KR100597233B1

KR100597233B1 - 신규한 세스키테르펜계 화합물 및 그 제조방법

Info

Publication number: KR100597233B1
Application number: KR1020040013436A
Authority: KR
Inventors: 유익동; 김원곤; 김진우; 유인자; 김종평
Original assignee: 한국생명공학연구원
Priority date: 2004-02-27
Filing date: 2004-02-27
Publication date: 2006-07-06
Also published as: KR20050087556A

Abstract

본 발명은 신규한 세스키테르펜계 화합물 및 그 제조방법에 관한 것으로, 상기 세스키테르펜계 화합물은 볼레투논 A 또는 볼레투논 B인 것을 특징으로 한다.

본 발명의 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 A, 볼레투논 B)은 DPPH 라디칼 소거에 의한 항산화 활성이 우수함으로, 활성산소가 과량으로 축적되어 발병되는 알콜성 간염 등의 간장질환, 뇌혈관 장해로 인한 뇌졸중, 심근경색, 당뇨병성 혈관장애, 고지혈증, 급성염증, 류마티스 및 암 등 각종 인체 질환의 예방 및 치료뿐만 아니라 노화방지에도 유용하게 사용할 수 있다.

Description

신규한 세스키테르펜계 화합물 및 그 제조방법{New sesquiterpene compound and a process for the preparation}

도 1은 본 발명의 볼레투논 A의 수소핵자기 공명 스펙트럼을 나타낸 도이다.

도 2는 본 발명의 볼레투논 A의 탄소핵자기 공명 스펙트럼을 나타낸 도이다.

도 3은 본 발명의 볼레투논 B의 수소핵자기 공명 스펙트럼을 나타낸 도이다.

도 4는 본 발명의 볼레투논 B의 HBMC 스펙트럼을 나타낸 도이다.

각종 산화반응, 화학약품, 식품, 인체질환 및 방사선 등에 의해 슈퍼옥사이드(superoxide, O₂ ^-), 하이드록실라디칼(hydroxyl radical, ·OH), 및 과산화수소 (H₂O₂) 등과 같은 반응성이 큰 강한 활성산소와 유리 라디칼(free radical) 등이 생 체 내에 생성되면 이들에 의해서 불포화 지방산이 다량 함유된 세포막의 지질이 산화되어 세포막에 지질 과산화물이 생성되게 된다. 세포막에 지질과산화물이 축적하면 세포막의 유동성과 기능성이 저하됨으로 세포의 전체적인 기능이 억제되고 세포의 구조도 변화하는 등 조직상에 국소적인 장해가 생기면서 각종 질환이 유발되게 되는 것이다. 또한 활성산소와 유리라디칼은 세포 구성성분인 핵산, 당 등을 변형 또는 파괴함으로써 암을 비롯하여 알콜성 간염 등의 간장질환, 뇌혈관 장해로 인한 뇌졸중, 심근경색, 당뇨병성 혈관장애, 고지혈증, 급성염증, 류마티스 질환 등 각종 인체 질환의 원인이 되고 있다. 또한 활성산소는 식품에 다량으로 존재하는 불포화 지방산 등과 반응하여 산패의 원인이 되어 식품의 안전성 및 고품질 유지에 결정적인 결함을 초래하기도 하며 각종 산화물에 의한 동식물의 산화적 스트레스, 미생물 발효시 발생하는 활성산소에 의한 수율저하 등 많은 분야에서 활성산소에 의한 문제가 야기되고 있다.

따라서 강력하면서도 독성이 없는 항산화 활성을 갖는 새로운 물질의 발견은 각종 질병의 치료제 개발이나 노화방지용 화장품첨가제 및 식품첨가제 등으로 매우 유용하게 활용될 것이다.

지금까지 지질과산화 저해제로는 BHT(butylated hydroxy toluene) 및 BHA (butylated hydroxy anisol) 등과 같은 합성 항산화제가 사용되어 왔으나, 이들 BHT나 BHA는 지질과산화 저해활성은 우수하나 암 또는 기형을 유발할 수 있는 가능성이 매우 높아 계속적으로 사용할 수 없는 단점이 있었다. 따라서 천연물로부터 새로운 항산화 활성물질을 창출하여 독성이나 부작용이 전혀 없는 항산화제를 개발 하는 것이 필요하다.

