CZ388999A3 - Sloučeniny - Google Patents

Abstract

Poskytuje se nová sloučenina obecného vzorce (I), kde R1 představuje 2-thienylový nebo 3-thienylový kruh aR2 představuje alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku ajejí optické izomery a racemáty ajejí farmaceuticky použitelné soli; spolu se způsobyjejich přípravy, prostředků sjejich obsahemajejich použití v terapii. Sloučeninyjsou selektivními inhibitory neuronální izoformy syntázy oxidu dusnatého.

Description

Oblast techniky

Tento vynález se týká nových amidinových derivátů, způsobů jejich přípravy , prostředků s jejich obsahem a jejich použití v terapii.

Dosavadní stav techniky

Oxid dusnatý se vytváří v buňkách savců z L-argininu působením specifických syntáz oxidu dusnatého (NOS). Tyto enzymy spadají do dvou oddělených skupin - konstitutivní NOS (cNOS) a indukovatelné NOS (iNOS). V současnosti byly identifikovány dvě konstitutivní NOS a jedna indukovatelné NOS. V rámci konstitutivních NOS je endoteliální enzym (ecNOS) zapojen do relaxace hladké svaloviny a regulace krevního tlaku a průtoku krve, zatímco neuronální enzym (ncNOS) slouží jako neurotransmitr a jeví se být zapojen do regulace různých biologických funkcí, jako je mozková ischemie. Indukovatelný NOS je implikován v patogenezi zánětlivých onemocnění. Specifická regulace těchto enzymů by měla proto poskytnout přínosný potenciál v terapii různých chorobných stavů.

Sloučeniny různé struktury jsou popisovány jako inhibitory NOS a nárokuje se jejich použití v terapii, viz například WO 95/09619 (The Wellcome Foundation) a WO 95/11231 (G.D. Searle). Přihlašovatel předtím popsal ve WO 95/05363 a WO 96/01817 amidinové deriváty, které jsou inhibitory NOS a které vykazují určitou selektivitu v inhibicí neuronálního enzymu, ncNOS.

j β « • ·

Původci nalezli skupinu amidinů, které jsou v generickém rámci skupiny WO 96/01817, ale které nejsou specificky doloženy příkladem ve WO 96/01817. Tyto sloučeniny ukazují překvapivě výhodné vlastnosti a jsou předmětem současné přihlášky.

Podstata vynálezu

Podle vynálezu se poskytuje sloučeniha obecného vzorce (I)

Ri kde

R¹ představuje 2-thienylový nebo 3-thienylový kruh a

R² představuje alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a jejich optické izomery a racemáty a jejich farmaceuticky po užitelné soli.

Přednostně R¹ představuje 2-thienylovou skupinu.

Obzvláště upřednostňované sloučeniny podle vynálezu zahrnují:

N-(2-methyl-l,2,3,4-terahydroisochinolin-7-ylj-2thiofenkarboximidamid:

N-(2-isopropyl-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin-7-yl)-2thiofenkarboximidamid

N-(2-ethyl-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin-7-yl) -2thiofenkarboximidamid

N-(2-propyl-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin-7-yl)-2thiofenkarboximidamid

N-(2-methyl-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin-7-yl)-3thiofenkarboximidamid a jejich farmaceuticky použitelné soli.

Specielně preferovanější sloučeninou podle vynálezu je N-(2-methyl-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin-7-yl )2thiofenkarboximidamid a její farmaceuticky použitelné soli.

Pokud není označeno jinak, výraz „alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku zde zmiňovaná označuje alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku s přímým nebo rozvětveným řetězcem. Příklady takových skupin zahrnují methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl a tercbutyl.

Předmětný vynález zahrnuje sloučeniny obecného vzorce (I) ve formě solí, zvláště adičních solí s kyselinou. Vyhovující soli zahrnují soli, které jsou tvořeny jak organickými, tak anorganickými kyselinami. Taková adiční sůl s kyselinou je obvykle farmaceuticky akceptovatelná, i když soli nefarmaceuticky použitelných kyselin mohou být použity v přípravě a čištění předmětných sloučenin. Takto, upřednostňované soli jsou soli, které vznikají z kyseliny chlorovodíkové, bromovodíkové, sírové, fosforečné, citrónové, vinné, mléčné, pyrohroznové, octové, jantarové, fumarové, maleinové, methansulfonová a benzensulfonová.

Podle vynálezu se dále poskytuje způsob přípravy sloučenin obecného vzorce (I) a jejich optických izomerů a racemátů a jejich farmaceuticky použitelných solí, který zahrnuj e:

(a) přípravu sloučeniny obecného vzorce (I) tím, že se nechá reagovat odpovídající sloučenina obecného vzorce (II) • * • · • ·

kde

R² odpovídá výše uvedené definici, se sloučeninou obecného vzorce (III)

NH

kde

R¹ odpovídá výše uvedené definici a L je odstupující skupina;

nebo s její adiční solí s kyselinou (b) přípravu sloučeniny obecného vzorce (I) tím, že se nechá reagovat odpovídající sloučenina obecného vzorce (IV) (IV)

ΗΑ.Η,Ν

kde

R² odpovídá výše uvedené definici a HA je kyselina, se sloučeninou obecného vzorce (V)

R¹-ΞΝ (V) kde

• · * · » ♦ · · · • · · · • · 4 · «

R¹ odpovídá výše uvedené definici;

(c) příprava sloučeniny obecného vzorce (I) tím, že se nechá reagovat sloučenina obecného vzorce (VI)

Ri kde

R¹ odpovídá výše uvedené definici, se sloučeninou obecného vzorce (VII)

R2 — L (VII) kde

R² představuje alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a L je odstupující skupina; nebo (d) přípravu sloučeniny obecného vzorce (I), kde R² představuje methylovou skupinu, reakcí sloučeniny obecného vzorce (VI) s formaldehydem a kyselinou mravenčí;

a kde je žádoucí nebo potřebné přeměnu výsledné sloučeniny obecného vzorce (I) anebo jiné její soli na její farmaceuticky použitelnou sůl, nebo naopak a kde je žádoucí, přeměnu výsledné sloučeniny obecného vzorce (I) na její optický izomer.

Při způsobu (a)’ reakce probíhá za mícháni směsi reaktantů ve vyhovujícím rozpouštědle, kterým je například Nmethyl-2-pyrolidinon nebo nižší alkohol jako ethanol, isopropanol nebo terciární butanol, při teplotě mezi teplotou ·

místnosti a refluxní teplotou rozpouštědla. Reakční čas bude závislý mimo jiné na rozpouštědle a povaze odstupující skupiny a může dosáhnout až 48 hodin; přičemž normální rozmezí je 1 až 24 hodin. Vhodné odstupující skupiny, které L může představovat, zahrnují thioalkyl, sulfonyl, trifluormethylsulfonyl, halogenid, alkylalkoholy, arylalkoholy a tosylové skupiny, ostatní jsou citované v „Advanced Organic Chemistry, J.March /1985/ 3. vydáni, strana 315, a jsou velice dobře známy v oboru.

Při způsobu (b)je reakce přednostně provedena refluxováním směsi dvou sloučenin po dobu několika hodin v přítomnosti vhodného rozpouštědla, přičemž reakční teplota je dostatečně vysoká, takže kondenzace nastává snadno, ale ne dostatečně vysoká, aby rozložila vznikající amidin. Reakční teplota se může měnit od teploty místnosti do teploty asi 250 °C, i když se upřednostňuje provádět reakci při teplotách mezi asi 100 až 200 °C. Původci zjistili, že o-dichlorbenzen je zvláště vyhovující rozpouštědlo. Také bylo nalezeno, že je často užitečné přidat 4-dimethylaminopyridin jako katalyzátor. Při chladnutí se vytvoří dvě vrstvy, rozpouštědlo může být dekantováno a reakční směs zpracována přidáním vodní báze. Případně, pokud jsou reaktanty rozpustné v rozpouštědle, rozpouštědlo může být odpařeno ve vakuu a reakční směs zpracována přidáním vody. Kyselina HA může být organická nebo anorganická, například kyselina chlorovodíková, bromovodíková, jodovodíková, sírová, dusičná, fosforečná, octová, mléčná, jantarová, fumarová, jablečná, maleinová, vinná, citrónová, benzoová anebo methansulfonová. Upřednostňuje se, aby HA byla kyselina halogenvodíková.

Při způsobu (c) reakce proběhne za standartních podmínek, například reakcí dvou sloučenin v inertním • · • · • · rozpouštědle, jako například DMF, za bazických podmínek při vyhovující teplotě, obvykle teplotě místnosti, po dobu do 72 hodin nebo než je reakce kompletní. Často se zjišťuje, že je nutné zpracovat amin s NaH před reakcí se sloučeninou obecného vzorce /VII/. Výhodné odstupující skupiny L jsou popsány výše. Původci dávají přednost, aby L představoval halogenid, zejména bromid.

Při způsobu (d), reakce obvykle proběhne refluxováním . reakční směsi po dobu až 4 hodin nebo než je reakce kompletní.

Soli sloučenin obecného vzorce (I) mohou vznikat reakcí volné báze nebo soli, enantiomerů, tautomeru anebo jejich chráněného derivátu, s jedním nebo více ekvivalenty příslušné kyseliny. Reakce může být provedena v rozpouštědle nebo médiu, ve kterém je sůl nerozpustná nebo v rozpouštědle, ve kterém je sůl rozpustná s následujícím postupným odpařením rozpouštědla ve vakuu anebo vymražováním. Výhodnými rozpouštědly jsou například voda, dioxan, ethanol, isopropanol, tetrahydrofuran nebo diethylether, nebo jejich směsi. Reakce může být metatetickým procesem nebo může být provedena na iontoměničové pryskyřici.

Sloučeniny obecného vzorce (II) mohou být připraveny redukcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce (VIII) kde

R² odpovídá výše uvedené definici.

(VIII) • ·

Redukční reakce může být provedena za mnoha podmínek, například za těch,které popisuje J. March v „Advanced Organic Chemistry na stranách 1103 a 1104. Tyto podmínky zahrnují katalytickou hydrogenací, použití zinku, mědi nebo kovového železa, AIH3-AICI3, sulfidů a jiných látek. Upřednostňuje se provádět reakci hydrogenací za atmosférického tlaku za přítomnosti palladia na uhlí jako katalyzátoru dokud reakce není kompletní, obvykle od 3 do 6 hodin nebo redukci použitím kovového zinku v kyselině octové a metharfolu.

Sloučeniny obecného vzorce (VIII) mohou být připraveny nitrací sloučeniny obecného vzorce (IX) (IX) kde

R² odpovídá výše uvedené definici

Nitrační reakce proběhne za podmínek velmi dobře známých odborníkovi v oboru, například zpracování s kyselinou dusičnou a sírovou nebo dusičnanem draselným a kyselinou sírovou, popřípadě v inertním organickém rozpouštědle.

Může být také vhodné připravit sloučeniny obecného vzorce (VIII) nitrací karbonylového nebo dikarbonylového derivátu sloučeniny obecného vzorce (IX); přičemž tyto nitrátované karbonylové nebo dikarbonylové deriváty mohou být redukovány na požadovanou sloučeninu obecného vzorce (VIII) například použitím diboranu.

J

Sloučeniny obecného vzorce (VIII) a (IX), stejně jako určité karbonylové a dikarbonylové deriváty sloučenin obecného vzorce (IX) právě zmíněné, mohou být také připraveny jednou z četných metod pro přípravu bicyklických heterocyklických sloučenin.

Takto sloučenina obecného vzorce (X)

může být připravena rozšířením kruhu cyklického ketonu vzorce (XI)

zpracováním s azidem sodným v kyselině /Grunewald a

Dahanukar, J. Heterocyclic Chem./, 31, 1609 až 1617, (1991)

Odborníku v oboru bude zřejmé, že sloučeniny obecného vzorce (X) mohou být také připraveny v nitrátované formě. Nitrace může být dosaženo zpracováním nenitrátového analogu s kyselinou dusičnou a kyselinou sírovou nebo dusičnanem draselným a kyselinou sírovou za standartních podmínek.

Meziprodukty mohou být připraveny jako takové nebo v chráněné formě. Zvláště aminové skupiny mohou být chráněny. Vhodné chránící skupiny jsou popsány v základní publikaci „Protective Groups in Organic Synthesis, 2. vydání (1991), Greene a Wuts. Aminové chránící skupiny, které připadají do i

• ·

úvahy, zahrnují alkoxykarbonylovou skupinu, jako tercbutoxykarbonyl, fenylalkoxykarbonyl, jako benzyloxykarbonyl anebo trifluoracetát. Deprotekce proběhne normálně zpracováním s vodnou bází anebo vodnou kyselinou.

