TW397812B

TW397812B - Bicyclic isothiourea derivatives useful in therapy

Info

Publication number: TW397812B
Application number: TW085100971A
Authority: TW
Inventors: James Macdonald
Original assignee: Astra Ab
Priority date: 1995-02-11
Filing date: 1996-01-26
Publication date: 2000-07-11
Also published as: DE69606165D1; IS4528A; HUP9801363A2; EP0808307A1; IL116966A; NZ301831A; US5786364A; FI973273A0; AU699546B2; AR002961A1; PL321741A1; EE9700168A; EP0808307B1; HUP9801363A3; ES2143181T3; FI973273A; WO1996024588A1; GR3033135T3; NO973614L; DE69606165T2

Description

經濟部中央揉準局貝工消費合作社印裝 Α7 Β7 五'發明説明（1 ) 本發明係關於一種新穎化合物，其製法，含此等化合物的組合物及其作爲神經保護劑的用途。過去曾有人述及硫脲及異硫脲在各種醫療上的用途。 W0 94/12165 (Wellcome)敘述用於治療系統性低血壓，腺毒性休克，及發炎等的簡單的異硫脲衍生物；w〇 95/〇9619 (Wellcome)(公佈於此申請案曰期後）敎述用於治療大腦局部缺血的脲及異硫脲衍生物；英國專利n78242 號（Wellcome)揭示具抗炎活性的雙異硫脲；歐洲專利申請案411615號（Warner Lambert)揭示用於治療識別衰退症狀的硫脲衍生物；歐洲專利申請案392802號（Beecham)揭示用於治療氣管、腦血管或神經性障礙的硫脲衍生物。異硫脉衍生物也是已知的製備抓衍生物的中間體（見揭示4-二甲基胺基苯基甲脒基硫代酸甲基酯的美國專利 4,211，867 (McNeil Laboratories)及 Synthesis (1988) 6, 460-466 (Rasmussen)及美國專利 5,223,498號（Boots)。 DE-B-1157626 (Hoechst)揭示用作結核菌抑制劑的N-烷氧基苯基-Ν'-峻琳基-硫腸。國際專利申請案WO 95/〇5363·(Fisons)(公佈於此申請案曰期後）揭示適用於治療神經變性疾病等的N_苯基脒衍生物。發明人等已發現一種新的有用的異硫脲衍生物。根據本發明，提挺一種式I化合物

D-S 4- 本紙張尺度適用ΐ國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公羡 ----------- I - (請先聞讀背面之注意事項再填寫本I) 訂經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（2 ) 其中 D代表1至6個碳原子的烷基； T代表以-(CH2)m-NXY取代的飽和的或不飽和的C3_5伸烷基鏈；以-(CH2)m-NXY取代的-0-(CH2)rNH ;或-U-(CH2)a-N(X)-(CH2)b-； U代表NH，Ο或CH2 ; a及b可相同或相異，於a+b在1至3的範圍内時，代表0至3 的整數； X及Y可相同或相異，代表氫，1至6個碳原子的烷基，或 -(CH2)nQ基團，或NXY共同代表六氫吡啶基，吡咯啶基，嗎啉基，或四氫異喹啉基； Q代表苯基或有一或多個選自包括1至6個碳原子的烷基、 1至6個碳原子的烷氧基、三氟甲基、鹵素、硝基及氰基的取代基取代的苯基； m及η各獨立代表0至5的整數；及其醫藥上可接受的鹽。發明人等喜愛Τ代表-U-(CH2)a-N(X)-(CH2)b-。發明人等特別喜愛T代表-U-(CH2)a-N(X)-(CH2)b-而U代表CH2。發明人等尤其喜愛T代表-U-(CH2)a-N(X)-(CH2)b-，U代表（：112而a及 b代表1。發明人等喜愛D代表1至3個碳原子的烷基，特別是甲基或乙基，尤其是乙基。在T代表-U-(CH2)a-N(X)-(CH2)b-時，發明人等喜愛X代表 -5- 本紙張又度適用中國國家標準（CNS )八4^格（2丨0X2?7公釐） ---------f 裝------訂 ('請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) A7 B7 經濟部中央搮準局員工消費合作社印裝五、發明説明（3 ) 氫’甲基或-CH2Q基團。在T代表由_(CH2)m_NXY取代的C35飽和的或不飽和的伸，基或由-(CHdm-NXY取代的-CKCH2)rNH_時，發明人等喜愛X及Y獨立代表氫，甲基或_CH2Q基囷，但乂及γ都代表-CHW時則不佳。發明人等特別喜愛χ&γ之一代表氫或甲基’而另一個代表_ch2q。發明人等喜愛η代表1。發明人等喜愛Q代表苯基或由選自包括1至6個碳原子的垸基、二氟甲基、画素、硝基或氰基的取代基取代的苯基〇根據本發明’提供一種製備式I化合物及其醫藥上可接受的鹽的方法，此法包括： (a) 以對應於式1然其X或X及Y之一代表氫的化合物與式 π化合物反應， I^-L II 式II中R1代表1至6個碳原子的烷基或基團，L是離去基’製成式I化合物’其中X或至少X及γ之一代表1至6 個碳原子的烷基或_(CH2)nQ基團，或 (b) 以T代表由（CH2)m-L取代的（：3_5飽和的或不飽和的伸烷基鏈或由-(CH2)m-L取代的-〇-(CH2)2-NH- (L代表離去基）的對應的化合物與式ΠΙ化合物 ΧΥΝΗ III 其中X及Y之定義如前述，製成T代表由-(CH^fNXY取代的c3_5飽和的或不飽和的伸 -t)- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公楚 — -- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -訂 Λ 經濟部中央標隼局員工消費仓作社印製 A7 B7 五、發明説明（4 ) 烷基鏈或由-(CH2)m-NXY取代的·0-(ί：Η2)2·ΝΗ-的式I化合物，或 (c ) 或以式IV化合物

