TW201920258A - 靶向hiv gp120及cd3之多特異性抗體 - Google Patents

靶向hiv gp120及cd3之多特異性抗體 Download PDF

Info

Publication number
TW201920258A
TW201920258A TW107121345A TW107121345A TW201920258A TW 201920258 A TW201920258 A TW 201920258A TW 107121345 A TW107121345 A TW 107121345A TW 107121345 A TW107121345 A TW 107121345A TW 201920258 A TW201920258 A TW 201920258A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
seq
amino acid
antibody
acid sequence
heavy chain
Prior art date
Application number
TW107121345A
Other languages
English (en)
Other versions
TWI728250B (zh
Inventor
多瑪仕 席勒
約書亞 果德史密斯
喬治 庫柯
克雷格 Ｓ 佩斯
道格 瑞德
德瑞克 斯隆
海瑟 史蒂芬森
納森 Ｄ 湯姆森
Original Assignee
美商基利科學股份有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 美商基利科學股份有限公司 filed Critical 美商基利科學股份有限公司
Publication of TW201920258A publication Critical patent/TW201920258A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI728250B publication Critical patent/TWI728250B/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/42—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum viral
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6839—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting material from viruses
    • A61K47/6841—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting material from viruses the antibody targeting a RNA virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1006—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody the antibody being against or targeting material from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1027—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against receptors, cell-surface antigens or cell-surface determinants
    • A61K51/1039—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against receptors, cell-surface antigens or cell-surface determinants against T-cell receptors
    • A61K51/1042—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against receptors, cell-surface antigens or cell-surface determinants against T-cell receptors against T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C07K16/1036—Retroviridae, e.g. leukemia viruses
    • C07K16/1045—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV
    • C07K16/1063—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV env, e.g. gp41, gp110/120, gp160, V3, PND, CD4 binding site
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/283—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against Fc-receptors, e.g. CD16, CD32, CD64
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A61K2039/572—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 cytotoxic response
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/524—CH2 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/526—CH3 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/72—Increased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)

