JP2023109364A - ミソハギ含有組成物 - Google Patents

Abstract

【課題】安全性が高く、飲食品への適用が可能である、優れた脂質吸収抑制、内臓脂肪の低減、血中コレステロール上昇抑制、血中トリグリセリド上昇抑制、血糖値の上昇抑制、二糖類の消化吸収抑制等に効果的な組成物を提供すること。
【解決手段】ミソハギ（Ｌｙｔｈｒｕｍ ａｎｃｅｐｓ）、及び／又は、その抽出物を有効量含有する、脂質吸収抑制、内臓脂肪の低減、血中コレステロール上昇抑制、血中トリグリセリド上昇抑制、血糖値の上昇抑制、及び、二糖類の消化吸収抑制からなる群より選択される少なくとも１種に用いるための組成物を調製する。
【選択図】図４

Description

新規性喪失の例外適用申請有り

本発明は、脂質吸収抑制、内臓脂肪の低減、血中コレステロール上昇抑制、血中トリグリセリド上昇抑制、血糖値の上昇抑制、二糖類の消化吸収抑制等に優れた効果を有し、飲食品、医薬品、又は医薬部外品として用いることができる組成物に関する。

近年、肥満者数は増加傾向にある。ＷＨＯによる２０１６年の調査では、全世界で肥満者数は６億５０００万人を超えており、今後さらに増加していくと推定されている。令和元年の国民健康・栄養調査によると、日本における成人の肥満者の割合は、男性で３３．０％、女性で２２．３％が肥満であるとされている（非特許文献１）。

また、糖尿病は、インスリン作用の不足に起因する慢性的な高血糖状態を主な症状とする代謝疾患であり、糖尿病が強く疑われる成人男女とその予備軍は、２０１２年度の厚生労働省の概況によると約２０５０万人にのぼり、その数は年々増加傾向にあり深刻な問題となっている。

肥満や血糖値の改善・予防のためには、医薬品を用いた治療や日ごろの食生活の改善などが必要となる。しかし、薬による治療は副作用が伴うことや、費用がかさんでしまうといったデメリットがある。そこで、普段の食生活に機能性食品を取り入れることにより、肥満や血糖値の悪化を防ぎ、未然に予防する試みがなされている。

令和元年国民健康・栄養調査報告、厚生労働省

現在日本では高額化する医療費を抑えるべく予防医療に注目が集まっており、疾病の発病リスクを軽減することのできる効果的かつ安全な飲食品、医薬品又は医薬部外品の開発が強く望まれている。

そこで本発明の目的は、安全性が高く、飲食品への適用が可能である、優れた脂質吸収抑制、内臓脂肪の低減、血中コレステロール上昇抑制、血中トリグリセリド上昇抑制、血糖値の上昇抑制、二糖類の消化吸収抑制等に効果的な組成物を提供することにある。

高知県は、急峻な山々から平坦地に至る様々な地形をもち、太平洋型の気候であることから多彩な自然環境を有している。そのため、亜熱帯地域から亜寒帯地域の植生が各々の環境に適応し分布している。現在、これらの植物は商業的に利用されていないものの、様々な生理活性をもつ可能性がある。

したがって、本発明者らは、高知県内に自生している未利用植物の中で、脂質代謝に関わるリパーゼ阻害活性、及び、血糖値改善に関わるα-グルコシダーゼ阻害活性を有する成分のスクリーニングを試みた。

高知県に自生するおよそ１００種の植物に対して乾固物重量１０ｍｇｅｑ．／ｍＬにおけるα－グルコシダーゼ阻害活性のスクリーニングを行ったところ、４種の植物に５０％以上の高い活性を見出し、これらの４種の植物の中で活性を強く示し、かつ食習慣のあるミソハギ（Ｌｙｔｈｒｕｍ ａｎｃｅｐｓ）を選択した。さらに、ミソハギに強いリパーゼ阻害活性を有することも見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、
項１．
ミソハギ（Ｌｙｔｈｒｕｍ ａｎｃｅｐｓ）、及び／又は、その抽出物を有効量含有する、脂質吸収抑制、内臓脂肪の低減、血中コレステロール上昇抑制、血中トリグリセリド上昇抑制、血糖値の上昇抑制、及び、二糖類の消化吸収抑制からなる群より選択される少なくとも１種に用いるための組成物。
項２．
前記ミソハギが、ミソハギの地上部を含む、項１に記載の組成物。
項３．
前記抽出物の抽出溶媒が、水、エタノール、メタノール、グリセリン、１，３－ブチレングリコール及びこれらの混合物からなる群より選択される少なくとも１種である、項１又は２に記載の組成物。
項４．
グラナチンＡ、ヘリオスコピニンＡ、ルセニン２、及び、ビセニン２からなる群より選択される少なくとも１種を有効量含有する、脂質吸収抑制、内臓脂肪の低減、血中コレステロール上昇抑制、血中トリグリセリド上昇抑制、血糖値の上昇抑制、及び、二糖類の消化吸収抑制からなる群より選択される少なくとも１種に用いるための組成物。
項５．
少なくとも１４日間以上継続して摂取するためのものである、項１～４のいずれか１項に記載の組成物。
項６．
経口、静脈内注射、吸入又は経皮により投与される、項１～５のいずれか１項に記載の組成物。
項７．
飲食品、医薬部外品、又は医薬品である、項１～６のいずれか１項に記載の組成物。

本発明の組成物は、ミソハギ（Ｌｙｔｈｒｕｍ ａｎｃｅｐｓ）から得られる有効成分を含有しており、安全性の問題がなく、脂質吸収抑制、内臓脂肪の低減、血中コレステロール上昇抑制、血中トリグリセリド上昇抑制、血糖値の上昇抑制、及び、二糖類の消化吸収抑制からなる群より選択される少なくとも１種に優れた効果を有している。このような組成物は、安全性が高く、副作用の少ない飲食品、医薬品又は医薬部外品に利用することができる。

図１は、試験１（１－１）における、ミソハギ抽出物の抽出手順を示した概要図である。 図２は、試験１（１－２）における、液液分配による分画手順を示した概要図である。 図３は、試験１（１－３）における、ＯＤＳ中圧カラムクロマトグラフィーによるミソハギ抽出物水層の分画手順を示した概要図である。 図４は、試験１（１－３）における、ＯＤＳ中圧カラムクロマトグラフィーによるミソハギ抽出物水層の分画後の各画分のリパーゼ阻害活性結果を示したグラフである。 図５は、試験１（１－４）における、２０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶出部に対してＨＰＬＣを行った結果を示したグラフである。 図６は、試験１（１－４）における、２０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶出部に対してＨＰＬＣを行った後の各画分のリパーゼ阻害活性結果を示したグラフである。 図７は、試験１（１－５）における、２０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶出部の画分Ｆｒ．３に対してＨＰＬＣを行った結果を示したグラフである。 図８は、試験１（１－５）における、画分Ｆｒ．３を更に分画してＨＰＬＣを行った結果を示したグラフである。 図９は、試験２（２－１）における、ミソハギ抽出物の抽出手順を示した概要図である。 図１０は、試験２（２－２）における、液液分配による分画手順を示した概要図である。 図１１は、試験２（２－３）における、ＯＤＳ中圧カラムクロマトグラフィーによるミソハギ抽出物水層の分画手順を示した概要図である。 図１２は、試験２（２－３）における、ＯＤＳ中圧カラムクロマトグラフィーによるミソハギ抽出物水層の分画後の各画分のα－グルコシダーゼ阻害活性結果を示したグラフである。 図１３は、試験２（２－４）における、２０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶出部に対してＨＰＬＣを行った結果を示したグラフである。 図１４は、試験２（２－４）における、２０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶出部の画分Ｆｒ．２に対してＨＰＬＣを行った結果を示したグラフである。 図１５は、試験２（２－５）における、４０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶出部に対してＨＰＬＣを行った結果を示したグラフである。 図１６は、試験２（２－５）における、４０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶出部の画分Ｆｒ．２に対してＨＰＬＣを行った結果を示したグラフである。 図１７は、試験２（２－６）における、シリカゲル中圧カラムクロマトグラフィーによるミソハギＡｃＯＥｔ層の分画手順を示した概要図である。 図１８は、試験２（２－８）における、ＡｃＯＥｔ層４０％ ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ溶出部に対してＨＰＬＣを行った結果を示したグラフである。 図１９は、試験２（２－９）における、α－グルコシダーゼ阻害活性測定法の測定手順を示した概要図である。

