SK281205B6 - Deriváty bicyklickej izotiomočoviny, spôsoby ich prípravy, farmaceutické kompozície s ich obsahom a ich použitie - Google Patents

Deriváty bicyklickej izotiomočoviny, spôsoby ich prípravy, farmaceutické kompozície s ich obsahom a ich použitie Download PDF

Info

Publication number
SK281205B6
SK281205B6 SK1040-97A SK104097A SK281205B6 SK 281205 B6 SK281205 B6 SK 281205B6 SK 104097 A SK104097 A SK 104097A SK 281205 B6 SK281205 B6 SK 281205B6
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
formula
compound
methyl
substituted
nxy
Prior art date
Application number
SK1040-97A
Other languages
English (en)
Other versions
SK104097A3 (en
Inventor
James Edwin Macdonald
Original Assignee
Astra Aktiebolag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GBGB9502669.6A external-priority patent/GB9502669D0/en
Priority claimed from GBGB9502670.4A external-priority patent/GB9502670D0/en
Application filed by Astra Aktiebolag filed Critical Astra Aktiebolag
Publication of SK104097A3 publication Critical patent/SK104097A3/sk
Publication of SK281205B6 publication Critical patent/SK281205B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D217/00—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems
    • C07D217/02—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems with only hydrogen atoms or radicals containing only carbon and hydrogen atoms, directly attached to carbon atoms of the nitrogen-containing ring; Alkylene-bis-isoquinolines
    • C07D217/04—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems with only hydrogen atoms or radicals containing only carbon and hydrogen atoms, directly attached to carbon atoms of the nitrogen-containing ring; Alkylene-bis-isoquinolines with hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals attached to the ring nitrogen atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C335/00—Thioureas, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C335/30—Isothioureas
    • C07C335/32—Isothioureas having sulfur atoms of isothiourea groups bound to acyclic carbon atoms

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Deriváty izotiomočoviny všeobecného vzorca (I), kde D predstavuje C1-6alkyl; T predstavuje C3-5 nasýtený alebo nenasýtený alkylénový reťazec substituovaný skupinou -(CH2)m-NXY; reťazec -O-(CH2)2-NH- substituovaný skupinou -(CH2)m-NXY alebo reťazec -U-(CH2)a-N(X)-(CH2)b-; spôsoby ich prípravy; farmaceutické prípravky, ktoré obsahujú uvedené zlúčeniny a ich použitie v lekárstve.ŕ

