CZ367499A3 - Sloučeniny - Google Patents

Abstract

Jsou zde poskytnutynové sloučeninyobecného vzorce (I), kdeA představuje benzenovýkruh, šestičlennýheterocyklický aromatický kruh obsahující 1 až 3 atomy dusíku nebo pětičlenný heterocyklický aromatickýkruh obsahující 1 až 3 heteroatomy, kterémohou býtstejnénebo odlišné ajsou vybrányzO, Na S, a R', R2, R3 aX jakje definováno v popisu ajejich farmaceuticky přijatelné soli ajejich enenciomery atautomery, spolu se způsoby jejich přípravy, přípravkyje obsahujícími ajejich použitímpři léčbě. Sloučeninyjsou inhibitoiy syntetázy oxidu dusnatého ajsou tedyzvláště vhodné při léčení aprofylaxi zánětlivých onemocnění abolesti.

Description

Oblast techniky

Předložený vynález se týká nových sloučenin, stejně jako souvisejících aspektů včetně způsobů přípravy těchto sloučenin, přípravků je obsahujících a jejich použití jako léčiv. Jsou zde také poskytnuty chemické meziprodukty vhodné pro výrobu těchto sloučenin.

Dosavadní stav techniky

Oxid dusnatý se vytváří v savčích buňkách z L-argininu působením specifických syntetáz oxidu dušnatého (NOS). Tyto enzymy spadají do dvou odlišných tříd - konstitutivní NOS (cNOS) a indukovatelné NOS (iNOS). V současnosti jsou známy dvě konstitutivní NOS a jedna induktivní NOS. U konstitutivních NOS se relaxace hladkého svalu a regulace krevního tlaku a toku účastní endoteliální enzym (ecNOS), zatímco neuronální enzym (ncNOS) slouží jako neurotransmiter a zdá se, že se účastní regulace různých biologických funkcí jako je cerebrální ischemie. Indukovatelné NOS se obzvláště účastní patogeneze zánětlivých onemocnění. Regulace těchto enzymů by proto měla poskytnout značný potenciál v léčbě široké palety chorobných stavů (J. E. Macdonald, Ann. Rep. Med. Chem., 31. 221 - 230, (1996)).

Podstata vynálezu

Podle tohoto vynálezu je poskytnuta sloučenina obecného vzorce (I):

• · ♦ ·

(i) ve kterém

A představuje benzenový kruh, šestičlenný heterocyklický aromatický kruh obsahující 1 až 3 atomy dusíku nebo pětiólenný heterocyklický aromatický kruh obsahující 1 až 3 heteroatomy, které mohou být stejné nebo odlišné a jsou vybrány z 0,

N a S,

R² a R³ nezávisle představují dusík, Cý _ ₆ alkyl, C·^ alkoxy, _ _g alkylthio, halogen, hydroxyskupinu nebo aminoskupinu,

R^x představuje (i) fenyl, šestičlenný heterocyklický aromatický kruh obsahující 1 až 3 atomy dusíku nebo pětičlenný heterocyklický aromatický kruh obsahující 1 až 3 heteroatomy, které mohou být stejné nebo odlišné a jsou vybrány z 0, N a S, fenyl nebo heterocyklický aromatický kruh jsou případně substituovány C _χ _ ₆ alkylem, Cý _ ₆ alkoxyskupinou, Cý _ 5 alkylthioskupinou, C₂ _ θ alkenylem, C₂ _ θ alkinylem, _g haloakylem, ^c2 - 12 alkoxyalkylem, C₂ _ ₁₂ alkylthioalkylem, aminoskupinou, halogenem, hydroxyskupinou, kyanoskupinou nebo nitroskupinou, nebo » · · ř * · (ii) OR⁴, kde R⁴ představuje Cj_ _ _g alkyl,

C₂ _ ₆ alkenyl, C₂ _ ₆ alkinyl, C_x _ ₆ haloalkyl, C₂ _ ₁₂ alkoxyalkyl, C₂ _ ₁₂ alkylthioalkyl, C₇ _ ₁₂ arylalkyl, C₇ _ ₁₂ aryloxyalkyl, aminoskupinu nebo halogen

X představuje CH₂, CO, 0 nebo S(O)_n, kde n představuje celé číslo od 0 do 2, a její farmaceuticky přijatelné soli, enanciomery, racemáty a tautomery.

Vynález dále poskytuje způsob přípravy takových sloučenin nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí, enanciomerů, racemátů nebo tautomerů.

Podle tohoto vynálezu je také poskytnuta sloučenina obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, enanciomer, racemát nebo tautomer pro použití jako léčivo.

Další aspekt vynálezu poskytuje použití sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enanciomeru, racemátů nebo tautomeru pro výrobu léčiva pro léčbu nebo profylaxi nemocí nebo stavů, při nichž je inhibice syntetázy oxidu dusnatého prospěšná.

Specifičtějším aspektem tohoto vynálezu je to, že poskytuje použití sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enanciomeru, racemátů nebo tautomeru pro výrobu léčiva pro léčbu nebo profylaxi zánětlivých onemocnění.

Podle tohoto vynálezu je také poskytnut způsob léčení • ···· · ·· ·· 99 • 99 · · · 9 ····

9 99 999 9999 • 9 9 · · 99 999999

9 · · 9 9 9

999999 999 99 · · 9» nebo snižování rizika nemocí nebo stavů, kdy je inhibice aktivity syntetázy oxidu dusnatého prospěšná, která zahrnuje, že této osobě je podáváno terapeuticky aktivní množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enanciomeru, racemátu nebo tautomeru.

Ještě více specificky je také poskytnut způsob léčení nebo snížení rizika zánětlivého onemocnění u osoby trpící uvedenou nemocí nebo s rizikem této nemoci, kde způsob zahrnuje podávání terapeuticky aktivní množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enanciomeru, racemátu nebo tautomeru této osobě.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být také výhodně použity v kombinaci s druhou farmaceuticky aktivní látkou, obzvláště v kombinaci se selektivním inhibitorem indukovatelné isoformy cyklooxygenázy (COX-2). V dalším aspektu vynálezu je tedy poskytnuto použití sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enanciomeru, racemátu nebo tautomeru v kombinaci s inhibitorem COX-2 pro léčbu zánětu, zánětlivého onemocnění a poruch souvisejících se zánětem. A je tam také poskytnut způsob léčení nebo snižování rizika zánětu, zánětlivého onemocnění a poruch souvisejících se zánětem u osoby trpící uvedenou nemocí nebo stavem, popřípadě takovým rizikem, kde způsob zahrnuje podávání terapeuticky aktivní množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enanciomeru, racemátu nebo tautomeru v kombinaci s inhibitorem COX-2 této osobě.

Výhodně představuje A thienový kruh.

Výhodně představuje X CH₂ nebo 0.