［ミソハギ含有組成物］
本発明の組成物は、ミソハギ（Ｌｙｔｈｒｕｍ ａｎｃｅｐｓ）、及び／又は、その抽出物を有効量含有する。

ミソハギは、日本各地の湿原や小川、用水路の縁等で生育するミソハギ科の多年草である。生薬名としては、千屈菜（せんくつさい）として知られており、夏場などの、のどの渇き止め等の目的で、水で煎じて飲用されることがある。また、食用としては、和え物、炒め物、佃煮等に調理することや、熱湯に通してサラダに和えて食べられることもある。

ミソハギの部位は、本発明の効果が奏される限り、特に制限されない。ミソハギの部位は、全草又は一部、特に葉部、茎部、根部、種子、花部を別々に１種類ずつ又はそれらの２種以上の組合せ等が挙げられる。

ミソハギは、採取した後にそのまま、又は、その乾燥物を適宜裁断し、破砕又は粉砕した粉末に調製することができる。ミソハギの乾燥物又はその粉砕物は、例えば、熱湯で煮出して用いることができる。ミソハギの破砕物又は粉砕物は、必要により焙煎して用いることもできる。

ミソハギの部位を複数組み合わせて用いる場合、その組合せは特に制限されない。より高い本発明の効果を得ることの観点から、ミソハギの部位は、茎部と葉部との組合せが好ましい。また、茎部と葉部との重量比率は、特に制限されないが、より高い本発明の効果を得ることの観点から、乾燥重量を基準として１～１０：１とすることができ、１～５：１が好ましく、１～３：１がより好ましく、２～３：１がさらに好ましい。

ミソハギの採取時期は、本発明の効果が奏される限り、特に制限されないが、例えば、７月～２月に採取されたものが好ましく、８月～１月に採取されたものがより好ましく、９月～１２月に採取されたものが更に好ましい。

ミソハギの焙煎は、回転式焙煎機等を用いた公知の方法により行われ、特に限定はされない。焙煎温度は、例えば、１５０～４００℃とすることができ、１８０～３５０℃が好ましく、２００～３３０℃がより好ましい。焙煎時間は、焙煎温度等の条件により適宜決定されるが、例えば、５～１２０分とすることができ、１０～９０分が好ましく、１５～６０分がより好ましい。

本発明において、ミソハギの抽出物を用いる場合は、その抽出方法は特に制限されるものではない。ミソハギの抽出物は、ミソハギの全草又は一部、特に葉部、茎部、根部、種子、花部を別々に１種類ずつ又はそれらの２以上の組合せの乾燥物、あるいはその乾燥物を適宜裁断し、破砕又は粉砕した粉末から、溶媒により抽出される。ミソハギは、自生しているものから容易に入手可能であり、栽培して得ることもでき、切り花や苗などの市販品を用いることもできる。

ミソハギの全草又は一部を乾燥させる場合は、限定はされないが、天日干し、風乾又は乾燥機を使用して行うことができる。天日干しを行う場合は、乾燥にかかる時間は天候等により左右されるが、例えば６時間以上、好ましくは１日以上、より好ましくは２日以上とすることができる。乾燥機を使用する場合は、一般的に１００℃以下、好ましくは４０℃以下の乾燥条件下で、例えば、回転乾燥機、熱風乾燥機、伝熱乾燥機、真空乾燥機、真空凍結乾燥機、冷風乾燥機、振動乾燥機、ろ過乾燥機、真空撹拌乾燥機等を用いることが可能である。

ミソハギの抽出物を用いる場合は、ミソハギの抽出物をそのまま用いてもよく、適宜に希釈又は濃縮して用いてもよい。ミソハギの抽出物を得る場合には、新鮮な植物体を用いることが可能であり、冷蔵、凍結、又は乾燥保存されたミソハギを用いることや、ミソハギの抽出物の濃縮物を水等の適宜な溶媒に溶解又は希釈して用いることもできる。ミソハギの抽出物の濃縮物は、限定はされないが、液状、ペースト状、泥状のものを用いることができる。

ミソハギの抽出に用いる溶媒としては、水、有機溶媒又は含水有機溶媒が挙げられる。適宜の抽出溶媒を用いることにより、ミソハギの水抽出物、有機溶媒抽出物又は含水有機溶媒抽出物を得ることができる。これらの抽出溶媒は、例えば、水、アルコール、又はこれらの混合物が挙げられ、水、メタノール、エタノール、１，３－ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン又はこれらの混合物が好ましい。より高い本発明の効果を得ることの観点から、これらの抽出溶媒は、水、メタノール、エタノール又は含水エタノールがさらに好ましい。メタノールを用いる場合の濃度は、限定はされないが、より高い抽出効率を得ることの観点から、例えば、４０％～９９％、好ましくは５０％～９９％、より好ましくは６０％～９９％、７０％～９５％、８０％～９５％の濃度で用いることができる。含水エタノールを用いる場合のエタノール濃度は、限定はされないが、より高い抽出効率を得ることの観点から、例えば、４０％～９９％、好ましくは５０％～９９％、より好ましくは６０％～９９％、７０％～９５％、８０％～９５％の濃度で用いることができる。

抽出に用いるミソハギの部位は、限定はされないが、例えば、葉部、茎部、根部、種子、花部等が挙げられ、より高い本発明の効果を得ることの観点から葉部、茎部又はこれらの組合せが好ましい。

抽出方法は特に限定はされないが、例えば、ミソハギの全草または一部を裁断し、ミキサー等の公知の方法により破砕し、抽出溶媒を加えて撹拌し、室温ないし加熱を一定の抽出時間で処置後、抽出上清からミソハギのエキスを分離抽出する方法が挙げられる。抽出処理は、１回であってもよく、複数回を段階的に行ってもよい。また、抽出方法は、ミソハギを抽出溶媒に浸漬した後、室温ないし加熱する条件において、静置する方法でもよい。

破砕条件としては、限定はされないが、ミソハギの全草または一部の裁断物が１ｋｇ～１０ｋｇ等の大スケールである場合は、大型バーチカルカッターミキサー等を用いることができ、数１０ｇ～数１００ｇの小スケールの場合は、家庭用ミキサー等を用いることができる。例えば、大スケールでの破砕条件を適用する場合は、原料の硬さ、含水率等によって適宜変更されるが、例えば、破砕時間は数十秒～数分間、ミキサーの回転数は１０～３０００ｒｐｍで行うことが可能である。

また、抽出条件は通常の条件を適用することができ、限定はされないが、ミソハギの乾燥物を、例えば３～１００℃で溶媒に浸漬、加熱還流又はマイクロウェーブ加熱をする方法を採用することができる。抽出温度は、適切な抽出量が得られる限り限定はされないが、例えば、７０％エタノール等の含水アルコールを用いた場合は２０～１００℃とすることができ、２２～８０℃が好ましく、２５～６０℃がより好ましい。また、抽出温度は、例えば、水を用いた場合は２０～１００℃とすることができ、５０～１００℃が好ましく、７０～１００℃がより好ましい。抽出時間は、適切な抽出量が得られる限り限定はされないが、例えば、５分以上１４日以内、好ましくは１０分以上７日以内、より好ましくは１５分以上５日以内とすることができる。前記抽出は通常常圧下で行われるが、加圧下で行うことも可能である。溶媒の添加量は、ミソハギの乾燥重量１ｋｇに対して１Ｌ～１００Ｌ程度使用することができる。