Abstract

本文揭示結合至HIV gp120及CD3之多特異性抗體(例如雙特異性抗體)。本文亦揭示使用此等抗體以治療或預防HIV感染之方法。

Description

靶向HIV GP120及CD3之多特異性抗體
本發明係關於用於治療及預防人類免疫不全病毒(HIV)感染之抗體。特定言之，本文提供包含廣泛中和抗HIV抗體之多特異性抗體，及用於使用此等抗體以減少HIV複製且治療及預防HIV感染之方法。
人類免疫不全病毒(HIV)感染及相關疾病係世界範圍內之主要公共衛生問題。大多數目前批准用於HIV感染之療法靶向病毒逆轉錄酶、蛋白酶及整合酶，但HIV對此等現存藥物之耐受性、長期毒性及病患缺乏對每日給藥方案之依從性已證實為與此等療法相關聯之問題。因此，發現及研發新穎HIV藥物非常重要。
WO2012/030904描述衍生自受HIV感染之供體之記憶B細胞之人類抗HIV抗體，其等可抑制來自多支之HIV-1物種之感染。然而，此等抗體之治療用途因免疫原性、藥物動力學、抗原特異性、效應功能及製造之問題而受限。因此，此項技術中需要針對治療用途具有有利性質之新穎抗HIV抗體。
本發明尤其提供用於治療或預防HIV之組合物及方法。更具體言之，本文提供靶向人類免疫不全病毒(HIV)包膜(Env)醣蛋白GP120 (gp120)及第二抗原(例如，分化簇3(CD3)；抗IgA受體(CD89))之多特異性抗體，及其用途。
在一項態樣中，本發明提供結合至人類免疫不全病毒-1 (HIV-1)包膜(Env)醣蛋白gp 120 (gp120)及人類CD3 (例如，人類CD3ε)之多特異性抗體。該抗體包含第一抗原結合域，該第一抗原結合域包含第一重鏈可變域(VH)及第一輕鏈可變域(VL)。該第一抗原結合域結合至gp120且包括包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第一VH互補決定區(CDR) 1；包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之第一VH-CDR2；包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一VH-CDR3；包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列之第一VL-CDR1；包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列之第一VL-CDR2；及包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之第一VL-CDR3。此抗體亦包含結合至人類CD3 (例如，人類CD3ε)之第二抗原結合域。在某些實施例中，該抗gp120抗體結合包含SEQ ID NO: 21中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 21中所示之胺基酸序列組成之蛋白質。在一些實例中，該抗gp120抗體結合包含SEQ ID NO: 38中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 38中所示之胺基酸序列組成之蛋白質。在一些實例中，該抗gp120抗體結合游離HIV-1病毒。在一些實例中，該抗gp120抗體結合受HIV-1感染之細胞。在一些實例中，該抗gp120抗體結合游離HIV-1病毒及受HIV-1感染之細胞兩者。在某些實例中，該抗gp120抗體結合HIV-1之至少兩種不同菌株(例如，M群、N群、O群或P群)。在一項實施例中，該抗gp120抗體結合pWITO.c/2474 (登錄號JN944948及NIH愛滋病試劑計劃目錄編號11739)。在另一實施例中，該抗gp120抗體結合pCH058.c/2960 (登錄號JN944940及NIH愛滋病試劑計劃目錄編號700010058)。
在另一態樣中，本發明提供結合至人類免疫不全病毒-1 (HIV-1)包膜(Env)醣蛋白gp 120 (gp120)及IgA受體CD89之多特異性抗體。該抗體包含第一抗原結合域，該第一抗原結合域包含第一重鏈可變域(VH)及第一輕鏈可變域(VL)。該第一抗原結合域結合至gp120且包括包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第一VH互補決定區(CDR) 1；包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之第一VH-CDR2；包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一VH-CDR3；包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列之第一VL-CDR1；包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列之第一VL-CDR2；及包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之第一VL-CDR3。此抗體亦包含結合至CD89 (例如，人類CD89/FCAR；UniProtKB - P24071)之第二抗原結合域。在某些實施例中，該抗gp120抗體結合包含SEQ ID NO: 21中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 21中所示之胺基酸序列組成之蛋白質。在一些實例中，該抗gp120抗體結合包含SEQ ID NO: 38中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 38中所示之胺基酸序列組成之蛋白質。在一些實例中，該抗gp120抗體結合游離HIV-1病毒。在一些實例中，該抗gp120抗體結合受HIV-1感染之細胞。在一些實例中，該抗gp120抗體結合游離HIV-1病毒及受HIV-1感染之細胞兩者。在某些實例中，該抗gp120抗體結合HIV-1之至少兩種不同菌株(例如，M群、N群、O群或P群)。在一項實施例中，該抗gp120抗體結合pWITO.c/2474 (登錄號JN944948及NIH愛滋病試劑計劃目錄編號11739)。在另一實施例中，該抗gp120抗體結合pCH058.c/2960 (登錄號JN944940及NIH愛滋病試劑計劃目錄編號700010058)。
在上述兩個態樣之一些實施例中，第一VH包含與SEQ ID NO: 7至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。在一些實施例中，第一VL包含與SEQ ID NO: 8至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。在此等實施例之某些實例中，於SEQ ID NO: 8之位置66、67、67A及67C (Kabat編號)之一或多者處之胺基酸係經改變。在某些實施例中，第一VL包含與SEQ ID NO: 81至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實施例中，第一VL包含與SEQ ID NO: 82至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實施例中，第一VL包含與SEQ ID NO: 83至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實施例中，第一VL包含與SEQ ID NO: 84至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實例中，上文描述之VH係直接或經由介入胺基酸(例如，G-S連接子序列)連接至SEQ ID NO: 56至65中所示之胺基酸序列中之任何一者。在其他實例中，上文描述之VH係直接或經由介入胺基酸(例如，G-S連接子序列)連接至SEQ ID NO: 66至75中所示之胺基酸序列中之任何一者。在一些實例中，上文描述之VH係直接或經由介入胺基酸(例如，G-S連接子序列)連接至於SEQ ID NO: 77內具有0至10個胺基酸取代(例如，增加半衰期及/或降低效應功能之取代)之胺基酸序列。在某些實施例中，上文描述之VH係直接或經由介入胺基酸(例如，G-S連接子序列)連接至包含來自IgG1 (例如，人類IgG1，例如，IgG1m3同種異型)及IgG3鉸鏈區(例如，WO2017/096221中描述之「開放式」 IgG3鉸鏈變體「IgG3 C-」)之CH1域、CH2域及CH3域之胺基酸序列。
在上述兩個態樣之一些實施例中，第一抗原結合域包含具有與SEQ ID NO: 9至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列之重鏈。在一些實施例中，第一抗原結合域包含具有與SEQ ID NO: 10至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列之輕鏈。在一些實施例中，第一抗原結合域包含具有與SEQ ID NO: 40至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列之輕鏈。在一些實施例中，第一抗原結合域包含具有與SEQ ID NO: 78至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列之輕鏈。在一些實施例中，第一抗原結合域包含具有與SEQ ID NO: 79至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列之輕鏈。在一些實施例中，第一抗原結合域包含具有與SEQ ID NO: 80至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列之輕鏈。
在上述兩個態樣之某些實施例中，第一VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列及第一VL包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列。在其他實施例中，第一VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列及第一VL包含SEQ ID NO: 81之胺基酸序列。在其他實施例中，第一VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列及第一VL包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列。在其他實施例中，第一VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列及第一VL包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列。在其他實施例中，第一VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列及第一VL包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列。在某些實例中，上文描述之VH係直接或經由介入胺基酸(例如，G-S連接子序列)連接至SEQ ID NO: 56至65中所示之胺基酸序列中之任何一者。在其他實例中，上文描述之VH係直接或經由介入胺基酸(例如，G-S連接子序列)連接至SEQ ID NO: 66至75中所示之胺基酸序列中之任何一者。在一些實例中，上文描述之VH係直接或經由介入胺基酸(例如，G-S連接子序列)連接至於SEQ ID NO: 77內具有0至10個胺基酸取代(例如，增加半衰期及/或降低效應功能之取代)之胺基酸序列。在某些實例中，上文描述之VH係直接或經由介入胺基酸(例如，G-S連接子序列)連接至包含來自IgG1 (例如，人類IgG1，例如，IgG1m3同種異型)及IgG3鉸鏈區(例如，WO2017/096221中描述之「開放式」 IgG3鉸鏈變體「IgG3 C-」)之CH1域、CH2域及CH3域之胺基酸序列。
在上述兩個態樣之一些實施例中，第一抗原結合域包含具有SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列之胺基酸序列之重鏈且包含具有SEQ ID NO: 10中所示之胺基酸序列之輕鏈。在一些實施例中，第一抗原結合域包含具有SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列之胺基酸序列之重鏈且包含具有SEQ ID NO: 40中所示之胺基酸序列之輕鏈。在一些實施例中，第一抗原結合域包含具有SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列之胺基酸序列之重鏈且包含具有SEQ ID NO: 78中所示之胺基酸序列之輕鏈。在一些實施例中，第一抗原結合域包含具有SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列之胺基酸序列之重鏈且包含具有SEQ ID NO: 79中所示之胺基酸序列之輕鏈。在一些實施例中，第一抗原結合域包含具有SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列之胺基酸序列之重鏈且包含具有SEQ ID NO: 80中所示之胺基酸序列之輕鏈。
在某些實施例中，該多特異性抗體係雙特異性抗體。
在某些實施例中，第二抗原結合域結合人類CD3且包含第二VH及第二VL。該第二VH包括包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列之第二VH-CDR1；包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之第二VH-CDR2；及包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列之第二VH-CDR3。在一些實施例中，該第二VL包括包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列之第二VL-CDR1；包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列之第二VL-CDR2；及包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列之第二VL-CDR3。
在某些實施例中，第二抗原結合域結合人類CD3且包含第二VH及第二VL，其中該第二VH包括包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列之第二VH-CDR1；包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之第二VH-CDR2；及包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列之第二VH-CDR3；及其中該第二VL包括包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列之第二VL-CDR1；包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列之第二VL-CDR2；及包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列之第二VL-CDR3。
在某些實施例中，第二抗原結合域結合人類CD89且包含第二VH及第二VL。該第二VH包括包含SEQ ID NO: 98之胺基酸序列之第二VH-CDR1；包含SEQ ID NO: 99之胺基酸序列之第二VH-CDR2；及包含SEQ ID NO: 100之胺基酸序列之第二VH-CDR3。在一些實施例中，該第二VL包括包含SEQ ID NO: 103之胺基酸序列之第二VL-CDR1；包含SEQ ID NO: 104之胺基酸序列之第二VL-CDR2；及包含SEQ ID NO: 105之胺基酸序列之第二VL-CDR3。
在某些實施例中，第二抗原結合域結合人類CD89且包含第二VH及第二VL，其中該第二VH包括包含SEQ ID NO: 98之胺基酸序列之第二VH-CDR1；包含SEQ ID NO: 99之胺基酸序列之第二VH-CDR2；及包含SEQ ID NO: 100之胺基酸序列之第二VH-CDR3；及其中該第二VL包括包含SEQ ID NO: 103之胺基酸序列之第二VL-CDR1；包含SEQ ID NO: 104之胺基酸序列之第二VL-CDR2；及包含SEQ ID NO: 105之胺基酸序列之第二VL-CDR3。
在一些實施例中，第二VH包含與SEQ ID NO: 17至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。在一些實施例中，第二VL包含與SEQ ID NO: 18至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。
在一項實施例中，第二VH包含SEQ ID NO: 17中所示之胺基酸序列及第二VL包含SEQ ID NO: 18中所示之胺基酸序列。
在一些實施例中，第二VH包含與SEQ ID NO: 96至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。在一些實施例中，第二VL包含與SEQ ID NO: 101至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。
在一項實施例中，第二VH包含SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列6及第二VL包含SEQ ID NO: 101中所示之胺基酸序列。
在某些實施例中，第二抗原結合域包含具有與SEQ ID NO: 19至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列之重鏈。在一些實施例中，第二抗原結合域包含具有與SEQ ID NO: 20至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列之輕鏈。
在某些實施例中，第二抗原結合域包含具有與SEQ ID NO: 97至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列之重鏈。在一些實施例中，第二抗原結合域包含具有與SEQ ID NO: 102至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列之輕鏈。
在一些實施例中，該抗體係κ-λ體、雙親和力再靶向分子(DART)、杵入臼型抗體(knob-in-hole)、股交換改造域抗體(SEED體)、雙特異性T細胞接合體(BiTe)、CrossMab、Fcab、雙功能抗體、串聯雙功能抗體(TandAb)或DuoBody®。
在某些實施例中，第一抗原結合域係直接或經由介入胺基酸序列稠合至選自由以下組成之群之第一重鏈恆定區：人類IgG1、人類IgG2、人類IgG3、人類IgG4、人類IgA1及人類IgA2。在一些實例中，第一抗原結合域係直接或經由介入胺基酸序列稠合至第一重鏈恆定區，其中該恆定區係來自人類IgG1 (例如，IgG1m3同種異型)，除IgG1鉸鏈區係經IgG3鉸鏈區(例如，WO2017/096221中描述之「開放式」 IgG3鉸鏈變體「IgG3 C-」)置換外。在一些實施例中，第二抗原結合域係直接或經由介入胺基酸序列稠合至選自由以下組成之群之第二重鏈恆定區：人類IgG1、人類IgG2、人類IgG3、人類IgG4、人類IgA1及人類IgA2。在一些實例中，第二抗原結合域係直接或經由介入胺基酸序列稠合至第二重鏈恆定區，其中該恆定區係來自人類IgG1 (例如，IgG1m3同種異型)，除IgG1鉸鏈區係經IgG3鉸鏈區(例如，WO2017/096221中描述之「開放式」 IgG3鉸鏈變體「IgG3 C-」)置換外。
在一特定實施例中，第一重鏈恆定區係人類IgG1，及第二重鏈恆定區係人類IgG1。
在一些實施例中，第一抗原結合域係直接或經由介入胺基酸序列稠合至第一輕鏈恆定區，該第一輕鏈恆定區係人類λ恆定區。在其他實施例中，第二抗原結合域係直接或經由介入胺基酸序列稠合至第二輕鏈恆定區，該第二輕鏈恆定區係人類λ恆定區。
在一項實施例中，第一重鏈恆定區包含下列中之任何一者：F405L、F405A、F405D、F405E、F405H、F405I、F405K、F405M、F405N、F405Q、F405S、F405T、F405V、F405W或F405Y胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變。在一項實例中，第一重鏈恆定區包含F405L胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變。在另一實例中，第一重鏈恆定區包含F405A胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變。在另一實例中，第一重鏈恆定區包含F405D胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變。在另一實例中，第一重鏈恆定區包含F405E胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變。在另一實例中，第一重鏈恆定區包含F405H胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變。在另一實例中，第一重鏈恆定區包含F405I胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變。在另一實例中，第一重鏈恆定區包含F405K胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變。在另一實例中，第一重鏈恆定區包含F405M胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變。在另一實例中，第一重鏈恆定區包含F405N胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變。在另一實例中，第一重鏈恆定區包含F405Q胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變。在另一實例中，第一重鏈恆定區包含F405S胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變。在另一實例中，第一重鏈恆定區包含F405T胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變。在另一實例中，第一重鏈恆定區包含F405V胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變。在另一實例中，第一重鏈恆定區包含F405W胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變。在另一實例中，第一重鏈恆定區包含F405Y胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變。
在另一實施例中，第一重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含下列中之任何一者：F405L、F405A、F405D、F405E、F405H、F405I、F405K、F405M、F405N、F405Q、F405S、F405T、F405V、F405W或F405Y胺基酸突變。在一項實例中，第一重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含F405L胺基酸突變。在另一實例中，第一重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含F405A胺基酸突變。在一項實例中，第一重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含F405D胺基酸突變。在一項實例中，第一重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含F405E胺基酸突變。在一項實例中，第一重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含F405H胺基酸突變。在一項實例中，第一重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含F405I胺基酸突變。在一項實例中，第一重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含F405K胺基酸突變。在一項實例中，第一重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含F405M胺基酸突變。在一項實例中，第一重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含F405N胺基酸突變。在一項實例中，第一重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含F405Q胺基酸突變。在一項實例中，第一重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含F405S胺基酸突變。在一項實例中，第一重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含F405T胺基酸突變。在一項實例中，第一重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含F405V胺基酸突變。在一項實例中，第一重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含F405W胺基酸突變。在一項實例中，第一重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變且第二重鏈恆定區包含F405Y胺基酸突變。
在某些實施例中，第一重鏈恆定區及第二重鏈恆定區之效應功能經減小或消除(例如，相對於具有野生型IgG1 Fc之抗體之效應功能)。
在一些實施例中，第一重鏈恆定區包括包含N297A突變或N297Q突變之人類IgG1重鏈恆定區及/或第二重鏈恆定區包括包含N297A突變或N297Q突變之人類IgG1重鏈恆定區。
在另一態樣中，本發明提供結合至gp120及人類CD3之雙特異性抗體。該雙特異性抗體包含結合至gp120之第一臂。該第一臂包含第一重鏈，該第一重鏈包含第一重鏈恆定區，該第一重鏈恆定區包含第一突變，該第一突變係以下中之任何一者：F405L、F405A、F405D、F405E、F405H、F405I、F405K、F405M、F405N、F405Q、F405S、F405T、F405V、F405W或F405Y胺基酸突變或K409R突變；及第一VH，其包括包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之VH-CDR1；包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之VH-CDR2；及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之VH-CDR3。在一項實例中，該第一臂包含第一重鏈，該第一重鏈包含第一重鏈恆定區，該第一重鏈恆定區包含第一突變，該第一突變係F405L或K409R突變中之任何一者。該第一臂亦包括包含第一輕鏈恆定區之第一輕鏈；及第一VL，其包括包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列之VL-CDR1；包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列之VL-CDR2；及包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之VL-CDR3。該雙特異性抗體包含結合至CD3 (例如，人類CD3 (例如，人類CD3ε)之第二臂。該第二臂包含第二重鏈，該第二重鏈包含第二重鏈恆定區，該第二重鏈恆定區包含第二突變，該第二突變係以下中之任何一者：F405L、F405A、F405D、F405E、F405H、F405I、F405K、F405M、F405N、F405Q、F405S、F405T、F405V、F405W或F405Y胺基酸突變或K409R突變；及第二VH，其包括包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列之VH-CDR1；包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH-CDR2；及包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列之VH-CDR3。在一項實例中，該第二臂包含第二重鏈，該第二重鏈包含第二重鏈恆定區，該第二重鏈恆定區包含第二突變，該第二突變係F405L或K409R突變中之任何一者。該第二臂包括包含第二輕鏈恆定區之第二輕鏈；及第二VL，其包括包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列之VL-CDR1；包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列之VL-CDR2；及包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列之VL-CDR3。該第一突變及該第二突變係不同之突變。
在另一態樣中，本發明提供結合至gp120及人類CD89之雙特異性抗體。該雙特異性抗體包含結合至gp120之第一臂。該第一臂包含第一重鏈，該第一重鏈包含第一重鏈恆定區，該第一重鏈恆定區包含第一突變，該第一突變係以下中之任何一者：F405L、F405A、F405D、F405E、F405H、F405I、F405K、F405M、F405N、F405Q、F405S、F405T、F405V、F405W或F405Y胺基酸突變或K409R突變；及第一VH，其包括包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之VH-CDR1；包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之VH-CDR2；及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之VH-CDR3。在一項實例中，該第一臂包含第一重鏈，該第一重鏈包含第一重鏈恆定區，該第一重鏈恆定區包含第一突變，該第一突變係F405L或K409R突變中之任何一者。該第一臂亦包括包含第一輕鏈恆定區之第一輕鏈；及第一VL，其包括包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列之VL-CDR1；包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列之VL-CDR2；及包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之VL-CDR3。該雙特異性抗體包含結合至CD89 (例如，人類CD89)之第二臂。該第二臂包含第二重鏈，該第二重鏈包含第二重鏈恆定區，該第二重鏈恆定區包含第二突變，該第二突變係以下中之任何一者：F405L、F405A、F405D、F405E、F405H、F405I、F405K、F405M、F405N、F405Q、F405S、F405T、F405V、F405W或F405Y胺基酸突變或K409R突變；及第二VH，其包括包含SEQ ID NO: 98之胺基酸序列之VH-CDR1；包含SEQ ID NO: 99之胺基酸序列之VH-CDR2；及包含SEQ ID NO: 100之胺基酸序列之VH-CDR3。在一項實例中，該第二臂包含第二重鏈，該第二重鏈包含第二重鏈恆定區，該第二重鏈恆定區包含第二突變，該第二突變係F405L或K409R突變中之任何一者。該第二臂包括包含第二輕鏈恆定區之第二輕鏈；及第二VL，其包括包含SEQ ID NO: 103之胺基酸序列之VL-CDR1；包含SEQ ID NO: 104之胺基酸序列之VL-CDR2；及包含SEQ ID NO: 105之胺基酸序列之VL-CDR3。該第一突變及第二突變係不同之突變。
在上述兩個態樣之某些實施例中，該抗gp120抗體臂結合包含SEQ ID NO: 21中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 21中所示之胺基酸序列組成之蛋白質。在一些實例中，該抗gp120抗體臂結合包含SEQ ID NO: 38中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 38中所示之胺基酸序列組成之蛋白質。在一些實例中，該抗gp120抗體臂結合游離HIV-1病毒。在一些實例中，該抗gp120抗體結合受HIV-1感染之細胞。在一些實例中，該抗gp120抗體臂結合游離HIV-1病毒及受HIV-1感染之細胞兩者。在某些實例中，該抗gp120抗體結合HIV-1之至少兩種不同菌株(例如，M群、N群、O群或P群)。在一項實施例中，該抗gp120抗體臂結合pWITO.c/2474 (登錄號JN944948及NIH愛滋病試劑計劃目錄編號11739)。在另一實施例中，該抗gp120抗體臂結合pCH058.c/2960 (登錄號JN944940及NIH愛滋病試劑計劃目錄編號700010058)。
在一些實施例中，第一VH包含與SEQ ID NO: 7至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。在一些實施例中，第一VL包含與SEQ ID NO: 8至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。在此等實施例之某些實例中，於SEQ ID NO: 8之位置66、67、67A及67C (Kabat編號)中之一或多者處之胺基酸係經改變。在某些實施例中，第一VL包含與SEQ ID NO: 81至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實施例中，第一VL包含與SEQ ID NO: 82至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實施例中，第一VL包含與SEQ ID NO: 83至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實施例中，第一VL包含與SEQ ID NO: 84至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。在一些實例中，上文描述之VH係直接或經由介入胺基酸(例如，G-S連接子序列)連接至於SEQ ID NO: 77內具有1至10個胺基酸取代(例如，增加半衰期及/或降低效應功能之取代)之胺基酸序列。
在一些實施例中，第一重鏈包含與SEQ ID NO: 9至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。在一些實施例中，第一輕鏈包含與SEQ ID NO: 10至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。在一些實施例中，第一輕鏈包含與SEQ ID NO: 40至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。在一些實施例中，第一輕鏈包含與SEQ ID NO: 78至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。在一些實施例中，第一輕鏈包含與SEQ ID NO: 79至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。在一些實施例中，第一輕鏈包含與SEQ ID NO: 80至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。
在某些實施例中，第二VH包含與SEQ ID NO: 17至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。在一些實施例中，第二VL包含與SEQ ID NO: 18至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。
在某些實施例中，第二VH包含與SEQ ID NO: 96至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。在一些實施例中，第二VL包含與SEQ ID NO: 101至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。
在一些實施例中，第二重鏈包含與SEQ ID NO: 19至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實施例中，第二輕鏈包含與SEQ ID NO: 20至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。
在一些實施例中，第二重鏈包含與SEQ ID NO: 97至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實施例中，第二輕鏈包含與SEQ ID NO: 102至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。
在一項實施例中，第一VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列且第一VL包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列及/或第二VH包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列且第二VL包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。
在一項實施例中，第一VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列且第一VL包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列及/或第二VH包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列且第二VL包含SEQ ID NO: 101之胺基酸序列。
在另一實施例中，第一VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列且第一VL包含SEQ ID NO: 81之胺基酸序列及/或第二VH包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列且第二VL包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。
在另一實施例中，第一VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列且第一VL包含SEQ ID NO: 81之胺基酸序列及/或第二VH包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列且第二VL包含SEQ ID NO: 101之胺基酸序列。
在另一實施例中，第一VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列且第一VL包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列及/或第二VH包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列且第二VL包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。
在另一實施例中，第一VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列且第一VL包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列及/或第二VH包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列且第二VL包含SEQ ID NO: 101之胺基酸序列。
在另一實施例中，第一VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列且第一VL包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列及/或第二VH包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列且第二VL包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。
在另一實施例中，第一VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列且第一VL包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列及/或第二VH包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列且第二VL包含SEQ ID NO: 101之胺基酸序列。
在又另一實施例中，第一VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列且第一VL包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列及/或第二VH包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列且第二VL包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。
在又另一實施例中，第一VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列且第一VL包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列及/或第二VH包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列且第二VL包含SEQ ID NO: 101之胺基酸序列。
在另一實施例中，第一重鏈包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列且第一輕鏈包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列及/或第二重鏈包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列且第二輕鏈包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。
在又另一實施例中，第一VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列且第一VL包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列及/或第二VH包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列且第二VL包含SEQ ID NO: 101之胺基酸序列。
在另一實施例中，第一重鏈包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列且第一輕鏈包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列及/或第二重鏈包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列且第二輕鏈包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。
在另一實施例中，第一重鏈包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列且第一輕鏈包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列及/或第二重鏈包含SEQ ID NO: 97之胺基酸序列且第二輕鏈包含SEQ ID NO: 102之胺基酸序列。
在另一實施例中，第一重鏈包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列且第一輕鏈包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列及/或第二重鏈包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列且第二輕鏈包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。
在另一實施例中，第一重鏈包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列且第一輕鏈包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列及/或第二重鏈包含SEQ ID NO: 97之胺基酸序列且第二輕鏈包含SEQ ID NO: 102之胺基酸序列。
在又另一實施例中，第一重鏈包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列且第一輕鏈包含SEQ ID NO: 79之胺基酸序列及/或第二重鏈包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列且第二輕鏈包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。
在又另一實施例中，第一重鏈包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列且第一輕鏈包含SEQ ID NO: 79之胺基酸序列及/或第二重鏈包含SEQ ID NO: 97之胺基酸序列且第二輕鏈包含SEQ ID NO: 102之胺基酸序列。
在另一實施例中，第一重鏈包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列且第一輕鏈包含SEQ ID NO: 80之胺基酸序列及/或第二重鏈包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列且第二輕鏈包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。
在另一實施例中，第一重鏈包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列且第一輕鏈包含SEQ ID NO: 80之胺基酸序列及/或第二重鏈包含SEQ ID NO: 97之胺基酸序列且第二輕鏈包含SEQ ID NO: 102之胺基酸序列。
在所有上述態樣及實施例之某些實施例中，該抗體進一步包含細胞毒性劑、放射性同位素、治療劑、抗病毒劑或可偵測標籤。
在另一態樣中，本發明提供包含編碼上文揭示之抗體之第一抗原結合域之第一輕鏈可變區或第一輕鏈之核酸分子之組合物。在另一態樣中，本發明提供包含編碼上文揭示之抗體之第一抗原結合域之第一重鏈可變區或第一重鏈之核酸分子之組合物。在又另一態樣中，本發明提供包含編碼上文揭示之抗體之第二抗原結合域之第一輕鏈可變區或第一輕鏈之核酸分子之組合物。在又另一態樣中，本發明提供包含編碼上文揭示之抗體之第二抗原結合域之第二重鏈可變區或第二重鏈之核酸分子之組合物。
在另一態樣中，本發明之特徵在於包含上文描述之核酸中之一或多者之宿主細胞。在某些實例中，該宿主細胞包含雙特異性抗體之所有四條鏈。在其他實例中，該宿主細胞包含編碼雙特異性抗體之gp120結合臂之核酸。在其他實例中，該宿主細胞包含編碼雙特異性抗體之CD3結合臂之核酸。在又其他實例中，該宿主細胞包含編碼雙特異性抗體之CD89結合臂之核酸。在一些實施例中，該宿主細胞係選自由以下組成之群：組織培養物中之大腸桿菌(E. coli )、假單胞菌(Pseudomonas )、芽孢桿菌(Bacillus )、鏈黴菌屬(Streptomyces )、酵母菌(例如，畢赤酵母菌屬(Pichia )、釀母菌屬(Saccharomyces ))、CHO、YB/20、NS0、PER-C6、HEK-293T、NIH-3T3、HeLa、BHK、Hep G2、SP2/0、R1.1、B-W、L-M、COS 1、COS 7、BSC1、BSC40、BMT10細胞、植物細胞、昆蟲細胞及人類細胞。
在又另一態樣中，特徵在於產生結合至gp120及人類CD3之抗體(或結合至gp120及人類CD89之抗體)之方法。該方法包括在使得表現核酸分子並產生抗體之條件下培養上文描述之宿主細胞。
在另一態樣中，揭示用於在樣本中偵測表現gp120及CD3 (或CD89)之細胞之方法。該方法涉及使該樣本與本文描述之抗體接觸。
在又另一態樣中，本發明提供包含本文描述之抗體及醫藥上可接受之賦形劑之醫藥組合物。
在另一實施例中，本發明之特徵在於一套組，其包含本文描述之抗體及a)偵測試劑；b) gp120及/或CD3及/或CD89抗原；c)反映針對人類投與批准使用或銷售之通知；或d)其組合。
本發明亦提供治療或預防有此需要之人類個體之人類免疫不全病毒感染之方法。該方法涉及向該人類個體投與治療有效量之本文揭示之抗體或醫藥組合物。在一些實施例中，該人類免疫不全病毒感染係HIV-1感染。在一些實施例中，該病患之病毒具有呈N332 PNG陽性之Env。在某些實施例中，該HIV為B、G、A、AC或AE支。
在另一態樣中，本發明之特徵在於結合至gp120之抗體。此抗體包含VH及VL。該VH包括包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之VH-CDR1、包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之VH-CDR2、包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之VH-CDR3。該VL包括包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列之VL-CDR1、包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列之VL-CDR2及包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之VL-CDR3。另外，該VL包含於位置67A (Kabat編號)處之酪胺酸、苯丙胺酸或蘇胺酸，或於位置67 (Kabat編號)處之甘胺酸。
在某些實施例中，該抗gp120抗體結合包含SEQ ID NO: 21中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 21中所示之胺基酸序列組成之蛋白質。在一些實例中，該抗gp120抗體結合包含SEQ ID NO: 38中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 38中所示之胺基酸序列組成之蛋白質。在一些實例中，該抗gp120抗體結合游離HIV-1病毒。在一些實例中，該抗gp120抗體結合受HIV-1感染之細胞。在一些實例中，該抗gp120抗體結合游離HIV-1病毒及受HIV-1感染之細胞兩者。在某些實例中，該抗gp120抗體結合HIV-1之至少兩種不同菌株(例如，M群、N群、O群或P群)。在一項實施例中，該抗gp120抗體結合pWITO.c/2474 (登錄號JN944948及NIH愛滋病試劑計劃目錄編號11739)。在另一實施例中，該抗gp120抗體結合pCH058.c/2960 (登錄號JN944940及NIH愛滋病試劑計劃目錄編號700010058)。
在一些實施例中，VH包含與SEQ ID NO: 7至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。在一些實施例中，VH係直接或經由介入胺基酸序列(例如，G-S連接子)連接至含有降低抗體之效應功能及/或增加抗體之藥物動力學半衰期之0至10 (例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)個胺基酸取代之人類IgG1恆定區(例如，IgG1m3同種異型)。在一些實例中，該抗體具有來自IgG3抗體(例如，WO 2017/096221中揭示之「開放式」 IgG3C-鉸鏈變體)之鉸鏈區及來自人類IgG1抗體(例如，IgG1m3同種異型)之CH1、CH2及CH3區。
在某些實施例中，VL包含與SEQ ID NO: 81、82、83或84至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。
在一些實施例中，重鏈包含與SEQ ID NO: 9至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。
在某些實施例中，輕鏈包含與SEQ ID NO: 40、78、79或80至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。
在一項實施例中，該抗體包括包含SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列之重鏈，及包含SEQ ID NO: 40中之任何一者所示之胺基酸序列之輕鏈。
在另一實施例中，該抗體包括包含SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列之重鏈，及包含SEQ ID NO: 78中之任何一者所示之胺基酸序列之輕鏈。
在又另一實施例中，該抗體包括包含SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列之重鏈，及包含SEQ ID NO: 79中之任何一者所示之胺基酸序列之輕鏈。
在另一實施例中，該抗體包括包含SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列之重鏈，及包含SEQ ID NO: 80中之任何一者所示之胺基酸序列之輕鏈。
在一些實施例中，上文描述之該等抗體進一步包含細胞毒性劑、放射性同位素、治療劑、抗病毒劑或可偵測標籤。
在另一態樣中，本發明之特徵在於包含本態樣之抗體及醫藥上可接受之載劑之醫藥組合物。
在另一態樣中，本發明係關於編碼本態樣之抗體之一種核酸或多種核酸。
在另一態樣中，本發明提供包含上文描述之該核酸或核酸之一種載體或多種載體。
在又另一態樣中，本發明之特徵在於包含上文描述之該載體或該等載體之宿主細胞。
在另一態樣中，本發明提供一種用於產生抗gp120抗體之方法。該方法涉及在使得表現該核酸或該等核酸或產生抗體之條件下培養上文描述之宿主細胞。
本發明之特徵亦在於治療或預防有此需要之人類個體之人類免疫不全病毒感染之方法。該方法包括向該人類個體投與治療有效量之本態樣之抗體或醫藥組合物。在一些實施例中，該人類免疫不全病毒感染係HIV-1感染。在一些實施例中，該病患之HIV具有呈N332 PNG陽性之Env。在某些實施例中，該HIV為B、G、A、AC或AE支。
在另一態樣中，本發明之特徵在於結合至gp120之抗體片段。此抗體片段包含VH及VL。該VH包括包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之VH-CDR1、包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之VH-CDR2、包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之VH-CDR3。該VL包括包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列之VL-CDR1、包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列之VL-CDR2及包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之VL-CDR3。另外，該VL包含於位置67A (Kabat編號)處之酪胺酸、苯丙胺酸或蘇胺酸，或於位置67 (Kabat編號)處之甘胺酸。
在某些實施例中，抗gp120抗體片段結合包含SEQ ID NO: 21中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 21中所示之胺基酸序列組成之蛋白質。在一些實例中，抗gp120抗體片段結合包含SEQ ID NO: 38中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 38中所示之胺基酸序列組成之蛋白質。在一些實例中，抗gp120抗體片段結合游離HIV-1病毒。在一些實例中，該抗gp120抗體結合受HIV-1感染之細胞。在一些實例中，該抗gp120抗體片段結合游離HIV-1病毒及受HIV-1感染之細胞兩者。在某些實例中，該抗gp120抗體結合HIV-1之至少兩種不同菌株(例如，M群、N群、O群或P群)。在一項實施例中，該抗gp120抗體片段結合pWITO.c/2474 (登錄號JN944948及NIH愛滋病試劑計劃目錄編號11739)。在另一實施例中，該抗gp120抗體片段結合pCH058.c/2960 (登錄號JN944940及NIH愛滋病試劑計劃目錄編號700010058)。
在一些實施例中，VH包含與SEQ ID NO: 7至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。
在某些實施例中，VL包含與SEQ ID NO: 81、82、83或84至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%相同之胺基酸序列。
在一些實施例中，該抗體片段係Fab、F(ab)2、Fv、scFv、sc(Fv)2或雙功能抗體。
在一些實施例中，上文描述之抗體片段進一步包含細胞毒性劑、放射性同位素、治療劑、抗病毒劑或可偵測標籤。
在另一態樣中，本發明之特徵在於包含此態樣之抗體片段及醫藥上可接受之載劑之醫藥組合物。
在另一態樣中，本發明係關於編碼此態樣之抗體片段之一種核酸或多種核酸。
在另一態樣中，本發明提供包含上文描述之該核酸或該等核酸之一種載體或多種載體。
在又另一態樣中，本發明之特徵在於包含上文描述之該載體或該(等)載體之宿主細胞。
在另一態樣中，本發明提供用於產生抗gp120抗體片段之方法。該方法涉及在使得表現該核酸或該等核酸並產生抗體片段之條件下培養上文描述之宿主細胞。
在另一態樣中，本發明之特徵在於用於在有此需要之人類個體中治療或預防HIV之方法。該方法包括向該人類個體投與治療有效量之此態樣之抗體片段或醫藥組合物。在一些實施例中，該人類免疫不全病毒感染係HIV-1感染。在一些實施例中，該病患之HIV具有呈N332 PNG陽性之Env。在某些實施例中，該HIV為B、G、A、AC或AE支。
除非另有定義，否則本文使用之所有技術及科學術語具有與由本發明所屬領域之一般技術者通常瞭解之含義相同之含義。儘管與彼等本文描述者類似或相同之方法及材料可用於實踐或測試本發明，但例示性方法及材料描述於下文中。本文提及之所有公開案、專利申請案、專利案及其他參考文獻係以全文引用之方式併入本文中。在有衝突之情況下，以本申請案(包括定義)為準。該等材料、方法及實例僅為說明性且非意欲限制。
自下列實施方式及自申請專利範圍當可明瞭本發明之其他特徵及優點。
相關申請案之交叉參考 本申請案主張2017年6月21日申請之美國臨時專利申請案系列第62/523,141號之優先權，該案以全文引用之方式併入本文中。
序列表 本申請案含有已以ASCII格式電子提交且以全文引用之方式併入本文中之序列表。2018年6月20日建立之該ASCII拷貝命名為35648-0054WO1_SL.txt且大小為164,114字節。
本文描述之多特異性抗體結合至人類免疫不全病毒(HIV)包膜(Env)蛋白gp120 (gp120)及分化簇3 (CD3) (例如，CD3ε)且有效殺死受HIV感染之細胞。例如，該多特異性抗體係具有兩個抗原結合臂之雙特異性抗體，其中該雙特異性抗體以一個臂結合受HIV感染之細胞上之抗原(例如，gp120)並以另一個臂結合T細胞(例如，CD3)上之抗原，使得可使T細胞(例如，CD4+ T細胞及/或CD8+ T細胞)靶向受HIV感染之細胞，從而導致對受HIV感染之細胞之殺死。結合CD3及gp120之雙特異性抗體可重定向CD8+ 及CD4+ T細胞以殺死表現gp120之細胞(例如，受HIV感染之細胞)。該等T細胞殺死受HIV感染之細胞而不依賴於其等T細胞受體特異性。在一項實施例中，該雙特異性抗體係抗gp120 X抗CD3 Duobody®。本發明之Duobody具有顯著優於此項技術中已知的其他雙特異性平臺之優點。Duobody®平臺優於(例如)DART平臺之主要優點係本文揭示之Duobody可募集CD4+ T細胞以殺死靶細胞(例如，受HIV感染之細胞)。對於DART，無法觀測到CD4+ T細胞介導之殺死無法(參見，Sloan等人，PLOS Pathogens, 11(11):e1005233. doi:10.1371/journal.ppat.1005233 (2015))。此係顯著優點，因為HIV治療中之標靶亦係CD4+ T細胞。使用需要先天效應細胞達到HIV治療活性之抗體之一個問題係該等效應細胞可能不存在於潛伏感染之CD4+ T細胞所在之組織中，但若CD4+ T細胞本身可為效應細胞，則此將不再成為問題。
HIV-1係HIV之主要家族且佔全世界範圍內所有感染之95%。HIV-2主要見於少數西非國家。
HIV病毒被分為特定群組(M、N、O及P)，其中M係「主要」群組且在全球範圍內造成大多數HIV/AIDS。基於其等基因序列，群組M被進一步細分為亞型(亦稱為支)，其等在不同地理位置中具有普遍性。
