KR20200019712A - HIV gp120 및 CD3을 표적화하는 다중특이적 항체 - Google Patents

HIV gp120 및 CD3을 표적화하는 다중특이적 항체 Download PDF

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Abstract

HIV gp120 및 CD3에 결합하는 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체)가 개시된다. 또한, HIV 감염을 치료하거나 또는 예방하기 위해 이러한 항체를 사용하는 방법이 개시된다.

Description

HIV gp120 및 CD3을 표적화하는 다중특이적 항체
관련 출원의 상호 참고
본 출원은 2017년 6월 21에 출원한 미국 가특허 출원 일련 번호 62/523,141을 우선권으로 주장하며, 그의 전문이 본원에 참고로 포함된다.
서열 목록
본 출원은 ASCII 포맷으로 전자적으로 제출된 서열 목록을 함유하며, 그의 전문이 본원에 참고로 포함된다. 2018년 6월 20일에 생성된 상기 ASCII 사본은 35648-0054WO1_SL.txt로 명명되고, 164,114 바이트의 크기를 갖는다.
기술분야
본 개시내용은 인간 면역결핍 바이러스 (HIV) 감염의 치료 및 예방을 위한 항체에 관한 것이다. 특히, 광범위 중화 항-HIV 항체를 포함하는 다중특이적 항체, 및 HIV 복제를 감소시키기 위해 및 HIV 감염의 치료 및 예방에서 이들 항체를 사용하는 방법이 본원에서 제공된다.
인간 면역결핍 바이러스 (HIV) 감염 및 관련 질환은 전세계적으로 주요한 공중 보건 문제이다. HIV 감염을 위해 가장 최근에 승인된 요법은 바이러스 역전사효소, 프로테아제 효소, 및 인테그라제를 표적화하지만, 이들 기존 약물에 대한 HIV의 내성, 장기간 독성, 및 환자가 매일 투약 레지멘을 고수하지 않는 것이 이들 요법과 연관된 문제점인 것으로 입증되었다. 따라서, 새로운 HIV 약물을 발견하고 개발하는 것이 중요하다.
WO2012/030904는 HIV-감염된 공여자의 기억 B 세포로부터 유래된 인간 항-HIV 항체를 기재하며, 이는 다수개의 클레이드로부터의 HIV-1 종에 의한 감염을 억제할 수 있다. 그러나, 이들 항체의 치료적 사용은 면역원성, 약동학, 항원 특이성, 이펙터 기능, 및 제조와 관련된 문제로 인해 제한된다. 따라서, 치료적 사용을 위해 유리한 성질을 갖는 신규한 항-HIV 항체가 관련 기술분야에서 요구되고 있다.
본 개시내용은 그 중에서도 HIV를 치료하거나 또는 예방하기 위한 조성물 및 방법을 제공한다. 더욱 구체적으로, 인간 면역결핍 바이러스 (HIV) 외피 (Env) 당단백질 GP120 (gp120), 및 제2 항원 (예를 들어, 분화 클러스터 3 (CD3); 항-IgA 수용체 (CD89))을 표적화하는 다중특이적 항체, 및 그의 용도가 본원에서 제공된다.
한 측면에서, 본 개시내용은 인간 면역결핍 바이러스-1 (HIV-1) 외피 (Env) 당단백질 gp 120 (gp120) 및 인간 CD3 (예를 들어, 인간 CD3ε)에 결합하는 다중특이적 항체를 제공한다. 상기 항체는 제1 중쇄 가변 도메인 (VH) 및 제1 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함하는 제1 항원-결합 도메인을 포함한다. 제1 항원-결합 도메인은 gp120에 결합하고, 서열식별번호(SEQ ID NO):1의 아미노산 서열을 포함하는 제1 VH-상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열식별번호:2의 아미노산 서열을 포함하는 제1 VH-CDR2; 서열식별번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 제1 VH-CDR3; 서열식별번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 제1 VL-CDR1; 서열식별번호:5의 아미노산 서열을 포함하는 제1 VL-CDR2; 및 서열식별번호:6의 아미노산 서열을 포함하는 제1 VL-CDR3을 포함한다. 이 항체는 또한 인간 CD3 (예를 들어, 인간 CD3ε)에 결합하는 제2 항원-결합 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-gp120 항체는 서열식별번호: 21에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 단백질에 결합한다. 일부 예에서, 항-gp120 항체는 서열식별번호: 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 단백질에 결합한다. 일부 예에서, 항-gp120 항체는 유리 HIV-1 바이러스에 결합한다. 일부 예에서, 항-gp120 항체는 HIV-1 감염된 세포에 결합한다. 일부 예에서, 항-gp120 항체는 유리 HIV-1 바이러스 및 HIV-1 감염된 세포 둘 다에 결합한다. 특정 경우에서, 항-gp120 항체는 HIV-1의 적어도 2가지 상이한 균주 (예를 들어, 그룹 M, 그룹 N, 그룹 O, 또는 그룹 P)에 결합한다. 한 실시양태에서, 항-gp120 항체는 pWITO.c/2474 (수탁 번호 JN944948 및 NIH AIDS 시약 프로그램 카탈로그 번호 11739)에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 항-gp120 항체는 pCH058.c/2960 (수탁 번호 JN944940 및 NIH AIDS 시약 프로그램 카탈로그 번호 700010058)에 결합한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 인간 면역결핍 바이러스-1 (HIV-1) 외피 (Env) 당단백질 gp 120 (gp120) 및 IgA 수용체, CD89에 결합하는 다중특이적 항체를 제공한다. 상기 항체는 제1 중쇄 가변 도메인 (VH) 및 제1 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함하는 제1 항원-결합 도메인을 포함한다. 제1 항원-결합 도메인은 gp120에 결합하고, 서열식별번호:1의 아미노산 서열을 포함하는 제1 VH-상보성 결정 영역 (CDR) 1; 서열식별번호:2의 아미노산 서열을 포함하는 제1 VH-CDR2; 서열식별번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 제1 VH-CDR3; 서열식별번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 제1 VL-CDR1; 서열식별번호:5의 아미노산 서열을 포함하는 제1 VL-CDR2; 및 서열식별번호:6의 아미노산 서열을 포함하는 제1 VL-CDR3을 포함한다. 이 항체는 또한 CD89 (예를 들어, 인간 CD89/FCAR; UniProtKB - P24071)에 결합하는 제2 항원-결합 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-gp120 항체는 서열식별번호: 21에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 단백질에 결합한다. 일부 예에서, 항-gp120 항체는 서열식별번호: 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 단백질에 결합한다. 일부 예에서, 항-gp120 항체는 유리 HIV-1 바이러스에 결합한다. 일부 예에서, 항-gp120 항체는 HIV-1 감염된 세포에 결합한다. 일부 예에서, 항-gp120 항체는 유리 HIV-1 바이러스 및 HIV-1 감염된 세포 둘 다에 결합한다. 특정 경우에서, 항-gp120 항체는 HIV-1의 적어도 2가지 상이한 균주 (예를 들어, 그룹 M, 그룹 N, 그룹 O, 또는 그룹 P)에 결합한다. 한 실시양태에서, 항-gp120 항체는 pWITO.c/2474 (수탁 번호 JN944948 및 NIH AIDS 시약 프로그램 카탈로그 번호 11739)에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 항-gp120 항체는 pCH058.c/2960 (수탁 번호 JN944940 및 NIH AIDS 시약 프로그램 카탈로그 번호 700010058)에 결합한다.
상기 두 측면의 일부 실시양태에서, 제1 VH는 서열식별번호:7과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 VL은 서열식별번호:8과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 이들 실시양태의 특정 예에서, 서열식별번호:8의 위치 66, 67, 67A 및 67C (카바트(Kabat) 넘버링) 중 하나 이상에서의 아미노산은 변경되지 않는다. 특정 실시양태에서, 제1 VL은 서열식별번호:81과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 VL은 서열식별번호:82와 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 VL은 서열식별번호:83과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 VL은 서열식별번호:84와 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 예에서, 상기 기재된 VH는 서열식별번호: 56-65에 제시된 아미노산 서열 중 하나에 직접적으로 또는 개재 아미노산(들) (예를 들어, G-S 링커 서열)을 통해 연결된다. 다른 예에서, 상기 기재된 VH는 서열식별번호: 66-75에 제시된 아미노산 서열 중 하나에 직접적으로 또는 개재 아미노산(들) (예를 들어, G-S 링커 서열)을 통해 연결된다. 일부 예에서, 상기 기재된 VH는 서열식별번호:77 내에 0-10개의 아미노산 치환 (예를 들어, 반감기를 증가시키고/거나 이펙터 기능을 감소시키는 치환)을 갖는 아미노산 서열에 직접적으로 또는 개재 아미노산(들) (예를 들어, G-S 링커 서열)을 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 상기 기재된 VH는 IgG1 (예를 들어, 인간 IgG1, 예를 들어, IgG1m3 알로타입) 및 IgG3 힌지 영역 (예를 들어, WO2017/096221에 기재된 "개방" IgG3 힌지 변이체 "IgG3 C-")으로부터의 CH1 도메인, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하는 아미노산 서열에 직접적으로 또는 개재 아미노산(들) (예를 들어, G-S 링커 서열)을 통해 연결된다.
상기 두 측면의 일부 실시양태에서, 제1 항원-결합 도메인은 서열식별번호:9와 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 항원-결합 도메인은 서열식별번호:10과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 항원-결합 도메인은 서열식별번호:40과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 항원-결합 도메인은 서열식별번호:78과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 항원-결합 도메인은 서열식별번호:79와 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 항원-결합 도메인은 서열식별번호:80과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다.
상기 두 측면의 특정 실시양태에서, 제1 VH는 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하고, 제1 VL은 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 포함한다. 다른 실시양태에서, 제1 VH는 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하고, 제1 VL은 서열식별번호:81의 아미노산 서열을 포함한다. 다른 실시양태에서, 제1 VH는 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하고, 제1 VL은 서열식별번호:82의 아미노산 서열을 포함한다. 다른 실시양태에서, 제1 VH는 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하고, 제1 VL은 서열식별번호:83의 아미노산 서열을 포함한다. 다른 실시양태에서, 제1 VH는 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하고, 제1 VL은 서열식별번호:84의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 예에서, 상기 기재된 VH는 서열식별번호:56-65에 제시된 아미노산 서열 중 하나에 직접적으로 또는 개재 아미노산(들) (예를 들어, G-S 링커 서열)을 통해 연결된다. 다른 예에서, 상기 기재된 VH는 서열식별번호:66-75에 제시된 아미노산 서열 중 하나에 직접적으로 또는 개재 아미노산(들) (예를 들어, G-S 링커 서열)을 통해 연결된다. 일부 예에서, 상기 기재된 VH는 서열식별번호:77 내에 0-10개의 아미노산 치환 (예를 들어, 반감기를 증가시키고/거나 이펙터 기능을 감소시키는 치환)을 갖는 아미노산 서열에 직접적으로 또는 개재 아미노산(들) (예를 들어, G-S 링커 서열)을 통해 연결된다. 특정 경우에서, 상기 기재된 VH는 IgG1 (예를 들어, 인간 IgG1, 예를 들어, IgG1m3 알로타입) 및 IgG3 힌지 영역 (예를 들어, WO2017/096221에 기재된 "개방" IgG3 힌지 변이체 "IgG3 C-")으로부터의 CH1 도메인, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하는 아미노산 서열에 직접적으로 또는 개재 아미노산(들) (예를 들어, G-S 링커 서열)을 통해 연결된다.
상기 두 측면의 일부 실시양태에서, 제1 항원-결합 도메인은 서열식별번호:9에 제시된 아미노산 서열을 갖는 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하고, 서열식별번호:10에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 항원-결합 도메인은 서열식별번호:9에 제시된 아미노산 서열을 갖는 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하고, 서열식별번호:40에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 항원-결합 도메인은 서열식별번호:9에 제시된 아미노산 서열을 갖는 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하고, 서열식별번호:78에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 항원-결합 도메인은 서열식별번호:9에 제시된 아미노산 서열을 갖는 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하고, 서열식별번호:79에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 항원-결합 도메인은 서열식별번호:9에 제시된 아미노산 서열을 갖는 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하고, 서열식별번호:80에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다.
특정 실시양태에서, 다중특이적 항체는 이중특이적 항체이다.
특정 실시양태에서, 제2 항원-결합 도메인은 인간 CD3에 결합하고, 제2 VH 및 제2 VL을 포함한다. 제2 VH는 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VH-CDR1; 서열식별번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VH-CDR2; 및 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VH-CDR3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 VL은 서열식별번호:14의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VL-CDR1; 서열식별번호:15의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VL-CDR2; 및 서열식별번호:16의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VL-CDR3을 포함한다.
특정 실시양태에서, 제2 항원-결합 도메인은 인간 CD3에 결합하고, 제2 VH 및 제2 VL을 포함하며, 제2 VH는 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VH-CDR1; 서열식별번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VH-CDR2; 및 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VH-CDR3을 포함하고; 제2 VL은 서열식별번호:14의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VL-CDR1; 서열식별번호:15의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VL-CDR2; 및 서열식별번호:16의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VL-CDR3을 포함한다.
특정 실시양태에서, 제2 항원-결합 도메인은 인간 CD89에 결합하고, 제2 VH 및 제2 VL을 포함한다. 제2 VH는 서열식별번호:98의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VH-CDR1; 서열식별번호:99의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VH-CDR2; 및 서열식별번호:100의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VH-CDR3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 VL은 서열식별번호:103의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VL-CDR1; 서열식별번호:104의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VL-CDR2; 및 서열식별번호:105의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VL-CDR3을 포함한다.
특정 실시양태에서, 제2 항원-결합 도메인은 인간 CD89에 결합하고, 제2 VH 및 제2 VL을 포함하며, 제2 VH는 서열식별번호:98의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VH-CDR1; 서열식별번호:99의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VH-CDR2; 및 서열식별번호:100의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VH-CDR3을 포함하고; 제2 VL은 서열식별번호:103의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VL-CDR1; 서열식별번호:104의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VL-CDR2; 및 서열식별번호:105의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VL-CDR3을 포함한다.
일부 실시양태에서, 제2 VH는 서열식별번호:17과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 VL은 서열식별번호:18과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
한 실시양태에서, 제2 VH는 서열식별번호:17에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 제2 VL은 서열식별번호:18에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 제2 VH는 서열식별번호:96과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 VL은 서열식별번호:101과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
한 실시양태에서, 제2 VH는 서열식별번호:96에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 제2 VL은 서열식별번호:101에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 제2 항원-결합 도메인은 서열식별번호:19와 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 항원-결합 도메인은 서열식별번호:20과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다.
특정 실시양태에서, 제2 항원-결합 도메인은 서열식별번호:97과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 항원-결합 도메인은 서열식별번호:102와 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 카파-람다 바디, 이중-친화도 재표적화 분자 (DART), 놉-인-홀(knob-in-hole), 가닥-교환 조작된 도메인 바디 (SEEDbody), 이중특이적 T 세포 인게이저 (BiTe), 크로스맙(CrossMab), Fcab, 디아바디, 탠덤(Tandem) 디아바디 (TandAb), 또는 듀오바디(DuoBody)®이다.
특정 실시양태에서, 제1 항원-결합 도메인은 인간 IgG1, 인간 IgG2, 인간 IgG3, 인간 IgG4, 인간 IgA1 및 인간 IgA2로 이루어진 군으로부터 선택된 제1 중쇄 불변 영역에 직접적으로 또는 개재 아미노산 서열을 통해 융합된다. 일부 예에서, 제1 항원-결합 도메인은 제1 중쇄 불변 영역에 직접적으로 또는 개재 아미노산 서열을 통해 융합되고, 불변 영역은 IgG1 힌지 영역이 IgG3 힌지 영역 (예를 들어, WO2017/096221에 기재된 "개방" IgG3 힌지 변이체 "IgG3 C-")으로 대체된 것을 제외하고는 인간 IgG1 (예를 들어, IgG1m3 알로타입)로부터의 것이다. 일부 실시양태에서, 제2 항원-결합 도메인은 인간 IgG1, 인간 IgG2, 인간 IgG3, 인간 IgG4, 인간 IgA1 및 인간 IgA2로 이루어진 군으로부터 선택된 제2 중쇄 불변 영역에 직접적으로 또는 개재 아미노산 서열을 통해 융합된다. 일부 예에서, 제2 항원-결합 도메인은 제2 중쇄 불변 영역에 직접적으로 또는 개재 아미노산 서열을 통해 융합되고, 불변 영역은 IgG1 힌지 영역이 IgG3 힌지 영역 (예를 들어, WO2017/096221에 기재된 "개방" IgG3 힌지 변이체 "IgG3 C-")으로 대체된 것을 제외하고는 인간 IgG1 (예를 들어, IgG1m3 알로타입)로부터의 것이다.
구체적인 실시양태에서, 제1 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1이고, 제2 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1이다.
일부 실시양태에서, 제1 항원-결합 도메인은 인간 람다 불변 영역인 제1 경쇄 불변 영역에 직접적으로 또는 개재 아미노산 서열을 통해 융합된다. 다른 실시양태에서, 제2 항원-결합 도메인은 인간 람다 불변 영역인 제2 경쇄 불변 영역에 직접적으로 또는 개재 아미노산 서열을 통해 융합된다.
한 실시양태에서, 제1 중쇄 불변 영역은 F405L, F405A, F405D, F405E, F405H, F405I, F405K, F405M, F405N, F405Q, F405S, F405T, F405V, F405W 또는 F405Y 아미노산 돌연변이 중 하나를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함한다. 한 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 F405L 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함한다. 또 다른 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 F405A 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함한다. 또 다른 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 F405D 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함한다. 또 다른 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 F405E 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함한다. 또 다른 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 F405H 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함한다. 또 다른 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 F405I 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함한다. 또 다른 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 F405K 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함한다. 또 다른 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 F405M 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함한다. 또 다른 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 F405N 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함한다. 또 다른 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 F405Q 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함한다. 또 다른 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 F405S 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함한다. 또 다른 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 F405T 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함한다. 또 다른 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 F405V 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함한다. 또 다른 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 F405W 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함한다. 또 다른 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 F405Y 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 제1 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 F405L, F405A, F405D, F405E, F405H, F405I, F405K, F405M, F405N, F405Q, F405S, F405T, F405V, F405W 또는 F405Y 아미노산 돌연변이 중 하나를 포함한다. 한 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 F405L 아미노산 돌연변이를 포함한다. 또 다른 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 F405A 아미노산 돌연변이를 포함한다. 한 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 F405D 아미노산 돌연변이를 포함한다. 한 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 F405E 아미노산 돌연변이를 포함한다. 한 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 F405H 아미노산 돌연변이를 포함한다. 한 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 F405I 아미노산 돌연변이를 포함한다. 한 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 F405K 아미노산 돌연변이를 포함한다. 한 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 F405M 아미노산 돌연변이를 포함한다. 한 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 F405N 아미노산 돌연변이를 포함한다. 한 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 F405Q 아미노산 돌연변이를 포함한다. 한 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 F405S 아미노산 돌연변이를 포함한다. 한 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 F405T 아미노산 돌연변이를 포함한다. 한 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 F405V 아미노산 돌연변이를 포함한다. 한 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 F405W 아미노산 돌연변이를 포함한다. 한 예에서, 제1 중쇄 불변 영역은 K409R 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 중쇄 불변 영역은 F405Y 아미노산 돌연변이를 포함한다.
특정 실시양태에서, 제1 중쇄 불변 영역 및 제2 중쇄 불변 영역의 이펙터 기능은 (예를 들어, 야생형 IgG1 Fc를 갖는 항체의 이펙터 기능에 비해) 감소되거나 또는 제거된다.
일부 실시양태에서, 제1 중쇄 불변 영역은 N297A 돌연변이 또는 N297Q 돌연변이를 포함하는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함하고/거나 제2 중쇄 불변 영역은 N297A 돌연변이 또는 N297Q 돌연변이를 포함하는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 gp120 및 인간 CD3에 결합하는 이중특이적 항체를 제공한다. 이중특이적 항체는 gp120에 결합하는 제1 아암을 포함한다. 제1 아암은 F405L, F405A, F405D, F405E, F405H, F405I, F405K, F405M, F405N, F405Q, F405S, F405T, F405V, F405W 또는 F405Y 아미노산 돌연변이 중 하나, 또는 K409R 돌연변이인 제1 돌연변이를 포함하는 제1 중쇄 불변 영역; 및 서열식별번호:1의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1; 서열식별번호:2의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2; 및 서열식별번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 포함하는 제1 VH를 포함하는 제1 중쇄를 포함한다. 한 예에서, 제1 아암은 F405L 또는 K409R 돌연변이 중 하나인 제1 돌연변이를 포함하는 제1 중쇄 불변 영역을 포함하는 제1 중쇄를 포함한다. 제1 아암은 또한 제1 경쇄 불변 영역; 및 서열식별번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR1; 서열식별번호:5의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR2; 및 서열식별번호:6의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR3을 포함하는 제1 VL을 포함하는 제1 경쇄를 포함한다. 이중특이적 항체는 CD3 (예를 들어, 인간 CD3 (예를 들어, 인간 CD3ε)에 결합하는 제2 아암을 포함한다. 제2 아암은 F405L, F405A, F405D, F405E, F405H, F405I, F405K, F405M, F405N, F405Q, F405S, F405T, F405V, F405W 또는 F405Y 아미노산 돌연변이 중 하나, 또는 K409R 돌연변이인 제2 돌연변이를 포함하는 제2 중쇄 불변 영역; 및 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1; 서열식별번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2; 및 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 포함하는 제2 VH를 포함하는 제2 중쇄를 포함한다. 한 예에서, 제2 아암은 F405L 또는 K409R 돌연변이 중 하나인 제2 돌연변이를 포함하는 제2 중쇄 불변 영역을 포함하는 제2 중쇄를 포함한다. 제2 아암은 제2 경쇄 불변 영역; 및 서열식별번호:14의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR1; 서열식별번호:15의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR2; 및 서열식별번호:16의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR3을 포함하는 제2 VL을 포함하는 제2 경쇄를 포함한다. 제1 돌연변이 및 제2 돌연변이는 상이한 돌연변이이다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 gp120 및 인간 CD89에 결합하는 이중특이적 항체를 제공한다. 이중특이적 항체는 gp120에 결합하는 제1 아암을 포함한다. 제1 아암은 F405L, F405A, F405D, F405E, F405H, F405I, F405K, F405M, F405N, F405Q, F405S, F405T, F405V, F405W 또는 F405Y 아미노산 돌연변이 중 하나, 또는 K409R 돌연변이인 제1 돌연변이를 포함하는 제1 중쇄 불변 영역; 및 서열식별번호:1의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1; 서열식별번호:2의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2; 및 서열식별번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 포함하는 제1 VH를 포함하는 제1 중쇄를 포함한다. 한 예에서, 제1 아암은 F405L 또는 K409R 돌연변이 중 하나인 제1 돌연변이를 포함하는 제1 중쇄 불변 영역을 포함하는 제1 중쇄를 포함한다. 제1 아암은 또한 제1 경쇄 불변 영역; 및 서열식별번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR1; 서열식별번호:5의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR2; 및 서열식별번호:6의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR3을 포함하는 제1 VL을 포함하는 제1 경쇄를 포함한다. 이중특이적 항체는 CD89 (예를 들어, 인간 CD89)에 결합하는 제2 아암을 포함한다. 제2 아암은 F405L, F405A, F405D, F405E, F405H, F405I, F405K, F405M, F405N, F405Q, F405S, F405T, F405V, F405W 또는 F405Y 아미노산 돌연변이 중 하나, 또는 K409R 돌연변이인 제2 돌연변이를 포함하는 제2 중쇄 불변 영역; 및 서열식별번호:98의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1; 서열식별번호:99의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2; 및 서열식별번호:100의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 포함하는 제2 VH를 포함하는 제2 중쇄를 포함한다. 한 예에서, 제2 아암은 F405L 또는 K409R 돌연변이 중 하나인 제2 돌연변이를 포함하는 제2 중쇄 불변 영역을 포함하는 제2 중쇄를 포함한다. 제2 아암은 제2 경쇄 불변 영역; 및 서열식별번호:103의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR1, 서열식별번호:104의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR2; 및 서열식별번호:105의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR3을 포함하는 제2 VL을 포함하는 제2 경쇄를 포함한다. 제1 돌연변이 및 제2 돌연변이는 상이한 돌연변이이다.
상기 두 측면의 특정 실시양태에서, 항-gp120 항체 아암은 서열식별번호: 21에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 단백질에 결합한다. 일부 예에서, 항-gp120 항체 아암은 서열식별번호: 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 단백질에 결합한다. 일부 예에서, 항-gp120 항체 아암은 유리 HIV-1 바이러스에 결합한다. 일부 예에서, 항-gp120 항체는 HIV-1 감염된 세포에 결합한다. 일부 예에서, 항-gp120 항체 아암은 유리 HIV-1 바이러스 및 HIV-1 감염된 세포 둘 다에 결합한다. 특정 경우에서, 항-gp120 항체는 HIV-1의 적어도 2가지 상이한 균주 (예를 들어, 그룹 M, 그룹 N, 그룹 O, 또는 그룹 P)에 결합한다. 한 실시양태에서, 항-gp120 항체 아암은 pWITO.c/2474 (수탁 번호 JN944948 및 NIH AIDS 시약 프로그램 카탈로그 번호 11739)에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 항-gp120 항체 아암은 pCH058.c/2960 (수탁 번호 JN944940 및 NIH AIDS 시약 프로그램 카탈로그 번호 700010058)에 결합한다.
일부 실시양태에서, 제1 VH는 서열식별번호:7과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 VL은 서열식별번호:8과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 이들 실시양태의 특정 예에서, 서열식별번호:8의 위치 66, 67, 67A 및 67C (카바트 넘버링) 중 하나 이상에서의 아미노산은 변경되지 않는다. 특정 실시양태에서, 제1 VL은 서열식별번호:81과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 VL은 서열식별번호:82와 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 VL은 서열식별번호:83과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 VL은 서열식별번호:84와 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 예에서, 상기 기재된 VH는 서열식별번호:77 내에 1-10개의 아미노산 치환 (예를 들어, 반감기를 증가시키고/거나 이펙터 기능을 감소시키는 치환)을 갖는 아미노산 서열에 직접적으로 또는 개재 아미노산(들) (예를 들어, G-S 링커 서열)을 통해 연결된다.
일부 실시양태에서, 제1 중쇄는 서열식별번호:9와 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 경쇄는 서열식별번호:10과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 경쇄는 서열식별번호:40과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 경쇄는 서열식별번호:78과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 경쇄는 서열식별번호:79와 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 경쇄는 서열식별번호:80과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 제2 VH는 서열식별번호:17과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 VL은 서열식별번호:18과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 제2 VH는 서열식별번호:96과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 VL은 서열식별번호:101과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 제2 중쇄는 서열식별번호:19와 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제2 경쇄는 서열식별번호:20과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 제2 중쇄는 서열식별번호:97과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제2 경쇄는 서열식별번호:102와 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
한 실시양태에서, 제1 VH는 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하고 제1 VL은 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 VH는 서열식별번호:17의 아미노산 서열을 포함하고 제2 VL은 서열식별번호:18의 아미노산 서열을 포함한다.
한 실시양태에서, 제1 VH는 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하고 제1 VL은 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 VH는 서열식별번호:96의 아미노산 서열을 포함하고 제2 VL은 서열식별번호:101의 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 제1 VH는 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하고 제1 VL은 서열식별번호:81의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 VH는 서열식별번호:17의 아미노산 서열을 포함하고 제2 VL은 서열식별번호:18의 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 제1 VH는 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하고 제1 VL은 서열식별번호:81의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 VH는 서열식별번호:96의 아미노산 서열을 포함하고 제2 VL은 서열식별번호:101의 아미노산 서열을 포함한다.
추가의 실시양태에서, 제1 VH는 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하고 제1 VL은 서열식별번호:82의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 VH는 서열식별번호:17의 아미노산 서열을 포함하고 제2 VL은 서열식별번호:18의 아미노산 서열을 포함한다.
추가의 실시양태에서, 제1 VH는 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하고 제1 VL은 서열식별번호:82의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 VH는 서열식별번호:96의 아미노산 서열을 포함하고 제2 VL은 서열식별번호:101의 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 제1 VH는 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하고 제1 VL은 서열식별번호:83의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 VH는 서열식별번호:17의 아미노산 서열을 포함하고 제2 VL은 서열식별번호:18의 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 제1 VH는 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하고 제1 VL은 서열식별번호:83의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 VH는 서열식별번호:96의 아미노산 서열을 포함하고 제2 VL은 서열식별번호:101의 아미노산 서열을 포함한다.
여전히 또 다른 실시양태에서, 제1 VH는 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하고 제1 VL은 서열식별번호:84의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 VH는 서열식별번호:17의 아미노산 서열을 포함하고 제2 VL은 서열식별번호:18의 아미노산 서열을 포함한다.
여전히 또 다른 실시양태에서, 제1 VH는 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하고 제1 VL은 서열식별번호:84의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 VH는 서열식별번호:96의 아미노산 서열을 포함하고 제2 VL은 서열식별번호:101의 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 제1 중쇄는 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 포함하고 제1 경쇄는 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 중쇄는 서열식별번호:19의 아미노산 서열을 포함하고 제2 경쇄는 서열식별번호:20의 아미노산 서열을 포함한다.
여전히 또 다른 실시양태에서, 제1 VH는 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하고 제1 VL은 서열식별번호:84의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 VH는 서열식별번호:96의 아미노산 서열을 포함하고 제2 VL은 서열식별번호:101의 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 제1 중쇄는 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 포함하고 제1 경쇄는 서열식별번호:40의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 중쇄는 서열식별번호:19의 아미노산 서열을 포함하고 제2 경쇄는 서열식별번호:20의 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 제1 중쇄는 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 포함하고 제1 경쇄는 서열식별번호:40의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 중쇄는 서열식별번호:97의 아미노산 서열을 포함하고 제2 경쇄는 서열식별번호:102의 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 제1 중쇄는 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 포함하고 제1 경쇄는 서열식별번호:78의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 중쇄는 서열식별번호:19의 아미노산 서열을 포함하고 제2 경쇄는 서열식별번호:20의 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 제1 중쇄는 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 포함하고 제1 경쇄는 서열식별번호:78의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 중쇄는 서열식별번호:97의 아미노산 서열을 포함하고 제2 경쇄는 서열식별번호:102의 아미노산 서열을 포함한다.
여전히 또 다른 실시양태에서, 제1 중쇄는 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 포함하고 제1 경쇄는 서열식별번호:79의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 중쇄는 서열식별번호:19의 아미노산 서열을 포함하고 제2 경쇄는 서열식별번호:20의 아미노산 서열을 포함한다.
여전히 또 다른 실시양태에서, 제1 중쇄는 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 포함하고 제1 경쇄는 서열식별번호:79의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 중쇄는 서열식별번호:97의 아미노산 서열을 포함하고 제2 경쇄는 서열식별번호:102의 아미노산 서열을 포함한다.
추가의 실시양태에서, 제1 중쇄는 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 포함하고 제1 경쇄는 서열식별번호:80의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 중쇄는 서열식별번호:19의 아미노산 서열을 포함하고 제2 경쇄는 서열식별번호:20의 아미노산 서열을 포함한다.
추가의 실시양태에서, 제1 중쇄는 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 포함하고 제1 경쇄는 서열식별번호:80의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 중쇄는 서열식별번호:97의 아미노산 서열을 포함하고 제2 경쇄는 서열식별번호:102의 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 상기 모든 측면 및 실시양태 중에서, 항체는 세포독성제, 방사성 동위원소, 치료제, 항바이러스제, 또는 검출가능한 표지를 추가로 포함한다.
추가의 측면에서, 본 개시내용은 상기 개시된 항체의 제1 항원-결합 도메인의 제1 경쇄 가변 영역 또는 제1 경쇄를 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 조성물을 제공한다. 또 다른 측면에서, 본 개시내용은 상기 개시된 항체의 제1 항원-결합 도메인의 제1 중쇄 가변 영역 또는 제1 중쇄를 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 조성물을 제공한다. 여전히 또 다른 측면에서, 본 개시내용은 상기 개시된 항체의 제2 항원-결합 도메인의 제1 경쇄 가변 영역 또는 제1 경쇄를 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 조성물을 제공한다. 여전히 또 다른 측면에서, 본 개시내용은 상기 개시된 항체의 제2 항원-결합 도메인의 제2 중쇄 가변 영역 또는 제2 중쇄를 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 조성물을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 상기 기재된 핵산 중 하나 이상을 포함하는 숙주 세포를 특징으로 한다. 특정 예에서, 숙주 세포는 이중특이적 항체의 4개의 쇄 모두를 포함한다. 다른 예에서, 숙주 세포는 이중특이적 항체의 gp120-결합 아암을 코딩하는 핵산을 포함한다. 다른 예에서, 숙주 세포는 이중특이적 항체의 CD3-결합 아암을 코딩하는 핵산을 포함한다. 여전히 다른 예에서, 숙주 세포는 이중특이적 항체의 CD89-결합 아암을 코딩하는 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 조직 배양물 중 이. 콜라이(E. coli), 슈도모나스(Pseudomonas), 바실루스(Bacillus), 스트렙토마이세스(Streptomyces), 효모 (예를 들어, 피키아(Pichia), 사카로마이세스(Saccharomyces)), CHO, YB/20, NS0, PER-C6, HEK-293T, NIH-3T3, HeLa, BHK, Hep G2, SP2/0, R1.1, B-W, L-M, COS 1, COS 7, BSC1, BSC40, BMT10 세포, 식물 세포, 곤충 세포 및 인간 세포로 이루어진 군으로부터 선택된다.
여전히 또 다른 측면에서, gp120 및 인간 CD3에 결합하는 항체 (또는 gp120 및 인간 CD89에 결합하는 항체)를 생성하는 방법을 특징으로 한다. 상기 방법은 핵산 분자가 발현되고 항체가 생성되도록 하는 조건하에서 상기 기재된 숙주 세포를 배양하는 것을 포함한다.
또 다른 측면에서, 샘플 중에서 gp120 및 CD3 (또는 CD89)을 발현하는 세포를 검출하는 방법이 개시된다. 상기 방법은 샘플을 본원에 기재된 항체와 접촉시키는 것을 수반한다.
여전히 또 다른 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 항체 및 제약상 허용가능한 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
추가의 실시양태에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 항체 및 a) 검출 시약, b) gp120 및/또는 CD3 및/또는 CD89 항원, c) 인간 투여를 위한 사용 또는 판매에 대한 승인을 반영하는 통지, 또는 d) 이들의 조합물을 포함하는 키트를 특징으로 한다.
또한, 인간 면역결핍 바이러스 감염의 치료 또는 예방이 필요한 인간 대상체에서 인간 면역결핍 바이러스 감염을 치료하거나 또는 예방하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 인간 대상체에게 본원에 개시된 항체 또는 제약 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 수반한다. 일부 실시양태에서, 인간 면역결핍 바이러스 감염은 HIV-1 감염이다. 일부 실시양태에서, 환자에서 바이러스는 N332 PNG 양성인 Env를 갖는다. 특정 실시양태에서, HIV는 클레이드 B, G, A, AC 또는 AE를 갖는다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 gp120에 결합하는 항체를 특징으로 한다. 이 항체는 VH 및 VL을 포함한다. VH는 서열식별번호:1의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1, 서열식별번호:2의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2, 서열식별번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 포함한다. VL은 서열식별번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR1, 서열식별번호:5의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR2, 및 서열식별번호:6의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR3을 포함한다. 또한, VL은 위치 67A (카바트 넘버링)에서 티로신, 페닐알라닌 또는 트레오닌, 또는 위치 67 (카바트 넘버링)에서 글리신을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-gp120 항체는 서열식별번호: 21에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 단백질에 결합한다. 일부 예에서, 항-gp120 항체는 서열식별번호: 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 단백질에 결합한다. 일부 예에서, 항-gp120 항체는 유리 HIV-1 바이러스에 결합한다. 일부 예에서, 항-gp120 항체는 HIV-1 감염된 세포에 결합한다. 일부 예에서, 항-gp120 항체는 유리 HIV-1 바이러스 및 HIV-1 감염된 세포 둘 다에 결합한다. 특정 경우에서, 항-gp120 항체는 HIV-1의 적어도 2가지 상이한 균주 (예를 들어, 그룹 M, 그룹 N, 그룹 O, 또는 그룹 P)에 결합한다. 한 실시양태에서, 항-gp120 항체는 pWITO.c/2474 (수탁 번호 JN944948 및 NIH AIDS 시약 프로그램 카탈로그 번호 11739)에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 항-gp120 항체는 pCH058.c/2960 (수탁 번호 JN944940 및 NIH AIDS 시약 프로그램 카탈로그 번호 700010058)에 결합한다.
일부 실시양태에서, VH는 서열식별번호:7과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, VH는 항체의 이펙터 기능을 감소시키고/거나 약동학적 반감기를 증가시키는 0-10 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10) 개의 아미노산 치환을 함유하는 인간 IgG1 불변 영역 (예를 들어, IgG1m3 알로타입)에 직접적으로 또는 개재 아미노산 서열 (예를 들어, G-S 링커)을 통해 연결된다. 일부 예에서, 항체는 IgG3 항체로부터의 힌지 영역 (예를 들어, WO 2017/096221에 개시된 "개방" IgG3C- 힌지 변이체) 및 인간 IgG1 항체로부터의 CH1, CH2 및 CH3 영역 (예를 들어, IgG1m3 알로타입)을 갖는다.
특정 실시양태에서, VL은 서열식별번호:81, 82, 83 또는 84와 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 중쇄는 서열식별번호:9와 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 경쇄는 서열식별번호: 40, 78, 79 또는 80과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
한 실시양태에서, 항체는 서열식별번호:9에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열식별번호:40 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 항체는 서열식별번호:9에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열식별번호:78 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
여전히 또 다른 실시양태에서, 항체는 서열식별번호:9에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열식별번호:79 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 항체는 서열식별번호:9에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열식별번호:80 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 기재된 항체는 세포독성제, 방사성 동위원소, 치료제, 항바이러스제, 또는 검출가능한 표지를 추가로 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 이 측면의 항체 및 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물을 특징으로 한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 이 측면의 항체를 코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 상기 기재된 핵산 또는 핵산들을 포함하는 벡터 또는 벡터들을 제공한다.
여전히 또 다른 측면에서, 본 개시내용은 상기 기재된 벡터 또는 벡터들을 포함하는 숙주 세포를 특징으로 한다.
추가의 측면에서, 본 개시내용은 항-gp120 항체를 생성하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 핵산 또는 핵산들이 발현되고 항체가 생성되는 조건하에서 상기 기재된 숙주 세포를 배양하는 것을 수반한다.
또한, 인간 면역결핍 바이러스 감염의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간 대상체에서 인간 면역결핍 바이러스 감염을 치료하는 방법을 특징으로 한다. 상기 방법은 인간 대상체에게 이 측면의 항체 또는 제약 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인간 면역결핍 바이러스 감염은 HIV-1 감염이다. 일부 실시양태에서, 환자에서 HIV는 N332 PNG 양성인 Env를 갖는다. 특정 실시양태에서, HIV는 클레이트 B, G, A, AC 또는 AE를 갖는다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 gp120에 결합하는 항체 단편을 특징으로 한다. 이 항체 단편은 VH 및 VL을 포함한다. VH는 서열식별번호:1의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1, 서열식별번호:2의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2, 서열식별번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 포함한다. VL은 서열식별번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR1, 서열식별번호:5의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR2, 및 서열식별번호:6의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR3을 포함한다. 또한, VL은 위치 67A (카바트 넘버링)에서 티로신, 페닐알라닌 또는 트레오닌, 또는 위치 67 (카바트 넘버링)에서 글리신을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-gp120 항체 단편은 서열식별번호: 21에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 단백질에 결합한다. 일부 예에서, 항-gp120 항체 단편은 서열식별번호: 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 단백질에 결합한다. 일부 예에서, 항-gp120 항체 단편은 유리 HIV-1 바이러스에 결합한다. 일부 예에서, 항-gp120 항체는 HIV-1 감염된 세포에 결합한다. 일부 예에서, 항-gp120 항체 단편은 유리 HIV-1 바이러스 및 HIV-1 감염된 세포 둘 다에 결합한다. 특정 경우에서, 항-gp120 항체는 HIV-1의 적어도 2가지 상이한 균주 (예를 들어, 그룹 M, 그룹 N, 그룹 O, 또는 그룹 P)에 결합한다. 한 실시양태에서, 항-gp120 항체 단편은 pWITO.c/2474 (수탁 번호 JN944948 및 NIH AIDS 시약 프로그램 카탈로그 번호 11739)에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 항-gp120 항체 단편은 pCH058.c/2960 (수탁 번호 JN944940 및 NIH AIDS 시약 프로그램 카탈로그 번호 700010058)에 결합한다.
일부 실시양태에서, VH는 서열식별번호:7과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, VL은 서열식별번호:81, 82, 83 또는 84와 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체 단편은 Fab, F(ab)2, Fv, scFv, sc(Fv)2, 또는 디아바디이다.
일부 실시양태에서, 상기 기재된 항체 단편은 세포독성제, 방사성 동위원소, 치료제, 항바이러스제, 또는 검출가능한 표지를 추가로 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 이 측면의 항체 단편 및 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물을 특징으로 한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 이 측면의 항체 단편을 코딩하는 핵산 또는 핵산들에 관한 것이다
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 상기 기재된 핵산 또는 핵산들을 포함하는 벡터 또는 벡터들을 제공한다.
여전히 또 다른 측면에서, 본 개시내용은 상기 기재된 벡터 또는 벡터들을 포함하는 숙주 세포를 특징으로 한다.
추가의 측면에서, 본 개시내용은 항-gp120 항체 단편을 생성하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 핵산 또는 핵산들이 발현되고 항체 단편이 생성되는 조건하에서 상기 기재된 숙주 세포를 배양하는 것을 수반한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 HIV의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간 대상체에서 HIV를 치료하거나 또는 예방하는 방법을 특징으로 한다. 상기 방법은 인간 대상체에게 이 측면의 항체 단편 또는 제약 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인간 면역결핍 바이러스 감염은 HIV-1 감염이다. 일부 실시양태에서, 환자에서 HIV는 N332 PNG 양성인 Env를 갖는다. 특정 실시양태에서, HIV는 클레이드 B, G, A, AC 또는 AE를 갖는다.
