TW202122413A - 可於鼻腔誘導病毒特異性抗體之季節性流感疫苗 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種有效性較裂解疫苗高之季節性流感疫苗。 本發明之季節性流感疫苗係於鼻腔黏膜誘導病毒特異性抗體之流感疫苗，且以流感病毒不活化全粒子為有效成分，每次皮內投予以抗原量計15 μgHA/株以上。

Description

可於鼻腔誘導病毒特異性抗體之季節性流感疫苗
本發明係關於一種可於鼻腔誘導病毒特異性抗體應答之有效性較高之流感疫苗。
冬季流行之流感係以流感病毒為病原體之急性呼吸道感染，並經由噴嚏等之飛沫或與附著有飛沫者之接觸來傳播。於該流感大流行之季節，由流感及其相關疾病所導致之死亡人數增加，此於老年人中尤為顯著。該現象係發達國家中所共通之現象，於老年人之比率急劇增加之日本亦為嚴重之社會問題。
作為預防該季節性流感最為有效之方法之一，可例舉疫苗。目前，日本所使用之流感疫苗係使用裂解抗原之疫苗，該裂解抗原係藉由界面活性劑或醚使病毒粒子解裂所得。具體而言，混合有A/H1N1亞型、A/H3N2亞型、B/Yamagata系統及B/Victoria系統之各抗原之多價裂解疫苗係藉由皮下投予進行接種。已知該裂解疫苗於疫苗株與流行株之抗原性一致之情形時，顯示40～60%左右之有效性。美國之研究報告顯示，雖該裂解疫苗之有效性為40%，看似較低，但藉由使40%之國民接種，會分別使流感感染者減少2100萬人、使因流感而入院者減少13萬人、使死亡人數減少6萬人(非專利文獻1)。
另一方面，於臨床現場期待有效性更高之流感疫苗，因此於2013年之厚生科學審議會預防接種、疫苗分科會研究開發及生產流通部會上作為開發優先度較高的疫苗，亦例舉出有效性較高之流感疫苗。歐美已承認減毒活經鼻疫苗、佐劑製劑及強效疫苗等有效性較高之流感疫苗，該等係以免疫應答較弱之老年人或幼兒為對象之疫苗，並非以所有年齡層為對象。又，近年來亦有減毒活經鼻疫苗之有效性差於裂解疫苗之有效性的研究報告(非專利文獻2)，於期待較高有效性之流感疫苗中，其效力尚未確立。 因此，現狀為仍然期望開發出有效性較高之流感疫苗。
目前季節性流感疫苗之有效性之基準係以歐洲藥品管理局(European Medicines Agency：EMA)之準則來規定(非專利文獻3)，以血清之HI(haemagglutination-inhibition，血球凝集抑制作用)抗體效價或者SRH(single radial haemolysis，單向輻射狀溶血)抗體效價作為指標。但是，流感病毒係於呼吸道局部增殖並發揮病原性之病毒，血中之抗體對該呼吸道局部之感染顯示效力的機制並未明確。 因此，必須明確與流感病毒之感染防禦或者發病阻止直接相關之免疫學指標，並根據該免疫學指標來創出有效性較高之疫苗。 [先前技術文獻] [非專利文獻]
[非專利文獻1]Sah P, Medlock J, Fitzpatrick MC, Singer BH, Galvani AP. Optimizing the impact of low-efficacy influenza vaccines. Proc Natl Acad Sci U S A.  2018 May 15; 115 (20): 5151-5156. [非專利文獻2]Jackson ML, Chung JR, Jackson LA, Phillips CH, Benoit J, Monto AS, Martin ET, Belongia EA, McLean HQ, Gaglani M, Murthy K, Zimmerman R, Nowalk MP, Fry AM, Flannery B. Influenza Vaccine Effectiveness in the United States during the 2015-2016 Season. N Engl J Med. 2017 Aug 10; 377 (6): 534-543. [非專利文獻3]Note for guidance on harmonization of requirements for influenza vaccines.(CPMP/BWP/214/96)
[發明所欲解決之問題]
本發明提供一種有效性高於裂解疫苗之季節性流感疫苗。 [解決問題之技術手段]
本案發明人等進行了銳意研究，結果發現，針對季節性流感病毒之不活化全粒子疫苗於鼻腔黏膜中之病毒特異性抗體(IgG)誘導能較高，該黏膜之IgG對上呼吸道中之病毒排除有效地發揮作用。進一步進行研究，結果發現，藉由以高用量皮內投予該不活化全粒子疫苗，與先前投予裂解疫苗相比，鼻腔黏膜之病毒特異性抗體誘導顯著地提高。
即，本發明關於以下之1)～7)。 1)一種季節性流感疫苗，其係於鼻腔黏膜誘導病毒特異性抗體之流感疫苗，且以流感病毒不活化全粒子為有效成分，並且每次皮內投予以抗原量計15 μgHA/株以上。 2)如1)所記載之疫苗，其中流感病毒之不活化全粒子含有季節性A型流感病毒株或B型流感病毒株之任一者或兩者。 3)一種用以皮內投予之季節性流感疫苗組合物，其含有以血球凝集素量計每株15 μg以上之流感病毒之不活化全粒子。 4)如3)所記載之疫苗組合物，其不含有佐劑。 5)如1)或2)所記載之疫苗、或3)或4)所記載之疫苗組合物，其藉由皮內針或微型針來投予。 6)一種季節性流感病毒不活化全粒子之用途，其用以製造於鼻腔黏膜誘導病毒特異性抗體之流感疫苗，且上述病毒不活化全粒子每次皮內投予15 μgHA/株以上。 7)一種病毒不活化全粒子，其係於鼻腔黏膜誘導病毒特異性抗體之流感疫苗療法中所使用之季節性流感病毒不活化全粒子，且每次皮內投予15 μgHA/株以上。 [發明之效果]
根據本發明，可提供一種鼻腔黏膜中之病毒特異性抗體誘導能較高、上呼吸道中之病毒排除效果優異的季節性流感疫苗，作為附加價值較高之預防藥之創製，可對醫藥品產業做出較大貢獻。
以下詳細地說明本發明之適宜之實施方式。但是，本發明並不限定於以下之實施方式。
本發明中，「季節性流感疫苗」係季節性流感之疫苗，意指至少包含季節性A型流感病毒或B型流感病毒之任一者之抗原的疫苗。即，本發明之季節性流感疫苗可為僅包含季節性A型流感病毒或B型流感病毒之一者之單價疫苗，亦可為包含其等兩者之多價疫苗，較佳為含有至少3種以上之流感病毒株、例如2種A型流感病毒株及1或2種B型流感病毒株的三價以上之疫苗，較佳可例舉四價疫苗。更佳可例舉包含2種A型株(A/H1N1亞型株及A/H3N2亞型株)、2種B型株(B/Victoria系統株及B/Yamagata系統株)之四價疫苗。
本發明中，於提及「流感病毒」之情形時，表示季節性A型流感病毒或者B型流感病毒、或其等兩者。又，流感病毒包含目前已知所有之亞型、及以後會被單離、鑑定出之亞型。 本發明之疫苗製備中所使用之流感病毒株可為自感染動物或患者單離出之株，亦可為藉由基因工程於培養細胞中所構建之重組病毒。
本發明之季節性流感疫苗之抗原即「流感病毒不活化全粒子」係指保持著培養季節性流感病毒所得之病毒之形態原狀的病毒粒子，且經不活化處理者。
本發明之流感病毒不活化全粒子可使用受精雞卵法或者細胞培養法來製備。 「受精雞卵法」係指將病毒株接種至孵化雞卵中並進行培養後，對病毒懸浮液進行澄清化、濃縮、純化及不活化，而獲得包含病毒粒子之病毒液的方法。又，「細胞培養法」係指將病毒株接種至培養細胞並進行培養後，與上述受精雞卵法同樣地自培養上清液獲得包含病毒粒子之病毒液的方法。 此處，培養係接種流感病毒株並以30～37℃進行1～7天左右、較佳為以33～35℃進行2天左右。培養結束後，回收病毒懸浮液(感染尿囊腔液或者感染細胞培養上清液)，進行離心分離或過濾以進行澄清。其次，為了濃縮，進行鋇鹽吸附溶出反應或超過濾。病毒純化可使用蔗糖密度梯度離心分離等超離心分離或液體層析法等方法來進行。 純化病毒液供進行不活化處理。病毒之不活化方法可例舉：福馬林處理、紫外線照射、利用β-丙內酯、二元伸乙基亞胺等之處理。
