TW538244B - Visually-readable reagent test strip - Google Patents

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4538244 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（1 ) 相紐申請案之前柹象照 本申請案爲1996年11月1日提出申請之共待審美國專利 申請案序號08/743,432之部份連續案，該共待審案係爲 1995年8月3日提出申請而已棄權之序號528 511之連續案 ，該棄權案係爲1995年3月27日提出申請之序號411,238， 及1995年5月15日提出申請之序號442,035之部份連續案。 發明背景 1 · 發明蔽罔 本發明係關於用以度量生物流體中被分析物濃度之乾測 試片，更特別是一種直接度量濃度而無需儀蘇之測試片。 2.相關技藝乏_沭 已發展出許多目視試驗裝置，以度量生物流體中某些被 分析物之濃度。此等裝置已用來度量例如血液、尿液或唾 液中之葡萄糖、膽固醇、蛋白質、酮類、苯丙胺酸或酵素 〇 摻有以酵素爲基礎之組合物之乾相試劑片，係廣泛地使 用在臨床實驗室、醫師診療室.、醫院及家庭中，以測試生 物流體試樣之葡萄糖濃度。事實上，對於許多國家之數百 萬個糖尿病患者而言，試劑片已變成每天之必需品。由於 糖尿病可能會造成血液化學中之危險性異常，故其可能會 助長視覺喪失、腎力衰竭及其他嚴重醫療結果。爲使此等 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Μ規格（210Χ297公釐） ：---·批衣------1T--*----- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} 538244 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（2 ) 結果之風險降至最低，大部份糖尿病患者必須自行週期性 地測試，然後據此調整其葡萄糖濃度，例如經由飲食控制 及/或使用胰島素注射。有些病患必須測試其血糖濃度， 經常達每日四次或更多。 對於必須控制其飲食以調節糖攝取及/或施予胰島素注 射，及關於此點必須藉由血糖濃度之頻繁測試作爲導引之 糖尿病患者而言，特別重要的是，能夠有快速、不昂貴且 正確之試劑片，以供葡萄糖測定0 已知試劑片含有指示劑，其會轉變成不同色澤，依已被 施加至片條之生物流體中之葡萄糖濃度而定。雖然此等片 條中有些係使用還原化學物質，但其更常涉及可氧化染料 或偶合染料。有些片條包含酵素，譬如葡萄糖氧化酶，其 能夠使葡萄糖氧化成葡萄糖酸與過氧化氫。其亦含有可氧 化染料，及具有過氧化活性之物質，其能夠於過氧化氫存 在下，選擇性地催化可氧化染料之氧化作用（參閲，例如 1994年4月26日頒予Kiser等人之美國專利5,306,623)。 1976年6月22日頒予11〇(：1131:以3361*之美國專利3,964,871 ，揭示一種用後即棄指示劑片條，供直接度量生物流體中 之物質，譬如葡萄糖。此指示劑係記錄物質之濃度，其方 式是同時包含指示試劑，其當其與該物質反應時，會被氧 化及改變顏色，以及n拮抗劑π，其係以某種方式防止經氧 化指示劑之蓄積，直到其已被完全消耗爲止。

Palmer等人在1989年5月24日發佈之歐洲專利申請案公 告0 317 070 (亦參閱1991年7月30日頒予之美國專利5,03 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2Κ)χ297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 538244 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（3 ) 6,000)中，揭示一種供葡萄糖及其他被分析物用之”數字 型”定量檢測系統。此系統係度量有機化合物在生物流體 中之濃度，其方式是首先以受質專一性氧化I每使該化合物 氧化，以產生過氧化氫。此系統包含一種色原，其係爲過 氧化氫之還原劑，及一種空氣安定性過氧化氫還原劑，其 具有較大還原潛力。此較大還原潛力會使因色原所致之任 何可測得之顏色改變延遲，直到空氣安定性之第一種過氧 化氫還原劑已被用完爲止。因此，若欲被度量之過氧化氫 低於相應於空氣安定性過氧化物還原劑濃度之預定含量， 則不會造成顏色改變。結果，此系統係定量地度量濃度， 而與顏色變化強度無關。 1988年4月19日頒予£耶161^1111之美國專利4,738,823 , 揭示一種被分析物測定用之測試片，其具有载體構件，此 構件具有吸收性材料，經定位以移除被施加至片條之過量 試樣。此片條亦可包含一個覆蓋物，其包含開孔，試樣可 經過其間引進。 1989年3月7日頒予811汁1^『(11:等人之美國專利4,810,470 ，揭示一種用以度量液體試樣中被分析物濃度之裝置。此 裝置包含一或多種吸收性基質，被液體不可透過之塗層或 薄膜覆蓋。將試樣沈積在一部份吸收性基質上，並以層析 方式計量進入基質中。藉芯吸作用，使試樣運行至含有被 分析物用之試劑之檢測區域。1991年2月19日頒予Daffern等人之美國專利4,994,238 ，揭示一種化學分析測試裝置，其包含吸收層、防水障壁 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ;裝· 訂、--- · •14 本紙張尺度適用中國國豕標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 538244 A7 B7 五、發明説明（4 ) 層及具有一定體積之試劑層。將試樣施加至試劑層，經過 覆蓋在上之吸收層與障壁層中之成排孔洞。 無論此項試驗是在家庭、醫師診療室、臨床或醫院中進 行，葡萄糖測定之正確性與再現性均極端地重要。在顏色 顯示之試劑片之情況中，一般期望顏色改變應爲顯著的， 且對於葡萄糖以外之生物流體成份之變異不敏感。在目視 讀取試劑片之情況中，特別重要的是，對於糖尿病患者， 其可能具有已受傷害之視覺，能夠有一種會依葡萄糖濃度 而顯示出顯著顏色改變之片條，惟在特定波長下由於吸光 率之改變所顯示之顏色改變，對於儀錶讀取片條之正確性 亦爲重要的。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項存填寫本頁) 、13 由於顏色改變係涉及一系列化學反應，故其不會瞬間發 生。因此，使用者必須等待一段時間，典型上爲一分鐘或 較少，以供反應進行。當以儀錶讀取片條時，計時器電路 系統可獲得信號，顯示反應已完成。但是，當片條以目視 讀取時，未使用儀錶，使用者可能會低估所需要之時間， 過早讀取片條，並獲得不正確結果。或者，使用者可能覺 得在讀數片條之前，需要等待超過之時間，以確定反應完 成，而造成沒有必要之延遲及使用者之不滿。因此，需要 一種π化學”計時器；意即一種在片條上之構件，其將改變 顏色’而不管萄糖（或其他令人感興趣之被分析物）在試 樣中之濃度，但其只有在足夠時間已通過而完成與試樣之 顏色形成反應後才會如此。 適 尺 張 I紙 I本 縣 I釐 公 538244 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（5 ) 根據本發明，一種用以度量被施加至片條之生物流體試 樣中被分析物濃度之細長多層試劑測試片，係包含 a) —個底層，其具有接受試樣之通孔； b) —個薄膜層，其具有面向底層之試樣側，及與其相 反之測試側，並具有沿著其長度方向排列之多個分立吸收 性檢測區域，藉由非吸收性區域分隔，此薄膜含有可與被 分析物反應之試劑，以產生顏色改變，該試劑包含 i) 與被分析物交互作用以形成過氧化氫之第一 種成份； ii) 與過氧化氫交互作用以進行顏色改變之第二 種成份；及 iii) 抑制第二種成份之顏色改變之第三種成份； c) 一個中間層，介於底層與薄膜層之間；及 d) 用以沿著片條分佈試樣之計量裝置，此計量裝置包 含在中間層中形成之流體輸送溝槽，以在薄膜表面上引導 試樣至吸收性檢測區域； 抑制劑濃度係以預定方式，随著與片條之第一個末端之距 離而漸增，因此若其欲達成顏色改變，則必須在試樣中包 含相應地漸增之被分析物濃度，於是在將試樣施加至片條 時，一或多個檢測區域可改變顏色，且最遠離第一個末端 之顏色改變區域會顯示試樣中之被分析物濃度。 於操作時，用以度量生物流體試樣中被分析物濃度之方 法，係包括以下步驟： (a)施加誠樣至試劑測試片，此測試片包含： (諸先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂--Γ . 4 538244 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（6 ) (i) 一個底層，其具有接受試樣之通孔； (ii) 一個薄膜層，其具有面向底層之誠樣側，且 包含多個吸收性檢測區域，當與含有至少預 定量被分析物之流後接觸時，每一個都會改 變顏色，大於此量之被分析物會造成較接近 片條第一個末端之檢测區域之顏色改變，及 (iii) 計量裝置，用以分佈試樣，從通孔沿著預定 非吸收性路徑至各檢測區域，及 (b)藉由觀察改變顏色及最遠離片條第一個末端之檢測 區域，測定被分析物濃度。 此片條係爲提供被分析物濃度之目視指示之類型，該被 分析物係包含在被施加至片條之”試樣側，，之生物流體中。 此目視指示係顯現在片條之相反（或"測試”）侧。 測試片之化學組成，當然係依欲被度量之被分析物/生 物流體而定。測試片可經設計以檢出被分析物，譬如葡萄 糖或其他糖類、醇類、膽固醇、蛋白質、酮類、尿酸、苯 丙胺酸或酵素，在生物流體中，譬如血液、尿液及唾液， 以及水。爲方便與簡潔起見，在本專利説明書中以最詳細 方式揭示之試劑測試片，係檢測血液中之葡萄糖。一般熟 请此藝者可容易地修改此揭示内容中之訊息，以檢測其他 被分析物/生物流體組合。 本發明之測試片係提供未經度量血液試樣中葡萄糖濃度 之相對較簡易且快速測定。此片條包含一個具有孔洞之底 廣，可將試樣經過該孔洞引進多孔基質之試樣侧，其相反 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) :裝- 訂 4

