TW486465B

TW486465B - A hydroxy cyclopentanone with anticancer activites

Info

Publication number: TW486465B
Application number: TW087108830A
Authority: TW
Inventors: Kaoru Kojima; Katsushige Ikai; Tatsuji Enoki; Nobuto Koyama; Ikunoshin Kato
Original assignee: Takara Shuzo Co
Priority date: 1997-06-13
Filing date: 1998-06-04
Publication date: 2002-05-11
Also published as: US6166091A; KR100585405B1; DE69818261D1; KR20010012196A; CN1257471A; ATE250021T1; EA200000016A1; CA2293763A1; ES2206930T3; JP3602854B2; DE69818261T2; AU735535B2; EP0990635A4; CN1129568C; EP0990635A1; EP0990635B1; WO1998056745A1; AU7548598A; EA001907B1

Description

486465 A7 B7 五、發明説明（條 T 一j一

技術領域請先閱讀背面 5 意事項再填寫本頁本發明為有關在醫藥，食品及飲料上有用之具有制癌等生理活性之羥基環戊酮化合物，其製法及利用。以往之技術以往臨床療法所用之藥物有烷化劑，代謝阻礙劑，植物生物鹼等制癌劑，抗生物質，免疫促進劑，免疫動節劑等多樣多岐，這些藥物療法至今難謂完成。其中天然物由來之前列腺素之中，有環戊烯酮環之前列腺素A及J類抑制DNA合成，有當作安全性高之制癌劑之可能性之報告，這些之各種衍生物已被合成（特開昭6 2 - 9 6 4 3 8號公報）。欲解決之課題訂本發明之目的為開發具有制癌作用等生理作用而安全性高之環戊酮化合物，提供此化合物之製法，含此化合物之醫藥，食品及飲料。解決課題之手段經濟部中央標準局貝工消费合作社印鉍本發明者們發現化合物〔I〕2，3，4 -三羥基環戊酮（以下簡稱羥基環戊酮）可從糖醛酸，糖醛酸衍生物，含糖醛酸及/或糖醛酸衍生物之糖化合物，含糖醛酸及/或糖醛酸衍生物之糖化合物含有物選出之至少一種物之加熱處理物中生成，從此加熱處理物中單離之該化合物具有制癌作用等生理活性，終於完成本發明。概而.言之，本發明之第1發明為有關如下式〔I〕2，3 ，4 -三羥基環戊酮或其光學活性體或此等之鹽本紙張尺度適用中國國家標绛（CNS ) Λ4規格（2ΚΓΧ 297公釐） ,86465 A7 90. 5. B7 ~ 五、發明説明（> ) ;ί 〔I〕 H0

OH OH 本發明之第2發明為2, 3,4 -三羥基環戊酮或其光學活性體或此等之鹽之製法，其特激為包括下列製程： U)將選自下列U), (b), (c)之至少一種物加熱處理 ,而生成2,3 ,4 -三羥基環戊酮 U)糖醛酸或糖醛酸衍生物， (b) 含有糖醛酸及/或糖醛酸衍生物之糖化合物， (c) 含有糖醛酸及/或糖醛酸衍生物之糖化合物含有物， (B)必要時從所得之加熱處理物單離2 , 3，4-三羥基環戊酮之製程。本發明之第3發明為2,3,4-三羥基環戊酮或其光學活性體或此等之鹽之製法，其特徽為從如下式〔II〕4, 5-二羥基-2-璟戊烯-1-酬轉變成式〔I〕2,3,4-三羥基環戊酮 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本 ο 經濟部中央標準局貝工消t合作社印製 Η Ηο ο 2，之之出明選發所 1 鹽第之以等為此明或發體 4 性第活之學明光發其本或削戊化環上基以羥種三一 4-少之明。發藥 1 -翳第 4 之以一徽為特明為發分 5 成第效之有明為發物本合戊環基羥三本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規枱（2丨0X 297公釐） 486465 經濟部中央標準局貞工消費合作社印製 /…截‘-.5:-::.. A7 · . ·，〜 B7 ； "* ' ' .. - ；五、發明説明（々）酮或其光學活性體或此等之鹽所選出之至少一種以上化合物為特徽之食品或飲料。圖式之簡單説明第1圖乃示留存時間與示差折射檢出計之輸出之關偽。第2圖乃示環戊烯酮，羥基環戊酮混合物之1 H-NMR。第3圖乃示環戊烯酮，羥基環戊酮混合物之DC-NMR。第4圖乃示三甲基矽烷基化璟戊烯酮，羥基環戊酮混合物之氣體層析圖。第5圖為第4圖之峰（1)之質譜。第6圖為第4圖之峰（2)之質譜。第7圖為羥基環戊酬非對映體A之1 H-NMR。第8圖為羥基環戊酮非對映體B之1 H-NMR。第9圖為羥基環戊國非對映體A之^C-NMR。第10圖為羥基環戊酮非對映體B之i3C-NMR。第11圖為三甲基矽烷基化羥基環戊酮非對映體A之氣體層析圖。第12圖為三甲基矽烷基化羥基璟戊酮非對映體B之氣體層析圖。第13圖為第1 1圖之峰（1 )之質譜。第14圖為第12圖之峰（2)之質譜。賁施發明之形態下面具體說明本發明。本發明之糖醛酸，糖醛酸衍生物，含糖醛酸及/或糖 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（2 10X297公釐） 486465 90· 5. 16 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 Μ五、發明説明（4 ) 醛酸衍生物之糖化合物，含糖醛酸及/或糖醛酸衍生物之糖化合物含有物只要在其加熱處理物中生成羥基璟戊酮則無特定。由本發明使在食品或飲料中含有適量具生理活性之羥基環戊酮，其光學活性體及/或此等之鹽。由於此等化合物所有之制癌作用等，本發明之食品或飲料當作制癌食品或飲料極為有用。又由本發明而提供含有羥基璟戊酮，其光學活性體及 /或此等之鹽之翳藥，而可當作癌症防治劑。用於本發明之羥基環戊酮為將（a)糖醛酸或醛糖酸衍生物，（b)含有糖醛酸及/或糖醛酸衍生物之糖化合物 ,(c)含有糖醛酸及/或糖醛酸衍生物之糖化合物含有物，加熱處理而生成。故將不含上述（a), (b)或（c)之原料用物理，化學，酵素或其他手段來生成之（a), (b) 或（c)經加熱處理，也可得本發明之羥基環戊酮。又在本發明中也可用含有羥基環戊酮之加熱處理物，從此加熱處理物之部分精製羥基環戊酮及精製之羥基環戊_ 〇糖醛酸也稱葡糖醛酸，糖醛之/薛基保持原狀，僅他端之第一醇基氧化為羧基之羥基醛酸之總稱，天然界以動植物之各種多糖之構成成分存在。含有糖醛酸之多糖已知果膠，果膠酸，藻酸，玻糖醛酸，肝素，乙醯肝素硫 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS M4規格（210X297公楚） 486465 經潢部中央標準局貝工消费合作社印？木

A7 B7五、發明説明U ) 酸，岩藻依多糖，軟骨素硫酸，軟骨素，皮虜素硫酸等，而已知有種種生理機能。本發明所用糖醛酸無待定，有半乳糖醛酸，葡糖醛酸，穀糖醛酸，甘露糖醛酸，艾杜糖醛酸等；糖醛酸之衍生物有這些之内酯，這些之酯，這些之醯胺，這些之鹽等，由加熱處理而生成羥基環戊酮之物均包括在本發明之衍生物。糖醛酸之内酯有葡糖醛酸- 6,3-内酯（以下簡稱葡糖醛酸内酯），甘露糖醛酸-6, 3 -内酯，艾杜糖醛酸 -6,3-内酯等。糖醛酸酯有如甲酯，乙酯，丙二醇酯，羧甲酯等，也可由糖醛酸製造，也可醯胺化來製成糖醛醯胺。此等之鹽可依常法製造。本文中含有糖醛酸及/或糖醛酸衍生物之糖化合物無特定，可用如果顯，果顧酸，藻酸，玻糖醛酸，肝素，乙醯肝素硫酸，岩藻依多糖，軟骨素硫酸，軟骨素，皮虜素硫酸，此等之化學，酵素或物理處理物，其分解物，分解物之衍生物，分解物之鹽。上述化學處理方法可將原料化合物例如在室溫〜100 °C 處理數秒〜數小時，宜5 0〜1 3 0 °C處理數秒〜6 fl分，在酸性下行此處理則苜鍵受水解，若為果膠時，産生含半乳糖醛酸及/或其酯之分解物。又例如在PH6.8, 9 5°C (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 及酸 ^ 0 生糖發和則飽分不十有數之 ~ 大分增數度理光處吸應反 fct 脱或之。近物附合 Ωη化 35糖之酯其得及酸0 糖有含將括包物合化糖之明發々本類在糖多之酯其或及酸0 糖有含上端末原還非之成生而應反離脱本紙張尺度適用中國國家標唪（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 486465 A 7 B7 五、發明説明（& ) /或其酯之糖化合物。前述酵素處理方法可為原料糖化合物由含糖醛酸及/ 或糖醛酸酯多糖水解酶，如果膠酶，玻糖醛酸酶等之習知分解；又有由含糖醛酸及/或其酯多糖列解酶之公知分解。例如為果膠，果膠酸時，由各習知之果膠裂解酶 (EC4.2.2.10)，果膠裂解酶（EC4.2.2.2),外聚半乳糖醛酸裂解酶（E C 4 . 2 . 2 . 9 )來分解，得在非還原末端有4 -去氧蘇-己-4-烯毗喃糖基糖醛酸或其甲酯之糖化合物。又若為玻糖醛酸時用玻糖醛酸裂解酶（EC4.2.2.1) ，若為藻酸時用藻酸裂解酶（EC4. 2. 2. 3)。又藻酸時得在非還原末端有4-去氣-L·«赤蘚-己-4-烯吡喃糖基糖醛酸之糖化合物。此在非還原末端有上述L-蘇及L-赤蘚體及此等之甲酯之酵素分解物也包括在本發明化合物。經淆部中夾標準局貝Η消費合作社印掣 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 前述物理處理方法包括原料糖化合物之近紅外線，紅外線，徹波，超音波處理等，例如將果膠及/或果膠酸投入PH中性或鹼性之溶液中，溫度宜室溫以上，宜在還原下，如有抗壞血酸之存在下，超音波處理1秒以上，宜5秒〜1小時，予以振動能量。除超音波之外，微波，近紅外線，紅外線等之照射也有效，可將此等配合照射。照射可連績也可斷續進行。本發明中含有糖醛酸及/或其衍生物之糖化合物含有物只要為含有上述糖醛酸及/或其衍生物之糖化合物之含有物則無特定。含有糖醛酸及/或其衍生物之糖化合物含有物可為蘋果，如檸檬等柑桔類，香蕉，白菜，包一 8 一本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 486465 A7 B7 五、發明説明（7 ) 心菜，萵苣，紫蘇，與瓜，芹菜，牛蒡，echalote,青花菜，青椒，菠菜，洋解，胡蘿®及其葉，蘿萄之葉，茶，芝麻，豆，薯等雙子葉植物之果實，蔬菜，葉，種子等，薆，米等單子葉植物之穀物，褐藻類，如昆布，裙帶菜等，紅藻類，緣藻類，單細胞緣藻類等之藻類，徹生物如L y 〇 p h y 1 1 u m，U 1 m a r i u m，紫蘑菇，金針菇，香菇，朴輦，傘菇，草菇等擔子菌類，蛹菇，冬蟲夏草等子囊Μ類，酵母，絲狀菌，如麴菌，細菌，如納豆菌，乳酸麵等，動物有脊椎動物及無脊椎動物，豬皮，牛皮，沙魚軟骨，鯨軟骨等，在本發明可用此等植物，徹生物或動物由來之含糖醛酸及/或其衍生物之糖化合物含有物。又在本發明作為含有糖醛酸及/或其衍生物之糖化合物含有物也可用水果之果皮及搾渣，如蘋果搾渣，桔子搾渣，蔬菜搾渣，榖類渣，如清酒渣，啤酒渣，燒酒渣，威士忌渣，豆類渣，如豆腐渣，海藻渣等農水産食品加工處理物就此或乾燥，粉碎來使用。經滴部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 在本發明作為含有糖醛酸及/或其衍生物之糖化合物含有物可就此或作為前處理依通常之煮，烤，炒，焐，煎，蒸，炸等任意加工方法處理。在本發明作為含有糖醛酸及/或其衍生物之糖化合物含有物也可用施行前述化學，酵素（包括由徹生物之發酵），物理之前處理所得之該含有物之處理物，或從該處理物之精製物。本紙張尺度適用中國國家標绛（CNS ) Λ4規格（210X297公釐） 486465

A7 B7 五、發明説明（$) 含有糖醛酸及/或其衍生物之糖化合物之多糖類可依習知之化學，酵素，物理之處理方法來製造。例如果膠可用從如柑桔類之果皮及蘋果之果實萃取之高分子之多糖類。工業上果膠之製造原料為水果，除可用檸檬，萊姆等柑結類之搾渣（内果皮為主）之外，可用蘋果之搾渣。果汁之搾渣主要含有不溶物之前果_，在製造階段將此可溶化（萃取）而製成果膠。可溶化可以酸性之溫水〜熱水萃取來施行，萃取時之溫度，PH，時間條件配合原料來控制，以高産量製造分子量及酯化度一定之果膠。萃取液乃由離心分離及過濾來精製，濃縮後，加醇使果膠沈澱來回收。將回收之沈澱乾燥，粉碎來調製所定之乾燥果膠。經滴部中央標準局Μ工消费合作社印製果_之主要構造為部分甲基化之半乳糖醛酸之聚合物。羧酸被甲酯化，保持自由酸，或被銨鹽化，鉀鹽化或鈉鹽化。果膠乃依甲酯化度（DM度：對全羧酸之甲氧之比例）而分為DM度高之HM果膠及DM低之低LM果膠〔吉積頁（1 9 9 1 )〕，本發明中可用市售之食品添加物果膠〔外山章天編，食品及科學社發行，天然物便覽，第12販，第138頁（ 1 9 9 3 )〕，市售之HM果膠，LM果膠等（新食品開發用素材便覽）。 / 依合成法合成之糖醛酸，其衍生物，寡糖等也可用於本發明。本發明所用之加熱處理物可以（a)糖醛酸或糖醛酸衍生物，（b)含有糖醛酸及/或糖醛酸衍生物之糖化合物 -1 0- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X297公釐） 486465 A7 B7 經濟部中央標準局員工消f合作社印製五、發明説明㈠） '… ·~-二二上」，（c)含有糖醛酸及/或糖醛酸衍生物之糖化合物含有物為原料製造。用於本發明之含有羥基環戊酮之加熱處理物之製造之加熱處理方法只要為生成本發明羥基璟戊酮之條件刖無特定，將糖醛酸，糖醛酸衍生物，含糖醛酸及/或糖醛酸衍生物之耱化合物，含糖醛酸及/或糖醛酸衍生物之糖化合物之糖化合物含有物例如在60〜350 °C加熱處理數秒〜數日。宜在80〜150 °C數分〜數日，若為果膠時 ,例如在8 0〜1 5 0 °C加熱處理數分〜數日，則可得含有羥基環戊圈之加熱處理物。又若將糖醛酸或其内酯或酯在6 0〜1 5 0 °C加熱處理數分〜數日，則可得含有羥基環戊酮之目的加熱處理物。加熱處理時之PH無特定，惟宜中性〜酸性下進行，隨原料調整P Η即可。加熱處理時原料濃度只要為由加熱處理能生成羥基環戊酮之範圍内則無特定，可考量操作性及産率等來設定。本發明中加熱處理可為濕式加熱或乾式加熱，但從本發明羥基環戊酮之生成率而言，宜為濕式加熱。濕式加熱可用水蒸氣加熱，水蒸氣加壓加熱，加壓式加熱等任意之濕式加熱方法。乾式加熱可用乾燥熱風之直接加熱 / 法，從熱源經隔壁加熱之間接加熱法等。直接加熱方法為氣流乾燥法，噴霧乾熱法等，間接加熱法可用鼓乾熱法等。本發明所用加熱處理物中之羥基環戊酮可以癌細胞增 -1 1 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） 486465 A7 五、發明説明（^ ) 殖抑制等為指標來精製及單離。精製及單離之手段可用化學及物理方法等之習知之單離及精製手段，可組合凝 _過滴法，由分子量分割膜之分劃法，溶劑萃取法，分餾法，離子交換樹脂，順相及逆相之各種層析法等習知之精製方法，採集加熱處理物中生成之羥基璟戊酮。例如將葡糖醛酸内酯水溶液加熱，而依序在陰離子交換柱層析，合成吸附劑柱層析及矽膠柱層析來精製羥基璟戊酮。本發明之羥基璟戊酮可以如下式〔II〕4,5 -二羥基- 2-環戊烯-卜削（以下稱環戊烯酮）為出發物質來製造。 0 ΠΙ]

11-L〇H 例如將環戊烯酮溶在水或含水溶劑來生成羥基環戊酮。本發明之羥基環戊_生成條件無限定，只要為生成羥基環戊酮之條件即可。所生成之羥基環戊酮量可用順相及逆相等柱之HPLC, 氣體層析，薄層層析，紙層析，核磁共振等方法來測定。經濟部中夾標準局貝工消f合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 此羥基環戊酮之精製方法可用化學，物理之方法等習知方法，配合凝膠過濾，由分子量分劃膜之分劃法，溶劑萃取法，分餾法，離子交換、逆相、順相等各種層析法等習知之精製方法來精製及單離反應生成物中之羥基環戊酮或其光學活性體。例如將璟戊烯酮水溶液在4°C保存30日，則環戊烯酮 -1 2 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）

486465 狐1 1 U 137 年f Ή 五、發明説明（"） L— 之約30%轉變成羥基環戊酮。單離之羥基璟戊_之構造可由質量分析法，NMR, IR ,UV等習知方法來決定。本發明之羥基璟戊酮及環戊烯酮在水溶液中相互轉變，呈平衡關俗。從單離之環戊烯酮如上述生成羥基環戊 _，反之，將單離之羥基環戊酮以水溶液狀態放置，則羥基璟戊酮之一部分轉變成環戊烯酮。本發明所用式〔II〕璟戊烯酮可依化學合成法而得 [Helvetica Chimica Acta，第 55卷，第 2838〜2844頁 (1972), Carbohydrate Res·第 247卷，第 217〜222頁 ( 1 9 9 3 )〕。環戊烯酮為糖醛酸，糖醛酸衍生物，含糖醛酸及/或糖醛酸衍生物之糖化合物，含糖醛酸及/或糖醛酸衍生物之含有糖化合物含有物所選出之至少一種加熱處理物，本發明也用其精製物。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 例如糖醛酸採用D -葡萄糖醛酸，將其1%溶液在121°C 加熱處理4小時而生成璟戊烯酮。將此加熱處理物中之環戊烯酮以溶劑萃取而濃縮，在矽膠層析，濃縮而以氯彷萃取來單離環戊烯酮。環戊烯酮之物性如下。璟戊烯/酮之質量分析使用DX 302 質量分析計（日本電子公司）。用重氫氯仿溶劑之NMR測定乃用JNM-A50M日本電子公司）。比旋光度用DIP-370型旋光計（日本分光公司），UV吸收譜用UV- 2 5 0 0分光光度計（島津製作所公司），紅外線吸收譜（IR)用FTIR-8000 紅外線分光光度計（島製作所公司）來測定。 -- 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) Λ4規枱（210X29*7公棼） 486465 A7 B7 五、發明説明（) FAB-MS m/z 1 1 5〔Μ·+Η〕+ (基質用甘油 > H — NMR (CDC 13 ) 64· 20 (1H, d, J = 2. 4Hz, 5,-Η)、4· 83 (lH，m，4 - Η)、6· 30(lH,dd,J=l· 2, 6· 1Hz, 2 - Η)、7· 48 (1 Η, dd, J = 2· 1, 6. 1Hz, 3 - Η) 但1 Η - N M R化學移位值以C H C 1 3之化學移位值為7 · 2 6 PPffl表示。旋光度：C«〕D ” 0°* (旦I 3、水） IR(KBr法）：3 4 0 0、1715、1 6 3 0、1"5、1 0 6 0' 1025 c m·1 UV : Am ax 2 1 5 nm (水）將單離之羥基環戊酮予以光學分割，得其光學活性體。仿上也可得環戊烯酮之光學活性體。光學活性體之分離可由混消旋物之機械分割，優先析晶法，作為非對映體鹽或色包化合物之結晶化來分割，酵素撤生物之動力學分割，由層析之分割等施行。由層析之分離可用氣體層析，液體層析，薄層層析等，各用適合之對掌固定相即可。依液體層析之光學分割可用採用對掌固定相之方法，經满部中央標準局貝工消费合作社印^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 用對掌溶離液之方法，作為非對映體之分離等。對掌固定相可用醯胺条固定相，脲条固定相，配基交換型固定相，多糖•多糖衍生物固定相，蛋白質固定相，聚甲基丙烯酸酯固體相，聚甲基丙烯醯胺固定相等。溶離液可用己烷条，醇条，水（緩衝液）条等，與上述 -1 4 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) ( 2丨〇〆297公釐） 486465 A7 B7 五、發明説明（〇 ) 固定相之組合適當地使用。羥基環戊酮或其光學活性體之鹽為醫藥容許鹽，可依習知方法轉換。經濟部中央標準局貝Jr消費告作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 羥基環戊酮或其光學活性體或這些之鹽具有制癌，抑制癌細胞增殖，誘發細胞自滅，抑制異構酶II，誘導癌細胞分化，抗風濕，抑制慢性關節風濕，誘導fas抗原産生，抗_，抗病毒，改善肝功能，誘導熱休克蛋白，血液成分正常化，增強癌免疫，消炎，抑制腫瘤壞死因子産生，抑制NO産生，調節免疫，如抑制延遲型過敏反應，抑制淋巴球幼化反應，抑制混合淋巴球反應，抑制IgE産生，抑制角叉菜膠浮腫等活性之生理活性，由於這些活性，羥基環戊酮或其光學活性體或這些之鹽所選出之至少一種化合物為有效成分而成之翳藥可當作例如作用於活體防禦機構之翳藥，作用於如抗體産生機構之製劑，消炎劑，抗過敏劑，抗風濕劑，干擾素誘發劑，作用於糖代謝之醫藥，如糖尿病治療劑，作用於病原生物之翳藥，如抗舖劑，抗病毒劑等。故本發明所得之醫藥可當作對羥基環戊酮或其光學活性體或這些之鹽有感受性之疾病，例如癌，病毒性疾病，風濕，糖尿病，過敏，自體免疫病，炎症等疾病之治療或預防用醫藥。羥基環戊酮或其光學活性體或這些之鹽對例如人前骨髓性白血病細胞HL-60，人急性淋巴芽球性白血病細胞 M0LT-3，肺癌細胞A-549, SV40轉形肺細胞WI-38VA13, 肝癌細胞Hep G2,結腸癌細胞HCT 116,人結腸癌細胞 -1 5- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 486465 A7 B7 五、發明説明（β ) SW 4 8 0 ,人結腸癌細胞WiDr,胃癌細胞AGS,脊髓瘤細胞等癌細胞有抑制細胞增殖作用，制癌活性，而可當作制癌劑之有效成分。又這些化合物具有對癌細胞誘發細胞自滅作用及抑制癌細胞之異構酶II之作用。羥基環戊酮之抑制癌細胞增殖作用之機制並不限制本發明，例如對癌細胞有誘發細胞自滅作用，抑制異構酶II作用等也包括在本發明之制癌作用。制癌劑之製造一般將羥基璟戊酮或其光學活性體或這些之鹽配合習知之醫藥用載體。該載體為藥學上容許之液體或固體載劑，必要時更可配合溶劑，分散劑，乳化剛，緩衝劑，安定劑，賦形劑，粘合劑，崩散劑，滑劑等，錠劑，顆粒劑，散劑，粉末劑，隱囊劑等固形劑，通常液劑，懸浮劑，乳劑等液劑。也可製成乾燥品而用前加適當載體來作成液狀。本發明之制癌劑乃依製劑形態之適當投與途徑投與。投與方法無特定，可外用，内服及注射。注射劑可為如靜脈，肌肉，皮下，皮内等之注射。也可以座劑等來外用。經滴部中夾標準局貝工消f合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 制癌劑之投與量乃依其製劑形態，投與方法，使用目的及病人之年齡，體重及症狀而適當地設定，一般，製劑中所含經基羥基環戊酮或其光學活性體或這些之鹽之量對成人每日l〇Pg〜2G0ing/kg。當然隨種種條件而變動，有比上述投與量少即足，也有須超過之情形。本藥劑除就此口服外，也可加在任意飲食品而日常攝取。 -16- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4^格（210X297公釐） 486465 A7 B7 五、發明説明（^ ) 以羥基環戊酮或其光學活性體或這些之鹽所選出之至少一種化合物為有效成分而作用於活體防禦機構之翳藥，例如作用於抗體産生機構之製劑，消炎劑，抗過敏劑，抗風濕劑，干擾素誘發劑等，作用於糖代謝之醫藥，如糖尿病治療劑，作用於病原生物之醫藥，如抗菌劑，抗病毒劑，細胞自滅誘發劑等可仿制癌劑來製劑化，仿制癌雨之方法及用量投與。羥基環戊酮與璟戊烯酮在水溶液中呈平衡，在活體内從環戊烯酮轉變之羥基環戊酮也能發揮醫藥效果。故在活體内形成羥基環戊酮之環戊烯酮或其光學活性體或其鹽之使用也包括在本案。