JPH10513194A

JPH10513194A - 治療に有用な二環性イソチオ尿素誘導体

Info

Publication number: JPH10513194A
Application number: JP8524210A
Authority: JP
Inventors: マクドナルド，ジエイムズ・エドウイン
Original assignee: アストラ・アクチエボラーグ
Priority date: 1995-02-11
Filing date: 1996-02-09
Publication date: 1998-12-15
Also published as: CN1181070A; HUP9801363A3; TR199700769T1; AU699546B2; PT808307E; SK281205B6; EE03439B1; WO1996024588A1; CA2211299A1; FI973273A; CZ237597A3; DE69606165T2; NZ301831A; DE69606165D1; FI973273A0; KR19980702114A; EP0808307B1; NO973614D0; US5786364A; GR3033135T3

Abstract

(57)【要約】式(Ｉ) ［式中、ＤはアルキルＣ１〜６を表し、Ｔは-(CH₂)_m-NXYで置換されたC_3-5飽和もしくは不飽和アルキレン鎖；-(CH₂)_m-NXYで置換された-O-(CH₂)₂-NH-または-U-(CH₂)_a-N(X)-(CH₂)_b-を表し、ａ、ｂ、ｍ、ＸおよびＹは明細書に定義した通りである］の新規な化合物ならびにそれらの製造方法、それらを含有する組成物およびそれらの治療における使用が提供される。式(Ｉ)の化合物にはとくに神経変性障害の処置における有用性が期待される。

Description

【発明の詳細な説明】治療に有用な二環性イソチオ尿素誘導体本発明は、新規化合物、それらの製造方法、それらからなる組成物およびそれらの神経保護薬としての使用に関する。チオ尿素およびイソチオ尿素誘導体には、これまでに様々な治療的用途が記載されている。WO 94／12165（Wellcome）には、とくに全身性低血圧、敗血症ショックおよび炎症状態の処置に使用される簡単なイソチオ尿素誘導体が記載されている。WO 95／09619（Wellcome）（本出願の優先日後に公開）には脳虚血の処置に使用される置換尿素およびイソチオ尿素誘導体が記載されている。英国特許第 1178242号（Wellcome）には抗炎症活性を有するビスイソチオ尿素が開示され、欧州特許出願第411615号（Warner Lambert）には認知力衰退の徴候の処置に用いられるチオ尿素誘導体が開示されている。欧州特許出願第392802号（Beecham）には気管支、脳血管または神経障害の処置に用いられるチオ尿素誘導体が開示されている。イソチオ尿素誘導体はまた、グアニジン誘導体製造の化学的中間体としても知られている［化合物４−ジメチルアミノフェニルカルバミミドチオン酸メチルエステルが開示されている米国特許第4,211,867号(McNeil Laboratories)およびSy nthesis(1988)6，460-466(Rasmussen)、ならびに米国特許第5,223,498号（Boots ）参照］。結核菌抑制薬として有用なＮ−アルコキシフェニル−N'−キノリニル−チオ尿素誘導体がDE-B-1157626（Hoechst）に開示されている。国際特許出願WO 95／05363（Fisons）（本出願の優先日後に公開）にはＮ−フェニルアミジン誘導体が開示され、これらはとくに神経変性疾患の処置への適用が示されている。本発明者らは今回、新規で有用な一群のイソチオ尿素誘導体を発見した。本発明によれば、式Ｉの化合物およびそれらの医薬的に許容される塩が提供される。式中、Ｄは、アルキルＣ１〜６を表し、Ｔは-(CH₂)_m-NXYで置換されたC_3-5飽和もしくは不飽和アルキレン鎖；-(CH₂)_m -NXYで置換された-O-(CH₂)₂-NH-または-U-(CH₂)_a-N(X)-(CH₂)_b−（ＵはNH、ＯまたはCH₂である）を表し、ａおよびｂは同一であるかまたは互いに異なり０〜３の整数であるが、ａ＋ｂは１〜３の範囲内であり、ＸおよびＹは同一であるかまたは互いに異なり、水素、アルキルＣ１〜６もしくは基-(CH₂)_nQを表すか、または NXYはすべてでピペリジニル、ピロリジニル、モルホリニルもしくはテトラヒドロイソキノリニルを表し、Ｑはフェニル、またはアルキルＣ１〜６、アルコキシＣ１〜６、トリフルオロメチル、ハロゲン、ニトロおよびシアノからなる群より選択される１個もしくは２個以上の置換基によって置換されたフェニルを表し、ｍおよびｎは独立に０〜５の整数を表す。Ｔは-U-(CH₂)_a-N(X)-(CH₂)_b-であることが好ましい。とくにＴは-U-(CH₂)a-N( X)-(CH₂)_b-であり、ＵはCH₂であることが好ましい。Ｔは-U-(CH₂)_a-N(X)-(CH₂)_b -であり、ＵはCH₂であり、ａおよびｂはそれぞれ１であることがさらに好ましい。ＤはアルキルＣ１〜３であり、さらにメチルまたはエチルであること、とくにエチルであることが好ましい。Ｔが-U-(CH₂)_a-N(X)-(CH₂)_b-である場合には、Ｘは水素、メチルまたは基-CH₂ Qであることが好ましい。Ｔが-(CH₂)_m-NXYで置換されたC_3-5飽和もしくは不飽和アルキレン鎖；-(CH₂)_m -NXYで置換された-O-(CH₂)₂-NH-である場合には、ＸおよびＹは独立に水素、メチルまたは基-CH₂Qであることが好ましいが、ＸおよびＹの両者が基-CH₂Qであることは好ましくない。ＸおよびＹは、その一方が水素またはメチルであり、他方が基-CH₂Qであることがとくに好ましい。ｎは１であることが好ましい。Ｑはフェニル、またはアルキルＣ１〜６、アルコキシＣ１〜６、トリフルオロメチル、ハロゲン、ニトロおよびシアノからなる群より選択される１個の置換基によって置換されたフェニルであることが好ましい。Ｑはフェニル、またはアルキルＣ１〜６もしくはハロゲンによって置換されたフェニルであることがとくに好ましい。本発明によればまた、式Ｉの化合物およびそれらの医薬的に許容される塩を製造するにあたり、（ａ）式ＩにおいてＸまたはＸおよびＹの少なくとも１つがアルキルＣ１〜６または基-(CH₂)_nQである化合物を、式ＩにおいてＸまたはＸおよびＹの一方もしくは両者が水素である相当する化合物と式II Ｒ¹Ｌ II （式中Ｒ¹はアルキルＣ１〜６または基-(CH₂)_nQであり、Ｌは離脱基である）の化合物とを反応させることによって調製するか、または、（ｂ）式ＩにおいてＴが-(CH₂)_m-NXYで置換されたC_3-5飽和もしくは不飽和アルキレン鎖または-(CH₂)_m-NXYで置換された-O-(CH₂)₂-NH-である化合物を、Ｔは -(CH₂)_m-Lで置換されたC_3-5飽和もしくは不飽和アルキレン鎖または-(CH₂)_m-Lで置換された-O-(CH₂)₂-NH-であり、Ｌは離脱基である相当する化合物と式III ＸＹＮＨ III （式中、ＸおよびＹは上に定義した通りである）の化合物とを反応させることによって調製するか、または（ｃ）式IV （式中、Ｔは上に定義した通りである）の化合物を式ＶＤ−ＬＶ（式中Ｄは上に定義した通りであり、Ｌは離脱基である）の化合物と反応させ、得られた化合物を、必要に応じてまたは所望により、以下に記述するようにしてその医薬的に許容される塩に変換するかまたはその逆の変換を行うことからなる方法を提供する。方法（ａ）および（ｂ）においては、反応は、たとえば２つの原料を不活性溶媒中塩基性条件下、室温において12時間までの反応時間反応させる標準条件下に行われる。アミンは、他の化合物と反応させる前にNaHで処理することが望ましいことがしばしば見出されている。適当な離脱基Ｌにはチオアルキル、スルホン酸、トリフルオロカーボンスルホン酸、ハライド、アルキルおよびアリールアルコールおよびトシル基が包含される。他の基は‘Advanced Organic Chemistry’ ，J．March（1985）3版， McGraw-Hill，315頁に列挙され、本技術分野では周知である。Ｌはハライド、とくにブロミドであることが好ましい。方法（ｃ）においては、反応は２つの反応原料を不活性溶媒たとえばアセトン中で混合することによって進行する。Ｌによって表される適当な離脱基にはチオアルキル、スルホン酸、トリフルオロカーボンスルホン酸、ハライド、アルキルおよびアリールアルコールならびにトシル基が包含される。他の基は‘Advanced Organic Chemistry’，J．March(1985)3版，McGraw-Hill，315頁に列挙され、本技術分野においては周知である。ヨウ化物、トルエンスルホネートまたはメタンスルホネート誘導体の使用が好ましい。式IVの化合物はRasmussenら、Synthesis（1988）456-459の方法に従って製造できる。式IIIの化合物はしたがって、式VI （式中、Ｔは上に定義した通りである）の化合物をベンゾイルイソチオシアナートと反応させ、得られたベンゾイルチオ尿素誘導体をついでアルカリ水溶液で切断することによって製造できる。式VIの化合物は式VII （式中、Ｔは上に定義した通りである）の相当する化合物の還元によって製造することができる。還元反応は多くの条件で、たとえばJ．March“Advanced Organic Chemistry”，3版（1985）1103-1104頁に記載の条件で実施することができる。これらには接触水素化、Zn、SnまたはFe金属、AlH₃-AlCl₃、スルフィドおよびその他のものの使用が包含される。パラジウム−炭触媒の存在下、常圧で、通常１〜４時間または還元が完結するまで水素化によって反応を行うのが好ましい。Ｔは上に定義した通りであり、ＸまたはＸおよびＹの少なくとも１つがアルキルＣ１〜６または基-(CH₂)_nQである式VIIの化合物は、Ｘおよび／またはＹが水素である相当する式VIIの化合物を式IIの化合物と反応させることによって製造できる。この反応は、方法（ａ）に上述したのと類似の条件下に実施できる。Ｔが-(CH₂)_m-NXYで置換されたC_3-5飽和もしくは不飽和アルキレン鎖または-(C H₂)_m-NXYで置換された-O-(CH₂)₂-NH-である式VIIの化合物は、Ｔが-(CH₂)_m-Lで置換されたC_3-5飽和もしくは不飽和アルキレン鎖、または-(CH₂)_m-Lで置換された-O-(CH₂)₂-NH-であり、Ｌは離脱基である相当する化合物を、式IIIの化合物と反応させることによって製造できる。この反応は、方法（ｂ）に上述したのと類似の条件下に実施できる。Ｘが水素である式VIIの化合物は既知であるか、または既知の方法により製造できる。たとえば、それらは非ニトロ化誘導体のニトロ化により製造できる。このニトロ化反応は、非ニトロ化芳香族化合物を、硝酸と単独または水、酢酸、無水酢酸もしくは硫酸中で反応させて行われるのが通常である。これらの反応のさらなる詳細およびさらに別の試薬はJ.March“Advanced Organic Chemistry”，3 版（1985）468-470頁に列挙されている。式II、IIIおよびＶの化合物は既知であるか、またはそれ自体既知の慣用方法によって製造できる。式Ｉの化合物はそのまま、または上述の種類の酸付加塩として製造される。別法として、それらは医薬的に許容されない塩、たとえばシュウ酸の塩として製造し、その生成物をついで慣用手段によって医薬的に許容される塩に変換することもできる。式Ｉの化合物の塩は、その遊離酸、塩基または塩を１当量以上の適当な塩基または酸と反応させることによって形成させる。反応は塩が不溶の溶媒もしくはメジウム中または塩が可溶の溶媒中、たとえば水、ジオキサン、エタノール、テトラヒドロフランもしくはジエチルエーテルまたは混合溶媒中で実施され、それらは真空中または凍結乾燥により除去される。この反応は複分解法であってもよくまたイオン交換樹脂上で実施してもよい。必要に応じて、アミンもしくは他の反応性の基は、標準テキスト“Protecting groups in Organic Synthesis”，2版(1991)Greene & Wutsに記載されているような保護基を用いて保護することができる。アミン保護基としてはとくに、アルコキシカルボニルＣ２〜７、たとえばｔ−ブチルオキシカルボニル、フェニルアルキリオキシカルボニルＣ８〜13、たとえばベンジルオキシカルボニルを挙げることができる。しかしながら、アミン基は適当な溶媒（たとえば、メチレンクロリド、メタノール）中無水トリフルオロ酢酸により室温で処理して保護することが好ましい。脱保護は水中での加水分解によって行うことができる。本発明の化合物および中間体は反応混合物から標準技術によって単離することができる。「アルキルＣ１〜６」の語は、１〜６個の炭素原子を含む直鎖状、分岐状、飽和、不飽和、脂肪族および環状アルキルを包含する。「アルキルＣ１〜３」も同様に解釈される。式Ｉの化合物はエナンチオマー型で存在できる。多様な光学異性体が慣用技術たとえば分別結晶またはHPLCを用いてその化合物のラセミ混合物の分離によって単離できる。別法として、個々のエナンチオマーは、適当な光学活性の出発原料の、ラセミ化を生じない反応条件での反応によって作成できる。中間化合物もエナンチオマー型で存在することが可能で、精製されたエナンチオマー、ジアステレオマー、ラセメートまたは混合物として使用できる。一般式Ｉの化合物は、動物に有用な薬理学的活性を有する。とくに、それらは有用な一酸化窒素シンターゼ阻害活性を有し、一酸化窒素の合成または過剰合成が一部寄与するヒトの疾患または状態、たとえば心停止、卒中および新生児低酸素症の場合のような低酸素症、虚血、低酸素症、低血糖、てんかんのような障害および外傷（脊髄および頭部傷害）における神経変性および／または神経壊死を含む神経変性状態、高圧酸素けいれんおよび中毒、痴呆たとえば初老期痴呆、アルツハイマー病およびAIDS関連痴呆、シデナム舞踏病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、コルサコフ病、脳血管障害関連痴愚、睡眠障害、精神分裂病、不安症、うつ病、季節性感情障害、ジェット症候群、月経前症候群(PMS)に伴ううつ病または他の症状、不安および細菌性ショックの処置または予防に有用性が期待される。式Ｉの化合物はまた、オピエートおよびジアゼピンに対する耐性の防止および逆転、薬物依存の処置、痛みの軽減、ならびに偏頭痛および他の血管性頭痛の処置に活性を示すことが期待される。本発明の化合物はまた、有用な免疫抑制活性を示し、炎症の処置または予防、胃腸管運動性障害の処置および陣痛の誘発に有用な可能性がある。これらの化合物は一酸化窒素シンターゼを発現する癌の処置にも有用性が考えられる。式Ｉの化合物は、とくに、神経変性状態もしくは偏頭痛の処置もしくは予防、またはオピエートおよびジアゼピンに対する耐性の防止および逆転もしくは薬物依存の処置、中でも神経変性障害の処置または予防に有用である。とくに、低酸素症、虚血、卒中および筋萎縮性側索硬化症からなる群より選ばれる状態に興味がもたれる。したがって、本発明のさらに他の態様においては、本発明は式Ｉの化合物またはその医薬的に許容される塩の医薬としての使用を提供する。本発明の他の態様によれば、本発明は式Ｉの化合物またはその医薬的に許容される塩の上述の疾患または状態の処置または予防のための医薬の製造における使用、ならびに式Ｉの化合物またはその医薬的に許容される塩の治療有効量を上述の疾患または状態に冒されているかまたは冒されやすい患者に投与することからなるこのような疾患または状態の１つの処置または予防方法を提供する。上述の治療的適用に際して、投与される用量はもちろん、用いられる化合物、投与方法および所望の処置によって変動する。しかしながら、一般的にはこれらの化合物を固体の形態において１mg〜2000mg／日の１日用量で患者に投与すると満足できる結果が得られる。式Ｉの化合物またはその医薬的に許容される塩は、それら単独で、または適当な経口または非経口投与用医薬製剤の形態で使用することができる。本発明によれば、式Ｉの化合物またはその医薬的に許容される塩、好ましくは 80％未満、さらに好ましくは50％未満からなり、これを医薬的に許容される希釈剤または担体と混合した医薬組成物が提供される。本発明はまた、構成成分を混合することからなるこのような医薬製剤の製造方法を提供する。上述の希釈剤および担体の例としては、錠剤および糖衣錠の場合には、乳糖、デンプン、タルク、ステアリン酸、カプセルの場合には、酒石酸または乳糖、注射用溶液の場合には、水、アルコール、グリセリン、植物油、坐剤の場合には、天然もしくは硬化油またはワックスがある。経口投与すなわち経食道投与に適当な形態の組成物には錠剤、カプセルおよび糖衣錠が、持続放出性組成物には活性成分をイオン交換樹脂と結合し、これを所望により拡散障壁層で被覆して樹脂の放出性を改変した組成物が包含される。この組成物は式Ｉの化合物またはその医薬的に許容される塩を50重量％まで、さらに好ましくは25重量％までを含有する。酵素、一酸化窒素シンターゼには多くのアイソフォームがあり、式Ｉの化合物およびそれらの医薬的に許容される塩は、Bredt & Synder, J．Pharm.(1992)225，161-165の記載に基づく数種の操作により、以下のように一酸化窒素シンターゼ阻害活性をスクリーニングできる。一酸化窒素シンターゼは³H-L-アルギニンを³H-L-シトルリンに変換し、これを陽イオン交換クロマトグラフィーによって分離し、シンチレーションカウンターで定量することができる。スクリーニングＡ (Ａ) 神経型一酸化窒素シンターゼ阻害活性のスクリーニング酵素はラット視床下部または小脳から単離された。雄性Sprague-Dawley ラット（250〜275ｇ）をCO₂麻酔して断頭したのち、小脳または視床下部を摘出する。１mM EDTA含有50mM Tris-HCl緩衝液（25℃でpH7.2）中でホモジナイズし、20, 000ｇで15分間遠心分離して小脳または視床下部上澄液を調製する。Dowex AG-50Ｗ-Ｘ８ナトリウム型および水素型カラムを連続して通過させるクロマトグラフィー、ついで1000ｇでの30秒間の遠心分離により、残留するＬ−アルギニンを上澄液から除去する。アッセイには、25μｌのＬ−アルギニン溶液（18μM ¹H-Ｌ−アルギニン、96n M ³H−アルギニン濃度）と、25μlのアッセイ緩衝液（50mM HEPES、１mM EDTA、 1.5mM CaCl₂、pH7.4）または25μlの緩衝液中試験化合物のいずれかを含む96のウエル（96ウエルフィルタープレート）のそれぞれに、22℃で25μlの上記最終上澄液を添加する。各試験管に25μｌの完全アッセイ緩衝液（50mM HEPES、１mM EDTA、1.5mM CaCl₂、１mM DTT、100μM NADPH、10μg／mlカルモジュリン、pH7 .4）を添加して反応を開始させ、10分後に停止緩衝液(20mM HEPES、２mM EDTA、 pH5.5)および200〜400メッシュDowex AG-50Ｗ-Ｘ８のスラリー200μlを加えて反応を停止させる。各フィルタープレートをろ過して標識Ｌ−シトルリンを標識Ｌ−アルギニンから分離し、停止した反応液それぞれ75μlを３mlのシンチレーションカクテルに加える。ついでＬ−トルリンをシンチレーションカウンターで定量する小脳上澄液を用いた典型的な実験では、基底活性は7,000dpm／mlの試薬ブランクからサンプル１mlにつき20,000dpm上昇する。濃度１μMで一酸化窒素シンターゼを80％阻害する対照標準、Ｎ−ニトロ−Ｌ−アルギニンをこのアッセイで試験してこの操作を確証する。スクリーニングＢ (Ｂ) 誘導型一酸化窒素シンターゼ阻害活性のスクリーニング酵素は誘導後、培養ヒト結腸直腸癌細胞系、DLD-1(European Collec- tion of Animal Cell Culturesから入手）から調製する。DLD-１細胞は10％ウシ胎児血清、４mM Ｌ−グルタミンおよび抗生物質（100単位／mlのペニシリンＧ、 100μg／mlのストレプトマイシンおよび0.25μg／mlのアンホテリシンＢ）ならびに100μg／mlのカナマイシンを補充したRPMI 1640培地中で培養する。細胞は3 7℃に保持した培地35mlを含む225cm³のフラスコ中、５％CO₂含有加湿雰囲気内で定常的に増殖させる。一酸化窒素シンターゼはインターフェロン-約250Ｕ／ml IL-2、1000Ｕ／ml IF Nγ、200Ｕ／ml IL-6、および200Ｕ／ml TNF-αに応答して細胞によって産生される。17〜20時間の培養期間後に、フラスコ表面から細胞シートを培養培地中に掻き落として細胞を収穫する。細胞を遠心分離（1000ｇ、10分）によって収集し、50mM Tris-HCl（20℃でpH7.5）、10％(v/v)グリセロール、0.1％(v/v)Triton- X-100、0.1μMジチオスレイトール、ならびにロイペプチン(２μg／ml)、大豆トリプシンインヒビター（10μg／ml）、アプロチニン（５μg／ml）およびフェニルメチルスルホニルフルオリド（50μg／ml）からなるプロテアーゼインヒビターのカクテルを含む溶液を細胞ペレットに加えて溶解物を調製する。アッセイには、基質カクテル［50mM Tris-HCl（20℃でpH7.5）、400μM NADPH 、20μMフラビンアデニンジヌクレオチド、20μMフラビンモノヌクレオチド、４ μMテトラヒドロビオプテリン、12μM Ｌ−アルギニンおよび0.025μCi Ｌ−［³ H］アルギニン］25μlを、50mM Tris-HCl中の試験化合物溶液25μlを含有する96 ウエルフィルタープレートのウエル（孔径0.45μM）に加える。反応は、細胞溶解液（上述のようにして調製）50μlを加えて開始させ、室温で１時間インキュベートしたのち、３mMのニトロアルギニンおよび21mM EDTAの水溶液50μlを加えて停止させる。標識Ｌ−シトルリンを標識Ｌ−アルギニンからDowex AG-50Ｗを用いて分離する。アッセイ混合物にDowex 50Ｗ（Na⁺型）の25％水性スラリー150μlを加え、ついで全体を96ウエルプレート中にろ過する。70μlのろ液をサンプリングし、固体シンチラントを含む96ウエルプレートのウェルに添加する。サンプルを乾燥させたのち、Ｌ−シトルリンをシンチレーションカウンターで定量する。典型的な実験では、基底活性はサンプル70μlにつき300dpmであり、これは試薬対照中では1900dpmに上昇する。IC₅₀（50％阻害濃度）10μMを示すアミノグアニジンを標準として試験し、この操作を確証する。スクリーニングＣ (Ｃ) 内皮型一酸化窒素シンターゼ阻害活性のスクリーニング酵素は、ヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVEC）からPollockら(1991)Proc.Nat．Acad ．Sci.，88，10480-10484の記載に基づく操作によって単離できる。HUVECはClon etics Corp(San Diego，CA，USA)から購入し、集密化するまで培養する。細胞は一酸化窒素シンターゼの産生の有意な低下を生じることなく35〜40回継代して維持できる。細胞が集密状態になったならばダルベッコのリン酸緩衝食塩溶液に再懸濁し、800rpmで10分間遠心分離し、氷冷した50mM Tris-HCl、１mM EDTA、10％グリセロール、１mMフェニルメチルスルホニルフルオリド、２μMロイペプチン、pH4.2中で細胞ペレットをホモジナイズする。34,000rpmにおいて60分間遠心分離したのち、ペレットを20mMのCHAPSも含有するホモジネーション緩衝液中に可溶化する。氷上で30分間インキュベートしたのち、懸濁液を34,000rpmで30分間遠心分離する。得られた上澄液は使用まで−80℃に保存する。アッセイには、25μlのＬ−アルギニン溶液(12μM ¹H-L−アルギニン、 64nM ³H-L−アルギニン濃度)と25μlアッセイ緩衝液（50mM HEPES、１mM EDTA、 1.5mM CaCl₂、pH7.4）または25μl緩衝液中試験化合物のいずれかを含む96ウエルフィルタープレートの各ウエルに22℃で25μｌの上記最終上澄液を加える。各ウエルに25μｌの完全アッセイ緩衝液(50mMのHEPES、１mM EDTA、1.5mM CaCl₂、１mM DTT、100μM NADPH、10μg／mlカルモジュリン、12μMテトラヒドロビオプテリン、pH7.4）を加え反応を開始させ、30分後に停止緩衝液（20mM HEPES、２m M EDTA、pH5.5）および200〜400メッシュDowex AG-50Ｗ-Ｘ８の50％スラリー200 μlを加えて反応を停止させる。他の96ウエルプレートにろ過して標識Ｌ−シトルリンを標識Ｌ−アルギニンから分離し、停止させた反応液それぞれ75μlを３mlのシンチレーションカクテルに加える。ついでＬ−シトルリンをシンチレーションカウンターで定量する。典型的な実験では基底活性は1500dpm／mlの試薬ブランクからサンプル１mlにつき5,000dpm上昇する。濃度１μMで一酸化窒素シンターゼを70〜90％阻害する対照標準、Ｎ−ニトロ−Ｌ−アルギニンをこのアッセイで試験してこの操作を確証する。化合物はエクソビボアッセイでも試験して、脳への浸透の程度を決定した。スクリーニングＤ (Ｄ) 神経型一酸化窒素シンターゼ阻害活性のエクソビボアッセイ雄性Sprague-Dawleyラット(250〜275ｇ)に、0.9％食塩水に溶解した試験化合物10mg／kgまたは対照として食塩水単独を静脈内に投与した。処置後予め定められた時点（通常２〜２４時間）で動物を屠殺し、小脳を摘出し、上澄液を調製し、スクリーニングＡの記載と同様にして、一酸化窒素シンターゼ活性をアッセイした。さらに確認試験として、小脳上澄液を2′-5′-ADP Sepharoseカラム（一酸化窒素シンターゼを結合する）に適用し、ついでNADPHで溶出した。溶出液をスクリーニングＡの操作により一酸化窒素シンターゼ活性について試験した。ラットの脳に浸透し、神経型一酸化窒素シンターゼを阻害する化合物は、上澄液プレパレーションおよび2′-5′-ADP Sepharoseカラムからの溶出液の両者において一酸化窒素シンターゼの低下を生じた。一酸化窒素シンターゼ阻害活性のスクリーニングでは、化合物の活性はIC₅₀（アッセイにおいて５０％の酵素阻害を与える薬物の濃度）で示す。試験化合物の IC₅₀値は最初、化合物の１、10および100μM溶液の阻害活性から評価した。少なくとも50％の酵素阻害を10μMで示した化合物を、IC₅₀を決定できるさらに適当な濃度を用いて再試験した。上記スクリーニングＡ（一酸化窒素シンターゼ神経型アイソフォームに対する活性のスクリーニング）では、以下の実施例１の化合物は10μMより低いIC₅₀を与えて、有用な治療活性を示すことが期待される。スクリーニングＢおよびＣ（一酸化窒素シンターゼのマクロファージおよび内皮型アイソフォームに対する活性のスクリーニング）では、実施例１の化合物はスクリーニングＡで得られた値より10倍以上高いIC₅₀値を与え、所望の選択性を示すことが指示される。実施例２の化合物もスクリーニングＡで試験し、同様に10μMより低いIC₅₀を与えた。すなわち、この化合物も有用な治療活性を示すことが期待される。従来知られている化合物と比較すると、式Ｉの化合物およびそれらの医薬的に許容される塩は、低い毒性、高い有効性、長い作用時間、広範囲の活性、強い効力、一酸化窒素シンターゼ酵素の神経型アイソフォームに対する高い選択性、少ない副作用、容易な吸収性または他の有用な薬理学的性質の点で有利である。本発明を以下の実施例によって例示するが、これはいかなる意味においても本発明を限定するものではない。実施例１Ｎ−（1,2,3,4−テトラヒドロイソキノリン−７−イル）カルバミミドチオイック酸エチルエステル (a) ２−（７−アミノ−1,2,3,4−テトラヒドロイソキノリン）2,2,2−トリフルオロアセトアミド 4.21ｇ（23.6ミリモル）の７−ニトロ−1,2,3,4−テトラヒドロイソキノリンおよび3.6mL（926ミリモル）のトリエチルアミンの100mLメチレンクロリド中溶液に０℃で3.5mL(25ミリモル)の無水トリフルオロ酢酸を添加し、反応混合物を一夜攪拌した。反応混合物を希塩酸で抽出した。水相を塩基性にしてメチレンクロリドで抽出した。乾燥した（硫酸マグネシウム）有機相をからＮ−（７−ニトロ−1,2,3,4−テトラヒドロイソキノリン）トリフルオロアセトアミドが黄色の固体として得られた。この化合物をそのまま200mLのエタノールに取り、0.50ｇの５％パラジウム−炭を加え、混合物をパールの水素化装置上45psiで1.5時間水素化した。触媒をろ去し、溶媒を蒸発させた。