<0^ IV νη2 其中Τ之定義如前述，與式V化合物反應

D-L V 其中D之定義如前述，L是離去基，在需要或必要時再將所得化合物轉化成醫藥上可接受的鹽，或反之亦然。於方法（a)及（b)中，反應可在標準條件下進行，例如以二物質在惰性溶劑内在鹼性條件下於室溫反應達12小時。發明人等時常發現，在與另一化合物反應前需將胺以NaH 處理。合適的離去基包括硫烷基，磺酸，三氟碳磺酸，鹵素化物，烷基及芳基醇，及甲苯磺醯基；其他離去基見 'Advanced Organic Chemistry', J. March (1985) 3rd Edition, McGraw-Hill，頁315，這都是此技藝熟知的。發明人等喜愛L代表南素化物，特別是漠化物。於方法（c)中，此反應可合併二反應物於惰性溶劑，如丙酮内進行。合適的離去劑L可代表包括硫烷基，磺酸，三氟碳磺酸，函素化物，烷基及芳基醇，及甲苯磺醯基；其他離去基見'Advanced Organic Chemistry’，J. March (1985) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4说格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •裝.

、1T A7 B7 經濟部中央橾率局負工消费合作社印装五、發明説明（5 ) 3rd Edition，McGraw-Hill，頁315，這都是此技藝熟知的。發明人等喜愛用碘化物，甲苯磺酸酯或甲烷磺酸酯衍生物〇式（IV)化合物可依 Rsamussen等於 Synthesis (1988) 456-459 所述方法製備。式ΠΙ化合物可以式VI化合物 Η 2 VI 其中Τ之定義如前述，與異硫氰酸苯曱醯酯反應再使所得苯甲醯基硫脲衍生物行鹼性裂解製備。式VI化合物可用對應的式VII化合物還原製備丁（ Η-Ν 0 2 V I I 其中Τ之定義如前述。此還原反應可在數種條件下完成，例如J March "Advanced Organic Chemistry” 3rd Edition (1985)頁1103-1104 所述方法。此等方法包括催化氫化，使用Zn，Sn或Fe金屬，A1H3-A1C13，硫化物等。發明人等喜愛在大氣壓下於有鈀/碳催化劑之存在下進行1-4小時或至還原完全進行還原反應。式VII化合物，其T之定義如前述，而X或至少X及Y之一代表1至6個碳原子的烷基或-(CH2)nQ基團，可用X及/或Y 代表氫的對應的式VII化合物與式Π化合物反應製備。 -8- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •裝· 訂尺度適用中國國家標準(CNS ) A4规格（210X297公嫠）經濟部中央樣準局負工消費合作社印装 A7 B7 五、發明説明（6 ) 此反應可在類似前述（a)方法之條件下進行。式VII化合物，其中T代表以-(CH^-NXY取代的C3_5飽和的或飽和的伸烷基鏈或以-(CH2)m-NXY取代的-〇-(CH2；)2-NH- ’可以T代表以_(CH2)m-L取代的¢3-5飽和的或飽和伸燒基鏈或以-(CHJm-L取代的-0-(CH2)2-NH-的對應的化合物（l 代表離去基）與式ΠΙ化合物反應製備。此反應可在類似前述（b)方法之條件下進行。式VII化合物是已知的或是可用已知方法製備的。例如，可用未硝化的衍生物硝化製備。此硝化反應傳統上是以未硝化的芳香族化合物單獨用硝酸或在水、醋酸、醋酸肝或硫酸用硝酸進行。其他此反應的詳情及其他試劑見】

March於"Advanced Organic Chemistry" 3rd Edition (1985)頁 468-470所述式II、III及V化合物是已知的或是可用已知方法製備的〇式I化合物可以製備成前述的式];化合物形式，或製成前述形式的酸加成鹽。或者也可製成非醫藥上接受的加成鹽，例如草酸鹽，再以傳統方法將其此類產物轉化成醫藥上可接受的鹽。式I化合物的鹽可以酸、鹼或其鹽與—或多當量的合適的鹼或酸反應製備。反應可於鹽不溶解其中的溶劑或介質内進行，或於鹽可溶解其中的溶劑内進行，如水，二0号严，乙醇，四氫呋喃或乙醚或此等溶劑混合物内進行，此等溶劑可於眞线衫除去。此反應可爲Μ法，也可於離 -9 各紙張从獅中關家辟（CNS )1ϋϋ：( 210X297/^ (請先閏讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝訂 Α7 Β7 經濟部中央橾準局員工消費合作社印製五、發明説明（7 ) 子交換樹脂上進行。必要時，胺或其他反應基團可用保護基保護，此等保護基見於標準敎科書"Protecting groups in Organic Synthesis11， 2nd Edition (1991) by Greene and Wuts。此處可特別提出的胺基保護基包括有2至7個碳原子的烷氧羰基，如t· 丁氧羰基’有8至13個碳原子的苯基烷氧羰基，如苄氧羰基。但較佳是在合適的溶劑（如二氣甲烷，甲醇）内於室溫以三氟醋酸酐處理以保護胺基。去保護可於水内藉水解完成。本發明化合物及中間體可用標準技術由反應混合物中分離。 ” 1至6個碳原子的烷基"一詞包括含有1至6個碳原子的直鏈、支鏈、飽和的、不飽和的脂肪族及環形烷基^ "丨至3 個碳原子的烷基”一詞也可這樣解釋。式I化合物可以對映體形式存在。各種光學異構物可以傳統技術，例如分別結晶或HPLC，使化合物的外消旋混合物分離分開。或者，各別的對映體也可用合適的光學活性起始物在不引起外消旋的條件下反應製備。中間體化合物也可以對映體形式存在，可以其純代的對映體、非鏡像立體異構物、外消旋鹽或混合物使用。式I化合物於動物具有用的醫藥活性。特別是具氧化— 氮合成酶抑制活性，可期望使用於人類各種因氧化—氮的合成或過度合成引起的疾病或症狀的治療或預防；例如，' 缺氧，如心跳停止、中風、及新生兒缺氧，神經變性=病包括局郅缺氧、缺氧、血糖過低、癲癎引起的神經變性二二--—-------- - - 10 - 張適用中國國冬標準（CNS ) 2獻別公瘦）