本發明之羥基環戊酮或其光學活性體具有抑制癌細胞増殖抑制作用等種種生理活性，將本發明之羥基環戊酮或其光學活性體或其鹽所選出之至少一種以上化合物含有，稀釋或添加而成之食品或飲料可當作如制癌性等機能性食品或飲料。製造本發明之食品或飲料時，可用含有羥基環戊酮之加熱處理物，其部分精製羥基環戊酮，精製羥基環戊酮及/或其光學活性體。經濟部中央標準局貝工消費合作社印紫 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 將本發明之羥基璟戊酮或其光學活性體或其鹽選出之至少一種以上化合物含有，稀釋或添加而成之食品或飲料無特定，可為如榖物加工品（麵粉加工器，澱粉加工品，預混加工品，麵類，義大利麵，麵包，餡，蕎麥麵，麩，米粉，粉絲，包裝餅等），油脂加工品（可塑性油脂 -17- 本紙張尺度i4用中國國家標率（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 486465 90· 5· 1 6 Α7 Β7 五、發明説明（4 ，炸油，沙拉油，美奶滋，調味醤等），大豆加工品（豆腐，豆瓣醬，納豆等），肉加工品（火腿，培根，熱狗等），水産製品（冷凍魚醬，魚九，炸魚丸，魚肉火腿，香腸，柴魚，魚卵加工品，水産罐頭，魚干等），乳製品（鮮奶，鮮奶油，優格，奶油，乾酪，煉奶，奶粉，冰淇淋等），蔬菜及水果加工品（果醬，醬菜，水果飲料，蔬菜飲料，混合飲料等），餅類（巧克力，餅乾，麵包，蛋糕，米果等），酒精飲料（日本酒，中國酒，蕪萄酒，威士忌，燒酒，伏特加，白蘭地，松葉酒，啤酒，清涼酒精飲料，水果酒，白乾等），_好飲料（緣茶，紅茶，烏龍茶，咖啡，清涼飲料，乳酸飲料等），調味料（醬油，烏醋，醋，味啉等），罐頭，瓶裝及袋裝食品（牛飯，紅豆飯，咖哩，其他各種調理過食品），半乾燥或濃縮食品 (肝醬，麵拌醬，濃湯），乾燥食品（生力麵，快速咖哩，咖哩精，果汁粉，湯粉，調理過之食品，飲料及湯等），冷凍食品（火鍋，蒸蛋，烤鰻，漢堡，燒麥，餃子，肉排，混合水果等），固形食品，液體食品（湯等），辛香料等農林産加工品，畜産加工品，水産加工品等。經满部中夾標準局員工消费合作社印ii (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明之飲食品之製法無待定，可依調理，加工及一般使用之飲食品之製法來製造，只要含具有制癌作用之羥基璟戊_，或其光學活性體及/或其鹽即可。調理加工後之（a)糖醛酸或糖醛酸衍生物，（b)含有糖醛酸及/或糖醛酸衍生物之糖化合物，（c)含有糖醛酸及/或糖醛酸衍生物之糖化合物含有物之加熱處理物中 -1 8 _ 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) Λ4規格（21 OX 297公釐） 486465 A 7 : ____^_B7 I _ 五、發明説明（) 含有羥基環戊酮或其光學活性體或其鹽所選出之化合物卽可。即在調理加工之前，中及後可將含有羥基璟戊酮或其光學活性體或其鹽所選出之化合物之（a)糖醛酸或糖醛酸衍生物，（h )含有糖醛酸及/或糖醛酸衍生物之糖化合物，（c)含有糖醛酸及/或糖醛酸衍生物之糖化合物含有物之加熱處理物添加，也可將調理加工品或其材料加入含有羥基環戊酮或其光學活性體或其鹽所選出之化合物之（a)糖醛酸或糖醛酸衍生物，（b)含有糖醛酸及 /或糖醛酸衍生物之糖化合物，（c)含有糖醛酸及/或糖醛酸衍生物之糖化合物含有物之加熱處理物來稀釋。經滴部中央標準局貝Η消费合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 製造食品或飲料時，可在任意製程加熱處理，使加熱處理物中含有效量羥基璟戊酮或其光學活性體或其鹽，也可加含有羥基璟戊酮或其光學活性體或其鹽之加熱處理物。又可將食品或飲料或其原料加入含有羥基璟戊酮或其光學活性體或其鹽之加熱處理物來稀釋。添加可作一次或分數次。如此可簡便地製造有新穎生理活性之食品或飲料。又在製造時使含有（a )糖醛酸或糖醛酸衍生物，（b)含有糖醛酸及/或糖醛酸衍生物之糖化合物， (c)含有糖醛酸及/或糖醛酸衍生物之糖化合物含有物使製造時生成之加熱處理物中含有羥基環戊酮或其光學活性體或其鹽之構成之分之食品或飲料也包括在本發明。無論經任一製程將含有羥基環戊酮等之加熱處理物含有，添加及/或稀釋而成之飲食品乃定義為本發明之 -1 9- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X29*7公釐） 486465 A7 B7 五、發明説明（d ) 食品或飲料。又作為羥基環戊醒等與含s Η基化合物（如含S Η基胺基酸）或其衍生物（如含半胱胺酸衍生物）之反應物，在食品或飲料中也將生成之羥基璟戊酮衍生物含有，添加及 /或稀釋而成者也定義為本發明之食品或飲料。在食品中有制癌作用之羥基環戊酮等之含量無待定，可依官能及生理活性來適當地選擇，例如羥基環戊酮等之含量，為每1 0 0份食品中含1 (Γ9份以上，從作為食品之官能及制癌作用而言，宜1 (Γ8〜5份，尤宜1 (Γ7〜2 份，攝取生理有效量食品卽可。又在飲料中有制癌作用之羥基環戊酮等之含量無特定，可依官能及生理活性來適當地選擇，例如羥基環戊酮等之含量，為每丨〇〇份食品中含1 (Γ9份以上，從作為食品之官能及制癌作用而言，宜1 (Γ8〜5份，尤宜1 (Γ7〜2 份，攝取生理有效量飲料即可。本文中「份」乃指重量份。經滴部中央標準局員工消费合作社印^. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明之食品或飲料只要將具有制癌性之羥基環戊酮等含有，添加及/或稀釋則其形狀無特定，錠狀，顆粒狀，_囊狀，凝顧狀，溶膠狀等形狀之可口服者均包括在内。本發明，食品或飲料中適量含有具生理活性之羥基環戊觀或其光學活性體或其鹽。由於這些化合物所具有之種種生理活性，制癌，誘導分化，抑制異常細胞增殖，誘發細胞自滅，抗病毒，抗鋪，改善肝功能，故本發明 -20- 本紙張尺度適用中國國家標绛（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 486465 A7 B7 五、發明説明（1 ?) 提供之食品或飲料具有預防發癌，制癌，預防病毒性疾病，抗_，誘發細胞自滅等效果，而為能纖維活體恆常性機能之健康食品或飲料。又因羥基環戊酮或其鹽之添加可簡便地增強食品或飲料之抗_力，故以羥基環戊酮或其鹽為有效成分之製劑當作食品或飲料之防腐劑極為有用。又本發明羥基環戊酮或其光學活性體或這些之鹽lOOfflg /kg在小白鼠口服，未見有毒性。實施例下面與實施例具體說明本發明，但不限於此，其中％乃指重量％。實施例〗 (1)將10克D-葡萄糖醛酸（細馬公司，G5269)溶在1公升水，加熱121°C 4小時後，減壓濃縮至約10»1，加乙酸丁酯：乙酸：水=3: 2: 2混液之上層40ml而混合後，離心而將上清減壓濃縮至約1 0 m 1。經滴部中央標準局舅Η消f合作社印來 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 將上逑萃取依在矽膠BW-300SP(2X28c»,富士 Silicia 化學公司）柱層析（乙酸丁酯：乙酸：水=3: 2: 2之上層為溶離液），以壓縮壓縮加壓為〇.2kg/cm2，以每分 5 hi 1之流速分離。分1 0 m 1分割，取出各劃份之一部分來薄層層析，則在第6 1〜80_份含高純度之環戊烯酮。收集這些割份而減壓濃縮後，以4 0 in 1氯仿萃取而減壓濃縮，得1 G 0 ra g環戊烯酮。

