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附件：一 第 84100084號專利申諳案中文説明書修正頁 蛛广…丨？ _ 民國86牟2月修正 五、發明説明（i ) 本發明是關於含有聚硫脲之藥學組成物及使用彼之方 法。此聚硫脲寡聚物是爲陰離子化合物而此具有特別有價 值之抗人類先天性免疫系統缺陷病毒的活性，因此這些寡 聚物在後天性免疫系統缺陷症候群（A I D S )之治療上 是有用的。 目前有許多研究正進行以發展對於在人類及動動中該 病毒感染的處理及治療。顯著的是此在人類中之A I D S 及A I D S相關之複徵（ARC )之發生事件正以具警訊 速率般增加。這五年來就A‘I D S病患之存活率是令人沮 喪的，及此A I D S病患，其免疫系統受到此感染嚴重損 害者，正遭受著許多感染之苦而此包括卡波濟氏肉瘤（ Kaposi’s sarcoma )及卡氏肺嚢蟲肺炎（Pneumocystis carni.nii pneumonia) ° 對於A I D S無可治癒是已知的，且目前治療大部分 是沒有足夠證據證明是有效的及具有許多麻煩的副作用。 此疾病的恐懼之導致了對於此些感染或懷疑感染此疾病者 產生社會排斥及差別待遇》 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 於 South African Patent 9 0 / 0 0 9 4，發表於 October 3 1 ，1 9 9 0的專利中發表一純淨形式之肝燐 月旨，其爲硫酸鹽化多醣類，而此可經由交相作用來與負責 細胞辨認及提供主細胞感染之限定抑制的病毒蛋白質相結 合。然而，肝燐脂造成某些副作用，著名的如出血及增加 凝結形成時間與血小板減少症（thrombocytopenia)。 若該病患是主動性出血（actively bleeding )'，或患 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（21()><297公釐) -4 - 經濟部中央樣準局員工消費合作社印袈 A7 _ B7 五、發明説明（2 ) 有血友病（hemophilia) *紫瘢病（pukpura )，血小板 減少症（thrombocytopenia )’ 顱內出血（intracrania hemorrhage)，細菌性心內膜炎（bacterial endocarditis)，陽性（active)肺結核，增加毛細管渗 透性（intreased capillary permeability)，胃腸道（ gastrointestinal tract)的潰瘍性傷害（ulcerative lesions)，嚴重高血壓（Severe hypertension )，流 產危險性（threatened abortio )或內臟癌症（ visceral carcinoma)，使禁止使用此肝燐醋（heparin )。此對於血友病之禁止使用是較特別受到關注，因爲許 多此類個人病患是爲Η I V陽性者。 長久以來也承認某些合成之水可溶性聚合物顯現出寬 廣範圍的生理活性〔R. M. Ottenbrite in "Biological Activities of Polymers", Amer. Chem. Soc. Symp. Ser.，No. 182，PP. 205 — 220’ eds. C. E.

Carraher and C. G. Gebelein ( 1 9 8 2 )〕。雖然此 類水可溶性聚合物之作用機構是未知的，但有一主張是爲 此聚合物經由離子吸引來與病毒細胞膜結合，因而令此病 毒無法感染到主細胞。不幸的是，該聚合物的極端毒性令 其無法做臨床上使用。而且，這些聚合物具有高分子量以 致於無法通過此腎臟細胞膜。 然而有人也曾經嚐試過藉由合成低分子量（ 1 ，000至10，000之脂肪族聚合物來克服此毒性 及排泄問題〔R· M. Ottenbrite in "Biological 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) Λ·4找.略ί ϋ10〆公釐） _ 卜-----^--『裝------訂-------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 A7 __B7 五、發明説明（3 )

Activity of Polymers", Amer. Chera. Soc. Symp. Ser. ,No. 182* pp. 205-220 * eds. C. E. Carraher and C. G. Gebelein ( 1 9 8 2 )〕。我們發 現到此類聚合物具有較低毒性但也大大地減低了該抗病毒 活性。此些低分子量之脂肪族聚合物可歸類爲^無規線圈 (random coil )〃聚合物。此類聚合物具有不可預測的 結構，因爲該主幹連接基之多變性的緣故。該無規線圈狀 聚合物在溶液中的結構一般可描述成球狀體。此些無規線 圈聚合物的抗病毒活性減低，相信是由於該聚合物與病毒 細胞膜之低結合親和力的緣故。另外有一嚐試來克服此無 規線圈聚合物的問題即提供一具有剛性架構而少有自由度 的聚合物。 某些顯現出對病毒複製具抑制性且沒有如肝燐脂及其 他已知聚合物所顯現出之副作用的對掌性陰離子寡聚物之 被發掘出，此些陰離子寡聚物具有規則性陰離子空間次序 ’且具有剛性主幹架構及是水溶性的。這些多分散性混合 物之陰離子寡聚物之描述於我們共同未決之U. S.

Patent Application Serial No. 7 1 0 * 3 7 0 1 filed June， 1 0 ， 1 9 9 1 ，及相關的 PCT Application Serial No. PCT/US 91/04804 ， filed July 8 ，1991中，而此發表一併於此做爲參 考。這些狹窄（narrow)聚合及單分散寡聚物之陰離子寡 聚物之描述於 U. S. Patent Application Serial No. 8 18 ’ 753 ， filed January 9 ， 1992 中，此發 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝 訂 泉 衣紙張尺戊遴·:丨1 令隼（CNS ) Λ4呒格 I: 210〆297公帑） 3〇3377 Λ7 Β7 五、發明説明（4 ) 表一併於此做爲參考。 某些具有剛性支幹架構及少自由度之對掌陰離子性聚 脲寡聚物同時地描述於彙存申請案中。 某些聚硫脲物已對於其抗病毒活性來發表於 Belgian Patent No. 5 4 4 ’ 8 6 8 ， issued July 3 1 ，1 9 5 6 中。 本發明之總結 目前已發現到該聚硫脲寡聚物擁有抗人類免疫性缺陷 病毒的活性，因此在A I D S及ARC的治療上是有用的 。此寡聚物是包括其醫學上可接受之鹽類。 因此，本發明是有關於水可溶性，剛性主幹架構之聚 硫脲寡聚物，而此寡聚物包含一以下分子式所表示之化合 物所衍生出的重複部分： 經濟部中央標準局貝工消費合作社印梵 LH —1- n^— » - - 1 I - -I I i I- - (Ί (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 其中X是一 一價芳族亞烴（hydro carbylene )基且此至 少用一磺酸基來取代。 本發明之寡聚物擁有在陰離子磺酸基之間的規則陰離 子空間次序。且此寡聚物之數平均分子量Μη是低於 1 〇，0 0 0 » 詳細描沭 本紙張尺度適用巾1國家螵嗥（ΓΜ ,! Λ4叹格（：:丨0 ·〇97公釐）

(ID A7 B7 五、發明説明（5 ) 本發明之寡聚物是以下列分子式來代表 ΓΗ Γη H S' 1 1 » ” R -N-C—— Ν- X-N-C ” Η -N-R' η S m 其中R是一氫，Cl — C4烷基，苯基或是一具有〇至 2R1基及高至3個分別獨立地選自於一氯或溴原子或-Ci 一 C4烷基之取代基來取代的苯基；R1代表 -S 0 3 R 2 ' - C Ο 2 R 2 ' - P03R2 或一OP〇3R2; R2是一氫或一醫學上可接受之陽離子；R3是一 R或 —X — NHR，其中R是如上述定義；Y代表

^衣 訂 ^泉 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製

R

衣纸張尺度適用中國國家標隼（CNS ) Λ4規格（ΉΟΧ 297公釐） A7 Β7 五、發明説明（6 )

(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ 經濟部中央標準局員工消費合作社印狀 m是一整數0或1 ，但有條件即當m是0時，R1是一氫 原子，及η是一整數3至50。 然而就分子式I之較佳代表關係是如下： R及R3是4_甲基苯基； m是1 ; η是3至1 5 ;及 X代表 衣紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210Χ297公釐） 9 A7 B7 五、發明説明（

