KR100593793B1 - 신규한 리그난계 화합물, 그 제조방법 및 이를유효성분으로 하는 심장순환계 질환의 예방 및 치료용조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 신규한 리그난계 화합물, 그 제조방법 및 이를 유효성분으로 하는 심장순환계 질환의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 리그난계 화합물인 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드는 저밀도 지질 단백질에 대한 항산화 활성효과가 매우 우수함으로, 저밀도 지질 단백질의 산화에 의해 유발되는 것으로 알려진 고지혈증, 관상동맥 심장병, 동맥경화증 및 심근경색증과 같은 심장순환계 질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용할 수 있다.

Description

신규한 리그난계 화합물, 그 제조방법 및 이를 유효성분으로 하는 심장순환계 질환의 예방 및 치료용 조성물{Novel lignan-type compound, the preparation method thereof and composition comprising the same for prevention and treatment of cardiovascular disease}
본 발명은 신규한 리그난계 화합물, 그 제조방법 및 이를 유효성분으로 하는 심장순환계 질환의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.
심장순환계 질환의 대표적인 질환인 동맥경화증은 동맥이 비후되고 경화되어 탄력을 잃고 약해진 것으로서, 노화와 더불어 발생하는 주요 질환 중의 하나이다. 동맥경화는 뇌동맥 또는 관상동맥에서 일어나기 쉬운데, 뇌동맥경화증의 경우에는 두통, 현기증, 정신장애를 나타내고 뇌연화증의 원인이 되며, 관상동맥경화증의 경우에는 심장부에 동통과 부정맥을 일으켜 협심증, 심근경색 등의 원인이 되는 것으로 알려져 있다. 또한 이로 인해 고혈압, 심장병, 뇌일혈 등이 유발되어, 동맥경화증으로 인한 질병이 현대 사회에 있어, 특히 50~60대의 남성들에게 가장 큰 사망요인으로 부각되고 있다.
동맥경화의 발병 요인으로는 여러 가지가 알려져 있으나, 그 중에서도 특히 저밀도 지질 단백질(low density lipoprotein, LDL)이 산화되어 생성되는 산화된 저밀도 지질 단백질(Ox-LDL)이 가장 주요한 발병 요인으로 지적되고 있다 (Steinberg. D. et al., N. Engl. J. Med., 320, 915-924 (1989)). 저밀도 지질 단백질은 혈중 콜레스테롤을 운반하는 단백질 중 하나로서, 이것이 산화되면 본래의 기능을 하지 못하고 혈관 내에서 대식세포(macrophage)에 의해 작은 거품세포로 변환되는데, 이 거품세포는 혈관 내피세포로 침투되어 평활근을 비후시킨다. 또한 산화된 지질 단백질은 대식세포를 동맥벽에 머무르게 하므로 혈관 내피에 지방선이 형성되고, 이로 인해 동맥경화증이 유발된다.
현재 동맥경화증 치료제로 사용되고 있는 프로부콜(Probucol), N,N'-디페닐렌디아민(N,N'-diphenylenediamine), 페놀계 합성 항산화제인 BHA (butylatedhydroxyanisol)와 BHT(butylated hydroxy toluene)는 LDL 콜레스테롤을 감소시키고, 산화정도를 약화시키며 병변형성을 감소시켜 항산화력은 우수하나, 부작용이 많아 사용이 제한되고 있다.
한편, 삼백초(三白草, Saururus chinensis Baill)는 삼백초과의 여러해살이 풀로서 중국에서는 예로부터 진통, 이뇨, 소염약으로 사용되어 왔다. 우리 나라에서는 약 10년 전에 삼백초가 제주도에서 자생하는 것이 처음으로 밝혀진 이래 민간에서 암치료 보조약, 순환기계 질환, 신경계 질환, 당뇨병 등의 만성 성인병 치료에 사용되어 왔다.
이에, 본 발명자들은 부작용이 적은 새로운 동맥경화증 치료제를 천연물에서 탐색하던 중, 삼백초로부터 분리해낸 리그난계 화합물에서 저밀도 지질 단백질에 대한 항산화 활성이 우수함을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 신규한 리그난계 화합물을 제공하고자 한다.
또한, 본 발명은 상기 리그난계 화합물의 제조방법을 제공하고자 한다.