抽出溶媒を加える前に、ミソハギに、酸、アルカリ、または酵素を加えることで、抽出効率を高めることも可能である。

抽出溶媒を加えて撹拌する操作は、公知の方法を用いることができるが、例えば、ミソハギの裁断物又は粉砕物と抽出溶媒とを含む抽出用容器を回転させる方法、前記抽出用容器を磁気式又は機械式の撹拌装置に設置して混合する方法、前記抽出用容器を振とうさせる方法等が挙げられる。

撹拌操作は、超音波処理により振動を起こし、抽出効率を高めることも可能である。超音波処理を行う場合は、限定はされないが、例えばミソハギの全草または一部の裁断物が１ｋｇ～１０ｋｇ等の大スケールである場合は、市販の超音波発生器にミソハギの裁断物又は粉砕物と抽出溶媒とを含む抽出用容器を設置し、２６ｋＨｚ超音波で６０分間処理することにより、超音波処理物を得ることができ、数１０ｇ～数１００ｇの小スケールの場合は、４０ｋＨｚの超音波で６０分間処理することにより、超音波処理物を得ることができる。超音波処理の温度条件は、適切な抽出量が得られる限り限定はされないが、２℃～１００℃、好ましくは１０℃～７０℃とすることができる。大スケール用の超音波発生器としては、例えば神明台工業（株）製ＵＴ－１２を使用することができ、小スケール用の超音波発生器としては、例えばＡＳ ＯＮＥ（株）製ＵＳ－３Ｒを使用することができる。

抽出効率を高めるためには、同種又は複数種の抽出溶媒を用いた多段階抽出を行うことも可能である。多段階抽出を行う場合は、第１段階の抽出において得られた残渣に、さらに同種又は複数種の抽出溶媒を加え、室温ないし加熱を行った後、抽出上清からミソハギのエキスを分離抽出することができる。

マイクロウェーブ加熱は、本発明の有効成分の活性が失われない範囲で、マイクロウェーブ照射装置の出力、マイクロウェーブの波長、照射時間等の条件を適宜設定することが可能である。例えば、ミソハギの乾燥物１００ｇに対して、２４５０ＭＨｚ、５００Ｗのマイクロウェーブを当てる場合は、１０秒～１０分、好ましくは３０秒～５分で処理することが可能である。

抽出上清をそのままミソハギ抽出物として用いることができる。さらには、抽出上清からミソハギ抽出物を分離抽出することもできる。この分離抽出段階においては、公知の方法を採用することができ、例えば、ろ過、遠心分離、吸引、圧搾等を行うことが可能である。

ろ過により分離抽出する場合は、限定はされないが、例えば、膜ろ過を行うことができる。膜ろ過を行う場合は、例えば、温度条件を２℃～７０℃、好ましくは１０℃～４０℃とすることができ、膜孔径を０．１μｍ～１０μｍ、好ましくは０．１μｍ～５μｍとすることが可能である。

遠心分離により分離抽出する場合は、公知の機器を用いることができ、遠心分離器としては、例えば、分離板型、円筒型、デカンター型等を挙げることができる。遠心分離を行う場合は、例えば、温度条件を２℃～７０℃、好ましくは１０℃～４０℃とすることができ、回転数を１０００ｒｐｍ～１００００ｒｐｍ、好ましくは１５００ｒｐｍ～８０００ｒｐｍ、さらに好ましくは２０００ｒｐｍ～６０００ｒｐｍとすることができ、遠心時間を１０秒～３０分、好ましくは２０秒～２０分、さらに好ましくは３０秒～１５分とすることができる。

圧搾による分離抽出は、圧搾機を用いることも可能であり、圧搾機としては公知の機器を用いることができ、例えば、空気圧式圧搾機、スクリュー式圧搾機等を挙げることができる。

ミソハギの抽出物は、希釈や濃縮の前後等に、さらに精製処理に付することより、精製物とすることができる。精製処理には、上記の溶媒による抽出以外に、当業者に公知な方法であるクロマトグラフ法、イオン交換クロマトグラフ法等を単独で、または組み合わせて用いることができる。

クロマトグラフ法を用いる場合であっては、例えば、順相若しくは逆相の担体又はイオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー又は遠心液体クロマトグラフィー等のいずれか、又はそれらを組み合わせて用いる方法が挙げられる。クロマトグラフ法を用いる場合の担体、溶出溶媒等の精製条件は、各種のクロマトグラフ法に対応して適宜選択することができる。

ミソハギの裁断物又は粉砕物と抽出溶媒とを混合する比率としては、より高い抽出効率を得ることの観点から、水抽出物を得る場合は、例えば、水１Ｌに対して、ミソハギ乾燥体の裁断物又は粉砕物を５ｇ～３００ｇ、好ましくは１０ｇ～２００ｇ、より好ましくは２０ｇ～１００ｇとすることができる。また、含水有機溶媒抽出物を得る場合は例えば、溶媒１Ｌに対して、ミソハギの裁断物又は粉砕物を１０ｇ～１ｋｇ、好ましくは２０ｇ～５００ｇ、より好ましくは３０ｇ～２００ｇとすることができる。

本発明において、ミソハギ又はその抽出物の含有量は、より高い本発明の効果を得る観点から、組成物の総量を基準として、固形分換算で０．０００００１～１００重量％、好ましくは０．００００１～９０重量％、さらに好ましくは０．０００１～８０重量％、さらに好ましくは０．００１～７０重量％、さらに好ましくは０．０１～６０重量％、さらに好ましくは０．１～５０重量％、さらに好ましくは０．２～４０重量％、さらに好ましくは０．３～３０重量％、さらに好ましくは０．４～２５重量％、さらに好ましくは０．５～２０重量％、さらに好ましくは０．６～１５重量％、さらに好ましくは０．７～１０重量％、さらに好ましくは０．８～５重量％、さらに好ましくは０．８～４重量％、さらに好ましくは０．８～３重量％、さらに好ましくは０．８～２重量％とすることができる。

本発明において、ミソハギの精製物の含有量は、より高い本発明の効果を得る観点から、生活習慣病予防及び／又は改善用組成物の総量を基準として、固形分換算で０．００００００００１～１重量％、好ましくは０．０００００００１～０．９重量％、さらに好ましくは０．００００００１～０．８重量％とすることができる。

［用途］
本発明者らは、ミソハギ又はその抽出物若しくは精製物が、脂質吸収抑制、内臓脂肪の低減、血中コレステロール上昇抑制、血中トリグリセリド上昇抑制、血糖値の上昇抑制、及び、二糖類の消化吸収抑制からなる群より選択される少なくとも１種に顕著な効果を有することを新たに見出した。本発明は、医薬的な用途にも用いられることが可能であるが、非医薬的な用途としても用いられ得る。

体内に摂取された二糖類は、α－グルコシダーゼの作用によってブドウ糖などの単糖に分解され、血管に吸収されることによって、血糖値が上昇する。後述の実施例において、ミソハギ及び／又はその抽出物が、α－グルコシダーゼの阻害活性を有することが見出されている。また、ミソハギ抽出物中のグラナチンＡ、及び／又は、ヘリオスコピニンＡがその活性に寄与していることが明らかとなった。これにより、ミソハギ及び／又はその抽出物並びにその活性成分を有効量用いることで、二糖類の消化吸収を遅らせることができ、食後の急激な血糖値の上昇を抑えることに繋がる。

食後の急激な血糖値の上昇は、空腹時の血糖値が正常域にある健常者でも起こり得る。食後に急激な血糖値上昇をくり返すと、血管壁に損傷を与えることや、脳梗塞、心筋梗塞のリスクを高めることになる。よって、ミソハギ及び／又はその抽出物を有効量用いることで、血管の損傷抑制や、脳梗塞又は心筋梗塞のリスク低減に効果を奏する。また、本発明は、血糖値改善、ＨｂＡ１ｃ改善、血管の健康、脳梗塞又は心筋梗塞が気になる健常者、若しくは、それらの予防を意識する健常者に向けられる飲食料品にも好適である。