如下述實施例所示，將4種流感病毒不活化全粒子以每株用血球凝集素(HA)計為15 μg以上之方式皮內投予，於該情形時，鼻腔中之病毒特異性抗體誘導能顯著地提昇，與裂解疫苗之皮內及皮下投予相比，可提前達成更高之抗體誘導(圖4A-4D)。上述鼻腔之病毒特異性抗體誘導效率良好之疫苗之病毒中和活性較高，於鼻腔中具有較高之病毒排除能力(圖5)。 因此，皮內投予15 μgHA/株以上之流感病毒不活化全粒子可成為於鼻腔黏膜誘導病毒特異性抗體的季節性流感之疫苗療法。換言之，流感病毒之不活化全粒子可成為於鼻腔黏膜誘導病毒特異性抗體之季節性流感疫苗，且皮內投予15 μgHA/株以上。 此處，於鼻腔黏膜誘導病毒特異性抗體意指例如於鼻腔黏膜中對經疫苗接種之流感病毒抗原所產生之中和抗體效價為80以上、較佳為160以上。此處，中和抗體效價可藉由評估病毒對MDCK細胞之細胞毒殺之抑制活性而測定。
本發明之季節性流感疫苗可以用以皮內投予之疫苗組合物(以下稱為「本發明之疫苗組合物」)之形式進行製劑化。 本發明中皮內投予意指投予至皮膚之真皮，並非意指所投予之疫苗組合物僅存在於真皮。真皮層之厚度因個體間及個體內之部位差異而有所不同，因此所皮內投予之疫苗組合物亦有可能僅存在於皮內或者主要存在於皮內、或存在於表皮內，本發明之皮內投予包括該等情況。 皮膚包含表皮、真皮及皮下組織這3層。表皮為距離皮膚表面0.05～0.2 mm之層，真皮為存在於表皮與皮下組織之間的1.5～3.0 mm之層，皮下組織為存在於真皮之內側的3.0～10.0 mm之層。投予至真皮之皮內投予係使用較皮下投予用針更細且短之針，因此估計與供皮下或者肌肉內投予之既有之疫苗相比，會減輕針刺時之疼痛或精神負擔。
本發明之疫苗組合物除流感不活化全粒子以外，還可進而包含可容許作為醫藥之載體。作為該載體，可例舉疫苗之製造中通常使用之載體，具體而言，例示：緩衝劑、乳化劑、保存劑(例如硫柳汞)、等張劑、pH值調整劑、不活化劑(例如福馬林)、佐劑或者免疫刺激劑等。佐劑係藉由與抗原一起投予而使對該抗原之免疫應答增強之物質，本發明之疫苗組合物由於如上所述作為疫苗抗原之流感不活化全粒子本身具有較高之抗體誘導能，故未必需要添加佐劑，可製成不含有佐劑之組合物。
本發明之疫苗組合物中之流感病毒不活化全粒子的含量以血球凝集素量計每株病毒為15 μg以上，即15 μgHA/株以上，較佳為15～60 μgHA/株，更佳為15～21 μgHA/株。再者，血球凝集素含量係藉由如下方式所獲得之值：利用單輻射免疫擴散試驗法等根據WHO(World Health Organization，世界衛生組織)或國家之基準所規定之試驗法進行測定。
本發明之疫苗組合物之1次之投予量以抗原(流感病毒不活化全粒子)計每株病毒為15 μgHA以上即可，可考慮對象之年齡、性別、體重等而適當增量，可例舉以較佳為15～60 μgHA/株、更佳為15～21 μgHA/株、進而較佳為15 μgHA/株之方式投予1次或2次以上。較佳為投予複數次，於該情形時，較佳為隔1～4週進行投予。
作為本發明之疫苗組合物之1次之皮內投予容量，視投予部位或投予裝置來決定，通常為0.05～0.5 mL左右，較佳為0.1～0.3 mL，更佳為0.2 mL。
作為用以皮內投予本發明之疫苗組合物之投予裝置，可使用能夠投予至皮內之皮內針或者微型針，例如針管之突出長度為0.9 mm～1.5 mm、較佳為1.0～1.2 mm、更佳為1.2 mm之皮內針或者微型針。 皮內投予裝置之針管可為1根，亦可為複數根，皮內針所具有之針管較佳為1～3根，更佳為3根。
本發明之疫苗組合物之投予對象可例舉人及除人以外之哺乳動物，較佳為人。作為除人以外之哺乳動物，例如可例舉：大鼠、豚鼠、兔、豬、牛、馬、山羊、綿羊、狗、貓、恆河獼猴、食蟹獼猴、紅毛猩猩、黑猩猩等。 [實施例]
以下，藉由實施例具體地說明本發明，但本發明並不受該等任何限定。
參考例1 利用不活化全粒子疫苗於鼻腔誘導病毒特異性IgG 將流感HA疫苗「生研」之B/Yamagata系統(B/Phuket/3073/2013株)之原液作為裂解抗原，以每0.2 mL血球凝集素成為15 μgHA之方式藉由含1 w/w%蔗糖之6.7 mM磷酸緩衝生理食鹽水(pH值7.2)進行調整，將其作為裂解疫苗。又，如以下記載般所製備之B/Yamagata系統(B/Phuket/3073/2013株)之不活化全粒子抗原亦同樣地，以每0.2 mL血球凝集素成為15 μgHA之方式藉由含1 w/w%蔗糖之6.7 mM磷酸緩衝生理食鹽水(pH值7.2)進行調整，將其作為不活化全粒子疫苗。