달리 정의되지 않는다면, 본원에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속한 기술분야의 숙련된 기술자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기재된 것들과 유사하거나 동등한 방법 및 물질이 본 발명의 실시 또는 시험에서 사용될 수 있지만, 예시적인 방법 및 물질이 하기에 기재된다. 본원에서 언급된 모든 공보, 특허 출원, 특허 및 다른 참고문헌은 그들의 전문이 참고로 포함된다. 분쟁이 있는 경우에는, 정의를 비롯하여 본 출원이 우선할 것이다. 물질, 방법 및 예시는 단지 설명을 위한 것이며, 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
본 발명의 다른 특징 및 이점은 하기 상세한 설명 및 청구범위로부터 명백해질 것이다.
본원에 기재된 다중특이적 항체는 인간 면역결핍 바이러스 (HIV) 외피 (Env) 단백질 gp120 (gp120) 및 분화 클러스터 3 (CD3) (예를 들어, CD3ε)에 결합하며, HIV-감염된 세포를 사멸시키는데 효과적이다. 예를 들어, 다중특이적 항체는 2개의 항원-결합 아암을 갖는 이중특이적 항체이며, 이중특이적 항체는 1개의 아암을 이용하여 HIV-감염된 세포 상의 항원 (예를 들어, gp120)에 결합하고, 다른 아암을 이용하여 T 세포 상의 항원 (예를 들어, CD3)에 결합하며, 이는 T 세포 (예를 들어, CD4+ T 세포 및/또는 CD8+ T 세포)를 HIV-감염된 세포에 대해 표적화시켜서 HIV-감염된 세포를 사멸시킬 수 있다. CD3 및 gp120에 결합하는 이중특이적 항체는 CD8+ 및 CD4+ T 세포가 gp120-발현 세포 (예를 들어, HIV-감염된 세포)를 사멸시키도록 재지시할 수 있다. T 세포는 그들의 T 세포 수용체 특이성과 무관하게 HIV-감염된 세포를 사멸시킨다. 한 실시양태에서, 이중특이적 항체는 항-gp120 X 항-CD3 듀오바디®이다. 본 개시내용의 듀오바디는 관련 기술분야에 공지된 다른 이중특이적 플랫폼에 비해 유의한 이점을 갖는다. 예를 들어 DART 플랫폼에 비한 듀오바디® 플랫폼의 주요 이점은, 본원에 개시된 듀오바디가 CD4+ T 세포를 동원하여 표적 세포 (예를 들어, HIV-감염된 세포)를 사멸시킬 수 있다는 것이다. CD4+ T 세포-매개된 사멸은 DART에 의해서는 관찰되지 않는다 (Sloan et al., PLOS Pathogens, 11(11):e1005233. doi:10.1371/journal.ppat.1005233 (2015) 참고). HIV 치료에서의 표적이 또한 CD4+T 세포이기 때문에 이는 유의한 이점을 갖는다. HIV 치료에 대한 활성을 위해 선천적인 이펙터 세포를 필요로 하는 항체를 사용하는 것과 관련된 한가지 우려는, 이펙터 세포가 잠재적으로 감염된 CD4+T 세포가 있는 조직에서는 존재하지 않을 수 있다는 것이며, CD4+T 세포 자체가 이펙터 세포일 수 있는 경우에는 문제가 덜 된다.
HIV-1은 HIV의 주요 패밀리이고, 전세계적으로 모든 감염의 95%를 차지한다. HIV-2는 몇몇 서아프리카 국가에서 주로 볼 수 있다.
HIV 바이러스는 구체적인 그룹 M, N, O 및 P로 나뉘어 지고, 이 중에서 M은 "주요" 그룹이며 전세계적으로 대부분의 HIV/AIDS를 담당한다. 그들의 유전자 서열을 기반으로 하여, 그룹 M은 별개의 지리학적 위치에서 유병률을 갖는 아형 (클레이드로도 지칭됨)으로 추가로 세분된다.
그룹 M "아형" 또는 "클레이드"는 유전자 서열 데이터에 의해 정의된 HIV-1 그룹 M의 아형이다. 그룹 M 아형의 예에는 아형 A-K가 포함된다. 일부 아형은 더욱 치명적이거나 또는 상이한 약물에 대해 내성인 것으로 공지되어 있다. 상이한 아형의 바이러스간의 재조합으로부터 유래된 "순환 재조합 형태" 또는 CRF 또한 있으며, 이들은 각각 번호가 주어진다. 예를 들어, CRF12_BF는 아형 B와 F 사이의 재조합이다. 아형 A는 서아프리카에서 흔하다. 아형 B는 유럽, 미국, 일본, 태국 및 호주에서 우세한 형태이다. 아형 C는 서아프리카, 동아프리카, 인도, 네팔 및 중국 일부에서 우세한 형태이다. 아형 D는 일반적으로 동부 및 중앙 아프리카에서만 볼 수 있다. 아형 E는 비재조합체로서 확인된 적이 전혀 없으며, CRF01_AE로서 아형 A와만 재조합된다. 아형 F는 중앙 아프리카, 남미 및 동유럽에서 확인된 적이 있다. 아형 G (및 CRF02_AG)는 아프리카 및 중앙 유럽에서 확인된 적이 있다. 아형 H는 중앙 아프리카에 제한된다. 아형 I는 이제 CRF04_cpx로 설명되는 균주를 기재하기 위해 원래 사용되였으며, cpx는 몇몇 아형의 "복합" 재조합을 나타낸다. 아형 J는 주로 북부, 중앙 및 서부 아프리카에서 확인되고, 카리브해 아형 K는 콩고 민주 공화국 및 카메론에 제한된다. 이들 아형은 때때로 A1 및 A2 또는 F1 및 F2와 같은 하위-아형으로 추가로 세분된다. 2015년도에, 아형 D 프로테아제에 의한 아형 A, 아형 D 및 아형 G의 재조합체인 균주 CRF19가 쿠바에서 AIDS로의 급속한 진행과 강력하게 연관된 것으로 확인되었다.
본 개시내용은 그 중에서도 HIV-감염된 세포의 표면 상에서 gp120 폴리펩티드를 표적화하는 중화 항체 (예를 들어, 광범위 중화 Ab)를 제공한다. 바이러스 외피 단백질에 대한 중화 항체는 취약한 세포의 감염을 차단시킴으로써 HIV-1 노출에 대한 적응성 면역 방어를 제공한다. 광범위 중화는, 항체가 상이한 클레이드로부터의 HIV-1 분리주를 중화시킬 수 있음을 나타낸다. 따라서, 본 개시내용에 포함되는 항체는 교차-클레이드 결합 활성을 갖는다.
gp120
외피 당단백질 gp120 (또는 gp120)은 HIV의 외부 층의 일부분인 120 kDa 당단백질이다. 이는 함께 연결되고 gp41 단백질에 의해 막에 고정된 gp120의 3개의 분자로 이루어진 바이러스 막 스파이크로서 제시된다. Gp120은 세포 표면 수용체와의 상호작용을 통해 숙주 세포로의 HIV 진입을 용이하게 하기 때문에 바이러스 감염에 대해 필수적이다. 이들 수용체에는 DC-SIGN, 헤파란 술페이트 프로테오글리칸, 및 CD4 수용체가 포함된다. 헬퍼 T-세포 상의 CD4와의 결합은 바이러스와 숙주 세포 막이 융합하게 만드는 gp120 및 gp41에서의 형태적 변화 케스케이드의 시작을 유도한다.
Gp120은 HIV env 유전자에 의해 코딩된다. env 유전자는 대략 850개 아미노산 유전자 생성물을 코딩한다. 일차 env 생성물은 단백질 gp160이며, 이는 세포 프로테아제 푸린에 의해 소포체에서 gp120 (약 480 아미노산) 및 gp41 (약 345 아미노산)로 절단된다.
HIV 클론 WITO의 예시적인 gp160 폴리펩티드의 아미노산 서열이 하기에 제공된다 (V3 초가변 루프는 굵은 글씨이고, N332 잠재적인 N-연결된 글리코실화 부위는 밑줄 친 굵은 글씨임):
Figure pct00001
예시적인 gp120 폴리펩티드의 아미노산 서열이 하기에 제공된다:
Figure pct00002
또 다른 예시적인 gp120 폴리펩티드의 아미노산 서열 (www.bioafrica.net/proteomics/ENV-GP120prot.html 참고)은 하기에 제공된다:
Figure pct00003
독립적인 인간 면역결핍 바이러스 유형 1 (HIV-1) 분리주에서의 게놈 다양성은, 동일한 환자로부터의 순차적 분리주에서는 더 적은 정도로, 심지어 단일 환자 분리주 내에서도 HIV-1의 널리 공지된 특징이다. 이러한 서열 이종성은 게놈에 걸쳐 분포되어 있고, 대부분의 이종성은 env 유전자에 위치한다. 몇몇 상이한 분리주로부터 예측된 아미노산 서열의 비교는, 서열 이종성이 표면 당단백질인 gp120의 5개의 가변 영역 (V1 내지 V5로 지정됨)에서 클러스터화됨을 보여주었다. V3 영역은 비록 35개 아미노산 길이이지만, 상당한 서열 가변성을 나타낸다. 흥미롭게도, 이러한 가변성에도 불구하고, V3 영역은 CD4+ 세포와의 상호작용을 매개하는 결정인자를 포함한다. gp120 가변성에서의 증가는 높은 수준의 바이러스 복제를 초래하고, 이는 다양한 HIV-1 변이체에 의해 감염된 개체에서 바이러스 적응도(fitness)의 개선을 시사한다. 잠재적인 N-연결된 글리코실화 부위 (PNGS)에서의 가변성 또한 증가된 바이러스 적응도를 초래한다. PNGS는 장쇄 탄수화물과 gp120의 고가변 영역의 결합을 가능하게 한다. 따라서, env에서 PNGS의 수는 중화 항체에 대한 더 많은 또는 더 적은 민감도를 제공함으로써 바이러스 적응도에 영향을 미칠 수 있다.
gp120의 V3 영역의 콘센서스 서열 (Milich et al., J Virol., 67(9):5623-5634 (1993)이 하기에 제공된다:
Figure pct00004
항-gp120 항체
본 개시내용은 항-gp120 항체를 특징으로 한다. 특정 실시양태에서, 이들 항체는 세포 표면 상에서 발현된 HIV-1 항원에 결합하며, 감염된 세포를 제거하거나 또는 사멸시킨다.
특정 실시양태에서, 이들 항체는 HIV-1을 표적화하는 중화 항체 (예를 들어, 모노클로날)이다. "중화 항체"는 숙주에서 및/또는 시험관내 표적 세포에서 HIV가 감염을 개시하고/거나 영속시키는 능력을 중화시킬 수 있는 것이다. 본 개시내용은 중화 모노클로날 인간 항체를 제공하며, 항체는 HIV로부터의 항원, 예를 들어, gp120 폴리펩티드를 인식한다. 특정 실시양태에서, "중화 항체"는 >1.5 또는 >2.0의 중화 지수로 HIV-1 바이러스, 예를 들어, SF162 및/또는 JR-CSF의 진입을 억제할 수 있다 (Kostrikis LG et al., J. Virol.,70(1): 445-458 (1996)).
일부 실시양태에서, 이들 항체는 HIV-1을 표적으로 하는 광범위 중화 항체 (예를 들어, 모노클로날)이다. "광범위 중화 항체"란 중화 검정에서 1종 초과의 HIV-1 바이러스 종 (다양한 클레이드로부터 및 클레이드 내의 상이한 균주로부터)을 중화시키는 항체를 의미한다. 광범위 중화 항체는 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 그 초과의 상이한 HIV-1 균주를 중화시킬 수 있고, 상기 균주는 동일한 또는 상이한 클레이드에 속한다. 특별한 실시양태에서, 광범위 중화 항체는 적어도 2, 3, 4, 5 또는 6종의 상이한 클레이드에 속하는 다중 HIV-1 종을 중화시킬 수 있다. 특정 실시양태에서, 중화 검정에서 투입 바이러스의 약 50%를 중화시키기 위한 항체의 억제 농도는 약 0.0001 ㎍/ml 미만, 약 0.001 ㎍/ml 미만, 약 0.01 ㎍/ml 미만, 약 0.1 ㎍/ml 미만, 약 0.5 ㎍/ml 미만, 약 1.0 ㎍/ml 미만, 약 5 ㎍/ml 미만, 약 10 ㎍/ml 미만, 약 25 ㎍/ml 미만, 약 50 ㎍/ml 미만, 또는 약 100 ㎍/ml 미만일 수 있다.
한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 PCT 출원 공개 번호 WO 2012/030904에서 PGT-121 LO6으로 기재된 항체에 관한 것이다. 하기 표 1은 PGT-121 LO6 항체에 대한 관련 서열 정보를 제공한다.
표 1
Figure pct00005
Figure pct00006
PGT-121 LO6 항체, 즉, PGT-122와 크게 관련이 있는 항체의 결정 구조 및 실험 분석은, PGT122 또한 항원에 결합하기 위해 (CDR과 함께) CDR 외부에 있는 아미노산 잔기를 이용한다는 것을 밝혀 내었다. 예를 들어, 이 항체는 항원과 접촉하는 프레임워크 영역에서 추가의 영역을 갖는 것으로 보인다 (예를 들어, Experimental Validation for PGT121 and related antibodies: Sok et al., PLOS Pathogens, 9, e1003754 (2013) 참고). Env 바이러스 항원에 결합된 PGT122의 고해상도 구조가 결정되었다 (예를 들어, Julien J.P. et al., Science, 342, 14777-14783 (2013), 및 Pancera, M. et al., Nature, 514, 455-461 (2014) 참고). PGT121의 구조는 [Julien JP et al., PLOS Pathogens 9, e1003342 (2013)] 및 [Mouquet H et al., PNAS, 109, E3268-E3277 (2012)]에 기재되어 있다. PGT122의 구조는 [Julien JP et al., PLOS Pathogens 9, e1003342 (2013), PDB ID 4JY5]에 기재되어 있고; PGT123의 구조는 [Julien JP et al., PLOS Pathogens 9, e1003342 (2013)]에 기재되어 있다. PGT122 및 PGT123 항체는 PGT121 항체와 밀접하게 관련이 있어서, PGT121, PGT122 및 PGT123 구조에 대한 지식과 함께 PGT122/Env 구조를 이용하여 Env에 결합된 PGT121의 구조를 매우 정확하게 모델링하고, Env와 결합하는 것과 관련된 PGT121의 잔기를 높은 신뢰도로 예측할 수 있다. PGT122 및 PGT122/Env 구조에 대한 유사성을 기반으로 하여 gp120 항원과 접촉하는 PGT121 LO6 항체의 예측된 잔기가 하기에 제공되며, 프레임워크 잔기는 굵은 글씨로 나타내었다 (카바트 넘버링):
VH (카바트 넘버링):
33, 56, 58, 99, 100, 100A, 100B, 100C, 100D, 100E, 100G, 100I, 100J, 100K, 100L; 및
VL (카바트 넘버링):
28, 29, 30, 50, 51, 52, 66, 67, 67A, 67C, 91, 92, 93, 94, 95, 95A, 95B.
PGT-121 LO6 항체는 항원의 여러 상이한 변이체, 예를 들어, 상이한 바이러스 균주에 결합하는 것으로 확인되었고, 이들은 상기 열거된 것들 이외의 미지의 아미노산 위치에서 상기 항체와 접촉할 수 있다. 상이한 바이러스 균주는 상이한 Env (즉, 항원) 서열 및 상이한 글리코실화 패턴을 가지며, 심지어 단일 Env 서열도 이종성 글리코실화 패턴을 가질 수 있으며, 이는 상이한 HIV-1 변이체의 Env 단백질 또는 심지어 동일한 Env 단백질 상의 상이한 글리코실화 패턴을 인식하기 위해 광범위 결합 또는 중화 항체를 필요로 한다. 예를 들어, PGT121의 에피토프는 Env V3 루프, 특히 위치 N332에서 N-연결된 글리칸으로 구성된다. V3 루프는 세포 향성(cellular tropism) 및 바이러스 클레이드의 주요 결정인자이다. 다중 클레이드의 117가지 CCR5-향성 바이러스 중에서, N332 글리칸을 코딩하는 바이러스 DNA 서열에서 잠재적인 N-연결된 글리코실화 (PNG) 모티프의 존재는 클레이드 B, G, A, AC 및 AE의 바이러스 중에서 PGT121에 의한 중화에 대한 감수성과 통계적으로 유의하게 연관이 있었다. 길리어드(Gilead)-후원된 임상 시험에 참여한 환자로부터 단리된 50가지 클레이드 B Env 서열 중에서, N332 PNG 모티프를 보유하는 CCR5-향성 Env의 94%는 CCR5-향성 N332 PNG 양성이 아닌 바이러스의 단지 26%와 비교하여 PGT121에 의한 중화에 감수성이었다 (P<0.0001). 따라서, Env 클레이드의 유전자 결정, 향성 및 N332 PNG 모티프의 존재는 PGT121에 의한 중화 감수성을 크게 예측하며, PGT121 및 그의 유도체에 의한 중화에 대한 바이러스 감수성을 예측하기 위해 마커로서 사용될 수 있다.
본 개시내용은 PGT-121 LO6 항체의 변이체를 제공한다. 특정 실시양태에서, 이들 변이체는 PGT-121 LO6 항체와 비교하여 gp120에 대해 실질적으로 동일한 또는 증가된 결합 친화도를 갖는다. 결합 친화도는 ELISA, SPR, BLI, 또는 유동 세포분석법을 비롯하여 관련 기술분야에 공지된 임의의 검정을 이용하여 측정할 수 있다. 특정 실시양태에서, 이들 변이체는 PGT-121 LO6 항체와 비교하여 pH 6.0에서 FcRn에 대해 증가된 결합 친화도를 갖는다. 일부 실시양태에서, 이들 변이체는 PGT-121 LO6 항체에 비해 HIV-1의 증가된 중화를 갖는다. 특정 실시양태에서, 변이체는 PGT-121 LO6 항체와 비교하여 감소된 면역원성을 갖는다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 변이체와 Env 단백질의 결합은 하기 잔기 (HIV Env HXB2 넘버링)에서 또는 그 주위에서 Env의 영역을 수반하는 것으로 예측된다: V3 루프 (324-328, 330) 및 연관된 N332 글리칸 및 V1-루프 (135-137)의 일부분 및 연관된 N137 글리칸, 잔기 415-417. Env 결합에 대한 항체 파라토프는 항원과의 직접적으로 접촉하게 하는 하기 영역 (카바트 넘버링)에서 잔기를 수반하는 것으로 예측된다: CDRH1 (33), CDRH2 (50, 56, 58), CDRH3 (99, 100, 100A, 100B, 100C, 100D, 100E, 100G, 100I, 100L), CDRL1 (28, 29, 30), CDRL2 (50, 51, 52), LFR3 (66, 67 67A, 67B, 및 67C) 및 CDRL3 (93, 94, 95A, 95B).
PGT-121 LO6 중쇄 가변 도메인 서열 (카바트 넘버링에 의함) (서열식별번호: 126)
Figure pct00007
PGT-121 LO6 경쇄 가변 도메인 서열 (카바트 넘버링에 의함; VL이 위치 107 (V)에서 끝나고; 즉, G108이 VL의 일부분이 아님을 주의한다) (서열식별번호: 127)
Figure pct00008
PGT-121 LO6 항체의 한 예시적인 변이체는 PGT-121.60 항체이며, 그의 관련 서열 정보가 하기 표 2에 제공된다.
표 2
Figure pct00009
Figure pct00010
예시적인 항-gp120 항체 1
예시적인 항-gp120 항체 1은 PGT-121.60 항체에 관한 것이다. 예시적인 항-gp120 항체 1의 관련 아미노산 서열 (PGT121.60 인간 IgG1 FEARLS / 인간 람다)이 표 3에 제공된다.
표 3
Figure pct00011
Figure pct00012
항-gp120 항체는 예시적인 항-gp120 항체 1의 중쇄 CDR 1, CDR2 및 CDR3 및 경쇄 CDR 1, CDR2 및 CDR3을 포괄할 수 있다. 한 실시양태에서, CDR은 카바트 정의를 기반으로 하여 정의된다. 또 다른 실시양태에서, CDR은 코티아(Chothia) 정의를 기반으로 하여 정의된다. 구체적인 실시양태에서, 코티아 정의는 디스커버리 스튜디오(Discovery Studio)로부터의 것이며, 이는 [Chothia and Lesk, J Mol Biol. 196(4):901-17 (1987)] 및 [Morea et al., Methods, 20:267-279 (2000)]으로부터의 정의를 이용한다. 또 다른 구체적인 실시양태에서, 코티아 정의는 아비시스(Abysis) 정의로부터의 코티아를 기반으로 한다. 또 다른 실시양태에서, CDR은 IMGT 정의를 기반으로 하여 정의된다. 또 다른 실시양태에서, CDR은 오네게르(Honegger) 정의를 기반으로 하여 정의된다. 또 다른 실시양태에서, CDR은 접촉 정의를 기반으로 하여 정의된다. 일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 서열식별번호: 21에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 단백질에 결합한다. 일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 서열식별번호: 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 단백질에 결합한다. 일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 유리 HIV-1 바이러스에 결합한다. 일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 HIV-1 감염된 세포에 결합한다. 일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 유리 HIV-1 바이러스 및 HIV-1 감염된 세포 둘 다에 결합한다. 특정 경우에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 HIV-1의 적어도 2가지 상이한 균주 (예를 들어, 그룹 M, 그룹 N, 그룹 O, 또는 그룹 P)에 결합한다. 한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 pWITO.c/2474 (수탁 번호 JN944948 및 NIH AIDS 시약 프로그램 카탈로그 번호 11739)에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 pCH058.c/2960 (수탁 번호 JN944940 및 NIH AIDS 시약 프로그램 카탈로그 번호 700010058)에 결합한다.
특정 예에서, 항-gp120 항체는 예시적인 항-gp120 항체 1의 가변 중쇄와 적어도 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-gp120 항체는 예시적인 항-gp120 항체 1의 중쇄와 적어도 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 특정 예에서, 항-gp120 항체는 예시적인 항-gp120 항체 1의 가변 경쇄와 적어도 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 특정 예에서, 항-gp120 항체는 예시적인 항-gp120 항체 1의 경쇄와 적어도 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-gp120 항체는 예시적인 항-gp120 항체 1의 가변 중쇄 및 가변 경쇄와 적어도 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-gp120 항체는 예시적인 항-gp120 항체 1의 중쇄와 적어도 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄와 적어도 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 서열식별번호: 21에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 단백질에 결합한다. 일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 서열식별번호: 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 단백질에 결합한다. 일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 유리 HIV-1 바이러스에 결합한다. 일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 HIV-1 감염된 세포에 결합한다. 일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 유리 HIV-1 바이러스 및 HIV-1 감염된 세포 둘 다에 결합한다. 특정 경우에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 HIV-1의 적어도 2가지 상이한 균주 (예를 들어, 그룹 M, 그룹 N, 그룹 O, 또는 그룹 P)에 결합한다. 한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 pWITO.c/2474 (수탁 번호 JN944948 및 NIH AIDS 시약 프로그램 카탈로그 번호 11739)에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 pCH058.c/2960 (수탁 번호 JN944940 및 NIH AIDS 시약 프로그램 카탈로그 번호 700010058)에 결합한다.
일부 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 1의 가변 중쇄는 CH1 도메인 및 힌지 영역을 포함하는 중쇄 불변 영역에 연결된다. 일부 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 1의 가변 중쇄는 CH3 도메인을 포함하는 중쇄 불변 영역에 연결된다. 특정 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 1의 가변 중쇄는 CH1 도메인, 힌지 영역, 및 IgG4로부터의 CH2 도메인, 및 CH3 도메인 (예를 들어, IgG1로부터)을 포함하는 중쇄 불변 영역에 연결된다. 특정 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 1의 가변 중쇄는 CH1 도메인, CH2 도메인, 및 IgG1 (예를 들어, 인간 IgG1, 예를 들어, IgG1m3 알로타입)로부터의 CH3 도메인, 및 IgG3 힌지 영역 (예를 들어, WO 2017/096221 (예를 들어, 상기 PCT 공보의 도 2A 참고)에서 "IgG3 C-"로 지정된 "개방" IgG3 힌지 변이체)을 포함하는 중쇄 불변 영역에 연결된다. 이 IgG3 힌지 변이체는 개선된 Fab 아암 가요성 및 삼합체내 상호작용에 충분한 200A0 거리에 걸쳐 있을 수 있는 능력을 나타내는 것으로 예상된다. 특정 실시양태에서, 이러한 키메라 항체는 키메라 항체의 안정성을 증가시키는 중쇄 불변 영역에서 1개 이상의 추가의 돌연변이를 함유한다. 특정 실시양태에서, 중쇄 불변 영역은 항체의 성질을 변형시키는 치환을 포함한다 (예를 들어, Fc 수용체 결합을 감소시키고, 항체 글리코실화를 증가 또는 감소시키고, C1q와의 결합을 감소시키고, 반감기를 증가시키고, 이펙터 기능을 감소시킴).
특정 실시양태에서, 항-gp120 항체는 IgG 항체이다. 한 실시양태에서, 항체는 IgG1이다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 IgG2이다. 일부 실시양태에서, 항체는 키메라 중쇄 불변 영역을 갖는다 (예를 들어, CH1, 힌지, 및 IgG4의 CH2 영역 및 IgG1의 CH3 영역을 가짐).
IgG 항체는 다양한 알로타입 및 이소알로타입으로 존재한다. 특별한 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 G1m1; nG1m2; G1m3; G1m17,1; G1m17,1,2; G1m3,1; 또는 G1m17의 알로타입을 갖는 IgG1 중쇄를 포함한다. 이들 각각의 알로타입 또는 이소알로타입은 IgG1 중쇄 불변 영역 (Fc) 내의 지정된 위치에서 하기 아미노산 잔기를 특징으로 한다 (EU 넘버링):
Figure pct00013
.
구체적인 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 1의 VH는 하기에 제공된 야생형 IgG1m3 서열에 직접적으로 연결되거나 또는 개재 아미노산 서열 (예를 들어, G-S 링커)을 통해 연결된다 (대표적인 알로타입-결정 잔기는 굵은 글씨로 나타냄).
Figure pct00014
특정 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 1의 VH (예를 들어, 서열식별번호: 7과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖거나, 또는 서열식별번호: 7 내에 0 내지 5 (즉, 1, 2, 3, 4 또는 5) 개의 아미노산 치환 (예를 들어, 보존적 치환)을 갖는 아미노산 서열)는 서열식별번호:77에서 1 내지 10 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 아미노산 치환 (예를 들어, 이펙터 기능을 감소시키고/거나 반감기를 증가시키도록 하는 치환)을 갖는 돌연변이성 IgG1m3 서열에 직접적으로 연결되거나 또는 개재 아미노산 서열 (예를 들어, G-S 링커)을 통해 연결된다. 예시적인 아미노산 치환은 본 개시내용에서 이후에 기재된다.
특정 실시양태에서, 항-gp120 항체는 인간 IgG1/인간 카파 항체이다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 Km1; Km1,2; 또는 Km3으로부터 선택된 알로타입을 갖는 카파 경쇄를 포함한다. 이들 각각의 알로타입은 IgG1 경쇄 내의 지정된 위치에서 하기 아미노산 잔기를 특징으로 한다 (EU 넘버링):
Figure pct00015
.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 하기 아미노산 서열 중 하나를 포함하는 IgG1 카파 경쇄를 포함하며, 대표적인 알로타입-결정 잔기는 굵은 글씨로 나타낸다:
Figure pct00016
; 또는
Figure pct00017
.
특정 실시양태에서, 항-gp120 항체는 인간 IgG1/인간 람다 항체이다. 각각의 개별 인간은 7 내지 11개의 상이한 람다 경쇄 유전자를 포함하며, 이는 람다1, 람다2, 람다3, 람다4, 람다5, 람다6 및 람다7로부터 선택된 경쇄를 코딩한다. 특별한 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 람다1, 람다2, 람다3, 람다4, 람다5, 람다6 및 람다7로부터 선택된 람다 경쇄를 포함한다. 특별한 실시양태에서, 본원에 기재된 항체는 하기 아미노산 서열 중 하나를 포함하는 람다 경쇄를 포함하며, 대표적인 람다-결정 잔기는 굵은 글씨로 나타내었다:
람다1:
Figure pct00018
람다2:
Figure pct00019
람다3:
Figure pct00020
; 또는
람다7:
Figure pct00021
.
구체적인 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 1의 VL (예를 들어, 서열식별번호: 8과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖거나, 또는 서열식별번호: 8 내에 0 내지 5 (즉, 1, 2, 3, 4 또는 5) 개의 아미노산 치환 (예를 들어, 보존적 치환)을 가는 아미노산 서열)은 야생형 인간 람다 2 서열 (서열식별번호:89)에 직접적으로 연결되거나 또는 개재 아미노산 서열 (예를 들어, G-S 링커)을 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 1의 VL은 서열식별번호:89 내에 1 내지 5 (즉, 1, 2, 3, 4, 5) 개의 치환을 갖는 돌연변이성 인간 람다 2 서열에 직접적으로 연결되거나 또는 개재 아미노산 서열 (예를 들어, G-S 링커)을 통해 연결된다.
특별한 실시양태에서, 항-gp120 항체는 인간 IgG1m3/인간 람다2 항체이다.
항체, 예컨대 예시적인 항-gp120 항체 1은 예를 들어 항체의 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 제조하고 발현시킴으로써 제조될 수 있다.
예시적인 항-gp120 항체 2
또 다른 예시적인 항-gp120 항체, 예시적인 항-gp120 항체 2는 예시적인 항-gp120 항체 1과 동일한 6개의 CDR을 갖는다. 이 항체는 서열식별번호:7에 기재된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 VH 서열 및 하기 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 VL 서열을 포함한다:
Figure pct00022
.
특정 예에서, VL은 인간 람다 불변 영역에 직접적으로 연결되거나 또는 개재 아미노산 서열 (예를 들어, G-S 링커)을 통해 연결된다.
예시적인 항-gp120 항체 2는 서열식별번호:9에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 중쇄, 및 하기 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 경쇄를 포함한다:
Figure pct00023
일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 서열식별번호: 21에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 단백질에 결합한다. 일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 서열식별번호: 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 단백질에 결합한다. 일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 유리 HIV-1 바이러스에 결합한다. 일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 HIV-1 감염된 세포에 결합한다. 일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 유리 HIV-1 바이러스 및 HIV-1 감염된 세포 둘 다에 결합한다. 특정 경우에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 HIV-1의 적어도 2가지 상이한 균주 (예를 들어, 그룹 M, 그룹 N, 그룹 O, 또는 그룹 P)에 결합한다. 한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 pWITO.c/2474 (수탁 번호 JN944948 및 NIH AIDS 시약 프로그램 카탈로그 번호 11739)에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 pCH058.c/2960 (수탁 번호 JN944940 및 NIH AIDS 시약 프로그램 카탈로그 번호 700010058)에 결합한다.
일부 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 2의 가변 중쇄 (예를 들어, 서열식별번호: 7과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖거나, 또는 서열식별번호: 7 내에 0 내지 5 (즉, 1, 2, 3, 4 또는 5) 개의 아미노산 치환 (예를 들어, 보존적 치환)을 갖는 아미노산 서열)는 CH1 도메인 및 힌지 영역을 포함하는 중쇄 불변 영역에 연결된다. 일부 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 2의 가변 중쇄 (예를 들어, 서열식별번호: 7과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖거나, 또는 서열식별번호: 7 내에 0 내지 5 (즉, 1, 2, 3, 4 또는 5) 개의 아미노산 치환 (예를 들어, 보존적 치환)을 갖는 아미노산 서열)는 CH3 도메인을 포함하는 중쇄 불변 영역에 연결된다. 특정 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 2의 가변 중쇄 (예를 들어, 서열식별번호: 7과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖거나, 또는 서열식별번호: 7 내에 0 내지 5 (즉, 1, 2, 3, 4 또는 5) 개의 아미노산 치환 (예를 들어, 보존적 치환)을 갖는 아미노산 서열)는 CH1 도메인, 힌지 영역, 및 IgG4로부터의 CH2 도메인, 및 CH3 도메인 (예를 들어, IgG1로부터)을 포함하는 중쇄 불변 영역에 연결된다. 특정 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 1의 가변 중쇄는 CH1 도메인, CH2 도메인, 및 IgG1 (예를 들어, 인간 IgG1, 예를 들어, IgG1m3 알로타입)로부터의 CH3 도메인, 및 IgG3 힌지 영역 (예를 들어, WO2017/096221에 기재된 "개방" IgG3 힌지 변이체 "IgG3 C-")을 포함하는 중쇄 불변 영역에 연결된다. 특정 실시양태에서, 이러한 키메라 항체는 키메라 항체의 안정성을 증가시키는 중쇄 불변 영역에서의 1개 이상의 추가의 돌연변이를 함유한다. 특정 실시양태에서, 중쇄 불변 영역은 항체의 성질을 변형시키는 치환을 포함한다 (예를 들어, Fc 수용체 결합을 감소시키고, 항체 글리코실화를 증가 또는 감소시키고, C1q와의 결합을 감소시키고, 반감기를 증가시키고, 이펙터 기능을 감소시킴).
특정 실시양태에서, 항-gp120 항체는 IgG 항체이다. 한 실시양태에서, 항체는 IgG1이다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 IgG2이다. 일부 실시양태에서, 항체는 키메라 중쇄 불변 영역을 갖는다 (예를 들어, CH1, 힌지, 및 IgG4의 CH2 영역 및 IgG1의 CH3 영역을 가짐).
특별한 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 G1m1; nG1m2; G1m3; G1m17,1; G1m17,1,2; G1m3,1; 또는 G1m17의 알로타입을 갖는 IgG1 중쇄를 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-gp120 항체는 인간 IgG1/인간 카파 항체이다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 Km1; Km1,2; 또는 Km3으로부터 선택된 알로타입을 갖는 카파 경쇄를 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-gp120 항체는 인간 IgG1/인간 람다 항체이다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 람다1, 람다2, 람다3, 람다4, 람다5, 람다6, 및 람다7로부터 선택된 람다 경쇄를 포함한다.
특별한 실시양태에서, 항-gp120 항체는 인간 IgG1m3/인간 람다2 항체이다.
일부 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 2의 VH (예를 들어, 서열식별번호: 7과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖거나, 또는 서열식별번호: 7 내에 0 내지 5 (즉, 1, 2, 3, 4 또는 5) 개의 아미노산 치환 (예를 들어, 보존적 치환)을 갖는 아미노산 서열)는 야생형 IgG1m3 서열 (서열식별번호:77)에 직접적으로 연결되거나 또는 개재 아미노산 서열 (예를 들어, G-S 링커)을 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 2의 VH (예를 들어, 서열식별번호: 7과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖거나, 또는 서열식별번호: 7 내에 0 내지 5 (즉, 1, 2, 3, 4 또는 5) 개의 아미노산 치환 (예를 들어, 보존적 치환)을 갖는 아미노산 서열)는 서열식별번호:77에서 1 내지 10 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 아미노산 치환 (예를 들어, 이펙터 기능을 감소시키고/거나 반감기를 증가시키기 위한 치환)을 갖는 돌연변이성 IgG1m3 서열에 직접적으로 연결되거나 또는 개재 아미노산 서열 (예를 들어, G-S 링커)을 통해 연결된다. 예시적인 아미노산 치환은 본 개시내용에서 이후에 기재된다.
일부 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 2의 VL (예를 들어, 서열식별번호: 81과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖거나, 또는 서열식별번호: 81 내에 0 내지 5 (즉, 1, 2, 3, 4 또는 5) 개의 아미노산 치환 (예를 들어, 보존적 치환)을 갖는 아미노산 서열)은 야생형 인간 람다 2 서열 (서열식별번호:89)에 직접적으로 연결되거나 또는 개재 아미노산 서열 (예를 들어, G-S 링커)을 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 2의 VL (예를 들어, 서열식별번호: 81과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖거나, 또는 서열식별번호: 81 내에 0 내지 5 (즉, 1, 2, 3, 4 또는 5) 개의 아미노산 치환 (예를 들어, 보존적 치환)을 갖는 아미노산 서열)은 서열식별번호:89 내에 1 내지 5 (즉, 1, 2, 3, 4, 5) 개의 치환을 갖는 돌연변이성 인간 람다 2 서열에 직접적으로 연결되거나 또는 개재 아미노산 서열 (예를 들어, G-S 링커)을 통해 연결된다.
예시적인 항-gp120 항체 2는 단일특이적 또는 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체)로서 사용될 수 있다. 전체 항체 또는 항원-결합 단편 (예를 들어, Fab, F(ab)2, Fv, scFv, sc(Fv)2, 디아바디)은 본 개시내용에 포함된다.
항체, 예컨대 예시적인 항-gp120 항체 2는 예를 들어 항체의 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 제조하고 발현시킴으로써 제조될 수 있다.
예시적인 항-gp120 항체 3
또 다른 예시적인 항-gp120 항체, 예시적인 항-gp120 항체 3은 예시적인 항-gp120 항체 1과 동일한 6개의 CDR을 갖는다. 이 항체는 서열식별번호:7에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 VH 서열, 및 하기 제공된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 VL 서열을 포함한다:
Figure pct00024
특정 예에서, VL은 인간 람다 불변 영역에 직접적으로 연결되거나 또는 개재 아미노산 서열 (예를 들어, G-S 링커)을 통해 연결된다.
예시적인 항-gp120 항체 3은 서열식별번호:9에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 중쇄, 및 하기 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 경쇄를 포함한다:
Figure pct00025
일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 서열식별번호: 21에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 단백질에 결합한다. 일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 서열식별번호: 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 단백질에 결합한다. 일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 유리 HIV-1 바이러스에 결합한다. 일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 HIV-1 감염된 세포에 결합한다. 일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 유리 HIV-1 바이러스 및 HIV-1 감염된 세포 둘 다에 결합한다. 특정 경우에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 HIV-1의 적어도 2가지 상이한 균주 (예를 들어, 그룹 M, 그룹 N, 그룹 O, 또는 그룹 P)에 결합한다. 한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 pWITO.c/2474 (수탁 번호 JN944948 및 NIH AIDS 시약 프로그램 카탈로그 번호 11739)에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 pCH058.c/2960 (수탁 번호 JN944940 및 NIH AIDS 시약 프로그램 카탈로그 번호 700010058)에 결합한다.
일부 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 3의 가변 중쇄는 CH1 도메인 및 힌지 영역을 포함하는 중쇄 불변 영역에 연결된다. 일부 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 3의 가변 중쇄는 CH3 도메인을 포함하는 중쇄 불변 영역에 연결된다. 특정 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 3의 가변 중쇄는 CH1 도메인, 힌지 영역, 및 IgG4로부터의 CH2 도메인, 및 CH3 도메인 (예를 들어, IgG1로부터)을 포함하는 중쇄 불변 영역에 연결된다. 특정 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 1의 가변 중쇄는 CH1 도메인, CH2 도메인, 및 IgG1 (예를 들어, 인간 IgG1, 예를 들어, IgG1m3 알로타입)로부터의 CH3 도메인, 및 IgG3 힌지 영역 (예를 들어, WO2017/096221에 기재된 "개방" IgG3 힌지 변이체 "IgG3 C-")을 포함하는 중쇄 불변 영역에 연결된다. 특정 실시양태에서, 이러한 키메라 항체는 키메라 항체의 안정성을 증가시키는 중쇄 불변 영역에서의 1개 이상의 추가의 돌연변이를 함유한다. 특정 실시양태에서, 중쇄 불변 영역은 항체의 성질을 변형시키는 치환을 포함한다 (예를 들어, Fc 수용체 결합을 감소시키고, 항체 글리코실화를 증가 또는 감소시키고, C1q와의 결합을 감소시키고, 반감기를 증가시키고, 이펙터 기능을 감소시킴).
특정 실시양태에서, 항-gp120 항체는 IgG 항체이다. 한 실시양태에서, 항체는 IgG1이다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 IgG2이다. 일부 실시양태에서, 항체는 키메라 중쇄 불변 영역을 갖는다 (예를 들어, CH1, 힌지, 및 IgG4의 CH2 영역 및 IgG1의 CH3 영역을 가짐).
특별한 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 G1m1; nG1m2; G1m3; G1m17,1; G1m17,1,2; G1m3,1; 또는 G1m17의 알로타입을 갖는 IgG1 중쇄를 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-gp120 항체는 인간 IgG1/인간 카파 항체이다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 Km1; Km1,2; 또는 Km3으로부터 선택된 알로타입을 갖는 카파 경쇄를 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-gp120 항체는 인간 IgG1/인간 람다 항체이다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 람다1, 람다2, 람다3, 람다4, 람다5, 람다6, 및 람다7로부터 선택된 람다 경쇄를 포함한다.
특별한 실시양태에서, 항-gp120 항체는 인간 IgG1m3/인간 람다2 항체이다.
일부 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 3의 VH (예를 들어, 서열식별번호: 7과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖거나, 또는 서열식별번호: 7 내에 0 내지 5 (즉, 1, 2, 3, 4 또는 5) 개의 아미노산 치환 (예를 들어, 보존적 치환)을 갖는 아미노산 서열)는 야생형 IgG1m3 서열 (서열식별번호:77)에 직접적으로 연결되거나 또는 개재 아미노산 서열 (예를 들어, G-S 링커)을 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 3의 VH (예를 들어, 서열식별번호: 7과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖거나, 또는 서열식별번호: 7 내에 0 내지 5 (즉, 1, 2, 3, 4 또는 5) 개의 아미노산 치환 (예를 들어, 보존적 치환)을 갖는 아미노산 서열)는 서열식별번호:77 내에 1 내지 10 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 아미노산 치환 (예를 들어, 이펙터 기능을 감소시키고/거나 반감기를 증가시키기 위해)을 포함하는 돌연변이성 IgG1m3 서열에 직접적으로 연결되거나 또는 개재 아미노산 서열 (예를 들어, G-S 링커)을 통해 연결된다. 예시적인 아미노산 치환은 본 개시내용에서 이후에 기재된다.
일부 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 3의 VL (예를 들어, 서열식별번호: 82와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖거나, 또는 서열식별번호: 82 내에 0 내지 5 (즉, 1, 2, 3, 4 또는 5) 개의 아미노산 치환 (예를 들어, 보존적 치환)을 갖는 아미노산 서열)은 야생형 인간 람다 2 서열 (서열식별번호:89)에 직접적으로 연결되거나 또는 개재 아미노산 서열 (예를 들어, G-S 링커)을 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 3의 VL (예를 들어, 서열식별번호: 82와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖거나, 또는 서열식별번호: 82 내에 0 내지 5 (즉, 1, 2, 3, 4 또는 5) 개의 아미노산 치환 (예를 들어, 보존적 치환)을 갖는 아미노산 서열)은 서열식별번호:89 내에 1 내지 5 (즉, 1, 2, 3, 4, 5) 개의 치환을 갖는 돌연변이성 인간 람다 2 서열에 직접적으로 연결되거나 또는 개재 아미노산 서열 (예를 들어, G-S 링커)을 통해 연결된다.
