TW501909B - Agent for inducing formation of flower buds and method for inducing formation of flower buds - Google Patents

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經濟部中夬標隼局員工消費合作社印製 501909 A7 ___ B7 ‘__ 五、發明説明（2 ) 此外，就牽牛屬（Pha r b i t i s)、蒼耳屬（Xa n t h i u m.)、 毒麥屬（Lo 1 i uin)，曾有相關基於光照週期性的成花現象* 藉由乾燥壓力而産生阻礙的報告（相關牽牛屬、蒼耳屬： Aspinaii 1967 ;毒麥屬：King and Evans);再者，針對 花芽誘導，藉由低溫（Bernier et al. 1981 ; Hirai et al, 1994)、高照度（Shinozaki 1972〉、缺營養（Hiral et al. 1993)、或者氮源不足（yada and Totuka 1982; Tana ka 1986; Tanaka et al. 1991)等因素而導致等相關報告 ，均已曾有提出者。 惟，在該等報告中，僅傺單方向的就現象層面予以研 究，並未及至於對成花素有任何相關特定的研究，故而期 盼可由物質層面研究，以確立開花方法。 ’ 有鑑於斯，本發明所欲解決的課題，便傜提供一種花 穿成形誘導劑，待別係指直接掛關於開花之花芽形成誘導 雨物質等，可以當作花芽形成誘導物質之有效成分者。 首先，本發明所提供的花芽形成誘導劑，偽由包含有 氧基及羥基、含有0〜6値雙鍵結構的磺原子數4〜24個之 脂肪酸所構成者。 其次，本發明所提供的花芽形成誘導劑，偽由包含有 氧基、羥基及過氧化氫基、含有0〜6値雙鍵結構的磺原子 數4〜24値之脂肪酸所搆成者。 再者，本發明所提供的花穿形成誘導劑，傜由包含有 " 過氯化氫基、含有0〜6値雙鍵结構的磺原子數4〜24値之 -5 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ).A4規格（210X297公.$ ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ,ιτ 501909 Α7 Β7 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 五、發明説明（3 ) 脂肪酸所構成者。 再者，本發明所提供的花芽形成誘導劑，係將酵母菌 體或被子植物的檀物體、或其水性萃取物與脂肪酸，利用 培育方式而製得者。 再者，本發明所提供的花芽形成誘導劑，傺含有上述 各種花芽形成誘導劑以及去甲腎上腺素所構成者。 再者，本發明所提供的花芽形成誘導用套組，係由包 含有花芽形成誘導劑所搆成者。 再者；本發明所提供的花芽形成誘導方法，其特徽像 將上述花芽形成誘導劑適用於植物者。 【圖示簡單說明】 ^ 第一圖像顯示因子C之"C-HMR圖。 第二圖偽進行一魄的暗處理情況下，針對牽牛花之因子C 相對於花芽形成誘導作用圖。 第三圖偽進行二晚的暗處理情況下’針對牽牛花之因子c 相對於花穿形成誘導作用圖° 第四圖偽相對於牽牛花Γ紫』，針對牽牛花之因子C相對 於花穿形成誘導作用圖° 第五圖偽就實施例15，將暗處理時間固定於16小時情況下 ，而改變因子C濃度時之花芽數變化圖。 第六圖涤就實施例16 ’將因子c濃度固定在10 “ Μ之情況 下，而改變暗處理時間時之花穿數變化圖° 用中國國家標準（CNS ) A4規格(210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ^-- --訂 t - -11- US— mu fm · 501909 Α7 Β7五、發明説明（4 ) 【發明實施態樣】 具有花穿形成誘導活性之脂肪酸 本發明中所指具有花穿形成誘導活性之脂肪酸的第一 態樣，傺指包含有氯基及羥基、含有0〜6値雙鍵結搆的碳 原子數4〜24痼之脂肪酸。該氧基及羥基傺以α — _醇結 構或7 — _醇結搆者為佳，如下所示： 0 0Η II I —C— CH —

ο y C

Η -ο——C (α -酮醇:） （7 -酮醇） 而，該雙鍵結構之數目，則以2〜5値者為佳，尤以2個或3 値者為優，更偏好於2値者。另，該磺原子之數目，則以 14〜22個者為佳，尤以16〜22個者為優，更偏好於18値者 。具有ot -酮醇結搆之代表性的脂肪酸，則可舉例如9-羥 -10-氧-12(Ζ)、15(Ζ)~十八磺二烯酸（在本發明中有時稱 之為『因子C』（FC))、及12-氧-13-羥-9(Ζ)、15(Ζ)-十 八磺二烯酸等。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

9-羥-10-氯-12 (Z)，15 (Z.)-十八钿二烯酸 本紙琅尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 501909 A7 B7 五、發明説明（

C00H 0H 0 12-氧-13-羥-9(Z)，15(Z)~十八磺二烯酸 此外，具有7 -麵醇結構之代表性的脂肪酸，則可舉 例如10-氯-13-羥-11(E)、15(Z)-十八磺二烯酸及9-羥-12 一氧-10(E)、15(Z)〜十八磺二烯酸等。 1= —--1 — —In 署 I _ 士 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

C00H 訂

C00H 10-氯-13-羥-11(E)，15CZ)-十八磺二烯酸

9-羥-12-氯-10(E)，15(Z)-十八磺二烯酸 本發明中所指具有花芽形成誘導活性之脂肪酸的第二 態樣，僳指包含有氧基、羥基及過氯化氫基卜0-0H) ·、含 有0〜6値雙鍵結搆的磺原子數4〜24個之脂肪酸。該氯基 及羥基傷由上述α —酮醇結構或7 -酮醇結搆所構成者，' 其中尤以α -酮醇結構者為佳。而，該雙鍵結搆之數目， 則以2〜5値者為佳，尤以2個或3値者為歷*更偏好於2値 者。另，該碳原子之數目，則以14〜22値者為佳，尤以16 〜22個者為慶，更偏好於18脑者。此態樣中所代表性的脂 肪酸，傜可擧例如9-過氧化氫-12-氯-13-羥-10(E)、15CZ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 4 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 501909 Α7 _ Β7 7、發明説明（6 ) )-十八碳二烯酸及9 -經-10 -氯-13~過氧化氫-11(E)、15(Ζ )一十八磺二烯酸等。 Η 9-過氯化氫-12-氯-13-羥-10(E)、15(Ζ)-十八磺二烯酸

nn I-1-1 1· 霤-i^K —m i^wIff Hi (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟、邓中夬標準局員工消費合作社印製 9-羥-10-氧-13-過氧化氫-11(E)、15(Z)-十八磺二烯酸 本發明中所指具有花穿形成誘導活性之脂肪酸的第三 態樣，涤指包含有過氧化氫基、含有0〜6値雙鍵結構的磺 原子數4〜24®之脂肪酸。該氧基及羥基傺由上述α -麵 醇結構或7 -酮醇結搆所搆成者，其中尤以α -酮醇結構 者為佳。而，該雙鍵結構之數目，則以2〜5値者為佳，尤 以2値或3個者為優，更偏好於3痼者。另，該磺原子之數 目，則以14〜22個者為佳，尤以16〜22値者為優，更偏好 於18値者。此態樣中所代表性的脂肪酸，偽可舉例如9-過 氧化氫-10(E)、12(Ζ)、15 (Ζ卜十八磺三烯酸及13-過氧化 氫-9 (Ζ)、11 (Ε )、15 (Ζ)-十八磺三烯酸等° ml ^ 1I1H I— f*>1·— ll»ii 0

1T d » If—— Iwli*一 11 nn 0 • tm tm tftls int f0i 0 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 五、 發明説明 (7 ) A7 B7

COOH •過氧化氫-10(E)、12(Z)、15(Z)-十八碩三烯酸

C00H .· d (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 13-過氧化氫-9(Z)、11(E)、15(Z)-十八磺三烯酸 上述各種脂肪酸中之9-羥-10-氧-12(Z)、15U卜十八 賤二烯酸，卽因子C，傺可利用由植物的萃取法、化學合 成法及酵素法而製得者，而其他的脂肪酸，則可藉由化學 合成法或酵素法進行製造而得。 萃取法 在該萃取法中，當作原料使用的青草（Lemna paiic i c ostata)，傜浮遊於水池或水田之水面上，而在浮遊於水 面上的各葉狀體上，各自有一根的根部向下方的水中延伸 之一種小型水草，而，花則形成於其葉狀體之一倒，乃由 二値具有單一雄蕊之雄花及具有單一雌蕊之雌花，共同包 覆形成一鏡小花苞。 該青草的繁殖速度具有比較性的快速（即，花成形速 度較快。譬如，在後述分析条統中，使用於花芽誘導的撿 驗用青草151条列，僅需在七天以下便可形成花），同時具 10 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2 ί ο X 297公釐）

