CZ388899A3 - Amidinové deriváty jako inhibitory syntasy oxidu dusnatého - Google Patents

Abstract

Jsou poskytnuty nové sloučeniny obecného vzorce (I), ve kterémR1 představuje 2-thienylový nebo 3-thienylový kruh a R2 představuje vodík nebo Cj^alkyl ajejich optické isomery a racemáty ajejich farmaceuticky přijatelné soli, spolu se způsobyjejich přípravy, přípravkyje obsahujícími ajejich použitímpři léčení. Sloučeninyjsou selektivními inhibitoiy neuronálních isoforemsyntasy oxidu dusnatého.

Description

Amidinové deriváty jako inhibitory syntasy oxidu dusnatého

Oblast techniky

Tento vynález se týká nových derivátů amidinu, způsobu jejich přípravy, přípravků je obsahujících a jejich použití při léčbě.

Dosavadní stav techniky

Oxid dusnatý se vytváří v savčích buňkách z L-argininu působením specifických syntas oxidu dusnatého (NOS). Tyto enzymy spadají do dvou odlišných tříd - konstitutivní NOS (cNOS) a indukovatelné NOS (iNOS). V současnosti jsou známy dvě konstitutivní NOS a jedna induktivní NOS. U konstitutivních NOS se relaxace hladkého svalu a regulace krevního tlaku a toku krve účastní endoteliální enzym (ecNOS) , zatímco neuronální enzym (ncNOS) slouží jako neurotransmiter a zdá se, že se účastní regulace různých biologických funkcí jako je cerebrální ischemie. Indukovatelné NOS se obzvláště účastní patogeneze zánětlivých onemocnění. Specifická regulace těchto enzymů by proto měla poskytnout značný potenciál v léčbě široké palety chorobných stavů.

Jako inhibitory NOS byly popsány sloučeniny různých struktur a jejich použití při léčbě je nárokováno, viz například WO 95/09619 (The Wellcome Foundation) a WO 95/11231 (G.D.Searle). Přihlašovatel v předchozí době ve WO 95/05363 a WO 96/01817 zveřejnil deriváty amidinu, které jsou inhibitory NOS, které vykazují jistou selektivitu při inhibici neuronálního enzymu, ncNOS.

• · · · • · · · · • · · · · ····»· · « • · · · • · · · · · • ·

Nyní se zveřejňuje skupina amidinů, které spadají do generického rozsahu WO 96/01817, ale které ve WO 96/01817 nejsou specificky vyjádřeny. Tyto sloučeniny vykazují překvapivě výhodné vlastnosti a jsou předmětem předložené přihlášky.

Podstata vynálezu

Podle vynálezu je poskytnuta sloučenina obecného vzorce (I):

ve kterém:

R¹ představuje 2-thienylový nebo 3-thienylový kruh a

R² představuje vodík nebo Coalkyl, její optické isomery a racemáty a její farmaceuticky přijatelné soli.

Výhodně R¹ představuje 2-thienylovou skupinu.

Výhodně R² představuje vodík, methylovou skupinu nebo 2-propylovou skupinu.

Obzvláště výhodné sloučeniny podle vynálezu zahrnuj 1:

N-(4-methyl-2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-yl)• · · 9 · 9··· •99' · 999 9 «9 9

999 99 9 9999

9999999 9 9 99 >9 9

9 ··· ····

999 9 99 999 ·· 99

-2-thiofenkarboximidamid,

N-(4-ethyl-2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-yl) -2-thiofenkarboximidamid,

N-(4-propyl-2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-yl)-2-thiofenkarboximidamid,

N-(4-isopropyl-2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-yl)-2-thiofenkarboximidamid,

N-(2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-yl)-2-thiofenkarboximidamid,

N-(2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-yl)-3-thiofenkarboximidamid,

N-(4-methyl-2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-yl)-3-thiofenkarboximidamid a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Více obzvláště výhodné sloučeniny podle vynálezu zahrnuj í:

N-(4-methyl-2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-yl)-2-thiofenkarboximidamid,

N-(4-isopropyl-2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-yl)-2-thiofenkarboximidamid,

N-(2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-yl)-2-thiofenkarboximidamid • Μ

4 * 4 4 4 4 · · · ·

444 44 4 4 · 4 ·

4444 44 4 4 44 44 · • 4 444 4444

444 4 44 444 44 44

- 4 a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Pokud není označeno jinak, pojem C_x_₄alkyl, na nějž se zde odkazuje, označuje alkylovou skupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem, která má od 1 do 4 atomů uhlíku. Příklady takových skupin zahrnují methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl a terč.-butyl.

Předložený vynález zahrnuje sloučeniny obecného vzorce (I) ve formě solí, obzvláště adiční soli s kyselinou. Vhodné soli zahrnují soli tvořené jak s kyselinami organickými, tak anorganickými. Takové adiční soli s kyselinou budou normálně farmaceuticky přijatelné ačkoliv soli farmaceuticky nepřijatelných kyselin mohou být užitečné při přípravě a čištění příslušné sloučeniny. Výhodné soli tedy zahrnují soli vytvořené z kyseliny chlorovodíkové, bromovodíkové, sírové, fosforečné, citrónové, vinné, mléčné, pyrohroznové, octové, jantarové, fumarové, maleinové, methansulfonové a benzensulfonové.

Podle tohoto vynálezu je dále poskytnut způsob přípravy sloučenin obecného vzorce (I) a jejich optických isomerů a racemátů a farmaceuticky přijatelných solí, který zahrnuje:

(a) přípravu sloučeniny obecného vzorce (I) reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce (II):

(II)

9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9

9999 9 9 9 9 99 99 9

9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 999 9 9 9 9

- 5 ve kterém

R² jak je definováno výše, se sloučeninou obecného vzorce (III) nebo její adični soli s kyselinou:

(III)

Rve kterém

R¹ je jak je definováno výše a

L je odštěpitelná skupina, (b) přípravu sloučeniny obecného vzorce (I) reakci odpovídájici sloučeniny obecného vzorce (IV):

ve kterém

R² je jak je definováno výše a

HA je kyselina, se sloučeninou obecného vzorce (V):

R¹ = N. (V) ve kterém

R¹ je jak je definováno výše, • 9 ·» 9 99 9 9 • 9 9 9 9 99 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9

9999 9 9 9 · 9 · ·· 9

9 9 9 9 9 9 9 9

999 9 99 999 99 99

- 6 (c) přípravu sloučeniny obecného vzorce (I), ve kterém R² představuje C_x_₄alkyl, reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce (I) , ve kterém R² představuje vodík, se sloučeninou obecného vzorce (VI):

R³-L (VI) ve kterém

R³ představuje C_x.₄alkyl a

L je odštěpitelná skupina, nébo (d) přípravu sloučeniny obecného vzorce (I), ve kterém R² představuje methylovou skupinu, reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce (I), ve kterém R² představuje vodík, s formaldehydem a kyselinou mravenčí, a kde je to požadované nebo nezbytné, se vzniklá sloučenina obecného vzorce (I) nebo její jiná sůl, převede na její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo naopak, a kde je to požadované, se vzniklá sloučenina obecného vzorce (I) převede na její optický isomer.

Ve způsobu (a) bude reakce probíhat při míchání směsi reaktantů ve vhodném rozpouštědle, například, N-methyl-2-pyrrolidinu nebo nižším alkanolu jako je ethanol, isopropanol nebo terciární butanol, při teplotě mezi teplotou místnosti a teplotou zpětného toku rozpouštědla. Reakční čas bude mezi jinými záviset na rozpouštědle a povaze odštěpitelné skupiny a může být až 48 hodin, avšak typicky bude mezi 1 až 24 hodinami. Vhodné odštěpitelné skupiny mohou zahrnovat thioalkyl, sulfonyl, trifluormethylsulfonyl, halogenid, alkylalkoholy, arylalkoholy a tosylové skupiny, jiné jsou uvedeny v • · • ft • ftftft

- 7 Advanced Organic Chemistry, J. March, 3. vydáni, str.