本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) Λ4現恪（210XM7公釐） 10 A7 B7 五、發明説明（8 ) 此名稱'^藥學上可接受之陽離子〃意謂一在醫學使用 上可接受的陽離子。此些在施用藥劑以得到希望效果上並 非實質無毒及並不是個別地擁有重要醫藥活性的陽離子皆 包括於該"藥學上可接受之陽離子r的名稱內。例如，這 些鹽類包括鹼金屬像鈉及鉀；鹼金屬金靥像鈣及鎂；敍； ΙΠΑ族之輕金靥，包括鋁；及有機一級、二級及三級胺像 三烷基胺、N，—二苯甲基乙二胺、二氫松香胺（ dihydroabietylamine) 、N — ( Ci — C4)院基六氫 U比 啶及其他合適胺類等等的鹽類皆是。其中鈉及鉀鹽類是較 佳的。 此名稱藥學上可接受的"是意謂適合用藥於溫血動 物，特別是人類，及包括無毒性的，例如，適合醫藥使用 且對溫血動物是不具毒性的。本發明之寡聚物的藥學上可 接受之陽離子是可藉由傳統的離子交換方法或藉由用合適 鹸來處理此R1酸而製備的。 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 m I ammm HD I^i 1-1- - Y $ T坊 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 當使用於其他而非醫學用途是本寡聚物的目標時，那 些鹽類是爲其他而非醫學使用上可接受者也可來運用。此 另外鹽類的實例包括鋇、鋅及鈦。 該^規則空間次序'或在陰離子之間的規則空間次 序^是意謂著該陰離子磺酸基存在於此聚合物之主幹架構 上的間隔是由所使用之起始物質試劑所決定的及陰離子基 的發生是可用一可預測的方式來控制的。然而不希望受任 何理論領域限定内，我們相信此寡聚物之磺酸基是爲該結 合於Η〖V及 或細胞膜的部分，且因此阻礙了病靡進行 本紙張尺度通用中國阐家標準（CNS ) Λ4規格ί 2丨0 公缝) ~ 一 11 - 經濟部中央橾準局員工消費合作社印裝 A7 B7 五、發明説明（9 ) 複製的能力。 如其間所用，該名稱1寡聚物"是涵蓋對於η，例如 3至5 0之所有可能的值。該寡聚物較佳是直鏈的且具有 η是等於3至5 0中之某一整數，較佳是3至2 0，更佳 是3至1 5。當然，此η值是直接有關於該所得寡聚物的 分子量》主要的是此些寡聚物要有足夠低的分子量才可通 過腎臟排泄細胞膜，但也能夠抑制該Η I V病毒。此平均 分子量是受此試劑的化學計量所控制。該數平均分子量（ Μη)是<10，000，較佳是約500至 10 ，000 ，且最佳是約1 ，000至6 ，000。 就本發明之目的而言，該其間所描述之寡聚物及其生 理上可接受之鹽類都要等量考慮。此生理上可接受的鹽類 是有關於那些將與至少一該R1基之酸基形成一鹽類之鹼 類的鹽類且此鹽類當如其間所描述一般來用藥時是不會造 成嚴重損害生理作用。合適的鹼類是包括如該鹼金屬及鹼 土金屬的氫氧化物、碳酸鹽類及碳酸氫鹽類像氫氧化鈉、 氫氧化鉀、氫氧化鈣、碳酸鉀、碳酸氫鈉、碳酸鎂及其他 類似物；及氨、一級、二級及三級胺及其他類似物。特別 較佳的鹼類是鹼金靥氫氧化物、碳酸鹽類及碳酸氫鹽類。 此生理上可接受的鹽類是可藉由傳統的離子交換方法或是 藉由一合適鹼類來處理此R1酸。此另外鹽類的實例已描 述於本文中。 本發明之組成物形式可以是固體或液體形式。此些組 成物形式可以是套組形式，如此該組成物可於使用前在合 张尺度遶用中阐阈家標準（) Λ4規格(2丨(）/ 2V7公缝Ί ^ ~ _ 12 - (請先閱請背面之注意事項再填寫本頁」 裝 訂· .泉 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 __B7 五、發明説明（10 ) 適時間來加以混合。不論是預混合或是套組形式，該處方 通常需要一藥學上可接受的介質或佐藥。 本發明之寡聚物是可溶於水中及鹽類溶液中，特別是 在生理P Η值及生理食鹽水溶液中。因此本寡聚物是容易 來配製成合適水溶藥劑形式。而且，本寡聚物組成物經用 藥後，該寡聚物在體內仍維持是可溶的。 另外一在溶液中之揮發性弱酸的鹽類如揮發性胺類的 銨類是可轉變成更佳的藥學上可接受之鹽類如鈉或鉀鹽類 ’然而這是藉由用一弱揮發性酸之鹼金屬鹽類來處理此溶 液來完成的。藉由蒸發或冷凍真空乾燥（lyophlization )來濃縮此溶液時’該胺及弱酸可被移去及此寡聚物可爲 其鹼金屬鹽類形式般分離出來。該可於此步驟中來轉變之 胺鹽的合適實例是氨、單乙胺、三乙胺、三甲胺或二甲胺 之鹽類（於本文中是視爲、銨鹽類"）。鹸金屬鹽類的實 例是爲鈉或鉀之氫氧化物、碳酸氫鹽、乙酸鹽、甲酸鹽或 丙酸鹽類》 陰離子寡聚物的製備 此陰離子聚合物是使用兩種方法來製備的。第一製法 ’一種產製一寡聚物之多分散性混合物的非特定方法，而 此是有關於結合一二胺類與一硫脲先質如硫光氣或硫羰基 二咪唑。且任意選擇性地存在一單官能基之封端（endcapping ) 試劑 ，一酸 接受者 以控制 反應之 p Η ， 及一水 不互溶之溶劑。也有另-·方法是描述用於一非封端（ηοη- 衣紙張尺度適用中阐家標笨（（，NS ) Λ4現格（21(X 公犛） l·---"---^--叫裝------訂------(泉 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -13 - ύ〇3377 A7 _____B7_ 五、發明説明（11 ) capped )聚硫脲與胺端物藉著使用一單官能基之胺反應性 試劑，或是藉由結合該未封端（uncapped)聚合物與一含 胺之單官能基封端（end-capping )試劑及一硫脲先質來 轉變成封端（capped)聚合物的方法。 第二方法是關於一藉由連續地添加一雙異硫氰酸鹽類 及二胺類來逐步建立此聚合物鏈的方法。雖然此方法較冗 長，但可產製具狹窄分散性的聚硫脲。 . 該用於聚硫脲之製備的方法外解述於下。 二胺類：本發明之二胺類主要是芳族的，且有如前段落所 描述之分子式。此類二胺類是用至少一在中性p Η是具電 荷的某基來取代，而此基較佳是磺酸酯基。單價脂肪族取 代基也是可容許的。也可運用一小組之與芳族基結合一起 的脂肪族連接基如反式取代之伸乙基及亞次乙基。較佳的 二胺類是爲其中該碳-氮鍵被迫使成平行者如2，5 —二 胺基—1 ，4 —苯二磺酸，4，4> —二胺基（1 ，1 一 —聯苯基）—2，2，—二磺酸，反一 2，2，—（1 , 經濟部中央樣準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 2 -乙嫌二基（ethenediyl)雙（5 —胺基苯擴酸）及2 ，5 _二胺基苯磺酸。 硫脲先質：不同的硫脲先質如硫光氣（硫羰基二氯）、硫 羰基二溴，及其他脲先質如硫羰基二咪唑、六氯丙硫酮、 C 1 ；3 C S C 0 2 C C 1 3 ' C C 1 3 c S C 1 及 C 1 ；3 〇 c S C 1 都可來運用》 ^蛾张尺度適用中國國家橾聲-((-NS ) Λ4^格门丨0,< 公犛_1 "~ -14 輕濟部中央榡準局員工消費合作社印袋 A7 r_B2_ 五、發明説明（l2 ) 酸接受者：不同的無機鹼類都可來運用，如鹼金屬或二價 金屬之氫氧化物、碳酸鹽類、碳酸氫鹽類、鱗酸鹽類皆是 。當所有的鹼類都是在該二官能基之親電子劑的加成前來 加入的話，則具有緩衝能力的酸接受者是較佳的。 單官能基之封端（end capping )試劑：不同的此類分子 量限定劑都可運用。此類試劑可以是脂肪族或芳族化合物 ，而此與二胺類或該二官能基之親電子劑反應，合適的單 官能基試劑實例是如胺類像苯胺、甲苯胺、甲胺、乙胺、 丁胺、二乙胺、氨及N-甲苯胺。單官能基之胺反應性試 劑的實例是如苯甲醯基氯、甲基苯甲醯基氯、乙醯氯、異 氰酸甲酯、異硫氰酸甲酯、異硫氰酸苯酯、P —甲苯異硫 氣酸及氯甲酸苯酯。此些封端（end-capping )試劑也可 含有具電荷取代基，例如2 —磺酚鉀（patassium 2-sulfophenol )或4 -磺苯胺鉀。 雜項添加物：此界面劑的添加是不需要也不是較佳的，且 &可能會複雜化該分離過程。 溶劑：當該二官能基之親電子劑在反應溫度下是一液體時 —單一溶劑，水，是較佳的。此類二官能基之親電子劑的 實例丨是光氣。當使用的是固體、水不可溶之反應物時，則 希望有少量的水互不溶性共溶劑。此類水互不溶之共溶劑 本紙张尺度逋甩中國國家標隼（CNS )八4况格（210X 297公势） l·-------~4装-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

-•IT

J Λ -15 - 經濟部中央橾準局員工消費合作社印製 A7 __ B7 _ 五、發明説明（l3 ) 的實例是如氯仿、四氯化碳、甲苯、二氯甲烷。典型的有 機溶劑對水溶性溶劑的比率是0至1 ，而0至0.1是較 佳的》 此方法是在溫度能讓反應進行的狀況下來處理，典型 地是約0至1 0 0°C。較佳是0至2 5°C。當使用硫光氣 時良好的混合是重要的。少量實驗室規模的實驗是在一簡 單玻璃裝置該MixxorTM中來進行，其中此反應物被迫使 於一狹窄通道中來回進行。壓力並不重要且典型地是使用 大氣壓力。此反應之P Η值要小心地維持以利此方法。要 考慮一點即是該具電荷之二胺類在ρ Η值低於4時會有限 制的溶解度》而且，pH在低於6時，該反應是十分緩慢 ，然而在Ρ Η高於1 0時，此二官能基之親電子劑便會不 安定而遭受氫氧化物或其他鹼類攻擊。該聚硫脲的降解也 可能發生在高pH值時。因此pH較佳是維持在6及9之 間。 當不使用封端（end-capping )試劑時，此分子量可 藉由小心地調整反應物的化學計量關係或使用第二方法來 達成。不論是二胺類或二官能基之親電子劑都必須使用過 量，例如超過1至1 0 0莫耳。這化學計量必須依任何之 二官能基的親電子劑而定，而此親電子劑是在與二胺類反 應便藉由水解加以破壞的。例如，當硫光氣是在高ρ Η下 使用時，便需要大量過量之可破壞它的氫氧化物以彌償此 快速的反應。因爲此副反應的程度很難去控制，所以較佳 是使用一單官能基封端（e n d - c a ρ p i n g )試劑以控制此分 本紙悵尺度適用中國國家標搫（CNS ) 格ί 21()x 公緩) ' —~* -16 - L,---·-丨^~丨'~1裝！ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 A7 A7 經濟部中央梂準局員工消费合作社印裝 B7 五、發明説明（14 ) 子量。當使用第一方法時’雖然上述技術可用來控制該數 平均分子量，但此產物的特徵是爲具有許多分子量分佈之 聚合物的混合物。 此反應物的添加次序並不是十分重要的。然而，較佳 的順序是先加入該二官能基之親電子劑。當所用的酸接受 者並不是緩衝劑如氫氧化物時，則最佳是在開始加入小部 分以達到希望的pH，然後殘餘的再同時與該二官能基之 親電子劑一起加入。 濃度並不是很重要，且可以是0. 5至50重量百分 率，而這是以二胺類之重量相對於溶劑重量來表示的。一 較佳範圍是0. 5至5重量百分率。 該設定要產製具狹窄分散性之聚硫脲的第二方法是表 示於下。在這方法中，該鏈長度是藉由此每次重複兩步驟 循環之兩重複單位來增加的。爲做解說，所以只考慮到該 起始物質是一簡單二胺類（最上分子式、η — = 0 )的例 子而已。此二胺類與一硫脲先質如硫光氣一起轉變成雙一 異硫氰酸酯（中間分子式具有、η- = 0) β該雙一異硫 氰酸酯用一多餘的二胺類來處理以產生此具有2重複單位 的硫脲寡聚物（π =2於下端分子式中）。這順序一 直重複以建立在此順序0，2，4，6等等中的鏈長度。 本紙张尺度適用中國國家標辛 ( CNS ) Λ·Η(格: 210公着） —1--------^装-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 17

A7 B7 五、發明説明（15 )

