JP3110017B2 - 試料の抗酸化能の測定方法並びにそれを用いた糖尿病及び高脂血症の診断方法 - Google Patents
試料の抗酸化能の測定方法並びにそれを用いた糖尿病及び高脂血症の診断方法Info
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、試料の抗酸化能の
測定方法並びにそれを用いた糖尿病及び高脂血症の診断
方法に関する。
測定方法並びにそれを用いた糖尿病及び高脂血症の診断
方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来より、試料の抗酸化能、すなわち、
他の物質の酸化を妨げる能力を測定する方法が知られて
いる。例えば、特表平６−５０７２３５号公報には、心
筋梗塞の発生及び心筋梗塞を発生しやすい状態か否かを
診断する目的で、血漿の抗酸化能を測定する方法が記載
されている。この方法では、被検試料である血漿と、メ
トミオグロビンと、過酸化水素と、２，２' −アジノビ
ス（３−エチルベンツチアゾリン−６−スルホン酸）
（以下、本明細書において「ＡＢＴＳ」という）のよう
な発色剤とを反応させ、反応後の吸光度を測定する。血
漿の抗酸化能が高い場合には、過酸化水素によるメトミ
オグロビンの酸化が血漿により抑制され、その結果、発
色が抑えられる。一方、血漿の抗酸化能が低い場合に
は、過酸化水素によるメトミオグロビンの酸化があまり
抑制されないため、発色があまり抑えられない。従っ
て、反応後の反応液の吸光度を測定することにより、血
漿の抗酸化能が測定できる。
他の物質の酸化を妨げる能力を測定する方法が知られて
いる。例えば、特表平６−５０７２３５号公報には、心
筋梗塞の発生及び心筋梗塞を発生しやすい状態か否かを
診断する目的で、血漿の抗酸化能を測定する方法が記載
されている。この方法では、被検試料である血漿と、メ
トミオグロビンと、過酸化水素と、２，２' −アジノビ
ス（３−エチルベンツチアゾリン−６−スルホン酸）
（以下、本明細書において「ＡＢＴＳ」という）のよう
な発色剤とを反応させ、反応後の吸光度を測定する。血
漿の抗酸化能が高い場合には、過酸化水素によるメトミ
オグロビンの酸化が血漿により抑制され、その結果、発
色が抑えられる。一方、血漿の抗酸化能が低い場合に
は、過酸化水素によるメトミオグロビンの酸化があまり
抑制されないため、発色があまり抑えられない。従っ
て、反応後の反応液の吸光度を測定することにより、血
漿の抗酸化能が測定できる。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】上記した従来の方法よ
りも、試料の抗酸化能の測定感度を向上させることがで
きれば好ましいことは言うまでもない。従って、本発明
の目的は、従来の方法よりも測定感度が高い、試料の抗
酸化能の測定方法を提供することである。
りも、試料の抗酸化能の測定感度を向上させることがで
きれば好ましいことは言うまでもない。従って、本発明
の目的は、従来の方法よりも測定感度が高い、試料の抗
酸化能の測定方法を提供することである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本願発明者らは、鋭意研
究の結果、従来のメトミオグロビンに代えて、メトヘモ
グロビンを用いることにより、測定感度を３倍以上向上
させることができることを見出し、本発明を完成した。
究の結果、従来のメトミオグロビンに代えて、メトヘモ
グロビンを用いることにより、測定感度を３倍以上向上
させることができることを見出し、本発明を完成した。
【０００５】すなわち、本発明は、メトヘモグロビン
と、メトヘモグロビンを酸化する酸化剤と、該酸化剤の
存在下でメトヘモグロビンと反応して色素を生成する発
色剤と、抗酸化能を調べようとする被検試料とを反応さ
せる工程と、生成された色素を測定する工程とを含む、
試料の抗酸化能の測定方法を提供する。さらに、本発明
は、上記本発明の方法において、被検試料を血漿や血清
等の体液として、糖尿病又は高脂血症を診断する方法を
提供する。
と、メトヘモグロビンを酸化する酸化剤と、該酸化剤の
存在下でメトヘモグロビンと反応して色素を生成する発
色剤と、抗酸化能を調べようとする被検試料とを反応さ
せる工程と、生成された色素を測定する工程とを含む、
試料の抗酸化能の測定方法を提供する。さらに、本発明
は、上記本発明の方法において、被検試料を血漿や血清
等の体液として、糖尿病又は高脂血症を診断する方法を
提供する。
【０００６】
【発明の実施の形態】本発明の方法に用いられるメトヘ
モグロビンは、ヒト又はヒト以外の動物由来のものであ
ってよい。メトヘモグロビンは、常法によりヘモグロビ
ンを酸化させることにより容易に調製することができ
る。あるいは、ヒトメトヘモグロビンは市販されている
ので、このような市販のメトヘモグロビンを用いること
もできる。さらに、メトヘモグロビンは、ヘモグロビン
の酸化により生じるので、出発物質としてはヘモグロビ
ンを用い、反応系内でメトヘモグロビンを生成させて、
これを反応に供することもできる。すなわち、メトヘモ
グロビン、酸化剤、発色剤及び被検試料から成る反応系
において、出発物質として、メトヘモグロビンに代えて
ヘモグロビンを用いることもできる。
モグロビンは、ヒト又はヒト以外の動物由来のものであ
ってよい。メトヘモグロビンは、常法によりヘモグロビ
ンを酸化させることにより容易に調製することができ
る。あるいは、ヒトメトヘモグロビンは市販されている
ので、このような市販のメトヘモグロビンを用いること
もできる。さらに、メトヘモグロビンは、ヘモグロビン
の酸化により生じるので、出発物質としてはヘモグロビ
ンを用い、反応系内でメトヘモグロビンを生成させて、
これを反応に供することもできる。すなわち、メトヘモ
グロビン、酸化剤、発色剤及び被検試料から成る反応系
において、出発物質として、メトヘモグロビンに代えて
ヘモグロビンを用いることもできる。
【０００７】反応溶液中のメトヘモグロビンの濃度は、
特に限定されないが、高い測定感度を得る観点から、
０．２μＭ〜８μＭ程度が好ましく、特に０．５μＭ〜
１．５μＭ程度が好ましい。
特に限定されないが、高い測定感度を得る観点から、
０．２μＭ〜８μＭ程度が好ましく、特に０．５μＭ〜
１．５μＭ程度が好ましい。
【０００８】本発明の方法に用いられる酸化剤として
は、メトヘモグロビンを酸化して、後述する発色剤との
反応により呈色させることができるものであれば、いず
れの酸化剤をも用いることができる。好ましい酸化剤の
例として、過酸化水素、オキソ酸及びその塩類等を挙げ
ることができるが、これらに限定されるものではない。
は、メトヘモグロビンを酸化して、後述する発色剤との
反応により呈色させることができるものであれば、いず
れの酸化剤をも用いることができる。好ましい酸化剤の
例として、過酸化水素、オキソ酸及びその塩類等を挙げ
ることができるが、これらに限定されるものではない。
【０００９】反応溶液中の酸化剤の濃度は、特に限定さ
れず、酸化剤の種類に応じて、ルーチンな実験により適
宜決定することができる。過酸化水素を用いる場合に
は、高い測定感度を得る観点から、反応溶液中の過酸化
水素濃度は、４０μＭ〜２００μＭ程度が好ましく、特
に６０μＭ〜１５０μＭ程度が好ましい。
れず、酸化剤の種類に応じて、ルーチンな実験により適
宜決定することができる。過酸化水素を用いる場合に
は、高い測定感度を得る観点から、反応溶液中の過酸化