Description

Oblasť techniky
Tento vynález sa týka derivátov izotiomočoviny, spôsobov ich prípravy, kompozícií, ktoré ich obsahujú a ich použitia ako nervovo ochranných činidiel.
Doterajší stav techniky
Deriváty tiomočoviny a izotiomočoviny boli opísané skôr na rôzne terapeutické použitie. WO 94/12165 (Wellcome) opisuje jednoduché deriváty izotiomočoviny na použitie pri liečení okrem iného systemickej hypotenzie, septického šoku a zápalových prípadov; WO 95/09619 (Wellcome) (publikované po dátume priority tejto prihlášky) opisuje substituované deriváty močoviny a izomočoviny na použitie pri liečbe cerebrálnej ischémie; patent Veľkej Británie č. 1178242 (Wellcome) opisuje, že bisizotiomočovina má protizápalový účinok; európska patentová prihláška č. 411615 (Wamer Lambert) opisuje, že deriváty tiomočoviny možno použiť pri liečení symptómov zníženej schopnosti poznávať; európska patentová prihláška č. 392802 (Beecham) opisuje, že deriváty tiomočoviny možno použiť pri liečení bronchiálnych cerebrovaskulámych alebo neuronálnych porúch.
Deriváty izotiomočoviny sú tiež známe ako chemické medziprodukty pri príprave derivátov guanidínu (pozri patent US 4,211,867 (McNeil Laboratories) a Synthesis (1988) 6, 460-466 (Rasmussen)), ktorý opisuje metylester kyseliny 4-dimetylaminofenylkarbamidovej a US patent 5,223,498 (Boots).
Deriváty N-alkoxyfenyl-N'-chinolinyl-tiomočoviny použiteľné ako tuberkulostatické činidlá sú opísané v DE-B-l 157626 (Hoechst).
Medzinárodná prihláška WO 95/05363 (Fisons) (vydaná po dátume priority tejto prihlášky) opisuje deriváty N-fenyl amidínu, ktoré sú indikované na liečbu okrem iného neurodegeneratívnych ochorení.
Podstata vynálezu
Teraz sme objavili novú a výhodnú skupinu derivátov izotiomočoviny.
Podľa tohto vynálezu sú poskytované deriváty izotiomočoviny vzorca (I) .6-alkylskupinu, Ci_6-alkoxyskupinu, trifluórmetyl skupinu, halogén, nitroskupinu a kyanoskupinu;
m a n nezávisle sú celé čísla od 0 do 5;
a ich farmaceutický prijateľné soli.
Výhodne T predstavuje reťazec -U-(CH2)a -N(X)-(CH2)b-. Obzvlášť výhodne T predstavuje reťazec -U-(CH2)a -N(X)- (CH2)t,- a U predstavuje CH2. Veľmi výhodne T predstavuje reťazec -U-(CH2)a -N(X)- (CH2)b- a U predstavuje CH2 a a aj b je 1.
Výhodne D predstavuje Cb3-alkyl skupinu, predovšetkým metyl skupinu alebo etyl skupinu, hlavne etyl skupinu.
Ak T predstavuje reťazec -U-(CH2)a -N(X)- (CH2)b-, X výhodne predstavuje vodík, metyl skupinu alebo skupinu -(CH2)Q.
Výhodne sa n rovná 1.
Výhodne Q predstavuje fenyl alebo fenyl substituovaný substituentom vybranými zo skupiny zahŕňajúcej C].6-alkyl skupinu, -alkoxyskupiny, trifluórmetyl skupinu, halogén, nitroskupinu a kyanoskupinu. Výhodné je hlavne ak Q predstavuje fenyl alebo fenyl substituovaný Cbb-alkylom alebo halogénom.
Tento vynález tiež poskytuje spôsob na prípravu zlúčenín vzorca (I) a ich farmaceutický prijateľných soli, ktorý zahŕňa:
a) prípravu zlúčeniny vzorca (I), kde X alebo aspoň jeden z X a Y predstavuje C,.6-alkyl alebo skupinu -(CH2)„Q, reakciou príslušnej zlúčeniny vzorca (I), kde X alebo jeden alebo oba z X a Y predstavujú vodík, so zlúčeninou vzorca (Π)
R' - L (II), kde R1 predstavuje Cw-alkyl skupinu alebo skupinu -(CH2)„Q a L je odstupujúca skupina, alebo
b) prípravu zlúčeniny vzorca (I), kde T predstavuje C3.5 nasýtený alebo nenasýtený alkylénový reťazec substituovaný skupinou -(CH2)m - NXY; reťazec -O-(CH2)2-NH- substituovaný skupinou -(CH2)m - NXY, reakciou zodpovedajúcej zlúčeniny, kde T predstavuje C3.s nasýtený alebo nenasýtený alkylénový reťazec substituovaný skupinou -(CH2)m-L alebo reťazec -O-(CH2)2-NH- substituovaný skupinou -(CH2)m-L a L predstavuje odstupujúcu skupinu, so zlúčeninou vzorca (III)
ΧΥΝΗ (III), kde X a Y sú definované alebo
c) reakciu zlúčeniny vzorca (IV)
kde
D predstavuje C^-alkylovú skupinu,
T predstavuje C3.5 nasýtený alebo nenasýtený alkylénový reťazec substituovaný skupinou -(CH2)m - NXY; reťazec -O-(CH2)2-NH- substituovaný skupinou -(CH2)m - NXY; alebo reťazec -U-(CH2)a-N(X)- (CH2)b-;
U predstavuje NH, O alebo CH2;
a a b, ktoré môžu byť rovnaké alebo odlišné, prestavujú celé číslo od 0 do 3 s podmienkou, že a + b je v rozmedzí od 1 do 3;
X a Y, ktoré môžu byť rovnaké alebo odlišné, predstavujú vodík, C1.6-alkylskupinu alebo skupinu -(CH2)nQ, alebo NXY spoločne predstavujú piperidinyl, pyrolidinyl, morfolinyl alebo tetrahydroizochinolinyl;
Q je fenyl alebo fenyl substituovaný jedným alebo viacerými substituentmi vybranými zo skupiny zahrnujúcej Cb kde T je definované so zlúčeninou vzorca (V)
D-L (V), kde D jc definované a L jc odstupujúca skupina, a kde je nutné alebo žiaduce, konvertovanie konečnej zlúčeniny na jej farmaceutický prijateľnú soľ alebo vice verša, ako je opísané.
V postupoch a) a b) sa reakcie uskutočňujú v štandardných podmienkach, napr. reakciou dvoch metanálov v inertnom rozpúšťadle v základných podmienkach pri izbovej teplote počas 12 hodín. Bolo zistené, že je vhodné upraviť amín pomocou NaH skôr, ako bude reagovať s inou zlúčeninou. Vhodné odstupujúce skupiny L zahŕňajú tioalkylovú skupinu, sulfonylovú skupinu, trifluorokarbón sulfonylovú skupinu, halogén, alkoxyskupinu alebo aryloxyskupinu a tozylové skupiny; ostatné sú vymenované v „Advanced Organic Chemistry“, J. March (1985), 3. vydanie,
McGraw-HilI na strane 315 a sú v tomto odbore dobre známe. Výhodne L predstavuje halogén, predovšetkým bróm.
V spôsobe c) reakcia prebieha kombináciou týchto dvoch reaktantov v inertnom rozpúšťadle, napT. acetóne. Vhodné odstupujúce skupiny, ktoré môže L reprezentovať, zahŕňajú tioalkylovú skupinu, sulfonylovú skupinu, trifluórkarbonsulfonylovú skupinu, halogén, alkoxyskupinu alebo aryloxyskupinu a tozylové skupiny; ostatné sú vymenované v „Advanced Organic Chemistry“, J. March (1985), 3. vydanie, McGraw-Hill na strane 315 a sú v tomto odbore dobre známe. Výhodne sú použité jód, toluénsulfónan alebo derivát metánsulfónanu.
Zlúčeniny vzorca (IV) môžu byť pripravené podľa metódy Rasmussena et al „Synthesis“ (1988) 456-459. Zlúčeniny vzorca (II) môžu byť takto pripravené reakciou zlúčeniny vzorca (VI)
kde T je definované, s benzoylizotiokyanidom, po ktorej nasleduje vodné alkalické štiepenie výsledného derivátu benzoyltiomočoviny.
Zlúčeniny vzorca (VI) môžu byť pripravené redukciou príslušnej zlúčeniny vzorca (VII),
kde T je definované.
Redukčná reakcia môže byť uskutočnená v niekoľkých podmienkach, napr. v tých, ktoré boli opísané v „Advanced Organic Chemistry“, J. March (1985), 3. vydanie, na stranách 1103-1104. Tieto zahŕňajú katalytickú hydrogenáciu, použitie kovov Zn, Sn alebo Fe, A1H3-A1C13, sulfidov a iných. Výhodné je uskutočňovať túto reakciu hydrogenáciou pri atmosférickom tlaku v prítomnosti paládia a uhlíkového katalyzátora, typicky počas 1 až 4 hodín alebo do dokončenia redukcie.
Zlúčeniny vzorca (VII), v ktorých T je podľa uvedenej definície a X alebo aspoň jeden z X a Y predstavujú Cw-alkyl alebo skupinu -(CH2)aQ, môžu byť pripravené v reakcii zodpovedajúcej zlúčeniny vzorca (VII), v ktorom X alebo Y predstavuje vodík, so zlúčeninou vzorca (II).
Táto reakcia môže byť uskutočňovaná v podmienkach analogických s tými, ktoré sú opísané v spôsobe a).
Zlúčeniny vzorca (VII), v ktorom T predstavuje nasýtený alebo nenasýtený alkylénový reťazec C3-5 substituovaný skupinou -(CH2)m - NXY alebo reťazec -O-(CH2)2-NHsubstituovaný skupinou -(CH2)m - NXY, môžu byť pripravené reakciou príslušnej zlúčeniny, v ktorej T predstavuje nasýtený alebo nenasýtený alkylénový reťazec C3-5 substituovaný skupinou -(CH2)m - L alebo reťazec -O-(CH2)2-NH- substituovaný skupinou -(CH2)m - L a L predstavuje odstupujúcu skupinu, so zlúčeninou vzorca (III).