• ·

Obzvláště výhodné sloučeniny vynálezu zahrnují:

ethyl-[4-amino-5-fluorspiro[2H-(1,3)-benzoxazin-2,4 -piperidin] -1 -karboxylat], ethyl-[4 -aminospiro[piperidin-4,6 (7 H)-thieno(3,2-c]pyridin]-1-karboxylat], ethyl-[7 -aminospiro[piperidin-4,5 (4 H)-thieno[2,3-c]pyridin]-1-karboxylat], a jejich farmaceuticky přijatelné soli, enanciomery, racemáty nebo tautomery.

Pokud není naznačeno jinak, pojem C-^ _ _g alkyl na nějž se zde odkazuje, označuje alkylovou skupinu mající od do 6 atomů uhlíku obsahující přímý nebo rozvětvený řetězec nebo cyklickou alkylovou skupinu mající od 3 do 6 atomů uhlíku. Příklady takových skupin zahrnují methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, n-butyl, iso-butyl, terč.-butyl, cyklopentyl a cyklohexyl.

Pokud není naznačeno jinak, pojem C₂ _ ₆ alkenyl na nějž se zde odkazuje, označuje alkylové skupiny mající od do 6 atomů uhlíku s přímým nebo rozvětveným řetězcem obsahující jednu dvojnou vazbu nebo cyklickou alkylovou skupinu mající od 3 do 6 atomů uhlíku obsahující jednu dvojnou vazbu. Příklady takových skupin zahrnují ethenyl, 1- a 2-propenyl, 2-methyl-2-propenyl, 2-butenyl, cyklopentenyl a cyklohexenyl.

Pokud není naznačeno jinak, pojem C₂ _ ₆ alkinyl na ···· · ·· · · ·· • ···· ♦ · · · • · · · · · « · · · ·· · · · · · * · · · · • · · · * · • · · · · · · · · * · · nějž se zde odkazuje, označuje alkylové skupiny mající od 2 do 6 atomů uhlíku s přímým nebo rozvětveným řetězcem obsahující jednu trojnou vazbu. Příklady takových skupin zahrnují ethinyl, 1- a 2- propinyl a 2-butinyl.

Pokud není naznačeno jinak, pojem C-|_ _ ₆ alkoxyskupina na nějž se zde odkazuje, označuje alkoxyskupinu mající od 1 do 6 atomů uhlíku s přímým nebo rozvětveným řetězcem. Příklady takových skupin zahrnují methoxy-, ethoxy-, η-propoxy-, iso-propoxy-, η-butoxy-, iso-butoxy-, sek.-butoxy a terč.-butoxyskupinu.

Jiné skupiny, například alkylthioskupina, haloalkyl, alkoxyalkyl, alkylthioalkyl, necht jsou vykládány podobně.

Způsob přípravy sloučenin podle vynálezu nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli, enanciomeru, racemátů nebo tautomeru zmíněný výše sestává z:

(a) reakce sloučeniny obecného vzorce (II)

ve kterém

A, R² a R³ jsou jak je definováno výše a

X představuje 0 nebo S, se sloučeninou obecného vzorce (III) nebo jejím acetalovým derivátem

R⁵ C 0 R⁶ (III) ve kterém

R⁵ a R⁶ dohromady představují (CH₂)2~ Z- (CH₂)₂/

Z představuje NÉCOR¹) a

R¹ je jak je definováno výše, nebo (b) reakce sloučeniny obecného vzorce (IV) nebo (IV )

ve kterých

A, X, R a R jsou jak je definováno výše,

R⁵ a R⁶ jsou jak je definováno v možnosti (a), a

O

R představuje alkylovou skupinu, s amoniakem nebo jeho ekvivalentem, nebo (c) odstranění chránících skupin ze sloučeniny obecného vzorce (I), ve které jsou jeden nebo více atomů dusíku • · a/nebo jiný atom chráněny, nebo

A, X, R² a R³ jsou jak je definováno výše, se sloučeninou obecného vzorce (VI)

Z - L (VI) ve kterém

Z představuje COR¹,

R¹ je jak je definováno výše, a

L je odštěpitelná skupina, nebo (e) přípravy sloučeniny obecného vzorce (I), ve kterém X představuje S(0)_n a n je 1 nebo 2, oxidací odpovídající sloučeniny, ve které X představuje S, a kde je to požadováno nebo nezbytné,se vzniklá sloučenina obecného vzorce (I) nebo její jiná sůl, převede na její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo naopak, a kde je to požadováno, se vzniklá sloučenina obecného vzorce (I) převede na její optický isomer.

• · · ·

Ve způsobu (a) může být reakce sloučenin obecných vzorců (II) a (III) prováděna mícháním reaktantů v inertním rozpouštědle za vhodné teploty, obecně mezi teplotou místnosti a teplotou varu rozpouštědla, po dobu až 72 hodin, nebo dokud reakce neproběhne úplně. Zjistili jsme, že je často příhodné používat sloučeniny obecného vzorce (III) v chráněné formě, například jako acetal jako je diethoxyacetal. Způsob se pak výhodně provádí za přítomnosti kyselého katalyzátoru. Požadovaný acetal může být vytvořen reakcí nechráněné sloučeniny obecného vzorce (III) s alkoholem jako je ethanol za použití postupů, které jsou odborníkovi v oboru dobře známy.

Ve způsobu (b) může být reakce prováděna probubláváním plynného amoniaku roztokem sloučeniny obecného vzorce (IV) nebo (IV ) v inertním polárním rozpouštědle. Alternativně může být reakce prováděna tak, že se na roztok sloučeniny obecného vzorce (IV) nebo (IV ) v polárním protickém rozpouštědle působí vodným amoniakem, amoniakem v acetonitrilu nebo methanolovým amoniakem nebo tak, že se na sloučeninu obecného vzorce (IV) nebo (IV ) působí jodidem amonným a amoniakem v alkoholovém roztoku.

Ve způsobu (c) zahrnují ochranné skupiny pro aminy alkyl, aralkyl, acyl, acylsulfonyl, arylsulfonyl a trialkylsilyl. Je-li ochrannou skupinou trialkylsilyl, může být tato skupina odstraněna hydrolýzou za použití například tetra-n-butylamoniumfluorid. Jiné ochranné skupiny a další detaily o způsobech jejich odstranění lze nalézt odkazem na standardní text Protecting Groups in Organic Synthesis, 2. vydání, Greene and Wuts (1991).

Ve způsobu (d) může být reakce prováděna smícháním • ··«· · ·· ·· • · · · 9 · · ··· • · ·> · · · · · · • · · 9 9 99 999 reaktantů v inertním rozpouštědle za vhodné teploty za přítomnosti báze, například pyridinu. Ačkoliv mnoho standardních odštěpitelných skupin L je vhodných, dáváme přednost tomu, když L představuje halogen, obzvláště choř nebo brom.

Ve způsobu (e) může být oxidace prováděna za použití například kyseliny m-chlorperbenzoové nebo oxonu^R.

Předložený vynález zahrnuje sloučeniny obecného vzorce (I) ve formě solí, obzvláště adiční soli s kyselinou.