群組M 「亞型」或「支(clade)」係由基因序列資料定義之HIV-1群組M之亞型。群組M亞型之實例包括亞型A至K。亞型中之一些已知更具毒性或對不同藥物具抗性。亦存在衍生自不同亞型之病毒(各給定數量)之間重組之「循環重組體形式」或CRF。CRF12_BF (例如)係亞型B與F之間的重組。亞型A在西非很常見。亞型B係歐洲、美洲、日本、泰國及澳大利亞之主要形式。亞型C係南非、東非、印度、尼泊爾及中國部分地區之主要形式。亞型D通常僅見於東非及中非。亞型E從未被定義為非重組體，僅與亞型A重組為CRF01_AE。亞型F已於中非、南美及東歐中發現。亞型G (及CRF02_AG)已於非洲及中歐中發現。亞型H僅限於中非。亞型I最初用以描述現視為CRF04_cpx之菌株，其中cpx為數種亞型之「複合」重組。亞型J主要於北非、中非及西非中發現，及加勒比亞型K僅限於剛果民主共和國及喀麥隆。此等亞型有時進一步分為亞-亞型(sub-subtype)，諸如A1及A2或F1及F2。2015年，發現具有亞型D蛋白酶之菌株CRF19 (亞型A、亞型D及亞型G之重組體)與古巴之AIDS之快速發展密切相關。
本發明尤其提供靶向受HIV感染之細胞表面上之gp120多肽之中和抗體(例如，廣泛中和Ab)。針對病毒包膜蛋白之中和抗體藉由阻斷易感細胞之感染提供針對HIV-1曝露之適應性免疫防禦。廣泛中和指示抗體可中和來自不同支之HIV-1分離株(isolates)。因此，本發明包含之抗體具有交叉支結合活性。
gp120 包膜醣蛋白gp120 (或gp120)係120 kDa醣蛋白，其係HIV之外層之一部分。其自身表現為病毒膜刺突(spikes)，由三個gp120分子連接在一起並由gp41蛋白固定至膜組成。Gp120對病毒感染而言至關重要，因為Gp120通過其與細胞表面受體之相互作用促進HIV進入宿主細胞內。此等受體包括DC-SIGN、硫酸乙醯肝素蛋白多醣及CD4受體。結合至輔助T細胞上之CD4會誘導gp120及gp41開始一系列構型變化，從而導致病毒與宿主細胞膜之融合。
Gp120係由HIV env基因編碼。該env基因編碼具有約850個胺基酸之基因產物。初級env產物係蛋白gp160，其在內質網中被細胞蛋白酶弗林蛋白酶裂解為gp120 (約480個胺基酸)及gp41 (約345個胺基酸)。
HIV純系WITO之例示性gp160多肽之胺基酸序列係提供於下文(V3高度可變環係經加粗及N332潛在N連接之醣化位點係經加粗並加底線)： MKVMGTKKNYQHLWRWGIMLLGMLMMSSAAEQLWVTVYYGVPVWREANTTLFCASDAKAYDTEVHNVWATHACVPTDPNPQEVVMGNVTEDFNMWKNNMVEQMHEDIISLWDQSLKPCVKLTPLCVTLHCTNVTISSTNGSTANVTMREEMKNCSFNTTTVIRDKIQKEYALFYKLDIVPIEGKNTNTSYRLINCNTSVITQACPKVSFEPIPIHYCAPAGFAILKCNNKTFNGKGPCRNVSTVQCTHGIKPVVSTQLLLNGSLAEEDIIIRSENFTNNGKNIIVQLKEPVKINCTRPGNNTRRSINIGPGRAFYATGAIIGDIRKAHCN ISTEQWNNTLTQIVDKLREQFGNKTIIFNQSSGGDPEVVMHTFNCGGEFFYCNSTQLFNSTWFNNGTSTWNSTADNITLPCRIKQVINMWQEVGKAMYAPPIRGQIDCSSNITGLILTRDGGSNSSQNETFRPGGGNMKDNWRSELYKYKVVKIEPLGIAPTRAKRRVVQREKRAVTLGAVFLGFLGAAGSTMGAASLTLTVQARLLLSGIVQQQSNLLRAIEAQQHMLQLTVWGIKQLQARVLAIERYLKDQQLLGIWGCSGKLICTTTVPWNTSWSNKSYDYIWNNMTWMQWEREIDNYTGFIYTLIEESQNQQEKNELELLELDKWASLWNWFNITNWLWYIKLFIMIIGGLVGLRIVCAVLSIVNRVRQGYSPLSFQTRLPNPRGPDRPEETEGEGGERDRDRSARLVNGFLAIIWDDLRSLCLFSYHRLRDLLLIVARVVEILGRRGWEILKYWWNLLKYWSQELKNSAVSLLNVTAIAVAEGTDRVIEIVQRAVRAILHIPTRIRQGFERALL (SEQ ID NO: 37)
例示性gp120多肽之胺基酸序列係提供於下文： AEQLWVTVYYGVPVWREANTTLFCASDAKAYDTEVHNVWATHACVPTDPNPQEVVMGNVTEDFNMWKNNMVEQMHEDIISLWDQSLKPCVKLTPLCVTLHCTNVTISSTNGSTANVTMREEMKNCSFNTTTVIRDKIQKEYALFYKLDIVPIEGKNTNTSYRLINCNTSVITQACPKVSFEPIPIHYCAPAGFAILKCNNKTFNGKGPCRNVSTVQCTHGIKPVVSTQLLLNGSLAEEDIIIRSENFTNNGKNIIVQLKEPVKINCTRPGNNTRRSINIGPGRAFYATGAIIGDIRKAHCN ISTEQWNNTLTQIVDKLREQFGNKTIIFNQSSGGDPEVVMHTFNCGGEFFYCNSTQLFNSTWFNNGTSTWNSTADNITLPCRIKQVINMWQEVGKAMYAPPIRGQIDCSSNITGLILTRDGGSNSSQNETFRPGGGNMKDNWRSELYKYKVVKIEPLGIAPTRAKRRVVQREKR (SEQ ID NO: 21)。
另一例示性gp120多肽之胺基酸序列(參見，www.bioafrica.net/proteomics/ENV-GP120prot.html)係提供於下文： TEKLWVTVYY GVPVWKEATT TLFCASDAKA YDTEVHNVWA THACVPTDPN PQEVVLVNVT ENFNMWKNDM VEQMHEDIIS LWDQSLKPCV KLTPLCVSLK CTDLKNDTNT NSSSGRMIME KGEIKNCSFN ISTSIRGKVQ KEYAFFYKLD IIPIDNDTTS YKLTSCNTSV ITQACPKVSF EPIPIHYCAP AGFAILKCNN KTFNGTGPCT NVSTVQCTHG IRPVVSTQLL LNGSLAEEEV VIRSVNFTDN AKTIIVQLNT SVEINCTRPN NNTRKRIRIQ RGPGRAFVTI GKIGNMRQAH CNISRAKWNN TLKQIASKLR EQFGNNKTII FKQSSGGDPE IVTHSFNCGG EFFYCNSTQL FNSTWFNSTW STEGSNNTEG SDTITLPCRI KQIINMWQKV GKAMYAPPIS GQIRCSSNIT GLLLTRDGGN SNNESEIFRP GGGDMRDNWR SELYKYKVVK IEPLGVAPTK AKRRVVQREK R (SEQ ID NO: 38)
獨立之人類免疫不全病毒類型1 (HIV-1)分離株間的基因組多樣性，在相同病患之系列分離株之間，且甚至於單一病患分離株內較小程度係HIV-1之熟知特徵。儘管此序列異質性係分佈於整個基因組，但大對數異質性係位於env基因中。來自數種不同分離株之預測胺基酸序列之比較已顯示序列異質性係叢集於表面醣蛋白gp120之五個可變區(命名為V1至V5)中。V3區(儘管僅35個胺基酸長)顯示相當大之序列可變性。有趣的是，儘管存在此可變性，但該V3區包括介導與CD4+ 細胞之相互作用之抗原決定子。gp120可變性之增加導致較高程度之病毒複製，此表明受不同HIV-1變體感染之個體之病毒適應性增加。潛在N連接之醣化位點(PNGS)之可變性亦導致增加之病毒適應性。PNGS容許長鏈碳水化合物結合至gp120之高可變區。因此，env中PNGS之數量可能藉由提供對中和抗體更多或更少之敏感性來影響病毒之適應性。
gp120之V3區之共有序列(Milich等人，J Virol., 67(9):5623-5634 (1993)係提供於下文： CTRPNNNTRKSIHIGPGRAFYTTGEIIGDIRQAHC (SEQ ID NO: 22)。
抗 gp120 抗體 本發明之特徵在於抗gp120抗體。在某些實施例中，此等抗體結合至表現於細胞表面上之HIV-1抗原並消除或殺死受感染之細胞。
在某些實施例中，此等抗體係靶向HIV-1之中和抗體(例如，單株)。「中和抗體」係可活體外中和HIV在宿主及/或靶細胞中引發及/或保持感染之能力之抗體。本發明提供中和單株人類抗體，其中該抗體識別來自HIV之抗原，例如，gp120多肽。在某些實施例中，「中和抗體」可抑制HIV-1病毒(例如，SF162及/或JR-CSF)之進入，及中和指數＞1.5或＞2.0 (Kostrikis LG等人，J. Virol.,70(1): 445-458 (1996))。
在一些實施例中，此等抗體係靶向HIV-1之廣泛中和抗體(例如，單株)。「廣泛中和抗體」意指在中和分析中中和多於一個HIV-1病毒物種(來自不同支及支內之不同菌株)之抗體。廣泛中和抗體可中和HIV-1之至少2、3、4、5、6、7、8、9或更多種不同菌株，該等菌株屬於相同或不同支。在特定實施例中，廣泛中和抗體可中和多個HIV-1物種，該等物種屬於至少2、3、4、5或6個不同支。在某些實施例中，抗體之抑制濃度可係小於約0.0001 µg/ml、小於約0.001 µg/ml、小於約0.01 µg/ml、小於約0.1 µg/ml、小於約0.5 µg/ml、小於約1.0 µg/ml、小於約5 µg/ml、小於約10 µg/ml、小於約25 µg/ml、小於約50 µg/ml或小於約100 µg/ml以在中和分析中中和約50%之輸入病毒。
在一項實施例中，本發明之抗gp120抗體係與PCT申請公開案第WO 2012/030904號中描述為PGT-121 LO6之抗體相關。下表1提供PGT-121 LO6抗體之相關序列資訊。 表1
與PGT-121 LO6抗體(即，PGT-122)高度相關之抗體之晶體結構及實驗分析顯示PGT122亦利用CDR外之胺基酸殘基以結合抗原(與CDR一起)。例如，此抗體似乎在框架區中具有與抗原接觸之另外區(參見，例如，Experimental Validation for PGT121 and related antibodies: Sok等人，PLOS Pathogens, 9, e1003754 (2013))。結合至Env病毒抗原之PGT122之高解析度結構已經測定(參見，例如，Julien J.P.等人，Science, 342, 14777-14783 (2013)，及Pancera, M.等人，Nature, 514, 455-461 (2014))。PGT121之結構係描述於Julien JP等人，PLOS Pathogens 9, e1003342 (2013)，及Mouquet H等人，PNAS, 109, E3268-E3277 (2012)中。PGT122之結構係描述於Julien JP等人，PLOS Pathogens 9, e1003342 (2013), PDB ID 4JY5中；及PGT123之結構係描述於Julien JP等人，PLOS Pathogens 9, e1003342 (2013)中。PGT122及PGT123抗體係與PGT121抗體密切相關，因此PGT122/Env結構及PGT121、PGT122及PGT123結構之知識可用以非常精確地建模結合至Env之PGT121之結構並高度可靠地預測涉及結合至Env之PGT121殘基。基於與PGT122及PGT122/Env結構之類似性，接觸gp120抗原之PGT121 LO6抗體之預測殘基係提供於下文及框架殘基加粗顯示(Kabat編號)： VH (Kabat編號)： 33、56、58、99、100、100A、100B、100C、100D、100E、100G、100I、100J、100K、100L；及 VL (Kabat編號)： 28、29、30、50、51、52、66、67、67A、67C、91、92、93、94、95、95A、95B。
PGT-121 LO6抗體已顯示結合至抗原之許多不同變體，例如，不同病毒菌株，其等可接觸該抗體之除彼等上文所示者外之未知胺基酸位置。不同病毒菌株具有不同Env (即，抗原)序列及不同醣化模式，且甚至單一Env序列可具有異質性醣化模式，需要廣泛結合或中和抗體以識別不同HIV-1變體之Env蛋白或相同Env蛋白上之甚至不同醣化模式。例如，PGT121之抗原決定基包含Env V3環，特定言之於位置N332處之N連接之聚糖。該V3環係細胞向性及病毒支之主要決定子。在多支之117株CCR5-熱帶病毒中，編碼N332聚糖之病毒DNA序列中之潛在N連接之醣化(PNG)基元之存在與B、G、A、AC及AE支之病毒易被PGT121中和具有統計學顯著相關性。在分離自參與由Gilead贊助之臨床試驗之病患之50個B支Env序列之間，相較於非CCR5-熱帶，N332 PNG陽性(P＜0.0001)之僅26%病毒，具有N332 PNG基元之94% CCR5-熱帶Env易於被PGT121中和。因此，Env支之基因測定、向性及N332 PNG基元之存在高度預測被PGT121中和之易感性且可用作標誌物以預測被PGT121及其衍生物中和之病毒易感性。
本發明提供PGT-121 LO6抗體之變體。在某些實施例中，相較於PGT-121 LO6抗體，此等變體針對gp120具有大體上相同或增加之結合親和力。結合親和力可使用此項技術中已知的任何分析測定，包括ELISA、SPR、BLI或流式細胞術。在某些實施例中，相較於PGT-121 LO6抗體，此等變體在pH 6.0下對FcRn具有增加之結合親和力。在一些實施例中，相對於PGT-121 LO6抗體，此等變體具有增加之HIV-1中和。在某些實施例中，相較於PGT-121 LO6抗體，該等變體具有減小之免疫原性。在某些實施例中，本發明之變體對Env蛋白之結合經預測涉及Env區之下列殘基或下列殘基周圍(HIV Env HXB2編號)：V3環(324至328、330)及相關聯之N332聚糖及V1環之一部分(135至137)及相關聯之N137聚糖，殘基415至417。用於Env結合之抗體互補位經預測涉及在下列區中可與抗原直接接觸之殘基(Kabat編號)：CDRH1 (33)、CDRH2 (50、56、58)、CDRH3 (99、100、100A、100B、100C、100D、100E、100G、100I、100L)、CDRL1 (28、29、30)、CDRL2 (50、51、52)、LFR3 (66、67、67A、67B及67C)及CDRL3 (93、94、95A、95B)。
PGT-121 LO6重鏈可變域序列(具有Kabat編號) (SEQ ID NO: 126)
PGT-121 LO6輕鏈可變域序列(具有Kabat編號；注意VL於位置107 (V)處結束；即，G108不為VL之一部分) (SEQ ID NO: 127)
PGT-121 LO6抗體之一個例示性變體係PGT-121.60抗體，其等相關序列資訊係提供於下表2中。 表2
例示性抗gp120抗體1 例示性抗gp120抗體1係與PGT-121.60抗體相關。例示性抗gp120抗體1之相關胺基酸序列(PGT121.60人類IgG1 FEARLS /人類λ)係提供於表3中。 表3
抗gp120抗體可包含例示性抗gp120抗體1之重鏈CDR 1、CDR2及CDR3及輕鏈CDR 1、CDR2及CDR3。在一項實施例中，該等CDR係基於Kabat定義加以定義。在另一實施例中，該等CDR係基於Chothia定義加以定義。在一特定實施例中，Chothia定義係來自Discovery Studio，其使用來自Chothia及Lesk, J Mol Biol. 196(4):901-17 (1987)及Morea等人，Methods, 20:267-279 (2000)之定義。在另一特定實施例中，Chothia定義係基於來自Abysis定義之Chothia。在另一實施例中，該等CDR係基於IMGT定義定義。在另一實施例中，該等CDR係基於Honegger定義定義。在另一實施例中，該等CDR係基於contact定義加以定義。在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合包含SEQ ID NO: 21中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 21中所示之胺基酸序列組成之蛋白質。在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合包含SEQ ID NO: 38中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 38中所示之胺基酸序列組成之蛋白質。在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合游離HIV-1病毒。在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合受HIV-1感染之細胞。在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合游離HIV-1病毒及受HIV-1感染之細胞兩者。在某些實例中，本發明之抗gp120抗體結合HIV-1之至少兩種不同菌株(例如，M群、N群、O群或P群)。在一項實施例中，本發明之抗gp120抗體結合pWITO.c/2474 (登錄號JN944948及NIH愛滋病試劑計劃目錄編號11739)。在另一實施例中，本發明之抗gp120抗體結合pCH058.c/2960 (登錄號JN944940及NIH愛滋病試劑計劃目錄編號700010058)。
在某些實例中，抗gp120抗體包含與例示性抗gp120抗體1之可變重鏈具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，抗gp120抗體包含與例示性抗gp120抗體1之重鏈具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列。在某些實例中，抗gp120抗體包含與例示性抗gp120抗體1之可變輕鏈具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列。在某些實例中，抗gp120抗體包含與例示性抗gp120抗體1之輕鏈具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，抗gp120抗體包含與例示性抗gp120抗體1之可變重鏈及可變輕鏈具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，抗gp120抗體包含與例示性抗gp120抗體1之重鏈具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列及包含與例示性抗gp120抗體1之輕鏈具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列。在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合包含SEQ ID NO: 21中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 21中所示之胺基酸序列組成之蛋白質。在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合包含SEQ ID NO: 38中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 38中所示之胺基酸序列組成之蛋白質。在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合游離HIV-1病毒。在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合受HIV-1感染之細胞。在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合游離HIV-1病毒及受HIV-1感染之細胞兩者。在某些實例中，本發明之抗gp120抗體結合HIV-1之至少兩種不同菌株(例如，M群、N群、O群或P群)。在一項實施例中，本發明之抗gp120抗體結合pWITO.c/2474 (登錄號JN944948及NIH愛滋病試劑計劃目錄編號11739)。在另一實施例中，本發明之抗gp120抗體結合pCH058.c/2960 (登錄號JN944940及NIH愛滋病試劑計劃目錄編號700010058)。
在一些實施例中，例示性抗gp120抗體1之可變重鏈係連接至包含CH1域及鉸鏈區之重鏈恆定區。在一些實施例中，例示性抗gp120抗體1之可變重鏈係連接至包含CH3域之重鏈恆定區。在某些實施例中，例示性抗gp120抗體1之可變重鏈係連接至包含CH1域、鉸鏈區及來自IgG4之CH2域及CH3域(例如，來自IgG1)之重鏈恆定區。在某些實施例中，例示性抗gp120抗體1之可變重鏈係連接至包含來自IgG1 (例如，人類IgG1，例如，IgG1m3同種異型)之CH1域、CH2域及CH3域及IgG3鉸鏈區(例如，WO 2017/096221中名為「IgG3 C-」之「開放式」 IgG3鉸鏈變體(參見，例如，此PCT公開案之圖2A))之重鏈恆定區。預期此IgG3鉸鏈變體顯示經改善之Fab臂可撓性及跨越200A0 距離(該距離足以進行三聚體內相互作用)之能力。在某些實施例中，此嵌合抗體在重鏈恆定區中含有一或多個另外突變，該等突變增加該嵌合抗體之穩定性。在某些實施例中，該重鏈恆定區包括修飾該抗體之性質(例如，降低Fc受體結合、增加或減少抗體醣化、降低結合至C1q、增加半衰期、降低效應功能)之取代。
在某些實施例中，抗gp120抗體係IgG抗體。在一項實施例中，該抗體係IgG1。在另一實施例中，該抗體係IgG2。在一些實施例中，該抗體具有嵌合重鏈恆定區(例如，具有CH1、鉸鏈、及IgG4之CH2區及IgG1之CH3區)。
IgG抗體以各種同種異型及同族同種異型存在。在特定實施例中，本發明之抗體包括具有G1m1；nG1m2；G1m3；G1m17,1；G1m17,1,2；G1m3,1；或G1m17之同種異型之IgG1重鏈。此等同種異型或同族同種異型中之各者之特徵在於在IgG1重鏈恆定區(Fc) (EU編號)內之指定位置具有下列胺基酸殘基： G1m1：D356、L358； nG1m1：E356、M358； G1m3：R214、E356、M358、A431； G1m17,1：K214、D356、L358、A431； G1m17,1,2：K214、D356、L358、G431； G1m3,1：R214、D356、L358、A431；及 G1m17：K214、E356、M358、A431。
在一特定實施例中，例示性抗gp120抗體1之VH係直接連接至，或經由介入胺基酸序列(例如，G-S連接子)連接至下文提供之野生型IgG1m3序列(典型決定同種異型之殘基係用粗體指示)。 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKR VEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRE EM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA LHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 77)。
在某些實施例中，例示性抗gp120抗體1之VH (例如，與SEQ ID NO: 7具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列，或具有0至5 (即，1、2、3、4或5)個胺基酸取代(例如，於SEQ ID NO: 7內之保守取代)之胺基酸序列)係直接連接至，或經由介入胺基酸序列(例如，G-S連接子)連接至突變體IgG1m3序列，該突變體IgG1m3序列在SEQ ID NO: 77中具有1至10 (例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個胺基酸取代(例如，作出取代以降低效應功能及/或增加半衰期)。例示性胺基酸取代稍後描述於本發明中。
在某些實施例中，抗gp120抗體係人類IgG1/人類κ抗體。在一些實施例中，本發明之抗體包含具有選自Km1；Km1,2；或Km3之同種異型之κ輕鏈。此等同種異型中之各者之特徵在於在IgG1輕鏈(EU編號)內之指定位置具有下列胺基酸殘基： Km1：V153、L191； Km1,2：A153、L191；及 Km3：A153、V191。
在某些實施例中，本發明之抗體包括包含下列胺基酸序列中之任何一者之IgG1 κ輕鏈，其中典型決定同種異型之殘基係用粗體指示： Km1： TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNVLQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKLYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 85)； Km1,2： TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKLYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 86)；或 Km3： TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 87)。
在某些實施例中，抗gp120抗體係人類IgG1/人類λ抗體。各個別人類包括介於七至十一個之間的不同λ輕鏈基因，該等λ輕鏈基因編碼選自λ1、λ2、λ3、λ4、λ5、λ6及λ7之輕鏈。在特定實施例中，本發明之抗體包含選自λ1、λ2、λ3、λ4、λ5、λ6及λ7之λ輕鏈。在特定實施例中，本文描述之抗體包括包含下列胺基酸序列中之任何一者之λ輕鏈，其中典型決定λ之殘基係用粗體指示： λ1： GQPKAN PT VTLFPPSSEELQANKATLVCLI SDFYPGAVTVAWKADG SPV KA GVETTK PSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHR SYSCQ VTHEGSTVEKTVAPT ECS (SEQ ID NO: 88)； λ2： GQPKAA PS VTLFPPSSEELQANKATLVCLI SDFYPGAVTVAWKADS SPV KA GVETTT PSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHR SYSCQ VTHEGSTVEKTVAPT ECS (SEQ ID NO: 89)； λ3： GQPKAA PS VTLFPPSSEELQANKATLVCLI SDFYPGAVTVAWKADS SPA KA GVETTT PSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHK SYSCQ VTHEGSTVEKTVAPT ECS (SEQ ID NO: 90)；或 λ7： GQPKAA PS VTLFPPSSEELQANKATLVCLV SDFYPGAVTVAWKADG SPV KV GVETTK PSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHR SYSCR VTHEGSTVEKTVAPA ECS (SEQ ID NO: 91)。
在一特定實施例中，例示性抗gp120抗體1之VL (例如，與SEQ ID NO: 8具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列，或具有0至5 (即，1、2、3、4或5)個胺基酸取代(例如，於SEQ ID NO: 8內之保守取代)之胺基酸序列)係直接連接至，或經由介入胺基酸序列(例如，G-S連接子)連接至野生型人類λ 2序列(SEQ ID NO: 89)。在某些實施例中，例示性抗gp120抗體1之VL係直接連接至，或經由介入胺基酸序列(例如，G-S連接子)連接至於SEQ ID NO: 89內具有1至5 (即，1、2、3、4、5)個取代之突變體人類λ 2序列。
在一特定實施例中，抗gp120抗體係人類IgG1m3/人類λ2抗體。
抗體(諸如例示性抗gp120抗體1)可(例如)藉由製備並表現編碼該抗體之胺基酸序列之核酸製得。
例示性抗gp120抗體2 另一例示性抗gp120抗體(例示性抗gp120抗體2)具有與例示性抗gp120抗體1相同之六個CDR。此抗體包括包含SEQ ID NO: 7中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 7中所示之胺基酸序列組成之VH序列及包含下文所示之胺基酸序列或由下文所示之胺基酸序列組成之VL序列： SDISVAPGETARISCGEKSLGSRAVQWYQHRAGQAPSLIIYNNQDRPSGIPERFSGSPDYRPGTTATLTITSVEAGDEADYYCHIWDSRVPTKWVFGGGTTLTVL (SEQ ID NO: 81)。
在某些實例中，VL係直接連接至，或經由介入胺基酸序列(例如，G-S連接子)連接至人類λ恆定區。
例示性抗gp120抗體2包括包含SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列組成之重鏈，及包含下文所示之胺基酸序列或由下文所示之胺基酸序列組成之輕鏈： SDISVAPGETARISCGEKSLGSRAVQWYQHRAGQAPSLIIYNNQDRPSGIPERFSGSPDY RPGTTATLTITSVEAGDEADYYCHIWDSRVPTKWVFGGGTTLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS (SEQ ID NO: 40)
在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合包含SEQ ID NO: 21中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 21中所示之胺基酸序列組成之蛋白質。在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合包含SEQ ID NO: 38中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 38中所示之胺基酸序列組成之蛋白質。在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合游離HIV-1病毒。在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合受HIV-1感染之細胞。在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合游離HIV-1病毒及受HIV-1感染之細胞兩者。在某些實例中，本發明之抗gp120抗體結合HIV-1之至少兩種不同菌株(例如，M群、N群、O群或P群)。在一項實施例中，本發明之抗gp120抗體結合pWITO.c/2474 (登錄號JN944948及NIH愛滋病試劑計劃目錄編號11739)。在另一實施例中，本發明之抗gp120抗體結合pCH058.c/2960 (登錄號JN944940及NIH愛滋病試劑計劃目錄編號700010058)。
在一些實施例中，例示性抗gp120抗體2之可變重鏈(例如，與SEQ ID NO: 7具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列，或具有0至5 (即，1、2、3、4或5)個胺基酸取代(例如，於SEQ ID NO: 7內之保守取代)之胺基酸序列)係連接至包含CH1域及鉸鏈區之重鏈恆定區。在一些實施例中，例示性抗gp120抗體2之可變重鏈(例如，與SEQ ID NO: 7具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列，或具有0至5 (即，1、2、3、4或5)個胺基酸取代(例如，於SEQ ID NO: 7內之保守取代)之胺基酸序列)係連接至包含CH3域之重鏈恆定區。在某些實施例中，例示性抗gp120抗體2之可變重鏈(例如，與SEQ ID NO: 7具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列，或具有0至5 (即，1、2、3、4或5)個胺基酸取代(例如，於SEQ ID NO: 7內之保守取代)之胺基酸序列)係連接至包含CH1域、鉸鏈區及來自IgG4之CH2域及CH3域(例如，來自IgG1)之重鏈恆定區。在某些實施例中，例示性抗gp120抗體1之可變重鏈係連接至包含來自IgG1 (例如，人類IgG1，例如，IgG1m3同種異型)及IgG3鉸鏈區(例如，WO2017/096221中描述之「開放式」 IgG3鉸鏈變體「IgG3 C-」)之CH1域、CH2域及CH3域之重鏈恆定區。在某些實施例中，此嵌合抗體在重鏈恆定區中含有一或多個另外突變，該等突變增加嵌合抗體之穩定性。在某些實施例中，重鏈恆定區包括修飾抗體之性質之取代(例如，降低Fc受體結合、增加或減少抗體醣化、降低結合至C1q、增加半衰期、降低效應功能)。
在某些實施例中，抗gp120抗體係IgG抗體。在一項實施例中，該抗體係IgG1。在另一實施例中，該抗體係IgG2。在一些實施例中，該抗體具有嵌合重鏈恆定區(例如，具有CH1、鉸鏈及IgG4之CH2區及IgG1之CH3區)。
在特定實施例中，本發明之抗體包括具有G1m1；nG1m2；G1m3；G1m17,1；G1m17,1,2；G1m3,1；或G1m17之同種異型之IgG1重鏈。
在某些實施例中，抗gp120抗體係人類IgG1/人類κ抗體。在一些實施例中，本發明之抗體包含具有選自Km1、Km1,2；或Km3之同種異型之κ輕鏈。在某些實施例中，抗gp120抗體係人類IgG1/人類λ抗體。在一些實施例中，本發明之抗體包含選自λ1、λ2、λ3、λ4、λ5、λ6及λ7之λ輕鏈。
在一特定實施例中，抗gp120抗體係人類IgG1m3/人類λ2抗體。
在一些實施例中，例示性抗gp120抗體2之VH (例如，與SEQ ID NO: 7具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列，或具有0至5 (即，1、2、3、4或5)個胺基酸取代(例如，於SEQ ID NO: 7內之保守取代)之胺基酸序列)係直接連接至，或經由介入胺基酸序列(例如，G-S連接子)連接至野生型IgG1m3序列(SEQ ID NO: 77)。在某些實施例中，例示性抗gp120抗體2之VH (例如，與SEQ ID NO: 7具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列，或具有0至5 (即，1、2、3、4或5)個胺基酸取代(例如，於SEQ ID NO: 7內之保守取代)之胺基酸序列)係直接連接至，或經由介入胺基酸序列(例如，G-S連接子)連接至於SEQ ID NO: 77內具有1至10 (例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個胺基酸取代(例如，降低效應功能及/或增加半衰期之取代)之突變體IgG1m3序列。例示性胺基酸取代稍後描述於本發明中。
在一些實施例中，例示性抗gp120抗體2之VL (例如，與SEQ ID NO: 81具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列，或具有0至5 (即，1、2、3、4或5)個胺基酸取代(例如，於SEQ ID NO: 81內之保守取代)之胺基酸序列)係直接連接至，或經由介入胺基酸序列(例如，G-S連接子)連接至野生型人類λ 2序列(SEQ ID NO: 89)。在某些實施例中，例示性抗gp120抗體2之VL (例如，與SEQ ID NO: 81具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列，或具有0至5 (即，1、2、3、4或5)個胺基酸取代(例如，於SEQ ID NO: 81內之保守取代)之胺基酸序列)係直接連接至，或經由介入胺基酸序列(例如，G-S連接子)連接至於SEQ ID NO: 89內具有1至5 (即，1、2、3、4、5)個取代之突變體人類λ 2序列。
例示性抗gp120抗體2可用作單特異性或多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)。全抗體或抗原結合片段(例如，Fab、F(ab)2、Fv、scFv、sc(Fv)2、雙功能抗體)係包含於本發明內。
抗體(諸如例示性抗gp120抗體2)可(例如)藉由製備並表現編碼該抗體之胺基酸序列之核酸製得。
例示性抗gp120抗體3 另一例示性抗gp120抗體(例示性抗gp120抗體3)具有與例示性抗gp120抗體1相同之六個CDR。此抗體包括包含SEQ ID NO: 7中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 7中所示之胺基酸序列組成之VH序列及包含下文提供之胺基酸序列或由下文提供之胺基酸序列組成之VL序列： SDISVAPGETARISCGEKSLGSRAVQWYQHRAGQAPSLIIYNNQDRPSGIPERFSGSPDFRPGTTATLTITSVEAGDEADYYCHIWDSRVPTKWVFGGGTTLTVL (SEQ ID NO: 82)
在某些實例中，VL係直接連接至，或經由介入胺基酸序列(例如，G-S連接子)連接至人類λ恆定區。
例示性抗gp120抗體3包括包含SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列組成之重鏈，及包含下文所示之胺基酸序列或由下文所示之胺基酸序列組成之輕鏈： SDISVAPGETARISCGEKSLGSRAVQWYQHRAGQAPSLIIYNNQDRPSGIPERFSGSPDF RPGTTATLTITSVEAGDEADYYCHIWDSRVPTKWVFGGGTTLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQ ID NO: 78)
在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合包含SEQ ID NO: 21中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 21中所示之胺基酸序列組成之蛋白質。在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合包含SEQ ID NO: 38中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 38中所示之胺基酸序列組成之蛋白質。在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合游離HIV-1病毒。在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合受HIV-1感染之細胞。在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合游離HIV-1病毒及受HIV-1感染之細胞兩者。在某些實例中，本發明之抗gp120抗體結合HIV-1之至少兩種不同菌株(例如，M群、N群、O群或P群)。在一項實施例中，本發明之抗gp120抗體結合pWITO.c/2474 (登錄號JN944948及NIH愛滋病試劑計劃目錄編號11739)。在另一實施例中，本發明之抗gp120抗體結合pCH058.c/2960 (登錄號JN944940及NIH愛滋病試劑計劃目錄編號700010058)。
在一些實施例中，例示性抗gp120抗體3之可變重鏈係連接至包含CH1域及鉸鏈區之重鏈恆定區。在一些實施例中，例示性抗gp120抗體3之可變重鏈係連接至包含CH3域之重鏈恆定區。在某些實施例中，例示性抗gp120抗體3之可變重鏈係連接至包含CH1域、鉸鏈區及來自IgG4之CH2域及CH3域(例如，來自IgG1)之重鏈恆定區。在某些實施例中，例示性抗gp120抗體1之可變重鏈係連接至包含來自IgG1 (例如，人類IgG1，例如，IgG1m3同種異型)及IgG3鉸鏈區(例如，WO2017/096221中描述之「開放式」 IgG3鉸鏈變體「IgG3 C-」)之CH1域、CH2域及CH3域之重鏈恆定區。在某些實施例中，此嵌合抗體在重鏈恆定區中含有一或多個另外突變，該等另外突變增加嵌合抗體之穩定性。在某些實施例中，該重鏈恆定區包括修飾該抗體之性質之取代(例如，降低Fc受體結合、增加或減少抗體醣化、降低結合至C1q、增加半衰期、降低效應功能)。
在某些實施例中，抗gp120抗體係IgG抗體。在一項實施例中，該抗體係IgG1。在另一實施例中，該抗體係IgG2。在一些實施例中，該抗體具有嵌合重鏈恆定區(例如，具有CH1、鉸鏈及IgG4之CH2區及IgG1之CH3區)。
在特定實施例中，本發明之抗體包括具有G1m1；nG1m2；G1m3；G1m17,1；G1m17,1,2；G1m3,1；或G1m17之同種異型之IgG1重鏈。在某些實施例中，抗gp120抗體係人類IgG1/人類κ抗體。在一些實施例中，本發明之抗體包含具有選自Km1；Km1,2；或Km3之同種異型之κ輕鏈。在某些實施例中，該抗gp120抗體係人類IgG1/人類λ抗體。在一些實施例中，本發明之抗體包含選自λ1、λ2、λ3、λ4、λ5、λ6及λ7之λ輕鏈。
在一特定實施例中，抗gp120抗體係人類IgG1m3/人類λ2抗體。
在一些實施例中，例示性抗gp120抗體3之VH (例如，與SEQ ID NO: 7具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列，或具有0至5 (即，1、2、3、4或5)個胺基酸取代(例如，於SEQ ID NO: 7內之保守取代)之胺基酸序列)係直接連接至，或經由介入胺基酸序列(例如，G-S連接子)連接至野生型IgG1m3序列(SEQ ID NO: 77)。在某些實施例中，例示性抗gp120抗體3之VH (例如，與SEQ ID NO: 7具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列，或具有0至5 (即，1、2、3、4或5)個胺基酸取代(例如，於SEQ ID NO: 7內之保守取代)之胺基酸序列)係直接連接至，或經由介入胺基酸序列(例如，G-S連接子)連接至在SEQ ID NO: 77中具有1至10 (例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個胺基酸取代(例如，以降低效應功能及/或增加半衰期)之突變體IgG1m3序列。例示性胺基酸取代稍後描述於本發明中。
在一些實施例中，例示性抗gp120抗體3之VL (例如，與SEQ ID NO: 82具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列，或具有0至5 (即，1、2、3、4或5)個胺基酸取代(例如，於SEQ ID NO: 82內之保守取代)之胺基酸序列)係直接連接至，或經由介入胺基酸序列(例如，G-S連接子)連接至野生型人類λ 2序列(SEQ ID NO: 89)。在某些實施例中，例示性抗gp120抗體3之VL (例如，與SEQ ID NO: 82具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列，或具有0至5 (即，1、2、3、4或5)個胺基酸取代(例如，於SEQ ID NO: 82內之保守取代)之胺基酸序列)係直接連接至，或經由介入胺基酸序列(例如，G-S連接子)連接至於SEQ ID NO: 89內具有1至5 (即，1、2、3、4、5)個取代之突變體人類λ 2序列。
例示性抗gp120抗體3可用作單特異性或多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)。全抗體或抗原結合片段(例如，Fab、F(ab)2、Fv、scFv、sc(Fv)2、雙功能抗體)係包含於本發明內。
抗體(諸如例示性抗gp120抗體3)可(例如)藉由製備並表現編碼該抗體之胺基酸序列之核酸製得。
例示性抗gp120抗體4 另一例示性抗gp120抗體(例示性抗gp120抗體4)具有與例示性抗gp120抗體1相同之六個CDR。此抗體包括包含SEQ ID NO: 7中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 7中所示之胺基酸序列組成之VH序列及包含下文顯示之胺基酸序列或由下文顯示之胺基酸序列組成之VL序列： SDISVAPGETARISCGEKSLGSRAVQWYQHRAGQAPSLIIYNNQDRPSGIPERFSGSPDTRPGTTATLTITSVEAGDEADYYCHIWDSRVPTKWVFGGGTTLTVL (SEQ ID NO: 83)
在某些實例中，VL係直接連接至，或經由介入胺基酸序列(例如，G-S連接子)連接至人類λ恆定區。
例示性抗gp120抗體4包括包含SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列組成之重鏈，及包含下文所示之胺基酸序列或由下文所示之胺基酸序列組成之輕鏈： SDISVAPGETARISCGEKSLGSRAVQWYQHRAGQAPSLIIYNNQDRPSGIPERFSGSPDT RPGTTATLTITSVEAGDEADYYCHIWDSRVPTKWVFGGGTTLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS (SEQ ID NO: 79)
在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合包含SEQ ID NO: 21中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 21中所示之胺基酸序列組成之蛋白質。在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合包含SEQ ID NO: 38中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 38中所示之胺基酸序列組成之蛋白質。在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合游離HIV-1病毒。在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合受HIV-1感染之細胞。在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合游離HIV-1病毒及受HIV-1感染之細胞兩者。在某些實例中，本發明之抗gp120抗體結合HIV-1之至少兩種不同菌株(例如，M群、N群、O群或P群)。在一項實施例中，本發明之抗gp120抗體結合pWITO.c/2474 (登錄號JN944948及NIH愛滋病試劑計劃目錄編號11739)。在另一實施例中，本發明之抗gp120抗體結合pCH058.c/2960 (登錄號JN944940及NIH愛滋病試劑計劃目錄編號700010058)。
在一些實施例中，例示性抗gp120抗體4之可變重鏈係連接至包含CH1域及鉸鏈區之重鏈恆定區。在一些實施例中，例示性抗gp120抗體4之可變重鏈係連接至包含CH3域之重鏈恆定區。在某些實施例中，例示性抗gp120抗體4之可變重鏈係連接至包含CH1域、鉸鏈區及來自IgG4之CH2域及CH3域(例如，來自IgG1)之重鏈恆定區。在某些實施例中，例示性抗gp120抗體1之可變重鏈係連接至包含來自IgG1 (例如，人類IgG1，例如，IgG1m3同種異型)及IgG3鉸鏈區(例如，WO2017/096221中描述之「開放式」 IgG3鉸鏈變體「IgG3 C-」)之CH1域、CH2域及CH3域之重鏈恆定區。在某些實施例中，此嵌合抗體在重鏈恆定區中含有一或多個另外突變，該等另外突變增加嵌合抗體之穩定性。在某些實施例中，該重鏈恆定區包括修飾該抗體之性質之取代(例如，降低Fc受體結合、增加或減少抗體醣化、降低結合至C1q、增加半衰期、降低效應功能)。
在某些實施例中，抗gp120抗體係IgG抗體。在一項實施例中，該抗體係IgG1。在另一實施例中，該抗體係IgG2。在一些實施例中，該抗體具有嵌合重鏈恆定區(例如，具有CH1、鉸鏈及IgG4之CH2區及IgG1之CH3區)。
在特定實施例中，本發明之抗體包括具有G1m1；nG1m2；G1m3；G1m17,1；G1m17,1,2；G1m3,1；或G1m17之同種異型之IgG1重鏈。在某些實施例中，抗gp120抗體係人類IgG1/人類κ抗體。在一些實施例中，本發明之抗體包含具有選自Km1；Km1,2；或Km3之同種異型之κ輕鏈。在某些實施例中，該抗gp120抗體係人類IgG1/人類λ抗體。在一些實施例中，本發明之抗體包含選自λ1、λ2、λ3、λ4、λ5、λ6及λ7之λ輕鏈。
在一些實施例中，例示性抗gp120抗體4之VH (例如，與SEQ ID NO: 7具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列，或具有0至5 (即，1、2、3、4或5)個胺基酸取代(例如，於SEQ ID NO: 7內之保守取代)之胺基酸序列)係直接連接至，或經由介入胺基酸序列(例如，G-S連接子)連接至野生型IgG1m3序列(SEQ ID NO: 77)。在某些實施例中，例示性抗gp120抗體4之VH (例如，與SEQ ID NO: 7具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列，或具有0至5 (即，1、2、3、4或5)個胺基酸取代(例如，於SEQ ID NO: 7內之保守取代)之胺基酸序列)係直接連接，或經由介入胺基酸序列(例如，G-S連接子)連接至在SEQ ID NO: 77中具有1至10 (例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個胺基酸取代(例如，以降低效應功能及/或增加半衰期)之突變體IgG1m3序列。例示性胺基酸取代稍後描述於本發明中。
在一些實施例中，例示性抗gp120抗體4之VL (例如，與SEQ ID NO: 83具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列，或具有0至5 (即，1、2、3、4或5)個胺基酸取代(例如，於SEQ ID NO: 83內之保守取代)之胺基酸序列)係直接連接至，或經由介入胺基酸序列(例如，G-S連接子)連接至野生型人類λ 2序列(SEQ ID NO: 89)。在某些實施例中，例示性抗gp120抗體4之VL (例如，與SEQ ID NO: 83具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列，或具有0至5 (即，1、2、3、4或5)個胺基酸取代(例如，於SEQ ID NO: 83內之保守取代)之胺基酸序列)係直接連接至，或經由介入胺基酸序列(例如，G-S連接子)連接至於SEQ ID NO: 89內具有1至5 (即，1、2、3、4、5)個取代之突變體人類λ 2序列。
在一特定實施例中，抗gp120抗體係人類IgG1m3/人類λ2抗體。
例示性抗gp120抗體4可用作單特異性或多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)。可採用全抗體或抗原結合片段(例如，Fab、F(ab)2、Fv、scFv、sc(Fv)2、雙功能抗體)。
抗體(諸如例示性抗gp120抗體4)可(例如)藉由製備並表現編碼該抗體之胺基酸序列之核酸製得。
例示性抗gp120抗體5 另一例示性抗gp120抗體(例示性抗gp120抗體5)具有與例示性抗gp120抗體1相同之六個CDR。此抗體包括包含SEQ ID NO: 7中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 7中所示之胺基酸序列組成之VH序列及包含下文提供之胺基酸序列或由下文提供之胺基酸序列組成之VL序列： SDISVAPGETARISCGEKSLGSRAVQWYQHRAGQAPSLIIYNNQDRPSGIPERFSGSPGSRPGTTATLTITSVEAGDEADYYCHIWDSRVPTKWVFGGGTTLTVL (SEQ ID NO: 84)
在某些實例中，VL係直接連接至，或經由介入胺基酸序列(例如，G-S連接子)連接至人類λ恆定區。
例示性抗gp120抗體5包括包含SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列組成之重鏈，及包含下文所示之胺基酸序列或由下文所示之胺基酸序列組成之輕鏈： SDISVAPGETARISCGEKSLGSRAVQWYQHRAGQAPSLIIYNNQDRPSGIPERFSGSPG SRPGTTATLTITSVEAGDEADYYCHIWDSRVPTKWVFGGGTTLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQ ID NO: 80)
在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合包含SEQ ID NO: 21中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 21中所示之胺基酸序列組成之蛋白質。在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合包含SEQ ID NO: 38中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 38中所示之胺基酸序列組成之蛋白質。在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合游離HIV-1病毒。在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合受HIV-1感染之細胞。在一些實例中，本發明之抗gp120抗體結合游離HIV-1病毒及受HIV-1感染之細胞兩者。在某些實例中，本發明之抗gp120抗體結合HIV-1之至少兩種不同菌株(例如，M群、N群、O群或P群)。在一項實施例中，本發明之抗gp120抗體結合pWITO.c/2474 (登錄號JN944948及NIH愛滋病試劑計劃目錄編號11739)。在另一實施例中，本發明之抗gp120抗體結合pCH058.c/2960 (登錄號JN944940及NIH愛滋病試劑計劃目錄編號700010058)。
在一些實施例中，例示性抗gp120抗體5之可變重鏈係連接至包含CH1域及鉸鏈區之重鏈恆定區。在一些實施例中，例示性抗gp120抗體5之可變重鏈係連接至包含CH3域之重鏈恆定區。在某些實施例中，例示性抗gp120抗體5之可變重鏈係連接至包含CH1域、鉸鏈區及來自IgG4之CH2域及CH3域(例如，來自IgG1)之重鏈恆定區。在某些實施例中，例示性抗gp120抗體1之可變重鏈係連接至包含來自IgG1 (例如，人類IgG1，例如，IgG1m3同種異型)及IgG3鉸鏈區(例如，WO2017/096221中描述之「開放式」 IgG3鉸鏈變體「IgG3 C-」)之CH1域、CH2域及CH3域之重鏈恆定區。在某些實施例中，此嵌合抗體在重鏈恆定區中含有一或多個另外突變，該等另外突變增加嵌合抗體之穩定性。在某些實施例中，該重鏈恆定區包括修飾該抗體之性質之取代(例如，降低Fc受體結合、增加或減少抗體醣化、降低結合至C1q、增加半衰期、降低效應功能)。
在某些實施例中，抗gp120抗體係IgG抗體。在一項實施例中，該抗體係IgG1。在另一實施例中，該抗體係IgG2。在一些實施例中，該抗體具有嵌合重鏈恆定區(例如，具有CH1、鉸鏈及IgG4之CH2區及IgG1之CH3區)。
在特定實施例中，本發明之抗體包括具有G1m1；nG1m2；G1m3；G1m17,1；G1m17,1,2；G1m3,1；或G1m17之同種異型之IgG1重鏈。
在某些實施例中，抗gp120抗體係人類IgG1/人類κ抗體。在一些實施例中，本發明之抗體包含具有選自Km1；Km1,2；或Km3之同種異型之κ輕鏈。在某些實施例中，該抗gp120抗體係人類IgG1/人類λ抗體。在一些實施例中，本發明之抗體包含選自λ1、λ2、λ3、λ4、λ5、λ6及λ7之λ輕鏈。
在一些實施例中，例示性抗gp120抗體5之VH (例如，與SEQ ID NO: 7具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列，或具有0至5 (即，1、2、3、4或5)個胺基酸取代(例如，於SEQ ID NO: 7內之保守取代)之胺基酸序列)係直接連接至，或經由介入胺基酸序列(例如，G-S連接子)連接至野生型IgG1m3序列(SEQ ID NO: 77)。在某些實施例中，例示性抗gp120抗體5之VH (例如，與SEQ ID NO: 7具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列，或具有0至5 (即，1、2、3、4或5)個胺基酸取代(例如，於SEQ ID NO: 7內之保守取代)之胺基酸序列)係直接連接至，或經由介入胺基酸序列(例如，G-S連接子)連接至在SEQ ID NO: 77中具有1至10 (例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個胺基酸取代(例如，以降低效應功能及/或增加半衰期)之突變體IgG1m3序列。例示性胺基酸取代稍後描述於本發明中。
在一些實施例中，例示性抗gp120抗體5之VL (例如，與SEQ ID NO: 84具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列，或具有0至5 (即，1、2、3、4或5)個胺基酸取代(例如，於SEQ ID NO: 84內之保守取代)之胺基酸序列)係直接連接至，或經由介入胺基酸序列(例如，G-S連接子)連接至野生型人類λ 2序列(SEQ ID NO: 89)。在某些實施例中，例示性抗gp120抗體5之VL (例如，與SEQ ID NO: 84具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列，或具有0至5 (即，1、2、3、4或5)個胺基酸取代(例如，於SEQ ID NO: 84內之保守取代)之胺基酸序列)係直接連接至，或經由介入胺基酸序列(例如，G-S連接子)連接至於SEQ ID NO: 89內具有1至5 (即，1、2、3、4、5)個取代之突變體人類λ 2序列。
在一特定實施例中，抗gp120抗體係人類IgG1m3/人類λ2抗體。
例示性抗gp120抗體5可用作單特異性或多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)。全抗體或抗原結合片段(例如，Fab、F(ab)2、Fv、scFv、sc(Fv)2、雙功能抗體)係包含於本發明內。
抗體(諸如例示性抗gp120抗體5)可(例如)藉由製備並表現編碼該抗體之胺基酸序列之核酸製得。
CD3 分化簇(CD3)係多聚體蛋白質複合物，該複合物由四種不同之多肽鏈組成：ε(ε)、γ(γ)、δ(δ)及ζ(ζ)，該等多肽鍵組裝在一起並充當三對二聚體(εγ、εδ、ζζ)。CD3蛋白具有N端胞外區、跨膜域及胞質尾，免疫受體酪胺酸活化基元(ITAM)位於該胞質尾。CD3 ε、γ及δ之胞外域含有免疫球蛋白樣域且因此視為免疫球蛋白超家族之一部分。CD3/T細胞共受體有助於活化CD8+ T細胞及亦CD4+ T細胞兩者。
人類CD3ε之胺基酸序列可參見UNiProtKB-P07766且提供於下文(信號序列加底線)：
人類CD3δ之胺基酸序列可參見UNiProtKB-P04234且提供於下文(信號序列加底線)：
結合人類CD3之抗體已為此項技術中熟知(參見，例如，Kuhn及Weiner, Immunotherapy, 8(8):889-906 (2016)；WO 2015/104346))。OKT3 (莫羅單抗(Muromab))(針對CD3ε之抗CD3抗體)已經臨床批准用於人類中以在實體器官移植中誘導免疫抑制來預防及治療排斥(Norman, Therapeutic Drug Monitoring, 17, 615-620 (1995))。替利珠單抗(Teplizumab，亦已知名為hOKT3γ1 (Ala-Ala)及MGA031)係人類化IgG1抗體，該抗體係藉由將OKT3之互補決定區移植至人類IgG1骨架內研發。在抗體之Fc部分中引入兩點突變降低結合至FcR。奧昔珠單抗(Otelixizumab (ChAglyCD3、TRX4、GSK2136525))係衍生自大鼠抗體YTH12.5。此人類化IgG1在γ1 Fc部分中具有單一突變以避免醣化且因此抑制FcR結合。維西珠單抗(Visilizumab (Nuvion, HuM291))係人類化IgG2抗體，該抗體藉由在其Fc區中之兩點突變呈現非促有絲分裂。弗羅魯單抗(Foralumab (28F11-AE；NI-0401))係完全人類抗CD3 mAb；此人類IgG1之Fc部分係經突變使得該mAb係活體外非FcR結合並顯示僅較小活體內細胞介素釋放同時維持對CD3/TCR及T細胞消耗之調節。
抗CD3抗體之非限制性實例亦揭示於US 2016/0333095A1中。
在某些實施例中，本發明之抗CD3抗體結合人類CD3。在一些實例中，本發明之抗CD3抗體結合人類CD3ε。在其他實施例中，本發明之抗CD3抗體結合人類CD3δ。
例示性抗CD3抗體1 例示性抗CD3抗體1之相關序列資訊提供於表4中。 表4
抗CD3抗體可包含例示性抗CD3抗體1之重鏈CDR1、CDR2及CDR3及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3。在一項實施例中，該等CDR係基於Kabat定義加以定義。在另一實施例中，該等CDR係基於Chothia定義加以定義。在另一實施例中，該等CDR係基於IMGT定義加以定義。在另一實施例中，該等CDR係基於Honegger定義加以定義。在另一實施例中，該等CDR係基於來自Abysis定義之Chothia加以定義。在另一實施例中，該等CDR係基於Chothia/AbM CDR加以定義。在另一實施例中，該等CDR係基於contact定義加以定義。此等CDR可(例如)藉由使用AbYsis資料庫(www.bioinf.org.uk/abysis/sequence_input/key_annotation/key_annotation.cgi)判定。
在某些實例中，抗CD3抗體包含與例示性抗CD3抗體1之可變重鏈具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，抗CD3抗體包含與例示性抗CD3抗體1之重鏈具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列。在某些實例中，抗CD3抗體包含與例示性抗CD3抗體1之可變輕鏈具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列。在某些實例中，抗CD3抗體包含與例示性抗CD3抗體1之輕鏈具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，抗CD3抗體包含與例示性抗CD3抗體1之可變重鏈及可變輕鏈具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，抗CD3抗體包含與例示性抗CD3抗體1之重鏈具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列及包含與例示性抗CD3抗體1之輕鏈具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列。