또한, 본 발명은 상기 리그난계 화합물을 유효성분으로 하는 심장순환계 질환의 예방 및 치료용 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 신규한 리그난계 화합물인 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드를 제공한다.
Figure 112004013922713-pat00001
본 발명의 리그난계 화합물은 약학적으로 허용되는 염의 형태로 사용될 수 있으며, 통상의 방법에 의해 제조되는 모든 염, 수화물 및 용매화물이 포함된다.
또한, 본 발명은 리그난계 화합물인 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드의 제조방법은
1) 삼백초 뿌리 분말을 에틸아세테이트로 추출하는 단계, 및
2) 상기 1)에서 얻은 에틸아세테이트 추출물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 분리·정제하는 단계로 이루어진다.
본 발명의 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드를 삼백초로부터 추출·분리·정제하는 방법을 구체적으로 설명하면, 다음과 같다.
건조된 삼백초 뿌리 분말을 에틸아세테이트로 추출하여 감압하에서 농축한다. 이 에틸아세테이트 추출액을 저밀도 지질 단백질에 대한 항산화 활성을 측정한 결과 저밀도 지질 단백질에 대해 우수한 항산화 활성을 나타내므로, 이 추출액을 감압하에서 농축, 건조시켜 흑갈색의 유성 물질을 얻는다.
상기에서 얻은 에틸아세테이트 추출물을 n-헥산과 에틸세테이트의 혼합용매를 이동상으로 하여 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 분리한다. 이 때, 이동상으로는 n-헥산 : 에틸 아세테이트 = 90~10 : 10~90 (v/v)인 용매를 사용하는 것이 바람직하다.
상기 활성분획을 클로로포름과 메탄올의 혼합용매를 이동상으로 하여 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 분리한다. 이 때, 클로로포름 : 메탄올 = 100~0 : 95~5 (v/v)인 용매를 사용하는 것이 바람직하다.
상기 활성분획을 다시 클로로포름과 아세톤의 혼합용매를 이동상으로 하여 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 분리한다. 이 때, 클로로포름 : 아세톤 = 100~1 : 0~4 (v/v)인 용매를 사용하는 것이 바람직하다.
상기 활성분획을 다시 90% 메탄올 수용액을 이동상으로 하여 C-18 역상 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 분리·정제하여 순수한 화합물을 얻는다.
상기와 같은 방법에 의하여, 건조된 삼백초 뿌리 1 ㎏당 18 ㎎ 이상의 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드를 얻을 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드를 함유하는 심장순환계 질환의 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.
본 발명의 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드는 IC50 값이 1.3 uM로 낮게 나와 저밀도 지질 단백질에 대하여 우수한 항산화 활성을 나타낸다.
따라서, 본 발명의 조성물은 저밀도 지질 단백질의 산화에 의해 유발되는 것으로 알려진 고지혈증, 관상동맥 심장병, 동맥경화증 및 심근경색증과 같은 심장순환계 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용할 수 있다.
본 발명의 조성물은 상기 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.
본 발명의 조성물은, 투여를 위해서 상기 기재한 유효성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 제조할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 당분야의 적정한 방법으로 또는 Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.
본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 비경구 투여(예를 들어 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)하거나 경구 투여할 수 있으며, 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다. 일일 투여량은 2'-디히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드가 약 0.1~100 ㎎/㎏ 이고, 바람직하게는 0.5~10 ㎎/㎏ 이며, 하루 일회 내지 수회에 나누어 투여하는 것이 더욱 바람직하다.
본 발명의 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드를 마우스에 경구 투여하여 독성 실험을 수행한 결과, 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드는 경구 독성시험에 의한 50% 치사량(LD50)은 적어도 1,000 ㎎/㎏ 이상인 것으로 나타난다.
본 발명의 조성물은 심장순환계 질환의 예방 및 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 호르몬 치료, 약물 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
본 발명의 조성물은 심장순환계 질환의 개선을 목적으로 건강식품에 첨가될 수 있다. 본 발명의 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드를 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드를 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에는 본 발명의 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드는 원료에 대하여 1~20 중량%, 바람직하게는 5~10 중량%의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스 트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 0.01~0.04 g, 바람직하게는 약 0.02~0.03 g 이다.
상기 외에 본 발명의 조성물은 여러가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01~0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예 및 실험예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예 및 실험예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
실시예 : 삼백초로부터 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드의 분리 및 정제
1. 삼백초로부터 추출
대한민국 경상남도 거창에서 구입한 삼백초 뿌리 1㎏ 을 세척하여 건조시킨 후, 분쇄기를 사용하여 분쇄하여 분말로 만들었다.
