WO1998056745A1

WO1998056745A1 - Hydroxycyclopentanone

Info

Publication number: WO1998056745A1
Application number: PCT/JP1998/002425
Authority: WO
Inventors: Kaoru Kojima; Katsushige Ikai; Tatsuji Enoki; Nobuto Koyama; Ikunoshin Kato
Original assignee: Takara Shuzo Co., Ltd.
Priority date: 1997-06-13
Filing date: 1998-06-01
Publication date: 1998-12-17
Also published as: EP0990635A1; KR20010012196A; ES2206930T3; AU735535B2; US6166091A; JP3602854B2; EP0990635B1; EA001907B1; CA2293763A1; EA200000016A1; TW486465B; DE69818261D1; ATE250021T1; CN1257471A; EP0990635A4; KR100585405B1; AU7548598A; CN1129568C; DE69818261T2

Description

明細書

ヒドロキシシクロペン夕ノン

発明の属する技術分野

本発明は、医薬、食品及び飲料の分野で有用な、制がん作用等の生理活性を有するヒドロキシシクロペン夕ノン化合物、その製造方法及びその利用に関する。

従来の技術

従来、臨床上の療法に用いられている薬物はアルキル化剤、代謝阻害剤、植物アル力ロイド等の制がん剤、抗生物質、免疫促進剤、免疫調節剤など多岐にわたつているが、これらの薬物療法はいまだ完成したとはいいがたい。

これらのうち、天然物由来であるプロスタグランジンの中で、シクロペンテノン環を有するプロス夕グランジン A及び J類が D N A合成を抑制することにより、安全性の高い制がん剤としての可能性が報告され、それらの各種誘導体が合成されている（特開昭 6 2 - 9 6 4 3 8号公報参照）。

発明が解決しょうとする課題

本発明の目的は、制がん作用等の生理作用を有する安全性の高いシクロベン夕ノン化合物を開発し、当該化合物の製造方法、当該化合物を含有する医薬、食品及び飲料を提供することにある。

課題を解決するための手段

本発明者らは式〔I〕で表される化合物、 2， 3 , 4 —トリヒドロキシ— 2— シクロペン夕ノン（以下、単にヒドロキシシクロペン夕ノンと称す）がゥロン酸、ゥロン酸誘導体、ゥロン酸及び/又はゥロン酸誘導体を含有する糖化合物、ゥロン酸及び/又はゥロン酸誘導体を含有する糖化合物含有物から選択される少なくとも 1種の物の加熱処理物中に生成し、加熱処理物中より単離された当該化合物が制がん作用等の生理活性を有することを見出し、本発明を完成させた。本発明を概説すれば、本発明の第 1の発明は下記式〔I〕で表される 2 , 3 , 4—トリヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩に関する。〔ι〕

本発明の第 2の発明は下記工程を包含することを特徴とする式〔I〕で表される 2, 3, 4—トリヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩の製造方法に関する。

(A) ：下記（a) 、（b)、（c) より選択される少なくとも 1種の物を加熱処理し、 2, 3, 4—トリヒドロキシシクロペン夕ノンを生成させる工程、

(a) ゥロン酸又はゥロン酸誘導体、

( b ) ゥロン酸及び/又はゥ口ン酸誘導体を含有する糖化合物、

( c ) ゥロン酸及び/又はゥロン酸誘導体を含有する糖化合物含有物、

(B) ：必要に応じて、得られた加熱処理物より 2 , 3， 4一トリヒドロキシシクロペン夕ノンを単離する工程。

本発明の第 3の発明は下記式〔II〕で表される 4, 5—ジヒドロキシー 2—シクロベンテン一 1—オンを式〔I〕で表される 2， 3, 4—トリヒドロキシシク口ペン夕ノンに変換させる工程を包含することを特徴とする式〔I〕で表される 2, 3, 4—トリヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩の製造方法に関する。

〔II〕

本発明の第 4の発明は本発明の第 1の発明の 2 , 3, 4—トリヒドロキシシク口ペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも 1以上の化合物を有効成分として含有することを特徴とする医薬に関する。本発明の第 5の発明は本発明の第 1の発明の 2, 3， 4一トリヒドロキシシク口ペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも 1以上の化合物を含有することを特徴とする食品又は飲料に関する。

図面の簡単な説明

図 1は保持時間と示差屈折検出計の出力の関係を示す図である。

図 2はシクロペンテノン、ヒドロキシシクロペン夕ノン混合物の ' Η— NMR スぺクトルを表す図である。

図 3はシクロペンテノン、ヒドロキシシクロペンタノン混合物の^{1 3} C— NM R スぺクトルを表す図である。

図 4はトリメチルシリル化されたシクロペンテノン、ヒドロキシシクロペン夕ノン混合物のガスクロマトグラムを表す図である。

図 5は図 4のピーク（ 1 ) のマススぺクトルを表す図である。

図 6は図 4のピーク（2 ) のマススぺクトルを表す図である。

図 7はヒドロキシシクロペンタノンジァステレオマー Αの ' H— N MRスぺクトルを表す図である。

図 8はヒドロキシシクロペンタノンジァステレオマー Βの ' Η— N MRスぺクトルを表す図である。

図 9はヒドロキシシクロペン夕ノンジァステレオマー Αの^{1 3} C— N MRスぺクトルを表す図である。

図 1 0はヒドロキシシクロペン夕ノンジァステレオマー Bの^{1 3} C— NM Rスぺクトルを表す図である。

図 1 1はトリメチルシリル化されたヒドロキシシクロペン夕ノンジァステレオマ一 Aのガスクロマトグラムを表す図である。

図 1 2はトリメチルシリル化されたヒドロキシシクロペン夕ノンジァステレオマ一 Bのガスクロマトグラムを表す図である。

図 1 3は図 1 1のビーク（ 1 ) のマススぺクトルを表す図である。

図 1 4は図 1 2のピーク（2 ) のマススぺクトルを表す図である。

発明の実施の形態

以下、本発明をより具体的に説明する。

本発明において、ゥロン酸、ゥロン酸誘導体、ゥロン酸及び/又はゥロン酸誘導体を含有する糖化合物、ゥロン酸及び/又はゥロン酸誘導体を含有する糖化合物含有物とは、その加熱処理物中にヒドロキシシクロペン夕ノンが生成されれば特に限定はない。

本発明により、食品又は飲料中に生理活性を有するヒドロキシシクロペンタノン、その光学活性体及び/又はそれらの塩の適量を含有させることが可能となつた。これらの化合物が有する制がん作用等によって、本発明の食品又は飲料は制がん性食品又は制がん性飲料として極めて有用である。

また本発明によりヒドロキシシクロペン夕ノン、その光学活性体及び/又はそれらの塩を含有する医薬が提供され、該医薬はがんの治療剤又は予防剤として有用である。

本発明に使用されるヒドロキシシクロペン夕ノンは、（a ) ゥロン酸又はゥロン酸誘導体、（b ) ゥロン酸及び/又はゥロン酸誘導体を含有する糖化合物、（ c ) ゥロン酸及び/又はゥロン酸誘導体を含有する糖化合物含有物から選択される物を加熱処理することにより生成される。従って上記（a ) 、 ( b ) 又は（c ) を含有しない原料を物理的、化学的、酵素的あるいはその他の手段を用いて生成せしめた（a ) 、 ( b ) 又は（c ) を加熱処理することにより、本発明のヒド口キシシクロペンタノンを得ることもできる。

また本発明においてはヒドロキシシクロペン夕ノンを含有する加熱処理物、該加熱処理物からの部分精製ヒドロキシシクロペン夕ノン及び精製ヒドロキシシク口ペン夕ノンを使用することができる。

ゥロン酸はグリクロン酸ともいい、アルドースのアルデヒド基はそのままにして他端の第 1アルコール基だけをカルボキシル基に酸化したヒドロキシアルデヒド酸の総称であり、天然では動植物の各種の多糖の構成成分として存在する。ゥロン酸を含有する多糖としては、ぺクチン、ぺクチン酸、アルギン酸、ヒアルロン酸、へパリン、へパラン硫酸、フコィダン、コンドロイチン硫酸、コンドロイチン、デルマタン硫酸等があり、種々の生理機能が知られている。

本発明で使用することができるゥロン酸は特に限定されるものでなく、例えばガラクッロン酸、グルクロン酸、グルロン酸、マンヌロン酸、ィズロン酸等があり、ゥロン酸の誘導体としては、それらのラクトン、それらのエステル、それらのアミド、それらの塩等があり、加熱処理によりヒドロキシシクロペン夕ノンを生成する物はすべて本発明の誘導体に包含される。ゥロン酸のラクトンとしてはグルクロノ一 6 , 3—ラクトン（以下、グルクロノラクトンと略記する）、マンヌロノ一 6， 3—ラクトン、ィズロノ一 6 , 3—ラクトン等が例示される。ゥロン酸エステルとしては、例えばメチルエステル、ェチルエステル、プロピレングリコールエステル、カルボキシメチルエステル等がありゥロン酸より製造することができる。またゥロン酸のアミド化によりゥロン酸アミドも製造することができる。更にこれらの塩は常法により製造することができる。

次に本明細書において、ゥロン酸及び/又はゥロン酸誘導体を含有する糖化合物は特に限定されるものでなく、例えばべクチン、ぺクチン酸、アルギン酸、ヒアルロン酸、へパリン、へパラン硫酸、フコィダン、コンドロイチン硫酸、コンドロイチン、デルマタン硫酸、それらの化学的、酵素的、物理的処理物である、その分解物、分解物の誘導体、分解物の塩を使用することができる。

前記の化学的な処理方法としては、原料化合物を例えば室温〜 2 0 0 °Cで数秒〜数時間、好ましくは 5 0〜1 3 0 °Cで数秒〜 6 0分処理すれば良く、酸性下この処理を行うとグリコシド結合が加水分解を受け、ぺクチンの場合、ガラクヅロン酸及び/又はガラクッロン酸エステルを含む分解物が生ずる。また例えば p H 6 . 8、 9 5 °Cで数分〜数十分処理することにより/?一脱離反応が生じ、 2 3 5 nm付近の吸光度が増大した不飽和ゥロン酸及び/又は不飽和ゥロン酸エステルを有する糖化合物が得られる。本発明の糖化合物にはゥロン酸及び/又はゥロン酸エステルを含有する多糖類の 5—脱離反応により生成する非還元末端に不飽和ゥロン酸及び/又は不飽和ゥロン酸エステルを含有する糖化合物が含まれる。また前記の酵素学的な処理方法としては、原料糖化合物のゥロン酸及び/又はゥロン酸エステル含有多糖加水分解酵素、例えばべクチナーゼ、ヒアルロニダ一ゼ等によるゥロン酸及び/又はゥ口ン酸エステル含有多糖の公知の分解が挙げられる。また、ゥロン酸及び/又はゥロン酸エステル含有多糖リア一ゼによるゥロン酸及び/又はゥロン酸エステル含有多糖の公知の分解が挙げられる。例えばべクチン、ぺクチン酸の場合、各々公知のぺクチンリア一ゼ（E C 4 . 2 . 2 . 1 0 ) 、ぺクチン酸リア一ゼ（E C 4 . 2 . 2 . 2 ) 、ェキソポリガラクッロン酸リア一ゼ（E C 4 . 2 . 2 . 9 ) で分解することによって、非還元末端に 4ーデォキシ一 L—トレオーへキスー 4—エノビラノシルゥロネート（4-deoxy- L-th reo-hex-4-enopyranosyl uronate) 又はそのメチルエステルを有する糖化合物が得られる。また、ヒアルロン酸の場合はヒアルロン酸リアーゼ（E C 4 . 2 . 2 . 1 ) 、アルギン酸の場合はアルギン酸リアーゼ（E C 4 . 2 . 2 . 3 ) が使用される。なお、アルギン酸の場合は非還元末端に 4—デォキシー L一エリトロ— へキス一 4—エノビラノシルゥロネ一トを有する糖化合物が得られる。この非還元末端に 4—デォキシ一 L—トレオーへキス一 4—エノビラノシルゥロネート、 4—デォキシ一 L—エリトロ一へキス一 4—エノビラノシルゥロネ一ト又はそれらのメチルエステルを有する酵素分解物も本発明の糖化合物に包含される ο

更に前記の物理的な処理方法としては、原料糖化合物の近赤外線、赤外線、マイク口波、超音波処理等が挙げられ、例えばべクチン及び/又はべクチン酸を p H中性又はアルカリ性の溶液中に入れ、温度は適宜、室温以上で、適宜還元下、例えばァスコルビン酸存在下で、時間は 1秒以上、好ましくは 5秒〜 1時間の超音波処理をし、振動エネルギーを与えることが挙げられる。なお超音波以外にもマイクロ波、近赤外線、赤外線等の照射も有効で、これらを組合せ照射しても良い。照射は連続的に行っても良く、断続的に行っても良い。

本発明においてゥロン酸及び/又はゥロン酸誘導体を含有する糖化合物含有物とは、上記のゥロン酸及び/又はゥロン酸誘導体を含有する糖化合物の含有物であれば特に限定はない。ゥロン酸及び/又はゥロン酸誘導体を含有する糖化合物含有物としてはリンゴ、例えばミカン、レモン等の柑橘類、バナナ、白菜、キヤべヅ、レタス、シソ、カボチヤ、セロリ、ゴボウ、エシャロット、ブロッコリ一、ピーマン、ほうれん草、夕マネギ、人参、人参の葉、大根の葉、茶、ゴマ、マメ、ィモ等の双子葉類植物の果実、野菜、葉、種実等、麦、米等の単子葉植物の穀物、褐藻類、例えば昆布、ワカメ等、紅藻類、緑藻類、単細胞緑藻類等の藻類、微生物としてはリオフィラムウルマリゥム、ハタケシメジ、ナメコ、シィ夕ケ、エノキタケ、ヒラタケ、マッシュルーム等の担子菌類、サナギタケ、ノムシタケ等の子のう菌類、酵母、糸状菌、例えば麹菌、細菌、例えば納豆菌、乳酸菌等、動物としては脊椎動物又は無脊椎動物、ブ夕皮膚、ゥシ皮膚、サメ軟骨、鯨軟骨等が例示され、本発明においては、これらの植物、微生物又は動物由来のゥ口ン酸及び/又はゥロン酸誘導体を含有する糖化合物含有物を使用することがでぎる。

また本発明においては、ゥロン酸及び/又はゥロン酸誘導体を含有する糖化合物含有物として、果物果皮、果物搾汁かす、例えばリンゴ搾汁かす、ミカン搾汁かす、野菜搾汁かす、穀類かす、例えば清酒粕、ビールかす、焼酎かす、ゥイスキーかす、豆類かす、例えばおから、海藻かす等の農水産 ·食品加工処理物をそのまま、あるいは乾燥、粉碎して用いても良い。

本発明で使用するゥ口ン酸及び/又はゥロン酸誘導体を含有する糖化合物含有物はそのまま、若しくは前処理として通常の、煮る、焼く、妙る、焙じる、煎じる、蒸す、炒める、揚げる等の任意の加工方法で処理することができる。

本発明においては、これらのゥロン酸及び/又はゥロン酸誘導体を含有する糖化合物含有物は前記の化学的、酵素的（微生物による発酵を含む）、物理的前処理を行って得られる該含有物の処理物、又は該処理物よりの精製物を使用しても良い。

ゥロン酸及び/又はゥロン酸誘導体を含有する糖化合物である多糖類は公知の化学的、酵素学的、物理的な処理方法により製造することができる。例えばべクチンとしては、例えば柑橘類の果皮及びリンゴの果実より抽出される高分子の多糖類を使用することができる。工業的なぺクチン製造の原料はフルーツで、レモン、ライム等の柑橘類のジュースのしぼりかす（主として内果皮）が用いられるほか、リンゴのジュースのしぼりかすも用いられている。ジュースのしぼりかすには主として不溶性のプロトぺクチンが含まれており、製造の段階でこれを可溶ィ匕（抽出）し、ぺクチンを調製する。可溶化は酸性の温水〜熱水で抽出することによって行うことができ、抽出時の温度、 p H、時間条件を原料に合せてコントロールすることにより、分子量やエステル化度の一定なぺクチンを高収量で製造することができる。抽出液は遠心分離やろ過によって精製し、濃縮後アルコールを添加してぺクチンを沈殿させ回収することができる。回収された沈殿を乾燥、粉砕し、所定の乾燥べクチンを調製することができる。

ぺクチンの主構造は、部分的にメチル化されたガラクヅロン酸のポリマーである。カルボキシル基はメチルエステル化されたり、遊離の酸のままか、あるいはアンモニゥム塩化、カリウム塩化、又はナトリウム塩化されている。ぺクチンはメチルエステル化度（D M度：全カルボキシル基に対するメトキシル基の割合）によって、 D M度の高い H Mぺクチン及び D M度の低い L Mぺクチンに分類され〔吉積智司ほか編、（株）光琳発行、新食品開発用素材便覧、第 1 1 4〜 1 1 9 頁（ 1 9 9 1 ) 〕、本発明においては市販の食品添加物べクチン〔外山章夫編、食品と科学社発行、天然物便覧、第 1 2版、第 1 3 8頁（ 1 9 9 3 ) 〕、市販の H Mぺクチン、 L Mぺクチン等（前出の新食品開発用素材便覧）を使用することができる。

合成法により合成されるゥロン酸、ゥロン酸誘導体、オリゴ糖等も本発明で使用することができる。

本発明に使用する加熱処理物は、（a ) ゥロン酸又はゥロン酸誘導体、（b ) ゥロン酸及び/又はゥロン酸誘導体を含有する糖化合物、（c ) ゥロン酸及び/ 又はゥロン酸誘導体を含有する糖化合物含有物から選択される物を原料として製造することができる。

本発明に使用するヒドロキシシクロペン夕ノンを含有する加熱処理物の製造における加熱処理方法としては、本発明のヒドロキシシクロペン夕ノンが生成する条件であれば特に限定は無いが、ゥロン酸、ゥロン酸誘導体、ゥロン酸及び/又はゥロン酸誘導体を含有する糖化合物、ゥ口ン酸含有物及び/又はゥロン酸誘導体を含有する糖化合物含有物を例えば 6 0〜3 5 0 °Cで数秒〜数日、好ましくは 8 0〜1 5 0 °Cで数分〜数日加熱処理すれば良く、ぺクチンの場合、例えば 8 0 〜1 5 0 °Cで数分〜数日の加熱処理を行うことにより、ヒドロキシシクロペン夕ノンを含有する加熱処理物を得ることができる。またゥロン酸、ゥロン酸のラクトン、ゥロン酸エステルを 6 0〜 1 5 0 °Cで数分〜数日加熱処理することによりヒドロキシシクロペン夕ノンを含有する目的の加熱処理物を得ることができる。加熱処理時の p Hは特に限定はないが、中性から酸性下で行うのが好ましく、その原料に応じ加熱処理時の p Hを調整すればよい。

加熱処理時の原料の濃度はその加熱処理によりヒドロキシシクロペン夕ノンを生成しうる範囲内であれば特に限定は無く、操作性、収率等の点を考慮し設定すれば良い。本発明における加熱処理は湿式加熱でも、乾式加熱でも良いが、本発明のヒドロキシシクロペン夕ノンの生成効率の点からは湿式加熱が好ましい。湿式加熱としては、水蒸気加熱、水蒸気加圧加熱、加圧式加熱等任意の湿式加熱方法を用いることができる。乾式加熱としては、乾燥熱風による直接加熱法、熱源から隔壁を通して加熱する間接加熱法等が使用できる。直接加熱方法としては、気流乾熱法、噴霧乾熱法等があり、間接加熱法としてはドラム乾熱法等が使用でぎる。

本発明に使用する加熱処理物中のヒドロキシシクロペン夕ノンはがん細胞増殖抑制等を指標に精製、単離することができる。精製、単離手段としては、化学的方法、物理的方法等の公知の精製、単離手段を用いれば良く、ゲルろ過法、分子量分画膜による分画法、溶媒抽出法、分留法、イオン交換樹脂、順相、逆相の各種クロマトグラフィ一法等の従来公知の精製方法を組合せ、加熱処理物中に生成されたヒドロキシシクロペン夕ノンを採取することができる。

例えば、グルクロノラクトン水溶液を加熱し、この加熱液を陰イオン交換カラムクロマトグラフィ一、合成吸着剤カラムクロマトグラフィー及びシリカゲル力ラムクロマトグラフィ一に順次かけることよってヒドロキシシクロペン夕ノンを精製することができる。

本発明のヒドロキシシクロペン夕ノンは下記式〔II〕で表される 4 , 5—ジヒドロキシ一 2—シクロペンテン一 1一オン（以下、単にシクロペンテノンと称す ) を出発物質として製造することもできる。〔II〕

例えば、シクロペンテノンを水又は水を含む溶媒に溶解することによってヒド口キシシクロペン夕ノンは生成する。本発明のヒドロキシシクロペンタノン生成の条件には何ら限定はなく、ヒドロキシシクロペン夕ノンが生成する条件であればよい。

生成したヒドロキシシクロペン夕ノン量は順相、逆相等のカラムを用いた H P L C、ガスクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、ペーパークロマトグラフィー、核磁気共鳴等の方法で測定できる。

このヒドロキシシクロペン夕ノンを精製する方法としては化学的方法、物理学的方法等の公知の方法を用いれば良く、ゲルろ過法、分子量分画膜による分画法、溶媒抽出法、分留法、イオン交換、逆相、順相等の各種クロマトグラフィー法等の従来公知の精製方法を組合せ、反応生成物中のヒドロキシシクロペン夕ノン又はその光学活性体を精製、単離することができる。

例えばシクロペンテノン水溶液を 4 °Cで 3 0日間保存するとシクロペンテノンの約 3 0 %がヒドロキシシクロペン夕ノンに変化する。

単離したヒドロキシシクロペン夕ノンの構造は質量分析法、核磁気共鳴法、赤外吸収スぺクトル、紫外吸収スぺクトル等の公知の方法で決定することができる本発明のヒドロキシシクロペン夕ノンとシクロペンテノンは水溶液中で相互に変換し、平衡関係にある。単離したシクロペンテノンから上記のようにヒドロキシシクロペン夕ノンが生成するが、逆に、単離したヒドロキシシクロペン夕ノンを水溶液状態で放置するとヒドロキシシクロペン夕ノンの一部はシクロペンテノンに変化する。

なお、本発明において使用する式〔II〕で表されるシクロペンテノンは、化学合成法により合成することができる〔カーボハイドレートリサーチ（Carbohyd rate Res. )s 第 247卷、第 2 17〜 2 2 2頁（ 1 99 3) 、ヘルべチカキミ力ァク夕（Helvetica Chimica Acta) 、第 5 5卷、第 2838〜 2 844頁（ 1 972 ) 〕。またシクロペンテノンはゥロン酸、ゥロン酸誘導体、ゥロン酸及び/又はゥロン酸誘導体を含有する糖化合物、ゥロン酸及びノ又はゥロン酸誘導体含有糖化合物含有物から選択される少なくとも 1種の物の加熱処理物中に生成する化合物であって、本発明ではその精製物も使用することがきる。

例えば、ゥロン酸として D—グルクロン酸を使用し、その 1 %溶液を 1 2 1°C で 4時間加熱処理することにより、加熱処理物中にシクロペンテノンが生成する。この加熱処理物中のシクロペンテノンを溶媒で抽出し、抽出物を濃縮する。次にこの濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで分離し、溶出するシクロペンテノン画分を濃縮し、濃縮物からシクロペンテノンをクロ口ホルムで抽出することにより、加熱処理物中のシクロペンテノンが単離される。

シクロペンテノンの物性を下記に示す。なおシクロペンテノンの質量分析は D X302質量分析計（日本電子社製）を用いて行った。また、重クロ口ホルム溶媒を用いた NMRスペクトルの測定は JNM— A 500 (日本電子社製）を用いた。比旋光度は D I P— 370型旋光計（日本分光社製）、 UV吸収スペクトルは UV— 25 00分光光度計（島津製作所社製）、赤外吸収スぺクトル（ IR) は FT I R— 8000赤外分光光度計（島津製作所社製）をそれぞれ用い測定した。

FAB-MS m/z 1 1 5 〔M + H〕 +

マトリックスとしてグリセロールを用いた。

^-NMR (CDC Is )

δ A. 20 ( 1 Η, d， J = 2. 4H z, 5— H) 、 4. 83 ( 1 H, m， 4 一 H)、 6. 30 ( 1 H， dd, J = 1. 2, 6. 1 H z, 2 - H) 、 7. 48 ( 1 H， dd, J = 2. 1 , 6. 1 Hz , 3-H)

但し、 — NMRの化学シフト値は CHCls の化学シフト値を 7. 2 6 p pmとして表した。

旋光度：〔ひ〕。 ^2Q 0° ( 1. 3、水） IR (KBr法）： 3400、 1715、 1630、 1115、 1060、 1 025 cnT¹に吸収を有する。

UV： Amax 215 nm (水）

単離されたヒドロキシシクロペン夕ノンを光学分割することによりヒドロキシシクロペン夕ノンの光学活性体を得ることができる。なお、同様にして、上記したシクロペンテノンの光学活性体を得ることもできる。

光学活性体の分離はラセミ混合物の機械的分割、優先晶出法、ジァステレオマ —塩あるいは包接化合物としての結晶化による分割、酵素 ·微生物による動力学的分割、クロマトグラフィ一による分割等により行うことができる。

クロマトグラフィーによる分割としては、ガスクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー等を用いることができ、それそれに適したキラル固定相を使用すればよい。

液体クロマトグラフィ一による光学分割としてはキラルな固定相を用いる方法、キラルな溶離液を用いる方法、ジァステレオマ一としての分離等を用いることができる。

キラル固定相としてはアミド系固定相、尿素系固定相、配位子交換型固定相、多糖 ·多糖誘導体固定相、タンパク質固定相、ポリメ夕クリル酸エステル固定相、ポリメ夕クリルアミド固定相等が使用できる。

溶離液としてはへキサン系、アルコール系、水（緩衝液）系等が使用でき、上記固定相との組合せにおいて適宜使用することができる。

ヒドロキシシクロペン夕ノン又はその光学活性体としては、医薬として許容される塩があり、公知の方法にて変換することができる。

ヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩は制がん活性、がん細胞増殖抑制活性、アポトーシス誘発活性、トポイソメラ一ゼ II阻害活性、がん細胞分化誘導活性、抗リウマチ活性、慢性関節リウマチ抑制作用、ファス抗原産生誘導活性、抗菌活性、抗ウィルス活性、肝機能改善活性、熱ショック夕ンパク誘導活性、血液成分正常化活性、がん免疫増強活性、抗炎症活性、腫瘍壊死因子産生抑制活性、一酸化窒素産生抑制活性、免疫調節活性、例えば遅延型過敏反応抑制活性、リンパ球幼若化反応抑制活性、混合リンパ球反応抑制活性

、 I g E産生抑制活性、力ラゲ一ナン浮腫抑制活性等の生理活性を有し、これらの活性により、ヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも 1以上の化合物を有効成分として含有する医薬は、例えば生体防御機構に作用する医薬、例えば抗体産生機構に作用する製剤、抗炎症剤、抗アレルギー剤、抗リウマチ剤、インターフェロン誘発剤等、糖質代謝に作用する医薬、例えば糖尿病治療剤、病原生物に作用する医薬、例えば、抗菌剤、抗ウィルス剤等として有用である。従って本発明で得られる医薬は、ヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩に感受性を示す疾病用の医薬として、例えばがん、ウィルス性疾患、リウマチ、糖尿病、アレルギ一、自己免疫疾患、炎症等の疾病の治療用医薬又は予防用医薬として極めて有用である。

ヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩は、例えばヒト前骨髄性白血病細胞 H L— 6 0、ヒト急性リンパ芽球性白血病細胞 M O L T一 3、肺がん細胞 A— 5 4 9、 S V 4 0形質転換肺細胞 W I— 3 8 VA 1 3、肝がん細胞 H e p G 2、結腸がん細胞 H C T 1 1 6、ヒト結腸がん細胞 S W 4 8 0、ヒト結腸がん細胞 W i D r、胃がん細胞 A G S、ミエローマ細胞等のがん細胞に細胞増殖抑制作用、制がん活性を有し、ヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも 1以上の化合物を有効成分として含有する制がん剤を製造することができる。また、これらの化合物はがん細胞にアポト一シス誘発作用、がん細胞のトポィソメラーゼ II阻害作用を有する。ヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩のがん細胞増殖抑制作用機作は本発明を何ら制限するものではないが、例えばがん細胞に対するアポトーシス誘発作用、トポイソメラーゼ II阻害作用も本発明において制がん作用に包含される。

制がん剤の製造は一般的には、ヒドロキシシクロペン夕ノン、その光学活性体及び/又はそれらの塩を薬学的に許容できる液状又は固体状の担体と配合し、かつ必要に応じて溶剤、分散剤、乳化剤、緩衝剤、安定剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等を加えて、錠剤、顆粒剤、散剤、粉末剤、カプセル剤等の固形剤、通常液剤、懸濁剤、乳剤等の液剤であることができる。またこれを使用前に適当な担体の添加によって液状となし得る乾燥品とすることができる。

本発明の制がん剤は、製剤形態に応じた適当な投与経路で投与される。投与方法も特に限定はなく、内用、外用及び注射によることができる。注射剤は、例えば静脈内、筋肉内、皮下、皮内等に投与し得、外用剤には座剤等も包含される。制がん剤としての投与量は、その製剤形態、投与方法、使用目的及びこれに適用される患者の年齢、体重、症状によって適宜設定され、一定ではないが一般には製剤中に含有されるヒドロキシシクロベン夕ノン、その光学活性体及び/又はそれらの塩の量が成人 1日当り 1 0 p g ~ 2 0 0 m g/ k gである。もちろん投与量は、種々の条件によって変動するので、上記投与量より少ない量で十分な場合もあるし、あるいは範囲を超えて必要な場合もある。本発明の薬剤はそのまま経口投与するほか、任意の飲食品に添加して日常的に摂取させることができる。ヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも 1以上の化合物を有効成分として含有する生体防御機構に作用する医薬、例えば抗体産生機構に作用する製剤、抗炎症剤、抗アレルギー剤、抗リウマチ剤、イン夕一フエロン誘発剤等、糖質代謝に作用する医薬、例えば糖尿病治療剤、病原生物に作用する医薬、例えば、抗菌剤、抗ウィルス剤、アポトーシス誘発剤等は制がん剤に準じ、製剤化することができ、制がん剤に準じた方法、用量で投与することができる。

ヒドロキシシクロペン夕ノンはシクロペンテノンと水溶液中にて平衡の関係にあり、生体内にてシクロペンテノンより変換されるヒドロキシシクロペン夕ノンも医薬としての効果を発揮すると考えられる。従って生体内でのヒドロキシシク口ペン夕ノンの形成を目的とするシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩の使用も本願に包含されるものである。

本発明のヒドロキシシクロペン夕ノン又はその光学活性体はがん細胞増殖抑制作用等の種々の生理活性を有し、本発明のヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも 1以上の化合物を含有、希釈又は添加してなる食品又は飲料は例えば制がん性の食品又は飲料等の機能性食品又は飲料として有用である。

なお、本発明の食品又は飲料の製造においてはヒドロキシシクロペン夕ノンを含有する加熱処理物、該加熱処理物からの部分精製ヒドロキシシクロペン夕ノン、精製ヒドロキシシクロペン夕ノン及び/又はその光学活性体を使用することができる。

本発明のヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも 1以上の化合物を含有、希釈又は添加してなる食品又は飲料とは、特に限定はないが、例えば穀物加工品（小麦粉加工品、デンプン類加工品、プレミックス加工品、麵類、マカロニ類、パン類、あん類、そば類、麩、ビーフン、はるさめ、包装餅等）、油脂加工品（可塑性油脂、てんぷら油、サラダ油、マヨネ一ズ類、ドレッシング等）、大豆加工品（豆腐類、味噌、納豆等 ) 、食肉加工品（ハム、ベーコン、プレスハム、ソーセージ等）、水産製品（冷凍すりみ、かまぼこ、ちくわ、はんぺん、さつま揚げ、つみれ、すじ、魚肉ハム、ソーセージ、かつお節、魚卵加工品、水産缶詰、つくだ煮等）、乳製品（原料乳、クリーム、ヨーグルト、バタ一、チーズ、練乳、粉乳、アイスクリーム等）、野菜 ·果実加工品（ペースト類、ジャム類、漬け物類、果実飲料、野菜飲料、ミックス飲料等）、菓子類（チョコレート、ビスケット類、菓子パン類、ケーキ、餅菓子、米菓類等）、アルコール飲料（日本酒、中国酒、ワイン、ウイスキー、焼酎、ウォッカ、ブランデ一、ジン、ラム酒、ビール、清涼アルコール飲料、果実酒、リキュール等）、嗜好飲料（緑茶、紅茶、ウーロン茶、コーヒー、清涼飲料、乳酸飲料等）、調味料（しょうゆ、ソース、酢、みりん等）、缶詰 ·瓶詰め '袋詰め食品（牛飯、釜飯、赤飯、カレー、その他の各種調理済み食品）、半乾燥又は濃縮食品（レバ一ペースト、その他のスプレツド、そば · うどんの汁、濃縮スープ類）、乾燥食品（即席麵類、即席カレ一、インスタントコーヒー、粉末ジュース、粉末スープ、即席味噌汁、調理済み食品、調理済み飲料、調理済みスープ等）、冷凍食品（すき焼き、茶碗蒸し、うなぎかば焼き、ハンバーグステーキ、シユウマイ、餃子、各種スティック、フル一ヅカクテル等）、固形食品、液体食品（スープ等）、香辛料類等の農産 ·林産加工品、畜産加工品、水産加工品等が挙げられる。

本発明の食品又は飲料の製造法は、特に限定はないが、調理、加工及び一般に用いられている食品又は飲料の製造法による製造を挙げることができ、製造された食品又は飲料に制がん作用を有するヒドロキシシクロペン夕ノン、その光学活性体及び/又はそれらの塩が含有されていれば良い。

調理及び加工においては、調理、加工後の（a ) ゥロン酸又はゥロン酸誘導体、（b ) ゥロン酸及び/又はゥロン酸誘導体を含有する糖化合物、（c ) ゥロン酸及び/又はゥロン酸誘導体を含有する糖化合物含有物から選択される物の加熱処理物中にヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される化合物が含有されていれば良い。

すなわち調理 '加工前、調理 ·加工時、更には調理 ·加工後にヒドロキシシク口ペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される化合物を含有する（a ) ゥロン酸又はゥロン酸誘導体、（b ) ゥロン酸及び/又はゥロン酸誘導体を含有する糖化合物、（c ) ゥロン酸及び/又はゥロン酸誘導体を含有する糖化合物含有物から選択される物の加熱処理物を添加してもよいし、調理及び加工品やその材料を、ヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される化合物を含有する（a ) ゥロン酸又はゥロン酸誘導体、 ( b ) ゥロン酸及び/又はゥロン酸誘導体を含有する糖化合物、（c ) ゥロン酸及び/又はゥロン酸誘導体を含有する糖化合物含有物から選択される物の加熱処理物へ添加し、該加熱処理物中のヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される化合物を希釈してもよい。

次に食品又は飲料の製造においては、任意の工程で、加熱処理を行い、加熱処理物中に有効量のヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される化合物を含有させれば良く、ヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される化合物を含有する加熱処理物を添加してもよい。また食品又は飲料やその原料をヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される化合物を含有する加熱処理物へ添加し、該加熱処理物中のヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される化合物を希釈してもよい。また、添加は 1回又は数回に渡って行ってもよい。したがって、簡便に新規な生理作用を示す食品又は飲料を製造することができる。また製造時において（a ) ゥロン酸又はゥロン酸誘導体、（b ) ゥロン酸及び/又はゥロン酸誘導体を含有する糖化合物、（c ) ゥロン酸及び/又はゥロン酸誘導体含有糖化合物含有物から選択される物を含有せしめ、製造時において生成した加熱処理物中のヒドロキシシクロべン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される化合物を構成成分とする食品又は飲料も本発明に包含される。いずれの工程を経た場合も、ヒド口キシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される化合物を含有する加熱処理物を含有、添加及び/又は希釈してなる食品又は飲料は本発明の食品又は飲料と定義される。

またヒドロキシシクロペン夕ノン、その光学活性体及び/又はそれらの塩と、 S H基含有化合物、例えば S H基含有アミノ酸、又はその誘導体、例えばシステイン含有アミノ酸誘導体との反応物として、食品、飲料中でも生成したヒドロキシシクロペン夕ノン誘導体を含有、添加及び/又は希釈してなる食品又は飲料も本発明の食品又は飲料と定義される。

制がん作用を有するヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される化合物の食品中の含有量は特に制限されず、その官能と生理活性の点より適宜選択できるが、例えばヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される化合物の含有量は食品 1 0 0 部当り 1 0— ⁹部以上、食品としての官能、制がん作用の面からは好ましくは 1 0 一⁸〜 5部、更に好ましくは 1 0— ⁷〜2部であり、生理的有効量の食品を摂取すれば良い。

また、制がん作用を有するヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される化合物の飲料中の含有量は特に制限されず、その官能と生理活性の点より適宜選択できるが、例えばヒドロキシシクロペンタノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される化合物の含有量は飲料 1 0 0部当り 1 0— ⁹部以上、飲料としての食味、制がん作用の面からは好ましくは 1 0— ⁸〜5部、更に好ましくは 1 0— ⁷〜2部であり、生理的有効量の飲料を摂取すれば良い。なお、本明細書において部は重量部を意味する。

本発明の食品又は飲料としては、制がん性を有するヒドロキシシクロペンタノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される化合物が含有、添加及び/又は希釈されていれば特にその形状に限定は無く、夕ブレット状、顆粒状、カプセル状、ゲル状、ゾル状等の形状の経口的に摂取可能な形状物も包含する。本発明の食品又は飲料は生理活性を有するヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される化合物を含有し、ヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩の有する種々の生理活性

、制がん作用、抗菌作用、アポト一シス誘発作用、抗ウィルス作用、肝機能改善作用等によって、これらを摂取することにより発がん予防、がん抑制効果、ウイルス性疾患予防、治療、アルツハイマー病予防効果、肝機能改善効果を有する健康食品又は飲料であり、生体の恒常性の維持、特に胃腸健康保持に有用な食品又は飲料である。またその抗菌力により、極めて保存性の良い、食品又は飲料であ本発明のヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩は 1 0 O m g/k gの経口投与でマウスに毒性は認められない。

実施例

以下、実施例を挙げて、本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に何ら限定されるものではない。なお、実施例における％は重量％を意味する。

実施例 1

( 1 ) 1 0 gの D—グルクロン酸（シグマ社製 G 5 2 6 9 ) を 1リットルの水に溶解し、 1 2 1 °Cで 4時間加熱した後約 1 O m lになるまで減圧下濃縮した。これに酢酸プチル：酢酸：水 = 3 ： 2 ： 2混合液の上層 4 O m lを加えて混合後、遠心によって得た上清を減圧下約 1 O m lまで濃縮した。

上記抽出液をカラムクロマトグラフィー用シリカゲル B W— 3 0 0 S P ( 2 X 28 cm, 富士シリシァ化学社製）にアプライし、酢酸プチル：酢酸：水 =3 ： 2 ： 2の上層を溶離液としてコンプレッサーで 0. 2 kg/cm² に加圧し、毎分 5 mlの流速で分離を行った。 1画分当り 10mlになるようにフラクシヨネ —シヨンを行い、各画分の一部をとつて薄層クロマトグラフィ一で分析したところ 61番から 80番までの画分に高純度のシクロペンテノンが含まれていた。これらの画分を集めて減圧下濃縮した後 40mlのクロ口ホルムで抽出し、抽出液を減圧下濃縮することによって 10 Omgのシクロペンテノンを得た。

この画分をパルパヅク夕イブ Sカラムを用いた順相 HP L Cで分離し、 215 nmの紫外線吸収で検出したところ、純度は 98%であった。

(2) 実施例 1一（1) で調製したシクロペンテノンの水溶液（5 Omg/m 1) を 4°Cで 30日間保存した試料を以下の条件の H PLCで分析した。

カラム：リクロソーブ（Li chro s orb) NH₂ — 5 (4. 6 x250 mm、メルク社製）

移動相： 80 %ァセトニトリル水溶液

流速： 0. 8 ml/分

カラム温度： 25°C

検出：示差屈折検出計（YRD— 880 midge t、島村計器製作所社製

)

試料： 10倍希釈液を 100〃 1注入

その結果、 5. 7分のシクロペンテノンのピークに加えて 6. 8分の本発明のヒドロキシシクロペンタノンのビークが見られた。クロマトグラムを図 1に示す。すなわち図 1は保持時間と示差屈折検出計の出力の関係を示す図であり、横軸は保持時間（分）、縦軸は示差屈折検出計の出力を示す。

実施例 2

(1) 市販のグルクロノラクトン（ナカライテスク社製） 500gを 38リツトルの水に溶解し、生蒸気を吹き込んで 125 °Cで 5時間加熱した。冷却後減圧下濃縮し、 NaOHで濃縮液を pH 5. 0に調整した。この液を水で平衡化したダイヤイオン SA— 10A (三菱化学社製）を用いた陰イオン交換カラム（20 リヅトル）にチャージし、水で溶出してくる非吸着画分 24リットルを得た。この画分を減圧下、 2. 8リットルまで濃縮し、終濃度 2Mになるように Na C 1を加え、 2M NaC 1水溶液で平衡化した合成吸着剤 S P— 2 07 (三菱化学社製）カラム（ 1 5リットル）に 2回に分けてチャージした。 2M Na C 1水溶液でカラムを洗浄し、 0. 1M Na C 1水溶液で溶出される画分合計 7 8リットルを得た。

この画分を減圧下 1 1 リットルまで濃縮し、濃縮液に対して上記と同様の SP 一 207カラムクロマトグラフィ一を行い 24リヅトルの溶出液を得た。但し、すべての試料を 1回のクロマトグラフィーにかけ、溶出は水で行った。

溶出液を減圧下 100mlまで濃縮し、 AC— 1 1 0— 1 0透析膜（旭化成社製）を用いた電気透析により脱塩し、シクロペンテノン、ヒドロキシシクロペン夕ノン混合液 1 00mlを得た。

(2) 実施例 2— （ 1) で得たシクロペンテノン、ヒドロキシシクロペンタノン混合液 10mlを減圧下濃縮乾固し、酢酸ブチル：酢酸：水 = 3 ： 2 ： 2の上層 1 5mlに溶解した。これを実施例 1— ( 1 ) と同様のシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、 5 00〜700mlの溶離液で溶出されてくるシクロぺンテノンを含む画分と 9 5 0〜 1700mlの溶離液で溶出されてくるヒドロキシシクロペン夕ノンを含む画分を得た。但し、カラムサイズは 2. 5 x 5 0 cm とした。ヒドロキシシクロペン夕ノン含有画分を減圧下濃縮、乾固し、 7 5mg のヒドロキシシクロペン夕ノンを得た。

(3) 実施例 2— (2) と同様のシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行い、 1 070ml〜： L 240 m 1の溶離液で溶出される画分 1と 1 320ml〜 1 500mlの溶離液で溶出される画分 2を得た。

画分 1と画分 2をそれぞれ減圧下濃縮し、以下の条件でそれそれの HP LCを行った。

カラム： CAP CE LL PAK Ci₈ SG 300A 5 jam

( 6 x 25 0 mm、資生堂社製）

移動相： 0. 1%TFA水溶液流速 : 1ml /分

検出： 2 1 0 nmにおける吸光度

それぞれの保持時間 6. 0分のビークを分取し、凍結乾燥した。画分 1の HP L C処理物からは 2 Omgのヒドロキシシクロペン夕ノンジァステレオマ一 A、画分 2の HP L C処理物からは 27 mgのヒドロキシシクロペン夕ノンジァステレオマ一 Bを得た。

実施例 3

実施例 2— (2) で得たヒドロキシシクロペン夕ノンを 4 mMになるように水に溶解し、 4°C、 37°C、又は 45°Cで 1 6時間放置した。各試料をシリ力ゲル 6 0シート F (メルク社製）にスポットし、酢酸プチル：酢酸：水 = 3 : 2 : 2の上層で展開した後、オルシノール—硫酸法で検出した。すなわち、 40 Omgのオルシン一水和物（ナカライテスク社製、 2 57— 30) を 22. 8mlの硫酸に溶解し、水を加えて 20 Omlとした液を展開後の薄層に噴霧し、 1 20°Cで 1〜2分間加熱してスポットを観察した。

その結果、すべての試料にシクロペンテノンのスポットが見られ、放置温度が長いほどシクロペンテノンのスポヅ卜の発色は強かった。

実施例 4

( 1 ) NMR

実施例 2— ( 1) で得たシクロペンテノン、ヒドロキシシクロペン夕ノン混合液を減圧下乾固し、重水に溶解して¹ H— NMRスペクトルと¹³ C— NMRスぺクトルを JNM— A 500 (日本電子社製）を用いて測定した。その結果を以下に示す。

Ή-NMR

(A)

δ 2. 42 ( 1 Η, d d, J = 2. 0, 20. OH z, 5 - H) , 2. 5 3 ( 1 H, dd₃ J = 5. 5 , 20. OH z, 5 -H) , 3. 9 1 ( 1 H, dd， J = 4. 0, 10. 5, 3— H) , 4. 23 ( 1 H₃ d d， J = 2. 0, 1 0. 5 H z, 2 -H) , 4. 27 ( 1 H， d d, J = 4. 0 , 5. 5 H z， 4 -H) (B)

δ 2. 1 3 ( 1 H， dd, J = 9. 0, 20. 0H z, 5— H) , 2. 8 6 ( 1 H, ddd, J = 2. 5， 8. 5， 20. 0 H z, 5 - H) ， 3. 7 6 ( 1 H, dd, J = 8. 5, 10. 0, 3 - H) , 4. 04 ( 1 H, d d, J = 2. 5 , 10. OHz， 2— H) , 4. 13 ( 1 H, d dd, J = 8. 5 , 8. 5 , 9. OH z, 4-H)

HODの化学シフト値を 4. 6 5 ppmとして表した。

この試料に含まれるヒドロキシシクロペン夕ノンは下記式〔III〕に示す構造とその対掌体及び下記式〔IV〕に示す構造とその対掌体の混合物であり、（A)、 (B) のどちらか一方が式〔III〕に示す構造とその対掌体、他方が式〔IV〕に示す構造とその対掌体のシグナルである。

〔III〕

〔IV〕

— NMRスペクトルを図 2に示す。すなわち図 2はシクロペンテノン、ヒドロキシシクロペン夕ノン混合物の — NMRスペクトルを表す図であり、横軸は化学シフト値（ppm) 、縦軸はシグナルの強度を示す。なお、 4. 1、 4 . 6、 6. 2、 7. 4 ppmのシグナルはシクロペンテノン由来のシグナルである o

¹³C - NMR

(A) 644. 2 (5 - C) , 67. 4 (4 - C) ， 76. 4 (3— C) , 78. 1 (

2- C) , 2 18. 1 ( 1 -C)

(B)

43. 5 (5-C) , 69. 5 (4一 C) , 80. 7 (2-C) , 80. 8 (

3- C) ， 2 14. 7 ( 1一 C)

ジォキサンの化学シフト値を 67. 4 ppmとして表した。

この試料に含まれるヒドロキシシクロペン夕ノンは式〔III〕に示す構造とその対掌体及び式〔IV〕に示す構造とその対掌体の混合物であり、（A) 、 (B) のどちらか一方が式〔III〕に示す構造とその対掌体、他方が式〔IV〕に示す構造とその対掌体のシグナルである。

¹³C— NMRスペクトルを図 3に示す。すなわち図 3はシクロペンテノン、ヒドロキシシクロペン夕ノン混合物の¹³ C— NMRスぺクトルを表す図であり、横軸は化学シフト値（ppm) 、縦軸はシグナルの強度を示す。なお、 76. 9、 81. 4、 132. 9、 163. 2、 208. 0 p pmのシグナルはシクロペンテノン由来のシグナルである。

(2) GC/MS

実施例 2— ( 1 ) で得たシクロペンテノン、ヒドロキシシクロペン夕ノン混合液 0. 5〃 1を減圧下乾固し、トリメチルクロロシラン（ジーエルサイエンス社製）： N， 0—ビス（トリメチルシリル）ーァセ夕ミド（ジーエルサイエンス社製）：無水ピリジン（シリレーショングレード、ピアス社製） =4 : 1 : 4混合液 1 0 1に溶解して 6 0°Cで 1時間トリメチルシリル化した。この試料 1 1を以下に示すガスクロマトグラフィー/質量分析（GC/MS) によって分析した。

カラム： TC一 1 (3 Omx 0. 25 mm, ジ一エルサイエンス社製）力ラム温度： 100 °C→ 160 °C (4 °C /分）

160 °C-> 300 °C ( 1 6 °C /分）

300°C ( 5分）

キヤリャ一ガス： He 1. 2 ml/分その結果を図 4、図 5、図 6に示す。すなわち図 4はトリメチルシリル化されたシクロペンテノン、ヒドロキシシクロペンタノン混合物のガスクロマトグラムを表す図であり、横軸はスキャン番号、縦軸はイオン強度を示す。図 5と図 6は図 4のビーク（ 1) とビーク（2) のマススペクトルを表す図であり、横軸は M /Z、縦軸は相対強度（％) を示す。

その結果、図 4のビーク（ 1 ) とビーク（2) は共に M/Z 349 [M + H ] ⁺ を示し、これはトリメチルシリル化されたヒドロキシシクロペン夕ノンの構造から計算される値と一致した。

実施例 5

( 1 ) NMR

実施例 2— （3) で得たヒドロキシシクロペン夕ノンジァステレオマー A及び Bをそれそれ重水に溶解して 'H— NMRスぺクトルと¹³ C— NMRスぺクトルを JNM— Α 5 00 (日本電子社製）を用いて測定した。その結果を以下に示す

Ή-NM

ヒドロキシシクロペンタノンジァステレオマー A

δ 2. 42 ( 1 Η, dd， J = 2. 0， 20. 0H z, 5— H) ， 2. 5 3 ( 1 H, dd, J = 5. 5 , 20. 0 H z， 5 -H) , 3. 9 1 ( 1 H， dd, J = 4. 0, 10. 5， 3 -H) , 4. 23 ( 1 H, d d, J = 2. 0, 1 0. 5 H z， 2 -H) , 4. 27 ( 1 H, d d， J = 4. 0， 5. 5 H z , 4 -H) ヒドロキシシクロペンタノンジァステレオマ一 B

δ 2. 1 3 ( 1 Η, d d， J = 9. 0， 20. OH z, 5 -H) , 2. 8 6 ( 1 H, dd d， J = 2. 5， 8. 5 , 20. OH z, 5 -H) , 3. 76 ( 1 H, dd, J = 8. 5, 1 0. 0， 3-H) , 4. 04 ( 1 H， d d, J = 2. 5 , 10. 0 H z, 2 -H) , 4. 1 3 ( 1 H, d dd, J = 8. 5 , 8. 5 , 9. 0H z, 4-H)

HODの化学シフト値を 4. 6 5 ppmとして表した。

ヒドロキシシクロペン夕ノンジァステレオマ一 A、 Bのどちらか一方が式〔III 〕に示す構造を持つ物質とその対掌体、他方が式〔IV〕に示す構造を持つ物質とその対掌体である。

'Η— NMRスぺクトルを図 7及び図 8に示す。すなわち図 7はヒドロキシシクロペンタノンジァステレオマー Αの、図 8はヒドロキシシクロペン夕ノンジァステレオマ一 Bの — NMRスペクトルを表す図であり、横軸は化学シフト値 (ppm)、縦軸はシグナルの強度を示す。

¹³C— NMR

ヒドロキシシクロペンタノンジァステレオマ一 A

(544. 2 (5-C) , 67. 4 (4— C) , 76. 4 (3 - C) , 78. 1 (

2- C) , 218. 1 ( 1 -C)

ヒドロキシシクロペンタノンジァステレオマ一 B

(543. 5 (5-C) , 69. 5 (4-C) , 80. 7 (2— C) ， 80. 8 (

3- C) , 21 . 7 (1一 C)

ジォキサンの化学シフト値を 67. 4 ppmとして表した。

ヒドロキシシクロペン夕ノンジァステレオマ一A， Bのどちらか一方が式〔III

〕に示す構造を持つ物質とその対掌体、他方が式〔IV〕に示す構造を持つ物質とその対掌体である。

¹³C— NMRスぺクトルを図 9及び図 10に示す。すなわち図 9はヒドロキシシクロペンタノンジァステレオマ一 Aの、図 10はヒドロキシシクロペン夕ノンジァステレオマ一 Bの¹³ C— NMRスぺクトルを表す図であり、横軸は化学シフト値（ppm) 、縦軸はシグナルの強度を示す。

(2) GC/MS

実施例 2_ (3) で得たヒドロキシシクロペン夕ノンジァステレオマ一 Aの 2 OmM水溶液とヒドロキシシクロペン夕ノンジァステレオマー Bの 4 OmM水溶液各々 0. 5 1を減圧下乾固し、トリメチルクロロシラン（ジ一エルサイェンス社製）： N, 0—ビス（トリメチルシリル）ーァセ夕ミド（ジ一エルサイェンス社製）：無水ピリジン（シリレーショングレード、ピアス社製） =4 : 1 : 4 混合液 100〃 1に溶解して室温で 20分間トリメチルシリル化した。この試料 2 1を以下に示すガスクロマトグラフィー/質量分析（GC/MS) によって分析した。

カラム： TC一 1 (3 Omx 0. 25mm、ジ一エルサイエンス社製）カラム温度： 100°C→160°C (4°C/分）

160 °C→ 300 °C ( 1 6°C/分）

300°C (5分）

キヤリヤーガス： He 1. 2 ml/分

その結果を図 1 1〜図 14に示す。すなわち図 1 1はトリメチルシリル化されたヒドロキシシクロペンタノンジァステレオマー Aのガスクロマトグラム、図 1 2はトリメチルシリル化されたヒドロキシシクロペンタノンジァステレオマ一 B のガスクロマトグラムを表す図であり、横軸はスキャン番号、縦軸はイオン強度を示す。図 13と図 14はそれそれ図 1 1のビーク（ 1 ) と図 12のビーク（ 2 ) のマススぺクトルを表す図であり、横軸は M/Z、縦軸は相対強度（％) を示す。

その結果、図 11のピーク（1) と図 12のビーク（2) は共に M/Z 34 9 [M + H] + を示し、これはトリメチルシリル化されたヒドロキシシクロペン夕ノンの構造から計算される値と一致した。

実施例 6

150、 1 10、 70又は 4 ヒドロキシシクロペン夕ノンジァステレオマ一 A水溶液、 200、 150、 100又は 60 /Mヒドロキシシクロペンタノンジァステレオマー B水溶液、あるいは対照として水 10 1を 96穴マイクロタイ夕一プレートの各ゥヱルに添加した。前骨髄性白血病細胞株 HL— 60 (A TCC CCL— 240) を 10%ゥシ胎児血清を含む RPMI 1640培地に 5 X 10⁴ 個/ mlとなるように懸濁し、 90 1ずつ上記マイクロタイ夕ープレートの各ゥエルに分注し、 5% C0₂ 存在下 37°Cで 48時間培養した。 5 mg/mlの 3— （4, 5—ジメチルチアゾ一ルー 2—ィル）一2, 5—ジフエニルテトラゾリゥムブロミド（MT T；シグマ社製）リン酸緩衝食塩水溶液 10 / 1を加えて更に 4時間培養を続けた後、顕微鏡で細胞の生育状態を観察した。また、 0 . 0 4 N H C 1含有 2—プロパノール 1 0 0 z lを加えてよくかくはんし、 5 9 0 n mにおける吸光度を測定した。

その結果、 1 1 0 /M以上のヒドロキシシクロペン夕ノンジァステレオマー A 添加区分（終濃度 1 1 /M) 及び 1 0 0 / M以上のヒドロキシシクロベン夕ノンジァステレオマ一 B添加区分（終濃度 1 0 / M) において細胞の増殖が見られなかった。よって、ヒドロキシシクロペン夕ノンジァステレオマ一 Aは 1 1 /M濃度で、ヒドロキシシクロペン夕ノンジァステレオマ一 Bは 1 0〃M濃度でH L— 6 0細胞の増殖を完全に抑制することが明らかになった。

発明の効果

本発明により制がん作用、がん細胞増殖抑制作用、がん細胞分化誘導作用、ァポトーシス誘発作用、抗菌作用、抗ウィルス作用、肝機能改善作用等の生理活性を有し、安全性の高いヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩が提供され、かつ、該化合物を含有する生理活性機能を有する医薬、食品及び飲料が提供される。

本発明により、ヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩は天然由来の原料から簡便に、効率良く製造することが可能となった。本発明により提供されるヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体は又はそれらの塩の種々の生理活性、制がん作用、抗菌作用、アポト一シス誘発作用、抗ウィルス作用、肝機能改善作用等によって、発がん予防、がん抑制効果、ウィルス性疾患予防、治療、アルツハイマー病予防効果、肝機能改善効果を有する医薬として使用することが可能となり、該医薬は生体の恒常性の維持、特に胃腸健康保持に有用な医薬となる。

また本発明により、食品又は飲料中に生理活性を有するヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩の適量を含有させることが可能となった。このヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩が有する種々の生理活性、制がん作用、分化誘導作用、異常細胞の増殖抑制作用、アポト一シス誘発作用、抗ウィルス作用、抗菌作用、肝機能改善作用等によつて、本発明により提供される食品又は飲料は発がん予防、制がん効果、ウィルス性疾患予防、抗菌効果、アポト一シス誘発作用等の生体の恒常性（ホメォス夕シス）維持機能を有する健康食品又は飲料であり、本発明により、胃腸健康保持に有用な機能性物質入りの食品又は飲料が提供される。また、ヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩を添加することにより、食品又は飲料の抗菌力を簡便に増強することができ、ヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩を有効成分とする製剤は食品又は飲料の防腐剤としても極めて有用である。

Claims

請求の範囲

1. 下記式〔I〕で表される 2 , 3 , 4—トリヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩。〕

2. 下記工程を包含することを特徴とする式〔I〕で表される 2 , 3 , 4—トリヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩の製造方

( A) ：下記（a ) 、（b )、（c ) より選択される少なくとも 1種の物を加熱処理し、 2， 3 , 4—トリヒドロキシシクロペン夕ノンを生成させる工程、

( a ) ゥロン酸又はゥロン酸誘導体、

( B ) ：必要に応じて、得られた加熱処理物より 2 , 3， 4一トリヒドロキシシクロペン夕ノンを単離する工程。

3. ゥロン酸がガラクヅロン酸、グルクロン酸、グルロン酸、マンヌロン酸及び/又はィズロン酸である請求の範囲 2記載の製造方法。

4. ゥロン酸誘導体が、ゥロン酸の塩、あるいはゥロン酸ラクトン、ゥロン酸エステル、ゥロン酸アミド又はそれらの塩である請求の範囲 2記載の製造方法。

5. 糖化合物がぺクチン、ぺクチン酸、アルギン酸、ヒアルロン酸、へパリン、フコィダン、コンドロイチン硫酸、コンドロイチン、デルマタン硫酸及び/又はその分解物から選択される糖化合物である請求の範囲 2記載の製造方法。

6. 加熱処理物が 6 0〜3 5 0 °C、数秒〜数日加熱処理して得られる加熱処理物である請求の範囲 2〜 5のいずれか 1項に記載の製造方法。

7. 加熱処理物が酸性〜中性の条件下で加熱処理を行って得られる加熱処理物である請求の範囲 2〜 6のいずれか 1項に記載の製造方法。

8. 下記式〔II〕で表される 4 , 5—ジヒドロキシー 2—シクロペンテン一 1 一オンを下記式〔I〕で表される 2， 3 , 4—トリヒドロキシシクロペン夕ノンに変換させる工程を包含することを特徴とする式〔I〕で表される 2 , 3 , 4 - トリヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩の製造方法。

〔II〕

〔I〕

9. 請求の範囲 1記載の 2 , 3 , 4—トリヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも 1以上の化合物を有効成分として含有することを特徴とする医薬。

10. 医薬が制がん剤である請求の範囲 9記載の医薬。

11. 請求の範囲 1記載の 2 , 3 , 4—トリヒドロキシシクロペン夕ノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも 1以上の化合物を含有することを特徴とする食品又は飲料。