Sloučeniny obecného vzorce (VIII) a (IX), kde R² představuje alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, mohou být také připraveny alkylací odpovídající N-H sloučeniny připravené způsobem (c) popsaným výše.

Sloučeniny obecného vzorce (IV) mohou být připraveny analogickými způsoby jako jsou popsány k přípravě sloučenin obecného vzorce (II). Sloučeniny obecného vzorce (IV) mohou být konvertovány na odpovídající sloučeniny obecného vzorce (II) zpracováním s bází. Sloučeniny obecného vzorce (II) mohou být konvertovány na odpovídající sloučeniny obecného vzorce (IV) zpracováním s protickou kyselinou HA, například jednou z výše jmenovaných.

Sloučeniny obecného vzorce (III) jsou buď známy nebo mohou být připraveny známými postupy. Například, sloučeniny obecného vzorce (III), kde L představuje thioalkylovou skupinu, mohou být připraveny zpracováním odpovídajícího thioamidu obecného vzorce (XII)

R¹^ NH, kde

R¹ odpovídá výše. uvedené definici s alkylhalogenem za -podmínek dobře v oboru.

(XII) známých odborníkovi

Popřípadě, adiční soli sloučenin obecného vzorce (III)s » « ·· 4 ···· • 44 4 4 4 4 4 4 4 4

4444*4 4 4 4* 44 4

kyselinou, kde L je thioalkyiová skupina, mohou být připraveny reakcí nitrilu obecného vzorce (V) s alkylthiolem a kyselinou, například kyselinou chlorovodíkovou, v rozpouštědle jako dichlormethan nebo diethyleter.

Sloučeniny obecného vzorce (V), (VII), (X), (XI) a (XII) jsou buď známé anebo mohou být připraveny běžnými metodami jako takovými.

Bude zřejmé odborníkovi v oboru, že může být žádoucí chránit aminovou nebo jinou reaktivní skupinu v meziproduktu použitím chránící skupiny, jak se popisuje v základní publikaci „Protective Groups in Organic Synthesis, 2. vydání (1991), Greene a Wuts. Vyhovující amino-protektivní skupiny jsou vyjmenovány výše.

Sloučeniny podle vynálezu a meziprodukty mohou být izolovány z jejich reakčních směsí a v případě potřeby dále čištěny použitím standardních technik.

Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou existovat v tautomerní, enantiomerní anebo diastereoizomerní formě, z nichž všechny jsou zahrnuty do rozsahu vynálezu. Různé optické izomery mohou být izolovány oddělením z racemické směsi sloučenin použitím konvenčních technik, například frakcionovanou krystalizaci nebo HPLC. Popřípadě jednotlivé individuální enantiomery mohou být připraveny reakcí příslušných opticky aktivních výchozích látek za reakčních podmínek, které .nezapříčiní racemizaci.

Meziprodukty mohou také existovat v enantiomerních formách a mohou být použity jako purifikované enantiomery, diastereomery, racemáty nebo směsi.

Sloučeniny obecného vzorce (I) mají užitečnou aktivitu inhibující syntázu oxidu dusnatého a zvláště vykazují dobrou selektivitu pro inhibici neuronálních izoforem syntázy oxidu dusnatého. Proto jsou užitečné v léčbě anebo profylaxi lidských onemocnění nebo stavů, kde syntéza nebo nadměrná syntéza oxidu dusnatého syntézou oxidu dusnatého k tomu přispívá. Příklady takových onemocnění nebo stavů zahrnují hypoxii, jako v případě srdeční zástavy, cévní mozkovou příhodu a neonatální hypoxii, neurodegenerativní stavy zahrnující nervovou degeneraci nebo nervovou nekrózu u poruch jako ischemie, hypoxie, hypoglykémie, epilepsie a u otevřených ran (jako poranění páteře nebo hlavy) , hyperbarické kyslíkové konvulze a toxicity, demence, například presenilni demence, Alzheimerova choroba a demence související s AIDS, Sydenhamova chorea, Parkinsonova nemoc, . Huntingtonova choroba, amyotropní laterální skleróza, Korsakovova nemoc, imbecilita spojená s poruchami cévního zásobení mozku, poruchy spánku, schizofrenie, úzkostné stavy, deprese, sezónní afektivní poruchy, jet-lag, deprese nebo další symptomy spojené s premenstruačním syndromem (PMS), Úzkost a septický šok. Sloučeniny obecného vzorce (I) jsou také užitečné v léčbě a zmírnění akutní perzistující zánětlivé nebo neuropatické bolesti nebo centrální bolesti a v léčbě nebo profylaxi zánětu. Sloučeniny obecného vzorce (I) jsou také určeny k projevení aktivity v prevenci a reverzní toleranci k opiátům a diazepinům, léčbě lékové závislosti a léčbě migrény a dalších bolestí hlavy na cévním pokladě. Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou také prokázat užitečnou imunosupresivní aktivitu a být užitečné v léčbě poruch motility gastrointestinálního traktu a v indukci porodu. Sloučeniny mohou být také užitečné v léčbě nádorů, které vykazují syntázu oxidu dusnatého.

J

U sloučenin obecného vzorce (I) se předpokládá, že jsou zvláště vhodné k léčbě nebo profylaxi hypoxie nebo cévní mozkové příhody nebo ischemie nebo neurodegenerativních stavů nebo schizofrenie nebo migrény nebo v prevenci a reverzní toleranci k opiátům a diazepinům nebo v léčbě lékové závislosti nebo v léčbě bolesti a zvláště v léčbě nebo profylaxi hypoxie nebo cévní mozkové příhody nebo ischemie nebo neurodegenerativních stavů nebo schizofrenie nebo bolesti. Zejména jsou zajímavé stavy vyčleněné ze skupiny obsahující hypoxii, ischemii, cévní mozkovou příhodu, bolest, schizofrenii, Parkinsonovu nemoc, Huntingtonovu chorobu a amyotropní laterální sklerózu.

V léčbě Parkinsonovy nemoci se od sloučenin obecného vzorce (I) očekává, že budou zvláště užitečné buď samostatně nebo v kombinaci s jinými látkami, jako L-Dopa.

