均爲新穎化合物，在合成維 他命D衍生物過程中之分析，試驗時極具實用價值。 圖_式的簡單說明 圖1 : ED — 7 1結晶結構式之分子結構投影圖。 圖2 : ED — 7 1結晶立體結構式之分子結構投影圖 〇 圖3 : ED — 7 1結晶結構式中氫鍵（只有圖示相關 部分）之分子結構投影圖。 圖4 : ED — 7 1結晶立體結構式中氫鍵（只有圖示 相同部分）之分子結構投影圖。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ---------II (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

-、1T -35 -

Claims (1)

1. 584627 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 附件1 A :

   第86 1 08 1 25號專利申請案 中文申請專利範圍修正本

   民國93年3月丨丨日修正 1 · 一種如式（I )所表示的維他命D衍生物之精 製方法’其特徵爲以可逆性層析法的吸附面所吸附，再 由吸附面分離回收該維他命D的方法。

   ⑴ -- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 結晶結構解析中空間群P 2 i 2 : 2 α，格子定數a = 1 0-3 5 2 ( 2 ) ，b = 34. 0 58(2) ，C - 8.231 (1)A，2 = 4。 2 · —種組合層析法之式（I )所示維他命D衍生 物的精製方法，其特徵爲以己烷等碳水化合物類溶媒、 異丙醚等醚類溶媒、丙酮等酮類溶媒、乙酸乙酯等酯類 溶媒、乙腈等腈類溶媒，或以上這些之混合溶媒的非質 子性有機溶媒下結晶化者。 本紙張尺度適用中國國家榇準（CNS ) Α4規格（210X297公釐）Γ^Γ 584627 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

   定數a ),C 的精製 或乙腈 中有機 溶媒、 腈類溶 中非質 中混合 A8 B8 C8 D8 (I ：) 結晶結構解析中空間群P 2 i 2 i 2 i，格子 = 10.352 (2) ，b = 34.〇58(2 = 8·231(1)Α，2 = 4。 3 ·如申請專利範圍第2項之與層析法組合 方法，其中非質子性有機溶媒爲乙酸乙醋、丙酬 ，或此等之混合溶媒。 4 ·如申請專利範圍第3項之精製方法，其 溶媒爲己院等碳水化合物類溶媒、異丙等_領 丙酮等酮類溶媒、乙酸乙酯等酯類溶媒、乙膳等 媒’或以上這些之混合溶媒的非質子性有機溶媒。 5 ·如申請專利範圍第4項之精製方法，其 子性有機溶媒爲乙酸乙酯、丙酮或乙腈，或此等 溶媒。 6 · —種如式（I )之維他命D衍生物精製方法， 其中維他命D衍生物之未精製物或粗精製物經可逆性層 析精製後，以有機溶媒結晶化。 ^紙張尺度適用中國國家標準（〇奶）六4規格（210\297公釐）-2 ' ^ ---------#------訂------#1 (請先閱讀背面之注意事項存填寫本貰) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 584627 六、申請專利範圍 A8 B8 C8 D8

   結晶結構解析中空間群p 2 i 2 i 2 i，格子定數a 一1〇.352 ( 2) ，b = 34.〇58(2) ，C 8.231 (1)A，2 = 4。 7 ·如申請專利範圍第6項之精製方法，其中有機 裕媒爲己烷等碳水化合物類溶媒、異丙醚等醚類溶媒、 丙酮等酮類溶媒、乙酸乙酯等酯類溶媒、乙腈等腈類溶 媒，或以上這些之混合溶媒的非質子性有機溶媒。 8 ·如申請專利範圍第7項之精製方法，其中非質 子丨生有機丨谷媒爲乙酸乙酯、丙酮或乙腈，或爲此等之混 合溶媒。 9 ·如申請專利範圍第8項之精製方法，其中有機 溶媒爲己烷等碳水化合物類溶媒、異丙醚等醚類溶媒、 丙酮等酮類溶媒、乙酸乙酯等酯類溶媒、乙腈等腈類溶 媒，或以上這些之混合溶媒的非質子性有機溶媒。 1 0 ·如申請專利範圍第9項之精製方法，其中非 質子性有機溶媒爲乙酸乙酯、丙酮或乙腈或爲此等之混 合溶媒。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） ---------9------1Τ------#1 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 584627 ABCD &、申請專利範圍 1 1 .如申請專利範圍第1項之維他命D衍生物之 製造方法，其中含有下列步驟： 將式（I I )所示化合物之未精製物或粗精製物經 酉享類再結晶精製後，將所精製式（I I )化合物藉由紫 外線照射及熱異構化反應得到式（I )所示維他命D衍 生物；接著將由上法所得維他命D衍生物之未精製物或 粗精製物經可逆性層析法精製後，以有機溶媒結晶化所 得者。

   (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

   結晶結構解析中空間群P 2 ^ 2 1 2 χ，格子定數a = 10.352(2) ，b = 34.〇58(2) ，C 二 8·231 (1)a，2 = 4。 1 2 ·如申請專利範圍第1 1項之製造方法，其中 ---- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 584627 六、申請專利範圍 有機溶媒爲己烷等碳水化合物類溶媒、異丙醚等醚類溶 媒、丙酮等酮類溶媒、乙酸乙酯等酯類溶媒、乙腈等腈 類丨谷媒，或以上這些之混合溶媒的非質子性有機溶媒。 1 3 ·如申請專利範圍第1 2項之製造方法，其非 貞子性有機溶媒爲乙酸乙酯、丙酮或乙腈，或爲此等之 混合溶媒。 1 4 ·如申請專利範圍第1 1至1 3項中任一項之 製造方法，其中醇類爲甲醇。 15·—種如式（I I I)示之化合物： (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

   6 · —種如式（I V )所示之化合物：

   7 、1T (III) (IY) 種如式（I )所示化合物之結晶。 Ψ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 5 · 584627 ABCD 六、申請專利範圍

   (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 結晶結構解析中空間群P 2 : 2 : 2 !，格子定數a = 10.352 (2) ，b = 34.058 (2) ，C 二 8.231 (1)A，2 = 4。 1 8 .如申請專利範圍第1 7項之結晶，其爲維他 命衍生物之未精製物或粗製物經可逆性層析予以精製後 ，以有機溶媒結晶化所得者，

   經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 結晶結構解析中空間群P 2.】2 i 2 a，格子定數a = 10.352(2) ，b = 34.〇58(2) ，C 二 8.231 (1)A，2 = 4。 1 9 ·如申請專利範圍第1 8項之結晶，其中有機 溶媒爲己烷等碳水化合物類溶媒、異丙醚等醚類溶媒、 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐) 584627 A8 B8 C8 D8 々、申請專利範圍 丙酮等酮類溶媒、乙酸乙酯等酯類溶媒、乙腈等腈類溶 媒，或以上這些之混合溶媒的非質子性有機溶媒。 2 0 ·如申請專利範圍第1 9項之結晶，其中非質 子性有機溶媒爲乙酸乙酯、丙酮或乙腈，或此等之混合 溶媒。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐）