TW434235B - Novel triptolide derivatives useful in the treatment of autoimmune diseases - Google Patents

Description

434235 經濟部中央標隼局貝工消費合作社印製 五、發明説明（1 ) 發明背景 自體免疫和發炎疾病影響超過5千萬的美國人，最近10 至15年的分子和細胞免疫學的基礎硏究的結果，使得這些 以免疫爲基礎的疾病之診斷、治療和預防的硏究已經從此 改變了。藉由解剖免疫系統之各個組份，這些對免疫回應 之啓動和進行有重要關連性之細胞、受體和介體已經繼續 地被硏究。編碼於主要組織結合性複合體中之蛋白質的結 晶學分析、抗原-專一性T細胞受體的鑑定、和複合體組織 介質網絡的基本了解的發展均對免疫學的發展有所貢獻。 各種免疫抑制劑已經證明有利於移植排斥的預防和自體免 疫疾病的治療，例如類風濕性關節炎、腎炎、葡萄膜炎' 甲狀腺炎、和胰島素依賴性糖尿病、全身性紅斑狼瘡、牛 皮癬和炎性腸疾病之早期階段。 運作正常時，免疫系統與精密的功能有關，例如穿透 皮膚和黏膜表面之保護體屏障（移植的組織和例如細菌、 病毒、寄生蟲之微生物）或重新出現（惡性變性）之外來物 質（化學和細胞抗原）之確認和記憶、特異的回應和淸除。 免疫回應的防禦武器是由與巨噬細胞合作之二種主要淋巴 球所組成，其爲B-淋巴球（B細胞，負責製造攻擊入侵的微 生物之抗體）或T-淋巴球（T細胞，負責消除感染的或不正常 的目標細胞）。免疫系統之主要大事記載完全揭示於 I. Roitt, J. Brostoff and D. Male in 11 immunology u , 3rd edition, Mosby，1993，其內容倂入本文以供參考’並簡述 於下文中。 n^[ I - - I ^^^1 · - ----- ^—^1*----i HI —r--1 δ-φ (請先聞讀背面之注意事項#填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格（210 X 29?公t ) -4- 4 3 4P35 Λ7 B? 經濟部中央標準局貝工消费合作社印製 五、發明説明（2 ) 回應是以抗原與B細胞上的巨噬細胞和表面抗體間的反 應加以啓動，巨噬細胞攝取和處理抗原，活化的巨噬細胞 分泌內白素-1 (IL-I)和腫瘤壞死因子（TNF)，並於細胞表面 展現處理過的抗原以及主要的抗組織結合性抗原》IL-1和 TNF二者均啓始許多種與發炎有關的過程，同時，IL-1引發 B細胞的增殖和抗體的合成。但重要的是，IL-1活化T細胞 ，而T細胞釋出一系列的淋巴細胞活素（lymphokines ) ，包含活化T細胞的增殖之細胞毒性淋巴細胞的內白素-2 ( IL-2 )。於自體免疫疾病中，系統無法區分"非自體 (non-self ) ”抗原和“自體（self ) ”抗原，且將開始 產製攻擊身體的正常組份之自體抗體或自體反應性T細胞。 於免疫回應階段中之各個單位可視爲有潛力之藥理介 入的位置，例如，腎上腺素皮質類固醇作用於免疫回應之 第一階段，與巨噬細胞作用，及抑制IL-1的合成和釋出。其 他用於治療自體免疫疾病之免疫抑制劑已經確認》例如類 風濕性關節炎用之咪唑硫嘌呤（32311110?1^1^)和胺甲蝶呤（ methotrexate)、腎炎和免疫起源用之環磷醯胺、和類風濕性 關節炎，葡萄膜炎、甲狀腺炎、早期的胰島素依賴性糖尿 病、牛皮癖、腎炎徵候群和再生不能性貧血用之環孢子菌 素（cyclosporin) 0 此外，免疫抑制劑已經證實可用於預防和治療同種異 體移植可能發生之器官移植排斥。於同種異體移植時，一 人捐贈器官至基因工程上全異的個體，然而於異種移植時 ，一物種的器官移植至另一物種的一員。於這些情況中， (請先閱讀背面之注意事項再填寫本页) 笨. 訂 f I. 本紙乐尺度適用中固國家標準（CNS > Μ規格（2I0X297公漤） -5- 4342 35 Λ7 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 五、發明説明（3 ) 環孢子菌素（cyclosporin)的使用已經顯示對接收器官的人的 狀況有實際的改善。然而，可獲得之免疫抑制劑藥物的治 療指數是狹窄的，沒有藥物是完全有效的’且其用途因其 嚴重的毒性而受限。 主要生長於南中國之衛矛科（Celastraceae)草本植物昆 明山海棠（Tripterygium wilfordii Hook F)的各種萃取物和萃 取物成份已經證實可用作爲免疫抑制劑。Zhang, et al·, Shanghai Yike da ue Xuebao, Π_( 4)，267 (1986)已經鑑定 T. wilfordii含有至少六種不同的類雙砲（diterpenoid) 1包含 triptonide 雷公藤羰內酯（triptonide)' triptophenolide和 triptonolide。詳言之，P. E. Upsky等人之1991年9月19日公 告的 W0 91/1 3627揭示昆明山海棠（Tripterygium wilfordii Hook F)的萃取物和萃取物成份可用作於抑制自體免責疫疾 病，例如類風濕性關節炎、全身性紅斑狼瘡和牛皮癬。 Yang, et al., Int. J. Immunopharmac., 14_, 963 (1 992)和 Yang, et al., Ini. J. Immunopharmac ., j_6_, 8 9 5 ( 1 9 9 4)已經 揭示雷公藤內酯（triptolide)用於抑制淋巴細胞增殖和皮膚同 種異體移植排斥。此外，Jin和Wiedmann之1 994年11月24日 公告的W0 94/26265揭示一種組成物，其中昆明山海棠（ Tripterygium wilfordii Hook F)的一種額外的成份（純化的 16 •羥基雷公藤內酯）與另一種免疫抑制劑（例如環孢子菌素A ( cyclosporin A)、FK506、咪哩硫嚷啼（azathioprine)、胺甲蝶 吟（methotrexate)、药巴黴素（rapamycin)、黴醅酸（ myc〇Dhenolic acid)、糖皮質激素（glucocorticoid))—起投 (请先閲讀背面之注意事項再填寫本I) 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4说格（2丨OX297公釐） -6 - 434 Λ7 Β7 五、發明説明（4 ) 月艮。相對於單獨使用1 6,羥基雷公藤內酯或其他免疫抑制劑 所產生的功效之總和而言，上述的組成物揭示免疫抑制活 性的增進。此使得以在較低的毒性的免疫治療（例如移植 排斥和自體免疫疾病的治療）情況下，得到較高的免疫抑制 活性。P. E. Lipsky等人之美國專利5,580,562 ( 1996年 12月3曰公告）揭示昆明山海棠（Tript erygium wilfordii Η ο o k F )製劑，與以前的製劑相比較，其於老鼠展現改 良之LD50 、改良治療活性：毒性指數比値、和較低量的雷 公藤內酯。 發明總論 本發明係有關式（I)所示之新穎的化合物：

〇 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印氧 其中 R!和R2各分別是Η或-0R5 ; R3是H' -C(0)(CH2)nCChH或適合的胺基酸； R4是 Η或-〇H ; R5是H、-C(0)(CH2)„C〇2H或適合的胺基酸； η是整數2、3、4、5或6;及 其立體異構物、鏡像異構物和藥學上可接受之鹽； 本紙乐尺度遄用中國固家標準（CNS ) Α4说格（210X 297公釐） 434235 , Λ7. _____B7 _____ 五、發明説明（5 ) 其先決條件是當R;不是Η時，1和112是11。 本發明亦係有關式（II)所示之新穎的化合物：

-------I， 裝—Ϊ - . (請先閏讀背面之注意事項再填寫本頁) 其中 X是 I、Br ' Cl、F或-CN ; R4D 1^各分別是Η或-〇R5 ; R3是H、-C(0)(CH2)„CChH或適合的胺基酸： 是 Η或-0H ; 1是11、-C(0)(CH小CChH或適合的胺基酸； η是整數2、3、4、5或6 ;及 其立體異構物、鏡像異構物和藥學上可接受之鹽； 其先決條件是當R3不是Η時，R,和1^是11。 此外，本發明係有關式（III)所示之新穎的化合物： 經濟部中央標準局貝工消费合作社印製 中 其

式 本紙張尺度適用中固國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐〉 -8 - 經濟部中央棵準局貝工消費合作社印製 4342 3 5 Λ7 五、發明説明（6 ) X是 I、Br、Cl、F或-CN ; R!和R:各分別是Η或-0R5 ; R3是H、-C(0)(CH2)nC〇2H或適合的胺基酸； 114是只或·0Η ; R5是H' -C(0)(CH2)nC〇2H或適合的胺基酸； η是整數2、3、4、5或6 ;及 其立體異構物、鏡像異構物和藥學上可接受之鹽； 其先決條件是當1不是Η時，Ri和b是Η。 本發明亦提洪製備式（I)、（Π)和（III)化合物所用之新穎 的中間物。此外，本發明提供一種治療權患自體免疫疾病 之患者的方法，其包含予患者投服治療有效量之式（I)、（II) 或（III)化合物。 發明之詳細說明 “立體異構物u乙辭是通稱指只有原子在空間的方向不 同之個別分子的所有異構物，其包含幾何（順/反）異構物’ 以及非爲彼此的鏡像之具有一個以上的不對稱中心之化合 物的異構物（非鏡像異構物）。不對稱中心"意指連接有4個 不同的基團之碳原子。“鏡像異構物”和“鏡像異構的”意指不 可重疊於自己的鏡像上之分子，且因而具光學活性’其中 一個鏡像異構物使偏光面於一個方向旋轉，而其鏡像使偏 光面於相反一個方向旋轉。“外消旋混合物''或“外消旋修飾 物”意指等量的鏡像異構物之混合物，及其不具光學活性。 本文中，字首“（+)"和"（-)”係用以指明化合物旋轉偏光面的 方向的符號，（+ )意指化合物是右旋性，而（-)意指化合物是 ί ^^1 I : - Ε - - I - 4 ^^1 - - - I 0¾. ，vs (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度逍用中國困家梯率（CNS ) A4規格（2I0X297公釐） -9- 434235 Λ7 五、發明説明（7 ) 左旋性。對胺基酸而言，符號L/D或R/S係依IUPAC-IUB生化 命名聯合委員會所揭示者使用（Eur. L· Biochem, 138: 9-37 (1984))。 “藥學上可接受之鹽”是式（I)、（II)或（III)所示之鹼化合 物或其任何中間物之無毒性有機或無機酸加成鹽。適合形 成鹽之無機酸的部份例子包含鹽酸、氫溴酸、硫酸、和磷 酸，及酸金屬鹽（例如正磷酸一氫鈉）、和硫酸氫鉀。適合形 成鹽之有機酸的例子包含一、二、和三羧酸，此酸的例子 是醋酸、羥基乙酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊 二酸、反丁烯二酸、蘋果酸、酒石酸、棒檬酸、抗壞血酸 、順丁烯二酸、羥基順丁烯二酸 '苯甲酸、羥基苯甲酸、 苯基醋酸、肉桂酸、水楊酸、2-苯氧基苯甲酸、對甲苯磺 酸、和磺酸例如甲烷磺酸和2 -羥基乙烷磺酸。此鹽可以水 合或實質上無水的形式存在。 經濟部中央標準局員工消资合作社印f (请先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) "鏡像異構強化”意指與一種鏡像異構物較其對應的相 反鏡像異構物的量增加。一種習用之表示所達成的鏡像異 構強化之方法是“鏡像異構物過量”或“ee”，其係以下列方程 式表示： ee = —'：-- X 100 e! + e2 其中，E1是第一種鏡像異構物的量及E2是第二種對應的鏡像 異構物的量。例如，當反應中二鏡像異構物的起始比率爲 50:50 (外消旋混合物），而反應得到最終比率爲9〇:1〇之鏡像 本紙张尺度遑用中國困家梯準（CNS ) A4规格（2丨OX297公釐） 10- 4342^6 Λ7 _________ΒΊ 五、發明説明（8 ) 異構強化，則相對於第一種鏡像異構物的ee値是80%。 符號“ ”意指一突指出頁面之鍵； 符號“............意指一指進入頁面之鍵； 符號"---意指一單鍵或雙鍵。 文獻中雷公藤內酯（triptolide)的編號系統係如下所示：

熟悉此項技術人士須明白的是，雷公藤內酯的改良可 造成上述編號系統的改變，光學活性形式和外消旋形式之 雷公藤內酯可爲熟悉此項技術人士立即獲致。光學活性形 式的雷公藤內酯可由天然來源依S. M. Kupchan, et al.， 經濟部中央標準局貝工消費合作社印簟

Am. Chem. Soc., £土，7 1 94 ( 1 972 )之步驟單離出。或者 ，雷公藤內醋可由其外消旋形式依Chee Hong Lai, et al., J .Org. Chem., £7_, 2 3 64 - 23 69 ( 1 9 8 2 )、van Tamelen and Leiden , J. Am. Chem. Soc., 104, 1785 (1982)或 Garver and van Tamelen, J. Am. Chem. Soc·，1 04, 867 ( 1 982 ) 之全合成方法製得。其他的起始物可依Kutney and Han, Recueil des Travaux Chimiques des Pays-Bas, 115(01) 77 ( 1 996 ) ' Deng Fu-xiao, et al., Acta Botanica Sinica, 3 4( 8), 6 1 8 (1992) ' C. P. Zhang, Acta Pharraaceutica Sinica, -11 - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國因家標準{ CNS ) A4规格（2丨OX297公t ) 434235 Λ 7 ΒΊ 五、發明説明（9 ) 28(2), 110 0993)及 Jin Wiedmann，WO 94/46265 (1994年 11 月24日公告）所述之方法製備。 文中“雷公藤內酯”或“2-羥基雷公藤內酯”是相同的，其 結構如下所示：

0 文中“雷公藤內酯醇（丁4?1〇1丨(^11〇1)'’或“15-羥基雷公藤內 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁〕 Γ 酯'’是相同的，其結構如下所示··

本纸張尺度適用中國國家梯準（〇阳}六4規格（2丨〇>< 297公4) I . -12- 4 3 42 3 5 五、發明说明（10 )

文中，各種α-胺基酸具有特殊的“R-基”，R-基係與α胺 基酸之OC -碳原子相連結之側鏈或基團。例如，甘胺酸之R_ 基側鏈是氫，丙胺酸則爲甲基，纈胺酸則爲異丙基。特殊 之a -胺基酸R -基或側鏈可參見A. L. Lehninger的生化教科書 〇 除非另外指明，本發明化合物中所用之OC-胺基酸宜爲L -型：然而，申請人認爲文中所用之胺基酸可爲D-或L-型或 爲D-和L-異構物之混合物，包含外消旋混合物。公認之α-胺基酸的縮寫係如表1所示。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央榇準局—工消资合作社印製

It 公 7 9 2 X :0 經濟_中央標準局貞工消費合作社印製 五、發明説明（n )

表I

胺基酸 符號 丙胺酸 Ala或 A 精胺酸 Arg或 R 天冬醯胺 Asn或 N 天冬胺酸 Asp或 D 半胱胺酸 Cy s或 C 谷胺醯胺 Gin或 Q 谷胺酸 Glu或 E 甘胺酸 Gly或 G 組胺酸 His或 Η 異亮胺酸 lie或 I 亮胺酸 Leu或 L 賴胺酸 Lys或 K 甲硫肢酸 Met或 Μ 苯丙胺酸 Phe或 F 脯胺酸 Pr◦或 P 絲胺酸 Ser或 S 蘇胺酸 Thr或 T 色胺酸 Trp或 W 酪胺酸 Tyr或 Y 纈胺酸 Val或 V (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝. 、vs 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4*i格（2丨OX297公釐） -14- 43 423 5 經濟部中央橾準局員工消費合作社印製 五、發明説明（12 ) 文中，“適當的胺基酸”意指上述表1中所列示之胺基酸 ，適當的胺基酸係連接於式（I)、（II)或（III)化合物之胺基酸 的羧基端而形成酯基鍵結。例如，將谷胺酸加於式（I)化合 物之第14位置的-0H可得到下列結構式所示之化合物：

較佳的胺基酸是Ala、Gin、Lys、Arg和Phe’而以Ala' Gin 和Lys最佳。 式（I)' (Π)或（III)化合物可依圖A中所述製備’除非另 外指明所有取代基均如上所定義，試劑和起始物是熟悉此 項技術人士可立即取得的。 ^^^1 ^^^1 ^—^1 »ιί I ^^^1 ^^^1 1^1 In tn ^^^1 - -¾-έ {請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準{ CNS ) A4規格（210X 297公釐） -15- 434235 Λ7 B7 五、發明说明（13 ) 經濟部中央標準局員工消费合作社印掣

U A

步驟D 醯化反應

B2b ^^^^1 ^^^^1 4UI ϋ—^ tt^— ^^^^1 1 ! 0¾ 、-· (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度通用中國國家標隼（CNS ) A4规格（2IOX297公釐） -16- 經濟部中央標準局員工消资合作社印製 A7 B7 五、發明説明（14 ) 圖A之步驟A中，令結構式（1)之化合物於順式二醇（Cis-diol)形成的條件下生成式（la)化合物，其中Ru和R2,分別是 氫或-0H。例如，結構式（1)之化合物（例如雷公藤內酯）在惰 性氣氛（例如氮氣）及室溫下，溶於適當的無水有機溶劑中（ 例如四氫呋喃）。溶液以約1至約6當量的氰基氫硼化鈉處理 ，繼之逐滴加入約1.2當量純的乙醚化三氟化硼（BF3Et:0)。 攪拌反應混合物約1小時至約24小時，宜約1 6小時》而後藉 由加入水性氯化銨而使反應驟停，及以先前技藝中習知的 技術單離和純化產物，例如萃取和層析技術。 例如，經驟停的反應混合物以適當的有機溶劑例如二 氯甲烷萃取，合倂有機萃取液，以鹽水沖洗，以無水硫酸 鎂乾燥，過濾及真空下濃縮得粗產物。而後粗產物於矽膠 上進行快速層析，以適合的洗提液洗提，例如甲醇/氯仿， 得純質的式（la)化合物》 或者，式（la)化合物可藉由將結構式（1)之化合物在惰 性氣氛（例如氮氣）及室溫下，溶於適當的無水有機溶劑中（ 例如四氫呋喃）。於此加入約1.9當量的氫硼化鋰，繼之加入 約2.1當量純的乙醚化三氟化硼。攪拌反應混合物約0.5小時 至約5小時，宜約1.5小時。而後小心地以1 N HC1使反應驟 停，及以先前技藝中習知的技術單離和純化產物，例如萃 取和層析技術。 例如，經驟停的反應混合物以適當的有機溶劑例如二 氯甲烷萃取，合倂有機萃取液，以1 N碳酸氫鈉、鹽水沖洗 '以無水硫酸鎂乾燥，過濾及真空下濃縮得粗產物=而後 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨0乂297公釐） ---------,衣------ΐτ------f' — (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -17- 附件UA):第87107719號專利申請案中文說明書修正頁 民國88年9月呈 五、發明説明（ 15 粗產物於矽膠上進行快速層析，以適合的洗提液洗提，例 如乙酸乙酯/己烷，得純質的式（la)化合物。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 圖A之步驟B中，令結構式（la)之化合物於熟悉此項技 術人士習知之標準的醯化條件下生成式（lb)化合物。例如依 照 J. Swistok, et al .，Tetrahedron Letters, 30(38)，5045 ( ! 9 89)的步驟，式（U)化合物溶於適當的有機溶劑中（例如二 甲基甲醯胺）。而後溶液以1當量適合的環狀酸酐（例如琥珀 酸酐）、1當量4-二甲胺蕋吡啶（DMAP)和約1.6當量吡啶處理 。在室溫下攪拌反應約1 2小時 > 及接著在真空下濃縮。而 後以先前技藝中習知的技術單離和純化式（lb)化合物，例如 萃取和層析技術。例如，將殘餘物溶於適當的有機溶劑中（ 例如二氯甲烷），以水和鹽水沖洗，以無水硫酸鎂乾燥，過 濾及真空下濃縮得粗產物。而後粗產物於矽膠上進行快速 層析，以適合的洗提液洗提，例如甲醇/氯仿，得純質的式（ lb)化合物》 經濟部智慧財產局8工消費合作社印製 或者，式（I a)化合物可溶於適合的無水有機溶劑中（例 如吡啶），而後以對應之適合的二酸之適合的單酯之醯氯化 物處理。適合的二酸之例子是琥珀酸、戊二酸 '己二酸、 庚二酸和辛二酸。適合的二酸之適合的單酯是最後於先前 技藝中習知的溫和條件下去酯化而得到式（lb)化合物之酯。 例如，上述溶液以1當量琥珀酸單第三丁酯或琥珀酸單苄酯 之醯氯化物處理，而後在室溫下攪拌約2小時。接著以先前 技藝屮習知的技術單離和純化所得之酯。例如，在真空下 除去溶劑|殘餘物於矽膠上進行快速層析，以適合的洗提 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2IOX297公釐） -18 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 咖235 · A7 __ B7 五、發明説明（^) ^ 液洗提，例如甲醇/氯仿，得純質的酯。而後利用先前技藝 中習知的技術分別將酯轉換成對應的酸，而得粗質之式（lb) 化合物，例如依 T. W. Green, “Protective Group in Organic Synthesis”， John Wjley & Sons Inc, 1981 第 168-169 和 Π 1 - Π2頁所揭示之第三丁酯的酸水解或苄酯的氫解。接著 藉由矽膠快速層析，以適合的洗提液洗提，例如甲醇/氯仿 ’純化粗質物質及必要時分離混合物，而得純質的式（lb)化 合物。 熟悉此項技術人士將立即認知到，當式（la)中H /或 Rh是·〇Η時，h述步驟將得到醯化的化合物之混合物，其 屮醯化可發生在Ru、Rn或第14位置之-0H。同時須明白的 是，所得之混合物可以先前技藝中習知的技術加以分離’ 例如快速層析或高效率液相層析。熟悉此項技術人士須再 明白的是，所有一級和二級醇均已被醯化之式（I b)化合物必 須使用對式（la)上各個醇而言至少1 .2當量的試劑處理。例 如，對存在於式（I a)化合物中的各個一級和二級醇而言，式 (la)化合物必須以至少1.2當量適當的環狀酸酐、至少1.2當 量DMAP和至少1.8當量吡啶處理》 此外，式（la )化合物可被表1中所示之胺基酸（ 其已在先前技藝中習知的條件下加以適當的保護）醯化’ 繼之化合物中胺基酸部份經去保護而得式（lb )化合物。 例如參見 P. .1 ◦ u 1 i η，e t. a 1.，T e t r a h e d r ο n L e 11 e r s，2 8 ( 1 5 ).1661 ( 1987 )' D. Grenouillat , et al., Tetrahedron Letters , 28 ( 47 ) , 5827 ( 1 987 ) 、M. Ueda ，et al.， 本紙張尺度適用中國國家梂準（CNS ) A4规格（210X297公釐） ---------Μ.------、tT------^. (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 19- 43^^35

A7 IV 經濟部中央樣準局貝工消费合作社印製 五、發明説明（17) Synthesis , 908 ( 1983 )和 E. Haslam，Tetrahedron，36_, 2409 ( 1980 )= 須明白的是，組成的胺基酸之官能基在偶合反應中通 常必須加以保護以避免生成非所欲之鍵，可用之保護基、 其形成及去除已掲示於T. W. Green, “Protective Group in Organic Synthesis", John Wiley & Sons Inc, New York ( 1981)和“The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology”，Vol. 3，Academic Press, New York (1981)，其內容在此倂入本 文以爲參考。 將與一級或二級醇偶合之胺基酸的α-胺基必須加以保 護，任何先前技藝中習知的保護基均可使用，其例子包含 :1)醯類，例如甲醯基、三氟乙醯基、酞醯基、和對甲苯 磺醯基；2)芳族胺基甲酸酯類，例如苄氧羰基（Cbz或Ζ)及經 取代的苄氧羰基類、丨-(對聯苯基）-1-甲基乙氧基-羰基、及9 -芴基甲氧羰基（Fmoc) ; 3)脂族胺基甲酸酯類，例如第三丁 氧羰基（Boc)、乙氧羰基、二異丙基甲氧羰基、及烯丙氧羰 基；4)環烷基胺基甲酸酯類1例如環戊氧羰基和金剛烷氧 羰基；5)烷基類，例如三苯甲基和苄基：6)三烷基甲矽烷， 例如三甲基甲矽烷；及7)含硫醇類，例如苯基硫羰基和二 硫雜琥珀醯基。較佳的α-胺基保護基是Boc或Fmoc，更宜爲 Boc。許多適合之經保護的胺基酸衍生物是可購買得到的。 加入之胺基酸的α-胺基保護基接著於先前技藝中已知 的條件下裂除以得到式（lb)化合物。例如，當使用Boc基團 時，依據 Green “Protective Group in Organic Synthesis' (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙伕尺度適用中國國家榇準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -20- 4 3 4'

經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 五、發明説明（18 ) John Wiley & Sons Inc, New York (1981)，232-233所述， 所擇之方法是三氟醋酸，純質或於二氯甲烷中，或HC1於二 噁烷或乙酸乙酯中。 詳言之，式（la)化合物在惰性氣氛（例如氮氣）下》溶於 適當的無水有機溶劑中（例如二氯甲烷），及以過量之適當之 經保護的胺基酸和約2當量的二甲胺基吡啶處理。適當之經 保護的胺基酸是N-(第三丁氧羰基）-丙胺酸、N-(第三丁氧羰 基）-苯丙胺酸、IN'-(二第三丁氧羰基）-賴胺酸' N-(第三丁 氧羰基）-ω-第三丁氧基谷胺酸酯等。溶液攪拌及冷卻至 〇 °C，及以約2當量的二環己基碳化二亞胺處理。而後使反 應回溫至室溫及.攪拌3小時，接著過濾反應以除去任何沉澱 物1及在真空下濃縮濾液，將殘餘物溶於適當的有機溶劑 中（例如二氯甲烷）及以0.5 N HC1水溶液 '飽和碳酸氫鈉水 溶液和鹽水處理，以無水硫酸鎂乾燥，過濾及真空下濃縮 。於矽膠上進行快速層析以純化殘餘物，以適合的洗提液 洗提，例如乙酸乙酯/己烷，得B0C-保護之式（lb )化合物 〇 B0C-保護基係於先前技藝中已知的條件下除去，例如 將B0C-保護之式（lb)化合物溶於適當的有機溶劑中（例如乙 醚），及緩緩地以1 N三氟醋酸處理溶液，攪拌反應約1小時 ，接著過濾式（lb)化合物之三氟醋酸鹽，以乙醚沖洗和乾燥 之•式（lb)化合物之自由鹼可藉由將式（lb)化合物之三氟醋 酸鹽溶於水中及以至少1當量的碳酸鈉處理而製得，接著以 適當的有機溶劑（例如二氯甲烷）萃取水溶液，而後有機萃取 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝.

，1T 本紙張尺度逋用中國圉家揉準（〇奶）六4規格（210><297公釐> -21 - 五、發明説明（19) 液以水和鹽水沖洗，以無水硫酸鎂乾燥，過濾及真空下濃 縮，得式（lb)化合物。 經濟部中央橾準局貝工消费合作社印製 圖A之步驟C中，式（la)之12-13環氧化物經開環成式（Ila )化合物。例如，在室溫下將式（la)化合物溶於適當的有機 溶劑中（例如二噁烷），及加入過量之適合的水性酸（例如2 N HC1或30 % HBr)，在約23 °C至約70 °C之溫度下攪拌反 應約1至約24小時，較宜爲約6小時。接著產物以先前 技藝中習知的技術單離和純化產物，例如萃取和層析技術 0 例如，反應以水稀釋及以適當的有機溶劑萃取（例如乙 酸乙酯、二氯甲烷或氯仿），合倂有機萃取液，以鹽水沖洗 ，以無水硫酸鎂乾燥，過濾及真空下濃縮得式（Ila)粗產物 3而後粗產物於矽膠上進行快速層析，以適合的洗提液洗 提，例如甲醇/氯仿或己烷/二氯甲烷，得純質的式（Ila)化合 物。 A之步驟D中，式（Ila)化合物於與圖A之步驟B的方法類 似的標準醯化條件下製得式（lib)化合物。 式（III)化合物可依圖B所述製得，除非另外指明，所有 取代基均如上所定義。試劑和起始物係可爲熟悉此項技術 人士所立即獲得的。 {請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度逋用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X29"?公釐） -22- 434235 A7 B7 發明説明（20 )

圖B

y

^1 ^^1 ^^1 1^1 t^i HI Λ < 士 之 ^^1 I m» U3.--° - - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁}

步驟B 環氧基開環 及醚生成

經濟部中央標準局貝工消费合作社印製 圖B之步驟A中’令結構式（1 )化合物於環氧化物開 環條件下。例如，結構式（1 )化合物溶於適當的有機溶 劑中（例如丙酮或二噁烷）及以適當的水性酸（例如 2 N HC1或30 % HBr )處理，在約〇 °C (當X = C1 )或約 70 °C (當X = Br )下攪拌反應約1至5小時，而後反應以水 本紙張尺度適用中國闽家梂芈（CNS > A4现格（2丨0X297公釐） -23 - 434 A7 B7 五、發明説明（21) 稀釋及以先前技藝中習知的技術單離和純化產物，例如層 析和/或結晶技術。例如，反應混合物以適當的有機溶劑 萃取（例如二氯甲烷或乙酸乙酯），合併有機萃取液，以鹽 水沖洗，以無水硫酸鎂乾燥，過濾及真空下濃縮得粗產物 (2)。而後粗產物於矽膠上進行快速層析，以適合的洗提液 洗提，例如己烷/二氯甲烷，得純質的結構式（2 )化合 物。 圖B之步驟B中，結構式（2)化合物經轉換成式（nia) 之醚，其中Ru和R2a分別是氫或-OH。例如，化合物（2)與 微細的硫酸氫鉀粉末於適當之無水有機溶劑（例如甲苯或二 噁烷）中混合，當X = C1，硫酸氫鉀可爲0.1至1 N HC1水溶 液取代，及較佳的有機溶劑是二噁烷。而後反應混合物在 約50 °C至約115 °C下（宜約75 °c )加熱約1至約24小時 (宜約5小時），接著過濾反應，例如以膨潤土過濾，固體 以適當的有機溶劑（例如氯仿）沖洗，而後濾液在真空下濃縮 ，得粗質的式（Ilia)化合物。而後粗產物以先前技藝中習 知的技術純化，例如於矽膠上進行層析，以適合的洗提液 洗提，例如甲醇/氯仿，得純質的結構式（Ilia)化合物。 或者1藉由於適當的有機溶劑（例如二氯甲烷）中在室 溫下，以適當的路易士酸（例如BF3/乙醚、TiCh或FeCh)處理 化合物（2)約1至2小時而可將化合物（2)轉換成式（Ilia)化合物 。而後依類似於上文中所述方法的步驟而單離和純化式（ Ilia)化合物。 圖B之步驟C中，式（nia)化合物依類似於圖B之步驟B中 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 装. 訂 經濟部中央標準局貝工消費合作社印策 本紙張尺度適用中a國家糅苹（CNS ) A4规格（210X297公釐） -24-

4 3 4^： C 經濟部中央榇準局員工消費合作社印製 五、發明説明（22 ) 所述的方法醯化而得式（Illb)化合物。 下列實施例用以說明圖A和B中所述之一般的合成。須 明白的是，這些實施例只用以說明本發明之範圍，但決不 用以限制本發明之範圍。試劑和起始物係可爲熟悉此項技 術人士所立即獲得的。本文中，下列用辭具有如下所示之 定義：“kg"意指公斤；“g"意指克；“mg”意指毫克；‘>g’’意指 微克；“m2/g”意指每克之平方公尺數，用於測量顆粒表面積 ;"mmol"意指毫莫耳；“L”意指公升；“mL”意指毫升；"μί” 意指微升：“era”意指公分；“Μ”意指莫耳濃度；“mM”意指毫 莫耳濃度；>M”意指微莫耳濃度；"nM’·意指毫微莫耳濃度 ;"eq”意指當量；"Ν”意指當量濃度；"ppm”意指百萬分之份 數；“δ”意指自四甲基甲矽烷以下之百萬分之份數；“°C”意 指攝氏溫度；“°FH意指華氏溫度：“mm Hg"意指毫米汞柱；" kPa ”意指千巴斯卡（pascal ) ; “ psi ”意指每平方英 吋之磅數；"rpm ”意指每分鐘之轉數；“ bp ”意指沸點 ;“ mp ”意指熔點；“ dec ”意指分解：“ HPLC ”意 指高效能液相層析："h”意指小時；“ min ”意指分鐘；“ sec '，意指秒：“ i.p. ”意指腹膜內；"P.o.”意指經口；“ COMC意指羧甲基纖維素；“ THF ”意指四氫呋喃；" DMF，，意指Ν,Ν-二甲基甲醯胺：·‘ DMSO，，意指二甲亞硕； ‘‘ LAH，，意指氫鋁化鋰；“ Rf ”意指延遲因素：及“Rl''意 指延遲時間。 實施例1 {請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張又度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210 X 297公釐） -25- 43 4. Λ7 B7 __ ~j~ ------- - 五、發明说明（23 ) [5aR-(5aa-6ct，6aa，7aa，7bp，8aS*，8b_a)l-3,3b，4,5,5a,6,6a，7a，7b， n 0,10-+二氫- 5a，6-二羥基- 8b-甲基- 6a-(l-甲乙某1H-二環 Μ 7.掠並l~4b.5:6,7]菲並「1,2-c]咲喃酮之製備

圖A，步驟A:在氮氣和室溫下’於攪拌中之雷公藤內 酯（360 mg，1 mmol’光學活性’單離自天然物）於乾燥THF (10 mL)中的溶液中加入氰基氫硼化鈉（360 mg, 6 mmol)， 繼之逐滴加入純質乙醚化三氟化硼（150 173 L2 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 m m ο 1)，所得之溶液在室溫下攪拌1 6小時’而後藉由力口入 i Ν氯化銨水溶液（25 mL)而使反應驟停’及以乙醚萃取（3 ；(2 5 mL )，合倂之有機萃取液以鹽水（25 mL)沖洗，以無 水硫酸鎂乾燥’過濾及在真空下濃縮’得一白色固體’接 著白色固體進行與上述相同的反應條件和收拾步驟而得一 白色固體（2 9 0 ιώ g )，以快速層析純化（氣仿而後〇. 5 % 至1%甲醇/氯仿），得標題化合物（丨60 mg, 44% )’標題 化合物以甲醇再結晶；mp 185-186 °C及[a]D = -32° ( c = 0.1 ’ 氯仿）。 -26- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（2丨0X297公釐） 經濟部智慧財產局資工消費合作社印製 A7 B7 ___五、發明説明（） 標題化合物之另一稲製法 i補充么烈” _r’ 圖A >步驟Λ :在氮氣和室溫下，於攪拌中之雷公 藤內酯（100 mg )於乾燥THF ( 30 mL )中的溶液中加 入氫硼化鋰（264 μί之2 N THF溶液）’繼之逐滴加入 純質乙醚化三氟化硼（72 μΙ> )’攪拌反應混合物90分鐘 ，而後小心以1 N H C1 ( 1 〇 m L )處理’再攪拌1 〇分鐘 後，反應混合物以二氯甲烷萃取（3 X 20 mL ) ’合併有 機萃取液，以1 N碳酸氫鈉（2 X 20 mL )和鹽水沖洗 ，以無水硫酸鎂乾燥，過濾及在真空下濃縮’殘餘物以管 柱層析純化（20%乙酸乙酯/己烷），得標題化合物（ 7 6 m g，7 6 % )。 實施例2 nS-Ua，2P，3a，3aP.4aR*.4ba,l laa)l-3-氯-l，2,3,3a，4b，5、6,9.9b ，10,丨1，1 U-十二氣-1.2.1 la-三羥基-4b-甲基-2-U-甲乙某）-7H-環氧乙烷並「4b,51菲並丨1，2-c〗呋喃-7-酮之製備 ----------^------π------0 (請先W讀背面之注意事項再填寫本頁〕

圖A ’步驟C :在室溫下，於攪拌中之[5aR-( 5aa，6a, 6a a，7 aoc，7 b P，8 a S *，8 b a) ] - 3，3 b，4，5，5 a，6，6 a, 7 a，7 b，8 b，9，1 0 -十二 氫-5a，6-二羥基-8b-甲基-6a-(l-甲乙基）-1Η-二環氧乙烷並[4b ，5 :6，7 ]菲並[1，2 - c ]吹喃-1 -酮（5 m g，由實施例1製備）於二噁 烷U mL)之溶液中加入2 N HC1 (0.5 mL)，攪拌反應混合 本紙張尺度適用中關家樣準（CNS ) A4胁（2丨0X297公| ) ' -27- A7 B7 五、發明説明（） 修正——…一~~1 25 補充 物5小時，而後以冷水（5 mL)稀釋，混合物艺ΫΈΓΙίΥΓχ w mL)萃取，合倂有機萃取液，以鹽水（3 X 10 mL)沖洗， 以無水硫酸鎂乾燥，過濾及真空下濃縮，殘餘物以管柱層 析純化（矽膠，40 %乙酸乙酯/己烷），得標題化合物（4.8 mg ，82 %)。 ---------象— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 實施例3 UAJ 1(^，20，3〇〇社0，4?1民!|!，41^，110，113〇〇1-3-氯-1，2,3,33,4 H 1 〇, 1 1，1 j a -十二氫-1,1 la-二羥基-4b-甲基-2-(卜甲乙基立il

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -28- 434235 A7 B7 五、發明説明（ 26 圖B，步驟A :雷公藤內酯（100 mg ’光學活性，單離 天然物）與二噁烷（1 5 mL)和1.5 N HC丨水溶液（1 5 mL )之混合物相混合，在室溫下攪拌反應混合物4 8小時，而 後將反應混合物倒入水（50 mL)中並以氯仿萃取（3 X 40 mL )，合倂之有機萃取液以鹽水（60 mL)沖洗，以無水硫 酸鎂乾燥，過濾及在真空下濃縮，得一白色固體，接著白 色固體以己烷/氯仿再結晶得白色針狀之標題化合物（65 mg ) |過濾S液在真空下濃縮，殘餘物以快速層析純化（ 矽膠，2 % φ醇/氯仿），再得標題化合物（20 mg)，總產 率爲 77 % : mp 244 T 分解；[α]» = -129" (c = 0.15，氯仿） (请先閲讀背面之注$項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 最終標題化合物的製備 圖 β，步驟 B: []bS-(iaRMbcx，6bp，7aP,8aR*,9oc,10p， ila，llaP)]-U-氯-10-(1-甲乙基）-lb，3,6,6b，7,7a ,9,10,II,11 a-十氫-9，10-二羥基-113-甲基-二環氧乙烷並[仆，5:83,9]菲並[1,2 -c ]呋喃，4 (2 Η)-酮（1 i m g)與二噁烷（丨m L)和1 . 5 N H C丨水溶 液（1 mL)混合，及在85 |'C下攪拌26小時，而後將反應混合 物倒入水（5 mL)中並以氯仿萃取（3 X 5 mL)，合倂之有機 萃取液以鹽水（5 mL)沖洗，以無水硫酸鎂乾燥，過濾及在 真空下濃縮，殘餘物以製備的TLC純化（20 x20 cm，0.25 m m，5 %甲醇/氯仿），得標題化合物（4 m g , 3 6 %)，檩題化 合物以己烷/氯仿再結晶；mp 1 2 5 "C分解；[ot ] D = -1 29° (c = 0 1 5，氯仿）。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )八4規格（2l〇X 297公釐） -29- ★34235 A7 B7 經濟部智慧財產局B工消費合作社印製 五'發明説明（） 27 醚化合物之另一種製法 窗施例4 【18-(1«，20，3〇1，330'431^.4匕〇^1101113〇〇1-3-溴-1，2,3,33、41?，5,6, 9,9b，10，i 1,1 la-十二氣-1,1 U-二羥基-4ί>-Φ 某-2-(1-甲乙基）-2 ,1 1-環氧基- 7H-環氧乙烷並丨4b，51菲並丨1 .2-cliM；喃-7-酮之製 at

.中問物[lbS-(laR\lba,6bP，7aP，8aR*.9a,l〇[3.1 Ια,Ι laP)卜11-溴-1 Ο -(卜甲乙基）-1 b，3'6'6 b , 7,7 a，9，1 Ο · 1 1，1 1 a -十氫-9，1 Ο -二羥 骚- lb-甲基-二環氧乙烷並丨4b,5:8a，9〗菲妝【l，2-cl呋喃-4(2Η)_ 酮之製備

_ Β，步驟A :雷公藤內酯（】00 nig，光學活性，単離自 天然物）與P、i酮（3 0 m L)、水（2.5 m L)和3 0 % Η B r水溶液（8 0() μΙΟ混合，在70 Τ下反應混合物70分鐘，而後將反應混合 物倒入水（60 mL)中及在离空下濃縮，而後殘餘層以二氯qi fcT萃取（3 X 60 mL)’合倂有機萃取液，以鹽水（6() mL)沖冼 ’以無水硫酸鎂乾燥，過濾及在真空下濃縮，得一固體（ 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） I n n n I n n I ^ 1 n n n I n ^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -30- 五、 A7 B7

發明説明（） 28 1 1 8 mg)，固體以己烷/二氯甲烷再結晶得白色立方塊狀之找 趨化合物（8 2 in g，6 7 %) ; m p 2 2 8 u C 分解；[ex ] η 二-丨 6 4 (c _ 0.1 ’氯仿） 標題化合物韵製備 圖 B，步驟 B :將[lbS-daRMbccjbPJaPJaR'yaJOP’ 1 1(*，1 laP)]-l 1-溴-10-U-甲乙基）-lb，3,6,6b，7,7a，9，l0，n，Πa-十氫-9，i0-二羥基-lb-甲基-二環氧乙烷並[4b,5:8a，9]非並[h2 -c]呋喃-4(2H)-酮（36 mg)與硫酸氫鉀微細粉末（95 mg)懸'浮 於乾燥的Φ苯（6 niL)中及在75 °C下加熱5小時’以膨滴土過 濾反應混合物並以氯仿（I 〇 mL)沖洗固體，在真空下濃縮滅 液，得白色粉末（40 mg)，白色粉末以管柱層析純化（矽膠’ 氯仿接著0.5至2 %甲醇/氯仿）’得標題化合物（2 5 m g，7 0 % );mp 195 T分解。 實施例5 [3bS-(,3ha.5a6,6P,6ap,7 &3Λ ba，8aR*，8bp , ίΜΙΙ: 3上3 Μ，5 7 5 a，6.

本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格（2l〇X297公爱） (銪先聞讀背面之注意事項#填寫本頁) 訂 -線 -31 -

Α7 Β7 五、發明説明（） 29 酯（3 7 6 m g ’ i m m ο 1 ’光學活性’單離丨天然物）於乾燥τ H F (i0 mL)屮的溶液屮加入氰基氫硼化鈉（360 mg，6 mmol)， 繼之逐滴加入純質乙醚化三氟化翻（150 μί，173 mg, 1.2 m m ο 1)，所得之溶液在室溫下攬拌1 6小時，而後藉由加入1 N氯化銨水溶液（2 5 m L)而使反應驟停，及以二氯卬烷萃収（ 3 X 25 mL)，合倂之有機萃取液以鹽水（25 mL)沖洗，以無 水硫酸鎂乾燥，過濾及在真空下濃縮，殘餘物以快速層析 純化（氯仿而後0.5%甲醇/氯仿），得標題化合物（160 mg, 44 %)。 實施例6 [1 S - (1 α , 2 β , 3 a , 3 a β , 4 a R * , 4 b α, 6 α , 9 b β , 1 1 a α)卜 3 -氯-1 ,2,3.3 a , 4 b, 5,6,9,9b,l(M M ia-十二氫-1,2,6,1 la-四羥越- 4b-Ep 驻-2-Π-φ 乙基）-7Η-環氧乙烷並丨4b,51菲並H，2-cl呋喃-7-酮之製備

圖A，步驟C :在室溫下，於攪拌中之[3bS-(3bct，5af5,6p ,6a β , 7aβ , 7ba , 8a R 8b β , i Οβ ) J -3 , 3 b ,Ί , 5,5 a,6,6a , 7a, 7 b, 8b,9,1 0- 卜二氫- 5a,6, 10-三羥基- 8b-q=<基- 6a-(l-甲乙基）-1 H - +二環氣乙 院並[4 b，5 : 6，7 ]菲並[1，2 - c ]呋喃-]-0nj (5 m g，由實施例5製備） 於—ii惡院（1 m L)之溶液中加入2 N H C1 (0.5 m L)，攪伴 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > Λ4規格（210X 297公釐） ' (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -32- 434235 A7 B7 五、發明説明（ 30 i+補克 反應混合物5小時’而後以冷水（5 mL)稀釋，混合物以乙酸 乙酷（3 X 1 〇 mL)萃収，合倂有機萃取液’以鹽水（3 X 1 〇 m L)沖洗，以無水硫酸鎂乾燥，過濾及真空下濃縮’殘餘 物以管柱層析純化（矽膠，卜2 %甲醇/氯仿）’得標題化合物 眢施例7 氯- I'〗」.？:. ，4 b，5,6，9，9 b，1 0，1 1，1 1 a -十二氤-1，6，1 1 a -二:_ 經某-4 b -甲某-- μ . 墨- ~~ 乂 . Ψ乙某）-2,1 1-環氧基-7Η-環氣乙烷並Hb. Vlgli並n，2-cm 7-酮之製備 ----------1-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

訂 間物[lbS-UaRMbadccJbPJai^SaR^QalfiR Hal 1λβ)1- 1 1-氣- lb，3,6,6b，7,7a，9,10，l 1，1 la -十氫-3,9 · 1 〇 -三徑基-1 b - φ 基-1 Ο - (1 -甲乙基）-二環氧乙院並〖4 b，5 : 8 a、91非邶丨1,2 - c 1丨1夫喃-4(2Η)-酮之製備

圖Β ’步驟A :雷公藤羥內酯（t r i p d i 〇丨i d e) (0.2 7 7 m m 〇: 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2】0X297公羡） 绍 經濟部智慧財產局員工诏費合作社印製 -33 - 4- w【- 4- w【-

A7 B7 五、發明説明（） 31 ，光學活性，軍離自天然物）與二噁烷（1 5 mL)和Ί ,5 N HC1 水溶液（15 inL)之混合物相混合，在室溫下攪拌反應混合物 48小時，而後將反應混合物倒入水（50 mL)中並以氯仿萃取（ 3 X 40 mL)，合倂之有機萃取液以鹽水（60 mL)沖洗，以無 水硫酸鎂乾燥，過濾及在真空下濃縮|殘餘物以快速層析 純化（矽膠，2 %甲醇/氯仿），得標題化合物。 最終標題化合物的製備 圖 B，步驟 B: [lbS-(laR'ibot，3(x，6bp，7ap，8aR'9ot,l〇p， 1 1 α，1 UP)] -Η -氯-]b，3,6'6b，7,7a，9,10，1 1，1 1 a-十氫-3,9，i〇-二 羥越-丨b-甲基-10- (1-甲乙基）-二環氧乙烷並[4b，5:8a，9] 菲並[l，2-cP^_-4(2H)-酮（11 mg)與二噁烷（丨+mL)和 1 5 N H C1水溶液（1 m L)混合，及在8 5 ° C下攪拌2 6小時，而 後將反應混合物倒人水（5 mL)中並以氯仿萃取U X 5 mL)，合倂之有機萃取液以鹽水（5 mL)沖洗’以無水硫 酸鎂乾燥，過濾及在真空下濃縮，殘餘物以製備的TL(:純 化（2 0 X 2 0 c m，0 · 2 5 m m，3 %甲醇/氯仿）’得機化八 物。 實施例8 r3bS-(3ba,5aP16P,6aP,7aP,7ba,8aR*,8bp)3-3,3b? α Ί, _7bT8b,9,10、十二氫-5a，6-二羥驻-6a“ 卜羥基-1 -甲匕-基） 莊-1H-二環氧乙烷並[4b,5:6,71菲並[1^1ι£ΐ^ 喃 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210X297公釐） n. - n n - 1 - - I an I .. 1^1 」，----^^1 n n I— TT n - -« In - ii - I >ew. 、濯 A (請先閱请背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員X消費合作社印製 -34- A7 B7 五、發明説明（） \ …一-32 β充卿％

圖A，步驟A :在氮氣和室溫下，於攪拌中之爾公藤内 酷酸（triplolideiiol ) ( 100 mg )於乾燥 THF ( 30 mL ) 中的溶液中加入氫硼化鋰（236 μί之2 N THF溶液）， 繼之逐滴加入純質乙醚化三氟化硼（5 2 μ L )，攪拌反應 混合物90分鐘，而後小心以1 N HC1 ( 10 mL )處理，再 攪拌10分鑓後 > 反應混合物以二氯甲烷萃取（3 X 20 mL )，合倂有機萃取液，以丨N碳酸氫鈉（2 X 2 0 m L )和 鹽水沖洗，以無水硫酸鎂乾燥，過濾及在真空下濃縮，殘 餘物以管柱層析純化（20%乙酸乙酯/己烷），得標題化合物 實施例9 【13-(1(^，23,3〇6，：330，411尺*，4匕〇〇,913|3，113〇〇1-3-氯-1，2,3,33,411;；内 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 9,9 b ' L 011 1，ί 1 a -丨.二氫-U 2，1 1 a -三羥基-2 - (1 -羥基-1 -甲 7,甚、— 朴-甲基-7_»-環氣乙烷並丨4卜，5〗菲並「1,2-^呋_-7-_之製1

圖A ’步驟C :在室溫下，於攪拌中之[3bS-(3ba，5a[i,6p 本紙張尺度適用中國國家標準{ CNS ) A4规格（21〇i_297公釐） ~~ -- -35-

43423S Α7 Β7 五、發明説明（） ./ --------'-'j 33 ；1：ΐ j補充· ( i ，6ap，7aP，7ba，8aR'8bp)]-3,3b，4,5,5a，6,6a，7.a.r7l，^.r9TTO7:k: 4l-5a，6 -二羥基- 6a-(i -羥基-i —甲乙基）_8b -甲基_iH，二環氧乙 院並[4b，5:6 J]菲並[He]呋喃·1-酮（5 mg，「.丨1寶施例8製備） 於二嗯烷U m L)之溶液屮加人2 N H C 1 (0.5 m L)，攪拌反 應混合物5小時，而後以冷水（5 mL)稀釋，混合物以乙酸乙 酷（3 X 10 mL)萃取，合倂有機萃取液，以鹽水（3 X π) mL) 沖洗’以無水硫酸鎂乾燥’過濾及真空下濃縮，殘餘物以 管柱層析純化（矽膠，丨％甲醇/氯仿），得標題化合物。 (婧先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) U S :_(1 a，2 L3 a，H4aR*，4ba，9b3，l 1 B,llaa)]-3-M-l 1 λ ?a.4b

A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（

圖B ’步驟A :雷公藤丨人j醋醇（t r i p t ο 1丨d e η ο 1) (1 0 0 m g)與 一贼院（1 5 m L)和1 .5 N H C1水溶液（1 5 m L)之混合物相混合 ’在室溫下攪拌反應混合物4 8小時，而後將反應混合物倒 人水（50 mL)中並以氯仿萃取（3 x 40 mL)，合併之有機萃取 液以鹽水（60 mL)沖洗，以無水硫酸鎂乾燥，過濾及在真空 下濃縮’殘餘物以快速層析純化（矽膠，2 %中酷/氯仿），得 標題化合物。 最_終標題化合物的製備 圖 B’ 步驟 B: [lbS-UaR^IbocJbpJapJaR^PoOOP， Ηα，1 lap)]-il-氯- lb，3,6,6b，7,7a，9，10，l 1，1 la-十氫-丨0-(卜羥基 -1-甲乙基）-lb-甲基-二環氣乙烷並[4b，5:8a，9]菲並[l，2-c]炚 喃-4(2H)-酮（Π mg)與二噁烷（1 mL)和丨.5 N HC1水溶液U mL)混合，及在85 T下攪拌26小時，而後將反應混合物倒 人水（5 m L)中並以氯仿萃取（3 X 5 m L) ’合併之有機萃取 液以鹽水（5 tnL)沖洗，以無水硫酸鎂乾燥’過濾及在真空 下濃縮，殘餘物以製備的TLC純化（20 x20 cm，0.25 mm' 3 %甲醅/氯仿），得標題化合物。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2!〇Χ297公釐） ----------裝------訂 (請先閲讀背面之注意事項存填寫本頁) -37-

，.心 3 ε . A7 B7 五、發明説明（） 35 實施例Π i3bS-(3ba，5aP，6P，6aP，7 4,7ba,8aR*，8bim-6a-(2-羥基-卜「Π 乙 基）-3'3\4,5,5:1，6,6&，7〔1，7181^9，10-十二氫-5 3,6-二羥基-813-甲 基-丨H-二環氧乙烷並Mb，5:6,7r菲並『l，2-cl呋喃-卜酮之製備 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部^慧財產局員工消費合作社印製 圖A，步驟A :依類似於實施例1之方法，由16 -經基-雷 公藤内酯製備標題化合物。 實施例1 2 nS-UocJPJaJaPjitR'AbaJbPJ lacp卜 3-氯- 2-(2-羥基-1-甲 乙基）-j ,2,3,3a，4b，5,6,9,9b，10,1 1，1 U-十二氫-1，2，1 la-三羥基-4b-甲基- 7H-環氧乙烷並「4b，5〗菲並夫喃-7-酮之製備

圖Λ |步驟B :依類似於實施例2之方法，由實施例1 1製 — iPbS-UbaJaPJPJaPJapJbaJaR'SbPUea-UHS-l-甲乙基）-3，3 b，4 ,5，5 a f 6，6 a，7 a，7 b，8 b，9，1 0 -十二氫-5 a，6 -二羥基-8 b -甲基-1 H -二環氧乙烷並[4 b, 5 :6，7 ]菲並[1 , 2 - c ]呋喃-1 -酮來

本纸張尺度適用中國國家梯準（CMS > Λ4規格（210 X 29?公釐） -38 - *3423© A7 B7 五、發明説明（ 製備標題化合物 寶施例1 3 nS-(U，2p，3〇c，3ap，4aR*，4ba，9bp，l 1 β，1 lacc)1-3-氯- 2-(2-羥基-1-甲乙基）-1,2,3，；^，413,5,6,9,91^10，11，113-十：:—.氫-1，11&'二羥 基-4b-q_』基-2，1 1-環氧基-7H-環氧乙烷並f4b、5】菲並fl，2-cl映 喃-7-酮之製備

OH 〇 中間物 nbS-(laR*,lb(x,6bP，7a0，8aR*,9a，l〇p，l la，l lap)卜 1 i-氯-10-(2-徑基-1-甲乙基）-lb，3,6,6b，7,7a'9，iO，l 1，1 la-十氫-9， 10-二羥基-1卜甲基-二環氧乙烷並[415:8〖1，9〗菲並[1，2-〇1呋喃 -4(2H)-酮之製備 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

OH 0 圖B，步驟A:依類似於實施例3之方法，Itl 1 6-羥基 公藤內酯製備中問物標題化合物。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 2ί>7公釐） -39- 43 42 3 ^ 、 A7 _________B7

五、發明説明（） 37 聖il標題化合物的製備 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 圖B ’步驟B :依類似於實施例3之力法’直接由上述製 得之 UbS-(laR、iba，6bp，7ap，8aR*，9〇c，10(M 1α，1 Up)卜^-氯― 1 () - (2 -經基-卜甲乙强）-j b，3，6，6 b，7，7 a, 9 ,1 0，] 1,1 1 a -十氫-9，1 〇 — 二拽蕋-1 b -甲越-二環氧乙烷並μ b，5 :8 a，9 ]菲並[l，2-c]呋喃_ 4 ( 2H)-酮來製備最終標題化合物。 實施例1 4 ba，5ap，6p，6ap，7aK7ba.8aR*，8bP)H:[3,3h，4,Wr、 ^Άλ2 a，7 b，8 b , 9 ,1 0 -十二氣-5 a -羥基· 8 b -甲基-6 a -(丨-ιυ 7 莊 h 丨. IL二丨H -二環氧乙烷並丨4 b，5 : 6.71菲並「1，2 - c ]呋喃-6 -某j喂，_「 二酸之製備

C〇2H 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ,ΙΑ，步驟 B :混合[5aR-(5aa，6ct，6aa,7aa，7bp，8aS'8bc〇 j-3,3b，4,5,5a，6,6a，7a,7b，8b，9,10-十二氫- 5a，6-二羥基 基 -6a-U-甲乙基）-1Η-二環氧乙烷並[4b，5‘.6,7]菲並[i，2-c]呋喃-1 -酮（1 m m ο 1，實施例1製備）、號拍酸酉_丨' (1 . 1 m m 〇 1)、4 -二ψ 胺基吡啶（1 . 1 m m ο 1)和吡啶（0 ‘ 1 0 m L)於D JVIF (3 m L)中，在 室溫下攪伴反應混合物24小時，及在真空下濃縮，加水及 加入1 N HC1使之略呈酸性，以二氯Φ烷萃取（3 X 5 mL)， 本紙張尺度適闱中國國家標準（CNS ) Λ4規格（2丨OX297公釐） -40-

五、發明说明（） 濟 38 ;就 I— |

八 Γ 二I

倂有機萃取液，以無水硫酸鎂乾燥，過濾及在真空下濃 縮，殘餘物於矽膠上以快速層析純化U %至5 %甲醇/氯仿） ，得標題化合物。 實施例1 5 nS-(la、2P，3a,3d，4aR*,4ba，9bP.，l laoQl-tH3-氯-l，3,3a，4b,5. 6,7,9,9 b，1 Ο，1 1 , Π a -十二氫-2, 1 1 a -二羥基-4 b -甲基-2 - (1 -中乙 某）-7-_-2H-環氧乙烷並[4b，51菲並丨1.2-cl呋喃-1-基1酯，丨__ 二酸之製1

-CO，H 圖 A '步驟 D :混合[1 S - (i ct，2 β，3 a，3 a β，4 a R *，4 b a，1 1 a α)]-3-氯-1,2,3,33,41),5,6,9,91?,10，11，113-十二氫-1,2,11(1-三羥基-4b-中基- 2-0-1]1乙基）-7H-環氣乙烷並[4b,5]菲並[1 ,2-c]吹喃-7 -酮I (1 m m ο 1，實施例 2 製備）、墟 _ 酸 0F (1.2 mmol) 、4 -二甲胺练吡啶（1.2 mmol)和吡啶（0.10 mL)於DMF (3 mL )屮，在室溫下攪拌反應混合物24小時’及在真空下濃縮 ，加水及加入1 N HC1使之略呈酸性，以二氯甲烷萃取（3 X 5 mL)，合併冇機萃取液，以無水硫酸鎂乾燥，過濾及在 真空下濃縮，殘餘物於矽膠上以快速層析純化（丨％至5 % Φ 醇/氯仿），得標題化合物。 本紙诔尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格< 210X297公釐） n . ^ I I I 線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} 經濟部智慧財產局員工消贫合作社印製 -41 - 五、發明説明（ A7 B7 I施例ί 6 [3bS-(3bαL5aJL6^_6aβ ,7 aβ 77ba ,8aR^ , 8b β) 1 - 1φ_ [^ ,3b 4 s ς ~ ~ ~~-- jj-8b-甲基m :1 H--二環氧非並[1，2 - c 1 呋喃^ 酸之製備