將此割份用P a 1 p a c k型S柱（寶酒造公司）以順相Η P L C -21- 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) Α4現格（210Χ：297公釐） 486465 A7 B7 五、發明説明（>-) 分離，以2 1 5 n m U V檢出，則純度為9 8 %。 (2)將實施例1-(1)製造之環戊烯_水溶液（50mg/Bl) 在4 °C保存30日之試料以如下條件之HPLC分析。柱：Uchrosorb _5(4·6Χ 250*am，黙克公司）移動相：8 0 %乙腈水溶液。

流速：0 . 8 ro 1 /分柱溫：2 5 °C 檢出：示差祈射檢出計（Y R D - 8 8 0 in i d g e t ,島村計器製作所製造）試料：注入1 0倍稀釋液1 0 0 # 1 結果，除5.7分之環戊烯酮之峰之外，有6.8分之本發明羥基環戊酮之峰。層析圖如第1圖。即第1圖乃示留存時間與示差祈射檢出計之輸出之關傜，橫軸為留存時間（分），縱軸為示差祈射檢出計之輸出。實施例2 經濟部中央標準局員X消贽合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) (1)將市售之葡糖醛酸内酯（中瀨Tex公司）500克溶在 38公升水，吹入水蒸氣來加熱125 °C 小時。冷卻後，減壓濃縮而以NaOH調為ΡΗ5.0後，通入以水平衡之Diaion S A-10A (三薆化學公司）之陰離子交換柱（20公升），得以水溶離之非吸附劃分2 4公升。將此劃分減壓濃縮至2.8公升，加NaCl至最後濃度為 2M，在以2M食鹽水平衡之合成吸附劑SP- 2 07(三菱化學公司）柱（15公升）分2次通入。以2M食鹽水清洗，得被 0.1M食鹽水溶出之劃分共78公升。本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） 486465 A 7 B7 五、發明説明（M ) 將此劃分減壓濃縮至11公升而仿上通入SP- 2 0 7柱，得 2 4公升溶出液。但所有之試料均層析一次，以水溶出。將溶出液減壓濃縮至1〇〇«11，用八(：-110-10透析膜（旭化成公司）之電透析來脫鹽，得環戊烯酬及羥基環戊酮之混液1 〇 n ro 1。 (2 )實施例2 - ( 1 )所得環戊烯酮及羥基環戊酮之混液1 Ο πι 1 減壓蒸乾，溶在乙酸乙酯：乙酸：水=3: 2: 2之上層 U ffi 1，仿實施例1- ( 1 )在矽膠柱層析，得被5 0 0〜7 0 0 m 1 溶離液溶出之含璟戊烯酮之割分及被950〜1700ml溶離液溶出之含羥基環戊顚之割分。但柱為2.5X50CB1。將含羥基環戊酮之劃分減壓濃縮至乾，得75®g羥基璟戊酮。 (3 )仿實施例2 - ( 2 )矽膠柱層析，得被1 0 7 ®卜1 2 4 0 in 1溶離液溶出之劃分1及被1 3 2 0〜1 5 0 0 in 1溶離液溶出之割分 2〇將剿分1及2分別減壓濃縮，以如下條件來Η P L C。柱:C A P C E L· I, P AK C 18 3 G 3 0 0 A 5 扭 (6X 250mro，資生堂公司）移動相：0 . 1 % TFA水溶液。流速：1 ffi 1 /分經濟部中决標準局員工消費合作社印^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 撿出：在2 lOnffi之吸光度分取各存留時間6.0分之峰而凍乾，從劃分1之HPLC 處理物得20®g羥基環戊酮非對映體A,從劃分2之HPLC 處理物得27® g羥基環戊酮非對映體B。實施例3 -23- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 486465 A7 ------B7__ 五、發明説明（》) 將實施例2 - ( 2 )所得之羥基環戊酮溶在水呈4 IB Μ，在4 °C 37乇或45°(3放置16小時。將各試料1#1點漬在矽_60片 F254 (黙克公司），以乙酸乙酯：乙酸：水=3: 2: 2之上層展開後，依笞黑酚-硫酸化檢出。卽將4 0 0«ng苔黑酚 —水合物（中瀨Tex公司製造，257 - 3 0)溶在22·8ηι1,加水為200^1,展開後之薄層上噴霧，在120°C加熱1〜2分而點漬來觀察。結果所有之試料均呈現環戊烯酮之斑點，放置溫度越高，環戊烯酮斑點之發色越強。

實施例4 (1 ) NMR 將實施例2 - U )所得之環戊烯酮及羥基環戊酮之混液減_蒸乾，溶在重水，用JNM-A500(日本電子公司製造）測定1 Η-NMR及BC-NMR，結果如下： !h-nmr (A)

62· 42(lH,dd, J = 2.0，20. OHz, 5 - Η), 2· 53(1 H，dd,J = 5· 5,2 0. 0Hz, 5 - H)，3· 91 (lH，dd,J = 4· 0, 10· 5, 3-H) , 4. 23(lH，dd，J = 2· 0，10· 5 H 經满部中决標準局貝J-消费合作社印^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) z，2 -H)，4· 27 (1H，dd，J = 4. 0，5. 5Hz, 4 -H) (B) δ 2. 13(lH,dd, J = 9. 0, 20. 0Hz, 5-H), 2. 86(1 H, ddd, J = 2. 5,8.5，20. 0Hz, 5 - H), 3. 76(1H, dd，J = 8· 5, 10.0，3 -H)，4· 04 (1H, dd，J = 2. 5, 10·0Ηζ,2 - H),4· 1 3 (1H, ddd, J = 8. 5,8.5,9. 0Hz, 4-H) -24- 本紙張尺度述用中國國家標率（CNS ) A4規格（210X 297公釐) ' 486465 A7 B7 五、發明説明（W ) HOD之化學移位值為4.65ppHi來表示。在此試料中所含羥基璟戊酮為呈如下式〔III〕及其對掌體及如下式〔IV〕及其對掌體之混合物，（A)，（B)- 方為呈式〔I I I〕及其對掌體，他方為呈式〔I V〕及其對掌體之信號。

rVH HO —J Ull Ο H [III]