Vhodné soli zahrnují soli tvořené jak s kyselinami organickými, tak anorganickými. Takové adiční soli s kyselinou budou normálně farmaceuticky přijatelné ačkoliv soli farmaceuticky nepřijatelných kyselin mohou být užitečné při přípravě a čištění příslušné sloučeniny. Výhodné soli tedy zahrnují soli vytvořené z kyseliny chlorovodíkové, bromovodíkové, sírové, fosforečné, citrónové, vinné, mléčné, pyrohroznové, octové, jantarové, fumarové, maleinové, methansulfonové a benzensulfonové.

Soli sloučenin obecného vzorce (I) mohou být vytvořeny reakcí volné báze nebo její soli, enanciomeru nebo tautomeru s jedním nebo více ekvivalenty příslušné kyseliny. Reakci lze provádět v rozpouštědle nebo v prostředí, ve kterém je sůl nerozpustná nebo v rozpouštědle, ve kterém je sůl rozpustná, například ve vodě, dioxanu, ethanolu, tetrahydrofuranu nebo diethyletheru, nebo ve směsi rozpouštědel, která může být odstraněna ve vakuu nebo sušením za mrazu. Reakce může také být metathetickým procesem nebo může být prováděna na iontoměničové pryskyřici.

Nové meziprodukty obecného vzorce (II), (IV), (IV ) a (V) tvoří další aspekt vynálezu.

• · ·· · ··<

• 4 • · ··

Sloučeniny obecného vzorce (II) lze připravit redukcí sloučeniny obecného vzorce (VII)

ve kterém

A, X, R² a R³ jsou jak je definováno výše.

Tento redukční proces se může provádět tak, že na sloučeninu obecného vzorce (VII) působí vodík za přítomnosti palladia na uhlí nebo rhodia na oxidu hlinitém nebo Raneyově niklu za zvýšené teploty a tlaku, obvykle 65 °C a tlaku 3 MPa.

Sloučeniny obecného vzorce reakcí sloučniny obecného vzorce

(VII) mohou být připraveny (VIII) (Vílí) ve kterém

A, X, R² a R³ jsou jak je definováno výše, s hydrochloridem hydroxylaminu.

V této reakci mohou být ony dva reaktanty zahřátý dohromady za přítomnosti báze, jako je methoxid sodný, v methanolu.

Jako alternativní metoda pro přípravu sloučenin obecného vzorce (II) se může na sloučeninu obecného vzorce (VIII) za přítomnosti kyseliny působit primárním alkoholem jako je ethanol a následně se na ni může působit chloridem amonným, aby se získala sloučenina obecného vzorce (II).

Jako další alternativní metoda pro přípravu sloučenin obecného vzorce (II) se může na sloučeninu obecného vzorce (IX)

ve kterém

A, X, R² a R³ jsou jak je definováno výše, působit amoniakem.

Reakce bude probíhat za standardních podmínek, ačkoliv je normálně nezbytný preaktivační krok, například za použití Meerweinova činidla.

Sloučeniny obecných vzorců III, VIII a IX jsou buď známy nebo mohou být připraveny konvenčními metodami známými j ako takové.

Sloučeniny obecného vzorce (IV) mohou být připraveny reakcí sloučeniny obecného vzorce (X) ve kterém A, X, R² a R³

(X) jsou jak je definováno výše, ·· ·· ·· • · · · · · • · · · · · • ·· ·· · ··· • · · · «· ·· ·· se sloučeninou obecného vzorce (III) za přítomnosti alkyljodidu.

Podmínky této reakce budou podobné podmínkám popsaným výše pro způsob (a).

Sloučeniny obecného vzorce působením Lawessonova činidla na (IX) · (X) mohou být připraveny sloučeninu obecného vzorce

Sloučeniny obecného vzorce (II) mohou být také připraveny přeměnou sloučeniny obecného vzorce (X) na odpovídající alkylthioderivát působením alkylhalidu (obzvláště alkyljodidu) a následnou reakcí s amoniakem podle způsobu analogickému se způsobem (b) uvedeným výše.

Meziprodukty mohou být připraveny a používány jako takové nebo v chráněné formě. Ochranné skupiny a deaily jejich odstraňování lze nalézt odkazem na standardní text Protecting Groups in Organic Synthesis, 2. vydání, Greene and Wuts (1991).

Sloučeniny podle vynálezu a jejich meziprodukty lze isolovat z jejich reakčních směsí a, pokud je to nezbytné, dále čistit, použitím standardních technik.

· ·

4 4

4 4

4

4

4 4

4« 4 < 4

4

Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou existovat v enanciomerních formách. Všechny enanciomery, diastereoisomery, racemáty a jejich směsi jsou tedy zahrnuty do rozsahu tohoto vynálezu. Různé optické isomery mohou být isolovány oddělením racemické směsi sloučenin použitím konvenčních technik, například frakční krystalizace nebo HPLC.

Meziprodukty také mohou existovat v enenciomerních formách a mohou být použity jako čištěné enenciomery, diastereoisomery, racemáty nebo jejich směsi.

Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou existovat v alternativních tautomerních formách. Sloučeniny obecného vzorce (I) jsou poskytnuty v jiné tautomerní formě nebo jako jejich směs.

Sloučeniny obecného vzorce (I) nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli, enanciomery, racemáty a tautomery jsou užitečné, protože mají farmakologickou aktivitu u zvířat. Tyto sloučeniny jsou obzvláště aktivními inhibitory enzymu syntetázy oxidu dusnatého. Více obzvláště jsou inhibitory indukovatelné isoformy enzymu syntetázy oxidu dusnatého přítomného v makrofazích a o jako takových se o nich předpokládá, že budou vhodné při léčbě například jako protizánětlivé látky.

Sloučeniny a jejich farmaceuticky přijatelné soli, enanciomery, racemáty a tautomery jsou indikovány pro použití při léčbě nebo profylaxi nemocí nebo stavů, ve kterých hraje významnou roli syntéza nebo zvýšená syntéza syntetázy oxidu dusnatého. Obzvláště jsou tyto sloučeniny indikovány pro použití při léčení zánětlivých stavů u savců včetně člověka.

- 15 • · 0 0 0 0 • 4 0 · · · • · 0 · · ·

00 000 000

0 0 0 · · 0 0 0 0

Stavy, které lze specificky zmínit jsou:

osteoartritida, revmatoidní artritida, revmatiodní spondylitida, dnavá artritida a jiné artritické stavy, záněty kloubů, ekzém, psoriazá, dermatitida a jiné zánětlivé kožní stavy jako je spálení po opalování, zánětlivé oční stavy včetně uveitidy a konjunktivitiay, plicní poruchy provázené zánětem, například astma, bronchitida, nemoc holubářů, farmářské plíce, akutní syndrom dechové tísně, bakterémie, endotoxémie (septický šok), aftózní vředy, gingivitida, pyréza, bolest a pankreatitida, stavy gastrointestinálního traktu včetně Crohnovy nemoci, atrofické gastritidy, varialoformní gastritidy, ulcerativní kolitidy, coeliakální nemoci, regionální ileitidy, peptických vředů, syndromu dráždivého střeva, poškození gastrointestinálního traktu vznikající v důsledku infekcí například Helicobacerem pylori nebo v důsledku léčby nesteroidními protizánětlivými léčivými látkami, a jiné stavy spojené se zánětem.