•1T 501909 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（8 ) < 有隨轉變日長，而可輕易的控制花芽形成誘導等相關花穿 成形的分析条統上之優越性質。 在培育該青草之破碎物時，至少必須可以確認青草之 花穿誘導活性。 然後，將該破碎物實施離心分離（8000 X g · 1〇分鐘） ，將所得之上清部份與沈澱物中的上清部份予以去除，並 以此當作含有因子C者使用。 如上述，該因子C便可以該破碎物為起始物質，而進 行單離、精製。 其中，為使其能具有更加的調製效率之起始物，可取 用浮有青草且浸泡過後的水溶液。該水容液並無特定的限 制，僅要可以生長青草者便可。 ’ 該水溶液調整的具體例，可如後述實施例中所載述者 〇 基本上，浸漬時間並無特定的限制，可在室溫下，進 行2〜3小時左右。 再者，當利用上述方法調製因子C之起始物時，若可 以預先賦予該青草可誘導出因子C的特定壓力的話，則將 可提昇因子C的製造效率。 具體而言，上述特定壓力，可舉例如乾燥壓力、熱壓 力、浸透壓壓力等方式。 所謂『乾燥壓力』，譬如在低1度（尤以相對濕度在 50%者為佳）、室溫下，尤以24〜25 t左右之條件下，將 -11 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS W規硌、：U)X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 d 501909 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 ____ B7 ·___五、發明説明（9 ) 青草以攤開狀態，放置於乾燥的濾紙上。此種情況下的乾 燥時間，大概約需20秒以上，尤以超過5分鐘以上者為佳 ，更以超過15分鐘以上者為更佳。 所謂『熱壓力』，譬如可將青草浸漬於溫水中°此種 情況下之溫水的溫度可為40〜65°C左右，尤以45〜60°C者 為佳，更以50〜55 °C者為更佳。再者，在溫水中的處理時 間，大約需5分鐘便足夠。而若屬於比較低溫的情況下， 譬如在40 °C左右的溫水中處理青草的話，則以處理2小時 以上為佳。此外，在進行熱壓力處理後，最好將該青草迅 速的放回於冷水中。 所諝『浸透壓壓力』，譬如可將該青草與高濃度之耱 溶液等高浸透壓溶液進行接觸。此種情況下的耱濃度，譬 如若為甘露耱醇溶液的話則為0.3M以上，尤以0.5M以上者 為佳。而處理時間，當使用0.5M甘露耱醇溶液之情況下， 約需1分鐘以上，尤以3分鐘以上者為佳。 若如上述作法，將可以調製成含有所期望之因子C的 / 起始物ϋ 此外，當作上述各種起始物之基的青草株，並無一定 的特殊限制，尤以使用待別具有良好效率的生産花穿誘導 物質之株（譬如青草441条列），此類青草株可使用一般的 選拔方法，亦可採用遣傳基因工學的方法進行選擇。 其次，將依照上述方法所調製的起始物，進行如下所 述的分離、精製手段後p便可製得所期望的因子C。 - 12 - "^紙張尺度適用中國3客漂莩ί CNS Γα4規袼（2ίϋχ297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) «ϋϋ ·_=11 · 訂 d I-—···— i vm ntn km am is-Ξ-- 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 501909 A7 B7 ^ 五、發明説明（10 ) 所使用的分離手段，並未進限於此處所例示的分離手 段*僅需可由上述起始物製造出因子C的分離手段者便可 〇 首先，對上述起始物進行溶劑萃取，以萃取出含有因 子C成分者為佳。而所使用於溶劑萃取的溶劑並無持定的 限制，例如可使用氯仿、醋酸乙酯、乙醚、丙醇等。該等 溶劑中，尤以氯仿具有可較輕易去除不純物之優點者為佳 〇 該溶劑萃取中所獲得的油層區分，可採用通常習知的 方法進行洗淨、濃縮，然後採用配用有十八矽烷（0DS)管 柱等逆相分配層析用管柱的高速液體層析（HPLC)，將該花

芽誘導活性區分予以進行分離、精製，而可單離出因子C 〇 此外，配合起始物的性質等*當然亦可另行組合其他 習知的分離手段，諸如超濾、凝膠過濾層析等方法。 化璺会成法 其次，針對本發明之具有誘導花芽形成作用之脂肪酸 的化學合成方法予以說明。 因子C (EP，9-羥-10-氯-12(Z)，15(Z卜十八磺二烯 酸），乃可依照以下機制（A)方式進行合成（方法1 )。 挺：用 Honanedioic acid mono ethylester(l)為起始 原料，與N，- e a r b ο n y 1 d Π m i d a z o i e進行反應，生成亞II 胺酯類後，在低溫下使用LiAlL進行還原反應而導向醛化 '13 - 太紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

501909 A7 B7 五、發明説明（11 (3)。另，將cis-2-hexen-l~oi(4)同時與三苯基鱗 itriph enyl phosphine)及 carbontetrabromide進行反應，將所 得之（5)與三苯基麟（triphenyl phosphine)進行反應，然 後在n-BuLi存在下，與chloroacetaldehyde進行反應後， 便可成形c i s嫌經構造而誘導於（7)。然後，再與me thy 1 th i 〇 m e t h y 1 p -1 ο 1 y 1 s u I f ο n e 進行反後，於 N a Η 存在下， 首先與上述有誘導而成的湛類（3)進行反應後，然後以t e r t-butyldiphenylsiylchloride保護所誘導出的2級酉？（9) 之情況下，進行酸加水分解，再進行脫保護後便可誘導出 因子 C (9-羥-10-氧-12 (Z)、15 (Z)-十八磺二烯酸} (12)。 ln« vm —HI fmmammi c (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) • i— 1 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 14 木紙掁尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 501909 A7 B7 五、發明説明（l2 機制（A) H0:C、 ,C〇2Et ⑶:Et -OHC^^^c〇2Et 、〇H PPh3, CBi 、Br PPh3 ->

Br

Ph： (6 ) 1) n-Buli 2) 0HC-CH2C1 n / sch3 ^ S02T01 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Cl

.SCHs 'SO2T0I 衣-- (8

DNaH n

OH I 訂 2)0HC(CH2)7C02Et CH(CH2)TC〇2Et CHaS7 xS〇2Tol C i S -i (t - B u) P h 2 (10) 0 - S i (t - B u) P h 2 丨i I - CHCCHa)TCOoEt CH3S 八 S02Toi

H3(T 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

MeOH (11)

n-ButNF/THF

〇-Si(c-Bu)Ph2 ^MCH2):C〇2H

(CH：)：C〇2H 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS ) A4規格（210X 297公釐） 501909 Α7 Β7 五、發明説明（I3 再者，相關因子C化學合成的第二方法，在上述方法 中，以l,9-Nonanedioi(l’）取代Nonanedionic acid mono ester(l)當作起始化合物，利用Μη〇2進行氧化而為二醛 類（2 ’），再利用ΚΜη〇4進行氧化而形成單醛單羧酸（3 f)後 ，並進行酯化，而生成上述機制（1)中的中間體化合物（3) ，之後便可依照上述方法（1)的機制U)進行反應。以下所 示便像由1,9-Nonaned io丨（1 f)轉換成中間體（3，）之反應步 驟的機制（B)。 機制⑻ HI. Ill —1*If - ill. I— .............I -»-1— - --...... II (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (1 / )

MnOi

-> OHC

CHO 訂

KMnCU protect ion 此外，12-氧-13-羥-9(Z)、15 (Z)-十八磺二烯酸，偽 可利用如合成機制（C)進行合成。邸，以Nonanedioic aci d m ο η o e t h y 1 e s t e r (1)當作起始原料，利用與氯化硫S? 進行反應而形成氯醯酸類（2)後，對其施行NaBH4還原反應 而導向酸醇類（3)。然後於保護游離羧酸後，與methylthi 0 methyl p-tolyl sulfone進行反應後，同時與二苯基鱗 (triphenyi phosphine)及 carbon tetrabromide進行反應 ，將所得之（5 )與三苯基麟（t r i p h e n y 1 p h o s p h丨n e)進行反 16 - 國國家標準（CNS ) A4規格（2!0X 297公 ύ 經濟部中央檬準扃消費合作社印裝 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 501909 A7 ___ B7 ,__ 五、發明説明（I4 ) 應，然後在n-BuLi存在下，與chioroacetaldehyde進行反 應後，便可成形c is烯烴構造而誘導於（6)。然後，再與me thyithio niethyi p-tolyl sulfone進行反應後，於 n-BuL i存在下，S行利用cis-2-hexen-l-o丨的PCC氯化反應，而 誘導於醒類（3)，最後再利用脫保護便可誘導成12-氯-13-羥-9(Z)、15(Z)-十八磺二烯酸（10)。 其次，10-氯-13-羥-11(E)、15(Z)-十八磺二烯酸， 傜可利用如合成機制（D)進行合成°即，以甲乙烯酮（Meth yl vinylketone)(l)當作起始原料，並在LDA、DME存在下 ，與氯化三甲基矽烷進行反應後’將所獲得的矽烷醚（2) 於低溫下（-7()°C )，經添加MCPBA及三甲基胺氫氟酸（trime t h y i a in i n e h y d r 0 f i u 0 r i c a cr i d)後，而形成醒!醇類（3 )。 然後施以羰基保護措施，並使用三苯基麟（ tripheny 1 pho sphine)及三氯乙_當作反應試藥，並於烯烴上附加氯化 物而誘導於（5)。然後’再於三丁基胂（tributy 】arsine) 及K 2 C 0 3存在下，與甲酸（f 0 r 111 i e a e i d)進行反應’使其形 成反式烯烴類結溝的氯化檢（7 ) °再使（7)與將順式2-己基 )進行反應，而誘導生成（9 ) °然後，再施行（9)與6 -庚烯 - 酸（6-hepteno ic ac id) (1〇 )的結合反應’最後並進行脱保 -17 ~ 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210x 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

501909 A7 B7 . 五、發明説明（I5 ) 護作用，而誘導出10-氯-13-羥-11(E)、15(Z)~十八磺二 烯酸（11)。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 18 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS ) A4規格（2ίΟΧ 297公釐） 501909 A7 B7 五、發明説明（1δ 11003