V léčbě bolesti se od sloučenin obecného vzorce (I) očekává, že budou zvláště užitečné buď samostatně anebo v kombinaci s jinými látkami, jako opiáty, zejména morfinem.

Od profylaxe se očekává, že bude zejména důležitá v léčbě osob, které trpěli předchozí epizodou nebo jsou jinak považovány za zvýšeně rizikové pro tuto nemoc nebo stav.

Osoby s rizikem vývoje konkrétního onemocnění nebo stavu obecně zahrnují ty, které mají v rodinné anamnéze tuto nemoc nebo stav nebo ty, které byly identifikovány genetickými testy nebo skríningem jako zvláště náchylné k vývoji daného onemocnění nebo stavu.

Podle dalšího aspektu vynálezu se poskytuje sloučenina obecného vzorce (I) nebo její optický izomer nebo racemát

nebo její farmaceuticky použitelná sůl k použití jako léčivý prostředek.

Podle dalšího znaku vynálezu se poskytuje použití sloučeniny obecného vzorce (I) nebo jejího optického izomeru nebo racemátu nebo její farmaceuticky použitelné soli k výrobě léku pro léčbu nebo profylaxi výše zmíněných onemocnění nebo stavů a metoda léčby nebo profylaxe jednoho z výše zmíněných onemocnění nebo stavů, které zahrnují podání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo jejího optického izomeru nebo racemátu nebo její farmaceuticky použitelné soli, osobě trpící nebo náchylné k takové nemoci nebo stavu.

Pro výše zmíněné terapeutické indikace se podaná dávka bude, samozřejmě, měnit v závislosti na použité sloučenině, způsobu podání a požadovaném ošetření. Zobecněno, uspokojivých výsledků je však dosaženo, když jsou sloučeniny podány člověku v denní dávce mezi 0,5 mg a 2000 mg (měřeno jako aktivní složka) denně, zejména v denní dávce mezi 2 mg a 500 mg.

Sloučeniny obecného vzorce (I) a jejich optické izomery a racemáty a farmaceuticky použitelné soli mohou být použity samostatně nebo ve formě odpovídajícího farmaceutickému prostředku. Podání může být, ale není na ně omezení, enterální (zahrnující orální, sublingvální nebo rektální), intranazální nebo topické anebo jinými parenterálními cestami. Konvenční postupy pro selekci a přípravu vyhovujícího farmaceutického prostředku popisuje například M.E.Aultonm, (Churchill Livingstone) ve „Pharmaceuticals The Science of Dosage Form Designs, (1988) j

• · »·

Podle vynálezu se poskytuje farmaceutický prostředek obsahující výhodně méně než 95% hmotnostních a výhodněji než 50% hmotnostních sloučenin obecného vzorce (I) nebo jejího optického izomeru nebo racemátu anebo její farmaceuticky použitelné soli, ve směsi s farmaceuticky použitelným ředidlem nebo nosičem. Prostředek může popřípadě také obsahovat druhou farmaceuticky aktivní látku, jako L-Dopa nebo opiátové analgetikum, jako morfin.

Také se poskytuje způsob přípravy takového farmaceutického prostředku, který zahrnuje smíchání složek.

Příklady takových ředidel a nosičů jsou pro tablety a dražé laktoza, škrob, talek a kyselina stearová, pro kapsle kyselina vinná nebo laktoza, pro injekční roztoky voda, alkoholy, glycerin a rostlinné oleje, pro čípky přírodní nebo ztužené oleje a vosky.

Farmaceutické prostředky ve formě vhodné pro orální, to je ezofageální, podání zahrnují tablety, kapsle a dražé. Prostředky s postupným uvolňováním zahrnují formy, kde účinná látka je vázána na iontoměničovou pryskyřici, která je případně povlečena difusní bariérou, která modifikuje uvolňovací vlastností pryskyřice.

Enzym syntéza oxidu dusnatého má velký počet izoforem a sloučeniny obecného vzorce (I) a jejich optické izomery a racemáty a jejich farmaceuticky použitelné soli mohou být testovány pro inhibiční aktivitu syntézy oxidu dusnatého následujícími postupy, jak popisuje Bredt a Snyder v Proč. Nati. Acad. Sci., 87, 682 až 685, (1990). Syntéza oxidu dusnatého konvertuje ³H-L-arginin na ³H-L-citrulin, který může být separován kationtovou měničovou chromatografii a

J

kvantifikován scintilačním čítáním.

Test inhibiční aktivity neuronální syntázy oxidu dušnatého

Enzym je izolován z krysího hipokampu nebo mozečku. Mozeček nebo hipokampus samčí krysy kmene Sprague-Dawley (250 až 275 g) je vyjmut po anestézii CO₂ zvířete a dekapitaci. Cerebelární nebo hipokampální supernatant je připraven homogenizací v 50 mM tris-HCl s 1 mM pufr*u EDTA (pH 7,2 při 25 °C) a centrifugací 15 minut při 20 000 g. Výsledný Larginin je postupně odstraněn ze supernatantu chromatografií na sloupci pryskyřice Dowex AG-50W-X8 buď v sodné nebo kyselé formě a dále se centrifuguje při 1000 g po dobu 30 sekund.

V testu je 25 μΐ finálního supernatantu přidáno do každé z 96 jamek (filtrační plotny o 96 jamkách) obsahující buď 25 μΐ zkušebního pufru (50 mM HEPES, 1 mM EDTA, 1,5 mM CaCl2, pH

7.4) anebo 25 μΐ testované sloučeniny v pufru při 22° C a 25 μΐ kompletního zkušebního pufru (50 mM HEPES, 1 mM EDTA, 1,5 mMCaCl2, 1 mM DTT, 100 μΜ NADPH, 10 μρ/ml kalmodulinu, pH

7.4) . Následuje lOminutová ekvilibrační perioda, 25 μΐ Largininového roztoku (koncentrace 18 μΜ ^-L-argininu, 96 nM ³H-L-argininu) se přidá do každé jamky ke spuštění reakce. Reakce se zastaví po 10 minutách přidáním 200 μΐ suspenze terminačniho pufru (20 mM HEPES, 2 mM EDTA, pH 5,5) a pryskyřice Dowex AG-50W-X8 o rozměru částic 0,074 až 0,038 mm.

Značený L-citrulin je oddělen od značeného L-argininu filtrováním každé filtrační plotny a 75 μΐ z každé ukončené reakce je přidáno k 3 ml scintilačního koktejlu. L-Citrulin se potom kvantifikuje scintilačním čítáním.

V typickém experimentu používajícím cerebelární supernatant je základní aktivita zvýšena na 20 000 dpm/ml u vzorku ve srovnání se slepým pokusem, který má aktivitu 7 000 dpm/ml. Referenční standard, N-nitro-L-arginin, který způsobuje 80% inhibici syntázy oxidu dusnatého při koncentraci 1 μΜ, je testován v pokusu na ověření postupu.

i

Test inhibiční aktivity syntázy endoteliálního oxidu dusnatého

Enzym je izolován z endoteliálních buněk lidské umbilikální vény (HUVEC) procedurou, která je založena na popisu Pollocka a kol. v Proč. Nati. Acad. Sci., 88, 10480 až 10484 (1991). HUVEC byly získány z Clonetics Corp ( San Diego, CA, USA) a vykultivovány ve zhlucích. Buňky mohou být pasážovány 35 až 40krát bez signifikantní ztráty výtěžku syntázy oxidu dusnatého. Když buňky splynou ve zhluku, jsou resuspendovány v Dulbeccově fyziologickém roztoku pufrovaném fosfátem, centrifugovány při frekvenci otáček 800 za minutu po dobu 10 minut a buněčná peleta je potom homogenizována v 50 mM v ledově ochlazené tris-HCl, 1 mM EDTA, 10% glycerolu, 1 mM fenylmethylsulfonylfluoridu, 2 μΜ leupeptinu při pH 4,2. Po následné centrifugaci při frekvenci 34 000 otáček za minutu po dobu 60 minut, peleta je solubilizovaná v homogenizačním pufru, který také obsahuje 20 mM CHAPS. Po 30 minutové inkubaci na ledu je suspenze centrifugovaná při frekvenci otáček 34 000 za minutu po dobu 30 minut. Výsledný supernatant je uskladněn při -80 °C až do doby použití.

V testu se 25 μΐ výsledného supernatantu přidá do každé z 12 testovacích zkumavek obsahujících 25 μΐ roztoku Largininu (s koncentrací 12 μΜ ¹H-L-argininu, 64 nM ³H-L• · argininu) a buď 25 μΐ zkušebního pufru (50 mM HEPES, 1 mM EDTA, 1,5 mM CaCl₂, pH 7,4) nebo 25 μΐ testovací sloučeniny v pufru při 22 °C. Do každé testovací zkumavky je přidáno 25 μΐ kompletního testovacího pufru (50 mM HEPES, 1 mM EDTA, 1,5 mM CaCl₂, 1 mM DTT, 100 μΜ NADPH, 10 μρ/ml kalmodulinu, 12 μΜ tetrahydrobiopterinu, pH 7,4), aby se spustila reakce a reakce je zastavena po 10 minutách přidáním 2 ml terminačního pufru (20 mM HEPES, 2 mM EDTA, pH 5,5).

Značený L-citrulin je oddělen ze značeného L-argininu chromatograficky na sloupci Dowex AG-50W-X8 o rozměru částic 0,074 až 0,038 mm. lml podíl každé ukončené reakční směsi se přidá do jednotlivých sloupců o objemu 1 ml a eluant se spojí s eluantem vzniklým z 1 ml destilované vody z promývání a 16 ml scintilačního koktejlu. L-Citrulin je poté kvantifikován scintilačním čítáním.

V typickém experimentu, bazální aktivita je zvýšena na 5 000 dpm/ml vzorku nad slepým reagentem, který má aktivitu 1500 dpm/ml. Referenční standard, N-nitro-L-arginin, který způsobí 70 až 90% inhibici syntázy oxidu dusnatého při koncentraci 1 μΜ, je testován v pokusu na ověření postupu.

V testech na inhibiční aktivitu syntázy oxidu dusnatého je aktivita sloučeniny vyjádřena jako IC₅₀ (koncentrace lékové substance, která dává 50% inhibici enzymu v testu). Hodnoty IC50 pro testované sloučeniny jsou původně stanoveny z inhibiční aktivity 1, 10 a 100 μΜ roztoku sloučeniny. Sloučeniny, které inhibují enzym alespoň z 50% při 10 μΜ jsou znovu testovány použitím přesněji odpovídajících koncentrací, takže IC50 může být stanoveno.

Když se testuje ve výše popsaných testech, sloučeniny • * c · • · • · • · J · · • · · • · · · · · o · z příkladů 1 až 6 uvedených dále, ukazují hodnoty IC₅₀ pro inhibici neuronální syntázy oxidu dusnatého menší než 10 μΜ a dobrou selektivitu pro inhibici neuronálních izoforem enzymu, což je indikuje k tomu, aby projevily zejména užitečnou terapeutickou aktivitu.

Když se srovnají s jinými sloučeninami, sloučeniny obecného vzorce (I) a jejich optické izomery a racemáty a jejich farmaceuticky použitelné soli mají’ tu výhodu, že jso.u méně toxické, více účinné s prodlouženou aktivitou, širším záběrem aktivity, silnější, selektivnější pro neuronální izoformu syntázy oxidu dusnatého, produkují méně vedlejších účinků, jsou lépe absorbovatelné nebo mají další užitečné farmakologické vlastnosti.

Příklady provedení vynálezu

Vynález je ilustrován na následujících příkladech.