한편, 미생물 대사산물로부터 탐색된 항산화 물질은 약 20여 종이 알려져 있으며, 지금까지 보고된 미생물로부터 유래된 항산화 활성물질은 대부분 스트렙토마이세스(Streptomyces)에서 유래된 것이 대부분이며, 카바졸(carbazole)계 화합물이 가장 많이 보고되었다. 대표적인 화합물들은 스트렙토마이세스 엑스폴리아투스 (Streptomyces exfoliatus) 균체 아세톤 추출물로부터 발견된 카르퀴노스타틴 (carquinostatin) 외에도 안티오스타틴(antiostatin), 카라조스타틴 (carazostatin), 네오카로조스타틴(neocarozostatin), 카바조마이신(cabazomycin) 등이 보고되었다. 또한 페나진(phenazine)계 항산화 물질로는 벤토시아닌 (benthocyanin), 벤토포에닌(benthophoenin), 페나조비리딘(phenazoviridin) 등이 밝혀졌으며 기타 티아졸계 화합물로 티아졸스타틴과 나프테르핀 피롤로스타틴 등이 보고되었다.

국내 지질과산화 저해물질의 탐색연구는 대부분 식품소재를 재료로하여 항산화 활성의 유무 및 활성정도를 측정하고 식품보호제로서의 이용에 국한되어 있어 활성물질의 추출, 정제 및 구조해석 등의 연구는 매우 미흡한 실정이었다.

1990년대 초 한국생명공학 연구원에서 본격적으로 지질과산화 저해활성물질을 탐색하는 연구가 시작되어 토양방선균 배양액 또는 천연물로부터 지질과산화 저해활성물질을 조사하였으며, 스트렙토마이세스 균주로부터 페닐티아졸린 (phenylthiazoline)계 신규 화합물인 4-메틸애루진산(4-methylaeruginic acid), 애그로사이브 실린드라세(Agrocybe cylindracea) 균주로부터 강력한 자유라디칼 제거 제 활성을 나타내는 새로운 인돌 알칼로이드 화합물, 폴리오젤루스 멀티플렉스 (Polyozellus multiplex) 균주로부터 테르페닐계 신규 화합물 폴리오젤린 (polyozellin), 국내 자생 약용식물인 울머스 다비디아나(Ulmus davidiana)로부터는 세스키테르펜 o-나프톨퀴논(sesquiterpene o-naphthoquinone)계 신규 화합물인 다비디아논(davidianone)을 발견하였다. 또한, 스트렙토마이세스 니트로스포리우스 (Streptomyces nitrosporeus) 균주로부터 벤자아마이드(benzamide)계 화합물인 벤자스타틴(benzastatin) A, B, C, D, E, F 및 G의 화합물을 발견하였다.

이에, 본 발명자들은 미생물, 버섯류 또는 약용식물 등 각종 천연물로부터 새로운 항산화 활성물질을 탐색하던 중, 오대산에 자생하고 있는 볼레투스 칼로푸스(Boletus calopus) 버섯의 추출물로부터 분리한 새로운 세스키테르펜 (sesquiterpene)계 화합물에서 우수한 항산화 활성이 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 신규한 세스키테르펜계 화합물 및 그 제조방법을 제공하고자 한다.

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 신규한 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 A) 및 하기 화학식 2로 표시되는 신규한 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 B)을 제공한다.

본 발명의 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 A, 볼레투논 B)은 약학적으로 허용되는 염의 형태로 사용될 수 있으며, 통상의 방법에 의해 제조되는 모든 염, 수화물 및 용매화물이 포함된다.

또한, 본 발명은 상기 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 A, 볼레투논 B)의 제조방법을 제공한다.

본 발명의 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 A, 볼레투논 B)은 볼레투스 칼로푸스(Boletus calopus) 버섯으로부터 추출·분리·정제하여 사용하였으며, 통상적인 모든 방법에 의해 얻을 수 있다.

본 발명에 따른 볼레투스 칼로푸스 버섯으로부터 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 A, 볼레투논 B)의 추출, 분리 및 정제방법은 다음과 같다.