삼백초 분말을 에틸아세테이트 4 ℓ에 넣어 상온에서 3일간 방치한 후, 에틸아세테이트 용액을 교반시키고 여과지로 여과하여 감압하에서 농축하였다. 상기와 같은 추출과정을 모두 2번 반복하여 액상만을 모으고 감압하에서 농축하여 에틸아세테이트 추출물(40 g)을 얻었다. 이 에틸아세테이트 추출액을 저밀도 지질 단백질에 대한 항산화 활성을 측정한 결과 저밀도 지질 단백질에 대한 우수한 항산화 활성을 나타내므로, 이 추출액을 감압하에서 농축, 건조시켜 흑갈색의 유성(oily) 물질을 얻었다.
2. 에틸아세테이트층으로부터 분리 및 정제
상기 1에서 얻은 에틸아세테이트 추출물을 n-헥산과 에틸세테이트 용액의 비율(n-헥산:에틸아세테이트 = 90~10 : 10~90 (v/v))을 변화시켜가며 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(실리카겔; Merck, Art 9385, 칼럼 크기 : Φ10 x 20 ㎝)를 사용하여 분리하고, 활성분획(3 g)을 얻었다.
상기 활성분획을 다시 클로로포름과 메탄올 용액의 비율(클로로포름:메탄올 = 100~95 : 5)을 변화시켜가며 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(실리카겔; Merck, Art 9385, 칼럼 크기 : Φ4.2 x 20 ㎝)를 사용하여 분리하고, 활성분획(270 ㎎)을 얻었다.
상기 활성분획을 다시 클로로포름과 아세톤 용액의 비율(클로로포름:아세톤 = 100~1 : 4)을 변화시켜가며 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(Merck, Art 9385, 칼럼 크기 : Φ0.8 x 20 ㎝)를 실시하여 활성분획(59 ㎎)을 얻었다.
상기 활성분획을 다시 90% 메탄올 수용액을 이동상으로 사용한 C-18 역상 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(Merck, Lichroprep C18, 칼럼 크기 : Φ1.0 x 20 ㎝)를 실시하여 순수 화합물(18 ㎎)을 얻었다.
3. 리그난계 화합물의 구조 분석
상기 실시예를 통하여 얻은 물질은, VG 고분해능 GC/MS 분광기(VG high resolution GC/MS spectrometer, Election Ionization MS, Autospec-Ultima)를 사용하여 분자량 및 분자식을 결정하였으며, 선광도는 편광기(Jasco DIP-181 digital polarimeter)를 사용하여 측정하였다. 또한 핵자기공명(NMR) 분석(Bruker AMX 300)을 통하여 1H NMR, 13C NMR, 호모-코지(HOMO-COSY), HMQC(1H-Detected heteronuclear Multiple-Quantum Coherence), HMBC(Heteronuclear Multiple-Bond Coherence), DEPT(Distortionless Enhancement by Polarization) 스펙트럼을 얻고, 분자구조를 결정하였다.
측정 결과는 하기와 같으며, 상기 실시예에 따른 삼백초로부터 분리한 활성물질은 상기 화학식 1의 구조를 갖는 새로운 리그난계 화합물인 것으로 밝혀졌으며, 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드로 명명하였다.