Táto reakcia môže byť uskutočňovaná v podmienkach analogických s tými, ktoré sú opísané v spôsobe b).
Zlúčeniny vzorca (VII), kde X predstavuje vodík, sú buď známe, alebo môžu byť pripravené známymi spôsobmi. Napríklad môžu byť pripravené nitráciou nenitrovaného derivátu. Táto nitračná reakcia sa vo všeobecnosti uskutočňuje reakciou nenitrovanej aromatickej zlúčeniny s kyselinou dusičnou samostatne alebo vo vode, v kyseline octovej, v anhydride kyseliny octovej alebo v kyseline sírovej. Ďalšie podrobnosti týchto reakcií a ďalšie alternatívne Činidlá sú uvedené v J. March „Advanced Organic Chemistry“, 3. vydanie (1985) na str. 468-470.
Zlúčeniny vzorcov (II, III a V) sú buď známe, alebo môžu byť pripravené všeobecne známymi metódami.
Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) môžu byť pripravené samé osebe alebo ako ich kyslé adičné soli opísaného typu. Alebo môžu byť pripravené ako farmaceutický neprijateľná adičná soľ, napr. soľ kyseliny šťaveľovej, a akýkoľvek produkt tejto reakcie môže byť následné konvertovaný konvenčnými prostriedkami na farmaceutický prijateľnú soľ.
Soli zlúčenín vzorca (I) môžu byť vytvárané reakciou voľnej kyseliny, zásady alebo ich solí s jedným alebo viacerými ekvivalentmi príslušnej zásady alebo kyseliny. Reakcia môže byť uskutočňovaná v rozpúšťadle alebo v prostredí, v ktorom sa soľ nerozpúšťa, napr. vo vode, dioxáne, etanole, tetrahydrofuráne alebo dietyléteri, alebo zmesi rozpúšťadiel, ktorá môže byť odstránená in vacuo alebo vysušením v mraze. Reakcia môže byť metatetickým procesom alebo môže byť uskutočňovaná na iónomeničovej živici.
Tam, kde je to nutné, amínové alebo iné reaktívne skupiny môžu byť chránené použitím chrániacej skupiny, ako je opísané v štandardnom texte Greene a Wuts, „Chrániace skupiny v organickej syntéze“ („Protecting groups in Organic Synthesis“), ž.vydanie (1991). Amínové chrániace skupiny, ktoré môžu byť uvedené, zahŕňajú predovšetkým alkyloxykarbonyl C2-7, napr. t-butyloxykarbonyl, fenylalkyloxykarbonyl, C8-|3, napr. benzyloxykarbonyl. Odporúčame však, aby amínové skupiny boli chránené úpravou pomocou anhydridu kyseliny trifluorooctovej vo vhodnom rozpúšťadle (napr. metylénchloride, metanole) pri izbovej teplote. Odstránenie ochrany je možné dosiahnuť hydrolýzou vo vode.
Zlúčeniny podľa tohto vynálezu a medziprodukty môžu byť izolované zo svojich reakčných zmesí štandardnými technikami.
Termín „alkyl C,-6“ zahŕňa priamy reťazec, rozvetvený, nasýtený, nenasýtený, alifatický a cyklický alkyl obsahujúci 1 až 6 atómov uhlíka. „Alkyl Ct-3“ môže byť vyjadrený obdobne.
Zlúčeniny vzorca (1) môžu existovať v enantiomerických formách. Rôzne optické izoméry môžu byť izolované separáciou racemickej zmesi zlúčenín použitím konvenčných techník, napr. fŕakčnou kryštalizáciou alebo HPLC. Alebo môžu byť jednotlivé enantioméry vytvorené reakciou vhodných opticky aktívnych východiskových materiálov v reakčných podmienkach, ktoré nespôsobujú racemizáciu.
Medziprodukty môžu tiež existovať v enantiometrických formách a môžu byť použité ako čisté enantioméry, diastereoméry, racemáty alebo zmesi.
Zlúčeniny vzorca (I) majú použiteľnú farmakologickú aktivitu pri zvieratách. Predovšetkým majú vhodnú schopnosť inhibovať syntézu oxidu dusičného a predpokladá sa, že ich možno použiť pri liečbe alebo profylaxii ochorení osôb alebo v podmienkach, v ktorých syntéza alebo nadbytočná syntéza oxidu dusičného spolupôsobí; napr. hypoxia, napr. v prípadoch zástavy srdca, infarktu a neonatálnej hypoxie, v neurodegeneratívnych prípadoch, vrátane degenerácie nervov alebo odumretia nervov pri poruchách, akými sú ischémia, hypoxia, hypoglykémia, epilepsia a pri externých poraneniach (napr. poraneniach miechy a hlavy), pri kŕčoch a toxicite spôsobenej hyperbarickým kyslíkom, demencii, napr. pre-senilnej demencii, Alzheimerovej chorobe a demencii v súvislosti s AIDS, Sydenhamsovej chorei, Parkinsonovej chorobe, Huntingtonovej chorobe, amyotropickej laterálnej skleróze, Korsakoffovej chorobe, imbecilite súvisiacej s ochorením mozgových ciev, pri poruchách
SK 281205 Β6 spánku, schizofrénii, pocitoch úzkosti, depresie, sezónnych emočných poruchách, pásmových chorobách (poruchy biorytmu), depresiách alebo iných symptómoch súvisiacich s premenštruačným syndrómom (PMS), pocitoch úzkosti a septickom šoku. Možno predpokladať, že zlúčeniny vzorca (I) môžu byť účinné tiež pri prevencii a zmenenej tolerancie proti opiátom a diazepinom, liečení drogovej závislosti, pri úľave od bolesti a liečbe migrény a iných vaskulámych bolestí hlavy. Zlúčeniny predloženého vynálezu môžu tiež mať užitočnú imunosupresívnu aktivitu, byť užitočné pri liečbe a profylaxii zápalu, pri liečení porúch gastrintestinálnej pohyblivosti a pri vyvolávaní pôrodu. Tieto zlúčeniny môžu byť tiež užitočné pri liečbe rakovín, ktoré exprimujú syntetázu oxidu dusičného.
Zlúčeniny vzorca (I) budú pravdepodobne hlavne použité pri liečbe alebo prevencii neurodegeneratívnych problémov alebo migrény, alebo pri prevencii a zmene tolerancie proti opiátom a diazepinom alebo na liečbu drogovej závislosti a predovšetkým na liečbu alebo prevenciu neurodegeneratívnych chorôb. Predovšetkým je záujem o prípady vybrané zo skupiny pozostávajúcej z hypoxie, ischémie, infarktu a amyotropickej laterálnej sklerózy.
Takže vynález poskytuje použitie zlúčeniny podľa vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľnej soli ako liečiva.
Vynález sa ďalej týka použitia zlúčeniny vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľnej soli na výrobu liečiva alebo prevenciu uvedených ochorení alebo stavov.
Zlúčeniny vzorca (I) aj ich farmaceutický prijateľné deriváty môžu byť používané samostatne alebo vo forme vhodných liečivých prípravkov a podaní.
Podľa vynálezu je poskytovaná farmaceutická kompozícia obsahujúca výhodne menej ako 80 % a výhodnejšie menej ako 50 % zlúčeniny vzorca (I), alebo jej farmaceutický prijateľnej soli, spolu s farmaceutický prijateľným riedidlom alebo nosičom.
Vynález sa ďalej týka spôsobu prípravy farmaceutického prípravku, ktorý zahŕňa miešanie prísad.
Príkladmi takýchto riedidiel a nosičov sú: pre tablety a dražé: laktóza, škrob, mastenec, kyselina stearová; pre kapsuly: kyselina vínna alebo laktóza; pre injekčné roztoky: voda, alkoholy, glycerín, rastlinné oleje; pre čapíky: prírodné alebo stužené tuky alebo vosky.
Kompozície vo forme vhodnej na orálne, t. j. ezofagiálne podanie zahŕňajú: tablety, kapsuly a dražé; dlhodobo uvoľňujúce zmesi zahŕňajú také, v ktorých je aktívna prísada viazaná na ionomeničovú živicu, ktorá môže byť potiahnutá difúznou prekážkou, ktorá modifikuje uvoľňovacie vlastnosti živice.
Je odporúčané, aby zmes obsahovala 50 %, výhodne do 26 % hmotn. zlúčeniny podľa vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľného derivátu.
Syntáza enzýmu oxidu dusičného má množstvo izoforiem a zlúčeniny vzorca (I) a ich farmaceutický prijateľné soli môžu byť selektované na spôsoby inhibície syntázy oxidu dusičného založené na prácach Bredta a Snydera v Proc. Natl.Acad. Sci (1990), 87, 682-685 a Forstermanna et al., Eur. J. Pharm. (1992), 225,161-165 nasledovne. Syntáza oxidu dusičného konvertuje 3H-L-arginín na 3H-L-citrulín, ktorý môže byť separovaný katiónovou výmennou chromatografiou a kvantifikovaný scintilačným počítaním.
Selekcia A (A) Selekcia na inhibičnú aktivitu neuronálnej syntázy oxidu dusičného