315 (1985), a jsou v oboru dobře známy.

Ve způsobu (b) se reakce výhodně provádí udržováním směsi dvou sloučenin za přítomnosti vhodného rozpouštědla při zpětném toku po několik hodin, přičemž je reakční teplota dostatečně vysoká, aby kondensace probíhala rychle, ale ne dostatačně vysoká k tomu, aby došlo k rozkladu vytvořeného amidinu. Reakční teplota se může měnit v rozpětí od teploty místnosti do teploty okolo 250 °C, ačkoliv je výhodné provádět reakci při teplotách od okolo 100°C do 200°C. Zjišťujeme, že obzvláště vhodným rozpouštědlem, je o-dichlorbenzen. Zjišťujeme také, že je často užitečné přidat 4-dimethylaminopyridin jako katalyzátor. Při chlazení se vytvoří 2 vrstvy, rozpouštědlo může být slito a reakční směs zpracována přidáním vodné báze. Alternativně, kde jsou reaktanty rozpustné v rozpouštědle, může být rozpouštědlo odpařeno ve vakuu a reakční směs zpracována přidáním vody. Kyselina HA může být organická nebo anorganická kyselina, například kyselina chlorovodíková, bromovodíková, jodovodíková, sírová, dusičná, fosforečná, octová, mléčná, jantarová, fumarová, jablečná, maleinová, vinná, citrónová, benzoová nebo methansulfonová. Dáváme přednost tomu, že HA je kyselina halogenovodíková.

Ve' způsobu (c) bude reakce probíhat za standardních podmínek, například reakcí dvou sloučenin v inertním rozpouštědle jako je DMF za bázických podmínek při vhodné teplotě, typicky teplotě místnosti, po dobu až 72 hodin nebo dokud reakce neproběhne úplně. Často jsme zjistili, že je žádoucí, aby byl amin, dříve, než bude reagovat se slučeninou obecného vzorce (VI), vystaven působení NaH. Vhodné odštěpitelné skupiny L jsou zmíněny výše. Dáváme přednost tomu, když L představuje halogenid, obzvláště bromid.

Ve způsobu (d) bude reakce typicky probíhat při zpětném toku reakční směsi po dobu až 4 hodin nebo dokud reakce neproběhne úplně.

Soli sloučenin obecného vzorce (I) mohou být vytvořeny reakcí volné báze, nebo její soli, enanciomeru nebo tautomeru s jedním nebo více ekvivalenty příslušné kyseliny. Reakci lze provádět v rozpouštědle nebo v prostředí, ve kterém je sůl nerozpustná nebo v rozpouštědle, ve kterém je sůl rozpustná, například ve vodě, dioxanu, ethanolu, tetrahydrofuranu nebo diethyletheru, nebo ve směsi rozpouštědel, která může být odstraněna ve vakuu nebo sušením za mrazu. Reakce může také být metathetickým procesem nebo může být prováděna na iontoměničové pryskyřici.

Sloučeniny obecného vzorce (II) lze připravit redukcí sloučeniny obecného vzorce (VII)

ve kterém

R² je jak je definováno výše.

Redukce může probíhat za četných podmínek, například těch, které jsou popsány v J. March Advanced Organic ·« ·· • · · • · · • · · • · · ···· · · • ·

Chemistry na stránkách 1103 a 1104. Tyto podmínky zahrnují katalytickou hydrogenaci, použití kovového Zn, Sn nebo Fe, A1H₃-A1C1₃, sulfidy a jiné. Upřednostňujeme provádění reakce hydrogenaci za atmosférického tlaku za přítomnosti katalyzátoru palladia na uhlí, dokud reakce neproběhne úplně, typicky po 3 až 6 hodin nebo redukcí za použití kovového zinku v kyselině octové a methanolu.

Sloučeniny obecného vzorce (VII) mohou být připraveny cyklizací sloučeniny obecného vzorce (VIII):

ve kterém

R² je jak je definováno výše a

L je odštěpitelná skupina, výhodně fluor, nebo cyklizací sloučeniny obecného vzorce (IX)

R2 ve kterém

R² je jak je definováno výše a

L je odštěpitelná skupina.

Sloučeniny obecného vzorce (VIII) mohou být připraveny reakcí sloučeniny obecného vzorce (X):

Λ

0,N

CHO (X) • · ·· · ·· ·· • 9 « · · 9 · · 9 9 «

999 9 · 9 · · 9 9

9999999 9 9 99 99 9 • 9 · · · « · 9 ·

999 9 ·· 999 99 99

- 10 ve kterém

L je odštěpitelná skupina, výhodně fluor, se sloučeninou obecného vzorce (XI):

R2 ve kterém

R² je jak je definováno výše, procesem redukční aminace.

Jiné syntézy sloučenin obecných vzorců (VIII) a (IX) budou odborníkovi v oboru ihned zřejmé. Sloučeniny obecných vzorců (VIII) nebo (IX) mohou cyklizovat přímo na sloučeninu obecného vzorce (VII) bez potřeby předchozí isolace. Cyklizační reakce mohou také probíhat při odstranění chránících skupin. Ve výše uvedených reakcích může být žádoucí učinit nukleofilní skupinu -OH ve sloučeninách obecných vzorců (VIII) a (IX) aktivnější tím, že se vystaví působení báze.

Sloučeniny obecného vzorce (VII) mohou také být připraveny nitrací. sloučeniny obecného vzorce (XII):

ve kterém • φ φ · · • φ φ φ · φ • φ φ φ · • φ φ φ

- 11 je jak je definováno výše.

Nitrační reakce bude probíhat za podmínek odborníkovi v oboru dobře známých, například za působení kyseliny dusičné a kyseliny sírové nabo dusičnanu draselného a kyseliny sírové, případně v inertním organickém rozpouštědle.

Také může být vhodné připravit sloučeniny obecného vzorce (VII) nitraci karbonylového nebo dikarbonylového derivátu sloučeniny obecného vzorce (XII), kterýžto nitrovaný karbonylový nebo dikarbonylový derivát může být redukován na požadovanou sloučeninu obecného vzorce (VII) za použití například diboranu.

Sloučeniny obecných vzorců (VII) a (XII), stejně jako jisté karbonylové a dikarbonylové deriváty právě zmíněných sloučenin obecného vzorce (XII) mohou také být připraveny jednou z četných metod přípravy bicyklických heterocyklických sloučenin.

Sloučeniny obecného vzorce (XII), kde R² představuje vodík, mohou také být připraveny syntézou založenou na expansi kruhu, aby se převedl cyklický keton na cyklický amid (Grunewald a Dahanukar, J. Heterocyklic Chem., 31, 1609 - 1617 (1994)).

Sloučenina vzorce (XIII):

(XIII) ·· ·· » · · 4 ► · · 4 » · · 4 • · ···· ··

- 12 může tedy být převedena na sloučeninu vzorce (XIV):

působením azidu sodného v kyselině. Další detaily o reakčních podmínkách mohou být získány odkazem na výše zmíněnou Grunewaldovu a Dahanukarovu publikaci.

Odborníkovi v oboru bude zřejmé, že sloučeniny vzorce (XIV) mohou být žádoucím způsobem připraveny v nitrované formě. Nitrace může být dosaženo působením kyseliny dusičné a kyseliny sírové nebo dusičnanu draselného a kyseliny sírové na nenitrovaný analog za standardních podmínek.

Meziprodukty mohou být připraveny jako takové nebo v chráněné formě. Obzvláště mohou být chráněny skupiny aminová a hydroxylová. Vhodné chránící skupiny jsou popsány v základním textu Protective Groups in Organic Synthěsis, 2. vydání (1991), Greene and Wuts. Skupiny chránící aminoskupinu, které mohou být zmíněny, zahrnují alkoxykarbonylovou skupinu, jako je terč.-butoxykarbonyl, fenylalkyloxykarbonylovou skupinu, jako je benzyloxykarbonyl, nebo trifluoracetat. Deprotekce bude normálně probíhat při působení vodné báze nebo vodné kyseliny.