예시적인 항-gp120 항체 3 단일특이적 또는 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체)로서 사용될 수 있다. 전체 항체 또는 항원-결합 단편 (예를 들어, Fab, F(ab)2, Fv, scFv, sc(Fv)2, 디아바디)은 본 개시내용에 포함된다.
항체, 예컨대 예시적인 항-gp120 항체 3은 예를 들어 항체의 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 제조하고 발현시킴으로써 제조될 수 있다.
예시적인 항-gp120 항체 4
또 다른 예시적인 항-gp120 항체, 예시적인 항-gp120 항체 4는 예시적인 항-gp120 항체 1과 동일한 6개의 CDR을 갖는다. 이 항체는 서열식별번호:7에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 VH 서열, 및 하기 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 VL 서열을 포함한다:
Figure pct00026
특정 예에서, VL은 인간 람다 불변 영역에 직접적으로 연결되거나 또는 개재 아미노산 서열 (예를 들어, G-S 링커)을 통해 연결된다.
예시적인 항-gp120 항체 4는 서열식별번호:9에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 중쇄, 및 하기 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 경쇄를 포함한다:
Figure pct00027
일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 서열식별번호: 21에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 단백질에 결합한다. 일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 서열식별번호: 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 단백질에 결합한다. 일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 유리 HIV-1 바이러스에 결합한다. 일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 HIV-1 감염된 세포에 결합한다. 일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 유리 HIV-1 바이러스 및 HIV-1 감염된 세포 둘 다에 결합한다. 특정 경우에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 HIV-1의 적어도 2가지 상이한 균주 (예를 들어, 그룹 M, 그룹 N, 그룹 O, 또는 그룹 P)에 결합한다. 한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 pWITO.c/2474 (수탁 번호 JN944948 및 NIH AIDS 시약 프로그램 카탈로그 번호 11739)에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 pCH058.c/2960 (수탁 번호 JN944940 및 NIH AIDS 시약 프로그램 카탈로그 번호 700010058)에 결합한다.
일부 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 4의 가변 중쇄는 CH1 도메인 및 힌지 영역을 포함하는 중쇄 불변 영역에 연결된다. 일부 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 4의 가변 중쇄는 CH3 도메인을 포함하는 중쇄 불변 영역에 연결된다. 특정 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 4의 가변 중쇄는 CH1 도메인, 힌지 영역, 및 IgG4로부터의 CH2 도메인, 및 CH3 도메인 (예를 들어, IgG1로부터)을 포함하는 중쇄 불변 영역에 연결된다. 특정 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 1의 가변 중쇄는 CH1 도메인, CH2 도메인, 및 IgG1 (예를 들어, 인간 IgG1, 예를 들어, IgG1m3 알로타입)로부터의 CH3 도메인, 및 IgG3 힌지 영역 (예를 들어, WO2017/096221에 기재된 "개방" IgG3 힌지 변이체 "IgG3 C-")을 포함하는 중쇄 불변 영역에 연결된다. 특정 실시양태에서, 이러한 키메라 항체는 키메라 항체의 안정성을 증가시키는 중쇄 불변 영역에서의 1개 이상의 추가의 돌연변이를 함유한다. 특정 실시양태에서, 중쇄 불변 영역은 항체의 성질을 변형시키는 치환을 포함한다 (예를 들어, Fc 수용체 결합을 감소시키고, 항체 글리코실화를 증가 또는 감소시키고, C1q와의 결합을 감소시키고, 반감기를 증가시키고, 이펙터 기능을 감소시킴).
특정 실시양태에서, 항-gp120 항체는 IgG 항체이다. 한 실시양태에서, 항체는 IgG1이다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 IgG2이다. 일부 실시양태에서, 항체는 키메라 중쇄 불변 영역을 갖는다 (예를 들어, CH1, 힌지, 및 IgG4의 CH2 영역 및 IgG1의 CH3 영역을 가짐).
특별한 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 G1m1; nG1m2; G1m3; G1m17,1; G1m17,1,2; G1m3,1; 또는 G1m17의 알로타입을 갖는 IgG1 중쇄를 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-gp120 항체는 인간 IgG1/인간 카파 항체이다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 Km1; Km1,2; 또는 Km3으로부터 선택된 알로타입을 갖는 카파 경쇄를 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-gp120 항체는 인간 IgG1/인간 람다 항체이다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 람다1, 람다2, 람다3, 람다4, 람다5, 람다6, 및 람다7로부터 선택된 람다 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 4의 VH (예를 들어, 서열식별번호: 7과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖거나, 또는 서열식별번호: 7 내에 0 내지 5 (즉, 1, 2, 3, 4 또는 5) 개의 아미노산 치환 (예를 들어, 보존적 치환)을 갖는 아미노산 서열)는 야생형 IgG1m3 서열 (서열식별번호:77)에 직접적으로 연결되거나 또는 개재 아미노산 서열 (예를 들어, G-S 링커)을 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 4의 VH (예를 들어, 서열식별번호: 7과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖거나, 또는 서열식별번호: 7 내에 0 내지 5 (즉, 1, 2, 3, 4 또는 5) 개의 아미노산 치환 (예를 들어, 보존적 치환)을 갖는 아미노산 서열)는 서열식별번호:77 내에 1 내지 10 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 아미노산 치환 (예를 들어, 이펙터 기능을 감소시키고/거나 반감기를 증가시키기 위해)을 갖는 돌연변이성 IgG1m3 서열에 직접적으로 연결되거나 또는 개재 아미노산 서열 (예를 들어, G-S 링커)을 통해 연결된다. 예시적인 아미노산 치환은 본 개시내용에서 이후에 기재된다.
일부 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 4의 VL (예를 들어, 서열식별번호: 83과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖거나, 또는 서열식별번호: 83 내에 0 내지 5 (즉, 1, 2, 3, 4 또는 5) 개의 아미노산 치환 (예를 들어, 보존적 치환)을 갖는 아미노산 서열)은 야생형 인간 람다 2 서열 (서열식별번호:89)에 직접적으로 연결되거나 또는 개재 아미노산 서열 (예를 들어, G-S 링커)을 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 4의 VL (예를 들어, 서열식별번호: 83과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖거나, 또는 서열식별번호: 83 내에 0 내지 5 (즉, 1, 2, 3, 4 또는 5) 개의 아미노산 치환 (예를 들어, 보존적 치환)을 갖는 아미노산 서열)은 서열식별번호:89 내에 1 내지 5 (즉, 1, 2, 3, 4, 5) 개의 치환을 갖는 돌연변이성 인간 람다 2 서열에 직접적으로 연결되거나 또는 개재 아미노산 서열 (예를 들어, G-S 링커)을 통해 연결된다.
특별한 실시양태에서, 항-gp120 항체는 인간 IgG1m3/인간 람다2 항체이다.
예시적인 항-gp120 항체 4 단일특이적 또는 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체)로서 사용될 수 있다. 전체 항체 또는 항원-결합 단편 (예를 들어, Fab, F(ab)2, Fv, scFv, sc(Fv)2, 디아바디)이 이용될 수 있다.
항체, 예컨대 예시적인 항-gp120 항체 4는 예를 들어 항체의 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 제조하고 발현시킴으로써 제조될 수 있다.
예시적인 항-gp120 항체 5
또 다른 예시적인 항-gp120 항체, 예시적인 항-gp120 항체 5는 예시적인 항-gp120 항체 1과 동일한 6개의 CDR을 갖는다. 이 항체는 서열식별번호:7에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 VH 서열, 및 하기 제공된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 VL 서열을 포함한다:
Figure pct00028
특정 예에서, VL은 인간 람다 불변 영역에 직접적으로 연결되거나 또는 개재 아미노산 서열 (예를 들어, G-S 링커)을 통해 연결된다.
예시적인 항-gp120 항체 5는 서열식별번호:9에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 중쇄, 및 하기 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 경쇄를 포함한다:
Figure pct00029
일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 서열식별번호: 21에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 단백질에 결합한다. 일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 서열식별번호: 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 단백질에 결합한다. 일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 유리 HIV-1 바이러스에 결합한다. 일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 HIV-1 감염된 세포에 결합한다. 일부 예에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 유리 HIV-1 바이러스 및 HIV-1 감염된 세포 둘 다에 결합한다. 특정 경우에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 HIV-1의 적어도 2가지 상이한 균주 (예를 들어, 그룹 M, 그룹 N, 그룹 O, 또는 그룹 P)에 결합한다. 한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 pWITO.c/2474 (수탁 번호 JN944948 및 NIH AIDS 시약 프로그램 카탈로그 번호 11739)에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 항-gp120 항체는 pCH058.c/2960 (수탁 번호 JN944940 및 NIH AIDS 시약 프로그램 카탈로그 번호 700010058)에 결합한다.
일부 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 5의 가변 중쇄는 CH1 도메인 및 힌지 영역을 포함하는 중쇄 불변 영역에 연결된다. 일부 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 5의 가변 중쇄는 CH3 도메인을 포함하는 중쇄 불변 영역에 연결된다. 특정 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 5의 가변 중쇄는 CH1 도메인, 힌지 영역, 및 IgG4로부터의 CH2 도메인, 및 CH3 도메인 (예를 들어, IgG1로부터)을 포함하는 중쇄 불변 영역에 연결된다. 특정 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 1의 가변 중쇄는 CH1 도메인, CH2 도메인, 및 IgG1 (예를 들어, 인간 IgG1, 예를 들어, IgG1m3 알로타입)로부터의 CH3 도메인, 및 IgG3 힌지 영역 (예를 들어, WO2017/096221에 기재된 "개방" IgG3 힌지 변이체 "IgG3 C-")을 포함하는 중쇄 불변 영역에 연결된다. 특정 실시양태에서, 이러한 키메라 항체는 키메라 항체의 안정성을 증가시키는 중쇄 불변 영역에서의 1개 이상의 추가의 돌연변이를 함유한다. 특정 실시양태에서, 중쇄 불변 영역은 항체의 성질을 변형시키는 치환을 포함한다 (예를 들어, Fc 수용체 결합을 감소시키고, 항체 글리코실화를 증가 또는 감소시키고, C1q와의 결합을 감소시키고, 반감기를 증가시키고, 이펙터 기능을 감소시킴).
특정 실시양태에서, 항-gp120 항체는 IgG 항체이다. 한 실시양태에서, 항체는 IgG1이다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 IgG2이다. 일부 실시양태에서, 항체는 키메라 중쇄 불변 영역을 갖는다 (예를 들어, CH1, 힌지, 및 IgG4의 CH2 영역 및 IgG1의 CH3 영역을 가짐).
특별한 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 G1m1; nG1m2; G1m3; G1m17,1; G1m17,1,2; G1m3,1; 또는 G1m17의 알로타입을 갖는 IgG1 중쇄를 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-gp120 항체는 인간 IgG1/인간 카파 항체이다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 Km1; Km1,2; 또는 Km3으로부터 선택된 알로타입을 갖는 카파 경쇄를 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-gp120 항체는 인간 IgG1/인간 람다 항체이다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 람다1, 람다2, 람다3, 람다4, 람다5, 람다6, 및 람다7로부터 선택된 람다 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 5의 VH (예를 들어, 서열식별번호: 7과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖거나, 또는 서열식별번호: 7 내에 0 내지 5 (즉, 1, 2, 3, 4 또는 5) 개의 아미노산 치환 (예를 들어, 보존적 치환)을 갖는 아미노산 서열)는 야생형 IgG1m3 서열 (서열식별번호:77)에 직접적으로 연결되거나 또는 개재 아미노산 서열 (예를 들어, G-S 링커)을 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 5의 VH (예를 들어, 서열식별번호: 7과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖거나, 또는 서열식별번호: 7 내에 0 내지 5 (즉, 1, 2, 3, 4 또는 5) 개의 아미노산 치환 (예를 들어, 보존적 치환)을 갖는 아미노산 서열)는 서열식별번호:77 내에 1 내지 10 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 아미노산 치환 (예를 들어, 이펙터 기능을 감소시키고/거나 반감기를 증가시키기 위해)을 갖는 돌연변이성 IgG1m3 서열에 직접적으로 연결되거나 또는 개재 아미노산 서열 (예를 들어, G-S 링커)을 통해 연결된다. 예시적인 아미노산 치환은 본 개시내용에서 이후에 기재된다.
일부 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 5의 VL (예를 들어, 서열식별번호: 84와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖거나, 또는 서열식별번호: 84 내에 0 내지 5 (즉, 1, 2, 3, 4 또는 5) 개의 아미노산 치환 (예를 들어, 보존적 치환)을 갖는 아미노산 서열)은 야생형 인간 람다 2 서열 (서열식별번호:89)에 직접적으로 연결되거나 또는 개재 아미노산 서열 (예를 들어, G-S 링커)을 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 5의 VL (예를 들어, 서열식별번호: 84와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖거나, 또는 서열식별번호: 84 내에 0 내지 5 (즉, 1, 2, 3, 4 또는 5) 개의 아미노산 치환 (예를 들어, 보존적 치환)을 갖는 아미노산 서열)은 서열식별번호:89 내에 1 내지 5 (즉, 1, 2, 3, 4, 5) 개의 치환을 갖는 돌연변이성 인간 람다 2 서열에 직접적으로 연결되거나 또는 개재 아미노산 서열 (예를 들어, G-S 링커)을 통해 연결된다.
특별한 실시양태에서, 항-gp120 항체는 인간 IgG1m3/인간 람다2 항체이다.
예시적인 항-gp120 항체 5는 단일특이적 또는 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체)로서 사용될 수 있다. 전체 항체 또는 항원-결합 단편 (예를 들어, Fab, F(ab)2, Fv, scFv, sc(Fv)2, 디아바디)은 본 개시내용에 포함된다.
항체, 예컨대 예시적인 항-gp120 항체 5는 예를 들어 항체의 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 제조하고 발현시킴으로써 제조될 수 있다.
CD3
분화 클러스터 (CD3)는 4개의 구별되는 폴리펩티드 쇄: 엡실론 (ε), 감마 (γ), 델타 (δ) 및 제타 (ζ)로 구성되며 3가지 이합체 쌍 (εγ, εδ, ζζ)으로서 조립하여 기능하는 다합체성 단백질 복합체이다. CD3 단백질은 N-말단 세포외 영역, 막경유 도메인, 및 면역수용체 티로신 활성화 모티프 (ITAM)가 위치하는 세포질 꼬리를 갖는다. CD3 ε, γ 및 δ의 세포외 도메인은 이뮤노글로불린-유사 도메인을 함유하며, 따라서 이뮤노글로불린 수퍼패밀리의 일부로 고려된다. CD3/T-세포 공동-수용체는 CD8+ T 세포 및 또한 CD4+ T 세포 둘 다를 활성화시키는 것을 돕는다.
인간 CD3ε의 아미노산 서열은 UNiProtKB-P07766에서 확인할 수 있으며, 하기에 제공된다 (신호 서열을 밑줄로 나타냄):
Figure pct00030
인간 CD3δ의 아미노산 서열은 UNiProtKB-P04234에서 확인할 수 있으며, 하기에 제공된다 (신호 서열을 밑줄로 나타냄):
Figure pct00031
인간 CD3에 결합하는 항체는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다 (예를 들어, Kuhn & Weiner, Immunotherapy, 8(8):889-906 (2016); WO 2015/104346) 참고). CD3ε에 대한 항-CD3 항체인 OKT3 (무로맙(Muromab))은 거부반응의 예방 및 치료를 위해 고형 장기 이식에서 면역저해의 유도를 위해 인간에서 사용하기 위해 임상적으로 승인되었다 (Norman, Therapeutic Drug Monitoring, 17, 615-620 (1995)). hOKT3γ1 (Ala-Ala) 및 MGA031의 명칭으로도 공지된 테플리주맙(Teplizumab)은 인간 IgG1 백본으로 OKT3의 상보성 결정 영역을 그래프팅시킴으로써 개발된 인간화 IgG1 항체이다. 그의 Fc 부분에서 2개의 점 돌연변이의 도입은 FcR과의 결합을 감소시킨다. 오텔릭시주맙(Otelixizumab) (ChAglyCD3, TRX4, GSK2136525)은 래트 항체 YTH12.5로부터 유래되었다. 이 인간화 IgG1은 글리코실화를 피하기 위해 γ1 Fc 부분에 단일 돌연변이를 함유하며, 따라서 FcR 결합을 억제한다. 비실리주맙(Visilizumab) (누비온(Nuvion), HuM291)은 그의 Fc 영역에서 2개의 점 돌연변이에 의해 비-유사분열성이 되는 인간화 IgG2 항체이다. 포랄루맙(Foralumab) (28F11-AE; NI-0401)은 완전 인간 항-CD3 mAb이며; 이 인간 IgG1의 Fc 부분은, mAb가 시험관 내에서 FcR에 결합하지 않고, CD3/TCR 및 T-세포 고갈의 조절을 유지하면서 생체 내에서 단지 미미한 시토카인 방출을 나타내도록 돌연변이되었다.
항-CD3 항체의 비제한적인 예가 US 2016/0333095A1에도 개시되어 있다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD3 항체는 인간 CD3에 결합한다. 일부 예에서, 본 개시내용의 항-CD3 항체는 인간 CD3ε에 결합한다. 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD3 항체는 인간 CD3δ에 결합한다.
예시적인 항-CD3 항체 1
예시적인 항-CD3 항체 1의 관련 서열 정보가 표 4에 제공된다.
표 4
Figure pct00032
Figure pct00033
항-CD3 항체는 예시적인 항-CD3 항체 1의 중쇄 CDR 1, CDR2 및 CDR3 및 경쇄 CDR 1, CDR2 및 CDR3을 포괄할 수 있다. 한 실시양태에서, CDR은 카바트 정의를 기반으로 하여 정의된다. 또 다른 실시양태에서, CDR은 코티아 정의를 기반으로 하여 정의된다. 또 다른 실시양태에서, CDR은 IMGT 정의를 기반으로 하여 정의된다. 또 다른 실시양태에서, CDR은 오네게르 정의를 기반으로 하여 정의된다. 또 다른 실시양태에서, CDR은 아비시스 정의로부터의 코티아를 기반으로 하여 정의된다. 또 다른 실시양태에서, CDR은 코티아/AbM CDR을 기반으로 하여 정의된다. 또 다른 실시양태에서, CDR은 접촉 정의를 기반으로 하여 정의된다. 이들 CDR은 예를 들어 아비시스 데이터베이스를 이용함으로써 결정될 수 있다 (www.bioinf.org.uk/abysis/sequence_input/key_annotation/key_annotation.cgi).
특정 예에서, 항-CD3 항체는 예시적인 항-CD3 항체 1의 가변 중쇄와 적어도 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD3 항체는 예시적인 항-CD3 항체 1의 중쇄와 적어도 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 특정 예에서, 항-CD3 항체는 예시적인 항-CD3항체 1의 가변 경쇄와 적어도 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 특정 예에서, 항-CD3 항체는 예시적인 항-CD3 항체 1의 경쇄와 적어도 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-CD3 항체는 예시적인 항-CD3 항체 1의 가변 중쇄 및 가변 경쇄와 적어도 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD3 항체는 예시적인 항-CD3 항체 1의 중쇄와 적어도 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄와 적어도 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 예시적인 항-CD3 항체 1의 가변 중쇄는 CH1 도메인 및 힌지 영역을 포함하는 중쇄 불변 영역에 연결된다. 일부 실시양태에서, 예시적인 항-CD3 항체 1의 가변 중쇄는 CH3 도메인을 포함하는 중쇄 불변 영역에 연결된다. 특정 실시양태에서, 예시적인 항-CD3 항체 1의 가변 중쇄는 CH1 도메인, 힌지 영역, 및 IgG4로부터의 CH2 도메인, 및 CH3 도메인 (예를 들어, IgG1로부터)을 포함하는 중쇄 불변 영역에 연결된다. 특정 실시양태에서, 예시적인 항-gp120 항체 1의 가변 중쇄는 CH1 도메인, CH2 도메인, 및 IgG1 (예를 들어, 인간 IgG1, 예를 들어, IgG1m3 알로타입)로부터의 CH3 도메인, 및 IgG3 힌지 영역 (예를 들어, WO2017/096221에 기재된 "개방" IgG3 힌지 변이체 "IgG3 C-")을 포함하는 중쇄 불변 영역에 연결된다. 특정 실시양태에서, 이러한 키메라 항체는 키메라 항체의 안정성을 증가시키는 중쇄 불변 영역에서의 1개 이상의 추가의 돌연변이를 함유한다. 특정 실시양태에서, 중쇄 불변 영역은 항체의 성질을 변형시키는 치환을 포함한다 (예를 들어, Fc 수용체 결합을 감소시키고, 항체 글리코실화를 증가 또는 감소시키고, C1q와의 결합을 감소시키고, 반감기를 증가시키고, 이펙터 기능을 감소시킴).
특정 실시양태에서, 항-CD3 항체는 IgG 항체이다. 한 실시양태에서, 항체는 IgG1이다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 IgG2이다. 일부 실시양태에서, 항체는 키메라 중쇄 불변 영역을 갖는다 (예를 들어, CH1, 힌지, 및 IgG4의 CH2 영역 및 IgG1의 CH3 영역을 가짐).
특별한 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 G1m1; nG1m2; G1m3; G1m17,1; G1m17,1,2; G1m3,1; 또는 G1m17의 알로타입을 갖는 IgG1 중쇄를 포함한다.
구체적인 실시양태에서, 예시적인 항-CD3 항체 1의 VH는 야생형 IgG1m3 Fc (서열식별번호:77)에 연결된다. 특정 예에서, 예시적인 항-CD3 항체 1의 VH는 서열식별번호:77에서 이루어진 1 내지 10 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 아미노산 치환 (예를 들어, 이펙터 기능을 감소시키고/거나 반감기를 증가시키기 위해)을 갖는 돌연변이된 IgG1m3 서열에 연결된다. 예시적인 아미노산 치환은 하기에 기재된다.
구체적인 실시양태에서, 예시적인 항-CD3 항체 1의 VL은 인간 람다 2 서열 (서열식별번호:89)에 연결된다. 특정 예에서, 예시적인 항-CD3 항체 1의 VL은 서열식별번호:89에서 이루어진 1 내지 10 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 아미노산 치환을 갖는 돌연변이된 인간 람다 2 서열에 연결된다. 이러한 아미노산 치환은 하기에 기재된다.
특정 실시양태에서, 항-CD3 항체는 인간 IgG1/인간 람다 항체이다.
항체, 예컨대 예시적인 항-CD3 항체 1은 예를 들어 항체의 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 제조하고 발현시킴으로써 제조될 수 있다.
CD89
IgA 수용체의 Fc 단편 (FCAR)으로도 공지된 CD89 (분화 클러스터 89)는 막경유 수용체 FcαRI이다. FcαRI는 이뮤노글로불린 A (IgA) 항체의 중쇄 불변 영역에 결합한다. FcαRI는 호중구, 단핵구, 대식세포 및 호산구를 비롯한 골수 계통 세포의 세포 표면 상에서 발현된다.
UniProtKB - P24071로부터의 인간 CD89의 아미노산 서열이 하기에 제공된다:
Figure pct00034
인간 CD89에 결합하는 항체는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다 (예를 들어, Fishwild et al., Nature Biotechnol., 14(7):845-851 (1996); Duval et al., J. Virol., 82(9): 4671-4674 (2008); US 2003/0082643). 일부 실시양태에서, 항-CD89 항체는 14.1, 7.4 또는 8.2 (각각 14A8, 7F12 및 8D2로도 지칭됨) 중 하나이다. 임의의 이들 항체 또는 그의 변이체는 본원에 개시된 다중특이적 항체에서 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD89 항체 또는 본원에 개시된 다중특이적 항체는 서열식별번호:95에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리펩티드에 결합한다.
예시적인 항-CD89 항체 1
예시적인 항-CD89 항체 1의 관련 서열 정보가 하기 표에 제공된다.
Figure pct00035
Figure pct00036
항-CD89 항체는 예시적인 항-CD89 항체 1의 중쇄 CDR 1, CDR2 및 CDR3 및 경쇄 CDR 1, CDR2 및 CDR3을 포괄할 수 있다. 한 실시양태에서, CDR은 카바트 정의를 기반으로 하여 정의된다. 또 다른 실시양태에서, CDR은 코티아 정의를 기반으로 하여 정의된다. 또 다른 실시양태에서, CDR은 IMGT 정의를 기반으로 하여 정의된다. 또 다른 실시양태에서, CDR은 오네게르 정의를 기반으로 하여 정의된다. 또 다른 실시양태에서, CDR은 아비시스 정의로부터의 코티아를 기반으로 하여 정의된다. 또 다른 실시양태에서, CDR은 코티아/AbM CDR을 기반으로 하여 정의된다. 또 다른 실시양태에서, CDR은 접촉 정의를 기반으로 하여 정의된다. 이들 CDR은 예를 들어 아비시스 데이터베이스를 이용함으로써 결정될 수 있다 (www.bioinf.org.uk/abysis/sequence_input/key_annotation/key_annotation.cgi).
특정 예에서, 항-CD89 항체는 예시적인 항-CD89 항체 1의 가변 중쇄와 적어도 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD89 항체는 예시적인 항-CD89 항체 1의 중쇄와 적어도 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 특정 예에서, 항-CD89 항체는 예시적인 항-CD89 항체 1의 가변 경쇄와 적어도 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 특정 예에서, 항-CD89 항체는 예시적인 항-CD89 항체 1의 경쇄와 적어도 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-CD89 항체는 예시적인 항-CD89 항체 1의 가변 중쇄 및 가변 경쇄와 적어도 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD89 항체는 예시적인 항-CD89 항체 1의 중쇄와 적어도 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄와 적어도 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 예시적인 항-CD89 항체 1의 가변 중쇄는 CH1 도메인 및 힌지 영역을 포함하는 중쇄 불변 영역에 연결된다. 일부 실시양태에서, 예시적인 항-CD89 항체 1의 가변 중쇄는 CH3 도메인을 포함하는 중쇄 불변 영역에 연결된다. 특정 실시양태에서, 예시적인 항-CD89 항체 1의 가변 중쇄는 CH1 도메인, 힌지 영역, 및 IgG4로부터의 CH2 도메인, 및 CH3 도메인 (예를 들어, IgG1로부터)을 포함하는 중쇄 불변 영역에 연결된다. 특정 실시양태에서, 예시적인 항-CD89 항체 1의 가변 중쇄는 CH1 도메인, CH2 도메인, 및 IgG1 (예를 들어, 인간 IgG1, 예를 들어, IgG1m3 알로타입)로부터의 CH3 도메인, 및 IgG3 힌지 영역 (예를 들어, WO2017/096221에 기재된 "개방" IgG3 힌지 변이체 "IgG3 C-")을 포함하는 중쇄 불변 영역에 연결된다. 특정 실시양태에서, 이러한 키메라 항체는 키메라 항체의 안정성을 증가시키는 중쇄 불변 영역에서의 1개 이상의 추가의 돌연변이를 함유한다. 특정 실시양태에서, 중쇄 불변 영역은 항체의 성질을 변형시키는 치환을 포함한다 (예를 들어, Fc 수용체 결합을 감소시키고, 항체 글리코실화를 증가 또는 감소시키고, C1q와의 결합을 감소시키고, 반감기를 증가시키고, 이펙터 기능을 감소시킴).
특정 실시양태에서, 항-CD89 항체는 IgG 항체이다. 한 실시양태에서, 항체는 IgG1이다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 IgG2이다. 일부 실시양태에서, 항체는 키메라 중쇄 불변 영역을 갖는다 (예를 들어, CH1, 힌지, 및 IgG4의 CH2 영역 및 IgG1의 CH3 영역을 가짐).
특별한 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 G1m1; nG1m2; G1m3; G1m17,1; G1m17,1,2; G1m3,1; 또는 G1m17의 알로타입을 갖는 IgG1 중쇄를 포함한다.
구체적인 실시양태에서, 예시적인 항-CD89 항체 1의 VH는 야생형 IgG1m3 Fc (서열식별번호:77)에 연결된다. 특정 예에서, 예시적인 항-CD89 항체 1의 VH는 서열식별번호:77에서 이루어진 1 내지 10 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 아미노산 치환 (예를 들어, 이펙터 기능을 감소시키고/거나 반감기를 증가시키기 위해)을 갖는 돌연변이된 IgG1m3 서열에 연결된다. 예시적인 아미노산 치환은 하기에 기재된다.
구체적인 실시양태에서, 예시적인 항-CD89 항체 1의 VL은 인간 람다 2 서열 (서열식별번호:89)에 연결된다. 특정 예에서, 예시적인 항-CD89 항체 1의 VL은 서열식별번호:89에서 이루어진 1 내지 10 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 아미노산 치환을 갖는 돌연변이된 인간 람다 2 서열에 연결된다. 이러한 아미노산 치환은 하기에 기재된다.
특정 실시양태에서, 항-CD89 항체는 인간 IgG1/인간 람다 항체이다.
항체, 예컨대 예시적인 항-CD89 항체 1은 예를 들어 항체의 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 제조하고 발현시킴으로써 제조될 수 있다.
다중특이적 항체
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 다중특이적 항체를 특징으로 한다. 다중특이적 항체는 2개 이상의 상이한 에피토프에 결합하는 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체, 3가 항체, 4가 항체)이다. 상기 기재된 항-gp120 및 항-CD3 항체 또는 항-gp120 및 항-CD89는 다중특이적 항체의 일부로서 포함될 수 있다. 다중특이적 항체는 다중특이적 항체의 항-gp120 또는 항-CD3 (또는 항-CD89) 항체 결합 부위에 의해 결합되지 않는 적어도 1개의 다른 항원 또는 1개의 다른 에피토프에 대한 결합 부위를 가질 수 있다. 항-gp120/항-CD3 다중특이적 항체 또는 항-gp120/항-CD89 다중특이적 항체는 이합체화 도메인 및 3개 이상의 (예를 들어, 3, 4, 5, 6개의) 항원 결합 부위를 포함할 수 있다. 예시적인 이합체화 도메인은 Fc 영역을 포함한다 (또는 그로 이루어진다). 항-gp120/항-CD3 다중특이적 항체 또는 항-gp120/항-CD89 다중특이적 항체는 3 내지 약 8 (즉, 3, 4, 5, 6, 7, 8) 개의 항원 결합 부위를 포함할 수 있다 (또는 그로 이루어질 수 있다). 다중특이적 항체는 임의적으로 적어도 1개의 폴리펩티드 쇄 (예를 들어, 2개의 폴리펩티드 쇄, 3개 폴리펩티드 쇄)를 포함하며, 폴리펩티드 쇄(들)은 3개 이상의 가변 도메인을 포함한다. 예를 들어, 폴리펩티드 쇄(들)은 예를 들어, VD1-(X1)n-VD2-(X2)n-Fc, 또는 VD1-(X1)n-VD2-(X2)n-VD3-(X3)n-Fc를 포함할 수 있으며, 여기서 VD1은 제1 가변 도메인이고, VD2는 제2 가변 도메인이고, VD3은 제3 가변 도메인이고, Fc는 Fc 영역의 폴리펩티드 쇄이고, X1, X2 및 X3은 아미노산 또는 펩티드 스페이서를 나타내고, n은 0 또는 1이다. 특정 예에서, 가변 도메인은 각각 scFv일 수 있다. 다중특이적 항체는 항체의 폴리펩티드 쇄를 코딩하는 핵산의 재조합 발현에 의해 용이하게 생성될 수 있다.
이중특이적 항체
한 측면에서, 다중특이적 항체는 이중특이적 항체이다. 이중특이적 항체는 2개의 상이한 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 항체이다. 이중특이적 항체는 2개의 "아암"을 갖는다. 이중특이적 항체의 1개의 아암은 1개의 에피토프에 결합하고, 다른 아암은 또 다른 에피토프에 결합한다. 한 실시양태에서, 이중특이적 항체의 1개의 아암은 제1 항원에 결합하고, 이중특이적 항체의 다른 아암은 제2 항원에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 이중특이적 항체의 2개의 아암은 동일한 항원의 2개의 상이한 에피토프에 결합한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 gp120에 특이적으로 결합하고 제2 항원 (예를 들어, 세포 방어 메카니즘을 감염된 세포에 집중시키고 국학시키도록 하기 위해 백혈구 상의 촉발 분자, 예컨대 T-세포 수용체 분자 (예를 들어, CD3), 또는 IgG의 경우 Fc 수용체 (FcγR), 예컨대 FcγRI (CD64), FcγRII (CD32), FcγRIII (CD16), 또는 CD89))에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체를 특징으로 한다.
특별한 실시양태에서, 이중특이적 항체의 1개의 아암은 gp120에 특이적으로 결합하고, 다른 아암은 CD3 (예를 들어, 인간 CD3 (예를 들어, 인간 CD3ε, 인간 CD3δ))에 특이적으로 결합한다. 또 다른 특별한 실시양태에서, 이중특이적 항체의 1개의 아암은 gp120에 특이적으로 결합하고, 다른 아암은 CD89 (예를 들어, 인간 CD89)에 특이적으로 결합한다. 특정 실시양태에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 예시적인 항-gp120 항체 1의 6개의 CDR을 포함한다. 일부 예에서, CDR은 카바트에 따라 정의된다. 다른 실시양태에서, CDR은 코티아에 따라 정의된다. 여전히 다른 실시양태에서, CDR은 IMGT 정의에 따라 정의된다. 여전히 다른 실시양태에서, CDR은 오네게르 정의에 따라 정의된다. 특정 실시양태에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 예시적인 항-gp120 항체 1의 VH (서열식별번호:7)와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 예시적인 항-gp120 항체 1의 VL (서열식별번호:8)과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 각각 예시적인 항-gp120 항체 1의 VH (서열식별번호:7) 및 VL (서열식별번호:8)과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 각각 예시적인 항-gp120 항체 2의 VH (서열식별번호:7) 및 VL (서열식별번호:81)과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 각각 예시적인 항-gp120 항체 3의 VH (서열식별번호:7) 및 VL (서열식별번호:82)과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 각각 예시적인 항-gp120 항체 4의 VH (서열식별번호:7) 및 VL (서열식별번호:83)과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 각각 예시적인 항-gp120 항체 5의 VH (서열식별번호:7) 및 VL (서열식별번호:84)과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 예시적인 항-gp120 항체 1의 중쇄 (서열식별번호:9)와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 예시적인 항-gp120 항체 1의 경쇄 (서열식별번호:10)와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 각각 예시적인 항-gp120 항체 1의 중쇄 (서열식별번호:9) 및 경쇄 (서열식별번호:10)와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 예에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 각각 예시적인 항-gp120 항체 2의 중쇄 (서열식별번호:9) 및 경쇄 (서열식별번호:40)와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 예에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 각각 예시적인 항-gp120 항체 3의 중쇄 (서열식별번호:9) 및 경쇄 (서열식별번호:78)와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 예에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 각각 예시적인 항-gp120 항체 4의 중쇄 (서열식별번호:9) 및 경쇄 (서열식별번호:79)와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 예에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 각각 예시적인 항-gp120 항체 5의 중쇄 (서열식별번호:9) 및 경쇄 (서열식별번호:80)와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 서열식별번호:7 및 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 서열식별번호:7 및 서열식별번호:81의 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 서열식별번호:7 및 서열식별번호:82의 아미노산 서열을 포함한다. 여전히 또 다른 실시양태에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 서열식별번호:7 및 서열식별번호:83의 아미노산 서열을 포함한다. 추가의 실시양태에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 서열식별번호:7 및 서열식별번호:84의 아미노산 서열을 포함한다. 한 특별한 실시양태에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 서열식별번호:9 및 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 특별한 실시양태에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 서열식별번호:9 및 서열식별번호:40의 아미노산 서열을 포함한다. 여전히 또 다른 특별한 실시양태에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 서열식별번호:9 및 서열식별번호:78의 아미노산 서열을 포함한다. 추가의 실시양태에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 서열식별번호:9 및 서열식별번호:79의 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 서열식별번호:9 및 서열식별번호:80의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 예에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 서열식별번호: 21에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 단백질에 결합한다. 일부 예에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 서열식별번호: 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 단백질에 결합한다. 일부 예에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 유리 HIV-1 바이러스에 결합한다. 일부 예에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 HIV-1 감염된 세포에 결합한다. 일부 예에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 유리 HIV-1 바이러스 및 HIV-1 감염된 세포 둘 다에 결합한다. 특정 경우에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 HIV-1의 적어도 2가지 상이한 균주 (예를 들어, 그룹 M, 그룹 N, 그룹 O, 또는 그룹 P)에 결합한다. 한 실시양태에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 pWITO.c/2474 (수탁 번호 JN944948 및 NIH AIDS 시약 프로그램 카탈로그 번호 11739)에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, gp120에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 pCH058.c/2960 (수탁 번호 JN944940 및 NIH AIDS 시약 프로그램 카탈로그 번호 700010058)에 결합한다.
특정 실시양태에서, 인간 CD3에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 예시적인 항-인간 CD3 항체 1의 6개의 CDR을 포함한다. 일부 예에서, CDR은 카바트에 따라 정의된다. 다른 실시양태에서, CDR은 코티아에 따라 정의된다. 여전히 다른 실시양태에서, CDR은 IMGT 정의에 따라 정의된다. 여전히 다른 실시양태에서, CDR은 오네게르 정의에 따라 정의된다. 특정 실시양태에서, 인간 CD3에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 예시적인 항-CD3 항체 1의 VH (서열식별번호:17)와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 인간 CD3에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 예시적인 항-CD3 항체 1의 VL (서열식별번호:18)과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 인간 CD3에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 각각 예시적인 항-인간 CD3 항체 1의 VH (서열식별번호:17) 및 VL (서열식별번호:18)과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 인간 CD3에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 예시적인 항-인간 CD3 항체 1의 중쇄 (서열식별번호:19)와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD3에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 예시적인 항-인간 CD3 항체 1의 경쇄 (서열식별번호:20)와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 인간 CD3에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 각각 예시적인 항-인간 CD3 항체 1의 중쇄 (서열식별번호:19) 및 경쇄 (서열식별번호:20)와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특별한 실시양태에서, 인간 CD3에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 서열식별번호:17 및 서열식별번호:18의 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 특별한 실시양태에서, 인간 CD3에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 서열식별번호:19 및 서열식별번호:20의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 인간 CD3에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 인간 CD3ε에 결합한다.
특정 실시양태에서, 인간 CD89에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 예시적인 항-인간 CD89 항체 1의 6개의 CDR을 포함한다. 일부 예에서, CDR은 카바트에 따라 정의된다. 다른 실시양태에서, CDR은 코티아에 따라 정의된다. 여전히 다른 실시양태에서, CDR은 IMGT 정의에 따라 정의된다. 여전히 다른 실시양태에서, CDR은 오네게르 정의에 따라 정의된다. 특정 실시양태에서, 인간 CD89에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 예시적인 항-CD89 항체 1의 VH (서열식별번호:96)와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 인간 CD89에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 예시적인 항-CD89 항체 1의 VL (서열식별번호:101)과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 인간 CD89에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 각각 예시적인 항-인간 CD89 항체 1의 VH (서열식별번호:96) 및 VL (서열식별번호:101)과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 인간 CD89에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 예시적인 항-인간 CD89 항체 1의 중쇄 (서열식별번호:97)와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD89에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 예시적인 항-인간 CD89 항체 1의 경쇄 (서열식별번호:102)와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 인간 CD89에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 각각 예시적인 항-인간 CD89 항체 1의 중쇄 (서열식별번호:97) 및 경쇄 (서열식별번호:102)와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특별한 실시양태에서, 인간 CD89에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 서열식별번호:96 및 서열식별번호:101의 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 특별한 실시양태에서, 인간 CD89에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 서열식별번호:97 및 서열식별번호:102의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 인간 CD89에 결합하는 이중특이적 항체의 아암은 인간 CD89에 결합한다.
특정 실시양태에서, 이중특이적 항체의 1개의 아암은 gp120에 결합하는 scFv를 포함한다. 특정 실시양태에서, 이중특이적 항체의 1개의 아암은 인간 CD3에 결합하는 scFv를 포함한다. 특정 실시양태에서, 이중특이적 항체의 1개의 아암은 인간 CD89에 결합하는 scFv에 결합한다. 특정 실시양태에서, 이중특이적 항체는 키메라 항체 또는 인간화 항체를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 이중특이적 항체는 F(ab')2 단편을 포함할 수 있다.
한 측면에서, 본 개시내용의 이중특이적 항체는 gp120 및 인간 CD3 (예를 들어, CD3ε, CD3δ)에 결합하고, HIV-1 감염된 세포의 사멸을 유발할 수 있다. 한 예에서, gp120에 결합하는 이러한 이중특이적 항체는 서열식별번호:1의 VH-CDR1, 서열식별번호:2의 VH-CDR2, 서열식별번호:3의 VH-CDR3, 서열식별번호:4의 VL-CDR1, 서열식별번호:5의 VL-CDR2, 및 서열식별번호:6의 VL-CDR3을 함유한다. 한 예에서, 인간 CD3에 결합하는 이러한 이중특이적 항체는 서열식별번호:11의 VH-CDR1, 서열식별번호:12의 VH-CDR2, 서열식별번호:13의 VH-CDR3, 서열식별번호:14의 VL-CDR1, 서열식별번호:15의 VL-CDR2, 및 서열식별번호:16의 VL-CDR3을 함유한다. 또 다른 예에서, gp120 및 인간 CD3에 결합하는 이중특이적 항체는 그의 gp120-결합 아암 상에: 서열식별번호:1의 VH-CDR1, 서열식별번호:2의 VH-CDR2, 서열식별번호:3의 VH-CDR3, 서열식별번호:4의 VL-CDR1, 서열식별번호:5의 VL-CDR2, 및 서열식별번호:6의 VL-CDR3을 함유하고; 그의 인간 CD3-결합 아암 상에: 서열식별번호:11의 VH-CDR1, 서열식별번호:12의 VH-CDR2, 서열식별번호:13의 VH-CDR3, 서열식별번호:14의 VL-CDR1, 서열식별번호:15의 VL-CDR2, 및 서열식별번호:16의 VL-CDR3을 함유한다.
또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 gp120-결합 아암 상에, 서열식별번호:7과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 또는 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 gp120-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환, 삽입 및/또는 결실을 제외하고는 서열식별번호:7과 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 gp120-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환을 제외하고는 서열식별번호:7과 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 gp120-결합 아암 상에, 서열식별번호:8, 81, 82, 83 또는 84와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 또는 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 VL을 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 gp120-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환, 삽입 및/또는 결실을 제외하고는 서열식별번호:8, 81, 82, 83 또는 84와 동일한 아미노산 서열을 갖는 VL을 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 gp120-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환을 제외하고는 서열식별번호:8, 81, 82, 83 또는 84와 동일한 아미노산 서열을 갖는 VL을 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 gp120-결합 아암 상에, 서열식별번호:9와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 또는 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 gp120-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환, 삽입 및/또는 결실을 제외하고는 서열식별번호:9와 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 gp120-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환을 제외하고는 서열식별번호:9와 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 gp120-결합 아암 상에, 서열식별번호:10, 40, 78, 79 또는 80과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 또는 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 gp120-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환, 삽입 및/또는 결실을 제외하고는 서열식별번호:10, 40, 78, 79 또는 80과 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 gp120-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환을 제외하고는 서열식별번호:10, 40, 78, 79 또는 80과 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 함유한다.