Enzým je izolovaný z hyppocampu alebo malého mozgu krysy. Hyppocampus alebo malý mozok samca krysy
Sprague-Dawley (250-275 g) je odobratý zvieraťu po anestézii CO2 a sťatí hlavy. Supematant malého mozgu alebo hyppocampu je pripravený homogenizáciou v 50 mM Tris-HCl s tlmivým roztokom lmM EDTA (pH 7,2 pri 25 °C) a centrifugáciou počas 15 minút pri 20 000 g. Reziduálny L-arginín je odstránený zo supematanta chromatografíou postupne pomocou stĺpcov sodíkovej formy a vodíkovej formy Dowex AG-50W-X8 a ďalšou centrifugáciou pri 1000 g počas 30 sekúnd.
Na analýzu je pridané 25μ1 finálneho supematanta do každej z 96 jamiek (na filtračnej platni s 96 jamkami) obsahujúcich 25 μί roztoku L-arginínu (s koncentráciou 18 μΜ 'H-L-arginínu, 96 nM 3H-L-arginínu) a tiež 25 μΐ analyzačného pufŕa (50 mM HEPES, lmM EDTA, 1,5 mM CaCl2, pH 7,4) alebo 25 μί testovacej zmesi v pufŕi pri 22 °C. Do každej testovacej skúmavky je pridané 25 μί kompletného analytického pufru (50 mM HEPES, lmM EDTA, 1,5 mM CaCl2 . 1 mM DTT, 100 μΜ NADPH, 10 μg/ml kalmodulínu, pH 7,4) na naštartovanie reakcie a reakcia je ukončená po 10 minútach pridaním 200 μί kaše terminačného puŕŕa (20 mM HEPES, 2 mM EDTA, pH 5,5) a pletiva Dowex AG-50W-X8 veľkosť oka 200-400.
Značený L-citrulín je oddelený od značeného L-arginínu filtrovaním každej filtračnej platne a 75 μί z každej ukončenej reakcie je pridané k 3 ml scintilačného koktailu. L-citrulín je potom kvantifikovaný scintilačným počítaním.
V typickom experimente sa použitím cerebelámeho supematanta bazálna aktivita zvýši o 20 OOOdpm na ml vzorky proti blanku, ktorého aktivita je 7 000 dpm na ml. Referenčný štandard N-nitro-L-arginín, ktorý má 80 % inhibíciu syntázy oxidu dusičného pri koncentrácii 1 μΜ, je v skúške testovaný na overenie postupu.
Selekcia B (B) Selekcia na indukovanú inhibičnú aktivitu neuronálnej syntázy oxidu dusičného
Enzým je po indukcii pripravený z kultivovaných ľudských bunkových línií koíorektálneho karcinómu, DLD-1 (získaného z Európskej banky živočíšnych bunkových kultúr, European Collection of Animal Celí Cultures). Bunky DLD-1 sú kultivované v médiu RPMI 1640 doplneným 10 % fetálnym bovinným sérom, 4 mM L-glutamínom a antibiotikami (100 jednotiek/ml penicilínu G, 100 pg/ml streptomycínu a 0,25 pg/ml amfotericínu B) a 100 pg/ml kanamycínu. Bunky normálne rastú v 225 cm3 bankách s obsahom 35 ml roztoku a sú udržiavané na teplote 37 °C a pri zvlhčenej atmosfére s obsahom 5 % CO2.
Syntáza oxidu dusičného je produkovaná bunkami ako reakcia na interferón - okolo 250 U/ml IL-1, 1000 U/ml IFNy, 200 U/ml IL-6 a 200 U/ml TNF-alfa. Po uplynutí 17-20 hodín je v kultúre uskutočnený zber buniek zoškrabnutím vrstvy buniek z povrchu banky do kultúrneho roztoku. Bunky sú zhromaždené centrifugáciou (1000 g počas 10 minút) a lyzát je pripravený pridaním roztoku s obsahom 50 mM Tris-HCl (pH 7,5 pri 20 °C), 10 % (v/v) glycerolu, 0, 1 % (v/v) Tritonu -X-100, 0,1 μΜ ditiotreitolu a koktailu inhibítorov proteázy, ktorý obsahuje lupeptín (2 pg/ml), inhibítor trypsínu so sójových bôbov (10 pg/ml), aprotinín (5 pg/ml) a fenylmetylsulfonyl fluorid (50 pg/ml) do bunkového peletu.
Na analýzu je 25 μί koktailu substrátu (50mM Tris-HCl (pH 7,5 pri 20 °C), 400 μΜ NADPH, 20 μΜ flavín adenín dinukleotidu, 20 μΜ flavín mononukleotidu, 4 μΜ tetrahydrobiopterínu, 12 μΜ L-arginínu a 0,025 pCi L-[3H] arginínu) pridaných do jamiek filtračnej platne s 96 jamkami (veľkosť póru 0,45 μΜ) obsahujúcich 25 μί roztoku testo
SK 281205 Β6 vanej zmesi v 50 mM Tris-HCl. Reakcia sa začne pridaním 50 μΐ bunkového lyzátu (príprava pozri vyššie) a po inkubácii počas 1 hodiny pri izbovej teplote je ukončená pridaním 50 μΐ vodného roztoku 3 mM nitoarginínu a 21 mM EDTA.
Značený L-citrulín je oddelený od značeného L-arginínu použitím Dowex AG-50W. Do testovanej zmesi sa pridá 150 μΐ 25 % vodnej kaše Dowex 50W (vo forme Na4) a potom sa zmes filtruje na platniach s 96 jamkami. Zo 70 μΐ filtrátu sú vytvorené vzorky a pridané do jamiek na platni s 96 jamkami, ktoré obsahujú pevné scintilačné látky.
Po vysušení vzorky je L-citrulín kvantifikovaný scintilačným počítaním.
V typickom experimente je bazálna aktivita 300 dpm na 70 μΐ vzorky, čo sa zvýši na 1900 dpm v reagenčných kontrolách. Aminoguanidín, ktorý má IC50 (50 % koncentrácia inhibítora) pri 10 μΜ, je testovaný ako štandard s cieľom overiť postup.
Selekcia C (C) Selekcia na inhibičnú aktivitu endoteliálnej syntázy oxidu dusičného
Enzým môže byť izolovaný z endoteliálnych buniek ľudskej pupočnej žily (human umbilical vein endothelial celí, HUVEC) postupom založeným na práci Pollock et al. (1991) Proc. Nat. Acad. Sci., 88, 10480-10484). Bunky HUVEC boli zakúpené od Clonetics Corp (San Diego, Kalifornia, Spojené štáty americké) a kultivované, až kým nevytvorili súvislú vrstvu. Bunky môžu byť pasážované 35 až 40-krát bez významných strát výťažku syntázy oxidu dusičného. Len čo bunky vytvoria súvislú vrstvu, sú opätovne suspendované v Dulbeccovom fosfátovom pufrovom fyziologickom roztoku, odstredené pri 800 ot/min. počas 10 minút, pelety buniek homogenizované v ľadovo chladnom roztoku 50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 % glycerole, 1 mM fenylmetylsulfonylfluoridu, 2 μΜ leupeptínu s pH 4,2. Po centrifugácii pri 34 000 ot./min. počas 60 minút je pelet rozpustený v homogenizačnom pufri, ktorý tiež obsahuje 20 mM CHAPS. Po 30 minútach inkubácie na ľade je suspenzia odstreďovaná pri 34 000 ot/min. počas 30 minút. Výsledný supematant je uskladnený pri teplote - 80°C až do použitia.
Na analýzu sa pridá 25μ1 finálneho supematanta do každej z 96 jamiek obsahujúcich 25 μΐ roztoku L-argininu (s koncentráciou 12 μΜ ’H-L-arginínu, 64 nM 3H-L-arginínu) a tiež 25 μΐ skúšobného tlmivého roztoku (50 mM HEPES, lmM EDTA, 1,5 mM CaCl2, pH 7,4) alebo 25 μΐ testovacej zmesi v pufri pri 22 °C. Do každej jamky je pridané 25 μΐ kompletného analytického pufra (50 mM HEPES, lmM EDTA, 1,5 mM CaCl2 . 1 mM DTT, 100 μΜ NADPH, 10 pg/ml kalmodulínu, 12 μΜ tetrahydrobiopterínu, pH 7,4) na naštartovanie reakcie a reakcia je ukončená po 30 minútach pridaním 200 μΐ 50 % kaše terminačného pufra (20 mM HEPES, 2 mM EDTA, pH 5,5) a pletiva Dowex AG-50W-X8 veľkosť oka 200-400.
Značený L-citrulín je oddelený od značeného L-arginínu filtrovaním do inej filtračnej platne a 75 μΐ z každej ukončenej reakcie je pridané k 3 ml scintilačného koktailu. L-citrulín je potom kvantifikovaný scintilačným počítaním.
V typickom experimente je bazálna aktivita zvýšená o 5000 dpm na ml vzorky proti reakčnému blanku, ktorého aktivita je 1500 dpm na ml. Referenčný štandard N-nitro-L-arginín, ktorý má 70 až 90 % inhibíciu syntázy oxidu dusičného pri koncentrácii 1 μΜ, je v skúške testovaný na overenie postupu.
Zmesi môžu byť tiež testované v ex vivo analýze na stanovenie rozsahu mozgovej infiltrácie.
Selekcia D (D) Rozbor ex vivo na inhibičnú aktivitu neuronálnej syntázy oxidu dusičného
Samcom krýs Sprague-Dawley (250-275g) bolo intravenózne podaných 10 mg/kg testovanej zlúčeniny v 0,9 % fyziologickom roztoku alebo samotný fyziologický roztok ako kontrola. Vo vopred stanovenom čase (typicky 2-24 hodín) po podaní boli zvieratá zabité, bol vybraný malý mozog a bol pripravený supematant a analyzovaný na aktivitu syntázy oxidu dusičného, ako bolo opísané v selekcii
A.
Ako ďalšia potvrdzujúca skúška bola aplikovaná časť supematanta malého mozgu na 2'-5'-ADP Sepharózovú kolónu (ktorá viaže syntázu oxidu dusičného) a následne je eluovaná NADPH. Eluent bol testovaný na aktivitu syntázy oxidu dusičného podľa postupu v selekcii A.