볼레투스 칼로푸스 버섯 자실체를 세척하여 건조시킨 후, 분쇄기로 잘게 마쇄하여 분말로 만든다. 볼레투스 칼로푸스 버섯 자실체 분말을 80% 메탄올로 추출하여 농축한 후, 에틸아세테이트로 재추출하여 에틸아세테이트층과 물층으로 분리한다.

상기에서 얻은 에틸아세테이트 추출물을 클로로포름과 메탄올의 혼합용매 (50:1, 25:1, 15:1, 5:1)를 사용하여 농도구배 실리카겔 칼럼 크로마토그래피, 세파덱스 LH-20 컬럼 크로마토그래피, 역상(ODS) 컬럼 크로마토그래피로 순차적으로 분리한다.

상기 분리된 활성분획을 67% 메탄올을 용매로하여 ODS TLC를 실시한 후, 메탄올과 물의 혼합용매(45:55)를 사용하여 HPLC를 실시하여 순수하게 정제된 흰색 분말의 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 A, 볼레투논 B)을 얻는다.

또한, 본 발명은 상기 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 A, 볼레투논 B)을 유효성분으로 하는 활성산소 소거제, 및 활성산소가 과량으로 축적되어 발병되는 질환의 예방 및 치료용 조성물뿐만 아니라 노화방지용 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 볼레투스 칼로푸스 버섯 자실체 추출물로부터 분리·정제된 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 A, 볼레투논 B)은 DPPH 라디칼 소거에 의한 항산화 활성이 우수하다.

따라서, 본 발명의 조성물은 활성산소가 과량으로 축적되어 발병되는 알콜성 간염 등의 간장질환, 뇌혈관 장해로 인한 뇌졸중, 심근경색, 당뇨병성 혈관장애, 고지혈증, 급성염증, 류마티스 및 암 등 각종 인체 질환의 예방 및 치료뿐만 아니라 노화방지에도 유용하게 사용할 수 있다.

본 발명의 조성물은 상기 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 A, 볼레투논 B)에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.

본 발명의 조성물은 실제 임상투여 시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 화학식 1, 화학식 2의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카 카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.

투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다. 일일 투여량은 볼레투논 A(또는 볼레투논 B)가 약 0.1~100㎎/㎏ 이고, 바람직하게는 5~50㎎/㎏ 이며, 하루 일회 내지 수회에 나누어 투여하는 것이 더욱 바람직하다.

본 발명의 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 A, 볼레투논 B)을 랫트에 경구투여하여 독성 실험을 수행한 결과, 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 A, 볼레투논 B)의 50% 치사량(LD₅₀)은 적어도 1000㎎/㎏ 으로 나타나, 안전한 물질로 판단된다.

본 발명의 조성물은 활성산소가 과량으로 축적되어 발병되는 질환의 예방 및 치료뿐만 아니라 노화방지를 위하여 단독으로, 또는 수술, 호르몬 치료, 약물 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.

본 발명의 조성물은 활성산소가 과량으로 축적되어 발병되는 질환 및 노화방지의 개선을 목적으로 건강식품에 첨가될 수 있다. 본 발명의 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 A, 볼레투논 B)을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 볼레투논 A 또는 볼레투논 B를 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에는 본 발명의 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 A, 볼레투논 B)은 원료에 대하여 1~20 중량%, 바람직하게는 5~10 중량%의 양으로 첨가된 다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100㎖당 일반적으로 약 0.01~0.04g, 바람직하게는 약 0.02~0.03g 이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01~0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예 및 실험예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예 및 실험예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

실시예 : 볼레투스 칼로푸스로부터 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 A, 볼레투논 B)의 추출, 분리 및 정제

1. 볼레투스 칼로푸스로부터 추출

볼레투스 칼로푸스 버섯 자실체 1,800g을 세척하여 건조시킨 후, 분쇄기로 잘게 마쇄하여 분말로 만들었다.

볼레투스 칼로푸스 버섯 자실체 분말을 80% 메탄올 1.5ℓ에 넣어 실온에서 3일동안 방치한 후, 메탄올 용액을 교반시키고 여과지로 여과하여 액상을 분리하였다. 상기와 같은 추출과정을 모두 2번 반복하여 액상만을 모으고 감압하에서 농축하였다.