在一些實施例中，例示性抗CD3抗體1之可變重鏈係連接至包含CH1域及鉸鏈區之重鏈恆定區。在一些實施例中，例示性抗CD3抗體1之可變重鏈係連接至包含CH3域之重鏈恆定區。在某些實施例中，例示性抗CD3抗體1之可變重鏈係連接至包含CH1域、鉸鏈區及來自IgG4之CH2域及CH3域(例如，來自IgG1)之重鏈恆定區。在某些實施例中，例示性抗gp120抗體1之可變重鏈係連接至包含來自IgG1 (例如，人類IgG1，例如，IgG1m3同種異型)及IgG3鉸鏈區(例如，WO2017/096221中描述之「開放式」 IgG3鉸鏈變體「IgG3 C-」)之CH1域、CH2域及CH3域之重鏈恆定區。在某些實施例中，此嵌合抗體在重鏈恆定區中含有一或多個另外突變，該等另外突變增加嵌合抗體之穩定性。在某些實施例中，該重鏈恆定區包括修飾該抗體之性質之取代(例如，降低Fc受體結合、增加或減少抗體醣化、降低結合至C1q、增加半衰期、降低效應功能)。
在某些實施例中，抗CD3抗體係IgG抗體。在一項實施例中，該抗體係IgG1。在另一實施例中，該抗體係IgG2。在一些實施例中，該抗體具有嵌合重鏈恆定區(例如，具有CH1、鉸鏈及IgG4之CH2區及IgG1之CH3區)。
在特定實施例中，本發明之抗體包括具有G1m1；nG1m2；G1m3；G1m17,1；G1m17,1,2；G1m3,1；或G1m17之同種異型之IgG1重鏈。
在一特定實施例中，例示性抗CD3抗體1之VH係連接至野生型IgG1m3 Fc (SEQ ID NO: 77)。在某些實例中，例示性抗CD3抗體1之VH係連接至經突變之IgG1m3序列，該經突變之IgG1m3序列具有在SEQ ID NO: 77中作出之1至10 (例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個胺基酸取代(例如，以降低效應功能及/或增加半衰期)。下文描述例示性胺基酸取代。
在一個特定實施例中，例示性抗CD3抗體1之VL係連接至人類λ 2序列(SEQ ID NO: 89)。在某些實例中，例示性抗CD3抗體1之VL係連接至突變之人類λ 2序列，該突變之人類λ 2序列具有在SEQ ID NO: 89中作出之1至10 (例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個胺基酸取代。下文描述此等胺基酸取代。
在某些實施例中，抗CD3抗體係人類IgG1/人類λ抗體。
抗體(諸如例示性抗CD3抗體1)可例如藉由製備並表現編碼該抗體之胺基酸序列之核酸製得。
CD89 亦稱為IgA受體之Fc片段(FCAR)之CD89 (分化簇89)係跨膜受體FcαRI。FcαRI結合免疫球蛋白A (IgA)抗體之重鏈恆定區。FcαRI係表現於骨髓譜系細胞之細胞表面上，該等骨髓譜系細胞包括嗜中性球、單核細胞、巨噬細胞及嗜伊紅細胞。
來自UniProtKB - P24071之人類CD89之胺基酸序列係提供於下文：
結合人類CD89之抗體已為此項技術中熟知(參見，例如，Fishwild等人，Nature Biotechnol., 14(7):845-851 (1996)；Duval等人，J. Virol., 82(9): 4671-4674 (2008)；US 2003/0082643)。在一些實施例中，該抗CD89抗體係14.1、7.4或8.2 (亦分別稱為14A8、7F12及8D2)中之任何一者。此等抗體或其變體中之任何一者可用於本文揭示之多特異性抗體中。
在某些實施例中，本發明之抗CD89抗體或本文揭示之多特異性抗體結合至包含SEQ ID NO: 95中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 95中所示之胺基酸序列組成之多肽。
例示性抗CD89抗體1 例示性抗CD89抗體1之相關序列資訊係提供於下表：
抗CD89抗體可包含例示性抗CD89抗體1之重鏈CDR1、CDR2及CDR3及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3。在一項實施例中，該等CDR係基於Kabat定義加以定義。在另一實施例中，該等CDR係基於Chothia定義加以定義。在另一實施例中，該等CDR係基於IMGT定義加以定義。在另一實施例中，該等CDR係基於Honegger定義加以定義。在另一實施例中，該等CDR係基於來自Abysis定義之Chothia加以定義。在另一實施例中，該等CDR係基於Chothia/AbM CDR加以定義。在另一實施例中，該等CDR係基於contact定義加以定義。此等CDR可(例如)藉由使用AbYsis資料庫(www.bioinf.org.uk/abysis/sequence_input/key_annotation/key_annotation.cgi)判定。
在某些實例中，抗CD89抗體包含與例示性抗CD89抗體1之可變重鏈具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，抗CD89抗體包含與例示性抗CD89抗體1之重鏈具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列。在某些實例中，抗CD89抗體包含與例示性抗CD89抗體1之可變輕鏈具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列。在某些實例中，抗CD89抗體包含與例示性抗CD89抗體1之輕鏈具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，抗CD89抗體包含與例示性抗CD89抗體1之可變重鏈及可變輕鏈具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列。在一些實施例中，抗CD89抗體包含與例示性抗CD89抗體1之重鏈具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列及包含與例示性抗CD89抗體1之輕鏈具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之胺基酸序列。
在一些實施例中，例示性抗CD89抗體1之可變重鏈係連接至包含CH1域及鉸鏈區之重鏈恆定區。在一些實施例中，例示性抗CD89抗體1之可變重鏈係連接至包含CH3域之重鏈恆定區。在某些實施例中，例示性抗CD89抗體1之可變重鏈係連接至包含CH1域、鉸鏈區及來自IgG4之CH2域及CH3域(例如，來自IgG1)之重鏈恆定區。在某些實施例中，例示性抗CD89抗體1之可變重鏈係連接至包含來自IgG1 (例如，人類IgG1，例如，IgG1m3同種異型)及IgG3鉸鏈區(例如，WO2017/096221中描述之「開放式」 IgG3鉸鏈變體「IgG3 C-」)之CH1域、CH2域及CH3域之重鏈恆定區。在某些實施例中，此嵌合抗體在重鏈恆定區中含有一或多個另外突變，該等另外突變增加嵌合抗體之穩定性。在某些實施例中，該重鏈恆定區包括修飾該抗體之性質之取代(例如，降低Fc受體結合、增加或減少抗體醣化、降低結合至C1q、增加半衰期、降低效應功能)。
在某些實施例中，抗CD89抗體係IgG抗體。在一項實施例中，該抗體係IgG1。在另一實施例中，該抗體係IgG2。在一些實施例中，該抗體具有嵌合重鏈恆定區(例如，具有CH1、鉸鏈及IgG4之CH2區及IgG1之CH3區)。
在特定實施例中，本發明之抗體包括具有G1m1；nG1m2；G1m3；G1m17,1；G1m17,1,2；G1m3,1；或G1m17之同種異型之IgG1重鏈。
在一特定實施例中，例示性抗CD89抗體1之VH係連接至野生型IgG1m3 Fc (SEQ ID NO: 77)。在某些實例中，例示性抗CD89抗體1之VH係連接至經突變之IgG1m3序列，該經突變之IgG1m3序列具有在SEQ ID NO: 77中作出之1至10 (例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個胺基酸取代(例如，以降低效應功能及/或增加半衰期)。下文描述例示性胺基酸取代。
在一個特定實施例中，例示性抗CD89抗體1之VL係連接至人類λ 2序列(SEQ ID NO: 89)。在某些實例中，例示性抗CD89抗體1之VL係連接至突變之人類λ 2序列，該突變之人類λ 2序列具有在SEQ ID NO: 89中作出之1至10 (例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個胺基酸取代。下文描述此等胺基酸取代。
在某些實施例中，抗CD89抗體係人類IgG1/人類λ抗體。
抗體(諸如例示性抗CD89抗體1)可例如藉由製備並表現編碼該抗體之胺基酸序列之核酸製得。
多特異性抗體 在另一態樣中，本發明之特徵在於多特異性抗體。多特異性抗體係結合兩個或更多個不同抗原決定基之抗體(例如雙特異性抗體、三價抗體、四價抗體)。可包含上文描述之抗gp120及抗CD3抗體或抗gp120及抗CD89作為多特異性抗體之一部分。該等多特異性抗體可具有未被該多特異性抗體之抗gp120或抗CD3 (或抗CD89)抗體結合位點結合之至少一個其他抗原或一個其他抗原決定基之結合位點。抗gp120/抗CD3多特異性抗體或抗gp120/抗CD89多特異性抗體可包含一個二聚化域及三個或更多個(例如三、四、五、六個)抗原結合位點。一個例示性二聚化域包含Fc區(或由Fc區組成)。抗gp120/抗CD3多特異性抗體或抗gp120/抗CD89多特異性抗體可包含(或由)三至約八個(即三、四、五、六、七、八個)抗原結合位點(組成)。該多特異性抗體視需要包含至少一條多肽鏈(例如兩條多肽鏈、三條多肽鏈)，其中該(等)多肽鏈包含三個或更多個可變域。例如，該(等)多肽鏈可包含例如VD1-(X1)n -VD2-(X2)n -Fc或VD1-(X1)n -VD2-(X2)n -VD3-(X3)n -Fc，其中VD1係第一可變域，VD2係第二可變域，VD3係第三可變域，Fc係Fc區之多肽鏈，X1、X2及X3表示胺基酸或肽間隔子，及n係0或1。在某些實例中，該等可變域可各為scFv。多特異性抗體可輕易藉由編碼該抗體之多肽鏈之核酸重組表現產生。
雙特異性抗體 在一項態樣中，多特異性抗體係雙特異性抗體。雙特異性抗體係對兩種不同抗原決定基具有結合特異性之抗體。雙特異性抗體具有兩個「臂」。雙特異性抗體之一個臂結合一種抗原決定基及另一個臂結合另一種抗原決定基。在一項實施例中，該雙特異性抗體之一個臂結合第一抗原及該雙特異性抗體之另一個臂結合第二抗原。在另一實施例中，該雙特異性抗體之兩個臂結合至相同抗原之兩種不同抗原決定基。
在一項態樣中，本發明之特徵在於特異性結合至gp120及特異性結合至第二抗原(例如，白血球上之觸發分子，諸如T細胞受體分子(例如，CD3)，或針對IgG之Fc受體(FcγR)，諸如FcγRI (CD64)、FcγRII (CD32)、FcγRIII (CD16)或CD89)，以便於將細胞防禦機制聚焦並定位至受感染之細胞))之雙特異性抗體。
在一特定實施例中，雙特異性抗體之一個臂特異性結合至gp120及另一個臂特異性結合至CD3 (例如，人類CD3 (例如，人類CD3ε、人類CD3δ))。在另一特定實施例中，該雙特異性抗體之一個臂特異性結合至gp120及另一個臂特異性結合至CD89 (例如，人類CD89)。在某些實施例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂包含例示性抗gp120抗體1之六個CDR。在一些實例中，該等CDR係根據Kabat定義。在其他實施例中，該等CDR係根據Chothia定義。在又其他實施例中，該等CDR係根據IMGT定義加以定義。在又其他實施例中，該等CDR係根據Honegger定義加以定義。在某些實施例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂包含與例示性抗gp120抗體1之VH (SEQ ID NO: 7)至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實施例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂包含與例示性抗gp120抗體1之VL (SEQ ID NO: 8)至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實施例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂包含分別與例示性抗gp120抗體1之VH (SEQ ID NO: 7)及VL (SEQ ID NO: 8)至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實施例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂包含分別與例示性抗gp120抗體2之VH (SEQ ID NO: 7)及VL (SEQ ID NO: 81)至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實施例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂包含分別與例示性抗gp120抗體3之VH (SEQ ID NO: 7)及VL (SEQ ID NO: 82)至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實施例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂包含分別與例示性抗gp120抗體4之VH (SEQ ID NO: 7)及VL (SEQ ID NO: 83)至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實施例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂包含分別與例示性抗gp120抗體5之VH (SEQ ID NO: 7)及VL (SEQ ID NO: 84)至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實施例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂包含與例示性抗gp120抗體1之重鏈(SEQ ID NO: 9)至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實施例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂包含與例示性抗gp120抗體1之輕鏈(SEQ ID NO: 10)至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實施例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂包含分別與例示性抗gp120抗體1之重鏈(SEQ ID NO: 9)及輕鏈(SEQ ID NO: 10)至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂包含分別與例示性抗gp120抗體2之重鏈(SEQ ID NO: 9)及輕鏈(SEQ ID NO: 40)至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂包含分別與例示性抗gp120抗體3之重鏈(SEQ ID NO: 9)及輕鏈(SEQ ID NO: 78)至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂包含分別與例示性抗gp120抗體4之重鏈(SEQ ID NO: 9)及輕鏈(SEQ ID NO: 79)至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂包含分別與例示性抗gp120抗體5之重鏈(SEQ ID NO: 9)及輕鏈(SEQ ID NO: 80)至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同之胺基酸序列。在一項實施例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂包含SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 8之胺基酸序列。在另一實施例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂包含SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 81之胺基酸序列。在另一實施例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂包含SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 82之胺基酸序列。在又另一實施例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂包含SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 83之胺基酸序列。在另一實施例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂包含SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 84之胺基酸序列。在一項特定實施例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂包含SEQ ID NO: 9及SEQ ID NO: 10之胺基酸序列。在另一特定實施例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂包含SEQ ID NO: 9及SEQ ID NO: 40之胺基酸序列。在又另一特定實施例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂包含SEQ ID NO: 9及SEQ ID NO: 78之胺基酸序列。在另一實施例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂包含SEQ ID NO: 9及SEQ ID NO: 79之胺基酸序列。在另一實施例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂包含SEQ ID NO: 9及SEQ ID NO: 80之胺基酸序列。在一些實例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂結合包含SEQ ID NO: 21中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 21中所示之胺基酸序列組成之蛋白質。在一些實例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂結合包含SEQ ID NO: 38中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 38中所示之胺基酸序列組成之蛋白質。在一些實例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂結合游離HIV-1病毒。在一些實例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂結合受HIV-1感染之細胞。在一些實例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂結合游離HIV-1病毒及受HIV-1感染之細胞兩者。在某些實例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂結合HIV-1之至少兩種不同菌株(例如，M群、N群、O群或P群)。在一項實施例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂結合pWITO.c/2474 (登錄號JN944948及NIH愛滋病試劑計劃目錄編號11739)。在另一實施例中，雙特異性抗體之結合至gp120之臂結合pCH058.c/2960 (登錄號JN944940及NIH愛滋病試劑計劃目錄編號700010058)。
在某些實施例中，雙特異性抗體之結合至人類CD3之臂包含例示性抗人類CD3抗體1之六個CDR。在一些實例中，該等CDR係根據Kabat加以定義。在其他實施例中，該等CDR係根據Chothia加以定義。在又其他實施例中，該等CDR係根據IMGT定義加以定義。在又其他實施例中，該等CDR係根據Honegger定義加以定義。在某些實施例中，雙特異性抗體之結合至人類CD3之臂包含與例示性抗CD3抗體1之VH (SEQ ID NO: 17)至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實施例中，雙特異性抗體之結合至人類CD3之臂包含與例示性抗CD3抗體1之VL (SEQ ID NO: 18)至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實施例中，雙特異性抗體之結合至人類CD3之臂包含分別與例示性抗人類CD3抗體1之VH (SEQ ID NO: 17)及VL (SEQ ID NO: 18)至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實施例中，雙特異性抗體之結合至人類CD3之臂包含與例示性抗人類CD3抗體1之重鏈(SEQ ID NO: 19)至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實施例中，雙特異性抗體之結合至CD3之臂包含與例示性抗人類CD3抗體1之輕鏈(SEQ ID NO: 20)至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實施例中，雙特異性抗體之結合至人類CD3之臂包含分別與例示性抗人類CD3抗體1之重鏈(SEQ ID NO: 19)及輕鏈(SEQ ID NO: 20)至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同之胺基酸序列。在一特定實施例中，雙特異性抗體之結合至人類CD3之臂包含SEQ ID NO: 17及SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。在另一特定實施例中，雙特異性抗體之結合至人類CD3之臂包含SEQ ID NO: 19及SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。在某些實施例中，雙特異性抗體之結合至人類CD3之臂結合至人類CD3ε。
在某些實施例中，雙特異性抗體之結合至人類CD89之臂包含例示性抗人類CD89抗體1之六個CDR。在一些實例中，該等CDR係根據Kabat加以定義。在其他實施例中，該等CDR係根據Chothia加以定義。在又其他實施例中，該等CDR係根據IMGT定義加以定義。在又其他實施例中，該等CDR係根據Honegger定義加以定義。在某些實施例中，雙特異性抗體之結合至人類CD89之臂包含與例示性抗CD89抗體1之VH (SEQ ID NO: 96)至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實施例中，雙特異性抗體之結合至人類CD89之臂包含與例示性抗CD89抗體1之VL (SEQ ID NO: 101)至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實施例中，雙特異性抗體之結合至人類CD89之臂包含分別與例示性抗人類CD89抗體1之VH (SEQ ID NO: 96)及VL (SEQ ID NO: 101)至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實施例中，雙特異性抗體之結合至人類CD89之臂包含與例示性抗人類CD89抗體1之重鏈(SEQ ID NO: 97)至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實施例中，雙特異性抗體之結合至CD89之臂包含與例示性抗人類CD89抗體1之輕鏈(SEQ ID NO: 102)至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同之胺基酸序列。在某些實施例中，雙特異性抗體之結合至人類CD89之臂包含分別與例示性抗人類CD89抗體1之重鏈(SEQ ID NO: 97)及輕鏈(SEQ ID NO: 102)至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同之胺基酸序列。在一特定實施例中，雙特異性抗體之結合至人類CD89之臂包含SEQ ID NO: 96及SEQ ID NO: 101之胺基酸序列。在另一特定實施例中，雙特異性抗體之結合至人類CD89之臂包含SEQ ID NO: 97及SEQ ID NO: 102之胺基酸序列。在某些實施例中，雙特異性抗體之結合至人類CD89之臂結合至人類CD89。
在某些實施例中，雙特異性抗體之一個臂包含結合gp120之scFv。在某些實施例中，雙特異性抗體之一個臂包含結合人類CD3之scFv。在某些實施例中，雙特異性抗體之一個臂包含結合人類CD89之scFv。在某些實施例中，雙特異性抗體可包括嵌合抗體或人類化抗體。在某些實施例中，雙特異性抗體可包含F(ab’)2片段。
在一項態樣中，本發明之雙特異性抗體結合至gp120及人類CD3 (例如，CD3ε、CD3δ)且可完成對受HIV-1感染之細胞之殺死。在一項實例中，結合至gp120之此雙特異性抗體含有SEQ ID NO: 1之VH-CDR1、SEQ ID NO: 2之VH-CDR2、SEQ ID NO: 3之VH-CDR3、SEQ ID NO: 4之VL-CDR1、SEQ ID NO: 5之VL-CDR2及SEQ ID NO: 6之VL-CDR3。在一項實例中，結合至人類CD3之此雙特異性抗體含有SEQ ID NO: 1之VH-CDR11、SEQ ID NO: 12之VH-CDR2、SEQ ID NO: 13之VH-CDR3、SEQ ID NO: 14之VL-CDR1、SEQ ID NO: 15之VL-CDR2及SEQ ID NO: 16之VL-CDR3。在另一實例中，結合至gp120及人類CD3之雙特異性抗體在其gp120結合臂上含有：SEQ ID NO: 1之VH-CDR1、SEQ ID NO: 2之VH-CDR2、SEQ ID NO: 3之VH-CDR3、SEQ ID NO: 4之VL-CDR1、SEQ ID NO: 5之VL-CDR2及SEQ ID NO: 6之VL-CDR3；及在其人類CD3結合臂上含有：SEQ ID NO: 1之VH-CDR11、SEQ ID NO: 12之VH-CDR2、SEQ ID NO: 13之VH-CDR3、SEQ ID NO: 14之VL-CDR1、SEQ ID NO: 15之VL-CDR2及SEQ ID NO: 16之VL-CDR3。
在另一實例中，此雙特異性抗體在其gp120結合臂上含有具有與SEQ ID NO: 7至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或至少98%相同之胺基酸序列之VH。在另一實例中，此雙特異性抗體在其gp120結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代、插入及/或刪除外與SEQ ID NO: 7相同之胺基酸序列之VH。在另一實例中，此雙特異性抗體在其gp120結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代外與SEQ ID NO: 7相同之胺基酸序列之VH。在另一實例中，此雙特異性抗體在其gp120結合臂上含有具有與SEQ ID NO: 8、81、82、83或84至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或至少98%相同之胺基酸序列之VL。在另一實例中，此雙特異性抗體在其gp120結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代、插入及/或刪除外與SEQ ID NO: 8、81、82、83或84相同之胺基酸序列之VL。在另一實例中，此雙特異性抗體在其gp120結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代外與SEQ ID NO: 8、81、82、83或84相同之胺基酸序列之VL。在另一實例中，此雙特異性抗體在其gp120結合臂上含有具有與SEQ ID NO: 9至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或至少98%相同之胺基酸序列之重鏈。在另一實例中，此雙特異性抗體在其gp120結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代、插入及/或刪除外與SEQ ID NO: 9相同之胺基酸序列之重鏈。在另一實例中，此雙特異性抗體在其gp120結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代外與SEQ ID NO: 9相同之胺基酸序列之重鏈。在另一實例中，此雙特異性抗體在其gp120結合臂上含有具有與SEQ ID NO: 10、40、78、79或80至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或至少98%相同之胺基酸序列之輕鏈。在另一實例中，此雙特異性抗體在其gp120結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代、插入及/或刪除外與SEQ ID NO: 10、40、78、79或80相同之胺基酸序列之輕鏈。在另一實例中，此雙特異性抗體在其gp120結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代外與SEQ ID NO: 10、40、78、79或80相同之胺基酸序列之輕鏈。
在另一實例中，此雙特異性抗體在其人類CD3結合臂上含有具有與SEQ ID NO: 17至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或至少98%相同之胺基酸序列之VH。在另一實例中，此雙特異性抗體在其人類CD3結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代、插入及/或刪除外與SEQ ID NO: 17相同之胺基酸序列之VH。在另一實例中，此雙特異性抗體在其人類CD3結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代外與SEQ ID NO: 17相同之胺基酸序列之VH。在另一實例中，此雙特異性抗體在其人類CD3結合臂上含有具有與SEQ ID NO: 18至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或至少98%相同之胺基酸序列之VL。在另一實例中，此雙特異性抗體在其人類CD3結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代、插入及/或刪除外與SEQ ID NO: 18相同之胺基酸序列之VL。在另一實例中，此雙特異性抗體在其人類CD3結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代外與SEQ ID NO: 18相同之胺基酸序列之VL。在另一實例中，此雙特異性抗體在其人類CD3結合臂上含有具有與SEQ ID NO: 19至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或至少98%相同之胺基酸序列之重鏈。在另一實例中，此雙特異性抗體在其人類CD3結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代、插入及/或刪除外與SEQ ID NO: 19相同之胺基酸序列之重鏈。在另一實例中，此雙特異性抗體在其人類CD3結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代外與SEQ ID NO: 19相同之胺基酸序列之重鏈。在另一實例中，此雙特異性抗體在其人類CD3結合臂上含有具有與SEQ ID NO: 20至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或至少98%相同之胺基酸序列之輕鏈。在另一實例中，此雙特異性抗體在其人類CD3結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代、插入及/或刪除外與SEQ ID NO: 20相同之胺基酸序列之輕鏈。在另一實例中，此雙特異性抗體在其人類CD3結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代外與SEQ ID NO: 20相同之胺基酸序列之輕鏈。
在一項態樣中，本發明之雙特異性抗體結合至gp120及人類CD89且可完成對受HIV-1感染之細胞之殺死。CD89係主要表現於嗜中性球上之IgA受體且因此此雙特異性抗體可增強嗜中性球之募集以殺死受HIV感染之細胞。在一項實例中，結合至gp120之此雙特異性抗體含有SEQ ID NO: 1之VH-CDR1、SEQ ID NO: 2之VH-CDR2、SEQ ID NO: 3之VH-CDR3、SEQ ID NO: 4之VL-CDR1、SEQ ID NO: 5之VL-CDR2及SEQ ID NO: 6之VL-CDR3。在一項實例中，結合至人類CD89之此雙特異性抗體含有SEQ ID NO: 98之VH-CDR1、SEQ ID NO: 99之VH-CDR2、SEQ ID NO: 100之VH-CDR3、SEQ ID NO: 103之VL-CDR1、SEQ ID NO: 104之VL-CDR2及SEQ ID NO: 105之VL-CDR3。在另一實例中，結合至gp120及人類CD89之雙特異性抗體在其gp120結合臂上含有：SEQ ID NO: 1之VH-CDR1、SEQ ID NO: 2之VH-CDR2、SEQ ID NO: 3之VH-CDR3、SEQ ID NO: 4之VL-CDR1、SEQ ID NO: 5之VL-CDR2及SEQ ID NO: 6之VL-CDR3；及在其人類CD89結合臂上含有：SEQ ID NO: 98之VH-CDR1、SEQ ID NO: 99之VH-CDR2、SEQ ID NO: 100之VH-CDR3、SEQ ID NO: 103之VL-CDR1、SEQ ID NO: 104之VL-CDR2及SEQ ID NO: 105之VL-CDR3。
在另一實例中，此雙特異性抗體在其gp120結合臂上含有具有與SEQ ID NO: 7至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或至少98%相同之胺基酸序列之VH。在另一實例中，此雙特異性抗體在其gp120結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代、插入及/或刪除外與SEQ ID NO: 7相同之胺基酸序列之VH。在另一實例中，此雙特異性抗體在其gp120結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代外與SEQ ID NO: 7相同之胺基酸序列之VH。在另一實例中，此雙特異性抗體在其gp120結合臂上含有具有與SEQ ID NO: 8、81、82、83或84至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或至少98%相同之胺基酸序列之VL。在另一實例中，此雙特異性抗體在其gp120結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代、插入及/或刪除外與SEQ ID NO: 8、81、82、83或84相同之胺基酸序列之VL。在另一實例中，此雙特異性抗體在其gp120結合臂上含有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代外與SEQ ID NO: 8、81、82、83或84相同之胺基酸序列之VL。在另一實例中，此雙特異性抗體在其gp120結合臂上含有具有與SEQ ID NO: 9至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或至少98%相同之胺基酸序列之重鏈。在另一實例中，此雙特異性抗體在其gp120結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代、插入及/或刪除外與SEQ ID NO: 9相同之胺基酸序列之重鏈。在另一實例中，此雙特異性抗體在其gp120結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代外與SEQ ID NO: 9相同之胺基酸序列之重鏈。在另一實例中，此雙特異性抗體在其gp120結合臂上含有具有與SEQ ID NO: 10、40、78、79或80至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或至少98%相同之胺基酸序列之輕鏈。在另一實例中，此雙特異性抗體在其gp120結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代、插入及/或刪除外與SEQ ID NO: 10、40、78、79或80相同之胺基酸序列之輕鏈。在另一實例中，此雙特異性抗體在其gp120結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代外與SEQ ID NO: 10、40、78、79或80相同之胺基酸序列之輕鏈。
在另一實例中，此雙特異性抗體在其人類CD89結合臂上含有具有與SEQ ID NO: 96至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或至少98%相同之胺基酸序列之VH。在另一實例中，此雙特異性抗體在其人類CD89結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代、插入及/或刪除外與SEQ ID NO: 96相同之胺基酸序列之VH。在另一實例中，此雙特異性抗體在其人類CD89結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代外與SEQ ID NO: 96相同之胺基酸序列之VH。在另一實例中，此雙特異性抗體在其人類CD89結合臂上含有具有與SEQ ID NO: 101至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或至少98%相同之胺基酸序列之VL。在另一實例中，此雙特異性抗體在其人類CD89結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代、插入及/或刪除外與SEQ ID NO: 101相同之胺基酸序列之VL。在另一實例中，此雙特異性抗體在其人類CD89結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代外與SEQ ID NO: 101相同之胺基酸序列之VL。在另一實例中，此雙特異性抗體在其人類CD89結合臂上含有具有與SEQ ID NO: 97至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或至少98%相同之胺基酸序列之重鏈。在另一實例中，此雙特異性抗體在其人類CD89結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代、插入及/或刪除外與SEQ ID NO: 97相同之胺基酸序列之重鏈。在另一實例中，此雙特異性抗體在其人類CD89結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代外與SEQ ID NO: 97相同之胺基酸序列之重鏈。在另一實例中，此雙特異性抗體在其人類CD89結合臂上含有具有與SEQ ID NO: 102至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或至少98%相同之胺基酸序列之輕鏈。在另一實例中，此雙特異性抗體在其人類CD89結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代、插入及/或刪除外與SEQ ID NO: 102相同之胺基酸序列之輕鏈。在另一實例中，此雙特異性抗體在其人類CD89結合臂上含有具有除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)個取代外與SEQ ID NO: 102相同之胺基酸序列之輕鏈。
在某些實施例中，雙特異性抗體具有來自其中具有0至10個胺基酸取代之人類IgG1抗體之Fc域。該Fc域含有來自該雙特異性抗體之一種組分(例如，gp120結合部分)之一個「腿」 (鉸鏈-CH2-CH3)及來自該雙特異性抗體之第二組分(例如，CD3-或CD89-結合部分)之另一「腿」 (鉸鏈-CH2-CH3)。該等取代可係在一個「腿」或兩個「腿」中。在某些實施例中，該Fc域在一個「腿」或兩個「腿」中具有下列突變(EU編號)中之一者或多者(1、2、3、4或5)：N297A或N297Q、L234F、L235E、D265A或P331S。
如本文揭示之結合至gp120及CD3或結合至gp120及CD89之雙特異性抗體可藉由化學連接兩種不同單株抗體或藉由融合兩種融合瘤細胞系以產生雜交-融合瘤製備。可採用之其他雙特異性抗體技術平臺包括(例如)Κλ體、SMIP、DNL、Covx體、肽體、股交換改造域體(SEED體)、dAb、雙功能抗體、親和體、Fynomers、Kunitz域、TandAb、奈米抗體、Albu-dab、DART、DVD-IG、scFv-Ig、SVD-Ig、dAb-Ig、杵入臼型抗體、BiTe平臺、CrossMab®平臺、DuoBodies®及TriomAbs®。可用於製造本文揭示之雙特異性抗體之雙特異性形式之非限制性實例係提供於Del Bano等人，Antibodies, 5:1 (2016)；Garber等人，Nature Reviews Drug Discovery, 13:799-801 (2014)中。
在一項實施例中，本發明之雙特異性抗體分子包含具有包含不同抗原結合區之兩個臂之單一抗體，一個臂對第一抗原(諸如gp120)具有特異性且第二臂對第二抗原(諸如人類CD3或人類CD89)具有特異性。在另一實施例中，本發明之雙特異性抗體分子包含具有一個抗原結合區或對第一抗原(諸如gp120)具特異性之臂及第二抗原結合區或對第二抗原(諸如人類CD3或人類CD89)具特異性之臂之單一抗體。在又另一實施例中，本發明之雙特異性抗體分子包含對第一抗原(諸如gp120)具有第一特異性及對第二抗原(諸如人類CD3或人類CD89)具有第二特異性之單鏈抗體，例如，經由由另外之肽連接子串聯連接之兩個scFv。在另一實施例中，本發明之雙特異性抗體分子包括雙重可變域抗體(DVD-Ig)，其中各輕鏈及重鏈含有通過短肽鍵聯串聯之兩個可變域(Wu等人，Generation and Characterization of a Dual Variable Domain Immunoglobulin (DVD-Ig™) Molecule, In: Antibody Engineering, Springer Berlin Heidelberg (2010))。在一些實施例中，該雙特異性抗體係經化學連接之雙特異性(Fab')2片段。在其他實施例中，該雙特異性抗體包含Tandab (即，兩個單鏈雙功能抗體之融合，導致四價雙特異性抗體，該四價雙特異性抗體針對靶抗原中之各者具有兩個結合位點)。在某些實施例中，該雙特異性抗體係可撓性體(flexibody)，其係scFv與雙功能抗體之組合，該組合產生多價分子。在又另一實施例中，該雙特異性抗體包含基於蛋白激酶A中之「二聚化及對接域(docking domain)」之「塢與鎖(dock and lock)」分子，其在施用至Fab時可產生三價雙特異性結合蛋白，該三價雙特異性結合蛋白由連接至不同Fab片段之兩個相同Fab片段組成。在另一實例中，該等雙特異性本發明之抗體包含「蠍子(Scorpion)分子」，該分子包含(例如)融合至人類Fab臂之兩端之兩個scFv。在又另一實施例中，本發明之雙特異性抗體包含雙功能抗體。
雙特異性抗體之例示性類別包括(但不限於) IgG樣分子，該等分子具有互補CH3域以迫使異源二聚化；IgG融合分子，其中全長IgG抗體係融合至另外之Fab片段或Fab片段之一部分；Fc融合分子，其中單鏈Fv分子或穩定化雙功能抗體係融合至重鏈恆定域、Fc區或其部分；Fab融合分子，其中不同Fab片段係融合在一起；重組IgG樣雙重靶向分子，其中該分子之兩側各含有至少兩種不同抗體之Fab片段或Fab片段之一部分；基於scFv及雙功能抗體及重鏈抗體(例如，域抗體、奈米抗體)，其中不同單鏈Fv分子或不同雙功能抗體或不同重鏈抗體(例如，域抗體、奈米抗體)係彼此融合或融合至另一蛋白質或載劑分子。
Fab融合雙特異性抗體之實例包括(但不限於) F(ab)2 (Medarex/AMGEN)、Dual-Action或Bis-Fab (Genentech)、塢與鎖(DNL) (ImmunoMedics)、二價雙特異性(Biotecnol)及Fab-Fv (UCB-Celltech)。
基於scFv-、雙功能抗體及域抗體之實例包括(但不限於)雙特異性T細胞接合體(BITE) (Micromet，串聯雙功能抗體(Tandab) (Affimed)，雙重親和力重靶向技術(DART) (MacroGenics)、單鏈雙功能抗體(Academic)、TCR樣抗體(AIT, ReceptorLogics)、人類血清白蛋白ScFv融合體(Merrimack)及COMBODY (Epigen Biotech)、雙重靶向奈米抗體(Ablynx)及雙重靶向重鏈僅域抗體。
Duobodies 本發明之雙特異性抗體可係結合至gp120及第二抗原(例如，人類CD3，諸如人類CD3ε或人類CD3δ；人類CD89)之Duobody®。Duobody®係雙特異性IgG1抗體，該雙特異性抗體之一個重鏈之恆定區之CH3區中包含K409R突變及在另一重鏈之恆定區之CH3區中包含選自由以下組成之群之突變：F405L、F405A、F405D、F405E、F405H、F405I、F405K、F405M、F405N、F405Q、F405S、F405T、F405V、F405W及F405Y。在一特定實施例中，Duobody®係雙特異性IgG1抗體，該雙特異性抗體之一個重鏈之恆定區之CH3區中包含K409R突變及在另一重鏈之恆定區之CH3區中包含F405L突變。
在某些實施例中，如上文描述之結合至gp120之第一抗原結合域包括包含選自由以下組成之群之突變之人類IgG1重鏈恆定區：F405L、F405A、F405D、F405E、F405H、F405I、F405K、F405M、F405N、F405Q、F405S、F405T、F405V、F405W及F405Y，及如上文描述之結合至人類CD3 (或人類CD89)之第二抗原結合域包括包含K409R突變之人類IgG1重鏈恆定區。
在一項實施例中，如上文描述之結合至gp120之第一抗原結合域包括包含F405L突變之人類IgG1重鏈恆定區，及如上文描述之結合至人類CD3之第二抗原結合域包括包含K409R突變之人類IgG1重鏈恆定區。
在其他實施例中，如上文描述之結合至gp120之第一抗原結合域包括包含K409R突變之人類IgG1重鏈恆定區，及如上文描述之結合至人類CD3 (或人類CD89)之第二抗原結合域包括包含選自由以下組成之群之突變之人類IgG1重鏈恆定區：F405L、F405A、F405D、F405E、F405H、F405I、F405K、F405M、F405N、F405Q、F405S、F405T、F405V、F405W及F405Y。
在一項實施例中，如上文描述之結合至gp120之第一抗原結合域包括包含K409R突變之人類IgG1重鏈恆定區，及如上文描述之結合至人類CD3 (或人類CD89)之第二抗原結合域包括包含F405L突變之人類IgG1重鏈恆定區。
Duobody®之CDR及VH及VL可係上文詳細描述之抗gp120、抗CD3或抗CD89胺基酸序列中之任何一者。
在一項實施例中，Duobody®之gp120結合臂包含SEQ ID NO: 1之VH-CDR1、SEQ ID NO: 2之VH-CDR2、SEQ ID NO: 3之VH-CDR3、SEQ ID NO: 4之VL-CDR1、SEQ ID NO: 5之VL-CDR2及SEQ ID NO: 6之VL-CDR3。在一項實施例中，Duobody®之CD3-結合臂包含SEQ ID NO: 1之VH-CDR11、SEQ ID NO: 12之VH-CDR2、SEQ ID NO: 13之VH-CDR3、SEQ ID NO: 14之VL-CDR1、SEQ ID NO: 15之VL-CDR2及SEQ ID NO: 16之VL-CDR3。在另一實例中，結合至gp120及人類CD3之Duobody®在其gp120結合臂上含有：SEQ ID NO: 1之VH-CDR1、SEQ ID NO: 2之VH-CDR2、SEQ ID NO: 3之VH-CDR3、SEQ ID NO: 4之VL-CDR1、SEQ ID NO: 5之VL-CDR2及SEQ ID NO: 6之VL-CDR3；及在其人類CD3結合臂上含有：SEQ ID NO: 1之VH-CDR11、SEQ ID NO: 12之VH-CDR2、SEQ ID NO: 13之VH-CDR3、SEQ ID NO: 14之VL-CDR1、SEQ ID NO: 15之VL-CDR2及SEQ ID NO: 16之VL-CDR3。
在一項實施例中，Duobody®之gp120結合臂包含SEQ ID NO: 7之VH及SEQ ID NO: 8之VL。在一項實施例中，Duobody®之gp120結合臂包含SEQ ID NO: 7之VH及SEQ ID NO: 81之VL。在一項實施例中，Duobody®之gp120結合臂包含SEQ ID NO: 7之VH及SEQ ID NO: 82之VL。在一項實施例中，Duobody®之gp120結合臂包含SEQ ID NO: 7之VH及SEQ ID NO: 83之VL。在一項實施例中，Duobody®之gp120結合臂包含SEQ ID NO: 7之VH及SEQ ID NO: 84之VL。在一項實施例中，Duobody®之CD3-結合臂包含SEQ ID NO: 17之VH及SEQ ID NO: 18之VL。在一項實施例中，Duobody®之CD89結合臂包含SEQ ID NO: 96之VH及SEQ ID NO: 101之VL。在另一實例中，結合至gp120及人類CD3之Duobody®在其gp120結合臂上含有：SEQ ID NO: 7之VH及SEQ ID NO: 8之VL，及在其人類CD3結合臂上含有：SEQ ID NO: 17之VH及SEQ ID NO: 18之VL。在另一實例中，結合至gp120及人類CD89之Duobody®在其gp120結合臂上含有：SEQ ID NO: 7之VH及SEQ ID NO: 8之VL，及在其人類CD89結合臂上含有：SEQ ID NO: 96之VH及SEQ ID NO: 101之VL。在一項實例中，結合至gp120及人類CD3之Duobody®在其gp120結合臂上含有：SEQ ID NO: 7之VH及SEQ ID NO: 81之VL，及在其人類CD3結合臂上含有：SEQ ID NO: 17之VH及SEQ ID NO: 18之VL。在一項實例中，結合至gp120及人類CD89之Duobody®在其gp120結合臂上含有：SEQ ID NO: 7之VH及SEQ ID NO: 81之VL，及在其人類CD3結合臂上含有：SEQ ID NO: 96之VH及SEQ ID NO: 101之VL。在一項實例中，結合至gp120及人類CD3之Duobody®在其gp120結合臂上含有：SEQ ID NO: 7之VH及SEQ ID NO: 82之VL，及在其人類CD3結合臂上含有：SEQ ID NO: 17之VH及SEQ ID NO: 18之VL。在一項實例中，結合至gp120及人類CD89之Duobody®在其gp120結合臂上含有：SEQ ID NO: 7之VH及SEQ ID NO: 82之VL，及在其人類CD3結合臂上含有：SEQ ID NO: 96之VH及SEQ ID NO: 101之VL。在一項實例中，結合至gp120及人類CD3之Duobody®在其gp120結合臂上含有：SEQ ID NO: 7之VH及SEQ ID NO: 83之VL，及在其人類CD3結合臂上含有：SEQ ID NO: 17之VH及SEQ ID NO: 18之VL。在一項實例中，結合至gp120及人類CD89之Duobody®在其gp120結合臂上含有：SEQ ID NO: 7之VH及SEQ ID NO: 83之VL，及在其人類CD89結合臂上含有：SEQ ID NO: 96之VH及SEQ ID NO: 101之VL。在一項實例中，結合至gp120及人類CD3之Duobody®在其gp120結合臂上含有：SEQ ID NO: 7之VH及SEQ ID NO: 84之VL，及在其人類CD3結合臂上含有：SEQ ID NO: 17之VH及SEQ ID NO: 18之VL。在一項實例中，結合至gp120及人類CD89之Duobody®在其gp120結合臂上含有：SEQ ID NO: 7之VH及SEQ ID NO: 84之VL，及在其人類CD89結合臂上含有：SEQ ID NO: 96之VH及SEQ ID NO: 101之VL。在另一實施例中，結合至gp120及人類CD3之Duobody®包含SEQ ID NO: 9之第一重鏈及SEQ ID NO: 10之第一輕鏈；及SEQ ID NO: 19之第二重鏈及SEQ ID NO: 20之第二輕鏈。在另一實施例中，結合至gp120及人類CD89之Duobody®包含SEQ ID NO: 9之第一重鏈及SEQ ID NO: 10之第一輕鏈；及SEQ ID NO: 97之第二重鏈及SEQ ID NO: 102之第二輕鏈。在另一實施例中，結合至gp120及人類CD3之Duobody®包含SEQ ID NO: 9之第一重鏈及SEQ ID NO: 40之第一輕鏈；及SEQ ID NO: 19之第二重鏈及SEQ ID NO: 20之第二輕鏈。在另一實施例中，結合至gp120及人類CD89之Duobody®包含SEQ ID NO: 9之第一重鏈及SEQ ID NO: 40之第一輕鏈；及SEQ ID NO: 97之第二重鏈及SEQ ID NO: 102之第二輕鏈。在另一實施例中，結合至gp120及人類CD3之Duobody®包含SEQ ID NO: 9之第一重鏈及SEQ ID NO: 78之第一輕鏈；及SEQ ID NO: 19之第二重鏈及SEQ ID NO: 20之第二輕鏈。在另一實施例中，結合至gp120及人類CD89之Duobody®包含SEQ ID NO: 9之第一重鏈及SEQ ID NO: 78之第一輕鏈；及SEQ ID NO: 97之第二重鏈及SEQ ID NO: 102之第二輕鏈。在另一實施例中，結合至gp120及人類CD3之Duobody®包含SEQ ID NO: 9之第一重鏈及SEQ ID NO: 79之第一輕鏈；及SEQ ID NO: 19之第二重鏈及SEQ ID NO: 20之第二輕鏈。在另一實施例中，結合至gp120及人類CD89之Duobody®包含SEQ ID NO: 9之第一重鏈及SEQ ID NO: 79之第一輕鏈；及SEQ ID NO: 97之第二重鏈及SEQ ID NO: 102之第二輕鏈。在另一實施例中，結合至gp120及人類CD3之Duobody®包含SEQ ID NO: 9之第一重鏈及SEQ ID NO: 80之第一輕鏈；及SEQ ID NO: 19之第二重鏈及SEQ ID NO: 20之第二輕鏈。在另一實施例中，結合至gp120及人類CD89之Duobody®包含SEQ ID NO: 9之第一重鏈及SEQ ID NO: 80之第一輕鏈；及SEQ ID NO: 97之第二重鏈及SEQ ID NO: 102之第二輕鏈。在一項實施例中，抗gp120 x CD3 Duobody®或抗gp120 x CD89 Duobody®之重鏈中之任何一者包含與下文所示之一種胺基酸序列至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%或95%、96%、97%、98%、99%或100%相同之胺基酸序列，或除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)個胺基酸取代外與下文提供之胺基酸序列中之任何一者相同之胺基酸序列：
在一項實施例中，抗gp120 x CD3 Duobody®或抗gp120 x CD89 Duobody®之重鏈中之任何一者包含與下文所示之一種胺基酸序列至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%或95%、96%、97%、98%、99%或100%相同之胺基酸序列，或除1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)個胺基酸取代外與下文提供之一種胺基酸序列相同之胺基酸序列：
在一項實施例中，Duobody®之一個重鏈恆定區包含SEQ ID NO: 64中所示之胺基酸序列及Duobody®之另一重鏈恆定區包含SEQ ID NO: 74中所示之胺基酸序列。在另一實施例中，Duobody®之一個重鏈恆定區包含SEQ ID NO: 65中所示之胺基酸序列及Duobody®之另一重鏈恆定區包含SEQ ID NO: 75中所示之胺基酸序列。在另一實施例中，Duobody®之一個重鏈恆定區包含SEQ ID NO: 62中所示之胺基酸序列及Duobody®之另一重鏈恆定區包含SEQ ID NO: 72中所示之胺基酸序列。在又另一實施例中，Duobody®之一個重鏈恆定區包含SEQ ID NO: 63中所示之胺基酸序列及Duobody®之另一重鏈恆定區包含SEQ ID NO: 73中所示之胺基酸序列。
在一項實施例中，Duobody®之gp120結合臂之重鏈具有SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列及Duobody®之gp120結合臂之輕鏈具有SEQ ID NO: 10中所示之胺基酸序列。在另一實施例中，Duobody®之gp120結合臂之重鏈具有SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列及Duobody®之gp120結合臂之輕鏈具有SEQ ID NO: 40中所示之胺基酸序列。在另一實施例中，Duobody®之gp120結合臂之重鏈具有SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列及Duobody®之gp120結合臂之輕鏈具有SEQ ID NO: 78中所示之胺基酸序列。在另一實施例中，Duobody®之gp120結合臂之重鏈具有SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列及Duobody®之gp120結合臂之輕鏈具有SEQ ID NO: 79中所示之胺基酸序列。在又另一實施例中，Duobody®之gp120結合臂之重鏈具有SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列及Duobody®之gp120結合臂之輕鏈具有SEQ ID NO: 80中所示之胺基酸序列。
在一項實施例中，gp120 X CD3 Duobody®之CD3結合臂之重鏈包含SEQ ID NO: 19中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 19中所示之胺基酸序列組成及Duobody®之CD3結合臂之輕鏈包含SEQ ID NO: 20中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 20中所示之胺基酸序列組成。
在一項實施例中，gp120 X CD89 Duobody®之CD89結合臂之重鏈包含SEQ ID NO: 97中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 97中所示之胺基酸序列組成及Duobody®之CD3結合臂之輕鏈包含SEQ ID NO: 102中所示之胺基酸序列或由SEQ ID NO: 102中所示之胺基酸序列組成。
在一項實施例中，gp120 X CD3 Duobody®包含兩個臂，第一臂包含結合gp120之重鏈及輕鏈，其中Duobody®之gp120結合臂之重鏈包含與SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或98%相同之胺基酸序列及gp120結合臂之輕鏈包含與SEQ ID NO: 10、40、78、79或80中所示之胺基酸序列至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或98%相同之胺基酸序列，及第二臂包含結合CD3之重鏈及輕鏈，其中Duobody®之CD3結合臂之重鏈包含與SEQ ID NO: 19中所示之胺基酸序列至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或98%相同之胺基酸序列及CD3結合臂之輕鏈包含與SEQ ID NO: 20中所示之胺基酸序列至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或98%相同之胺基酸序列。