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(OI)POI? 3os1d9lr9 Η003Ί13(2_:3ΚΤ=Ι3Π --x/x//\3oH d 501909 '經濟部中央標準局員工消費合作社印製 Α7 Β7 五、發明説明（18 ) 酵素法 其次，相關酵素的合成法予以詳細說明。譬如說本發 明的因子C可猶如下所述的酵素法進行合成°此種利用酵 素法合成因子c的起始原料傺可使用α -亞麻酸。此亞麻 酸係經由植物等比較豐富含有的一種不飽和脂肪酸，可利 用一般習知的方法，由該類動物、植物等進行萃取、精製 而得，並將其使用為製造因子C的起始原料’當然亦可使 用市售産品。 首先，在此種酵素法中，將亞麻酸當作基質，並 與脂肪氧化酶（L 0 X)進行作用’並於第9位置處引進過氧 化氫基（-00Η)。而該脂肪氧化酶（L0X)·燦於具有cis，cis-1 ，4-戊二烯結構的不飽和脂肪酸中，施行將當作分子狀氧 的過氯化羥基引入的氯化還原酵素，不論在動物、植物中 ，於其活體内均可確定存在的酵素。 就植物而言，譬如大豆、亞麻的種子、苜宿、大麥、 蠶豆、四季豆、扁平豆、豌豆、馬鈴磬之塊莖、小麥粉、 蘋果、麵包酵母〕綿、奇異果之根部、醋粟、葡萄、西洋 梨、扁豆、稻米胚、草莓、向日葵、茶葉等中，均有存在 此種酵素。 本發明中所使用的脂肪氧化酶（L0X)，僅要於α -亞麻 酸的第9位置處引進過氧化氫基者便可，相關於其來源則 無一定的限制。此外，以該α -亞麻酸為基質，當進行上 述的脂肪氯化酶處理時，當然以將所使用的脂肪氧化酶調 -21 - 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210:<297公釐） 1--- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ^ In 1— · 501909 A7 B7 - 五、發明説明（19 ) 整至適當溫度及適當PH值條件下，再進行酵素反應者為佳 。再者，此處所採用的脂肪氯化酶，傷可使用一般習知的 方法，由上述該等植物中進行萃取、精製而製得，同時亦 可使用市面上所販售者。 藉由上述方法，可由α -亞麻酸調製成9-過氣化氫亞 麻酸（9-過氣化氫-cis-12, 15-十八磺二烯酸）。 其次，再以該9-過氧化氫亞麻酸為基質*利用進行過 氧化氫異構酶作用，便可以製得所需的因子C。該過氯化 氫異構酶，其過氧化氫基經環氯化後，轉換成麵醇體為具 有活性的酵素。通常該等酵素之存在處，就檀物而言，譬 如大麥、小麥、玉黍蜀、線、茄子、亞麻之種子、萵Μ、 燕麥、波菜、向日葵等中。 本發明中的氣化氫異搆酶，乃譬如將9-過氯化氫亞麻 酸的第9位置處的過氧化氬基進行脫水反應，_而形成環氧 基，此為利用0Η_的求質子反應，便可獲得所期望的因子 C，而並無其他的特殊限制。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 惟，當以9-過氯化氫亞麻酸為基質，進行如上述的過 氧化氫異搆酶處理時，當然以將所使用的過氧化氫異構_ 調整至適當溫度及適當ΡΗ值條件下，再進行酵素反應者為 佳。 再者，此處所採用的過氧化氫異搆酶，偽可使用一般 習知的方法，由上述該等植物中進行萃取、精製而製得， 同時亦C使用市面上所販售者。 -22 - 义氓伕尺度適用中國國家標隼（ CNS0_A4規格（210X 297公釐） 501909 A7 B7 ^ 五、發明説明（2〇 ) 上述二項步驟的發酵反應，亦可採取分別各自進行方 式’亦可採取連續進行方式。此外，將上述酵素的粗级精 製品或精製品，進行如上所述的酵素反應後，亦可以獲得 因子C。另，將該酵素固定於載體上，並該等經固定化的 酵素，調製成爾後進行管式處理或批式處理等的基質，而 可製得因子C。 此外，當形成環氯基後，藉由-的求質子反應（如上 述），便可製得因子C。而該求質子物質之環氧基附近， 的作用形式，誠如眾所周知，除將形成α -酮醇不鉋和脂 肪酸外，亦會産生如7 - _ 化合物的副産物° 該7 ~酮醇化合物等副産物，可採用習知如HPLC等分 離手段，而輕易的將其去除。 以下所述機制（E) ’傷利用如上述之酵素法合成因子 C的反應結.構。 —nil m tf_m —di —m mmmMmmmmat I. =_ I-**I gi j 11---- Ini - is (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ml —m 1—'WW-SIK nn * 訂 d 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 尺 張 紙 本 準 標 ^ 國 國 |中 用 適 格 一视 23 t一 公 501909 A7 B7 五、發明説明（21 ) 機制(E)

C00H

Linoleni c acid(LA) 1 ipoxygenase(LOX) + 0 2

00H

COOH

•hydroperoxy-LA COOH (Allene oxide) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 hydroperoxide i somerase

COOH Factor C

0 OH 雖然利用酵素法進行製造因子C的製造方法，已於上 述予以詳細的說明，可是將脂肪酸中之雙鍵結搆轉換成α -結搆的脂肪氧化德及過氧化氫異搆酶，葆普遍的分 佈於 酵母菌體及被子植物的植物體中。故，依照本發明的話， 不止使用因子C可以製造本發明的花穿形成誘導劑，尚可 利用酵母菌體、被子植物的植物體、或者其酵素含有物、 將其譬如粉碎物V水性萃取物等與具雙鍵結搆的脂肪酸， 藉由酵素反應容許的媒體，例如在水性媒體中進行培育的 話，相同的亦可製得本發明的花芽形成誘導劑。 此種情況下所使用的酵母，可如屬於酵母麵屬（Sacch