本紙張尺細中國ί^ΤΓ〇Νδ)Α4^( 210X297,J1T 發明説明（7 ) 側爲測試側。此基質通常爲薄膜，且此兩術語係在本專利 説明書與隨文所附之申請專利範圍中交換地使用。測試用 試劑係被塗敷至基質，且達較大或較小程度，係被浸潰在 基質之孔隙中。爲簡化起見，在本專利説明書與随文所附 之申請專利範圍中，吾人有時會將基質上之試劑稱爲.，塗 層”，故應明瞭試劑塗層會滲透基質。 一個中間層係位於底層與基質之間。在一具體實施例中 ，中間層上之切口係與薄膜之非吸收性區域對準，以導引 試樣至沿著片條排列之一系列吸收性檢測區域（當在本專 利説明書及随文所附之申請專利範圍中使用時，應明瞭·， bibulous”係意謂吸收性）。於中間層上之一系列凹口係 圍繞著檢測區域附近及上方之空間，以強制試樣流動至此 等區域。於另一項具體實施例中，在中間層上之細長而實 質上爲矩形之槽缝，係導引試樣至被非吸收性區域分隔之 連續吸收性區域。 固定體積之試樣-典型上爲包含紅血球與葡萄糖之全企 液-因此係被引導至薄膜之試樣側，在一系列檢測區域之 每一個處。基質之孔隙度允許流體通過，從試樣側朝向測 試側，例如藉毛細作用。因此，測試用試劑可與血液中之 葡萄糖反應，而造成測試側或其附近之顏色改變。由於強 烈帶色之紅血球可能使其較難以檢測顏色改變，故基質較 佳爲各向異性，並具有從試樣侧上之大孔隙漸變至測試側 上之較小孔隙之孔隙大小，以捕集紅血球離開測試侧。有 多種物料可用於本發明測試片與計時器之不同組件。一此 538244 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（8 此等物料係個別揭示於1994年4月26日及1995年5月23日頒 予Kiser等人之美國專利5,306,623與5,418,142中，且併 於本文供參考。 測試用試劑包含一種使葡萄糖轉化成過氧化氫之成份， 譬如葡萄糖氧化聘；一或多種用以檢測自存在於試樣中之 葡萄糖所產生之過氧化氫之成份；及一種抑制劑。用以檢 測過氧化氫之成份，可爲過氧化I每，較佳爲辣根過氧化酶 ’且伴随著一種會在反應過程中改變顏色之"指示劑”。此 指示劑可爲一種可氧化染料或偶合染料。過氧化酶會在過 氧化氳存在下催化指示劑之氧化作用。此試劑之最後一種 要件爲抑制劑，其會阻滯指示劑之改變顏色之氧化作用。 此片條係沿著其長度方向分段，其方式孫致使相鄰薄膜 片段具有不同抑制劑濃度。各片段具有吸收性檢測區域， 其只有在假若及當有足夠葡萄糖存在時才會改變顏色，其 係首先造成所有抑制劑被消耗，然後使指示劑氧化，於是 造成特徵性顏色改變。因此，在特定區域中之顏色改變， 係註實在最初血液試樣中有低限葡萄糖濃度。沿著此片條 ’在一特定方向上，各連續片段具有逐步較大之抑制劑濃 度，其係相應於低限葡萄糖濃度上之逐步增加。指示劑濃 度對所有片段均相同。原則上，其他不同抑制劑/指示劑 差額亦是可能的。 若此等片段具有抑制劑濃度在對於特定試樣之適當範圍 内’則相鄰檢測區域會與被分析物反應，以致使一個區域 被著色，而相鄰區域則否。此結果表示在試樣中之葡萄糖 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 一裝. 訂 -10 -