残留物を100mLの石油エーテルと磨砕すると標記化合物5.45ｇ（95％）が灰色の固体として得られた。融点：61〜３℃。 (b) 1,2,3,4 −テトラヒドロイソキノリン−７−チオ尿素 1.3mL（9.7ミリモル）のベンゾイルイシチオシアナートのアセトン13mL中溶液を還流し、これに1.25ｇ（5.12ミリモル）の２−（７−アミノ −1,2,3,4−テトラヒドロイソキノリン）トリフルオロアセトアミドを還流が制御される速度で迅速に添加した。添加完了後、反応混合物を３時間攪拌した。冷却して固体を集め、アセトン30mLで洗浄すると1.74ｇ(83％)の中間体１−ベンゾイル−３−［２−（2,2,2−トリフルオロアセトアミド）1,2,3,4−テトラヒドロイソキノリン−７−チオ尿素が灰白色の固体として得られた。この化合物をそのまま20mLの５％水酸化ナトリウム溶液に加え、得られた溶液を80℃に１時間加熱した。室温に冷却して溶液をろ過すると標記化合物0.78ｇ(74％)が得られた。融点：198〜203℃。 (c) Ｎ−（1,2,3,4−テトラヒドロイソキノリン−７−イル）カルバミミドチオイック酸エチルエステル 0.75ｇ（3.61ミリモル）の1,2,3,4−テトラヒドロイソキノリン−７−チオ尿素のイソプロパノール10mL中懸濁液に２mLのイソプロパノール中0.35ｇ（3.7ミリモル）のメタンスルホン酸を添加した。反応混合物を0.25時間攪拌したのち、 0.85mL（8.4ミリモル）のメタンスルホン酸エチルを加えた。反応混合物を４時間加熱還流した。溶媒を真空中で蒸発させると油状物が得られ、これを100mLの水に溶解し、水相を飽和炭酸水素ナトリウムで塩基性にし、水相を100mLのメチレンクロリドで８回抽出した。抽出液を合わせて硫酸マグネシウム上で乾燥し、濃縮すると0.61ｇの油状物が得られ、これは放置すると固化した。アンモニア飽和クロロホルム中10％メタノールを用いてシリカゲル上カラムクロマトグラフィーに付すと、標記化合物0.45ｇ（53％）が白色固体として得られた。MS 236（Ｍ＋Ｈ）。実施例２Ｎ−５−(２−(((３−クロロフェニル)メチル)（メチル）アミノ)インダニル）カルバミミドチオイック酸エチルエステル (a) ２−((３−クロロフェニル)カルボニル)アミノ−５−ニトロインダン２−アミノ−５−ニトロインダン塩酸塩（1.5ｇ、7.0ミリモル）のメチレンクロリド（50ml）中溶液に０℃でトリエチルアミン（2.1ml、15.0ミリモル）ついで３−クロロベンゾイルクロリド（1.0ml、7.5ミリモル）を添加した。混合物を直ちに水中に一度に加え、層を分離した。水層をメチレンクロリド（２×20ml）で抽出し、抽出液を合わせて水で洗浄し、MgSO₄上で乾燥し、ろ過し、濃縮すると油状物が得られた。これはTLCで均一であり、そのまま次工程に使用された。M S（Ｍ＋Ｈ）⁺＝317。 (b) ２−((３−クロロフェニル)メチル)アミノ−５−ニトロインダン THF（75ml）中２−((３−クロロフェニル)カルボニル)アミノ−５−ニトロインダン（2.2ｇ、7.0ミリモル）にBH₃・THF（1.0Ｍ、35ml、35ミリモル）を滴下して加えた。混合物を12時間還流し、０℃に冷却し、４Ｎ HCL（60ml）で反応をクエンチし、１時間還流した。得られた溶液を蒸発させて油状物とし、50％NaOH で塩基性にしてメチレンクロリド（３×20ml）で抽出した。抽出液を合わせて水で洗浄し、MgSO₄上で乾燥し、ろ過し、濃縮すると油状物が得られた。IPA／HCl で処理すると２−((３−クロロフェニル)メチル)アミノ−６−ニトロインダン（ 2.1ｇ、２工程で88％）が得られた。融点：234〜237℃。 (c) ２−((３−クロロフェニル)メチル)(メチル)アミノ)−５−ニトロインダンギ酸（5.5ml）中に２−((３−クロロフェニル)メチル)アミノ−５−ニトロインダン（4.4ｇ、14.5ミリモル）を取り、これにホルムアミド（12ml）を加えた。混合物を30分加熱還流し、冷却し、２Ｎ NaOHで中和し、酢酸エチル（３×70ml）で抽出した。抽出液を合わせて水で洗浄し、MgSO₄ 上で乾燥し、ろ過し、濃縮すると油状物（4.2ｇ、91％）が得られた。MS（Ｍ＋Ｈ）⁺＝317。 (d) ２−((３−クロロフェニル)メチル)(メチル)アミノ)−５−アミノベンゼン 85％AcOH／H₂O（100ml）中２−((３−クロロフェニル)メチル)(メチル)アミノ )−５−ニトロインダン（4.3ｇ、13.6ミリモル）に金属亜鉛（7.1ｇ、109.0ミリモル）を加えた。混合物を５分間攪拌し、セライトを通してろ過し、蒸発させると油状物が得られた。油状物を塩基性水中に注ぎ、酢酸エチル（３×100ml）で抽出した。抽出液を合わせて水で洗浄し、MgSO₄上で乾燥し、ろ過し、濃縮すると油状物（3.6ｇ、92％）が得られた。MS（Ｍ＋Ｈ）⁺＝287。 (e) ５−(２−(((３−クロロフェニル)メチル)(メチル)アミノ)インダニル)−１ −ベンゾイル−２−チオ尿素 15mlの乾燥アセトン中ベンゾイルイソチオシアナート（2.7ｇ、16.5ミリモル）の溶液を予め加熱して極めて穏やかに還流し、これに10mlの乾燥アセトンに溶解した２−((３−クロロフェニル)メチル)（メチル）アミノ)−５−アミノベンゼン（3.6ｇ、12.4ミリモル）を激しい還流が制御される速度で速やかに加えた。反応混合物を30分間還流し、激しく攪拌しながら氷上に注ぎ、酢酸エチル(３ ×100ml)で抽出した。抽出液を合わせて水で洗浄し、MgSO₄上で乾燥し、ろ過し濃縮すると固体が得られ、これをＩＰＡから再結晶した（3.12ｇ、58％）。融点：128〜130℃。 (f) ５−(２−(((３−クロロフェニル)メチル)（メチル）アミノ)インダニル)− ２−チオ尿素５−(２−(((３−クロロフェニル)メチル)（メチル）アミノ)インダニル)−１ −ベンゾイル−２−チオ尿素（3.1ｇ、7.12ミリモル）および40mlの2.5Ｎ水酸化ナトリウム水溶液の混合物を攪拌しながら90℃に35分間加熱した。温かい反応混合物を攪拌しながら60mlの水中に注いだ。生成物を３部のメチレンクロリドに抽出した。抽出液を合わせ水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濃縮乾固した。残留物をシリカゲル上クロマトグラフィー（８：１酢酸エチル／ヘキサン）に付して濃縮すると油状物（2.2ｇ、93％）が得られた。MS(M＋H)⁺＝246。 (g) Ｎ−５−(２−(((３−クロロフェニル)メチル)(メチル)アミノ)インダニル) カルバミミドチオイック酸エチルエステル５−(２−(((３−クロロフェニル)メチル)（メチル）アミノ)インダニル)−２ −チオ尿素（2.2ｇ、6.33ミリモル）を20mlの200エタノールに懸濁し、混合物をメタンスルホン酸0.41mlおよびメタンスルホン酸エチルエステル1.35mlで処理した。混合物を４時間還流し、蒸発させ、飽和重炭酸塩で塩基性とし、メチレンクロリド（３×30ml）で抽出した。抽出液を合わせ水で洗浄し、MgSO₄上で乾燥し、ろ過し濃縮すると油状物が得られ、これを酢酸エチルに溶解してIPA／HClで処理した。固体をろ過し、IPAで洗浄した（2.40ｇ、83％）。融点：＞150℃（分解）。実施例３Ｎ−(２−メチル−1,2,3,4−テトラヒドロイソキノリン−７−イル)カルバミミドチオイック酸エチルエステル塩酸塩 (a) ７−ニトロ−２−メチル−1,2,3,4−テトラヒドロイソキノリン塩酸塩ギ酸10mlおよび38％ホルムアミド水溶液17ml中７−ニトロイソキノリン4.00ｇ（18.7ミリモル）の溶液を１時間加熱還流した。反応混合物を冷却し、氷上に注ぎ、アンモニア水で塩基性にした。沈殿したゴム状の残留物をメチレンクロリドで２回抽出した。乾燥した（MgSO₄）有機相を濃縮すると粗製の７−ニトロ−２−メチル−1,2,3,4−テトラヒドロイソキノリンが粘稠な油状物として得られた。この油状物をそのままエタノール（50ml）に取り、エーテル中塩酸溶液をリトマスで明らかに酸性になるまで加えた。エーテルを加えて沈殿を誘発させ、得られた固体を集めると標記化合物3.99ｇ(93％)が黄色の固体として得られた。融点：236〜８℃（分解）。 (b) ７−アミノ−２−メチル−1,2,3,4−テトラヒドロイソキノリン塩酸塩 3.98ｇ（17.5ミリモル）の７−ニトロ−２−メチル−1,2,3,4−テトラヒドロイソキノリン塩酸塩および0.4ｇの10％パラジウム‐炭を200mlのエタノールに懸濁し、50psiで２時間水素化した。触媒をろ去し、少量の水で洗浄した。ろ液を濃縮して水溶液を得た。無水エタノールを加えて過剰の水を固体が生成するまで蒸発させた。この固体を熱エタノール（60ml）に溶解し、エーテルを徐々に加えて沈殿を誘発させた。生成物を集めると標記化合物3.38ｇ（97％）が灰白色の固体として得られた。融点：114〜９℃。 (c) ２−メチル−1,2,3,4−テトラヒドロイソキノリン−７−チオ尿素 3.88ｇ（19.5ミリモル）の７−アミノ−２−メチル−1,2,3,4−テトラヒドロイソキノリン塩酸塩の水100ml中溶液を炭酸カリウム溶液で塩基性とし、メチレンクロリドで２回抽出した。乾燥した（硫酸マグネシウム）有機相を濃縮すると遊離塩基3.13ｇ（99％）が油状物として得られた。この油状物をアセトン（75ml ）に取り、アセトン100ml中2.21ｇ（19.4ミリモル）のトリフルオロ酢酸を加えた。この溶液を加熱還流し、この間に5.2ml（39ミリモル）のベンジルイソチオシアナートを滴下して加えた。反応混合物を１時間加熱したのち室温に冷却した。溶媒を真空中で除去して、得られた油状物をメタノール（150ml）および2.5Ｍ水酸化ナトリウム（50ml）に取った。この溶液を１時間65℃に加熱したのち室温に冷却した。メタノールを真空中で蒸発させ、水溶液を冷却すると、生成物が沈殿した。固体を集めると標記化合物2.22ｇが淡黄色の固体として得られた。融点：184〜６℃。さらに標記化合物の第２の結晶（0.79ｇ、総収率69％）が得られた。 (d) Ｎ−（２−メチル−1,2,3,4−テトラヒドロイソキノリン−７−イル）カルバミミドチオイック酸エチルエステル塩酸塩 0.88ｇ（4.0ミリモル）の２−メチル−1,2,3,4−テトラヒドロイソキノリン− ７−チオ尿素のイソプロパノール８ml中懸濁液に0.39ｇ（3.9ミリモル）のメタンスルホン酸を加えた。メタンスルホン酸塩および遊離塩基いずれもイソプロパノールに不溶であるので、この溶液を0.5時間加熱還流してメタンスルホン酸塩の形成を保証した。この溶液に1.5ml（14ミリモル）のメタンスルホン酸エチルエステルを加え、一夜加熱を続けると澄明な溶液が得られた。溶媒を真空中で除去し、得られた油状物を水に取り、炭酸カリウムで塩基性とし、メチレンクロリドで２回抽出した。乾燥した（硫酸マグネシウム）有機相を濃縮すると油状物が得られた。この油状物をエタノールに取り、エタノール中塩酸でリトマスに対して明らかに酸性にした。エーテルを加えると塩が粘稠な油状物として分離した。溶媒を傾瀉し、油状物をエーテルで数回洗浄した。油状物を水(250ml)に取り、溶液を脱色炭で処理した。溶液をろ過し、ろ液を500mlの水で希釈した。この溶液を凍結乾燥すると標記化合物1.06ｇ(78％)が一水和物として得られた。MS(CI) 250(M＋H)；NMR(DMSO／D₂O) 7.33(d，1H)，7.21(d,1H)，7.17(s，1H)，4.36(broad s，2H)，3.0-3.6(m，6H) ，3.17(s，3H),1.30(t，3H)。