Zlúčeniny, ktoré prenikli do mozgu krysy a bránili neuronálnej syntáze oxidu dusičného, mali za následok zníženú aktivitu oxidu dusičného tak v preparáte supematanta, ako aj v kolóne 2'-5'-ADP Sepharózy.
V jednotlivých selekciách na inhibíciu aktivity syntázy oxidu dusičného je aktivita zlúčeniny vyjadrená ako IC50 (koncentrácia substancie liečiva, ktorá má 50 % inhibíciu enzýmu pri analýze). Hodnoty IC50 testovaných zlúčenín boli na začiatku odhadnuté podľa inhibičnej aktivity 1, 10 a 100 μΜ roztokov zlúčenín. Zlúčeniny, ktoré inhibovali enzým na minimálne 50 % pri 10 μΜ, boli testované znova použitím vhodnejších koncentrácií tak, aby bola stanovená hodnota IC50.
Pri uvedenej selekcii A (selekcia na aktivitu vzhľadom na neuronálnu izoformu syntázy oxidu dusičného) vykazovala zlúčeniny z uvedeného príkladu 1 IC5o pri koncentrácii nižšej ako 10 μΜ, čo naznačuje, že pravdepodobne vykáže využiteľnú terapeutickú aktivitu.
V selekciách B a C (selekcie na aktivitu vzhľadom na makrofágovú a endoteliálnu izoformu syntázu oxidu dusičného) vykazovala zlúčenina z príkladu 1 hodnoty IC50 10 -krát vyššie ako boli dosiahnuté v selekcii A, čo naznačuje, že vykazuje žiaducu selektivitu.
Zlúčeniny z príkladu 2 boli tiež testované v selekcii A a tiež vykazovali hodnotu IC50 nižšiu ako 10 μΜ. Preto sa pri tejto zlúčenine tiež predpokladá užitočná terapeutická aktivita.
V porovnaní so zlúčeninami z doterajšieho stavu techniky, majú zlúčeniny vzorca (I) a ich farmaceutický prijateľné soli výhodu, že môžu byť menej toxické, účinnejšie, dlhšie pôsobiace, mať širší rozsah pôsobnosti, byť potentnejšie, selektívnejšie vzhľadom na neuronálnu izoformu enzýmu syntázy oxidu dusičného, vytvárať menej vedľajších účinkov, byť ľahšie absorbovateľné alebo mať iné užitočné farmakologické vlastnosti.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Vynález je ďalej ilustrovaný nasledujúcimi príkladmi bez toho, aby bol nimi obmedzený.
Príklad 1
Etylester kyseliny N-( 1,2,3,4-tetrahydroizochinolín-7-yl)karbamimidotiovej
a)2-(7-Amino-l,2,3,4-tetrahydroizochinolín)2,2,2-trifluoroacetamid
SK 281205 Β6
K roztoku 4,21 g (23,6 mmol) 7-nito-l,2,3,4-tetrahydroizochinolínu a 3,6 ml (926 mmol) trietylamínu v 100 ml mety lén chloridu bolo pridané pri 0 °C 3,5 ml (25 mmol) anhydridu kyseliny trifluóroctovej. Reakčná zmes bola zmiešaná cez noc. Reakčná zmes bola extrahovaná zriedenou kyselinou chlorovodíkovou. Vodná fáza bola alkalizovaná a extrahovaná metylén chloridom. Suchá organická fáza (cez síran horečnatý) poskytla N-(7-nitro-l,2,3,4-tetrahydroizochinolín) trifluoroacetamid ako žltú pevnú látku. Táto zlúčenina bola okamžite zobratá v 200 ml etanolu, bolo pridané 0,50 g 5 % paládia na uhlíku a zmes bola hydrogenovaná na Parrovom hydrogenerátore pri 45 psi počas 1,5-hodiny. Katalyzátor bol odstránený filtráciou a rozpúšťadlo bolo odparené. Rezíduum bolo zmiešané so 100 ml petroléteru, na účely získania 5,45 g (95 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme šedej pevnej látky, s teplotou topenia 61-3 °C.
b) l,2,3,4-Tetrahydroizochinolín-7-tiomočovina
K roztoku 1,3 ml (9,7 mmol) benzoylizotiokyanátu v 13 ml acetónu pri spätnom toku bolo rýchlo pridané 1,25 g (5,12 mmol) 2-(7-amino-1,2,3,4-tetrahydroizochinolínu)trifluoroacetamidu v takom pomere, aby bol kontrolovaný spätný tok. Po ukončení adície bola reakčná zmes miešaná počas 3 hodín. Pri chladení bola zobratá pevná látka a bola prepláchnutá 30 ml acetónu, čím poskytla 1,74 g (83 %) medziproduktu 1 -benzoylu-3 - [2-(2-2-2-trifluoroacetamidu)l,2,3,4-tetrahydroizochinolín]-7-tiomočoviny vo forme belavej pevnej látky. Táto zlúčenina bola okamžite pridaná k 20 ml 5 % roztoku hydroxidu sodného a výsledný roztok bol zahrievaný na 80 °C počas 1 hodiny. Po ochladení na teplotu okolia bol roztok fdtrovaný, čím poskytol 0,78 g (74 %) zlúčeniny uvedenej v názve, s teplotou topenia 198-203 °C.
c) Etylester kyseliny N-( 1,2,3,4-tetrahydroizochinolín-7-yl)karbamimidotiovej
K roztoku 0,75 g (3,61 mmol) 1,2,3,4-tetrahydroizochinolín-7-tiomočoviny v 10 ml izopropanolu bolo pridané 0,35 g (3,7 mmol) kyseliny metánsírovej v 2 ml izopropanolu. Reakčná zmes bola miešaná štvrť hodiny pred pridaním 0,85 ml (8,4 mmol) etylmetánsíranu. Reakčná zmes bola zahrievaná v spätnom prúdení počas 4 hodín. Rozpúšťadlo bolo oddestilované vo vákuu na olej, ktorý bol rozpustený v 100 ml vody. Vodná fáza bola alkalizovaná pomocou nasýteného uhličitanu sodného a vodná fáza bola extrahovaná 8-krát 100 ml metylén chloridu. Zmiešané extrakty boli vysušené cez síran horečnatý a koncentrované, čím vzniklo 0,61 g oleja, ktorý státím stuhol. Stĺpcová chromatografla na silikagéli použitím 10 % metanolu v chloroforme nasýtenom amoniakom poskytla 0,45 g (53 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej pevnej látky, MS 236 (M+H).
Príklad 2 Etylester kyseliny N-5-(2(((3-chlórfenyl)metyl)(metyl)amino)indanyl)-karbamimidotiovej
a) 2-((3-Chlórfenyl)karbonyl)amino-5-nitroindán
K hydrochloridu 2-amino-5-nitroindánu (1,5 g 7,0 mmol) v metylén chloride (50 ml) pri 0 °C bol pridaný trietylamín (2,1 ml, 15,0 mmol) a následne 3-chlórbenzoyl chlorid (1,0 ml, 7,5 mmol). Zmes bola okamžite nasypaná do vody a vrstvy oddelené. Vodná vrstva bola extrahovaná metylén chloridom (2 x 20 ml) a zmiešané extrakty prepláchnuté vodou, vysušené cez MgSO4, filtrované a koncentrované na olej, ktorý bol homogénny podľa chromato grafie na tenkej vrstve (TLC) a použitý okamžite v nasledujúcom kroku: M.S. (M+H)+= 317.
b) 2-((3-Chlórfenyl)metyl)amino-5-nitroindán
K 2-((3-chlórfenyl)karbonyl)amino-5-nitroindánu (2,2 g, 7,0 mmol) v kyseline tetrahydrolistovej (THF) (75 ml) bol po kvapkách pridávaný BH3. THF (1,0 M, 35 ml, 35 mmol). Zmes bola refluxovaná počas 12 hodín, schladená na 0 °C, prudko ochladená 4 N HC1 (60 ml) a refluxovaná počas 1 hodiny. Výsledný roztok bol odparený na olej, ktorý bol alkalizovaný s 50 % NaOH a extrahovaný metylén chloridom (3 x 20 ml). Zmiešané extrakty boli premyté vodou, vysušené cez MgSO4, filtrované a koncentrované na olej. Spracovanie izopropanol/HCl (IPA/HC1) poskytlo 2-((3-chlórfenyl)metyl)amino-5-nitroindán: (2,1 g, 88 % v dvoch krokoch); s teplotou topenia 234-237 °C.
c) 2-((3-Chlórfenyl)metyl)(metyl)ammo-5-nitroindán
K 2-((3-chlórfenyl)metyl)amino-5-nitroindánu (4,4 g,
14.5 mmol) v kyseline mravčej (5,5 ml) bol pridaný formaldehyd (12 ml). Zmes bola ohrievaná, aby refluxovala, počas 30 minút, schladená, neutralizovaná 2 N NaOH a extrahovaná etyl acetátom (3 x 70 ml). Zmiešané extrakty boli premyté vodou, vysušené cez MgSO4, filtrované a koncentrované na olej: (4,2 g, 91 %); M.S. (M+H)+= 317.
d) 2-((3-Chlórfenyl)metyl)(metyl)amino-5-aminobenzén
K 2-((3-chlórfenyl)metyl)amino-5-nitroindánu (4,3 g,
13.6 mmol) v 85 % AcOH/H2O (100 ml) bol pridaný kovový zinok (7,1 g, 109,0 mmol). Zmes bola miešaná počas 5 minút, filtrovaná cez celit a odparená na olej. Olej bol vyliaty do zásaditej vody a extrahovaný etylacetátom (3 x 100 ml). Zmiešané extrakty boli premyté vodou, vysušené cez MgSO4, filtrované a koncentrované na olej: (3,6 g, 92 %); M.S. (M+H)+= 287.
e) 5-(2-(((3 -Chlórfenyl)metyl)(metyl)amino)indanyl)-1 -benzoyl-2-tiomočovina
K roztoku bonzoylizotiokyanátu (2,7 g, 16,5 mmol) v 15 ml suchého acetónu prehriateho na veľmi jemný reflux bol pridaný tak rýchlo, aby bol silný reflux pod kontrolou, 2-((3-chlórfenyl)metyl)(metyl)amino-5-aminobenzén (3,6 g, 12,4 mmol) rozpustený v 10 ml suchého acetónu. Reakčná zmes bola refluxovaná počas 30 minút, naliata na ľad pri intenzívnom miešaní, a extrahovaná etyl acetátom (3 x 100 ml). Zmiešané extrakty boli premyté vodou, vysušené cez MgSO4, filtrované a koncentrované na pevnú látku, ktorá bola «kryštalizovaná z IPA: (3,12 g, 58 %), s teplotou topenia 128-130 °C.
f) 5-(2-(((3-Chlórfenyl)metyl)(metyl)amino)indanyl)-2-tiomočovina
Zmes 5-(2-(((3-chlórfenyl)metyl)(metyl)amino)indanyl)-l-benzoyl-2-tiomočoviny (3,1 g, 7,12 mmol) a 40 ml 2,5 N vodného hydroxidu sodného bola zahrievaná na 90 °C počas 35 minút a miešaná. Teplá reakčná zmes bola naliata do 60 ml vody pri stálom miešaní. Produkt bol extrahovaný do troch dávok metylénchloridu. Zmiešané extrakty boli premyté vodou, vysušené cez síran horečnatý a koncentrované do sucha. S rezíduom bola uskutočnená chromatografla cez silikagél (8 : 1 etylecetát/hexán) a rezíduum bolo koncentrované na olej: (2,2 g, 93 %); M.S. (M+H)+=246.
g) Etylester kyseliny N-5-(2(((3-chlórfenyl)metyl)(metyl)amino)indanyl)-karbamimidotiovej
5-(2-(((3-Chlórfenyl)metyl)(metyl)amino)indanyl)-26
SK 281205 Β6
-tiomočovina (2,2 g, 6,33 mmol) bola rozptýlená v 20 ml etanolu 200 a zmes bola spracovaná 0,41 ml kyseliny metánsírovej a 1,35 ml etyl metánsíranu. Zmes bola refluxovaná počas 4 hodín, odparená, upravená na zásadu nasýteným hydrogenuhličitanom a extrahovaná metylénchloridom (3 x 30 ml). Zmiešané extrakty boli premyté vodou, vysušené cez MgSO4, filtrované a koncentrované na olej, ktorý bol rozpustený v etylacetáte a ošetrený IPA/HC1. Pevné látky boli filtrované a premyté IPA: (2,40 g, 83 %); teplota topenia dec. > 150 °C.
Príklad 3
Dihydroetylester kyseliny N-(2-metyl-1,2,3,4,-tetrahydroizochinolín-7-yl)karbamimidotiovej
a) 7-Nitro-2-metyl-l,2,3,4-tetrahydroizochinolín hydrochlorid
Roztok 4,00 g (18,7 mmol) 7-nitrochinolinu v 10 ml kyseliny mravčej a 17 ml 38 % vodného formaldehydu bol ohrievaný pri refluxe počas 1 hodiny. Reakčná zmes bola ochladená, naliata na ľad a alkalizovaná vodným amoniakom. Gumovité rezíduum, ktoré sa vyzrážalo, bolo dvakrát extrahované metylénchloridom. Vysušená (cez síran horečnatý) organická fáza bola koncentrovaná, aby poskytla hrubý 7-nitro-2-metyl-l,2,3,4-tetrahydroizochinolín vo forme hustého oleja. Tento olej bol okamžite zachytený etanolom (50 ml) a do roztoku bol pridávaný roztok kyseliny chlorovodíkovej v etanole, pokiaľ nebol roztok zreteľne kyslý podľa lakmusu. Bol pridaný éter, aby vyvolal zrážanie a bol získaný výsledný produkt s hmotnosťou 3,99 g (93 %) zlúčeniny z názvu vo forme žltej pevnej látky, teplota topenia 236-8 °C (dec).
b) 7-Amino-2-metyl-l,2,3,4-tetrahydroizochinolín hydrochlorid
Suspenzia 3,98 g (17,5 mmol) 7-nitro-2-metyl-1,2,3,4-tetrahydroizochinolín hydrochloridu a 0,4 g 10 % paládia na uhlíku v 200 ml etanolu bola hydrogenovaná pri 50 psi počas 2 hodín. Katalyzátor bol filtrovaný a premytý malým množstvom vody. Filtrát bol koncentrovaný, čím vznikol vodný roztok. Absolútny etanol bol pridaný a následne odparený v horúcom etanole (60 ml) a na vyvolanie kryštalizácie bol pomaly pridávaný éter. Produkt bol získaný v množstve 3,38 g (97 %) zlúčeniny z názvu vo forme belavej pevnej látky, teplota topenia 114-9 °C.
c) 2-Metyl-l,2,3,4-tetrahydroizochinolín-7-tiomočovina
Roztok 3,88 g (19,5 mmol)) 7-amino-2-metyl-l,2,3,4-tetrahydroizochinolín hydrochloridu v 100 ml vody bol alkalizovaný roztokom uhličitanu draselného a bol dvakrát extrahovaný metylén chloridom. Vysušená (cez síran horečnatý) organická fáza bola koncentrovaná, aby poskytla
3,13 g (99 %) voľnej zásady vo forme oleja. Tento olej bol zachytený v acetóne (75 ml) a do 100 ml acetónu bolo pridané 2,21 g (19,4 mmol) kyseliny trifluorooctovej. Roztok bol zahrievaný na reflux, kde bolo po kvapkách pridávaných 5,2 ml (39 mmol) benzyl izotiokyanátu. Reakčná zmes bola ohrievaná počas 1 hodiny a potom ochladená na okolitú teplotu. Rozpúšťadlo bolo odstránené vo vákuu a výsledný olej bol zachytený v metanole (150 ml) a 2,5 M hydroxide sodnom (50 ml). Tento roztok bol zahrievaný na 65 °C počas jednej hodiny a potom ochladený na teplotu okolitého prostredia. Metanol bol odstránený vo vákuu a vodný roztok bol chladený, aby sa produkt vyzrážal. Pevná látka bola zhromaždená v množstve 2,22 g zlúčeniny z názvu vo forme ľahko nažltkastej pevnej látky s teplotou topenia 184-6 °C. Získali sme tiež druhú dávku zlúčeniny z názvu (0,79 g, celkový výťažok 69 %).
d) Dihydroetylester kyseliny N-(2-metyl-1,2,3,4-tetrahydroizochinolín-7-yl)karbaniimidotiovej
K suspenzii 0,88 g (4,0 mmol)) 2-metyl-1,2,3,4-tetrahydroizochinolín-7-tiomočoviny v 8 ml izopropanolu bolo pridané 0,39 g (3,9 mmol) kyseliny metánsírovej. Roztok bol ohrievaný na reflux pol hodiny, aby bolo zaistené vytvorenie metánsírovej soli, pretože tak soľ ako aj voľná zásada boli nerozpustné v izopropanole. K tomuto roztoku bolo pridaných 1,5 ml (14 mmol) etylmetylsíranu a zahrievanie pokračovalo cez noc, čím vznikol číri roztok. Rozpúšťadlo bolo odstránené vo vákuu a výsledný olej bol zachytený vo vode, alkalizovaný uhličitanom draselným a dvakrát extrahovaný metylénchloridom. Vysušená (síranom horečentým) organická fáza bola koncentrovaná, aby bol získaný olej. Tento olej bol zachytený v etanole a okyslený kyselinou chlorovodíkovou v etanole, pokiaľ lakmus nebol zreteľne kyslý. Bol pridaný éter a vznikla soľ vo forme viskózneho oleja. Rozpúšťadlo bolo dekantované a olej bol niekoľkokrát prepláchnutý éterom. Olej bol zachytený do vody (250 ml) a roztok bol spracovaný odfarbovacím uhlíkom. Roztok bol filtrovaný a filtrát bol zriedený na 500 ml vodou. Tento roztok bol vysušený zmrazením, čím vzniklo 1,06 g (78 %) zlúčeniny z názvu vo forme monohydrátu. MS(C1) 250 (M+H); NMR (DMSO/S20) 7,33 (d, 1H), 7,17 (s,lH), 4,36 (široké s, 2H), 3,0-3,6 (m,6H), 3,17 (s,3H), 1,30 (t, 3H).
Príklad 4
Dihydrochloridmetylester kyseliny N-(2-metyl-1,2,3,4-tetrahydroizochinolín-7-yl)karbamimidotiovej
K suspenzii 1,00 g (4,52 mmol)) 2-metyl-1,2,3,4-tetrahydroizochinolín-7-tiomočoviny (príklad 3, krok (c)) v 10 ml izopropanolu bolo pridané 0,44 g (4,5 mmol) kyseliny metánsírovej. Roztok bol miešaný pri teplote okolia počas 2 hodín, aby bolo zaistené vytvorenie metánsírovej soli, pretože tak soľ ako aj voľná zásada boli nerozpustné v izopropanole. K tomuto roztoku bolo pridaných 6,7 g (47 mmol) metyl jodidu a reakčná zmes bola miešaná cez noc. Rozpúšťadlo bolo odstránené vo vákuu a rezíduum bolo rozpustené vo vode, upravené odfarbovacím uhlíkom a filtrované, aby sa získal číri, bezfarebný vodný roztok. Tento roztok bol alkalizovaný uhličitanom draselným a dvakrát extrahovaný metylénchloridom. Organické fázy boli zmiešané, vysušené (síran horečnatý) a koncentrované vo vákuu, čím sa získalo 1,02 g (96 %) produktu vo forme voľnej zásady. Tento olej bol zachytený v etanole a bol urobený zreteľne kyslým pridaním kyseliny chlorovodíkovej v etanole. Pridanie väčšieho množstva éteru spôsobilo, že soľ sa oddelila ako olej. Rozpúšťadlo bolo čírené a tento olej bol niekoľkokrát prepláchnutý éterom. Tento olej bol zachytený v 250 ml vody a bol opäť upravený odfarbovacím uhlíkom. Roztok bol filtrovaný a filtrát bol zriedený na 500 ml vodou. Tento roztok bol vysušený mrazom, čím sme získali 0,70 g titulnej zlúčeniny vo forme bielej pevnej látky. MS(C1) 236 (M+H); NMR (DMSO/S20) 11,6-11,9 (široké, 1H), 9,4-9,7 (široké, 1H), 7,36 (d, 1H), 7,24 (d, 1H),
7,18 (s, 1H), 4,2-4,6 (široké m, 2H), 3,0-3,7 (široké m, 4H),
2,87 (s, 3H), 2,70 (s, 3H).