水素濃度は、４０μＭ〜２００μＭ程度が好ましく、特
に６０μＭ〜１５０μＭ程度が好ましい。
【００１０】本発明の方法に用いられる発色剤として
は、前記酸化剤の存在下でメトヘモグロビンと反応して
色素を生成するものであればいずれのものであってもよ
く、好ましい例として、ＡＢＴＳ及びその塩、オルトフ
ェニレンジアミン( ＯＰＤ) 、テトラメチルベンジジン
( ＴＭＢ) 、ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）、４−クロ
ロナフトール、５−アミノサリチル酸、ｏ−トルイジン
及びｏ−ジアニシジン等を挙げることができる。
は、前記酸化剤の存在下でメトヘモグロビンと反応して
色素を生成するものであればいずれのものであってもよ
く、好ましい例として、ＡＢＴＳ及びその塩、オルトフ
ェニレンジアミン( ＯＰＤ) 、テトラメチルベンジジン
( ＴＭＢ) 、ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）、４−クロ
ロナフトール、５−アミノサリチル酸、ｏ−トルイジン
及びｏ−ジアニシジン等を挙げることができる。
【００１１】反応溶液中の発色剤の濃度は、特に限定さ
れず、発色剤の種類に応じて、ルーチンな実験により適
宜決定することができる。ＡＢＴＳを用いる場合には、
高い測定感度を得る観点から、反応溶液中のＡＢＴＳ濃
度は、５０μＭ以上が好ましく、特に８０μＭ以上が好
ましい。なお、ＡＢＴＳは３００μＭ以上加えても感度
が向上しないので、無駄であるから、ＡＢＴＳの濃度は
３００μＭ以下が好ましい。もっとも、ＡＢＴＳの濃度
は３００μＭよりも高くても反応に支障はないので、例
えば１ｍＭ程度とすることも可能である。
れず、発色剤の種類に応じて、ルーチンな実験により適
宜決定することができる。ＡＢＴＳを用いる場合には、
高い測定感度を得る観点から、反応溶液中のＡＢＴＳ濃
度は、５０μＭ以上が好ましく、特に８０μＭ以上が好
ましい。なお、ＡＢＴＳは３００μＭ以上加えても感度
が向上しないので、無駄であるから、ＡＢＴＳの濃度は
３００μＭ以下が好ましい。もっとも、ＡＢＴＳの濃度
は３００μＭよりも高くても反応に支障はないので、例
えば１ｍＭ程度とすることも可能である。
【００１２】本発明の方法における被検試料は、その抗
酸化能を調べようとするものであればいずれのものであ
ってもよく、例えば血漿や血清のような体液、各種食品
及び飲料並びに各種化学物質等を挙げることができる。
被検試料は、必要に応じ、適宜希釈してから他の試薬と
混合してもよい。
酸化能を調べようとするものであればいずれのものであ
ってもよく、例えば血漿や血清のような体液、各種食品
及び飲料並びに各種化学物質等を挙げることができる。
被検試料は、必要に応じ、適宜希釈してから他の試薬と
混合してもよい。
【００１３】反応を行なうには、まず、上記３種類の試
薬と被検試料とを混合する。３種類の試薬は、緩衝液又
は水に溶解した溶液の形態としておくことが好ましい。
混合の順序は特に限定されないが、酸化剤とメトヘモグ
ロビンが反応する場に必ず被検試料が存在することを確
保するために、メトヘモグロビン、発色剤及び被検試料
を先ず混合し、最後に酸化剤を添加することが好まし
い。
薬と被検試料とを混合する。３種類の試薬は、緩衝液又
は水に溶解した溶液の形態としておくことが好ましい。
混合の順序は特に限定されないが、酸化剤とメトヘモグ
ロビンが反応する場に必ず被検試料が存在することを確
保するために、メトヘモグロビン、発色剤及び被検試料
を先ず混合し、最後に酸化剤を添加することが好まし
い。
【００１４】反応温度は特に限定されず、室温から４０
℃程度の温度が好ましく、特に２５℃から３５℃が好ま
しい。反応時間は、反応温度により異なり、好ましい反