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 501909 A7 _______B7 ._ 五、發明説明（22 ) aromyces)的酵母，諸如發麵酵母（s accharoniuces cerev i s iae) 0 再者，所謂『被子植物』，則譬如屬於雙子葉植物綱 (D ic i ty 1 edoneae)之原始花被群（Arch ich lamydeae)的植 物，可舉例如 木麻黃目（Verticillatae)的木麻黃科（Casuarinaceae) 胡椒目（P i p e r i e s)之三白草科（S a u r u r a c e a e)、胡椒科（ Piperaceae)及金粟蘭科（Chiorarrthaeeae); 楊柳目（S a 1 i c a 1 e s)的楊柳科（S a 1 i c a c e a e); 揚梅目（M y r i c a 1 e s)之揚梅科（M y r i c a c e a e); 胡桃目（J u g 1 a n d a i e s.)之胡桃科（J u g 丨 a n d a c e a e); 胡挑目（J ii g 1 a n d a 1 e s)之胡桃科（J u g 1 a n d a c e a e); 山毛櫸目（？以3丨63)之樺木科（861：111^6^)及仂毛櫸科（: Fagaceae)； 奪麻目（Urticales)之榆科（Ulisaceae)、桑科（Moraceae )及奪麻科（Urticaceae); 河苔草目（Podosteaionales)之河苔草科（Podostemaceae )； 山龍眼目（P r o t e a 1 e s )之山龍眼科（P r o t e a c e a e); 檀香目（S a n t a 1 a 1 e s)之鐵青樹科（〇 1 a c a c e a e) ·、檀香科（ Santalaeeae)及桑寄生科（Loranthaceae); cr 馬兜鈐目（1「丨51：0丨(^^4163)之馬兜鈐科（1「丨31：0：1〇(^1£1 -25 - 反紙杲又度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） m I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 501909 A7 B7 五、發明説明（23) ceae)及花草科（Rafflesiaceae); 蛇Μ 目（Baianophoraies)之蛇 蓼目（Polygortales)之蓼科（Polygonaceae); 中心子目（Centrosperiaae)之藜科（Chenopodi aceae)、 莧科 Umaranthaceae)、紫茉莉科（Nyctagi n a c e a e)、假繁 縷科（Cynocrarabaceae)、商陸科（Phytolaccaceae)、番杏 科（i\ i z o a c e a e)、馬齒莧科（P o r t u i a c a c e a e)、落葵科（B a s e il a c e a e)及石竹科（C a r y o p h y 11 a c e a); 毛莨目（Ran a i es)之木蘭科（Ma gηo 1 i ace ae)、昆橢樹科（ Troehodendraceae)、連香樹科（Cercidiphyllaceae)、睡 蓮科（N y m p h a e a c e a e)、金魚藻科（C e r a t o p h y Π a c e a e)、毛 茛科（R a ω u n c u i a c e a e)、木通科（L a r d i z a b a 1 a c e a e)、小 _ 科（B e r b e r i d a c e a e)、防己科（M e n i s p e r m a e e a e)、鱲梅科（ C a 1 y c a n t h a e e a e)、肉豆 S 科（M y r i s t i c a e e a e)、樟科（L a u raceae)； 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 罌粟目（Rhoeadales)之（Papaveraceae)、山相科（Cappa ridaceae)、十字花科（Cruciferae)及木犀草科（Resedace ae) ϊ 瓶子草目（Sarraceniales)之毛膏草菜科（Droseraceae) 及緒籠草科（N e p e n t h a c e a e); 薔薇目（R o s a 1 e s.)之景天科（C r a s s u 1 a c e a e)、虎耳草科（ S a x i f r a g a c e a e)、海桐花科（P ί 11 o s p o r a c e a e.)、金縷梅科 -26 - 本I張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(2iOX 297公釐） 501909 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 ----- ---^_:_—_—五、發明説明（24 ) (H a πι a in e 1 i d a c e a e)、懸鈐木科（P 1 a t a n a c e a e)、薔薇科（R 〇 saceae)及豆科(Leguminosae)； _牛兒苗目（〇6^以3 1^)之酢漿草科（0父31 i d a c e a e)、 栊牛兒苗科（G e r a n i a c e a e )、金蓮花科（T r o p a e o i aceae) 、 亞麻科（L i n a c e a e)、古柯科（E r y t h r o x y 1 a c e a e)、鏡藜科（ Zygophyliaceae)、芸香科（Rutaceae)、苦木科（Simaroub a c e a e)、橄欖科（B u r s e r a c e a e )、揀科（M e 丨丨 a c e a e)、遠志 科（P o 1 y g a 1 a c e a e)、大戟科（E u p h o r b i a c e a e)及水馬齒科（ Calltrichaceae)； 無患子目（Sapindales)之黃揚科（Buxaeeae)、岩高蘭科 (E m p e t r a c e a e)、馬桑科（C 〇 r i a r i a e e a e)、漆樹科（A n a c a r d i a c e a e)、冬清科（A <3 u i f o 1 i a c e a e)、衛予科（C e 1 a s t r a c e a e)、省沽油科（S t a p h y 1 e a c e a e)、茶茱萸科（I c a c i n a c e a e )、槭科（A c _e r a c e a e)、翅子藤科（H i p p o c a s t a n a c e a e)、無 患子科（Sapindaceae)、清風藤科（Sabiaceae)及鳳仙花科 (Balsaminaceae)； 鼠李目（Rhamnales)之鼠李科（Rhamnaceae)及葡萄科（Vi t a c e a e )； 錦葵目（Ma丨va les)之杜英科（E laeocarpaceae)、椴樹科 (T i 1 i a c e a e)、錦葵科（M a 1'/ a c e a e)及梧桐科（S t e r c u 1 i a c e ae)； 側膜胎座目（Par i eta 1 es)之玀猴桃科（Act in id iaceae) 、茶科（T h e a c e a e )、藤萸科（G u 11 i f e r a e )、溝錦縷科（E 1 a -27 - 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ^-- X- -5m if ] d M ma flili ιιϋ— if-1 · 501909 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 i、發明説明（25 ) tinaceae)、堅柳科（Tamaricaceae)、董菜科（Violaceae) 、大風子科（F 丨 a c o u r t ί a c e a e)、莖節花科（S1: a c h y u r a c e a e )、西番蓮目科（P a s s i f 1 o r a c e a e:)及秋海棠科（B e g ο n i c a c e a e); 仙人掌目（〇 p u n t i a i e s )之仙人掌科（C a e t a c e a e); 桃金娘目（lyrt i f 1 orae)之瑞香科（Thyme 1 aeaceae)、胡 頹子科（Elaegnaceae)、千屈菜科（Lythraeeae)、石權科 (P u n i c a c e a e)、红樹科（R h i z o p h o r a c e a e)、八角楓科（.iU a ngiaeeae)、使君子科（Combretaceae)、桃金娘科（Myrtac eae)、野牡丹科（Melastomataceae)、麥科（Hydrocaryace ae)、月見草科（Oenotheraceae)、小二仙草科（Haloragac eae)及（Hippuridaceae)； 傘形花目（ϋ m b e Π i f 1 o r a e )之五 5S 科（A r a Π a c e a e)、傘 形科（U m b e Π i f e r a e)及山茱萸科（C o r n a c e a e); 等植物。 而，相關屬於雙子葉植物綱的和瓣花亞門（Syflipetale a)的植物，則可舉例如下： 岩梅目（Diapensiales)之岩梅科（Diapensiaceae); 杜騰花目（E r i c a 1 e s)之橙葉樹科（C 1 e t h r a e e a e.)、鹿蹄 草科（P y r o 1 a c e a e)及杜鵑科（E r i c a c e a e); 報春花目（P r i ffl ul a 1 e s)之紫金牛科（M y r s i n a c e a e)及報 春花科（P r i m ii 1 a c e a e); 白花丹目（P 1 u in b a g ί n a 1 e s.)之白花丹科（P i u is b a g i rra c e a e - 28 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210:< 297公| (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 d 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 501909 A7 B7 ^ 五、發明説明（26 ) )； 柿樹目（E b e na 1 es )之柿樹科（E be n acea e)、山礬科（S y αιρ i o c a c e a e)及安息香科（S t y r a c a c e a e.); 旋轉花目（Contortae)之木犀科（(Heaceae)、馬錢科（Lo ganiaceae)、龍膽科（Gent i anaceae)、夾竹桃科（Apocyna eeae)、籮蘑科（Asclepiadaeeae); 管狀花目（Tubif lorae)之旋花科（ConvolYulaceae)、花 惹科（P ο 1 e m ο n 丨 a c e a e)、紫草科（B o r a g ί n a c e a e)、馬鞭草 科（V e r b e n a c e a e)、唇形科（L a b i a t a e)、節科（S o 1 a n a c e a e )、玄參科（Serophulariaceae)、紫崴科（Bignoniaeeae) 、胡麻科（P e d a 1 i a e e a e)、角胡麻科（M a r t y n i a c e a e)、列 當科（Orobanchaceae)、苦登苔科（Gesneriaceae)、狸藻 科（L e n t i b u i a r i a c e a e)、爵床科（A e a n t h a c e a e)、苦鑑藍 科（M y ο p 〇 r a c e a e:)及透骨草科（P h r y ® a c e a e); 車錢草目（p丨a n t a g i n a i e s)之車錢草科（P丨a n i a g ί n a c e a e )； 茜根目（Rubiales)之茜根科（Rubiaceae)、冬忍科（Capr ifol iaceae)、五福花科 Udoxaceae)、敗醬科（Valer iaric e a e)及山蘿卜科（D i p s a c a c e a e)、 葫蘆目（Cucurbitales)之葫蘆目（Cucurbitaceae)、以 及 結梗目（C a m p a n u i a t a e)之結梗科（c a nip a n u 1 a c e a e)及菊 科(Compositae) i -29 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） «衣 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 d 501909 Α7 Β7 五、發明説明（27 ) 等植物。 而，單子葉植物綱（Μ ο η 〇 c 〇 t y 1 e d ο n e a e)的植物，則可 舉例如下： 露兜樹目（P a n d a n a 1 e s)之香蒲科（T y p h a c e a e)、露兜樹 科（Pandanaeeae)及黑之棱科（Sparganiaceae); ί召生目（Helobiae)之眼子菜科（Potamogetonaceae)、茨 藻科（N a j a d a e e a e,)、芝菜科（S c h e u c h z e r i a e e a e)、澤篤科 (A i i smataceae)及水鱉科（Hydrochar i taceae); 黴草目（Triuridales)之黴草科（Triuridaceae); 穎花目（G 1 u in i f 1 o r a e)之禾本科（G r a m i n e a e)及莎草科（ Cyperaceae)； 棕櫊目（Pal ina I es)之棕櫊科（Pal isae) ; ^ 天南星目（Arales)之天南星科（Araceae)及浮萍科（Lemn a c e a e )； 鴨拓草目（C o ni m e丨i n a 1 e s j之縠精草科（E r i o c a u 1 a c e a e ) 、鳳梨科（B r o m e Π a c e a e)、鴨 ffi 草科（C o m ni e 1 i n a c e a e)、 雨久花科（P ο n t e d e r i a c e a e)及田蔥科（P h i 1 y d r a c e a e); 百合目（L i Π i f 1 o r a e)之燈心草科（J u n c a c e a e )、百部科 (Steiaonaeeae)、百合科（L i 1 i aeeae)、石隸科（Amary i 1 i d a c e a e)、薯蕷科（D i o s c o r e a c e a e)及鳶尾科（I r i d a e e a e ); S 焦目（S c i t a m i n e a e)之 M 焦科（M u s a c e a e.)、（ Z ingiber a c e a e)及美人 M 科（C a η n a c e a e)； 蘭目（0 r c h丨d a ke s )之水玉簪科（B u r m a η n 1 i a c e a e)及蘭科 一 30 一 本紙張尺度通用π國S家標準（CNS ) A4規格（2ί0Χ 297公釐) 11— 1·1·ι· l-m j_l I 1---1-1 =1=--- - -- , 4 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 501909 A7 B7 五、發明説明（28 ) (Orchidaceae)； 等檀物。 該等植物偽使用將植物體、種子、酵素以不活性化方 法，進行各種處理之處理物，譬如，乾燥物、粉碎物、水 性萃取物、榨汁等。待別是如眾所周知，葉綠素乃脂肪氯 化酶之阻害劑，故而以使用如小麥、稻米、大麥、大豆、 玉蜀黍、豌豆等，無具葉緣素之部分（種子）者為佳。 再者，所諝『酵素』，除上述植物或其處理物之外， 尚可使用脂肪氧化酶及過氧化氫異搆酶之酵素標品，此種 情況下，仍可如同上所述之因子C的酵素製造方法具有相 同結果。 脂肪氧化酶，乃以具有順式、順式，4-戊二烯結構 之高度不飽和脂肪酸為基質，藉由如下所示反應步驟而引 進過氧化氫基。 CH 二 CH CH — CH/ \ 〇2 脂肪氧化酶 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ml «mm ctn— —SI— —iti —-ϋ I- ml · fl 1 iAW. 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