또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 인간 CD3-결합 아암 상에, 서열식별번호:17과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 또는 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 인간 CD3-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환, 삽입 및/또는 결실을 제외하고는 서열식별번호:17과 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 인간 CD3-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환을 제외하고는 서열식별번호:17과 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 인간 CD3-결합 아암 상에, 서열식별번호:18과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 또는 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 VL을 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 인간 CD3-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환, 삽입 및/또는 결실을 제외하고는 서열식별번호:18과 동일한 아미노산 서열을 갖는 VL을 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 인간 CD3-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환을 제외하고는 서열식별번호:18과 동일한 아미노산 서열을 갖는 VL을 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 인간 CD3-결합 아암 상에, 서열식별번호:19와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 또는 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 인간 CD3-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환, 삽입 및/또는 결실을 제외하고는 서열식별번호:19와 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 인간 CD3-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환을 제외하고는 서열식별번호:19와 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 인간 CD3-결합 아암 상에, 서열식별번호:20과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 또는 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 인간 CD3-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환, 삽입 및/또는 결실을 제외하고는 서열식별번호:20와 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 인간 CD3-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환을 제외하고는 서열식별번호:20와 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 함유한다.
한 측면에서, 본 개시내용의 이중특이적 항체는 gp120 및 인간 CD89에 결합하며, HIV-1 감염된 세포의 사멸을 유발할 수 있다. CD89는 호중구 상에서 우세하게 발현되는 IgA 수용체이며, 따라서 이 이중특이적 항체는 호중구의 동원을 증강시켜 HIV-감염된 세포를 사멸시킬 수 있다. 한 예에서, gp120에 결합하는 이러한 이중특이적 항체는 서열식별번호:1의 VH-CDR1, 서열식별번호:2의 VH-CDR2, 서열식별번호:3의 VH-CDR3, 서열식별번호:4의 VL-CDR1, 서열식별번호:5의 VL-CDR2, 및 서열식별번호:6의 VL-CDR3을 함유한다. 한 예에서, 인간 CD89에 결합하는 이러한 이중특이적 항체는 서열식별번호:98의 VH-CDR1, 서열식별번호:99의 VH-CDR2, 서열식별번호:100의 VH-CDR3, 서열식별번호:103의 VL-CDR1, 서열식별번호:104의 VL-CDR2, 및 서열식별번호:105의 VL-CDR3을 함유한다. 또 다른 예에서, gp120 및 인간 CD89에 결합하는 이중특이적 항체는 그의 gp120-결합 아암 상에: 서열식별번호:1의 VH-CDR1, 서열식별번호:2의 VH-CDR2, 서열식별번호:3의 VH-CDR3, 서열식별번호:4의 VL-CDR1, 서열식별번호:5의 VL-CDR2, 및 서열식별번호:6의 VL-CDR3을 함유하고; 그의 인간 CD89-결합 아암 상에: 서열식별번호:98의 VH-CDR1, 서열식별번호:99의 VH-CDR2, 서열식별번호:100의 VH-CDR3, 서열식별번호:103의 VL-CDR1, 서열식별번호:104의 VL-CDR2, 및 서열식별번호:105의 VL-CDR3을 함유한다.
또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 gp120-결합 아암 상에, 서열식별번호:7과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 또는 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 gp120-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환, 삽입 및/또는 결실을 제외하고는 서열식별번호:7과 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 gp120-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환을 제외하고는 서열식별번호:7과 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 gp120-결합 아암 상에, 서열식별번호:8, 81, 82, 83 또는 84와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 또는 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 VL을 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 gp120-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환, 삽입 및/또는 결실을 제외하고는 서열식별번호:8, 81, 82, 83 또는 84와 동일한 아미노산 서열을 갖는 VL을 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 gp120-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환을 제외하고는 서열식별번호:8, 81, 82, 83 또는 84와 동일한 아미노산 서열을 갖는 VL을 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 gp120-결합 아암 상에, 서열식별번호:9와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 또는 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 gp120-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환, 삽입 및/또는 결실을 제외하고는 서열식별번호:9와 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 gp120-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환을 제외하고는 서열식별번호:9와 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 gp120-결합 아암 상에, 서열식별번호:10, 40, 78, 79 또는 80과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 또는 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 gp120-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환, 삽입 및/또는 결실을 제외하고는 서열식별번호:10, 40, 78, 79 또는 80과 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 gp120-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환을 제외하고는 서열식별번호:10, 40, 78, 79 또는 80과 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 함유한다.
또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 인간 CD89-결합 아암 상에, 서열식별번호:96과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 또는 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 인간 CD89-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환, 삽입 및/또는 결실을 제외하고는 서열식별번호:96과 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 인간 CD89-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환을 제외하고는 서열식별번호:96과 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 인간 CD89-결합 아암 상에, 서열식별번호:101과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 또는 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 VL을 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 인간 CD89-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환, 삽입 및/또는 결실을 제외하고는 서열식별번호:101과 동일한 아미노산 서열을 갖는 VL을 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 인간 CD89-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환을 제외하고는 서열식별번호:101과 동일한 아미노산 서열을 갖는 VL을 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 인간 CD89-결합 아암 상에, 서열식별번호:97과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 또는 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 인간 CD89-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환, 삽입 및/또는 결실을 제외하고는 서열식별번호:97과 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 인간 CD89-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환을 제외하고는 서열식별번호:97과 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 인간 CD89-결합 아암 상에, 서열식별번호:102와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 또는 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 인간 CD89-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환, 삽입 및/또는 결실을 제외하고는 서열식별번호:102와 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 함유한다. 또 다른 예에서, 이러한 이중특이적 항체는, 그의 인간 CD89-결합 아암 상에, 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) 개의 치환을 제외하고는 서열식별번호:102와 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 함유한다.
특정 실시양태에서, 이중특이적 항체는 그 안에 0-10개의 아미노산 치환을 갖는 인간 IgG1 항체로부터의 Fc 도메인을 갖는다. Fc 도메인은 이중특이적 항체의 제1 성분 (예를 들어, gp120 결합 부분)으로부터의 1개의 "레그(leg)" (힌지-CH2-CH3) 및 이중특이적 항체의 제2 성분 (예를 들어, CD3- 또는 CD89-결합 부분)으로부터의 또 다른 "레그" (힌지-CH2-CH3)를 함유한다. 치환은 하나 또는 둘 다의 "레그"에 있을 수 있다. 특정 실시양태에서, Fc 도메인은 하나 또는 둘 다의 "레그"에서 하기 돌연변이 (EU 넘버링): N297A 또는 N297Q, L234F, L235E, D265A, 또는 P331S 중 1개 이상 (1, 2, 3, 4 또는 5개)을 갖는다.
본원에 개시된 바와 같이 gp120 및 CD3에 결합하거나 또는 gp120 및 CD89에 결합하는 이중특이적 항체는 2가지 상이한 모노클로날 항체를 화학적으로 연결시킴으로써 또는 2가지 하이브리도마 세포주를 융합시켜 하이브리드-하이브리도마를 생성함으로써 제조될 수 있다. 사용될 수 있는 다른 이중특이적 항체 기술 플랫폼에는 예를 들어, Κλ-바디, SMIPs, DNLs, Covx-바디, 펩티바디, 가닥-교환 조작된 도메인 바디 (SEEDbodies), dAbs, 디아바디, 아피바디(Affibodies), 피노머(Fynomer), 쿠니츠(Kunitz) 도메인, TandAbs, 나노바디, Albu-dabs, DARTs, DVD-IG, scFv-Igs, SVD-Igs, dAb-Igs, 놉-인투-홀(Knobs-in-Holes), BiTe 플랫폼, 크로스맙® 플랫폼, 듀오바디® 및 트리오맙(TriomAb)®이 포함된다. 본원에 개시된 이중특이적 항체를 제조하는데 사용될 수 있는 이중특이적 포맷의 비제한적인 예는 [Del Bano et al., Antibodies, 5:1 (2016); Garber et al., Nature Reviews Drug Discovery, 13:799-801 (2014)]에서 제공된다.
한 실시양태에서, 본 개시내용의 이중특이적 항체 분자는 상이한 항원-결합 영역을 포함하는 2개의 아암을 갖는 단일 항체를 포함하며, 1개의 아암은 제1 항원 예컨대 gp120에 대해 특이성을 갖고, 제2 아암은 제2 항원 예컨대 인간 CD3 또는 인간 CD89에 대해 특이성을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 이중특이적 항체 분자는 제1 항원 예컨대 gp120에 대해 특이적인 1개의 항원-결합 영역 또는 아암 및 제2 항원 예컨대 인간 CD3 또는 인간 CD89에 대해 특이적인 제2 항원-결합 영역 또는 아암을 갖는 단일 항체를 포함한다. 여전히 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 이중특이적 항체 분자는, 예를 들어 추가의 펩티드 링커에 의해 나란히 연결된 2개의 scFv를 통해, 제1 항원 예컨대 gp120에 대한 제1 특이성 및 제2 항원 예컨대 인간 CD3 또는 인간 CD89에 대한 제2 특이성을 갖는 단일 쇄 항체를 포함한다. 추가의 실시양태에서, 본 개시내용의 이중특이적 항체 분자에는 이중-가변-도메인 항체 (DVD-Ig)가 포함되며, 여기서 각각의 경쇄 및 중쇄는 짧은 펩티드 연결을 통해 나란히 있는 2개의 가변 도메인을 함유한다 (Wu et al., Generation and Characterization of a Dual Variable Domain Immunoglobulin (DVD-Ig™) Molecule, In: Antibody Engineering, Springer Berlin Heidelberg (2010)). 일부 실시양태에서, 이중특이적 항체는 화학적으로-연결된 이중특이적 (Fab')2 단편이다. 다른 실시양태에서, 이중특이적 항체는 Tandab (즉, 각각의 표적 항원에 대한 2개의 결합 부위를 갖는 4가의 이중특이적 항체를 생성하는 2개의 단일 쇄 디아바디의 융합체)를 포함한다. 특정 실시양태에서, 이중특이적 항체는 다가 분자를 생성하는 scFv와 디아바디의 조합물인 플렉시바디이다. 여전히 또 다른 실시양태에서, 이중특이적 항체는 단백질 키나제 A에서 "이합체화 및 도킹 도메인"을 기반으로 하여, Fab에 적용될 때, 상이한 Fab 단편에 연결된 2개의 동일한 Fab 단편으로 이루어진 3가의 이중특이적 결합 단백질을 생성할 수 있는 "도킹 및 록킹(dock and lock)" 분자를 포함한다. 또 다른 예에서, 본 개시내용의 이중특이적 항체는 예를 들어 인간 Fab-아암의 양 말단에 융합된 2개의 scFv를 포함하는 "스콜피온(Scorpion) 분자"를 포함한다. 여전히 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 이중특이적 항체는 디아바디를 포함한다.
이중특이적 항체의 예시적인 부류에는 이종이합체화를 일으키도록 상보성 CH3 도메인을 갖는 IgG-유사 분자; 전장 IgG 항체가 추가의 Fab 단편 또는 Fab 단편의 일부에 융합된 것인 IgG 융합 분자; 단일 쇄 Fv 분자 또는 안정화된 디아바디가 중쇄 불변-도메인, 그의 Fc-영역 또는 일부에 융합된 것인 Fc 융합 분자; 상이한 Fab-단편이 함께 융합된 것인 Fab 융합 분자; 분자의 양측 각각이 적어도 2가지 상이한 항체의 Fab 단편 또는 Fab 단편의 일부를 함유하는 것인 재조합 IgG-유사 이중 표적화 분자; 상이한 단일 쇄 Fv 분자 또는 상이한 디아바디 또는 상이한 중쇄 항체 (예를 들어 도메인 항체, 나노바디)가 서로 융합되거나 또는 또 다른 단백질 또는 담체 분자에 융합된 것인 scFv- 및 디아바디-기반 및 중쇄 항체 (예를 들어, 도메인 항체, 나노바디)가 포함되나 이로 제한되는 것은 아니다.
Fab 융합 이중특이적 항체의 예에는 F(ab)2 (메다렉스(Medarex)/암젠(AMGEN)), 이중-작용 또는 비스-Fab (제넨테크), 도킹-및-록킹 (DNL) (이뮤노메딕스(ImmunoMedics)), 2가 이중특이적 (바이오테크놀(Biotecnol)) 및 Fab-Fv (UCB-셀테크(UCB-Celltech))가 포함되나 이로 제한되는 것은 아니다.
scFv-, 디아바디-기반 및 도메인 항체의 예에는 이중특이적 T 세포 인게이저 (BITE) (마이크로메트(Micromet), 탠덤 디아바디 (Tandab) (아피메드(Affimed)), 이중 친화도 재표적화 기술 (DART) (마크로제닉스(MacroGenics)), 단일-쇄 디아바디 (아카데믹(Academic)), TCR-유사 항체 (AIT, 리셉터로직스(ReceptorLogics)), 인간 혈청 알부민 ScFv 융합체 (메리맥(Merrimack)) 및 콤바디(COMBODY) (에피젠 바이오테크(Epigen Biotech)), 이중 표적화 나노바디 (아블링스(Ablynx)), 및 이중 표적화 중쇄 단독 도메인 항체가 포함되나 이로 제한되는 것은 아니다.
듀오바디
본 개시내용의 이중특이적 항체는 gp120 및 제2 항원 (예를 들어, 인간 CD3 예컨대 인간 CD3ε 또는 인간 CD3δ; 인간 CD89)에 결합하는 듀오바디®일 수 있다. 듀오바디®는 이중특이적 항체의 1개의 중쇄의 불변 영역의 CH3 영역에 K409R 돌연변이 및 다른 중쇄의 불변 영역의 CH3 영역에 F405L, F405A, F405D, F405E, F405H, F405I, F405K, F405M, F405N, F405Q, F405S, F405T, F405V, F405W 및 F405Y로 이루어진 군으로부터 선택된 돌연변이를 포함하는 이중특이적 IgG1 항체이다. 구체적인 실시양태에서, 듀오바디®는 이중특이적 항체의 1개의 중쇄의 불변 영역의 CH3 영역에 K409R 돌연변이 및 다른 중쇄의 불변 영역의 CH3 영역에 F405L 돌연변이를 포함하는 이중특이적 IgG1 항체이다.
특정 실시양태에서, 상기 기재된 바와 같이 gp120에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 F405L, F405A, F405D, F405E, F405H, F405I, F405K, F405M, F405N, F405Q, F405S, F405T, F405V, F405W 및 F405Y로 이루어진 군으로부터 선택된 돌연변이를 포함하는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함하고, 상기 기재된 바와 같이 인간 CD3 (또는 인간 CD89)에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 K409R 돌연변이를 포함하는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 상기 기재된 바와 같이 gp120에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 F405L 돌연변이를 포함하는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함하고, 상기 기재된 바와 같이 인간 CD3에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 K409R 돌연변이를 포함하는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함한다.
다른 실시양태에서, 상기 기재된 바와 같이 gp120에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 K409R 돌연변이를 포함하는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함하고, 상기 기재된 바와 같이 인간 CD3 (또는 인간 CD89)에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 F405L, F405A, F405D, F405E, F405H, F405I, F405K, F405M, F405N, F405Q, F405S, F405T, F405V, F405W 및 F405Y로 이루어진 군으로부터 선택된 돌연변이를 포함하는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 상기 기재된 바와 같이 gp120에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 K409R 돌연변이를 포함하는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함하고, 상기 기재된 바와 같이 인간 CD3 (또는 인간 CD89)에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 F405L 돌연변이를 포함하는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함한다.
듀오바디®의 CDR 및 VH 및 VL은 상기에 상세히 기재된 항-gp120, 항-CD3, 또는 항-CD89 아미노산 서열 중 임의의 것일 수 있다.
한 실시양태에서, 듀오바디®의 gp120-결합 아암은 서열식별번호:1의 VH-CDR1, 서열식별번호:2의 VH-CDR2, 서열식별번호:3의 VH-CDR3, 서열식별번호:4의 VL-CDR1, 서열식별번호:5의 VL-CDR2, 및 서열식별번호:6의 VL-CDR3을 포함한다. 한 실시양태에서, 듀오바디®의 CD3-결합 아암은 서열식별번호:11의 VH-CDR1, 서열식별번호:12의 VH-CDR2, 서열식별번호:13의 VH-CDR3, 서열식별번호:14의 VL-CDR1, 서열식별번호:15의 VL-CDR2, 및 서열식별번호:16의 VL-CDR3을 포함한다. 또 다른 예에서, gp120 및 인간 CD3에 결합하는 듀오바디®은 그의 gp120-결합 아암 상에: 서열식별번호:1의 VH-CDR1, 서열식별번호:2의 VH-CDR2, 서열식별번호:3의 VH-CDR3, 서열식별번호:4의 VL-CDR1, 서열식별번호:5의 VL-CDR2, 및 서열식별번호:6의 VL-CDR3을 함유하고; 그의 인간 CD3-결합 아암 상에: 서열식별번호:11의 VH-CDR1, 서열식별번호:12의 VH-CDR2, 서열식별번호:13의 VH-CDR3, 서열식별번호:14의 VL-CDR1, 서열식별번호:15의 VL-CDR2, 및 서열식별번호:16의 VL-CDR3을 함유한다.
한 실시양태에서, 듀오바디®의 gp120-결합 아암은 서열식별번호:7의 VH 및 서열식별번호:8의 VL을 포함한다. 한 실시양태에서, 듀오바디®의 gp120-결합 아암은 서열식별번호:7의 VH 및 서열식별번호:81의 VL을 포함한다. 한 실시양태에서, 듀오바디®의 gp120-결합 아암은 서열식별번호:7의 VH 및 서열식별번호:82의 VL을 포함한다. 한 실시양태에서, 듀오바디®의 gp120-결합 아암은 서열식별번호:7의 VH 및 서열식별번호:83의 VL을 포함한다. 한 실시양태에서, 듀오바디®의 gp120-결합 아암은 서열식별번호:7의 VH 및 서열식별번호:84의 VL을 포함한다. 한 실시양태에서, 듀오바디®의 CD3-결합 아암은 서열식별번호:17의 VH 및 서열식별번호:18의 VL을 포함한다. 한 실시양태에서, 듀오바디®의 CD89-결합 아암은 서열식별번호:96의 VH 및 서열식별번호:101의 VL을 포함한다. 또 다른 예에서, gp120 및 인간 CD3에 결합하는 듀오바디®은 그의 gp120-결합 아암 상에: 서열식별번호:7의 VH 및 서열식별번호:8의 VL을 함유하고, 그의 인간 CD3-결합 아암 상에: 서열식별번호:17의 VH 및 서열식별번호:18의 VL을 함유한다. 또 다른 예에서, gp120 및 인간 CD89에 결합하는 듀오바디®는 그의 gp120-결합 아암 상에: 서열식별번호:7의 VH 및 서열식별번호:8의 VL을 함유하고, 그의 인간 CD89-결합 아암 상에: 서열식별번호:96의 VH 및 서열식별번호:101의 VL을 함유한다. 한 예에서, gp120 및 인간 CD3에 결합하는 듀오바디®는 그의 gp120-결합 아암 상에: 서열식별번호:7의 VH 및 서열식별번호:81의 VL을 함유하고, 그의 인간 CD3-결합 아암 상에: 서열식별번호:17의 VH 및 서열식별번호:18의 VL을 함유한다. 한 예에서, gp120 및 인간 CD89에 결합하는 듀오바디®는 그의 gp120-결합 아암 상에: 서열식별번호:7의 VH 및 서열식별번호:81의 VL을 함유하고, 그의 인간 CD3-결합 아암 상에: 서열식별번호:96의 VH 및 서열식별번호:101의 VL을 함유한다. 한 예에서, gp120 및 인간 CD3에 결합하는 듀오바디®는 그의 gp120-결합 아암 상에: 서열식별번호:7의 VH 및 서열식별번호:82의 VL을 함유하고, 그의 인간 CD3-결합 아암 상에: 서열식별번호:17의 VH 및 서열식별번호:18의 VL을 함유한다. 한 예에서, gp120 및 인간 CD89에 결합하는 듀오바디®는 그의 gp120-결합 아암 상에: 서열식별번호:7의 VH 및 서열식별번호:82의 VL을 함유하고, 그의 인간 CD3-결합 아암 상에: 서열식별번호:96의 VH 및 서열식별번호:101의 VL을 함유한다. 한 예에서, gp120 및 인간 CD3에 결합하는 듀오바디®는 그의 gp120-결합 아암 상에: 서열식별번호:7의 VH 및 서열식별번호:83의 VL을 함유하고, 그의 인간 CD3-결합 아암 상에: 서열식별번호:17의 VH 및 서열식별번호:18의 VL을 함유한다. 한 예에서, gp120 및 인간 CD89에 결합하는 듀오바디®는 그의 gp120-결합 아암 상에: 서열식별번호:7의 VH 및 서열식별번호:83의 VL을 함유하고, 그의 인간 CD89-결합 아암 상에: 서열식별번호:96의 VH 및 서열식별번호:101의 VL을 함유한다. 한 예에서, gp120 및 인간 CD3에 결합하는 듀오바디®는 그의 gp120-결합 아암 상에: 서열식별번호:7의 VH 및 서열식별번호:84의 VL을 함유하고, 그의 인간 CD3-결합 아암 상에: 서열식별번호:17의 VH 및 서열식별번호:18의 VL을 함유한다. 한 예에서, gp120 및 인간 CD89에 결합하는 듀오바디®는 그의 gp120-결합 아암 상에: 서열식별번호:7의 VH 및 서열식별번호:84의 VL을 함유하고, 그의 인간 CD89-결합 아암 상에: 서열식별번호:96의 VH 및 서열식별번호:101의 VL을 함유한다. 또 다른 실시양태에서, gp120 및 인간 CD3에 결합하는 듀오바디®는 서열식별번호:9의 제1 중쇄 및 서열식별번호:10의 제1 경쇄; 및 서열식별번호:19의 제2 중쇄 및 서열식별번호:20의 제2 경쇄를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, gp120 및 인간 CD89에 결합하는 듀오바디®는 서열식별번호:9의 제1 중쇄 및 서열식별번호:10의 제1 경쇄; 및 서열식별번호:97의 제2 중쇄 및 서열식별번호:102의 제2 경쇄를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, gp120 및 인간 CD3에 결합하는 듀오바디®는 서열식별번호:9의 제1 중쇄 및 서열식별번호:40의 제1 경쇄; 및 서열식별번호:19의 제2 중쇄 및 서열식별번호:20의 제2 경쇄를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, gp120 및 인간 CD89에 결합하는 듀오바디®는 서열식별번호:9의 제1 중쇄 및 서열식별번호:40의 제1 경쇄; 및 서열식별번호:97의 제2 중쇄 및 서열식별번호:102의 제2 경쇄를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, gp120 및 인간 CD3에 결합하는 듀오바디®는 서열식별번호:9의 제1 중쇄 및 서열식별번호:78의 제1 경쇄; 및 서열식별번호:19의 제2 중쇄 및 서열식별번호:20의 제2 경쇄를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, gp120 및 인간 CD89에 결합하는 듀오바디®는 서열식별번호:9의 제1 중쇄 및 서열식별번호:78의 제1 경쇄; 및 서열식별번호:97의 제2 중쇄 및 서열식별번호:102의 제2 경쇄를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, gp120 및 인간 CD3에 결합하는 듀오바디®는 서열식별번호:9의 제1 중쇄 및 서열식별번호:79의 제1 경쇄; 및 서열식별번호:19의 제2 중쇄 및 서열식별번호:20의 제2 경쇄를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, gp120 및 인간 CD89에 결합하는 듀오바디®는 서열식별번호:9의 제1 중쇄 및 서열식별번호:79의 제1 경쇄; 및 서열식별번호:97의 제2 중쇄 및 서열식별번호:102의 제2 경쇄를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, gp120 및 인간 CD3에 결합하는 듀오바디®는 서열식별번호:9의 제1 중쇄 및 서열식별번호:80의 제1 경쇄; 및 서열식별번호:19의 제2 중쇄 및 서열식별번호:20의 제2 경쇄를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, gp120 및 인간 CD89에 결합하는 듀오바디®는 서열식별번호:9의 제1 중쇄 및 서열식별번호:80의 제1 경쇄; 및 서열식별번호:97의 제2 중쇄 및 서열식별번호:102의 제2 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, 항-gp120 x CD3 듀오바디®의 또는 항-gp120 x CD89 듀오바디®의 중쇄 중 하나는 하기 제공된 1개의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 또는 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나 또는 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10) 개의 아미노산 치환을 제외하고는 하기 제공된 아미노산 서열 중 1개와 동일한 아미노산 서열을 포함한다:
Figure pct00037
Figure pct00038
한 실시양태에서, 항-gp120 x CD3 듀오바디® 또는 항-gp120 x CD89 듀오바디®의 중쇄 중 하나는 하기 제공된 1개의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94% 또는 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나 또는 1 내지 10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10) 개의 아미노산 치환을 제외하고는 하기 제공된 1개의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다:
Figure pct00039
Figure pct00040
Figure pct00041
한 실시양태에서, 듀오바디®의 1개의 중쇄 불변 영역은 서열식별번호:64에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 듀오바디®의 다른 중쇄 불변 영역은 서열식별번호:74에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 듀오바디®의 1개의 중쇄 불변 영역은 서열식별번호:65에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 듀오바디®의 다른 중쇄 불변 영역은 서열식별번호:75에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 듀오바디®의 1개의 중쇄 불변 영역은 서열식별번호:62에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 듀오바디®의 다른 중쇄 불변 영역은 서열식별번호:72에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 여전히 또 다른 실시양태에서, 듀오바디®의 1개의 중쇄 불변 영역은 서열식별번호:63에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 듀오바디®의 다른 중쇄 불변 영역은 서열식별번호:73에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
한 실시양태에서, 듀오바디®의 gp120-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호:9에 제시된 아미노산 서열을 갖고, 듀오바디®의 gp120-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호:10에 제시된 아미노산 서열을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 듀오바디®의 gp120-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호: 9에 제시된 아미노산 서열을 갖고, 듀오바디®의 gp120-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호: 40에 제시된 아미노산 서열을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 듀오바디®의 gp120-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호: 9에 제시된 아미노산 서열을 갖고, 듀오바디®의 gp120-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호: 78에 제시된 아미노산 서열을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 듀오바디®의 gp120-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호: 9에 제시된 아미노산 서열을 갖고, 듀오바디®의 gp120-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호: 79에 제시된 아미노산 서열을 갖는다. 여전히 또 다른 실시양태에서, 듀오바디®의 gp120-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호: 9에 제시된 아미노산 서열을 갖고, 듀오바디®의 gp120-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호: 80에 제시된 아미노산 서열을 갖는다.
한 실시양태에서, gp120 X CD3 듀오바디®의 CD3-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호:19에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어지고, 듀오바디®의 CD3-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호:20에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진다.
한 실시양태에서, gp120 X CD89 듀오바디®의 CD89-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호:97에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어지고, 듀오바디®의 CD3-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호:102에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진다.
한 실시양태에서, gp120 X CD3 듀오바디®는 2개의 아암을 포함하며, 제1 아암은 gp120에 결합하는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 듀오바디®의 gp120-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호:9에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 또는 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, gp120-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호:10, 40, 78, 79 또는 80에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 또는 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 제2 아암은 CD3에 결합하는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 듀오바디®의 CD3-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호:19에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 또는 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, CD3-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호:20에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 또는 98% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
한 실시양태에서, gp120 X CD89 듀오바디®는 2개의 아암을 포함하며, 제1 아암은 gp120에 결합하는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 듀오바디®의 gp120-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호:9에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 또는 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, gp120-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호:10, 40, 78, 79 또는 80에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 또는 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 제2 아암은 CD89에 결합하는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 듀오바디®의 CD89-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호:97에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 또는 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, CD89-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호:102에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 또는 98% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
한 구체적인 실시양태에서, gp120 X CD3 듀오바디®는 2개의 아암을 포함하며, 제1 아암은 gp120에 결합하는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 듀오바디®의 gp120-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호:9에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, gp120-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호:10에 제시된 아미노산 서열을 포함하며, 제2 아암은 CD3에 결합하는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 듀오바디®의 CD3-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호:19에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, CD3-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호:20에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 1-10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10) 개의 아미노산 치환은 듀오바디®의 중쇄 불변 영역 중 하나 또는 둘 다의 임의의 성분 (예를 들어, CH1, 힌지, CH2, CH3) 내에 있을 수 있다. 특정 예에서, 아미노산 치환은 변경되지 않은 폴리펩티드에 비해 이펙터 기능을 변경 (예를 들어, 감소)시키고/거나 반감기를 증가시킨다. 특정 실시양태에서, 이들 치환은 보존적 아미노산 치환일 수 있다.
한 구체적인 실시양태에서, gp120 X CD89 듀오바디®는 2개의 아암을 포함하며, 제1 아암은 gp120에 결합하는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 듀오바디®의 gp120-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호:9에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, gp120-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호:10에 제시된 아미노산 서열을 포함하며, 제2 아암은 CD89에 결합하는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 듀오바디®의 CD89-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호:97에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, CD89-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호:102에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 1-10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10) 개의 아미노산 치환은 듀오바디®의 중쇄 불변 영역 중 하나 또는 둘 다의 임의의 성분 (예를 들어, CH1, 힌지, CH2, CH3) 내에 있을 수 있다. 특정 예에서, 아미노산 치환은 변경되지 않은 폴리펩티드에 비해 이펙터 기능을 변경 (예를 들어, 감소)시키고/거나 반감기를 증가시킨다. 특정 실시양태에서, 이들 치환은 보존적 아미노산 치환일 수 있다.
또 다른 구체적인 실시양태에서, gp120 X CD3 듀오바디®는 2개의 아암을 포함하며, 제1 아암은 gp120에 결합하는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 듀오바디®의 gp120-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호:9에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, gp120-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호:40에 제시된 아미노산 서열을 포함하며, 제2 아암은 CD3에 결합하는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 듀오바디®의 CD3-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호:19에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, CD3-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호:20에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 1-10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10) 개의 아미노산 치환은 듀오바디®의 중쇄 불변 영역 중 하나 또는 둘 다의 임의의 성분 (예를 들어, CH1, 힌지, CH2, CH3) 내에 있을 수 있다. 특정 예에서, 아미노산 치환은 변경되지 않은 폴리펩티드에 비해 이펙터 기능을 변경 (예를 들어, 감소)시키고/거나 반감기를 증가시킨다. 특정 실시양태에서, 이들 치환은 보존적 아미노산 치환일 수 있다.
또 다른 구체적인 실시양태에서, gp120 X CD89 듀오바디®는 2개의 아암을 포함하며, 제1 아암은 gp120에 결합하는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 듀오바디®의 gp120-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호:9에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, gp120-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호:40에 제시된 아미노산 서열을 포함하며, 제2 아암은 CD89에 결합하는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 듀오바디®의 CD89-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호:97에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, CD89-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호:102에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 1-10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10) 개의 아미노산 치환은 듀오바디®의 중쇄 불변 영역 중 하나 또는 둘 다의 임의의 성분 (예를 들어, CH1, 힌지, CH2, CH3) 내에 있을 수 있다. 특정 예에서, 아미노산 치환은 변경되지 않은 폴리펩티드에 비해 이펙터 기능을 변경 (예를 들어, 감소)시키고/거나 반감기를 증가시킨다. 특정 실시양태에서, 이들 치환은 보존적 아미노산 치환일 수 있다.
또 다른 구체적인 실시양태에서, gp120 X CD3 듀오바디®는 2개의 아암을 포함하며, 제1 아암은 gp120에 결합하는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 듀오바디®의 gp120-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호:9에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, gp120-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호:78에 제시된 아미노산 서열을 포함하며, 제2 아암은 CD3에 결합하는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 듀오바디®의 CD3-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호:19에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, CD3-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호:20에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 1-10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10) 개의 아미노산 치환은 듀오바디®의 중쇄 불변 영역 중 하나 또는 둘 다의 임의의 성분 (예를 들어, CH1, 힌지, CH2, CH3) 내에 있을 수 있다. 특정 예에서, 아미노산 치환은 변경되지 않은 폴리펩티드에 비해 이펙터 기능을 변경 (예를 들어, 감소)시키고/거나 반감기를 증가시킨다. 특정 실시양태에서, 이들 치환은 보존적 아미노산 치환일 수 있다.
또 다른 구체적인 실시양태에서, gp120 X CD89 듀오바디®는 2개의 아암을 포함하며, 제1 아암은 gp120에 결합하는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 듀오바디®의 gp120-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호:9에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, gp120-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호:78에 제시된 아미노산 서열을 포함하며, 제2 아암은 CD89에 결합하는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 듀오바디®의 CD89-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호:97에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, CD89-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호:102에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 1-10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10) 개의 아미노산 치환은 듀오바디®의 중쇄 불변 영역 중 하나 또는 둘 다의 임의의 성분 (예를 들어, CH1, 힌지, CH2, CH3) 내에 있을 수 있다. 특정 예에서, 아미노산 치환은 변경되지 않은 폴리펩티드에 비해 이펙터 기능을 변경 (예를 들어, 감소)시키고/거나 반감기를 증가시킨다. 특정 실시양태에서, 이들 치환은 보존적 아미노산 치환일 수 있다.
또 다른 구체적인 실시양태에서, gp120 X CD3 듀오바디®는 2개의 아암을 포함하며, 제1 아암은 gp120에 결합하는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 듀오바디®의 gp120-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호:9에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, gp120-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호:79에 제시된 아미노산 서열을 포함하며, 제2 아암은 CD3에 결합하는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 듀오바디®의 CD3-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호:19에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, CD3-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호:20에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 1-10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10) 개의 아미노산 치환은 듀오바디®의 중쇄 불변 영역 중 하나 또는 둘 다의 임의의 성분 (예를 들어, CH1, 힌지, CH2, CH3) 내에 있을 수 있다. 특정 예에서, 아미노산 치환은 변경되지 않은 폴리펩티드에 비해 이펙터 기능을 변경 (예를 들어, 감소)시키고/거나 반감기를 증가시킨다. 특정 실시양태에서, 이들 치환은 보존적 아미노산 치환일 수 있다.
또 다른 구체적인 실시양태에서, gp120 X CD89 듀오바디®는 2개의 아암을 포함하며, 제1 아암은 gp120에 결합하는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 듀오바디®의 gp120-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호:9에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, gp120-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호:79에 제시된 아미노산 서열을 포함하며, 제2 아암은 CD89에 결합하는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 듀오바디®의 CD89-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호:97에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, CD89-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호:102에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 1-10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10) 개의 아미노산 치환은 듀오바디®의 중쇄 불변 영역 중 하나 또는 둘 다의 임의의 성분 (예를 들어, CH1, 힌지, CH2, CH3) 내에 있을 수 있다. 특정 예에서, 아미노산 치환은 변경되지 않은 폴리펩티드에 비해 이펙터 기능을 변경 (예를 들어, 감소)시키고/거나 반감기를 증가시킨다. 특정 실시양태에서, 이들 치환은 보존적 아미노산 치환일 수 있다.
또 다른 구체적인 실시양태에서, gp120 X CD3 듀오바디®는 2개의 아암을 포함하며, 제1 아암은 gp120에 결합하는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 듀오바디®의 gp120-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호:9에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, gp120-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호:80에 제시된 아미노산 서열을 포함하며, 제2 아암은 CD3에 결합하는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 듀오바디®의 CD3-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호:19에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, CD3-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호:20에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 1-10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10) 개의 아미노산 치환은 듀오바디®의 중쇄 불변 영역 중 하나 또는 둘 다의 임의의 성분 (예를 들어, CH1, 힌지, CH2, CH3) 내에 있을 수 있다. 특정 예에서, 아미노산 치환은 변경되지 않은 폴리펩티드에 비해 이펙터 기능을 변경 (예를 들어, 감소)시키고/거나 반감기를 증가시킨다. 특정 실시양태에서, 이들 치환은 보존적 아미노산 치환일 수 있다.
또 다른 구체적인 실시양태에서, gp120 X CD89 듀오바디®는 2개의 아암을 포함하며, 제1 아암은 gp120에 결합하는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 듀오바디®의 gp120-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호:9에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, gp120-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호:80에 제시된 아미노산 서열을 포함하며, 제2 아암은 CD89에 결합하는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 듀오바디®의 CD89-결합 아암의 중쇄는 서열식별번호:97에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, CD89-결합 아암의 경쇄는 서열식별번호:102에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 1-10 (즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10) 개의 아미노산 치환은 듀오바디®의 중쇄 불변 영역 중 하나 또는 둘 다의 임의의 성분 (예를 들어, CH1, 힌지, CH2, CH3) 내에 있을 수 있다. 특정 예에서, 아미노산 치환은 변경되지 않은 폴리펩티드에 비해 이펙터 기능을 변경 (예를 들어, 감소)시키고/거나 반감기를 증가시킨다. 특정 실시양태에서, 이들 치환은 보존적 아미노산 치환일 수 있다.
특별한 실시양태에서, 항체는 탈푸코실화된다. 일부 실시양태에서, 항체는 1개 이상의 태그를 포함한다. 특정 실시양태에서, 1개 이상의 태그는 아비딘 태그를 포함한다.
Fc 변형
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 (예를 들어, 듀오바디®)는 IgG1m3 아미노산 서열 (즉, 서열식별번호:77)과 비교하여 중쇄 불변 영역 (Fc)에 1개 이상의 아미노산 서열 변형을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 (예를 들어, 듀오바디®)는 PGT-121.60 항체와 비교하여 중쇄 불변 영역 (Fc)에 1개 이상의 아미노산 서열 변형을 포함한다. 특별한 실시양태에서, 이들 변형은 PGT-121 LO6 항체와 비교하여 변형된 항체의 안정성을 증가시키거나 또는 결합 친화도를 증가시킨다. 특별한 실시양태에서, 이들 변형은 PGT-121.60 항체와 비교하여 변형된 항체의 안정성을 증가시키거나 또는 결합 친화도를 증가시킨다. 특별한 실시양태에서, 이들 특정한 변형은 항체의 반감기를 증가시킨다. 특정 실시양태에서, 이들 특정한 변형은 항체 이펙터 기능을 감소시킨다. 다른 실시양태에서, 이들 특정한 변형은 항체 이펙터 기능을 감소시키고, 항체의 반감기를 증가시킨다.
특정 실시양태에서, 1개 이상의 변형은 하기 Fc 아미노산 치환 (EU 넘버링) 또는 이들의 조합으로부터 선택된다: L234F; L235E; G236A; S239D; F243L; D265E; D265A; S267E; H268F; R292P; N297Q; N297A; S298A; S324T; I332E; S239D; A330L; L234F; L235E; P331S; F243L; Y300L; V305I; P396L; S298A; E333A; K334A; E345R; L235V; F243L; R292P; Y300L; P396L; M428L; E430G; N434S; G236A, S267E, H268F, S324T, 및 I332E; G236A, S239D, 및 I332E; S239D, A330L, I332E; L234F, L235E, 및 P331S; F243L, R292P, Y300L, V305I, 및 P396L; G236A, H268F, S324T, 및 I332E; S239D, H268F, S324T, 및 I332E; S298A, E333A, 및 K334A; L235V, F243L, R292P, Y300L, 및 P396L; S239D, I332E; S239D, S298A, 및 I332E; G236A, S239D, I332E, M428L 및 N434S; G236A, S239D, A330L, I332E, M428L 및 N434S; S239D, I332E, G236A 및 A330L; M428L 및 N4343S; M428L, N434S; G236A, S239D, A330L, 및 I332E; 및 G236A 및 I332E. 특정 실시양태에서, 1개 이상의 변형은 N297A, D265A, L234F, L235E, N297Q, 및 P331S로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 1개 이상의 변형은 N297A 또는 D265A이다. 특정 실시양태에서, 1개 이상의 변형은 L234F 및 L235E이다. 특정 실시양태에서, 1개 이상의 변형은 L234F, L234E, 및 D265A이다. 특정 실시양태에서, 1개 이상의 변형은 L234F, L234E, 및 N297Q이다. 특정 실시양태에서, 1개 이상의 변형은 L234F, L235E, 및 P331S이다. 특정 실시양태에서, 1개 이상의 변형은 D265A 및 N297Q이다. 특정 실시양태에서, 1개 이상의 변형은 L234F, L235E, D265A, N297Q, 및 P331S이다.
Fc-수용체 결합을 감소시키는 돌연변이에는 예를 들어, N297A; N297Q; D265A; L234F/L235E; L234F/L235E/N297Q; L234F/L235E/P331S; D265A/N297Q; 및 L234F/L235E/ D265A/N297Q/P331S (모두 EU 넘버링)가 포함된다. 특정 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 (예를 들어, 듀오바디)는 L234F 및 L235E 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 (예를 들어, 듀오바디)는 L234F, L235E, 및 D265A 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 (예를 들어, 듀오바디)는 L234F, L235E, 및 D265A 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 (예를 들어, 듀오바디)는 N297A 또는 N297Q 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 (예를 들어, 듀오바디)는 N297A 또는 N297Q 돌연변이 뿐만 아니라 L234F, L235E, 및 D265A 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 1, 2, 3, 4개 이상의 아미노산 치환이 항체의 이펙터 기능을 변경시키기 위해 Fc 영역에 도입된다. 예를 들어, 이들 치환은 아미노산 잔기 234, 235, 236, 237, 265, 297, 318, 320 및 322로 이루어진 군으로부터 선택된 위치 (EU 넘버링에 따라)에 위치한다. 이들 위치는, 항체가 이펙터 리간드 (예를 들어, Fc 수용체 또는 보체의 C1 성분)에 대해 변경된 (예를 들어, 감소된) 친화도를 갖지만 모 항체의 항원-결합 능력은 보유하도록 하는, 상이한 아미노산 잔기로 교체될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 (예를 들어, 듀오바디)는 E233P, L234V, L235A, 및 G236A 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 A327G, A330S, 및 P331S 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 K322A 돌연변이 (EU 넘버링)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 E318A, K320A, 및 K322A (EU 넘버링) 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체는 L235E (EU 넘버링) 돌연변이를 포함한다.