Sloučeniny budou také užitečné při léčení a zmírňování akutní nebo chronické zánětlivé nebo neuropatické bolesti nebo bolesti centrálního původu.

• ·

Sloučeniny obecného vzorce (I) a jejich farmaceuticky přijatelné soli, enanciomery, racemáty a tautomery mohou být také užitečné při léčbě nebo profylaxi dalších nemocí nebo stavů než jsou ty uvedené výše. Například mohou být užitečné při léčení atherosklerózy, cystické fibrózy, hypotenze provázející septický a/nebo toxický šok, při léčbě dysfunkce imunitního systému a jako adjuvanš při krátkodobé imunosupresi při transplantaci orgánů, při léčení cévních komplikací provázejících diabetes a jako součást terapie cytokiny, například TNF nebo interleukiny.

Sloučeniny obecného vzorce (I) také mohou vykazovat inhibiční aktivitu neuronálních isoforem syntetázy oxidu dušnatého. Mohou tedy být také vhodné při léčení hypoxie, například v případech srdeční blokády a mrtvice, neurodegenerativních poruch včetně degenerace nervů a/nebo nekrózy nervů při takových poruchách, jako jsou hypoxie, hypoglykémie, epilepsie a při zevních poraněních (jako jsou poranění míchy a hlavy), hyperbarických kyslíkových křečí a toxicity, demence, například presenilní demence, Alzheimerovy nemoci a demence související s AIDS, Syndenhamovy chorey, Parkinsonovy nemoci, Touretteova syndromu, Huntingtonovy nemoci, amyotrofické laterální sklerózy, Korsakoffovy nemoci, imbecility související s poruchami mozkových cév, poruch spánku, schizofrenie, depresí, autismu, sezónní afektivní poruchy, poruchy ze změny časových pásem, depresí nebo jiných symptomů spojených s premenstruálním syndromem (PMS), úzkosti a septického šoku. U sloučenin obecného vzorce (I) lze také očekávat, že vykáží aktivitu při prevenci a zvratu tolerance na opiáty a diazepiny, při léčení lékové závislosti, při léčení migrény a jiných cévních bolestí hlavy, neurogenního zánětu, při léčení poruch střevní motility, rakoviny a při indukci porodu.

• · · · · to • to · · · · • ·· · · · ··· • to toto • · ·» ··

Při výše zmíněných terapeutických indikacích se bude podaná dávka samozřejmě lišit v závislosti na použité sloučenině, způsobu podání a požadované léčbě. Obecně se však dosáhne uspokojivých výsledků, pokud jsou sloučeniny podávány v pevné formě v dávce mezi 1 mg a 2000 mg za den.

Sloučeniny obecného vzorce (I) a jejich farmaceuticky přijatelné deriváty mohou být použity samotné nebo ve formě příhodných farmaceutických přípravků, ve kterých je sloučenina nebo derivát ve směsi s farmaceuticky přijatelným adjuvanciem, ředidlem nebo nosičem. Podání je možné enterálně (včetně podání ústy, sublingválně nebo rektálně), intranasálně, intravenózně, topicky nebo jinými parenterálními cestami, na které však výčet není omezen. Konvenční postupy pro výběr a přípravu vhodných farmaceutických přípravků jsou popsány například ve Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs, M.E. Aulton, Churchill Livingstone, 1988. Farmaceutický přípravek výhodně zahrnuje méně než 80 % a výhodněji méně než 50 % sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enanciomeru, racemátu nebo tautomeru.

Je zde také poskytnut způsob přípravy takového farmaceutického přípravku, který zahrnuje míchání složek.

Sloučeniny obecného vzorce (I) a jejich farmaceuticky přijatelné deriváty mohou být také výhodně použity v kombinaci s inhibitorem COX-2. Obzvláště výhodnými inhibitory COX-2 jsou celecoxib a MK-966. Inhibitor NOS a inhibitor COX-2 mohou být zpracovány dohromady v jednom farmaceutickém přípravku pro podání v jediné dávkové jednotce nebo může být každá složka zpracována tak, že oddělené dávky mohou být podány bud' zároveň nebo sekvenčně.

• · • · • · · · · • · ··· »·· • · · • * · ·

Vynález je ilustrován, ale v žádném případě omezen, následujícími příklady.

Příklady provedení vynálezu

Příprava 1

Ethyl-[l-oxa-6-azaspiro[2,5]oktan-6-karboxylat]

47% roztok hydroxidu sodného (15 ml), ethyl-[4-oxopiperidin-l-karboxylatu] (4,53 ml, 30 mmol), trimethylsulfonuimmethansulfonatu (7,36 g, 39 mmol) (Syn. Comm., 15, 749 (1985)) a dichlormethanu (30 ml) se zahřívá 16 hodin na 50 °C, ochladí, naředí vodou (30 ml) a extrahuje dichlormethanem. Spojené extrakty se vysuší síranem sodným a odpaří. Zbytek se vyčistí bleskovou sloupcovou chromatografii na oxidu křemičitém, eluuje se 2% methanolem/dichlormethanem, aby se získal produkt jako pohyblivý žlutý olej (4,0 g), MS (+EI) ^m/z 185, ¹H NMR (360 MHz) (CDC1₃) 4,15 (2H, q,

J 7,1 Hz), 3,78 (2H, br s), 3,46 (ÍH, ddd, J 3,7, 9,6, 13,3 Hz), 2,71 (2H, s), 1,87 až 1,79 (2H, m), 1,49 až 1,43 (2H, m) , 1,28 (3H, t, J 7,1 Hz).

Příklad 1

Ethyl-[4-amino-5-fluorspiro[2H-(1,3)-benzoxazin-2,4 -piperidin]-l -karboxylat] (a) 2-Fluor-6-hydroxybenzamid

Kyselina 2-fluor-6-hydroxybenzoová (20,0 g, 0,128 mol) aoxalylchlorid (22,3 ml, 0,256 mol) se rozpustí v

- 19 • · · · • · · · • · · · ·· · ··· • · • · · · ethylacetátu (300 ml) spolu s N,N-dimethylformamidem (DMF) (2 kapky) a směs se 20 hodin míchá pod dusíkovou atmosférou. Rozpouštědlo se odstraní destilací za sníženého tlaku a zbyde surový chlorid kyseliny, který se znovu rozpustí v ethylacetátu (300 ml) a ochladí na 0 °C. Po kapkách se přidá koncentrovaný vodný amoniak (hustota 0,88, 50 ml) a směs se míchá další 2 hodiny. Směs se vlije do vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Organická fáze se oddělí a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (2x200 ml). Spojené organické fáze se vysuší (MgSO₄) a odpaří a zbyde surová sloučenina (10,2 g, 51,5 %). Hmotnostní spektrum (-ve Cl) ^m/z 154 (M⁺-H).

(b) Ethyl-[5-fluor-3,4-dihydro-4-oxospiro[2H-(1,3)-benzoxamin-2,4 -piperidin]-l -karboxylat]

Produkt z kroku (a) uvedeného výše (10,0 g, 64,5 mmol), ethyl-[4-oxopiperidin-l-karboxylat] (10,5 ml, 69 mmol) a koncentrovaná kyselina sírová (1 ml) v chloroformu (200 ml) se 6 hodin zahřívají ke zpětnému toku za použití

Soxhletova přístroje obsahujícího bezvodý chlorid vápenatý.

Po ochlazení se roztok promyje vodným hydrogenuhličitanem sodným, vysuší (MgSO₄) a odpaří za sníženého tlaku. Odparek se vyčistí bleskovou chromatografií na silikagelu za použití ethylacetátu jako eluentu, aby se získal laktam pojmenovaný v záhlaví jako pevná látka (15,4 g, 77 %), teplota tání 196 až 198 °C. Hmotnostní spektrum (+ve Cl) ^m/z 309 (M⁺+H).

(c) Ethyl-[5-fluor-3,4-dihydro-4-thioxospiro[2H-(1,3)-benzoxazin-2,4 -piperidin]-1 -karboxylat]

Produkt z kroku (b) uvedeného výše (7,6 g, 25 mmol) a Lawessonovo činidlo (6,4 g, 16 mmol) v toluenu (150 ml) se 1 • ···· 9 ·9 99 • 99 999 9 9 99 9

9999 99 9 9 ·· 9

99 99 99 999999

9 9 9 9 9 9

999999 999 99 99 99 hodinu zahřívají ke zpětnému toku. Směs se ochladí a sraženina se odfiltruje, rozpustí v ethylacetátu a promyje vodným hydrogenuhličitanem sodným. Odpaření organického roztoku za sníženého tlaku poskytne thioamid pojmenovaný v záhlaví jako pevnou látku (5,1 g, 64 %), teplota tání 206 až 207 °C. Hmotnostní spektrum (+ve Cl) ^m/z 325 (M⁺+H).

(d) Ethyl-[4-amino-5-fluorspiro[2H-(1,3)-benzoxamin-2,4 -piperidin]-l -karboxylat]

Produkt z kroku (c) uvedeného výše (2,0 g, 6 mmol) se rozpustí v přebytku 7M roztoku bezvodého amoniaku v methanolu a 6 hodin se zahřívá na 50 °C. Po odpaření rozpouštědla se odparek vyčistí bleskovou chromatografií na silikagelu za použití dichlormethanu/methanolu (98:2) jako eluentu, aby se získala sloučenina pojmenovaná v záhlaví jako pevná látka (1,8 g), bod tání 114 až 116 °C. Hmotnostní spektrum (+ve Cl) ^m/z 308 (M⁺+H). Nalezeno: C, 58,63, H, 5,84, N 13,67.

Pro C₁₅H-j_gFN₃O₃ požadováno: C, 58,62, H, 5,90, N, 13,67 %.

Příklad 2

Ethyl-[4 -aminospiro[piperidin-4,6 (7 H)-thieno[3,2-c]pyridin]-1-karboxylat] (a) Ethyl-[4-hydroxy-4-(2-thienylmethyl)piperidin-l-karboxylatJ n-Butyllithium (1,46M v hexanu, 11,1 ml, 16,2 mmol) se po kapkách přidá k roztoku thiofenu (1,33 ml, 16,8 mmol) v THF (60 ml) při -78 °C. Roztok se ohřeje na -20 °C a potom se ochladí zpátky na -78 °C. Po 30 minutách se přidá trifluorid-bor-etherat (2,1 ml, 16 mmol) a potom epoxid ···· • ·· (přípravek 1) (1,00 g, 5,41 mmol) v THF (10 ml). Po 15 minutách se reakce potlačí vodou (20 ml) a dvakrát se extrahuje dichlormethanem. Spojené extrakty se vysuší síranem sodným a potom se odpaří. Odparek se vyčistí bleskovou sloupcovou chromatografií na oxidu křemičitém, eluuje se 2% methanolem/dichlormethanem, aby se získal produkt jako viskózní bezbarvý olej (1,0 g, 70 %), MS (+EI) ^m/z 269, ^H NMR (360 MHz) (CDC1₃) 7,22 až 7,17 (1H, m), 6,99 (1H, dd,

J 3,4, 5,1 Hz), 6,86 (1H, d, J 3,4 Hz), 4,12 (2H, q, J 7,1

Hz), 3,91 (2H, široký s), 3,16 (2H, široký s), 2,97 (2H, s),

1,57 (4H, široký s), 1,26 (3H, t, J 7,1 Hz).

(b) Ethyl-[4 -(ethylthio)spiro[piperidin-4,6 (7 H)-thieno[3,2-c]pyridin]-1-karboxylat]

Chlorid cíničitý (0,65 ml, 5,56 mmol) se přidá ke směsi ethylthiokyanatu (0,72 ml, 8,34 mmol) a produktu z příkladu 2(a) (373 mg, 1,39 mmol) v toluenu (7 ml). Roztok se 2 hodiny zahřívá ke zpětnému toku, ochladí, naředí se 10% vodným roztokem hydroxidu sodného a dvakrát se extrahuje ethylacetátem. Spojené organické extrakty se dvakrát extrahují 4N kyselinou chlorovodíkovou a spojené kyselé extrakty se alkalizují přidáním 10% roztoku hydroxidu sodného a ledu. Bázický roztok se 4x extrahuje ethylacetátem a spojené organické fáze se vysuší síranem sodným a odpaří, aby se získal žlutý olej (115 mg, 24 %), MS (+EI) ^m/z 338, NMR (360 MHz) (CDC1₃) 7,12 (1H, d, J 5,1 Hz), 7,05 (1H, d, J 5,1 Hz),

4,14 (2H, q, J 7,1 Hz), 3,91 (2H, široký s), 3,48 až 3,38 (2H, m), 3,07 (2H, q, J 7,4 Hz), 2,76 (2H, s), 1,75 (2H, d J 12,5 Hz), 1,52 (2H, dt, J 4,5, 12,2 Hz), 1,35 (3H, t,

J 7,3 Hz), 1,26 (3H, t, J 7,1 Hz).