00H I CH /

CH CH、

CH 二 CH

C00H 31 - 本紙張尺度適用中國國家標隼 (CNS ) A4規格（210x 297公 501909 Α7 Β7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（29 ) 準此，本發明之酵素法中所使用的脂肪_，可採用碩 原子鐽内具有上述結搆的任意脂肪酸°此類脂肪酸’可舉 例如，順式-9，12-十八磺二烯酸（亞麻酸；C18 : 2、c is-9， 12)、反式 ~9 , 12-十八磺二烯酸（U 酸；C18 : 2、trans-9 ,12)、9,11(10，12)-十八磺二烯酸（〇18:2、八9,11(10，1 2))、順式-6,9，12-十八磺三烯酸（7-亞麻酸；（：18:3、（^ 3~6,9，12)、順式-9，12,15-十八磺三烯酸（7-亞麻酸；（：1 8:3、（^3-9，12,15)、反式-9，12,15-十八磺三烯酸0」 酸；[：18:3、！^3〇3-9,12,15)、順式-6,9,12,15-十八磺四 烯酸（C18:4、cis-6,9,12，15)、順式-Π,14-二十磺二烯 酸（C20:2、cis-11,14)、順式-5,8,11-二十硝三烯酸（C20 :3、cis-5,8,11)、5,8,11-二十磺三烯酸（C20:3、5,8,11 3〇〇1卜）、順式-8,11，14-二十磺三烯酸（020:3、〇13-8，11 ，14)、8，11,14-二十碳三烯酸（[20:3、8,11,141〇11^)、 順式-11, 14, 17-二十磺三烯酸（C20 : 3、c is_ll，14, 17)、 順式-5,8,11，14-二十磺四烯酸（花生四烯酸、C20:4、cis -5,8,11.14)、順式-5,8,11，14，17-二十磺五烯酸（020:3 、（^3-5,8,11,14,17)、順式-13，16-二十二硝二烯酸（〇22 :2、（^3-13，16)、順式_13,16,19-二十二磺三烯酸（(：22:3 、eis-13, 16, 19)順式-7, 10, 13, 16-二十二碳四烯酸（C22: 4、cis»7，10,13,16)、順式 U〇，13,16,19-二十二碌五 烯_((：22:5、（^3-7，10,13,16>19)、順式-4,7，10，13,16, 19-二十二磺六烯酸（022:5、（^3-4,7,10,13,16，19)等‘::' -32 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2ί〇Χ 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) —-- 訂--1 丨籲 501909 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 A7 _ B7五、發明説明（3〇 ) 所諝『脂肪酸』，可配合所欲製造的脂肪酸而進行適 當的選擇。譬如在本發明第三實施態樣中所屬的9-過氧化 氫-10(E)、12(Z)、15 (Z卜十八磺三烯酸及13'過氯化氫-9 (Z)、1ί (E)、15(Z)-十八碳三烯酸，於利用酵素法進行製 得時，便可採用使亞麻酸與脂肪氯化酶産生作用之方式。 另，若採用過氯化氫異構酶進行因子C的製造時，則可如 同上述的方法。 再者，在因子C中使用脂肪氧化酶之情況下，將會産 生9-羥-10-氯-13-過氯化氫-11(E) ·、15 (Z)-十八磺二烯酸 。甚而，藉由13-羥-12-氧-9 (Z)、15 (Z)-十八磺二烯酸與 脂肪氯化酶之作用，便可獲得9-過氧化氫_12-氯-13·•羥-10(E)、15 CZ)-十八碳二烯酸。 ^ 酵素或酵母菌體、抑或是植物體或其處理物，在與脂 肪酸進行培育上，則如前所述之相II因子C的酵素製造方 法。 此外，該因子C，除可依照上述萃取法與酵素法之外 ，尚可利用化學合成反應而製得。 此外*與本發明之不鉋和脂肪酸相組合，而可充分發 揮所預期之花芽形成誘導作用的去甲醫上腺素，在本發明 中像可採用依照一般習知方法進行合成而製得者，當然市 商上所販害者亦可。 本發明中，不僅可使用屬夫然型之-）形去甲腎上腺 素，亦可以使用（+)形去甲腎上腺素。 -33 - 衣纸展尺度適用中S3家襟準（CNS )A4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 ....... Λ ml mu Ilii · 501909 經濟部中央樣準局員工消費合作社印製 A7 __ _B7 . __五、發明説明（31 ) 依照上述方法，便可提供本發明之不鉋和脂肪酸、或 以不飽和脂肪酸與去甲腎上腺素為有效成分之花芽形成誘 導劑（以下通稱『本發明花芽形成誘導劑』）。 本發明之花芽形成誘導劑中，僅以不鉋和脂肪酸為有 效成分時，其與植物中潛在性存在的去甲腎上腺素互相組 合之後，便可以充分的發揮花芽形成誘導作用的效果。另 ，配合對象植物的種類之不同，此種本發明花穿形成誘導 劑亦可與去甲腎上腺素製劑相互組合，而可充分發揮花芽 形成誘導作用。 再者，在本發明花芽形成誘導劑中，若以不飽和脂肪 酸及去甲腎上腺素為有效成分的話，就植物而言，可發揮 本發明花芽形成誘導劑之花芽形成誘導作用的功效比例最 強，故而以上述二者之組合成份者為最容易使用者。 在本發明花芽形成誘導劑中，其不飽和脂肪酸與去甲 腎上腺素的組成比例，並無特定的限制，可配合上述目的 、甚至於使用對象植物的性質之不同，而進行適當的調整 。譬如針對青草等浮萍科植物，因不考慮植物中去甲腎上 腺素存在等因素，故而，採用二者（即，不鉋和脂肪酸與 去甲腎上腺素）以等莫耳濃度方式進行調配，藉此可獲得 較本發明所預期效果有更佳的效果産生。如若在浮萍科植 物中，該二者未採用等莫耳濃度調配的倩況下，則僅能發 揮如同以調配量較少之調配成分濃度等量調製時的所産生 的效果而已。 - 34 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS ) A4規格（：M0X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

In in 11 訂 mi mi ini— Kn 501909 A7 B7 五、發明説明（32 ) 經 部 中 央 標 準 局 員 工 消 合 作 社 印 製 此外，本發明花穿形成誘導劑，配合其所使用的對象 植物性質之處理後，馬上投藥之情況下所獲得的效果將較 佳。譬如，如後述實施例之牽牛花等短曰植物的比例上， 在進行一定的暗處理後，再使用本發明花芽形成誘導劑的 效果將會更佳。 本發明有效成分傺可以未加處理便直接當作本發明花 芽形成誘導劑使用，亦可以調製成植物上所期望的型態， 配合製劑學上之許可製成如液劑、固形劑、粉劑、乳劑、 底床添加劑等形式，而其所使用的載體成分或製劑舖助劑 成分，則僅要不影響本發明所期望效果的花芽形成誘導作 用之情況下，可使用一般習知常用的載體。例如，當作為 本發明花芽形成誘導劑之底床添加劑或固形劑時，一般大 約可使用如滑石、黏土、蛭石、矽藻土、高鱗土、磺酸 鈣、氫氯化鉀、白土、_矽膠等無機質類、或者是小麥粉、 澱粉等固體載體；此外，若作成液劑之情況時，則大約可 使用水、二甲苯等芳香族磺化氫類、或者如乙醇、乙二醇 等醇類、或者是如丙_等酮類、或者是如二噁烷、四氫呋 喃等醚類、或者是如二甲基甲醯胺、二甲基亞a、乙睛等 液體載體。此外，製劑用的輔助劑*則可適當的調配使用 如烷基硫酸酯類、烷基磺酸鹽、烷基芳族磺酸鹽、二烷基 磺琥珀酸鹽等陰離子界面活性劑、高级脂肪族胺之鹽類等 陽離子界面活性劑、聚氧乙二醇烷基醚、聚氯乙二醇醯基 酯、聚氧乙二醇多元醇醯基醚、纖維素誘導體等非界面活 -35 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2⑴X 297公釐） ：-I-. II衊 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 έ 501909 A7 B7 五、發明説明（33 ) 性劑、或者是明膠、酪朊膠、阿拉伯膠等增黏劑、增量劑 、結合劑等。 此外，配合所需，在不影響本發明所預期的效果前提 下*在本發明花芽形成誘導劑中亦可以適當的添加植物生 長調節劑、譬如安息香酸、煙_、煙酸釀胺、峨可酸等。 上述本發明花芽形成誘導_，配合其劑形之方法，可 使用於各種植物上，譬如，在本發明中，針對為求開花之 植物的生長點，可於葉之表面及/或内面、整棵全體上等 部位，可使用液劑、或乳劑，利用散佈、點滴、塗佈等方 式供給，此外，亦可利用固形劑或粉爾，使根部由地底中 進行趿收等方式。再者，針對求開花檀物如浮萍等水草之 情況時，可利用底床添加劑，使其由根部進行吸收，或將 固形劑漸溶於水中等方式。 此外，本發明所提供之包含有以因子C及不飽和脂肪 酸、及去甲醫上腺素為有效成分的套組之花芽形成誘導用 套組，此種本發明花芽形成誘導用組套之目的及效果，則 均與上述本發明花芽形成誘導劑相同。 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 當然，試甩本發明所提供的花芽形成誘導劑及花芽形 成誘導用套組之植物種類，並無持定的限制，諸如雙子葉 植物、單子葉植物等二者均具有本發明花芽形成誘導劑相 同之效果。 所謂『雙子葉植物』，則譬如包含有牽牛屬植物（牽 牛花）、旋花屬植物（旋花、午旋花、海旋花）、甘馨屬植 - 36 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（：Π0Χ297公釐） 501909 A7 B7 五、發明説明（34 經濟、那中夬檩準局員工消費合作衽印製 物（軍扇旋花、甘薯）、無根蔓草屬植物（無根蔓草、7 y 夕'才 >)在内的旋花科植物，此外尚有譬如木麻黃科植物 、三白草科植物、胡椒科植物、金粟蘭科植物、揚柳科植 物、瘍梅科植物、胡桃科植物、胡桃科植物、樺木科植物 、山毛櫸科植物、榆科植物、桑科植物、奪麻科植物、河 苔草科植物、山龍眼科植物、鐵青樹科植物、擅香科植物 、桑寄生科植物、馬兜鈐科檀物、花草科植物、蛇菰科植 物、蓼科檀物、藜科檀物、Μ科植物、紫茉籾科植物、假 繁縷科植物、商陸科植物、番杏科植物、馬齒莧科植物、 落葵科植物、石竹科植物、木蘭科植物、毘橢樹科植物、 連香樹科植物、睡蓮科檀物、金魚藻科植物、毛莨科植物 、木通科植物、小蘗科植物、防己科植物、蠟梅科植物、 肉豆蔻科植物、樟科植物、罌粟科植物、山柑科植物、十 字花科植物、木犀草科植物、毛膏草菜科植物、豬籠草科 植物、景天科植物、虎耳草科植物、海桐花科植物、金縷 梅科植物、懸鈐木科揎物、薔薇科檀物、豆科植物、酢漿 草科植物、《牛兒苗科植物、金蓮花科植物、亞麻科植物 、古柯科植鞠、蒺藜科植物、芸香科植物、苦木科植物、 橄欖科植物、揀科植物、遠志科植物、大戟科植物、水馬 齒科植物、黃揚科植物、岩高蘭科植物、馬桑科植物、漆 樹科植物、冬清科植物、衛予科植物、省沽油科植物、茶 莱萸科植物、槭科檀物、翅子藤科植物·、無患子科植物、 清風藤科植物、鳳仙花科植物、鼠李科植物、Μ萄科植物 -37 -

(210X297公釐） ϋ·Ι ·-*……I 111 «In m (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) I衣--