항체의 반감기를 증가시키는 돌연변이는 관련 기술분야에 공지되어 있다. 한 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 (예를 들어, 듀오바디®)의 불변 영역은 위치 252 (EU 넘버링)에서 메티오닌에서 티로신으로의 치환, 위치 254 (EU 넘버링)에서 세린에서 트레오닌으로의 치환, 및 위치 256 9EU 넘버링)에서 트레오닌에서 글루탐산으로의 치환을 포함한다. 예를 들어, 미국 특허 번호 7,658,921을 참고한다. "YTE 돌연변이체"로 지정된 이러한 유형의 돌연변이체는 동일한 항체의 야생형 버전에 비해 4배 증가된 반감기를 나타낸다 (Dall'Acqua t al., J Biol Chem, 281: 23514-24 (2006); Robbie et al., Antimicrob Agents Chemotherap., 57(12):6147-6153 (2013)). 특정 실시양태에서, 항체는 위치 251-257, 285-290, 308-314, 385-389, 및 428-436 (EU 넘버링)에 있는 아미노산 잔기의 1, 2, 3개 이상의 아미노산 치환을 포함하는 IgG 불변 도메인을 포함한다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 (예를 들어, 듀오바디®)는 M428L 및 N4343S 치환 (EU 넘버링)을 포함한다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 (예를 들어, 듀오바디®)는 T250Q 및 M428L (EU 넘버링) 돌연변이를 포함한다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 (예를 들어, 듀오바디®)는 H433K 및 N434F (EU 넘버링) 돌연변이를 포함한다.
특별한 실시양태에서, 항체 (예를 들어, 듀오바디®)는 2개 이상, 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상, 6개 이상, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하, 또는 1개의 변형된 Fc 아미노산 잔기(들)을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체는 L234F, L235E, D264A 돌연변이를 포함하며, 이들은 집합적으로 "FEA"로 지칭된다. 특정 실시양태에서, 항체는 L234F, L235E, D264A 및 F405L 돌연변이를 포함하며, 이들은 집합적으로 "FEAL"로 지칭된다. 특정 실시양태에서, 항체는 L234F, L235E, D264A 및 F405L, F405A, F405D, F405E, F405H, F405I, F405K, F405M, F405N, F405Q, F405S, F405T, F405V, F405W 및 F405Y로 이루어진 군으로부터 선택된 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체는 L234F, L235E, D264A 및 K409R 돌연변이를 포함하며, 이들은 집합적으로 "FEAR"로 지칭된다. 특정 실시양태에서, FEAL 및 FEAR은 본원에 기재된 이중특이적 항체 (예를 들어, 듀오바디®)에 포함된다. 특정 실시양태에서, 항체는 M428L 및 N434S 돌연변이를 포함하며, 이들은 집합적으로 LS로 지칭된다. 특정 실시양태에서, 항체는 L234F, L235E, D264A, F405L, M428L 및 N434S 돌연변이를 포함하며, 이들은 집합적으로 "FEALLS"로 지칭된다. 특정 실시양태에서, 항체는 L234F, L235E, D264A, M428L 및 N434S 돌연변이를 F405L, F405A, F405D, F405E, F405H, F405I, F405K, F405M, F405N, F405Q, F405S, F405T, F405V, F405W 및 F405Y로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 추가의 돌연변이와 함께 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체는 L234F, L235E, D264A, K409R, M428L 및 N434S 돌연변이를 포함하며, 이들은 집합적으로 "FEARLS"로 지칭된다. 특정 실시양태에서, FEALLS 및 FEARLS는 본원에 기재된 이중특이적 항체 (예를 들어, 듀오바디®)에 포함된다. 특정 실시양태에서, 항체는 S239D, I332E, G236A, A330L ("DEAL")을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체는 S239D, I332E, G236A, A330L, M428L 및 N434S 돌연변이 ("DEALLS")를 포함한다. FEA 돌연변이는 Fc와 활성화 FcγR의 결합을 증강시킴으로써 이펙터 기능을 감소시키거나 제거하는 반면에, DEAL 돌연변이는 이펙터 기능을 증가시키거나 또는 증강시킨다. LS 돌연변이는 항체의 약동학적 반감기를 증가시킨다.
이펙터 기능을 감소시키거나 또는 제거함으로써, CD3 X gp120 다중특이적/이중특이적 항체는, (i) 이중특이적 분자에 의해 결합된 T 세포 (HIV로 감염되지 않은 것들을 포함할 것임)가 선천적인 이펙터 세포 예를 들어 NK 세포, 대식세포에 의해 사멸되지 않는 것을 보장하고; (ii) 선천적인 이펙터 세포 상의 FcγR에 결합하지 않거나 또는 그와의 감소된 결함을 가짐으로써, T 세포가 표적 세포의 부재하에 활성화되지 않는 것 또한 보장한다. 표적 세포의 부재하에 T 세포의 활성화는 시토카인 반응을 초래할 것이고 허용될 수 없을 것이다. 이중특이적 분자와 선천적인 이펙터 세포 상의 FcγR의 결합은 T 세포 상의 CD3 분자의 클러스터화를 초래하여, 항원-비의존성 T 세포 활성화를 일으킬 것이다.
접합된 항체
본원에 개시된 임의의 항체는 거대분자 물질 예컨대 중합체 (예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), PEG로 변형된 폴리에틸렌이민 (PEI) (PEI-PEG), 폴리글루탐산 (PGA) (N-(2-히드록시프로필) 메타크릴아미드 (HPMA) 공중합체), 히알루론산, 방사성 물질 (예를 들어 90Y, 131I, 125I, 35S, 3H, 121In, 99Tc), 형광 물질 (예를 들어, 플루오레세인 및 로다민), 발광 물질 (예를 들어, 루미놀), 합텐, 효소 (예를 들어, 글루코스 옥시다제), 금속 킬레이팅제, 비오틴, 아비딘, 및 약물을 비롯한 다양한 분자에 결합되어 있는 접합된 항체일 수 있다.
상기 기재된 접합된 항체는 본원에 기재된 항체 또는 그의 보다 저분자량 형태에 대해 화학적 변형을 수행함으로써 제조될 수 있다. 항체를 변형시키는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다 (예를 들어, US 5,057,313 및 US 5,156,840).
핵산
본 개시내용은 또한 gp120 및 인간 CD3 항원에 결합하거나, 또는 gp120 및 인간 CD89 항원에 결합하는 본원에 기재된 다중특이적 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 이러한 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 및 이러한 폴리뉴클레오티드 또는 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포 (예를 들어, 포유류 세포, 효모, 이. 콜라이)를 특징으로 한다. 본원에는 본원에 제공된 임의의 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 뿐만 아니라 이러한 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 벡터, 예를 들어, 숙주 세포, 예를 들어, 포유류 세포에서 그들의 효율적인 발현을 위한 발현 벡터가 제공된다.
한 측면에서, 본 개시내용은 gp120에 결합하는 항체 (예를 들어, 예시적인 항-gp120 항체 2; 예시적인 항-gp120 항체 3; 예시적인 항-gp120 항체 4; 예시적인 항-gp120 항체 5)의 VH, VL 또는 VH 및 VL을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 gp120 및 인간 CD3 폴리펩티드에 결합하고 본원에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 gp120 및 인간 CD89 폴리펩티드에 결합하고 본원에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 본 발명에 따른 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 핵산 분자를 제공한다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자는 본 출원의 항체 경쇄 (또는 그의 단편) 또는 항체 경쇄 (또는 그의 단편), 또는 이들 둘 다를 코딩한다. 다른 실시양태에서, 핵산은 DNA, cDNA, 또는 mRNA이다. 일부 다른 실시양태에서, 핵산 분자는 숙주 세포에서 발현을 증강시키기 위해 코돈-최적화된다.
또 다른 측면에서, 본원에는 본원에 기재된 항체의 CDR, 경쇄 또는 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다. 폴리뉴클레오티드는 본원에 기재된 항체의 VL CDR을 포함하는 경쇄 또는 경쇄 가변 도메인을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다 (예를 들어, 상기 표 참고). 폴리뉴클레오티드는 본원에 기재된 항체의 VH CDR을 포함하는 중쇄 또는 중쇄 가변 도메인을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다 (예를 들어, 상기 표 참고). 한 실시양태에서, 본원에 기재된 폴리뉴클레오티드는 각각 서열식별번호: 4, 5 및 6; 또는 각각 14, 15 및 16에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR을 갖는 가변 경쇄 또는 경쇄를 코딩한다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 폴리뉴클레오티드는 각각 서열식별번호: 1, 2 및 3; 또는 각각 11, 12 및 13에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR을 갖는 가변 중쇄 또는 중쇄를 코딩한다. 한 실시양태에서, 본원에 기재된 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호:8, 18 또는 101에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 코딩한다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호:7, 17 또는 96에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인을 코딩한다. 여전히 또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호:10, 20 또는 102에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 코딩한다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호:9, 19 또는 97에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 코딩한다.
본 개시내용은 또한 예를 들어 코돈 최적화, 이종성 신호 서열로의 교체, 및 mRNA 불안정성 요소의 제거에 의해 최적화된 항-gp120 및 항-CD3 (또는 항-CD89) 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포괄한다. 최적화된 핵산을 생성하는 방법은 예를 들어 미국 특허 번호 5,965,726; 6,174,666; 6,291,664; 6,414,132; 및 6,794,498에 기재된 방법을 적합화함으로써 수행될 수 있다.
벡터 및 숙주 세포
본 개시내용은 또한 본원에 개시된 핵산(들)을 포함하는 벡터를 포괄한다. 벡터는 임의의 유형, 예를 들어, 재조합 벡터 예컨대 발현 벡터일 수 있다. 벡터에는 플라스미드, 코스미드, 박테리아 인공 염색체 (BAC) 및 효모 인공 염색체 (YAC) 및 박테리오파지 또는 식물 또는 동물 (인간 포함) 바이러스로부터 유래된 벡터포함되나 이로 제한되는 것은 아니다. 벡터는 제안된 숙주 세포에 의해 인식되는 복제 기점, 및 발현 벡터의 경우에는 숙주 세포에 의해 인식되는 프로모터 및 다른 조절 영역을 포함할 수 있다. 특별한 실시양태에서, 벡터는 프로모터 및 임의적으로 추가의 조절 요소에 작동가능하게 연결된 본 개시내용의 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 특정 벡터는 그들이 도입된 숙주에서 자율 복제할 수 있다 (예를 들어, 박테리아 복제 기점을 갖는 벡터는 박테리아에서 복제할 수 있음). 다른 벡터는 숙주로 도입시 숙주의 게놈에 통합될 수 있고, 이로써 숙주 게놈과 함께 복제된다. 벡터에는 본원에 개시된 항체의 재조합 생성에 적합한 것들이 포함되나 이로 제한되지 않는다.
벡터의 선택은 따라야 하는 재조합 절차 및 사용되는 숙주에 따라 좌우된다. 숙주 세포 내로 벡터의 도입은 그 중에서도 인산칼슘 트랜스펙션, 바이러스 감염, DEAE-덱스트란-매개된 트랜스펙션, 리포펙타민 트랜스펙션 또는 전기천공에 의해 수행될 수 있다. 벡터는 자율적으로 복제할 수 있거나 또는 그들이 통합된 염색체와 함께 복제할 수 있다. 특정 실시양태에서, 벡터는 1개 이상의 선택 마커를 함유한다. 마커의 선택은 선택된 숙주 세포에 따라 좌우될 수 있다. 이들에는 카나마이신, 네오마이신, 퓨로마이신, 히그로마이신, 제오신, 헤르페스 단순 바이러스로부터의 티미딘 키나제 유전자 (HSV-TK), 및 마우스로부터의 디히드로폴레이트 리덕타제 유전자 (dhfr)가 포함되나 이로 제한되지 않는다. 항체를 단리시키기 위해 사용될 수 있는 단백질 또는 펩티드를 코딩하는 1가지 이상의 핵산 분자에 작동가능하게 연결된, 본원에 기재된 항체를 코딩하는 1가지 이상의 핵산 분자를 포함하는 벡터 또한 본 개시내용에 포함된다. 이들 단백질 또는 펩티드에는 글루타티온-S-트랜스퍼라제, 말토스 결합 단백질, 금속-결합 폴리히스티딘, 녹색 형광 단백질, 루시페라제 및 베타-갈락토시다제가 포함되나 이로 제한되지 않는다.
특별한 실시양태에서, 사용되는 벡터는 pcDNA™3.1+ (써모피셔(ThermoFisher), 메사추세츠주)이다.
본 개시내용은 또한 본원에 기재된 핵산 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 임의의 다양한 숙주 세포가 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 숙주 세포는 원핵생물 세포, 예를 들어, 이. 콜라이이다. 또 다른 실시양태에서, 숙주 세포는 진핵생물 세포, 예를 들어, 포유류 세포, 예컨대 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포, COS 세포, BHK 세포, NSO 세포 또는 바우스(Bowes) 흑색종 세포이다. 인간 숙주 세포의 예는 그 중에서도 HeLa, 911, AT1080, A549, 293 및 HEK293T 세포이다.
용어 "핵산 분자"는 뉴클레오티드의 중합체 형태를 지칭하며, RNA, cDNA, 게놈 DNA의 센스 및 안티센스 가닥, 및 이들의 합성 형태 및 혼합된 중합체를 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 핵산 분자는 용어 폴리뉴클레오티드와 상호교환가능하다. 일부 실시양태에서, 뉴클레오티드는 리보뉴클레오티드, 데옥시뉴클레오티드 또는 이들 뉴클레오티드 유형의 변형된 형태, 및 이들의 조합물을 지칭한다. 상기 용어는 DNA의 단일- 및 이중-가닥 형태를 포함하나 이로 제한되지 않는다. 또한, 폴리뉴클레오티드, 예를 들어, cDNA 또는 mRNA는 천연 발생 및/또는 비-천연 발생 뉴클레오티드 연결에 의해 함께 연결된 천연 발생 및 변형된 뉴클레오티드 중 하나 또는 둘 다를 포함할 수 있다. 관련 기술분야의 기술자에 의해 용이하게 이해되는 바와 같이, 핵산 분자는 화학적으로 또는 생화학적으로 변형될 수 있거나 또는 비-천연의 또는 유도체화된 뉴클레오티드 염기를 함유할 수 있다. 이러한 변형에는 예를 들어, 표지, 메틸화, 유사체에 의한 천연 발생 뉴클레오티드 중 1개 이상의 치환, 인터뉴클레오티드 변형 예컨대 비하전된 연결 (예를 들어, 메틸 포스포네이트, 포스포트리에스테르, 포스포르아미데이트, 카르바메이트 등), 하전된 연결 (예를 들어, 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트 등), 펜던트 모이어티 (예를 들어, 폴리펩티드), 인터칼레이터 (예를 들어, 아크리딘, 프소랄렌 등), 킬레이터, 알킬레이터, 및 변형된 연결 (예를 들어, 알파 아노머 핵산 등)이 포함된다. 상기 용어는 또한 단일-가닥, 이중-가닥, 부분 듀플렉스, 트리플렉스, 헤어핀, 원형 및 패드록킹 형태를 비롯한 임의의 위상적 형태를 포함하는 것으로 의도된다. 핵산 서열에 대한 지칭은 달리 명시하지 않는다면 그의 보체를 포괄한다. 따라서, 특정한 서열을 갖는 핵산 분자에 대한 지칭은 그의 상보성 서열을 갖는 그의 상보성 가닥을 포괄하는 것으로 이해해야 한다. 상기 용어는 또한 코돈-최적화된 핵산을 포함한다.
용어 "작동가능하게 연결된"은 보통 물리적으로 연결되고 서로 기능적 관계를 갖는 2개 이상의 핵산 서열 요소를 지칭한다. 예를 들어, 프로모터가 코딩 서열의 전사 또는 발현을 개시하거나 또는 조절할 수 있다면, 상기 프로모터는 코딩 서열에 작동가능하게 연결된 것이며, 이 경우에, 코딩 서열은 프로모터의 "조절하에" 있는 것으로 이해해야 한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "치환"은 1개 이상의 아미노산 또는 뉴클레오티드가 각각 상이한 아미노산 또는 뉴클레오티드로 교체된 것을 지칭한다.
"단리된" 핵산은 그의 천연 환경의 성분으로부터 분리된 핵산 분자를 지칭한다. 단리된 핵산은, 보통 핵산 분자를 함유하는 세포에 함유되지만 상기 핵산 분자가 염색체 외에 존재하거나 또는 그의 천연 염색체 위치와 상이한 염색체 위치에서 존재하는 것인 핵산 분자를 포함한다. "항체 또는 그의 단편을 코딩하는 단리된 핵산"은 항체 중쇄 및 경쇄 (또는 그의 단편)를 코딩하는 하나 이상의 핵산 분자, 예컨대 단일 벡터 또는 별도의 벡터에서의 이러한 핵산 분자(들), 및 숙주 세포에서 하나 이상의 위치에 존재하는 이러한 핵산 분자(들)을 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "벡터"는 그가 연결된 또 다른 핵산을 전파시킬 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 상기 용어는 자가-복제 핵산 구조체로서의 벡터 뿐만 아니라, 그가 도입된 숙주 세포의 게놈에 포함된 벡터를 포함한다. 일부 벡터는 본 출원의 핵산 분자 또는 폴리뉴클레오티드를 전달하는데 적합하다. 특정 벡터는 그들이 작동가능하게 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본원에서 발현 벡터로 지칭된다.
용어 "숙주 세포", "숙주 세포주" 및 "숙주 세포 배양물"은 상호교환적으로 사용되고, 외인성 핵산이 도입된 세포, 예컨대 이러한 세포의 자손을 지칭한다. 숙주 세포는 일차 형질전환된 세포 및 계대 횟수에 상관없이 그로부터 유래된 자손을 포함하는 "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"를 포함한다. 자손은 모 세포의 핵산 내용과 완전히 동일하지 않을 수 있고, 돌연변이를 함유할 수 있다. 원래의 형질전환된 세포에서 스크리닝 또는 선택된 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이성 자손이 본원에 포함된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 폴리뉴클레오티드 "변이체"는 전형적으로 본원에 구체적으로 개시된 폴리뉴클레오티드와 1개 이상의 치환, 결실, 부가 및/또는 삽입에서 차이가 있는 폴리뉴클레오티드이다. 이러한 변이체는 천연 발생일 수 있거나, 또는 예를 들어 본 발명의 폴리뉴클레오티드 서열 중 하나 이상을 변형시키고 본원에 기재된 바와 같이 코딩된 폴리펩티드의 하나 이상의 생물학적 활성을 평가함으로써 및/또는 관련 기술분야에 널리 공지된 임의의 수많은 기술을 사용함으로써 합성에 의해 생성될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 폴리펩티드 "변이체"는 전형적으로 본원에 구체적으로 개시된 폴리펩티드와 1개 이상의 치환, 결실, 부가 및/또는 삽입에서 차이가 있는 폴리펩티드이다. 이러한 변이체는 천연 발생일 수 있거나, 또는 예를 들어 본 발명의 상기 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 변형시키고 본원에 기재된 바와 같은 폴리펩티드의 하나 이상의 생물학적 활성을 평가함으로써 및/또는 관련 기술분야에 널리 공지된 임의의 수많은 기술을 사용함으로써 합성에 의해 생성될 수 있다. 한 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 변이체 1, 변이체 2, 변이체 3 및/또는 변이체 4를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 변이체 1을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 변이체 2를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 변이체 3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 변이체 4를 포함한다.
용어 "변이체"는 또한 1개 이상의 뉴클레오티드 또는 아미노산 돌연변이를 포함하는 임의의 천연 발생 또는 조작된 분자를 지칭할 수 있다. 한 실시양태에서, 분자는 항체이다. 예를 들어, 체세포 변이체는 동일한 B-세포주의 일부이거나 그로부터 유래된 모든 관련된 천연 발생 항체를 포괄할 수 있다. 조작된 변이체는 항체에 대해 이루어진 모든 단일 돌연변이 또는 조합 돌연변이를 포괄할 수 있다.
항체의 생성 방법
gp120에 결합하는 단일특이적 항체 및 gp120 및 인간 CD3 (예를 들어, 인간 CD3ε 또는 인간 CD3δ)에 결합하는 이중특이적 항체는 항체의 합성에 대해 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어 화학적 합성에 의해 또는 재조합 발현 기술에 의해 생성될 수 있다.
단일특이적 항체의 제조 방법은 관련 기술분야에 매우 널리 공지되어 있다. 이중특이적 항체의 제조 방법은 예를 들어 미국 특허 번호 5,731,168; 5,807,706; 5,821,333; 및 미국 출원 공개 번호 2003/020734 및 2002/0155537에 기재되어 있다. 이중특이적 4가 항체, 및 그의 제조 방법은 예를 들어 WO 02/096948 및 WO 00/44788에 기재되어 있으며, 이들 둘 다의 개시내용은 전문이 본원에 참고로 포함된다. 또한, 이중특이적 항체의 제조에 관한 다른 공보에는 WO 91/00360, WO 92/08802, WO92/05793, 및 WO 93/17715; [Tutt et al., J. Immunol. 147:60-69 (1991)]; 미국 특허 번호 4,474,893; 4,714,681; 4,925,648; 5,573,920; 5,601,819 및 9,212,230; 및 [Kostelny et al., J. Immunol. 148:1547-1553 (1992)]가 포함된다.
한 실시양태에서, 본 개시내용의 이중특이적 항체는 듀오바디®이다. 듀오바디는 예를 들어 국제 공개 번호 WO 2008/119353, WO 2011/131746, WO 2011/147986, 및 WO 2013/060867, [Labrijn AF et al., PNAS, 110(13): 5145-5150 (2013)], [Gramer et al., mAbs, 5(6): 962-973 (2013)], 및 [Labrijn et al., Nature Protocols, 9(10): 2450-2463 (2014)]에 기재된 바와 같이 듀오바디® 기술 플랫폼 (젠맵 에이/에스(Genmab A/S))에 의해 제조될 수 있다. 이 기술을 이용하여 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 함유하는 제1 단일특이적 항체의 1/2과 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 함유하는 제2 단일특이적 항체의 1/2을 조합할 수 있다. 생성된 이종이합체는 제2 항체로부터의 1개의 중쇄 및 1개의 경쇄와 쌍을 형성한 제1 항체로부터의 1개의 중쇄 및 1개의 경쇄를 함유한다. 두 단일특이적 항체 모두가 상이한 항원 상의 상이한 에피토프를 인식할 때, 생성된 이종이합체는 이중특이적 항체이다.
듀오바디® 플랫폼의 경우, 각각의 단일특이적 항체는 CH3 도메인에서 단일 점 돌연변이를 갖는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 이들 점 돌연변이는 돌연변이가 없는 단일특이적 항체 중 하나에서의 CH3 도메인들 사이에 비해 생성된 이중특이적 항체에서의 CH3 도메인들 사이에서 더 강력한 상호작용을 허용한다. 각각의 단일특이적 항체에서 단일 점 돌연변이는 중쇄 불변 영역의 CH3 도메인에서 잔기 366, 368, 370, 399, 405, 407 또는 409 (EU 넘버링)에 있을 수 있다 (WO 2011/131746 참고). 추가로, 단일 점 돌연변이는 다른 단일특이적 항체에 비해 한 단일특이적 항체에서 상이한 잔기에 위치한다. 예를 들어, 한 단일특이적 항체는 돌연변이 F405L (EU 넘버링; 잔기 405에서 페닐알라닌에서 류신으로의 돌연변이), 또는 F405A, F405D, F405E, F405H, F405I, F405K, F405M, F405N, F405Q, F405S, F405T, F405V, F405W 및 F405Y 돌연변이 중 하나를 포함할 수 있는 반면에, 다른 단일특이적 항체는 돌연변이 K409R (EU 넘버링; 잔기 409에서 리신에서 아르기닌으로의 돌연변이)을 포함할 수 있다. 단일특이적 항체의 중쇄 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 이소타입 (예를 들어, 인간 IgG1 이소타입)일 수 있고, 듀오바디® 기술에 의해 생성된 이중특이적 항체는 Fc-매개된 이펙터 기능을 변경 (예를 들어, 감소)시키고/거나 반감기를 개선시키도록 변형될 수 있다. 듀오바디®의 한 제조 방법은 다음을 수반한다: (i) CH3 도메인에서 단일 매칭 점 돌연변이 (즉, K409R 및 F405L (또는 F405A, F405D, F405E, F405H, F405I, F405K, F405M, F405N, F405Q, F405S, F405T, F405V, F405W 및 F405Y 돌연변이 중 하나) (EU 넘버링))를 함유하는 2개의 모 IgG1의 별도의 발현; (ii) 절반-분자의 재조합을 가능하게 하도록 시험관 내에서 허용되는 산화환원 조건하에 모 IgG1의 혼합; (iii) 쇄간 디술피드 결합의 재산화를 가능하게 하도록 환원제의 제거; 및 (iv) 크로마토그래피-기반 또는 질량 분광분석법 (MS)-기반 방법을 이용하여 교환 효율 및 최종 생성물의 분석 (Labrijn et al., Nature Protocols, 9(10): 2450-2463 (2014) 참고).
이중특이적 항체의 또 다른 예시적인 제조 방법은 놉-인투-홀 기술에 의한 것이다 (Ridgway et al., Protein Eng., 9:617-621 (1996); WO 2006/028936). 이 기술에서 IgG에서 CH3 도메인의 계면을 형성하는 선택된 아미노산을 돌연변이시킴으로써, 이중특이적 항체의 제조에서의 주요 결점인 Ig 중쇄의 짝형성 오류 문제가 감소된다. 2개의 중쇄가 직접적으로 상호작용하는 CH3 도메인 내의 위치에서, 작은 측쇄를 갖는 아미노산 (홀)을 한 중쇄의 서열에 도입시키고, 큰 측쇄를 갖는 아미노산 (놉)을 다른 중쇄 상의 대응 상호작용 잔기 위치에 도입시킨다. 일부 예에서, 본 개시내용의 항체는 CH3 도메인이 이중특이적 항체를 우세하게 형성하도록 두 폴리펩티드 사이의 계면에서 상호작용하는 선택된 아미노산을 돌연변이시킴으로서 변형된 것인 이뮤노글로불린 쇄를 갖는다. 이중특이적 항체는 동일한 하위 부류 또는 상이한 하위 부류의 이뮤노글로불린으로 구성될 수 있다. 한 예에서, gp120 및 CD3에 결합하는 이중특이적 항체는 "놉 쇄"에서 T366W (EU 넘버링) 돌연변이 및 "홀 쇄"에서 T366S, L368A, Y407V 9EU 넘버링) 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 예를 들어 "놉 쇄"에 Y349C 돌연변이 및 "홀 쇄"에 E356C 돌연변이 또는 S354C 돌연변이를 도입시킴으로써, 추가의 쇄간 디술피드 브릿지가 CH3 도메인들 사이에 도입된다. 특정 실시양태에서, R409D, K370E 돌연변이는 "놉 쇄"에 도입되고, D399K, E357K 돌연변이는 "홀 쇄"에 도입된다. 다른 실시양태에서, Y349C, T366W 돌연변이는 쇄들 중 하나에 도입되고, E356C, T366S, L368A, Y407V 돌연변이는 대응 쇄에 도입된다. 일부 실시양태에서, Y349C, T366W 돌연변이는 한 쇄에 도입되고, S354C, T366S, L368A, Y407V 돌연변이는 대응 쇄에 도입된다. 일부 실시양태에서, Y349C, T366W 돌연변이는 한 쇄에 도입되고, S354C, T366S, L368A, Y407V 돌연변이는 대응 쇄에 도입된다. 여전히 다른 실시양태에서, Y349C, T366W 돌연변이는 한 쇄에 도입되고, S354C, T366S, L368A, Y407V 돌연변이는 대응 쇄에 도입된다 (모두 EU 넘버링).
이중특이적 항체의 또 다른 예시적인 제조 방법은 이중특이적 T-세포 인게이저 (BiTEs®) 플랫폼을 사용하는 것에 의한 것이다. BiTE는 가요성 펩티드 링커 (예를 들어, GGGGS (서열식별번호:76))를 통해 제1 scFv (예를 들어, gp120에 결합하는 scFv)를 제2 scFv (예를 들어, 인간 CD3에 결합하는 scFv)에 유전적으로 융합시킴으로써 제조된다. 예를 들어, [Staerz et al., Nature, 314:628-631 (1985); Mack et al., PNAS, 92:7021-7025 (1995); Huehls et al., Immunol. Cell Biol., 93:290-296 (2015)]를 참고한다.
이중특이적 항체의 또 다른 예시적인 제조 방법은 이중-친화도 재표적화 (DART) 플랫폼을 이용하는 것에 의한 것이다. 이 기술은 [Holliger et al. (PNAS, 90:6444-6448 (1993))]의 디아바디 포맷을 기반으로 하며, VH 및 VL 쇄의 안정성 및 최적의 쌍 형성을 추가로 개선시켰다 (Johnson et al., J Mol. Biol., 399:436-449 (2010); Sung et al., J Clin Invest., 125(11): 4077-4090 (2015)).
이중특이적 항체의 여전히 또 다른 예시적인 제조 방법은 삼관능성 하이브리드 항체 플랫폼 - 트리오맙®을 사용하는 것에 의한 것이다. 이 플랫폼은 상이한 이소타입을 갖는 2개의 전장 항체의 절반, 마우스 IgG2a 및 래트 IgG2b로 제조된 키메라 구축을 이용한다. 이 기술은 종-우선적인 중쇄/경쇄 쌍형성 회합에 의존한다. [Lindhofer et al., J Immunol., 155:219-225 (1995)]를 참고한다.
이중특이적 항체의 추가의 예시적인 제조 방법은 TandAb® 플랫폼을 사용하는 것에 의한 것이다. 이 기술은 디아바디 개념을 기반으로 하지만, 쇄내 쌍형성을 방지하기 위해 짧은 링커를 포함하는 단일 폴리펩티드 쇄 VH1-VL2-VH2-VL1로 지정된다. 이 단일 쇄의 머리에서 꼬리로의 이합체화는 4가 동종이합체의 형성을 일으킨다 (Kipriyanov et al., J Mol. Biol., 293:41-56 (1999)).
이중특이적 항체의 여전히 또 다른 제조 방법은 크로스맙 기술이다. 크로스맙은 두 전장 항체의 절반에 의해 구성된 키메라 항체이다. 정확학 쇄 쌍형성을 위해, 이는 두가지 기술을 조합한다: (i) 두 중쇄 사이의 정확한 쌍 형성을 우세하게 하는 놉-인투-홀; 및 (ii) 경쇄 쌍형성 오류를 피하는 비대칭을 도입하도록 두 Fab 중 하나의 중쇄와 경쇄 사이의 교환. [Ridgway et al., Protein Eng., 9:617-621 (1996); Schaefer et al., PNAS, 108:11187-11192 (2011)]을 참고한다. 크로스맙은 2개 이상의 표적을 표적화하기 위해 또는 2:1 포맷과 같이 1개의 표적에 대해 2가를 도입하기 위해 2개 이상의 항원-결합 도메인을 조합할 수 있다.
본 개시내용의 다중특이적 항체는 박테리아 또는 진핵생물 세포에서 생성될 수 있다. 항체는 또한 진핵생물 세포 예컨대 형질전환된 세포주 (예를 들어, CHO, 293E, 293T, COS, NIH3T3)에서 생성될 수 있다. 또한, 항체 (예를 들어, scFv's)는 효모 세포 예컨대 피키아 (예를 들어, Powers et al., J Immunol Methods. 251:123-35 (2001) 참고), 한세울라(Hanseula), 또는 사카로마이세스에서 발현될 수 있다. 한 실시양태에서, 본원에 기재된 이중특이적 항체는 CHO 세포주에서 생성될 수 있다. 관심 항체를 생성하기 위해, 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 구축하고, 발현 벡터에 도입시킨 다음, 적합한 숙주 세포에서 발현시킨다. 표준 분자 생물학 기술을 이용하여, 재조합 발현 벡터를 제조하고, 숙주 세포를 형질감염시키고, 형질전환체에 대해 선택하고, 숙주 세포를 배양하고, 항체를 회수한다.
항체가 박테리아 세포 (예를 들어, 이. 콜라이)에서 발현되어야 하는 경우, 발현 벡터는 박테리아 세포에서 벡터의 증폭을 허용하는 특징을 가져야 한다. 추가로, 이. 콜라이 예컨대 JM109, DH5α, HB101, 또는 XL1-Blue가 숙주로 사용되는 경우, 벡터는 이. 콜라이에서 효율적인 발현을 가능하게 할 수 있는 프로모터, 예를 들어, lacZ 프로모터 (Ward et al., 341:544-546 (1989), araB 프로모터 (Better et al., Science, 240:1041-1043 (1988)), 또는 T7 프로모터를 가져야 한다. 이러한 벡터의 예에는 예를 들어, M13-시리즈 벡터, pUC-시리즈 벡터, pBR322, pBluescript, pCR-Script, pGEX-5X-1 (파마시아(Pharmacia)), "QIAexpress 시스템" (퀴아젠(QIAGEN)), pEGFP, 및 pET (이 발현 벡터가 사용되는 경우, 숙주는 바람직하게는 T7 RNA 폴리머라제를 발현하는 BL21임)가 포함된다. 발현 벡터는 항체 분비를 위해 신호 서열을 함유할 수 있다. 이. 콜라이의 주변 세포질로의 생성을 위해서는, pelB 신호 서열 (Lei et al., J. Bacteriol., 169:4379 (1987))이 항체 분비를 위한 신호 서열로서 사용될 수 있다. 박테리아 발현을 위해서는, 염화칼슘 방법 또는 전기천공 방법을 이용하여 발현 벡터를 박테리아 세포에 도입시킬 수 있다.
항체가 동물 세포 예컨대 CHO, COS 및 NIH3T3 세포에서 발현되어야 하는 경우, 발현 벡터는 이들 세포에서의 발현을 위한 프로모터, 예를 들어, SV40 프로모터 (Mulligan et al., Nature, 277:108 (1979)), MMLV-LTR 프로모터, EF1α 프로모터 (Mizushima et al., Nucleic Acids Res., 18:5322 (1990)), 또는 CMV 프로모터를 포함한다. 이뮤노글로불린 또는 그의 도메인을 코딩하는 핵산 서열 외에도, 재조합 발현 벡터는 추가의 서열, 예컨대 숙주 세포에서 벡터의 복제를 조절하는 서열 (예를 들어, 복제 기점) 및 선택가능한 마커 유전자를 보유할 수 있다. 선택가능한 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포의 선택을 용이하게 한다 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,399,216, 4,634,665 및 5,179,017 참고). 예를 들어, 전형적으로, 선택가능한 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포에 대해 약물, 예컨대 G418, 히그로마이신, 또는 메토트렉세이트에 대한 내성을 부여한다. 선택가능한 마커를 갖는 벡터의 예에는 pMAM, pDR2, pBK-RSV, pBK-CMV, pOPRSV, 및 pOP13이 포함된다.
한 실시양태에서, 항체는 포유류 세포에서 생성된다. 항체를 발현하는 예시적인 포유류 숙주 세포에는 중국 햄스터 난소 (CHO 세포) (예를 들어, [Kaufman and Sharp (1982) Mol. Biol. 159:601-621]에 기재된 DHFR 선택가능한 마커와 함께 사용되는 [Urlaub and Chasin (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220]에 기재된 dhfr - CHO 세포), 인간 배아 신장 293 세포 (예를 들어, 293, 293E, 293T), COS 세포, NIH3T3 세포, 림프구 세포주, 예를 들어, NS0 골수종 세포 및 SP2 세포, 및 트랜스제닉 동물, 예를 들어, 트랜스제닉 포유류로부터의 세포가 포함된다. 예를 들어, 세포는 유선 상피 세포이다.
항체 발현을 위한 예시적인 시스템에서, 본 개시내용의 이중특이적 항체의 항체 중쇄 및 항체 경쇄를 코딩하는 재조합 발현 벡터는 인산칼슘-매개된 트랜스펙션에 의해 dhfr - CHO 세포에 도입된다. 구체적인 실시양태에서, dhfr - CHO 세포는 DG44 세포주의 세포, 예컨대 DG44i이다 (예를 들어, Derouaz et al., Biochem Biophys Res Commun., 340(4):1069-77 (2006) 참고). 재조합 발현 벡터 내에서, 항체 중쇄 및 경쇄 유전자 각각은 인핸서/프로모터 조절 요소 (예를 들어, SV40, CMV, 아데노바이러스 등으로부터 유래됨, 예컨대 CMV 인핸서/AdMLP 프로모터 조절 요소 또는 SV40 인핸서/AdMLP 프로모터 조절 요소)에 작동가능하게 연결되어, 높은 수준의 유전자 전사를 유도한다. 재조합 발현 벡터는 또한 메토트렉세이트 선택/증폭을 이용하여 벡터로 형질감염된 CHO 세포의 선택을 가능하게 하는 DHFR 유전자를 보유한다. 선택된 형질전환체 숙주 세포를 배양하여 항체 중쇄 및 경쇄를 발현시키고, 배양 배지로부터 항체를 회수한다.
다중특이적 항체는 또한 트랜스제닉 동물에 의해 생성될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 5,849,992는 트랜스제닉 포유류의 유선에서 항체를 발현시키는 방법을 기재한다. 젖-특이적 프로모터 및 관심 항체를 코딩하는 핵산 및 분비를 위한 신호 서열을 포함하는 트랜스진을 구축한다. 이러한 트랜스제닉 포유류의 암컷에 의해 생성된 젖은 그 안에 분비된 관심 항체를 포함한다. 항체는 젖으로부터 정제될 수 있거나, 또는 일부 적용에서는 직접적으로 사용될 수 있다. 본원에 기재된 핵산 중 하나 이상을 포함하는 동물 또한 제공된다.
본 개시내용의 다중특이적 항체는 숙주 세포의 내부로부터 또는 외부 (예컨대 배지)로부터 단리되고, 실질적으로 순수한 및 균질한 항체로서 정제될 수 있다. 항체 정제를 위해 흔히 이용되는 단리 및 정제 방법이 항체의 단리 및 정제를 위해 이용될 수 있고, 임의의 특정한 방법으로 제한되지 않는다. 항체는 예를 들어 컬럼 크로마토그래피, 여과, 한외여과, 염석, 용매 침전, 용매 추출, 증류, 면역침전, SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 등전점 전기영동, 투석, 및 재결정화를 적절히 선택하고 조합함으로써 단리 및 정제될 수 있다. 크로마토그래피에는 예를 들어 친화도 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피, 겔 여과, 역상 크로마토그래피, 및 흡착 크로마토그래피가 포함된다 (Strategies for Protein Purification and Characterization: A Laboratory Course Manual. Ed Daniel R. Marshak et al., Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1996). 크로마토그래피는 액상 크로마토그래피 예컨대 HPLC 및 FPLC를 이용하여 수행될 수 있다. 친화도 크로마토그래피를 위해 사용되는 컬럼에는 단백질 A 컬럼 및 단백질 G 컬럼이 포함된다. 단백질 A 컬럼을 이용하는 컬럼의 예에는 하이퍼(Hyper) D, POROS, 및 세파로스 FF (지이 헬쓰케어 바이오사이언시즈(GE Healthcare Biosciences))가 포함된다. 본 개시내용은 또한 이들 정제 방법을 이용하여 고도로 정제되는 항체가 포함된다.
제약 조성물
본 개시내용은 또한 본원에 기재된 항체, 또는 본원에 기재된 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 및 제약상 허용가능한 희석제, 담체 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 항체 또는 폴리뉴클레오티드의 치료 유효량을 포함한다.
다양한 제약상 허용가능한 희석제, 담체 및 부형제, 및 제약 조성물의 제조 및 사용을 위한 기술은 본 개시내용에 비추어 관련 기술분야의 기술자에게 공지되어 있을 것이다. 예시적인 제약 조성물 및 제약상 허용가능한 희석제, 담체 및 부형제는 또한 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. (Lippincott, Williams & Wilkins 2003)]에 기재되어 있다. 특별한 실시양태에서, 각각의 담체, 희석제 또는 부형제는 제약 조성물의 다른 성분과 상용성이고 대상체에게 손상을 주지 않는다는 관점에서 "허용가능하다". 종종, 제약상 허용가능한 담체는 수성 pH-완충된 용액이다. 제약상-허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제로서 작용할 수 있는 물질의 일부 예에는 멸균수; 완충제, 예를 들어, 인산염-완충된 식염수; 당, 예컨대 락토스, 글루코스 및 수크로스; 전분, 예컨대 옥수수 전분 및 감자 전분; 셀룰로스, 및 그의 유도체, 예컨대 나트륨 카르복시메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트; 분말형 트래거캔쓰; 맥아; 젤라틴; 활석; 부형제, 예컨대 코코아 버터 및 좌제 왁스; 오일, 예컨대 땅콩유, 면실유, 홍화유, 참깨유, 올리브유, 옥수수유 및 대두유; 글리콜, 예컨대 프로필렌 글리콜; 폴리올, 예컨대 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜; 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트 및 에틸 라우레이트; 한천; 완충제, 예컨대 수산화마그네슘 및 수산화알루미늄; 알긴산; 발열원-무함유 물; 등장성 식염수; 링거(Ringer) 용액; 에틸 알콜; 인산염 완충제 용액; 및 제약 제형에서 사용되는 다른 무독성 상용성 물질이 포함된다. 습윤제, 유화제 및 윤활제, 예컨대 나트륨 라우릴 술페이트 및 스테아르산마그네슘, 뿐만 아니라 착색제, 이형제, 코팅제, 감미제, 향미제 및 향료, 보존제 및 항산화제 또한 조성물에 존재할 수 있다.
제약 조성물의 제형 및 전달 방법은 일반적으로 처리할 부위 및 질환에 따라 적합화될 것이다. 예시적인 제형에는 비경구 투여, 예를 들어, 정맥내, 동맥내, 근육내 또는 피하 투여에 적합한 것들, 예컨대 미셸, 리포좀 또는 약물-방출 캡슐에 캡슐화된 제형 (느린 방출을 위해 고안된 생체적합성 코팅 내에 포함된 활성 작용제); 섭취가능한 제형; 국소 사용을 위한 제형, 예컨대 크림, 연고 및 겔; 및 다른 제형 예컨대 흡입제, 에어로졸 및 스프레이가 포함되나 이로 제한되지 않는다.