Claims (10)

1. Derivát bicyklickej izotiomočoviny vzorca (I)
H (I),
0-S kde
D predstavuje Cj.6-alkylovú skupinu,
T predstavuje C3.s nasýtený alebo nenasýtený alkylénový reťazec substituovaný skupinou -(CH2)m - NXY; reťazec -O-(CH2)2-NH- substituovaný skupinou -(CH2)m - NXY; alebo reťazec -U-(CH2)a -N(X)- (CH2)b-;
U predstavuje NH, O alebo CH2;
a a b, ktoré môžu byť rovnaké alebo odlišné, prestavujú celé číslo od 0 do 3 s podmienkou, že a+b je v rozmedzí od 1 do 3;
X a Y, ktoré môžu byť rovnaké alebo odlišné, predstavujú vodík, C|_6-alkyl alebo skupinu -(CH2)„Q, alebo NXY spoločne predstavujú piperidinyl, pyrolidinyl, morfolinyl alebo tetrahydroizochinolinyl;
Q je fenyl alebo fenyl substituovaný jedným alebo viaceiými substituentmi vybranými zo skupiny zahrnujúcej Ct. ^-alkylovú skupinu, C1.6-alkoxyskupiny, trifluórmetylovú skupinu, halogén, nitroskupinu a kyanoskupinu: m a n nezávisle sú celé čísla od 0 do 5;
ajej farmaceutický prijateľné soli.
2. Zlúčenina vzorca (I) podľa nároku 1, v ktorej T predstavuje reťazec -U-(CH2)a-N(X)- (CH2)t,-.
3. Zlúčenina vzorca (I) podľa nároku 2, v ktorej T predstavuje reťazec -U-(CH2)a -N(X)- (CH2)b- a U predstavuje CH2.
4. Zlúčenina vzorca (I) podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3, v ktorej T predstavuje reťazec -U-(CH2)a -N(X)-(CH2)t,-, U predstavuje CH2 a každé a a b je 1.
5. Zlúčenina vzorca (I) podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 4, v ktorej D je etyl.
6. Zlúčenina vzorca (I) podľa nároku 1, ktorou je etylester kyseliny N-( 1,2,3,4-tetrahydroizochinolín-7-yl)karbamimidotio vej;
etylester kyseliny N-5-(2-(((3-chlórfenyl)metyl)(metyl)amino)mdanyl)karbamimidotiovej;
etylester kyseliny N-(2-metyl-1,2,3,4-tetrahydroizochinolín-7-yl)karbamimidotiovej;
metylester kyseliny N-(2-metyl-1,2,3,4-tetrahydroizochinol ín-7-yl)karbamimidotiovej;
alebo ich farmaceutický prijateľná soľ.
7. Zlúčenina podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 6 na použitie ako liečivo.
8. Farmaceutická kompozícia, vyznačujúca sa t ý m , že obsahuje zlúčeniny všeobecného vzorca (I), podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 6 spolu s farmaceutický akceptovateľným riedidlom alebo nosičom.
9. Použitie zlúčeniny podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 6 na výrobu liečiva na liečbu alebo prevenciu neurodegeneratívnych porúch alebo na prevenciu a zmenu tolerancie proti opiátom a diazepínom alebo na liečbu toxikománie.
10. Spôsob prípravy zlúčenín vzorca (I) podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 6 alebo ich farmaceutický akceptovateľných solí, vyznačujúci sa tým,že zahŕňa:
a) prípravu zlúčeniny vzorca (I), kde X alebo aspoň jeden z X a Y predstavuje C^-alkyl alebo skupinu -(CH2)nQ, reakciou príslušnej zlúčeniny vzorca (I), kde X alebo jeden, alebo oba z X a Y predstavujú vodík, so zlúčeninou vzorca (H)
R1 - L (II), kde R1 predstavuje C^-alkyl alebo skupinu -(CH2)„Q a L je odstupujúca skupina, alebo
b) prípravu zlúčeniny vzorca (I), kde T predstavuje C3.5 nasýtený alebo nenasýtený alkylénový reťazec substituovaný skupinou -(CH2)m - NXY; reťazec -O-(CH2)2-NH- substitu ovaný skupinou -(CH2)m - NXY, reakciou zodpovedajúcej zlúčeniny, kde T predstavuje C3.5 nasýtený alebo nenasýtený alkylénový reťazec substituovaný skupinou -(CH2)m-L alebo reťazec -O-(CH2)2-NH- substituovaný skupinou -(CH2)m-L a L predstavuje odstupujúcu skupinu, so zlúčeninou vzorca (III)
ΧΥΝΗ (III), kde X a Y sú definované, alebo
c) reakciu zlúčeniny vzorca (IV)
IIH t kde T je definované so zlúčeninou vzorca (V)
D-L (V), kde D je definované a L je odstupujúca skupina, a kde je to nutné alebo žiaduce, konvertovanie konečnej zlúčeniny na jej farmaceutický prijateľnú soľ alebo vice verša.
SK1040-97A 1995-02-11 1996-02-09 Deriváty bicyklickej izotiomočoviny, spôsoby ich prípravy, farmaceutické kompozície s ich obsahom a ich použitie SK281205B6 (sk)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB9502669.6A GB9502669D0 (en) 1995-02-11 1995-02-11 Pharmaceutically active compounds
GBGB9502670.4A GB9502670D0 (en) 1995-02-11 1995-02-11 Pharmaceutically active compounds
PCT/SE1996/000162 WO1996024588A1 (en) 1995-02-11 1996-02-09 Bicyclic isothiourea derivatives useful in therapy