1) 물성 : 연갈색 유성
2) 선광도 : [α]D 25 -13.8°(c = 0.29, CHCl3)
3) 분자량 : 346
4) 분자식 : C20H26O5
5) 1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.53 (1H, s, H-2), 6.70 (1H, d, J = 7.9 ㎐, H-5), 6.56 (1H, d, J = 7.9 ㎐, H-6), 6.44 (1H, s, H-3'), 6.41 (1H, s, H-6'), 5.52 (1H, s), 5.54 (1H, s), 4.53 (1H, br), 3.79 (3H, s, C3-OMe), 3.74 (3H, s, C5'-OMe), 2.31 (1H, dd, J = 8.0, 13.9 ㎐, H-7'a), 2.39 (1H, dd, J = 7.8, 13.6 ㎐, H-7a), 2.52 (1H, dd, J = 7.0, 13.8 ㎐, H-7b), 2.55 (1H, dd, J = 6.8, 13.9 ㎐, H-7'b), 1.75 (2H, m, H-8, 8'), 0.84 (3H, d, J = 7.1 ㎐, H-9), 0.82 (3H, d, J = 7.1 ㎐, H-9')
6) 13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ 148.4 (C-2'), 146.9 (C-3), 144.8 (C-4'), 144.1 (C-4), 141.4 (C-5'), 134.3 (C-1), 122.3 (C-6), 118.9 (C-1'), 114.5 (C-5), 114.1 (C-3'), 111.9 (C-2), 103.5 (C-6'), 57.2 (C3-OMe), 56.4 (C5'-OMe), 41.7 (C-7), 38.5 (C-8), 37.0 (C-8'), 35.5 (C-7'), 14.7 (C-9'), 14.6 (C-9)
7) EIMS(rel. int.) m/z [M]+ 346 (61.8), 153 (100), 137 (28.2)
실험예 1 : 저밀도 지질 단백질에 대한 항산화 활성
본 발명의 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드의 저밀도 지질 단백질에 대한 항산화 활성을 알아보기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.
Cu2+은 저밀도 지질 단백질의 산화를 유도(Cu2+ mediated LDL-oxidation)하는 것으로 알려져 있다. 따라서 본 발명에서는 이 때 생성된 불포화 지방산의 산화산물인 디알데하이드(dialdehyde)를 TBARS (thiobarbituric acid reactive substances)법으로 측정하여, 상기 실시예에서 제조한 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드의 항산화 활성을 조사하였다(Packer, L. Ed. (1994) Methods in Enzymology Vol. 234, Oxygen radicals in biological systems Part D. Academic press, San Diego).
사람의 혈장 300 ㎖를 초원심분리기로 100,000 xg에서 24 시간 동안 원심분리하여 상층에 부유된 고밀도 지질 단백질(VLDL)/킬로마이크론(chylomicron)층을 제거하고 나머지 용액의 비중을 1.063 g/㎖로 맞춘 후, 100,000 xg에서 24 시간 동안 원심분리하여 다시 상층에 부유된 저밀도 지질 단백질 35 ㎖(1.5~2.5 ㎎ 단백질/㎖)를 분리하였다.
이렇게 분리한 저밀도 지질 단백질 50 ㎕(단백질 농도, 50-100 ㎍/㎖)를 10 mM 인산완충용액(phosphate-buffered saline, PBS) 180 ㎕와 혼합하고, 여러 농도로 준비된 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드 용액을 각각 10 ㎕씩 첨가하였다.
2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드는 DMSO(dimethylsulfoxide)에 녹여 사용하였으며, 실험에 사용하기 전에 여러 농도로 희석하였다. 음성 대조군으로는 용매만을 첨가한 것을 사용하였으며, 양성 대조군으로는 BHT((butylated hydroxy toluene) 첨가한 것을 사용하였다.
상기 용액에 0.25 mM CuSO4 10 ㎕를 첨가하여 37℃에서 2 시간 동안 반응시키고, 20% 트리클로로아세트산(trichloroacetic acid, TCA) 용액 1 ㎖를 첨가하여 반응을 중지시켰다. 0.05 N NaOH 용액에 녹인 0.67% TBA 용액 1 ㎖를 첨가하고 10초간 교반시킨 후 95℃에서 5 분동안 가열하여 발색 반응이 일어나도록 하고 얼음물로 용액을 냉각하였다. 이 용액을 3000 rpm에서 5 분 동안 원심분리하여 상등액을 분리하였으며, 자외선-가시광선 분광기로 540 ㎚에서의 흡광도를 측정하여 상기 발색 반응으로 생성된 말론디알데하이드(malondialdehyde, MDA)의 양을 구하였다.
한편, 테트라메톡시프로판(말론알데하이드 비스(디메틸아세탈)) [tetramethoxypropane malonaldehyde bis(dimethylacetal)]의 저장용액을 이용하여 0~5 n㏖ 말론디알데하이드를 포함하는 PBS 표준용액을 250 ㎕씩 만들었다.
이 표준용액을 상기와 같은 방법으로 발색시켜 540 ㎚에서의 흡광도를 측정하고, 말론디알데하이드의 표준곡선을 구하였다. 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드를 사용한 상기 실험에서 말론디알데하이드의 양은 이 표준곡선을 이용하여 정량하였다.