MfMi HH II . - -*i _ I---------f 袭-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 經濟部中央橾隼局貝工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（8 ) /或神經壞死，外傷（如脊髓及頭部傷害），高壓氧痙攣及中毒，癡呆如老年性癡呆，阿滋海默氏病及與愛滋病有關的癡呆，Sydenham氏舞蹈病，巴金森氏病，Humingt〇n氏病 ’肌萎縮性側索硬化，Korsakoff氏病，與腦血管障礙有關的愚癡，睡眠障礙，精神分裂，焦慮，抑鬱，受季節影響的疾病’ jet-lag，經前症候群（PMS)伴生的抑鬱或其他症狀，焦慮及膿毒性休克。在鴉片製劑及苯曱二氮革類藥物耐量的減輕或預防上，在藥物成癮的治療上，在減輕疼痛及在治療偏頭痛及其他血管性頭痛的治療上，式j化合物也可期望展7F其活性。本發明化合物也顯示有用的免疫抑制活性，可用以治療或預防發炎，用以治療胃腸蠕動障礙，並可用以引導分娩。此等化合物也可用於展現氧化一氮合成酶的癌的治療。式I化合物可期望用於在神經變性疾病或偏頭痛的治療與預防上，或用於鴉片製劑及苯甲二氮革類藥物耐量的減輕上，或用於藥物成癮的治療上，特別是用於神經變性疾病的治療及預防止。發明人等特別對選自缺氧，局部缺氧 ’中風，及肌萎縮性側索硬化的疾病有興趣。是以，根據本發明的又一方面，發明人等提供式J化合物或其醫藥上可接受的鹽的用途，在製造治療或預防前述疾病的藥物上的用途；以及治療或預防前述疾病的方法，此法包括給予患有或疑似有此等疾病的病人治療有效量的式I化合物或其醫藥上可接受的鹽。使用於上述適應症時，給予劑量自然隨所用化合物、给 11 - 本紙張纽適用中關家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐f ------- n --- ™I I (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

，1T 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 A7 s·----—B7 五、發明説明（7~i '— 方式及所需治療而變。但一般而言，此化合物每天给予人類1毫克至2000毫克的每日劑量時會獲得令人滿意的故果。式1化合物及其醫藥上可接受的鹽可以其原來形式或合適的製備形式作經腸或非經腸給予。根據本發明，提供一種醫藥組合物，此組合物較佳含有少於8〇%，更佳是少50%的式I化合物，或其醫藥上可接受的鹽’及醫藥上可接受的稀釋劑或載劑的混合物。發明人等也提供此等醫藥調配物的製備方法，此方法包括混合諸成分。此類稀釋劑及載劑的例是：用於錠劑及糖錠劑的是：乳糖 ’澱粉’滑石粉，硬脂酸；用於膠囊的是：酒石酸和乳糖 :用於可注射溶液的是：水，醇。甘油，植物油；用於塞劑的是：天然或硬化油或蠟。適於經口，即經食道給予的組合物的形式包括：錠劑，膠囊及糖錠劑；長時釋出的組合物包括活性成分結合於離子交換樹脂上的組合物，此種樹脂視需要以擴散障礙劑作塗覆，以改良樹脂的釋出性質。發明人等較喜愛組合物含達50%，更佳是達25重量°/〇的式I化合物，或其醫藥上可接受的鹽。氧化一氮合成酶有數種異構物，式I化合物，及其醫藥上可接受的鹽，之氧化一氮合成酶抑制活性可根據Bredt and Snyder於 Proc. Natl. Acad. Sci. (1990) 87, 682-685所述方法及Forstermann等於Eur. J. Pharm. (1992) 225, 161-165所 -12 本紙張尺&遥用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝-

•1T 經濟部中央揉隼局員工消費合作社印褽 A7 _____B7 五、發明説明（1〇 ) 述方法篩選。氧化一氮合成酶將3h-l-精胺酸轉化成3h-l-瓜胺酸，此瓜胺酸可用陽離子交換色譜分析分離並以閃爍計數定量。

篩選A (A)神經原氧化一氮合成酶抑制活性之篩選由鼠海馬或小腦分離出酶。用C02使雄性Sprague-Dawley 鼠（250-275克）麻醉，行斷頭術，取下小腦或海馬《於50 mM的有 1 mM EDTA緩衝液的 Tris-HCl (pH 7.2，25°C 時）内均質化，並以20,000 g (重力）離心15分鐘製成小腦或海馬上清液。以色譜分析法相繼用Dowex AG-50W-X8鈉形及氫形柱由上清液分出殘餘之L-精胺酸，再以1000 g離心30秒〇鑑定時，於22°C將25微升終上清液加於96個凹（96凹過濾碟的）的每一凹内，凹内含25微升精胺酸溶液（濃度爲18#M ^-L-精胺酸，96 nM 3H-L-精胺酸）及25微升鑑定緩衝液（50 瓜]^[11£?£8，1111]^£0丁八，1.5 1111^€3(：12，？117.4)或及25微升緩衝液内的試驗化合物〇於每一試管中加25微升完全鑑定緩衝液（50 mM HEPES，1 mM EDTA，1_5 mM CaCl2，1 mMDTT，100パMNADPH，10微克鈣調蛋白，pH7.4)引發反應，10分鐘後加200微升終止緩衝液泥樣物（20 mM HEPES， 2 mM EDTA，pH5.5)&DowexAG-50W-X8 200- 400篩目使反應停止。過濾每一過濾碟由作了標記的L-精胺酸分離出作了標記的L-瓜胺酸，將每一終止反應液75微升加於3毫升閃爍混 _ -13- 本紙诔尺度適用中國國家榇準（CNS ) M規格（210X 297公沒·) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝. 訂經濟部中央橾準局員工消费合作社印製 Α7 Β7 五、發明説明（11 ) 合液内。然後以閃爍計數定量L·瓜胺酸。於使用小腦上清液的典型實驗中，樣品之基礎活性增加至2〇,〇00 dpm/毫升，而純試劑之活性只爲7,〇〇〇 dpm/毫升。鑑定中也試驗對照標準N-硝基_L·精胺酸（此N_硝基-L-精胺酸濃度爲1 時抑制80%的氧化一氮合成酶）以確證此過程。