農度’係至少等於爲使一個區域之顏色改變所需要之低限 濃度，但未高達爲改變相鄰區域之顏色所需要之濃度。 爲進行血糖監控，一種選用之計時器片段塗層，係包含 指示劑片條構件—種具有測試用試劑經塗覆於其上之多 孔性基質-及另外爲葡萄糖構件。於乾燥狀態下，試劑化 學物質並未被葡萄糖活化，但在將試樣施加至片條時，計 時器塗層係被水合，且在塗層中之葡萄糖，於預定時間後 ’會造成指示劑改變顏色。葡萄糖較佳係存在於計時器中 ’其量係遠超過爲克服抑制劑所需要之量。在該情況中， 所需要之時間係爲較長或較短，依有較多或較少抑制劑存 在而定。於片條中及於計時器中之顏色改變，可直接由眼 睛或使用光學儀器觀察，該儀器係檢測反射度上之改變。 册圖簡述 圖1爲本發明直接讀取試劑測試片之基質之透視圖。 圖2爲本發明直接讀取試劑測試片之試樣側之剖視底部 平面圖。 圖3爲圖2測試片内部經部份切除之放大斷片透視圖。 圖4爲圖2片條沿著線條4_4所取得之橫截面。 圖5爲圖2測試片之底部平面圖。 圖6爲頂部平面圖，顯示圖5測試片之測試側。 圖7爲圖6片條，在試樣已被施加至其上後之情況。 圖8爲圖2喊片之另_個具體實施例之剖視透視圖。 圖9爲圖8測域片之底部平面圖。 -11 -

、發明説明（1G 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 圖10爲圖8測試片之頂部平面圖。 圖π爲圖ίο片條沿著線條n—u所取得之橫截面 本發明爲一種用以度量生物流體中被分析物濃度之直接 讀取試劑測試片。此種測試片之主要構件爲多孔性基質， 其中摻有會進行顏色改變之測試用試劑，以回應被施加至 片條之生物流體試樣中之被分析物。 此基質可爲均勾組合物，或可爲經塗覆之基材，且可爲 各向同性或各向異性。其具有於其上施加試樣之試樣側， 及於其上觀察顏色改變之測試側。此基質較佳爲各向異性 薄膜；更佳爲具有寬廣孔隙大小範圍之各向異性薄膜。例 如，從约0·1微米至约150微米孔隙大小之梯度，可延伸經 過此薄膜。在大孔隙側上，孔隙大小較佳係在约30微米至 約40微米之範面内。在孔隙最小之薄膜側面上，其空隙體 積相對較小，且薄膜材料通常十分稠密，在一層中，其典 型上可構成高達薄膜厚度之20%。在此層中，孔隙大小較 佳係在约0.1至約〇·8微米之範圍内，其中額定孔隙大小較 佳爲約0·3微米。在將生物流體施加至試樣側時，當試樣 穿透薄膜時，其會逐漸地遭遇較小孔隙。最後，譬如紅血 球之固體，會抵達薄膜中其無法進一步穿透之位置。仍然 含有經溶解葡萄糖之其餘試樣部份，會穿透經過而達測試 侧。薄膜之各向異性及/或分離成份（於下文討論）之使用 ，允許相對較快速流率經過薄膜，即使固體之過濾正在進 -12 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X^97公釐） ^ 裝IT (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局， 員工消費合作社印製 538244 A7 ________B7__ 五、發明説明（Η ) 行時亦然。 當試樣通過基質時，與試劑之反應會造成光吸收性染料 在接近測試側之空隙體積中形成或分解，於是實質上影镌 基質之反射度。 聚颯與聚醯胺（尼龍）係爲適當基質材料之實例。其他具 有可比擬性質之聚合體亦可使用。可將此等聚合體改質以 引進會提供帶電荷結構之其他官能基，因此基質之表面可 爲中性、正電性或負電性〇 一種製備構成基質之多孔性材料之較佳方法，係爲澆鑄 聚合體而未使用支撐核芯。此種基質爲例如各向異性聚砜 薄膜，其可得自Memtec公司（Timonium, MD)。通常採用低 於約200微米厚度之基質，其中以约115至155微米較佳。 最佳爲约130至140微米之厚度，特別是當該基質爲尼龍或 各向異性聚颯時。 可將此薄膜以測試用試劑處理，其方式是將薄膜浸潰於 諸成份之互混物中，藉以使薄膜飽和。較佳係將至少一部 份成份順序地施加至薄膜。過量試劑可藉機械方式移除， 例如空氣刀、刮刀或玻璃棒。然後，使薄膜乾燥。試劑有 集中在薄膜之小孔隙（測試）側之傾向。 測試用試劑包含（i) 一種使葡萄糖轉化成過氧化氫之成 份，（ii) 一種檢測過氧化氫之成份，及（iii)一種成份， 用以抑制檢測過氧化氫之成份。此試劑可視情況進一步包 含分離成份，其會造成固體譬如紅血球，變成被捕獲在基 質中，而有效地自生物流體中移除固體。亦可包含如下文 -13 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 一--- ---------------IT--r----φ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 538244 Μ Β7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（12 ) 及在實例中所述之其他成份。 用以使葡萄糖轉化成過氧化氫之較佳成份，包括葡萄糖 氧化酶，其爲一種通常得自黑曲霉或青霉屬之酵素。葡萄 糖氧化酶會與葡萄糖及氧反應，而產生葡萄糖酸内酯與過 氧化氫。最適宜葡萄糖氧化酶濃度係依指示劑系統之組成 而定。例如，若指示劑系統爲MBTHSB-ANS (其係描述於下 文），則在约500-10,〇〇〇 U. /毫升範圍内之葡萄糖氧化聆 係爲適當的，更佳爲約700-2000 U. /毫升，且最佳爲约 1000U· /毫升。一般而言，較高濃度之葡萄糖氧化胃每會造 成反應更迅速地進行，而較低濃度則較不迅速。 經如此製成之過氧化氫，會與用以檢測過氧化氫之成份 反應，該成份包括選擇性地催化過氧化氳與指示劑間之反 應之過氧化酶。過氧化酶係使用過氧化氫作爲氧化劑，其 能夠從不同受質移除氫原子。適當過氧化I每可含有得自植 物之鐵原十°林、紅色血晶素。得自動物，例如得自動物甲 狀腺之過氧化酶，亦適合。辣根過氧化酶（HRp〇)係特佳地 作爲用以檢測過氧化氫成份之一種組份。 此過氧化氫，較佳係被過氧化胃每催化，其係直接或間接 反應而形成或分解會吸收預定波長範圍光線之指示劑染料 此才曰示劑染料較佳係在與測試用試劑強烈吸收之不同波 長下強烈地吸收。指示劑之經氧化形式可爲帶有顏色、輕 微帶有顏色或無色之最後產物，其註實基質測試側顏色上 之改變。換言之，測試用試劑可藉由帶有顏色之區域經漂 白，或者，藉由無色區域顯現顏色，而指示有被分析物存 ~ 14 -