、1T * In— am ί — UK »111— 501909 Α7 Β7 五、發明説明（35 ) 、 杜英科 植 物 椴 樹 科 植 物 Λ 錦 葵 科 植 物 Λ 梧 桐 科 植 物 、 獮 猴 桃 科 植 物 茶科 檀 物 .、 藤 萸 科 植 物 、 溝 錦 縷 科 植 物 、 堅 柳 科 植 物 、 董 菜 科 植 物 \ 大 風 子 科 植 物 Λ 笙 節 花科 植 物 、 西 番 蓮 目 科 植 物 Λ 秋 海 棠 科 植 物 仙人 掌 科 植 物 Λ 瑞 香 科 植 物 、 胡 頹 子科 植 物 \ 千 屈 菜 科 植 物 、 石 榴 科 植 物 、 紅 樹 科 植 物 、 八 角 楓 科 植 物 使 君 子 科 植 物 、 桃 金 娘 科 植 物 、 野 牡 丹科 植 物 ·、 麥 科 植 物 月 見 草 科 檀 物 、 小 二 仙 草 科 植 物 、 五 S5科 植 物 ·、 傘 形科 植 物 、 山 茱 萸 科 植 物 、 山 石 梅 科 植 物 橙 十中 茱 樹 科 植 物 、 鹿 蹄 科 植 物 、 杜 鵑 科 植 物 、 紫 金 牛科 植 物 、 報 春 花科 植 物 ·、 白 化 丹科 植 物 、 柿 樹 科 植 物 、 山 礬 科 植 物 、 安息 香 科 植 物 木 犀 科 植 物 馬 錢 科 植 物 龍 膽 科 植 物 、 夾竹 桃 科 植 物 ·、 m 蘑 科 植 物 ·、 旋 花科 植 物 、 花 Μ 科 植 物 紫 草 科 植 物 > 馬 鞭 早 科 植 物 % 唇 形科 植 物 茄科 植 物 ·、 玄 參 科 植 物 、 紫 ，巍 科 植 物 、 胡 麻 科 植 物 *、 角 胡 麻 科 植 物 、 列 當 科 植 物 苣 苔 科 植 物 、 狸 藻 科 植 物 、 爵 床科 植 物 苦 檻 KM 植 物 、 透 骨 科 植 物 '、 車 錢 科 植 物 、 茜 根 科 植 物 、 冬 忍 科 植 物 五 福 花科 植 物 Ν 敗 醬 科 植 物 \ 山 籮 h 科 植 物 、 胡 蘆 巨 植 物 % 桔 梗 科 植 物 、 菊 科 植 物 等 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 d 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 植物。 而，而所諝『單子葉植物』，則包含浮萍屬植物（浮 萍）及青草屬植物（青草、t夕毛）之外，尚有如浮萍科 植物、香蒲科植物、露兜樹科植物、黑之凌科植物、眼子 ^科檀物、茨藻科埴物、芝菜科41物、澤瀉科植物、水鱉 ~ 38 - 本紙張尺度通用中國國家縣、c>；s) A4規洛（21GX 297公釐） 501909 經濟部中央標準局員工消費合作社印裂 A7 —____ B7 ‘__五、發明説明（36 ) 科植物、黴草科植物、禾本科植物、莎草科植物、棕櫚科 植物、天南星科植物、縠精草科植物、鳳梨科植物、鴨跖 草科植物、雨久花科植物、田戀科植物、燈心草科植物、 百部科植物、百合科植物、石蒜科植物、薯蕷科植物、鳶 尾科植物、Μ焦科植物、美人蕉科植物、水玉簪植物、蘭 科植物等植物。 實施例 以下所載述實施例，乃針對本發明進一步更具體的說 明。惟，本發明的技術内容範圍並不僅限於該等實施例。 實施例1 刺用赛敗法·诰闵；r 將實施短日處理且僅一次花芽成形的青草（Lesiiia pau cicostata)之441条統（以下簡稱『P441』，乃由本發明者 之一的的京都大學農學院名譽教授瀧本敦處取得，俥供 爾後如若需要時分讓之所需），在24〜25°C下，以白晝色 螢光燈持續性的照射（使用Hitachi FL20 SSD，對植物以 約5W/S12之比例進行照射），在含有1%蔗糖之1/2稀釋的亨 達培養基中，進行無菌培養並保存繼代。該亨達培養基（ Hutner、®ediuni:Hutner 1953)，另，亨達培養基尚未稀 釋下之組成，如下： (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) d - 39 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨0:< 297公釐） 501909 A7 B7 五、發明説明（37 ) KH2P04 (400ffig)、關4_ 3 (200邮）、EDTA.2K (690mg) 、 Ca(N〇3)2 · 4H20(354mg) 、 MgS〇4 · 7H20(500mg) , FeS 〇4 · 7H 20(24. 9mg). MnCl2 · 4H20(17.9mg)N ZnS〇4 · 7H2〇(65.9mg) N CaS〇4 · 5H20(3.95mg). Na2MoO. · 2H2〇(14.2mg). H3BO3(14.2mg )、（：〇以〇3)2.6{{20(0.211^)/ 10002^蒸留水（口《6.2〜6.4) 其次，將該P441之培養基，以蒸餾水洗淨後，移植於 含有 2,uM 之 Fe-EDTA 的 1/10 稀釋 E 培養基（Cleland and Bri ggs 1967)，並將其在無菌狀況且24〜25°C條件下，進行6 〜12天持鑛的光照射（約5W/si2)之培養。其中，該1/10E培 養基之組成如下：

Ca(N〇3)2 · 4H2〇(118mg) 、 MgS〇4 · 7H 2〇(49· 2mg)、02P〇4 (68· Omg)、KN〇3 (115mg)、 FeCl 3 * 6H 2 0(0. 54m g)、tertarate(0· 30mg)、H3B03 (0· 29mg)、 ZnS〇4 * 7H 2 0(0. 022nig )、Na2iMo〇4 · 2H20(0. 013mg)、 CuS04 * 5H2〇(〇. 008mg) . MnCl 2 • 4H2 0(0.36mg), EDTA-2KCL 21mg) N EDTA · NaFe (1)salt(0. 77mg )/ 1000ml蒸留水 將依照上述方法所調製而成的P441培養基，攤開於乾 燥的濾紙上，且在低濕度（相對濕度50%以下）、24〜25 Ό 左右之條件下，放置15分鐘，並施加乾燥壓力。 將經乾燥壓力處理完成過之P441 (75g)，於L51蒸餾 水中，以24〜251C浸漬2小時。 然後，將該P441由該浸漬液中去除，並於該浸漬液中 =，計分三次添加1.5丨的氯彷進行分液，並將所得的氯仿層 -40 - 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐〉 • 1— —mi im Βιϋ· HI ί I!--. 1! ml i-ii 1-—I n (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 丁 _ n . 經濟部中央標準局員工消費合作社印m 501909 經濟部中夬標準局員工消費合作社印製 A7 B7 . — ——— 丨 _ 五、發明説明（3δ ) 予以水洗，並添加醋酸〇. 1 ® 1 ’並以分離機進行乾燥，於 所得的殘渣中，添加500 /i 1的特级甲醇原液，將分離機中 的殘餘物予以溶解。 其次，將上述甲醇溶液放置於高速液體層析〔C ο i u m n:0DS (十八碳矽烷）管柱（Φ 1〇Χ250απη、CAPCELLPAK C18: 資生堂公司産品）、以so lv :50%蒸餾水（含有0.1%三氣化 醋酸）及乙睛（含有0，035三氟化醋酸％ )為移動相，流量4 . 0 0 (m 1 / in i η )，活性區分（活性傜依照後述試驗例之方法求 算）〕，在溶出時間靠近15分鐘左右下進行分取。 更進一步，在已分取的活性區分中’添加醋酸乙酯， 將醋酸乙酯予以分離並水洗，使用分離機將該醋酸乙酯予 以乾燥，便可獲得所需精製物的乾固物約° 為確定此乾固物的結搆，使用1 3〇nmr以化學偏移值 求算（將上述乾固物溶解於重甲醇及重醋酸分別各1滴之 混和中，俾作為測量樣品）。 結果顯示，其化學偏移值及由化學編移值中所求算出 的化學結構式，如下所示： 1 ： 178. 47 ( s ) . 2 : 35. 71( t ) , 3 : 26. 82* ( t )，4 : 31. 11( t ) ? 5 ： 26. 92* ( t ) , 6 : 35. 36 ( t ) , 7 : 78. 61(d )/ 8 : 213· 78 ( s )，9 : 38· 38( t )，10 : 122· 95 ( d )，11 : 133. 45 ( d) , 12 : 27. 46( t ) , 13 : 128. 38 ( d) , 14 : 134. 55 ( d ) , 15 : 22. 28 ( t ) , 16 : 15. 39(q ) (相關圖表請參閲第一圖所不°营’其化學偏移值所附不 - 41 - 本纸張尺度適中國國家標準1^3「^4規格（210^297公釐） 馨衣-- (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) —m me nn · 訂 d 0 iammmmmml —If — ml Ham ·111 nm* 501909 A7 B7 五、發明説明（39 ) 之數字，乃分別對應下述化學結搆式中磺原子標號者) 米傺歸屬不明確者 ⑯ ⑮ ⑭⑬⑫ ⑪⑩⑨ ch3~ch2-ch:ch-ch2-ch:ch-ch: OH ⑧j -C-CH-CH2 |j⑦ ⑥ -CH： ⑤ (CH2)3-CH2 ④ ③ -CHs-COOH ② ① (C,8Η3〇〇4, Μ. W. ： 310) 由結果中明白顯示，該乾固物確實為精製成所期望 的α -麵醇不飽和脂肪酸（即，因子C )。 審_例2 因孑C相對於青茸之花莽形成誘皇_作用 衣· (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 採用青草Ρ151条統（以下簡稱『Ρ151』，乃由本發明 者之一的的京都大學農學院名譽教授瀧本敦處取得，俾 供爾後如若需要時分讓之所需）為標本植物，針對上述製 造例中所獲得的因子C之花芽形成誘導作用’探討其成花 率（％)被認為成花的葉狀體數目/整體葉狀體數目Χ100) 0 gp，首先將上述因子C(K155iBg溶解於水0·15ιη1中， 並添加ΙΟιηΜ去甲腎上腺素與〇 * 5Μ三羥甲基氨基甲烷缓衝液 (PH8.0)25“ 1，再將該溶液於251C下培育6小時。 其中，該因子C與去甲腎上腺素之濃度像如表一中所 示之濃度，將如上述條件下培育之溶液’添加於30ml四角 燒瓶中之分析培養基（1/10E培養基in苄基腺嘌昤、不 添加Μ糖）10 m丨中，其結果如第1表中所示° -42 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 訂 4 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 501909 A7 —__B7 五、發明説明（4〇 ) 表 1 NEeq FCeq NEeq ~~—— FCeq A 0· M 7. 8nM D 0. 3// M 2·9^Γ A 3uM 78nM D 3uM 29nM A 10 UM 260nM D 10 UM 98nM B 0. 3uM 78nM E 0. 3uM 29nM B 3uM 780nM E -3/i M 29〇πΜ B 10 UM 2. 6mM E 10 UM 98〇πΜ C 30nM 78nM F 30nM 29nM C lOOnM 260nM F lOOnM 98nM C 0.3uM 780nM F 0. 3// M 29〇nM C 3uM 7, 8uM F 3uM 2· 9 xz M C 10 UM 26 uM F 10 UM 9* 8 /z M _ 在添加有各種該等因子C濃度的分析培養基上，將P1 51之群落移植一個，並在24〜25TJT，使用白晝色螢光燈 持續照射（利用Hitachi FL20 SSD，以相對植物約Win2之 比例進行照射），而進行ir天的培養，並求取上述成花率（ 如第2表中所示）。 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 另，在同一条統的試驗乃分別利用三館四角燒瓶進行 ，而且至少最低以相同条列進行二次試驗為原則，其結果 如第2表中所示，表中所示偽指各別試驗之平均值土 SE ( 檫準誤差）。 -43 - 纸張尺度適用中國國家標準（CNS〉A4規格（210X297公釐） 501909 Α7 Β7 五、發明説明（4i ) 表2 30nM ΝΕ ΙΟΟηΜ JE 0. 3/ζΜ ΝΕ 3.0//Μ ΝΕ ΙΟ/iM ΝΕ A 一 — 1· 6 土 1· 6 29· 5±3· 5 51·5±2·4 B — 一 :29· 0±10· 3 34· 7±4. 4 44. 8±0. 7 C 3·0±3·0 40· 6±2· 1 46. 3±3. 6 56· 2±1· 2 53·2±1· 1 D — 一 — 16. 3±6. 4 50. 6土7.0 E — 1· 9±1· 1 61·6±1·2 65. 0土0. 4 F 11·7±2·7 39·2±7·9 1 63·2±1.2 60. 8±1· 9 66·8±3·5 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 藉由該等結果顯示，可知該花芽誘導活性乃隨濃度的 增加而增加，其中，因子C含量之使用量，係相等於去甲 醫上腺素之莫耳量或者在此含量以上之情況的C及F實驗 群，即使其去甲腎上腺素之含量在30nM之極低濃度倩況下 ，其花芽誘導活性亦相當的明顯。 換句話說，因子C之含量與去甲腎上腺素等莫耳濃度 之情況時，所期望之青草的花穿誘導活性，可以最有效$ 的充分發揮。 如上述，利用上述濃度之組成方式，調製因子c與έ 甲腎上腺素並予以投藥時，在青草中確實可以判定具有1^ 芽誘導活性。 再者，誠如後述，在與上述青草屬於完全不同条統@ 雙子葉植物之牽牛花上，亦同樣可以確認藉由因子C等$ 有花穿誘導活性，相同的，包含浮萍屬植物及青草屬植物 等在内的浮萍科植物，均可以確認花芽誘導活性° 本纸浪尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2ί〇Χ 297公麈） -44 -