また、後述の別の実施例において、ミソハギ及び／又はその抽出物が、リパーゼ阻害作用を有することが見出されている。また、ミソハギ抽出物中のグラナチンＡ、ルセニン２、及び、ビセニン２からなる群より選択される少なくとも１種がその活性に寄与していることが明らかとなった。これにより、ミソハギ及び／又はその抽出物並びにその活性成分を有効量用いることで、リパーゼを阻害し、腸管からの脂質吸収を抑制し、内臓脂肪を低減することに繋がる。同様の作用機序を有する医薬品としては、例えば、セチリスタットが臨床で用いられている。セチリスタットは、リパーゼを阻害することで、脂質吸収を抑制し、内臓脂肪、ＨｂＡ１ｃ、ＬＤＬコレステロール、総コレステロール、収縮期血圧を低下させ、体重を減少させたことが報告されている。また、本発明は、肥満改善、内臓脂肪改善、ＬＤＬコレステロール改善、総コレステロール改善、血圧改善が気になる健常者、若しくは、それらの予防を意識する健常者に向けられる飲食料品にも好適である。

［飲食料品］
本発明の組成物は、飲食料品の一つの成分として配合することが可能である。これらの飲食料品は、限定はされないが、脂質吸収抑制、内臓脂肪の低減、血中コレステロール上昇抑制、血中トリグリセリド上昇抑制、血糖値の上昇抑制、及び、二糖類の消化吸収抑制等のために用いられる飲食料品として用いることも可能であり、例えば、病院等の医療機関で患者のために提供され得る。またはこれらの飲食料品は、限定はされないが、機能性飲料又は機能性食品として提供することも可能であり、これらの機能性飲食料品は、医療機関の他、ドラッグストア、コンビニエンスストア、スーパーマーケット、百貨店等で提供され得る。機能性飲食料品とは、国や公共団体が許可・指定している医薬品的な効能を有する飲食品又は企業が国等に所定の効果を届け出た内容に基づき機能性を表示した飲食料品をいう。機能性食品には、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、老人用食品、健康補助食品（バランス栄養食、サプリメント）等が挙げられる。医薬品的な効能又は機能性を表示したパッケージや容器、添付文書、取扱い説明書等を含む飲食品も含まれる。国等への申請書に医薬品的な効能又は機能性を表示した飲食品も含まれる。

食品としては、あらゆる食品が挙げられ、例えば、穀類、いも類、魚介類、肉類、卵類、油脂類、乳類、野菜類、豆類、果実類、砂糖類、海藻類、菓子類、調味料類、調理加工食品類等が挙げられる。

調味加工食品としては、限定はされないが、例えば、ちくわ、かまぼこ等の水産加工品；ハムやソーセージ等の畜産加工品；クッキー、ビスケット、スナック、チョコレート、ケーキ等の菓子；そば、うどん、生麺、中華麺、パスタ等の麺類；食パン、菓子パン等のパン；納豆、味噌等の発酵加工食品；豆腐、おから等の大豆食品；浅漬け、糠漬け等の漬け物、水産品、加工肉、野菜、果物等の缶詰；バター、マーガリン、ヨーグルト、チーズ、牛乳等の乳製品；アイスクリーム、シャーベット等の冷菓食品等が挙げられる。

飲料としては、あらゆる飲料が挙げられ、限定はされないが、例えば、ミソハギそのものをお茶とする飲料、お茶の葉の代用としての焙煎乾燥物、果汁飲料、果汁１００％飲料、低果汁飲料、果肉飲料、野菜ジュース、フレーバー入り飲料、希釈用果実飲料等の果実飲料；炭酸飲料；コーヒー、コーヒー飲料、コーヒー入り清涼飲料、ココア飲料、紅茶、緑茶、抹茶、烏龍茶、麦茶、ほうじ茶等の嗜好飲料；食酢飲料；スポーツドリンク等の清涼飲料水；牛乳；乳飲料；乳性飲料；乳酸飲料；乳酸菌飲料；豆乳、調製豆乳等の大豆飲料；ビール、日本酒、焼酎、リキュール、ワイン等のアルコール飲料；タウリン、ローヤルゼリー、アミノ酸、ビタミン、ミネラル、鉄分等を含む栄養飲料等が挙げられる。

本発明を飲食料品に適用する時期に制限はないが、例えば、飲食料品の製造工程において、加工工程、調理工程、加熱工程、保存工程等の前後において適用され得る。例えば、加工工程や調理工程においては、原料に本発明の生活習慣病予防及び／又は改善用組成物を含ませることができる。適用方法は、飲食料品の種類、原料の形態等に応じて適宜変更することができ、混入、添加、塗布、噴霧、浸漬等の様々な方法を採用し得る。

本発明の組成物を飲料品に適用する場合、一つの実施形態において、茶飲料とすることが好ましい。限定はされないが、乾燥したミソハギの葉部及び／又は茎部は、公知の方法により裁断された後、破砕又は粉砕され粉状物とされる。ミソハギの粉状物の状態で、茶飲料として販売することが可能である。また、必要により、ミソハギの粉状物は焙煎される。ミソハギの粉状物は焙煎された状態で茶飲料として販売することも可能である。ミソハギの粉状物や焙煎物は、例えば、ティーバッグに適量を封入した形態で販売することも可能である。焙煎されたミソハギは、熱湯で煮出すことで飲用される。

また、前記飲料や他の茶飲料と、ミソハギ又はその抽出物とを混合物として、又は水などで薄めてジュースやドリンク剤等として用いることができる。更に、前記混合物の濃縮品、噴霧乾燥等によって粉末状にした粉末茶、凍結乾燥したインスタント茶等として利用することができる。その場合、たとえば粉末茶やインスタント茶にお湯を注いで飲むことができる。また、例えば緑茶や紅茶などの茶調製物とミソハギ又はその抽出物との混合物を飲料用茶葉としてそのまま用いることもできる。その場合、一般的な日本茶や紅茶の飲用物と同様にして、茶調製物とミソハギ又はその抽出物との混合茶葉に湯を注いで飲むことができる。

本発明の組成物を飲食料品に適用する場合は、本発明の効果を損なわない範囲で通常の食品及び飲料に使用されている助剤を適宜配合することが可能である。そのような助剤としては、例えば、ブドウ糖、ショ糖、果糖、オリゴ糖、水飴、マルトース、マルチトース、キシリトール、ソルビトール、アスパルテーム、スクラロース、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ－アスコルビン酸、ｄＬ－α－トコフェノール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、グリセリン脂肪酸エステル、プロピレングリコール、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸、ソルビタン脂肪酸エステル、エステルアラビアガム、カゼイン、ペクチン、ゼラチン、寒天、カラギーナン、ビタミンＢ類、ビタミンＣ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、カルシウム塩類、アミノ酸類、色素、香料、保存剤等が挙げられる。

本発明の組成物を飲食料品に適用する場合のミソハギ又はその抽出物の含有量は、限定はされないが、固形分換算で、ヒト及び動物であれば、一般に１日あたり０．００００１～５０００ｍｇ／ｋｇ体重であり、好ましくは０．０１～２００ｍｇ／ｋｇ体重であり、より好ましくは０．１～１００ｍｇ／ｋｇ体重である。かかる１日当りの摂取量は、１回で摂取してもよく、また、２回又は３回等、複数回に分割して摂取してもよい。

本発明の組成物を飲料品に適用する場合のｐＨは、飲料品の種類によって適宜調整されるが、例えば、茶飲料の場合は、ｐＨ３．５～７．５とすることができ、３．８～７．２が好ましく、４．０～７．０がより好ましく、４．５～６．５がさらに好ましい。飲料品のｐＨは、例えば、炭酸水素ナトリウム、クエン酸等を適宜配合することにより調整することができる。

［医薬品、医薬部外品］
本発明の組成物は、医薬品や医薬部外品とされる場合は、適宜の形態に製剤化し、任意の投与形態でヒト又は動物に投与することができる。投与形態としては、限定はされないが、例えば、経口、経皮、経腸、経粘膜、注射などが挙げられる。本発明の効果を顕著に奏する観点から、投与形態は経口投与が好ましい。