(請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ¾衣- 訂 4 438244 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（13 ) 在於試樣中。 可使用於本發明之指示劑，包括（a)3-甲基-2-苯幷嘍唑 啉酮腙鹽酸鹽（MBTH)，且併用3-二甲胺基苯甲酸（DMAB); (13)]^111且併用3,5-二氣-2-羥基苯-磺酸（〇(：耶5);((：)4-胺基安替蒎（4-AAP)與5-氧基-1 -(對-磺苯基）-2-吡唑啉-3-羧酸（OPSP) ; (d)4-AAP與N-(間-甲·苯基）-二乙醇胺（NDA );(e)2,2’_次偶氮基-二（3-乙基苯幷嘍唑啉）磺酸（ABTS) ;(f)4AAP與4-甲氧基萘酚；（g)五倍子酚紅（PGR) ; (h)溴 基五倍子酚紅（BPR) ; (i)酸綠25 (AG);或（j)[3-曱基-2-苯幷嚐唑啡酮脯]N-磺醯基苯磺酸鹽單鈉（MBTHSB)，且併 用8-苯胺基-卜萘磺酸銨（ANS) oMBTHSB-ANS係爲較佳者。 關於MBTHSB-ANS之其他資訊，係呈現在1996年10月8日頒 予之美國專利5,563,031中，且併於本文供參考。 抑制用成份會阻滯過氧化氫與指示劑間之反應，例如經 由使過氧化氫還原或經由使已氧化之指示劑還原。原則上 ，對於抑制劑有數種不同操作模式。首先，抑制劑可與指 示劑競爭，於是減緩在指示劑中進行顏色改變之速率。^ 次，抑制劑可爲非競爭性，因此在任何大量顏色改變於指 示劑中進行之前，實質上所有抑制劑均被消耗。抑制劑^ 作之其他模式亦可行。本發明之抑制劑較佳爲非競爭性。 其中，適當抑制劑之範圍係爲2,3,4-三羥基苯甲酸；乙 醇酸丙酯，3,4-二經基桂皮酸；3,4-二幾基苯甲搭；沒食 子酸；5,6-二胺基尿嘧啶；抗壞血酸；及異抗壞血酸。抗 壞血酸爲較佳的；但是，抗壞血酸會在溶液中氧化，故二 -15 - 本紙張尺度適用中關家標準(^T^72_10x297/Ac^y (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- 、1T--r. 538244 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（14 ) 須被安定化，以允許試劑被塗覆。較佳安定劑爲一級醇類 ，譬如乙基、曱基或丙基醇。乙醇係爲較佳的，特別是濃 溶液；意即50%或更多乙醇之溶液。 雖然各向異性薄膜’其係爲較佳基質，會濾出紅血球並 保持其遠離測試側，但測試用試劑亦可視情況含有分離成 份。此分離成份應能夠從含有紅血球之流體，例如全血液 ，藉由在基質中多價螯合紅色血球，而產生相對較透明無 色流體。使用於本發明中之分離成份，包括但不限於聚乙 二醇、聚（甲基乙烯基醚/順丁缔二酸）酐、聚丙二醇、聚 苯乙烯磺酸、聚丙烯酸、聚乙烯醇及聚乙烯基磺酸，其pH 值在约4.0-8.0之間。此種分離成份係存在於基質中，其 量係依其電荷與分子量、被埋藏在基質中之其他成份、基 質pH值與孔隙大小及基質於乾燥後之殘餘水份而改變。此 等參數易由熟諳此藝者決定。例如，當採用聚丙二醇作爲 分離成份時（例如PPG-410,得自 BASF, Wyandotte, MI)， 其較佳係以約2-30%重量對體積（w/v)，且更佳爲8-10% w/v存在。其他分離成份亦可以約2-30%w/v之濃度採用 。聚合體分離成份可浸潰或埋藏在基質中，或在製造期間 澆鑄於薄膜中。 有些水溶性鹽亦可達成血液分離。於此等鹽中，適合用 以分離血液之成份爲檸檬酸鹽、曱酸鹽及硫酸鹽，以及某 些酸類，譬如胺基酸、檸檬酸、肌醇及蘋果酸（參閲，例 如1971年1月5日頒予M· C· Fetter之美國專利3,552,928) 。包含分離成份之優點，係爲由於固體譬如紅血球實質上 -16 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 538244 A7 -—--- -B7_ 五、發明説明（15 ) 自生物流體中移除，故在測試位置較不會有背景顏色遮蔽 藉由測試用試劑所產生呈色上之改變。 可將其他成份埋藏至基質中，以加強試劑片之呈色與可 讀性，及保持基質之均句性與完整性。例如，測試用試劑 可包含鹽及/或緩銜劑，以幫助染料在基質中之分離。此 種緩衔劑可含有例如檸檬酸鹽，以约0.01 Μ至约1.0 M， 且較佳爲以約〇·1 Μ存在於溶液中〇其他緩街劑亦可採用 〇 使基質成爲親水性之化合物，或可充作安定劑之化合物 ’譬如水解蛋白質，亦可採用。此種化合物包括但不限於 例如牛血清白蛋白，多肽及低分子量蛋白質，可以Crotein SPA取得（CR0DA公司，New York, N.Y.)。此種化合物係 於例如约1毫克/毫升至約100毫克/毫升之濃度下使用。 在Crotein之情況中，约30毫克/毫升係爲較佳的。 其他安定劑與防腐劑亦可包含在基質之塗層中。例如， 可採用乙二胺四醋酸（EDTA)、二乙三胺五醋酸（DTPA)及相 關化合物，其濃度爲例如约0.01毫克/毫升至约10毫克/ 毫升。其中，防腐劑之目的係爲幫助抑制劑安定化。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 有些指示劑（例如BPR)具有在基質中潛移之不期望傾向 。當使用此種指示劑時，係加入離子配對劑以防止此種潛 移0 例如，以 P〇lyquart (H) (Henkel 公司，Ambler, PA) 市購而得之聚乙二醇衍生物，對於其促進指示劑與其他基 質取代基間之離子配對之能力，是特別有用的。 當藉由顏色形成（例如MBTHSB-ANS)指示有被分析物存在 -17 - 本紙張又度適财（ CNS) A4規格（2iGX297公酱） 538244 A7 B7 五、發明説明（16 ) 時，可添加界面活性劑以使顏色明亮，及加強與未帶色周 圍之對比。 有機溶劑亦可採用於本發明之實作上，且可包含在供基 質用之測試用試劑配方中，當然，其條件是可與基質及測 試用試劑組合物相容。可能適當之有機溶劑包括氣仿、丙 酮、醇類、二氣曱烷、乙醚與石油鍵·、乙腈及其混合物。 於本發明實施上，於水中之70%乙醇係爲特佳的。 被塗覆於或浸潰至基質中之測試用試劑，在測試片之表 面上並非是均勾的。反而，較佳是將試劑以橫越片條之狹 窄尺寸延伸之一系列平行條紋或"片段”施加至基質。於鄰 接片段中之組成，係在抑制劑濃度上逐步增加。各片段具 有一個吸收性檢測區域。在此檢測區域中，測試用試劑會 與血液中之任何葡萄糖反應，以造成顏色改變，其條件是 葡萄糖濃度足夠大以克服在該檢測區域中之抑制劑含量。 因此，各後續檢測區域需要逐步較大葡萄糖濃度在試樣中 ，以造成該區域改變顏色。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 檢測區域之一係視情況適合充作計時器，以指示在各檢 測區域中已經過足夠時間，供試劑與葡萄糖反應。基質之 計時器片段係以包含測試用試劑及外加葡萄糖之組合物塗 覆或浸潰。由於測試用試劑之目的係爲回應葡萄糖而改變 顏色，故合併此兩種成份而不會造成顏色改變，係需要稍 微小心。必須有超過計時功能所需要之抑制劑量存在，以 補償此作用。在將含有葡萄糖之溶液塗敷後，使計時器片 段乾燥之速率係經控制。實際上，係首先將薄膜以含有緩 -18 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 538244 A7 --—τ -Ί -- - Β 7 —-一 五、發明説明（17 ) 衝劑、安定劑及酵素之溶液塗覆，並使該塗層乾燥以形成 第一層。然後’第二個塗層係塗敷含有指示劑、抑制劑及 葡萄糖之溶液。譬如膜片速度、烘箱溫度與空氣流量以及 被沈積塗料溶液之量等參數，係已預先被固定，並對抑制 劑及/或葡萄糖濃度施行適當調整。代替直接塗敷第二個 塗層，一種替代但非較佳之方式，係涉及在個別膜片上製 成第二個塗層，然後將其放置在第一層上。 在將試樣施加至片條上時，計時器片段組合物之水合作 用，允許顏色形成反應進行。於是，計時器片段改變顏色 所花費之時間，係藉由溫度及藉由測試用試劑之特性，特 別是抑制劑濃度、葡萄糖量及水合作用與氧擴散率進行測 定。 可使計時器顏色改變之時間，依葡萄糖在試樣中之濃度 而定，或者，與該濃度無關。藉由在計時器中摻入大爲過 量之葡萄糖，則該時間係實質上與試樣之葡萄糖濃度無關 。藉由在計時器中摻入較少葡萄糖，則可使該時間依試樣 中之葡萄糖而定；意即，若在試樣中之葡萄糖濃度較大， 則計時器將較快速改變顏色。在計時器中之葡萄糖濃度較 佳係大於约1500毫克/公合，其使得計時器實質上與在約 40-400亳克/公合範圍内之試樣葡萄糖濃度無關。計時器 片段組合物係包含過量之使葡萄糖轉化成過氧化氫之成份 (譬如葡萄糖氧化|每）及葡萄糖。於是，計時器組合物應包 含與具有最高抑制劑濃度（其係相應於最高葡萄糖讀數）之 結果片段至少一樣多或更多之抑制劑。 -19 - ---------------訂·—一.----0 C請先閱讀背面之注意事項、再填寫本頁j 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉μ規格（210Χ297公釐）