実施例４Ｎ−(２−メチル−1,2,3,4−テトラヒドロイソキノリン−７−イル）カルバミミドチオイック酸メチルエステル塩酸塩 1.00ｇ（4.52ミリモル）の２−メチル−1,2,3,4−テトラヒドロイソキノリン −７−チオ尿素［実施例３、工程(c)］のイソプロパノール10ml中懸濁液にメタンスルホン酸0.44ｇ（4.5ミリモル）を加えた。メタンスルホン酸塩および遊離塩基いずれもイソプロパノールに不溶であるので、この溶液を２時間室温で攪拌してメタンスルホン酸塩の形成を保証した。この溶液に6.7ｇ（47ミリモル）のヨウ化メチルを加え、反応混合物を一夜攪拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物を水に溶解し、脱色炭で処理し、ろ過すると澄明無色の水溶液が得られた。この溶液を炭酸カリウムで塩基性とし、メチレンクロリドで２回抽出した。有機相を合わせて乾燥し（硫酸マグネシウム）、真空中で濃縮すると1.02ｇ（96％）の生成物が遊離塩基として得られた。この油状物をエタノールに取り、エタノール中塩酸を加えて明らかに酸性にした。過剰のエーテルを加えると塩が油状物として分離した。溶媒を傾瀉し、この油状物をエーテルで数回洗浄した。この油状物を水250mlに取り、再び脱色炭で処理した。溶液をろ過し、ろ液を500mlの水で希釈した。この溶液を凍結乾燥すると標記化合物が白色固体として得られた。MS(C I)236(M＋H)；NMR(DMSO／D₂O)11.6-11.9(broad，1H)，9.4-9.7(broad，1H)，7.3 6(d，1H)，7.24(d，1H)，7.18(s，1H)，4.2-4.6(broad m，2H)，3.0-3.7(broad m，4H)，2.87(s，3H)，2.70(s，3H)。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ )，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．式Ｉ［式中、ＤはアルキルＣ１〜６を表し、Ｔは-(CH₂)_m-NXYで置換されたC_3-5飽和もしくは不飽和アルキレン鎖；-(CH₂ )_m-NXYで置換された-O-(CH₂)₂-NH-または-U-(CH₂)_a-N(X)-(CH₂)_b-（ＵはNH、ＯまたはCH₂である）を表し、ａおよびｂは同一であるかまたは互いに異なり０〜３の整数であるが、ａ＋ｂは１〜３の範囲内であり、ＸおよびＹは同一であるかまたは互いに異なり、水素、アルキルＣ１−６もしくは基-(CH₂)_nQを表すか、または NXYはすべてでピペリジニル、ピロリジニル、モルホリニル、またはテトラヒドロイソキノリニルを表し、Ｑは、アルキルＣ１〜６、アルコキシＣ１〜６、トリフルオロメチル、ハロゲン、ニトロまたはシアノによって置換されていてもよいフェニルを表し、ｍおよびｎは独立に０〜５の整数を表す］の化合物およびその医薬的に許容される塩。２．Ｔは-U-(CH₂)_a-N(X)-(CH₂)_b-である請求項１記載の式Ｉの化合物。３．Ｔは-U-(CH₂)_a-N(X)-(CH₂)_b-であり、ＵはCH₂である請求項１または２記載の式Ｉの化合物。４．Ｔは-U-(CH₂)_a-N(X)-(CH₂)_b-であり、ＵはCH₂であり、ａおよびｂはそれぞれ１である請求項１〜３のいずれかに記載の式Ｉの化合物。５．Ｄはエチルである請求項１〜４のいずれかに記載の式Ｉの化合物。６．化合物は、Ｎ−(1,2,3,4−テトラヒドロイソキノリン−７−イル)カルバミミドチオイック酸エチルエステル、Ｎ−６−(２−(((３−クロロフェニル)メチル)(メチル)アミノ)インダニル) カルバミミドチオイック酸エチルエステル、Ｎ−(２−メチル−1,2,3,4−テトラヒドロイソキノリン−７−イル)カルバミミドチオイック酸エチルエステル、Ｎ−(２−メチル−1,2,3,4−テトラヒドロイソキノリン−７−イル)カルバミミドチオイック酸メチルエステル、またはそれらの医薬的に許容される塩である請求項１記載の式Ｉの化合物。７．医薬として使用するための請求項１〜６のいずれかに記載の化合物。８．請求項１〜６のいずれかに記載の化合物を医薬的に許容される希釈剤または担体と混合してなる医薬組成物。９．請求項１〜６のいずれかに記載の化合物の、神経変性障害の処置もしくは予防、またはオピエートおよびジアゼピンに対する耐性の防止および逆転もしくは薬物依存の処置のための医薬の製造における使用。 10．請求項１〜６のいずれかに定義された式Ｉの化合物およびそれらの医薬的に許容される塩の製造方法において、 (a)式ＩにおいてＸまたはＸおよびＹの少なくとも１つがアルキルC₁〜C₆または基-(CH₂)_nQである化合物を、式ＩにおいてＸまたはＸおよびＹの一方もしくは両者が水素である相当する化合物と式II Ｒ¹Ｌ II （式中R¹はアルキルＣ１〜６または基-(CH₂)_nQであり、Ｌは離脱基である）の化合物とを反応させることにより調製するか、または、（b）式ＩにおいてＴが-(CH₂)_m-NXYで置換されたC_3-5飽和もしくは不飽和アルキレン鎖または-(CH₂)_m-NXYで置換された-O-(CH₂)₂-NH-である化合物を、Ｔは -(CH₂)_m-Lで置換されたC₃〜C₅飽和もしくは不飽和アルキレン鎖または-(CH₂)_m-L で置換された-O-(CH₂)₂-NH-であり、Ｌは離脱基である相当する化合物と式III ＸＹＮＨ III （式中、ＸおよびＹは請求項１に定義した通りである）の化合物とを反応させることにより調製するか、または（c）式IV （式中、Ｔは請求項１に定義した通りである）の化合物と式ＶＤ−ＬＶ（式中、Ｄは上に定義した通りであり、Ｌは離脱基である）の化合物とを反応させ、得られた化合物を、必要に応じてまたは所望によりその医薬的に許容される塩に変換するかまたはその逆の変換を行うことからなる方法。