결과는 표 1에 나타내었다.
화합물 IC50 (uM)
2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드 1.3
양성 대조군(BHT) 1.5
표 1에 나타난 바와 같이, 본 발명의 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드는 IC50 값이 1.3 uM로서 매우 낮게 나타나 저밀도 지질 단백질에 대한 항산화 활성이 우수함을 알 수 있다.
따라서, 본 발명의 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드는 저밀도 지질 단백질이 산화되어 유발되는 것으로 알려진 동맥경화증을 포함하는 심장순환계 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용할 수 있다.
실험예 2 : 마우스에 대한 경구투여 급성 독성실험
본 발명의 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드의 급성 독성을 알아보기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.
4주령의 특정 병원체 부재(specific pathogens free) ICR 마우스로서 암컷 12 마리와 숫컷 12 마리(암수 각각 3 마리/용량군)를 온도 22±3℃, 습도 55±10%, 조명 12L/12D의 동물실내에서 사육하였다. 마우스는 실험에 사용되기 전 1주일 정도 순화시켰다. 실험동물용 사료((주)제일제당, 마우스 및 랫트용) 및 음수는 멸균한 후 공급하였으며 자유섭취시켰다.
상기 실시예에서 제조한 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드를 0.5% 트윈 80을 용매로 하여 50 mg/㎖ 농도로 조제한 후, 마우스 체중 20 g 당 0.04 ㎖ (100 mg/kg), 0.2 ㎖(500 mg/kg), 0.4 ㎖(1,000 mg/kg)씩 경구 투여하였다. 시료는 단회 경구 투여하였으며, 투여 후 7 일 동안 다음과 같이 부작용 또는 치사 여부를 관찰하였다. 즉, 투여당일은 투여 후 1 시간, 4 시간, 8 시간, 12 시간 뒤에, 그리고 투여 익일부터 7 일째까지는 매일 오전, 오후 1 회 이상씩 일반증상의 변화 및 사망동물의 유무를 관찰하였다.
또한, 투여 7 일째에 동물을 치사시켜 해부한 후 육안으로 내부 장기를 검사하였다. 투여당일부터 1 일 간격으로 체중의 변화를 측정하여 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드에 의한 동물의 체중 감소 현상을 관찰하였다.
시험 결과, 시험물질을 투여한 모든 마우스에서 특기할 만한 임상증상은 없었고 폐사된 마우스도 없었으며, 또한 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사, 부검소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다.
따라서, 본 발명의 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드는 모든 마우스에서 1,000 mg/kg까지 독성변화를 나타내지 않았으며, 경구투여 최소치사량(LD50)이 적어도 1,000 mg/kg 이상인 안전한 물질로 판단되었다.
하기에 본 발명의 조성물을 위한 제제예를 예시한다.
제제예 1 : 약학적 제제의 제조
1. 산제의 제조
2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드 2 g
유당 1 g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
2. 정제의 제조
2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유 당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
3. 캡슐제의 제조
2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유 당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
4. 주사액제의 제조
2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드 10 ㎍/㎖
묽은 염산 BP pH 3.5로 될 때까지
주사용 염화나트륨 BP 최대 1 ㎖
적당한 용적의 주사용 염화나트륨 BP 중에 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드를 용해시키고, 생성된 용액의 pH를 묽은 염산 BP를 사용하여 pH 3.5로 조절하고, 주사용 염화나트륨 BP를 사용하여 용적을 조절하고 충분히 혼합하였다. 용액을 투명유리로 된 5 ㎖ 타입 I 앰플 중에 충전시키고, 유리를 용해시킴으로써 공기의 상부 격자하에 봉입시키고, 120℃에서 15분 이상 오토클래이브시켜 살균하여 주사액제를 제조하였다.
제제예 2 : 식품의 제조
2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드를 포함하는 식품들을 다음과 같이 제조하였다.
1. 조리용 양념의 제조
2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드 0.2 ~ 10 중량%로 건강 증진용 조리용 양념을 제조하였다.
2. 토마토 케찹 및 소스의 제조
2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드 0.2 ~ 1.0 중량%를 토마토 케찹 또는 소스에 첨가하여 건강 증진용 토마토 케찹 또는 소스를 제조하였다.
3. 밀가루 식품의 제조
2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드 0.1 ~ 5.0 중량%를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.