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 538244 A7 _____ B7_ 五、發明説明（18 ) 計時器亦充當重要品質管制功能，其方式是當測試片已 因曝露於水份而被危害時，使其顯而易見。測試片必須保 持乾燥，直到其欲被使用時，因爲使葡萄糖轉化成過氧化 氫之成份（一般爲酵素）易在曝露於水份時降解。因此，若 片條過早曝露於水份，則其將變成受危害。但測試片之損 害對於使用者並非顯而易見，其可能因此使用此種片條， 並獲得錯誤結果。但是，若此片條包含計時器片段，則曝 露至水份會造成計時器改變顏色，其會警告使用者片條已 被危害及不應使用之事實。 關於計時器之其他資訊，係呈現在1996年9月3日提出申 請之共待審美國專利申請案序號08/706,753中，且併於本 文供參考。 除了含試劑之基質以外，本發明之片條包含一個支撐基 質之底層。此底層較佳爲熱塑性薄片，更佳爲聚酯，通常 约0.05-0.2毫米厚，並具有孔洞，試樣可經過其間施加至 基質之試樣侧。血液試樣係自此試樣孔洞，沿著基質之長 度方向分佈。若底層大致上爲不透明，則可將一或多個透 明窗口區段定位在與試樣孔洞適當距離處，試樣在窗口（ 一或多個）中出現，係確認已將足夠試樣施加至片條。 從試樣孔洞分佈血液至檢測區域，係涉及一個中間層， 其係位於底層與薄膜之間，且視情況黏附至此兩者上。此 中間層較佳爲熱塑性薄片；更佳爲聚酯，通常約〇 〇5_〇·2 毫米厚。在一具體實施例中，於中間層上之切口係導引試 樣由片條之長度方向下降，沿著薄膜上之非吸收性路徑， -20 - 本纸張尺舰财) 衣------1Τ--„----- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 538244 A7 B7 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 五、發明説明（19 ) 並指引試樣至各檢測區域。於中間層上之凹口係對準檢測 區域，因此各檢測區域係實質上被中間層之壁圍繞。於另 一項具體實施例中，中間層具有一個細長、實質上爲矩形 之槽缝，其係導引試樣越過薄膜表面至檢測區域。槽缝寬 度通常在约0.5與3毫米間之範圍内。 關於薄膜上之非吸收性路徑之一種較佳結構，係經由使 薄膜孔隙結構陷縮而形成。其可藉由加熱達成，無論是直 接或利用雷射或超音波，且較佳係包括壓力。但是，較佳 方法是壓扁。因此，薄膜係被壓扁以使其到處成爲非吸收 性（但仍爲親水性），惟檢測區域除外。於本發明之一項具 體宥施例中，係將薄膜在平板之間壓扁，並使用孔模防止 檢測區域被壓扁。至少约6噸/平方英吋（80,000 kPa)之 壓力係爲較佳的。可視情況將板加熱到至少約ll〇°C。較 佳壓力與溫度當然係依壓扁機制且停留時間，以及薄膜參 數而定。最適宜數值可藉例行實驗測定。在此具體實施例 中，係將薄膜依此方式壓扁，產生朝向底層延伸之檢測區 域，並與具凹口之中間層一起使用，如下文所討論者。 爲精確度量，對各檢測區域所提供之血液體積，較隹係 爲可再現性。若凹口完全環繞檢測區域，則在中間層與底 層及經壓扁薄膜之間呈現液密封口，各檢測區域係伴随著 密閉（圓柱形）體積，其壁係藉由中間層形成，而其末端係 藉由薄膜與底層形成。但是，分佈溝槽係沿著片條行進， 並餵送試樣至各檢測區域。底層較佳係具有通氣孔，與檢 測區域對準，以幫助均句地充填溝槽與檢測區域。高精密 ------ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -一口 .