(請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 •嫌. 501909 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 .五、發明説明（42 ) 富旆例3 因孑Π栩對於萣Φ ?卩的花穿形成誘皇作用 將9g的牽牛花種子實施20分鐘的濃硫酸處理，並在流 水下放置一晚，然後將種子以胚穿部份朝上放置之方式， 放置於濕漬海砂上24小時並使之生根，在將該等以發根的 種子深植於海砂中約1 · 5〜2 · OcnL左右，在連續光下進行培 養（五天左右）。 將藉由此種培養而開葉的牽牛花之整體檀物髏，移植 於培養液中，該培養液之組成份如下所述： 〔KN0“2 50mg) . NH4N03(250mg) . KH2P〇4(250mg) . MgS〇4 · 7H.O(250mg) 、MgS〇4 · 4H2〇(lmg) 、 Fe-citrate n-hydrate(6mg) 、 H3B〇3(2mg) 、CuS04 · 5H20(0· Img)、 ZeSih · 71^0(0· 2mg)、Na2Mo〇4 * 2H2Q (0.2mg)、Ca(H2P0J2.2H20(250mg) /lOOOnii 蒸留水〕{C 移 U/*c〇 在該培養条統中，就上述製造例所獲得因子C等的被 驗藥物，則使用木棉線直接投藥於牽牛花導管中，並實施 暗處理，然後在281下，進行16天的連續光照射培W，再 以實體顯黴鏡觀察確認第十六天的花芽數目。 上述『暗處理』偽進行一晚（16小時的暗處理）、或者 二晚（16小時的暗處理+8小時的明處理+16小時的暗處理） 〇 其中*實施一晚處理之結果如第二圖所示，而實施二 晚之結果則如第三圖中所示。 在該二個圖示中，對照群涤有投與蒸餾水之群。而1 “ M(FC)、10.u M(FC)、100/i MCFC)，則涤分別投與各種濃 - 45 - 本纸張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) "ml fm ί* 訂 d 501909 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 ‘_______五、發明説明（43 ) 度因子C之群。因子C +NE，則偽將去甲腎上腺素1〇 α Μ ’ 依照上述試驗例1中所記載的方法，賦加乾燥壓力的青草 Ρ441条統的浸漬水與培育出者° 在第二圖所示的一晚暗處理群與對照群間之比較中’ 可以判定因子C的花芽誘導活性’而在與去甲腎上腺素組 合調配的投藥群中*更可以確認具有更強的花穿誘導活性 0 相對於此，如第三圖中所示實施二晚之處理群’主要 箸重於對照群或投舆藥劑濃度之不同方面，由此可以確之 平均花芽數對濃度依存性的增加’至少花芽誘導活性亦將 增強。 藉此，可以確定在牽牛花中，該因子C等之花芽誘導 活性。 此外，如前所述般，與牽牛花屬於完全不同条統之單 子葉植物的青草，亦可以確認該因子C等的花芽誘導活性 ，所以，包含牽牛屬植物、旋花y屬植物、甘薯屬植物、 及無根蔓草屬植物在内的旋花科植物，均可以確認具有花 芽形成誘導活性。 再者，如上所述，藉由將因子c等的投藥，不論在單 子葉植物或雙子葉植物等完全不同条統的植物中，均可確 認具有花穿形成誘導活性，故而可以明顯的表示，就整體 所有植物而言，藉由因子C等的投藥，均可以確認具有花 芽形成誘導活性。 - -46 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格:：2丨0><:291公廣） ............ till 1 I i== ----1 I— n (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 d « mfltc me —ϋϋ nn 501909 Α7 Β7 五、發明説明（44 ) 奮旆_ 4 準備如實施例3中所載述之已發芽的青草『紫』。另 外，亦準備於溶解因子C之濃度1 μ Μ、1〇 M Μ及50 y Μ水溶 液，於進行暗處理前及暗處理後，每天於雙葉之表裡二面 上實施噴霧十次，並觀察第十四天的花穿數，如第四圖所 示。藉此，可以更清楚明瞭將因子C噴霧於葉子上之方法 ，可明白的確認花穿形成誘導活性。 奮施例5 將 Dendrobium hybridum Hort.Redstar 之盆栽 20 盆， 由四月起到1：月間，適當的投與油粕及液肥（:），待施加肥 料中止後，於八月到十二月間，區分實驗區及對照區，對 實驗區則由每週一到五之間，每日將50 # Μ的因子C水溶 液，使用噴霧器散佈於整棵全體上，持續進行栽培。其中 ，D e n d r 〇 fa i u πι h y b r ί d u ία Η 〇 r t · R e d s t a r 的管理，傷放置於 室溫中，不使冬期最低溫度在10t:以下。而對照區則使用 水進行相同的處理。 其結果如表3中所示。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

In —in fm —ml Miff mu —in· a · 震！ 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 47 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格ί 210X 297公釐） 501909 五、發明説明（45 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 開花時期 1棵平均之 開花數相對值 實驗區 2月（7盆）、3月（3盆） 132 對照區（水） 3月（8盆）·、4月（2盆:） 100 誠如上述，因子C將可促進Dendrobium hybridum Ho r t. R e d s t a r的花穿形成° 窨施例6 ’ 將Cymbidium hybridum Hort.Raspberry Miile-feui 1 1 e之盆栽20盆，由四月起到八月間，適當的投與油办言 及液肥，待施加肥料中止後，於九月到十一月間，區分實 驗區及對照區，對實驗區則由每週一到五之間，每日將50 μ Μ的因子C水溶液，使用噴霧器散佈於整棵全體上，持 續進行栽培。其中，Cymbidium hybridum Hort.Raspberr y Miile-feuilie的管理，僳放置於室溫中，不使冬期最 低溫度在10 °C以下。而對照區則使用水進行相同的處理。 其結果如表4中所示。 -48 - 各紙張尺度通用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