本參考例中所使用之不活化全粒子抗原之製備如下所述。將B/Phuket/3073/2013株之病毒接種至12天齡之受精雞卵之絨毛尿囊膜腔內，培養3天後採集絨毛尿囊膜腔液。藉由過濾器過濾對所採集之絨毛尿囊膜腔液進行澄清後，使其吸附於硫酸鋇鹽，藉由12%檸檬酸鈉溶液溶出而回收流感病毒。所回收之病毒進而藉由如下方式純化：藉由超過濾置換成6.7 mM磷酸緩衝生理食鹽水(pH值7.2)，緩衝液置換後藉由蔗糖密度梯度離心來回收包含流感病毒之區分。於該純化流感病毒中以最終濃度成為0.05%之方式添加作為不活化劑之β-丙內酯，藉由4℃下24小時之反應以使流感病毒之感染性不活化。於該不活化反應後藉由超過濾(MWCO(molecular weight cut off，分子量截留)：100,000)將緩衝液置換成含1 w/w%蔗糖之6.7 mM磷酸緩衝生理食鹽水(pH值7.2)，將其作為不活化全粒子疫苗。
將以上述方式製備之投予液(表1)以每隻0.2 mL之方式投予至BALB/c小鼠(雌，5週齡)之皮下，於投予後21、42及63天後進行全採血(各時間點分別自8隻小鼠採血)。又，同樣地以21天之間隔投予2次各投予液，第1次投予後42及62天後(分別距離第2次投予21及42天後)進行全採血。 全採血之後，自上顎之咽側插入PIPETMAN，使含0.175% BSA (Bovine Serum Albumin，牛血清白蛋白)及蛋白酶抑制劑(Thermo Fisher Scientific公司)之D-PBS((Dulbecco's Phosphate Buffered Saline，杜氏磷酸鹽緩衝液)流入，將自外鼻孔回收之溶液作為鼻腔洗淨液。對於所採集之血液，藉由離心分離來製備血清，測定血清對B/Phuket/3073/2013株之HI抗體效價。又，關於鼻腔洗淨液，測定與B/Phuket/3073/2013株結合之IgG效價。
[表1]
抗原之形態 疫苗株 投予次數 採集日※ 投予路徑 N
(天數)
不活化全粒子疫苗(W.V.) B/Phuket/3073/2013 1 21 皮下 8
42 皮下 8
63 皮下 8
2 42 皮下 8
63 皮下 8
裂解疫苗(S.V.) B/Phuket/3073/2013 1 21 皮下 8
42 皮下 8
63 皮下 8
2 42 皮下 8
63 皮下 8
※自第1次投予日起算
血清對B/Phuket/3073/2013株之HI抗體效價如圖1所示。於1次投予群之比較中，裂解疫苗之抗體誘導較不活化全粒子疫苗慢，因此於第21天，裂解疫苗投予群之抗體效價較低，但於第42天及第63天，裂解疫苗投予群之抗體效價逐漸提高，於第42天以後，所有疫苗投予群之抗體效價均成為相同程度。又，於2次投予群中，不活化全粒子疫苗於第42天及第63天為相同程度之抗體效價，但裂解疫苗於第42天至第63天確認到抗體效價稍微降低之傾向。因此，於第42天，不活化全粒子疫苗與裂解疫苗之HI抗體效價相同，但於第63天顯示出不活化全粒子疫苗之HI抗體效價較高之傾向。
鼻腔洗淨液之病毒特異性IgG效價係如圖2所示，於1次投予群之比較中，裂解疫苗投予群之抗體效價自第21天至第63天逐漸提高，但相對較低，與此相對，不活化全粒子疫苗投予群係繪製以第42天為波峰之鐘形，顯示出不同於HI抗體效價之傾向。因此，關於第42天及第63天時之血清之HI抗體效價，所有疫苗均為相同程度，但關於鼻腔洗淨液之病毒特異性IgG效價，於第42天時，不活化全粒子疫苗投予群顯示出顯著高於裂解疫苗投予群之抗體誘導。
又，於2次投予群中，裂解疫苗投予群之病毒特異性IgG效價於第42天之鼻腔洗淨液中提高，但抗體效價仍低於不活化全粒子疫苗投予群。進而，於第63天(第2次投予後42天後)之比較中，不活化全粒子疫苗投予群之抗體效價有上升傾向，與此相對，裂解疫苗投予群顯示抗體效價降低之傾向，關於鼻腔黏膜之病毒特異性IgG之持續性，亦認為不活化全粒子疫苗更優異。
參考例2 病毒攻擊試驗 與參考例1同樣地，以每0.2 mL血球凝集素成為15 μgHA之方式藉由含1 w/w%蔗糖之6.7 mM磷酸緩衝生理食鹽水(pH值7.2)對B/Victoria系統(B/Texas/2/2013株)之裂解抗原或者不活化全粒子抗原進行調整，將其作為裂解疫苗或不活化全粒子疫苗。