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I 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS ) A4規格^ 538244 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（2〇 ) 度需要分佈溝槽提供固定體積之試樣至各檢測區域，但接 著不再提供，至少不在度量之時間架構-约1或2分鐘下提 供，在施加血液後约90秒開始起算。由於最初試樣體積是 可變的，故在薄膜之各末端較佳係有一個吸收層，以從分 侑溝槽末端帶走過量試樣。在溝槽末端之吸收層，亦會加 強裁樣沿著片條長度方向之芯吸作用。此項技藝中所習知 之非織造織物，係形成較佳吸收層。 於本發明之另一項具體實施例中，係將薄膜與覆蓋薄片 在滾筒之間壓製。覆蓋薄片具有順應檢測區域而定位之孔 洞，且此等區域係接著延伸至孔洞中，保持未被壓扁。對 此項具體實施例而言，無需孔模，且壓扁作用較佳係藉滾 筒達成，使用至少約1000磅（4,450 N)之施力。注意，在 此項具體實施例中之檢測區域，係在與上述具體實施例中 方向之相反方向上延伸。由於試樣係被吸取朝向上層，向 外側開放，故在底層中未使用通氣孔。此具體實施例係併 用中間層，其具有實質上矩形槽缝，以導引試樣至檢測區 域。由於該具體實施例具有試樣孔洞，位於接近具有••高 葡萄糖”檢測區域之片條末端處，故接近片條之相反端僅 使用單一吸收層。 因試樣中之葡萄糖所造成之顏色改變，係顯現在薄膜之 測試侧。在此具體實施例中，檢測區域係朝向底層延伸， 其係合宜地以具有與檢測區域對準之孔洞之上層覆蓋薄膜 之測試侧。此等孔洞使得可目視顏色改變，且亦允許氧抵 達反應位置。當檢測區域在相反方向上延伸時，於上層中 -22 - 本紙張尺度通用中國國豕標準（CNS ) A4規格（210X297公襲) IT (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 538244 A7 _______B7 五、發明説明（21 ) 之孔洞係在如上述之壓扁程序期間界定檢測區域。在兩種 情況中，上層較佳爲熱塑性薄片，更佳爲聚酯，通常爲约 0.05-0.2毫米厚。上層可連接至薄膜，例如使用黏著劑。 若黏著劑會干擾葡萄糖度量反應，則任何黏著劑較佳係被 限制於薄膜之非吸收性區域。但是，若黏著劑不會干擾此 等反應，則其部位較不重要。 由於檢測區域’當其含有較佳試劑時，在曝露於光或氧 時會慢慢地進行顏色改變，且由於選用之計時器對水份具 敏感性，故片條較佳係被包裝在不透明之氧與水份不可透 過之封閉物中，譬如密封之箔包覆物。若將片條個別地包 裝，則片條可於使用期間留在已剝開之包覆物中。 現在參考附圖進一步説明本發明。圖1顯示本發明之基 質10，用以度量生物流體中之被分析物量。雖然基質1〇係 以孤形位置顯示，但其係爲可撓性，且當使用時通常呈平 面。此基質包含試樣側12，生物流體試樣係被施加於其上 ，及測試侧14,於其上或其附近之顏色改變，係指示有被 分析物存在。顏色改變係由於被分析物與被浸潰在孔隙16 中之試劑之交互作用所造成〇爲度量葡萄糖在血液中之濃 度’孔隙大小較佳係在接近試樣侧12處相對較大，並在趙 近測試側14時降低其大小。孔隙大小梯度係用以在接近試 樣侧12處捕集紅血球，因此其顏色不會干擾看見顏色改變 以指示被分析物存在之能力。 三個平行片段a、b及c係概要地顯示。各後續片段具有 比前一個片段逐步較多之抑制劑。在一較佳具體實施例中 -23 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨〇 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

538244 發明説明（22 ) ，於已將試劑施加至薄膜中之平行片段後，如所示，係將 薄膜之每-處壓爲，但在進彳亍被分析物—試劑反應之檢測 區域處則除外。吸收性檢測區域—位在各平行片段中之單 -區域-及非吸收性經壓扁區域式樣之—項具髋實施例， 係描繪於圖2之平面圖及圖3之放大斷片透視圖中。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂·· 圖2爲部份剖視之底部平面圖，顯·示薄膜1〇之試樣侧以 及吸收層20與22，被中間層24覆蓋，及底層26。薄膜1〇及 吸收層20與22，較佳係以頂層（未示出）支撐。吸收層况與 22較佳係位在薄膜末端（超過虛線a與β)以吸收血液試樣， 其係超過度量所需要之體精。該體積必須足以提供試樣至 各檢測區域，及若有計時器區域存在，則其亦然。一般而 言，具有較少檢測區域之片條，不需要如此多之試樣，但 提供較小範圍之葡萄糖値及/或較不精密。圖2顯示9個 吸收性區域，代表8個檢測區域（编號卜8)及一個計時器（ Τ)，其提供適當範圍與精密度，然而並不需要無法令人接 受之大試樣體積。中間層24具有凹口28,其係對準底層26 中之試樣孔洞30。試樣係經過試樣孔洞3〇引進，並藉毛細 作用沿著中間層24之中央溝槽32導引至各檢測區域及計時 區域’任何過量試樣係在吸收層2〇與22中被吸收。試樣經 過選用之透明窗口34與35出現，係確認已提供足夠試樣供 度量。中間層24較佳係與薄膜之試樣側12形成封口，因此 試樣例如不能夠在鄰接檢測區域之間直接流動。 圖3爲放大斷片透視圖，描繪3個檢測區域部份6、7及 8，經過底層26觀看，及被中間層24之指狀物分隔。選用 -24 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 538244 A7 ___ B7 五、發明説明（23 ) 之黏著層24a係使中間層24連接至底層26及薄膜10。在層 26中之通氣孔40，有助於試樣流入片條中。在頂層36中之 孔洞，譬如38，係與吸收性區域排成一列，使得可目視吸 收性區域中之任何顏色改變，以及讓顏色改變反應所需要 之氧進入。選用之黏著劑層36a係使頂層36連接至薄膜1〇 之測試側。 圖4爲沿著圖2線條4-4所取得之橫截面，除了圖2中 所示之諸層以外，其顯示頂層36。於底層26中之通氣孔， 譬如40，係與檢測及計時器區域排成一列，且幫助試樣充 填圍繞著各彼等區域之體積。欲被充填之體積，係以薄膜 10、中間層24及底層26爲邊界。-注意柱狀檢測區域3係延 伸朝向底層26，且在檢測區域與底層間之最小分隔，典型 上只有约12微米。爲清楚起見，所顯示之分隔係大於一定 比例。 圖5爲本發明片條之底部平面圖，顯示試樣孔洞30，及 指示使用者經過該孔洞引進試樣之圖形。當見及試樣經過 透明窗口34與35時，確認足夠試樣已被施加至片條。 圖6爲片條之頂層36之平面圖，其已被校準以使檢測區 域與葡萄糖濃度產生關聯。 圖7顯示圖6之片條，在血液試樣已被施加至開孔30 ( 圖2)後之情況，試樣已沿著中央溝槽32擴散，且在試樣中 之葡萄糖已於檢測區域中與試劑反應。由於底部檢測區域 具有最少抑制劑，故該區域將首先改變顏色。接著，第二 個，然後是第三個區域會改變顏色。上方圓圈不會改變顏 -25 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ^批衣------1T------ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 538244 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 Α7 Β7 五、發明説明（24 ) 色，因爲太少葡萄糖在試樣中。由於足夠時間已過去，計 時器區域42會改變顏色，故可讀取片條。因此，在圖7中 描繪之結果，顯示試樣葡萄糖濃度爲至少丨2〇毫克/公合 ,但低於150毫克/公合。此讀數可在計時器區域42改變 顏色後之任何時間下取得。注意圖7中，經由與葡萄糖反 應所造成之顏色改變，係從白色至帶有顏色。但是，此系 統可替代地以指示劑染料操作，該染料係因葡萄糖所引致 之氧化作用而分解，並具有相應之顏色改變，從帶有顏色 至白色。 圖8爲本發明片條之另一項具體實施例之剖視透視圖。 底層126具有試樣孔洞13〇 ,用以引進血液試樣。其與圖2 之具體實施例不同，圖2中之試樣孔洞3〇係位在接近片條 中間（端對端）處，試樣孔洞13〇較佳係位在接近片條末端 ，其具有檢測區域以顯示高葡萄糖濃度，以及選用之計時 器。將試樣孔洞置於該末端，係提供兩項優點。首先是葡 萄糖度量所需要之時間降低，因血液抵達•，高葡萄糖••檢測 區域（其係花費最長時間才會回應）之時間降低。其次是計 時器變化性降低，因爲試樣基本上係直接施加至計時器， 故排除血液抵達計時器之時間上之變化性。中間屠124里 有細長槽缝132，其係從大致上相應並對準試樣孔洞13〇之 切口行經片條之長度。槽缝係運送血液試樣，沿著片條之 長度方向，於薄膜110上方，朝向吸收層12〇。當試樣通過 薄膜110上方時，其一部份係沈積在計時器τ，中，及在八 個檢測區域（編號101-108)之每一個中。計時器與檢測區 -26 - 扯衣 訂 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

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域係各經顯層136巾與彼等對準之相應細觀看。企液 經過透明窗口 135出現，係確認已提供足夠試樣以供度量 〇 圖9爲圖8片條之底部平面圖，其中指示使用者經過底 層中之孔洞130(及在中間層中之共對準孔洞128)引進試樣 之圖形（譬如在圖5中所描繪者）已被，省略。 圖10爲頂層136之平面圖，其顯示計時器圖形，以及檢 測區域之校準。 圖11爲沿著圖10之線條11-11所取得之橫截面，其顯 示頂層136、薄膜110、中間層124及底層126。箭頭係説明 試樣引進底層126中之孔洞130，及中間層124中之共對準 孔洞128之方向。注意柱狀計時器區域1，係向上延伸朝向 相應孔洞138,且較佳係進入其中，其係與計時器τ，對準 ，且係爲與相應之計時器及檢測區域對準之頂層136中之 九個孔洞一 〇 爲更瞭解本發明’下述實例係進一步説明本發明之不同 具體實施例。此等實例並不意欲以任何方式作爲限制。 鲁抑衣------訂·--：---- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 27 -- - I II ...... 本紙張尺度適用中國國家襟準（CNS ) A4規格（21〇X297公釐） 538244 A7 B7 五、發明説明（26 )

實例 1 - BPR 製備下列溶液： 酵素溶液 蒸餘水 83.5 克 0·2Μ烏頭酸 27.0克 l%(w/w) EDTA Na2 23· 8克 葡萄糖氧化酶 165,000U 烏頭酸 6·0克 HRP0 340,000ϋ NaOH(固體） 2.2克 Crotein SPA 4.2克 咪峻 0.6克 甘露醇 3·0克 5%(w/w)Surfactol Q1 3.0克 調整pH值至4.80 乙醇 40.0 克 PPG-410 5·6克 酵素溶液 28.0 克 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂-

Jf 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 將Memtec BTSH 55薄膜在此溶液中浸潰塗覆，並以玻璃 棒刮除過量溶液。將已塗覆之薄膜在浮選乾燥機中，於 °F&適度空氣流量下乾燥，因此膜片在2〇秒内實質上乾澡 。將膜片纏繞在線轴上，準備進行下述第二次塗復。 製備下列溶液： 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) a4規格（2丨0χ297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 538244 A7 ---一 B7 ___ 五、發明説明（27 ) 抗壤血酸鹽（抑制劑）儲備溶液 稀釋劑 蒸餾水 190克 370克 1%EDTA Na2 55克 107克 BPR 0.36 克 0.71 克 Poly Quart®H 6克 11.8 克 PPG-410 14·2 克 27·8 克 抗壞血酸 1.37 克 -- 乙醇 243克 477克 計時器溶液 稀釋劑（每一份上述配方） 120克 抗壞血酸 0.885克 葡萄糖溶液* 17.25克 *葡萄糖溶液爲16.0克/分升葡萄糖在水中之溶液，使其 變旋24小時，冷凍儲存。 製成下述儲備溶液之稀釋液： 0·04〇5 ·· 1，〇·1〇8 : 1，〇·236 : 1，0.369 : 1，0·569 : 1 ，U60 : 1。在抑制劑濃度上之此逐步增加，係相應於檢 測區域報告之逐步較大葡萄糖濃度。將此等溶液，伴随著 計時器溶液，並排塗覆至負栽酵素薄膜之大孔隙側，以沈 積每平方毫米薄膜大约1.2 X 10_4毫升。在歷經如上述關 於酵素塗覆步驟之相同乾燥條件之前，使薄膜潮濕大約十 五秒。結果顯示計時器在約70秒内反應，其中約95%結果 落在64與79秒之間。 本紙張尺度適用巾關家縣（CNS ) Μ規格（2lGx297公襲） --------^裝------訂--1---- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 538244 A7 B7 五、發明説明（28 ) 實例2 - MBTHSB-ANS指示劑 製備下列溶液： HPLC 水 1500毫升 檸檬酸 16.92克 檸檬酸鈉 20.88克 甘露醇 15克 EDTA 二鈉 1.26 克 Gantrez S95 6.75 克 Crotein SPA 36克 葡萄糖氧化百每 1·69 MU HRP0 1.5 MU Carbopol 9101 75毫升 檸檬酸二鈉## 225毫升 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 1 在乙犄中之11%溶液 "0·1Μ, pH值5·0 將Memtec BTS 35薄膜在貯槽中塗覆，以致使大孔隙表 面接觸該塗料溶液；按前述方式，以玻璃棒移除過量溶液 。按實例1，使薄膜乾燥及纏繞在線轴上。製成下列溶液 538244 A7 B7 經濟部中央標率局g〈工消費合作社印I · 五、發明説明（29 ) 溶液A (指示劑） 溶液B (潤濕劑) 70%(v/v)乙醇 2819亳升 Maphos®60A 41克 MBTHSB 2.98 克 70%(v/v)乙醇 205毫升 (NH4)ANS 25.83克 溶液B 205毫升 2%DTPA 51.25毫升 溶液C (抗壞血酸鹽儲備液） 溶液D (計時器） 水 115毫升 水 53毫升 抗壞血酸 4.58 克 抗壞血酸 8.75 克 乙醇 267毫升 乙醇 123毫升 以70%Et0H使體積成爲 175毫升 葡萄糖溶液 40·5毫升 對各抑制劑溶液，溶液A之體積係固定在263毫升。對 不同檢測區域，70%£1:011:溶液(：之比例，係從58.9改變 至0.200 ,因此被加入溶液a之70%Et0H +溶液c之體積 ’對所有抑制劑溶液均爲87.5毫升。這僅會有效地改變抑 制劑在各溶液中之濃度。將含有逐步增加抑制劑濃度之溶 液’及計時器溶液（溶液D)，並排塗覆至薄膜之大孔隙侧 。調整沈積速率以達成每平方毫米薄膜〜8 X 1〇-5毫升抑 制劑。使薄膜按上述乾燥，惟在塗覆與乾燥間之延遲爲約 K6分鐘。結果顯示計時器在約60秒内反應，對於30至55 %之叙球容積，或78至420亳克/公合之葡萄糖，幾乎無 影嚮。 -31 - 本紙張尺厌_宁國國家標準（CNS ) Α4規格UlOx 297/>t ) ---------·#------訂---L----0, (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 538244 A7 B7 五、發明説明（30 ) 熟諳此藝者應明瞭前述説明與實例，係爲實施本發明之 説明例，但絕非限制。本文中所提出細節之變異，在未偏 離本發明之範圍與精神下均可施行。 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -32 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）