応時間はルーチンな実験により適宜決定することができ
るが、通常、２分〜２０分程度、さらには５分〜１５分
程度が好ましい。なお、反応時間はこの範囲よりも長く
なっても反応に支障はない。
℃程度の温度が好ましく、特に２５℃から３５℃が好ま
しい。反応時間は、反応温度により異なり、好ましい反
応時間はルーチンな実験により適宜決定することができ
るが、通常、２分〜２０分程度、さらには５分〜１５分
程度が好ましい。なお、反応時間はこの範囲よりも長く
なっても反応に支障はない。
【００１５】反応後、生成した色素を測定する。これ
は、例えば反応液の吸光度を測定することにより容易に
行なうことができる。この場合、測定波長は、使用する
発色剤に応じて適宜選択される。発色剤としてＡＢＴＳ
を用いる場合には、５５０ｎｍ〜８７０ｎｍ程度が好ま
しく、特に７３４ｎｍ付近が好ましい。また、３９０ｎ
ｍ〜４２０ｎｍの範囲の波長を用いることも可能であ
る。
は、例えば反応液の吸光度を測定することにより容易に
行なうことができる。この場合、測定波長は、使用する
発色剤に応じて適宜選択される。発色剤としてＡＢＴＳ
を用いる場合には、５５０ｎｍ〜８７０ｎｍ程度が好ま
しく、特に７３４ｎｍ付近が好ましい。また、３９０ｎ
ｍ〜４２０ｎｍの範囲の波長を用いることも可能であ
る。
【００１６】既知濃度の標準試料を用いて上記方法によ
り先ず標準線（横軸を標準試料濃度、縦軸を吸光度）を
作成しておき、未知の被検試料について同様に吸光度を
測定し、標準線と比較することにより、未知の被検試料
の抗酸化能が、どれだけの量の標準試料の抗酸化能に相
当するのかを知ることができる。
り先ず標準線（横軸を標準試料濃度、縦軸を吸光度）を
作成しておき、未知の被検試料について同様に吸光度を
測定し、標準線と比較することにより、未知の被検試料
の抗酸化能が、どれだけの量の標準試料の抗酸化能に相
当するのかを知ることができる。
【００１７】本発明の方法は、種々の目的に使用するこ
とができる。例えば、被検試料を血漿や血清のような体
液とすることにより、糖尿病や高脂血症の診断を行なう
ことができる。すなわち、下記実施例において具体的に
記載されるように、糖尿病患者や高脂血症患者の体液の
抗酸化能は、健常人のそれよりも低くなっているので、
本発明の方法により血漿や血清のような体液の抗酸化能
を測定することにより、糖尿病や高脂血症の診断を行な
うことができる。また、飲食物の酸化性と発ガンとの関
係が疑われている。各種食品や飲料の抗酸化能を測定す
ることにより、それらの食品や飲料が他の飲食物の酸化
性をどの程度緩和するかを知ることができ、ひいてはガ
ンの予防に役立つ可能性のある食品や飲料を探索するこ
とができる。
とができる。例えば、被検試料を血漿や血清のような体
液とすることにより、糖尿病や高脂血症の診断を行なう
ことができる。すなわち、下記実施例において具体的に
記載されるように、糖尿病患者や高脂血症患者の体液の
抗酸化能は、健常人のそれよりも低くなっているので、
本発明の方法により血漿や血清のような体液の抗酸化能
を測定することにより、糖尿病や高脂血症の診断を行な
うことができる。また、飲食物の酸化性と発ガンとの関
係が疑われている。各種食品や飲料の抗酸化能を測定す
ることにより、それらの食品や飲料が他の飲食物の酸化
性をどの程度緩和するかを知ることができ、ひいてはガ
ンの予防に役立つ可能性のある食品や飲料を探索するこ
とができる。
【００１８】
【実施例】以下、本発明を実施例に基づきより具体的に
説明する。もっとも、本発明は下記実施例により限定さ
れるものではない。
説明する。もっとも、本発明は下記実施例により限定さ
れるものではない。
【００１９】実施例１ 標準線の作成 メトヘモグロビン（Ｓｉｇｍａ社より購入）、ＡＢＴＳ