상기에서 얻은 메탄올 추출물을 에틸아세테이트로 재추출하여 에틸아세테이트층과 물층으로 분리하였다.

2. 에틸아세테이트 추출물의 분리 및 정제

상기 1에서 얻은 에틸아세테이트 추출물을 클로로포름과 메탄올의 혼합용매 (50:1, 25:1, 15:1, 5:1)를 사용하여 농도구배 실리카겔 칼럼 크로마토그래피를 사용하여 분리하였다.

상기 분리된 활성분획을 세파덱스 LH-20 컬럼 크로마토그래피, 역상(ODS) 컬럼 크로마토그래피로 순차적으로 분리하였다.

상기 분리된 활성분획을 67% 메탄올을 용매로하여 ODS TLC를 실시한 후, 메탄올과 물의 혼합용매(45:55)를 사용하여 HPLC를 실시하여 순수하게 정제된 흰색 분말의 세스키테르펜계 화합물을 얻었다. 이 때, 볼레투논 A는 5.0㎎, 볼레투논 B는 3.5㎎ 이었다.

3. 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 A, 볼레투논 B)의 구조 분석

상기 실시예를 통하여 얻은 물질은, VG 고분해능 GC/MS 분광기(VG high resolution GC/MS spectrometer, Election Ionization MS, Autospec-Ultima)를 사용하여 분자량 및 분자식을 결정하였으며, 선광도는 편광기(Jasco DIP-181 digital polarimeter)를 사용하여 측정하였다. 또한 핵자기공명(NMR) 분석(Bruker AMX 300)을 통하여 ¹H NMR, ¹³C NMR, 호모-코지(HOMO-COSY), HMQC(¹H-Detected heteronuclear Multiple-Quantum Coherence), HMBC(Heteronuclear Multiple-Bond Coherence), DEPT(Distortionless Enhancement by Polarization) 스펙트럼을 얻고, 분자구조를 결정하였다(도 1 ~ 도 4).

측정 결과는 하기와 같으며, 화학식 1의 화합물은 볼레투논 A, 화학식 2의 화합물은 볼레투논 B의 신규한 화합물로 동정하였다.

[볼레투논 A]

1) 물성 : 흰색 분말

2) 융점 : 255℃

3) 선광도 : [α]_D ²⁵ +50 (c=0.6㎎/㎖, 메탄올)

4) 질량분석치 : HRESI-MS [(M+Na)⁺, m/z 실측치 349.1254, 계산치 349.1257]

5) 분자식 : C₁₆H₂₂O₇

6) 분자량 : 326

7) 자외선 흡수 스펙트럼 (UV max ㎚ (ε) in 메탄올) : 236 (14855)

8) 적외선 흡수 스펙트럼(IR max in KBr) : 3422, 2923, 2853, 1735, 1668, 1598, 1459 ㎝^-1

9) ¹H-NMR(DMSO-d₆, 600MHz) δ 6.94(m), 5.92(s), 4.49(d, J = 9.6㎐), 4.12(s), 4.04(dd, J = 10.5㎐, 3.6㎐), 4.01(d, J = 13.5㎐), 3.94(d, J = 13.5 ㎐), 3.88(t, J = 10.5㎐), 3.26(s), 2.61(dd, J = 20.8㎐, 5.6㎐), 2.50(dd, J = 20.8㎐, 2.3㎐), 2.14(m), 2.01(m), 1.42(s), 0.70(d, J = 6.2㎐)

10) ¹³C-NMR(DMSO-d₆, 125MHz) δ 198.7(C-1, s), 171.3(C-9, s), 146.5(C-3, d), 133.1(C-2, s), 106.3(C-10_a, s), 76.2(C-5, d), 73.2(C-9_a, d), 71.5(C-7, t), 68.6(C-1', t), 58.4(C-1'-OCH₃, q), 56.0(C-4_a, s), 45.9(C-5_a, d), 29.8(C-6, d), 28.1(C-4, t), 21.7(C-2', q), 17.0(C-3', q)