本発明の組成物が経口投与される場合は、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、シロップ剤、散剤、フィルム状、ドロップ状、ゼリー状、半固体のプリン状等の剤型に、公知の方法で製剤化される。フィルム状、ドロップ状、ゼリー状、半固体のプリン状の剤型等により、経口投与の場合は、本発明の生活習慣病予防及び／又は改善用組成物は、水無しにより摂取されることが可能である。または、ミソハギ又はその抽出物若しくは精製物の乾燥粉末を生薬又は漢方薬製剤として経口投与することも可能である。

非経口投与する場合は、例えば、静脈内注射、筋肉注射剤、経皮吸収剤、吸入薬、坐剤、点眼剤、点鼻剤等の剤型に公知の方法で製剤化することが可能である。

投与形態の一態様として、ミソハギ又はその抽出物若しくは精製物の安定性及び生体利用性を高め、あるいは患者の服薬コンプライアンスを向上するため、又はこれらを組み合わせた目的のために、公知の薬物送達システムを利用して、吸収部位まで本発明の組成物を送達することが可能である。

薬物送達システムとしては、限定されないが、例えばセルロース、デキストラン、澱粉、ポリビニルアルコール、アセチル化若しくはメタクリル化されたポリマー、ポリ乳酸及びポリグリコール酸及びそのブロック共重合体、ポリエチレングリコール等のポリマーを利用する方法、アルブミン等の輸送タンパク質を利用する方法、その他ミセル、リポソーム、ミクロスフェア、ナノ粒子、複合エマルジョン、デンドリマー等を利用する方法が挙げられる。これらの薬物送達システムは、吸収部位等の目的の部位へ本発明の組成物を運搬する目的だけでなく、適時に本発明の組成物を放出する放出制御の目的にも用いられ得る。

本発明の組成物は、本発明の効果を損なわない範囲で、固形の製剤においては、賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤等を、液状の製剤においては、溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤等を適宜配合することが可能である。

賦形剤としては、例えば、乳糖、白糖、Ｄ－マンニトール、ぶどう糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、軽質無水ケイ酸などが挙げられる。

滑沢剤の好適な例としては、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク、精製タルク、コロイドシリカ、ホウ砂、ポリエチレングリコール等が挙げられる。

結合剤としては、例えば、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、結合セルロース、白糖、Ｄ－マンニトール、デキストリン、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。

崩壊剤としては、例えば、デンプン、乾燥デンプン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルメロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖等が挙げられる。

溶剤としては、例えば、注射用水、アルコール、プロピレングリコール、マクロゴール、ゴマ油、トウモロコシ油等が挙げられる。

溶解補助剤としては、例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、Ｄ－マンニトール、安息香酸ベンジル、エタノール、トリスアミノメタン、コレステロール、トリエタノールアミン、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム等が挙げられる。

懸濁化剤としては、例えば、ステアリルトリエタノールアミン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルアミノプロピオン酸、レシチン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、モノステアリン酸グリセリン等の界面活性剤や、例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース等の親水性高分子等が挙げられる。

等張化剤としては、例えば、塩化ナトリウム、グリセリン、Ｄ－マンニトール等が挙げられる。

緩衝剤としては、例えば、リン酸塩、酢酸塩、炭酸塩、クエン酸塩などの緩衝液等が挙げられる。

無痛化剤としては、例えば、ベンジルアルコール等が挙げられる。

防腐剤としては、例えば、パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソルビン酸等が挙げられる。

本発明の組成物を経口により投与する場合のミソハギ又はその抽出物の有効投与量は、限定はされないが、固形分換算で、ヒト及び動物であれば、一般に１日あたり０．００００１～５０００ｍｇ／ｋｇ体重であり、好ましくは０．０１～２００ｍｇ／ｋｇ体重であり、より好ましくは０．１～１００ｍｇ／ｋｇ体重である。投与回数は、通常は１日１～４回程度であるが、投与経路等によって、適宜調整することができる。

次に、試験例、実施例等により本発明を具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。

［試験１．ミソハギ及び／又はその抽出物のリパーゼ阻害活性の検討］
（実施例１）生鮮ミソハギからの含水有機溶媒による抽出方法１
（１－１．抽出方法）
生鮮ミソハギ（収穫時期９月～１２月、以下のミソハギについても同様）４ｋｇに、１５Ｌの８０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏを用いて、室温で４８時間浸漬した後、抽出液を濾過し、濾液を得た。残渣に再度１５Ｌの８０％ＭｅＯＨを加え、同条件で繰り返し抽出、濾過により濾液を得た。濾液を合一し、ロータリーエバポレーターを用いて減圧濃縮し、ミルサーで粉砕後ＭｅＯＨ抽出物（２７１．５８ｇ）を得た（図１）。

（１－２．液液分配による分画方法）
得られたミソハギ抽出物に対して、液液分配による分画を行った。得られた８０％ＭｅＯＨ抽出物（乾固物重量：５．４ｇ）を水１３５ｍＬに懸濁し、Ｈｅｘａｎｅ１００ｍＬで３回液液分配を行い、水層とＨｅｘａｎｅ層（０．１７ｇ）を得た。得られた水層をＡｃＯＥｔ１０００ｍＬで４回分配を行い、濃縮乾固後、水層（４．７０ｇ）、ＡｃＯＥｔ層（０．３６４ｇ）を得た（図２）。下記［リパーゼ阻害活性測定法］の記載に従って、各画分のリパーゼ阻害活性を測定した結果、水層（阻害率：６４．８％）に高い活性が認められた。一方で、ＡｃＯＥｔ層（阻害率：１６．３％）、ｈｅｘａｎｅ層（阻害率：３．６６％）は十分な活性を示さなかった。

（１－３．ＯＤＳ中圧カラムクロマトグラフィーによる水層の分画）
上記の液液分配による分画にて最も高い活性を示したＨ_２Ｏ抽出物３．６３ｇをＯＤＳ中圧カラムクロマトグラフィーに供した（図３）。条件は、下記のとおりである。
ＯＤＳ ：Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ ＯＤＳ ＤＭ１０２０Ｔ、ＦＵＪＩ ＳＩＬＹＳＩＡ ＣＨＥＭＩＣＡＬ ＬＴＤ．製、１００－２００ｍｅｓｈ
カラムサイズ：２０ｍｍ ｉ．ｄ．×３２５ｍｍ
溶離液 ：ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（濃度０～１００％）、各２，５００ｍＬ

上記条件で、０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶出部（１．６９ｇ）、２０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶出部（１．７９ｇ）、４０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶出部（０．１２ｇ）、及び、１００％ ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶出部（０．０６ｇ）を得た。各画分は下記［リパーゼ阻害活性測定法］の記載に従って、リパーゼ阻害活性を測定した（図４）。

（１－４．ＯＤＳ２０％ ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶出部の分画）
上記１－３で最も高い活性を示した２０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶出部を、下記［ＨＰＬＣ条件Ｉ］に示した方法で精製を進めた。逆相系のＨＰＬＣを用い、保持時間に従ってＦｒ．１～４の４つの画分に分画した（図５）。得られた各画分は下記（１－６．リパーゼ阻害活性測定法）の記載に従って、リパーゼ阻害活性を測定したところ（図６）、最も高い活性を示したＦｒ．２が関与成分であると推定し、化合物１として単離・精製し、下記（１－７．構造解析）に記載の方法に従って、ＮＭＲ分析に供した。