在一項實施例中，gp120 X CD89 Duobody®包含兩個臂，第一臂包含結合gp120之重鏈及輕鏈，其中Duobody®之gp120結合臂之重鏈包含與SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或98%相同之胺基酸序列及gp120結合臂之輕鏈包含與SEQ ID NO: 10、40、78、79或80中所示之胺基酸序列至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或98%相同之胺基酸序列，及第二臂包含結合CD89之重鏈及輕鏈，其中Duobody®之CD89結合臂之重鏈包含與SEQ ID NO: 97中所示之胺基酸序列至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或98%相同之胺基酸序列及CD89結合臂之輕鏈包含與SEQ ID NO: 102中所示之胺基酸序列至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或98%相同之胺基酸序列。
在一項特定實施例中，gp120 X CD3 Duobody®包含兩個臂，第一臂包含結合gp120之重鏈及輕鏈，其中Duobody®之gp120結合臂之重鏈包含SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列及gp120結合臂之輕鏈包含SEQ ID NO: 10中所示之胺基酸序列，及第二臂包含結合CD3之重鏈及輕鏈，其中Duobody®之CD3結合臂之重鏈包含SEQ ID NO: 19中所示之胺基酸序列及CD3結合臂之輕鏈包含SEQ ID NO: 20中所示之胺基酸序列。在某些實施例中，1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)個胺基酸取代可於該Duobody®之重鏈恆定區中之一者或兩者之任何組分(例如，CH1、鉸鏈、CH2、CH3)內作出。在某些實例中，該等胺基酸取代相對於未經改變之多肽改變(例如，降低)效應功能及/或增加半衰期。在某些實施例中，此等取代可係保守胺基酸取代。
在一項特定實施例中，gp120 X CD89 Duobody®包含兩個臂，第一臂包含結合gp120之重鏈及輕鏈，其中Duobody®之gp120結合臂之重鏈包含SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列及gp120結合臂之輕鏈包含SEQ ID NO: 10中所示之胺基酸序列，及第二臂包含結合CD89之重鏈及輕鏈，其中Duobody®之CD89結合臂之重鏈包含SEQ ID NO: 97中所示之胺基酸序列及CD89結合臂之輕鏈包含SEQ ID NO: 102中所示之胺基酸序列。在某些實施例中，1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)個胺基酸取代可於該Duobody®之重鏈恆定區中之一者或兩者之任何組分(例如，CH1、鉸鏈、CH2、CH3)內作出。在某些實例中，該等胺基酸取代相對於未經改變之多肽改變(例如，降低)效應功能及/或增加半衰期。在某些實施例中，此等取代可係保守胺基酸取代。
在另一特定實施例中，gp120 X CD3 Duobody®包含兩個臂，第一臂包含結合gp120之重鏈及輕鏈，其中Duobody®之gp120結合臂之重鏈包含SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列及gp120結合臂之輕鏈包含SEQ ID NO: 40中所示之胺基酸序列，及第二臂包含結合CD3之重鏈及輕鏈，其中Duobody®之CD3結合臂之重鏈包含SEQ ID NO: 19中所示之胺基酸序列及CD3結合臂之輕鏈包含SEQ ID NO: 20中所示之胺基酸序列。在某些實施例中，1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)個胺基酸取代可於該Duobody®之重鏈恆定區中之一者或兩者之任何組分(例如，CH1、鉸鏈、CH2、CH3)內作出。在某些實例中，該等胺基酸取代相對於未經改變之多肽改變(例如，降低)效應功能及/或增加半衰期。在某些實施例中，此等取代可係保守胺基酸取代。
在另一特定實施例中，gp120 X CD89 Duobody®包含兩個臂，第一臂包含結合gp120之重鏈及輕鏈，其中Duobody®之gp120結合臂之重鏈包含SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列及gp120結合臂之輕鏈包含SEQ ID NO: 40中所示之胺基酸序列，及第二臂包含結合CD89之重鏈及輕鏈，其中Duobody®之CD89結合臂之重鏈包含SEQ ID NO: 97中所示之胺基酸序列及CD89結合臂之輕鏈包含SEQ ID NO: 102中所示之胺基酸序列。在某些實施例中，1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)個胺基酸取代可於該Duobody®之重鏈恆定區中之一者或兩者之任何組分(例如，CH1、鉸鏈、CH2、CH3)內作出。在某些實例中，該等胺基酸取代相對於未經改變之多肽改變(例如，降低)效應功能及/或增加半衰期。在某些實施例中，此等取代可係保守胺基酸取代。
在另一特定實施例中，gp120 X CD3 Duobody®包含兩個臂，第一臂包含結合gp120之重鏈及輕鏈，其中Duobody®之gp120結合臂之重鏈包含SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列及gp120結合臂之輕鏈包含SEQ ID NO: 78中所示之胺基酸序列，及第二臂包含結合CD3之重鏈及輕鏈，其中Duobody®之CD3結合臂之重鏈包含SEQ ID NO: 19中所示之胺基酸序列及CD3結合臂之輕鏈包含SEQ ID NO: 20中所示之胺基酸序列。在某些實施例中，1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)個胺基酸取代可於該Duobody®之重鏈恆定區中之一者或兩者之任何組分(例如，CH1、鉸鏈、CH2、CH3)內作出。在某些實例中，該等胺基酸取代相對於未經改變之多肽改變(例如，降低)效應功能及/或增加半衰期。在某些實施例中，此等取代可係保守胺基酸取代。
在另一特定實施例中，gp120 X CD89 Duobody®包含兩個臂，第一臂包含結合gp120之重鏈及輕鏈，其中Duobody®之gp120結合臂之重鏈包含SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列及gp120結合臂之輕鏈包含SEQ ID NO: 78中所示之胺基酸序列，及第二臂包含結合CD89之重鏈及輕鏈，其中Duobody®之CD89結合臂之重鏈包含SEQ ID NO: 97中所示之胺基酸序列及CD89結合臂之輕鏈包含SEQ ID NO: 102中所示之胺基酸序列。在某些實施例中，1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)個胺基酸取代可於該Duobody®之重鏈恆定區中之一者或兩者之任何組分(例如，CH1、鉸鏈、CH2、CH3)內作出。在某些實例中，該等胺基酸取代相對於未經改變之多肽改變(例如，降低)效應功能及/或增加半衰期。在某些實施例中，此等取代可係保守胺基酸取代。
在另一特定實施例中，gp120 X CD3 Duobody®包含兩個臂，第一臂包含結合gp120之重鏈及輕鏈，其中Duobody®之gp120結合臂之重鏈包含SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列及gp120結合臂之輕鏈包含SEQ ID NO: 79中所示之胺基酸序列，及第二臂包含結合CD3之重鏈及輕鏈，其中Duobody®之CD3結合臂之重鏈包含SEQ ID NO: 19中所示之胺基酸序列及CD3結合臂之輕鏈包含SEQ ID NO: 20中所示之胺基酸序列。在某些實施例中，1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)個胺基酸取代可於該Duobody®之重鏈恆定區中之一者或兩者之任何組分(例如，CH1、鉸鏈、CH2、CH3)內作出。在某些實例中，該等胺基酸取代相對於未經改變之多肽改變(例如，降低)效應功能及/或增加半衰期。在某些實施例中，此等取代可係保守胺基酸取代。
在另一特定實施例中，gp120 X CD89 Duobody®包含兩個臂，第一臂包含結合gp120之重鏈及輕鏈，其中Duobody®之gp120結合臂之重鏈包含SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列及gp120結合臂之輕鏈包含SEQ ID NO: 79中所示之胺基酸序列，及第二臂包含結合CD89之重鏈及輕鏈，其中Duobody®之CD89結合臂之重鏈包含SEQ ID NO: 97中所示之胺基酸序列及CD89結合臂之輕鏈包含SEQ ID NO: 102中所示之胺基酸序列。在某些實施例中，1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)個胺基酸取代可於該Duobody®之重鏈恆定區中之一者或兩者之任何組分(例如，CH1、鉸鏈、CH2、CH3)內作出。在某些實例中，該等胺基酸取代相對於未經改變之多肽改變(例如，降低)效應功能及/或增加半衰期。在某些實施例中，此等取代可係保守胺基酸取代。
在另一特定實施例中，gp120 X CD3 Duobody®包含兩個臂，第一臂包含結合gp120之重鏈及輕鏈，其中Duobody®之gp120結合臂之重鏈包含SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列及gp120結合臂之輕鏈包含SEQ ID NO: 80中所示之胺基酸序列，及第二臂包含結合CD3之重鏈及輕鏈，其中Duobody®之CD3結合臂之重鏈包含SEQ ID NO: 19中所示之胺基酸序列及CD3結合臂之輕鏈包含SEQ ID NO: 20中所示之胺基酸序列。在某些實施例中，1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)個胺基酸取代可於該Duobody®之重鏈恆定區中之一者或兩者之任何組分(例如，CH1、鉸鏈、CH2、CH3)內作出。在某些實例中，該等胺基酸取代相對於未經改變之多肽改變(例如，降低)效應功能及/或增加半衰期。在某些實施例中，此等取代可係保守胺基酸取代。
在另一特定實施例中，gp120 X CD89 Duobody®包含兩個臂，第一臂包含結合gp120之重鏈及輕鏈，其中Duobody®之gp120結合臂之重鏈包含SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列及gp120結合臂之輕鏈包含SEQ ID NO: 80中所示之胺基酸序列，及第二臂包含結合CD89之重鏈及輕鏈，其中Duobody®之CD89結合臂之重鏈包含SEQ ID NO: 97中所示之胺基酸序列及CD89結合臂之輕鏈包含SEQ ID NO: 102中所示之胺基酸序列。在某些實施例中，1至10 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)個胺基酸取代可於該Duobody®之重鏈恆定區中之一者或兩者之任何組分(例如，CH1、鉸鏈、CH2、CH3)內作出。在某些實例中，該等胺基酸取代相對於未經改變之多肽改變(例如，降低)效應功能及/或增加半衰期。在某些實施例中，此等取代可係保守胺基酸取代。
在特定實施例中，抗體係經非岩藻醣化。在一些實施例中，該等抗體包含一或多個標誌。在某些實施例中，該等一或多個標誌包含抗生物素蛋白標誌。
Fc 修飾 在某些實施例中，相較於IgG1m3胺基酸序列(即，SEQ ID NO: 77)，本發明之抗體(例如，Duobodies®)在重鏈恆定區(Fc)中包括一或多個胺基酸序列修飾。在某些實施例中，相較於PGT-121.60抗體，本發明之抗體(例如，Duobodies®)在重鏈恆定區(Fc)中包括一或多個胺基酸序列修飾。在特定實施例中，相較於PGT-121 LO6抗體，此等修飾增加經修飾之抗體之穩定性或增加經修飾之抗體之結合親和力。在特定實施例中，相較於PGT-121.60抗體，此等修飾增加經修飾之抗體之穩定性或增加經修飾之抗體之結合親和力。在特定實施例中，某些此等修飾增加抗體之半衰期。在某些實施例中，某些此等修飾降低抗體效應功能。在其他實施例中，某些此等修飾降低抗體效物功能並增加抗體之半衰期。
在某些實施例中，該等一或多個修飾係選自下列Fc胺基酸取代(EU編號)或其組合：L234F；L235E；G236A；S239D；F243L；D265E；D265A；S267E；H268F；R292P；N297Q；N297A；S298A；S324T；I332E；S239D；A330L；L234F；L235E；P331S；F243L；Y300L；V305I；P396L；S298A；E333A；K334A；E345R；L235V；F243L；R292P；Y300L；P396L；M428L；E430G；N434S；G236A、S267E、H268F、S324T及I332E；G236A、S239D及I332E；S239D、A330L、I332E；L234F、L235E及P331S；F243L、R292P、Y300L、V305I及P396L；G236A、H268F、S324T及I332E；S239D、H268F、S324T及I332E；S298A、E333A及K334A；L235V、F243L、R292P、Y300L及P396L；S239D、I332E；S239D、S298A及I332E；G236A、S239D、I332E、M428L及N434S；G236A、S239D、A330L、I332E、M428L及N434S；S239D、I332E、G236A及A330L；M428L及N4343S；M428L、N434S；G236A、S239D、A330L及I332E；及G236A及I332E。在某些實施例中，該等一或多個修飾係選自由以下組成之群：N297A、D265A、L234F、L235E、N297Q及P331S。在某些實施例中，該等一或多個修飾係N297A或D265A。在某些實施例中，該等一或多個修飾係L234F及L235E。在某些實施例中，該等一或多個修飾係L234F、L234E及D265A。在某些實施例中，該等一或多個修飾係L234F、L234E及N297Q。在某些實施例中，該等一或多個修飾係L234F、L235E及P331S。在某些實施例中，該等一或多個修飾係D265A及N297Q。在某些實施例中，該等一或多個修飾係L234F、L235E、D265A、N297Q及P331S。
降低Fc受體結合之突變包括(例如)N297A；N297Q；D265A；L234F/L235E；L234F/L235E/N297Q；L234F/L235E/P331S；D265A/N297Q；及L234F/L235E/ D265A/N297Q/P331S (全部EU編號)。在某些實施例中，本文揭示之抗體(例如，Duobodies)包含L234F及L235E突變。在某些實施例中，本文揭示之抗體(例如，Duobodies)包含L234F、L235E及D265A突變。在某些實施例中，本文揭示之抗體(例如，Duobodies)包含L234F、L235E及D265A突變。在某些實施例中，本文揭示之抗體(例如，Duobodies)包含N297A或N297Q突變。在某些實施例中，本文揭示之抗體(例如，Duobodies)包含N297A或N297Q突變及L234F、L235E及D265A突變。在某些實施例中，將一、二、三、四或多個胺基酸取代引入Fc區內以改變抗體之效應功能。例如，此等取代係位於選自由以下組成之群之位置：胺基酸殘基234、235、236、237、265、297、318、320及322，(根據EU編號)。此等位置可經不同胺基酸殘基置換使得該抗體對效應配體(例如，Fc受體或補體之C1組分)具有已經改變(例如，減小)之親和力，但保留親代抗體之抗原結合能力。在某些實施例中，本文揭示之抗體(例如，Duobodies)包含E233P、L234V、L235A及G236A突變(EU編號)。在一些實施例中，該等抗體包含A327G、A330S及P331S突變(EU編號)。在一些實施例中，該等抗體包含K322A突變(EU編號)。在一些實施例中，該等抗體包含E318A、K320A及K322A (EU編號)突變。在某些實施例中，該等抗體包含L235E (EU編號)突變。
增加抗體半衰期之突變已為此項技術中已知。在一項實施例中，本文描述之抗體(例如，Duobodies®)之恆定區包含於位置252 (EU編號)處之甲硫胺酸至酪胺酸取代、於位置254 (EU編號)處之絲胺酸至蘇胺酸取代，及於位置256 (EU編號)處之蘇胺酸至麩胺酸取代。參見，例如，美國專利案第7,658,921號。指定為「YTE突變體」之此突變體類型相對於相同抗體之野生型形式顯示四倍增加之半衰期(Dall’Acqua等人，J Biol Chem, 281: 23514-24 (2006)；Robbie等人，Antimicrob Agents Chemotherap., 57(12):6147-6153 (2013))。在某些實施例中，抗體包括包含位置251至257、285至290、308至314、385至389及428至436 (EU編號)處之胺基酸殘基之一、二、三或多個胺基酸取代之IgG恆定域。在其他實施例中，本文描述之抗體(例如，Duobodies®)包含M428L及4343S取代(EU編號)。在其他實施例中，本文描述之抗體(例如，Duobodies®)包含T250Q及M428L (EU編號)突變。在其他實施例中，本文描述之抗體(例如，Duobodies®)包含H433K及N434F (EU編號)突變。
在特定實施例中，抗體(例如，Duobodies®)包含兩個或以上、三個或以上、四個或以上、五個或以上、六個或以上、六個或以下、五個或以下、四個或以下、三個或以下、兩個或以下或一個經修飾之Fc胺基酸殘基。在某些實施例中，該等抗體包含L234F、L235E、D264A突變，其等統稱為「FEA」。在某些實施例中，該等抗體包含L234F、L235E、D264A及F405L突變，其等統稱為「FEAL」。在某些實施例中，該等抗體包含L234F、L235E、D264A及選自由以下組成之群之突變：F405L、F405A、F405D、F405E、F405H、F405I、F405K、F405M、F405N、F405Q、F405S、F405T、F405V、F405W及F405Y。在某些實施例中，該等抗體包含L234F、L235E、D264A及K409R突變，其等統稱為「FEAR」。在某些實施例中，FEAL及FEAR係包含於本文描述之雙特異性抗體(例如，Duobodies®)中。在某些實施例中，該等抗體包含M428L及N434S突變，其等統稱為LS。在某些實施例中，該等抗體包含L234F、L235E、D264A、F405L、M428L及N434S突變，其等統稱為「FEALLS」。在某些實施例中，該等抗體包含L234F、L235E、D264A、M428L及N434S突變及選自由以下組成之群之另一突變：F405L、F405A、F405D、F405E、F405H、F405I、F405K、F405M、F405N、F405Q、F405S、F405T、F405V、F405W及F405Y。在某些實施例中，該等抗體包含L234F、L235E、D264A、K409R、M428L及N434S突變，其等統稱為「FEARLS」。在某些實施例中，FEALLS及FEARLS係包含於本文描述之雙特異性抗體(例如，Duobodies®)中。在某些實施例中，該等抗體包含S239D、I332E、G236A、A330L (「DEAL」)。在某些實施例中，該等抗體包含S239D、I332E、G236A、A330L、M428L及N434S突變(「DEALLS」)。該等FEA突變降低或消除效應功能，而該等DEAL突變藉由增強Fc之結合以活化FcγR而增加或增強效應功能。該等LS突變增加該抗體之藥物動力學半衰期。
藉由降低或消除效應功能，CD3 X gp120多特異性/雙特異性抗體(i)其確保由該雙特異性分子結合之T細胞(其將包括彼等未受HIV感染者)不被先天效應細胞(例如，NK細胞、巨噬細胞)殺死；及(ii)藉由不結合至先天效應細胞上的FcγR或對先天效應細胞上的FcγR具有降低之結合，其亦確保T細胞在缺乏靶細胞之情況下不被活化。T細胞在缺乏靶細胞之情況下之活化將導致細胞介素反應且將無法耐受。雙特異性分子對先天效應細胞上的FcγR之結合將導致T細胞上的CD3分子叢集，導致抗原獨立性T細胞活化。
共軛抗體 本文揭示之抗體中之任何一者可係結合至各種分子之共軛抗體，該等分子包括巨分子物質，諸如聚合物(例如，聚乙二醇(PEG)、經PEG修飾之聚伸乙亞胺(PEI) (PEI-PEG)、聚麩胺酸(PGA) (N-(2-羥丙基)甲基丙烯醯胺(HPMA)共聚物)、透明質酸、放射性材料(例如，90 Y、131 I、125 I、35 S、3 H、121 In、99 Tc)、螢光物質(例如，螢光素及玫瑰紅)、發光物質(例如，發光胺)、半抗原、酶(例如，葡萄糖氧化酶)、金屬螯合物、生物素、抗生物素蛋白及藥物。
上文描述之結合抗體可藉由對本文描述之抗體或其較低分子量形式進行化學修飾加以製備。用於修飾抗體之方法亦為此項技術中熟知(例如，US 5,057,313及US 5,156,840)。
核酸 本發明之特徵亦在於包含編碼本文描述之多特異性抗體之核苷酸序列之多核苷酸，該多特異性抗體結合至gp120及人類CD3抗原，或其結合至gp120及人類CD89抗原；包含此等多核苷酸之載體；及包含此等多核苷酸或表現載體之宿主細胞(例如，哺乳動物細胞、酵母菌、大腸桿菌)。本文提供包含編碼本文提供之抗體中之任何一者之核苷酸序列之多核苷酸，及包含此等多核苷酸序列之載體，例如，用於在宿主細胞(例如，哺乳動物細胞)中高效表現自身之表現載體。
在一項態樣中，本發明提供包含編碼結合至gp120之抗體(例如，例示性抗gp120抗體2；例示性抗gp120抗體3；例示性抗gp120抗體4；例示性抗gp120抗體5)之VH、VL或VH及VL之核苷酸序列之多核苷酸。
在另一態樣中，本發明提供包含編碼結合至gp120及人類CD3多肽且包含如本文描述之胺基酸序列之抗體之核苷酸序列之多核苷酸。
在另一態樣中，本發明提供包含編碼結合至gp120及人類CD89多肽且包含如本文描述之胺基酸序列之抗體之核苷酸序列之多核苷酸。
在另一態樣中，本發明提供編碼根據本發明之抗體或其抗原結合片段之多核苷酸或核酸分子。在一些實施例中，該等核酸分子編碼本申請案之抗體輕鏈(或其片段)或抗體輕鏈(或其片段)或兩者。在其他實施例中，該核酸係DNA、cDNA或mRNA。在一些其他實施例中，該核酸分子係經密碼子最佳化以增強於宿主細胞中之表現。
在另一態樣中，本文提供包含編碼本文描述之抗體之CDR、輕鏈或重鏈之核苷酸序列之多核苷酸。該等多核苷酸可包含編碼包含本文(參見，例如，上表)描述之抗體之VL CDR之輕鏈或輕鏈可變域之核苷酸序列。該等多核苷酸可包含編碼包含本文(參見，例如，上表)描述之抗體之VH CDR之重鏈或重鏈可變域之核苷酸序列。在一項實施例中，本文描述之多核苷酸編碼可變輕鏈或具有VL-CDR之輕鏈，該等VL-CDR包含SEQ ID NO: 4、5及6中分別所示之胺基酸序列；或14、15及16中分別所示之胺基酸序列。在另一實施例中，本文描述之多核苷酸編碼可變重鏈或具有VH-CDR之重鏈，該等VH-CDR包含SEQ ID NO: 1、2及3中分別所示之胺基酸序列；或11、12及13中分別所示之胺基酸序列。在一項實施例中，本文描述之多核苷酸編碼VL域，該VL域包含SEQ ID NO: 8、18或101中所示之胺基酸序列。在另一實施例中，本文描述之多核苷酸編碼VH域，該VH域包含SEQ ID NO: 7、17或96中所示之胺基酸序列。在又另一實施例中，本文描述之多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 10、20或102中所示之胺基酸序列之輕鏈。在另一實施例中，本文描述之多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 9、19或97中所示之胺基酸序列之重鏈。
本發明亦包含編碼抗gp120及抗CD3 (或抗CD89)抗體之多核苷酸，其等例如藉由密碼子最佳化、以異源性信號序列置換及mRNA不穩定元素之消除而最佳化。產生最佳化之核酸之方法可藉由適應例如美國專利案第5,965,726；6,174,666；6,291,664；6,414,132；及6,794,498號中描述之方法進行。
載體及宿主細胞 本發明亦包括包含本文揭示之核酸之載體。載體可係任何類型，例如，重組載體，諸如表現載體。載體包括(但不限於)質體、黏質體、細菌人造染色體(BAC)及酵母人造染色體(YAC)及衍生自噬菌體或植物或動物(包括人類)病毒之載體。載體可包含由推薦之宿主細胞識別之複製之起源，且在表現載體之情況下，啟動子及由宿主細胞識別之其他調節區。在特定實施例中，載體包含編碼本發明之抗體之可操作地連接至啟動子及視需要另外調節元件之多核苷酸。某些載體能夠在引入該等載體之宿主中自主複製(例如，具有複製之細菌起源之載體可在細菌中複製)。其他載體一經引入宿主中即可整合至宿主之基因組內，並藉此與宿主基因組一起複製。載體包括(但不限於)彼等適用於本文揭示之抗體之重組產生。
載體之選擇取決於遵循之重組程序及使用之宿主。向宿主細胞內引入載體可尤其受磷酸鈣轉染、病毒感染、由DEAE-聚葡萄糖介導之轉染、脂質體轉染或電穿孔影響。載體可自主複製或可與已整合該等載體之染色體一起複製。在某些實施例中，該等載體含有一或多個選擇標誌物。標誌物之選擇可取決於所選之宿主細胞。此等包括(但不限於)卡那黴素、新黴素、嘌呤黴素、潮黴素、博來黴素、來自單純皰疹病毒之胸苷激酶基因(HSV-TK)及來自小鼠之二羥葉酸還原酶基因(dhfr)。包含編碼本文描述之抗體之一或多種核酸分子(其等可操作地連接至編碼可用以分離該等抗體之蛋白質或肽之一或多種核酸分子)之載體亦包含於本發明內。此等蛋白質或肽包括(但不限於)麩胱甘肽-S-轉移酶、麥芽糖結合蛋白、結合金屬之多組胺酸、綠色螢光蛋白、螢光素酶及β-半乳糖苷酶。
在特定實施例中，使用之載體係pcDNA™3.1+ (ThermoFisher, MA)。
本發明亦提供包含本文描述之核酸或載體之宿主細胞。可使用各種宿主細胞中之任何一者。在一項實施例中，宿主細胞係原核細胞，例如，大腸桿菌。在另一實施例中，宿主細胞係真核細胞，例如，哺乳動物細胞，諸如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、COS細胞、BHK細胞、NSO細胞或Bowes黑色素瘤細胞。人類宿主細胞之實例尤其係HeLa、911、AT1080、A549、293及HEK293T細胞。
術語「核酸分子」係指核苷酸之聚合形式且包括RNA、cDNA、基因組DNA之正義股及反義股兩者，及上述之合成形式及混合聚合物。如本文使用，該術語核酸分子可與術語多核苷酸互換。在一些實施例中，核苷酸係指核糖核苷酸、脫氧核苷酸或任一類型核苷酸之修飾形式及其組合。該術語亦包括(但不限於) DNA之單股及雙股形式。另外，多核苷酸(例如，cDNA或mRNA)可包括由天然生成及/或非天然生成之核苷酸鍵聯連接在一起之天然生成及經修飾之核苷酸中之任何一者或兩者。正如由熟習此項技術者將容易地知曉，該等核酸分子可以化學或生物化學方式加以修飾或可含有非天然或衍生之核苷酸鹼基。此等修飾包括(例如)標籤、甲基化、天然生成之核苷酸中之一或多者經類似物之取代、核苷酸間修飾，諸如未帶電之鍵聯(例如，膦酸甲酯、磷酸三酯、膦醯胺酯、胺基甲酸酯等)、帶電之鍵聯(例如，硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)、側鏈部分(例如，多肽)、嵌入劑(例如，吖啶、補骨脂素等)、螯合劑、烷化劑，及經修飾之鍵聯(例如，α異頭核酸等)。上述術語亦旨在包括任何拓撲構型，其包括單股、雙股、部分雙重、三重、髮夾形、圓形及掛鎖形構型。除非另有規定，否則對核酸序列之參考包含其補體。因此，對具有特定序列之核酸分子之參考應瞭解包含其互補股，及其互補序列。該術語亦包括經密碼子最佳化核酸。
術語「可操作地連接」係指兩個或多個核酸序列元件通常以物理方式連接且彼此發生功能關係。例如，若啟動子可引發或調節編碼序列之轉錄或表現，則該啟動子係可操作地連接至編碼序列，在該情況下編碼序列應瞭解為在該啟動子之「控制下」。
如本文使用，「取代」表示一或多個胺基酸或核苷酸分別經不同胺基酸或核苷酸置換。
「經分離」之核酸係指已分離自天然環境之組分之核酸分子。經分離之核酸包括細胞中含有之核酸分子，該等細胞通常含有該核酸分子，但該核酸分子係存在於染色體外或在不同於其天然染色體位置之染色體位置處。「編碼抗體或其片段之經分離之核酸」係指編碼抗體重鏈及輕鏈(或其片段)之一或多種核酸分子，其等包括單一載體或單獨載體中之此(等)核酸分子，且此(等)核酸分子存在於宿主細胞中之一或多個位置處。
如本文使用之術語「載體」係指能夠繁殖與其連接之另一核酸之核酸分子。該術語包括諸如自我複製之核酸結構之載體及併入宿主細胞之基因組內之載體，該載體已引入該宿主細胞中。一些載體係適用於遞送本申請案之核酸分子或多核苷酸。某些載體能夠引導與該等載體可操作地連接之核酸之表現。此等載體在本文中稱為表現載體。
術語「宿主細胞」、「宿主細胞系」及「宿主細胞培養物」可互換使用且係指已引入外源性核酸之細胞，該等細胞包括此等細胞之傳代。宿主細胞包括「轉形體」及「轉形細胞」，其等包括初級轉形細胞及衍生自該初級轉形細胞而不考慮繼代數量之傳代。傳代可能與親代細胞在核酸含量上非完全相同，但可含有突變。具有與在初始轉形細胞中篩選或選擇之功能或生物活性相同之功能或生物活性之突變體傳代係包括於本文中。
如本文使用之術語多核苷酸「變體」係在一或多個取代、刪除、添加及/或插入方面通常不同於本文中明確揭示之多核苷酸之多核苷酸。 此等變體可係天然生成的或可係合成產生的，例如，藉由修飾本發明之多核苷酸序列中之一或多者並評估如本文描述之經編碼之多肽之一或多種生物活性及/或使用此項技術中熟知的許多技術中之任何一者。
如本文使用之術語多肽「變體」係在一或多個取代、刪除、添加及/或插入方面通常不同於本文明確揭示之多肽之多肽。此等變體可係天然生成的或可係合成產生的，例如，藉由修飾本發明之上文多肽序列中之一或多者並評估如本文描述之多肽之一或多種生物活性及/或使用此項技術中熟知的許多技術中之任何一者。在一項實施例中，該抗體或其抗原結合片段包括變體1、變體2、變體3及/或變體4。在一些實施例中，該抗體或其抗原結合片段包括變體1。在一些實施例中，該抗體或其抗原結合片段包括變體2。在一些實施例中，該抗體或其抗原結合片段包括變體3。在一些實施例中，該抗體或其抗原結合片段包括變體4。
術語「變體」可亦係指包含一或多個核苷酸或胺基酸突變之任何天然生成或經改造之分子。在一項實施例中，該分子係抗體。例如，體細胞變體可包含所有相關天然生成之抗體，該等抗體係相同B-細胞譜系之一部分或衍生自相同B-細胞譜系。經改造之變體可包含對抗體所作之所有單一突變或組合突變。
產生抗體之方法 結合至gp120之單特異性抗體及結合至gp120及人類CD3 (例如，人類CD3ε或人類CD3δ)之雙特異性抗體可藉由此項技術中已知之用於合成抗體之任何方法產生，例如，藉由化學合成或藉由重組表現技術。
用於製造單特異性抗體之方法已為此項技術中非常熟知的。製造雙特異性抗體之方法係描述(例如)於美國專利案第5,731,168；5,807,706；5,821,333號；及美國申請公開案第2003/020734及2002/0155537號中。雙特異性四價抗體及用於製造其等之方法係描述(例如)於WO 02/096948及WO 00/44788中，兩案之揭示內容係以全文引用之方式併入本文中。另外，與製造雙特異性抗體相關之其他公開案包括WO 91/00360、WO 92/08802、WO92/05793及WO 93/17715；Tutt等人，J. Immunol. 147:60-69 (1991)；美國專利案第4,474,893；4,714,681；4,925,648；5,573,920；5,601,819及9,212,230號；及Kostelny等人，J. Immunol. 148:1547-1553 (1992)。
在一項實施例中，本發明之雙特異性抗體係Duobody®。Duobody可藉由如(例如)於國際公開案第WO 2008/119353、WO 2011/131746、WO 2011/147986及WO 2013/060867號、Labrijn AF等人，PNAS, 110(13): 5145-5150 (2013)、Gramer等人，mAbs, 5(6): 962-973 (2013)，及Labrijn等人，Nature Protocols, 9(10): 2450-2463 (2014)中描述之DuoBody®技術平臺(Genmab A/S)製造。此技術可用以組合含有兩條重鏈及兩條輕鏈之第一單特異性抗體之一半及含有兩條重鏈及兩條輕鏈之第二單特異性抗體之一半。所得之異源二聚體含有與來自第二抗體之一條重鏈及一條輕鏈配對之來自第一抗體之一條重鏈及一條輕鏈。當單特異性抗體中之兩者識別不同抗原上之不同抗原決定基時，所得之異源二聚體係雙特異性抗體。
就DuoBody®平臺而言，單特異性抗體中之各者包括在CH3域中具有單點突變之重鏈恆定區。相較於在單特異性抗體中之任何一者中之無突變之CH3域之間，此等點突變在所得之雙特異性抗體中之CH3域之間允許更強之相互作用。各單特異性抗體中之單點突變可位於重鏈恆定區之CH3域中之殘基366、368、370、399、405、407或409 (EU編號)(參見，WO 2011/131746)。此外，相對於其他單特異性抗體，該單點突變係位於一個單特異性抗體中之不同殘基處。例如，一個單特異性抗體可包含突變F405L (EU編號；於殘基405處之苯丙胺酸至白胺酸突變)，或以下中之任何一者：F405A、F405D、F405E、F405H、F405I、F405K、F405M、F405N、F405Q、F405S、F405T、F405V、F405W及F405Y突變，而其他單特異性抗體可包含突變K409R (EU編號；於殘基409處之離胺酸至精胺酸突變)。單特異性抗體之重鏈恆定區可係IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同型(例如，人類IgG1同型)，及由DuoBody®技術產生之雙特異性抗體可經修飾以改變(例如，降低)由Fc介導之效應功能及/或改善半衰期。製造Duobody®之一種方法涉及下列：(i)在CH3域中含有單一匹配點突變(即，K409R及F405L (或以下中之任何一者：F405A、F405D、F405E、F405H、F405I、F405K、F405M、F405N、F405Q、F405S、F405T、F405V、F405W及F405Y突變) (EU編號))之兩種親代IgG1之不同表現；(ii)在允許之氧化還原條件下活體外混合親代IgG1以能夠重組半分子；(iii)移除還原劑以容許鏈間二硫鍵之再氧化；及(iv)使用基於層析術或基於質譜法(MS)之方法(參見，Labrijn等人，Nature Protocols, 9(10): 2450-2463 (2014))分析交換效率及最終產物。
製造雙特異性抗體之另一例示性方法係藉由杵入臼型抗體技術(Ridgway等人，Protein Eng., 9:617-621 (1996)；WO 2006/028936)。Ig重鏈之錯配問題(其係用於製造雙特異性抗體之主要缺點)在此技術中藉由使形成IgG中之CH3域之界面之所選胺基酸突變加以減少。在其中兩條重鏈直接相互作用之CH3域內之位置處，將具有小側鏈(臼)之胺基酸引入一條重鏈之序列內並在另一重鏈上將具有大側鏈(杵)之胺基酸引入相應之相互作用殘基位置內。在一些實例中，本發明之抗體具有免疫球蛋白鏈，其中CH3域已藉由使兩條多肽之間之界面處相互作用之所選胺基酸突變而經修飾以便於優先形成雙特異性抗體。該等雙特異性抗體可由相同子類或不同子類之免疫球蛋白鏈構成。在一項實例中，結合至gp120及CD3之雙特異性抗體在「杵鏈」中包含T366W (EU編號)突變及在「臼鏈」中包含T366S、L368A、Y407V 9EU編號)突變。在某些實施例中，另外鏈間二硫鍵係藉由例如向「杵鏈」內引入Y349C突變及向「臼鏈」內引入E356C突變或S354C突變而引入CH3域之間。在某些實施例中，在「杵鏈」中引入R409D、K370E突變及在「臼鏈」中引入D399K、E357K突變。在其他實施例中，向該等鏈之任何一者中引入Y349C、T366W突變及向對應鏈中引入E356C、T366S、L368A、Y407V突變。在一些實施例中，向一條鏈中引入Y349C、T366W突變及在對應鏈中引入S354C、T366S、L368A、Y407V突變。在一些實施例中，向一條鏈中引入Y349C、T366W突變及向對應鏈中引入S354C、T366S、L368A、Y407V突變。在又其他實施例中，向一條鏈中引入Y349C、T366W突變及向對應鏈(全部EU編號)中引入S354C、T366S、L368A、Y407V突變。
製造雙特異性抗體之另一例示性方法係藉由使用雙特異性T細胞接合體(BiTEs®)平臺。BiTE係藉由經由可撓性肽連接子(例如，GGGGS (SEQ ID NO: 76))將第一scFv (例如，結合gp120之scFv)以基因方式融合至第二scFv (例如，結合人類CD3之scFv)製造。參見，例如，Staerz等人，Nature, 314:628-631 (1985)；Mack等人，PNAS, 92:7021-7025 (1995)；Huehls等人，Immunol. Cell Biol., 93:290-296 (2015)。
製造雙特異性抗體之另一例示性方法係藉由使用雙重親和力重靶向(DART)平臺。此技術係基於Holliger等人，(PNAS, 90:6444-6448 (1993))之雙功能抗體形式且針對VH及VL鏈之穩定性及最佳化配對進行改善(Johnson等人，J Mol. Biol., 399:436-449 (2010)；Sung等人，J Clin Invest., 125(11): 4077-4090 (2015))。
製造雙特異性抗體之又另一例示性方法係藉由使用三功能雜合抗體平臺 - Triomab®。此平臺採用由不同同型、小鼠IgG2a及大鼠IgG2b之兩個全長抗體之一半組成之嵌合構築。此技術依賴於物種優先之重鏈/輕鏈配對關係。參見，Lindhofer等人，J Immunol., 155:219-225 (1995)。
製造雙特異性抗體之另一例示性方法係藉由使用TandAb®平臺。此技術係基於雙功能抗體概念但經設計為單一多肽鏈VH1-VL2-VH2-VL1，其包含短連接子以防止鏈內配對。此單鏈之頭對尾二聚化導致四價同源二聚體之形成(Kipriyanov等人，J Mol. Biol., 293:41-56 (1999))。
用於製造雙特異性抗體之又另一方法係CrossMab技術。CrossMab係由兩個全長抗體之一半構成之嵌合抗體。就正確鏈配對而言，組合兩種技術：(i)有助於在兩條重鏈之間正確配對之杵入臼型抗體；及(ii)在兩種Fab中之任何一者之重鏈及輕鏈之間交換以引入非對稱，該非對稱避免輕鏈錯配。參見，Ridgway等人，Protein Eng., 9:617-621 (1996)；Schaefer等人，PNAS, 108:11187-11192 (2011)。CrossMab可組合兩個或多個抗原結合域用於靶向兩個或多個標靶或用於向一個標靶引入二價，諸如2:1形式。
本發明之多特異性抗體可於細菌或真核細胞中產生。抗體亦可於真核細胞諸如轉形細胞系(例如，CHO、293E、293T、COS、NIH3T3)中產生。另外，抗體(例如，scFv’s)可表現於酵母細胞諸如畢赤酵母菌屬(參見，例如，Powers等人，J Immunol Methods. 251:123-35 (2001))、漢遜氏酵母(Hanseula )或釀母菌屬中。在一項實施例中，本文描述之雙特異性抗體係於CHO細胞系中產生。為產生受關注之抗體，編碼該抗體之多核苷酸係經構築，引入表現載體內，及然後表現於合適之宿主細胞中。標準分子生物技術係用以製備重組表現載體、轉染宿主細胞、針對轉形體進行選擇、培養宿主細胞及回收該抗體。
若欲使抗體表現於細菌細胞(例如，大腸桿菌)中，則表現載體應具有允許在細菌細胞中擴增載體之特徵。另外，當大腸桿菌(諸如JM109、DH5α、HB101或XL1-Blue)用作宿主時，載體必須具有啟動子，例如，lacZ啟動子(Ward等人，341:544-546 (1989)、araB啟動子(Better等人，Science, 240:1041-1043 (1988))或可容許在大腸桿菌中有效表現之T7啟動子。此等載體之實例包括(例如) M13系列載體、pUC系列載體、pBR322、pBluescript、pCR-Script、pGEX-5X-1 (Pharmacia)、「QIA表現系統」 (QIAGEN)、pEGFP及pET (當使用此表現載體時，宿主係較佳表現T7 RNA聚合酶之BL21)。表現載體可含有用於抗體分泌之信號序列。就於大腸桿菌之周質內產生而言，pelB信號序列(Lei等人，J. Bacteriol., 169:4379 (1987))可用作用於抗體分泌之信號序列。就細菌表現而言，氯化鈣方法或電穿孔方法可用以向細菌細胞內引入表現載體。
若欲使抗體表現於動物細胞(諸如CHO、COS及NIH3T3細胞)中，則該表現載體包括在此等細胞中表現所必需之啟動子，例如，SV40啟動子(Mulligan等人，Nature, 277:108 (1979))、MMLV-LTR啟動子、EF1α啟動子(Mizushima等人，Nucleic Acids Res., 18:5322 (1990))或CMV啟動子。除編碼免疫球蛋白或其域之核酸序列外，重組表現載體可攜載另外序列，諸如調節載體在宿主細胞(例如，複製之起源)之複製之序列及可選擇之標誌物基因。可選擇之標誌物基因促進已引入載體之宿主細胞之選擇(參見，例如，美國專利案第4,399,216、4,634,665及5,179,017號)。例如，通常可選擇之標誌物基因對已引入載體之宿主細胞賦予對藥物(諸如G418、潮黴素或甲氨蝶呤)之耐受性。具有可選擇之標誌物之載體之實例包括pMAM、pDR2、pBK-RSV、pBK-CMV、pOPRSV及pOP13。
在一項實施例中，抗體係產生於哺乳動物細胞中。用於表現抗體之例示性哺乳動物宿主細胞包括中國倉鼠卵巢(CHO細胞) (包括dhfr - CHO細胞(描述於Urlaub and Chasin (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220中，與DHFR可選擇之標誌物一起使用，例如，如描述於Kaufman及Sharp (1982) Mol. Biol. 159:601-621)中)、人類胚胎腎293細胞(例如，293、293E、293T)、COS細胞、NIH3T3細胞、淋巴細胞細胞系(例如，NS0骨髓瘤細胞及SP2細胞)及來自轉基因動物(例如，轉基因哺乳動物)之細胞。例如，該細胞係乳腺上皮細胞。
在用於抗體表現之例示性系統中，編碼本發明之雙特異性抗體之抗體重鏈及抗體輕鏈之重組表現載體係藉由由磷酸鈣介導之轉染引入dhfr - CHO細胞內。在一特定實施例中，dhfr - CHO細胞係DG44細胞系之細胞，諸如DG44i (參見，例如，Derouaz等人，Biochem Biophys Res Commun., 340(4):1069-77 (2006))。在重組表現載體內，抗體重鏈及輕鏈基因係各可操作地連接至強化子/啟動子調節元件(例如，衍生自SV40、CMV、腺病毒及類似物，諸如CMV強化子/AdMLP啟動子調節元件或SV40強化子/AdMLP啟動子調節元件)，以驅動基因之高程度轉錄。該等重組表現載體亦攜載DHFR基因，其容許選擇CHO細胞，該等CHO細胞已經載體使用甲氨蝶呤選擇/擴增轉染。所選轉形體宿主細胞係經培養以容許抗體重鏈及輕鏈之表現且抗體係回收自培養基。
多特異性抗體亦可由轉基因動物產生。例如，美國專利案第5,849,992號描述在轉基因哺乳動物之乳腺中表現抗體之方法。轉基因係經構築為包括牛奶特異性啟動子及編碼受關注之抗體之核酸及用於分泌之信號序列。由此等轉基因哺乳動物之雌性產生之牛奶包括其中分泌之受關注之抗體。該抗體可純化自牛奶，或就一些應用而言，直接使用。亦提供包含本文描述之核酸中之一或多者之動物。
本發明之多特異性抗體可分離自宿主細胞之內部或外部(諸如培養基)並純化為大體上純及同源性抗體。常用於抗體純化之分離及純化方法可用於抗體之分離及純化，且不限於任何特定方法。抗體可藉由適當地選擇及組合例如管柱層析術、過濾、超濾、鹽析、溶劑沈澱、溶劑萃取、蒸餾、免疫沈澱、SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳、等電聚焦、透析及重結晶加以分離及純化。層析術包括(例如)親和力層析術、離子交換層析術、疏水性層析術、凝膠過濾、反相層析術及吸附層析術(Strategies for Protein Purification and Characterization: A Laboratory Course Manual. Daniel R. Marshak等人編，Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1996)。層析術可使用液相層析術(諸如HPLC及FPLC)進行。用於親和力層析術之管柱包括蛋白A管柱及蛋白G管柱。使用蛋白A管柱之管柱之實例包括Hyper D、POROS及Sepharose FF (GE Healthcare Biosciences)。本發明亦包括使用此等純化方法高度純化之抗體。
醫藥組合物 本發明亦包括包含本文描述之抗體或編碼本文描述之抗體之多核苷酸及醫藥上可接受之稀釋劑、載劑或賦形劑之醫藥組合物。在某些實施例中，該醫藥組合物包含治療有效量之抗體或多核苷酸。
熟習此項技術者鑒於本發明將知曉各種醫藥上可接受之稀釋劑、載劑及賦形劑及用於製備及使用醫藥組合物之技術。說明性醫藥組合物及醫藥上可接受之稀釋劑、載劑及賦形劑亦描述於Remington: The Science and Practice of Pharmacy，第20版，(Lippincott, Williams及Wilkins 2003)中。在特定實施例中，各載劑、稀釋劑或賦形劑係在可與醫藥組合物之其他成分相容且對個體無害之意義上「可接受」。通常，醫藥上可接受之載劑係水性pH緩衝溶液。可充當醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑之材料之一些實例包括：無菌水；緩衝劑，例如，磷酸鹽緩衝鹽水；糖，諸如乳糖、葡萄糖及蔗糖；澱粉，諸如玉米澱粉及土豆澱粉；纖維素及其衍生物，諸如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素及乙酸纖維素；粉狀黃芪膠；麥芽；明膠；滑石；賦形劑，諸如可可油及栓劑蠟；油，諸如花生油、棉花籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油及大豆油；乙二醇，諸如丙二醇；多元醇，諸如甘油、山梨醇、甘露醇及聚乙二醇；酯，諸如油酸乙酯及月桂酸乙酯；瓊脂；緩衝劑，諸如氫氧化鎂及氫氧化鋁；海藻酸；無熱原水；等滲鹽水；林格氏溶液；乙醇；磷酸鹽緩衝溶液；及醫藥調配物中採用之其他非毒性可相容物質。潤濕劑、乳化劑及潤滑劑(諸如月桂基硫酸鈉及硬脂酸鎂)及著色劑、脫模劑、塗層劑、脫硫劑、調味劑及芳香劑、防腐劑及抗氧化劑亦可存在於組合物中。
醫藥組合物之調配物及遞送方法將通常根據欲治療之部位及疾病加以調適。例示性調配物包括(但不限於)彼等適用於非經腸投與(例如，靜脈內、動脈內、肌內或皮下投與)者，包括囊封於微胞、脂質體或藥物釋放膠囊(活性劑併入經設計用於緩釋之生物相容性包衣內)中之調配物；可消化之調配物；用於局部使用之調配物，諸如霜劑、軟膏及凝膠；及其他調配物，諸如吸入劑、氣溶膠及噴霧。
使用方法 本發明提供用於治療或預防有此需要之個體(例如，人類個體)中之HIV感染或相關疾病或失調症之方法，該等方法包括對有此需要之個體提供有效量之本文描述之抗體，或編碼該抗體之多核苷酸。如本文使用，在向個體投與之療法之內文中之術語「有效量」係指達成所需預防或治療效果之療法之量。多核苷酸可存在於載體(例如，病毒載體)中。在特定實施例中，相關疾病或失調症係由受HIV之感染引起。在特定實施例中，其係獲得性免疫不全症候群(AIDS)。在特定實施例中，個體係病毒學抑制之受HIV感染之哺乳動物，而在其他實施例中，該個體係未接受過治療之受HIV感染之哺乳動物。在某些實施例中，未接受過治療之個體具有在103 與105 個拷貝/ml之間的病毒載量，及在某些實施例中，病毒學抑制之個體具有病毒載量＜ 50個拷貝/ml。在特定實施例中，該個體係哺乳動物，例如，人類。在某些實施例中，該個體已經診斷患有HIV (例如，HIV-1或HIV-2)感染或相關疾病或失調症(例如，AIDS)或被認為處於發展HIV (例如，HIV-1或HIV-2)感染或相關疾病或失調症(例如，AIDS)之風險下。處於HIV-相關疾病或失調症之風險下之個體包括已接觸感染者或以其他方式曝露於HIV之病患。預防劑之投與可在HIV-相關疾病或失調症之症狀特性之表現前發生，使得疾病或失調症在其進展過程中被預防或或者延遲。
亦提供用於治療或抑制個體(例如，人類個體)中之HIV病毒滴定量、病毒複製、病毒增殖或HIV病毒DNA、HIV前病毒DNA或HIV病毒蛋白之量之增加之方法。在一項實施例中，該方法包括向有此需要之個體提供一定量之本文描述之抗體或編碼該抗體之多核苷酸，該量有效預防個體中之HIV滴定量、病毒複製或一或多種HIV菌株或分離株之HIV蛋白之量之增加。在某些實施例中，該方法進一步包括在一個或多個時間點(例如，在向該個體提供本發明之抗體之前及之後)量測HIV病毒或前病毒DNA或蛋白質之量。用於測定個體中之HIV病毒或前病毒DNA或蛋白質之量之方法及生物標誌物已為此項技術中已知及可獲得，且描述(例如)於Siliciano, J.D.等人，Curr Opin. HIV AIDS, 5(6):491-7 (2010)，及Rouzioux, C.等人，Curr Opin HIV AIDS, 8(3):170-5 (2013)中。
本文描述之Duobody®可在分離自受組合抗逆轉錄病毒療法(cART)抑制之病患之CD4+ T細胞中活體外重新活化潛在HIV且因此可實際上增加HIV病毒滴定量。此係Duobody®之益處，因為其將活化潛在受感染之細胞以表現gp120且將然後潛在地被靶向以用於消除。結合至CD3可誘導部分T細胞活化表型及潛在受感染之CD4+ T細胞之活化導致病毒表現。因此，特徵亦在於逆轉有此需要之個體中之HIV之潛伏之方法。該方法涉及向有此需要之人類個體投與本文描述之gp120 X CD3 Duobody®。在某些實施例中，該方法進一步包括在一或多個時間點(例如，在向該個體提供本發明之Duobody®之前及之後)量測HIV RNA、病毒或前病毒DNA或蛋白質之量。
在某些態樣中，本發明之抗體可用於(例如)抑制某些病毒(諸如本文描述之HIV分離株)、預防抑制或預防某些病毒(諸如本文描述之HIV分離株)之感染、在樣本中偵測某些病毒(諸如本文描述之HIV分離株)、抑制某些病毒(諸如本文描述之HIV分離株)、診斷某些病毒(諸如本文描述之HIV分離株)之方法中。
就哺乳動物個體(例如，人類)之活體內治療而言，可向該個體投與或提供包含本文描述之多特異性抗體之醫藥組合物。當用於活體內療法時，本文描述之抗體係通常以治療有效量(即，消除或減小病患之病毒負荷及/或病毒庫之量)向該病患投與或提供。該等抗體係根據已知方法諸如(但不限於)靜脈內投與(例如，作為推注或藉由在一段時間週期內連續輸注)、藉由肌內、腹膜內、腦脊髓內、皮下、關節內、滑膜內、囊內、經口、局部或吸入途徑向哺乳動物個體(例如，人類)投與或提供。該等抗體可非經腸投與(在可能之情況下)在靶細胞位點處，或靜脈內投與。在一項實施例中，向該個體投與抗體係經由靜脈內途徑。在另一實施例中，向該個體投與抗體係經由皮下途徑。在特定實施例中，本發明之醫藥組合物係向病患全身、非經腸或局部投與。
在某些實施例中，本發明提供用於治療HIV感染之方法，該方法包括向有此需要之病患投與治療有效量之本文揭示之抗體。
組合療法 在某些實施例中，提供用於治療或預防患有感染或處於患有感染之風險下之人類之HIV感染之方法，該方法包括向該人類投與治療有效量之本文揭示之抗體(或其醫藥組合物)與治療有效量之一或多種(例如，一、二、三、一或二，或一至三種)另外治療劑之組合。在一項實施例中，提供用於治療患有感染或處於患有感染之風險下之人類之HIV感染之方法，該方法包括向該人類投與治療有效量之本文揭示之抗體(或其醫藥上可接受之鹽)與治療有效量之一或多種(例如，一、二、三、一或二，或一至三種)另外治療劑之組合。
在一項實施例中，提供包含本文揭示之抗體(或其醫藥組合物)與一或多種(例如，一、二、三、一或二，或一至三種)另外治療劑及醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑之組合之醫藥組合物。
在某些實施例中，本發明提供用於治療HIV感染之方法，該方法包括向有此需要之病患投與治療有效量之本文揭示之抗體(或其醫藥組合物)與治療有效量之一或多種適用於治療HIV感染之另外治療劑之組合。
在某些實施例中，本文揭示之抗體或其醫藥組合物係與一、二、三、四或多種另外治療劑組合。在某些實施例中，本文揭示之抗體或其醫藥組合物係與兩種另外治療劑組合。在其他實施例中，本文揭示之抗體或其醫藥組合物係與三種另外治療劑組合。在其他實施例中，本文揭示之抗體或其醫藥組合物係與四種另外治療劑組合。一、二、三、四或多種另外治療劑可係選自治療劑之相同類別之不同治療劑，及/或其等可選自治療劑之不同類別。
在某些實施例中，本文揭示之抗體係與一或多種另外治療劑一起投與。本文揭示之抗體及一或多種另外治療劑之共投與通常係指本文揭示之化合物及一或多種另外治療劑之同時或順序投與，使得治療有效量之本文揭示之抗體及一或多種另外治療劑係同時存在於病患之體內。當順序投與時，該組合可以兩次或多次投與進行投與。
共投與包括在單位劑量之一或多種另外治療劑之投與之前或之後，投與單位劑量之本文揭示之抗體。例如，本文揭示之抗體可在一或多種另外治療劑之投與之數秒、數分鐘或數小時內投與。在一些實施例中，首先投與單位劑量之本文揭示之抗體，接著在數秒或數分鐘內投與單位劑量之一或多種另外治療劑。或者，首先投與單位劑量之一或多種另外治療劑，接著在數秒或數分鐘內投與單位劑量之本文揭示之抗體。在其他實施例中，首先投與單位劑量之本文揭示之抗體，接著在數小時之週期(例如，1至12小時)後，投與單位劑量之一或多種另外治療劑。在又其他實施例中，首先投與單位劑量之一或多種另外治療劑，接著，在數小時之週期(例如，1至12小時)後，投與單位劑量之本文揭示之抗體。
在某些實施例中，本文揭示之抗體係與一或多種另外治療劑組合成單一劑型以用於向病患同時投與，例如作為用於經口投與之固體劑型。
在某些實施例中，本發明之抗體係調配成液體，液體可視需要含有適用於治療HIV之另外治療劑。在某些實施例中，該液體可含有用於治療HIV之另一活性成分，諸如HIV蛋白酶抑制劑、逆轉錄酶之HIV非核苷或非核苷抑制劑、逆轉錄酶之HIV核苷或核苷抑制劑、HIV整合酶抑制劑、HIV非催化位點(或變構)整合酶抑制劑、藥物動力學增強劑，及其組合。
在某些實施例中，此等調配物適用於每日一次給藥。在上述實施例中，另外治療劑可係抗HIV劑。在一些實例中，另外治療劑可係HIV蛋白酶抑制劑、逆轉錄酶之HIV非核苷或非核苷抑制劑、逆轉錄酶之HIV核苷或核苷抑制劑、HIV整合酶抑制劑、HIV非催化位點(或變構)整合酶抑制劑、HIV進入抑制劑、HIV成熟抑制劑、潛伏期逆轉劑、靶向HIV衣殼之化合物、基於免疫之治療劑、磷脂醯肌醇3-激酶(PI3K)抑制劑、HIV抗體、雙特異性抗體及「抗體樣」治療性蛋白質、HIV p17基質蛋白抑制劑、IL-13拮抗劑、肽基-脯胺醯基順式-反式異構酶A調節劑、蛋白質二硫鍵異構酶抑制劑、補體C5a受體拮抗劑、DNA甲基轉移酶抑制劑、HIV vif基因調節劑、Vif二聚化拮抗劑、HIV-1病毒感染因子抑制劑、TAT蛋白抑制劑、HIV-1 Nef調節劑、Hck酪胺酸激酶調節劑、混合譜系激酶-3 (MLK-3)抑制劑、HIV-1剪接抑制劑、Rev蛋白抑制劑、整合素拮抗劑、核蛋白抑制劑、剪接因子調節劑、含有COMM域之蛋白1調節劑、HIV核糖核酸酶H抑制劑、回溯環狀蛋白(retrocyclin)調節劑、CDK-9抑制劑、樹突狀ICAM-3之非整合1抑制劑、HIV GAG蛋白抑制劑、HIV POL蛋白抑制劑、補體因子H調節劑、泛素連接酶抑制劑、脫氧胞苷激酶抑制劑、週期素依賴性激酶抑制劑、前蛋白轉形酶PC9刺激物、ATP依賴性RNA解旋酶DDX3X抑制劑、逆轉錄酶引發複合物抑制劑、G6PD及NADH-氧化酶抑制劑、藥物動力學增強劑、HIV基因療法、HIV疫苗，及其組合。
在一些實施例中，另外治療劑係選自由以下組成之群：針對HIV之組合藥物、用於治療HIV之其他藥物、HIV蛋白酶抑制劑、HIV逆轉錄酶抑制劑、HIV整合酶抑制劑、HIV非催化位點(或變構)整合酶抑制劑、HIV進入(融合)抑制劑、HIV成熟抑制劑、潛伏期逆轉劑、衣殼抑制劑、基於免疫之治療劑、PI3K抑制劑、HIV抗體及雙特異性抗體及「抗體樣」治療性蛋白質，及其組合。
可與本發明之抗體一起使用之組合藥物之實例包括ATRIPLA® (依法韋侖、富馬酸替諾福韋地索蒲賽及恩曲他濱)；COMPLERA® (EVIPLERA®；利匹韋林、富馬酸替諾福韋地索蒲賽及恩曲他濱)；STRIBILD® (埃替格韋、可比司他、富馬酸替諾福韋地索蒲賽及恩曲他濱)；TRUVADA® (富馬酸替諾福韋地索蒲賽及恩曲他濱；TDF+FTC)；DESCOVY® (替諾福韋艾拉酚胺及恩曲他濱)；ODEFSEY® (替諾福韋艾拉酚胺、恩曲他濱及利匹韋林)；GENVOYA® (替諾福韋艾拉酚胺、恩曲他濱、可比司他及埃替格韋)； 地瑞納韋、半富馬酸替諾福韋艾拉酚胺、恩曲他濱及可比司他；依法韋侖、拉米夫定及富馬酸替諾福韋地索蒲賽；拉米夫定及富馬酸替諾福韋地索蒲賽；替諾福韋及拉米夫定；替諾福韋艾拉酚胺及恩曲他濱；半富馬酸替諾福韋艾拉酚胺及恩曲他濱；半富馬酸替諾福韋艾拉酚胺、恩曲他濱及利匹韋林；半富馬酸替諾福韋艾拉酚胺、恩曲他濱、可比司他及埃替格韋；COMBIVIR® (齊多夫定及拉米夫定；AZT+3TC)；EPZICOM® (LIVEXA®；硫酸阿巴卡韋及拉米夫定；ABC+3TC)；KALETRA® (ALUVIA®；洛匹那韋及利托那韋)；TRIUMEQ® (度魯特韋、阿巴卡韋及拉米夫定)；TRIZIVIR® (硫酸阿巴卡韋、齊多夫定及拉米夫定；ABC+AZT+3TC)；阿紮那韋及可比司他；硫酸阿紮那韋及可比司他；硫酸阿紮那韋及利托那韋；地瑞納韋及可比司他；度魯特韋及利匹韋林；度魯特韋及利匹韋林鹽酸鹽；度魯特韋、硫酸阿巴卡韋及拉米夫定；拉米夫定、奈韋拉平及齊多夫定；雷特格韋及拉米夫定；朵拉維林、拉米夫定及富馬酸替諾福韋地索蒲賽；朵拉維林、拉米夫定及替諾福韋二吡呋酯；度魯特韋+拉米夫定、拉米夫定+阿巴卡韋+齊多夫定、拉米夫定+阿巴卡韋、拉米夫定+富馬酸替諾福韋地索蒲賽、拉米夫定+齊多夫定+奈韋拉平、洛匹那韋+利托那韋、洛匹那韋+利托那韋+阿巴卡韋+拉米夫定、洛匹那韋+利托那韋+齊多夫定+拉米夫定、替諾福韋+拉米夫定及富馬酸替諾福韋地索蒲賽+恩曲他濱+利匹韋林鹽酸鹽、洛匹那韋、利托那韋、齊多夫定及拉米夫定；Vacc-4x及羅米地辛；及APH-0812。
可與本發明之抗體組合用於治療HIV之其他藥物之實例包括乙醯嗎喃、阿拉泊韋、BanLec、去鐵酮、Gamimune、麥特可法林(metenkefalin)、納曲酮、Prolastin、REP 9、RPI-MN、VSSP、H1viral、SB-728-T、1,5-二咖啡醯奎寧酸、rHIV7-shl-TAR-CCR5RZ、AAV-eCD4-Ig基因治療劑、MazF基因治療劑、BlockAide、ABX-464、AG-1105、APH-0812、BIT-225、CYT-107、HGTV-43、HPH-116、HS-10234、IMO-3100、IND-02、MK-1376、MK-8507、MK-8591、NOV-205、PA-1050040 (PA-040)、PGN-007、SCY-635、SB-9200、SCB-719、TR-452、TEV-90110、TEV-90112、TEV-90111、TEV-90113、RN-18、Immuglo及VIR-576。
可與本發明之抗體組合之HIV蛋白酶抑制劑之實例包括安普那韋、阿紮那韋、貝卡那韋、地瑞納韋、福沙那韋、福沙那韋鈣、茚地那韋、硫酸茚地那韋、洛匹那韋、奈非那韋、甲磺酸奈非那韋、利托那韋、沙奎那韋、甲磺酸沙奎那韋、替拉那韋、DG-17、TMB-657 (PPL-100)、T-169、BL-008及TMC-310911。
可與本發明之抗體組合之逆轉錄酶之HIV核苷或非核苷抑制劑之實例包括達匹維林、地拉夫定、甲磺酸地拉夫定、朵拉維林、依法韋侖、依曲韋林、香菇多糖、奈韋拉平、利匹韋林、ACC-007、AIC-292、KM-023及VM-1500。
可與本發明之抗體組合之逆轉錄酶之HIV核苷或核苷抑制劑之實例包括阿德福韋、阿德福韋福韋酯、阿茲夫定、恩曲他濱、替諾福韋、替諾福韋艾拉酚胺、富馬酸替諾福韋艾拉酚胺、半富馬酸替諾福韋艾拉酚胺、替諾福韋二吡呋酯、富馬酸替諾福韋地索蒲賽、半富馬酸替諾福韋二吡呋酯、VIDEX®及VIDEX EC® (地達諾新、ddl)、阿巴卡韋、硫酸阿巴卡韋、阿洛夫定、阿立他濱、森薩夫定(censavudine)、地達諾新、艾夫他濱、福替那韋(festinavir)、磷夫定酯、CMX-157、達匹維林、朵拉維林、依曲韋林、OCR-5753、乳清酸替諾福韋二吡呋酯、福齊夫定替酯、拉米夫定、齊多夫定替單磷酸酯、司他夫定、紮西他濱、齊多夫定、GS-9131、GS-9148及KP-1461。
可與本發明之抗體組合之HIV整合酶抑制劑之實例包括埃替格韋、薑黃素、薑黃素之衍生物、菊苣酸、菊苣酸之衍生物、3,5-二咖啡醯奎寧酸、3,5-二咖啡醯奎寧酸之衍生物、金精三羧酸、金精三羧酸之衍生物、咖啡酸苯乙酯、咖啡酸苯乙酯之衍生物、酪胺酸磷酸化抑制劑、酪胺酸磷酸化抑制劑之衍生物、槲皮素、槲皮素之衍生物、雷特格韋、度魯特韋、JTK-351、比克替拉韋(bictegravir)、AVX-15567、卡博特韋(cabotegravir (長效可注射))、二酮基喹啉-4-1衍生物、整合酶-LEDGF抑制劑、萊金(ledgins)、M-522、M-532、NSC-310217、NSC-371056、NSC-48240、NSC-642710、NSC-699171、NSC-699172、NSC-699173、NSC-699174、二苯乙烯二磺酸、T-169及卡博特韋。
可與本發明之抗體組合之HIV非催化位點(或變構)整合酶抑制劑(NCINI)之實例包括CX-05045、CX-05168及CX-14442。
可與本發明之抗體組合之HIV進入(融合)抑制劑之實例包括賽尼克韋羅(cenicriviroc)、CCR5抑制劑、gp41抑制劑、CD4結合抑制劑、gp120抑制劑及CXCR4抑制劑。
可與本發明之抗體組合之CCR5抑制劑之實例包括阿拉韋羅、維立韋羅、馬拉韋羅、賽尼克韋羅、PRO-140、阿達他韋(adaptavir (RAP-101))、尼非韋羅(TD-0232)、抗GP120/CD4或CCR5雙特異性抗體、B-07、MB-66、多肽C25P、TD-0680及vMIP (Haimipu)。
可與本發明之抗體組合之gp41抑制劑之實例包括艾博衛泰、恩夫韋地、BMS-986197、恩夫韋地生物更佳藥、恩夫韋地生物類似藥、HIV-1融合抑制劑(P26-Bapc)、ITV-1、ITV-2、ITV-3、ITV-4、PIE-12三聚物及西夫韋肽。
可與本發明之抗體組合之CD4結合抑制劑之實例包括伊巴珠單抗及CADA類似物。
可與本發明之抗體組合之gp120抑制劑之實例包括Radha-108 (瑞賽脫(receptol)) 3B3-PE38、BanLec、基於膨潤土之奈米醫學、福斯特賽韋氨丁三醇(fostemsavir tromethamine)、IQP-0831及BMS-663068。