篩選B (B)可謗導的氧化一氮合成酶抑制活性之篩選經謗導後，由培養的人結腸直腸癌細胞系DLD-1 (取自

European Collection of Animal Cell Cultures)製得酶，將 DLD-1細胞於加有胎牛血清’ AmML-精胺酸及抗生素 (100單位/毫升青黴素<3，100微克/毫升鏈黴素及〇 25微克/ 毫升兩性黴素B)及1〇〇微克/毫升卡那黴素的rPMi 164〇的培養基内培養。將細胞以常規種於225立方公分的含有35 毫升培氧質的燒瓶内，於37°C及潮濕的含5% (：02的大氣下生長。細胞因受干擾素的250單位/毫升IL-1，1000單位/毫升IFN r，200單位/毫升il-6及200單位/毫升THF-α之刺激而生產氧化一氮合成酶。培養17-20小時後，由燒瓶表面刮下細胞層收取細胞入培養基内。離心（1000 g，10分鐘）集中細胞，於此細胞丸内加含有50 mM Tris-HCl (pH 7·5，2(TC ) ’ 10%(重量/重量）甘油，0.1%(重量/重量）Tritox-X-100， 0.1 μ Μ二硫蘇糖醇及含亮抑蛋白酶肽（2微克/毫升）的蛋白酶抑制劑的混合物，大豆胰蛋白酶抑制劑（1〇微克/毫升）， -14 - 本紙張尺度適用中國罔家標準（CNS } Α4規格（210Χ297公釐） I I.~ : I! ( - II I 訂 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（12 ) 抑蛋白酶肽（5微克/毫升）及苯基甲基磺醢氟（50微克/毫升）之溶液製成裂解物。鑑定時，將25微升基質混合物（50mM Tris-HCl (pH 7,5， 20°C)，400//MNADPH，20//M黃素腺嘌呤二核甞酸，20// Μ黃素單核苷酸，Μ四氫生物蝶呤，12 "M L-精胺酸及 0.025微居里L-[3H]精胺酸）之混合物加於96凹過濾碟（孔大小0.45微米）之凹内，凹内含25微升試驗化合物於50 mM Tris-HCl内之溶液。加50微升細胞裂解物（如上所製備）使反應開始，於室溫培養1小時後，加50微升3 mM硝基精胺酸及21 mM EDTA之水溶液使反應停止。用Dowex入G-50W由作了標記的L-精胺酸分出作了標記的L-瓜胺酸。鑑定物内加150微升25%的Dowex 50W (Na+形）泥樣狀，將全部混合物過濾入96個凹碟内。取樣70微升濾過物，加於含固體閃爍體的96個凹碟之凹内。待樣品乾燥後以閃爍記數定量L-瓜胺酸。於典型實驗中，基礎活性爲每70微生樣品300 dpm，於試劑對照增爲1900 dpm。胺基胍之IC5〇 (抑制50%的濃度）爲10#M，以此作爲標準確證此過程。

篩選C (C)内皮細胞氧化一氮合成酶抑制活性之篩選依 Pollock等（1991)發表於 Proc. Nat· Acad. Sci·，88, 10480-1CM84之方法由人類臍靜脈内皮細胞（HUVECs)分離出酶。 HUVECs係賭自 Clonetics Corp (San Diego, CA，USA)並培養至聚集。細胞可維持至35-40傳代而無明顯的產生氧化一 -15- 本紙張又度適用中國國家榡準（CNS ) A4& ( 210X297公釐i (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •裝_

.IT 經濟部中央橾準局貝工消費合作社印製 A7 B7 五、發明说明（13 ) 氮合成酶的損失。在細胞達聚集時，將細胞再懸浮於 DulbeCco氏磷酸鹽緩衝的食鹽水内，以800轉/分鐘離心10 分鐘，將細胞小丸在冰冷的50 mM Tris-HCl，1 mM EDTA ，10%甘油，1 mM苯甲基續酷氟，2 mM亮抑蛋白酶肽内均質化。再以34,000轉/分鐘離心60分鐘後，將小丸溶於均質化的緩衝液内，此緩衝液也含20 mM的CHAPS。於冰上培養30分鐘後，將懸浮液以34,000轉/分鐘離心30分鐘。將所得上清液存於-80°C待用。鑑定時，於22°C將25微升終上清液加於96個凹碟的每一凹内，凹内含25微升L-精胺酸溶液（濃度爲12#M 3H-L-精胺酸，64 nM 3H-L-精胺酸）及25微升鑑定缓衝液（50 mM HEPES » 1 mM EDTA » 1.5 mM CaCl2 » pH 7.4)^, A 25^ ^ 衝液内的試驗化合物。於每一凹内加25微升完全鑑定液 (50 mM HEPES，1 mM EDTA，1.5 mM CaCl2，1 mM DTT， 100"ΜΝΑϋΡΙί，10微克/毫升鈣調蛋白，四氫生物蠛呤，pH 7.4)引發反應，30分鐘後加200微升50%的終止緩衝液泥樣物（20 mM HEPES，2 mM EDTA，pH 5.5)及 Dowex AG-50W-X8 200-400篩目使反應停止。由作了標記的L-精胺酸過濾分離出作了標記的L-瓜胺酸入另一 96凹碟内，加75微升每種終反應物於3毫升閃爍混合物内。然後以閃爍計數定量L-瓜胺酸。於典型實驗中，樣品的基礎活性增加5,000 dpm/毫升，較單純的試劑的活性1500 dpm/毫升爲高。此鑑定用對照標準N-硝基-L-精胺酸確定，N-硝基-L-精胺在濃度爲1 -16 本紙張尺度適用中國國家祿準（) A4^，格（21〇X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) •裝. 訂經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（14 ) ' : 〜時對氧化t合成酶的抑制爲州。此等化合物也可作活體外試驗以測定其腦浸透強度。