사용 방법
본 개시내용은 HIV 감염 또는 관련 질환 또는 장애의 치료 또는 예방이 필요한 대상체 (예를 들어, 인간 대상체)에게 본원에 기재된 항체, 또는 상기 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 HIV 감염 또는 관련 질환 또는 장애를 치료하거나 또는 에방하는 방법을 제공한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 대상체에게 요법을 투여하는 것과 관련하여 용어 "유효량"은 원하는 예방적 또는 치료적 효과를 달성하는 요법의 양을 지칭한다. 폴리뉴클레오티드는 벡터, 예를 들어, 바이러스 벡터에 존재할 수 있다. 특별한 실시양태에서, 관련 질환 또는 장애는 HIV에 의한 감염에 의해 초래된다. 특별한 실시양태에서, 이는 후천성 면역 결핍 증후군 (AIDS)이다. 특별한 실시양태에서, 대상체는 바이러스적으로 저해된 HIV-감염된 포유류인 반면에, 다른 실시양태에서, 대상체는 치료한 적이 없는(treatment-naive) HIV-감염된 포유류이다. 특정 실시양태에서, 치료한 적이 없는 대상체는 103 내지 105 카피/ml의 바이러스 로드를 갖고, 특정 실시양태에서, 바이러스적으로 저해된 대상체는 < 50 카피/ml의 바이러스 로드를 갖는다. 특별한 실시양태에서, 대상체는 포유류, 예를 들어, 인간이다. 특정 실시양태에서, 대상체는 HIV, 예를 들어, HIV-1 또는 HIV-2, 감염 또는 관련 질환 또는 장애, 예를 들어, AIDS로 진단받은 적이 있거나, 또는 HIV, 예를 들어, HIV-1 또는 HIV-2 감염 또는 관련 질환 또는 장애, 예를 들어, AIDS가 발달할 위험이 있는 것으로 고려된다. HIV-관련 질환 또는 장애에 대한 위험이 있는 대상체에는 감염된 사람과 접촉한 적이 있거나 또는 일부 다른 방식으로 HIV에 노출된 적이 있는 환자이다. 예방제의 투여는 HIV-관련 질환 또는 장애의 특징적인 증상이 나타나기 전에 일어날 수 있으며, 이로써 질환 또는 장애가 예방되거나 또는 대안적으로 그의 진행이 지연되도록 한다.
대상체 (예를 들어, 인간 대상체)에서 HIV 바이러스 역가, 바이러스 복제, 바이러스 증식, 또는 HIV 바이러스 DNA, HIV 프로바이러스 DNA 또는 HIV 바이러스 단백질의 양에서의 증가를 예방하거나 또는 억제하는 방법 또한 제공된다. 한 실시양태에서, 상기 방법은 이러한 예방 또는 억제가 필요한 대상체에게 대상체에서 HIV 역가, 바이러스 복제, 또는 하나 이상의 HIV 균주 또는 분리주의 HIV 단백질의 양에서의 증가를 예방하는데 효과적인 본원에 기재된 항체, 또는 상기 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 양을 투여하는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 상기 방법은 하나 이상의 시점에서, 예를 들어, 대상체에게 본 개시내용의 항체를 제공하기 전에 및 후에 HIV 바이러스 또는 프로바이러스 DNA 또는 단백질의 양을 측정하는 것을 추가로 포함한다. 대상체에서 HIV 바이러스 또는 프로바이러스 DNA 또는 단백질의 양을 측정하기 위한 방법 및 바이오마커는 관련 기술분야에 공지되어 있고 이용가능하며, 예를 들어, [Siliciano, J.D. et al., Curr Opin. HIV AIDS, 5(6):491-7 (2010), 및 Rouzioux, C. et al., Curr Opin HIV AIDS, 8(3):170-5 (2013)]에 기재되어 있다.
본원에 기재된 듀오바디®는 조합 항레트로바이러스 요법 (cART)-저해된 환자로부터 단리된 CD4+T 세포에서 생체 외에서 잠복성 HIV를 재활성화시킬 수 있고, 따라서 HIV 바이러스 역가를 실제로 증가시킬 수 있다. 이는 잠복적으로-감염된 세포를 gp120을 발현하도록 활성화시킨 다음, 잠재적으로 제거를 목적으로 할 것이기 때문에, 이는 듀오바디®의 이점이다. CD3과의 결합은 부분 T 세포 활성화 표현형을 유도할 수 있고, 잠복적으로-감염된 CD4+ T 세포의 활성화는 바이러스 발현을 초래한다. 따라서, HIV의 잠복성의 역전을 필요로 하는 대상체에서 HIV의 잠복성을 역전시키는 방법 또한 특징으로 한다. 상기 방법은 이러한 역전을 필요로 하는 인간 대상체에게 본원에 기재된 gp120 X CD3 듀오바디®를 투여하는 것을 수반한다. 특정 실시양태에서, 상기 방법은 하나 이상의 시점에서, 예를 들어, 대상체에게 본 개시내용의 듀오바디®를 제공하기 전에 및 후에 HIV RNA, 바이러스 또는 프로바이러스 DNA 또는 단백질의 양을 측정하는 것을 추가로 포함한다.
특정 측면에서, 본 개시내용의 항체는 예를 들어 본원에 기재된 특정한 바이러스 예컨대 HIV 분리주의 억제, 본원에 기재된 특정한 바이러스 예컨대 HIV 분리주의 감염의 예방적 억제 또는 예방, 샘플에서 본원에 기재된 특정한 바이러스 예컨대 HIV 분리주의 검출, 본원에 기재된 특정한 바이러스 예컨대 HIV 분리주의 억제, 본원에 기재된 특정한 바이러스 예컨대 HIV 분리주의 진단을 위한 방법에서 사용될 수 있다.
포유류 대상체, 예를 들어, 인간의 생체내 치료를 위해, 대상체에게 본원에 기재된 다중특이적 항체를 포함하는 제약 조성물을 투여하거나 또는 제공할 수 있다. 생체내 요법을 위해 사용되는 경우, 본원에 기재된 항체는 전형적으로 치료 유효량 (즉, 환자의 바이러스 부담 및/또는 바이러스 병원소를 제거하거나 또는 감소시키는 양)으로 환자에게 투여되거나 또는 제공된다. 항체는 공지된 방법에 따라, 예컨대, 비제한적으로 볼루스로서 또는 소정 기간에 걸쳐 연속 주입에 의해 정맥내 투여, 근육내, 복강내, 뇌척수내, 피하, 관절내, 활액막내, 경막내, 경구, 국소, 또는 흡입 경로에 의해 포유류 대상체, 예를 들어, 인간에게 투여되거나 또는 제공된다. 항체는 가능한 경우 표적 세포 부위에서 비경구로, 또는 정맥내로 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 대상체에게 항체의 투여는 정맥내 경로를 통한 것이다. 또 다른 실시양태에서, 대상체에게 항체의 투여는 피하 경로를 통한 것이다. 특별한 실시양태에서, 본 개시내용의 제약 조성물은 대상체에게 전신으로, 비경구로 또는 국부적으로 투여된다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용은 HIV 감염의 치료가 필요한 환자에게 본원에 개시된 항체의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, HIV 감염을 치료하는 방법을 제공한다.
조합 요법
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 제약 조성물의 치료 유효량을 1종 이상의 (예를 들어, 1, 2, 3종, 1 또는 2종, 또는 1 내지 3종) 추가의 치료제의 치료 유효량과 조합하여 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 감염을 갖거나 또는 감염을 가질 위험이 있는 인간에서 HIV 감염을 치료하거나 또는 예방하는 방법이 제공된다. 한 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 제약상 허용가능한 염의 치료 유효량을 1종 이상의 (예를 들어, 1, 2, 3종, 1 또는 2종, 또는 1 내지 3종) 추가의 치료제의 치료 유효량과 조합하여 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 감염을 갖거나 또는 감염을 가질 위험이 있는 인간에서 HIV 감염을 치료하거나 또는 예방하는 방법이 제공된다.
한 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 제약 조성물을 1종 이상의 (예를 들어, 1, 2, 3종, 1 또는 2종, 또는 1 내지 3종) 추가의 치료제, 및 제약상 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제와 함께 포함하는 제약 조성물이 제공된다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용은 HIV 감염의 치료가 필요한 환자에게 본원에 개시된 항체 또는 그의 제약 조성물의 치료 유효량을 HIV 감염의 치료에 적합한 1종 이상의 추가의 치료제의 치료 유효량과 조합하여 투여하는 것을 포함하는, HIV 감염을 치료하는 방법을 제공한다.
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 제약 조성물을 1, 2, 3, 4종 이상의 추가의 치료제와 조합한다. 특정 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 제약 조성물을 2종의 추가의 치료제와 조합한다. 다른 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 제약 조성물을 3종의 추가의 치료제와 조합한다. 추가의 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 제약 조성물을 4종의 추가의 치료제와 조합한다. 1, 2, 3, 4종 이상의 추가의 치료제는 동일한 부류의 치료제로부터 선택된 상이한 치료제일 수 있고/거나, 이들은 상이한 부류의 치료제로부터 선택될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 1종 이상의 추가의 치료제와 함께 투여된다. 본원에 개시된 항체와 1종 이상의 추가의 치료제의 공동-투여는 일반적으로 본원에 개시된 항체 및 1종 이상의 추가의 치료제의 치료 유효량이 둘 다 환자의 신체에 존재하도록 하는 본원에 개시된 화합물 및 1종 이상의 추가의 치료제의 동시 또는 순차적 투여를 지칭한다. 순차적으로 투여되는 경우, 조합물은 2회 이상의 투여로 투여될 수 있다.
공동-투여는 1종 이상의 추가의 치료제의 단위 용량의 투여 이전 또는 이후에 본원에 개시된 항체의 단위 용량의 투여를 포함한다. 예를 들어, 본원에 개시된 항체는 1종 이상의 추가의 치료제의 투여로부터 수초, 수분 또는 수시간 이내에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체의 단위 용량을 먼저 투여한 후에, 수초 또는 수분 이내에 1종 이상의 추가의 치료제의 단위 용량을 투여한다. 대안적으로, 1종 이상의 추가의 치료제의 단위 용량을 먼저 투여한 후에, 수초 또는 수분 이내에 본원에 개시된 항체의 단위 용량을 투여한다. 다른 실시양태에서, 본원에 개시된 항체의 단위 용량을 먼저 투여한 후에, 소정 시간 (예를 들어, 1-12 시간) 후에, 1종 이상의 추가의 치료제의 단위 용량을 투여한다. 여전히 다른 실시양태에서, 1종 이상의 추가의 치료제의 단위 용량을 먼저 투여한 후에, 소정 시간 (예를 들어, 1-12 시간) 후에, 본원에 개시된 항체의 단위 용량을 투여한다.
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 환자에게 동시에 투여하기 위한 단위 투여 형태로, 예를 들어 경구 투여를 위한 고체 투여 형태로 1종 이상의 추가의 치료제와 조합될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 액체로서 제형화되고, 이는 임의적으로 HIV 치료에 유용한 추가의 치료제(들)을 함유할 수 있다. 특정 실시양태에서, 액체는 HIV를 위한 또 다른 활성 성분, 예컨대 HIV 프로테아제 억제제, 역전사효소의 HIV 비-뉴클레오시드 또는 비-뉴클레오티드 억제제, 역전사효소의 HIV 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 억제제, HIV 인테그라제 억제제, HIV 비-촉매적 부위 (또는 알로스테릭) 인테그라제 억제제, 약동학적 인핸서, 및 이들의 조합물을 함유할 수 있다.
특정 실시양태에서, 이러한 제형은 1일 1회 투여에 적합하다. 상기 실시양태에서, 추가의 치료제는 항-HIV 작용제일 수 있다. 일부 예에서, 추가의 치료제는 HIV 프로테아제 억제제, 역전사효소의 HIV 비-뉴클레오시드 또는 비-뉴클레오티드 억제제, 역전사효소의 HIV 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 억제제, HIV 인테그라제 억제제, HIV 비-촉매적 부위 (또는 알로스테릭) 인테그라제 억제제, HIV 진입 억제제, HIV 성숙 억제제, 잠복 역전제, HIV 캡시드를 표적화하는 화합물, 면역-기반 요법, 포스파티딜이노시톨 3-키나제 (PI3K) 억제제, HIV 항체, 이중특이적 항체 및 "항체-유사" 치료적 단백질, HIV p17 매트릭스 단백질 억제제, IL-13 길항제, 펩티딜-프롤릴 시스-트랜스 아이소머라제 A 조절인자, 단백질 디술피드 아이소머라제 억제제, 보체 C5a 수용체 길항제, DNA 메틸트랜스퍼라제 억제제, HIV vif 유전자 조절인자, Vif 이합체화 길항제, HIV-1 바이러스 감염 인자 억제제, TAT 단백질 억제제, HIV-1 Nef 조절인자, Hck 티로신 키나제 조절인자, 혼합된 계통 키나제-3 (MLK-3) 억제제, HIV-1 스플라이싱 억제제, Rev 단백질 억제제, 인테그린 길항제, 핵단백질 억제제, 스플라이싱 인자 조절인자, COMM 도메인 함유 단백질 1 조절인자, HIV 리보뉴클레아제 H 억제제, 레트로시클린 조절인자, CDK-9 억제제, 수지상 ICAM-3 그래빙 비인테그린 1 억제제, HIV GAG 단백질 억제제, HIV POL 단백질 억제제, 보체 인자 H 조절인자, 유비퀴틴 리가제 억제제, 데옥시시티딘 키나제 억제제, 시클린 의존성 키나제 억제제, 프로프로테인 컨버타제 PC9 자극인자, ATP 의존성 RNA 헬리카제 DDX3X 억제제, 역전사효소 프라이밍 복합 억제제, G6PD 및 NADH-옥시다제 억제제, 약동학적 인핸서, HIV 유전자 요법, HIV 백신, 및 이들의 조합물일 수 있다.
일부 실시양태에서, 추가의 치료제는 HIV에 대한 조합 약물, HIV 치료를 위한 다른 약물, HIV 프로테아제 억제제, HIV 역전사효소 억제제, HIV 인테그라제 억제제, HIV 비-촉매적 부위 (또는 알로스테릭) 인테그라제 억제제, HIV 진입 (융합) 억제제, HIV 성숙 억제제, 잠복 역전제, 캡시드 억제제, 면역-기반 요법, PI3K 억제제, HIV 항체, 및 이중특이적 항체, 및 "항체-유사" 치료적 단백질, 및 이들의 조합물로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 개시내용의 항체와 함께 사용될 수 있는 조합 약물의 예에는 아트리플라(ATRIPLA)® (에파비렌츠, 테노포비르 디소프록실 푸마레이트, 및 엠트리시타빈); 콤플레라(COMPLERA)® (에비플레라(EVIPLERA)®; 릴피비린, 테노포비르 디소프록실 푸마레이트, 및 엠트리시타빈); 스트리빌드(STRIBILD)® (엘비테그라비르, 코비시스타트, 테노포비르 디소프록실 푸마레이트, 및 엠트리시타빈); 트루바다(TRUVADA)® (테노포비르 디소프록실 푸마레이트 및 엠트리시타빈; TDF+FTC); 데스코비(DESCOVY)® (테노포비르 알라페나미드 및 엠트리시타빈); 오데프세이(ODEFSEY)® (테노포비르 알라페나미드, 엠트리시타빈, 및 릴피비린); 겐보야(GENVOYA)® (테노포비르 알라페나미드, 엠트리시타빈, 코비시스타트, 및 엘비테그라비르); 다루나비르, 테노포비르 알라페나미드 헤미푸마레이트, 엠트리시타빈, 및 코비시스타트; 에파비렌츠, 라미부딘, 및 테노포비르 디소프록실 푸마레이트; 라미부딘 및 테노포비르 디소프록실 푸마레이트; 테노포비르 및 라미부딘; 테노포비르 알라페나미드 및 엠트리시타빈 ;테노포비르 알라페나미드 헤미푸마레이트 및 엠트리시타빈; 테노포비르 알라페나미드 헤미푸마레이트, 엠트리시타빈, 및 릴피비린; 테노포비르 알라페나미드 헤미푸마레이트, 엠트리시타빈, 코비시스타트, 및 엘비테그라비르; 콤비비르(COMBIVIR)® (지도부딘 및 라미부딘; AZT+3TC); 에프지콤(EPZICOM)® (리벡사(LIVEXA)®; 아바카비르 술페이트 및 라미부딘; ABC+3TC); 칼레트라(KALETRA)® (알루비아(ALUVIA)®; 로피나비르 및 리토나비르); 트리우메큐(TRIUMEQ)® (돌루테그라비르, 아바카비르, 및 라미부딘); 트리지비르(TRIZIVIR)® (아바카비르 술페이트, 지도부딘, 및 라미부딘; ABC+AZT+3TC); 아타자나비르 및 코비시스타트; 아타자나비르 술페이트 및 코비시스타트; 아타자나비르 술페이트 및 리토나비르; 다루나비르 및 코비시스타트; 돌루테그라비르 및 릴피비린; 돌루테그라비르 및 릴피비린 히드로클로라이드; 돌루테그라비르, 아바카비르 술페이트, 및 라미부딘; 라미부딘, 네비라핀, 및 지도부딘; 랄테그라비르 및 라미부딘; 도라비린, 라미부딘, 및 테노포비르 디소프록실 푸마레이트; 도라비린, 라미부딘, 및 테노포비르 디소프록실; 돌루테그라비르 + 라미부딘, 라미부딘 + 아바카비르 + 지도부딘, 라미부딘 + 아바카비르, 라미부딘 + 테노포비르 디소프록실 푸마레이트, 라미부딘 + 지도부딘 + 네비라핀, 로피나비르 + 리토나비르, 로피나비르 + 리토나비르 + 아바카비르 + 라미부딘, 로피나비르 + 리토나비르 + 지도부딘 + 라미부딘, 테노포비르 + 라미부딘, 및 테노포비르 디소프록실 푸마레이트 + 엠트리시타빈 + 릴피비린 히드로클로라이드, 로피나비르, 리토나비르, 지도부딘 및 라미부딘; Vacc-4x 및 로미뎁신; 및 APH-0812가 포함된다.
본 개시내용의 항체와 조합될 수 있는 HIV 치료를 위한 다른 약물의 예에는 아세만난, 알리스포리비르, BanLec, 데페리프론, 가미뮨, 메텐케팔린, 날트렉손, 프롤라스틴, REP 9, RPI-MN, VSSP, H1viral, SB-728-T, 1,5-디카페오일퀴닉산, rHIV7-shl-TAR-CCR5RZ, AAV-eCD4-Ig 유전자 요법, MazF 유전자 요법, 블록에이드(BlockAide), ABX-464, AG-1105, APH-0812, BIT-225, CYT-107, HGTV-43, HPH-116, HS-10234, IMO-3100, IND-02, MK-1376, MK-8507, MK-8591, NOV-205, PA-1050040 (PA-040), PGN-007, SCY-635, SB-9200, SCB-719, TR-452, TEV-90110, TEV-90112, TEV-90111, TEV-90113, RN-18, 이뮤글로, 및 VIR-576이 포함된다.
본 개시내용의 항체와 조합될 수 있는 HIV 프로테아제 억제제의 예에는 암프레나비르, 아타자나비르, 브레카나비르, 다루나비르, 포삼프레나비르, 포삼프레나비르 칼슘, 인디나비르, 인디나비르 술페이트, 로피나비르, 넬피나비르, 넬피나비르 메실레이트, 리토나비르, 사퀴나비르, 사퀴나비르 메실레이트, 트리프라나비르, DG-17, TMB-657 (PPL-100), T-169, BL-008, 및 TMC-310911이 포함된다.
본 개시내용의 항체와 조합될 수 있는 역전사효소의 HIV 뉴클레오시드 또는 비-뉴클레오티드 억제제의 예에는 다피비린, 델라비르딘, 델라비르딘 메실레이트, 도라비린, 에파비렌츠, 에트라비린, 렌티난, 네비라핀, 릴피비린, ACC-007, AIC-292, KM-023, 및 VM-1500이 포함된다.
본 개시내용의 항체와 조합될 수 있는 역전사효소의 HIV 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 억제제의 예에는 아데포비르, 아데포비르 디피복실, 아즈부딘, 엠트리시타빈, 테노포비르, 테노포비르 알라페나미드, 테노포비르 알라페나미드 푸마레이트, 테노포비르 알라페나미드 헤미푸마레이트, 테노포비르 디소프록실, 테노포비르 디소프록실 푸마레이트, 테노포비르 디소프록실 헤미푸마레이트, 비덱스(VIDEX)® 및 비덱스 EC® (디다노신, ddl), 아바카비르, 아바카비르 술페이트, 알로부딘, 아프리시타빈, 센사부딘, 디다노신, 엘부시타빈, 페스티나비르, 포살부딘 티독실, CMX-157, 다피비린, 도라비린, 에트라비린, OCR-5753, 테노포비르 디소프록실 오로테이트, 포지부신 티독실, 라미부딘, 포스파지드, 스타부딘, 잘시타빈, 지도부딘, GS-9131, GS-9148, 및 KP-1461이 포함된다.
본 개시내용의 항체와 조합될 수 있는 HIV 인테그라제 억제제의 예에는 엘비테그라비르, 쿠르쿠민, 쿠르쿠민의 유도체, 키코르산, 키코르산의 유도체, 3,5-디카페오일퀴닉산, 3,5-디카페오일퀴닉산의 유도체, 아우린트리카르복실산, 아우린트리카르복실산의 유도체, 카페익산 페네틸 에스테르, 카페익산 페네틸 에스테르의 유도체, 티르포스틴, 티르포스틴의 유도체, 쿠에르세틴, 쿠에르세틴의 유도체, 랄테그라비르, 돌루테그라비르, JTK-351, 빅테그라비르, AVX-15567, 카보테그라비르 (지속성 주사가능한), 디케토 퀴놀린-4-1 유도체, 인테그라제-LEDGF 억제제, 레드긴스, M-522, M-532, NSC-310217, NSC-371056, NSC-48240, NSC-642710, NSC-699171, NSC-699172, NSC-699173, NSC-699174, 스틸벤디술폰산, T-169 및 카보테그라비르가 포함된다.
본 개시내용의 항체와 조합될 수 있는 HIV 비-촉매적 부위, 또는 알로스테릭, 인테그라제 억제제 (NCINI)의 예에는 CX-05045, CX-05168, 및 CX-14442가 포함된다.
본 개시내용의 항체와 조합될 수 있는 HIV 진입 (융합) 억제제의 예에는 세니크리비록, CCR5 억제제, gp41 억제제, CD4 부착 억제제, gp120 억제제, 및 CXCR4 억제제가 포함된다.
본 개시내용의 항체와 조합될 수 있는 CCR5 억제제의 예에는 아플라비록, 비크리비록, 마라비록, 세니크리비록, PRO-140, 아답타비르 (RAP-101), 니페비록 (TD-0232), 항-GP120/CD4 또는 CCR5 이중특이적 항체, B-07, MB-66, 폴리펩티드 C25P, TD-0680, 및 vMIP (하이미푸)가 포함된다.
본 개시내용의 항체와 조합될 수 있는 gp41 억제제의 예에는 알부비르티드, 엔푸비르티드, BMS-986197, 엔푸비르티드 바이오베터, 엔푸비르티드 바이오시밀러, HIV-1 융합 억제제 (P26-Bapc), ITV-1, ITV-2, ITV-3, ITV-4, PIE-12 삼합체 및 시푸비르티드가 포함된다.
본 개시내용의 항체와 조합될 수 있는 CD4 부착 억제제의 예에는 이발리주맙 및 CADA 유사체가 포함된다.
본 개시내용의 항체와 조합될 수 있는 gp120 억제제의 예에는 Radha-108 (레셉톨) 3B3-PE38, BanLec, 벤토나이트-기반 나노의약, 포스템사비르 트로메타민, IQP-0831, 및 BMS-663068이 포함된다.
본 개시내용의 항체와 조합될 수 있는 CXCR4 억제제의 예에는 플레릭사포르, ALT-1188, N15 펩티드, 및 vMIP (하이미푸)가 포함된다.
본 개시내용의 항체와 조합될 수 있는 HIV 성숙 억제제의 예에는 BMS-955176 및 GSK-2838232가 포함된다.
본 개시내용의 항체와 조합될 수 있는 잠복 역전제의 예에는 히스톤 데아세틸라제 (HDAC) 억제제, 프로테아좀 억제제 예컨대 벨카데, 단백질 키나제 C (PKC) 활성화제, Smyd2 억제제, BET-브로모도메인 4 (BRD4) 억제제, 이오노마이신, PMA, SAHA (수베르아닐로히드록삼산, 또는 수베로일, 아닐리드, 및 히드록삼산), NIZ-985, IL-15, JQ1, 디술피람, 암포테리신 B, 및 유비퀴틴 억제제 예컨대 라르가졸 유사체, 및 GSK-343이 포함된다. HDAC 억제제의 예에는 로미뎁신, 보리노스타트, 및 파노비노스타트가 포함된다. PKC 활성화제의 예에는 인도락탐, 프로스트라틴, 인게놀 B, 및 DAG-락톤이 포함된다.
본 개시내용의 항체와 조합될 수 있는 캡시드 억제제의 예에는 캡시드 중합체화 억제제 또는 캡시드 붕괴 화합물, HIV 뉴클레오캡시드 p7 (NCp7) 억제제 예컨대 아조디카본아미드, HIV p24 캡시드 단백질 억제제, AVI-621, AVI-101, AVI-201, AVI-301, 및 AVI-CAN1-15 시리즈가 포함된다.
본 개시내용의 항체와 조합될 수 있는 면역-기반 요법의 예에는 toll-유사 수용체 조절인자 예컨대 TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, TLR11, TLR12, 및 TLR13; 프로그래밍된 세포 사멸 단백질 1 (PD-1) 조절인자; 프로그래밍된 사멸-리간드 1 (PD-L1) 조절인자; IL-15 효능제; 더마비르(DermaVir); 인터류킨-7; 플라쿠에닐 (히드록시클로로퀸); 프로류킨 (알데스류킨, IL-2); 인터페론 알파; 인터페론 알파-2b; 인터페론 알파-n3; 페길화 인터페론 알파; 인터페론 감마; 히드록시우레아; 마이코페놀레이트 모페틸 (MPA) 및 그의 에스테르 유도체 마이코페놀레이트 모페틸 (MMF); 리바비린; 린타톨리모드, 중합체 폴리에틸렌이민 (PEI); 게폰; 린타톨리모드; IL-12; WF-10; VGV-1; MOR-22; BMS-936559; CYT-107, 인터류킨-15/Fc 융합 단백질, 노름페론, 페그인터페론 알파-2a, 페그인터페론 알파-2b, 재조합 인터류킨-15, RPI-MN, GS-9620, 및 IR-103이 포함된다.
본 개시내용의 항체와 조합될 수 있는 PI3K 억제제의 예에는 이델랄리십, 알펠리십, 부파를리십, CAI 오로테이트, 코판리십, 두벨리십, 게다톨리십, 네라티닙, 파눌리십, 페리포신, 픽틸리십, 필라랄리십, 푸퀴티닙 메실레이트, 리고세르팁, 리고세르팁 나트륨, 소놀리십, 타셀리십, AMG-319, AZD-8186, BAY-1082439, CLR-1401, CLR-457, CUDC-907, DS-7423, EN-3342, GSK-2126458, GSK-2269577, GSK-2636771, INCB-040093, LY-3023414, MLN-1117, PQR-309, RG-7666, RP-6530, RV-1729, SAR-245409, SAR-260301, SF-1126, TGR-1202, UCB-5857, VS-5584, XL-765, 및 ZSTK-474가 포함된다.
본 개시내용의 항체와 조합될 수 있는 인테그린 알파-4/베타-7 길항제의 예에는 PTG-100, TRK-170, 아브릴루맙, 에트롤리주맙, 카로테그라스트 메틸, 및 베돌리주맙이 포함된다.
본 개시내용의 항체와 조합될 수 있는 HIV 항체, 이중특이적 항체, 및 "항체-유사" 치료적 단백질의 예에는 DARTs®, 듀오바디®, BITES®, XmAbs®, TandAbs®, Fab 유도체, bNAbs (광범위 중화 HIV-1 항체), BMS-936559, TMB-360, 및 HIV gp120 또는 gp41을 표적화하는 것들, HIV를 표적화하는 항체-동원 분자, 항-CD63 모노클로날 항체, 항-GB 바이러스 C 항체, 항-GP120/CD4, CCR5 이중특이적 항체, 항-nef 단일 도메인 항체, 항-Rev 항체, 낙타과 유래된 항-CD18 항체, 낙타과-유래된 항-ICAM-1 항체, DCVax-001, gp140 표적화된 항체, gp41-기반 HIV 치료적 항체, 인간 재조합 mAbs (PGT-121), 이발리주맙, 이뮤글로, MB-66이 포함된다. 이러한 방식으로 HIV를 표적화하는 것들의 예에는 바비툭시맙, UB-421, C2F5, C2G12, C4E10, C2F5+C2G12+C4E10, 3BNC-117, PGT145, PGT121, PGDM1400, MDX010 (이필리무맙), VRC01, A32, 7B2, 10E8, VRC-07-523, VRC-HIVMAB080-00-AB, MGD-014 및 VRC07이 포함된다. HIV를 표적화하는 항체의 추가의 예에는 PGT122, PGT123, PGT124, 10-1074, PGT133, PGT134, PG16, PG9, PGT151 등이 포함된다.
본 개시내용의 항체와 조합될 수 있는 약동학적 인핸서의 예에는 코비시스타트 및 리토나비르가 포함된다.
본 개시내용의 항체와 조합될 수 있는 추가의 치료제의 예에는 WO 2004/096286 (길리어드 사이언시즈(Gilead Sciences)), WO 2006/015261 (길리어드 사이언시즈), WO 2006/110157 (길리어드 사이언시즈), WO 2012/003497 (길리어드 사이언시즈), WO 2012/003498 (길리어드 사이언시즈), WO 2012/145728 (길리어드 사이언시즈), WO 2013/006738 (길리어드 사이언시즈), WO 2013/159064 (길리어드 사이언시즈), WO 2014/100323 (길리어드 사이언시즈), US 2013/0165489 (유니버시티 오브 펜실베니아(University of Pennsylvania)), US 2014/0221378 (재팬 토바코(Japan Tobacco)), US 2014/0221380 (재팬 토바코), WO 2009/062285 (뵈링거 잉겔하임(Boehringer Ingelheim)), WO 2010/130034 (뵈링거 잉겔하임), WO 2013/006792 (파마 리소시즈(Pharma Resources)), US 20140221356 (길리어드 사이언시즈), US 20100143301 (길리어드 사이언시즈) 및 WO 2013/091096 (뵈링거 잉겔하임)에 개시된 화합물이 포함된다.
본 개시내용의 항체와 조합될 수 있는 HIV 백신의 예에는 펩티드 백신, 재조합 아단위 단백질 백신, 생 벡터 백신, DNA 백신, CD4-유래된 펩티드 백신, 백신 조합물, rgp120 (AIDSVAX), ALVAC HIV (vCP1521)/AIDSVAX B/E (gp120) (RV144), 단량체성 gp120 HIV-1 아형 C 백신, 리뮨(Remune), ITV-1, 콘트리 비르(Contre Vir), Ad5-ENVA-48, DCVax-001 (CDX-2401), Vacc-4x, Vacc-C5, VAC-3S, 멀티클래이드 DNA 재조합 아데노바이러스-5 (rAd5), 펜박스(Pennvax)-G, 펜박스-GP, HIV-TriMix-mRNA 백신, HIV-LAMP-vax, Ad35, Ad35-GRIN, NAcGM3/VSSP ISA-51, 폴리-ICLC 아주반트용 백신, 타트이뮨(TatImmune), GTU-multiHIV (FIT-06), gp140[델타]V2.TV1+MF-59, rVSVIN HIV-1 gag 백신, SeV-Gag 백신, AT-20, DNK-4, ad35-Grin/ENV, TBC-M4, HIVAX, HIVAX-2, NYVAC-HIV-PT1, NYVAC-HIV-PT4, DNA-HIV-PT123, rAAV1-PG9DP, GOVX-B11, GOVX-B21, TVI-HIV-1, Ad-4 (Ad4-env 클레이드 C+Ad4-mGag), EN41-UGR7C, EN41-FPA2, PreVaxTat, AE-H, MYM-V101, CombiHIVvac, ADVAX, MYM-V201, MVA-CMDR, DNA-Ad5 gag/pol/nef/nev (HVTN505), MVATG-17401, ETV-01, CDX-1401, rcAD26.MOS1.HIV-Env, Ad26.Mod.HIV 백신, AGS-004, AVX-101, AVX-201, PEP-6409, SAV-001, ThV-01, TL-01, TUTI-16, VGX-3300, IHV-001, 및 바이러스-유사 입자 백신 예컨대 슈도비리온 백신, CombiVICHvac, LFn-p24 B/C 융합 백신, GTU-기반 DNA 백신, HIV gag/pol/nef/env DNA 백신, 항-TAT HIV 백신, 콘쥬게이트 폴리펩티드 백신, 수지상-세포 백신, gag-기반 DNA 백신, GI-2010, gp41 HIV-1 백신, HIV 백신 (PIKA 아주반트), I i-key/MHC 클래스 II 에피토프 하이브리드 펩티드 백신, ITV-2, ITV-3, ITV-4, LIPO-5, 멀티클래이드 Env 백신, MVA 백신, 펜박스-GP, pp71-결핍 HCMV 벡터 HIV gag 백신, 재조합 펩티드 백신 (HIV 감염), NCI, rgp160 HIV 백신, RNActive HIV 백신, SCB-703, Tat Oyi 백신, TBC-M4, 치료적 HIV 백신, UBI HIV gp120, Vacc-4x + 로미뎁신, 변이체 gp120 폴리펩티드 백신, rAd5 gag-pol env A/B/C 백신이 포함된다.
본 개시내용의 항체와 조합될 수 있는 임신 조절을 위한 치료제 (피임약)에는 시프로테론 아세테이트, 데소게스트렐, 디에노게스트, 드로스피레논, 에스트라디올 발레레이트, 에티닐 에스트라디올, 에티노디올, 에토노게스트렐, 레보메폴레이트, 레보노르게스트렐, 리네스트레놀, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 메스트라놀, 미페프리스톤, 미소프로스톨, 노메게스트롤 아세테이트, 노렐게스트로민, 노레틴드론, 노레티노드렐, 노르게스티메이트, 오르멜록시펜, 세게스테르손 아세테이트, 울리프리스탈 아세테이트, 및 임의의 이들의 조합물이 포함된다.
특별한 실시양태에서, 본원에 개시된 항체, 또는 제약상 허용가능한 염은 아트리플라® (에파비렌츠, 테노포비르 디소프록실 푸마레이트, 및 엠트리시타빈); 콤플레라® (에비플레라®; 릴피비린, 테노포비르 디소프록실 푸마레이트, 및 엠트리시타빈); 스트리빌드® (엘비테그라비르, 코비시스타트, 테노포비르 디소프록실 푸마레이트, 및 엠트리시타빈); 트루바다® (테노포비르 디소프록실 푸마레이트 및 엠트리시타빈; TDF +FTC); 데스코비® (테노포비르 알라페나미드 및 엠트리시타빈); 오데프세이® (테노포비르 알라페나미드, 엠트리시타빈, 및 릴피비린); 겐보야® (테노포비르 알라페나미드, 엠트리시타빈, 코비시스타트, 및 엘비테그라비르); 아데포비르; 아데포비르 디피복실; 코비시스타트; 엠트리시타빈; 테노포비르; 테노포비르 디소프록실; 테노포비르 디소프록실 푸마레이트; 테노포비르 알라페나미드; 테노포비르 알라페나미드 헤미푸마레이트; 트리우메큐® (돌루테그라비르, 아바카비르, 및 라미부딘); 돌루테그라비르, 아바카비르 술페이트, 및 라미부딘; 랄테그라비르; 랄테그라비르 및 라미부딘; 마라비록; 엔푸비르티드; 알루비아® (칼레트라®; 로피나비르 및 리토나비르); 콤비비르® (지도부딘 및 라미부딘; AZT+3TC); 에프지콤® (리벡사®; 아바카비르 술페이트 및 라미부딘; ABC+3TC); 트리지비르® (아바카비르 술페이트, 지도부딘, 및 라미부딘; ABC+AZT+3TC); 릴피비린; 릴피비린 히드로클로라이드; 아타자나비르 술페이트 및 코비시스타트; 아타자나비르 및 코비시스타트; 다루나비르 및 코비시스타트; 아타자나비르; 아타자나비르 술페이트; 돌루테그라비르; 엘비테그라비르; 리토나비르; 아타자나비르 술페이트 및 리토나비르; 다루나비르; 라미부딘; 프롤라스틴; 포삼프레나비르; 포삼프레나비르 칼슘 에파비렌츠; 에트라비린; 넬피나비르; 넬피나비르 메실레이트; 인터페론; 디다노신; 스타부딘; 인디나비르; 인디나비르 술페이트; 테노포비르 및 라미부딘; 지도부딘; 네비라핀; 사퀴나비르; 사퀴나비르 메실레이트; 알데스류킨; 잘시타빈; 트리프라나비르; 암프레나비르; 델라비르딘; 델라비르딘 메실레이트; Radha-108 (레셉톨); 라미부딘 및 테노포비르 디소프록실 푸마레이트; 에파비렌츠, 라미부딘, 및 테노포비르 디소프록실 푸마레이트; 포스파지드; 라미부딘, 네비라핀, 및 지도부딘; 아바카비르; 및 아바카비르 술페이트로부터 선택된 1, 2, 3, 4종 이상의 추가의 치료제와 조합된다.
구체적인 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 제약 조성물은 역전사효소의 HIV 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 억제제 및 역전사효소의 HIV 비-뉴클레오시드 억제제와 조합된다. 또 다른 구체적인 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 제약 조성물은 역전사효소의 HIV 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 억제제, 및 HIV 프로테아제 억제 화합물과 조합된다. 추가의 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 제약 조성물은 역전사효소의 HIV 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 억제제, 역전사효소의 HIV 비-뉴클레오시드 억제제, 및 약동학적 인핸서와 조합된다. 특정 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 제약 조성물은 적어도 1종의 역전사효소의 HIV 뉴클레오시드 억제제, 인테그라제 억제제, 및 약동학적 인핸서와 조합된다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 제약 조성물은 역전사효소의 2종의 HIV 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 억제제와 조합된다.
특별한 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 제약 조성물은 아바카비르 술페이트, 테노포비르, 테노포비르 디소프록실, 테노포비르 디소프록실 푸마레이트, 테노포비르 디소프록실 헤미푸마레이트, 테노포비르 알라페나미드, 또는 테노포비르 알라페나미드 헤미푸마레이트와 조합된다.
특별한 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 제약 조성물은 테노포비르, 테노포비르 디소프록실, 테노포비르 디소프록실 푸마레이트, 테노포비르 알라페나미드, 또는 테노포비르 알라페나미드 헤미푸마레이트와 조합된다.
특별한 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 제약 조성물은 아바카비르 술페이트, 테노포비르, 테노포비르 디소프록실, 테노포비르 디소프록실 푸마레이트, 테노포비르 알라페나미드, 및 테노포비르 알라페나미드 헤미푸마레이트로 이루어진 군으로부터 선택된 제1의 추가의 치료제, 및 엠트리시타빈 및 라미부딘으로 이루어진 군으로부터 선택된 제2의 추가의 치료제와 조합된다.
특별한 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 제약 조성물은 테노포비르, 테노포비르 디소프록실, 테노포비르 디소프록실 푸마레이트, 테노포비르 알라페나미드, 및 테노포비르 알라페나미드 헤미푸마레이트로 이루어진 군으로부터 선택된 제1의 추가의 치료제, 및 제2의 추가의 치료제와 조합되며, 여기서 제2의 추가의 치료제는 엠트리시타빈이다.
또 다른 특별한 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 제약 조성물은 시프로테론 아세테이트, 데소게스트렐, 디에노게스트, 드로스피레논, 에스트라디올 발레레이트, 에티닐 에스트라디올, 에티노디올, 에토노게스트렐, 레보메폴레이트, 레보노르게스트렐, 리네스트레놀, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 메스트라놀, 미페프리스톤, 미소프로스톨, 노메게스트롤 아세테이트, 노렐게스트로민, 노레틴드론, 노레티노드렐, 노르게스티메이트, 오르멜록시펜, 세게스테르손 아세테이트, 울리프리스탈 아세테이트, 및 임의의 이들의 조합물로 이루어진 군으로부터 선택된 제1의 추가의 치료제 (피임약)와 조합된다.
키트
본 개시내용은 또한 본원에 기재된 하나 이상의 항체 또는 그의 콘쥬게이트를 포함하는 키트를 포괄한다. 한 예에서, 본원에는 본원에 기재된 제약 조성물의 성분 중 하나 이상, 예컨대 본원에 제공된 하나 이상의 항체로 충전된 1개 이상의 컨테이너를 포함하는 제약학적 팩 또는 키트가 제공된다. 일부 예에서, 키트는 본원에 기재된 제약 조성물을 함유한다. 한 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 제약 조성물을 1종 이상의 (예를 들어, 1, 2, 3종, 1 또는 2종, 또는 1 내지 3종) 추가의 치료제 (예컨대 상기 개시된 것들)와 조합하여 포함하는 키트가 제공된다. 임의적으로 이러한 컨테이너(들)은 제약학적 또는 생물학적 제품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관에 의해 처방된 형태의 안내문과 조합될 수 있고, 안내문은 인간 투여를 위한 제조, 사용 또는 판매에 대한 정부 기관의 승인을 반영한다.
실시예
하기 실시예는 청구된 발명을 보다 잘 설명하기 위해 제공되며, 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 구체적인 물질이 언급되는 경우, 이는 단순히 설명의 목적을 위한 것이며, 본 발명을 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 관련 기술분야의 기술자는 발명적 능력을 발휘하지 않고 본 발명의 범위를 벗어나지 않으면서 등가의 수단 또는 반응물을 개발할 수 있다.
실시예 1: 바이러스 중화 활성
PGT121은 HIV 아형 B 분리주의 넓은 커버리지(coverage) (IC50 0.03 ㎍/ml, 80% 범위(breadth))를 갖는 매우 강력한 중화 항체이다. PGT121 및 그의 변이체의 중화의 효능 (IC50 또는 IC95로서 측정됨) 및 범위 (시험한 패널로부터 중화된 분리주의 %)를 2가지 상이한 공개된 검정 포맷을 이용하여 시험하였다:
i) CEM-NKr-CCR5-LucR 리포터 세포주 기반 검정 (Li et al. 2005. J Vir 79(16): 10108-10125), 이는 슈도타입화된(pseudotyped) 뿐만 아니라 복제 가능성(replication competent) HIV 분리주에 대해 항체를 스크리닝하는데 적합함; 및
ii) 모노그램 HIV 페노센스(Monogram HIV PhenoSense) 중화 검정 (모노그램 바이오사이언시즈(Monogram Biosciences)), 이는 관심 HIV Env 변이체에 의해 슈도타입화된 루시페라제 리포터 바이러스를 사용함 (Richman et al. 2003. PNAS 100(7): 4144-4149).