S "II - H2N-X-- N-C-N-X-- NH2 I I J η Η Η 硫脲先質 ▼ s p— —

II SCN-X--N-C-N-X-- NCS L I I 」n

Η H 過量二胺類 ▼

S "II · H2N-X-- N-C-N-X NH2 在這方法中，該用於每一步驟的條件皆是相似於上述 之第一製法中用於產製多分散性聚硫脲的條件。主要的不 同是在先前方法中該反應物之化學計量是接近1:1。在 這製法中此添加的試劑，該硫脲是於第一步驟，及該二胺 類是於第二步驟中且是大量過量地加入。此成長鏈對於力口 入之試劑的莫耳比率大約是在1 : 3至1 : 50，而較佳 範圍是1 : 5至1 ·· 10。 然而在任何階段下都不需要分離出此成長鏈。某一較 佳方法是用過量的硫脲先質來處理此二胺類（或具有胺末 端的寡聚物）而有足夠時間令此胺末端完全地轉變成異硫 木紙張又度適用中國國家標牟（CNS ) A4規格（210x29"?公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) .裝. 訂 .泉 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 18 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（16 ) 氰酸酯。然後該過量的硫脲 之溶劑如二氯甲烷中來移離 溶液是用過量的二胺類來處 實施例中之某例子的做法一 該產物可藉由把此反應 物是不好溶劑的某一溶劑中 丙酮、甲醇、乙醇、異丙醇 使用的慮方形式及方法 此抗Η I V之陰離子寡 一 I病毒或其他相關具有g 細胞syncytim形成。抗Η 療A I D S或ARC或其他 或其他具有g p 1 2 0表面 此需要去預防在Η I V 抗Η I V陰離子寡聚物用量 上，已測定出當該抗Η I V 1 Ο Μ g/mL水溶液處方 完全抑制與減低了該病毒複 低於 300pg/mJ?。 此爲了治療A I D S或 之疾病所需抗Η I V陰離子 特別劑量單位、治療時間、 治療之病變的本質及程度及 本紙張尺度遴用中國國家橾牟（CNS ) Λ4砍格ί 2Ι0 Χ 先質藉由萃取至一水互不溶性 。然後該雙一異硫氰酸酯的水 理。然而，可能藉由如描述於 樣來分離出雙-異硫氰酸酯。 溶液倒入一水可互溶但對於產 來沈澱分離出。此類溶劑是如 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 聚物可用於預防該受到Η I V Ρ 1 2 0表面蛋白質所感染之 I V陰離子寡聚物也可用於治 由於Η I V- I逆轉錄酶病毒 蛋白質之病所引起的疾病。 感染細胞中syncytim形成的 是可以爲任何有效用量。實驗 陰離子寡聚物所運用的濃度爲 形式時，可對s y n c y t i u m形成 製指標即此P 2 4抗原的存在 ARC或其他由於Η I V感染 寡聚物的用藥量是可如所用之 治療之病患的年齡及性別、所 其他在藥學技術上巳知實際因 W7公釐） 19 _____ B7 五、發明説明（17 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 素，而有很大變化。尤其此抗Η I V寡聚物可與其他已知 用逆轉錄酶病毒性疾病之治療的試劑及已知用於治療該由 於逆轉錄酶病毒所引起之疾病及狀況的症候及此複雜相關 性的試劑來結合運用。 如本發明之抗Η I V/陰離子寡聚物用藥的抗Η I V 有效量一般是約0 . lmg/'kg至5 0 〇mg/kg的範圍內， 而這是以病人之體重來做基準且此亦可每日用藥一次或多 次。 此抗Η I V陰離子寡聚物可與使用傳統劑藥單位形式 像口服或針劑形式之醫藥介質來一起用藥。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 就此口服用藥，抗Η I V陰離子寡聚物可以是製成固 體或液體製備物的組成物形式如膠囊、藥丸、藥片、藥錠 、錠劑、融化物、粉末、溶液、懸浮液、或乳化液。此固 體單位劑藥形式可以是膠囊，而此可爲普通硬、或軟殼膠 襄形式且可含如界面劑、潤滑劑、及惰性填料如乳糖、蔗 糖、山梨糖醇、磷酸鈣及殻類澱粉。於另一具體部份中本 發明之陰離子寡聚物可與傳統的藥片主劑如乳糖、蔗糖及 殼類澱粉，及結合結合劑如阿拉伯膠、殼類澱粉或明膠， 及在此藥片用藥時輔助分解及溶解的分解劑如馬鈴薯澱粉 、海藻酸、玉米澱粉及古亞膠（guar gum )、改良藥片顆 粒之流動及預防藥片物質黏著於藥片壓模及壓戮器之表面 上的潤滑劑如滑石、硬脂酸或硬脂酸鎂、鈣或鋅、染料、 著色劑及爲了要增加藥片唯美性質及令其更能讓病人接受 的調味劑，等等一切添加劑一起來製成藥片。用於口服液 本紙張尺度適用中國國家標芈（CNS ) Λ4現格（210X297公缝） Μ 303377 Β7 五、發明説明（18 ) (讀先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 體劑藥形式的合適輔藥是包括稀釋劑如水及醇類像乙醇、 苯甲醇及此聚乙二醇，且亦可添加或不添加該醫學上可接 受的界面劑、懸浮劑或乳化劑。 本發明之抗Η I V陰離子寡聚物也可以針劑形式來用 藥，即是皮下、靜脈內、肌內或腹膜內的注射，而此是以 該陰離子寡聚物於一生理可接受之稀釋劑與一醫藥介質中 的可注射之劑藥形式來運用的，而此稀釋劑與介質可以是 一無菌液體或此液體的混合物如水、生理鹽水、葡萄糖水 溶液及相關糖類溶液、醇類如乙醇、異丙醇、或十六醇、 乙二醇類如丙二醇或聚乙二醇、甘油酮醛類如2，2 —二 甲基一1 ，3-二噁茂（dioxolane ) - 4-甲醇、醚類 如聚（乙二醇）400、油類、脂肪酸、脂肪酸酯或甘油 酯、或一乙醯化脂肪酸甘油酯類等等，且此亦可添加或不 添加一醫學上可接受的界面劑如某皂類或清潔劑懸浮劑如 果膝、含碳化物（carbomers )、甲基纖維素、經丙基甲 基纖維素、或羧甲基纖維素、或是乳化劑及其他醫藥佐藥 〇 經濟部中央棣準局員工消費合作社印製 可用於本發明之針劑組成物的油類例子是爲那石油、 動物，植物或合成油類，例如花生油、大豆油、芝麻油、 棉籽油、玉米油、橄欖油、石躐油及礦油。合適的脂肪酸 包括油酸、硬脂酸及異硬脂酸。合適的脂肪酸酯類是如油 酸乙酯及肉豆寇酸異丙酯。合適的皂類包脂肪性鹼金屬I 銨及三乙醇胺鹽類，及合適清潔劑包括陽離子清潔劑如二 甲基二烷基鹵化銨類·烷基鹵化吡啶類及烷基胺乙酸酯類 本紙張尺度適用十國國家標率（CNS ) Λ4现格（210 公筹） 21 經濟部中央樣準局員工消費合作社印裝 A7 __B7 五、發明説明（19 ) ;陰離子清潔劑如烷基、芳基及烯靥烴類磺酸酯、烷基、 烯類、醚類及單甘油硫酸酯，及磺化琥珀酸酯：非離子性 清潔劑如脂肪胺氧化物、脂肪酸烷醇醯胺類、及聚氧乙烯 聚丙烯共聚物；及兩性清潔劑如烷基- /3 -胺基丙酸酯、 及2 -烷基-咪唑啉四銨鹽類，與其混合物。本發明之針 劑組成物典型地在溶液中是含有約0 . 5至2 5重量百分 率的抗Η I V陰離子寡聚物。較有利的話也可使用防腐劑 及緩衝劑。爲了減低或減去在注射位置上的刺激。此類組 成物可含有一親水性—親油性平衡HLB約爲1 2至1 7 之非離子性界面劑。該界面劑在此類組成物中的量是約5 至1 5重量百分率範圍內。此界面劑可以是具有上述（ HLB)的單一成分或是具有希望（HLB)的二或多種 成分之混合物》該用於針劑配方中的界面劑例子是爲聚乙 二山梨聚糖（polyethylene sorbitan )脂肪酸醋，例如 山梨聚糖（Sor bitan )單油酸酯。 本發明之陰離子寡聚物也可以預防性地來運用，即是 預防該病毒由一受感染個體轉移到一未感染的目標物上。 病毒可經由血液而呈比例似地擴展，但亦可經由其他體液 的交換來傳送。因此，本發明之寡聚物可與用於清潔用之 標準清潔劑產品來配方處理，特別是在研究及臨床實驗室 及醫院中這些操控感染個體之血液產物的場所。含有本發 明之寡聚物的組成物是可用於清潔藥物/手術設備及用具 與該看護工作者的手及皮膚。本發明之寡聚物也可以一液 體或粉末形式來運用於性愛預防裝置之表面’例如保險套 本紙张.尺度嗵用中;-¾阁家標嗥（CNS > Λ4哫济（2丨(）<_ 公釐） L---N-----^士/衣-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T -22 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 Μ _ Β7 五、發明説明（20 ) ’而此於使用者或該製造此性愛預防裝置之廠商於販賣前 來使用。本發明之寡聚物可配方成灌柱組成物，而可令女 性在與感染個體做性接觸前來使用。本發明之寡聚物也可 配方成潤滑劑及spermacidal膠狀物及外用藥水。最後， 本發明之寡聚物也可配方製成用於加至熱浴池，渦漩浴及 游泳池中以令該潛在病毒活性失去作用的組成物。 本發明藉由下列實施例的考量將會更清楚，而此實施 例只是純粹爲本發明之範例而已。 定義 該使用於本發明實施例的名稱是定義如下，除非另有 設定，且例如代表某一合適設備或樹脂的例子，該不同多 數或樹脂但相同設備也可來使用： T C I D 5 0 :組織培養感染劑量（tissue culture infectious dose )，即，此於感染七天 後該能有效感染5 0百分率之細胞（5 0 百分率細胞病理效應（cytopathiceffect )的培養液用量。 Μ T T =四哩物還原試劑（tetraazolium reduction)試 劑； 3 - (4 ，5 -二甲基瞎唑—2 —基）—2 ，5 -二苯基四唑溴化物； RPM I =—細胞培養； 尽紙?R尺度適汛中國國家標年（（_、NS ) Λ4找，格（210..< 297公讀：） ' -23 - L------^--装-- (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 A7 B7 五、發明説明（21 ) RF及GB8意謂Η I V— I病毒菌株； ΜΤ 4，（ 8 1 6 6 及 J Μ =細胞株（cell lines); P 2 4 test-Abbott意謂此細胞核抗原使用目前由Abbott 所販賣之測試套組的測試評估。