ジアンモニウム塩（Ａｌｄｒｉｃｈ社から購入）及び過
酸化水素の溶液をリン酸塩バッファーを溶媒として調製
した。また、標準液として、強い抗酸化能を有すること
が知られているα−トコフェロール誘導体である６−ヒ
ドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２
−カルボン酸（商品名トロロックス、東京化成株式会社
から購入）の０、０．５、１．０、２．０、４．０又は
６．０ｍＭ溶液を、リン酸塩バッファーを溶媒として調
製した。
ジアンモニウム塩（Ａｌｄｒｉｃｈ社から購入）及び過
酸化水素の溶液をリン酸塩バッファーを溶媒として調製
した。また、標準液として、強い抗酸化能を有すること
が知られているα−トコフェロール誘導体である６−ヒ
ドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２
−カルボン酸（商品名トロロックス、東京化成株式会社
から購入）の０、０．５、１．０、２．０、４．０又は
６．０ｍＭ溶液を、リン酸塩バッファーを溶媒として調
製した。
【００２０】ＡＢＴＳ溶液２５０μｌとメトヘモグロビ
ン溶液２５０μｌとを混合し、これに標準液６０μｌを
添加した。さらに、過酸化水素溶液を加えることで酸化
反応を開始させた。反応液中のメトヘモグロビンの濃度
は２μＭ、ＡＢＴＳの濃度は４００μＭ、過酸化水素の
濃度は１３０μＭであった。反応は３０℃で行ない、１
０分後に波長７３４ｎｍで吸光度を測定した。結果を図
１に示す。
ン溶液２５０μｌとを混合し、これに標準液６０μｌを
添加した。さらに、過酸化水素溶液を加えることで酸化
反応を開始させた。反応液中のメトヘモグロビンの濃度
は２μＭ、ＡＢＴＳの濃度は４００μＭ、過酸化水素の
濃度は１３０μＭであった。反応は３０℃で行ない、１
０分後に波長７３４ｎｍで吸光度を測定した。結果を図
１に示す。
【００２１】図１に示されるように、標準液の濃度が高
くなるにつれて吸光度が小さくなっており、すなわち、
トロロックス（商品名）による抗酸化作用のためにメト
ヘモグロビンの酸化が妨げられて発色が少なくなってい
ることがわかる。吸光度は、標準液濃度が高くなればな
るほど低くなっているので、本発明の方法により被検試
料の抗酸化能を測定することができることがわかる。
くなるにつれて吸光度が小さくなっており、すなわち、
トロロックス（商品名）による抗酸化作用のためにメト
ヘモグロビンの酸化が妨げられて発色が少なくなってい
ることがわかる。吸光度は、標準液濃度が高くなればな
るほど低くなっているので、本発明の方法により被検試
料の抗酸化能を測定することができることがわかる。
【００２２】実施例２ 低濃度域における検出限界 トロロックス（商品名）の濃度を０、０．０４、０．０
８、０．１２、０．１６ｍＭとし、反応時間を３分間と
したことを除き実施例１と同じ操作を行なった。実験
は、各濃度について５回ずつ行なった。結果を図２に示
す。
８、０．１２、０．１６ｍＭとし、反応時間を３分間と
したことを除き実施例１と同じ操作を行なった。実験
は、各濃度について５回ずつ行なった。結果を図２に示
す。
【００２３】図２中、５回の実験の測定値の平均値を黒
塗りの四角で表し、標準偏差の±２倍（±２ＳＤ）の範
囲を縦の棒で示した。検出限界を決定するための一般的
な方法である±２ＳＤ法では、±２ＳＤの範囲が、標準
液濃度が０の場合の±２ＳＤの範囲と重複しない最小濃
度が検出限界であると定義される。図２より、この方法
における検出限界はトロロックス（商品名）濃度約０．
０４ｍＭであることがわかる。
塗りの四角で表し、標準偏差の±２倍（±２ＳＤ）の範
囲を縦の棒で示した。検出限界を決定するための一般的