荈選D (D)神經原氧化—氮合成酶抑制活性之活體外鑑定將試驗化合物溶於09%生理食鹽水内，以1〇毫克/公斤的劑量靜脈内給予雄性Sprague_Dawley鼠（25〇_275克），或八给予生理食鹽水作爲對照。治療後於預設時間（一般是 2-24小時）將動物殺死，移除小腦，如篩選A製備上清液並鑑定氧化一氮合成酶活性。作爲進一步確定試驗’將一部分小腦上清液施於2,_5,_ ADP瓊脂糖凝膠柱（結合有氧化一氮合成酶），再

用 NADPH 洗離。洗離液用篩選A方法試驗氧化一氮合成酶活性。上清液製劑及2，-5，-ADP瓊脂糖凝膠柱洗離液都顯示浸透鼠腦並抑制神經原氧化一氮合成酶的化合物減少氧化一氮合成酶活性。於上述氧化一氮合成酶抑制活性的篩選中，化合物活性以1<：5〇 (鑑定中使50%的酶受抑制的藥物濃度）表示。試驗化合物的1(：5〇値開始由化合物的1，1〇及100 "μ的漠度的抑制活性評估。於10 "M的濃度抑制至少50%的酶的化合物，再用更合適的濃度重試以測定IC50。於上述篩選A(對抗氧化一氮合成酶的神經原同種型的活性的篩選）中’下述實例1化合物之κ：5〇値小於1〇//M，此顯示可期望有有用的治療活性。於篩選B及C (對抗氧化一氮合成酶的大呑噬細胞及内皮細胞同種型的活性的筛選） -17- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）

In. I I I Hu !-1 1_^I -! I . · (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 A7 B7 經濟部中央揉隼局員工消費合作社印製五、發明説明（15 ) 中，實例1化合物的IC5〇値大於篩選A所得者1〇倍以上，顯示有所需選擇性。實例2化合物也以篩選八作試驗，所得lc如値也小於ι〇^Μ 。此化合物也可期望有有用的治療活性。與前此技藝的化合物比較，式合物及其醫藥上可接受的鹽具有毒性低、更有效、作用時間長、活性範圍廣、藥效更強、對氧化一氮合成酶的神經原統種型更去選擇性、副作用較少、更易吸收及具其他有用的醫藥性質的優點〇今以下述實例説明本發明，但此等實例決非限制本發明〇實例1