眚施例1 A L--------^装-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 使用特定方法製備聚硫脲 雙-異硫氤酸酯的製備

經濟部中央橾隼局貝工消費合作枉印製 該4，4 > 一二胺基聯苯—2 ，2 — -二磺酸（ 1_ 2g，3. 48_〇1)與15111又水及600以1^之 硫光氣一起激烈攪拌3小時。另外加入2 5 0 M L之硫光 氣，及此反應再攪拌1 4小時。該產物藉由經過一中度多 孔性燒結玻璃過濾漏斗來過濾分離，可得7 Omg之殘餘的 不可溶單體。此純淨紫色濾液在低於5 0°C及近似1 0 mmHg下來蒸發，於真空中烘乾3小時，可得1. 35 g，3 1 . 5mmole之雙異硫氰酸酯二水合物，爲淡紫色 潮解性固體。此產物藉由質子及碳核磁共振與燃燒分析來 做特性分析》 本紙張尺度適州中國國家標準（CNS ) Λ4%格（210X2()7公釐） 24 A7 B7 五、發明説明（22 ) 未封端夕聚硫脲的製備

NCS +

nh2

ho3s so3h

Η Η ho3s -.--------士衣-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央樣隼局貝工消費合作社印製 過 量 的 4 9 4 — 二 胺 基 聯 苯 一 2 2 一 二 礎 酸 ( 6 0 g ， 4 6 • 5 mmol e ) eta 興 2 當 量 之 Ν a Η C 0 3 ( 8 2 g > 9 7 6 mmol e ) 混 合 造 成 Ρ Η 上 升 至 7 5 〇 在 1 0 分 鐘 的 時 段 內 把 上 述 所 製 備 之 itttt 雙 — 異 硫 氤 酸 酯 ( 2 1 7 g » 4 6 7 mmol e Ρ Η 1 5 ) 的 溶 液 ( 3 〇 m L ) 加 至 該 攪 拌 後 的 溶 液 中 〇 於 加 入 完 成 後 > P Η 已 掉 至 6 5 及 此 反 rrfar 應 液 攪 拌 1 4 小 時 0 然 後 P Η 值 用 1 2 Μ Η C £ 來 彐田 m 整 至 1 8 > 及 8 小 時 後 會 形 成 白 色 固 體 ΓΙΑ 而 此 固 體 加 以 過 濾 並 用 2 5 m L 的 冷 0 1 Μ Η C 來 清 洗 0 該 固 體 nsz. 於 真 空 中 烘 乾 以 得 1 2 0 g 之 未 反 應 的 起 始 物 質 ( 4 » 4 〆 — 二 胺 基 聯 苯 — 2 t 2 — 一 礦 酸 ) 爲 白 色 固 體 η». 〇 此 過 濾 物 加 以 蒸 發 可 得 1 0 0 g 之 暗 紫 色 固 體 〇 這 過 濾 物 經 光 譜 鑑 定 爲 幾 近 純 的 聚 硫 脲 ( Π > η 0 受 到 少 量 起 始 —. 胺 類 ( 4 4 — —— 胺 基 聯 苯 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) Λ4現格（210 X 2^7公缝） 訂 良 25 A7 ____B7__ 五、發明説明（23 ) —2，2>_二磺酸）及NaCl的污染）。 圭_封端聚硫脲的純化 製備一膠體過濾管柱，而此藉由令1 1 5 g之 Pharmacia Sephadex® G— 10 (40— 120μιη 粒狀 大小）樹脂來膨脹於近似5 0 0 m L蒸餾水中1小時所得 的。在令此懸浮液靜置於一 1 L分度圓柱體後，該澄清部 分由樹脂混合物上端傾去。一玻璃管柱漿狀充填著此樹脂 及5 0〇mL的蒸餾水通過此管柱可得—2. 5x50 c m床。使用一 Gilson Minipuls螺動式幫浦（流率近似 每分鐘3- 4mL)來維持固定流率通過此管柱。該展開 液在3 1 〇 n m之（ISC0 model UA- 5紫外線偵測器）下 監測該產物的存在》 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 上述製備之5 0 mg聚硫脲寡聚物溶於2. 5mL蒸餾 水中的溶液小心地運用於該管柱上端。此管柱用蒸餾水來 展開，可收集到3產物部分（每一 15mi)。該部分藉 由Η P L C加以分析可知第一部分含有聚硫脲且此不含有 起始胺類及鹽類。 實-施例藉由非特定方法使用硫光氣來製備未封端之 聚硫脲 本纸張.尺度適用中國國家樣羋（（’NS ) Λ4規格 ( 2丨<>'<2()7公釐） -26 五、發明説明（24 )

SO3H

HO3S A7 B7 SO3H SO3H nh2 —► H2N- 厂 CSCI2

nh2 ho3s Η Η ho3s —4，4 二胺基聯苯一 100mg，0. 29mmole)來 似 4mL 的 0.1M N a Ο Η 。該溶液的pH升至6_ 8。這 ，而此裝置令該互不溶的液體可 2 . 2 1 m L ( 0 . 2 9 mmo1e 100#L)於10mL氯仿中 鐘後，此溶液之P H藉由加入近 Na〇H來調整至6 — 7。該溶 1 6小時，及此溶劑蒸發掉。所 以分析顯示是產製了一聚硫脲寡 2，2 ——二磺酸（ 加至5 0 m β水中， 緩慢地加入以溶解此 溶液加至一MixxorT 方便激烈攪拌，及加 之硫光氣）之一硫光 的原料溶液。於混合 似 2 · 5 m L 之 〇 . 液於一4 5。0油浴中 得之固體藉由HPL 聚物的混合物。 及近 固體 M 中 入 氣（ 2分 1 Μ 加熟 C加 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 装 、-'° 經濟部中央標準局貝工消费合作社印裝 窨施例1 C 使用硫羰基二咪唑來製備未封端聚骑

再結晶後之4 ’ 4 / —二胺基聯苯—2 酸（1. 0〇g，2. 91mm〇le )來加至 本紙張尺度遴用中闽國家榡準（CNS ) Λ4呒格（2I0X. 297公埯） so3h

27 經濟部中央棣準局員工消費合作社印裝 A7 B7__ 五、發明説明（25 ) 成爲漿狀物，接下來加入碳酸氫鈉（489 mg，5_ 82 mmol)。在此固體溶解後可得pH爲6. 5。把硫羰基二 咪哩（6 0 〇mg，3 · 3 7mmol，Aldrich Chemical Co. )加至激烈攪拌且發展成鮮明黃色的攪拌溶液中。五分鐘 之間，該顏色褪掉且此反應物再攪拌2 4小時。在這點上 ，該藉由Η P L C所觀察出之寡聚物的分佈並未隨時間而 改變。此溶劑在真空中蒸發（T = 3 5°C)以提供1. 8 g之粗製硫脲寡聚物，而此藉由Η P L C可得是含有最大 成分爲η=4(η=4在254nm下是9. 9面積百分 率）。 由未封端寡聚物來製備封端之聚硫脲寘聚物 如上述一般所製備之未封端聚硫脲寡聚物（4 0 Omg )來溶於1 5mL水中。使用5%之氫氯酸來調整P Η至 4. 5。邊攪拌邊加入硫羰基二咪唑（1 〇〇 mg，

Aldrich Chemical Co.)及攪拌1 5分鐘後可得PH爲 6 · 6。HP L C分析顯示該寡聚物的分佈是改變成一系 列更多親油性種類（末端化異硫氰酸酯）。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} -装-