[볼레투논 B]

1) 물성 : 흰색 분말

2) 융점 : 282℃

3) 선광도 : [α]_D ²⁵ +32 (c=1.2㎎/㎖, 메탄올)

4) 질량분석치 : HRESI-MS [(M+Na)⁺, m/z 실측치 319.1132, 계산치 319.1158]

5) 분자식 : C₁₅H₂₀O₆

6) 분자량 : 296

7) 자외선 흡수 스펙트럼 (UV max ㎚ (ε) in 메탄올) : 242 (21009)

8) 적외선 흡수 스펙트럼(IR max in KBr) : 3429, 2927, 1667, 1411 ㎝^-1

9) ¹H-NMR(DMSO-d₆, 600MHz) δ 6.77(br, s), 4.34(d, J = 3.6㎐), 4.10(t, J = 11.5㎐), 3.77(s), 3.35(dd, J = 11.5㎐, 6.8㎐), 2.57(m), 2.56-2.46(d, J = 19.7㎐), 2.08(m), 1.63(s), 0.94(s), 0.83(d, J = 7.1㎐)

10) ¹³C-NMR(DMSO-d₆, 125MHz) δ 198.6(C-1, s), 173.0(C-9, s), 145.0(C-3, d), 131.7(C-2, s), 107.0(C-10_a, s), 77.4(C-9_a, d), 71.9(C-5, d), 66.6(C-7, t), 54.5(C-4_a, s), 46.0(C-5_a, d), 30.1(C-4, t), 27.6(C-6, d), 21.0(C-2', q), 15.0(C-3', q)

실험예 1 : 본 발명의 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 A, 볼레투논 B)의 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH) 라디칼 소거능력 측정

본 발명의 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 A, 볼레투논 B)의 DPPH 라디칼 소거능력을 알아보기 위하여, 다음과 같은 실험을 수행하였다.

에탄올에 녹인 0.15mM DPPH 용액 1㎖와, 메탄올에 녹인 상기 실시예에서 제조한 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 A, 볼레투논 B)의 각 농도의 시료 0.1㎖를 섞은 후 30분간 방치한 다음 517㎚에서 흡광도를 측정하였다.

DPPH 라디칼 소거능력은 광흡수도와 시료를 넣지 않고 메탄올만을 넣은 대조군의 광흡수도를 측정하여 다음 식에 의하여 산출하였다. 양성 대조군으로는 BHA (Butylated hydroxyanisol)와 비타민 E를 사용하였다.

라디칼 소거율(%) = [(A-B)/A] ×100

※ A : 시료를 넣지 않은 것의 흡광도

B : 시료를 넣은 것의 흡광도

결과는 표 1에 나타내었다.

	DPPH 라디칼 소거능력			분자량
	IC₅₀(㎍/㎖)	중량비(%)	몰비(%)	분자량
볼레투논 A	3.62	284	215	326
볼레투논 B	3.60	286	197	296
BHA	2.36	436	183	180
비타민 E	10.28	100	100	430

표 1에 나타난 바와 같이, 본 발명의 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 A, 볼레투논 B)의 DPPH 라디칼 소거능력은 IC₅₀가 각각 3.62㎍/㎖ 및 3.60㎍/㎖로, DPPH 라디칼 소거에 의한 항산화 활성이 우수함을 알 수 있다.

실험예 2 : 급성 독성실험

본 발명의 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 A, 볼레투논 B)의 급성 독성을 알아보기 위하여, 하기와 같은 방법으로 급성독성실험을 하였다.

실험동물로 6주령의 특정병원부재(SPF) SD계 랫트를 사용하였으며, 군당 2마 리씩 나누었다. 상기 실시예에서 제조한 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 A, 볼레투논 B)을 각각 0.5% 메틸셀룰로오스 용액에 현탁하여 1g/㎏/15㎖의 용량으로 단회 경구투여 하였다.

시험물질 투여후 동물의 폐사여부, 임상증상, 체중변화를 관찰하고 혈액학적 검사와 혈액생화학적 검사를 실시하였으며, 부검하여 육안으로 복강장기와 흉강장기의 이상여부를 관찰하였다.

시험결과, 시험물질을 투여한 모든 동물에서 특기할 만한 임상증상은 없었고 폐사된 동물도 없었으며, 또한 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사, 부검소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다.

이상의 결과 실험된 화합물은 모두 랫트에서 1000㎎/㎏까지 독성변화를 나타내지 않았으며, 경구투여 최소치사량(LD₅₀)은 적어도 1000㎎/㎏ 이상인 안전한 물질로 판단되었다.

하기에 본 발명의 조성물을 위한 제제예를 예시한다.

제제예 1 : 약학적 제제의 제조

1. 정제의 제조

본 발명의 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 A, 볼레투논 B) 또는 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 정제는 하기와 같은 방법으로 제조하였다.

상기 실시예의 화합물을 체질하고, 락토오스, 전분 및 전젤라틴화 옥수수 전 분과 혼합한 후, 적합한 용적의 정제수를 첨가하고 분말로 과립화시켰다. 과립을 건조시킨 후 스테아르산마그네슘과 혼합하고 압착하여 정제를 얻었다.

상기 정제의 구성성분은 하기와 같다.

볼레투논 A(또는 볼레투논 B) 5.0㎎

락토오스 BP 150.0㎎

전분 BP 30.0㎎

전젤라틴화 옥수수 전분 BP 15.0㎎

스테아르산 마그네슘 1.0㎎

2. 캡슐제의 제조

본 발명의 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 A, 볼레투논 B) 또는 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 캡슐제는 하기와 같은 방법으로 제조하였다.

상기 실시예의 화합물을 일정량의 부형제 및 스테아르산마그네슘과 혼합하였다. 얻어진 혼합물을 젤라틴 캡슐 중에 충전하여 캡슐을 수득하였다.

상기 캡슐제의 구성성분은 하기와 같다.

볼레투논 A(또는 볼레투논 B) 5.0㎎

전분 1500 100.0㎎

스테아르산마그네슘 BP 1.0㎎

3. 주사액제의 제조

본 발명의 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 A, 볼레투논 B) 또는 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 주사액제는 하기와 같은 방법으로 제조하였다.

적당한 용적의 주사용 염화나트륨 BP 중에 상기 실시예의 화합물을 용해시키고, 생성된 용액의 pH를 묽은 염산 BP를 사용하여 pH 3.5로 조절하고, 이어서 주사용 염화나트륨 BP를 사용하여 용적을 조절하고 충분히 혼합하였다. 용액을 투명유리로된 5㎖ 타입 I 앰플 중에 충전시키고, 유리를 용해시킴으로써 공기의 상부 격자하에 봉입시키고, 이어서 120℃로 15분 이상 오토클래이브시켜 살균하여 주사액제를 얻었다.

상기 주사액제의 구성성분은 하기와 같다.

볼레투논 A(또는 볼레투논 B) 100㎍/㎖

묽은 염산 BP pH 3.5로 될 때까지

주사용 염화나트륨 BP 최대 1㎖

제제예 2 : 식품의 제조

본 발명의 볼레투논 A(또는 볼레투논 B)를 포함하는 식품들을 다음과 같이 제조하였다.

1. 조리용 양념의 제조

볼레투논 A(또는 볼레투논 B) 0.2 ~ 10 중량%로 건강 증진용 조리용 양념을 제조하였다.

2. 토마토 케찹 및 소스의 제조

볼레투논 A(또는 볼레투논 B) 0.2 ~ 1.0 중량%를 토마토 케찹 또는 소스에 첨가하여 건강 증진용 토마토 케찹 또는 소스를 제조하였다.

3. 밀가루 식품의 제조

볼레투논 A(또는 볼레투논 B) 0.1 ~ 5.0 중량%를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.

4. 스프 및 육즙(gravies)의 제조

볼레투논 A(또는 볼레투논 B) 0.1 ~ 1.0 중량%를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.

5. 그라운드 비프(ground beef)의 제조

볼레투논 A(또는 볼레투논 B) 10 중량%를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.

6. 유제품(dairy products)의 제조

볼레투논 A(또는 볼레투논 B) 0.1 ~ 1.0 중량%를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.

7. 선식의 제조

현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다.