な方法である±２ＳＤ法では、±２ＳＤの範囲が、標準
液濃度が０の場合の±２ＳＤの範囲と重複しない最小濃
度が検出限界であると定義される。図２より、この方法
における検出限界はトロロックス（商品名）濃度約０．
０４ｍＭであることがわかる。
【００２４】比較例１ メトミオグロビンを用いる従
来法の検出限界(1) メトヘモグロビンに代えてメトミオグロビンを用いるこ
とを除き、実施例２と同様な操作を行なった。結果を図
３に示す。
来法の検出限界(1) メトヘモグロビンに代えてメトミオグロビンを用いるこ
とを除き、実施例２と同様な操作を行なった。結果を図
３に示す。
【００２５】図３より、±２ＳＤ法により決定される検
出限界はトロロックス（商品名）約０．１２ｍＭである
ことがわかる。この検出限界は、実施例２に記載した本
発明の検出限界の３倍である。
出限界はトロロックス（商品名）約０．１２ｍＭである
ことがわかる。この検出限界は、実施例２に記載した本
発明の検出限界の３倍である。
【００２６】比較例２ メトミオグロビンを用いる従
来法の検出限界(2) 反応液中のメトミオグロビンの濃度を５μＭ、ＡＢＴＳ
の濃度を５００μＭ、過酸化水素の濃度を２５０μＭと
したことを除き、比較例１と同じ操作を行なった。結果
を図４に示す。
来法の検出限界(2) 反応液中のメトミオグロビンの濃度を５μＭ、ＡＢＴＳ
の濃度を５００μＭ、過酸化水素の濃度を２５０μＭと
したことを除き、比較例１と同じ操作を行なった。結果
を図４に示す。
【００２７】図４より、±２ＳＤ法により決定される検
出限界はトロロックス（商品名）約０．１６ｍＭである
ことがわかる。この検出限界は、実施例２に記載した本
発明の検出限界の４倍である。
出限界はトロロックス（商品名）約０．１６ｍＭである
ことがわかる。この検出限界は、実施例２に記載した本
発明の検出限界の４倍である。
【００２８】実施例３ ヒト血漿の抗酸化能の測定 健常人、糖尿病患者及び高脂血症患者の血漿を被検試料
として用いることを除き、実施例１と同じ操作を行っ
た。実施例１で作成した標準線と比較することにより、
各被検試料のトロロックス( 商品名) 換算抗酸化能値を
求めた。結果を下記表１に示す。
として用いることを除き、実施例１と同じ操作を行っ
た。実施例１で作成した標準線と比較することにより、
各被検試料のトロロックス( 商品名) 換算抗酸化能値を
求めた。結果を下記表１に示す。
【００２９】
【表１】
【００３０】表1 の結果から、高脂血症患者及び糖尿病
患者の血漿の抗酸化能は、健常者のそれに比較して低く
なっていることがわかる。このことから、本発明の方法
を適用することにより、高脂血症及び糖尿病の診断が可
能であることがわかる。
患者の血漿の抗酸化能は、健常者のそれに比較して低く
なっていることがわかる。このことから、本発明の方法
を適用することにより、高脂血症及び糖尿病の診断が可
能であることがわかる。
【００３１】実施例４ 飲料の抗酸化能の測定 日本茶、紅茶、コーヒー、赤ワイン及び白ワインの抗酸
化能を測定した。日本茶及び紅茶の試料は、茶葉６ｇに
１００℃の熱湯１００ｍｌを加え、１分間静置し、その
上清を採取し、日本茶は６４倍、紅茶は３２倍希釈して
被検試料とした。コーヒーは、挽いたコーヒー豆６ｇに
１００℃の熱湯６０ｍｌを加え、１分間静置し、その上
清を採取し、３２倍希釈して被検試料とした。赤ワイン
及び白ワインは原液を１６倍希釈して被検試料とした。
化能を測定した。日本茶及び紅茶の試料は、茶葉６ｇに
１００℃の熱湯１００ｍｌを加え、１分間静置し、その
上清を採取し、日本茶は６４倍、紅茶は３２倍希釈して
被検試料とした。コーヒーは、挽いたコーヒー豆６ｇに
１００℃の熱湯６０ｍｌを加え、１分間静置し、その上