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK104097A3 SK104097A3 (en) 1998-10-07
SK281205B6 true SK281205B6 (sk) 2001-01-18

Family

ID=26306479

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK1040-97A SK281205B6 (sk) 1995-02-11 1996-02-09 Deriváty bicyklickej izotiomočoviny, spôsoby ich prípravy, farmaceutické kompozície s ich obsahom a ich použitie

Country Status (29)

Country Link
US (2) US5786364A (sk)
EP (1) EP0808307B1 (sk)
JP (1) JPH10513194A (sk)
KR (1) KR19980702114A (sk)
CN (1) CN1181070A (sk)
AR (1) AR002961A1 (sk)
AT (1) ATE188689T1 (sk)
AU (1) AU699546B2 (sk)
BR (1) BR9607264A (sk)
CA (1) CA2211299A1 (sk)
CZ (1) CZ237597A3 (sk)
DE (1) DE69606165T2 (sk)
DK (1) DK0808307T3 (sk)
EE (1) EE03439B1 (sk)
ES (1) ES2143181T3 (sk)
FI (1) FI973273A (sk)
GR (1) GR3033135T3 (sk)
HU (1) HUP9801363A3 (sk)
IL (1) IL116966A (sk)
IS (1) IS4528A (sk)
NO (1) NO309036B1 (sk)
NZ (1) NZ301831A (sk)
PL (1) PL321741A1 (sk)
PT (1) PT808307E (sk)
RU (1) RU2157802C2 (sk)
SK (1) SK281205B6 (sk)
TR (1) TR199700769T1 (sk)
TW (1) TW397812B (sk)
WO (1) WO1996024588A1 (sk)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW397812B (en) * 1995-02-11 2000-07-11 Astra Ab Bicyclic isothiourea derivatives useful in therapy
TW458978B (en) * 1995-11-07 2001-10-11 Astra Ab Amidine and isothiourea derivatives as inhibitors of nitric oxide synthase
US6140322A (en) * 1995-11-07 2000-10-31 Astra Aktiebolag Amidine and isothiourea derivatives as inhibitors of nitric oxide synthase
AU4947197A (en) * 1996-10-16 1998-05-11 Glaxo Group Limited Tetrahydro-6h-pyrazino{1,2-b}isoquinoline 1,4-diones as apoprotein b-100 inhibitors
US5929085A (en) * 1996-11-06 1999-07-27 Astra Aktiebolag Amidine and isothiourea derivatives, compositions containing them and their use as inhibitors of nitric oxide synthase
SE9701681D0 (sv) * 1997-05-05 1997-05-05 Astra Ab New compounds
GB9719530D0 (en) * 1997-09-12 1997-11-19 Smithkline Beecham Plc Novel compounds
DE19844291A1 (de) * 1998-09-18 2000-03-23 Schering Ag Benzoxazin- und Benzothiazin-Derivate und deren Verwendung in Arzneimitteln
US6664293B2 (en) 1999-02-26 2003-12-16 Fujiwawa Pharmaceutical Co., Ltd. Amide compounds for the potentiation of cholinergic activity
GB0016169D0 (en) * 2000-06-30 2000-08-23 Univ London Diagnostic method
TWI243164B (en) 2001-02-13 2005-11-11 Aventis Pharma Gmbh Acylated indanyl amines and their use as pharmaceuticals
RU2223952C2 (ru) * 2001-06-04 2004-02-20 Институт физиологически активных веществ РАН Производные n,s-замещенных n'-1-[(гетеро)арил]-n'-[(гетеро)арил]метилизотиомочевин или их солей с фармакологически приемлемыми кислотами нх, способы получения их солей и оснований, фармацевтическая композиция, способ лечения и способ изучения глутаматэргической системы
RU2252936C2 (ru) * 2002-12-05 2005-05-27 Институт физиологически активных веществ РАН S-замещенные n-1-[(гетеро)арил]алкил-n`-[(гетеро)арил]алкилизотиомочевины, способ их получения, фармацевтическая композиция, способ изучения глутаматэргической системы, способы лечения (варианты)
ITTO20040125A1 (it) 2004-03-01 2004-06-01 Rotta Research Lab Nuove amidine eterocicliche inibitrici la produzione di ossido d'azoto (no) ad attivita' antinfiammatoria ed analgesica

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1157626B (de) * 1959-06-27 1963-11-21 Hoechst Ag Verfahren zur Herstellung von N-p-Alkoxy-phenyl-N'-chinolylthioharnstoffen mit tuberkulostatischen Eigenschaften
GB1178242A (en) * 1966-02-05 1970-01-21 Wellcome Found Novel Biologically Active Bis-Isothioureas
BE792078A (fr) * 1971-12-01 1973-05-29 Wander Ag Dr A Nouveaux derives de l'indazole, leur preparation et leur application comme medicaments
US4029792A (en) * 1972-02-29 1977-06-14 Pfizer Inc. (2-Imidazolin-2-ylamino) substituted -quinoxalines and -quinazolines as antihypertensive agents
US4211867A (en) * 1976-03-19 1980-07-08 Mcneil Laboratories, Incorporated Nitrogen heterocyclic carboximidamide compounds
NL7902993A (nl) * 1978-04-24 1979-10-26 Rhone Poulenc Ind Nieuwe isochinolinederivaten, de bereiding ervan en farmaceutische preparaten, die de nieuwe isochinoline- derivaten bevatten.
GB8903592D0 (en) * 1989-02-16 1989-04-05 Boots Co Plc Therapeutic agents
GB8908063D0 (en) * 1989-04-11 1989-05-24 Beecham Group Plc Novel compounds
US4988688A (en) * 1989-08-02 1991-01-29 Warner-Lambert Company 4-(N-substituted amino)-2-butynyl-1-ureas and thioureas and derivatives thereof as centrally acting muscarinic agents
WO1994012165A2 (en) * 1992-11-27 1994-06-09 The Wellcome Foundation Limited Enzyme inhibitors
ATE231126T1 (de) * 1993-08-12 2003-02-15 Astrazeneca Ab Amidin-derivate mit stickstoffoxid-synthease- aktivität
AU7705694A (en) * 1993-10-04 1995-05-01 Glaxo Wellcome House Substituted urea and isothiourea derivatives as no synthase inhibitors
TW397812B (en) * 1995-02-11 2000-07-11 Astra Ab Bicyclic isothiourea derivatives useful in therapy

Also Published As

Publication number Publication date
DE69606165D1 (de) 2000-02-17
IS4528A (is) 1997-07-21
HUP9801363A2 (hu) 1998-09-28
TW397812B (en) 2000-07-11
EP0808307A1 (en) 1997-11-26
IL116966A (en) 2000-02-17
NZ301831A (en) 1998-05-27
US5786364A (en) 1998-07-28
FI973273A0 (fi) 1997-08-08
AU699546B2 (en) 1998-12-03
AR002961A1 (es) 1998-05-27
PL321741A1 (en) 1997-12-22
EE9700168A (et) 1998-02-16
EP0808307B1 (en) 2000-01-12
HUP9801363A3 (en) 1999-01-28
ES2143181T3 (es) 2000-05-01
FI973273A (fi) 1997-08-08
WO1996024588A1 (en) 1996-08-15
GR3033135T3 (en) 2000-08-31
NO973614L (no) 1997-09-29
DE69606165T2 (de) 2000-08-24
CA2211299A1 (en) 1996-08-15
PT808307E (pt) 2000-04-28
RU2157802C2 (ru) 2000-10-20
SK104097A3 (en) 1998-10-07
ATE188689T1 (de) 2000-01-15
EE03439B1 (et) 2001-06-15
CN1181070A (zh) 1998-05-06
KR19980702114A (ko) 1998-07-15
NO973614D0 (no) 1997-08-05
AU4734796A (en) 1996-08-27
TR199700769T1 (xx) 1998-03-21
JPH10513194A (ja) 1998-12-15
DK0808307T3 (da) 2000-05-08
IL116966A0 (en) 1996-05-14
US6040314A (en) 2000-03-21
CZ237597A3 (cs) 1998-05-13
NO309036B1 (no) 2000-12-04
BR9607264A (pt) 1997-12-30
MX9705965A (es) 1997-11-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2130017C1 (ru) Производные амидина, способ их получения и лекарственное средство на их основе, обладающее свойством ингибировать активность синтетазы оксида азота (у)
EP0690851B1 (en) Guanidine derivatives useful in therapy
SK281205B6 (sk) Deriváty bicyklickej izotiomočoviny, spôsoby ich prípravy, farmaceutické kompozície s ich obsahom a ich použitie
EP0782567B1 (en) Isothiourea derivatives as no synthase inhibitors
EP0759027B1 (en) Bicyclic amidine derivatives as inhibitors of nitric oxide synthetase
CZ108697A3 (cs) Bicyklické amidinové deriváty použitelné k léčení
KR20010012227A (ko) 화합물
SK140599A3 (en) Amidine derivatives as inhibitors of nitric oxide synthase
MXPA97005965A (en) Derivatives of istitiourea biciclicos, useful in tera
RU2155761C2 (ru) Бициклические производные амидина, способ их получения, фармацевтическая композиция и способ ингибирования синтетазы окиси азота
CZ388999A3 (cs) Sloučeniny
HUT77376A (hu) Biciklusos amidinszármazékok, eljárás előállításukra, a vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk
IL115482A (en) Bicyclic amidine derivatives, their preparation and pharmaceutical compositions containing them
NZ290918A (en) Bicyclic amidines
CZ360199A3 (cs) Sloučeniny 6,7-disubstituovaného-4- aminopyrido [2,3-dJ pyrimidinu