Claims (1)

1. 538244 A8 B8 C8 D8 公參束 申凊專利範圍 專利申請案第86120028號 ROC Patent Appln. No. 86120028 修正之申請專利.範圍中.文本-附件（一） Amended Claims in Chinese - Enel. (I) (民國90年1U月l々日 (Submitted on October [(J , 2001) L 一種用以度量生物流體試樣中被分析物濃度之細長多 層試劑測試片，該試樣係被施加至片條，此片條包含 a) —個底層，其具有接受試樣之通孔： b) 一個薄膜層，其具有面向底層之試樣側，及與其相反 之测試側，並具有沿著其長度方向排列之多個分立吸 收性檢測區域，藉由非吸收性區域分隔，此薄膜含有 可與被分析物反應之試劑，以產生顏色改變，該試劑 包含 丄）與被分析物交互作用以形成過氧化氳之第一種成 份；. H)與過氧化氫交互作用以進行顏色改變之第二種成 份;及 hi)抑制第二種成份之顏色改變之第三·種成份； c) 一個中間層，介於底層與薄膜層之間；及 d) 用以沿著片條分佈試樣之計量裝置，此計量裝置包含 在中間層中形成之流體輸送溝槽，以在薄膜表面上引 導試樣至吸收性檢測區域； 抑制劑濃度係以預定方式，隨著與片條第一個末端之 距離而漸增，因此若其欲達成顏色改變，則必須在試 樣中包含相應地漸增之被分析物濃度，於是在將試樣 -33. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)丨 、τ 經濟部智总財是岣：只工消費合作社印製 本紙張尺度通州r囤囤豕標準（CNS )八4規格（2丨〇>< 297公釐 538244 其中被分析物為葡 其中生物流體為含 其中底層包含熱驾 經濟部智总时/4^;:只工消費合作社印製 A8 B8 C8 D8 申請專利範圍 施加至片條時，一或多個檢測區域可改變顏色，且最 遂離第一個末端之顏色改變區域會顯示試樣中之被分 析物濃度。 2·根據申請專利範圍第1項之測試片 萄糖。 3·根據申請專利範圍第1項之測試片 有紅血球之全血液。 4_根據申請專利範圍第1項之測試片 性薄片。 5·根據申請專利範圍第4項之測試片，其中底層包含聚酯 6·根據申請專利範圍第1項之測試片，其中底層進-步έ 含多個對準檢測區域之通孔。 7·根據申請專利範圍第i項之測試片，其中底層具有透印 區’又位在距接受試樣之孔洞預定距離處，以確保足务 試樣量。 ^ 8·根據申請專利範圍第丨項之測試片，其中薄膜層包含洛 向異丨生夕孔性薄膜，其具有大於接近試樣側及小於接近 測試側之孔隙。 9·根據申請專利範圍第2項之測試片，其中孔隙大小係經 選擇，以致使全血液試樣之紅血球被捕獲在薄膜中。 10·根據申請專利範圍第8項之測試片，其令薄膜包含聚硪 (polysulfone) 〇 11·根據申請專利範圍第丨項之測試片，其中流體傳送溝槽 -34· 本紙汰尺度通/¾ 阁國冢標準（CNS ; Λ4規格（210X297公着） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

   538244 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 實質上為矩形。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 12. 根據申請專利範圍第1項之測試片5其中第一種成份包 含葡萄糖氧化酶。 13. 根據申請專利範圍第1項之測試片，其中第二種成份包 含過氧化酶，及在氧化時會改變顏色之指示劑染料或偶 合染料。 14. 根據申請專利範圍第13項之測試片，其中過氧化酶為辣 根過氧化酶。 15. 根據申請專利範圍第13項之測試片，其中指示劑染料或 偶合染料為[3-曱基-2-苯并噻唑咁酮腙]N-磺醯基苯磺 酸單鈉，且併用8-苯胺基-1-萘磺酸銨（MBTHSB-ANS)。 16. 根據申請專利範圍第11項之測試片，其中第三種成份包 含抗壞血酸。 17. 根據申請專利範圍第1項之測試片，其中試劑進一步包 含一種分離用成份，選自包括聚乙二醇、聚（甲基乙烯 基醚/順丁烯二酸）酐、聚丙二醇、聚苯乙烯磺酸、聚丙 烯酸、聚乙烯醇及聚乙烯基磺酸。 經濟部智忽財4A工消費合作社印製 18. 根據申請專利範圍第1項之測試片，其中之中間層包含 熱塑性薄片。 19. 根據申請專利範圍第1項之測試片，其中之中間層包含 聚酯。 20. 根據申請專利範圍第1項之測試片，其中吸收性區域與 非吸收性區域個別包含薄膜層之未被壓扁及被壓扁區 -35- 木紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 六 申請專利範圍 域。 圍第2。項爾，其中未被叫 一们Γ 為柱狀’各具有—個底部在_中，及 個與该底部相反而鄰接底層之末端。 22. 根獅請專利範圍第2()項之_，其中 ，區域實質上為柱狀，各具有_個底部在薄膜= 固與5亥底部相反而鄰接頂層之末端。 23. 根據申請專利範圍第1項之測試片，其進-步包含—個 之=鄰接薄膜層之頂部表面，並具有與檢測區域 24·根據申請專利範圍第23項之測試片，其中薄膜層係黏附 至頂層。 訂 25·，據申請專利範圍第24項之測試片，其中薄膜層係以黏 者劑黏附至頂層，雜著舰被限制於_層之非 性區域。 線 m 26·根據申請專利範圍第1項之測試片，其進二步包含一個 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 吸收層，接觸薄膜之末端，此末端係最接近片條之第一 個末端。 27.根據申請專利範圍第丨項之測試片，其進一步包含吸收 層，接觸薄膜層之各末端。 28·根據申請專利範圍第丨項之測試片，其中用以接受試樣 之通孔係接近片條之末端，此末端係遠離第一個末端。 29.根據申請專利範圍第丨項之測試片，其進一步包含計時 36. 本紙張尺度如中國國家標準（CNS)A4規格 (210 X 297 公釐） 538244 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 器構件，其包含一個檢測區域，此區域除了該試劑以外， 包含一數量之葡萄糖，以在將試樣施加至片條後之預定 時間，造成該區域改變顏色。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ^^1 I— n n i ·_ϋ 一 口， n ·ϋ 1· ·ϋ II 線 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -37- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）