將以上述方式製備之投予液(表2)以每隻0.2 mL之方式皮下投予至BALB/c小鼠(雌，5週齡)，投予1次或者隔3週投予2次。對照群係隔3週皮下投予生理食鹽水(大塚製藥工場)2次。第1次投予後42天後，於異氟醚麻醉下將B/Victoria系統之B/Brisbane/60/2008株以1×104 TCID50 (50% tissue culture infective dose，半數組織培養感染劑量)/10 μL/head病毒接種至鼻腔。病毒接種後3天後使各小鼠放血致死，其後藉由與參考例1相同之方法回收鼻腔洗淨液。 藉由qPCR(quantitative Polymerase Chain Reaction，定量聚合酶鏈反應)測定所回收之鼻腔洗淨液中所含之病毒量，比較評估鼻腔黏膜中之病毒之排除能力。
[表2]
抗原之形態 疫苗株 投予次數 投予用量 (μgHA/head) 投予容量 試樣採集日 N
不活化全粒子疫苗(W.V.) B/Texas/2/2013 1 15 0.2 mL 第45天 8
不活化全粒子疫苗(W.V.) B/Texas/2/2013 2 15 0.2 mL 第45天 8
裂解疫苗(S.V.) B/Texas/2/2013 1 15 0.2 mL 第45天 8
裂解疫苗(S.V.) B/Texas/2/2013 2 15 0.2 mL 第45天 8
生理食鹽水 - 2 - 0.2 mL 第45天 8
病毒接種3天後之鼻腔洗淨液之病毒含量如圖3所示。藉由皮下投予不活化全粒子疫苗，鼻腔黏膜中之病毒特異性IgG於1次投予42天後及2次投予後提高(參考例1)，但即便於病毒攻擊試驗中在上述時間點接種之情形時，亦幾乎未檢測出病毒。另一方面，於皮下投予裂解疫苗時，可能因為1次投予42天後鼻腔黏膜之病毒特異性IgG效價較低，故雖與對照群相比，病毒含量稍微降低，但確認到鼻腔洗淨液之病毒含量較高。但是，於皮下投予裂解疫苗時，亦由於藉由投予2次而第42天之鼻腔黏膜中之病毒特異性IgG效價提高(參考例1)，故2次投予群之病毒含量未達對照之十分之一，確認到鼻腔黏膜中之病毒含量顯著降低。 該等結果表示以較高水準誘導鼻腔黏膜之病毒特異性IgG效價關係到流感疫苗之有效性。
實施例1 皮內投予流感疫苗時之鼻腔黏膜之抗體誘導評估 使用與參考例1同樣製備之4株(A/H1N1、A/H3N2、B/Yamagata系統、B/Victoria系統)裂解抗原與不活化全粒子抗原，製備不活化全粒子疫苗及裂解疫苗。供於皮內投予之疫苗係以每0.2 mL血球凝集素成為15、3、或0.6 μgHA之方式藉由含1 w/w%蔗糖之6.7 mM磷酸緩衝生理食鹽水(pH值7.2)進行調整，供於皮下投予之疫苗係以每0.5 mL血球凝集素成為15、3、或0.6 μgHA之方式藉由含1 w/w%蔗糖之6.7 mM磷酸緩衝生理食鹽水(pH值7.2)進行調整。
將以上述方式製備之投予液(表3-1、表3-2)隔3週2次投予至SD大鼠(雄，9週齡)之後背部，皮內投予係每隻投予0.2 mL，皮下投予係每隻投予0.5 mL，於第2次投予之21天後在異氟醚麻醉下除血，其後採集鼻腔洗淨液。鼻腔洗淨液之採集方法與參考例1同樣地，自上顎之咽側插入PIPETMAN，使含0.175% BSA及蛋白酶抑制劑(Thermo Fisher Scientific公司)之D-PBS流入，將自外鼻孔回收之溶液作為鼻腔洗淨液。再者，皮內投予時使用3根PASKIN(南部化成，34 G，1.2 mm)。 所回收之鼻腔洗淨液係供於測定與各疫苗株結合之病毒特異性IgG效價、及測定對於A/Singapore/GP1908/2015株之中和抗體效價。
[表3-1]
抗原之形態 疫苗株 投予用量 (μgHA/株/head) 投予容量 (mL) 投予路徑 N
不活化全粒子疫苗(W.V.) A/Singapore/GP1908/2015 A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016 B/Phuket/3073/2013 B/Maryland/15/2016 15 0.2 皮內 8