ο c〇2h 圖A -步驟B :依類似於實施例14之方法，由實施例"製 得之[531^-(5%6〇1，6^7；1〇1，71^,833*，8匕〇〇]-3 313 4“〇 ’，J，Ja，b，6a’73,71)，813’9，10-十二氬-53,6-二羥基-813-甲基-63-(卜甲乙其）丄1{ -二環氧乙烷並[4b，5:6,7]菲並[l，2-c]呋喃-1 -酮和戊二酸軒來 製備標題化合物。 (請先閲讀背面之注#^項再填寫本頁) 訂- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 α a二 並 烷 乙 氧 環二 - H ΤΓ 1 ~ 1 酮 備 製 之 酸 例 施 實 α

RI 基 羥 基 甲 喃 呋 基 乙 甲 匕a 基 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（2!0Χ297公釐） -42-

43423S A7 B7 五、發明説明（d

圖 A，步驟B:混合[HS-ObcOaP/PmVapjbcx'hp ，8!^，]〇0)]-3,3!7,4,5,53,6,63,7^1，71)，813,9，1〇-十二氫.53,6 1〇_二 淫基-8 b - Φ基-6 a - (1 -甲乙基）-1 Η -二環氧乙院並[4 b，5 :6,7 J 菲並Π，hc】炚喃-卜酮（1 mmol，實施例5製備）、琥珀酸 酐（2.2 mmol) 、4-二Φ胺基吡啶（2.2 mmol )和吡啶（ 0.20 mL)於DMF (3 mL)中，在室溫下攪拌反應混合物24 小時，及在真空下濃縮，加水及加入1 N HC1使之略呈酸 性，以二氯甲烷萃取（3 X 5 mL)，合倂有機萃取液，以 無水硫酸鎂乾燥，過濾及在真空下濃縮，殘餘物於矽膠上 以快速層析純化（1 %至5 %甲醇/氯仿），得標題化 合物。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 α 基 氧 丙

&iL 例 施 實 α

RI mil 基 羧 並 烷 乙 氧 環 二 - Η 3 6 酮 匕Η 基 備 製 之 酸 菲 氫 基 羥 喃 呋 木紙張尺度適用中國國家標準（CNS > Λ4規格（2I0X 297公瘦） -43- 43 4：r - ^ Λ7 B7 五、發明説明（41 )

圖 A，步驟 B:混合[3bS- (3bot，5aP，6p,6ap,7ap,7ba，8a R'8bP)] -6a- (2-羥基-1-甲乙基）-3,3b，4,5,5a，6,6a，7a，7b，8b， 9，10-十二氫-5&，6-二羥基-81)-甲基-：^-二環氧乙烷並[413,5:6 ，7]菲並[l，2-c]呋喃-卜酮（1 mmol，實施例11製備）、琥珀 酸酐（2.2 mmol) 、4-二甲胺基吡啶（2.2 mmol)和吡啶（ 0.20 mL)於DMF ( 3 mL)中，在室溫下攪拌反應混合物24 小時，及在真空下濃縮，加水及加入1 N HC1使之略呈酸 性，以二氯甲院萃取（3 X 5 m L )，合倂有機萃取液， 以無水硫酸鎂乾燥，過濾及在真空下濃縮，殘餘物於矽膠 上以快速層析純化（1 %至5 %甲醇/氯仿），得標題化合物 i - I 1 —^1 ^^^1 ^ϋ— ...... * 士«^^1 ·> —^^1 ^^^1 ^n· I - i \ 1 -0 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 實施例1 9 r3bS-(3ba,5aP,6P,6a3,7ag17ba.8aR*,8hp)1-3Jb,415,5a!6,6a,7a ,7b,8b,9，10-十二氫- 5a·羥基-8b-甲基- 6a-(l-甲乙基）-1Η-二環 氧乙烷並f4b,5:6,71菲並『1,2-cl呋喃-6-基酯’ L-丙睽_酸三氟 醋酸鹽之製備 本紙张尺度適用中國固家榡率（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -44 -

43423S Λ7 五、發明説明（42

'nh2 cf3co2h 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 圖A，步驟B:在氮氣下混合[5aR-(5aa，6a，6acx,7aa,7bp， 8&3*，8匕〇〇]-3,35,4,5,5 3,6,63,73,71)，813,9，10-十二氫-53,6-二羥 基- 8b-甲基_6a-(l-甲乙基）-1Η-二環氧乙烷並[4\5:6,7]菲並[1 ，2-c]呋喃-卜酮（36 mg，0.1 mmol，實施例1製備）與N-(第三 丁氧羰基）-L-丙胺酸（21 mg，0·11 mmol)和二甲胺基吡啶（23 μ[，0.2 mmol)於無水二氯甲烷（5 1111〇中 > 冷卻溶液至〇 °C ’加入二環己基碳化二亞胺（40 mg, 0.2 mmol)，回溫至室 溫並攪拌3小時，而後過濾反應及在真空下濃縮濾液，將殘 餘物溶於二氯甲烷（20 mL)，及以0.5 N HC1 (20 mL)、飽和 碳酸氫鈉（20 mL)和鹽水（20 mL)沖洗，以無水硫酸鎂 乾燥’過濾及在真空下濃縮，殘餘物以快速層析純化（矽 膠，乙酸乙酯/己烷），得純質之BOC-保護的標題化合物。 將BOC-保護的標題化合物溶於乙醚（15 mL)中，及緩緩地 以1 N三氟醋酸（1 mL)處理，攪拌反應i小時，過濾反應以 收集固體，以乙醚沖洗固體及在真空下乾燥，得標題化合 物/ ° \v D' 實施例20 r3bS-(3ba15ap,6P,6a[3,7ap,7ba.8aR*,8bP)1-3,3b.4.<S.5a.6.6a.7a 本紙張尺度適用中國國家梯準（CNS ) Α4規格（2丨0Χ297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝』

,1T -45- 424^.35 Λ7 B/五、發明説明（43 ) ，7b,8b,9，l〇-十二氫- 5a-羥基- 8b-甲基- 6a-(l-甲乙某WH-二璟 氧乙院並丨4b ,5:6,71菲並[1,2-cl咲喃-6-基醒> L· -苯丙胺酸三 氟醋酸鹽之製備

經濟部_央標準局負工消费合作社印製 CF 3OO2H 圖A，步驟 B:在氮氣下混合[5aR-(5acc，6a,6aa,7aa,7bp, 835*，8匕〇0]-3,31),4,5,53,6,6&,7丑，713,813,9，10-十二氫-5辽,6-二羥 基- 8b-甲基-6a-(l-甲乙基）-1Η-二環氧乙烷並[4b，5:6,7]菲並[1 ，2-c]呋喃-卜酮（36 mg，0.1 mmol，實施例1製備）與N-(第三 丁氧羰基）-L -苯丙胺酸（29.1 mg, 0.11 mmol)和二甲胺基口比 陡（23 pL, 0,2 mmol)於無水二氯甲烷（5 mL)中，冷卻溶液 至0 °C，加入二環已基碳化二亞胺（40 mg，0.2 mmol)，回 溫至室溫並攪拌3小時，而後過濾反應及在真空下濃縮濾液 ，將殘餘物溶於二氯甲烷（20 mL)，及以(Μ N HC1 (20 mL) 、飽和碳酸氫鈉（2 0 m L)和鹽水（2 0 m L)沖洗，以無水硫酸 鎂乾燥，過濾及在真空下濃縮，殘餘物以快速層析純化（矽 膠，乙酸乙酯/己烷），得純質之BOC-保護的標題化合物。 將BOC-保護的標題化合物溶於乙醚（15 mL)中，及緩緩地以 1 N三氟醋酸（1 mL)處理，攪拌反應1小時，過濾反應以收 集固體，以乙醚沖洗固體及在真空下乾燥，得標題化合物 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家梂率（CNS ) Α4規格（210 Χ297公漤） -46- Λ7 ___B7 五、發明说明（44 ) 以下的實施例用以說明使用本發明的方法，這些實施 例僅用以說明本發明的範圍，但決不用以限制本發明的範 圍。 實施例2 1 內白素-2分析

Jurkat E6-1細胞系（ATCC TIB-152)，由新鮮的人血製 得之人類白血球T細胞系或淋巴細胞，於由RPMI-1 640 ( Mediatech)加上 10% v/v牛胚胎血淸（HyClone, Logen， Vermont)、青黴素（100 單位/mL)、鏈黴素（200 μ!〇 和 2 mM L -谷胺酸（GIBCO，Grand Island, New York)所組成之完全培 養介質內生長。細胞在使用前生成至濃度介於1.2至1.8 x 106細胞/mL，而後細胞在低速下離心並以1.25 X 1 06細胞/ mL之濃度再懸浮於新鮮的介質中。 經濟部中央標準局貝工消费合作社印製 t— -. - 1- · 1 - - - I - H) - - τ» . - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 待測試化合物溶於DMSQ中，加入水使成50% DMSO /水之溶液，而後將化合物於無菌水中稀釋使DMSO濃度 低於0.05%，濃度爲1.25 X 106細胞/ Ml之細胞以植物血 凝集素 10 Mg/mL (PHA)和 10s Μ佛爾醇酯（Phorbol ester) (12-0-十四碳羰基佛爾醇13-醋酸酯：TPA) (Sigma, St. Louis，Missoun)刺激，接著加入化合物，及以細胞/盤孔 之量將細胞置於平底的組織培養盤內（Falcon, Lincoln Park, New Jersey )，而後將盤於37。(：和5% CCh的氣氛 下培育。 培育後（16-24小時），分析細胞之IL-2產量及細胞生存 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） ~ -47-

；342 3S Λ7 ___B7 五、發明説明（45 ) 率（1^1'1')，11^2產量係利用固相已1^13八免疫分析法（11&0 Systems, Inc.，Minneapolis, Minnesota販售之套組）來進行分 析。 實施例22 細胞生存率 細胞生存率係利用粒線體酶分析來測定，在除去IL-2 分析的上層淸液後，將Cell Titer 96 (Promega, Madison，

Wisconsin所售之MTT溶液）加至孔盤中並在37 °C下培育4小 時，而後加入增溶的溶液並培育一夜，而後於ELISA孔盤 解讀器上在570 nm波長解讀各個孔盤，表II示內白素-2分 析的結果、細胞生存率分析及細胞生存率/IL-2抑制的比率 〇

表II ^^1 _·- 1 - ^^1 I 1 - 1 - - - 士^>n ml I ^^1 I ......... X»» 0¾-,11 . . (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央梯準局負工消费合作社印製 化合物 ICWIL-2 ICso/MTT MTT/IL-2 (ng/mL) (ng/mL) 雷公藤內酯 1至3 5 2至4 實施例1 36 300至 500 8至14 實施例2 60 550 9 實施例3 140 >1000 -48- 本紙張尺度適用中囷國家梯準（CNS ) A4規格（2丨0 X 297公嫠> Λ7 B7 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 五、發明説明（46 ) 窗施例23 佐劑引發的關節炎的鼠模式之消炎活件 依據 Pearson and Wood, Arth. Rheum·，2_，44 ( 1 959)的 步驟，測量下列化合物於佐劑引發的關節炎的鼠模式中之 消炎活性，使用體重介於160 g至200 g之雄性Wistar-Lewis 鼠（Mollegaard，Breeding Centre Ltd, BIBY，DK 4623 LI, SKENSVED, P. P. Box 28，DK)，將 Freund佐劑（0.1 mL，每 毫升重質白蜡油中懸浮有6 mg包皮垢分枝桿菌（ Mycobacterium smegmatis) ' Merck / Darmstadt )注射於 鼠尾根部，於測試的第1 0天至第1 4天間，免疫病理過程導 致慢性發炎，特別是於全身各部位呈關節炎和關節周圍炎 的症狀，動物攝取標準化的食物AUromin-R ( Altrogge, Lage)並可自由地食用水，自注射佐劑日起連續12天經腹 膜內投服化合物（羧甲基纖維素溶液，注射量爲0.5 mL / 100 g體重），記錄硏究之第1天和第18天之後掌和體 重，及第18天之關節炎指數，使用環孢子菌素A ( Cyclosporin A )和脫氫皮留醇（Prednisolone )作爲標準 化合物，上述試驗的結果示於表III ，此外，表IV示上 述試驗中之第1天和第21天間體重（增重）的變化百分 比。 (請先閩讀背面之注^*•項再填寫本頁) 裝. 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS ) Α4规格（210X 297公釐） -49 - 經濟部中央標準局肩工消費合作社印裝 五、發明説明（47 ) 表ΠΙ 化合物 劑量 毫克/公斤/天（1，P，） 抑制％ 實施例1 10 90 雷公藤內酯 0.2 70 雷公藤內酯 0.4 85 雷公藤內酯 0.8 76 環孢子菌素A 10 100 脫氫皮甾醇 15 100 表IV 化合物 劑量 毫克/公斤/天i，P， 體重變化量％ 實施例1 10 29.9 雷公藤內酯 0.2 17.2 雷公藤內酯 0.4 22.0 雷公藤內酯 0.8 18.0 環孢子菌素A 10 27.2 脫氫皮甾醇 15 14.2 佐劑關節炎控制組 ，CMC 5 mL 17.9 正常無關節炎動物 32.0 ---------^-- r . (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙伕尺度適用中國國家梯準（CNS ) Α4規格（2! Ο X 297公嫠）

，1T -50- 434235 Λ7 _____ B"1 , 五、發明説明（48 ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部中央榡準局負工消費合作社印I 本發明提供一種治療罹患自體免疫疾病之患者的方法 ，其包含予患者投服治療有效量之式（I)、（II)或（ΙΠ)化合物 。"自體免疫疾病”乙辭意指患者之免疫回應直接與患者本身 的組成對抗而導致非所欲且常常是可怕的衰弱症狀之疾病 狀態和症狀，自體免疫疾病的範圍包含ARDS、炎性腸疾病 例如潰瘍性結腸炎和局部性迴腸炎（Crohn’s disease)、類 風濕性關節炎、糖尿病I型、川崎氏症（Kawasaki disease) 、多發性硬化、家族性地中海熱、牛皮癖和狼瘡。罹患自 體免疫疾病之患者需要消炎齊ί (例如式（I)、（Π)或（III)化合 物）之治療，此外，罹患同種異體移植排斥和植體對宿主疾 病之患者亦需要消炎劑（例如式（I)、（Π)或（III)化合物）之治 療。因此，藉由投服式（I)、（Π)或（ΙΠ)化合物而對罹患這些 疾病之患者所進行的治療將特別有效於進一步防止患者狀 況的敗壞或惡化，自體免疫疾病之早期階段的患者之治療 將特別有效於進一步防止疾病狀態敗壞成更嚴重的症狀。 以式（I)、（II)或（III)化合物治療之自體免疫疾病將特別適合 於類風濕性關節炎、少年關節炎、全身性紅斑狼瘡和牛皮 癬。 文中“患者”乙辭意指罹患（或因罹患而有危險性）與免疫 爲主的疾病（例如自體免疫疾病）有關之急性或慢性發炎、細 胞傷害或細胞死亡之溫血動物例如哺乳動物。須明白的是 ，人類'狗' 天竺鼠、小鼠、大鼠、均包涵在“患者”的範圍 內。 投服式（I)、（II)或（ΠΙ)化合物於患者將於患者產生免疫 -51 - 本紙張Λ度速用中國國家標準（CNS ) Α4说格（210X297公釐） 434^31 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 Λ7 B7 五、發明説明（49 ) 抑制和消炎的功效，根據標準的臨床和實驗室試驗和步驟 ，參予的診斷專家（熟悉此項技術人士）可立即鑑定出需要免 疫抑制和消炎劑（例如式（I) ' (Π)或（Πί)化合物）之患 者。 式（I)、（II)或（ΠΙ)化合物之有效劑量是指，於單劑或多 重劑投服於患者時，可有效地提供免疫抑制和消炎功效之 劑量。 式（I)、（II)或（III)化合物之有效劑量可由參予的診斷專 家（熟悉此項技術人士）利用習知的技術和藉由觀察類似狀況 下所得之結果而立即決定。決定有效劑量時’參予的診斷 專家考慮的因素有許多，包含（但不限於此）：哺乳動物的種 類；其大小、年齡和健康；涉及的特殊疾病：涉及的程度 或疾病的嚴重性；各個患者的回應；投服之特定化合物； 投服模式；投服的製劑之生物可吸收特性；所擇之劑量攝 取法：共同藥物的使用；及其他相關狀況。 式（I) 、 （II)或（III)化合物之有效劑量是自每天每 公斤體重每約0.1毫克（mg/kg/day)至約50 mg/kg/day， 較宜是約0.2至約25 mg/kg/day，更宜是約1至約10 mg/kg/ day ° 於進行治療罹患上述疾病之患者時，式（I)、（π)或（III) 化合物可以任何使化合物可生物吸收有效劑量之形式或模 式投服，包含經口和非經腸途徑。例如，式（I)、（Π)或（III) 化合物可經口、皮下、肌內、靜脈內、皮膚、鼻內、直腸 等投服，通常經口投服和靜脈內投服是較合宜的。熟悉於 本紙張尺度遑用中國國家橾準（CNS ) Α4規格（210X297公嫠） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ;裝- π -52- 43 4235 Λ7 B7_____ 五、發明説明（50 ) 製備調合物之技術的人士可根據所擇之化合物的特殊性質 、特治療之疾病狀態、疾病的階段和其他相關狀況而立即 選擇出適當的投服形式和模式。 式（I) ' (Π)或（ΙΪΙ)化合物可單獨投服或者以藥學 組成物的形式混合以藥學上可接受之載體或助劑一起投服 ，而其比率和性質決定於所擇之化合物的溶解度和化學性 質、所擇之投服途徑、和標準的藥學實務經驗。本發明之 化合物當有效時爲了安定性、結晶的便利性、增進溶解度 等目的可調製成其藥學上可接受之酸加成鹽的形成及加以 投服。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閏讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明之另一體系是提供包含式（I)、（Π)或（III)化合物 及摻合或以其他的方式結合以一或多種惰性載體。這些組 成物可以爲例如分析標準物、製造大量船運用之便利的裝 置、或藥學組成物之形式使用。式（I)、（II)或（ΠΙ)化合物之 可分析的量是可立即由爲熟悉此項技術人士所習知和認可 之標準分析步驟和技術測試出的量。式（I)、 （II)或（III) 化合物之可分析的量將爲佔組成物之約0.001 %至約75 % (以重量計）。惰性載體可爲任何之不會破壞式（I) 、（II) 或（III)化合物或於其他方面與式（I)、（II)或（III)化合物共 價性結合之物質。適合之惰性載體的例子是水；緩衝液， 例如高效能液相層析（HPLC)分析所用者；有機溶劑，例 如乙腈、乙酸乙酯、己烷等；及藥學上可接受之載體或助 劑。 詳言之，本發明提供藥學組成物’，其包含有效量之式（ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS M4規格Ui〇x 297公釐> -53- 434235 經濟部中央標皁局員工消费合作社印製 五、發明説明（51 ) I)、（II)或（ΙΠ)化合物及摻合或以其他的方式結合以一或多 種藥學上可接受之載體或助劑。藥學組成物係依藥學界中 習知的技術製備，載體或助劑可爲可作爲活性成份之載體 或介質之固體、半固體或液體物質，適合的載體或助劑是 爲先前技藝中所習知者。藥學組成物可製成口服或非經腸 投服用，包含局部使用，及可以錠劑、膠囊、栓劑、溶液 、懸浮液等之形式投服至患者。 本發明之化合物可經口投服，例如與惰性稀釋劑或可 食性載體一起經口投服。其可包覆於明膠膠囊或壓製成錠 劑。爲了口服治療用投服之目的，化合物可混合以助劑， 及以錠劑、片劑、膠囊、酏劑、懸浮液、糖漿、包藥麵片 和咀嚼膠等之形式使用。這些製劑可含至少40 %本發明之 化合物，活性成份，但可依特定的形式而加以變化，及可 合宜地變更成佔單劑重之4 %至約70 %。組成物中存在之 化合物的量即爲所得之適當的劑量。本發明之較佳的組成 物和製劑是製成使口服單劑含有5.0-300毫克之本發明化合 物者。 錠劑、九劑、膠囊、片劑等亦可含有一或多種下列佐 劑：結合劑例如微晶纖維素、黃著膠或明膠；賦形劑例如 澱粉或乳糖；崩散劑例如藻酸、Pnmogel、玉米澱粉等；潤 滑劑例如硬脂酸鎂或5〖61：〇16&;滑動劑（§1丨(^11〇例如膠狀二 氧化矽：及增甜劑例如蔗糖或糖精或調味劑例如薄荷、水 楊酸甲酯或橙味劑。當劑型是膠囊時，除了上述類別的物 質以外，其可另外含有液體載體例如聚乙二醇或脂肪油。 (锖先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） -54- 434235 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 丨丨· ' ιιι—^^ — ^ i.^· I 五、發明説明（） 馬 52 卩定无 I [ 其他的劑型可含有其他之各種可改變劑型之物理性質的物 質，例如糖衣。因此，錠劑或九劑可塗覆上糖、蟲膝或其 他腸衣塗劑。而糖漿除了本發明化合物外可含有蔗糖作爲 增甜劑以及…些防腐劑、顏料和色料和香料。用於製備這 些各種的組成物之物質應是藥學上純質的及在其用量下應 是無毒的。 爲了非經腸治療投版之目的（包含局部投服）’本發明 之化合物可摻入溶液或懸浮液中，這些製劑應含有至少〇. 1 %本發明之化合物，但可於〇. 1至約5 0重量％間加以變化°組 成物屮.之本發叨化合物的量是使可得到適當的劑量者，本 發明之較佳的組成物和製劑可經製作使非經腸藥劑單位中 含有5.0至1 00毫克之本發明化合物者。 溶液或懸浮液亦可含有一或多種下列佐劑：無菌稀釋 液例如注射用水、鹽水、固定油、乙二醇、甘油、丙二醇 或其他合成的溶劑；抗菌劑例如苄醇或甲基帕拉本（methyl paraben):抗氧化劑例如抗壞血酸或亞硫酸鈉；螯合劑例 如乙二胺四醋酸；緩衝劑例如醋酸、檸檬酸或磷酸，及調 節滲透壓用之試劑例如氯化鈉或葡萄糖。非經腸製劑可包 覆於玻璃或塑膠製之安瓿、拋棄型針筒或多重劑小瓶中。 於任何一類之具有特殊之槪括性用途之結構上相關的 化合物中’較合宜的基團和構型是，對式（I)化合物而言， 其中 Ri、R:、1^.;和}^是 η ; R2、幻和 114是 Η及 1^是 OH ; R!、R; 和R>是Η及R:是OH ;及R,、R4U L是Η，而R3是 C(二0)(CH2：hC〇2H或 C( = 0)(CH小CChH; (請先閱讀背面之注^^項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準{ CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） -55- 省34235 A7 B7 五、發明説明（ (K· 53 |補充 及對式（II)化合物而言，其中Ri、R!、R3和是Η ; Ri、R4U R-是 Η及 Ri 是 OH; R「R.;和 R^H及 L是 OH;及]^、R;和 r4 是 Η，而 R3是 C(二0)(CH2)2CChH或 C( = 0)(CH〇3CChH ;此外，X 較宜是C1或Br ; 及對式（111)化合物而言，其中R i、R 2、R 3和R 4是Η ; R 2、R 3 和R4是Η，及1是OH ; ，Ri ' 113和是Η及R2是ΟΗ ;及R,、 R:和 L是 H，而 R，是（：（=0)((：112)2(：0』或(：（=〇)((：^2)3(：〇211;此 外，X較宜是C1或Br。同時’對R3和RTiffi言’式（I)、（II)和（ III)化合物中，其各分別獨立’而較佳之適合的胺基酸是 Ala、Gin、Lys、Ai.g、和Phe’ 而最佳的是 Ala、Gin和Lys。 (婧先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- 訂 0 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製 本紙张尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -56-

Claims (1)

1. 2' 4 3 4 A8B8C8D8 六、申請專利範圍 附件-（A ) m ν ;π -屮\m ^ I —‘ — 一一-----一 :第8 7 1 Ο 7 7 1 號專利申請案 中文申請專利範圍修正本 民國89年12月呈

   1. 一種下式所示之化合物：

   〇 其中 R1，R 2，R;及 R 4 係 Η ;及 其立體異構物、鏡像異構物和藥學上可接受之鹽 2. 一種.下式所不之化合物： 裝--------訂---------線 (請先M讀背面之注意事碩再墣寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣

   R, 0 ^ 0 其中 X係I 、 Br 、 C1或 F ; Ri，R2, R;及 R·)係 H;及 其立體異構物、鏡像異構物和藥學上可接受之鹽 3 . —種下式所示之化合物： 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 附件UA):第87107719號專利申請案中文說明書修正頁 民國88年9月呈 五、發明説明（ 15 粗產物於矽膠上進行快速層析，以適合的洗提液洗提，例 如乙酸乙酯/己烷，得純質的式（la)化合物。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 圖A之步驟B中，令結構式（la)之化合物於熟悉此項技 術人士習知之標準的醯化條件下生成式（lb)化合物。例如依 照 J. Swistok, et al .，Tetrahedron Letters, 30(38)，5045 ( ! 9 89)的步驟，式（U)化合物溶於適當的有機溶劑中（例如二 甲基甲醯胺）。而後溶液以1當量適合的環狀酸酐（例如琥珀 酸酐）、1當量4-二甲胺蕋吡啶（DMAP)和約1.6當量吡啶處理 。在室溫下攪拌反應約1 2小時 > 及接著在真空下濃縮。而 後以先前技藝中習知的技術單離和純化式（lb)化合物，例如 萃取和層析技術。例如，將殘餘物溶於適當的有機溶劑中（ 例如二氯甲烷），以水和鹽水沖洗，以無水硫酸鎂乾燥，過 濾及真空下濃縮得粗產物。而後粗產物於矽膠上進行快速 層析，以適合的洗提液洗提，例如甲醇/氯仿，得純質的式（ lb)化合物》 經濟部智慧財產局8工消費合作社印製 或者，式（I a)化合物可溶於適合的無水有機溶劑中（例 如吡啶），而後以對應之適合的二酸之適合的單酯之醯氯化 物處理。適合的二酸之例子是琥珀酸、戊二酸 '己二酸、 庚二酸和辛二酸。適合的二酸之適合的單酯是最後於先前 技藝中習知的溫和條件下去酯化而得到式（lb)化合物之酯。 例如，上述溶液以1當量琥珀酸單第三丁酯或琥珀酸單苄酯 之醯氯化物處理，而後在室溫下攪拌約2小時。接著以先前 技藝屮習知的技術單離和純化所得之酯。例如，在真空下 除去溶劑|殘餘物於矽膠上進行快速層析，以適合的洗提 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2IOX297公釐） -18 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 咖235 · A7 __ B7 五、發明説明（^) ^ 液洗提，例如甲醇/氯仿，得純質的酯。而後利用先前技藝 中習知的技術分別將酯轉換成對應的酸，而得粗質之式（lb) 化合物，例如依 T. W. Green, “Protective Group in Organic Synthesis”， John Wjley & Sons Inc, 1981 第 168-169 和 Π 1 - Π2頁所揭示之第三丁酯的酸水解或苄酯的氫解。接著 藉由矽膠快速層析，以適合的洗提液洗提，例如甲醇/氯仿 ’純化粗質物質及必要時分離混合物，而得純質的式（lb)化 合物。 熟悉此項技術人士將立即認知到，當式（la)中H /或 Rh是·〇Η時，h述步驟將得到醯化的化合物之混合物，其 屮醯化可發生在Ru、Rn或第14位置之-0H。同時須明白的 是，所得之混合物可以先前技藝中習知的技術加以分離’ 例如快速層析或高效率液相層析。熟悉此項技術人士須再 明白的是，所有一級和二級醇均已被醯化之式（I b)化合物必 須使用對式（la)上各個醇而言至少1 .2當量的試劑處理。例 如，對存在於式（I a)化合物中的各個一級和二級醇而言，式 (la)化合物必須以至少1.2當量適當的環狀酸酐、至少1.2當 量DMAP和至少1.8當量吡啶處理》 此外，式（la )化合物可被表1中所示之胺基酸（ 其已在先前技藝中習知的條件下加以適當的保護）醯化’ 繼之化合物中胺基酸部份經去保護而得式（lb )化合物。 例如參見 P. .1 ◦ u 1 i η，e t. a 1.，T e t r a h e d r ο n L e 11 e r s，2 8 ( 1 5 ).1661 ( 1987 )' D. Grenouillat , et al., Tetrahedron Letters , 28 ( 47 ) , 5827 ( 1 987 ) 、M. Ueda ，et al.， 本紙張尺度適用中國國家梂準（CNS ) A4规格（210X297公釐） ---------Μ.------、tT------^. (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 19- 經濟部智慧財產局資工消費合作社印製 A7 B7 ___五、發明説明（） 標題化合物之另一稲製法 i補充么烈” _r’ 圖A >步驟Λ :在氮氣和室溫下，於攪拌中之雷公 藤內酯（100 mg )於乾燥THF ( 30 mL )中的溶液中加 入氫硼化鋰（264 μί之2 N THF溶液）’繼之逐滴加入 純質乙醚化三氟化硼（72 μΙ> )’攪拌反應混合物90分鐘 ，而後小心以1 N H C1 ( 1 〇 m L )處理’再攪拌1 〇分鐘 後，反應混合物以二氯甲烷萃取（3 X 20 mL ) ’合併有 機萃取液，以1 N碳酸氫鈉（2 X 20 mL )和鹽水沖洗 ，以無水硫酸鎂乾燥，過濾及在真空下濃縮’殘餘物以管 柱層析純化（20%乙酸乙酯/己烷），得標題化合物（ 7 6 m g，7 6 % )。 實施例2 nS-Ua，2P，3a，3aP.4aR*.4ba,l laa)l-3-氯-l，2,3,3a，4b，5、6,9.9b ，10,丨1，1 U-十二氣-1.2.1 la-三羥基-4b-甲基-2-U-甲乙某）-7H-環氧乙烷並「4b,51菲並丨1，2-c〗呋喃-7-酮之製備 ----------^------π------0 (請先W讀背面之注意事項再填寫本頁〕

   圖A ’步驟C :在室溫下，於攪拌中之[5aR-( 5aa，6a, 6a a，7 aoc，7 b P，8 a S *，8 b a) ] - 3，3 b，4，5，5 a，6，6 a, 7 a，7 b，8 b，9，1 0 -十二 氫-5a，6-二羥基-8b-甲基-6a-(l-甲乙基）-1Η-二環氧乙烷並[4b ，5 :6，7 ]菲並[1，2 - c ]吹喃-1 -酮（5 m g，由實施例1製備）於二噁 烷U mL)之溶液中加入2 N HC1 (0.5 mL)，攪拌反應混合 本紙張尺度適用中關家樣準（CNS ) A4胁（2丨0X297公| ) ' -27- A7 B7 五、發明説明（） 修正——…一~~1 25 補充 物5小時，而後以冷水（5 mL)稀釋，混合物艺ΫΈΓΙίΥΓχ w mL)萃取，合倂有機萃取液，以鹽水（3 X 10 mL)沖洗， 以無水硫酸鎂乾燥，過濾及真空下濃縮，殘餘物以管柱層 析純化（矽膠，40 %乙酸乙酯/己烷），得標題化合物（4.8 mg ，82 %)。 ---------象— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 實施例3 UAJ 1(^，20，3〇〇社0，4?1民!|!，41^，110，113〇〇1-3-氯-1，2,3,33,4 H 1 〇, 1 1，1 j a -十二氫-1,1 la-二羥基-4b-甲基-2-(卜甲乙基立il

   本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -28- 434235 A7 B7 五、發明説明（ 26 圖B，步驟A :雷公藤內酯（100 mg ’光學活性，單離 天然物）與二噁烷（1 5 mL)和1.5 N HC丨水溶液（1 5 mL )之混合物相混合，在室溫下攪拌反應混合物4 8小時，而 後將反應混合物倒入水（50 mL)中並以氯仿萃取（3 X 40 mL )，合倂之有機萃取液以鹽水（60 mL)沖洗，以無水硫 酸鎂乾燥，過濾及在真空下濃縮，得一白色固體，接著白 色固體以己烷/氯仿再結晶得白色針狀之標題化合物（65 mg ) |過濾S液在真空下濃縮，殘餘物以快速層析純化（ 矽膠，2 % φ醇/氯仿），再得標題化合物（20 mg)，總產 率爲 77 % : mp 244 T 分解；[α]» = -129" (c = 0.15，氯仿） (请先閲讀背面之注$項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 最終標題化合物的製備 圖 β，步驟 B: []bS-(iaRMbcx，6bp，7aP,8aR*,9oc,10p， ila，llaP)]-U-氯-10-(1-甲乙基）-lb，3,6,6b，7,7a ,9,10,II,11 a-十氫-9，10-二羥基-113-甲基-二環氧乙烷並[仆，5:83,9]菲並[1,2 -c ]呋喃，4 (2 Η)-酮（1 i m g)與二噁烷（丨m L)和1 . 5 N H C丨水溶 液（1 mL)混合，及在85 |'C下攪拌26小時，而後將反應混合 物倒入水（5 mL)中並以氯仿萃取（3 X 5 mL)，合倂之有機 萃取液以鹽水（5 mL)沖洗，以無水硫酸鎂乾燥，過濾及在 真空下濃縮，殘餘物以製備的TLC純化（20 x20 cm，0.25 m m，5 %甲醇/氯仿），得標題化合物（4 m g , 3 6 %)，檩題化 合物以己烷/氯仿再結晶；mp 1 2 5 "C分解；[ot ] D = -1 29° (c = 0 1 5，氯仿）。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )八4規格（2l〇X 297公釐） -29- ★34235 A7 B7 經濟部智慧財產局B工消費合作社印製 五'發明説明（） 27 醚化合物之另一種製法 窗施例4 【18-(1«，20，3〇1，330'431^.4匕〇^1101113〇〇1-3-溴-1，2,3,33、41?，5,6, 9,9b，10，i 1,1 la-十二氣-1,1 U-二羥基-4ί>-Φ 某-2-(1-甲乙基）-2 ,1 1-環氧基- 7H-環氧乙烷並丨4b，51菲並丨1 .2-cliM；喃-7-酮之製 at

   .中問物[lbS-(laR\lba,6bP，7aP，8aR*.9a,l〇[3.1 Ια,Ι laP)卜11-溴-1 Ο -(卜甲乙基）-1 b，3'6'6 b , 7,7 a，9，1 Ο · 1 1，1 1 a -十氫-9，1 Ο -二羥 骚- lb-甲基-二環氧乙烷並丨4b,5:8a，9〗菲妝【l，2-cl呋喃-4(2Η)_ 酮之製備

   _ Β，步驟A :雷公藤內酯（】00 nig，光學活性，単離自 天然物）與P、i酮（3 0 m L)、水（2.5 m L)和3 0 % Η B r水溶液（8 0() μΙΟ混合，在70 Τ下反應混合物70分鐘，而後將反應混合 物倒入水（60 mL)中及在离空下濃縮，而後殘餘層以二氯qi fcT萃取（3 X 60 mL)’合倂有機萃取液，以鹽水（6() mL)沖冼 ’以無水硫酸鎂乾燥，過濾及在真空下濃縮，得一固體（ 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） I n n n I n n I ^ 1 n n n I n ^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -30- 五、 A7 B7

   發明説明（） 28 1 1 8 mg)，固體以己烷/二氯甲烷再結晶得白色立方塊狀之找 趨化合物（8 2 in g，6 7 %) ; m p 2 2 8 u C 分解；[ex ] η 二-丨 6 4 (c _ 0.1 ’氯仿） 標題化合物韵製備 圖 B，步驟 B :將[lbS-daRMbccjbPJaPJaR'yaJOP’ 1 1(*，1 laP)]-l 1-溴-10-U-甲乙基）-lb，3,6,6b，7,7a，9，l0，n，Πa-十氫-9，i0-二羥基-lb-甲基-二環氧乙烷並[4b,5:8a，9]非並[h2 -c]呋喃-4(2H)-酮（36 mg)與硫酸氫鉀微細粉末（95 mg)懸'浮 於乾燥的Φ苯（6 niL)中及在75 °C下加熱5小時’以膨滴土過 濾反應混合物並以氯仿（I 〇 mL)沖洗固體，在真空下濃縮滅 液，得白色粉末（40 mg)，白色粉末以管柱層析純化（矽膠’ 氯仿接著0.5至2 %甲醇/氯仿）’得標題化合物（2 5 m g，7 0 % );mp 195 T分解。 實施例5 [3bS-(,3ha.5a6,6P,6ap,7 &3Λ ba，8aR*，8bp , ίΜΙΙ: 3上3 Μ，5 7 5 a，6.

   本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格（2l〇X297公爱） (銪先聞讀背面之注意事項#填寫本頁) 訂 -線 -31 -

   Α7 Β7 五、發明説明（） 29 酯（3 7 6 m g ’ i m m ο 1 ’光學活性’單離丨天然物）於乾燥τ H F (i0 mL)屮的溶液屮加入氰基氫硼化鈉（360 mg，6 mmol)， 繼之逐滴加入純質乙醚化三氟化翻（150 μί，173 mg, 1.2 m m ο 1)，所得之溶液在室溫下攬拌1 6小時，而後藉由加入1 N氯化銨水溶液（2 5 m L)而使反應驟停，及以二氯卬烷萃収（ 3 X 25 mL)，合倂之有機萃取液以鹽水（25 mL)沖洗，以無 水硫酸鎂乾燥，過濾及在真空下濃縮，殘餘物以快速層析 純化（氯仿而後0.5%甲醇/氯仿），得標題化合物（160 mg, 44 %)。 實施例6 [1 S - (1 α , 2 β , 3 a , 3 a β , 4 a R * , 4 b α, 6 α , 9 b β , 1 1 a α)卜 3 -氯-1 ,2,3.3 a , 4 b, 5,6,9,9b,l(M M ia-十二氫-1,2,6,1 la-四羥越- 4b-Ep 驻-2-Π-φ 乙基）-7Η-環氧乙烷並丨4b,51菲並H，2-cl呋喃-7-酮之製備

   圖A，步驟C :在室溫下，於攪拌中之[3bS-(3bct，5af5,6p ,6a β , 7aβ , 7ba , 8a R 8b β , i Οβ ) J -3 , 3 b ,Ί , 5,5 a,6,6a , 7a, 7 b, 8b,9,1 0- 卜二氫- 5a,6, 10-三羥基- 8b-q=<基- 6a-(l-甲乙基）-1 H - +二環氣乙 院並[4 b，5 : 6，7 ]菲並[1，2 - c ]呋喃-]-0nj (5 m g，由實施例5製備） 於—ii惡院（1 m L)之溶液中加入2 N H C1 (0.5 m L)，攪伴 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > Λ4規格（210X 297公釐） ' (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -32- 434235 A7 B7 五、發明説明（ 30 i+補克 反應混合物5小時’而後以冷水（5 mL)稀釋，混合物以乙酸 乙酷（3 X 1 〇 mL)萃収，合倂有機萃取液’以鹽水（3 X 1 〇 m L)沖洗，以無水硫酸鎂乾燥，過濾及真空下濃縮’殘餘 物以管柱層析純化（矽膠，卜2 %甲醇/氯仿）’得標題化合物 眢施例7 氯- I'〗」.？:. ，4 b，5,6，9，9 b，1 0，1 1，1 1 a -十二氤-1，6，1 1 a -二:_ 經某-4 b -甲某-- μ . 墨- ~~ 乂 . Ψ乙某）-2,1 1-環氧基-7Η-環氣乙烷並Hb. Vlgli並n，2-cm 7-酮之製備 ----------1-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

   訂 間物[lbS-UaRMbadccJbPJai^SaR^QalfiR Hal 1λβ)1- 1 1-氣- lb，3,6,6b，7,7a，9,10，l 1，1 la -十氫-3,9 · 1 〇 -三徑基-1 b - φ 基-1 Ο - (1 -甲乙基）-二環氧乙院並〖4 b，5 : 8 a、91非邶丨1,2 - c 1丨1夫喃-4(2Η)-酮之製備

   圖Β ’步驟A :雷公藤羥內酯（t r i p d i 〇丨i d e) (0.2 7 7 m m 〇: 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2】0X297公羡） 绍 經濟部智慧財產局員工诏費合作社印製 -33 - 4- w【- 4- w【-

   A7 B7 五、發明説明（） 31 ，光學活性，軍離自天然物）與二噁烷（1 5 mL)和Ί ,5 N HC1 水溶液（15 inL)之混合物相混合，在室溫下攪拌反應混合物 48小時，而後將反應混合物倒入水（50 mL)中並以氯仿萃取（ 3 X 40 mL)，合倂之有機萃取液以鹽水（60 mL)沖洗，以無 水硫酸鎂乾燥，過濾及在真空下濃縮|殘餘物以快速層析 純化（矽膠，2 %甲醇/氯仿），得標題化合物。 最終標題化合物的製備 圖 B，步驟 B: [lbS-(laR'ibot，3(x，6bp，7ap，8aR'9ot,l〇p， 1 1 α，1 UP)] -Η -氯-]b，3,6'6b，7,7a，9,10，1 1，1 1 a-十氫-3,9，i〇-二 羥越-丨b-甲基-10- (1-甲乙基）-二環氧乙烷並[4b，5:8a，9] 菲並[l，2-cP^_-4(2H)-酮（11 mg)與二噁烷（丨+mL)和 1 5 N H C1水溶液（1 m L)混合，及在8 5 ° C下攪拌2 6小時，而 後將反應混合物倒人水（5 mL)中並以氯仿萃取U X 5 mL)，合倂之有機萃取液以鹽水（5 mL)沖洗’以無水硫 酸鎂乾燥，過濾及在真空下濃縮，殘餘物以製備的TL(:純 化（2 0 X 2 0 c m，0 · 2 5 m m，3 %甲醇/氯仿）’得機化八 物。 實施例8 r3bS-(3ba,5aP16P,6aP,7aP,7ba,8aR*,8bp)3-3,3b? α Ί, _7bT8b,9,10、十二氫-5a，6-二羥驻-6a“ 卜羥基-1 -甲匕-基） 莊-1H-二環氧乙烷並[4b,5:6,71菲並[1^1ι£ΐ^ 喃 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210X297公釐） n. - n n - 1 - - I an I .. 1^1 」，----^^1 n n I— TT n - -« In - ii - I >ew. 、濯 A (請先閱请背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員X消費合作社印製 -34- A7 B7 五、發明説明（） \ …一-32 β充卿％

   圖A，步驟A :在氮氣和室溫下，於攪拌中之爾公藤内 酷酸（triplolideiiol ) ( 100 mg )於乾燥 THF ( 30 mL ) 中的溶液中加入氫硼化鋰（236 μί之2 N THF溶液）， 繼之逐滴加入純質乙醚化三氟化硼（5 2 μ L )，攪拌反應 混合物90分鐘，而後小心以1 N HC1 ( 10 mL )處理，再 攪拌10分鑓後 > 反應混合物以二氯甲烷萃取（3 X 20 mL )，合倂有機萃取液，以丨N碳酸氫鈉（2 X 2 0 m L )和 鹽水沖洗，以無水硫酸鎂乾燥，過濾及在真空下濃縮，殘 餘物以管柱層析純化（20%乙酸乙酯/己烷），得標題化合物 實施例9 【13-(1(^，23,3〇6，：330，411尺*，4匕〇〇,913|3，113〇〇1-3-氯-1，2,3,33,411;；内 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 9,9 b ' L 011 1，ί 1 a -丨.二氫-U 2，1 1 a -三羥基-2 - (1 -羥基-1 -甲 7,甚、— 朴-甲基-7_»-環氣乙烷並丨4卜，5〗菲並「1,2-^呋_-7-_之製1

   圖A ’步驟C :在室溫下，於攪拌中之[3bS-(3ba，5a[i,6p 本紙張尺度適用中國國家標準{ CNS ) A4规格（21〇i_297公釐） ~~ -- -35- 43423S Α7 Β7 五、發明説明（） ./ --------'-'j 33 ；1：ΐ j補充· ( i ，6ap，7aP，7ba，8aR'8bp)]-3,3b，4,5,5a，6,6a，7.a.r7l，^.r9TTO7:k: 4l-5a，6 -二羥基- 6a-(i -羥基-i —甲乙基）_8b -甲基_iH，二環氧乙 院並[4b，5:6 J]菲並[He]呋喃·1-酮（5 mg，「.丨1寶施例8製備） 於二嗯烷U m L)之溶液屮加人2 N H C 1 (0.5 m L)，攪拌反 應混合物5小時，而後以冷水（5 mL)稀釋，混合物以乙酸乙 酷（3 X 10 mL)萃取，合倂有機萃取液，以鹽水（3 X π) mL) 沖洗’以無水硫酸鎂乾燥’過濾及真空下濃縮，殘餘物以 管柱層析純化（矽膠，丨％甲醇/氯仿），得標題化合物。 (婧先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) U S :_(1 a，2 L3 a，H4aR*，4ba，9b3，l 1 B,llaa)]-3-M-l 1 λ ?a.4b