［ＨＰＬＣ条件Ｉ］
分析装置 ：島津製作所製 ＬＣ－１０Ａ
カラム ：ＣＯＳＭＯＳＩＬ ５Ｃ１８－ＭＳ－ＩＩ（１０ｍｍ ｉ．ｄ．×２５０ｍｍ，Ｎａｃａｌａｉ ｔｅｓｑｕｅ）
溶離液 ：Ａ ０．５％ Ｆｏｒｍｉｃ ａｃｉｄ／Ｈ_２Ｏ
Ｂ ０．５％ Ｆｏｒｍｉｃ ａｃｉｄ／ＭｅＯＨ
グラジエント：０－３５ｍｉｎ（Ｂ ｃｏｎｃ．１０％）、３５－４０ｍｉｎ（１０－５０％）、４０－５５ｍｉｎ（５０％）、５５－６０ｍｉｎ（５０－１０％）
流速 ：３．０ｍＬ／ｍｉｎ
検出器 ：紫外分光検出器（ＵＶ）
カラム温度 ：４０℃

（１－５．ＯＤＳ２０％ ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶出部の分画）
上記１－４で得られたＯＤＳ２０％ ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶出部の画分Ｆｒ．３を［ＨＰＬＣ条件ＩＩ］に示した方法で分析を行った。
保持時間に従ってＦｒ．１～４に分画した（図７）。各画分のリパーゼ阻害活性を測定したところ、活性の発現にはＦｒ．２とＦｒ．３の共存が必要であることが明らかとなった。そこで、Ｆｒ．３をさらにＦｒ．３－１～３－３に分画した（図８）。Ｆｒ．２とこれらの画分についてリパーゼ阻害活性を評価したところ、Ｆｒ．３－１とＦｒ．３－２とが活性に関与していることが分かった。そこで、Ｆｒ．３－１を化合物２、Ｆｒ．３－２を化合物３として単離・精製し、下記（１－７．構造解析）に記載の方法に従って、ＮＭＲ分析に供した。

［ＨＰＬＣ分析条件ＩＩ］
分析装置 ：島津製作所製 ＬＣ－１０Ａ
カラム ：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ－４（１０ｍｍ ｉ．ｄ．×２５０ｍｍ，ＧＬ ｓｃｉｅｎｃｅ Ｉｎｃ．）
溶離液 ：３５％ ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ
流速 ：３．０ ｍＬ／ｍｉｎ
検出器 ：紫外分光検出器（ＵＶ）
カラム温度 ：４０℃

（１－６．リパーゼ阻害活性測定法）
（１）試薬の調製
豚膵臓リパーゼ１．０ｍｇに１２５ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．５）を２０ｍＬ添加し、撹拌、５秒間超音波処理を行なった後、再度撹拌を行ったものを酵素溶液とした。リパーゼキットＳ付属の緩衝液３００μＬで発色剤３０ｍｇを溶解し、超純水２７５０μＬを加えたものを発色原液とした。測定時には、この発色原液３００μＬを超純水２４００μＬ、緩衝液３００μＬで希釈し、発色液を調製した。反応停止原液５ｍＬを超純水で１００ｍＬに希釈し、反応停止液とした。
（２）活性測定法
０．５６ｍＬ容９６穴ディーププレート（ＢＭ６０２８、ＢＭ Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ Ｃｏ．Ｌｔｄ．）にサンプル（５０ｍＬ ｅｑ．ｄ．ｗ．／ｍＬ ｉｎ ＤＭＳＯ ｏｒ ５０％ＭｅＯＨ）１５μＬ、発色液５０μＬ、酵素溶液５μＬを順次添加し、暗所下３０℃で５分間静置した。その後、基質液５μＬを添加し、暗所下３０℃で静置した。基質添加から３０分後、反応停止液１００μＬを添加し酵素反応を停止させ、１時間以内に４１２ｎｍにおける吸光度を測定した。
サンプル添加時の吸光度（Ａｓａｍｐｌｅ）、サンプルの代わりに１００％ＤＭＳＯを添加したコントロールの吸光度（Ａｃｏｎｔｒｏｌ）、酵素溶液の代わりに１２５ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液を添加したブランクの吸光度（Ａｓａｍｐｌｅ ｂｌａｎｋ），（Ａｃｏｎｔｒｏｌ ｂｌａｎｋ）を以下の式に代入し、リパーゼ阻害率を算出した。

リパーゼ阻害率(%)=｛1－(Asample－Asample blank)/(Acontro－Acontrol blank)｝×100

（１－７．構造解析）
^１Ｈ－ＮＭＲスペクトル、及び、^１３Ｃ－ＮＭＲスペクトルの測定は、ＪＮＭ－ＥＣＸ５００（ＪＥＯＬ社製）を用い、当該装置の使用法に従って^１Ｈ－ＮＭＲの測定周波数は５００ＭＨｚ、^１３Ｃ－ＮＭＲの測定周波数は１２５ＭＨｚにて測定した。

化合物１の解析結果は、以下の通りであり、グラナチンＡであることが認められた。
^１３Ｃ－ＮＭＲ：（ＣＨ３）３２．２、（ＣＨ２）５０．１、６４．７、（ＣＨ）５１．６、６１．０、６９．３、７０．８、７１．０、９０．０、１０８．７、１０９．５、１１３．５、１２７．４、（Ｃ＝Ｏ）２０６．７、（Ｃ＝ＯＯ）１６５．３、１６５．９、１６６．６、１６８．８、（Ｃ）８１．１、１０９．６、１１６．０、１１７．２、１１７．８、１１９．７、１２５．４、１２５．７、１３６．４、１３６．９、１３７．０、１４４．６、１４４．６、１４４．８、１４５．１、１４５．５、１４７．０、１４７．６、１９８．０
^１Ｈ－ＮＭＲ：２．１８（ｓ）、２．７７（ｄ，Ｊ＝５）、３．２６（ｄ，Ｊ＝１５）、４．１１（ｄｄ，Ｊ＝１１．５，５．０）、４．５３（ｓ）、４．６３（ｄ、Ｊ＝１３．０，５．５）、４．９６（ｄｄ，Ｊ＝８１２．０，１２．０）、５．０１（ｓ）、５．１７（ｓ）、６．１０（ｓ）

化合物２の解析結果は、以下の通りであり、ルセニン２であることが認められた。
^１３Ｃ－ＮＭＲ：（６－Ｇｌｕｃｏｓｅ）６０．４、６９．６、７１．５、７３．９、７８．４、８１．４、（８－Ｇｌｕｃｏｓｅ）６２．２、７０．９、７２．４、７４．６、７９．４、８２．６、（Ｃ）１０３．０、１０３．６、１０５．８、１０８．０、１１４．５、１１６．５、１１９．９、１２２．３、１４６．４、１５０．４、１５５．９、１５９．２、１６１．９、１６４．７、１８２．７
^１Ｈ－ＮＭＲ：（６－Ｇｌｕｃｏｓｅ）３．８５、４．７３、（８－Ｇｌｕｃｏｓｅ）３．８２、４．８５、（Ｈ）６．５２、６．８８（ｄ，Ｊ＝８．１）、７．３８、７．４３（ｄ，Ｊ＝８．１）

化合物３の解析結果は、以下の通りであり、ビセニン２であることが認められた。
^１３Ｃ－ＮＭＲ：（６－Ｇｌｕｃｏｓｅ）６０．２、６９．５、７１．４、７３．９、７８．３、８２．４、（８－Ｇｌｕｃｏｓｅ）６１．８、７１．０、７２．４、７４．６、７９．２、８１．４、（Ｃ）１０３．１、１０４．３、１０５．７、１０８．１、１１６．３、１２２．０、１２６．９、１２９．６、１５５．４、１５９．１、１６１．４、１６１．７、１６４．６、１８２．７
^１Ｈ－ＮＭＲ：（６－Ｇｌｕｃｏｓｅ）４．７１（ｄ，Ｊ＝９．８）、（８－Ｇｌｕｃｏｓｅ）４．７６（ｄ，Ｊ＝９．８）、（Ｈ）６．７８（ｓ）、６．８８、７．９４