清を採取し、３２倍希釈して被検試料とした。赤ワイン
及び白ワインは原液を１６倍希釈して被検試料とした。
【００３２】標準液に代えて、上記各被検試料を用いる
ことを除き、実施例１と同じ操作を行った。実施例１で
作成した標準線と比較し、希釈倍率の補正を行なうこと
により、各被検試料の原液のトロロックス( 商品名) 換
算抗酸化能値を求めた。結果を下記表１に示す。
ことを除き、実施例１と同じ操作を行った。実施例１で
作成した標準線と比較し、希釈倍率の補正を行なうこと
により、各被検試料の原液のトロロックス( 商品名) 換
算抗酸化能値を求めた。結果を下記表１に示す。
【００３３】
【００３４】
【発明の効果】本発明により、従来の方法よりも被検試
料の抗酸化能の測定感度が向上した、試料の抗酸化能の
測定方法が提供された。本発明によれば、高感度に被検
試料の抗酸化能を測定することができる。また、本発明
により、糖尿病及び高脂血症の高感度診断法が提供され
た。
料の抗酸化能の測定感度が向上した、試料の抗酸化能の
測定方法が提供された。本発明によれば、高感度に被検
試料の抗酸化能を測定することができる。また、本発明
により、糖尿病及び高脂血症の高感度診断法が提供され
た。
【図１】本発明の方法により、濃度既知の標準液を用い
て作成した標準線を示す。
て作成した標準線を示す。
【図２】本発明の方法により、低濃度域の標準液を用い
て測定した測定値の平均値と±２ＳＤの範囲を示す図で
ある。
て測定した測定値の平均値と±２ＳＤの範囲を示す図で
ある。
【図３】メトヘモグロビンに代えてメトミオグロビンを
用いた従来の方法により、低濃度域の標準液を用いて測
定した測定値の平均値と±２ＳＤの範囲を示す図であ
る。
用いた従来の方法により、低濃度域の標準液を用いて測
定した測定値の平均値と±２ＳＤの範囲を示す図であ
る。
【図４】メトヘモグロビンに代えてメトミオグロビンを
用いた、上記と条件の異なる従来の方法により、低濃度
域の標準液を用いて測定した測定値の平均値と±２ＳＤ
の範囲を示す図である。
用いた、上記と条件の異なる従来の方法により、低濃度
域の標準液を用いて測定した測定値の平均値と±２ＳＤ
の範囲を示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 平５−52756（ＪＰ，Ａ) 特表 平６−507235（ＪＰ，Ａ) Ｊｏｈｎ Ｋｅｍｐ ｅｔ ａｌ．" ＴＨＥ ＥＦＦＥＣＴＳ ＯＦ ＡＳＣ ＯＲＢＩＣ ＡＣＩＤ ＯＮ ＣＯＰＰ ＥＲ−ＩＮＤＵＣＥＤ ＯＸＩＤＡＣＴ ＩＶＥ ＣＡＨＡＮＧＥＳ ＩＮ ＨＵ ＭＡＮ ＥＲＹＴＨＲＯＣＹＴＥＳ：Ｅ ＸＡＭＰＬＥ ＯＦ Ａ ＢＩＰＨＡＳ ＩＣ ＤＯＳＥ−ＲＥＳＰＯＮＳＥ Ｒ ＥＬＡＴＩＯＮＳＨＩＰ”Ｊ．ＥＮＶＩ ＲＯＮ．ＳＣＩ．ＨＥＡＬＴＨ，Ａ20 （１），ｐｐ21−35（1985) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) G01N 33/49 G01N 33/00 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ)
Claims (7)
- 【請求項１】 メトヘモグロビンと、メトヘモグロビン
を酸化する酸化剤と、該酸化剤の存在下でメトヘモグロ
ビンと反応して色素を生成する発色剤と、抗酸化能を調
べようとする被検試料とを反応させる工程と、生成され
た色素を測定する工程とを含む、試料の抗酸化能の測定
方法。 - 【請求項２】 前記酸化剤は過酸化水素である請求項１
記載の方法。 - 【請求項３】 前記発色剤は、２，２’−アジノビス
（３−エチルベンツチアゾリン−６−スルホン酸）であ
る請求項１又は２記載の方法。 - 【請求項４】 反応溶液中のメトヘモグロビン濃度が0.