、1T %

本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) Λ4規格（210/2M公釐） S03377 A7 B7 五、發明説明（26 ) 加入甲苯胺（8 Omg)而此立即形成白色沈澱物（甲苯胺 硫脲）。攪拌此漿狀物20分鐘後（pH爲7. 0)，此 溶液加以過濾及該母液加以蒸發（1 0 - 1 m m，3 5 ° ) 以得5 3 7mg之P -甲苯胺封端之聚硫脲寡聚物。 Η P L C分析顯示少量先質異硫氰酸酯末端化物種（此甲 苯胺封端化物質是甚至更親油性及此系列展開物甚至是在 更長延滯時間）。 去射端之聚硫脲寡聚物的分餾 如上述所製備之粗製的未封端聚硫脲（5 0 Omg)來 溶於2mL水中，及此溶液置於一 2 6mmx 9 0 cm G1C)大小之排外（exclusion )凝膨管柱（Pharmacia ) 中。部分收集物（20mL)藉由HPLC來分析及此第 一二UV活性部分（2 5 4 nm)經估計是含有n = 7. 2。這些加以結合及蒸發以得14 Omg之數平均分散 性η = 7· 2而此是藉由iH NMR分析所測定之末端 經濟部中央標準局貝工消費合作社印装 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 基分析而得。該結構是與13C及1H NMR分析皆符合。 生理數據 實施例1 一抗Η I V寡聚物對於預防SYNCYTIA形成的能力及 P 2 4病毒核抗原的表示是使用〗Μ細胞及G B 8病毒種 類 爲了顯示本發明之寡聚物阻擾Η I V感染的情形，該 CD4t Τ細胞（_JM)是暴露於HIV — I之GB8菌 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（2丨0x 297公釐) ~~ -29 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（27 ) 株，GB 8。該病毒首先用一寡聚物來培養1 5分鐘，然 後加入細胞。2小時吸收後，此病毒接種物（inocuium) 加以移去，該細胞清洗三次以移去輸入之少量病毒及此細 胞在該化合物存在下來培養。抗病毒活性是在培養三天後 來測定，而這是藉由描繪此發現於四重培養（quadruple cultures)中之syncytia的平均數對於此陰離子聚合物 或其他測試化合物的loglO濃度之間關係來測定的。一 寡聚物的效力也可藉由評估在此表面流體中病毒核抗原（ P24 test-Abbott )來測定。肝燐脂、聚葡萄糖硫酸酯（ dextran sulfate ) ' r s CD4 、 ATZ 及/或 ddcdata ，包括於下列任何表格中時，皆是提供做爲正向 控制。 此數據是總結於表格I中

表格I 化合物 E D 50(m g/ml)+ 實施例1 C未封端 1 . 9 實施例1 C封端 0.46 +有效劑量是對於該J Μ細胞藉由G B 8 病毒菌株之Η I V — 1誘導 syncytia形 成產生5 0 %抑制性 本紙張尺度適用中阐國家標羋（CNS ) Λ4現格（2丨()〆· 297公犛 '丨 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •装· 訂 -30 - A7 B7 五、發明説明（28 ) .f, Ati ~H -Sr 使 —抗Η I V寡聚物去預防Η I V誘使細胞死亡的如刀$ 用MT - 4細胞及此R F病毒菌株來完成

在這實驗中，1_ 之RPMI中間物（RPMI medial)來加至每一試管中以溶解該測試化合物。然後化 合物用於Η I V_ I活性之測試評估’而此是藉由經過一 微滴定（microtitre)板做溶液雙倍稀釋。然後5 X 1 〇4細胞及1 0 OTC I D5。單位之病毒加至每一阱（ well)中，及此板在3 7 °C下培養7天。加入MTT至每 一阱（well)中及此板再培養2小時。此藍色甲腊（ f or mazan )結晶使用酸性異丙醇來加以溶解及在5 4 0 n m下測定吸收度。 數據描述於下表格Π中 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 装 、νβ 經濟部中央標準局員工消費合作社印51 表格Π 化合物 E D 5〇 ( u g/ral) + C D 5 〇 ( U g/ml) 實施例1 C 5 . 1 2 10 0 未封端 實施例1 C 8 . 5 2 10 0 封端 本紙張尺度H卜國阈家標隼U、NS ) Λ4現烙(21(K<2t》7公犛） - - A7 _______B7_ 五、發明説明（29 ) + 有效劑量是對於該MT-4細胞藉由RF病毒菌株 在MTT測試中Η I V— 1之引起細胞死亡產生 5 0 %抑制性 * 化合物之細胞毒素（Cytotoxic )劑量是對於在該 MTT測試中MT — 4細胞產生5 0%毒性 此抗Η IV寡聚物對於該Η IV - IRF^C8 166 T 細胞株（CELL LINE )中成長的效用

擬定：C 8 1 6 6細胞在室溫下受Η I V — lRF^染一小 時。然後此細胞於RPM I中清洗2次及分配於含有不同 濃度之測試化合物或無化合物（控制組）之組織培養板的 讲（well)中。在3 7°C下培養3天後，此細胞就該 syncytia之存在做觀察及該無細胞之表層流體使用ELISA 做P 2 4病毒核抗原之層級的測試。結果列於下表格瓜及 IV中。 —Ρ I - - ^---；---^装— I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 一準 ί榡 【家 -國 國 I中 用 適 ^ 尺 ,^ 紙 一本 胁 一釐 公 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（3〇 ) 表格m 化合物 濃度 卩 g/m 1 SYNCYTIA P 2 4 C pg/m1) %控制 實施例1 C 100 0 負的 0 未封端 10 + 5 5 9 5 0 14 1 + + 241460 59 0. 1 + + + 508610 7100 0. 01 + + + 376670 93 實施例1 C 100 0 負的 0 封端 10 0 負的 0 1 + / + + 150668 37 0.1 + + 389080 96 0. 01 + + + 435450 7100 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 装. 訂 本紙張尺度適用中國國家標羋（CNS ) Λ4規格（210 X 297公釐） -33 - A7 B7 五、發明説明（31 )

表格V 化合物 E D 5〇( β g/ml)+ 實施例1 C未封端 1 . 6 實施例1 C封端 0 . 6 +有效劑量是對於C 9 8 1 6 6細胞用此 RF病毒菌株感染中Η I V_ 1引起 SYNCYTIA及P 2 4病毒抗原數目產生 5 0 %抑制性 U---"·---- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210/2们公釐）

Claims (1)

1. A8 B8 C8 D8 夂、申請專利範圍 附件二A:第84 1 0 0084號專利申請案 中文申請專利範圍修正本 民E 1 ·—種水可溶性、剛性主幹架構之聚 其具有500至10，000之數目平均分 下列分子式： 3 86年2月修正 硫脲寡聚物， 子置且相當於 ----------^— (請先W讀背面之注$項再填寫本頁) 訂· "Η Ί 1 Ή ! Η S" 1 ” R -N-C- Μ Ν-Χ· -N-C S m L 一 烷基取代的苯 其中：R是一氫、苯基、或經一個Cl— C4 基； R 1 代表-s 〇 3r 2 ; 經濟部中央標準局®:工消費合作社印製 R2是一氫或一醫學上可接受之陽離子 R3是一R或-X — NH2，其中R是ί X代表

   9〇337γ 六、申請專利範圍 C — R II Ν I Ν II CIR 1 或 I Ν II Ν 經濟部中央梯準局貝工消费合作社印製 rn是~〇或1之整數，但有條件即當111是〇時，R 是一 氫原子’及π是一 3至5 0之整數。 2 .如申請專利範圍第1項之寡聚物，其中該寡聚物 是爲彼之鹽類形式。 3. 如申請專利範圍第1項之寡聚物，其中R是一氣 、111是1 ，該r及R3是4 一甲基苯基；且n是3至1 5 之整數。 4. 如申請專利範圍第1項之寡聚物，其中m是1 ， 該R及R3是4 —甲基苯基：且η是3至1 5之整數。 5 .—種用於在溫血動物中診斷及/或治療A I D S (後天性免疫系統缺陷症候群）及/或ARC (AIDS 相關之複徵）之醫薬組成物，其包括一如申請專利範圍第 1項中的寡聚物與一醫學上可接受的介質。 ' 6 . —種用於在溫血動物中診斷及/或治療A I DS (後天性免疫系統缺陷症候群）及/或ARC (AIDS 相關之複徵）之醫藥組成物，其包括一如申請專利範圍第 1至4項中任一項之寡聚物，與_清潔劑。 7. 如申請專利範圍第5項之醫藥組成物，其可爲液 體、粉末、灌注液（d ο u c h e )、膠狀物或外用薬水。 8. —種製備如申請專利範圍第1項之聚硫脲寡聚物 的方法，其包括使—芳族二胺類與一硫羰基二咪唑（ t h i 〇 c a r b ο π y 1 d 1 i m 1 d a ζ ο 1 e )反應。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 上 訂 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS ) Α4规格（210Χ297公釐） 303377 A8 B8 C8 D8 々、申請專利範圍 9.一種製備如申請專利範圍第1項之聚硫脲寡聚物 的方法，其包括在某一酸接受者存在下來反應一芳族二胺 與類 ,>·7 劑子 B ipr親之基 匕匕 ΑΗΡ 官 ---------裝-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 ΜΓ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -> -

   Tr .·Γ·7." "ν^

   X 通則： 分析性HP LC之條件： 管柱：Altech所售之Adsorbospshere HSTM, 100X4.6nraID, 5卿粒徑 洗提液：50mM ET3H0AC，含有5 %作爲保存劑之CH3CN 檢測：UV檢測器，波長=254nm 梯度：於95/5(A/B)開始，於1 4分鐘時線性改變至60/40，然後於 18分鐘時變至20/80，5分鐘後結束 流速：lmL/分鐘 注入置：10# L樣品置 G — 1 0膠髓色層分析條件： 固相：Pharmacia Sephadex R G_10(40 — 120 "in 珠粒徑） .1 管柱：30 X 85cm 洗提液：經微孔過濾之蒸皤水 流速：5mL/分鐘，不變流速，使用Gilson Miniplus嫌動栗 檢測：ISC0型UA-5 UV檢測器，波長= 310im 1 NMR及13C NMR皆記錄在GerainiL300(Varian)儀器上，且以3値（測 爲ppm)報告出。除非再特別提及f，否則皆使用氧化氘作溶劑，並用二 噁烷作內部指示劑。 BPSDS單體銨鹽 —般步驟：室溫下將2當量之胺敝加至由BPDS (4,4’—二胺基 聯苯-2,2’-二磺酸）單體在丙烯睛內所成漿體中。當使用三丙胺或 三丁胺時，漿髏於3 0分鐘內變成澄清，此意指鹽之形成已完全。蒸 發出溶劑，以NMR ( C D C 1 3)分析所形成之白色鹽。當使用其他 種類胺鹸時，於1小時後過濾漿體，以少置丙烯臃洗固髗。以NMR (DMSO — d6)分析產物。 三乙銨鹽 303377 ΛΗ NMR(DMSO-de) ： 9 0.89(18Η. t，J=7.3Hz，一CH3 )，2.8-2.9 (12H，q, J=7.2Hz, NCH2)，6.35(2H, dd, Ji=2Hz，J2=8.4Hz)， 7.04(2H, d, J=8.4Hz)，7.11(2H,d,J=2Hz)。 13C NMR(DMS〇-de ： d 8.43(-CH3), 45.39(-NCH2-) » 112.90, 113.07，127.21，133.52, 144.85。 三丙銨鹽 "H NMRCCDr. CN) ： 3 0.89(18fi, t, J=7.2Hz » -CH3), 1.2-1.4( 12H, m, -CH2-)，1.4-1.6 ( 12H, m, -CH2- )，2.8-2.9 ( 12H, m, -NCH2-)，6.58(2H, d, J=8.1 Hz)，7.25(2H， d， J=8.1 Hz) ，7.24 (2H, s)。 •I 13C NMR(CD^CN) : 3 11.26(-CH3) ， 17.40(-CH2_) ， 54.53(-NCH2-) ，114.02， 114.79, 129.16, 134.78, 145.75, 146.64。 三丁銨鹽 M 臓(CDCU) ： 8 0.89(18H, t, J=7.3Hz » -CH3), 1.5-1.7 ( 12H, m, -CH2-)，1.5-1.7 (12% m, -CH2-)，2.8-2.9 (12H, m, -NCH2-) » (2H, dd, Ji=2Hz, J2=8.4Hz) > 7.04(2H, d, J=8.4Hz) » 7.11(2H, d, J=2Hz)。 13C NMR(CDCU) : 3 13.59(-CH3)，19.95(-CH2-)，24.99(-CH2-) ，51.89(-NCH2-), 113.96， 115.06， 129.09, 133.72， 143.89, 144.40。 2.6-吡啶二羧酸鹽 ΧΗ NMR(D^O) ： 9 2.70(12H. s, -CH3), 6.94(2H, dd, Ji=2.1Hz, J2=8.1 Hz), 7.17(2H, d, J=8.1Hz) » 7.42(2H, d, J=2.1Hz) » 7.61 (4H, d, J=8.1Hz,吡啶二羧酸之間位H)，8.25(2H, t, J=8.1Hz,吡 啶二羧酸之對位H)。 13Γ NMR(D^O) ： 9 21.48(-CH3). 117.87, 120.90, 127.32,132.11 ，136.06, 144.35, 146.59, 148.61, 155.74。 去鄉甲茏胺封端之硫脲寡聚物 將重新結晶過之BPDS單髖（l.OOg, 2.91mniol)加入50raL水中成漿體 ，接著加入碳酸氫鈉U89 rag, 5.82 mmol )。由固髖之解離作用產生 pH=6.5之形成物。將硫羰基二咪唑（600mg, 3.37mmol, Aldrich Chemical Co.)加入攪拌中之溶液，同時劇烈攪拌，發展出淺黃色。 於5分鐘內顔色退去，攪拌反應物24小時。此黏時以HPLC觀察到之寡 聚物分佈不隨時間改變。於眞空中（T=35eC)蒸發溶劑，產生1.8g之原 始硫脲寡聚物，其由HPLC知含有作爲最大成份之n=4(n=4於9.9面稹％ ，於254nm)。 經甲苯胺封端之硫脲寡聚物 將未封端之硫脲寡聚物（由先前實例所得之400mg)溶於15mL水中， 以5 %鹽酸調整pH至4.5。攪拌時將硫羰基二咪唑（100mg, Aldrich Chemical Co.)加入（攪拌1 5夯鐘後pH=6.6) °HPLC分析顯示，寡 聚物之分佈改變至一系列更親脂性種類（終端異硫氰酸酯）。加入甲 苯胺（80mg)，立刻形成白色沈澱（甲苯胺硫脲）。攪拌漿體20分鐘後 (pH=7.0)，過濂溶液，蒸發掉母液（10_11〇, 35°C)，產生537mg經對 甲苯胺封端之硫脲寡聚物。HPLC分析顯示無微量之前驅體異硫氰酸酯 終端物（經甲苯胺封端之物質甚至更具親脂性，且此系列在甚至更長 之駐留時間中洗提）。 未綈甲苯胺封端之聚硫脲惠聚物流份 由先前實例所得原始經封端之物質（500mg)溶於2mL水中，將溶液塗 至26mmX90cni G-10尺寸之排出矽膠上（Pharmacia)。所收集之流份（ 20inL)以HPLC分析，前2個UV活性流份（254mn)計算含有n=7.2。將 這些結合，蒸發，產生140mg之數目平均分散度n=7.5者，此由M NMR 終端基分析得知。所建議結構與13C及1H NMR分析皆符合。此物質係 用於隨後之生物試驗中。 翬FMOC-BPDS之製備 以在水（20inL)中之NaHC〇3(0.672g, 8丽〇1)將BPDS(1.38g, 4mmol) 單體轉變成其鈉鹽。將溶於CH3CN(5inL)中之FMOC-Cl(Advanced Chemtech, 1.04g, 8mmol )加入BPDS鹽之澄清溶液中。蒸發溶劑，以 管柱色層分析法分離所形成之固體，係使用CH3OH、CHCU及NH4〇H之 4:4:1混合物作爲洗提液，以得二FM0C-BPDS(0.66g, 20¾產率，90% 純度，由LC知），單FM0C_BPDS(1.30g, 54%產率，84絲Φ度，由LC知） •I ，及未反應之BPDS單髏（0.120g, 7.⑽產率），作爲其之銨鹽。該單 FM0C-BPDS再以額外管柱色層分析法來純化。 單FM0C-BPDS 元棄分析:爲單水合物C27H2eN4S2〇8-H2〇 理論値·· C:52.41% ; H:4.89% : N:9.06¾ 實驗値：C:52.26% : H:4.77% :fN:8.78¾ H NMR : 3 4.28 ( 1H,三重線，J=6.6Hz，芴之C9-H)，4.47(2H,二重 線，J=6.6Hz, -0CH2-)，6.74(1H，dd, JF8.2HZ，J2=2.3Hz),7.12 (1H，d, 6.2Hz)，7.28-7.42(7H,多重線），7.71(2H, d, J=7.3 Hz， 芴之H)，7.80(2H, d, J=7.3Hz,芴之H)，8.06(1-2H,廣S，可互換 之H) 13C NMR ： 9 27.56 ( -QCH2-). 48.93(芴之C9)，117.0, 120.2， 122.3， 127.5, 129.5, 120.1, 120.6， 135.8, 135.9, 139.2, 143.3, 144.0, 148.0，146.1, 148.0, 157.4, 181.3(羰基）。 二FMOC-BPDS l〇MR(CD30D) ： 9 4_27(1H，三重線，J=6.5Hz,芴之H), 4.46(2H, *6_ s〇SS77 d, J=6.5Hz，-〇CH2-),7.26-7.42(6H,多重線），7·70(2Η, d，J= 7·2Ηζ)，7·79(2Η, d, J=7.2Hz)，7.96(lH，brs,可互換之H)， 8.08ΠΗ, br s,可互換之H)。 13C NMR(CD3〇D) : 3 37.1(-0CH2-)，48.3(芴之C9)，121.0, 126.2, 128.2， 128.8, 134.2， 138.9， 142.6， 144.2, 145.2, 155.9， 164.9(羰基）。 BPDS -甲苯胺里硫脲之製備 以在水（1 OmL)中之NaHC03 (0.84g, 1 Ommo 1)將BPDS單髖轉變成其鈉 鹽。將催化置（O.OlOg)作爲相轉移催化劑之溴化四丁銨，及在丙烯睛 (2mL)中之異硫氰酸對甲苯酯(Aldrich, 0.89g, 6.0imo1)加入水溶液 •I 中。將混合物加熱至50°C 3小時，蒸發溶劑。以管柱色層分析法分離 原始混合物，係使用CH30H, CHC13及NH4〇H之4:4:1混合物作爲洗提液 ，以得BPDS-甲苯胺二硫脲（〇.143g, 0.2imol, 4¾產率）及BPDS-甲苯 胺單硫脲（1.05g, 2.0imol, 40¾產率，LC純度97¾)，爲其敍鹽形式。 單硫脲 ' 元素分析:爲二水合物C2〇H25N506S3-2H20 理論値：C:42.14% ; H:5.19% : N:12.43% 實驗値：C:42.58% : H:.5.17% ; N:11.89% ^ NMR ： a 2.34 ( 3H, s, p-CH3)，7.25(2H, d, J=8.2Hz,間位甲苯 基之幻，7.29(211，（],』=8.2以，甲苯基之鄰位11)，7.35-7.41(311, 多重線），7.42(1H, dd, ·Κ=2·6Ηζ, J2=8.2Hz), 7.86(br d，可互換 之H) 13C NMR(D^O/CD3CN) ： a 22.6(p-CH3),126.3. 128.3, 128.5 > 131.9 * 135.1, 137.7 » 138.8° 將硫光氣（4.0mL，6. lg，53nmiol )加入在室溫下由BPDS ( 5.0g， 15mmol )在水（20mL)中所成懸浮液中。於室溫下劇烈攪拌此二相混合 物1小時。混合物之HPLC分析顯示只有一個案(Rf=10.3分鐘），其屬 於BPDS之二異硫氰酸酯，蒸發溶劑，於眞空下，20°C中，乾燥最終白 色固體（5. lg，79¾產率），貯放在冰箱中。微分析產生二水合物形式 〇 1H NMR ： 9 7.36 (2H. d, J=8.4Hz) » 7.44(2H, dd, Ji=2.1Hz, J2= 8.4 Hz) ， 7.88 (2H ， d ， J=2.1Hz)。 ifC_NMR(D2〇/CD3CN) : 3 127.0，127.3, 129.7, 133.5, 135.7, 138.4(二重線），145.0(-肊5)。 硫脲三聚物（n=3)之製備 使BPDS單髄（31.2g 90.7imol)與在300mL水中之NaHC〇3 (15.24g, 181mmo 1)於室溫中（pH=7.8)反應。將BPDS二異硫氰酸酯（4.21g, 9.07 mo丨）加入水溶液中（pH=6.5)，於室溫中攪拌混合物整夜。反應混合物 之HPLC分析顯示有過置之BPDS(Rf=1.4分鐘）及三聚物（Rf=4.0分鐘）。 加入濃HCl(15mL, 5.1g, UOirnnoi)，以使溶液之pH夠酸（pH=2.6)，以 使磺酸基質子化。過濾出最終白色固體。濾液含有單體與三聚物之混 合物，比例約爲2:3,以及在反應期間形成之NaCl(8.17g)。由濾液中 蒸發出溶劑。將過童三丁胺（55g, 300imol)加入產物混合物中，於丙 烯腈(30mL)中再漿化，再攪拌混合物2小時。過濾出固體，於眞空中 乾燥（16.2g, 50%NaCl;三聚物67.9%及單體27.0%，由1^(：面稹知〉》 硫脲寡聚物（n=7)之逐步合成 未封端之五聚物之製備 將三聚物（0.575g, LC之68¾純，0.25mmol，由於NaCl污染)與硫羰基 二咪唑（TCDI, 0.178g, 1.0丽〇丨）於室溫中混合。起始物質會於1小 時內消失（由LC)。未反應之TCDI及某些BPDS二異硫氰酸酯及咪唑副產 ^〇SS77 物，被以二氣甲烷（2X10raL)萃取。水層含有約75%(LC面稹）之所欲三 聚物二異硫氰酸酯（Rf=8.9分鐘），以及單體二異硫氰酸酯（Rf=10.0分 鏟）。將單FMOC-BPDS(0.50g, 0.95丽〇1,96.5%純）加入此水層中， 於室溫中攪拌混合物。即使在76小時後，仍有少置未反應之單體FMOC -BPDS。將哌啶(0.2g)加入反應混合物中，以由產物除去FMOC保護基 及未反應之FMOC — BPDS。於室溫中，2小時內，去保護作用即完成。 所形成之白色沈澱於有機溶劑中爲可溶性的，其隨後經1H NMR鑑定爲 9一伸甲基芴之哌啶加合物。蒸發溶劑，以G- 10管柱色層分析法來純 化原始產物混合物，得淺黃色固體（0.126g, 40¾產率）。產物之平均 大小（n=4,4)以1H NMR化學位移之整合來測定。 未封端之七聚物之製備 將8?05—甲苯胺單硫脲二銨鹽（0.0408,0.076丽〇1,1^之98.5%純 )，藉水中之硫羰基二咪唑(0.02g, O.lmmol)轉變成對應之異硫氰酸 酯。反應於室溫中在0.5小時內完成。將未封端之五聚物(0.058mg, η =4.7)加入異硫氰酸酯溶液中，於室溫中攪拌混合物18小時。此時混 合物之HPLC分析顯示有少量未封為之寡聚物（Rf=3.6-4.3分鐘），但大 多數之起始物質被轉變成經封端之寡聚物（Rf=9.2-11.4分鐘）。蒸發 溶劑，以G-10色層分析法純化最終白色固體。較前之流份含有未封端 之七聚物（Rf=8.9分鐘），其爲主產物（55-60%LC面稹），以及有少置較 小寡聚物（11=卜6,每者低於5%)。綜合流份（0.038g)之平均大小爲n= 6.82(以1H NMR整合測定）。