不活化全粒子疫苗(W.V.) A/Singapore/GP1908/2015 A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016 B/Phuket/3073/2013 B/Maryland/15/2016 3 0.2 皮內 8
不活化全粒子疫苗(W.V.) A/Singapore/GP1908/2015 A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016 B/Phuket/3073/2013 B/Maryland/15/2016 0.6 0.2 皮內 8
不活化全粒子疫苗(W.V.)    A/Singapore/GP1908/2015 A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016 B/Phuket/3073/2013 B/Maryland/15/2016 15 0.5 皮下 8
不活化全粒子疫苗(W.V.) A/Singapore/GP1908/2015 A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016 B/Phuket/3073/2013 B/Maryland/15/2016 3 0.5 皮下 8
不活化全粒子疫苗(W.V.) A/Singapore/GP1908/2015 A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016 B/Phuket/3073/2013 B/Maryland/15/2016 0.6 0.5 皮下 8
[表3-2]
抗原之形態 疫苗株 投予用量 (μgHA/株/head) 投予容量 (mL) 投予路徑 N
裂解疫苗(S.V.) A/Singapore/GP1908/2015 A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016 B/Phuket/3073/2013 B/Maryland/15/2016 15 0.2 皮內 8
裂解疫苗(S.V.) A/Singapore/GP1908/2015 A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016 B/Phuket/3073/2013 B/Maryland/15/2016 3 0.2 皮內 8
裂解疫苗(S.V.) A/Singapore/GP1908/2015 A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016 B/Phuket/3073/2013 B/Maryland/15/2016 0.6 0.2 皮內 8
裂解疫苗(S.V.) A/Singapore/GP1908/2015 A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016 B/Phuket/3073/2013 B/Maryland/15/2016 15 0.5 皮下 8
裂解疫苗(S.V.) A/Singapore/GP1908/2015 A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016 B/Phuket/3073/2013 B/Maryland/15/2016 3 0.5 皮下 8
裂解疫苗(S.V.) A/Singapore/GP1908/2015 A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016 B/Phuket/3073/2013 B/Maryland/15/2016 0.6 0.5 皮下 8