可與本發明之抗體組合之CXCR4抑制劑之實例包括普樂沙福、ALT-1188、N15肽及vMIP (Haimipu)。
可與本發明之抗體組合之HIV成熟抑制劑之實例包括BMS-955176及GSK-2838232。
可與本發明之抗體組合之潛伏期逆轉劑之實例包括組蛋白去乙醯化酶(HDAC)抑制劑、蛋白酶體抑制劑(諸如萬珂)、蛋白激酶C (PKC)活化劑、Smyd2抑制劑、BET-布羅莫結構4 (BRD4)抑制劑、離子黴素、PMA、SAHA (脲基異羥肟酸或辛二醯基、苯胺及異羥肟酸)、NIZ-985、 IL-15、JQ1、戒酒硫、兩性黴素B及泛素抑制劑(諸如拉格唑拉類似物及GSK-343)。HDAC抑制劑之實例包括羅米地辛、伏立諾他及帕比司他。PKC活化劑之實例包括吲哚內醯胺、酪胺酸激酶抑制劑(prostratin)、巨大戟二萜醇B及DAG-內酯。
可與本發明之抗體組合之衣殼抑制劑之實例包括衣殼聚合抑制劑或衣殼破壞化合物、HIV核衣殼p7 (NCp7)抑制劑(諸如偶氮二甲醯胺)、HIV p24衣殼蛋白抑制劑、AVI-621、AVI-101、AVI-201、AVI-301及AVI-CAN1-15系列。
可與本發明之抗體組合之基於免疫之治療劑之實例包括類鐸受體調節抑制劑，諸如TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、TLR11、TLR12及TLR13；程序性細胞死亡蛋白1 (PD-1)調節劑；程序性死亡配體1 (PD-L1)調節劑；IL-15促效劑；DermaVir；白介素-7；硫酸羥基氯喹(羥氯喹)；阿地白介素(proleukin) (阿地白介素(aldesleukin)，IL-2)；干擾素α；干擾素α-2b；干擾素α-n3；聚乙二醇化干擾素α；干擾素γ；羥基脲；麥考酚酸酯(MPA)及其酯衍生之麥考酚酸酯(MMF)；利巴韋林；雷他莫德、聚合物聚乙烯亞胺(PEI)；吉朋(gepon)；雷他莫德；IL-12；WF-10；VGV-1；MOR-22；BMS-936559；CYT-107、白介素-15/Fc融合蛋白、諾弗龍(normferon)、聚乙二醇干擾素α-2a、聚乙二醇干擾素α-2b、重組白介素-15、RPI-MN、GS-9620及IR-103。
可與本發明之抗體組合之PI3K抑制劑之實例包括艾代拉利司、阿派裡斯(alpelisib)、布帕裡斯(buparlisib)、CAI乳清酸鹽、庫盼裡斯(copanlisib)、杜維裡斯(duvelisib)、戈達托裡斯(gedatolisib)、來那替尼、帕紐裡斯(panulisib)、哌立福新、匹替裡斯(pictilisib)、匹拉裡斯(pilaralisib)、甲磺酸普喹替尼(puquitinib mesylate)、瑞格色替(rigosertib)、瑞格色替(rigosertib sodium)、搜那裡斯(sonolisib)、他賽裡斯(taselisib)、AMG-319、AZD-8186、BAY-1082439、CLR-1401、CLR-457、CUDC-907、DS-7423、EN-3342、GSK-2126458、GSK-2269577、GSK-2636771、INCB-040093、LY-3023414、MLN-1117、PQR-309、RG-7666、RP-6530、RV-1729、SAR-245409、SAR-260301、SF-1126、TGR-1202、UCB-5857、VS-5584、XL-765及ZSTK-474。
可與本發明之抗體組合之整合素α-4/β-7拮抗劑之實例包括PTG-100、TRK-170、阿布里單抗(abrilumab)、埃圖力珠單抗、卡他斯特甲基(carotegrast methyl)及維多珠單抗。
可與本發明之抗體組合之HIV抗體、雙特異性抗體及「抗體樣」治療性蛋白質之實例包括DARTs®、DUOBODIES®、BITES®、XmAbs®、TandAbs®、Fab衍生物、bNAb (廣泛中和HIV-1抗體)、BMS-936559、TMB-360及彼等靶向HIV gp120或gp41者、靶向HIV之抗體徵集分子、抗CD63單株抗體、抗GB病毒C抗體、抗GP120/CD4、CCR5雙特異性抗體、抗nef單域抗體、抗Rev抗體、駱駝科衍生之抗CD18抗體、駱駝科衍生之抗ICAM-1抗體、DCVax-001、gp140靶向抗體、基於gp41之HIV治療抗體、人類重組mAb (PGT-121)、伊巴珠單抗、Immuglo、MB-66。彼等以此方式靶向HIV者之實例包括巴維昔單抗、UB-421、C2F5、C2G12、C4E10、C2F5+C2G12+C4E10、3BNC-117、PGT145、PGT121、PGDM1400、MDX010 (易普利姆瑪)、VRC01、A32、7B2、10E8、VRC-07-523、VRC-HIVMAB080-00-AB、MGD-014及VRC07。靶向HIV之抗體之另外實例包括PGT122 、 PGT123 、 PGT124 、 10-1074 、 PGT133 、 PGT134 、 PG16 、 PG9 、 PGT151 或類似物。
可與本發明之抗體組合之藥物動力學增強劑之實例包括可比司他及利托那韋。
可與本發明之抗體組合之另外治療劑之實例包括以下揭示之化合物：WO 2004/096286 (Gilead Sciences)、WO 2006/015261 (Gilead Sciences)、WO 2006/110157 (Gilead Sciences)、WO 2012/ 003497 (Gilead Sciences)、WO 2012/003498 (Gilead Sciences)、WO 2012/145728 (Gilead Sciences)、WO 2013/006738 (Gilead Sciences)、WO 2013/159064 (Gilead Sciences)、WO 2014/100323 (Gilead Sciences)、US 2013/0165489 (賓夕法尼亞大學)、US 2014/0221378 (Japan Tobacco)、US 2014/0221380 (Japan Tobacco)、WO 2009/062285 (Boehringer Ingelheim)、WO 2010/130034 (Boehringer Ingelheim)、WO 2013/006792 (Pharma Resources)、US 20140221356 (Gilead Sciences)、US 20100143301 (Gilead Sciences)及WO 2013/091096 (Boehringer Ingelheim)。
可與本發明之抗體組合之HIV疫苗之實例包括肽疫苗、重組子單元蛋白疫苗、活載體疫苗、DNA疫苗、CD4衍生之肽疫苗、疫苗組合、rgp120 (AIDSVAX)、ALVAC HIV (vCP1521)/AIDSVAX B/E (gp120) (RV144)、單體gp120 HIV-1亞型C疫苗、Remune、ITV-1、Contre Vir、Ad5-ENVA-48、DCVax-001 (CDX-2401)、Vacc-4x、Vacc-C5、VAC-3S、多支(multiclade) DNA重組腺病毒-5 (rAd5)、Pennvax-G、Pennvax-GP、HIV-TriMix-mRNA疫苗、HIV-LAMP-vax、Ad35、Ad35-GRIN、NAcGM3/VSSP ISA-51、聚ICLC輔佐之疫苗、TatImmune、GTU-多HIV (FIT-06)、gp140[δ]V2.TV1+MF-59、rVSVIN HIV-1 gag疫苗、SeV-Gag疫苗、AT-20、DNK-4、ad35-Grin/ENV、TBC-M4、HIVAX、HIVAX-2、NYVAC-HIV-PT1、NYVAC-HIV-PT4、DNA-HIV-PT123、rAAV1-PG9DP、GOVX-B11、GOVX-B21、TVI-HIV-1、Ad-4 (Ad4-env C支+Ad4-mGag)、EN41-UGR7C、EN41-FPA2、PreVaxTat、AE-H、MYM-V101、CombiHIVvac、ADVAX、MYM-V201、MVA-CMDR、DNA-Ad5 gag/pol/nef/nev (HVTN505)、MVATG-17401、ETV-01、CDX-1401、rcAD26.MOS1.HIV-Env、Ad26.Mod.HIV疫苗、AGS-004、AVX-101、AVX-201、PEP-6409、SAV-001、ThV-01、TL-01、TUTI-16、VGX-3300、IHV-001，及類似病毒顆粒疫苗，諸如假病毒顆粒疫苗，CombiVICHvac、LFn-p24 B/C融合疫苗、基於GTU之DNA疫苗、HIV gag/pol/nef/env DNA疫苗、抗TAT HIV疫苗、結合之多肽疫苗、樹突細胞疫苗、基於gag之DNA疫苗、GI-2010、gp41 HIV-1疫苗、HIV疫苗(PIKA佐劑)、I i-key/MHC類別II抗原決定基雜合肽疫苗、ITV-2、ITV-3、ITV-4、LIPO-5、多支Env疫苗、MVA疫苗、Pennvax-GP、缺乏pp71之HCMV載體HIV gag疫苗、重組肽疫苗(HIV感染)、NCI、rgp160 HIV疫苗、RNA活性HIV疫苗、SCB-703、Tat Oyi疫苗、TBC-M4、治療性HIV疫苗、UBI HIV gp120、Vacc-4x+羅米地辛、變體gp120多肽疫苗、rAd5 gag-pol env A/B/C疫苗。
可與本發明之抗體組合之用於節育(避孕劑)之治療劑包括乙酸環丙孕酮、去氧孕烯、地諾孕素、屈螺酮、雌二醇戊酸、乙炔雌二醇、炔諾醇、依託孕烯、左亞葉酸、左炔諾孕酮、利奈孕酮、乙酸甲羥孕酮、美雌醇、米非司酮、米索前列醇、乙酸諾美孕酮、甲基孕酮、炔諾酮、異炔諾酮、炔諾肟酯、奧美昔芬、乙酸烯諾孕酮(segestersone acetate)、乙酸烏利司他及其任何組合。
在一特定實施例中，本文揭示之抗體或其醫藥上可接受之鹽係與選自以下之一、二、三、四或多種另外治療劑組合：ATRIPLA® (依法韋侖、富馬酸替諾福韋地索蒲賽及恩曲他濱)；COMPLERA® (EVIPLERA®；利匹韋林、富馬酸替諾福韋地索蒲賽及恩曲他濱)；STRIBILD® (埃替格韋、可比司他、富馬酸替諾福韋地索蒲賽及恩曲他濱)；TRUVADA® (富馬酸替諾福韋地索蒲賽及恩曲他濱；TDF +FTC)；DESCOVY® (替諾福韋艾拉酚胺及恩曲他濱)；ODEFSEY® (替諾福韋艾拉酚胺、恩曲他濱及利匹韋林)；GENVOYA® (替諾福韋艾拉酚胺、恩曲他濱、可比司他及埃替格韋)；阿德福韋；阿德福韋福韋酯；可比司他；恩曲他濱；替諾福韋；替諾福韋二吡呋酯；富馬酸替諾福韋地索蒲賽；替諾福韋艾拉酚胺；半富馬酸替諾福韋艾拉酚胺；TRIUMEQ® (度魯特韋、阿巴卡韋及拉米夫定)；度魯特韋、硫酸阿巴卡韋及拉米夫定；雷特格韋；雷特格韋及拉米夫定；馬拉韋羅；恩夫韋地；ALUVIA® (KALETRA®；洛匹那韋及利托那韋)；COMBIVIR® (齊多夫定及拉米夫定；AZT+3TC)；EPZICOM® (LIVEXA®；硫酸阿巴卡韋及拉米夫定；ABC+3TC)；TRIZIVIR® (硫酸阿巴卡韋、齊多夫定及拉米夫定；ABC+AZT+3TC)；利匹韋林；利匹韋林鹽酸鹽；硫酸阿紮那韋及可比司他；阿紮那韋及可比司他；地瑞納韋及可比司他；阿紮那韋；硫酸阿紮那韋；度魯特韋；埃替格韋；利托那韋；硫酸阿紮那韋及利托那韋；地瑞納韋；拉米夫定；prolastin；福沙那韋；福沙那韋鈣依法韋侖；依曲韋林；奈非那韋；甲磺酸奈非那韋；干擾素；地達諾新；司他夫定；茚地那韋；硫酸茚地那韋；替諾福韋及拉米夫定；齊多夫定；奈韋拉平；沙奎那韋；甲磺酸沙奎那韋；阿地白介素；紮西他濱；替拉那韋；安普那韋；地拉夫定；甲磺酸地拉夫定；Radha-108 (瑞賽脫)；拉米夫定及富馬酸替諾福韋地索蒲賽；依法韋侖、拉米夫定及富馬酸替諾福韋地索蒲賽；齊多夫定替單磷酸酯；拉米夫定、奈韋拉平及齊多夫定；阿巴卡韋；及硫酸阿巴卡韋。
在一特定實施例中，本文揭示之抗體或其醫藥組合物係與逆轉錄酶之HIV核苷或核苷抑制劑及逆轉錄酶之HIV非核苷抑制劑組合。在另一特定實施例中，本文揭示之抗體或其醫藥組合物係與逆轉錄酶之HIV核苷或核苷抑制劑，及HIV蛋白酶抑制化合物組合。在一另外實施例中，本文揭示之抗體或其醫藥組合物係與逆轉錄酶之HIV核苷或核苷抑制劑、逆轉錄酶之HIV非核苷抑制劑，及藥物動力學增強劑組合。在某些實施例中，本文揭示之抗體或其醫藥組合物係與逆轉錄酶之至少一種HIV核苷抑制劑、整合酶抑制劑及藥物動力學增強劑組合。在另一實施例中，本文揭示之抗體或其醫藥組合物係與逆轉錄酶之兩種HIV核苷或核苷抑制劑組合。
在一特定實施例中，本文揭示之抗體或其醫藥組合物係與硫酸阿巴卡韋、替諾福韋、替諾福韋二吡呋酯、富馬酸替諾福韋地索蒲賽、半富馬酸替諾福韋二吡呋酯、替諾福韋艾拉酚胺或半富馬酸替諾福韋艾拉酚胺組合。
在一特定實施例中，本文揭示之抗體或其醫藥組合物係與替諾福韋、替諾福韋二吡呋酯、富馬酸替諾福韋地索蒲賽、替諾福韋艾拉酚胺或半富馬酸替諾福韋艾拉酚胺組合。
在一特定實施例中，本文揭示之抗體或其醫藥組合物係與選自由以下組成之群之第一另外治療劑組合：硫酸阿巴卡韋、替諾福韋、替諾福韋二吡呋酯、富馬酸替諾福韋地索蒲賽、替諾福韋艾拉酚胺及半富馬酸替諾福韋艾拉酚胺，及與選自由以下組成之群之第二另外治療劑組合：恩曲他濱及拉米夫定。
在一特定實施例中，本文揭示之抗體或其醫藥組合物係與選自由以下組成之群之第一另外治療劑組合：替諾福韋、替諾福韋二吡呋酯、富馬酸替諾福韋地索蒲賽、替諾福韋艾拉酚胺及半富馬酸替諾福韋艾拉酚胺，及與第二另外治療劑組合，其中該第二另外治療劑係恩曲他濱。
在另一特定實施例中，本文揭示之抗體或其醫藥組合物係與選自由以下組成之群之第一另外治療劑(避孕劑)組合：乙酸環丙孕酮、去氧孕烯、地諾孕素、屈螺酮、雌二醇戊酸、乙炔雌二醇、炔諾醇、依託孕烯、左亞葉酸、左炔諾孕酮、利奈孕酮、乙酸甲羥孕酮、美雌醇、米非司酮、米索前列醇、乙酸諾美孕酮、甲基孕酮、炔諾酮、異炔諾酮、炔諾肟酯、奧美昔芬、乙酸烯諾孕酮、乙酸烏利司他及其任何組合。
套組 本發明亦包括包含一或多種本文描述之抗體或其共軛物之套組。在一項實例中，本文提供包含以本文描述之醫藥組合物之成分中之一或多種(諸如一或多種本文提供之抗體)填充之一或多個容器之藥物包裝或套組。在一些實例中，該等套組含有本文描述之醫藥組合物。在一項實施例中，本文提供包含本文揭示之抗體(或其醫藥組合物)與一或多種(例如，一、二、三、一或二，或一至三種)另外治療劑(諸如彼等上文揭示者)之組合之套組。視需要與此(等)容器相關聯可係呈由調整藥物或生物產品之製造、用途或銷售之政府機構規定之形式之通知，該通知反映由製造、用途或銷售之機構針對人類投與進行批准。
實例 提供下列實例以更佳闡述本發明且不應視為對本發明之範圍之限制。就提及特定材料之程度而言，其僅出於闡述之目的且非意欲限制本發明。熟習此項技術者可研發等效方式或反應物而不運用發明能力且不背離本發明之範圍。
實例 1 ：病毒中和活性 PGT121係廣泛涵蓋HIV亞型B分離株之高效中和抗體(IC50 0.03 µg/ml, 80%幅度)。PGT121及其變體之中和之效能(作為IC50或IC95量測)及幅度(自測試組中和之分離株%)係使用兩種不同之經公開之分析形式檢查： i)基於CEM-NKr-CCR5-LucR報導細胞系之分析(Li等人，2005. J Vir 79(16): 10108-10125)，其可相容用於針對假病毒型及複製勝任型HIV分離株篩選抗體；及 ii) Monogram HIV PhenoSense中和分析(Monogram Biosciences)，其使用具有受關注之HIV Env變體之螢光素酶報導病毒假病毒型(Richman等人，2003. PNAS 100(7): 4144-4149)。
在基於報導細胞系之CEM-NKr-CCR5-LucR中和分析(一種多週期病毒複製分析(Spenlehauer等人，2001. Virology, doi:10.1006/viro.2000.0780))中，抗體係針對一組五種複製勝任型臨床分離株進行篩選，該等五種複製勝任型臨床分離株包括擴增自病患血漿樣本(NIH AIDS試劑計劃)之實驗室適應之HIV-1 BaL菌株及亞型B分離株93HT593、92US657、92US712及92US727。
就所測試之五種病毒而言，觀測到數種變體PGT-121抗體之中和效能堪比PGT-121 (本文亦稱為PGT-121 LO6)之中和效能，此表明相較於PGT-121存在於此等抗體中之修飾對抗原識別及結合(具有CEM-NKr-CCR5-Luc細胞之下表5)之決定子具有最小影響。相較於PGT121，其他變體(例如，PGT121.60及PGT121.61)針對此受限病毒組顯示中和效能增加2至3倍。 表5：如使用基於CEM.NKr.CCR5.LucR之分析可見，PGT121及針對HIV-1菌株BaL、HT593、US657、US712及US727之選擇變體之中和活性。資料表示2至3次重複之平均值
在Monogram中和分析中，Env (gp160)編碼區係擴增自分離自HIV+ ART原始病毒血症病患之血漿病毒RNA並選殖至表現載體內，使得存在於病患血漿樣本中之病毒準種分佈係經維持。該等表現載體係然後用以產生表現病患衍生之Env蛋白之HIV-1假病毒群。針對Monogram中和分析產生兩組B支臨床分離株：組1 (Monogram臨床分離株組)包含來自Monogram庫收集之63種分離株，且包括33或更多種CCR5-熱帶病毒、15或更多種CXCR4-熱帶(X4)及15或多種雙重混合(DM)向性之病毒；及組2 (Gilead臨床分離株組)包含分離自來自臨床試驗中登記之ART原始HIV病患之前ART基線血漿樣本之142種亞型B病毒且包括113種CCR5-熱帶(R5)病毒、28種雙重或混合向性(DM)之病毒及一種CXCR4熱帶(X4)病毒。鑒於HIV-1 Env在病患分離株之間、在支間及在支內顯示顯著多樣性，PGT121及變體之中和活性亦使用來自Monogram庫收集之一組病毒針對表示非B支之病毒進行特性描述。該Monogram HIV PhenoSense中和分析係用以特性描述病患分離株之大集合，藉此實現對PGT121及所產生之變體之幅度及效能兩者進行更嚴格之特性分析。結果係顯示於表6至9中。結果顯示PGT121之變體(諸如PGT121.60)針對所選病毒顯示增強之中和活性。 表6：PGT121及PGT121.60針對亞型B病毒之中和活性(IC50 ) 表7：PGT121及PGT121.60針對亞型B病毒之中和效能表8：PGT121及選擇變體針對92亞型B病毒之中和效能及覆蓋率 表9：PGT121及PGT121.60針對多支病毒之中和活性
此等實驗證實經Fc增強之PGT121非預期改善X4-熱帶HIV中和。HIV可利用除CD4外之兩種共受體，用於進入T細胞(CXCR4或CCR5)內。共受體結合係由Env(本文描述之廣泛中和抗體之標靶)介導。具有不同序列之HIV之不同菌株因此優先使用CXCR4 (稱為X4-熱帶)、CCR5 (稱為R5-熱帶)或兩者(稱為X4/R5或雙重-熱帶)。顯示R5及X4向性(被稱為雙混合或DM)之病毒池可含有R5、X4及或雙重熱帶菌株之混合物。PGT121通常針對X4分離株顯示低敏感性(低效能及幅度)，優先中和R5熱帶病毒。向PGT121 (PGT121.56)內添加Fc突變DEAL+LS特異性增強其針對DM及X4熱帶病毒之中和活性(2倍之中值IC50增強及就至少一種分離株而言多達約20倍增強。儘管一些PGT121 Fab變體(例如，PGT121.13及PGT121.22)針對R5 DM及X4病毒顯示減小之中和效能，但攜載DEAL+LS Fc突變之經改造之PGT121 Fab變體中之數種(其等包括具有WT Fab之PGT121.56)相較於R5病毒更有效中和DM及X4病毒(P＜0.0001) (資料未顯示)。非常出乎意料地，因為HIV中和被視為僅由Fab域而非Fc域介導。在R5分離株中， 在測試之分離株之約46%中觀測到2至3倍中和增強。DEAL+LS突變係存在於本發明之某些抗體及其片段中。引入PGT121.56內之另外修飾進一步改善選擇變體(例如，PGT121.60)之中和活性。
覆蓋幅度係計算為在IC95 ＜15 µg/ml下經中和之病毒之百分率。效能係藉由計算跨病毒之中值IC95值進行測定且IC95 ＜15 µg/ml。當針對包含總計89個B支分離株之兩組HIV-1分離株進行測試時，本發明之抗體相較於PGT121 (資料未顯示)顯示中和活性無損失。某些抗體之效能係與PGT121幾乎相同，及中和幅度略有改善。中和性能分析亦充當該等抗體相對於PGT-121識別並結合來自廣泛範圍之HIV-1臨床分離株之不同Env抗原之能力之替代評估。來自各種抗體之性能分析之資料顯示具有降低之中和效能之抗體亦顯示減小之ADCC活性(資料未顯示)，此表明抗體之中和活性與ADCC活性之間具有正相關，並支援中和幅度用作用於評估ADCC幅度之替代。
實例 2 ：免疫原性研究 三種方法係用以評估免疫原性並引導改造以移除PGT121中的免疫原性基元。電腦模擬(in silico)預測工具係用以識別PGT121抗體中之免疫原性之潛在風險之位點，及亦引導改造力度以改善可製造性(例如，醣化位點之移除、低pH保持穩定性之改善)，同時防止引入新穎T細胞抗原決定基。基於此分析，在本發明之抗體中作出框架區之修飾以減小免疫原性，此具有影響功能活性之低風險。另外，為進一步識別本發明之一種抗體之可變域內之潛在免疫原性基元，採用活體外人類T細胞活化分析EpiScreen™ (Antitope, Ltd., Cambridge, UK)。於50個健康供體(表示各種HLA單倍型)中誘導CD4+ T細胞反應，以回應於衍生自該抗體之重疊15個胺基酸肽，且KLH (匙孔血藍蛋白，陽性對照)係使用H-胸苷併入分析評估以量測T細胞增殖加以評估。該分析使得特異性T細胞抗原決定基可位於初級抗體序列中以引導抗體改造。亦提供使用測試抗體對T細胞抗原決定基之相對免疫原性進行分級(資料未顯示)。
為評估所選抗體變體之臨床免疫原性風險，使用EpiScreen™時間過程T細胞分析(Antitope, Ltd., Cambridge, UK)以量測由完整抗體誘導之T細胞活化。全分子分析係如本文描述進行(Baker及Jones 2007. Curr. Opin. Drug Discov. Devel. 10: 219-227)。因此，此分析不僅考慮T細胞抗原決定基含量，但亦處理天然IgG。不同於電腦模擬及肽掃描分析，全分子活體外T細胞活化分析可提供給定抗體之相對臨床風險之評估，且在某些情況下可用以預測如本文描述之臨床免疫原性速率(Baker及Jones 2007 Curr. Opin. Drug Discov. Devel. 10:219-227)。
許多臨床階段抗體已在此分析中運行，且顯示很少或無臨床免疫原性之抗體在此分析中具有接近或低於10%之分數，而顯示高臨床免疫原性之抗體(諸如阿侖單抗(Alemtuzumab)及英利昔單抗(Infliximab))顯示在25至40%之範圍中之分數(Baker及Jones 2007. Curr. Opin. Drug Discov. Devel. 10:219-227)。當相較於PGT121 WT (即，PGT-121 LO6)時，PGT121.42、PGT121.60、PGT121.61及PGT121.65顯示減小之供體反應速率，此支援此等變體具有臨床免疫原性之低風險(資料未顯示)。
實例 3 ： FcRn 結合 新生兒Fc受體(FcRn)係已顯示在人類及臨床前物種中調節IgG分子之藥物動力學中發揮主要作用之Fc受體。內吞作用之後，在酸性pH (＜6.5)下，FcRn以高親和力結合至IgG之Fc部分。結合FcRn之IgG再循環回至胞外空間，在此處在生理pH下，IgG結合親和力係減小並將IgG釋放回至該循環內。未由FcRn途徑挽救之游離IgG在溶酶體中降解為內源性胺基酸。在pH 6.0/7.0下，IgG對FcRn之相對結合親和力特性已成為用於對IgG活體內半衰期進行分級之業已建立之相關性及用於藥物動力學最佳化之設計特徵。
測定在不同pH下，抗體對各種抗體變體之FcRn之結合。用100 µl 5 µg/ml FcRn塗覆96孔Maxisorp盤。該盤在4℃下培養過夜，及然後在用0.05% Tween 20清洗緩衝劑清洗3次後，用4%脫脂牛奶在室溫下阻斷2小時。在室溫下用初級抗體之3倍連續稀釋液將該盤培養1小時。然後將該盤清洗3次並添加稀釋於4%脫脂牛奶中之100 µL Fab-抗人類Fab-HRP或山羊抗人類IgG-HRP第二抗體。然後在室溫下將該等盤培養50分鐘，清洗三次，並添加100 µL新鮮TMB受質。將盤放置於平臺上顯影3分鐘並輕輕搖晃。盤係用100 µL 1M HCl中止，短暫搖晃，在A450下於spectramax m5盤讀數器上進行讀數。
相對於PGT-121，在IgG之與FcRn相互作用之Fc部分中包含LS突變之本發明之抗體在pH 6.0下顯示FcRn結合之顯著改善及在7.0之中性pH下對結合之較小影響，如藉由針對人類FcR之pH 7.0/6.0之比率表示。經改善之結合係歸因於LS突變之存在且經預測相對於PGT-121在人類中提供延長之半衰期。資料係顯示於表10中。 表10：針對PGT121及變體之人類FcRn結合資料
此資料顯示PGT121.60及61相較於PGT121.56或PGT121.42之顯著改善。PGT121.56係具有DEAL+LS Fc之WT Fab。此表明PGT121.60及61中之Fab突變改善FcRn結合。PGT121.64及PGT121.65不顯示此改善，此表明此等兩種變體中之Fab修飾可實際上降低FcRn結合。
實例 4 ：活體內特性分析 來自本申請案之PGT121及數種抗體係經分析以表徵其等基本藥物動力學概況以確保本發明之抗體中存在之Fab/Fc修飾增強且不顯著干擾PGT121固有之藥物動力學行為。本發明之PGT121及數種其他抗體之活體內配置係在兩隻雄性原始食蟹猴(n=2)中於單一靜脈內(IV) 1.0 mg/kg劑量後進行表徵。自猴收集血清樣本並使用生物分析方法(本文描述)分析以藉由非隔室藥物動力學分析(NCA)測定血清濃度-時間分佈曲線及平均血清藥物動力學參數。
在獨立研究中，PGT121、PGT121 LS及新批次PGT121.42及PGT121.60之固有藥物動力學行為係在三隻雄性原始食蟹猴(n=3)中於單一IV 10.0 mg/kg劑量後進行表徵。收集血清樣本並使用生物分析方法(本文描述)分析以藉由非隔室藥物動力學分析(NCA)測定血清濃度-時間分佈曲線及平均血清藥物動力學參數。PGT121、PGT121.42、PGT121.43、PGT121.60及PGT121.61之平均血清藥物動力學參數係測定自濃度-時間分佈曲線之非隔室藥物動力學分析並闡述於表11中。經活體內測試之本發明之所有抗體具有堪比PGT121或相較於PGT121經改善之藥物動力學(如本文定義)。 表11：在原始食蟹猴(n=2)中IV投與(1 mg/kg)後之PGT121及變體之藥物動力學參數
PGT121、PGT121 LS、PGT121.42及PGT121.60之平均血清藥物動力學參數係測定自濃度-時間分佈曲線之非隔室藥物動力學分析並闡述於表12中。 表12：在原始食蟹猴(n=3)中IV投與(10 mg/kg)後之PGT121、PGT121 LS、PGT121.42及PGT121.60之藥物動力學參數
經活體內測試之本發明之所有抗體具有堪比PGT121或相對於PGT121經改善之藥物動力學(如本文定義)。相較於PGT121，PGT121.60針對測試病毒顯示增加之效能(資料未顯示)。跨測試之所有病毒分離株，PGT121變體(諸如PGT121.60、PGT121.64及PGT121.65)均顯示經改善之效能(資料未顯示)。此表明所作修飾(可能在CDR外對抗原接觸殘基所作之修飾)改善中和效能。相較於PGT121，PGT121.60針對表示B及非B亞型之病毒顯示增加之中和活性(資料未顯示)。
實例 5 ：評估 gp120 X CD3 Duobody 殺死受 HIV 感染之細胞之能力 評估例示性gp120 X CD3 Duobody® (Duobody®之gp120部分之重鏈序列係提供於下文，Duobody®之gp120部分之輕鏈具有SEQ ID NO: 10中所示之序列；Duobody®之CD3部分之重鏈序列係提供於下文，Duobody®之CD3部分之輕鏈具有SEQ ID NO.:20中所示之序列)及單特異性PGT121.60 (SEQ ID NO: 41及10)針對22種初級HIV-1分離株或純系之殺死活性。各病毒係以平均4個健康PBMC供體評估(參見，表13)。使用例示性gp120 X CD3 Duobody® (平均值± SD；70% ± 11%)比使用PGT121.60 (平均值± SD；56% ± 16%；配對T檢驗，P=0.001)達成顯著更高之殺死之受感染之細胞之比例(Emax)。例示性gp120 X CD3 Duobody®比PGT121.60亦顯著更有效，相較於PGT121.60之1.034 µg/mL ± 1.408 µg/mL (配對T檢驗，P=0.007)，示性gp120 X CD3 Duobody®達成0.129 µg/mL ± 0.074 µg/mL之EC50 值。相較於PGT121.60，例示性gp120 X CD3 Duobody®之EC50 之平均倍數變化係21倍。 表13：例示性gp120 X CD3 Duobody®及PGT-121.60之殺死活性之匯總表
總而言之，例示性gp120 X CD3 Duobody®相較於PGT121.60在顯著更低濃度下殺死顯著更大比例之受HIV感染之細胞。
Duobody®之gp120部分之重鏈序列：
Duobody®之CD3部分之重鏈序列：
方法 由PBMC效應細胞殺死受感染細胞 受HIV感染之CD4 T細胞之例示性gp120 X CD3 Duobody®-及PGT-121.60-依賴性殺死係使用初級靜態受HIV感染之CD4+ T細胞作為靶細胞及自體PBMC作為效應細胞而經活體外研究。初級CD4+ T細胞係在1200 ×g下藉由二次離心感染(spinfection)以50至100 ng p24/百萬細胞感染2小時並在37℃下於具有30 U/mL IL-2 (Roche Cat#11011456001)之RPMI培養基(以10% FBS及1%盤尼西林/鏈黴素補充)中培養5天。在靜止5天以容許重新(de novo)抗原表現後，將經二次離心感染之CD4+ T細胞培養物清洗3次以移除游離病毒，以2 x 105 個細胞/孔接種於96孔盤中並以例示性gp120 X CD3 Duobody®或PGT-121.60之7個濃度之10倍連續稀釋液在人類血清IgG (5 mg/mL最終濃度)之存在下培養1小時。當CD4+ T細胞標靶調理時，製備效應細胞。將冷凍保存之自體PBMC解凍並使用PKH67根據製造商之說明書進行膜染色並以4 x 105 個細胞/孔添加至調理靶細胞以產生2:1之E:T比率。效應細胞係與經調理之靶細胞以200 µL每孔之最終體積共培養24至48小時。
受HIV感染之靶細胞之殺死係藉由流式細胞術測定。在共培養週期結束時，細胞用PBS清洗2兩次，以100 µL Live/Dead Aqua (1/1000稀釋於PBS中)染色10分鐘，直至染色劑係以添加100 µL FACS緩衝劑(PBS+2% FBS)滅活。細胞然後係用FACS緩衝劑清洗並用抗CD4-PE/Cy7 mAb (1/50稀釋於FACS緩衝劑中)培養20分鐘，然後用FACS緩衝劑清洗3次並以100 µL Cytofix/Cytoperm透化10分鐘。細胞然後係用PermWash清洗一次並用含於FACS緩衝劑+10% PermWash中之抗p24-PE mAb培養25分鐘。最終，細胞用FACS緩衝劑清洗3次，重新懸浮於120 µL FACS緩衝劑中並於LSR Fortessa或X20 FACS (BD Biosciences, San Jose, CA)上獲取流式細胞術資料並使用FlowJo軟體(TreeStar)進行分析。
資料分析 在由PBMC殺死受感染之初級CD4+ T細胞中，藉由流式細胞術計數受HIV感染之靶細胞使用下列門控策略：基於前向及側向散射選擇淋巴細胞，並藉由針對Live/Dead Aqua陰性染色選擇活淋巴細胞。PKH67陰性活淋巴細胞(表示經接種之CD4+ T細胞)係然後經選擇並將受HIV感染之細胞識別為p24 Gag+，CD4low (因為由HIV介導之CD4下調)細胞。百分率HIV感染係由受HIV感染(p24 Gag+ ，CD4low 陽性)之經接種(PKH67-陰性)之CD4+ T細胞之百分率表示。
比較受HIV感染之靶細胞於經例示性gp120 X CD3 Duobody®-或PGT-121.60處理之孔中之百分率與受HIV感染之靶細胞於未經處理之孔(僅用人類血清IgG處理，n=2至10每個96孔盤)中之平均百分率。受HIV感染之靶細胞之百分率殺死係使用下列等式計算： 100 – ((經處理之孔中之%受HIV感染之靶細胞/未經處理之孔中之%受HIV感染之靶細胞) * 100)。
由例示性gp120 X CD3 Duobody®-或PGT-121.60 (Emax)殺死之受感染之細胞之最大分率及給定半數最大殺死之濃度(EC50 )係獲得自藉由三個參數非線性回歸(等式1)，使用GraphPad Prism (La Jolla, CA)軟體擬合之劑量-反應曲線。 等式1：其中Y = 殺死%，X =抗體濃度，底部=在缺乏抗體之情況下之反應，及頂部=最大反應。
劑量-反應曲線具有視Emax ＜ 40%，將EC50 值報告為＞100 μg/mL並將具有≤ 0%之絕對值之Emax指定為0%。
實例 6 ：評估抗 gp120 抗體變體 在經加速之應力條件(25℃、40℃)下，於PGT-121.60之輕鏈可變域之位置59處之天冬胺酸經異構化為IsoAsp。Asp59形成HIV Env N332結合基元之一部分且對PGT-121.60結合gp120而言重要，導致喪失抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)。此化學傾向係藉由藥物產品之凍乾減輕。
選擇PGT-121.60作為Duobody®分子之臂中之任何一者。儘管凍乾係成功之商業策略，但需自PGT-121.60移除異構化可能性以簡單化研發及製造、改善批次間之一致性、及使得液體調配物能夠用於Duobody®形式。改造目標係移除天冬胺酸異構化位點同時保持生物活性且不重新引入T細胞抗原決定基。來自改造之前四種變體(變體1、變體2、變體3及變體4)係經推進以用於表徵，包括使用基於PGT-121.60 ADCC報導細胞之分析進行結合及效能測試。
全部四種變體具有下文提供之相同重鏈胺基酸序列：
變體1具有SEQ ID NO: 40中所示之輕鏈序列。變體2具有SEQ ID NO: 78中所示之輕鏈序列。變體3具有SEQ ID NO: 79中所示之輕鏈序列。變體4具有SEQ ID NO: 80中所示之輕鏈序列。
結合研究 測定上文描述之各種變體抗體對gp120 HIV Env蛋白之結合。用25 µl 5µg/ml gp120塗覆384孔Maxisorp盤。在4℃下將該盤培養過夜。該盤用PBS 0.05% Tween 20清洗緩衝劑清洗4次並用75 µl PBS 5% BSA在室溫下阻斷1小時，在600 rpm下搖晃。該盤用初級抗體之3倍連續稀釋液在室溫下培養1小時，在600 rpm下搖晃。該盤然後用PBS 0.05% Tween 20清洗4次並將25 µl山羊抗人類IgG (H+L) HRP第二抗體稀釋於PBS 1% BSA中並在室溫下在600 rpm下搖晃培養40分鐘。該等盤係用PBS 0.05% Tween 20清洗4次並添加25 µl新鮮TMB受質。將該等盤顯影90秒及在600 rpm下搖晃並用25 µl 1M HCl中止。該等盤係在Spectramax m5盤讀數器上於A450下進行讀數。
相對於PGT-121.60，在框架插入環中的天冬胺酸異構化位點中包含突變之本發明之變體抗體具有經改善及經減少之對gp120之結合兩者。序列活性關係分析顯示關於殘基59處的天冬胺酸之維持之明確且強烈偏好。甘胺酸係於殘基59處耐受而麩醯胺酸、麩胺酸鹽及天冬醯胺酸不利影響抗體結合gp120之能力。於殘基60處，所引入之胺基酸之龐大側基係經耐受。資料顯示於下表14中。 表14：針對PGT121.60及變體之gp120結合資料。
(在上表中，分子旁邊之字母對應於輕鏈之位置59及60 (Kabat編號)處之胺基酸。經突變之殘基係經加粗)。
此資料顯示變體2、變體1及變體3之gp120結合相較於PGT121.60及其他變體有所改善，此表明使天冬胺酸異構化位點突變可影響對gp120之結合。此等變體係用DEAL+LS Fc (即，具有S239D、I332E、G236A、A330L、M428L及N434S突變(「DEALLS」)之Fc)測試。
效能研究 選擇PGT-121.60 ADCC分析，因為其併入表現HT593之靶細胞系且HT593已知對PGT-121.60中之isoAsp可能性敏感。基於ADCC報導細胞之分析量測PGT-121.60誘導經活化之T細胞(NFAT)介導之螢光素酶表現之核因子之能力，其係作為ADCC活性之替代量測。在該分析中，表現FcγRIIIa受體(V158)及NFAT調節之螢光素酶之Jurkat細胞係用表現gp120之人類胚胎腎(HEK)細胞在濃度增加之PGT-121.60參考標準、對照及樣本之存在下進行培養。PGT-121.60結合至HEK細胞表面上的gp120，有效交聯Jurkat細胞上的FcγRIIIa並經由NFAT活化螢光素酶基因表現。相對發光單位(RLU)係針對PGT-121.60濃度繪製，及使用平行線分析程序以相對於參考標準測定對照及樣本之效能。作為第一參考標準(RS)，將PGT-121.60之相對效能(RP)值指定為100%。
將PGT-121.60變體(即，變體1、變體2、變體3及變體4)之樣本稀釋至0.5 mg/mL之中間濃度且蛋白質濃度藉由UV分光光度法(280 nm之吸光度最大值至吸光度320 nm)證實。將中間物接著稀釋至0.6 ng/mL 4.96 µg/mL之初始濃度範圍。樣本(對照，25℃，4週)然後根據上文描述之ADCC分析進行測試，只是熱應力樣本係針對其各自對照(指定為100% RP)而非PGT-121.60參考標準加以定量。
使PGT.121.60變體(變體1、變體2、變體3及變體4)之樣本藉由在25℃下培養4週來經歷熱應力。該等變體係然後與其各自未經處理之對照一起在基於PGT.121.60 ADCC報導細胞之分析中進行測試，其各自未經處理之對照已儲存於2至8℃下。結果係顯示於表15中。 表15：熱應力PGT-121.60及isoAsp變體之ADCC活性 a. PGT-121.60僅測試一次且結果與歷史資料一致。
結果指示，儘管經熱處理之PGT-121.60顯示減小之活性(65% RP)，但變體(變體2、變體3、變體4及變體1) (分別96%、104%、95%及100%)之ADCC活性未受在25℃下進行4週之處理影響。
實例 7 ：評估 HIV 中和活性 抗體之HIV-1中和之效能(量測為IC50或IC95)及幅度(中和自經測試之組之%分離株)係在(i)基於CEM-NKr-CCR5-LucR報導細胞系之分析及ii)如實例1中描述之Monogram HIV PhenoSense中和分析(Monogram Biosciences)中進行檢查。
在基於CEM-NKr-CCR5-LucR報導細胞系之中和分析中，檢查抗體抵抗一組40個B支複製勝任型HIV-1分離株及純系。
變體1至4之中和效能係類似於PGT-121.60之效能(相較於PGT-121.60，各變體之學生配對T測試P值係≥ 0.372)。相較於PGT-121.60，變體之IC50 值之幾何平均值倍數變化在變體1之1.035至變體2之1.539之範圍內，此指示消除PGT-121.60中之異天冬胺酸可能性之突變不顯著影響PGT-121.60之HIV中和活性。針對經測試之40種病毒中之1種(病毒8339)，變體1至4之中和活性係經完全消除。結果係顯示於表16中。 表16：使用基於CEM.NKr.CCR5.LucR之分析之中和活性。資料表示2次重複之平均值。 a. na係指「不適用」† 排除耐藥病毒計算之幾何平均值(IC50 ＞100 ug/mL)
在Monogram HIV PhenoSense中和分析中，變體1至3之HIV中和活性係以雙特異性形式用FEAR/FEAL Fc針對Gilead臨床分離株組(n = 142種病毒)進行評估。當以FEAR/FEAL雙特異性形式評估時，相較於PGT-121.60 DEAL+LS，變體1至3之效能係減小4.1與5.3倍之間(表17)。結合基於CEM.NKr.CCR5.LucR之分析之結果，在該分析中該等變體係以DEAL+LS形式評估，結果指示雙特異性Duobody®形式，而非突變消除PGT-121.60中的異天冬胺酸鹽可能性，將HIV中和活性削弱4至5倍。 表17：使用Monogram HIV PhenoSense中和分析之中和活性。資料表示單次實驗。 a. na係指「不適用」† 排除耐藥病毒計算之幾何平均值(IC50 ＞100 ug/mL)
實例 8 ： T 細胞活化 由CD3-雙特異性抗體連接CD3+ T細胞及表現受關注之抗原之靶細胞會導致T細胞活化。在缺乏抗原陽性靶細胞之情況下，以CD3雙特異性抗體通常不可見T細胞活化。T細胞活化對抗原陽性靶細胞之存在之此依賴性可防止全域T細胞活化並限制與全域T細胞活化相關聯之不良事件，諸如細胞介素釋放症候群。
為評估gp120 X CD3 Duobody®在僅在兩種抗原之存在下活化T細胞之能力，吾人培養分離自未感染HIV之供體(n=2)及受HIV感染之供體(n=2)之初級PBMC與gp120 X CD3 Duobody®-變體1、gp120 X CD3 Duobody®-變體2或PGT-121.60及CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T細胞，CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T細胞係(i)受對gp120 x CD3 Duobody® (7552)進行之殺死敏感之HIV-1病毒感染，(ii)受對gp120 x CD3 Duobody® (THRO)進行之殺死耐受之HIV-1病毒感染，或(iii)未感染。PBMC及CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T細胞係以1:10效應細胞對靶細胞比率共培養以最大化結合靶細胞之效應細胞之數量，且因此，最大化偵測經活化之效應細胞之能力。評估來自未受HIV感染(n=2)及受HIV感染(n=2)之供體之效應細胞。結果係顯示於表18至23中。
gp120 X CD3 Duobody變體1 (表18及19)及gp120 X CD3 Duobody變體2 (表20及21)兩者均誘導初級CD4 T細胞及CD8 T細胞上的T細胞活化標誌物CD69及CD25之劑量依賴性上調。亦觀測到PD-1之輕微上調。未觀測到Ki67之上調。來自未受HIV感染及受HIV感染之供體之T細胞類似地回應。活化標誌物之上調係依賴於結合至兩種抗原之gp120 X CD3 Duobody，因為活化標誌物之上調僅在經對gp120 x CD3 Duobody (7552)進行之殺死敏感之HIV-1病毒轉染之CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T細胞之存在下觀測到。當效應細胞係與經對gp120 X CD3 Duobody (THRO)進行之殺死耐受之HIV病毒感染之CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T細胞或未感染之CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T細胞共培養時，未觀測到活化標誌物之上調。不結合至T細胞之PGT-121.60不誘導T細胞活化標誌物之上調，無論CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T細胞是否經對gp120 x CD3 Duobody®進行之殺死敏感之病毒感染(表22及23)。 表18：gp120 x CD3 Duobody變體1 CD4 T細胞活化。 表19：gp120 x CD3 Duobody變體1 CD8 T細胞活化。 表20：gp120 x CD3 Duobody變體2 CD4 T細胞活化。 表21：gp120 x CD3 Duobody變體2 CD8 T細胞活化。 表22：PGT-121.60 CD4 T細胞活化。 表23：PGT-121.60 CD8 T細胞活化。
方法 由Gp120 X CD3 Duobody誘導之T細胞活化標誌物之上調係藉由共培養藉由Ficol paque分離自獲得自未受HIV感染(n=2)及受HIV感染之供體(n=2)之白血球濃厚液(leukopak)之1 x 104 個人類初級T細胞與1 x 105 個CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T細胞進行評估，CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T細胞係(i)受對gp120 x CD3 Duobody® (7552)進行之殺死敏感之HIV-1病毒感染，(ii)受對gp120 x CD3 Duobody® (THRO)進行之殺死耐受之HIV-1病毒感染，或(iii)在37℃下歷時24小時未受感染。孔然後用FACS緩衝劑清洗3次，用Live/Dead Amcyan (Thermo Fisher, Cat. No. L34966)根據製造商之說明書染色，用FACS緩衝劑清洗3次並在室溫下用稀釋至FACS緩衝劑中之下列抗體培養20分鐘：抗CD4-BV711 (BD Biosciences Cat. No. 563028)；抗CD8-APC/Cy7 (BD Biosciences, Cat. No. 560179)；抗CD25-PE/Cy7 (BD Biosciences, Cat. No. 557741)；抗CD69-PerCP/Cy5.5 (BioLegend, Cat. No. 310926)；抗PD-1-BV605 (BioLegend, Cat. No. 329924)；抗Ki67-AF700 (BD Biosciences. Cat. No. 561277)。細胞然後用FACS緩衝劑清洗3次並用100 µL Cytofix/Cytoperm固定及透化10分鐘，用PermWash清洗一次，重新懸浮於120 µL FACS緩衝劑中並於LSR Fortessa或X20 FACS (BD Biosciences, San Jose, CA)上獲取流式細胞術資料，並使用FlowJo軟體(TreeStar)分析。
表現各活化標誌物之CD4及CD8 T細胞之最大分率(Emax)及給定50% Emax之濃度(EC50)係獲得自藉由三個參數非線性回歸(等式1)，使用GraphPad Prism (La Jolla, CA)軟體擬合之劑量-反應曲線。 等式1：其中Y =活化%，X =抗體濃度，底部=在缺乏抗體之情況下之反應，及頂部=最大反應。
針對T細胞活化具有高於基線(無抗體對照孔)之Emax ＜ 5%之劑量-反應曲線，將EC50 值報告為＞100 μg/mL (經測試之最大濃度)。
實例 9 ：使用 PBMC 效應細胞殺死受 HIV 感染之 CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T 細胞。 殺死活性係針對4種初級HIV-1分離株或分子純系進行評估。各病毒係使用來自2個健康供體之PBMC效應細胞進行評估且結果顯示於表24中。使用gp120 X CD3 Duobodies® (例示性，變體1及變體2) (中值，76%)比使用PGT-121.60 (中值，18%，Mann-Whitney，P ＜ 0.0001)及PGT-121 (中值，0%，Mann-Whitney，P ＜ 0.0001)達成顯著更高的殺死之受感染之細胞之比例(Emax)。
除比PGT-121.60及PGT-121殺死顯著更大數量之受感染之細胞(Emax)以外，gp120 X CD3 Duobodies (例示性，變體1及2；中值EC50，0.042 ug/mL)亦比PGT-121 (中值EC50，＞100 ug/mL；Mann-Whitney，P ＜ 0.0001)顯著更有效殺死受感染之細胞且趨於比PGT-121.60 (中值EC50，＞100 ug/mL；Mann-Whitney，P = 0.1157)更有效。
PGT-121.60 (中值18%)與PGT-121 (中值0%)之間之受感染細胞殺死效率(Emax)之差異係統計學顯著(Mann Whitney，P = 0.018)。此外，PGT-121.60趨於比PGT-121 (P = 0.128)更有效。結果表明CD3-雙特異性Duobodies顯示比PGT-121.60 (經效應物增強之IgG1 mAb)或PGT-121 (IgG1 mAb)增加之殺死受HIV感染之細胞。 表24：受HIV感染之CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T細胞之殺死。
方法 CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T細胞係在含有20 Tg/mL DEAE聚葡萄糖之R10+1+1 (RMPI加10% FBS，1%盤尼西林/鏈黴素，1% HEPES)培養基中受HIV-1分離株92US657、1489、8398及7552感染並在37℃下培養4小時。培養四小時後，CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T細胞係用R10+1+1稀釋3次並培養48至72小時以容許HIV Env之重新表現。將受感染之CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T細胞清洗3次以移除游離病毒，以2 x 104 個細胞/孔接種至白色96孔盤，並用gp120 X CD3 Duobody®或PGT-121.60之7個濃度之10倍連續稀釋液在人類血清IgG (5 mg/mL最終濃度)之存在下培養1小時，然後，添加2 x 105 個PBMC/孔以調理CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T細胞並在37℃下以100 µL之最終體積培養48小時。受HIV感染之CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T細胞之殺死係藉由添加100 µL/孔之ONE-Glo™螢光素酶試劑測定且相對發光單位(RLU)係在光度計中根據製造商之說明書量測。
gp120 x CD3 Duobody®及PGT-121.60對受HIV感染之CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T細胞之殺死係測定自經gp120 x CD3 Duobody-或PGT-121.60處理之孔之RLU且與在未經處理之孔(僅用人類血清IgG處理，n=2至10個每96孔盤)中之受HIV感染之CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T細胞之RLU比較。受HIV感染之CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T細胞之殺死百分率係使用下列等式計算： 100 – ((經處理之孔中之受HIV感染之靶細胞之RLU/未經處理之孔中之受HIV感染之靶細胞之RLU) * 100)。
經殺死之受感染之細胞之最大分率(Emax)及給定50%殺死之濃度(IC50 )係獲得自藉由三個參數非線性回歸(等式1)，使用GraphPad Prism (La Jolla, CA)軟體擬合之劑量-反應曲線。 等式1：其中Y = 殺死%，X =抗體濃度，底部=在缺乏抗體之情況下之反應，及頂部=最大反應。
針對受感染細胞殺死具有視Emax ＜ 10%之劑量-反應曲線，將IC50 值報告為＞100 μg/mL並將具有≤ 0%之絕對值之Emax指定為0%。
實例 10 ：使用扁桃體衍生之單核細胞殺死受 HIV 感染之初級 CD4 T 細胞 在經cART抑制、受HIV感染之個體中之潛在受HIV感染之細胞之主要庫存在於淋巴結中。抗體利用存在於淋巴組織中之效應細胞之能力係在活體外殺死分析中使用分離自HIV-1血清反應陰性扁桃體之單核細胞作為效應細胞及受HIV-1感染之初級CD4 T細胞作為靶細胞進行檢查。由於來自扁桃體供體之自體PBMC不可利用性，因此異源性初級CD4 T細胞係用作靶細胞及PBMC效應細胞之來源。
來自來自單一供體之扁桃體衍生之單核細胞(TDMC)、來自兩個供體之外周血單核細胞(PBMC)及受兩種HIV-1病毒(CHO58及92US727)感染之靶細胞之結果係顯示於表25及26中。TDMC及PBMC均介導例示性gp120 x CD3 Duobody及包含變體1或變體2之Duobodies對受HIV感染之CD4 T細胞之強烈殺死，及TDMC之Emax及IC50濃度分別在自66%至82.6%及0.013至0.053 µg/mL之範圍內，及PBMC之Emax及IC50濃度分別在自62%至84%及0.001至0.024 ug/mL之範圍內。相反，僅PBMC但非TDMC可利用PGT121.60 (或陰性對照Duobody，帕利珠單抗x CD3)以介導對受HIV感染之CD4 T細胞之殺死。 表25：使用扁桃體衍生及外周血衍生之單核效應細胞殺死之受HIV感染之細胞之最大百分率。 表26：使用扁桃體衍生及外周血衍生之單核效應細胞殺死受HIV感染之細胞之效能(IC50)。
方法 受HIV感染之CD4 T細胞之gp120 X CD3 Duobody® -及PGT-121.60-依賴性殺死係使用作為靶細胞之初級靜態受HIV感染之CD4+ T細胞及作為效應細胞之外周血衍生之單核細胞及扁桃體衍生之單核細胞加以活體外研究。未患病之扁桃體係獲得自經歷扁桃體組織切除術之健康自願供體。扁桃體係在含有抗生素之DMEM培養基中運送至實驗室並在扁桃體組織切除術之8小時內處理。為分離扁桃體衍生之單核細胞(TDMC)，首先移除脂肪及四分化組織(quarterized tissue)。使用手術刀將該等扁桃體切為2-mm3 薄片，並分佈在整個100 µm尼龍細胞過濾器(Falcon)中。在用DMEM加1% FBS清洗後，TDMC係由Ficol paque回收自細胞懸浮液，凍存於90% DMSO、10% FBS中並儲存在液氮中。
初級CD4+ T細胞係在1200 ×g下藉由二次離心感染以50至100 ng p24/百萬細胞感染2小時並在37℃下在RPMI培養基(用10% FBS及1%盤尼西林/鏈黴素補充)中以30 U/mL IL-2 (Roche Cat#11011456001)培養5天。在5天靜止後容許重新抗原表現，將經二次離心感染之CD4+ T細胞培養物清洗3次以移除游離病毒，以2 x 105 個細胞/孔接種於96孔盤中，並以gp120 X CD3 Duobody®或PGT-121.60之7個濃度之10倍連續稀釋液在人類血清IgG (5 mg/mL最終濃度)之存在下培養1小時。在CD4+ T細胞標靶調理時，製備效應細胞。將經凍存之PBMC及TDMC解凍並使用PKH67根據製造商之說明書將膜染色並以4 x 105 個細胞/孔添加至調理靶細胞來產生2:1之E:T比率。將效應細胞與經調理之靶細胞以每孔200 µL之最終體積共培養48小時。
受HIV感染之靶細胞之殺死係藉由流式細胞術測定。在共培養週期結束時，該等細胞係用PBS清洗2次，用100 µL Live/Dead Aqua (1/1000稀釋於PBS中)染色10分鐘，直至染色劑以添加100 µL FACS緩衝劑(PBS+2% FBS)滅活。該等細胞然後用FACS緩衝劑清洗並用抗CD4-PE/Cy7 mAb (1/50稀釋於FACS緩衝劑中)培養20分鐘，然後用FACS緩衝劑清洗3次並用100 µL Cytofix/Cytoperm固定及透化10分鐘。該等細胞然後用PermWash清洗一次並用含於FACS緩衝劑+10% PermWash中之抗p24-PE mAb培養25分鐘。最終，該等細胞用FACS緩衝劑清洗3次，重新懸浮於120 µL FACS緩衝劑中，及在LSR Fortessa或X20 FACS (BD Biosciences, San Jose, CA)上獲取流式細胞術資料並使用FlowJo軟體(TreeStar)進行分析。
在PBMC及TDMC殺死受感染之初級CD4+ T細胞中，藉由流式細胞術計數受HIV感染之靶細胞使用下列門控策略：基於前向及側向散射選擇淋巴細胞，並藉由針對Live/Dead Aqua陰性染色選擇活淋巴細胞。PKH67陰性活淋巴細胞(表示經接種之CD4+ T細胞)係然後經選擇並將受HIV感染之細胞識別為p24 Gag+，CD4low (因為由HIV介導之CD4下調)細胞。百分率HIV感染係由受HIV感染(p24 Gag+ ，CD4low 陽性)之經接種(PKH67-陰性)之CD4+ T細胞之百分率表示。
比較受HIV感染之靶細胞於經PGT-121.60處理之孔中之百分率與受HIV感染之靶細胞於未經處理之孔(僅用人類血清IgG處理，n=2至10每個96孔盤)中之平均百分率。受HIV感染之靶細胞之百分率殺死係使用下列等式計算： 100 – ((經處理之孔中之%受HIV感染之靶細胞/未經處理之孔中之%受HIV感染之靶細胞) * 100)。
由PGT-121.60殺死之受感染之細胞之最大分率(Emax)及給定50%殺死之濃度(IC50 )係獲得自由三個參數非線性回歸(等式1)，使用GraphPad Prism (La Jolla, CA)軟體擬合之劑量-反應曲線。 等式1：其中Y = %殺死，X =抗體濃度，底部=在缺乏抗體之情況下之反應，及頂部=最大反應。
針對受感染細胞殺死具有視Emax ＜ 40%之劑量-反應曲線，將IC50 值報告為＞10 μg/mL並將具有≤ 0%之絕對值之Emax指定為0%。
實例 11 ：藉由 T 細胞子集殺死受 HIV 感染之 CD4 T 細胞 為證實哪種T細胞子集能夠介導受HIV感染之細胞之gp120 x CD3 Duobody依賴性殺死，吾人評估經分離之T細胞子集(即記憶CD8 T細胞、原始CD4 T細胞、記憶CD4 T細胞、效應記憶CD4 T細胞及γΔ T細胞)介導受HIV感染之CD4 T細胞之殺死之能力。
表27中顯示之結果指示經檢查之所有T細胞子集(即，記憶CD8 T細胞、原始CD4 T細胞、記憶CD4 T細胞、效應記憶CD4 T細胞及γΔ T細胞)可介導利用例示性gp120 x CD3 Duobody®、gp120 x CD3 Duobody®變體1及gp120 x CD3 Duobody®變體2強效(EC50；0.006至0.14 µg/mL)、有效(Emax；27%至68%) Duobody依賴性殺死受HIV-1 WITO感染性分子純系感染之T細胞。相反，CD8及CD4 T細胞子集不可介導利用PGT-121.60有效殺死受HIV感染之T細胞。結果亦顯示γΔ T細胞可介導PGT-121.60有效殺死受HIV感染之T細胞，即使相較於gp120 x CD3 Duobodies (EC50 12 ug/mL vs 0.02 ug/mL至0.14 ug/mL)，效能減小，但具有堪比由gp120 x CD3 Duobodies達成之Emax之Emax (48% vs 43%至68%)。PGT-121.60介導γΔ T細胞抗體依賴性殺死受HIV感染之T細胞之能力係與γΔ T細胞表現FcγR CD16且能夠介導抗體依賴性細胞細胞毒性之公開案一致(Tokuyama等人，2008；Seidel等人，2014；Chen及Freedman, 2008)。 表27：各種T細胞子集殺死受HIV感染之細胞之Emax (%)及效能(IC50)。
方法 藉由T細胞子集進行之受HIV感染之CD4 T細胞之gp120 X CD3 Duobody® -及PGT-121.60-依賴性殺死係使用實例5中描述之藉由PBMC效應細胞分析之受感染細胞殺死及下列修飾加以活體外研究：不使用全PBMC作為效應細胞，而是使用根據製造商方案使用表21中詳細描述之細胞分離套組分離之T細胞子集作為效應細胞，且效應物相對於標靶比率為2:1。若Emax係≤ 10%，則將EC50值報告為＞ 10 ug/mL (經測試之最大濃度)。 表28：T細胞子集分離套組
實例 11 ：人類血小板結合 為評估與人類血小板之結合，進行基於流式細胞術之血小板結合分析並與PGT-121.60相比較。自3個人類健康供體之全血製備富含血小板之血漿(PRP)樣本並用測試物件以1000 µg/ml或250 µg/ml濃度處理。靶向RSV融合蛋白之單株抗體帕利珠單抗(Pali)及其衍生之duobody(Pali x CD3)係用作非抗HIV Env對照抗體。
表29中顯示之結果指示結合至人類血小板之1000 µg/ml PGT-121.60之MFI在來自3個供體之樣本中相較於染色背景增加40至100倍，而gp120 X CD3 Duobody變體之MFI在相同樣本中係增加15至50倍。當物件在結合分析中以250 µg/ml測試時，相較於PGT-121.60，血小板染色MFI減小至4至7倍及針對變體而言1至3倍。非抗HIV Env對照抗體Pali及Pali X CD3之MFI在兩種測試濃度下皆處於背景水平。相較於PGT-121.60，變體顯示較低之人類血小板結合活性。Duobody變體之平均結合MFI在1000 µg/ml濃度下係PGT-121.60之35至47% (表30)。 表29：人類血小板結合MFI相較於染色背景之倍數增加。 表30： gp120 X CD3 Duobody變體及PGT-121.60結合至人類血小板之比較。
方法 自人類全血樣本製備富含血小板之血漿(PRP)樣本。簡而言之，在室溫下在170xg下離心全血樣本15分鐘而不停止。離心後，自各樣本之頂層收集PRP，及然後5倍稀釋於經改性之HT (mHT)緩衝劑(10 mM HEPES、137 mM NaCl、2.8 mM KCl、1 mM MgCl2 、12 mM NaHCO3 、0.4 mM Na2 HPO4 、0.35% BSA、5.5 mM 葡萄糖，pH 7.4)中。將經稀釋之測試抗體(50 μL)添加至等體積PRP樣本中並在室溫下培養45分鐘。在培養結束時，添加等體積BD FACS染色緩衝劑(具有2%胎牛血清之磷酸鹽緩衝鹽水)並在2000xg下在室溫下將分析盤離心5分鐘。吸取上清液並將經清洗之PRP樣本重新懸浮於mHT緩衝劑中及在4℃下用PE抗CD61、FITC抗CD41及APC抗人類IgG二級抗體染色30分鐘。染色後，PRP樣本用BD FACS緩衝劑清洗並重新懸浮於125 μL BD FACS染色緩衝劑中並藉由流式細胞術以BD LSRFortessaTM 細胞分析儀(BD Biosciences, San Jose, CA)及FlowJo軟體(TreeStar, Ashland, OR)進行分析。
血小板群體定義為PE抗CD41及FITC抗CD61雙陽性FACS事件。對血小板群體之APC抗人類IgG之平均螢光強度(MFI)值進行定量。然後，計算各測試物件之MFI相較於染色背景之倍數增加(僅由APC抗人類IgG二級抗體測定)。為比較gp120 X CD3 duobody變體之血小板結合活性與PGT-121.60之血小板結合活性，計算各樣本中在1000 μg/ml下各Duobody變體相比於PGT-121.60之MFI百分率。
其他實施例 儘管已結合本發明之實施方式描述本發明，但前述實施方式旨在闡述而非限制由隨附申請專利範圍之範圍定義之本發明之範圍。其他態樣、優點及修飾係在下列隨附申請專利範圍之範圍內。