2〜８μＭである請求項１ないし３のいずれか１項に記
載の方法。 - 【請求項５】 請求項１ないし４のいずれか１項に記載
の方法において、被検試料を体液とした糖尿病の診断方
法。 - 【請求項６】 請求項１ないし４のいずれか１項に記載
の方法において、被検試料を体液とした高脂血症の診断
方法。 - 【請求項７】 前記体液は血漿又は血清である請求項５
又は６記載の方法。
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|---|---|---|---|
| JP10161374A JP3110017B2 (ja) | 1998-05-26 | 1998-05-26 | 試料の抗酸化能の測定方法並びにそれを用いた糖尿病及び高脂血症の診断方法 |
| US09/318,767 US6316263B1 (en) | 1998-05-26 | 1999-05-26 | Method for measuring antioxidant activities of samples and method for diagnosing diabetes or hyperlipidemia using the same |
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|---|---|---|---|
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| JPH11337554A JPH11337554A (ja) | 1999-12-10 |
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| JP10161374A Expired - Fee Related JP3110017B2 (ja) | 1998-05-26 | 1998-05-26 | 試料の抗酸化能の測定方法並びにそれを用いた糖尿病及び高脂血症の診断方法 |
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| JP (1) | JP3110017B2 (ja) |
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| JPH0562404U (ja) * | 1992-01-31 | 1993-08-20 | 太陽誘電株式会社 | チップ状回路部品供給装置 |
| JP2005230522A (ja) * | 2004-02-19 | 2005-09-02 | Nuskin Internatl Inc | バイオフォトニック・フィードバック制御装置及び方法 |
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| IT201700030715A1 (it) * | 2017-03-21 | 2018-09-21 | Fondazione St Italiano Tecnologia | Procedimento per determinare la capacità antiossidante di un campione biologico e relativo kit. |
| CN111766233B (zh) * | 2020-07-22 | 2021-03-30 | 中临健康科技产业有限公司 | 一种血清总抗氧化物状态测定试剂盒 |
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| US5843691A (en) * | 1993-05-15 | 1998-12-01 | Lifescan, Inc. | Visually-readable reagent test strip |
| US5885789A (en) * | 1997-03-20 | 1999-03-23 | Stc Technologies Incorporated | Solution-based assay for peroxidatively-active substances in bodily fluids |
| US5753452A (en) * | 1996-04-04 | 1998-05-19 | Lifescan, Inc. | Reagent test strip for blood glucose determination |
| AT404513B (de) * | 1996-07-12 | 1998-12-28 | Avl Verbrennungskraft Messtech | Verfahren und messanordnung zur optischen bestimmung der totalen hämoglobinkonzentration |
| US5858794A (en) * | 1997-05-13 | 1999-01-12 | Bayer Corporation | Cyanide-containing hemoglobin reagent composition and method providing acceptable precision, accuracy and freedom from white cell interference on automated hematology analyzers |
-
1998
- 1998-05-26 JP JP10161374A patent/JP3110017B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1999
- 1999-05-26 US US09/318,767 patent/US6316263B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-05-26 EP EP99304062A patent/EP0962770A1/en not_active Ceased
Non-Patent Citations (1)
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|---|
| Ｊｏｈｎ Ｋｅｍｐ ｅｔ ａｌ．"ＴＨＥ ＥＦＦＥＣＴＳ ＯＦ ＡＳＣＯＲＢＩＣ ＡＣＩＤ ＯＮ ＣＯＰＰＥＲ−ＩＮＤＵＣＥＤ ＯＸＩＤＡＣＴＩＶＥ ＣＡＨＡＮＧＥＳ ＩＮ ＨＵＭＡＮ ＥＲＹＴＨＲＯＣＹＴＥＳ：ＥＸＡＭＰＬＥ ＯＦ Ａ ＢＩＰＨＡＳＩＣ ＤＯＳＥ−ＲＥＳＰＯＮＳＥ ＲＥＬＡＴＩＯＮＳＨＩＰ"Ｊ．ＥＮＶＩＲＯＮ．ＳＣＩ．ＨＥＡＬＴＨ，Ａ２０（１），ｐｐ２１−３５（１９８５） |
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| EP0962770A1 (en) | 1999-12-08 |
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