鼻腔洗淨液之病毒特異性IgG效價之結果如圖4A～D所示。對於A/Singapore/GP1908/2015株(A/H1N1亞型)及A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016株(A/H3N2亞型)之IgG效價於不活化全粒子疫苗之皮內投予群或者不活化全粒子疫苗之皮下投予群的高用量下確認到誘導，於其他群中幾乎未誘導(圖4A及B)。又，於在鼻腔黏膜中確認到病毒特異性IgG之誘導的群中，於皮內投予有不活化全粒子疫苗之15 μgHA/株/head之群中確認到最高誘導效率。因此，為了誘導針對A型病毒之鼻腔黏膜之病毒特異性IgG，不活化全粒子疫苗之投予較為有效，尤其是藉由以高用量皮內投予不活化全粒子疫苗，能夠達成較高之抗體誘導。 又，關於對於B/Phuket/3073/2013株及B/Maryland/15/2016株之IgG效價，亦於不活化全粒子疫苗之皮內投予群中顯示出最高誘導(圖4C及D)。於B型時，於裂解疫苗之皮內投予群中亦確認到鼻腔黏膜中病毒特異性IgG之誘導，但可知在皮下投予與現行之流感疫苗相同之裂解疫苗(SV(S.C.))時，誘導效率最低。因此，認為若皮內投予不活化全粒子疫苗，則對於A型及B型之任一病毒均可有效率地於鼻腔黏膜誘導特異性IgG。
圖5中示出鼻腔洗淨液對A/Singapore/GP1908/2015株(A/H1N1亞型)之中和抗體效價之結果，但僅皮內投予不活化全粒子疫苗之15 μgHA/株/head之群顯示出較高的病毒中和活性。 因此，於鼻腔黏膜之病毒特異性IgG效價之結果中，不活化全粒子疫苗(15 μgHA/株/head)之皮內投予對所有株之IgG效價均較高，又，病毒之中和活性亦最高。即，藉由皮內投予高用量之不活化全粒子疫苗，於鼻腔黏膜排除病毒之抗體誘導提高，流感疫苗之有效性變得高於現行疫苗。
圖1係皮下投予疫苗時血清之對B/Phuket/3073/2013株之HI抗體效價。 圖2係皮下投予疫苗時鼻腔洗淨液之對B/Phuket/3073/2013株之IgG效價。 圖3係接種病毒3天後鼻腔洗淨液之病毒含量。 圖4A係鼻腔洗淨液之對於A/Singapore/GP1908/2015株之IgG效價。 圖4B係鼻腔洗淨液之對於A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016株之IgG效價。 圖4C係鼻腔洗淨液之對於B/Phuket/3073/2013株之IgG效價。 圖4D係鼻腔洗淨液之對於B/Maryland/15/2016株之IgG效價。 圖5係鼻腔洗淨液之對於A/Singapore/GP1908/2015株之中和抗體效價。

Claims (7)

  1. 一種季節性流感疫苗，其係於鼻腔黏膜誘導病毒特異性抗體之流感疫苗，且以流感病毒不活化全粒子為有效成分，並且每次皮內投予以抗原量計15 μgHA/株以上。
  2. 如請求項1之疫苗，其中流感病毒之不活化全粒子含有季節性A型流感病毒株或B型流感病毒株之任一者或兩者。
  3. 一種用以皮內投予之季節性流感疫苗組合物，其含有以血球凝集素量計每株15 μg以上之流感病毒之不活化全粒子。
  4. 如請求項3之疫苗組合物，其不含有佐劑。
  5. 如請求項1或2之疫苗、或如請求項3或4之疫苗組合物，其中上述疫苗或疫苗組合物係藉由皮內針或微型針進行投予。
  6. 一種季節性流感病毒不活化全粒子之用途，其用以製造於鼻腔黏膜誘導病毒特異性抗體之流感疫苗，且上述病毒不活化全粒子每次皮內投予15 μgHA/株以上。
  7. 一種病毒不活化全粒子，其係於鼻腔黏膜誘導病毒特異性抗體之流感疫苗療法中使用之季節性流感病毒不活化全粒子，且每次皮內投予15 μgHA/株以上。
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JP2009209086A (ja) * 2008-03-04 2009-09-17 Masami Moriyama 粘膜投与型ワクチン
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JP2011057605A (ja) * 2009-09-09 2011-03-24 Masami Moriyama 粘膜投与型ワクチン
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