Claims (86)

  1. 一種多特異性抗體，其結合至人類免疫不全病毒-1 (HIV-1)包膜(Env)醣蛋白gp120 (gp120)及人類CD3，其中該抗體包含： (a)第一抗原結合域，其包含第一重鏈可變域(VH)及第一輕鏈可變域(VL)，其中該第一抗原結合域結合至gp120且包含： (i)第一VH互補決定區(CDR) 1，其包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列； (ii)第一VH-CDR2，其包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列； (iii)第一VH-CDR3，其包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列； (iv)第一VL-CDR1，其包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列； (v)第一VL-CDR2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列；及 (vi)第一VL-CDR3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列；及 (b)第二抗原結合域，其結合至人類CD3。
  2. 如請求項1之抗體，其中該第一VH包含與SEQ ID NO: 7至少70%相同之胺基酸序列。
  3. 如請求項1或2之抗體，其中該第一VL包含與SEQ ID NO: 8至少70%相同之胺基酸序列。
  4. 如請求項3之抗體，其中SEQ ID NO: 8之位置66、67、67A及67C (Kabat編號)之胺基酸未改變。
  5. 如請求項1或2之抗體，其中該第一VL包含與SEQ ID NO: 81至少70%相同之胺基酸序列。
  6. 如請求項1或2之抗體，其中該第一VL包含與SEQ ID NO: 82至少70%相同之胺基酸序列。
  7. 如請求項1或2之抗體，其中該第一VL包含與SEQ ID NO: 83至少70%相同之胺基酸序列。
  8. 如請求項1或2之抗體，其中該第一VL包含與SEQ ID NO: 84至少70%相同之胺基酸序列。
  9. 如請求項1至8中任一項之抗體，其中該第一抗原結合域包含具有與SEQ ID NO: 9至少70%相同之胺基酸序列之重鏈。
  10. 如請求項1至9中任一項之抗體，其中該第一抗原結合域包含具有與SEQ ID NO: 10至少70%相同之胺基酸序列之輕鏈。
  11. 如請求項1之抗體，其中該第一VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列且該第一VL包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列。
  12. 如請求項1之抗體，其中該第一VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列且該第一VL包含SEQ ID NO: 81之胺基酸序列。
  13. 如請求項1之抗體，其中該第一VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列且該第一VL包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列。
  14. 如請求項1之抗體，其中該第一VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列且該第一VL包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列。
  15. 如請求項1之抗體，其中該第一VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列且該第一VL包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列。
  16. 如請求項1至15中任一項之抗體，其中該多特異性抗體係雙特異性抗體。
  17. 如請求項1至16中任一項之抗體，其中該第二抗原結合域包含第二VH及第二VL，其中該第二VH包含： (i)包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列之第二VH-CDR1； (ii)包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之第二VH-CDR2；及 (iii)包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列之第二VH-CDR3。
  18. 如請求項1至16中任一項之抗體，其中該第二抗原結合域包含第二VH及第二VL，其中該第二VL包含： (i)包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列之第二VL-CDR1； (ii)包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列之第二VL-CDR2；及 (iii)包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列之第二VL-CDR3。
  19. 如請求項1至16中任一項之抗體，其中該第二抗原結合域包含第二VH及第二VL，其中 該第二VH包含： (i)包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列之第二VH-CDR1； (ii)包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之第二VH-CDR2；及 (iii)包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列之第二VH-CDR3；且 該第二VL包含： (i)包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列之第二VL-CDR1； (ii)包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列之第二VL-CDR2；及 (iii)包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列之第二VL-CDR3。
  20. 如請求項17至19中任一項之抗體，其中該第二VH包含與SEQ ID NO: 17至少70%相同之胺基酸序列。
  21. 如請求項17至19中任一項之抗體，其中該第二VL包含與SEQ ID NO: 18至少70%相同之胺基酸序列。
  22. 如請求項17至19中任一項之抗體，其中該第二VH包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列且該第二VL包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。
  23. 如請求項17至19中任一項之抗體，其中該第二抗原結合域包含具有與SEQ ID NO: 19至少70%相同之胺基酸序列之重鏈。
  24. 如請求項17至19中任一項之抗體，其中該第二抗原結合域包含具有與SEQ ID NO: 20至少70%相同之胺基酸序列之輕鏈。
  25. 如請求項1至24中任一項之抗體，其中該抗體係κ-λ抗體、雙親和力再靶向分子(DART)、杵入臼型(knob-in-hole)抗體、股交換改造域抗體(SEED體)、雙特異性T細胞接合體(BiTe)、CrossMab、Fcab、雙功能抗體(Diabody)、串聯雙功能抗體(TandAb)或DuoBody。
  26. 如請求項1至24中任一項之抗體，其中該第一抗原結合域係直接或經由介入胺基酸序列稠合至第一重鏈恆定區，該第一重鏈恆定區選自由以下組成之群：人類IgG1 、人類IgG2 、人類IgG3 、人類IgG4 、人類IgA1 及人類IgA2 ，且其中該第二抗原結合域係直接或經由介入胺基酸序列稠合至第二重鏈恆定區，該第二重鏈恆定區選自由以下組成之群：人類IgG1 、人類IgG2 、人類IgG3 、人類IgG4 、人類IgA1 及人類IgA2 。
  27. 如請求項26之抗體，其中該第一重鏈恆定區係人類IgG1 ，且其中該第二重鏈恆定區係人類IgG1 。
  28. 如請求項26或27之抗體，其中該第一抗原結合域係直接或經由介入胺基酸序列稠合至第一輕鏈恆定區，該第一輕鏈恆定區係人類λ恆定區，且其中該第二抗原結合域係直接或經由介入胺基酸序列稠合至第二輕鏈恆定區，該第二輕鏈恆定區係人類λ恆定區。
  29. 如請求項26至28中任一項之抗體，其中 (a)該第一重鏈恆定區包含F405L胺基酸突變；及 (b)該第二重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變。
  30. 如請求項26至28中任一項之抗體，其中 (a)該第一重鏈恆定區包含K409R胺基酸突變；且 (b)該第二重鏈恆定區包含F405L胺基酸突變。
  31. 如請求項26至30中任一項之抗體，其中該第一重鏈恆定區及該第二重鏈恆定區之效應功能經減小或消除。
  32. 如請求項26至30中任一項之抗體，其中該第一重鏈恆定區包含人類IgG1 重鏈恆定區，該人類IgG1 重鏈恆定區包含N297A突變或N297Q突變，及/或該第二重鏈恆定區包含人類IgG1 重鏈恆定區，該人類IgG1 重鏈恆定區包含N297A突變或N297Q突變。
  33. 一種結合至gp120及人類CD3之雙特異性抗體，其中該抗體包含： (A)結合至gp120之第一臂，其包含： (i)第一重鏈，其包含： (a)包含第一突變之第一重鏈恆定區，該第一突變係F405L或K409R突變；及 (b)第一VH，其包括包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之VH-CDR1；包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之VH-CDR2；及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之VH-CDR3；及 (ii)第一輕鏈，其包含： (a)第一輕鏈恆定區；及 (b)第一VL，其包括包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列之VL-CDR1；包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列之VL-CDR2；及包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之VL-CDR3；及 (B)結合至人類CD3之第二臂，其包含： (i)第二重鏈，其包含： (a)包含第二突變之第二重鏈恆定區，該第二突變係F405L或K409R突變；及 (b)第二VH，其包括包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列之VH-CDR1；包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH-CDR2；及包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列之VH-CDR3；及 (ii)第二輕鏈，其包含： (a)第二輕鏈恆定區；及 (b)第二VL，其包括包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列之VL-CDR1；包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列之VL-CDR2；及包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列之VL-CDR3， 其中該第一突變及該第二突變係不同之突變。
  34. 如請求項33之抗體，其中該第一VH包含與SEQ ID NO: 7至少70%相同之胺基酸序列。
  35. 如請求項33或34之抗體，其中該第一VL包含與SEQ ID NO: 8至少70%相同之胺基酸序列。
  36. 如請求項35之抗體，其中SEQ ID NO: 8之位置66、67、67A及67C (Kabat編號)之胺基酸改變。
  37. 如請求項33至36中任一項之抗體，其中該第一重鏈包含與SEQ ID NO: 9至少70%相同之胺基酸序列。
  38. 如請求項33至37中任一項之抗體，其中該第一輕鏈包含與SEQ ID NO: 10至少70%相同之胺基酸序列。
  39. 如請求項33至38中任一項之抗體，其中該第二VH包含與SEQ ID NO: 17至少70%相同之胺基酸序列。
  40. 如請求項33至39中任一項之抗體，其中該第二VL包含與SEQ ID NO: 18至少70%相同之胺基酸序列。
  41. 如請求項33至40中任一項之抗體，其中該第二重鏈包含與SEQ ID NO: 19至少70%相同之胺基酸序列。
  42. 如請求項33至41中任一項之抗體，其中該第二輕鏈包含與SEQ ID NO: 20至少70%相同之胺基酸序列。
  43. 如請求項33之抗體，其中該第一VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列且該第一VL包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列及/或該第二VH包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列且該第二VL包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。
  44. 如請求項33之抗體，其中該第一VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列且該第一VL包含SEQ ID NO: 81之胺基酸序列及/或該第二VH包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列且該第二VL包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。
  45. 如請求項33之抗體，其中該第一VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列且該第一VL包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列及/或該第二VH包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列且該第二VL包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。
  46. 如請求項33之抗體，其中該第一VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列且該第一VL包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列及/或該第二VH包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列且該第二VL包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。
  47. 如請求項33之抗體，其中該第一VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列且該第一VL包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列及/或該第二VH包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列且該第二VL包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。
  48. 如請求項33之抗體，其中該第一重鏈包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列且該第一輕鏈包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列及/或該第二重鏈包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列且該第二輕鏈包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。
  49. 如請求項33之抗體，其中該第一重鏈包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列且該第一輕鏈包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列及/或該第二重鏈包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列且該第二輕鏈包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。
  50. 如請求項33之抗體，其中該第一重鏈包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列且該第一輕鏈包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列及/或該第二重鏈包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列且該第二輕鏈包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。
  51. 如請求項33之抗體，其中該第一重鏈包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列且該第一輕鏈包含SEQ ID NO: 79之胺基酸序列及/或該第二重鏈包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列且該第二輕鏈包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。
  52. 如請求項33之抗體，其中該第一重鏈包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列且該第一輕鏈包含SEQ ID NO: 80之胺基酸序列及/或該第二重鏈包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列且該第二輕鏈包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。
  53. 如請求項1至52中任一項之抗體，其進一步包含細胞毒性劑、放射性同位素、治療劑、抗病毒劑或可偵測標籤。
  54. 一種組合物，其包含(i)編碼如請求項1至52中任一項之抗體之第一抗原結合片段之第一輕鏈可變區或第一輕鏈之核酸分子；(ii)編碼如請求項1至52中任一項之抗體之第一抗原結合片段之第一重鏈可變區或第一重鏈之核酸分子；(iii)編碼如請求項1至52中任一項之抗體之第二抗原結合片段之第一輕鏈可變區或第一輕鏈之核酸分子；及(iv)編碼如請求項1至52中任一項之抗體之第二抗原結合片段之第二重鏈可變區或第二重鏈之核酸分子。
  55. 一種宿主細胞，其包含(i)編碼如請求項1至52中任一項之抗體之第一抗原結合片段之第一輕鏈可變區或第一輕鏈之核酸分子；(ii)編碼如請求項1至52中任一項之抗體之第一抗原結合片段之第一重鏈可變區或第一重鏈之核酸分子；及/或(iii)編碼如請求項1至52中任一項之抗體之第二抗原結合片段之第一輕鏈可變區或第一輕鏈之核酸分子；及(iv)編碼如請求項1至52中任一項之抗體之第二抗原結合片段之第二重鏈可變區或第二重鏈之核酸分子。
  56. 如請求項55之宿主細胞，其係選自由以下組成之群：於組織培養物中之大腸桿菌(E. coli )、假單胞菌(Pseudomonas )、芽孢桿菌(Bacillus )、鏈黴菌(Streptomyces )、酵母菌、CHO、YB/20、NS0、PER-C6、HEK-293T、NIH-3T3、HeLa、BHK、Hep G2、SP2/0、R1.1、B-W、L-M、COS 1、COS 7、BSC1、BSC40、BMT10細胞、植物細胞、昆蟲細胞及人類細胞。
  57. 一種產生結合至gp120及人類CD3之抗體之方法，該方法包括如請求項55或56之宿主細胞在表現該等核酸分子並產生該抗體之條件下培養。
  58. 一種用於偵測樣本中表現gp120及CD3之細胞之方法，該方法包括使該樣本與如請求項1至53中任一項之抗體接觸。
  59. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至53中任一項之抗體，及醫藥上可接受之賦形劑。
  60. 一種套組，其包含如請求項1至53中任一項之抗體或如請求項59之醫藥組合物，及a)偵測試劑，b) gp120及/或CD3抗原，c)反映針對人類投與批准使用或銷售之通知，或d)其組合。
  61. 一種治療或預防有需要之人類個體中人類免疫不全病毒感染之方法，該方法包括向該人類個體投與治療有效量之如請求項1至53中任一項之抗體或如請求項59之醫藥組合物。
  62. 一種結合至gp120之抗體，其中該抗體包含重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)，其中該VH包括包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之VH-CDR1、包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之VH-CDR2、包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之VH-CDR3，其中該VL包括包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列之VL-CDR1、包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列之VL-CDR2及包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之VL-CDR3，且其中該VL包含於位置67A (Kabat編號)之酪胺酸、於位置67A (Kabat編號)之苯丙胺酸、於位置67A (Kabat編號)之蘇胺酸或於位置67 (Kabat編號)之甘胺酸。
  63. 如請求項62之抗體，其中該VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列。
  64. 如請求項62之抗體，其中該VL包含SEQ ID NO: 81、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 83或SEQ ID NO: 84之胺基酸序列。
  65. 如請求項62之抗體，其中該VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列，且該VL包含SEQ ID NO: 81、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 83或SEQ ID NO: 84之胺基酸序列。
  66. 如請求項62之抗體，其中該抗體包括包含SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列之重鏈。
  67. 如請求項62之抗體，其中該抗體包括包含SEQ ID NO: 40、78、79或80中任一者所示之胺基酸序列之輕鏈。
  68. 如請求項62之抗體，其中該抗體包括包含SEQ ID NO: 9中所示之胺基酸序列之重鏈，及包含SEQ ID NO: 40、78、79或80中任一者所示之胺基酸序列之輕鏈。
  69. 如請求項62至68中任一項之抗體，其進一步包含細胞毒性劑、放射性同位素、治療劑、抗病毒劑或可偵測標籤。
  70. 一種醫藥組合物，其包含如請求項62至69中任一項之抗體，及醫藥上可接受之載劑。
  71. 一種核酸，其編碼如請求項62至68中任一項之抗體。
  72. 一種載體，其包含如請求項71之核酸。
  73. 一種宿主細胞，其包含如請求項72之載體。
  74. 一種產生抗gp120抗體之方法，該方法包括如請求項73之宿主細胞在表現該核酸或該等核酸並產生該抗體之條件下培養。
  75. 一種治療或預防有需要之人類個體中人類免疫不全病毒感染之方法，該方法包括向該人類個體投與治療有效量之如請求項62至69中任一項之抗體或如請求項70之醫藥組合物。
  76. 一種結合至gp120之抗體片段，其中該抗體片段包含重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)，其中該VH包括包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之VH-CDR1、包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之VH-CDR2、包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之VH-CDR3，其中該VL包括包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列之VL-CDR1、包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列之VL-CDR2及包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之VL-CDR3，且其中該VL包含於位置67A (Kabat編號)之酪胺酸、於位置67A (Kabat編號)之苯丙胺酸、於位置67A (Kabat編號)之蘇胺酸或於位置67 (Kabat編號)之甘胺酸。
  77. 如請求項76之抗體片段，其中該VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列。
  78. 如請求項76之抗體片段，其中該VL包含SEQ ID NO: 81、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 83或SEQ ID NO: 84之胺基酸序列。
  79. 如請求項76之抗體片段，其中該VH包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列，且該VL包含SEQ ID NO: 81、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 83或SEQ ID NO: 84之胺基酸序列。
  80. 如請求項76至79中任一項之抗體片段，其係Fab、F(ab)2、Fv、scFv、sc(Fv)2或雙功能抗體。
  81. 如請求項76至80中任一項之抗體片段，其進一步包含細胞毒性劑、放射性同位素、治療劑、抗病毒劑或可偵測標籤。
  82. 一種醫藥組合物，其包含如請求項76至81中任一項之抗體片段，及醫藥上可接受之載劑。
  83. 一種核酸，其編碼如請求項76至80中任一項之抗體片段。
  84. 一種載體，其包含如請求項83之核酸。
  85. 一種宿主細胞，其包含如請求項84之載體。
  86. 一種產生抗gp120抗體片段之方法，該方法包括如請求項85之宿主細胞在表現該核酸或該等核酸並產生該抗體片段之條件下培養。
TW107121345A 2017-06-21 2018-06-21 靶向hiv gp120及cd3之多特異性抗體 TWI728250B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762523141P 2017-06-21 2017-06-21
US62/523,141 2017-06-21