Sloučeniny obecných vzorců (VII), (VIII), (IX), (XI) a (XII) , ve kterých R² představuje C^alkyl, mohou také být připraveny alkylací odpovídající sloučeniny, ve které R² představuje vodík, podle postupu (c) uvedeného výše.

• · ··»»

- 13 Sloučeniny obecného vzorce (IV) mohou být připraveny postupy analogickými těm, které jsou popsány pro přípravu sloučenin obecného vzorce (II). Sloučeniny obecného vzorce (IV) mohou být převedeny na odpovídající sloučeniny obecného vzorce (II) působením báze. Sloučeniny obecného vzorce (II) mohou být převedeny na odpovídající sloučeniny obecného vzorce (IV) působením protické kyseliny HA, například jedné z těch na seznamu uvedeném výše.

Sloučeniny obecného vzorce (III) jsou buď známy nebo mohou být připraveny známými postupy. Například sloučeniny obecného vzorce (III), ve kterém L představuje thioalkyl, mohou být připraveny tak, že na odpovídající thioamid obecného vzorce (XV):

S ve kterém je jak je definováno výše se působí alkylahalogenidem za podmínek odborníkovi v oboru dobře známých.

Alternativně mohou být adiční soli sloučenin obecného vzorce (III) , ve kterém L je thioalkyl, s kyselinou připraveny reakcí nitrilu obecného vzorce (V) s alkylthiolem a kyselinou, například kyselinou chlorovodíkovou, v rozpouštědle jako je dichlormethan nebo diethylether.

Sloučeniny obecných vzorců (V), (VI), (X), (XI), (XIII), (XIV) a (XV) jsou buď známy nebo mohou být • ·

• *	* ·	•	• *
• ·	ft ft	• ·	•	ft	•
• ftftftft	• · ·	•	0 ft	•	•
• ·	• ·	•	•	•	•
·· ·	• ·	• ftft	• ·

- 14 připraveny konvenčními postupy, které jsou známy jako takové.

Odborníkovi v oboru bude zřejmé, že může být žádoucí chránit amonoskupinu nebo jinou reaktivní skupinu v meziproduktu použitím chránící skupiny jak je popsáno ve základním textu Protective Groups in Organic Synthesis, 2. vydání (1991), Greene and Wuts. Vhodné skupiny chránící aminoskupinu jsou zmíněny výše.

Sloučeniny podle vynálezu a meziprodukty mohou být isolovány z jejich reakčních směsí a pokud je to nezbytné, dále čištěny použitím standardních postupů.

Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou existovat v tautomerních, enantiomerních nebo diastereoisomerních formách, z nichž všechny jsou zahrnuty do rozsahu tohoto vynálezu. Různé optické isomery mohou být isolovány dělením racemické směsi sloučenin použitím konvenčních technik, například frakční krystalizace nebo HPLC. Alternativně mohou být jednotlivé enantiomery připraveny reakcí vhodného opticky aktivního výchozího materiálu za reakčních podmínek, které nezpůsobí racemisaci.

Meziprodukty také mohou existovat v enantiomerních formách a mohou být použity jako čištěné enantiomery, diastereomery, racemáty nebo jejich směsi.

Sloučeniny obecného vzorce (I) mají užitečnou inhibiční aktivitu na syntasu oxidu dusnatého a obzvláště vykazují dobrou selektivitu pro inhibici neuronální isoformy syntasy oxidu dusnatého. Jsou tedy užitečné při léčbě nebo profylaxi onemocnění lidí nebo stavů u lidí,

9« « ·* ·· • 999 9 * · · • 9 9 9 9 9 9

Q) 4 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 • 9 9 99 99 99

- 15 při kterých syntéza nebo nadměrná syntéza oxidu dusnatého syntasou oxidu dusnatého hraje roli. Příklady takových nemocí nebo stavů zahrnují hypoxii, jako v případech srdeční blokády, mrtvice a neonatální hypoxie, neurodegenerativních poruch včetně degenerace nervů a/nebo nekrózy nervů při takových poruchách, jako jsou ischemie, hypoxie, hypoglykémie, epilepsie a při zevních poraněních (jako jsou poranění míchy a hlavy), hyperbarických kyslíkových křečí a toxicity, demence, například presenilní demence, Alzheimerovy nemoci a demence související s AIDS, Syndenhamovy chorey, Parkinsonovy nemoci, Huntingtonovy nemoci, amyotrofické laterální sklerózy, Korsakoffovy nemoci, imbecility související s poruchami mozkových cév, poruch spánku, schizofrenie, úzkosti, depresí, sezónní afektivní poruchy, poruchy ze změny časových pásem, depresí nebo jiných symptomů spojených s premenstruáiním syndromem (PMS), úzkosti a septického šoku. Sloučeniny obecného vzorce (I) jsou také užitečné při léčbě a zmírňování průběhu akutní nebo chronické bolesti provázející zánět nebo neuropatií, nebo bolestí centrálního původu a při léčbě a profylaxi zánětu. U sloučenin obecného vzorce (I) lze také očekávat, že vykáží aktivitu při prevenci a zvratu tolerance na opiáty a diazepiny, při léčení lékové závislosti, při léčení migrény a jiných cévních bolestí hlavy. Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou také vykazovat užitečnou imunosupresivní aktivitu a mohou být užitečné při léčení poruch žaludeční a střevní motility a při indukci porodu. Tyto sloučeniny mohou také být užitečné při léčbě rakovin, které exprimují syntasu oxidu dusnatého.

U sloučenin obecného vzorce (I) se předpokládá, že budou obzvláště užitečné při léčení nebo profylaxi hypoxie • · · ·· · · · · * ······· · · ·· ·· · • · ·«· · · · · ··· t ·· ··· ·· ··

- 16 nebo mrtvice nebo ischemie nebo neurodegenerativních stavů nebo schizofrenie nebo migrény nebo při prevenci a zvratu tolerance na opiáty a diazepiny nebo při léčení drogové závislosti nebo při léčení bolesti a obzvláště při léčení nebo profylaxi hypoxie nebo mrtvice nebo ischemie nebo neurodegenerativních poruch nebo schizofrenie nebo bolesti. Máme obzvláštní zájem na stavech zvolených ze skupiny sestávající z hypoxie, ischemie, mrtvice, bolesti, schizofrenie, Parkinsonovy nemoci, Huntingtonovy nemoci a amyotrofické laterální sklerosy.

Při léčení bolesti se předpokládá, že sloučeniny obecného vzorce (I) budou užitečné buď samotné nebo v kombinaci s jinými látkami, jako jsou opiáty, obzvláště morfin.

Při léčení Parkinsonovy nemoci se předpokládá, že sloučeniny obecného vzorce (I) budou užitečné buď samotné nebo v kombinaci s jinými látkami, jako je L-Dopa.

U profylaxe se očekává, že bude obzvláště relevantní při léčení osob, které byly postiženy předchozí episodou příslušné nemoci nebo stavu nebo jsou jinak považovány za vystavené zvýšenému riziku. Osoby s rizikem, že se u nich vyvine určitá nemoc nebo stav, obecně zahrnují ty, které mají rodinnou historii nemoci nebo stavu, nebo ty, které byly identifikovány prostřednictvím genetického testování nebo vyhledávání, že mají obzvláštní sklon k vyvinutí nemoci nebo stavu.

Podle dalšího hlediska tohoto vynálezu tedy předkládáme sloučeninu obecného vzorce (I) nebo její optický isomer nebo racemát nebo její farmaceuticky přijatelnou

- 17 sůl pro použití jako léčiva.

Podle jiného rysu tohoto vynálezu předkládáme použití sloučeniny obecného vzorce (I) nebo jejího optického isomeru nebo racemátu nebo její farmaceuticky přijatelné soli pro výrobu léčiva pro léčení nebo profylaxi výše zmíněných nemocí nebo stavů, a způsob léčení nebo profylaxe jedné z výše zmíněných nemocí nebo stavů, která zahrnuje podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo jejího optického isomeru nebo racemátu nebo její farmaceuticky přijatelné soli osobě, která je postižena nebo má sklon k takové nemoci nebo stavu.