［試験２．ミソハギ及び／又はその抽出物のα－グルコシダーゼ阻害活性の検討］
（実施例２）乾燥ミソハギからの含水有機溶媒による抽出方法１
（２－１．抽出方法）
ミソハギ（乾燥葉及び茎）を裁断した後、８０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏを添加、その後室温で４８～７２時間抽出した。抽出液を濾過し（Ｎｏ．２、Ｔｏｙｕ Ｒｏｓｈｉ Ｋａｉｓｙａ，Ｌｔｄ．製）、残渣に８０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏを添加し、７５℃で３時間加熱しながら再抽出した。その後濾過し、８０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏを加え６０℃で１時間ソニケーションをし、濾過した。得られた濾液は、エバポレーターを用いて濃縮した。窒素置換をした後、凍結乾燥、粉砕したものを８０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ抽出物とした（図９）。また、抽出率は２５．１％であった。

（２－２．液液分配による分画方法）
得られたミソハギ抽出物に対して、液液分配による分画を行った（図１０）。ミソハギ乾燥植物体の８０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ抽出物（乾固物重量：８．０２ｇ）を５０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏで懸濁し、Ｈｅｘａｎｅで３回液液分配を行った。５０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ層を回収後、ＭｅＯＨをエバポレーターで留去した後、Ｈ_２Ｏを添加し、ＡｃＯＥｔで３回液液分配を行った。それぞれ、Ｈｅｘａｎｅ層（０．１４ｇ）、ＡｃＯＥｔ層（１．３５ｇ）、Ｈ_２Ｏ層（７．８８ｇ）を得た。

（２－３．ＯＤＳ中圧カラムクロマトグラフィーによる水層の分画）
得られたＨ_２Ｏ抽出物１．６９ｇをＯＤＳ中圧カラムクロマトグラフィーに供した（図１１）。条件は、下記のとおりである。
ＯＤＳ ：Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ ＯＤＳ ＤＭ１０２０Ｔ、ＦＵＪＩ ＳＩＬＹＳＩＡ ＣＨＥＭＩＣＡＬ ＬＴＤ．製、１００－２００ｍｅｓｈ
カラムサイズ：５０ｍｍ ｉ．ｄ．×１７０ｍｍ
溶離液 ：ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（濃度０～１００％）、各３，４００ｍＬ

上記条件で、０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶出部（１．５０ｇ）、２０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶出部（０．６６ｇ）、４０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶出部（０．１９ｇ）、１００％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶出部（０．１６ｇ）を得た。各画分は下記（２－９．α－グルコシダーゼ阻害活性測定法）の記載に従って、α－グルコシダーゼ阻害活性を測定した（図１２）。

（２－４．ＯＤＳ２０％ ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ溶出部の分画）
上記２－３において、α－グルコシダーゼ阻害活性の評価結果の高かった２０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶出部を［ＨＰＬＣ条件ＩＩＩ］に示した方法で精製を進めた。
逆相系のＨＰＬＣを用い、保持時間に従ってＦｒ．１～３の３つの画分に分画した（図１３）。各画分のα－グルコシダーゼ阻害活性を測定したところ、最も阻害活性の高かったＦｒ．２について、溶離液を１０％ ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏに変更し、分画を行った。保持時間に従い、Ｆｒ．２－１～２－３の３つの画分に分画し（図１４）、主要なピークであるＦｒ．２－２は化合物Ａとして単離・精製した。
得られた９．８ｍｇ（ｆｒｏｍ １．７ｇ ｅｑ．）をＮＭＲ分析に供した。

［ＨＰＬＣ条件ＩＩＩ］
分析装置 ：島津製作所製 ＬＣ－１０Ａ
カラム ：ＣＯＳＭＯＳＩＬ ５Ｃ１８－ＭＳ－ＩＩ （１０ ｍｍ ｉ．ｄ．×２５０ｍｍ，Ｎａｃａｌａｉ ｔｅｓｑｕｅ）
溶離液 ：２０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ ｏｒ １０％ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ
流速 ：３．０ｍＬ／ｍｉｎ
検出器 ：紫外分光検出器（ＵＶ）
カラム温度 ：４０℃

（２－５．ＯＤＳ４０％ ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶出部の分画）
上記２－３において、α－グルコシダーゼ阻害活性の評価結果の高かった４０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶出部を［ＨＰＬＣ条件ＩＶ］に示した方法で分析を行った。
保持時間に従ってＦｒ．１～４に分画した（図１５）。各画分のα－グルコシダーゼ阻害活性を測定したところ、最も阻害活性の高かったＦｒ．２について、溶離液を２０％ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏに変更し、分画を行った。保持時間に従い、Ｆｒ．２－１～２－５の５つの画分に分画し（図１６）、各画分のα－グルコシダーゼ阻害活性を測定したところ、活性の認められたＦｒ．２－４を化合物Ｂとして単離・精製した。
得られた化合物Ｂの３０．６ｍｇ（ｆｒｏｍ ９．８ｇ ｅｑ．）をＮＭＲ分析に供した。

［ＨＰＬＣ分析条件ＩＶ］
分析装置 ： ＨＩＴＡＣＨＩ社製 Ｌ－６２００
カラム ：ＣＯＳＭＯＳＩＬ ５Ｃ１８－ＭＳ－ＩＩ（１０ｍｍ ｉ．ｄ．×２５０ｍｍ，Ｎａｃａｌａｉ ｔｅｓｑｕｅ）
溶離液：３０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ ｏｒ ２０％ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ
流速：３．０ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：紫外分光検出器（ＵＶ）
カラム温度：４０℃

（２－６．ＡｃＯＥｔ層の分画）
上記２－２で得られたミソハギＡｃＯＥｔ層をシリカゲル中圧カラムを用いて分画した（図１７）。条件は、下記のとおりである。
シリカゲル中圧カラム：Ｗａｋｏｇｅｌ（登録商標）Ｃ－３００、Ｗａｋｏ ｐｕｒｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｌｔｄ．製、４５－７５ｍｅｓｈ
カラムサイズ ：２０ｍｍ ｉ．ｄ．×２８０ｍｍ
溶離液：ＡｃＯＥｔ／Ｈｅｘａｎｅ（濃度４０～１００％）、各１，３００ｍＬ

このような条件で、４０％ＡｃＯＥｔ／Ｈｅｘａｎｅ溶出部（０．３８ｇ）、６０％ＡｃＯＥｔ／Ｈｅｘａｎｅ溶出部（０．０９ｇ）、８０％ＡｃＯＥｔ／Ｈｅｘａｎｅ溶出部（０．９８ｇ）、１００％ＡｃＯＥｔ／Ｈｅｘａｎｅ溶出部（０．２７ｇ）を得た。得られた各画分は下記（２－９．α－グルコシダーゼ阻害活性測定法）の記載に従って、α－グルコシダーゼ阻害活性を評価した。

（２－７．ＯＤＳ中圧カラムによる８０％ ＡｃＯＥｔ／Ｈｅｘａｎｅ の分画）
上記２－６で得られたミソハギ８０％ＡｃＯＥｔ層の分画をＯＤＳ中圧カラムを用いて行った（図１７）。条件は下記のとおりである。
ＯＤＳ：Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ ＯＤＳ ＤＭ１０２０Ｔ（ＦＵＪＩ ＳＩＬＹＳＩＡ ＣＨＥＭＩＣＡＬ ＬＴＤ．製、１００－２００ｍｅｓｈ）
カラムサイズ：１５ ｍｍ ｉ．ｄ．×３００ｍｍ
溶離液：ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（濃度０～１００％）、各６００ｍＬ

このような条件で０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶出部（０．０６４ｇ）、２０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶出部（０．１２ｇ）、４０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶出部（０．１３ｇ）、１００％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶出部（０．０８９ｇ）、１００％ＥｔＯＨ溶出部（０．０７９ｇ）を得た。各画分は下記（２－９．α－グルコシダーゼ阻害活性測定法）の記載に従って、α－グルコシダーゼ阻害活性を測定した。

（２－８．逆相系ＨＰＬＣによるＡｃＯＥｔ層４０％ ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶出部の分画）
上記２－７．で得られた４０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶出部を［ＨＰＬＣ条件Ｖ］に示した方法で分析を行った。保持時間に従ってＦｒ．１～５に分画した（図１８）。各画分のα－グルコシダーゼ阻害活性を測定したところ、活性の認められたＦｒ．２を化合物Ｃとして単離・精製した。
化合物Ｃ ９７．１ｍｇ（ｆｒｏｍ ３０ｇ ｅｑ．）はＮＭＲ分析の結果、化合物Ｂと同一であった。

［ＨＰＬＣ分析条件Ｖ］
分析装置 ：島津製作所製 ＬＣ－１０Ａ
カラム ：ＣＯＳＭＯＳＩＬ ５Ｃ１８－ＭＳ－ＩＩ（１０ｍｍ ｉ．ｄ．×２５０ｍｍ，Ｎａｃａｌａｉ ｔｅｓｑｕｅ）
溶離液 ：２０％ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ
流速 ：３．０ｍＬ／ｍｉｎ
検出器 ：紫外分光検出器（ＵＶ）
カラム温度 ：４０℃

（２－９．α－グルコシダーゼ阻害活性測定法）
（１）試薬の調製
ラット腸管アセトンパウダー０．１ｇに、０．１Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）を１．０ｍＬ添加した後、毎分５分ごとに攪拌を１時間行った。攪拌後、遠心分離し（１５，０００ｒｐｍ、４５ｍｉｎ、４℃）、上清を回収したものをα－グルコシダーゼ溶液（１００ｍｇ／ｍＬ）とした。測定に用いる際は０．１Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）で１０倍希釈した。基質として用いるマルトースは、０．１Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解し、０．２５Ｍマルトース溶液とした。発色試薬は、グルコースＣ－ＩＩテストワコーの発色剤１瓶を緩衝液１瓶で溶解した。
（２）活性測定法
０．５６ｍＬ容９６穴ディーププレート（ＢＭ６０２８、ＢＭ Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ Ｃｏ． Ｌｔｄ．）に１００％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解したサンプル溶液２５μＬ、０．１Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）１００μＬ、０．２５Ｍ マルトース溶液１００μＬを順次添加した。その後、３７℃で５分間インキュベーションした後、α－グルコシダーゼ溶液（１０ｍｇ／ｍＬ）２５μＬを添加し、さらに４０分間、３７℃でインキュベーションした。正確に酵素反応させた後、０．２Ｍ 炭酸ナトリウム水溶液を２５０μＬ添加して反応を停止し、これをサンプル反応溶液とした。一方、０．２Ｍ 炭酸ナトリウム水溶液を添加後に、α－グルコシダーゼ溶液を添加したものをブランク、サンプルの代わりにＤＭＳＯを添加したものをコントロールとした。

９６穴マイクロプレートにサンプル反応溶液１６μＬ、発色試薬２４０μＬを順次添加し、サーモマイクロプレートシェイカーを用いて３７℃で５分間攪拌した後、マイクロプレートリーダーで５０５ｎｍにおける吸光度を測定した（図１９）。
グルコース溶液を用いて検量線を作成し、各ウェルの吸光度からグルコース生成量を算出した。試料の有する阻害活性値は、阻害率（％）として、以下の式を用いて算出した。

α－グルコシダーゼ阻害率（％）＝｛１－（■－■）／（■－■）｝×１００
Ａ： サンプルのグルコース生成量
Ｂ： サンプルブランクのグルコース生成量
Ｃ： コントロールのグルコース生成量
Ｄ： コントロールブランクのグルコース生成量
なお、３回繰り返し測定による阻害率は、平均値±標準誤差で表した。

（２－１０．構造解析）
^１Ｈ－ＮＭＲスペクトル、及び、^１３Ｃ－ＮＭＲスペクトルの測定は、ＪＮＭ－ＥＣＸ５００（ＪＥＯＬ社製）を用い、当該装置の使用法に従って^１Ｈ－ＮＭＲの測定周波数は５００ＭＨｚ、^１３Ｃ－ＮＭＲの測定周波数は１２５ＭＨｚにて測定した

化合物Ａの解析結果は、以下の通りであり、グラナチンＡであることが認められた。
^１３Ｃ－ＮＭＲ：（ＣＨ３）３２．２、（ＣＨ２）５０．１、６４．７、（ＣＨ）５１．６、６１．０、６９．３、７０．８、７１．０、９０．０、１０８．７、１０９．５、１１３．５、１２７．４、（Ｃ＝Ｏ）２０６．７、（Ｃ＝ＯＯ）１６５．３、１６５．９、１６６．６、１６８．８、（Ｃ）８１．１、１０９．６、１１６．０、１１７．２、１１７．８、１１９．７、１２５．４、１２５．７、１３６．４、１３６．９、１３７．０、１４４．６、１４４．６、１４４．８、１４５．１、１４５．５、１４７．０、１４７．６、１９８．０
^１Ｈ－ＮＭＲ：２．１８（ｓ）、２．７７（ｄ，Ｊ＝５）、３．２６（ｄ，Ｊ＝１５）、４．１１（ｄｄ，Ｊ＝１１．５， ５．０）、４．５３（ｓ）、４．６３（ｄ、Ｊ＝１３．０，５．５）、４．９６（ｄｄ，Ｊ＝８１２．０， １２．０）、５．０１（ｓ）、５．１７（ｓ）、６．１０（ｓ）

化合物Ｂ及び化合物Ｃの解析結果は、以下の通りであり、ヘリオスコピニンＡであることが認められた。
^１３Ｃ－ＮＭＲ：（ＣＨ３）３２．１、（ＣＨ２）４９．２、６３．９、（ＣＨ）５１．６、６１．０、６９．３、７０．８、７１．０、９０．０、１０８．７、１０９．５、１１３．５、１２７．４、（Ｃ＝Ｏ）２０６．７、（Ｃ＝ＯＯ）１６５．３、１６５．９、１６６．６、１６８．８、（Ｃ）８１．１、１０９．６、１１６．０、１１７．２、１１７．８、１１９．７、１２５．４、１２５．７、１３６．４、１３６．９、１３７．０、１４４．６、１４４．６、１４４．８、１４５．１、１４５．５、１４７．０、１４７．６、１９８．０
^１Ｈ－ＮＭＲ：２．１８（ｓ）、２．７７（ｄ，Ｊ＝５）、３．２６（ｄ，Ｊ＝１５）、４．１１（ｄｄ，Ｊ＝１１．５， ５．０）、４．５３（ｓ）、４．６３（ｄ、Ｊ＝１３．０，５．５）、４．９６（ｄｄ，Ｊ＝８１２．０， １２．０）、５．０１（ｓ）、５．１７（ｓ）、６．１０（ｓ）

Claims (7)

1. ミソハギ（Ｌｙｔｈｒｕｍ ａｎｃｅｐｓ）、及び／又は、その抽出物を有効量含有する、脂質吸収抑制、内臓脂肪の低減、血中コレステロール上昇抑制、血中トリグリセリド上昇抑制、血糖値の上昇抑制、及び、二糖類の消化吸収抑制からなる群より選択される少なくとも１種に用いるための組成物。
2. 前記ミソハギが、ミソハギの地上部を含む、請求項１に記載の組成物。
3. 前記抽出物の抽出溶媒が、水、エタノール、メタノール、グリセリン、１，３－ブチレングリコール及びこれらの混合物からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１又は２に記載の組成物。
4. グラナチンＡ、ヘリオスコピニンＡ、ルセニン２、及び、ビセニン２からなる群より選択される少なくとも１種を有効量含有する、脂質吸収抑制、内臓脂肪の低減、血中コレステロール上昇抑制、血中トリグリセリド上昇抑制、血糖値の上昇抑制、及び、二糖類の消化吸収抑制からなる群より選択される少なくとも１種に用いるための組成物。
5. 少なくとも１４日間以上継続して摂取するためのものである、請求項１～４のいずれか１項に記載の組成物。
6. 経口、静脈内注射、吸入又は経皮により投与される、請求項１～５のいずれか１項に記載の組成物。
7. 飲食品、医薬部外品、又は医薬品である、請求項１～６のいずれか１項に記載の組成物。