Ul，2,3,4-四氫異喹淋-7-基）甲脒基硫代酸乙基酯 ⑷2二(7-胺基-1，2,3,4·四氫異喹啉）2,2,2-三氟乙醯胺於4.21克（23.6毫莫耳）7-硝基-1，2,3,4-四氫異喹啉及3 6毫升（926¾莫耳）二乙基胺於1〇〇毫升二氣甲烷内之溶液中於〇 °(：加3.5毫升（25毫莫耳）三氟醋酸酐》將此混合物攪拌過夜。反應混合物用稀鹽酸萃取。將水相鹼化並用二氣甲烷萃取。乾燥有機相製得N-(7-硝基-1，2,3,4-四氫異喹啉）三氟乙醯胺’爲黃色固體。將此化合物立即溶於200毫升乙醇内 ’加0.50克5%的赵/碳，此混合物於Parr氫化器上於45镑/ 英吋2下氫化1.5小時。過濾移除催化劑，蒸發溶劑。殘餘物用1〇〇毫升石油醚研磨，製得么標題化合物，爲灰色固體，熔點61-3°C。 13 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） --------人威-------1T------/ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央橾準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（16 ) (b) U，3，4-四氫異4 n林_7-硫脉於1.3毫升（9.7毫莫耳）異硫氰酸苯甲醯酯與丙酮内之溶液中於回流迅速加1.25克（5.12毫莫耳）2-(7-胺基-1，2,3,4-四氫異喹啉）三氟乙醯胺，加的速度可控制回流。加完後，將反應混合物攪拌3小時。冷卻後收取固體，用30毫升丙酮洗，製得1.74克（83%)中間體1-苯甲醯基-3-[2-(2,2,2-三氟乙醯胺）1,2,3,4-四氫異喹啦_7_硫脲，爲灰白色固體。將此化合物立即加於20毫升5%的氫氧化鈉溶液中，所得溶液於 8(TC加熱1小時。冷至週邊溫度後，將溶液過濾，製得 0.78克（74%)標題化合物，熔點198-203°C。 ⑷ N-(l，2,3,4-四氫異喹啉-7-基）甲脒基硫代酸乙基酯於0.75克（3.61毫莫耳）1，2,3,4-四氫異4啉-7-硫脲於10毫升異丙醇内之懸浮液中加2毫升異丙醇内之0.35克（3.7毫莫耳）甲烷磺酸。將此反應混合物攪拌0.25,j、時，然後加0.85 毫升（8_4毫莫耳）甲烷磺酸乙酯。此反應混合物於回流加熱 4小時。眞空汽提去溶劑，得油體，將之溶於100毫升水内。用飽和碳酸氫鈉使水性成絵性，再將水相用1〇〇毫升二氣甲烷萃取8次。合併之萃取物於硫酸鎂上乾燥並濃縮，製得0_61克油體，靜置至成固體。於二氧化硬膠上作柱色層分析，用10%甲醇於氣仿内並以氨飽和的溶液洗離，製得標題北，合物，爲白色固體，MS 236 (M+H) 〇實例2 N-5-(2-(((3-氣苯基）甲基）（甲基）胺基）雖滿基）甲肤農硫代酸 -19- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝. 訂本紙張尺度通用中國國家梯準（€從）八4«^(210乂297公釐） A7 B7 五、發明説明（17 ) -- A基醋 ⑷ 苯基）羰基）胺基-5-硝某於二氯甲烷（50毫升）内之2-胺基-5-确基莽滿鹽酸鹽（15 克，7_0毫莫耳）中於〇。(：加三乙基胺（21毫升，15〇毫莫耳），再加3-氣苯甲醯氣（1.〇毫升，7.5毫莫耳）。將此混合物立即倒入水内，分開各層。水層用二氣甲烷（2 χ 2〇毫升）萃取’合併之萃取物用水洗，於MgS〇4上乾燥，過遽，滚縮成油體，以TLC (薄層色譜分析）均質化，立即用於下一步驟:M.S. (M+H)+=317。 (b) 2-((3-氣笨基）甲基）胺基-5-硝基茚滿於THF (75毫升）内之2-((3-氣苯基）羰基）胺基_5_硝基節滿 (2.2克’7.0毫莫耳）中滴加8113.丁1^(1.014，35毫升，35毫莫耳）。將此混合物回流12小時，冷至〇°C，用4當量的HC1 (60毫升）停止反應，再回流1小時。所得溶液蒸發成油體，用50%的NaOH鹼化，再用二氣甲烷（3 X 20毫升）萃取。合併之萃取物用水洗，於MgS04上乾燥，過濾，濃縮成油體。用IP A/HC1處理，製得2-((3-氣苯基）甲基）胺基_6_硝基茚滿：（2.1 克，88% 二步驟）；熔點 234-237°C。 (c) 2-((3-氣苯基）甲基）（甲基）胺基-5-硝基茚滿經濟部中央橾準局負工消費合作社印製 ^ .裝訂 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 於甲酸（5.5毫升）内之2-((3-氣苯基）甲基）胺基-5-硝基茚滿 (4.4克，14.5毫莫耳）中加甲醛（12毫升）。將此混合物加熱至回流30分鐘，冷卻，用2當量的NaOH中和，用醋酸乙酯 (3 X 70毫升）萃取。合併之萃取物用水洗，於MgS04上乾燥，過濾，濃縮成油體：（4.2克，91%) ; M.S. (M+H)+=317， -20- 本紙張尺度遄用中國國家標準（CNS ) A4说格（210X297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A 7 __ B7 五、發明説明（18 ) ⑷ 2-((3-氩笨基1甲基甲基）胺基-5-胺基苽於85 %Ac0H/H20 (100毫升）内之2-((3-氯苯基）甲基）（甲基) 胺基-5-硝基茚滿（4.3克，13.6毫莫耳）中加鋅金屬（7.1克， 109,0毫莫耳）。將此混合物攪拌5小時，用矽藻土過濾，蒸發成油體。將此油體倒入鹼性水内，用醋酸乙酯（3 X 100 毫升）萃取。合併之萃取物用水洗，於MgS04上乾燥，過濾，濃縮成油體：（3.6克，92%) ; M.S. (M+H)+=287 〇 (e) 5-(2-((3-氪笨基）甲基）（甲基）胺基）gf滿基）-1-笨甲醯基 -2-硫脲於異硫氰酸苯甲醯酯（2.7克，16.5毫莫耳）於15毫升無水丙酮内之以加熱至輕度回流之溶液中，迅速加溶於10毫升無水丙酮内之2-((3-氯苯基）甲基）（甲基）胺基-5-胺基苯（3.6 克，12.4毫莫耳），加入速度能控制強烈回流《將此反應混合物回流30分鐘，在攪拌下倒於冰上，用醋酸乙酯（3 X 100毫升）萃取。合併之萃取物用水洗，於]^^504上乾燥，過濾，濃縮成固體，再用IPA重結晶：（3.12克，58%);熔點 128-130。。。 (f) 5-(2-(((3-氣苯基）甲基）（甲基）胺基）茚滿基）-2-硫脲將5-(2-(((3-氣苯基）甲基）（甲基）胺基）茚滿基）-1_苯甲醯基 -2-硫脲（3.1克，7.12毫莫耳）及40毫升2.5當量的氫氧化鈉水溶液之混合物於90°C加熱3 5分鐘，同時授拌。將溫反應混合物倒入60毫升水内，同時攪拌。此產物用二氣甲烷萃取成三部分。合併之萃取物用水洗，於MgS04上乾燥，濃縮至乾。殘餘物於二氧化矽膠上作色層分析（8:1醋酸乙酯/己 -21 - 本纸張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公董） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) .裝