Při výše zmíněných terapeutických indikacích se bude podaná dávka samozřejmě měnit v závislosti na použité sloučenině, způsobu podání a požadované léčbě. Obecně se však dosáhne uspokojivých výsledků, pokud jsou sloučeniny podávány člověku v denní dávce mezi 0,5 mg a 2000 mg (měřeno jako aktivní složka) za den, obzvláště v denní dávce mezi 2 a 500 mg.

Sloučeniny obecného vzorce (I) a jejich optické isomery a racemáty a farmaceuticky přijatelné soli mohou být použity samotné nebo ve formě příhodných léčivých přípravků. Podání je možné enterálně (včetně orálně, sublingválně nebo rektálně), intranasálně, topicky nebo jinými parenterálními cestami, na které však výčet není omezen. Konvenční postupy pro výběr a přípravu vhodných farmaceutických přípravků jsou popsány například ve Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs, M.E. Aulton, Churchill Livingstone, 1988.

Podle tohoto vynálezu je poskytnut farmaceutický • 9

- 18 přípravek obsahující výhodně méně než 95 % hmotnostních a výhodněji méně než 50 % hmotnostních sloučeniny obecného vzorce (I) nebo jejího optického isomeru nebo racemátu, nebo její farmaceuticky přijatelné soli, ve směsi s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem. Přípravky mohou příležitostně také obsahovat druhou farmakologicky aktivní složku, jako je L-Dopa nebo opiátové analgetikum, jako je morfin.

Také předkládáme způsob přípravy takových farmaceutických přípravků, který zahrnuje míchání složek.

Příklady takových ředidel a nosičů jsou: pro tablety a dražé: laktosa, škrob, mastek, kyselina stearová, pro kapsule: kyselina vinná nebo laktosa, pro roztoky pro injekci: voda, alkoholy, glycerin, rostlinné oleje, pro čípky: přírodní nebo ztužené oleje nebo vosky.

Přípravky ve formě vhodné pro orální, to jest esofageální, podání zahrnují tablety, kapsule a dražé, přípravky s pomalým uvolňováním zahrnují ty, ve kterých je aktivní složka vázána na iontoměničovou pryskyřici, které je případně obalená difusní bariérou, aby se modifikovaly uvolňovací vlastnosti pryskyřice.

Enzym syntasa oxidu dušnatého má mnoho isoforem a sloučeniny obecného vzorce (I) a jejich optické isomery a racemáty a jejich farmaceuticky přijatelné soli mohou být testovány na aktivitu inhibice syntasy oxidu dušnatého podle postupů založených na těch, které popsali Bredt a Snyder v Proč. Acad. Sci., 87, 682 - 685 (1990). Syntasa oxidu dušnatého přeměňuje ³H-L-arginin na ³H-L-citrullin, který může být oddělen chromatografií na kationtoměniči a • · · φφφφ φ φ • · · • φ · φ · φφφ· φφφ φ φφ φφφ ·· ··

- 19 kvantifikován ítáním scintilace.

Test aktivity inhibice neuronálni syntasy oxidu dusnatého

Enzym se izoluje z hippokampu nebo mozečku krys.

Mozeček nebo hippokampus samce krysy Sprague-Dawley (250 až 270 g) se vyjme po anestezii zvířete provedené CO₂ a dekapitaci. Mozečkový nebo hippokampální supernatant se připraví homogenizací v 50mM Tris-HCl s lmM pufrem EDTA (pH 7,2 při 25 °C) a odstředěním při 20 000 g po dobu 15 minut. Zbytkový L-arginin se ze supernatantu odstraní chromatografii skrz sloupec sodné formy Dowexu AG-50W-X8 a následně vodíkové formy Dowexu AG-50W-X8 a dalším odstředěním při 1000 g po dobu 30 sekund.

Pro stanovení se přidá 25 μΐ konečného supernatantu do každé z 96 jamek (z filtrační plotny s 96 jamkami), obsahujících buď 25 μΐ testovacího pufru (50 mM HEPES, 1 mM EDTA, 1,5 mM CaCl₂, pH 7,4) nebo 25 μΐ testované sloučeniny v pufru při 22 °C a 25 μΐ úplného testovacího pufru (50 mM HEPES, 1 mM EDTA, 1,5 mM CaCl₂, 1 mM DTT, 100 μΜ NADPH, 10 pg/ml kalmodulinu, pH 7,4). Následuje 10 minut ustanovování rovnováhy. 25 μΐ roztoku L-argininu (o koncentraci 18 μΜ ^-L-argininu, 96 nM ³H-L-argininu) se přidá do každé jamky, aby se reakce započala. Reakce se zastaví po 10 minutách přidáním 200 μΐ suspenze ukončovacího pufru (20 mM HEPES, 2 mM EDTA, pH 5,5) a Dowexu AG-50W-X8 o velikosti zrn 1,8 až 1,3 mm.

Značený L-citrullin se od značeného L-argininu oddělí filtrací každé filtrační plotny a 75 μΐ každé reakční směsi se přidá ke 3 ml scintilačního koktejlu. L-Citrullin se pak kvantifikuje čítáním scintilace.

»«»· ·

- 20 V typickém experimentu, kde se využívá mozečkový supernatant, se základní aktivita zvýší o 20 000 rozpadů za minutu/ml vzorku nad reakční referenční vzorek, který má aktivitu 7 000 rozpadů za minutu/ml. Referenční standard, N-nitro-L-arginin, který poskytuje 80% inhibici syntasy oxidu dusnatého při koncentraci 1 μΜ, se při stanovení testuje, aby se postup ověřil.

Test aktivity inhibice endotheliální syntasy oxidu dusnatého

Enzym se isoluje z endotheliálních buněk lidské umbilikální vény (HUVECs) postupem založeným na tom, který je popsán Pollockem a kol. v Proč. Nati. Acad. Sci., 88, 10480 - 10484 (1991). HUVECs byly získány od Clonetics Corp (San Diego, CA, USA) a kultivovány do souvislé vrstvy. Buňky mohou být udržovány do 35 až 40 přenesení bez významné ztráty výtěžku syntasy oxidu dusnatého. Když buňky dosáhnou souvislé vrstvy, suspendují se v Dulbeccově fosfátem pufrovaném fyziologickém roztoku, 10 minut se odstřeďují při frekvenci otáček 800 za minutu a buněčná peleta se potom homogenizuje v ledově studené směsi 50mM Tris-HCl, lmM EDTA, 10% glycerolu, ImM fenylmethylsulfonylf luoridu a 2μΜ leupeptinu při pH 4,2. Po 60 minutách odstřeďování při frekvenci otáček 34 000 za minutu se peleta solubilizuje v homogenizačním pufru, který také obsahuje 20mM CHAPS. Po 30 minutách inkubace na ledu se suspenze 30 minut odstředůje při frekvenci otáček 34 000 za minutu. Vzniklý supernatant se skladuje při -80 °C dokud není použit.

Pro stanovení se přidá 25 μΐ konečného supernatantu • · • · · · · 9 9 9 9 9

9999 9 9 9 9 99 9 9 · • · · · · · · · * ··· · ·· 999 99 99

- 21 do každé z 12 testovacích zkumavek obsahujících 25 μΐ roztoku L-argininu (o koncentraci 12 μΜ ^-L-argininu, 64 nM ³H-L-argininu) a buď 25 μΐ testovacího pufru (50 mM HEPES, 1 mM EDTA, 1,5 mM CaCl₂, pH 7,4) nebo 25 μΐ testované sloučeniny v pufru při 22 °C. Do každé testovací zkumavky se přidá 25 μΐ úplného testovacího pufru (50 mM HEPES, 1 mM EDTA, 1,5 mM CaCl₂, 1 mM DTT, 100 μΜ NADPH, pg/ml kalmodulinu, 12 μΜ tetrahydrobiopterinu, pH 7,4), aby se reakce započala a reakce se po 10 minutách zastaví přidáním 2 ml ukončovacího pufru (20 mM HEPES, 2 mM EDTA, pH 5,5).