Příklad 1

N-(2-Methyl-1,2,3,4-tetrahydroisochinolin-7-yl) -2thiofenkarboximidamid-dihydrochlorid

a) 2-Methyl-7-nitro-l,2,3,4-tetrahydroisochinolinhydrochlorid g (93,2 mmol) 7-nitro-l,2,3,4-tetrahydroisochinolinu, 50. ml 37% vodného roztoku formaldehydu a 90 ml kyseliny mravenčí je zahříváno při zpětném toku 1 hodinu, chlazeno a vylito na led. Reakční směs je zalkalizována koncentrovaným roztokem hydroxidu amonného. Tuhá látka, která se vysrážela, je zachycena, rozpuštěna v 200 ml teplého r · · • ·

ethanolu, okyselena směsí 95% ethanolu s koncentrovaným HCI a produkt je ponechán ke krystalizaci. Sloučenina z názvu je získána jako tuhá látka bílé barvy (18,71 g, 87,8 %), teplota tání 256 až 257 °C.

b) 2-Methyl-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin-7-ylaminhydrochlorid

2-Methyl-7-nitro-l, 2,3,4-tetrahydroi‘sochinolinhydrochlorid je rozpuštěn v methanolu a hydrogenován při 343,5 kPa za přítomnosti katalytického množství 10% palladia na uhlí. Po 1 hodině je směs filtrována přes sklo a odpařena, aby se dosáhlo 2-methyl-l,2,3,4-terahydroisochinolin-7ylamin-hydrochloridu, teplota tání 137 až 138 °C.

c) Hydrochlorid ethylesteru kyseliny 2-thiofenkarboximidothiové

Do 28,4 g (0,45 mol) míchaného roztoku ethanethiolu v 500 ml methylen-chloridu při 10 °C pod dusíkovou atmosférou se přidá 50,0 g (0,45 mol) 2-thiofenkarbonitrilu. Tento roztok je zpracován pomalým proudem plynového HCI po dobu 6 hodin. Reakční směs se poté ponechá zahřát na teplotu místnosti během 18 hodin. Přidá se 200 ml etheru a bílá tuhá látka krystalizuje. Tuhý hydrochlorid ethylesteru kyseliny 2thiofenkarboximidothiové je odfiltrován a vysušen na vzduchu. Je získáno 68,5 g sloučeniny,teplota tání 196 až 197 °C.

d) N-(2-Methyl-l,2,3,4-terahydroisochinolin-7-yl)-2thiofenkarboximidamid-dihydrochlorid

34,66 g 2-methyl-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin-7-ylaminhydrochloridu v 600 ml 95% ethanolu je zahříván na 65 °C, aby se rozpustila většina tuhých látek a směs potom mohla i

• ·

«.·» ···· ·*·· *·· · · * · » · · • ····«· · · 9 · ♦ · » • · · · * ·««· ··· Ί «· » · « « 9 · · chladnout při míchání. Následující den se jemná suspenze tuhých látek zpracuje s 41 g hydrochloridu ethylesteru kyseliny 2-thiofenkarboximidthiové a promíchává při 23 °C. Všechny tuhé látky se rozpouští 2 hodiny a do 4 hodin se vysráží nové tuhé látky. Směs se zpracuje s 2 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Směs se ochladí na 0 °C a míchá se 30 minut. Tuhé látky se odfiltrují, promyjí 2x50 ml ethanolu a vysuší vzduchem, aby se získal N-(2methyl-1,2,3,4-tetrahydroisochinolin-7-yl‘) -2thiofenkarboximidamid-dihydrochlorid, teplota tání 142 až 146 °C, MS m/z 272 [M+H]⁺·

Příklad 2

N- (2-Isopropyl-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin-7-yl)-2thiofenkarboximidamid

Do 7,0 g (21 mmol) promíchaného roztoku N-(1,2,3,4tetrahydroisochinolin-7-yl)-2-thiofenkarboximidamidu ve 100 ml dimethylformamidu se přidá 14,6 g (100 mmol) uhličitanu draselného. Do této směsi se přidá 5,1 g (42 mmol) 2-bromopropanu a směs je poté zahřívána na 40°C po dobu 72 hodin. Reakční směs se vyleje do 500 ml vody a extrahuje se 3x100 ml ethylacetátu. Kombinované ethylacetátové extrakty jsou promyty 200 ml vody a sušeny síranem hořečnatým. Odpařením roztoku se získá surový olej, který je potom rozpuštěn v 250 ml horkého cyklohexanu a 10 ml ethylacetátu. Stáním sloučenina z nadpisu vykrystalizuje a 3,2 g této sloučeniny se odfiltruje. Teplota tání 110 až 111 °C.

Příklad 3

N-(2-Ethyl-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin-7-yl)-2* · * · · « · • · · » » • · · · » · • · · · · • 9 I < · · »

thiofenkarboximidamid-hydrochlorid

a) 2-Ethyl-7-nitro-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin-hydrochiorid

Do 5g (30 mmol) 7-nitro-l,2,3,4-tetrahydroisochinolinu ve 100 ml acetonitrilu se přidá 5,38 g (60 mmol) ethylmethansulfonátu a 5 g uhličitanu draselného. Směs se zahřívá na 40 °C po dobu 18 hodin. Směs se filtruje a koncentruje na olej. Olej je rozpuštěn v methanolu a zpracován s HCI v isopropanolu. Sůl hydro“chloridu je odfiltrována (4,89 g, 67%), teplota tání 259 až 260 °C.

b) 2-Ethyl-l,2,3,4-tetrahydrochloridisochínolin-7-ylaminhydrochlorid

4,89 g 2-ethyl-7-nitro-l,2,3,4-tetrahydroisochinolinhydrochloridu se rozpustí ve 250 ml methanolu a hydrogenuje se při 34,35 kPa za přítomnosti katalytického množství 5% palladia na uhlí. Po 1 hodině se směs filtruje přes sklo a evaporuje na olej, který se použije okamžitě v následujícím kroku.

c) N-(2-Ethyl-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin-7yl)-2thiofenkarboximidamid-hydrochlorid

K 2,48 g (10 mmol) 2-ethyl-l,2,3,4tetrahydroisochinolin-7-ylamin-hydrochloridu ve 25 ml isopropanolu se přidá 5,68 g (20 mmol) hydrojodidu methylesteru kyseliny 2-thiofenkarboximidothiové. Směs se zahřívá na 50 °C po dobu 24 hodin. Směs se vyleje na 50 ml vody a potom 15Q ml bazické vody. Směs se extrahuje s 3x100 ml ethylacetátu. Extrakty jsou promyty vodou, vysušeny síranem hořečnatým, filtrovány a koncentrovány na olej, který krystalizuje stáním. Tuhé látky jsou rozpuštěny v etheru a zpracovány s HCI. v isopropanolu. Tuhé látky jsou

odfiltrovány (1,41 g, 49 %), teplota tání 122 až 126 °C.