.1T 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 A7 _____ B7 _ 五、發明説明（19 ) 烷）並濃縮成油體：（2.2克，93%) ; M.S. (M+H)+=246。 (g) N-5-(2-(((3-氣苯基）甲基K甲基）胺基）茚滿基）甲脒某硫代酸，乙基酯將5-(2-(((3-氣苯基）曱基）（甲基）胺基）茚滿基）-2-硫脲（2.2 克’ 6.33毫莫耳）懸浮於20宅升之200乙醇内，此混合物再以0·41毫升甲烷磺酸及nl.35毫升甲烷磺酸乙酯處理。將此混合物回流4小時，用飽和碳酸氫鹽使成鹼性，用二氣曱烷（3 X 30毫升）萃取》合併之萃取物用水洗，於MgS04 上乾燥，過濾，濃縮成油體，再將此油體溶於醋酸乙酯内，用IPA/HC1處理。過濾固體，用IPA洗：（2.40克，83%); 熔點分解>15(TC。實例3 N-(2-甲基-1,2,3,4-四氫異4淋-7-基）甲脒基硫代酸乙基酯二鹽酸鹽 ⑷ 7-硝基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喳啉鹽酸鹽將4.00克（18.7毫莫耳）7-硝基異喹啉於1〇毫升甲酸及17毫升3 8%的甲醛水溶液内之溶液於回流加熱j小時。將反應混合物冷卻’倒於冰上，用氨水溶液鹼化。沉澱出之膠樣殘餘物用二氣甲烷萃取二次。將乾燥（硫酸鎂）過的有機相濃縮，得粗製7-硝基-2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉，爲粘稠油體。將此油體立即溶於乙醇（50毫升）内，加鹽酸於乙醇内之溶液至溶液以石蕊試紙試驗呈明顯酸性。加醚引發沉殿，收取形成之固體，得3.99克（93%)標題化合物，爲黃色固體’熔點236-8。(：（分解 -22- nlln—^ .裝 II II II 訂 •- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家梯率（CNS ) A4规格（210 X297公釐） A7 B7 經濟部中央揉隼局負工消費合作社印製五、發明説明（2〇 ) (b) 7-胺基-2-甲基-1，2.3,4-四氫異<4·*林鹽酸輮將3.98克（17.5毫莫耳）7·硝基-2_甲基_1 2 3 4_四氫異喹啉鹽酸鹽及0.4克鈀/碳於200毫升乙醇内之懸浮液於5〇磅/英对2下氫化2小時。過濾催化劑，用少量水洗。將濾過物濃縮得水相。加純乙醇並蒸發去過量的水至形成固體。將此固體溶於熱乙醇（60毫升）内，緩慢加醚引發結晶。收取產物得3.38克（97%)標題化合物，爲灰白色固體，溶點114_9SC。 ⑷ 2-甲基-1，2,3,4-四氫異喹啉_7·硫脲將3_88克（19.5寬莫耳）7-胺基-2-甲基_1，2,3,4-四氫異4琳鹽酸鹽於100毫升水内之溶液用碳酸鉀溶液變成鹼性，用二氯甲烷萃取二次。將經乾燥（硫酸鎂）過的有機相濃縮，製得3 · 13克（99%)游離態的鹼，爲油體。將此油體溶於丙酮（75毫升）内，加於1〇〇毫升丙酮内的2 21克（19 4毫莫耳）二氟醋酸。將此溶液加熱至回流，同時滴加5.2毫升（3 9毫莫耳）異硫氰酸芊酯。再將反應混合物加熱1小時，然後冷卻至週邊溫度。眞空蒸發去溶劑，將所得油體溶於曱醇 (150毫升）及2.5M的氫氧化鈉（5〇毫升）内。此溶液於65。(：加熱1小時’然後冷卻至週邊溫度。眞空氣提去甲醇，再將水溶液冷卻結晶出產物。收取固體，得2 22克標題化合物，爲淺黃色固體，熔點184-6°C。也收獲第二批標題化合物（0.79克，總產出率69%)。 ⑷卜甲基-1，2,3〆-四氫異4啉-7-基）甲脒基硫代酸乙基酯二鹽酸鹽 -23- 冬纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ---—mi--^ 裝— — *· (請先閣讀背面之注意事項再填寫本頁) 39T812 A7 ___ ____B7__ 五、發明説明（21 ) 於〇·88克（4.0毫莫耳）2-曱基-1，2,3,4-四氫異喹啉_7_硫脲於 8毫升異丙醇内之懸浮液中加0.39克（3.9毫莫耳）甲烷磺酸。由於鹽及游離態驗不溶於異丙醇’將此溶液回流〇 5小時以確保甲烷磺酸鹽的形成。於此溶液中加1 5毫升（14毫莫耳）甲烷磺酸乙酯並繼續加熱過夜使成澄清溶液。眞空蒸發去溶劑，將所得油體溶於水内，用碳酸鉀鹼化並用二氣甲烷萃取二次。將經乾燥（硫酸鎂）過的有機相濃縮，製得油體。將此油體溶於乙醇内，用乙醇内的鹽酸酸化至以石從試紙試驗爲明顯的酸性。加酸，製得鹽，爲枯性油體。傾出溶劑，油體用醚洗數次。再將油體溶於水（250毫升）内，此溶液以脱色碳處理。將溶液過濾，濾過物用500毫升水稀釋。將溶液凍乾，製得丨〇6克（78%)標題化合物，爲單水合物。MS (CI) 250 (M+H) ; NMR (DMS0/D20) 7.33 (d，lH)，7.21 (d，1H)，7.17 (s，1H)，4.36 (廣 s，2H)，3.0-3.6 (m， 6H)，3.17 (s，3H), 1.30 (t，3H)。實例4 N-(2-甲基-1，2,3,4-四氫異喳啉-7-基）甲脒基硫代酸甲基醋二鹽酸鹽經濟部中央樣準局員工消费合作社印装 ---------IV 裝-- '· (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 於1.00克（4.52毫莫耳）2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-硫脲（實例3步驟（c))於10毫升異丙醇内之懸浮液中加0.44克（4_5 毫莫耳）曱烷磺酸。由於鹽及游離態鹼不溶於異丙醇，將此溶液於週邊溫度攪拌2時以確保甲烷磺酸鹽的形成。於此溶液中加6.7克（47毫莫耳）甲基碘，再將反應混合物攪拌過夜。眞空汽提去溶劑，將所得油體溶於水内，用脱色碳 24- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公董） 387812 A7 B7 五、發明説明（22 處理並過濾，得澄清無色水溶液。此溶液用碳酸鉀鹼化並用一氣甲烷萃取二次。合併有機相，乾燥（硫酸鎂），眞空濃縮，製得1.02克（96%)產物，爲游離態鹼。將此油體溶於乙醇内’用乙醇内的鹽酸酸化至呈明顯酸性。加過量的醚分離出鹽，爲油體。傾出溶劑，油體用醚洗數次。再將油體溶於250毫升水内，再以脱色碳處理。將溶液過濾，遽過物用500毫升水稀釋。將溶液凍乾，製得克標題化合物’爲白色固體。MS (CI) 236 (M+H) NMR (DMS0/D20) 11.6-11.9 (廣，1H)，9.4-9.7 (廣，1H)，7.36 (d，1H)，7.24 (d，1H)， 7.18 (s，1H)，4.2-4.6 (廣m，2H)，3.0-3.7 (廣m，4H)，2.87 (s，3H)， 2.70 (s，3H)。 ---------<-v\.,裝-------訂 0 · (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標隼局貝工消费合作社印製本紙張·尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐）