501909 A7 B7 五、發明説明（46 ) 開花時期 1棵平均之 開花數相對值 實驗區 1月（1盆）、2月（7盆:） 151 3月（2盆） 對照區（水） 3月（1 0盆） 100 誠如上述 :，因子C將可促進Cyiabid: l u m hy br i dum Ho t»Raspberry Mille-feuille的花穿形成。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) |衣--- •--訂 奮_ _ 7 將康乃馨（:D丨a n t h u s c a r y ο p h y 1 1 u s L:)之種籽，於九 月散播，並於三月實施更植，待更植實施完成後，由每週 一到五之間，每日將50 /i Μ的因子C水溶液，使用噴霧器 散佈於整棵全體上，待七月時，觀察100棵康乃馨的開花 數，其結果如表5中所示。 4 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 一 49 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Μ規格W公,4 501909 A7 B7 五、發明説明（47 ) 平均1棵開花數的相對值 實驗區 142 對照區（水） 100 誠如上述，因子C將可促進康乃馨的花芽形成。 審施例8 準備如實施例3中所載述之已發芽的青草『紫』。另 外，亦準備溶解有 9-過氧化氫-10(£)，12(2)、15(2)-十八磺三烯酸之10,1^ 、50 y Μ及100 y Μ濃度的水溶液，如實施例3中所載述般 ，將木棉線引導於胚軸内，觀察第十四天的花穿數目，其 結果如第六表中所示。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ^ ---- 訂 d 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -50 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 501909 A7 B7 五、發明説明（48 ) 第十四天後的花穿數目 對照區（水） 0.892 10 /i Μ 1.425 50 μ Μ 1.623 100 u Μ 2,209 η = 16之平均 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ---訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 奮施例9 重覆實施例8之方法，並使用9-羥-10-氯-13-過氯化 氫-11 (Ε )、15 (Ζ)-十八碳二烯酸為被撿驗物質，觀察第十 四天的花穿數目，其結果如第t表中所示。 -51 - 又呔長尺！適用宁國國家標隼（〇^)八4規格（210/ 297公釐） 501909 A7 B7 五、發明説明（招） 寿 7 第十四天後的花芽數目 對照區（水.） 1.203 10 α Μ 1.392 50.α Η 1.572 100 u Μ 1.704 _衣-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 n = 16之平均

奮旃例1 0 利用酵袤法製诰因孑C 將尚未加熱的小麥予以粉碎，並將其粉末（大豆乃由 シ夕7公司製造生産）200g，分散於1公升的水中，並添 加(K 5g的亞麻酸，進行攪拌同時在30 t;下進行培育，待培 育三天後，使用氯仿進行萃取。然後，再使用分離機使氯 仿飛離後，然後再以矽膠層析（載體：Wakogel 0200、和 光純藥工業公司製，溶劑：乙謎一苯一乙醇*醋酸40 : 50 :2 : 0.2)，進行區分分取。 相同的··使用大豆而獲得區分。 如同實施洌1〜6中所載述般，可以確知各區分對花 -52 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X29?公釐） d 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 501909 A7 _ B7 ·_______ 五、發明説明（5〇 ) 芽之促進形成。

實施遞」_L 將乾燥大豆使甩研磨機進行研磨成粉末，並取懸 浮於離子交換水lOOinl中，添加亞麻酸20 mg，且保持於30 °C中，使用磁式攪拌器進行攪拌並進行二天的反應’利用 過濾將大豆粉末予以去除，將水層部份使用醋酸乙酯進行 萃取，再利用減壓餾除醋酸乙酯後，再度溶解於25ια 1水（ 試料A )中，雖有未能完全溶解之物，但仍可使用。 於試料A之lail中，添加lOiaM之去甲腎上腺素（NE) 10 “ i、或0·5Μ之Tris buffer (PH 8,0)5^ 1，在25°C 下進行 一晚的培W。在雷母納（151条統）培養基中，將濃度為〇· 3 紅Μ、ly Μ、3m Μ之NE添加於其中，並將該雷母納（151条 統）移植一個群落，並以連續光（Hitachi F120SSD、10 Wur 2)進行一週的培養。 相關於花芽，以群落數目之百分比，評估成花率，其 結果如表8中所示。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ··1 —in =三'=" - I - ----- mu. ----- - -1 Λ ------訂一. 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2iOX297公釐） 501909 A7 B7 五、發明説明（51 ) S NE濃度（, ,α Μ) 0.3 1 3 亞麻酸 0 0 0 試料A 44.3 ± 6,5 58,2土 2.: 5 56·9±4·3 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 其結果傷以三樣本之平均土 SD表示。 如上述，亞麻酸本身並未具有花穿形成促進功能，然 而藉由酵素處理，便可轉換成具有花芽促進功能的物質。 此外，亦證實合併使用去甲腎上腺素之效果。 奮施例1 2 使用在實施例1 〇中所調製而成的試料A，利用實施 例1所記載的方法，調查牽牛花的花穿形成誘導，其結果 如表9中所示。

、1T d 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -54 — 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨0X297公釐） 刈 1909 Α7 Β7 五 '發明説明（52 ) 處理 牽牛花之花#數 水 1.3 亞麻酸 0.9 試料A 2.5 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) n = 24之平均 試料A有Ρ< 〇·1的明顯差距，與水及亞麻酸相較之下 ，可更具有花芽形成促進功能之作用。 審旆例1 3 將以脱殼之乾燥小麥予以粉碎，利用如實施例1 1所 載述之方式進行處理，而製得試料Β。 其次，在如同上述實施例1 1中所載述的方法，對浮 萍調查花芽形成誘導功能，其結果如表1 0中所示。

In— ftm —mf · 訂 d 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -55 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 29*7公釐） 501909 A7 B7 五、發明説明（53 ) 1 Ο HE濃度（M) 0.3 1 3 亞麻酸 0 0 0 試料B 55.4土 2*5 52 J 士 5·4 58·4± 3·6 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

In n . 如上述，可以確定亞麻酸之酵素處理效果，及合併使 用去甲腎上腺素之效果。 奮偷例1 4 以花生四烯酸取代亞麻酸，進行如同實施例1 1之方 法，而製得試料C。 使用該試料C，利用實施例1 1中所載述的方法，針 對青草，調查花芽形成誘導功能，其結果如表1 1中所示 訂 d 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -56 - 本纸蒗尺度適用口3國家樣樂（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 501909 Α7 Β7 五、發明説明（54 ) X NE濃度U M) 0.3 1 3 亞麻酸 0 0 0 試料C 10 ‘ 9 ± 2,3 27.5土14 48.9 士 2 · 7 * - 4 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本百〇 如上述，可以確定花生四烯酸之酵素處理效果，及合 併使用去甲腎上腺素之效果。 ’ 奮施Μ 1 5 重複實施例3之方法，將暗處理時間固定於十六天’ 觀察値數（η )訂為50，其結果如第五圖中所示，由該结果 中顯示，當因子C之濃度固定為1〜ΙΟπιΜ之情況下，花穿 數目有明顯的增加。

窨施例1 R 重複實施例3之方法，將一晚之暗處理時間固定於十 四小時、十六小時及十八小時，同時將因子C之濃度固定 在10 ^ Μ下，其結果如第六圖中所示，由該結果中顯示’ 不論在任何種暗處理時間下，藉由ΙΟπιΜ之因子C，可確定 花芽數目有明顯的增加。 ^ -57 - 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（21GX297公唐） 灯 d 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 501909 A7 B7 * 五、發明説明（55 ) 産業上之可利用 藉由本發明，可提供一種直接作用於植物之花芽形成 的花芽形成誘導劑及花芽形成誘導甩組套。 mwmmmmtmi MWMmmmmms —itf— —ill ll-i-*I lull —HI, if·— —lull mmmwmmmmmmt mmmmmmu —Hi (sm fits fm · ，蟻 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 i0 經濟部中央標準局員工消r合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）

Claims (1)

1. 申請專利範圍 第麵細號專财請案中物咖修正本91年6月27日 種化芽域料劑，係指-種由包含有氧基及羥基 S有0 6個雙鍵結構的碳原子數4〜24個之脂肪酸 所構成者；該脂肪酸中的氧基及Μ基係構成α，醇結 構或Τ-酮醇結構，且該7^姻醇結構係位在一可選擇 性地具有支鏈的線性碳鏈上。 如申請專利範圍第i項之花芽形成誘導劑，其中該脂 肪酸的碳原子數為18個。 如申請專利範圍第2項之花芽形成誘導劑，其中該脂 肪酸為9-羥-10-氧-12(z)，15(z)_十八碳二烯酸。 如申請專利範圍第2項之花芽形成誘導劑，其中該脂 肪酸為12-氧-13-羥-11(e)，15(Z)-十八碳二烯酸。 如申請專利範圍第2項之花芽形成誘導劑，其中該脂 肪酸為10-氧-13Hll(E}，15(Z)-十八碳二烯酸。 如如申請專利範圍第2項之花芽形成誘導劑，其中該 脂肪酸為9-羥-12-氧-1〇(Ε)，15(Ζ)-十八碳二烯酸。 一種花芽形成誘導劑，係指一種由包含有氧基、羥基 及過氧化氫基，含有〇〜6個雙鍵結構的碳原子數4〜24 個之脂肪酸所構成者；又，該脂肪酸中的氧基及羥基 係構成α -酮醇結構。 如申請專利範圍第7項之花芽形成誘導劑，其令該脂 肪酸的碳原子數為18個。 如申請專利範圍第8項之花芽形成誘導劑，其中該脂 肪酸為9-過氧化氩-12-氧-13-羥-1 〇(Ε)，15(Ζ)-十八碳 1. 2. 3· 4. 5. 6. 7. 8. 9. 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) Α4規格（210X297公釐） ..................::释丨：......！·訂..................•…U (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 45· A8 B8 一 _D8 申請專利ϋ ~一 一一~-一^ 二歸酸。 申專利紅圍第8項之花芽形成誘導劑，其中該脂 肪酸為9-經鲁氧_13_過氧化氣_u⑻，ΐ5(ζ)_十八破 一歸酸。 如申明專利範圍第g項之花芽形成誘導劑，其中該脂 肪酸為9-過氧化氫·1〇⑻，12(z)，15(Zh八碳二稀酸。 12·如申請專利範圍第8項之花芽形成誘導劑，其中.該脂 肪酸為13·過氧化氫-9(Ζ)，11(Ε)，15(Ζ)_十八碳二烯酸。 •—種花芽形成誘導劑，包含有申請專利範圍第卜12 項中任一項的花芽形成誘導劑以及去甲腎上腺素。 14. 一種花芽形成之誘導方法，其特徵在於：將申請專利 範圍第1〜13項中任一項之花芽形成誘導劑施用於植 物〇 * 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) Α4規格（210X297公釐) (請先閲讀背面之注意事項再填窝本頁) •訂丨 -16-