Značený L-citrullin se oddělí od značeného L-argininu chromatografií na sloupci Dowexu AG-50W-X8 o rozměrech částic 0,074 až 0,038 mm. lml dávka každé ukončené reakční směsi se přidá do individuálního 1 ml sloupce a eluentu spojeného s tím ze dvou promytí 1 ml destilované vody a 16 ml scintilačního koktejlu.

L-Citrullin se potom kvantifikuje čítáním scintilace.

V typickém experimentu se základní aktivita zvýší o 5 000 rozpadů za minutu/ml vzorku nad reakční referenční vzorek, který má aktivitu 1 500 rozpadů za minutu/ml.

Referenční standard, N-nitro-L-arginin, který poskytuje 70 až 90% inhibici syntasy oxidu dusnatého při koncentraci 1 μΜ, se při stanovení testuje, aby se postup ověřil.

V testech aktivity inhibice syntasy oxidu dusnatého se aktivita sloučeniny vyjadřuje jako IC₅₀ (koncentrace léčivé látky, která v testu poskytuje 50% inhibici enzymu). Hodnoty IC₅₀ pro testované sloučeniny byly na začátku odhadnuty z inhibiční aktivity 1, 10 a 100μΜ roztoků sloučenin. Sloučeniny, které inhibovaly při ·· ···· · ·· ·· » · · ι » · · I » · · 4 » · · 4 ·· 4·

- 22 koncentraci 10 μΜ přinejmenším z 50 % byly znovu podrobeny testu za použití vhodnějších koncentrací, tak aby mohlo být určeno IC₅₀.

Při testech uvedených výše sloučeniny z příkladů 1 až 7 vykázaly hodnoty IC₅₀pro inhibici neuronální syntasy oxidu dusnatého menší než 10 μΜ a dobrou selektivitu pro inhibici neuronální isoformy enzymu, což naznačuje, že se u nich dá předpovědět, že vykáží užitečnou terapeutickou aktivitu.

Ve srovnání jinými sloučeninami mají sloučeniny obecného vzorce (I) a jejich optické isomery a racemáty a jejich farmaceuticky přijatelné soli tu výhodu, že mohou být méně toxické, více účinné, déle působící, že mohou mít širší spektrum aktivity, mohou být účinnější, selektivnější pro neuronální isoformu syntasy oxidu dusnatého, mohou méně vést k nežádoucím účinkům, mohou být snadno absorbovány nebo mít jiné užitečné farmakologické vlastnosti.

Vynález je ilustrován následujícími příklady.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Dihydrochlorid N- (4-methyl-2,3,4,5-tetrahydro-l, 4-benzoxazepin-7-yl)-2-thiofenkarboximidamidu

a) Hydrochlorid 2-[(2-fluor-5-nitrobenzyl)(methyl)amino]ethanolu • · • · • · * • · • tetete • ·· ·· • · · ·· · • ···· • ·· ·· · • ···· ··· ·· ··

- 23 K 2-fluor-5-nitrobenzaldehydu (6,0 g, 35 mmol) v absolutní ethanolu (60 ml) se přidá 2-(methylamino)ethanol (2,9 ml, 35 mmol) a 8M boran-pyridinový komplex (4,4 ml, mmol). Směs se 48 hodin míchá, odpaří se, rozpustí se v okyselené vodě a extrahuje se methylchloridem (3x50 ml). Spojené extrakty se promyjí vodu, vysuší síranem hořečnatým, zfiltrují a odpaří na olej. Olej se rozpustí v isopropanolu a vystaví se působení HC1 v isopropanolu. Sůl se shromáždí filtrací (2,81 g, 30 %), teplota tání 163,3 až 164,8 °C.

b) Hydrochlorid 4-methyl-7-nitro-2,3,4,5-tetrahydro1,4-benzoxazepinu

K 2-[(2-fluor-5-nitrobenzyl)(methyl)amino]ethanolu (3,3 g, 12 mmol) v DMF (10 ml) se přidá 60% hydrid sodný (1,1 g, 27 mmol). Směs se 18 hodin zahřívá na 100 °C, vlije se do vody a extrahuje se ethylacetátem (3x50 ml). Spojené extrakty se promyjí vodou, vysuší síranem hořečnatým, zfiltrují a odpaří na olej, který ztuhne. Tuhá látka se rozpustí v isopropanolu a vystaví se působení HC1 v isopropanolu. Sůl se shromáždí filtrací (1,52 g, 52 %), teplota tání 233 až 235 °C (rozklad).

c) 4-Methyl-2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-ylamin

4-Methyl-7-nitro-2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin (1,52 g, 6,0 mmol) se rozpustí v methanolu (100 ml) a hydrogenuje se při tlaku 351,85 kPa za přítomnosti katalytického množství 10% palladia na uhlí. Po 1 hodině se směs zfiltruje skrz skleněnou vrstvu a odpaří se na olej, který se ihned použije v dalším kroku.

• · 4 ·· · ····

4444 44 4 444 ·»· • 4 444 4444

444 4 44 444 44 44

- 24 d) Dihydrochlorid N-(4-methyl-2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-yl)-2-thiofenkarboximidamidu

Odparek z předchozí reakce se rozpustí v N-methyl-2-pyrrolidinonu (10 ml) a k tomuto roztoku se přidá hydrojodid methylesteru kyseliny 2-thiofenkarboximidothioové (1,81 g, 6,6 mmol). Směs se míchá 24 hodin při 45 °C, vlije se do alkalizované vody a extrahuje se ethylacetátem (3x100 ml). Spojené extrakty se promyji vodou, vysuší se síranem hořečnatým, zfiltruje a odpaří na tuhou látku, která se rekrystalizuje z methylenchloridu.

Tuhá látka se rozpustí v ethanolu, vystaví se působení HCI v isopropanolu a trituruje se etherem. Sůl se shromáždí filtrací (0,58 g, 27 %), teplota tání 172 až 175 °C.

Příklad 2

Dihydrochlorid N-(4-ethyl-2,3,4,5-tetrahydro-l,4benzoxazepin-7-yl)-2-thiofenkarboximidamidu

Podle postupu popsaného v příkladu 1, s tím, že se vychází z 2-fluor-5-nitrobenzaldehydu (6,0 g, 35 mmol) a 2-(ethylamino)ethanolu (3,2 g, 35 mmol), se připraví sloučenina pojemnovaná v záhlaví. Teplota tání 138 až 141 °C.

Příklad 3

Hemifumarat N-(4-propyl-2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-yl)-2-thiofenkarboximidamidu • · φφφφ • · ·· φφφ φ φ • φ φ φ φ · φ φφφ · φφ φ φφ φφ φ φ φ φ φ φ φ φ · φ φ φ φ • Φ φφ

- 25 a) 2,3,4,5-Tetrahydro-l,4-benzoxazepin-5-on

Κ 4-chromanonu (50 g, 340 mmol) v kyselině octové (670 ml) se po kapkách přidá azid sodný (66,31 g, 1,02 mol) a koncentrovaná kyselina sírová (100 ml) při 0 °C.

Směs se 4 hodiny zahřívá na 50 °C a potom se ochladí na teplotu místnosti. Směs se vlije na led (1 litr) a alkalizuje se koncentrovaným roztokem hydroxidu amonného. Směs se 24 hodin míchá a tuhá látka se shromáždí filtrací (30,43 g, 55 %), MS ^m/z 164 [M+H]⁺.

b) 7-Nitro-2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-5-on

K 2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-5-onu (30,34 g, 190 mmol) v koncentrované kyselině sírové (600 ml) při 0 °C se po částech přidá dusičnan draselný (20,82 g, 206 mmol) . Směs se 20 minut míchá při 0 °C a potom 4 hodiny při teplotě místnosti. Směs se vlije na led (2 litry) a tuhá látka se shromáždí filtrací. Tuhá látka se zachytí do horkého ethylacetátu a potom se ochladí, aby se získala sloučenina pojmenovaná v záhlaví (8,79 g, 22 %), MS ^m/z 209 [M+H]⁺.

c) Hydrochlorid 7-nitro-2,3,4,5-tetrahydro-l, 4-benzoxazepinu

K 7-nitro-2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-5-onu (8,79 g, 40 mmol) v THF (100 ml) se přidá IM komplex boran-THF (130 ml, 130 mmol). Směs se 4 hodiny zahřívá ke zpětnému toku pod dusíkem. Potom se ochladí na 0 °C, reakce se přeruší 4N HC1 (50 ml) a udržuje při zpětném toku další 1 hodinu. Směs se potom odpaří, naředí «·· • · • · • φ • φ

- 26 vodou (100 ml), alkalizuje 2N NaOH (30 ml) a extrahuje se ethalacetatem (3x100 ml). Spojené extrakty se promyjí vodou, vysuší síranem hořečnatým, zfiltrují a odpaří se na olej, který během stání vykrystalizuje. Tuhá látka se rozpustí v methanolu a vystaví se působení HCI v isopropanolu. Sůl se shromáždí filtrací (7,92 g, 86 %),

MS “/z 195 [M+H]⁺.

d) Hydrochlorid 2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-ylaminu

7-Nitro-2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin (5 g) se rozpustí v methanolu (250 ml) a hydrogenuje se při tlaku 351,85 kPa za přítomnosti katalytického množství 10% palladia na uhlí. Po 1 hodině se směs zfiltruje skrz skleněnou vrstvu a odpaří se na tuhou látku. Tuhá látka se rozpustí v horkém methanolu (20 ml) a vystaví se působení HCI v isopropanolu. Sůl se shromáždí filtrací (3,67 g, 85 %) ,

MS ^ra/z 165 [M+H]⁺.

e) N-(2,3,4,5-Tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-yl)-2-thiofenkarboximidamid

K 2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-ylaminu (3,67 g, 18 mmol) v DMF (60 ml) se přidá hydrojodid methylesteru kyseliny 2-thiofenkarboximidothioové (5,52 g, 19 mmol) . Směs se 24 hodin zahřívá na 50 °C. Vlije se do vody (50 ml), potom do alkalizované vody (150 ml) a nechá se 1 hodinu míchat. Tuhá látka se shromáždí filtrací. Tuhá látka se rozpustí v horkém ethylacetátu, zfiltruje se a naředí se hexanem. Tuhá látka se shromáždí filtrací (3,13 • · · ·

• · · · ·· · • * * · · · · ·· ·»···# ft · · · · · · ♦♦ *·» *· 9 9

- 27 g, 64) , MS ^m/z 274 [M+H]⁺.

f) Hemifumarat N-(4-propyl-2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-yl)-2-thiofenkarboximidamidu

K N-(2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-yl)-2-thiofenkarboximidamidu (1,57 g, 6 mmol) v DMF (75 ml) se přidá uhličitan draselný (9 g) a 1-brompropan (1,48 g, mmol) a katalytické množství jodidu sodného. Směs se 48 hodin míchá a potom se zfiltruje. Tuhá látka se rozpustí ve vodě (50 ml) a extrahuje se methylenchloridem (3x50 ml) . Spojené extrakty se vysuší síranem hořečnatým, zfiltrují se a odpaří na tuhou látku. Tuhá látka se rekrystalizuje z horkého isopropanolu. Tuhá látka se rozpustí v ethylacetátu, vystaví se působení kyseliny fumarové v isopropanolu a trituruje se etherem.

Hemifumaratová sůl se shromáždí filtrací (0,86 g, 39 %), teplota tání 174 °C.

Příklad 4

Hemifumarat N-(4-isopropyl-2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-yl)-2-thiofenkarboximidamidu

a) Oxalat 2-[(2-fluor-5-nitrobenzyl)(isopropyl)amino]ethanolu

Ke kyselině octové (25,76 ml, 450 mmol) a 2-(isopropylamino)ethanolu (51,76 ml, 450 mmol) v suchém THF (750 ml) o teplotě 0 °C se po částech přidá

2-fluor-5-nitrobenzaldehyd (75,88 g, 450 mmol) a triacetoxyborhydridu sodného (141,99 g, 670 mmol). Reakční • · · · <1 «

• 9 · · • S « ·

- 28 směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a 3 hodiny se míchá. Směs se vyjme okyselenou vodou a promyje se methylenchloridem (250 ml), alkalizuje se 50% hydroxidem sodným (150 ml) a extrahuje se methylenchloridem (3x250 ml) . Extrakty se vysuší síranem hořečnatým, zfiltruje se a odpaří na olej. Olej se rozpustí v 95% ethanolu a vystaví se působení kyseliny oxalové v isopropanolu. Oxalatová sůl se shromáždí filtrací (31,2 g, 20 %), teplota tání 106 až 107 °C.

b) 4-Isopropyl-7-nitro-2,3,4,5-tetrahydro-l, 4-benzoxazepin

K 2-[(2-fluor-5-nitrobenzyl)(isopropyl)amino]ethanolu (31,2 g, 90 mmol) v DMSO (250 ml) se přidá 25% roztok hydroxidu sodného (43,2 g, 270 mmol) a směs se 3 hodiny nechá míchat. Reakční smě se naředí na dvojnásobek svého objemu vodou a tuhá látka se shromáždí filtrací.

Filtrát se extrahuje methylenchloridem (3x150 ml), promyje se vodou, vysuší se síranem hořečnatým, zfiltruje se a odpaří se na olej. Tuhá látka a olej se rozpustí v horkém 95% ethanolu, potom se ochladí. Tuhá látka se shromáždí filtrací (17,47 g, 68 %) , MS ^ra/z 237 [M+H]⁺.

c) 4-Isopropyl-2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-ylamin

Ke 4-isopropyl-7-nitro-2,3,4,5-tetrahydro-l, 4-benzoxazepinu (17,46 g) v methanolu (1,5 litru) se po · částech přidá kyselina octová (36 ml) a práškový zinek (36

g) a směs se 3 hodiny míchá. Směs se naředí vodou (1 litr), alkalizuje se koncentrovaným roztokem hydroxidu amonného (250 ml) a extrahuje se ethylacetátem (5x250 ml) .

♦ · » φ φφφφ » • ·

Φ φ φ « ' φ φ • ΦΦ ο

- 29 Extrakty se vysuší síranem hořečnatým, zfitrují se a odpaří na olej (11,34 g, 74 %), která se ihned použije v dalším kroku.

d) Hemifumarat N-(4-isopropyl-2,3,4,5-tetrahydro-l, 4-benzoxazepin-7-yl)-2-thiofenkarboximidamidu

K 4-isopropyl-2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-ylaminu (11,34 g, 50 mmol) v 95% ethanolu (250 ml) se přidá hydrochlorid ethylesteru kyseliny 2-thiofenkarboximidthioové (13,7 g, 66 mmol) a reakční směs se 24 hodin míchá. Směs se odpaří, rozpustí ve vodě (250 ml), promyje se ethylacetátem (150 ml), alkalizuje se 50% roztokem hydroxidu sodného a extrahuje se ethylacetátem (3x150 ml) . Tuhá látka se shromáždí filtrací extraktů. Extrakty se potom vysuší síranem hořečnatým, zfiltrují se a odpaří na tuhou látku. Spojené tuhé látky se rozpustí v horkém ethylacetátu (150 ml) a horké se zfiltrují. Krystaly se shromáždí filtrací (8,26 g). Krystaly a kyselina fumarová (4,2 g) se vyjmou horkým ethylacetátem (750 ml). Hemifumaratová sůl se shromáždí filtrací (8,16 g, 44 %),

MS ^m/z 316 [M+H]⁺.

Příklad 5

N-(2,3,4,5-Tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-yl)-3-thiofenkarboximidamid

a) 2-[(2-Fluor-5-nitrobenzyl)amino]ethanol

K 2-fluor-5-nitro-benzaldehydu (52,4 g, 0,31 mmol) v absolutním ethanolu (500 ml) se přidá ethanolamin (18,93 g, 0,31 mmol) a komplex boran-pyrimidin (31,31 ml, 0,31 :·« • · * · · φ · • φφφφφφ φ • φ · φ «φφ φ ·« *·

- 30 mmol) . Směs se 48 hodin míchá a potom se odpaří. Odparek se okyselí 2,5N kyselinou chlorovodíkovou, extrahuje se methylenchloridem (3x150 ml) a extrakty se odloží. Vodná fáze se alkalizuje 25% vodným roztokem hydroxidu sodného a extrahuje se methylenchloridem (4x200 ml). Tyto extrakty se promyjí nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a odpaří se, aby se získaly žluté krystaly (37,67 g, 57 %), teplota tání 98,5 až 99,5 °C.

b) Hydrochlorid 7-nitro-2,3,4,5-tetrahydro-l, 4-benzoxazepinu

K 2-[(2-fluor-5-nitrobenzyl)(isopropyl)amino]ethanolu (29,13 g, 136 mmol) v DMSO (680 ml) se přidá 25% vodný roztok hydroxidu sodného (65,28 g, 408 mmol). Směs se nechá míchat přes noc při teplotě místnosti, vlije se do vody (1,5 litru) a extrahuje se methylenchloridem (4x800 ml). Spojené extrakty se promyjí vodou, nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým, odpaří se na viskózní olej a okyselí se 2,5N kyselinou chlorovodíkovou, čímž se získá hnědá tuhá látka (24,58 g, 80 %), teplota tání 274 až 276 °C.

c) Hydrochlorid 2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-ylaminu

Sloučenina pojmenovaná v záhlaví se získá z výše uvedeného hydrochloridu 7-nitro-2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepinu katalytickou hydrogenaci, jak je popsána v příkladu 3d).

d) Hydrojodid methylesteru kyseliny 3-thiofenkarboximidothioové

9 9 · · ····«· 0 0 • 9 9 9 * 99 999 ··

9 9 9

9 9 9

9 9 9

9 9

- 31 Sloučenina pojmenovaná v záhlaví se připraví z 3-thiofenkarbothioamidu a methyljodidu postupem analogickým tomu, který je popsán ve WO 95/05363, příklad 1(d). Teplota tání 157 až 158 °C.

e) N-(2,3,4,5-Tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-yl)-3-thiofenkarboximidamid

Hydrochlorid 2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-ylaminu (1,84 g, 8,4 mmol) se rozpustí v 95% ethanolu (40 ml) a přidá se hydrojodid methylesteru kyseliny 3-thiofenkarboximidothioové (2,85 g, 10 mmol). Směs se míchá 2 dny při teplotě místnosti a potom se přes noc zahřívá na 60 °C a ochladí se. Tuhá látka (1,02 g) se shromáždí. Filtrát se odpaří a odparek se vystaví působení ethylacetátu. Vzniklé krystaly se shromáždí a spojí se tuhou látkou získanou předtím. Rozpustí se ve vodě (20 ml) alkalizované koncentrovaným roztokem hydroxidu amonného a etrahují se methylenchloridem (3x30 ml). Organické extrakty se promyjí vodou, vysuší se síranem hořečnatým a odpaří se, aby se získala tuhá látka (0,508 g), teplota tání 150 až 152 °C.

Příklad 6

N-(4-Methyl-2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-yl)-3-thiofenkarboximidamid

a) Hydrochlorid 4-methyl-7-nitro-2,3,4,5-tetrahydro-1,4-benzoxazepinu

- 32 Směs hydrochloridu 7-nitro-2,3,4,5-tetrahydro-1,4-benzoxazepinu (11,53 g, 50 mmol), 37% formaldehydu (25 ml, 335 mmol) a 88% kyseliny mravenčí (15 ml, 340 mmol) se 24 hodin zahřívá na 80 °C, ochladí se a vlije se do vody (150 ml). Suspenze se alkalizuje 25% vodným roztokem hydroxidu sodného, aby se získala hnědá tuhá látka (7,52 g). Vodná vrstva se extrahuje methylenchloridem (3x200 ml), promyje se nasyceným roztokem chloridu sodného a vysuší se síranem hořečnatým, aby se získaly žluté krystaly (1,02 g). Tento vzorek se spojí s tuhou látkou získanou dříve a jako suspenze v isopropanolu (750 ml) se několik hodin udržuje při zpětném toku a potom se zfiltruje. Filtrát se okyselí, aby se získala sloučenina pojmenovaná v záhlaví (9,51 g).

b) Hydrochlorid 4-methyl-2,3,4,5-tetrahydro-l, 4-benzoxazepin-7-ylaminu

Produkt z kroku a) uvedeného výše se redukuje katalytickou hydrogenací za použití způsobu popsaného v příkladu 1 c), aby se získala součenina pojmenovaná v záhlaví. MS Vz 17 9 [M+H]⁺.

c) N-(4-Methyl-2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-yl)-3-thiofenkarboximidamid

Za použití produktu z příkladů 6 b) a 5 d) se připraví sloučenina pojmenovaná v záhlaví za použití postupu z příkladu 5 e). Teplota tání 255 až 256 °C.

Příklad 7 ·

• 9 9

9 9 9 9999 * ·· «9« 99 99

- 33 Hydrochlorid Ν-(2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-yl)-2-thiofenkarboximidamidu

Hydrochlorid 4-methyl-2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-ylaminu (8,7 g, 0,052 mmol) a hydrojodid methylesteru kyseliny 2-thiofenkarboximidothioové (18,0 g, 0,063 mmol) v l-methyl-2-pyrrolidinonu (50 ml) se 78 hodin míchá při teplotě místnosti. Reakční směs se potom vlije do vody (500 ml) a extrahuje se ethylacetátem (200 ml). Vodná fáze se potom alkalizuje 50% vodným rotokem hydroxidu sodného a extrahuje se ethylacetátem (2x200 ml) . Odpařením rozpouštědla se získá surový produkt, který se převede na hydrochloridovou sůl (9,3 g) použitím HCl v ethanolu. Teplota tání 269 až 270 °C.

• · · • ftft ft · • ftft ftft ft ft · • · ftft ♦·· ft ··

Claims (24)

1. PATENTOVÉ NÁROKY • ft ftftftft • ftftftft ft ftft ftft · • ftftftft • · · ftft ftft ve kterém:

   R¹ představuje 2-thienylový nebo 3-thienylový kruh a

   R² představuje vodík nebo C^alkyl, její optické isomery a racemáty a její farmaceuticky přijatelné soli.
2. 2. Sloučenina obecného vzorce (I) podle nároku 1, kde R¹ představuje 2-thienylovou skupinu.
3. 3. Sloučenina obecného vzorce (I) podle nároku 1, kde R² představuje vodík, methylovou skupinu nebo 2-propylovou skupinu.
4. 4. Sloučenina obecného vzorce (I) podle nároku 1, kde R¹ představuje 2-thienyl a R² představuje vodík, methylovou skupinu nebo 2-propylovou skupinu.
5. 5. Sloučenina obecného vzorce (I), kterou je:

   N-(4-methyl-2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-yl)-2-thiofenkarboximidamid,

   N-(4-ethyl-2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-yl)• · * · · 9 •9 9 9 9 9

   9 9 9 9 9

   9 ······ »

   - 35 -2-thiofenkarboximidamid,

   Ν-(4-propyl-2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-yl)-2-thiofenkarboximidamid,

   N-(4-isopropyl-2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-yl)-2-thiofenkarboximidamid,

   N-(2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-yl)-2-thiofenkarboximidamid,

   N-(2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-yl)-3-thiofenkarboximidamid,