(c) Ethyl-[4 -aminospiro[piperidin-4,6 (7 H)-thieno[3,2-c]22 φφφφ * φφ ·* ·· • φφφφ ···· φφφ · · · · · · · φ φ φ φ · · Φ·· φφφ • · φ φ φ φ φφφ φφφ φφ φ· φφ pyridin]-1-karboxylat]

Směs thioimidatu z kroku (b) uvedeného výše (150 mg,

0,443 mmol), chloridu amonného (64 mg, 0,44 mmol) a amoniaku (2N roztok v methanolu, 1 ml) v ethanolu (1 ml) se 3 hodiny zahřívala ke zpětnému toku. Ochlazený roztok se naředí diethyletherem a trituruje se, aby se získala hydrojodidová sůl jako béžové krystaly (112 mg, 60 %), teplota tání 242 až 252 °C (rozklad), MS (+EI) ^m/z 293, ¹H NMR (360 MHz) (dg-DMSO) 9,26 (2H, široký s), 7,69 (1H, d, J 5,4 Hz),

7,65 (ÍH, d, J 5,4 Hz), 4,05 (2H, q, J 7,0 Hz), 3,48 až 3,27 (4H, m), 1,72 (4H, t, J 5,5 Hz), 1,84 (3H, t, J 7,1 Hz).

Příklad 3

Ethyl-[7 -aminospiro[piperidin-4,5 (4 H)-thieno[2,3-c]pyridin]-1-karboxylat] (a) Ethyl-[4-hydroxy-4-(3-thienylmethyl)piperidin-l-karboxylat]

Tato sloučenina se připraví postupem z příkladu 2(a) za použití 3-thienyllithia s tím rozdílem, že reakce probíhá při -100 °C místo při -78 °C a po přidání epoxidu (příprava 1) se reakční směs během 30 minut ohřeje na -78 °C. Tento postup poskytne produkt jako bezbarvý olej (16 %), ¹H NMR (360 MHz) (CDC1₃) 7,32 až 7,30 (ÍH, m), 7,06 až 7,04 (ÍH, m), 7,01 až 6,98 (ÍH, m), 4,12 (2H, q, J 7,1 Hz), 4,0 až 3,8 (2H, široký s), 3,2 až 3,1 (2H, široký m), 2,79 (2H, s),

1,6 až 1,5 (4H, m), 1,26 (3H, t, J 7,1 Hz).

(b) Ethyl-[7 -(ethylthio)spiro[piperidin-4,5 (4 H)-thieno[2,3-c]pyridin]-1-karboxylat] ·· ·· ·* • · · · · · • · · · · · • · · ··· ··· • · · · ·· ·· ·· ···* • · ·

Tato sloučenina se připraví z produktu kroku (a) uvedeného výše postupem z příkladu 2(b), čímž se získá žlutý olej (30 %), MS(+EI) ^m/z 338.

(c) Ethyl-[7 -aminospiro[piperidin-4,5 (4 H)-thieno[2,3-c]pyridin]-1-karboxylat]

Tato sloučenina se připraví z produktu kroku (b) uvedeného výše postupem z příkladu 2(c), čímž se získá hydrojodidová sůl jako bílé krystaly, teplota tání více než 230 °C, MS (+EI) ^m/z 294, ¹H NMR (360 MHz) (dg-DMSO) 8,18 (ÍH, d, J 4,9 Hz), 7,22 (ÍH, d, J 4,9 Hz), 4,05 (2H, q,

J 7,0 HZ), 3,46 (4H, Široký S), 3,15 (2H, s), 1,71 (4H, široký s), 1,18 (3H, t, J 7,1 Hz).

Testy

Farmakologická aktivita sloučenin podle tohoto vynálezu byla testována použitím následujících testů.

Test 1

Aktivita sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enanciomeru, racemátu nebo tautomeru může být testována na inhibiční aktivitu syntetázy oxidu dusnatého postupem založeným na postupu uvedeném v Fórstermann a kol., Eur. J. Pharm., 225, 161 - 165 (1992).

O

Syntetáza oxidu dusnatého premenuje ^JH-L-arginin na ³H-L-citrullin, který může být oddělen ohromatogafií na kationtiontoměniči a kvantifikován počítačem scintilace tekutin.

• 4« ·

444

44 •

• 4

4 « 4

4 4 4

444 444

44

Enzym se po indukci připraví z kultivované linie myších makrofágových buněk J774A-1 (získané z laboratoří Imperiál Cancer Research Fund). Buňky J774A-1 se kultivují v Eaglesově mediu modifikovaném podle Dubblebecco (DMEM) doplněném 10% fetálním hovězím sérem, 4 mM L-glutaminu a antibiotiky (100 jednotek na ml penicilinu G, 100 mg na ml streptomycinu a 0,25 mg na ml amfotericinu B). Buňky se rutinně pěstují v lahvi o objemu 225 cm³ obsahující 35 ml media udržovaného při 37 °C a ve zvlhčované atmosféře obsahující 5 % C0₂.

Syntetáza oxidu dusnatého je buňkami tvořena jako odpověď na interferon-g (IFNg) a lipopolysacharid (LPS).

Medium ze splývajících kultivačních lahví se odstraní a nahradí 25 ml (na láhev) čerstvého media obsahujícího 1 mg na ml LPS a 10 jednotek na ml IFNg. Po časovém úseku 17 až 20 hodin v kultuře se zachycení buněk provede seškrábáním buněčného povlaku s povrchu lahve do kultivačního media.

Buňky se shromáždí odstředěním (1000 g po dobu 10 minut) a lyzát se připraví tak, že se k buněčným peletám přidá roztok obsahující 50 mM Tris-HCl (pH 7,5 při 20 °C), 10 % (objemově) glycerolu, 0,1 % (objemově) Triton-X-100, 0,1 mM dithiothreitolu a koktejl inhibitorů proteáz obsahující leupeptin (2 mg/ml), inhibitor trypsinu ze sójových bobů (10 mg/ml), aprotinin (5 mg/ml) a fenylmethylsulfonylfluoridu (50 mg/ml).

Pro stanovení se do jamek na filtrační plotně (velikost pórů 0,45 μη) s 96 prohlubněni obsahujících každá 25 μΐ roztoku testované sloučeniny v 50 mM Tris-HCl přidá 25 μΐ substrátového koktejlu (50 mM Tris-HCl (pH 7,5 při 20 °C), 400 μΜ NADPH, 20 μΜ flavinadenindinukleotidu, μΜ flavinmononukleotidu, 4 μΜ tetrahydrobiopterinu, • · • · • · · · · ··»· · · · · ♦ · · ·· · · 99 ·· · ··« • · · · · · ··· ··· · · · · ·» μΜ L-argininu a L-[³H]argininu s aktivitou 925 kBq). Reakce se spustí přidáním 50 μΐ buněčného lyzátu (připaveného jak je uvedeno výše) a po inkubaci během 1 hodiny při teplotě místnosti se ukončí přidáním 50 μΐ vodného roztoku 3 mM nitroargininu a 21 mM EDTA.