검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다.

볼레투논 A(또는 볼레투논 B)를 진공 농축기에서 감압·농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.

상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 볼레투논 A(또는 볼레투논 B)의 건조분말을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.

곡물류(현미 30중량%, 율무 15중량%, 보리 20중량%),

종실류(들깨 7중량%, 검정콩 8중량%, 검정깨 7중량%),

볼레투논 A(또는 볼레투논 B)의 건조분말(1 중량%),

영지(0.5중량%),

지황(0.5중량%)

제제예 3 : 음료의 제조

1. 탄산음료의 제조

설탕 5~10%, 구연산 0.05~0.3%, 카라멜 0.005~0.02%, 비타민 C 0.1~1%의 첨가물을 혼합하고, 여기에 79~94%의 정제수를 섞어서 시럽을 만들고, 상기 시럽을 85~98℃에서 20~180초간 살균하여 냉각수와 1:4의 비율로 혼합한 다음 탄산가스를 0.5~0.82% 주입하여 볼레투논 A(또는 볼레투논 B)를 함유하는 탄산음료를 제조하였다.

2. 건강음료의 제조

액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와 볼레투논 A(또는 볼레투논 B)를 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 건강음료를 제조하였다.

3. 야채쥬스의 제조

볼레투논 A(또는 볼레투논 B) 0.5g을 토마토 또는 당근 쥬스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 야채쥬스를 제조하였다.

4. 과일쥬스의 제조

볼레투논 A(또는 볼레투논 B) 0.1g을 사과 또는 포도 쥬스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 과일쥬스를 제조하였다.

본 발명의 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 A, 볼레투논 B)은 DPPH 라디칼 소거에 의한 항산화 활성이 우수하다.

Claims

하기 화학식 1로 표시되는 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 A).

<화학식 1>
하기 화학식 2로 표시되는 세스키테르펜계 화합물(볼레투논 B).

<화학식 2>
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 세스키테르펜계 화합물은 볼레투스 칼로푸스(Boletus calopus) 버섯으로부터 추출·분리·정제하여 얻은 것임을 특징으로 하는 세스키테르펜계 화합물.
1) 건조된 볼레투스 칼로푸스 버섯 자실체 분말을 메탄올로 추출하여 농축한 후, 에틸아세테이트로 재추출하는 단계,

2) 상기 1)단계에서 얻은 에틸아세테이트 추출물을 클로로포름과 메탄올의 혼합용매(50:1, 25:1, 15:1, 5:1)를 사용하여 농도구배 실리카겔 칼럼 크로마토그래피, 세파덱스 LH-20 컬럼 크로마토그래피, 역상(ODS) 컬럼 크로마토그래피로 순차적으로 분리하는 단계,

3) 상기 2)에서 분리된 활성분획을 67% 메탄올을 용매로하여 ODS TLC를 실시한 후, 메탄올과 물의 혼합용매(45:55)를 사용하여 HPLC를 실시하여 정제하는 단계로 이루어지는,

제 1항 또는 제 2항의 세스키테르펜계 화합물의 제조방법.
제 1항 또는 제 2항의 세스키테르펜계 화합물을 유효성분으로 하는 활성산소 소거제.
제 1항 또는 제 2항의 세스키테르펜계 화합물을 유효성분으로 하는 활성산소가 과량으로 축적되어 발병되는 간장질환, 뇌혈관 장해로 인한 뇌졸중, 심근경색, 당뇨병성 혈관장애, 고지혈증, 급성염증, 류마티스의 예방 및 치료용 약학 조성물.
제 1항 또는 제 2항의 세스키테르펜계 화합물을 유효성분으로 하는 활성산소가 과량으로 축적되어 발병되는 간장질환, 뇌혈관 장해로 인한 뇌졸중, 심근경색, 당뇨병성 혈관장애, 고지혈증, 급성염증, 류마티스의 예방 및 치료용 식품 조성물.
제 1항 또는 제 2항의 세스키테르펜계 화합물을 유효성분으로 하는 노화방지용 약학 조성물.
제 1항 또는 제 2항의 세스키테르펜계 화합물을 유효성분으로 하는 노화방지용 식품 조성물.