리포터 세포주-기반 CEM-NKr-CCR5-LucR 중화 검정인 다중주기 바이러스 복제 검정에서 (Spenlehauer et al. 2001. Virology, doi:10.1006/viro.2000.0780), 실험실 적합화된 HIV-1 BaL 균주, 및 환자 혈장 샘플로부터 증폭된 아형 B 분리주 93HT593, 92US657, 92US712 및 92US727 (NIH AIDS 시약 프로그램)을 비롯하여 5가지 복제 가능성 임상적 분리주의 패널에 대해 항체를 스크리닝하였다.
몇몇 변이체 PGT-121 항체의 중화 효능은 시험한 5가지 바이러스에 대한 PGT-121 (본원에서 PGT-121 LO6으로도 지칭됨)의 중화 효능에 필적하는 것으로 관찰되었고, 이는 PGT-121과 비교하여 이들 항체에 존재하는 변형이 항원 인식 및 결합의 결정인자에 대해 최소한의 영향을 미쳤음을 시사한다 (하기 표 5는 CEM-NKr-CCR5-Luc 세포에 대한 것임). 다른 변이체 (예를 들어 PGT121.60 및 PGT121.61)는 PGT121과 비교하여 이 제한된 바이러스 패널에 대한 중화 효능에서 2-3배 증가를 나타내었다.
표 5: CEM.NKr.CCR5.LucR 기반 검정을 이용하여 관찰되는 바와 같이, HIV-1 균주 BaL, HT593, US657, US712 및 US727에 대한 PGT121 및 선택 변이체의 중화 활성. 데이터는 2 내지 3회 반복의 평균을 나타냄
Figure pct00042
모노그램 중화 검정에서, Env (gp160) 코딩 영역을 HIV+ ART 나이브(naive) 바이러스혈증 환자로부터 단리된 혈장 바이러스 RNA로부터 증폭시키고, 발현 벡터에 클로닝하여, 환자 혈장 샘플에 존재하는 바이러스 준종 분포가 유지되도록 하였다. 이어서, 발현 벡터를 이용하여 환자-유래된 Env 단백질을 발현하는 HIV-1 슈도바이러스 무리를 생성하였다. 클레이드 B 임상적 분리주의 2개의 패널을 모노그램 중화 검정을 위해 생성하였다: 패널 1 (모노그램 임상적 분리주 패널), 모노그램 라이브러리 콜렉션으로부터 63종의 분리주로 구성되고, 33종 이상의 CCR5-향성 바이러스, 15종 이상의 CXCR4-향성 (X4) 및 15종 이상의 이중-혼합 (DM) 향성 바이러스를 포함함; 및 패널 2 (길리어드 임상적 분리주 패널), 임상 시험에 등록한 ART 나이브 HIV 환자로부터의 pre-ART 기준선 혈장 샘플로부터 단리된 142종의 아형 B 바이러스로 구성되고, 113종의 CCR5-향성 (R5) 바이러스, 28종의 이중 또는 혼합-향성 (DM) 바이러스 및 1종의 CXCR4 향성 (X4) 바이러스를 포함함. HIV-1 Env가 환자 분리주에서, 클레이드 사이에서, 뿐만 아니라 클레이드 내에서 유의한 다양성을 나타낸다는 점을 고려하여, PGT121 및 변이체의 중화 활성을 또한 모노그램의 라이브러리 콜렉션으로부터의 바이러스의 패널을 이용하여 비-B 클레이드를 나타내는 바이러스에 대해 프로파일링하였다. 모노그램 HIV 페노센스 중화 검정을 이용하여 환자 분리주의 큰 콜렉션을 프로파일링하였고, 이로써 PGT121 및 생성된 변이체의 범위 및 효능 둘 다의 더욱 엄격한 프로파일링을 가능하게 하였다. 결과를 표 6-9에 나타내었다. 결과는 PGT121의 변이체 예컨대 PGT121.60이 선택 바이러스에 대해 증강된 중화 활성을 나타내었음을 나타내었다.
표 6: 아형 B 바이러스에 대한 PGT121 및 PGT121.60의 중화 활성 (IC50)
Figure pct00043
표 7: 아형 B 바이러스에 대한 PGT121 및 PGT121.60의 중화 효능
Figure pct00044
표 8: 92개의 아형 B 바이러스에 대한 PGT121 및 선택 변이체의 중화 효능 및 커버리지
Figure pct00045
표 9: 멀티클래이드 바이러스에 대한 PGT121 및 PGT121.60의 중화 활성
Figure pct00046
Figure pct00047
Figure pct00048
Figure pct00049
이들 실험은 Fc 증강된 PGT121에 의한 X4-향성 HIV 중화에서 예상치못한 개선을 입증하였다. HIV는 T 세포로의 진입을 위해 CD4 이외에도 2가지 공동-수용체 - CXCR4 또는 CCR5를 사용할 수 있다. 공동-수용체 결합은 본원에 기재된 광범위 중화 항체의 표적인 Env에 의해 매개된다. 따라서, 상이한 서열을 갖는 HIV의 상이한 균주는 CXCR4 (X4-향성으로 공지됨), CCR5 (R5-향성으로 공지됨) 또는 이들 둘 다 (X4/R5 또는 이중-향성으로 공지됨)를 우세하게 사용한다. R5 및 X4 향성 둘 다를 나타내는 (이중-혼합 또는 DM으로 지칭됨) 바이러스 풀은 R5, X4 및 또는 이중 향성 균주의 혼합물을 함유할 수 있다. 일반적으로, PGT121은 X4 분리주에 대해 불량한 민감도 (낮은 효능 및 범위)를 나타내고, R5 향성 바이러스를 우세하게 중화시킨다. PGT121 (PGT121.56)에 Fc 돌연변이 DEAL+LS의 부가는 DM 및 X4 향성 바이러스에 대한 그의 중화 활성을 특이적으로 증강시켰다 (적어도 하나의 분리주에 대해 2배의 중간 IC50 증강 및 약 20배 이하의 증강). 일부 PGT121 Fab 변이체 (예를 들어 PGT121.13 및 PGT121.22)는 R5 DM 및 X4 바이러스에 대해 감소된 중화 효능을 나타낸 반면에, WT Fab를 갖는 PGT121.56을 비롯하여 DEAL+LS Fc 돌연변이를 보유하는 몇몇 조작된 PGT121 Fab 변이체는 R5 바이러스와 비교하여 DM 및 X4 바이러스를 중화시키는데 더욱 강력하였다 (P<0.0001) (데이터는 도시되지 않음). HIV 중화가 Fc 도메인이 아니라 오로지 Fab 도메인에 의해 매개되는 것으로 생각되었기 때문에, 이는 매우 예상치못한 것이었다. R5 분리주 중에서, 중화에서 2 내지 3배 증강이 시험한 분리주의 약 46%에서 관찰되었다. DEAL+LS 돌연변이는 본 개시내용의 특정 항체 및 그의 단편에 존재한다. PGT121.56에 도입된 추가의 변형은 선택 변이체 (예를 들어, PGT121.60)의 중화 활성을 개선시켰다.
커버리지의 범위는 IC95 <15 ㎍/ml에서 중화된 바이러스의 백분율로서 계산되었다. 효능은 IC95 <15 ㎍/ml를 갖는 바이러스에 걸쳐 중간 IC95 값을 계산함으로써 결정되었다. 총 89개의 클레이드 B 분리주를 포함하는 HIV-1 분리주의 두 패널에 대해 시험하였을 때, 본 개시내용의 항체는 PGT121과 비교하여 중화 활성에서 손실을 나타내지 않았다 (데이터는 도시되지 않음). 특정 항체의 효능은 PGT121과 거의 동일하였고, 약간 개선된 중화 범위를 나타내었다. 중화 프로파일링은 또한 PGT-121에 비해 항체가 광범위한 HIV-1 임상적 분리주로부터 다양한 Env 항원을 인식하고 그에 결합하는 능력을 평가하는 대용물로서 작용하였다. 다양한 항체의 프로파일링으로부터의 데이터는 감소된 중화 효능을 갖는 항체도 감소된 ADCC 활성을 나타내었음을 나타내었고 (데이터는 도시되지 않음), 이는 항체의 중화 활성과 ADCC 활성 사이의 양의 상관관계를 시사하고, ADCC 범위의 평가에 대한 대용물로서 중화 범위의 사용을 뒷받침한다.
실시예 2: 면역원성 연구
면역원성을 평가하고, PGT121에서 면역원성 모티프를 제거하기 위한 조작을 안내하기 위해 3가지 방법을 이용하였다. 인실리코(In silico) 예측 도구를 이용하여, PGT121 항체에서 면역원성의 잠재적인 위험 부위를 확인하였고, 또한 신규한 T 세포 에피토프의 도입을 방지하면서 제조가능성을 증가시키기 위한 조작 노력을 안내하였다 (예를 들어 글리코실화 부위의 제거, 낮은 pH 유지 안정성의 개선). 이 분석을 기반으로 하여, 본 개시내용의 항체에서 프레임워크 영역을 변형시켜, 기능적 활성에 영향을 미칠 위험이 낮은 면역원성을 감소시켰다. 또한, 본 개시내용의 한 항체의 가변 도메인 내에서 잠재적으로 면역원성인 모티프를 추가로 확인하기 위해, 생체외 인간 T 세포 활성화 검정, 에피스크린(EpiScreen)™ (안티토프, 리미티드(Antitope, Ltd.), 영국 캠브릿지)을 사용하였다. 항체로부터 유래된 15가지 아미노산 펩티드의 중첩에 대한 반응으로 다양한 HLA 일배체형을 나타내는 50명의 건강한 공여자에서 CD4+ T 세포 반응을 유도하였고, T-세포 증식을 측정하기 위해 H-티미딘 혼입 검정을 이용하여 KLH (키홀 림펫 헤모시아닌, 양성 대조군)를 평가하였다. 상기 검정은 항체 조작을 안내하기 위해 일차 항체 서열에서 특이적인 T 세포 에피토프의 국지화를 가능하게 하였다. 이는 또한 시험한 항체와 함께 T 세포 에피토프의 상대적인 면역원성의 순위를 제공하였다 (데이터는 도시되지 않음).
선택된 항체 변이체의 임상적 면역원성 위험을 평가하기 위해, 에피스크린™ 시간 경과 T-세포 검정 (안티토프, 리미티드, 영국 캠브릿지)을 이용하여 무손상 항체에 의해 유도된 T-세포 활성화를 측정하였다. 전체 분자 검정을 기재된 바와 같이 수행하였다 (Baker and Jones 2007. Curr. Opin. Drug Discov. Devel. 10: 219-227). 따라서, 이 검정은 T-세포 에피토프 함량 뿐만 아니라 천연 IgG의 가공을 고려한다. 인실리코 및 펩티드 스캐닝 검정과는 달리, 전체 분자 생체외 T-세포 활성화 검정은 주어진 항체의 상대적인 임상적 위험의 평가를 제공할 수 있고, 특정 경우에는 기재된 바와 같이 임상적 면역원성 비율을 예측하는데 이용될 수 있다 (Baker and Jones 2007 Curr. Opin. Drug Discov. Devel. 10:219-227).
여러 임상적 단계 항체를 이 검정에서 작동시켰고, 임상적 면역원성을 거의 내지는 전혀 나타내지 않는 항체는 이 검정에서 거의 10% 또는 그보다 낮은 점수를 가진 반면에, 높은 임상적 면역원성을 나타내는 항체 예컨대 알렘투주맙 및 인플릭시맙은 25-40% 범위의 점수를 나타낸다 (Baker and Jones 2007. Curr. Opin. Drug Discov. Devel. 10:219-227). PGT121.42, PGT121.60, PGT121.61 및 PGT121.65는 PGT121 WT (즉, PGT-121 LO6)와 비교할 때 감소된 공여자 반응률을 나타내었고, 이는 이들 변이체에 대한 임상적 면역원성의 감소된 위험을 뒷받침한다 (데이터는 도시되지 않음).
실시예 3: FcRn 결합
신생아 Fc 수용체 (FcRn)는 인간 및 전임상 종에서 IgG 분자의 약동학을 조절하는데 큰 역할을 하는 것으로 확인된 Fc 수용체이다. 엔도시토시스 이후에, 산성 pH에서 (<6.5), FcRn은 높은 친화도로 IgG의 Fc 부분에 결합한다. FcRn 결합된 IgG는 세포외 공간으로 다시 재순환되고, 여기에서 생리학적 pH에서 IgG 결합 친화도가 감소하고, IgG가 다시 순환으로 방출된다. FcRn 경로에 의해 회수되지 않은 유리 IgG는 리소좀에서 내인성 아미노산으로 분해된다. pH 6.0/7.0에서 IgG와 FcRn의 상대적인 결합 친화도 특징은 생체 내에서 IgG의 반감기의 평가를 위한 널리 정립된 상관관계 및 약동학적 최적화를 위한 설계 특징이 되었다.
상이한 pH에서 항체와 다양한 항체 변이체의 FcRn의 결합을 결정하였다. 96-웰 맥시소프(Maxisorp) 플레이트를 100ul의 5 ㎍/ml FcRn으로 코팅하였다. 플레이트를 4℃에서 밤새 인큐베이션한 다음, 0.05% 트윈(Tween) 20 세척 완충제로 3회 세척한 후에, 실온에서 2 시간 동안 4% 탈지유로 차단시켰다. 플레이트를 일차 항체의 3배 계열 희석액과 함께 1 시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 이어서, 플레이트를 3회 세척하고, 4% 탈지유 중에서 희석된 100 ㎕의 Fab-항-인간 Fab-HRP 또는 염소 항-인간 IgG-HRP 이차 항체를 첨가하였다. 이어서, 플레이트를 실온에서 50 분 동안 인큐베이션하고, 3회 세척하고, 100 ㎕의 신선한 TMB 기질을 첨가하였다. 플레이트를 벤치 상에서 부드럽게 진탕시키면서 3 분 동안 발달시켰다. 플레이트를 100 ㎕의 1M HCl에 의해 켄칭시키고, 간단히 진탕시키고, A450에서 스펙트라맥스 m5 플레이트 판독기 상에서 판독하였다.
PGT-121과 비교하여, FcRn과 상호작용하는 IgG의 Fc 부분에 LS 돌연변이를 포함하는 본 개시내용의 항체는 pH 6.0에서 FcRn 결합에서의 유의한 개선을 나타내었고, 인간 FcRn에 대한 pH 7.0/6.0의 비에 의해 표현되는 바와 같이 7.0의 중성 pH에서는 결합에 대한 영향이 더 적었다. 개선된 결합은 LS 돌연변이의 존재에서 기인하고, PGT-121에 비해 인간에서 연장된 반감기를 제공할 것으로 예측된다. 데이터는 표 10에 도시된다.
표 10: PGT121 및 변이체에 대한 인간 FcRn 결합 데이터
Figure pct00050
이 데이터는 PGT121.56 또는 PGT121.42에 비해 PGT121.60 및 61의 유의한 개선을 나타낸다. PGT121.56은 DEAL+LS Fc를 갖는 WT Fab이다. 이는 PGT121.60 및 61에서의 Fab 돌연변이가 FcRn 결합을 개선시킴을 시사한다. PGT121.64 및 PGT121.65는 이러한 개선을 나타내지 않으며, 이는 이들 두 변이체에서 Fab 변형이 FcRn 결합을 실제로 감소시킬 수 있음을 시사한다.
실시예 4: 생체내 프로파일링
PGT121 및 본 출원으로부터의 몇몇 항체를 검정하여, 본 개시내용의 항체에 존재하는 Fab/Fc 변형이 PGT121 고유의 약동학적 거동을 증강시키고 유의하게 교란시키지 않도록 하기 위해 그들의 기본 약동학적 프로파일을 특징분석하였다. 2 마리의 수컷 나이브 시노몰구스 원숭이 (n=2)에서 단일 정맥내 (IV) 1.0 mg/kg 투여 이후에, PGT121 및 본 개시내용의 몇몇 다른 항체의 생체내 배치를 특징분석하였다. 혈청 샘플을 원숭이로부터 수집하였고, 비-구획 약동학적 분석 (NCA)에 의해 혈청 농도-시간 프로파일 및 평균 혈청 약동학적 파라미터를 결정하기 위해 (본원에 기재된) 생물분석 방법을 이용하여 분석하였다.
별도의 연구에서, 3 마리의 수컷 나이브 시노몰구스 원숭이 (n=3)에서 단일 IV 10.0 mg/kg 투여 이후에 PGT121, PGT121 LS, 및 새로운 로트의 PGT121.42 및 PGT121.60의 고유의 약동학적 거동을 특징분석하였다. 혈청 샘플을 수집하였고, 비-구획 약동학적 분석 (NCA)에 의해 혈청 농도-시간 프로파일 및 평균 혈청 약동학적 파라미터를 결정하기 위해 (본원에 기재된) 생물분석 방법을 이용하여 분석하였다. PGT121, PGT121.42, PGT121.43, PGT121.60, 및 PGT121.61의 평균 혈청 약동학적 파라미터를 농도-시간 프로파일의 비-구획 약동학적 분석으로부터 결정하였고, 표 11에 기재하였다. 생체 내에서 시험한 본 개시내용의 모든 항체는 PGT121에 필적하는 또는 그에 비해 개선된 약동학 (본원에서 정의된 바와 같음)을 가졌다.
표 11: 나이브 시노몰구스 원숭이 (n=2)에서 IV 투여 (1 mg/kg) 이후에 PGT121 및 변이체의 약동학적 파라미터
Figure pct00051
PGT121, PGT121 LS, PGT121.42, 및 PGT121.60의 평균 혈청 약동학적 파라미터를 농도-시간 프로파일의 비-구획 약동학적 분석으로부터 결정하였고, 표 12에 기재하였다.
표 12: 나이브 시노몰구스 원숭이 (n=3)에서 IV 투여 (10 mg/kg) 이후에 PGT121, PGT121 LS, PGT121.42, 및 PGT121.60의 약동학적 파라미터
Figure pct00052
생체 내에서 시험한 본 개시내용의 모든 항체는 PGT121에 필적하는 또는 그에 비해 개선된 약동학 (본원에서 정의된 바와 같음)을 가졌다. PGT121.60은 PGT121과 비교하여 시험한 바이러스에 대해 증가된 효능을 나타내었다 (데이터는 도시되지 않음). PGT121 변이체 예컨대 PGT121.60, PGT121.64 및 PGT121.65는 시험한 모든 바이러스 분리주에 걸쳐 개선된 효능을 나타내었다 (데이터는 도시되지 않음). 이는 이루어진 변형 (아마도 CDR 외부에 있는 항원 접촉 잔기에 대해 이루어진 변형)이 중화 효능을 개선시켰음을 시사한다. PGT121.60은 PGT121과 비교하여 B 및 비-B 아형을 대표하는 바이러스에 대해 증가된 중화 활성을 나타내었다 (데이터는 도시되지 않음).
실시예 5: gp120 X CD3 듀오바디가 HIV-감염된 세포를 사멸시키는 능력의 평가
예시적인 gp120 X CD3 듀오바디® (듀오바디®의 gp120 부분의 중쇄 서열은 하기에 제공되고, 듀오바디®의 gp120 부분의 경쇄는 서열식별번호: 10에 제시된 서열을 갖고; 듀오바디®의 CD3 부분의 중쇄 서열은 하기에 제공되고, 듀오바디®의 CD3 부분의 경쇄는 서열식별번호:20에 제시된 서열을 가짐) 및 단일특이적 PGT121.60 (서열식별번호: 41 및 10)의 사멸 활성을 22종의 일차 HIV-1 분리주 또는 클론에 대해 평가하였다. 각각의 바이러스를 4명의 건강한 PBMC 공여자의 평균으로 평가하였다 (표 13 참고). 사멸된 감염 세포의 비율 (Emax)은 PGT121.60 (평균 ± SD; 56% ± 16%; 대응표본 T-검사, P=0.001)에 비해 예시적인 gp120 X CD3 듀오바디® (평균 ± SD; 70% ± 11%)에 의해 유의하게 더 높았다. 예시적인 gp120 X CD3 듀오바디®는 또한 PGT121.60에 비해 유의하게 더 강력하였고, PGT121.60에 대한 1.034 ㎍/mL ± 1.408 ㎍/mL와 비교하여 0.129 ㎍/mL ± 0.074 ㎍/mL의 EC50 값을 달성하였다 (대응표본 T-검사, P=0.007). PGT121.60과 비교하여 예시적인 gp120 X CD3 듀오바디®의 EC50에서의 평균 변화 배수는 21배이었다.
표 13: 예시적인 gp120 X CD3 듀오바디® 및 PGT-121.60의 사멸 활성의 요약 표
Figure pct00053
요약하면, 예시적인 gp120 X CD3 듀오바디®은 PGT121.60에 비해 유의하게 낮은 농도에서 유의하게 더 높은 비율의 HIV-감염된 세포를 사멸시킨다.
듀오바디®의 gp120 부분의 중쇄 서열:
Figure pct00054
듀오바디®의 CD3 부분의 중쇄 서열:
Figure pct00055
방법
PBMC 이펙터 세포에 의한 감염된-세포 사멸
HIV-감염된 CD4 T-세포의 예시적인 gp120 X CD3 듀오바디®- 및 PGT-121.60-의존성 사멸을 표적 세포로서 일차 휴지 HIV-감염된 CD4+ T-세포 및 이펙터 세포로서 자가 PBMC를 사용하여 시험관 내에서 연구하였다. 일차 CD4+ T 세포를 1200 xg에서 2 시간 동안 50-100 ng p24/백만개 세포에 의한 스핀펙션(spinfection)에 의해 감염시켰고, 37℃에서 5 일 동안 RPMI 배지 (10% FBS 및 1% 페니실린/스트렙토마이신으로 보충됨) 중에서 30 U/mL의 IL-2 (로쉐(Roche) Cat#11011456001)와 함께 배양하였다. 데 노보 항원 발현이 가능하도록 5 일 동안 휴식한 후에, 스핀펙션된 CD4+ T-세포 배양물을 3회 세척하여 유리 바이러스를 제거하였고, 96-웰 플레이트에서 2 x 105 세포/웰로 플레이팅하고, 인간 혈청 IgG (5 mg/mL 최종 농도)의 존재하에 예시적인 gp120 X CD3 듀오바디® 또는 PGT-121.60의 7가지 농도의 10배 계열 희석액과 함께 1 시간 동안 인큐베이션하였다. CD4+ T-세포 표적이 옵소닌화되는 동안, 이펙터 세포를 준비하였다. 동결보존된 자가 PBMC를 해동시키고, 제조자의 지침에 따라 PKH67을 사용하여 막을 염색하고, 옵소닌화 표적 세포에 4 x 105 세포/웰로 첨가하여 2:1의 E:T 비를 수득하였다. 이펙터 세포를 옵소닌화 표적 세포와 함께 200 ㎕/웰의 최종 부피로 24 - 48 시간 동안 공동-배양하였다.
HIV-감염된 표적 세포의 사멸을 유동 세포분석법에 의해 결정하였다. 공동-배양 기간의 마지막에, 세포를 PBS로 2회 세척하고, 100 ㎕의 FACS 완충제 (PBS + 2% FBS)를 첨가하여 염색이 불활성화될 때까지 10 분 동안 100 ㎕의 라이브/데드 아쿠아(Live/Dead Aqua) (PBS 중에서 1/1000 희석됨)로 염색하였다. 이어서, 세포를 FACS 완충제로 세척하고, 항-CD4-PE/Cy7 mAb (FACS 완충제 중에서 1/50 희석)와 함께 20 분 동안 인큐베이션한 다음, FACS 완충제로 3회 세척하고, 100 ㎕의 시토픽스(Cytofix)/시토펌(Cytoperm)에 의해 10 분 동안 고정시키고 투과화시켰다. 이어서, 세포를 펌워쉬(PermWash)로 1회 세척하고, FACS 완충제 + 10% 펌워쉬 중의 항-p24-PE mAb와 함께 25 분 동안 인큐베이션하였다. 최종적으로, 세포를 FACS 완충제로 3회 세척하고, 120 ㎕의 FACS 완충제 중에서 재현탁시키고, 유동 세포분석 데이터를 LSR 포르테싸(Fortessa) 또는 X20 FACS (비디 바이오사이언시즈(BD Biosciences), 캘리포니아주 산 호세) 상에서 획득하고, 플로우조(FlowJo) 소프트웨어 (트리스타(TreeStar))를 이용하여 분석하였다.
데이터 분석
PBMC에 의해 감염된 일차 CD4+ T-세포의 사멸에서, 유동 세포분석법에 의한 HIV-감염된 표적 세포의 열거는 하기 게이팅 전략을 이용하였다: 림프구를 전방 및 측면 산란, 및 라이브/데드 아쿠아에 대한 음성 염색에 의한 살아있는 림프구를 기반으로 하여 선택하였다. 이어서, 접종된 CD4+T-세포를 대표하는 PKH67-음성의 살아있는 림프구를 선택하였고, HIV-감염된 세포는 p24 Gag+, CD4low (HIV-매개된 CD4 하향-조절로 인해) 세포로 확인되었다. HIV-감염 백분율은 HIV-감염된 (p24 Gag+, CD4low 양성) 접종된 (PKH67-음성) CD4+ T 세포의 백분율로 나타내었다.
예시적인 gp120 X CD3 듀오바디®- 또는 PGT-121.60-처리된 웰에서 HIV-감염된 표적 세포의 백분율을 비처리된 웰에서 HIV-감염된 표적 세포의 평균 백분율과 비교하였다 (인간 혈청 IgG만으로 처리됨, 96-웰 플레이트당 n=2-10). HIV-감염된 표적-세포의 사멸 백분율은 하기 식을 이용하여 계산하였다:
100 - ((처리된 웰에서 % HIV-감염된 표적 세포/비처리된 웰에서 % HIV-감염된 표적 세포) * 100).
예시적인 gp120 X CD3 듀오바디®- 또는 PGT-121.60에 의해 사멸된 감염된 세포의 최대 분율 (Emax) 및 최대 사멸의 절반을 제공하는 농도 (EC50)를 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism, 캘리포니아주 라 호이아) 소프트웨어를 사용하여 3개의 파라미터 비선형 회귀 (식 1)에 의해 대입된 용량-반응 곡선으로부터 수득하였다.
Figure pct00056
상기 식에서, Y = % 사멸, X = 항체 농도, 최저 = 항체 부재하에서의 반응, 및 최고 = 최대 반응.
명백한 Emax < 40%를 갖는 용량-반응 곡선에서, EC50 값은 >100 ㎍/mL로 기록되었고, ≤ 0%의 절대값을 갖는 Emax는 0%로 할당되었다.
실시예 6: 항-gp120 항체 변이체의 평가
가속된 스트레스 조건하에 (25℃, 40℃), PGT-121.60의 경쇄 가변 도메인의 위치 59에서 아스파르테이트는 IsoAsp로 이성질체화된다. Asp59는 HIV Env N332 결합 모티프의 일부를 형성하고, PGT-121.60에 의한 gp120 결합에 결정적이어서, 항체 의존성 세포-매개된 세포독성 (ADCC)의 손실을 유도한다. 이러한 화학적 경향(liability)은 약물 제품의 동결건조에 의해 완화되었다.
PGT-121.60을 듀오바디® 분자의 아암 중 하나로서 선택하였다. 비록 동결건조가 성공적인 상업적 전략임에도 불구하고, 개발 및 제조를 간소화하고, 로트마다의 일관성을 개선시키고, 듀오바디® 포맷에 대한 액체 제형을 가능하게 하기 위해서는 PGT-121.60으로부터 이성질체화 경향을 제거하는 것이 바람직하였다. 생체활성을 유지하고 T 세포 에피토프를 재도입시키지 않으면서 아스파르테이트 이성질체화 부위를 제거하는 것이 조작 목적이었다. 조작으로부터의 최고 변이체 중 4가지 (변이체 1, 변이체 2, 변이체 3 및 변이체 4)를 PGT-121.60 ADCC 리포터 세포 기반 검정을 이용하는 결합 및 효능 시험을 비롯하여 특징분석을 위해 진행하였다.
4가지 모든 변이체는 하기에 제공된 동일한 중쇄 아미노산 서열을 갖는다:
Figure pct00057
변이체 1은 서열식별번호: 40에 제시된 경쇄 서열을 갖는다. 변이체 2는 서열식별번호: 78에 제시된 경쇄 서열을 갖는다. 변이체 3은 서열식별번호: 79에 제시된 경쇄 서열을 갖는다. 변이체 4는 서열식별번호: 80에 제시된 경쇄 서열을 갖는다.
결합 연구
상기 기재된 다양한 변이체 항체와 gp120 HIV ENV 단백질의 결합을 측정하였다. 384 웰 맥시소프 플레이트를 25㎕의 5㎍/ml gp120로 코팅하였다. 플레이트를 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 플레이트를 PBS 0.05% 트윈 20 세척 완충제로 4회 세척하고, 실온에서 1 시간 동안 600rpm에서 진탕시키면서 75㎕의 PBS 5% BSA로 차단하였다. 플레이트를 실온에서 1 시간 동안 600rpm에서 진탕시키면서 일차 항체의 3배 계열 희석액과 함께 인큐베이션하였다. 이어서, 플레이트를 PBS 0.05% 트윈 20으로 4회 세척하고, 25㎕의 염소 항-인간 IgG (H+L) HRP 이차 항체를 PBS 1% BSA 중에서 희석하고, 실온에서 600 rpm에서 진탕시키면서 40 분 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 PBS 0.05% 트윈 20으로 4회 세척하고, 25㎕의 신선한 TMB 기질을 첨가하였다. 플레이트를 600rpm에서 진탕시키면서 90 초 동안 발달시키고, 25㎕의 1M HCl에 의해 켄칭시켰다. 플레이트를 A450에서 스펙트라맥스 m5 플레이트 판독기 상에서 판독하였다.
PGT-121.60과 비교하여, 프레임워크 삽입 루프에서 아스파르테이트 이성질체화 부위에 돌연변이를 포함하는 본 개시내용의 변이체 항체는 gp120에 대한 개선된 및 감소된 결합 모두를 가졌다. 서열 활성 관계 분석은 잔기 59에서 아스파르테이트의 유지에 대한 명백하고 강력한 선호를 나타내었다. 글리신은 잔기 59에서 허용된 반면에, 글루타민, 글루타메이트 및 아스파라긴은 gp120에 결합하는 항체 능력에 부정적인 영향을 미쳤다. 잔기 60에서, 도입된 아미노산의 더 벌크한 측쇄가 허용되었다. 데이터는 하기 표 14에 도시된다.
표 14: PGT121.60 및 변이체에 대한 gp120 결합 데이터.
Figure pct00058
(상기 표에서, 분자 옆의 글자는 경쇄의 위치 59 및 60 (카바트 넘버링)에 있는 아미노산에 상응한다. 돌연변이된 잔기(들)은 굵은 글씨로 나타내었다.)
이 데이터는 PGT121.60 및 다른 변이체에 비해 변이체 2, 변이체 1 및 변이체 3의 gp120 결합에서의 개선을 나타내며, 이는 아스파르테이트 이성질체화 부위를 돌연변이시키는 것이 gp120와의 결합에 영향을 미칠 수 있음을 시사한다. 이들 변이체를 DEAL+LS Fc (즉, S239D, I332E, G236A, A330L, M428L 및 N434S 돌연변이 ("DEALLS")를 갖는 Fc)에 의해 시험하였다.
효능 연구
PGT-121.60 ADCC 검정은 HT593-발현 표적 세포주를 포함하고, HT593은 PGT-121.60에서 isoAsp 경향에 민감한 것으로 공지되어 있기 때문에, 상기 검정을 선택하였다. ADCC 리포터 세포-기반 검정은 ADCC 활성의 대용물 측정으로서 활성화된 T 세포의 핵 인자 (NFAT)-매개된 루시페라제 발현을 유도하는 PGT-121.60의 능력을 측정한다. 상기 검정에서, FcγRIIIa 수용체 (V158)를 발현하는 Jurkat 세포 및 NFAT-조절된 루시페라제를 gp120-발현 인간 배아 신장 (HEK) 세포와 함께 증가하는 농도의 PGT-121.60 참고 표준, 대조군 및 샘플의 존재하에 인큐베이션하였다. PGT-121.60은 HEK 세포 표면 상의 gp120에 결합하고, Jurkat 세포 상의 FcγRIIIa와 효과적으로 가교하고, NFAT를 통해 루시페라제 유전자 발현을 활성화시킨다. 상대 발광 단위 (RLU)를 PGT-121.60 농도에 대해 플롯하였고, 평행선 분석 프로그램을 이용하여 참고 표준에 대한 대조군 및 샘플의 효능을 측정하였다. 제1 참고 표준 (RS)으로서 PGT-121.60은 100%의 상대 효능 (RP) 값이 할당되었다.
PGT-121.60 변이체 (즉, 변이체 1, 변이체 2, 변이체 3 및 변이체 4)의 샘플을 0.5 mg/mL의 중간체 농도로 희석하고, 단백질 농도를 UV 분광광도법 (흡광 최대 280 nm - 흡광 320 nm)에 의해 확인하였다. 후속적으로 중간체를 0.6 ng/mL 내지 4.96 ㎍/mL의 개시 농도 범위로 희석하였다. 이어서, 열 스트레스 샘플을 PGT-121.60 참고 표준이 아니라 그들 각각의 대조군 (100% RP로 할당됨)에 대해 정량화한 것을 제외하고는, 샘플 (대조군, 25℃, 4 주)을 상기 기재된 ADCC 검정에 따라 시험하였다.
PGT.121.60 변이체인 변이체 1, 변이체 2, 변이체 3 및 변이체 4의 샘플을 25℃에서 4 주 동안 인큐베이션함으로써 열 스트레스에 적용하였다. 이어서, 이들을 2-8℃에서 보관되었던 그들 각각의 비처리 대조군과 함께 PGT.121.60 ADCC 리포터 세포 기반 검정에서 시험하였다. 결과는 표 15에 도시된다.
표 15: 열-스트레스 적용된 PGT-121.60 및 isoAsp 변이체의 ADCC 활성
Figure pct00059
a. PGT-121.60을 1회만 시험하였고, 결과는 과거 데이터와 일치하였다.
결과는 열-처리된 PGT-121.60은 감소된 활성 (65% RP)을 나타내는 반면에, 변이체인 변이체 2, 변이체 3, 변이체 4 및 변이체 1의 ADCC 활성 (각각 96%, 104%, 95% 및 100%)은 25℃에서 4 주 동안의 처리에 의해 영향을 받지 않았음을 나타낸다.
실시예 7: HIV 중화 활성의 평가
항체에 의한 HIV-1 중화의 효능 (IC50 또는 IC95로서 측정됨) 및 범위 (시험한 패널로부터 중화된 분리주의 %)을 실시예 1에 기재된 바와 같이 (i) CEM-NKr-CCR5-LucR 리포터 세포주 기반 검정 및 ii) 모노그램 HIV 페노센스 중화 검정 (모노그램 바이오사이언시즈)으로 시험하였다.
CEM-NKr-CCR5-LucR 리포터 세포주-기반 중화 검정에서, 항체를 40개의 클레이드 B 복제-가능성 HIV-1 분리주 및 클론의 패널에 대해 시험하였다.
변이체 1-4의 중화 효능은 PGT-121.60과 유사하였다 (PGT-121.60과 비교한 각각의 변이체에 대한 스튜던츠 대응표본 T-검사 P 값은 ≥ 0.372이었음). PGT-121.60과 비교하여, 변이체의 IC50 값에서의 기하 평균 변화 배수는 변이체 1에 대해 1.035 내지 변이체 2에 대해 1.539의 범위이었고, 이는 PGT-121.60에서 이소아스파르테이트 경향을 제거하는 돌연변이가 PGT-121.60의 HIV 중화 활성에 유의한 영향을 미치지 않았음을 나타낸다. 변이체 1-4의 중화 활성은 시험한 40종의 바이러스 중 1종 (바이러스 8339)에 대해 완전히 제거되었다. 결과는 표 16에 제시되어 있다.
표 16: CEM.NKr.CCR5.LucR 기반 검정을 이용하는 중화 활성. 데이터는 2회 반복의 평균을 나타낸다.
Figure pct00060
Figure pct00061
a. na는 "해당 없음"을 지칭함
† 내성 바이러스 (IC50 >100 ug/mL)를 제외하고 계산된 기하 평균
모노그램 HIV 페노센스 중화 검정에서, 변이체 1-3의 HIV 중화 활성을 길리어드 임상적 분리주 패널 (n = 142 바이러스)에 대해 FEAR/FEAL Fc를 갖는 이중특이적 포맷으로 평가하였다. FEAR/FEAL 이중특이적 포맷으로 평가할 때, 변이체 1-3의 효능은 PGT-121.60 DEAL+LS와 비교하여 4.1 내지 5.3배 감소되었다 (표 17). 변이체를 DEAL+LS 포맷으로 평가한 CEM.NKr.CCR5.LucR 기반 검정의 결과와 함께, 상기 결과는 PGT-121.60에서 이소아스파르테이트 경향을 제거하는 돌연변이가 아니라 이중특이적 듀오바디® 포맷이 HIV 중화 활성을 4 내지 5배 손상시킴을 나타낸다.
표 17. 모노그램 HIV 페노센스 중화 검정을 이용하는 중화 활성. 데이터는 단일 실험을 나타낸다.
Figure pct00062
Figure pct00063
Figure pct00064
Figure pct00065
Figure pct00066
Figure pct00067
Figure pct00068
a. na는 "해당 없음"을 지칭함
† 내성 바이러스 (IC50 >100 ug/mL)를 제외하고 계산된 기하 평균
실시예 8: T 세포 활성화
CD3-이중특이적 항체에 의해 CD3+ T 세포와 관심 항원을 발현하는 표적 세포의 라이게이션은 T 세포 활성화를 일으킨다. T 세포 활성화는 일반적으로 항원-양성 표적 세포의 부재하에서는 CD3 이중특이적 항체에 의해 관찰되지 않는다. 항원-양성 표적 세포의 존재에 대한 T 세포 활성화의 이러한 의존성은은 전반적인 T 세포 활성화를 방지할 수 있고, 전반적인 T 세포 활성화와 연관된 불리한 사건, 예컨대 시토카인 방출 증후군을 제한할 수 있다.
gp120 X CD3 듀오바디®가 두 항원 모두의 존재하에 T 세포만을 활성화시키는 능력을 평가하기 위해, 본 발명자들은 HIV-비감염된 공여자 (n=2) 및 HIV-감염된 공여자 (n=2)로부터 단리된 일차 PBMC를 gp120 X CD3 듀오바디®-변이체 1, gp120 X CD3 듀오바디®-변이체 2 또는 PGT-121.60, 및 (i) gp120 x CD3 듀오바디®에 의한 사멸에 민감한 HIV-1 바이러스 (7552)로 감염되거나, (ii) gp120 x CD3 듀오바디®에 의한 사멸에 내성인 HIV-1 바이러스 (THRO)로 감염되거나, 또는 (iii) 비감염된 CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T 세포와 함께 인큐베이션하였다. PBMC 및 CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T 세포를 1:10의 이펙터 세포 대 표적 세포 비에서 공동-배양하여, 표적 세포와 결속하는 이펙터 세포의 개수, 따라서 활성화된 이펙터 세포를 검출하는 능력을 최대화시켰다. HIV-비감염된 (n=2) 및 HIV-감염된 (n=2) 공여자 둘 다로부터의 이펙터 세포를 평가하였다. 결과는 표 18 - 23에 제시되어 있다.
gp120 X CD3 듀오바디 변이체 1 (표 18 및 19) 및 gp120 X CD3 듀오바디 변이체 2 (표 20 및 21) 둘 다 일차 CD4 T 세포 및 CD8 T 세포 상의 T-세포 활성화 마커 CD69 및 CD25의 용량-의존성 상향조절을 유도하였다. PD-1의 적은 상향조절 또한 관찰되었다. Ki67의 상향조절은 관찰되지 않았다. HIV-비감염된 및 HIV-감염된 공여자로부터의 T 세포는 유사하게 반응하였다. 활성화 마커의 상향조절이 gp120 x CD3 듀오바디에 의한 사멸에 민감한 HIV-1 바이러스 (7552)로 감염된 CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T 세포의 존재하에서만 관찰되기 때문에, 활성화 마커의 상향조절은 두 항원 모두에 결합하는 gp120 X CD3 듀오바디에 의존적이었다. 이펙터 세포를 gp120 X CD3 듀오바디에 의한 사멸에 내성인 HIV 바이러스 (THRO)로 감염된 CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T 세포 또는 비감염된 CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T 세포와 공동-배양하였을 때, 활성화 마커의 상향조절은 관찰되지 않았다. T 세포에 결합하지 않는 PGT-121.60은, CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T 세포가 gp120 x CD3 듀오바디®에 의한 사멸에 민감한 바이러스로 감염되거나 또는 그렇지 않은지 여부와 무관하게, T 세포 활성화 마커의 상향조절을 유도하였다 (표 22 및 23).
표 18: gp120 x CD3 듀오바디 변이체 1 CD4 T-세포 활성화.
Figure pct00069
표 19: gp120 x CD3 듀오바디 변이체 1 CD8 T-세포 활성화.
Figure pct00070
표 20: gp120 x CD3 듀오바디 변이체 2 CD4 T-세포 활성화.
Figure pct00071
표 21: gp120 x CD3 듀오바디 변이체 2 CD8 T-세포 활성화.
Figure pct00072
표 22: PGT-121.60 CD4 T-세포 활성화.
Figure pct00073
표 23: PGT-121.60 CD8 T-세포 활성화.
Figure pct00074
방법
T 세포 활성화 마커의 Gp120 X CD3 듀오바디-유도된 상향조절을, HIV-비감염된 (n=2) 및 HIV-감염된 공여자 (n=2)로부터 수득된 류코팩(leukopak)으로부터 피콜 파크(Ficol paque)에 의해 단리된 1 x 104 인간 일차 T 세포를 (i) gp120 x CD3 듀오바디®에 의한 사멸에 대해 민감한 HIV-1 바이러스 (7552)로 감염되거나, (ii) gp120 x CD3 듀오바디®에 의한 사멸에 대해 내성인 HIV-1 바이러스 (THRO)로 감염되거나, 또는 (iii) 비감염된 1 x 105 CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T 세포와 함께 37℃에서 24 시간 동안 공동-배양함으로써 평가하였다. 이어서, 웰을 FACS 완충제로 3회 세척하고, 제조자의 지침에 따라 라이브/데드 암시안(Live/Dead Amcyan) (써모 피셔(Thermo Fisher), 카탈로그 번호 L34966)으로 염색하고, FACS 완충제로 3회 세척하고, FACS 완충제 중에서 희석된 하기 항체와 함께 실온에서 20 분 동안 인큐베이션하였다: 항-CD4-BV711 (비디 바이오사이언시즈 카탈로그 번호 563028); 항-CD8-APC/Cy7 (비디 바이오사이언시즈, 카탈로그 번호 560179); 항-CD25-PE/Cy7 (비디 바이오사이언시즈, 카탈로그 번호 557741); 항-CD69-PerCP/Cy5.5 (바이오레전드(BioLegend), 카탈로그 번호 310926); 항-PD-1-BV605 (바이오레전드, 카탈로그 번호 329924); 항-Ki67-AF700 (비디 바이오사이언시즈. 카탈로그 번호 561277). 이어서, 세포를 FACS 완충제로 3회 세척하고, 100 ㎕의 시토픽스/시토펌에 의해 10 분 동안 고정시키고 투과화시키고, 펌워쉬로 1회 세척하고, 120 ㎕의 FACS 완충제 중에서 재현탁시키고, 유동 세포분석 데이터를 LSR 포르테싸 또는 X20 FACS (비디 바이오사이언시즈, 캘리포니아주 산 호세) 상에서 획득하고, 플로우조 소프트웨어 (트리스타)를 이용하여 분석하였다.