Značený L-citrullin se od značeného L-argininu oddělí použitím Dowexu AG-50W. Ke stanovení se přidá 150 μΐ 25% vodné suspenze Dowexu 50W (forma Na⁺) a potom se celá zfiltruje do ploten s 96 jamkami. 75 μΐ filtrátu se odebere jako vzorek a přidá do jamek 96-jamkové plotny obsahujících pevný scintilant. Poté, co se vzorky nechají sušit se L-citrullin kvantifikuje scintilačním počítáním.

V typickém experimentu je základní aktivita 300 rozpadů za minutu na 75 μΐ vzorku, která se zvýší na 1900 u kontrol s reagencii. Aktivita sloučenin se vyjadřuje jako IC₅₀ (koncentrace lékové substance, která ve stanovení poskytuje 50% inhibici enzymu), k ověření postupu je jako standard testován aminoguanidin, který dává IC₅₀ (50% inhibiční koncentrace) při 10 μΜ. Sloučeniny jsou testovány v rozmezí koncentrací a ze získaných inhibici jsou vypočítány hodnoty IC_5Q. Sloučeniny, které inhibují enzym přinejmenším z 25 % při 100 μΜ jsou klasifikovány jako aktivní a jsou podrobeny přinejmenším jednomu opakovanému testu.

Sloučeniny z příkladů 1 až 3 byly testovány výše uvedeným testem a dávaly hodnoty IC_5Q menší než 1 μΜ, což ukazuje, že se u nich dá předpovědět, že vykáží užitečnou terapeutickou aktivitu.

Test 2

£ F F * * * *

FFF F F · F · • · F FFFF

F F FF FFF FFF

FFF F F

FFF FF FF FF

Sloučeniny také vykazují aktivitu proti lidským formám indukované syntetázy oxidu dusnatého, jak je možné demonstrovat v následujícím stanovení.

Enzym se po indukci připraví z kultivované linie lidských buněk adrenokarcinomu tlustého střeva DLD 1 (získané z European Collection of Animal Cell Culture - buněčná linie číslo 90102540). Buňky DLD 1 se kultivují v mediu RPMI 1640 doplněném 10% fetálním hovězím sérem, 4 mM L-glutaminu a antibiotiky (100 jednotek na ml penicilinu G, 100 p,g na ml streptomycinu a 0,25 μg na ml amfotericinu B). Buňky se rutinně pěstují v lahvi o objemu 225 cm³ obsahující 35 ml media udržovaného při 37 °C a ve zvlhčované atmosféře obsahující 5 % co₂.

Syntetáza oxidu dusnatého je buňkami tvořena jako odpověď na interferon-τ (IFN-τ) a interleukin-ΐβ (IL-Ιβ).

Medium ze splývajících kultivačních lahví se odstraní a nahradí 25 ml (na láhev) čerstvého media obsahujícího 250 jednotek na ml IL-Ιβ a 1000 jednotek na ml IFN-τ. Po časovém úseku 17 až 20 hodin v kultuře se zachycení buněk provede seškrábáním buněčné monovrstvy z povrchu lahve do kultivačního media. Buňky se zachytí odstředěním (1000 g po dobu 10 minut) a lyzát připravený přidáním k buněčným peletám roztok obsahující 50 mM Tris-HCl (pH 7,5 při 20 °C), 10 % (objemově) glycerolu, 0,1 % (objemově) Tritonu-X-100, 0,1 mM dithiothreitolu a koktejl inhibitorů proteáz obsahující leupeptin (2 μg/ml), inhibitor trypsinu ze sójových bobů (10 μg/ml) aprotinin (5 μg/ml) a fenylmethylsulfonylfluoridu ( 50 μg/ml).

Pro stanovení se do jamek 96-jamkové plotny přidá 25 μΐ substrátového koktejlu (50 mM Tris-HCl (pH 7,5), 400 μΜ NADPH, 20 μΜ flavinadenindinukleotidu, 20 μΜ flavinmono» φ »· · Φ ►

- 27 φ φ φ · * « φ φ • φφφ φφφ φ φ φ φ φ φ nukleotidu a 4 μΜ tetrahydrobiopterinu. Testované sloučeniny se preinkubují s enzymem přidáním dohromady se 40 μΐ buněčného lyzátu (připraveného jak je uvedeno výše) a inkubací po hodinu při 37°C, na konci tohoto časového úseku se enzymatická reakce spustí přidáním 10 μΐ 30μΜ L-argininu a L-[³H]-argininu s aktivitou 925 kBq v 50 mM Tris-HCl. Inkubace pokračuje další 1 hodinu při 37 °C. Reakce se ukončí přidáním 50 μΐ vodného roztoku 3 mM nitroargininu a 21 mM

EDTA.

Značený L-citrullin se od značeného L-argininu oddělí použitím Dowexu AG-50W. 120 μΐ 25% vodné suspenze Dowexu 50W se přidá k filtračním deskám s 96 jamkami (velikost pórů 0,45 μπι) . K tomu se přidá 120 μΐ testovací směsi, ve které byla reakce ukončena. 75 μΐ filtrátu se odebere jako vzorek a přidá do jamek 96-jamkové pitný obsahujících pevný scintilant. Poté, co se vzorky nechají vysušit se L-citrullin kvantifikuje scintilačním počítáním.

V typickém experimentu je základní aktivita 300 rozpadů za minutu na 75 μΐ vzorku, která se za přítomnosti enzymu zvýší na 3000 rozpadů za minutu. Aktivita sloučenin se vyjadřuje jako IC₅₀ (koncentrace lékové substance, která ve stanovení poskytne 50% inhibicí enzymu), k ověření postupu je jako standard testován L-NMMA, který poskytne IC₅₀ při asi 0,4 μΜ. Sloučeniny jsou testovány v rozmezí koncentrací a ze získaných inhibicí jsou vypočítány hodnoty IC_5Q.

V tomto testu sloučeniny z příkladů 1 až 3 dávají hodnoty IC_5Q menší než 25 μΜ, což ukazuje, že se u nich dá předpovědět, že vykáží užitečnou terapeutickou aktivitu.

Claims (1)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Sloučenina obecného vzorce (I) (1) ve kterém A

   R² a R³ představuje benzenový kruh, šestičlenný heterocyklický aromatický kruh obsahující 1 až 3 atomy dusíku nebo pětičlenný heterocyklický aromatický kruh obsahující 1 až 3 heteroatomy, které mohou být stejné nebo odlišné a jsou vybrány z 0,

   N a S, nezávisle představují dusík, C-^ _ _g alkyl, alkoxy, C-^ _ θ alkylthio, halogen, hydroxyskupinu nebo aminoskupinu, představuje (i) fenyl, šestičlenný heterocyklický aromatický kruh obsahující 1 až 3 atomy dusíku nebo pětičlenný heterocyklický aromatický kruh obsahující 1 až 3 heteroatomy, které mohou být stejné nebo odlišné a jsou vybrány z 0, N a S, fenyl nebo heterocyklický aromatický kruh jsou případně substituovány C _χ _ _g alkylem, _ ₆ alkoxyskupinou, C₁ _ ₆ alkylthioskupinou, C₂ _ ₆ alkenylem, C₂ _ ₆ alkinylem, C₁ _ ₆ haloakylem, • · · · ^c2 - 12 alkoxyalkylem, C₂ _ ₁₂ alkylthioalkylem, aminoskupinou, halogenem, hydroxyskupinou, kyanoskupinou nebo nitroskupinou, nebo (ii) OR⁴, kde R⁴ představuje _ ₆ alkyl,