Claims

公告表第 Π097 1 申請案中文申請專利範圍修正本(88年12月）六申請專利範圍397812

1.. 種式I化合物『〇 —--—I T： KH 0-S 經濟部中央樣隼局員工消費合作社印策其中 D代表1至6個碳原子的烷基； T代表以-(CHJm-NXY取代的飽和的或不飽和的& $伸燒基鏈；或-U-(CH2)a-N(X)-(CH2)b-; 疋 u代表〇或ch2; a及b可相同或相異’於a+b在1至3的範圍内時，代表〇至 3的整數； X及Y可相同或相異，代表氫’ i至6個碳原子的烷基，或 _(CH2)nQ基團，， Q代表視需要經#素取代之竿基； '爪及^各獨立代表1至5的整數；及其醫藥上可接受的鹽。 2_根據申請專利範圍第1項之式j化合物 (CH2)a-N(X)-(CH2)b-。 3·根據申請專利範圍第1項之式J化合物 (CH2)a-N(X)-(CH2)|j-而.U代表 CH2。 4. 根據申請專利範圍第1項之式j化合物 (CH2)a-N(X)-(CH2)b-，U代表 CH2 而 a及 b各代表 1 5. 根據申凊專利範圍第！項之.化合物’其中d代表乙基 6. 根據申請專利範圍第1項之化合物，其為：其中T代表-U. 其中T代表_U- 其中T代表-U- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ,Λ·· 訂公告表第 Π097 1 申請案中文申請專利範圍修正本(88年12月）六申請專利範圍397812

1.. 種式I化合物『〇 —--—I T： KH 0-S 經濟部中央樣隼局員工消費合作社印策其中 D代表1至6個碳原子的烷基； T代表以-(CHJm-NXY取代的飽和的或不飽和的& $伸燒基鏈；或-U-(CH2)a-N(X)-(CH2)b-; 疋 u代表〇或ch2; a及b可相同或相異’於a+b在1至3的範圍内時，代表〇至 3的整數； X及Y可相同或相異，代表氫’ i至6個碳原子的烷基，或 _(CH2)nQ基團，， Q代表視需要經#素取代之竿基； '爪及^各獨立代表1至5的整數；及其醫藥上可接受的鹽。 2_根據申請專利範圍第1項之式j化合物 (CH2)a-N(X)-(CH2)b-。 3·根據申請專利範圍第1項之式J化合物 (CH2)a-N(X)-(CH2)|j-而.U代表 CH2。 4. 根據申請專利範圍第1項之式j化合物 (CH2)a-N(X)-(CH2)b-，U代表 CH2 而 a及 b各代表 1 5. 根據申凊專利範圍第！項之.化合物’其中d代表乙基 6. 根據申請專利範圍第1項之化合物，其為：其中T代表-U. 其中T代表_U- 其中T代表-U- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ,Λ·· 訂 A8 B8 C8 D8 397B12 々、申請專利範圍 .N-(l，2,3,4-四氫異喹啉-7-基）甲脒基硫代酸乙酯； Ν-6-(2-(((3·氯苯基）甲基）（甲基）胺基）茚滿基）甲脒基硫代酸乙酯； Ν-(2-甲基-1，2,3,4-四氫異》奎'•林-7-基）甲脒基硫代酸乙醋； Ν-(2-甲基-1，2,3,4-四氫異ρ奎琳-7-基）甲脒基硫代酸甲酯； Ν-(4-甲基-2,3,4-5 -四氫-1,4 -苯并氨雜環庚三缔_7_基）甲脒基硫代酸乙酯順丁烯二酸鹽；或其醫藥上可接受的鹽。 7. —種用於抑制一氧化氮合成酶及治療或預防神經變性疾病之醫藥組合物，其含有根據申請專利範圍第1項之化合物及與其混合的稀釋劑或載劑。 8，根據申請專利範園第1項之化合物，係用於製造用於治療或預防神經變性疾病或用於預防及逆轉對鸦片製劑及二氮雜革類藥物之耐受性或用於治療藥物成瘾等藥物。 9. 一種製備如根據申請專利範圍第1項所定義之式〗化合物及其醫藥上可接受的鹽的方法，其包括 (a) 由對應於式I，其中X或X及Y之一代表氫的化合物與式ΊΙ化合物反應， R!-L II 式II中R1代表1至6個碳原子的烷基或-(CH2)nQ基團，離去基，製成式I化合物，其中X或至少X及γ之一代表i 至6個碳原子的烷基或-(CH2)nQ基團，或 (b) 由式IV化合物本紙張尺度通用中國國家標準（CNS ) A4说格（2H)X297公釐） i ---------Γ，4 — (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部中央標準局負工消費合作社印$. 39781S ' ~~~-~—Λ申請專利範圍 A8SD8 Η IV Η Η' 其中Τ之定義如申請專利範圍第i項所，述，與式V化合物反應 D-L V 第1項所述，L是離去基其ID之定義如申請專利範圍第1項所述’ L是離古卷’ 在而要或必要時，再將所得化合物轉化成醫藥上可接森的鹽’或反之亦然。又經濟部中央標率局負工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家揉率（CNS > A4规格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

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