각각의 활성화 마커를 발현하는 CD4 및 CD8 T 세포의 최대 분율 (Emax) 및 50% Emax를 제공하는 농도 (EC50)를 그래프패드 프리즘 (캘리포니아주 라 호이아) 소프트웨어를 사용하여 3개의 파라미터 비선형 회귀 (식 1)에 의해 대입된 용량-반응 곡선으로부터 수득하였다.
Figure pct00075
상기 식에서, Y = % 활성화, X = 항체 농도, 최저 = 항체 부재하에서의 반응, 및 최고 = 최대 반응.
T 세포 활성화에 대해 기준선 (항체 없음 대조군 웰)보다 높은 Emax < 5%를 갖는 용량-반응 곡선에서, EC50 값은 >100 ㎍/mL (시험한 최대 농도)로 기록되었다.
실시예 9: PBMC 이펙터 세포를 이용하는 HIV-감염된 CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T 세포의 사멸 .
사멸 활성을 4개의 일차 HIV-1 분리주 또는 분자 클론에 대해 평가하였다. 각각의 바이러스를 2명의 건강한 공여자로부터의 PBMC 이펙터 세포를 사용하여 평가하였고, 결과는 표 24에 제시되어 있다. 사멸된 감염된 세포의 비율 (Emax)은 PGT-121.60 (중간, 18%, 만-휘트니(Mann-Whitney), P < 0.0001) 및 PGT-121 (중간, 0%, 만-휘트니, P < 0.0001)에 비해 gp120 X CD3 듀오바디® (예시적인, 변이체 1 및 변이체 2) (중간, 76%)에 의해 유의하게 더 높았다.
PGT-121.60 및 PGT-121과 비교하여 유의하게 더 많은 개수의 감염된 세포 (Emax)를 사멸시키는 것 외에도, gp120 X CD3 듀오바디 (예시적인, 변이체 1 및 2; 중간 EC50, 0.042 ug/mL)는 또한 PGT-121 (중간 EC50, >100 ug/mL; 만-휘트니, P < 0.0001)에 비해 감염된 세포를 사멸시키는데 있어서 유의하게 더 강력하였고, PGT-121.60 (중간 EC50, >100 ug/mL; 만-휘트니, P = 0.1157)에 비해 더 강력한 경향이 있었다.
PGT-121.60 (중간 18%)과 PGT-121 (중간 0%) 사이의 감염된-세포-사멸 효능 (Emax)에서의 차이는 통계적으로 유의하였다 (만 휘트니, P = 0.018). 추가로, PGT-121.60은 PGT-121에 비해 더 강력한 경향이 있었다 (P = 0.128). 상기 결과는 CD3-이중특이적 듀오바디가 PGT-121.60 (이펙터-증강된 IgG1 mAb) 또는 PGT-121 (IgG1 mAb)에 비해 HIV-감염된 세포의 증가된 사멸을 나타내었음을 시사한다.
표 24: HIV-감염된 CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T 세포의 사멸.
Figure pct00076
방법
CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T 세포를 20 ㎍/mL DEAE 덱스트란을 함유하는 R10+1+1 (RMPI + 10% FBS, 1 % 페니실린/스트렙토마이신, 1% HEPES) 배지 중의 HIV-1 분리주 92US657, 1489, 8398 및 7552로 감염시키고, 37℃에서 4 시간 동안 인큐베이션하였다. 접종 4 시간 후에, CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T 세포를 R10+1+1로 3배 희석하고, 48-72 시간 동안 배양하여, HIV Env의 데 노보 발현을 가능하게 하였다. 감염된 CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T 세포를 3회 세척하여 유리 바이러스를 제거하고, 백색의 96-웰 플레이트에서 2 x 104 세포/웰로 플레이팅하고, 인간 혈청 IgG (5 mg/mL 최종 농도)의 존재하에 7가지 농도의 gp120 X CD3 듀오바디® 또는 PGT-121.60의 10배 계열 희석액과 함께 1 시간 동안 인큐베이션한 후에, 2 x 105 PBMC/웰을 옵소닌화 CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T 세포에 첨가하고, 37℃에서 48 시간 동안 100 ㎕의 최종 부피로 인큐베이션하였다. 100 ㎕/웰의 ONE-Glo™ 루시페라제 시약을 첨가하여 HIV-감염된 CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T 세포의 사멸을 결정하고, 상대 발광 단위 (RLU)를 광도계 제조자의 지침에 따라 측정하였다.
gp120 x CD3 듀오바디® 및 PGT-121.60에 의한 HIV-감염된 CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T 세포의 사멸을 gp120 x CD3 듀오바디- 또는 PGT-121.60-처리된 웰의 RLU로부터 결정하고, 비처리된 웰에서 HIV-감염된 CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T 세포의 RLU와 비교하였다 (인간 혈청 IgG만으로 처리됨, 96-웰 플레이트당 n=2-10). HIV-감염된 CEM-NKr-CCR5-LucR CD4 T 세포의 사멸 백분율을 하기 식을 이용하여 계산하였다:
100 - ((처리된 웰에서 HIV-감염된 표적 세포의 RLU/비처리된 웰에서 HIV-감염된 표적 세포의 RLU) * 100).
사멸된 감염된 세포의 최대 분율 (Emax) 및 50% 사멸을 제공하는 농도 (IC50)를 그래프패드 프리즘 (캘리포니아주 라 호이아) 소프트웨어를 사용하여 3개의 파라미터 비선형 회귀 (식 1)에 의해 대입된 용량-반응 곡선으로부터 수득하였다.
Figure pct00077
상기 식에서, Y = % 사멸, X = 항체 농도, 최저 = 항체 부재하에서의 반응, 및 최고 = 최대 반응.
감염된-세포 사멸에 대해 명백한 Emax < 10%를 갖는 용량-반응 곡선에서, IC50 값은 >100 ㎍/mL로 기록되었고, ≤ 0%의 절대값을 갖는 Emax는 0%로 할당되었다.
실시예 10: 편도선-유래된 단핵 세포를 사용하는 HIV-감염된 일차 CD4 T 세포의 사멸
cART-저해된, HIV-감염된 대상체에서 잠복성 HIV-감염된 세포의 주요 병원소는 림프절에 존재한다. 항체가 림프 조직에 존재하는 이펙터 세포를 사용하는 능력을 이펙터 세포로서 HIV-1 혈청반응 음성의 편도선으로부터 단리된 단핵 세포 및 표적 세포로서 HIV-1-감염된 일차 CD4 T 세포를 이용하여 시험관내 사멸 검정에서 실험하였다. 편도선 공여자로부터의 자가 PBMC를 이용할 수 없기 때문에, 이종성 일차 CD4 T 세포를 표적 세포 및 PBMC 이펙터 세포 공급원으로서 사용하였다.
단일 공여자로부터의 편도선-유래된 단핵 세포 (TDMC), 두 공여자로부터의 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC), 및 두 HIV-1 바이러스 (CHO58 및 92US727)로 감염된 표적 세포로부터의 결과를 표 25 및 26에 도시하였다. TDMC 및 PBMC 둘 다 예시적인 gp120 x CD3 듀오바디 및 변이체 1 또는 변이체 2로 구성된 듀오바디에 의한 HIV-감염된 CD4 T 세포의 강력한 사멸을 매개하였고, TDMC의 경우 Emax 및 IC50 농도가 각각 66% 내지 82.6% 및 0.013 내지 0.053 ㎍/mL의 범위이고, PBMC의 경우 Emax 및 IC50 농도가 각각 62% 내지 84% 및 0.001 내지 0.024 ug/mL의 범위이었다. 대조적으로, TDMC가 아니라 PBMC만이 PGT121.60 (또는 음성 대조군 듀오바디, 팔리비주맙 x CD3)을 이용하여 HIV-감염된 CD4 T 세포의 사멸을 매개할 수 있었다.
표 25: 편도선-유래된- 및 말초 혈액-유래된-단핵 이펙터 세포를 이용하여 사멸된 HIV-감염된 세포의 최대 백분율.
Figure pct00078
표 26: 편도선-유래된- 및 말초 혈액-유래된-단핵 이펙터 세포를 이용하는 HIV-감염된 세포의 사멸의 효능 (IC50).
Figure pct00079
방법
HIV-감염된 CD4 T-세포의 gp120 X CD3 듀오바디®- 및 PGT-121.60-의존성 사멸을 표적 세포로서 일차 휴지 HIV-감염된 CD4+ T-세포 및 이펙터 세포로서 말초 혈액 유래된-단핵 세포 및 편도선-유래된 단핵 세포를 사용하여 시험관 내에서 조사하였다. 질환이 없는 편도선을 편도선 절제술을 받은 건강한 동의한 공여자로부터 수득하였다. 편도선을 항생제를 함유하는 DMEM 배지 중에서 실험실로 운반하여, 편도선 절제술 8 시간 이내에 가공하였다. 편도선-유래된 단핵 세포 (TDMC)를 단리하기 위해, 지방 및 사분면 조직을 먼저 제거하였다. 메스를 사용하여 편도선을 2-mm3 조각으로 절단하고, 100 ㎛ 나일론 세포 스트레이너 (팔콘(Falcon))를 통해 분산시켰다. DMEM + 1% FBS로 세척한 후에, TDMC를 피콜 파크에 의해 세포 현탁액으로부터 회수하고, 90% DMSO, 10% FBS 중에서 동결보존시키고, 액체 질소에서 보관하였다.
일차 CD4+ T 세포를 1200 xg에서 2 시간 동안 50-100 ng p24/백만개 세포에 의한 스핀펙션에 의해 감염시켰고, 37℃에서 5 일 동안 RPMI 배지 (10% FBS 및 1% 페니실린/스트렙토마이신으로 보충됨) 중에서 30 U/mL의 IL-2 (로쉐 Cat#11011456001)와 함께 배양하였다. 데 노보 항원 발현이 가능하도록 5 일 동안 휴식한 후에, 스핀펙션된 CD4+ T-세포 배양물을 3회 세척하여 유리 바이러스를 제거하였고, 96-웰 플레이트에서 2 x 105 세포/웰로 플레이팅하고, 인간 혈청 IgG (5 mg/mL 최종 농도)의 존재하에 7가지 농도의 gp120 X CD3 듀오바디® 또는 PGT-121.60의 10배 계열 희석액과 함께 1 시간 동안 인큐베이션하였다. CD4+ T-세포 표적이 옵소닌화되는 동안, 이펙터 세포를 준비하였다. 동결보존된 PBMC 및 TDMC를 해동시키고, 제조자의 지침에 따라 PKH67을 사용하여 막을 염색하고, 옵소닌화 표적 세포에 4 x 105 세포/웰로 첨가하여 2:1의 E:T 비를 수득하였다. 이펙터 세포를 옵소닌화 표적 세포와 함께 200 ㎕/웰의 최종 부피로 48 시간 동안 공동-배양하였다.
HIV-감염된 표적 세포의 사멸을 유동 세포분석법에 의해 결정하였다. 공동-배양 기간의 마지막에, 세포를 PBS로 2회 세척하고, 100 ㎕의 FACS 완충제 (PBS + 2% FBS)를 첨가하여 염색이 불활성화될 때까지 10 분 동안 100 ㎕의 라이브/데드 아쿠아 (PBS 중에서 1/1000 희석됨)로 염색하였다. 이어서, 세포를 FACS 완충제로 세척하고, 항-CD4-PE/Cy7 mAb (FACS 완충제 중에서 1/50 희석)와 함께 20 분 동안 인큐베이션한 다음, FACS 완충제로 3회 세척하고, 100 ㎕의 시토픽스/시토펌에 의해 10 분 동안 고정시키고 투과화시켰다. 이어서, 세포를 펌워쉬로 1회 세척하고, FACS 완충제 + 10% 펌워쉬 중의 항-p24-PE mAb와 함께 25 분 동안 인큐베이션하였다. 최종적으로, 세포를 FACS 완충제로 3회 세척하고, 120 ㎕의 FACS 완충제 중에서 재현탁시키고, 유동 세포분석 데이터를 LSR 포르테싸 또는 X20 FACS (비디 바이오사이언시즈, 캘리포니아주 산 호세) 상에서 획득하고, 플로우조 소프트웨어 (트리스타)를 이용하여 분석하였다.
PBMC 및 TDMC에 의해 감염된 일차 CD4+ T-세포의 사멸에서, 유동 세포분석법에 의한 HIV-감염된 표적 세포의 열거는 하기 게이팅 전략을 이용하였다: 림프구를 전방 및 측면 산란, 및 라이브/데드 아쿠아에 대한 음성 염색에 의한 살아있는 림프구를 기반으로 하여 선택하였다. 이어서, 접종된 CD4+T-세포를 대표하는 PKH67-음성의 살아있는 림프구를 선택하고, HIV-감염된 세포는 p24 Gag+, CD4low (HIV-매개된 CD4 하향-조절로 인해) 세포로 확인되었다. HIV-감염 백분율은 HIV-감염된 (p24 Gag+, CD4low 양성) 접종된 (PKH67-음성) CD4+ T 세포의 백분율로 나타내었다.
PGT-121.60-처리된 웰에서 HIV-감염된 표적 세포의 백분율을 비처리된 웰에서 HIV-감염된 표적 세포의 평균 백분율과 비교하였다 (인간 혈청 IgG만으로 처리됨, 96-웰 플레이트당 n=2-10). HIV-감염된 표적-세포의 사멸 백분율은 하기 식을 이용하여 계산하였다:
100 - ((처리된 웰에서 % HIV-감염된 표적 세포/비처리된 웰에서 % HIV-감염된 표적 세포) * 100).
PGT-121.60에 의해 사멸된 감염된 세포의 최대 분율 (Emax) 및 50% 사멸을 제공하는 농도 (IC50)를 그래프패드 프리즘 (캘리포니아주 라 호이아) 소프트웨어를 사용하여 3개의 파라미터 비선형 회귀 (식 1)에 의해 대입된 용량-반응 곡선으로부터 수득하였다.
Figure pct00080
상기 식에서, Y = % 사멸, X = 항체 농도, 최저 = 항체 부재하에서의 반응, 및 최고 = 최대 반응.
감염된-세포 사멸에 대해 명백한 Emax < 40%를 갖는 용량-반응 곡선에서, IC50 값은 >10 ㎍/mL로 기록되었고, ≤ 0%의 절대값을 갖는 Emax는 0%로 할당되었다.
실시예 11: T-세포 하위집합에 의한 HIV-감염된 CD4 T 세포의 사멸
T-세포 하위집합이 HIV-감염된 세포의 gp120 x CD3 듀오바디-의존성 사멸을 매개할 수 있는지를 연구하기 위해, 본 발명자들은 단리된 T-세포 하위집합, 즉, 기억 CD8 T 세포, 나이브 CD4 T 세포, 기억 CD4 T 세포, 이펙터 기억 CD4 T 세포, 및 γΔ T 세포가 HIV-감염된 CD4 T 세포의 사멸을 매개하는 능력을 평가하였다.
표 27에 도시된 결과는 시험한 모든 T 세포 하위집합 (즉, 기억 CD8 T 세포, 나이브 CD4 T 세포, 기억 CD4 T 세포, 이펙터 기억 CD4 T 세포 및 γΔ T 세포)이 예시적인 gp120 x CD3 듀오바디®, gp120 x CD3 듀오바디® 변이체 1, 및 gp120 x CD3 듀오바디® 변이체 2를 사용하여 HIV-1 WITO 감염성 분자 클론에 의해 감염된 T 세포의 강력하고 (EC50; 0.006 - 0.14 ㎍/mL) 효과적인 (Emax; 27% - 68%) 듀오바디-의존성 사멸을 매개할 수 있음을 나타낸다. 대조적으로, CD8 및 CD4 T 세포 하위집합은 PGT-121.60을 이용하여 HIV-감염된 T 세포의 효과적인 사멸을 매개할 수 없었다. 결과는 또한 γΔ T 세포가 PGT-121.60에 의한 HIV-감염된 T 세포의 효과적인 사멸을 매개할 수 있음을 나타내었고, Emax는 gp120 x CD3 듀오바디에 의해 달성되는 것에 필적하였지만 (48% vs 43% - 68%), gp120 x CD3 듀오바디에 비해 효능이 감소되었다 (EC50 12 ug/mL vs 0.02 ug/mL - 0.14 ug/mL). PGT-121.60이 γΔ T 세포에 의해 HIV-감염된 T 세포의 항체-의존성 사멸을 매개하는 능력은 γΔ T 세포가 FcγR CD16을 발현하고 항체-의존성 세포성 세포독성을 매개할 수 있다는 공개내용과 일치한다 (Tokuyama et al, 2008; Seidel et al, 2014; Chen & Freedman, 2008).
표 27: 다양한 T 세포 하위집합에 의한 HIV-감염된 세포의 사멸의 Emax (%) 및 효능 (IC50).
Figure pct00081
방법
T 세포 하위집합에 의한 HIV-감염된 CD4 T-세포의 gp120 X CD3 듀오바디®- 및 PGT-121.60-의존성 사멸을 실시예 5에 기재된 PBMC 이펙터 세포 검정에 의한 감염된-세포 사멸을 이용하고 하기 변형을 이용하여 시험관 내에서 조사하였다: 이펙터 세포로서 전체 PBMC를 사용하지 않고, 이펙터 세포로서 표 21에 상세하기 기재된 세포 단리 키트를 이용하여 제조자의 프로토콜에 따라 단리된 T 세포 하위집합을 2:1의 이펙터 대 표적 비로 사용하였다. Emax가 ≤ 10%인 경우에 EC50 값은 > 10 ug/mL로 기록되었다 (시험한 최대 농도).
표 28: T 세포 하위집합 단리 키트
Figure pct00082
실시예 11: 인간 혈소판 결합
인간 혈소판과의 결합을 평가하기 위해, 유동 세포분석법-기반 혈소판 결합 검정을 수행하였고, PGT-121.60과 비교하였다. 혈소판 풍부 혈장 (PRP) 샘플을 3명의 인간 건강한 공여자의 전혈로부터 준비하였고, 1000 ㎍/ml 또는 250 ㎍/ml 농도에서 시험 물품으로 처리하였다. 모노클로날 항체 팔리비주맙 (Pali)을 표적으로 하는 RSV 융합 단백질, 및 그의 유래된 듀오바디, Pali x CD3을 비-항-HIV Env 대조군 항체로서 사용하였다.
표 29에 도시된 결과는, 인간 혈소판에 결합하는 1000 ㎍/ml의 PGT-121.60의 MFI가 3명의 공여자로부터의 샘플에서 염색 백그라운드에 비해 40-100배 증가한 반면에, gp120 X CD3 듀오바디 변이체의 MFI는 동일한 샘플에서 15-50배 증가하였음을 나타낸다. 결합 검정에서 물품을 250 ㎍/ml에서 시험하였을 때, 혈소판 염색 MFI는 PGT-121.60에 비해 4-7배 감소하였고 변이체에 대해 1-3배 감소하였다. 비-항-HIV Env 대조군 항체 Pali 및 Pali X CD3의 MFI는 두 시험 농도 모두에서 백그라운드 수준에 있었다. PGT-121.60과 비교하여, 변이체는 보다 낮은 인간 혈소판 결합 활성을 나타내었다. 듀오바디 변이체의 평균 결합 MFI는 1000 ㎍/ml 농도에서 PGT-121.60의 35-47%이었다 (표 30).
표 29: 염색 백그라운드에 비한 인간 혈소판 결합 MFI의 증가 배수.
Figure pct00083
표 30: 인간 혈소판에 결합하는 gp120 X CD3 듀오바디 변이체 및 PGT-121.60의 비교.
Figure pct00084
방법
혈소판-풍부 혈장 (PRP) 샘플을 인간 전혈 샘플로부터 준비하였다. 간략히, 전혈 샘플을 170xg에서 실온에서 15 분 동안 중단하지 않고 원심분리하였다. 원심분리한 후에, PRP를 각각의 샘플의 상부층으로부터 수집한 다음, 변형된 HT (mHT) 완충제 (10 mM HEPES, 137 mM NaCl, 2.8 mM KCl, 1 mM MgCl2, 12 mM NaHCO3, 0.4 mM Na2HPO4, 0.35% BSA, 5.5 mM 글루코스, pH 7.4) 중에서 5배 희석하였다. 희석된 시험 항체 (50 ㎕)를 동등한 부피의 PRP 샘플에 첨가하고, 실온에서 45 분 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 마지막에, 동등한 부피의 BD FACS 염색 완충제 (2% 태아 소 혈청을 갖는 인산염 완충된 식염수)를 첨가하고, 검정 플레이트를 2000xg에서 실온에서 5 분 동안 원심분리하였다. 상청액을 흡입해 내고, 세척된 PRP 샘플을 mHT 완충제 중에서 재현탁시키고, PE 항-CD61, FITC 항-CD41 및 APC 항-인간 IgG 이차 항체에 의해 4℃에서 30 분 동안 염색하였다. 염색한 후에, PRP 샘플을 BD FACS 완충제로 세척하고, 125 ㎕의 BD FACS 염색 완충제 중에서 재현탁시키고, BD LSR포르테싸TM 세포 분석기 (비디 바이오사이언시즈, 캘리포니아주 산 호세) 및 플로우조 소프트웨어 (트리스타, 오래곤주 애슐랜드)를 이용하여 유동 세포분석법에 의해 분석하였다.
혈소판 집단은 PE 항-CD41 및 FITC 항-CD61 이중 양성 FACS 사건으로 정의되었다. 혈소판 집단의 APC 항-인간 IgG의 평균 형광 강도 (MFI) 값을 정량화하였다. 이어서, 염색 백그라운드 (APC 항-인간 IgG 이차 항체 단독에 의해 측정됨)에 비한 각각의 시험 물품의 MFI의 증가 배수를 계산하였다. gp120 X CD3 듀오바디 변이체의 혈소판-결합 활성을 PGT-121.60과 비교하기 위해, 각각의 샘플 중에서 1000 ㎍/ml에서 PGT-121.60에 대한 각각의 듀오바디 변이체의 MFI 백분율을 계산하였다.
다른 실시양태
본 발명이 그의 상세한 기재와 함께 기재되었지만, 상기 기재는 설명을 위해 의도된 것이고 본 발명을 제한하지 않으며, 본 발명은 첨부된 청구항의 범위에 의해 정의된다. 다른 측면, 이점 및 변형은 하기 청구항의 범위 내에 있다.
SEQUENCE LISTING <110> GILEAD SCIENCES, INC. <120> MULTISPECIFIC ANTIBODIES THAT TARGET HIV GP120 AND CD3 <130> 35648-0054W01 <140> <141> <150> 62/523,141 <151> 2017-06-21 <160> 127 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 1 Asp Ser Tyr Trp Ser 1 5 <210> 2 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 2 Tyr Val His Lys Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 3 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 3 Thr Leu His Gly Arg Arg Ile Tyr Gly Ile Val Ala Phe Asn Glu Trp 1 5 10 15 Phe Thr Tyr Phe Tyr Met Asp Val 20 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" 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Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Leu Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu 420 425 430 Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 98 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 98 Ser Tyr Val Leu His 1 5 <210> 99 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 99 Val Ile Ser Asp Asp Gly Arg Asn Lys Tyr Phe Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 100 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 100 Glu Gly Tyr Ser Gly Ser Trp Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 101 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 101 Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Glu Gly Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 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165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 103 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 103 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala Leu Ala 1 5 10 <210> 104 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 104 Gly Ala Ser Ser Leu Glu Gly 1 5 <210> 105 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 105 Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 106 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 106 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Val 1 5 <210> 107 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 107 Ile Ser Asp Asp Gly Arg Asn Lys 1 5 <210> 108 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 108 Val Arg Glu Gly Tyr Ser Gly Ser Trp Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 109 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 109 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 1 5 <210> 110 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 110 Asp Asp Gly Arg 1 <210> 111 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens 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Claims (86)

  1. 인간 면역결핍 바이러스-1 (HIV-1) 외피 (Env) 당단백질 gp120 (gp120) 및 인간 CD3에 결합하며, 다음을 포함하는 다중특이적 항체:
    (a) 제1 중쇄 가변 도메인 (VH) 및 제1 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함하는 제1 항원-결합 도메인, 여기서 제1 항원-결합 도메인은 gp120에 결합하며 다음을 포함함:
    (i) 서열식별번호:1의 아미노산 서열을 포함하는 제1 VH-상보성 결정 영역 (CDR) 1;
    (ii) 서열식별번호:2의 아미노산 서열을 포함하는 제1 VH-CDR2;
    (iii) 서열식별번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 제1 VH-CDR3;
    (iv) 서열식별번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 제1 VL-CDR1;
    (v) 서열식별번호:5의 아미노산 서열을 포함하는 제1 VL-CDR2; 및
    (vi) 서열식별번호:6의 아미노산 서열을 포함하는 제1 VL-CDR3; 및
    (b) 인간 CD3에 결합하는 제2 항원-결합 도메인.
  2. 제1항에 있어서, 제1 VH가 서열식별번호:7과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 제1 VL이 서열식별번호:8과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  4. 제3항에 있어서, 서열식별번호:8의 위치 66, 67, 67A 및 67C (카바트 넘버링)에서의 아미노산이 변경되지 않은 것인 항체.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 제1 VL이 서열식별번호:81과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서, 제1 VL이 서열식별번호:82와 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  7. 제1항 또는 제2항에 있어서, 제1 VL이 서열식별번호:83과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  8. 제1항 또는 제2항에 있어서, 제1 VL이 서열식별번호:84와 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항원-결합 도메인이 서열식별번호:9와 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 것인 항체.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항원-결합 도메인이 서열식별번호:10과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인 항체.
  11. 제1항에 있어서, 제1 VH가 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하고, 제1 VL이 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  12. 제1항에 있어서, 제1 VH가 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하고, 제1 VL이 서열식별번호:81의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  13. 제1항에 있어서, 제1 VH가 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하고, 제1 VL이 서열식별번호:82의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  14. 제1항에 있어서, 제1 VH가 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하고, 제1 VL이 서열식별번호:83의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  15. 제1항에 있어서, 제1 VH가 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하고, 제1 VL이 서열식별번호:84의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 다중특이적 항체가 이중특이적 항체인 항체.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 항원-결합 도메인이 제2 VH 및 제2 VL을 포함하고, 제2 VH가 다음을 포함하는 것인 항체:
    (i) 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VH-CDR1;
    (ii) 서열식별번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VH-CDR2; 및
    (iii) 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VH-CDR3.
  18. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 항원-결합 도메인이 제2 VH 및 제2 VL을 포함하고, 제2 VL이 다음을 포함하는 것인 항체:
    (i) 서열식별번호:14의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VL-CDR1;
    (ii) 서열식별번호:15의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VL-CDR2; 및
    (iii) 서열식별번호:16의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VL-CDR3.
  19. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 항원-결합 도메인이 제2 VH 및 제2 VL를 포함하고,
    제2 VH가 다음을 포함하고:
    (i) 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VH-CDR1;
    (ii) 서열식별번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VH-CDR2; 및
    (iii) 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VH-CDR3;
    제2 VL이 다음을 포함하는 것인 항체:
    (i) 서열식별번호:14의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VL-CDR1;
    (ii) 서열식별번호:15의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VL-CDR2; 및
    (iii) 서열식별번호:16의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VL-CDR3.
  20. 제17항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 VH가 서열식별번호:17과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  21. 제17항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 VL이 서열식별번호:18과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  22. 제17항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 VH가 서열식별번호:17의 아미노산 서열을 포함하고, 제2 VL이 서열식별번호:18의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  23. 제17항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 항원-결합 도메인이 서열식별번호:19와 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 것인 항체.
  24. 제17항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 항원-결합 도메인이 서열식별번호:20과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인 항체.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 카파-람다 바디, 이중-친화도 재표적화 분자 (DART), 놉-인-홀, 가닥-교환 조작된 도메인 바디 (SEEDbody), 이중특이적 T 세포 인게이저 (BiTe), 크로스맙, Fcab, 디아바디, 탠덤 디아바디 (TandAb), 또는 듀오바디인 항체.
  26. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항원-결합 도메인이 인간 IgG1, 인간 IgG2, 인간 IgG3, 인간 IgG4, 인간 IgA1 및 인간 IgA2로 이루어진 군으로부터 선택된 제1 중쇄 불변 영역에 직접적으로 또는 개재 아미노산 서열을 통해 융합되고, 제2 항원-결합 도메인이 인간 IgG1, 인간 IgG2, 인간 IgG3, 인간 IgG4, 인간 IgA1 및 인간 IgA2로 이루어진 군으로부터 선택된 제2 중쇄 불변 영역에 직접적으로 또는 개재 아미노산 서열을 통해 융합되는 것인 항체.
  27. 제26항에 있어서, 제1 중쇄 불변 영역이 인간 IgG1이고, 제2 중쇄 불변 영역이 인간 IgG1인 항체.
  28. 제26항 또는 제27항에 있어서, 제1 항원-결합 도메인이 인간 람다 불변 영역인 제1 경쇄 불변 영역에 직접적으로 또는 개재 아미노산 서열을 통해 융합되고, 제2 항원-결합 도메인이 인간 람다 불변 영역인 제2 경쇄 불변 영역에 직접적으로 또는 개재 아미노산 서열을 통해 융합되는 것인 항체.
  29. 제26항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
    (a) 제1 중쇄 불변 영역이 F405L 아미노산 돌연변이를 포함하고;
    (b) 제2 중쇄 불변 영역이 K409R 아미노산 돌연변이를 포함하는 것인 항체.
  30. 제26항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
    (a) 제1 중쇄 불변 영역이 K409R 아미노산 돌연변이를 포함하고;
    (b) 제2 중쇄 불변 영역이 F405L 아미노산 돌연변이를 포함하는 것인 항체.
  31. 제26항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 중쇄 불변 영역 및 제2 중쇄 불변 영역의 이펙터 기능이 감소되거나 또는 제거되는 것인 항체.
  32. 제26항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 중쇄 불변 영역이 N297A 돌연변이 또는 N297Q 돌연변이를 포함하는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함하고/거나 제2 중쇄 불변 영역이 N297A 돌연변이 또는 N297Q 돌연변이를 포함하는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함하는 것인 항체.
  33. gp120 및 인간 CD3에 결합하며, 다음을 포함하는 이중특이적 항체:
    (A) 다음을 포함하는 gp120에 결합하는 제1 아암:
    (i) 다음을 포함하는 제1 중쇄:
    (a) F405L 또는 K409R 돌연변이인 제1 돌연변이를 포함하는 제1 중쇄 불변 영역; 및
    (b) 서열식별번호:1의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1; 서열식별번호:2의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2; 및 서열식별번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 포함하는 제1 VH; 및
    (ii) 다음을 포함하는 제1 경쇄:
    (a) 제1 경쇄 불변 영역; 및
    (b) 서열식별번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR1; 서열식별번호:5의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR2; 및 서열식별번호:6의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR3을 포함하는 제1 VL; 및
    (B) 다음을 포함하는 인간 CD3에 결합하는 제2 아암:
    (i) 다음을 포함하는 제2 중쇄:
    (a) F405L 또는 K409R 돌연변이인 제2 돌연변이를 포함하는 제2 중쇄 불변 영역; 및
    (b) 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1; 서열식별번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2; 및 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 포함하는 제2 VH; 및
    (ii) 다음을 포함하는 제2 경쇄:
    (a) 제2 경쇄 불변 영역; 및
    (b) 서열식별번호:14의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR1; 서열식별번호:15의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR2; 및 서열식별번호:16의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR3을 포함하는 제2 VL,
    여기서, 제1 돌연변이 및 제2 돌연변이는 상이한 돌연변이임.
  34. 제33항에 있어서, 제1 VH가 서열식별번호:7과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  35. 제33항 또는 제34항에 있어서, 제1 VL이 서열식별번호:8과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  36. 제35항에 있어서, 서열식별번호:8의 위치 66, 67, 67A 및 67C (카바트 넘버링)에서의 아미노산이 변경되지 않은 것인 항체.
  37. 제33항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 중쇄가 서열식별번호:9와 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  38. 제33항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 경쇄가 서열식별번호:10과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  39. 제33항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 VH가 서열식별번호:17과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  40. 제33항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 VL이 서열식별번호:18과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  41. 제33항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 중쇄가 서열식별번호:19와 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  42. 제33항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 경쇄가 서열식별번호:20과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  43. 제33항에 있어서, 제1 VH가 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하고 제1 VL이 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 VH가 서열식별번호:17의 아미노산 서열을 포함하고 제2 VL이 서열식별번호:18의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  44. 제33항에 있어서, 제1 VH가 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하고 제1 VL이 서열식별번호:81의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 VH가 서열식별번호:17의 아미노산 서열을 포함하고 제2 VL이 서열식별번호:18의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  45. 제33항에 있어서, 제1 VH가 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하고 제1 VL이 서열식별번호:82의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 VH가 서열식별번호:17의 아미노산 서열을 포함하고 제2 VL이 서열식별번호:18의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  46. 제33항에 있어서, 제1 VH가 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하고 제1 VL이 서열식별번호:83의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 VH가 서열식별번호:17의 아미노산 서열을 포함하고 제2 VL이 서열식별번호:18의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  47. 제33항에 있어서, 제1 VH가 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하고 제1 VL이 서열식별번호:84의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 VH가 서열식별번호:17의 아미노산 서열을 포함하고 제2 VL이 서열식별번호:18의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  48. 제33항에 있어서, 제1 중쇄가 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 포함하고 제1 경쇄가 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 중쇄가 서열식별번호:19의 아미노산 서열을 포함하고 제2 경쇄가 서열식별번호:20의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  49. 제33항에 있어서, 제1 중쇄가 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 포함하고 제1 경쇄가 서열식별번호:40의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 중쇄가 서열식별번호:19의 아미노산 서열을 포함하고 제2 경쇄가 서열식별번호:20의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  50. 제33항에 있어서, 제1 중쇄가 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 포함하고 제1 경쇄가 서열식별번호:78의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 중쇄가 서열식별번호:19의 아미노산 서열을 포함하고 제2 경쇄가 서열식별번호:20의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  51. 제33항에 있어서, 제1 중쇄가 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 포함하고 제1 경쇄가 서열식별번호:79의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 중쇄가 서열식별번호:19의 아미노산 서열을 포함하고 제2 경쇄가 서열식별번호:20의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  52. 제33항에 있어서, 제1 중쇄가 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 포함하고 제1 경쇄가 서열식별번호:80의 아미노산 서열을 포함하고/거나 제2 중쇄가 서열식별번호:19의 아미노산 서열을 포함하고 제2 경쇄가 서열식별번호:20의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  53. 제1항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 세포독성제, 방사성 동위원소, 치료제, 항바이러스제, 또는 검출가능한 표지를 추가로 포함하는 항체.
  54. (i) 제1항 내지 제52항 중 어느 한 항의 항체의 제1 항원-결합 단편의 제1 경쇄 가변 영역 또는 제1 경쇄를 코딩하는 핵산 분자, (ii) 제1항 내지 제52항 중 어느 한 항의 항체의 제1 항원-결합 단편의 제1 중쇄 가변 영역 또는 제1 중쇄를 코딩하는 핵산 분자, (iii) 제1항 내지 제52항 중 어느 한 항의 항체의 제2 항원-결합 단편의 제1 경쇄 가변 영역 또는 제1 경쇄를 코딩하는 핵산 분자, 및 (iv) 제1항 내지 제52항 중 어느 한 항의 항체의 제2 항원-결합 단편의 제2 중쇄 가변 영역 또는 제2 중쇄를 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 조성물.
  55. (i) 제1항 내지 제52항 중 어느 한 항의 항체의 제1 항원-결합 단편의 제1 경쇄 가변 영역 또는 제1 경쇄를 코딩하는 핵산 분자, (ii) 제1항 내지 제52항 중 어느 한 항의 항체의 제1 항원-결합 단편의 제1 중쇄 가변 영역 또는 제1 중쇄를 코딩하는 핵산 분자, 및/또는 (iii) 제1항 내지 제52항 중 어느 한 항의 항체의 제2 항원-결합 단편의 제1 경쇄 가변 영역 또는 제1 경쇄를 코딩하는 핵산 분자, 및 (iv) 제1항 내지 제52항 중 어느 한 항의 항체의 제2 항원-결합 단편의 제2 중쇄 가변 영역 또는 제2 중쇄를 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 숙주 세포.
  56. 제55항에 있어서, 조직 배양물 중 이. 콜라이, 슈도모나스, 바실루스, 스트렙토마이세스, 효모, CHO, YB/20, NS0, PER-C6, HEK-293T, NIH-3T3, HeLa, BHK, Hep G2, SP2/0, R1.1, B-W, L-M, COS 1, COS 7, BSC1, BSC40, BMT10 세포, 식물 세포, 곤충 세포 및 인간 세포로 이루어진 군으로부터 선택되는 숙주 세포.
  57. 핵산 분자가 발현되고 항체가 생성되도록 하는 조건하에서 제55항 또는 제56항의 숙주 세포를 배양하는 것을 포함하는, gp120 및 인간 CD3에 결합하는 항체를 생성하는 방법.
  58. 샘플을 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항의 항체와 접촉시키는 것을 포함하는, 샘플 중에서 gp120 및 CD3을 발현하는 세포를 검출하는 방법.
  59. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항의 항체 및 제약상 허용가능한 부형제를 포함하는 제약 조성물.
  60. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항의 항체 또는 제59항의 제약 조성물, 및 a) 검출 시약, b) gp120 및/또는 CD3 항원, c) 인간 투여를 위한 사용 또는 판매에 대한 승인을 반영하는 통지, 또는 d) 이들의 조합물을 포함하는 키트.
  61. 인간 면역결핍 바이러스 감염의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간 대상체에게 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항의 항체 또는 제59항의 제약 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 인간 대상체에서 인간 면역결핍 바이러스 감염을 치료하거나 또는 예방하는 방법.
  62. gp120에 결합하는 항체이며, 항체는 중쇄 가변 도메인 (VH) 및 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함하고, VH는 서열식별번호:1의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1, 서열식별번호:2의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2, 서열식별번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 포함하고, VL은 서열식별번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR1, 서열식별번호:5의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR2 및 서열식별번호:6의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR3을 포함하고, VL은 위치 67A (카바트 넘버링)에서 티로신, 위치 67A (카바트 넘버링)에서 페닐알라닌, 위치 67A (카바트 넘버링)에서 트레오닌, 또는 위치 67 (카바트 넘버링)에서 글리신을 포함하는 것인 항체.
  63. 제62항에 있어서, VH가 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  64. 제62항에 있어서, VL이 서열식별번호:81, 서열식별번호:82, 서열식별번호:83 또는 서열식별번호:84의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  65. 제62항에 있어서, VH가 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하고, VL이 서열식별번호:81, 서열식별번호:82, 서열식별번호:83 또는 서열식별번호:84의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  66. 제62항에 있어서, 항체가 서열식별번호:9에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 것인 항체.
  67. 제62항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 40, 78, 79 또는 80 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 항체.
  68. 제62항에 있어서, 항체가 서열식별번호:9에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열식별번호: 40, 78, 79 또는 80 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 항체.
  69. 제62항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 세포독성제, 방사성 동위원소, 치료제, 항바이러스제, 또는 검출가능한 표지를 추가로 포함하는 항체.
  70. 제62항 내지 제69항 중 어느 한 항의 항체 및 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물.
  71. 제62항 내지 제68항 중 어느 한 항의 항체를 코딩하는 핵산 또는 핵산들.
  72. 제71항의 핵산 또는 핵산들을 포함하는 벡터 또는 벡터들.
  73. 제72항의 벡터 또는 벡터들을 포함하는 숙주 세포.
  74. 핵산 또는 핵산들이 발현되고 항체가 생성되도록 하는 조건하에서 제73항의 숙주 세포를 배양하는 것을 포함하는, 항-gp120 항체를 생성하는 방법.
  75. 인간 면역결핍 바이러스 감염의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간 대상체에게 제62항 내지 제69항 중 어느 한 항의 항체 또는 제70항의 제약 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 인간 대상체에서 인간 면역결핍 바이러스 감염을 치료하거나 또는 예방하는 방법.
  76. gp120에 결합하는 항체 단편이며, 항체 단편은 중쇄 가변 도메인 (VH) 및 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함하고, VH는 서열식별번호:1의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1, 서열식별번호:2의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2, 서열식별번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 포함하고, VL은 서열식별번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR1, 서열식별번호:5의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR2 및 서열식별번호:6의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR3을 포함하고, VL은 위치 67A (카바트 넘버링)에서 티로신, 위치 67A (카바트 넘버링)에서 페닐알라닌, 위치 67A (카바트 넘버링)에서 트레오닌, 또는 위치 67 (카바트 넘버링)에서 글리신을 포함하는 것인 항체 단편.
  77. 제76항에 있어서, VH가 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체 단편.
  78. 제76항에 있어서, VL이 서열식별번호:81, 서열식별번호:82, 서열식별번호:83 또는 서열식별번호:84의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체 단편.
  79. 제76항에 있어서, VH가 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하고, VL이 서열식별번호:81, 서열식별번호:82, 서열식별번호:83 또는 서열식별번호:84의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체 단편.
  80. 제76항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, Fab, F(ab)2, Fv, scFv, sc(Fv)2, 또는 디아바디인 항체 단편.
  81. 제76항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 세포독성제, 방사성 동위원소, 치료제, 항바이러스제, 또는 검출가능한 표지를 추가로 포함하는 항체 단편.
  82. 제76항 내지 제81항 중 어느 한 항의 항체 단편 및 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물.
  83. 제76항 내지 제80항 중 어느 한 항의 항체 단편을 코딩하는 핵산 또는 핵산들.
  84. 제83항의 핵산 또는 핵산들을 포함하는 벡터 또는 벡터들.
  85. 제84항의 벡터 또는 벡터들을 포함하는 숙주 세포.
  86. 핵산 또는 핵산들이 발현되고 항체 단편이 생성되는 조건하에서 제85항의 숙주 세포를 배양하는 것을 포함하는, 항-gp120 항체 단편을 생성하는 방법.
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