Příklad 4

N-(2-Propyl-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin-7-yl)-2thiofenkarboximidamid-dihydrochlorid

a) 7-Nitro-2-propyl-l,2,3,4-tetrahydroisochinolinhydrochlorid

Sloučenina uvedená v názvu se připravuje z 5 g (30 mmol) 7-nitro-l,2,3,4-tetrahydroisochinolinu a 7,36 g (60 mmol) 1bromopropanu analogickým postupem jako v příkladu 3a. Získá se 3,29 g (43%) soli hydrochloridu, MS m/z 221 [M+H]⁺.

b) 2-Propyl-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin-7-ylaminhydrochlorid

3,29 g (13 mmol) 7-nitro-2-propyl-l,2,3,4tetrahydroisochinolin-hydrochloridu z příkladu 4a se hydrogenuje za použití postupu popsaného v příkladu 3b.

3,07 g (100%) titulní sloučeniny, hydrochloridové soli, která se takto získá, se okamžitě použije v dalším kroku.

c) N-(2-Propyl-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin-7yl) -2thiofenkarboximidamid-dihydrochlorid

3,07 g (13 mmol) 2-propyl-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin7-ylamin-hydrochloridu v 30 ml DMF se zpracuje s 2,84 g (10 mmol) hydrojodidu methylesteru kyseliny 2-thiofenkarboximidothiové podle postupu z příkladu 3c. Tuhé látky jsou rekrystalizovány z etheru, 1,28 g(43%), MS m/z 300 [M+H]⁺. Dihydrochloridová sůl je připravena rozpuštěním těchto tuhých látek v ethanolu, zpracováním s Hel v ethanolu a triturací s ethyl acetátem, 0,86 g (73%), teplota tání 241 až 24 3 °C.

J * · «« · ·· · · • · · · · · · · · · ♦ • · » ·· · » · · · • ······ · · · ♦ ·· ·

Příklad 5

N-(2-Methyl-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin-7-yl)-3thiofenkarboximidamid-dihydrochlorid

a) Hydrojodid methylesteru kyseliny 3-thiofenkarboximidothiové

Titulní sloučenina je připravena z 3-thiofenkarbothioamidu a methyljodidu postupem analogickým tomu, který je popsán v příkladu ld z WO 95/05363.

b) N-(2-Methyl-1,2,3,4-tetrahydroisochinolin-7-yl)-3thiofenkarboximidamid-dihydrochlorid

Směs 1,5 g (7,55 mmol) 2-methyl-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin-7-ylamid-dihydrochloridu a 2,69 g (9,44 mmol) hydrojodidu methylesteru kyseliny 3-thiofenkarboximidothiové v 10 ml N-methyl-2-pyrrolidinonu se zahřívá při 50 °C po dobu 5 hodin. Výsledná tuhá hmota se zpracuje s 50 ml isopropanolu, rozpustí ve vodě, zalkalizuje koncentrovaným roztokem hydroxidu amonného a dvakrát extrahuje chloroformem. Spojené extrakty se suší síranem hořečnatým, roztok se odpaří a odparek se zpracuje s HCI v ethanolu, aby vzniklo 37 g (52%) titulní sloučeniny, MS m/z 272 [M+H]⁺.'

Příklad 6

N- (2-Butyl-l, 2,3., 4-tetrahydroisochinolin-7-yl) -2thiofenkarboximidamid

3,0 g (9 mmol) N-(1,2,3,4-tetrahydriosochinolin-7-yl)-2thiofenkarboximidamidu a l,57g (18 mmol) 1-chlorbutanu se

J v ·· · · · · · • ♦ ♦ · · · · · » ·· ·· · *··· ······ t · ·· ·· · • ·· * ·«·· • · · · · · · · · · * nechají spolu reagovat podle postupu z příkladu 2, s tím rozdílem, že se 95% ethanol použije jako rozpouštědlo. Surový olej, který se tím získá, je chromatografován na silikagelu při eluování 10% methanolem v chloroformu, aby se získal olej, který krystalizuje z horkého hexanu (1,12 g, 40 %), teplota tání 95 až 96 °C.

Claims (22)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1 Sloučenina obecného vzorce (I)

   Ri kde:

   R¹ představuje 2-thienylový nebo 3-thienylový kruh a

   R² představuje alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, a její optické izomery a racemáty a její farmaceuticky použitelné soli.
2. 2. Sloučenina obecného vzorce (I) podle nároku 1, kde R¹ představuje 2-thienyl.
3. 3. Sloučenina obecného vzorce (I) podle nároku 1, kde R² představuje methyl.
4. 4. Sloučenina obecného, vzorce (I) podle nároku 1, kde R¹ představuje 2-thienyl a R² představuje methyl.
5. 5. Sloučenina obecného vzorce (I), kterou je:

   N-(2-methyl-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin-7-yl)-2thiofenkarboximidamid,

   N-(2-isopropyl-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin-7-yl) -2thiofenkarboximidamid,

   N-(2-ethyl-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin-7-yl)-2thiofenkarboximidamid

   N-(2-propyl-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin-7-yl)-2thiofenkarboximidamid

   N-(2-methyl - 1,2,3,4-tetrahydroisochinolin-7-yl)-3thiofenkarboximidamid

   N-(2-butyl-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin-7-yl)-2thiofenkarboximidamid, nebo optický izomer nebo racemát kterékoliv z těchto sloučenin nebo farmaceuticky použitelná sůl kterékoliv z těchto sloučenin.
6. 6. Sloučenina obecného vzorce (I) podle některého z w * z nároků 1 až 5, pro použití jako léčivo.
7. 7. Farmaceutický prostředek vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 5 nebo její optický izomer nebo racemát nebo její farmaceuticky použitelnou sůl, popřípadě ve směsi s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.
8. 8. Farmaceutický prostředek vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu obecného vzorce (I), podle některého z nároků 1 až 5 nebo její optický izomer nebo racemát nebo její farmaceuticky použitelnou sůl, v kombinaci s L-Dopa nebo s opiátovým analgetikem, zejména morfinem, popřípadě ve směsi s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.
9. 9. Způsob léčení nebo snížení rizika lidského onemocnění nebo stavu, kde inhibice aktivity syntázy oxidu dusnatého je přínosná, vyznačující se tím, že zahrnuje podání osobě trpící anebo náchylné k takové nemoci nebo stavu, terapeuticky účinného množství sloučeniny podle obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 5 nebo jejího optického izomeru nebo racemátu nebo její farmaceuticky použitelné soli.