   C₂ _ ₆ alkenyl, C₂ _ θ alkinyl, _g haloalkyl, C₂ _ ₁₂ alkoxyalkyl, C₂ _ ₁₂ alkylthioalkyl, C_? _ ₁₂ arylalkyl, C₇ _ ₁₂ aryloxyalkyl, aminoskupinu nebo halogen

   X představuje CH₂, CO, 0 nebo S(0)_n, kde n představuje celé číslo od 0 do 2, a její farmaceuticky přijatelná sůl, enanciomer

   nebo tautomer. 2. Sloučenina obecného vzorce (I) podle nároku 1, ve kterém A představuje thienový kruh. 3. Sloučenina obecného vzorce (I) podle nároku 1, ve kterém X představuje ch₂. 4. Sloučenina obecného vzorce (I) podle nároku 1, ve kterém X představuje 0. 5. Sloučenina obecného vzorce (I) podle nároku 1, ve kterém A představuje thienový kruh a X představuje CH₂ nebo 0. 6. Sloučenina obecného vzorce (I), která je:

   ethyl-[4-amino-5-fluorspiro[2H-(1,3)-benzoxazin-2,4 -piperidin]-! -karboxylat], ethyl-[4 -aminospiro[piperidin-4,6 (7 H)-thieno[3,2-c]• · · 9

   9 ··

   9·9 • 9

   9« I «

   9 ·

   9 9 pyridin]-l-karboxylat], ethyl-[7 -aminospiro[piperidin-4,5 (4 H)-thieno[2,3-c]pyridin]-l-karboxylat], nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, enanciomer nebo tautomer.

   7. Sloučenina obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 6 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, enanciomer nebo tautomer pro použití jako léčivo.

   8. Farmaceutický přípravek vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 6 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, enanciomer nebo tautomer, ve směsi s farmaceuticky přijatelným adjuvanciem, ředidlem nebo nosičem.

   9. Použití sloučeniny obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 6 nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enanciomeru nebo tautomeru pro výrobu léčiva pro léčbu nebo profylaxi nemocí nebo stavů člověka, při nichž je inhibice syntetázy oxidu dusnatého prospěšná.

   10. Použití podle nároku 9, kde je to především indukovatelná syntetáza oxidu dusnatého, která má být inhibována.

   11. Použití sloučeniny obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 6 nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enanciomeru nebo tautomeru pro výrobu léčiva pro léčbu nebo profylaxi zánětlivých onemocnění.

   12. Použití podle nároku 11, kde nemocí je astma nebo revmatoidní artritida.

   * · ·· 44 • · · • 4 4 ··· 4·· • · • 4 44

   13. Použití sloučeniny obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 6 nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enanciomeru nebo tautomeru pro výrobu léčiva pro léčbu nebo profylaxi bolesti.

   14. Použití sloučeniny obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 6 nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enanciomeru nebo tautomeru v kombinaci s inhibitorem COX-2 pro výrobu léčiva pro léčbu nebo profylaxi zánětlivých onemocnění .

   15. Způsob léčení nebo snižování rizika nemocí nebo stavů lidí, kdy je inhibice aktivity syntetázy oxidu dusnatého prospěšná, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I), podle některého z nároků 1 až 6, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, enanciomer nebo tautomer osobě trpící takovými nemocemi nebo stavy nebo se zvýšeným rizikem takových nemocí nebo stavů.

   16. Způsob léčení podle nároku 15,vyznačuj ící se tím, že je to především indukovatelná syntetáza oxidu dusnatého, která má být inhibována.

   17. Způsob léčení nebo snížení rizika zánětlivého onemocnění u osoby trpící uvedenou nemocí nebo s rizikem uvedené nemoci,vyznačující se tím, že zahrnuje podávání této osobě terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 6, nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enanciomeru nebo tautomeru.

   • · · • *

   18. Způsob léčení podle nároku 17, vyznačuj íc i se t í m, že nemocí je astma nebo revmatoidní artritida.

   19. Způsob léčení bolesti nebo snížení jejího rizika u osoby trpící uvedeným stavem nebo s rizikem uvedeného stavu, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání této osobě terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 6, nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enanciomeru nebo tautomeru.

   20. Způsob léčení zánětlivého onemocnění nebo snížení jeho rizika u osoby trpící uvedenou nemocí nebo s rizikem uvedené nemoci, vyznačující se tím, že zahrnuje, podávání této osobě terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 6, nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enanciomeru nebo tautomeru, s inhibitorem COX-2.

   21. Způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 6, nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli, enanciomeru nebo tautomeru, vyznačuj ίο í se tím, že sestává z:

   (a) reakce sloučeniny obecného vzorce (II)

   R?

   XH

   R³

   ()

   NH

   NH₂ ve kterém

   A, R² a R³ X jsou jak je definováno výše a představuje 0 nebo S, se sloučeninou obecného vzorce (III) nebo jejím ♦ ft ftft • · · · • · · · ••ft ftftft • · acetalovým derivátem

   R⁵ c o R⁶ (III) ve kterém

   R⁵ a R⁶ dohromady představují (CH₂)₂“ Z- (CH₂)₂z Z představuje NÍCOR¹) a

   R je jak je definováno výše, nebo (b) reakce sloučeniny obecného vzorce (IV) nebo (IV ) ve kterých

   A, X, R² a R³ jsou jak je definováno výše,

   R⁵ a R⁶ jsou jak je definováno v možnosti (a), a

   O

   R představuje alkylovou skupinu, s amoniakem nebo jeho ekvivalentem, nebo (c) odstranění chránících skupin ze sloučeniny obecného • · ·« • ··

   000 000 vzorce (I), ve které jsou jeden nebo více atomů dusíku a/nebo jiný atom chráněny, nebo (d) reakce sloučeniny obecného vzorce (V) ve kterém

   O o

   A, X, R⁴ a R 3sou jak je definováno výše, se sloučeninou obecného vzorce (VI)

   Z - L (VI) ve kterém η

   Z představuje COR, η

   R je jak je definováno výše, a

   L je odštěpitelná skupina, nebo (e) přípravy sloučeniny obecného vzorce (I), ve kterém X představuje S(0)_n a n je 1 nebo 2, oxidací odpovídající sloučeniny, ve které X představuje S, a kde je to požadováno nebo nezbytné,se vzniklá sloučenina obecného vzorce (I) nebo její jiná sůl, převede na její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo naopak, a kde je to požadováno, se vzniklá sloučenina obecného vzorce (I) převede na její optický isomer.