HO ΜημΙ-Ο K 1 H-NMR如第2圖，即第2圖乃示環戊烯酮及羥基璟戊酮之混合物之1 H-tJ MR,橫軸為化學移位值（ppm)，縱軸乃示信號之強度。又4.1，4. G，6.2, 7. 4ppia之信號為環戊烯酮由來之信號。

l3C-NMR (A) 經漓部中央標準局員_τ消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 644· 2 (5 - C), 67· 4(4 - C)，76· 4 (3 - C), 78· 1 ( 2 — C), 218· 1(1—C) (B) · 64 3. 5 (5 -C) , 69. 5 (4-C) , 80. 7 (2~C) , 80. 8 ( 3 - C) , 2 1 4· 7 (1“.C) 一25- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21 OX 29*7公釐） 486465 A7 B7 五、發明説明（砷）二鸣烷之化學移位值為67.4ppffl來表示。含在此試料之羥基環戊酮為呈式〔III〕及其對掌體及呈式〔I V〕及其對掌體之混合物，（A ) , ( B )之一方為式〔UI〕及其對掌體，他方為式〔IV〕及其對掌體之信號。如第3 _，即第3圆為環戊烯酮及羥基璟戊 _之混合物之BC-NMR,橫軸為化學移位值（PPffl)，縱軸為信號之強度。又 76·9, 81.4， 132.9, 163.2, 208.0 ppm之信號為環戊烯酮由來之信號。

(2 ) GC/ MS 將實施例2 - ( 1 )所得之環戊烯酮及羥基環戊酮之混液 0.5# 1減壓蒸乾，溶在三甲基氯矽烷（GL Science公司） :N，0 -雙（三甲基矽烷基）-乙醯胺（G L S c i e n c e公司）：無水吡啶（矽烷化级，Pias公司）=4:l:4混液100>ul ，在6 0 °C三甲基矽烷化1小時。此試料1 # 1依如下 GC/ MS分析。 tt : T C - 1 ( 3 0 m X 0 . 2 5 fflin N G L Science 公司) 柱溫度：1 0 〇 °C 1 6 0 °C ( 4 °C / 分） 1 6 0 0C — 3 0 0 °C ( 1 6 0C / 分）經满部中央標準局貝_x消费合作社印繁 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 3 0 0 oC (5 分）氣體載體：He 1 . 2ml/分結果如第4, 5，6圖。卽第4圖乃示被三甲基矽烷化之環戊烯酮及羥基環戊酮之混合物之氣體層析，横軸為掃描號數，縱軸為離子強度。第5及6圖乃示第4圖之 -26- 本紙張尺度適用中國國家標绛（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 486465 A7 B7 五、發明説明（< ) 峰（1)及（2)之質譜，橫軸為M/Z,縱軸為相對強度（％)。結果，第4圖之峰（1)及（2)均呈M/Z 3 4 9 [M + H]+ ， (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 此從三甲基矽烷化之羥基環戊酮之構造計算之值一致。

實施例5 (1 ) N MR 將實施例2-(3)所得之羥基環戊酮非對映A及B各溶在重水，用JNM-A 500(日本電子公司）測定1 H-NMR及 DC-NMR，結果如下，

1 H-NMR

羥基環戊酮非對映體-A 6 2. 4 2 ( 1 H, dd, J = 2· 0，20. 0 Η z, 5 - Η)，2· 5 3(1 Η, dd，J = 5.5，2 0· 0Hz，5 -Η), 3· 9 1 ( 1 Η, dd, J = 4. 0, 1 0. 5, 3 - Η)，4· 2 3 (1Η，dd, J = 2· 0, 10· 5 Η ζ, 2-Η) , 4· 27 (1Η，dd，J = 4· 0，5· 5Ηζ，4 一Η) 羥基環戊酮非對映體-Β 6 2.13 (1Η, dd, J = 9. 0,2 0. OHz, 5-H) ,2.86(1 H, ddd, J = 2. 5，8· 5，20· OHz，5—H), 3· 76(1H， dd，J = 8· 5, 10· 0，3 — H)，4· 04(lH，dd,J = 2· 5, 經濟部中央標準局員-X消费合作社印來

4 5 \—/ Η I 2 ) ，Η ζ I Η 4 ο .ζ OH 為值位移學化之體映對非酮戊環基羥

9 f 5 • 8 5 8 II J J d d d H 示表式方體掌對其及之 A 體〇映體對掌非對酮其戊及環 3基 IV羯 t 為式 _ 為 7 方第他本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） 486465 Α7 Β7 五、發明説明（) 第8圖為羥基環戊酮非對映體B之1 H-NMR,橫軸為化學移位值（PPR1),縱軸為信號之強度。

13 C-NMR

羥基璟戊酮非對映體-A (544.2 (5 - C)，67. 4 (4 - C), 76. 4 (3 - C)，78. 1 2-C),2 18.1 (1 - C)

羥基璟戊酮非對映體-B cM3· 5 (5 - C)，69· 5 (4 - C)，80· 7 (2 - C)，80· 8 3 - C)，214.7(l - C) 二鸣烷之化學移位值為6 7 . 4 p p m來表示。羥基璟戊酮非對映體A及B之一方為式〔III〕及其對掌體，羥基環戊酮非對映體A及B之他方為式〔IV〕及其對掌體，第9圖為羥基璟戊酮非對映體A之！3C-NMR, 第10圖為羥基環戊酮非對映體B之13 C-HMR,橫軸為化學移位值（PPB〇,縱軸為信號之強度。

(2 ) G C / M S 經漓部中央標準局員-Τ-消费合作社印餐 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 2 - ( 3 )所得之羥基環戊酮非對映體Α之2 0 in Μ水溶液及羥基環戊酮非對映體Β之40m Μ水溶液各0 . 5 // 1減壓蒸乾，溶在三甲基氯矽烷（GL Science公司）：H，0 -雙（三甲基矽烷基）-乙_胺（6【Science公司）：無水吡啶（矽烷化级，Pias公司）=4 : 1 ·· 4混液100 # 1，在室溫三甲基矽烷化1小時。此試料1 # 1依如下G C / M S分析。 -28- 本紙張尺度適用中國國家標_· ( C、NS ) Λ4規格（210Χ 297公釐） 486465 A7 B7 五、發明説明（β ) 柱:TC 一 l(3flnx 0.25mffl、 G L Science 司) 柱溫度·· 1 0 0 °C — 1 6 0 °C ( 4 °C / 分） 1 6 0 °C 3 0 0 0C ( 1 6 °C / 分） 3 0 0 °C ( 5 分）載體氣體：H e 1 . 2 hi 1 /分結果如第11〜14画。即第11圖乃示被三甲基矽烷化之羥基環戊酮非對映體A之氣體層析，第12圖乃示被三甲基矽烷化之羥基環戊酮非對映體B之氣體層析，橫軸為掃描號數，縱軸為離子強度。第13及14圖乃示第11圖之峰（1)及第12画之峰（2)之質譜，橫軸為M/Z，縱軸為相對強度（％ )。結果，第11圏之峰（1)及第】2圖之峰（2)均呈M/Z 349 [Μ + Η r ,此從三甲基矽烷化之羥基璟戊酮之構造計算之值一致。實施例6 將150，〗10，70或40# Μ羥基環戊酮非對映體A水溶液，200， 150，100或600/iM羥基環戊酮非對映體B水