   A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（

   圖B ’步驟A :雷公藤丨人j醋醇（t r i p t ο 1丨d e η ο 1) (1 0 0 m g)與 一贼院（1 5 m L)和1 .5 N H C1水溶液（1 5 m L)之混合物相混合 ’在室溫下攪拌反應混合物4 8小時，而後將反應混合物倒 人水（50 mL)中並以氯仿萃取（3 x 40 mL)，合併之有機萃取 液以鹽水（60 mL)沖洗，以無水硫酸鎂乾燥，過濾及在真空 下濃縮’殘餘物以快速層析純化（矽膠，2 %中酷/氯仿），得 標題化合物。 最_終標題化合物的製備 圖 B’ 步驟 B: [lbS-UaR^IbocJbpJapJaR^PoOOP， Ηα，1 lap)]-il-氯- lb，3,6,6b，7,7a，9，10，l 1，1 la-十氫-丨0-(卜羥基 -1-甲乙基）-lb-甲基-二環氣乙烷並[4b，5:8a，9]菲並[l，2-c]炚 喃-4(2H)-酮（Π mg)與二噁烷（1 mL)和丨.5 N HC1水溶液U mL)混合，及在85 T下攪拌26小時，而後將反應混合物倒 人水（5 m L)中並以氯仿萃取（3 X 5 m L) ’合併之有機萃取 液以鹽水（5 tnL)沖洗，以無水硫酸鎂乾燥’過濾及在真空 下濃縮，殘餘物以製備的TLC純化（20 x20 cm，0.25 mm' 3 %甲醅/氯仿），得標題化合物。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2!〇Χ297公釐） ----------裝------訂 (請先閲讀背面之注意事項存填寫本頁) -37-

   ，.心 3 ε . A7 B7 五、發明説明（） 35 實施例Π i3bS-(3ba，5aP，6P，6aP，7 4,7ba,8aR*，8bim-6a-(2-羥基-卜「Π 乙 基）-3'3\4,5,5:1，6,6&，7〔1，7181^9，10-十二氫-5 3,6-二羥基-813-甲 基-丨H-二環氧乙烷並Mb，5:6,7r菲並『l，2-cl呋喃-卜酮之製備 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部^慧財產局員工消費合作社印製 圖A，步驟A :依類似於實施例1之方法，由16 -經基-雷 公藤内酯製備標題化合物。 實施例1 2 nS-UocJPJaJaPjitR'AbaJbPJ lacp卜 3-氯- 2-(2-羥基-1-甲 乙基）-j ,2,3,3a，4b，5,6,9,9b，10,1 1，1 U-十二氫-1，2，1 la-三羥基-4b-甲基- 7H-環氧乙烷並「4b，5〗菲並夫喃-7-酮之製備

   圖Λ |步驟B :依類似於實施例2之方法，由實施例1 1製 — iPbS-UbaJaPJPJaPJapJbaJaR'SbPUea-UHS-l-甲乙基）-3，3 b，4 ,5，5 a f 6，6 a，7 a，7 b，8 b，9，1 0 -十二氫-5 a，6 -二羥基-8 b -甲基-1 H -二環氧乙烷並[4 b, 5 :6，7 ]菲並[1 , 2 - c ]呋喃-1 -酮來

   本纸張尺度適用中國國家梯準（CMS > Λ4規格（210 X 29?公釐） -38 - *3423© A7 B7 五、發明説明（ 製備標題化合物 寶施例1 3 nS-(U，2p，3〇c，3ap，4aR*，4ba，9bp，l 1 β，1 lacc)1-3-氯- 2-(2-羥基-1-甲乙基）-1,2,3，；^，413,5,6,9,91^10，11，113-十：:—.氫-1，11&'二羥 基-4b-q_』基-2，1 1-環氧基-7H-環氧乙烷並f4b、5】菲並fl，2-cl映 喃-7-酮之製備

   OH 〇 中間物 nbS-(laR*,lb(x,6bP，7a0，8aR*,9a，l〇p，l la，l lap)卜 1 i-氯-10-(2-徑基-1-甲乙基）-lb，3,6,6b，7,7a'9，iO，l 1，1 la-十氫-9， 10-二羥基-1卜甲基-二環氧乙烷並[415:8〖1，9〗菲並[1，2-〇1呋喃 -4(2H)-酮之製備 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

   OH 0 圖B，步驟A:依類似於實施例3之方法，Itl 1 6-羥基 公藤內酯製備中問物標題化合物。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 2ί>7公釐） -39- 43 42 3 ^ 、 A7 _________B7

   五、發明説明（） 37 聖il標題化合物的製備 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 圖B ’步驟B :依類似於實施例3之力法’直接由上述製 得之 UbS-(laR、iba，6bp，7ap，8aR*，9〇c，10(M 1α，1 Up)卜^-氯― 1 () - (2 -經基-卜甲乙强）-j b，3，6，6 b，7，7 a, 9 ,1 0，] 1,1 1 a -十氫-9，1 〇 — 二拽蕋-1 b -甲越-二環氧乙烷並μ b，5 :8 a，9 ]菲並[l，2-c]呋喃_ 4 ( 2H)-酮來製備最終標題化合物。 實施例1 4 ba，5ap，6p，6ap，7aK7ba.8aR*，8bP)H:[3,3h，4,Wr、 ^Άλ2 a，7 b，8 b , 9 ,1 0 -十二氣-5 a -羥基· 8 b -甲基-6 a -(丨-ιυ 7 莊 h 丨. IL二丨H -二環氧乙烷並丨4 b，5 : 6.71菲並「1，2 - c ]呋喃-6 -某j喂，_「 二酸之製備

   C〇2H 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ,ΙΑ，步驟 B :混合[5aR-(5aa，6ct，6aa,7aa，7bp，8aS'8bc〇 j-3,3b，4,5,5a，6,6a，7a,7b，8b，9,10-十二氫- 5a，6-二羥基 基 -6a-U-甲乙基）-1Η-二環氧乙烷並[4b，5‘.6,7]菲並[i，2-c]呋喃-1 -酮（1 m m ο 1，實施例1製備）、號拍酸酉_丨' (1 . 1 m m 〇 1)、4 -二ψ 胺基吡啶（1 . 1 m m ο 1)和吡啶（0 ‘ 1 0 m L)於D JVIF (3 m L)中，在 室溫下攪伴反應混合物24小時，及在真空下濃縮，加水及 加入1 N HC1使之略呈酸性，以二氯Φ烷萃取（3 X 5 mL)， 本紙張尺度適闱中國國家標準（CNS ) Λ4規格（2丨OX297公釐） -40-

   五、發明说明（） 濟 38 ;就 I— | 八 Γ 二I

   倂有機萃取液，以無水硫酸鎂乾燥，過濾及在真空下濃 縮，殘餘物於矽膠上以快速層析純化U %至5 %甲醇/氯仿） ，得標題化合物。 實施例1 5 nS-(la、2P，3a,3d，4aR*,4ba，9bP.，l laoQl-tH3-氯-l，3,3a，4b,5. 6,7,9,9 b，1 Ο，1 1 , Π a -十二氫-2, 1 1 a -二羥基-4 b -甲基-2 - (1 -中乙 某）-7-_-2H-環氧乙烷並[4b，51菲並丨1.2-cl呋喃-1-基1酯，丨__ 二酸之製1 -CO，H 圖 A '步驟 D :混合[1 S - (i ct，2 β，3 a，3 a β，4 a R *，4 b a，1 1 a α)]-3-氯-1,2,3,33,41),5,6,9,91?,10，11，113-十二氫-1,2,11(1-三羥基-4b-中基- 2-0-1]1乙基）-7H-環氣乙烷並[4b,5]菲並[1 ,2-c]吹喃-7 -酮I (1 m m ο 1，實施例 2 製備）、墟 _ 酸 0F (1.2 mmol) 、4 -二甲胺练吡啶（1.2 mmol)和吡啶（0.10 mL)於DMF (3 mL )屮，在室溫下攪拌反應混合物24小時’及在真空下濃縮 ，加水及加入1 N HC1使之略呈酸性，以二氯甲烷萃取（3 X 5 mL)，合併冇機萃取液，以無水硫酸鎂乾燥，過濾及在 真空下濃縮，殘餘物於矽膠上以快速層析純化（丨％至5 % Φ 醇/氯仿），得標題化合物。 本紙诔尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格< 210X297公釐） n . ^ I I I 線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} 經濟部智慧財產局員工消贫合作社印製 -41 - 五、發明説明（ A7 B7 I施例ί 6 [3bS-(3bαL5aJL6^_6aβ ,7 aβ 77ba ,8aR^ , 8b β) 1 - 1φ_ [^ ,3b 4 s ς ~ ~ ~~-- jj-8b-甲基m :1 H--二環氧非並[1，2 - c 1 呋喃^ 酸之製備

   ο c〇2h 圖A -步驟B :依類似於實施例14之方法，由實施例"製 得之[531^-(5%6〇1，6^7；1〇1，71^,833*，8匕〇〇]-3 313 4“〇 ’，J，Ja，b，6a’73,71)，813’9，10-十二氬-53,6-二羥基-813-甲基-63-(卜甲乙其）丄1{ -二環氧乙烷並[4b，5:6,7]菲並[l，2-c]呋喃-1 -酮和戊二酸軒來 製備標題化合物。 (請先閲讀背面之注#^項再填寫本頁) 訂- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 α a二 並 烷 乙 氧 環二 - H ΤΓ 1 ~ 1 酮 備 製 之 酸 例 施 實 α RI 基 羥 基 甲 喃 呋 基 乙 甲 匕a 基 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（2!0Χ297公釐） -42- 43423S A7 B7 五、發明説明（d

   圖 A，步驟B:混合[HS-ObcOaP/PmVapjbcx'hp ，8!^，]〇0)]-3,3!7,4,5,53,6,63,7^1，71)，813,9，1〇-十二氫.53,6 1〇_二 淫基-8 b - Φ基-6 a - (1 -甲乙基）-1 Η -二環氧乙院並[4 b，5 :6,7 J 菲並Π，hc】炚喃-卜酮（1 mmol，實施例5製備）、琥珀酸 酐（2.2 mmol) 、4-二Φ胺基吡啶（2.2 mmol )和吡啶（ 0.20 mL)於DMF (3 mL)中，在室溫下攪拌反應混合物24 小時，及在真空下濃縮，加水及加入1 N HC1使之略呈酸 性，以二氯甲烷萃取（3 X 5 mL)，合倂有機萃取液，以 無水硫酸鎂乾燥，過濾及在真空下濃縮，殘餘物於矽膠上 以快速層析純化（1 %至5 %甲醇/氯仿），得標題化 合物。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 α 基 氧 丙 &iL 例 施 實 α RI mil 基 羧 並 烷 乙 氧 環 二 - Η 3 6 酮 匕Η 基 備 製 之 酸 菲 氫 基 羥 喃 呋 木紙張尺度適用中國國家標準（CNS > Λ4規格（2I0X 297公瘦） -43- 434235 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 丨丨· ' ιιι—^^ — ^ i.^· I 五、發明説明（） 馬 52 卩定无 I [ 其他的劑型可含有其他之各種可改變劑型之物理性質的物 質，例如糖衣。因此，錠劑或九劑可塗覆上糖、蟲膝或其 他腸衣塗劑。而糖漿除了本發明化合物外可含有蔗糖作爲 增甜劑以及…些防腐劑、顏料和色料和香料。用於製備這 些各種的組成物之物質應是藥學上純質的及在其用量下應 是無毒的。 爲了非經腸治療投版之目的（包含局部投服）’本發明 之化合物可摻入溶液或懸浮液中，這些製劑應含有至少〇. 1 %本發明之化合物，但可於〇. 1至約5 0重量％間加以變化°組 成物屮.之本發叨化合物的量是使可得到適當的劑量者，本 發明之較佳的組成物和製劑可經製作使非經腸藥劑單位中 含有5.0至1 00毫克之本發明化合物者。 溶液或懸浮液亦可含有一或多種下列佐劑：無菌稀釋 液例如注射用水、鹽水、固定油、乙二醇、甘油、丙二醇 或其他合成的溶劑；抗菌劑例如苄醇或甲基帕拉本（methyl paraben):抗氧化劑例如抗壞血酸或亞硫酸鈉；螯合劑例 如乙二胺四醋酸；緩衝劑例如醋酸、檸檬酸或磷酸，及調 節滲透壓用之試劑例如氯化鈉或葡萄糖。非經腸製劑可包 覆於玻璃或塑膠製之安瓿、拋棄型針筒或多重劑小瓶中。 於任何一類之具有特殊之槪括性用途之結構上相關的 化合物中’較合宜的基團和構型是，對式（I)化合物而言， 其中 Ri、R:、1^.;和}^是 η ; R2、幻和 114是 Η及 1^是 OH ; R!、R; 和R>是Η及R:是OH ;及R,、R4U L是Η，而R3是 C(二0)(CH2：hC〇2H或 C( = 0)(CH小CChH; (請先閱讀背面之注^^項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準{ CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） -55- 省34235 A7 B7 五、發明説明（ (K· 53 |補充 及對式（II)化合物而言，其中Ri、R!、R3和是Η ; Ri、R4U R-是 Η及 Ri 是 OH; R「R.;和 R^H及 L是 OH;及]^、R;和 r4 是 Η，而 R3是 C(二0)(CH2)2CChH或 C( = 0)(CH〇3CChH ;此外，X 較宜是C1或Br ; 及對式（111)化合物而言，其中R i、R 2、R 3和R 4是Η ; R 2、R 3 和R4是Η，及1是OH ; ，Ri ' 113和是Η及R2是ΟΗ ;及R,、 R:和 L是 H，而 R，是（：（=0)((：112)2(：0』或(：（=〇)((：^2)3(：〇211;此 外，X較宜是C1或Br。同時’對R3和RTiffi言’式（I)、（II)和（ III)化合物中，其各分別獨立’而較佳之適合的胺基酸是 Ala、Gin、Lys、Ai.g、和Phe’ 而最佳的是 Ala、Gin和Lys。 (婧先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- 訂 0 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製 本紙张尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -56- 2' 4 3 4 A8B8C8D8 六、申請專利範圍 附件-（A ) m ν ;π -屮\m ^ I —‘ — 一一-----一 :第8 7 1 Ο 7 7 1 號專利申請案 中文申請專利範圍修正本 民國89年12月呈

   1. 一種下式所示之化合物：

   〇 其中 R1，R 2，R;及 R 4 係 Η ;及 其立體異構物、鏡像異構物和藥學上可接受之鹽 2. 一種.下式所不之化合物： 裝--------訂---------線 (請先M讀背面之注意事碩再墣寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣

   R, 0 ^ 0 其中 X係I 、 Br 、 C1或 F ; Ri，R2, R;及 R·)係 H;及 其立體異構物、鏡像異構物和藥學上可接受之鹽 3 . —種下式所示之化合物： 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）