4. 스프 및 육즙(gravies)의 제조
2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드 0.1 ~ 1.0 중량%를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.
5. 그라운드 비프(ground beef)의 제조
2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드 10 중량%를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.
6. 유제품(dairy products)의 제조
2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드 0.1 ~ 1.0 중량%를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
7. 선식의 제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드를 진공 농축기에서 감압·농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.
상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 디아릴 헵타노이드계 화합물의 건조분말을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.
곡물류(현미 30 중량%, 율무 15 중량%, 보리 20 중량%),
종실류(들깨 7 중량%, 검정콩 8 중량%, 검정깨 7 중량%),
2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드의 건조분말(1 중량%),
영지(0.5 중량%),
지황(0.5 중량%)
제제예 3 : 음료의 제조
1. 탄산음료의 제조
설탕 5~10%, 구연산 0.05~0.3%, 카라멜 0.005~0.02%, 비타민 C 0.1~1%의 첨가물을 혼합하고, 여기에 79~94%의 정제수를 섞어서 시럽을 만들고, 상기 시럽을 85~98℃에서 20~180 초간 살균하여 냉각수와 1:4의 비율로 혼합한 다음 탄산가스를 0.5~0.82% 주입하여 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드를 함유하는 탄산음료를 제조하였다.
2. 건강음료의 제조
액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드를 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 건강음료를 제조하였다.
3. 야채쥬스의 제조
2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드 0.5 g을 토마토 또는 당근 쥬스 1,000 ㎖에 가하여 건강 증진용 야채쥬스를 제조하였다.
4. 과일쥬스의 제조
2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드 0.1 g을 사과 또는 포도 쥬스 1,000 ㎖에 가하여 건강 증진용 과일쥬스를 제조하였다.
본 발명의 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드는 저밀도 지질 단백질에 대한 항산화 활성효과가 매우 우수함으로, 저밀도 지질 단백질의 산화에 의해 유발되는 것으로 알려진 고지혈증, 관상동맥 심장병, 동맥경화증 및 심근경색증과 같은 심장순환계 질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용할 수 있다.

Claims (8)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드.
    <화학식 1>
    Figure 112006013059996-pat00002
  2. 제 1항에 있어서, 상기 화합물은 삼백초로부터 추출·분리·정제하여 얻은 것임을 특징으로 하는 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드.
  3. 1) 삼백초 뿌리 분말을 에틸아세테이트로 추출하는 단계, 및
    2) 상기 1)에서 얻은 에틸아세테이트 추출물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 분리·정제하는 단계로 이루어지는
    제 1항의 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드의 제조방법.
  4. 제 3항에 있어서, 상기 2)단계는
    2-1) 상기 1)에서 얻은 에틸아세테이트 추출물을 n-헥산과 에틸세테이트(n-헥산 : 에틸 아세테이트 = 90~10 : 10~90 (v/v))의 혼합용매를 이동상으로 하여 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 분리하는 단계,
    2-2) 클로로포름과 메탄올의 부피비를 100:5(v/v)에서 95:5(v/v)의 농도구배로 변화시킨 혼합용매를 이동상으로 하여 상기 2-1)에서 얻은 활성분획을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 분리하는 단계,
    2-3) 클로로포름과 아세톤의 부피비를 100:4(v/v)에서 1:4(v/v)의 농도구배로 변화시킨 혼합용매를 이동상으로 하여 상기 2-2)에서 얻은 활성분획을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 분리하는 단계, 및
    2-4) 상기 2-3)에서 얻은 활성분획을 다시 90% 메탄올 수용액을 이동상으로 하여 C-18 역상 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 분리·정제하는 단계로 이루어지는 제 1항의 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드의 제조방법.
  5. 제 1항의 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드를 유효성분으로 하는 고지혈증, 관상동맥 심장병, 동맥 경화증 및 심근 경색증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 심장순환계 질환의 예방 및 치료용 약학 조성물.
  6. 삭제
  7. 제 1항의 2'-히드록시 디히드로구아이아레틱 에시드를 유효성분으로 하는 심장순환계 질환의 예방 및 치료용 식품 조성물.
  8. 제 7항에 있어서, 상기 심장순환계 질환은 고지혈증, 관상동맥 심장병, 동맥경화증 및 심근경색증 중에서 선택된 것임을 특징으로 하는 심장순환계 질환의 예방 및 치료용 식품 조성물.
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