   N-(4-methyl-2,3,4,5-tetrahydro-l,4-benzoxazepin-7-yl)-3-thiofenkarboximidamid nebo optický isomer nebo racemát kterékoli z nich, nebo farmaceuticky přijatelná sůl kterékoli z nich.
6. 6. Sloučenina obecného vzorce (I), podle některého z nároků 1 až 5, pro použití jako léčivo.
7. 7. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu obecného vzorce (I), podle některého z nároků 1 až 5, nebo její optický isomer nebo racemát, nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl, případně ve směsi s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.
8. 8. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu obecného vzorce (I), podle některého z nároků 1 až 5, nebo její optický isomer nebo • · ·'· ···· ·

   - 36 racemát, nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl v kombinaci s L-Dopou, nebo opiátovým analgetikem, obzvláště morfinem, případně ve směsi s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.
9. 9. Způsob léčeni nebo snižování rizika onemocnění lidí nebo stavů lidí, při kterých je přínosná inhibice aktivity syntasy oxidu dusnatého, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I), podle některého z nároků 1 až 5, nebo jejího optického isomeru nebo racemátu nebo její farmaceuticky přijatelné soli osobě, která je postižena nebo má sklon k takové nemoci nebo stavu.
10. 10. Způsob léčení podle nároku 9, vyznačuj ící se t í m, že je to převážně neuronální isoforma syntasy oxidu dusnatého, která se inhibuje.
11. 11. Způsob léčení nebo snižování rizika hypoxie nebo mrtvice nebo ischemie nebo neurodegenerativních stavů nebo schizofrenie nebo bolesti nebo migrény, nebo pro prevenci a zvrácení tolerance na opiáty a diazepiny, nebo' pro léčbu drogové závislosti, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání osobě, která trpí takovou nemocí nebo stavem nebo je citlivá na takovou nemoc nebo stav, terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I), podle některého z nároků 1 až 5, nebo jejího optického isomeru nebo racemátu nebo její farmaceuticky přijatelné soli.
12. 12. Způsob léčení podle nároku 11, vyznačuj ící se t í m, že stav, který má být léčen, se zvolí ze skupiny sestávající z hypoxie, ischemie, mrtvice, Huntingto99

    - 37 novy nemoci, Parkinsonovy nemoci, amyotrofické laterální sklerózy, schizofrenie a bolesti.
13. 13. Způsob léčení podle nároku 12, vyznačuj ící se t i m, že stavem, který má být léčen, je mrtvice.
14. 14. Způsob léčení podle nároku 12, vyznačuj ící se t i m, že stavem, který má být léčen, je amyotrofická laterální skleróza.
15. 15. Způsob léčení podle nároku 12, vyznačuj ící se t i m, že stavem, který má být léčen, je bolest.
16. 16. Způsob léčení podle nároku 12, vyznačuj ící se t i m, že stavem, který má být léčen, je Huntingtonova nemoc.
17. 17. Způsob léčení podle nároku 12, vyznačuj ící se t i m, že stavem, který má být léčen, je Parkinsonova nemoc.
18. 18. Způsob léčení podle nároku 12, vyznačůjící se t i m, že stavem, který má být léčen, je schizofrenie .
19. 19. Způsob léčení bolesti nebo snižování rizika bolesti, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání osobě, která trpí bolestí nebo je u ní riziko bolesti, terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I), podle některého z nároků 1 až 5, nebo jejího optického isomeru nebo racemátu nebo její farmaceuticky přijatelné soli v kombinaci s opiátovým analgetikem, obzvláště morfinem.

    - 38 ···· · ·
20. 20. Způsob léčení Parkinsonovy nemoci, vyznačující se tím, že zahrnuje zahrnuje podávání osobě, která trpí Parkinsonovou nemocí nebo je u ní riziko Parkinsonovy nemoci, terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I), jak je definována v některém z nároků 1 až 5, nebo jejího optického isomeru nebo racemátu nebo její farmaceuticky přijatelné soli v kombinaci s L-Dopou.
21. 21. Použití sloučeniny obecného vzorce (I), podle některého z nároků 1 až 5, nebo jejího optického isomeru nebo racemátu nebo její farmaceuticky přijatelné soli k výrobě léčiva pro léčení nebo profylaxi nemocí lidí nebo stavů lidí, při kterých je prospěšná inhibice syntasy oxidu dusnatého .
22. 22. Použití nárokované v nároku 21, kterým je převážně neuronální isoforma syntasy oxidu dusnatého, která má být inhibována.
23. 23. Použití sloučeniny obecného vzorce (I), podle některého z nároků 1 až 5, nebo jejího optického isomeru nebo racemátu nebo její farmaceuticky přijatelné soli k výrobě léčiva pro léčení nebo profylaxi hypoxie nebo mrtvice nebo nebo ischemie nebo neurodegenrativních stavů nebo schizofrenie nebo bolesti nebo migrény nebo pro prevenci a zvrácení tolerance na opiáty a benzodiazepiny nebo pro léčení drogové závislosti.
24. 24. Použití podle nároku 23, kde stav je zvolen ze skupiny sestávající z hypoxie, ischemie, mrtvice, amyotrofické laterální sklerózy, Huntingtonovy nemoci, Parkinsonovy nemo·· · ···· · · · · ··· ·· · ···· • ···· · · « ······ • · · · · 9 · · · ··· · ·· ··· ·· 99

    - 39 ci, schizofrenie a bolesti.

    25. Použití podle nároku 24, ke : stavem je mrtvice. 26. Použití podle nároku laterální skleróza. 24, kde stavem je amyotrofická 27. Použití podle nároku 24, kde stavem je bolest. 28. Použití nemoc. podle nároku 24, kde stavem je Huntingtonova 29. Použití nemoc. podle nároku 24, kde stavem je Parkinsonova 30. Použití podle nároku 24, kde stavem je schizofrenie.

    31. Použití sloučeniny obecného vzorce (I), podle některého z nároků 1 až 5, nebo jejího optického isomeru nebo racemátu nebo její farmaceuticky přijatelné soli v kombinaci s opiátovým analgetikem, obzvláště morfinem, k výrobě léčiva pro léčení nebo profylaxi bolesti.

    32. Použití sloučeniny obecného vzorce (I), podle některého z nároků 1 až 5, nebo jejího optického isomeru nebo racemátu nebo její farmaceuticky přijatelné soli v kombinaci s L-Dopou k výrobě léčiva pro léčení nebo profylaxi Parkinsonovy nemoci.

    33. Způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce (I), podle některého z nároků 1 až 5, nebo jejího optického isomeru nebo racemátu nebo její farmaceuticky přijatelné soli, vyznačující se tím, že zahrnuje • ·

    - 40 a) přípravu sloučeniny obecného vzorce (I) reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce (II):

    ve kterém

    R² má význam vymezený v nároku 1, se sloučeninou obecného vzorce (III) nebo její adiční soli s kyselinou:

    YH _RA_L (III) ve kterém

    R¹ má význam vymezený v nároku 1 a

    L je odštěpitelná skupina,

    (b) přípravu sloučeniny obecného vzorce (I) reakcí odpovídáj ící sloučeniny obecného vzorce (IV) : Γ (IV) —-N \ ΗΑ.Η,Ν R² ve kterém R² má význam vymezený v nároku 1, HA je kyselina,

    - 41 ΦΦΦΦΦΦ φ φ φ φ φ φφφ se sloučeninou obecného vzorce (V):

    R¹ = Ν (V) ve kterém

    R¹ má význam vymezený v nároku 1, (c) přípravu sloučeniny obecného vzorce (I), ve kterém R² představuje Coalkyl, reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce (I), ve kterém R² představuje vodík, se sloučeninou obecného vzorce (VI):

    R³ - L (VI) ve kterém

    R³ představuje Coalkyl a

    L je odštěpitelná skupina, nebo (d) přípravu sloučeniny obecného vzorce (I), ve kterém R² představuje methylovou skupinu, reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce (I), ve kterém R² představuje vodík, s formaldehydem a kyselinou mravenčí, a kde je to požadované nebo nezbytné, se vzniklá sloučenina obecného vzorce (I) nebo její jiná sůl, převede na její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo naopak, a kde je to požadované, se vzniklá sloučenina obecného vzorce (I) převede na její optický isomer.