   • · · * • · · · · · · · · · · ··· · · · · · · · • ······ · · ·· ·· ·
10. 10. Způsob léčení podle nároku 9, vyznačující se t í m, že je to především neuronální izoforma syntázy oxidu dusnatého, která je inhibována.
11. 11. Způsob léčení nebo snížení rizika hypoxie nebo cévní mozkové příhody nebo ischemie nebo neurodegenerativních stavů nebo schizofrenie nebo bolesti nebo migrény, anebo pro prevenci a reverzní toleranci k opiátům a diazepínům, anebo pro léčbu lékové závislosti, vyznač*ující se tím, že zahrnuje podání osobě trpící nebo náchylné k takovýmto onemocněním nebo stavům, terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 5 nebo jejího optického izomeru nebo racemátů nebo její farmaceuticky použitelné soli.
12. 12. Způsob léčení podle nároku 11, vyznačuj ící se t í m, že stav, který se má léčit, je vybrán ze skupiny obsahující hypoxii, ischemii, cévní mozkovou příhodu, Huntingtonovu chorobu, Parkinsonovu nemoc, amyotropní laterální sklerózu, schizofrenii a bolest.

    13. se t příhoda. Způsob léčení podle nároku 12 v y z nač cévní' u j í c mozková í í m, že stav, který má být léčen, je 14 . Způsob léčení podle nároku 12 v y z nač u j í c í se t í m, že stav, který má být léčen, je amyotropní

    laterální skleróza.
13. 15. Způsob léčení podle nároku 12 vyznačuj ící se t í m, že stav, který má být léčen, je bolest.
14. 16. Způsob léčení podle nároku 12 vyznačuj ící i

    • · • · se t í m, že stav, který má být léčen, je Huntíngtonova choroba.
15. 17. Způsob léčby podle nároku 12 vyznačuj ící se t í m, že stav, který má být léčen, je Parkinsonova nemoc.
16. 18. Způsob léčby podle nároku 12, vyznačuj ící se t í m, že stav, který má být léčen,· je schizofrenie.
17. 19. Způsob léčení, nebo snížení rizika trpění bolestí, vyznačující se tím, že zahrnuje podání osobě trpící anebo s rizikem trpění bolestí, terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 5 nebo jejího optického izomeru nebo racemátu nebo její farmaceuticky použitelné soli, v kombinaci s opiátovým analgetikem, zejména morfinem.
18. 20. Způsob léčení Parkinsonovy nemoci, vyznačuj i c i se t í m, že zahrnuje podání osobě trpící anebo se zvýšeným rizikem postižení Parkinsonovou nemocí, terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 5 nebo jejího optického izomeru nebo racemátu nebo její farmaceuticky použitelné soli, v kombinaci s L-Dopa.
19. 21. Použití sloučeniny obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 5 nebo jejího optického izomeru nebo racemátu nebo její farmaceuticky použitelné soli pro výrobu léku pro léčbu nebo profylaxi lidského onemocnění nebo stavu, kde inhibice aktivity syntézy oxidu dusnatého je přínosná.

    I
20. 22. Použití podle nároku 21, kde je to především neuronální izoforma syntézy oxidu dusnatého, která je inhibována.
21. 23. Použití sloučeniny obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 5 nebo jejího optického izomeru nebo racemátů nebo její farmaceuticky použitelné soli, pro výrobu léku pro léčbu nebo profylaxi hypoxie nebo cévní mozkové příhody nebo ischemie nebo neurodegenerativních stavů nebo schizofrenie nebo bolesti nebo migrény anebo pro prevenci a reverzní toleranci k opiátům a diazepinům anebo pro léčbu lékové závislosti.
22. 24. Použití podle nároku 23, kde stav je vybrán ze skupiny obsahující hypoxii, ischemii, cévní mozkovou příhodu, amyotropní laterální sklerózu, Huntingtonovu chorobu, Parkinsonovu nemoc, schizofrenii a bolest.

    25. příhoda. Použití podle nároku 24, kde stav je cévní mozková 26. laterální Použití podle . skleróza. nároku 24, kde stav je amyotropní 27 . Použití podle nároku 24, kde stav je bolest. 28 . choroba. Použití podle nároku 24, kde stav je Huntingtonova 29. nemoc. Použití podle nároku 24, kde stav je Parkinsonova 30 . Použití podle nároku 24, kde stav je schizofrenie.

    31. Použití sloučeniny obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 5 nebo jejího optického izomerů nebo racemátu nebo její farmaceuticky použitelné soli, v kombinaci s opiátovým analgetikem, zejména morfinem, pro výrobu léku pro léčbu nebo profylaxi bolesti.

    32. Použití sloučeniny obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 5 nebo jejího optického izomerů nebo racemátu nebo její farmaceuticky použitelné soli, v kombinaci s L-Dopou, pro výrobu léku pro léčbu nebo profylaxi

    Parkinsonovy nemoci.

    33. Proces přípravy sloučeniny obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 5 nebo jejího optického izomerů nebo racemátu, nebo její farmaceuticky použitelné soli, vyznačující se tím, že zahrnuje:

    (a) přípravu sloučeniny obecného vzorce (I) reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce (II) kde

    Pu má význam uvedený v nároku I, se sloučeninou obecného vzorce (III)

    L

    I kde

    R¹ má význam uvedený v nároku 1 a

    L je odstupující skupina, nebo její adiční solí s kyselinou (b) příprava sloučeniny obecného vzorce (I) reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce (IV) kde má význam uvedený v nároku 1 a HA je kyselina, se sloučeninou obecného vzorce (V)

    R¹—=N (V) kde

    R má význam uvedený v nároku 1, (c) příprava sloučeniny obecného vzorce (I) reakcí sloučeniny obecného vzorce (VI) • ·

    Ri kde

    R¹ má význam uvedený v nároku 1, se sloučeninou obecného vzorce (VII) (VÍZ)

    R2 — L kde

    R² má význam uvedený v nároku 1 L je odstupující skupina nebo (d) příprava sloučeniny obecného vzorce (I), vyznačující se t i m, že R²představuje methyl, reakcí sloučeniny obecného vzorce (VI) s formaldehydem a kyselinou mravenčí;

    a kde je žádoucí nebo potřebná přeměna výsledné sloučeniny obecného vzorce (I) nebo jiné její soli na farmaceuticky použitelnou sůl nebo obrácené a kde je žádoucí přeměna výsledné sloučeniny obecného vzorce (I) na její optický izomer.