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW201920258A true TW201920258A (zh) 2019-06-01
TWI728250B TWI728250B (zh) 2021-05-21

Family

ID=62976133

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW107121345A TWI728250B (zh) 2017-06-21 2018-06-21 靶向hiv gp120及cd3之多特異性抗體

Country Status (10)

Country Link
US (2) US10882907B2 (zh)
EP (1) EP3642229A1 (zh)
JP (1) JP7009517B2 (zh)
KR (1) KR102324568B1 (zh)
CN (1) CN110831965B (zh)
AR (1) AR112257A1 (zh)
AU (1) AU2018290228B2 (zh)
CA (1) CA3065328C (zh)
TW (1) TWI728250B (zh)
WO (1) WO2018237148A1 (zh)

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3642229A1 (en) 2017-06-21 2020-04-29 Gilead Sciences, Inc. Multispecific antibodies that target hiv gp120 and cd3
JP7126573B2 (ja) 2018-07-03 2022-08-26 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド ＨＩＶ ｇｐ１２０を標的化する抗体および使用方法
CN113518823A (zh) * 2019-01-07 2021-10-19 托马斯杰斐逊大学 多功能的融合蛋白及其用途
TW202231277A (zh) 2019-05-21 2022-08-16 美商基利科學股份有限公司 鑑別對使用gp120 v3聚醣導向之抗體的治療敏感之hiv病患的方法
CA3145791A1 (en) 2019-07-16 2021-01-21 Gilead Sciences, Inc. Hiv vaccines and methods of making and using
IL294663A (en) 2020-01-13 2022-09-01 Neoimmunetech Inc A method for tumor treatment with a combination of il-7 protein and a bispecific antibody
TW202200161A (zh) 2020-03-20 2022-01-01 美商基利科學股份有限公司 4’-c-經取代-2-鹵基-2’-去氧腺苷核苷之前藥及其製造與使用方法
JP2023539196A (ja) 2020-08-25 2023-09-13 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド Ｈｉｖを標的とする多重特異性抗原結合分子及び使用方法
TW202406932A (zh) 2020-10-22 2024-02-16 美商基利科學股份有限公司 介白素2-Fc融合蛋白及使用方法
WO2022103758A1 (en) 2020-11-11 2022-05-19 Gilead Sciences, Inc. METHODS OF IDENTIFYING HIV PATIENTS SENSITIVE TO THERAPY WITH gp120 CD4 BINDING SITE-DIRECTED ANTIBODIES
JP2024500322A (ja) * 2020-12-07 2024-01-09 ヴィーブ、ヘルスケア、カンパニー 併用療法
AR127298A1 (es) * 2021-10-08 2024-01-10 Genmab As Anticuerpos que se unen a cd30 y cd3
WO2023102239A1 (en) 2021-12-03 2023-06-08 Gilead Sciences, Inc. Therapeutic compounds for hiv virus infection
TW202342447A (zh) 2021-12-03 2023-11-01 美商基利科學股份有限公司 用於ｈｉｖ病毒感染之治療性化合物
TW202342448A (zh) 2021-12-03 2023-11-01 美商基利科學股份有限公司 用於ｈｉｖ病毒感染之治療性化合物
CN114316062B (zh) * 2022-03-02 2022-06-07 珠海臻谱基因科技有限公司北京分公司 靶向HIV gp120蛋白和人CD3分子的多特异性抗体及其应用
US20240117030A1 (en) * 2022-03-03 2024-04-11 Pfizer Inc. Multispecific antibodies and uses thereof
TW202400172A (zh) 2022-04-06 2024-01-01 美商基利科學股份有限公司 橋聯三環胺甲醯基吡啶酮化合物及其用途
WO2024006982A1 (en) 2022-07-01 2024-01-04 Gilead Sciences, Inc. Therapeutic compounds useful for the prophylactic or therapeutic treatment of an hiv virus infection
WO2024015741A1 (en) 2022-07-12 2024-01-18 Gilead Sciences, Inc. Hiv immunogenic polypeptides and vaccines and uses thereof
GB202211100D0 (en) * 2022-07-29 2022-09-14 Stam Jord Cornelis Lysosomal degradation
US20240083984A1 (en) 2022-08-26 2024-03-14 Gilead Sciences, Inc. Dosing and scheduling regimen for broadly neutralizing antibodies
WO2024076915A1 (en) 2022-10-04 2024-04-11 Gilead Sciences, Inc. 4'-thionucleoside analogues and their pharmaceutical use

Family Cites Families (104)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4634665A (en) 1980-02-25 1987-01-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US5179017A (en) 1980-02-25 1993-01-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4714681A (en) 1981-07-01 1987-12-22 The Board Of Reagents, The University Of Texas System Cancer Center Quadroma cells and trioma cells and methods for the production of same
US4474893A (en) 1981-07-01 1984-10-02 The University of Texas System Cancer Center Recombinant monoclonal antibodies
US5156840A (en) 1982-03-09 1992-10-20 Cytogen Corporation Amine-containing porphyrin derivatives
US5057313A (en) 1986-02-25 1991-10-15 The Center For Molecular Medicine And Immunology Diagnostic and therapeutic antibody conjugates
US4925648A (en) 1988-07-29 1990-05-15 Immunomedics, Inc. Detection and treatment of infectious and inflammatory lesions
US5601819A (en) 1988-08-11 1997-02-11 The General Hospital Corporation Bispecific antibodies for selective immune regulation and for selective immune cell binding
DK0479909T3 (da) 1989-06-29 1997-04-07 Medarex Inc Bispecifikke reagenser til AIDS-behandling
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US7041293B1 (en) 1990-04-03 2006-05-09 Genentech, Inc. HIV env antibodies
ATE175118T1 (de) 1990-10-05 1999-01-15 Medarex Inc Gezielte immunostimulierung mit bispezifischen stoffen
DE69128253T2 (de) 1990-10-29 1998-06-18 Chiron Corp Bispezifische antikörper, verfahren zu ihrer herstellung und deren verwendungen
DE69214709T2 (de) 1991-04-26 1997-02-20 Surface Active Ltd Neue Antikörper und Verfahren zu ihrer Verwendung
CA2131528C (en) 1992-03-05 2004-07-13 Philip E. Thorpe Methods and compositions for targeting the vasculature of solid tumors
US6174666B1 (en) 1992-03-27 2001-01-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Method of eliminating inhibitory/instability regions from mRNA
AU5729294A (en) 1992-11-25 1994-06-22 Tanox Biosystems, Inc. Conjugates and constructs including anti-cd28 and anti-cd3 binding molecules
EP0702793B1 (en) 1993-06-11 2003-08-27 Coulter International Corporation Anti-cd3 antibody-aminodextran conjugates for induction of t-cell activation and proliferation
US5827690A (en) 1993-12-20 1998-10-27 Genzyme Transgenics Corporatiion Transgenic production of antibodies in milk
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US6815201B2 (en) 1997-09-08 2004-11-09 The Public Health Research Institute Of The City Of New York, Inc. HIV-1 gp120 V1/V2 domain epitopes capable of generating neutralizing antibodies
GB9815909D0 (en) 1998-07-21 1998-09-16 Btg Int Ltd Antibody preparation
AU5728999A (en) 1998-07-28 2000-02-21 Micromet Ag Heterominibodies
US6897044B1 (en) 1999-01-28 2005-05-24 Biogen Idec, Inc. Production of tetravalent antibodies
US7658921B2 (en) 2000-12-12 2010-02-09 Medimmune, Llc Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
AU2002327164A1 (en) 2001-01-29 2002-12-09 Idec Pharmaceuticals Corporation Engineered tetravalent antibodies and methods of use
CA2437814C (en) 2001-02-12 2008-05-13 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to fc alpha receptor (cd89)
US20030020733A1 (en) 2001-07-24 2003-01-30 Yin Memphis Zhihong Computer display having selective area magnification
US7662925B2 (en) 2002-03-01 2010-02-16 Xencor, Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US20090010920A1 (en) 2003-03-03 2009-01-08 Xencor, Inc. Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb
US8388955B2 (en) 2003-03-03 2013-03-05 Xencor, Inc. Fc variants
ATE490788T1 (de) 2003-04-25 2010-12-15 Gilead Sciences Inc Antivirale phosphonate analoge
WO2004106381A1 (en) 2003-05-31 2004-12-09 Micromet Ag Pharmaceutical compositions comprising bispecific anti-cd3, anti-cd19 antibody constructs for the treatment of b-cell related disorders
CA2553946C (en) 2004-02-06 2019-02-26 University Of Massachusetts Antibodies against clostridium difficile toxins and uses thereof
KR20060131892A (ko) 2004-02-16 2006-12-20 마이크로메트 에이지 덜 면역원성인 결합 분자
CN100376599C (zh) 2004-04-01 2008-03-26 北京安波特基因工程技术有限公司 基因工程重组抗cea抗cd3抗cd28线性单链三特异抗体
EP1778251B1 (en) 2004-07-27 2011-04-13 Gilead Sciences, Inc. Nucleoside phosphonate conjugates as anti hiv agents
JP2008511337A (ja) 2004-09-02 2008-04-17 ジェネンテック・インコーポレーテッド ヘテロ多量体分子
AU2005302416A1 (en) 2004-10-29 2006-05-11 Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Broadly cross-reactive HIV-1 neutralizing human monoclonal antibodies
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US8546543B2 (en) 2004-11-12 2013-10-01 Xencor, Inc. Fc variants that extend antibody half-life
CA2587617C (en) 2004-11-12 2011-02-01 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to fcrn
UA95902C2 (ru) 2005-02-23 2011-09-26 Дженентек, Инк. Способ увеличения времени развития заболевания или выживаемости у раковых пациентов
JP2006315964A (ja) * 2005-05-10 2006-11-24 Chugai Pharmaceut Co Ltd 抗体安定化方法
AU2006299429B2 (en) 2005-10-03 2012-02-23 Xencor, Inc. Fc variants with optimized Fc receptor binding properties
EP3770174A1 (en) 2005-10-11 2021-01-27 Amgen Research (Munich) GmbH Compositions comprising cross-species-specific antibodies and uses thereof
EP1803814A1 (en) 2005-12-27 2007-07-04 SIGMA-TAU Industrie Farmaceutiche Riunite S.p.A. Method of improving the antibody selection capacity in phage-display library
WO2008140579A2 (en) 2006-11-17 2008-11-20 New York University Induction of broadly reactive neutralizing antibodies by focusing the immune response on v3 epitopes of the hiv-1 gp120 envelope
CN104497143B (zh) 2007-03-29 2020-08-25 健玛保 双特异性抗体及其制造方法
SI2155783T1 (sl) 2007-04-03 2013-10-30 Amgen Research (Munich) Gmbh Medvrstno specifiäśna cd3-epsilon vezavna domena
CN101918365B (zh) 2007-11-16 2013-10-09 吉联亚科学股份有限公司 人类免疫缺陷病毒复制的抑制剂
US20120034228A1 (en) 2008-10-01 2012-02-09 Micromet Ag CROSS-SPECIES-SPECIFIC PSCAxCD3, CD19xCD3, C-METxCD3, ENDOSIALINxCD3, EPCAMxCD3, IGF-1RxCD3 OR FAPALPHAxCD3 BISPECIFIC SINGLE CHAIN ANTIBODY
WO2010037838A2 (en) 2008-10-01 2010-04-08 Micromet Ag Cross-species-specific single domain bispecific single chain antibody
PL2356153T3 (pl) 2008-10-01 2016-11-30 Swoiste międzygatunkowo dwuswoiste przeciwciało jednołańcuchowe PSMAXCD3
WO2010056898A2 (en) 2008-11-12 2010-05-20 University Of Maryland, Baltimore Rapid expression cloning of human monoclonal antibodies from memory b cells
ES2623794T3 (es) 2008-12-09 2017-07-12 Gilead Sciences, Inc. Intermedios para la preparación de moduladores de receptores tipo toll
EP2398496B1 (en) 2009-02-20 2015-08-05 International AIDS Vaccine Initiative Vesicular stomatitis virus vectors encoding hiv env epitopes
SI3260136T1 (sl) 2009-03-17 2021-05-31 Theraclone Sciences, Inc. Humani imunodeficientni virus (HIV)-nevtralizirajoča protitelesa
EP2246364A1 (en) 2009-04-29 2010-11-03 Pierre Fabre Médicament Anti CXCR4 antibodies for the treatment of HIV
US8338441B2 (en) 2009-05-15 2012-12-25 Gilead Sciences, Inc. Inhibitors of human immunodeficiency virus replication
WO2011131746A2 (en) 2010-04-20 2011-10-27 Genmab A/S Heterodimeric antibody fc-containing proteins and methods for production thereof
WO2011139637A1 (en) 2010-05-03 2011-11-10 Philadelphia Health & Education Corporation Small-molecule modulators of hiv-1 capsid stability and methods thereof
CN103154035B (zh) 2010-05-27 2017-05-10 根马布股份公司 针对her2的单克隆抗体
MA34397B1 (fr) 2010-07-02 2013-07-03 Gilead Sciences Inc Dérivés d'acide napht-2-ylacétique dans le traitement du sida
EP2588455B1 (en) 2010-07-02 2018-04-04 Gilead Sciences, Inc. 2-quinolinyl-acetic acid derivatives as hiv antiviral compounds
PT3556396T (pt) 2010-08-31 2022-07-04 Scripps Research Inst Anticorpos neutralizantes do vírus da imunodeficiência humana (vih)
KR20140000275A (ko) 2010-11-18 2014-01-02 예일 유니버시티 인체 면역결핍 바이러스에 대해 항체 모집 및 진입 저해 활성을 갖는 2작용기의 분자
WO2012106578A1 (en) 2011-02-04 2012-08-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services HIV NEUTRALIZING ANTIBODIES HAVING MUTATIONS IN CONSTANT DOMAIN (Fc)
UA111841C2 (uk) 2011-04-21 2016-06-24 Гіліад Сайєнсіз, Інк. Сполуки бензотіазолу та їх фармацевтичне застосування
PT2729448E (pt) 2011-07-06 2015-12-02 Gilead Sciences Inc Compostos para o tratamento de vih
CN102863512B (zh) 2011-07-07 2016-04-20 上海泓博智源医药技术有限公司 抗病毒化合物
SI2771364T1 (sl) 2011-10-27 2019-10-30 Genmab As Produkcija heterodimernih proteinov
CN108676091B (zh) 2011-12-08 2022-04-01 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) Hiv-1的中和抗体及其用途
US9399645B2 (en) 2011-12-20 2016-07-26 Boehringer Ingelheim International Gmbh Inhibitors of HIV replication
PE20141558A1 (es) 2012-04-20 2014-11-06 Gilead Sciences Inc Derivados de acido benzotiazol-6-il acetico y su uso para tratar una infeccion por vih
WO2013163427A1 (en) * 2012-04-25 2013-10-31 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Antibodies to treat hiv-1 infection
EP2895203A4 (en) 2012-06-15 2016-09-28 Imaginab Inc ANTIGEN BINDING CONSTRUCTIONS FOR CD3
US11149069B2 (en) 2012-08-03 2021-10-19 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Compositions and methods for conformationally stabilizing primate immunodeficiency virus envelope glycoprotein trimers
DK3067358T3 (da) 2012-12-21 2019-11-04 Gilead Sciences Inc Polycykliske carbamoylpyridon-forbindelser og deres farmaceutiske anvendelse
EP2940019B1 (en) 2012-12-27 2018-03-28 Japan Tobacco Inc. SUBSTITUTED SPIROPYRIDO[1,2-a]PYRAZINE DERIVATIVE AND MEDICINAL USE THEREOF AS HIV INTEGRASE INHIBITOR
SI2968520T1 (sl) * 2013-03-14 2022-01-31 Macrogenics, Inc. Bispecifične molekule, ki so imunoreaktivne z imunskimi efektorskimi celicami, ki izražajo aktivacijski receptor
NZ715896A (en) * 2013-07-05 2022-02-25 Genmab As Humanized or chimeric cd3 antibodies
US10376583B2 (en) 2013-09-30 2019-08-13 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Human immunodeficiency virus therapies utilizing N332-glycan-dependent antibodies and a reservoir activator
CA2932405A1 (en) 2013-12-02 2015-06-11 Aaron Diamond Aids Research Center Improved hiv-1-neutralizing antibody potency and breadth via cell receptor anchoring using bispecific antibodies with native architecture
TWI701042B (zh) 2014-03-19 2020-08-11 美商再生元醫藥公司 用於腫瘤治療之方法及抗體組成物
AU2015266077A1 (en) 2014-05-28 2016-09-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to human and cynomolgus CD3 epsilon
NZ726514A (en) 2014-05-29 2019-01-25 Macrogenics Inc Tri-specific binding molecules and methods of use thereof
US10093720B2 (en) * 2014-06-11 2018-10-09 International Aids Vaccine Initiative Broadly neutralizing antibody and uses thereof
PL3166607T3 (pl) 2014-07-11 2023-02-20 Gilead Sciences, Inc. Modulatory receptorów toll-podobnych do leczenia hiv
AU2016210068B2 (en) 2015-01-23 2021-10-28 Sanofi Anti-CD3 antibodies, anti-CD123 antibodies and bispecific antibodies specifically binding to CD3 and/or CD123
US10562960B2 (en) * 2015-03-20 2020-02-18 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to gp120 and their use
EP3283106B1 (en) 2015-04-13 2021-12-22 Pfizer Inc. Therapeutic antibodies and their uses
CA2983034A1 (en) * 2015-04-17 2016-10-20 Igm Biosciences, Inc. Multi-valent human immunodeficiency virus antigen binding molecules and uses thereof
CA2991880A1 (en) 2015-07-10 2017-01-19 Merus N.V. Human cd3 binding antibody
EP3322727A1 (en) 2015-07-15 2018-05-23 Genmab A/S Humanized or chimeric cd3 antibodies
WO2017074878A1 (en) * 2015-10-25 2017-05-04 Sanofi Trispecific and/or trivalent binding proteins for prevention or treatment of hiv infection
WO2017096221A1 (en) 2015-12-02 2017-06-08 The Rockefeller University Bispecific anti-hiv broadly neutralizing antibodies
WO2017106346A2 (en) 2015-12-15 2017-06-22 Gilead Sciences, Inc. Human immunodeficiency virus neutralizing antibodies
CN109071658A (zh) 2016-02-05 2018-12-21 根马布股份公司 具有改进的内化特性的多特异性抗原-结合分子
BR112019015900A2 (pt) 2017-02-10 2020-04-07 Genmab B.V. polipeptídeo, métodos para aumentar a atividade agonística de um polipeptídeo, para aumentar a atividade de cdc de um polipeptídeo e de tratamento de um indivíduo tendo uma doença, composição, kit de partes, e, uso de um polipeptídeo ou uma composição
EP3642229A1 (en) 2017-06-21 2020-04-29 Gilead Sciences, Inc. Multispecific antibodies that target hiv gp120 and cd3

Also Published As

Publication number Publication date
US11597759B2 (en) 2023-03-07
JP7009517B2 (ja) 2022-01-25
TWI728250B (zh) 2021-05-21
CA3065328A1 (en) 2018-12-27
US10882907B2 (en) 2021-01-05
AR112257A1 (es) 2019-10-09
KR102324568B1 (ko) 2021-11-10
WO2018237148A1 (en) 2018-12-27
US20200377592A1 (en) 2020-12-03
WO2018237148A8 (en) 2019-12-26
JP2020529192A (ja) 2020-10-08
AU2018290228A1 (en) 2020-01-02
EP3642229A1 (en) 2020-04-29
CN110831965B (zh) 2023-03-07
US20180371086A1 (en) 2018-12-27
AU2018290228B2 (en) 2021-07-01
KR20200019712A (ko) 2020-02-24
CA3065328C (en) 2023-08-15
CN110831965A (zh) 2020-02-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11597759B2 (en) Multispecific antibodies that target HIV GP120 and CD3
US11987617B2 (en) Antibodies that target HIV GP120 and methods of use
US20230056252A1 (en) Multi-specific antigen binding molecules targeting hiv and methods of use
TWI836260B (zh) 靶向hiv之多特異性抗原結合分子及使用方法