溶液，或當作對照之水# 1加在9 6穴微板之各穴，在含10%牛胎兒血清之RPMI 1640培養基懸浮HL-60UTCC 經濟部中央標準局員工消费合作社印奴 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) CCL-240)5X 104個/«!]，而在上述徹板之各穴分注90>u 1 / ，在5 % C 0 2存在下3 7 °C培養4 8小時後，加5 m g / a 1溴化 3- (4，5 -二甲基瞎唑-2-基）2, 5 -二苯基四銼（MTT,細馬公司）磷酸緩衝食鹽水溶液1 0 A 1，繼壤培養4小時後，以顯微鏡觀察細胞之生育狀態。又加〇.f)4N HC1之2- 丁 -29- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 486465 A7 B7 五、發明説明（"）醇1G0//1而充分攪拌後，測定在590nm之吸光度。結果在110# Μ以上之羥基環戊酮非對映體A添加部分 (最後濃度llA M)及100>u Μ以上之羥基環戊酮非對映體B 添加部分（最後濃度10/uM)不見細胞增殖。故得知羥基環戊酮A以11#Μ，羥基環戊酬B以ΙΟ/iM濃度完全抑制 HL-6G細胞之増殖。發明之效果本發明提供具有制癌，抑制癌細胞増殖，誘導癌細胞分化，誘發細胞自滅，抗抗病毒，改善肝功能，之種種生理活性之S安全性高之羥基璟戊酮或其光學活性體或其鹽，並提供以由此選出之至少一種化合物為有效成分之翳藥，食品及飲料。依本發明羥基環戊酮或其光學活性體或其鹽可由天然原料簡便有效地製造。本發明之羥基環戊酮或其光學活性體或其鹽具有制癌，抑制癌細胞增殖，誘導癌細胞分化，誘發細胞自滅，抗«，抗病毒，改善肝功能，之種種生理活性，故可用以防治癌，病毒疾病，阿滋海黙病，改善肝功能，維持活體之恆常性，尤其可用以保持胃腸健康。經濟部中央標準局貝Η消费合作社印來 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 又依本發明，也可在食品或飲料中適量含有具生理活性之羥基環戊酮或其光學活性體或其鹽。由於這些化合物所具有之種種生理活性，制癌，誘導分化，抑制異常細胞增殖，誘發細胞自滅，抗病毒，抗_，改善肝功能，故本發明提供之食品或飲料具有預防發癌，制癌，預 -30- 本紙張尺度適用中國國家標绛（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 486465 A7 B7 五、發明説明（纖酮能戊為環而基，羥果因效又等。滅料自飲胞或細品發食誘康 ,健 _之抗能，機病性疾常性恆毒體病活防維以之故料，飲力或 0 品抗食之作料當飲劑或製品之食分強成増效地有便為 C 簡鹽用可其有加或為添酮極之戊，鹽環劑其基腐或羥防 ,衊 —I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經漓部中央標準局员工消#合作社印製木紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 486465 B7 ; . ;Ά —-；~~ 五、發明説明（) ........:二::二實施例7 500g葡糖醛酸內酯（中瀨Tex公司製）在38公升水中溶解，加熱至125°C，開始加熱後之〇·5、1、2、5、16小時各取出1公升之加熱處理液。取出之加熱處理液各以實施例2-(1)方法處理，而得環戊烯酮及羥基環戊烯酮混合物，以實施例1-(2)之HPLC分析此混合物，測定羥基環戊烯酮之量。下表爲上述各加熱時間取得之加熱處理液而得環戊烯酮及羥基環戊烯酮混合物中之羥基環戊烯酮的量，且爲1 公升加熱處理液之換算量。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製加熱時間 (小時）羥基環戊烯酮 (毫克） 0.5 0.53 1 1.17 2 2.93 5 6.76 16 6.65 由上可知0.5-16小時加熱時間生成的羥基環戊烯酮量。 -32- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐）

Claims

486465

修. 六、申請專利範圍第 87108830 號 Λ申請專利範圍：具制癌活性之羥基環戊酮」專利案 (90年8月7日修正） 1_ 一種2,3,4 -三羥基環戊酮之非對映體，係選自如下式〔I〕2,3，4-三羥基環戊酮，下式〔瓜〕化合物及其對掌體（Antipode)之混合物以及下式〔IV〕化合物及其對掌體之混合物 0 〔I〕 H0 OH OH HO

OH 〔II!〕 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) lill 0 H Η O tin

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製〔IV〕 2.—種2,3,4-三羥基環戊酮[I]之非對映體之製法，其特徵爲包括下列製程： (A)將選自下列（a)，（b)，（c)之一種以上物加熱處理，而生成2,3,4-三羥基環戊酮， U)糖醛酸或糖醛酸衍生物， (b)含有糖醛酸及/或糖醛酸衍生物之糖化合物，本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 486465 A8 B8 C8 D8 、申請專利範圍 (C)含有糖醛酸及/或糖醛酸衍生物之糖化合物含有物， (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (B)從所得之加熱處理物單離2,3,4-三羥基環戊酮之製程。 3. 如申請專利範圍第2項之製法，其中糖醛酸爲半乳糖醛酸，葡糖醛酸，榖糖醛酸，甘露糖醛酸及/或艾杜糖醛酸。 4. 如申請專利範圍第2項之製法，其中糖醛酸衍生物爲糖醛酸之鹽，或糖醛酸之內酯，酯，醯胺或此等之鹽。 5·如申請專利範圍第2項之製法，其中糖化合物爲果膠，果膠酸，藻酸，玻糖醛酸，肝素，岩藻依多糖，軟骨素硫酸，軟骨素，皮膚素硫酸及/或其分解物所選出之糖化合物。 6. 如申請專利範圍第2〜5項中任一項之製法，其中加熱處理物爲60〜35°C加熱處理10分〜24小時而得。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 7. 如申請專利範圍第2〜5項中任一項之製法，其中力口熱處理物爲在酸性〜中性條件下加熱處理而得。 8·—種如下式〔I〕2,3,4-三羥基環戊酮之非對映體之製法，其特徵爲從如下式〔II〕4,5-二羥基-2-環戊烯-1-酮轉變成式〔I〕2,3,4-三羥基環戊酮之製程。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 486465 ' A8 B8 C8 D8六、申請專利範圍〔II〕經濟部智慧財/!.局員工消費合作社印製

HO -J-L OH 〔I〕 9. 一種具抑制癌症之醫藥組成物，內含有效成分爲一種以上化合物選自如申請專利範圍第1項之2,3,4-三羥基環戊酮之非對映體。 10. 如申請專利範圍第1項之2,3,4-三羥基環戊酮之非對映體，其係用於食品。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐）