TW201639585A - 使用去細胞化組織之沾黏防止材及代用生體膜 - Google Patents

Abstract

本發明係有關含有去細胞化組織及生體適合性高分子或纖維蛋白膠之沾黏防止材；包含將生體適合性高分子或纖維蛋白膠應用於去細胞化組織之沾黏防止材之製造方法；含有去細胞化組織及生體適合性高分子或纖維蛋白膠之沾黏防止材套組；含有去細胞化組織及生體適合性高分子或纖維蛋白膠之代用生體膜；包含將生體適合性高分子或纖維蛋白膠應用於去細胞化組織之代用生體膜之製造方法及含有去細胞化組織及生體適合性高分子或纖維蛋白膠之代用生體膜套組。

Description

使用去細胞化組織之沾黏防止材及代用生體膜

本發明係有關沾黏防止材，尤其是伴隨組織再生之代用生體膜。

術後之組織沾黏係發生於循環器科、消化器外科、整形外科、婦產科、眼科等廣泛領域。例如，開腹手術後腹腔內之沾黏為生理性之生體修復反應，由於要完全無沾黏有困難，手術後之沾黏會以一定之頻率引起沾黏性腸阻塞。沾黏性腸阻塞通常在如下腹部之剝離面大之手術比起上腹部為多。其頻率與手術時間或出血量有某一程度之比例。為了防止、減少沾黏性腸阻塞之發生，要求外科醫師謹慎、愛護的手術操作、最小量之剝離、最少量之出血、最短之手術時間、防止手術中之汚染、最少量之異物殘存、使用吸收性縫合線、適當引流、防止感染、手術後早期離床等，於緊急之汚染手術，更要求充分之腹腔內洗淨、術後之體位、術後抗生劑之使用等。其分別對於防止沾黏性腸阻塞有某種程度之效果，惟，只有如此，仍 不能完全防止腸阻塞之發生(非專利文獻1)。

於婦產科領域，輸卵管沾黏亦有將來生育能力降低之危險性，為重要問題之一。至今多方嘗試防止術後之沾黏，惟，不能說是完善之沾黏防止法(非專利文獻2)。

於心臟血管外科領域，術後之心外膜(心臟表面)與胸壁之沾黏或心膜與心外膜之沾黏於再手術時，對於心臟與大血管會增加損傷之危險性(非專利文獻3)。沾黏對於再手術時之幾乎所有操作均帶來惡影響。沾黏會使因沾黏剝離引起之出血、臟器/血管之損傷、心臟表面構造之辨視性降低。長時間之手術使對病患之侵襲增加，出血量增加會使大量輸血伴隨之臟器障礙惡化。於術後，心外膜與胸壁強固沾黏時，有會造成心臟，尤其是右心室收縮障礙之情況。於此點，希望心外膜形成不與周圍構造物沾黏，可自由活動的狀態。又，雖然希望將已開放之自己心膜再閉鎖，但是不能施行之情況多，通常勉強地希望不會再閉鎖(非專利文獻4)。因此，開心術後，於心膜之閉鎖大都使用任何心膜代用材。雖可使用例如矽膜、聚胺基甲酸酯、筋膜、膨體聚四氟乙烯(expanded-polytetrafluoroethylene(e-PTFE))墊片、牛、豬、馬等之異種心膜、達克龍(Dacron)、硬膜等，惟，心膜之沾黏極可能會因使用異物，在周圍組織引起炎症反應，誘發縱隔炎之發生(非專利文獻5)。異物若殘存，則會成為感染菌之溫床，又，於遠隔期亦會鈣化。因此，期待開發生體適合性高之心膜代用材或促進再生之 代用生體膜。

於美國，有治療腹部沾黏一年中花費13億美元的報告(非專利文獻6)，從醫療經濟面而言，實施儘可能減輕沾黏之處置是重要的。另，減輕沾黏，可期待減少術後合併症，提昇病患的生活品質QOL(Quality Of Life)及減少醫療費用。惟，於現狀，不能完全防止術後組織之沾黏，成為外科醫師非常煩惱的大問題。

作為防止沾黏之物理性屏障，現在於日本國內被認定可於臨床上使用之材料為透明質酸鈉/羧甲基纖維素(seprafilm(註冊商標))等屏障及氧化再生纖維素(Interceed(註冊商標))或聚四氟乙烯(e-PTFE)(Gore-Tex Surgical Membrane(註冊商標))等沾黏防止材。於美國被認可之代用心膜材料為聚乳酸/聚乙二醇(REPEL-CV(註冊商標))等沾黏防止材。任一種材料之有效性均被限定，導至仍不能滿足外科醫師(非專利文獻7至8)。又，戈爾-達德士外科用內植膜(Gore-Tex Surgical Membrane(註冊商標))由於作為異物永久殘存，於周圍組織引起炎症反應，導至纖維性組織增生，於再手術時組織構成不能辨視。基於上述等理由，亦期待生體適合性高之心膜代用材或將促進再生之代用生體膜之製品化。

亦有以防止沾黏為目的，使用為生體組織黏合劑之纖維蛋白膠之例子之報告(非專利文獻9至10)。惟，由於纖維蛋白膠不能完全防止組織沾黏(專利文獻1至3)，仍不能解決使外科醫師煩惱的大問題。

矽、鐵氟龍(Teflon)(註冊商標)、聚胺基甲酸酯等非生體吸收性之材料雖然防止組織間之沾黏效果高，惟，由於為非吸收性材料，殘存於生體組織面，不僅延遲組織修復，還有成為炎症原因之情況。因此，開發有使用生體吸收性素材之沾黏防止膜，例如使用明膠之沾黏防止膜(專利文獻4至5)、使用褐藻酸或透明質酸之沾黏防止膜(專利文獻6)、使用羧甲基纖維素之沾黏防止膜(專利文獻7至8)等。惟，以往之生體吸收性之沾黏防止膜雖然不會殘存於生體，但有因防止沾黏之效果不充分，容易發生沾黏及由於強度不充分，不能縫合至病患組織之問題。

另一方面，為了減低移殖他人或其他種動物組織時之排斥反應，開發從源自生體之組織除去細胞之去細胞化組織。去細胞化之方法己知有使用界面活性劑之方法(專利文獻9至10)、使用酵素之方法(專利文獻11)、使用氧化劑之方法(專利文獻12)、藉由高靜水壓處理之方法(專利文獻13至15)、藉由凍結融解處理之方法(專利文獻16至17)、以高張電解質溶液處理之方法(專利文獻18)等。去細胞化組織有應用於皮膚(專利文獻16至17)、眼角膜(專利文獻14)、血管(專利文獻19)等之提案。

[先前技術文獻] [專利文獻]

[專利文獻1]日本特表平11-502431號公報

[專利文獻2]日本特開2001-327592號公報

[專利文獻3]日本特表2003-500170號公報

[專利文獻4]日本特開2004-065780號公報

[專利文獻5]日本特開2013-226166號公報

[專利文獻6]日本特開2000-116765號公報

[專利文獻7]日本特開2004-051531號公報

[專利文獻8]日本特開2010-284216號公報

[專利文獻9]日本特開昭60-501540號公報

[專利文獻10]日本特表2003-518981號公報

[專利文獻11]日本特表2002-507907號公報

[專利文獻12]日本特表2003-525062號公報

[專利文獻13]日本特開2004-097552號公報

[專利文獻14]國際公開第2008/111530號小冊

[專利文獻15]日本特表2013-502275號公報

[專利文獻16]日本特開2005-185507號公報

[專利文獻17]日本特開2005-211480號公報

[專利文獻18]日本特開2010-221012號公報

[專利文獻19]日本特開2013-503696號公報

[非專利文獻]

[非專利文獻1]福島恒男等, 外科治療, 2006; 94(6):919-924

[非專利文獻2]藤下晃等, 婦產科手術, 2002; 13:91-98

[非專利文獻3]Dobell AR., et al., Ann Thorac Surg.1984 37:273-8

[非專利文獻4]Cunningham JN, Jr., et al.,J Thorac Cardiovasc Surg. 1975; 70:119-25

[非專利文獻5]佐久間啟等, 人工臟器, 2000; 29(1):233-238

[非專利文獻6]Ray NF. et al.,J. Am. Coll. Surg. 1998; 186:1-9

[非專利文獻7]Lodge AJ, et al., Ann Thorac Surg. 2008; 86:614-621

[非專利文獻8]Haensig et al., Medical Devices: Evidence and Research 2011; 4:17-25

[非專利文獻9]佐藤孝道等, 產科及婦科, 1990; 57(12):2398-2404

[非專利文獻10]奥田喜代司等, 婦產科的世界, 1993; 45(9):759-764

本發明要解決之課題為提供應用於手術部位時可發揮防止沾黏效果之材料(沾黏防止材)及應用於術後缺損部位時代用生體機能之材料(代用生體膜)。

本發明要解決之課題為提供膜之強度高，可縫合，可減低術後生體組織沾黏，於生體之應用性優越之沾黏防止材。

本發明人等經過深入研究之結果發現藉由以源自生體組織之去細胞化組織作為沾黏防止材使用，可解決上述課題，因而完成本發明。亦即，本發明為使源自生體組織經去細胞化之去細胞化組織與生體適合性高分子複合化之沾黏防止材。

本發明人等發現將去細胞化組織及纖維蛋白膠複合化而製作之代用生體膜或沾黏防止材應用於組織缺損部位或組織間時，成為組織之代替物或屏障，可防止與周圍之組織沾黏，因而達成本發明。

亦即，本發明係包含 (1)含有去細胞化組織及生體適合性高分子之沾黏防止材， (2)包含使生體適合性高分子與去細胞化組織複合化之沾黏防止材之製造方法， (3)含有去細胞化組織及生體適合性高分子之沾黏防止材套組， (4)含有去細胞化組織及生體適合性高分子之代用生體膜， (5)包含使生體適合性高分子與去細胞化組織複合化之代用生體膜之製造方法， (6)含有去細胞化組織及生體適合性高分子之代用生體膜套組。

具體而言，本發明包含以下者。

[1]一種沾黏防止材，其含有去細胞化組織及生體適 合性高分子；[2]如上述[1]所述之沾黏防止材，其中，該去細胞化組織為使選自由心膜、膀胱、羊膜、硬膜、腹膜、橫隔膜、筋膜、小腸黏膜下組織及皮膚所成群組之源自生體之組織經去細胞化之組織；[3]如上述[1]或[2]所述之沾黏防止材，其中，該去細胞化組織為對源自生體之組織進行高靜水壓處理或界面活性劑處理而獲得之去細胞化組織；[4]如上述[3]所述之沾黏防止材，其中，該高靜水壓處理為包含對源自生體之組織，於介質中施加50至1,500MPa之靜水壓；[5]如上述[1]至[4]中任一項所述之沾黏防止材，其中，該生體適合性高分子為源自天然之生體適合性高分子；[6]如上述[1]至[5]中任一項所述之沾黏防止材，其中，該生體適合性高分子為纖維蛋白膠。[7]如上述[1]至[6]中任一項所述之沾黏防止材，其中，去細胞化組織係與生體適合性高分子複合化；[8]如上述[7]所述之沾黏防止材，其中，該去細胞化組織與生體適合性高分子之複合化為使生體適合性高分子含浸或塗佈於去細胞化組織；[9]如上述[1]至[8]中任一項所述之沾黏防止材，其中，該沾黏防止材為沾黏防止膜，膜厚為10至5,000μm；[10]一種沾黏防止材之製造方法，其包含使生體適合性高分子與去細胞化組織複合化； [11]如上述[10]所述之製造方法，其中，該複合化為使生體適合性高分子含浸或塗佈於去細胞化組織；[12]一種沾黏防止材套組，其含有去細胞化組織及生體適合性高分子；[13]如上述[12]所述之套組，其中，該去細胞化組織為使選自由心膜、膀胱、羊膜、硬膜、腹膜、橫隔膜、筋膜、小腸黏膜下組織及皮膚所成群組之組織經去細胞化之組織；[14]如上述[12]或[13]所述之套組，其中，該去細胞化組織為對源自生體之組織進行高靜水壓處理或界面活性劑處理而獲得之去細胞化組織；[15]如上述[14]所述之套組，其中，該高靜水壓處理為包含對源自生體之組織，在介質中施加50至1,500MPa之靜水壓；[16]如上述[12]至[15]中任一項所述之套組，其中，該生體適合性高分子為纖維蛋白膠；[17]如上述[12]至[16]中任一項所述之套組，其中，該去細胞化組織係與生體適合性高分子複合化；[18]如上述[17]所述之套組，其中，該去細胞化組織與生體適合性高分子之複合化為將生體適合性高分子含浸或塗佈於去細胞化組織；[19]如上述[12]至[18]中任一項所述之套組，其中，該沾黏防止材為沾黏防止膜，膜厚為10至5,000μm；[20]一種代用生體膜，其含有去細胞化組織及生體適 合性高分子；[21]如上述[20]所述之代用生體膜，其中，該去細胞化組織為使選自由心膜、膀胱、羊膜、硬膜、腹膜、橫隔膜、筋膜、小腸黏膜下組織及皮膚所成群組之源自生體之組織經去細胞化之組織；[22]如上述[20]或[21]所述之代用生體膜，其中，該去細胞化組織為對源自生體之組織進行高靜水壓處理或界面活性劑處理而獲得之去細胞化組織；[23]如上述[22]所述之代用生體膜，其中，該高靜水壓處理包含對源自生體之組織，在介質中施加50至1,500MPa之靜水壓；[24]如上述[20]至[23]中任一項所述之代用生體膜，其中，該生體適合性高分子為源自天然之生體適合性高分子；[25]如上述[20]至[23]中任一項所述之代用生體膜，其中，該生體適合性高分子為纖維蛋白膠；[26]如上述[20]至[25]中任一項所述之代用生體膜，其中，去細胞化組織與生體適合性高分子複合化；[27]如上述[26]所述之代用生體膜，其中，該去細胞化組織與生體適合性高分子之複合化為將生體適合性高分子含浸或塗佈於去細胞化組織；[28]如上述[20]至[27]中任一項所述之代用生體膜，其中，膜厚為10至5,000μm；[29]一種代用生體膜之製造方法，其包含使生體適合性高分子與去細胞化組織複合化； [30]如上述[29]所述之製造方法，其中，該複合化為將生體適合性高分子含浸或塗佈於去細胞化組織；[31]一種代用生體膜套組，其含有去細胞化組織及生體適合性高分子；[32]如上述[31]所述之套組，其中，該去細胞化組織為使選自由心膜、膀胱、羊膜、硬膜、腹膜、橫隔膜、筋膜、小腸黏膜下組織及皮膚所成群組之組織經去細胞化之組織；[33]如上述[31]或[32]所述之套組，其中，該去細胞化組織為對源自生體之組織進行高靜水壓處理或界面活性劑處理而獲得之去細胞化組織；[34]如上述[33]所述之套組，其中，該高靜水壓處理包含對源自生體之組織，於介質中施加50至1,500MPa之靜水壓；[35]如上述[31]至[34]所述之套組，其中，該生體適合性高分子為纖維蛋白膠；[36]如上述[31]至[35]所述之套組，其中，該去細胞化組織係與生體適合性高分子複合化；[37]如上述[36]所述之套組，其中，該去細胞化組織與生體適合性高分子之複合化為將生體適合性高分子含浸或塗佈於去細胞化組織；及[38]如上述[31]至[37]中任一項所述之套組，其中，該代用生體膜之膜厚為10至5,000μm。

本發明之代用生體膜或沾黏防止材在應用於組織缺損部位時，具有作為缺損組織之代替物機能之效果或對於與應用部位接觸之組織具有防止沾黏之效果。

藉由使用本發明之沾黏防止材，可大幅度減少沾黏。又，本發明之代用生體膜或沾黏防止材對於組織具有可縫合之強度，可固定於組織。

第1圖表示本發明之沾黏防止材應用於大鼠之心臟沾黏模型後第7天之評估。圖中，E及F表示心肌組織、G及H表示心膜。

本發明包含含有去細胞化組織及生體適合性高分子之代用生體膜。又，本發明包含含有去細胞化組織及生體適合性高分子之沾黏防止材。

本發明沾黏防止材之特徵使將源自生體之組織經去細胞化之去細胞化組織及生體適合性高分子複合化。於本發明，複合化為生體適合性高分子不容易從去細胞化組織脫離之狀態，去細胞化組織與生體適合性高分子可為化學結合、可為生體適合性高分子物理吸附於去細胞化組織、可為生體適合性高分子含浸於去細胞化組織。物理吸附之一例為塗佈。於本發明，較好將生體適合性高分子含浸或塗佈於去細胞化組織。

1.去細胞化組織

本發明之沾黏防止材只要是使用墊片狀之去細胞化組織，去細胞化組織中使用之源自生體之組織及使用部位為源自脊椎動物、可獲得可用於沾黏防止材之大小及厚度即可，並無特別限制。

去細胞化組織可從脊椎動物(捐贈者)回收源自生體之組織，進行去細胞化處理而取得。源自生體之組織藉由進行去細胞化處理，可除去源自捐贈者之細胞或病原體(病毒或細菌)。因此，經去細胞化處理之源自生體之組織即使移殖到與捐贈者不同種類之動物，異種免疫反應亦可被抑制。因此，將源自生體之組織回收之動物之種類並無特別限制。另一方面，源自生體之組織較好為可容易取得者，因此較好為人類以外之動物，尤其較好為哺乳類之家畜或鳥類之家禽。哺乳類之家畜可列舉牛、馬、駱駝、大羊駝、驢、犛牛、綿羊、豬、山羊、鹿、羊駱駝、狗、狸、鼬鼠、狐狸、貓、兔子、倉鼠、天竺鼠、大鼠、松鼠及浣熊等。鳥類之家禽可列舉鸚鵡、鳳頭鸚鵡、雞、家鴨、火雞、鵝、珍珠雞、綠雉、鴕鳥、鴯鶓及鵪鶉等。其中，從取得之安定性而言，較好為豬、兔子或牛。

源自生體之組織於細胞外具有基材構造，可例示如可進行去細胞化處理之組織。該組織可例示選自由肝臟、腎臟、輪尿管、膀胱、尿道、舌、扁桃腺、食道、胃、橫隔膜、小腸、大腸、腹膜、肛門、胰臟、心臟、心膜、血管、脾臟、肺、腦、硬膜、骨、脊髄、軟骨、睪丸、羊膜、子宮、輸卵管、卵巢、胎盤、角膜、骨格肌、腱、 神經及皮膚等所成群組之組織。去細胞化組織為墊片狀時，由於在生體之應用容易，較佳之組織可例示選自由心膜、膀胱、羊膜、硬膜、腹膜(大網膜、小網膜)、橫隔膜、黏膜下層(例如小腸黏膜下組織)及皮膚所成群組之組織。即使為非墊片狀之組織，只要加工成墊片狀，則在生體之應用變容易，因此，該等不為墊片狀之組織亦包含於可去細胞化處理之組織中。更好為皮膚、心膜及羊膜。皮膚通常由表皮、真皮、皮下組織等構成，惟，於本發明之沾黏防止材使用時，較好只使用真皮。

從動物回收源自生體之組織可採用適合於捐贈者之動物種或源自生體之組織之方法。將從動物回收之源自生體之組織進行去細胞化處理。去細胞化處理只要可將源自捐贈者之細胞或病原體除去之方法即可，並無特別限制。該等方法可例示界面活性劑處理(Singelyn J.M.,et al.,Biomaterials,2009,30,5409-5416；Singelyn J.M,,et al.,J.Am.Coll.Cardiol.,2012,59,751-763；Sonya B.,et al.,Sci.Transl.Med.,2013,5,173ra25)、酵素處理、滲透壓處理、凍結融解處理、氧化劑處理、高靜水壓處理(Sasaki S.,et al.,Mol.Vis.,2009,15,2022-2028；Yoshihide H.,et al.,Biomaterials,2010,31,3941-3949；Seiichif.,et al.,Biomaterials,2010,31,3590-3595；Negishi J.,et al.,J.Artif.Organs,2011,14,223-231；日本專利第4092397號公報；日本再公表2008-111530號公報；日本特開2009-50297號公報)及該等之組合，亦可對應捐贈者之動物種或源自生體 組織之種類適當選擇。高靜水壓處理由於係藉由在介質中，對源自生體之組織施加靜水壓而破壞源自捐贈者之細胞或病原體，於去細胞化時不需可能對人體有影響之藥劑，因而特別佳。另一方面，即使在使用藥劑進行去細胞化處理時，藉由將去細胞化處理後之組織充分洗淨，亦可將藥劑除去。

去細胞化處理亦可包含將去細胞化之源自生體之組織洗淨之步驟。將去細胞化之源自生體之組織洗淨之方法可對應去細胞化處理之種類適當選擇。洗淨方法可例示浸漬於洗淨液之方法(日本特開2010-227246號公報)、照射微波之方法(專利第4189484號公報)。

進行高靜水壓處理時之壓力只要可將源自捐贈者之細胞或病原體破壞之壓力即可，可對應捐贈者之動物種或源自生體組織之種類適當選擇。靜水壓可例示2至1,500MPa。施加之靜水壓比50MPa高時，對源自生體之組織之去細胞化可充分進行。因此，較好為50至1,500MPa，更好為80至1,300MPa，更好為90至1,200MPa，最好為95至1,100MPa。

施加高靜水壓所使用之介質可列舉水、生理食鹽水、丙二醇或其水溶液、丙三醇或其水溶液及糖類水溶液等。緩衝液可列舉乙酸緩衝液、磷酸緩衝液、檸檬酸緩衝液、硼酸緩衝液、酒石酸緩衝液、Tris緩衝液、HEPES緩衝液及MES緩衝液等。糖類水溶液之糖類可列舉赤蘚糖、木糖、阿拉伯糖、阿洛糖、塔羅糖、葡萄糖、甘露糖、 半乳糖、赤蘚醇、木糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇、半乳糖醇、蔗糖、乳糖、麥芽糖、海藻糖、葡聚糖、褐藻酸及透明質酸等。

高靜水壓處理之溫度只要不生成冰，不會因為熱導至組織受損之溫度即可，並無特別限制。從去細胞化處理能圓滑進行、對組織之影響亦少而言，較好在0至45℃，更好在4至40℃，又更好在10至37℃，最好在15至35℃。

高靜水壓處理之時間若太短，則去細胞化處理不能充分進行，若太長，則會導至能量浪費，因此，較好為5至60分鐘，更好為7至30分鐘。

有無去細胞化可以組織學染色(蘇木素-伊紅染色)或定量殘存DNA確認。

施加高靜水壓之源自生體之組織係組織中之細胞被破壞，該等細胞可藉由洗淨液除去。洗淨液可為與施加高靜水壓中使用之介質相同之液，也可為不同之洗淨液，亦可將複數種洗淨液組合使用。洗淨液較好含有核酸分解酵素、有機溶劑或螯合劑。核酸分解酵素可提昇從施加靜水壓之源自生體之組織中除去核酸成分之效率，有機溶劑可提昇除去脂質之效率，螯合劑則藉由將去細胞化組織中之鈣離子或鎂離子惰性化，可防止在應用於患部時去細胞化組織鈣化。

有機溶劑從除去脂質之效果高而言，較好為水溶性之有機溶劑，較好為乙醇、異丙醇、丙酮及二甲 亞碸。螯合劑可列舉乙撐二胺四乙酸(EDTA)、氮基三乙酸(NTA)、二乙撐三胺五乙酸(DTPA)、羥乙基乙撐二胺三乙酸(HEDTA)、三乙撐四胺六乙酸(TTHA)、1,3-丙二胺四乙酸(PDTA)、1,3-二胺基-2-羥基丙烷四乙酸(DPTA-OH)、羥乙基亞胺基二乙酸(HIDA)、二羥乙基甘胺酸(DHEG)、二醇醚二胺四乙酸(GEDTA)、二羧基甲基麩胺酸(CMGA)、3-羥基-2,2’-亞胺基二琥珀酸(HIDA)及二羧基甲基天冬胺酸(ASDA)等亞胺基羧酸系螯合劑或其鹽；檸檬酸、酒石酸、蘋果酸及乳酸等羥基羧酸系螯合劑或其鹽，該等螯合劑之鹽可列舉鈉鹽或鉀鹽。

接著，去細胞化處理後之組織從保持安定性之觀點而言，較好為經凍結乾燥者。凍結乾燥之條件只要是能從去細胞化後之組織除去水分之條件即可，可對應源自生體組織之種類適當選擇。條件可例示於同種移殖凍結保存中使用之程序冷凍凍結(-1℃/分鐘、90分鐘以上)及藉由真空乾燥裝置凍結乾燥。

從提昇洗淨效率而言，洗淨液可含有界面活性劑。界面活性劑可列舉脂肪酸皂、烷氧基羧酸鹽、聚氧伸乙基烷氧基羧酸鹽、烷基磺酸鹽、烷基苯磺酸鹽、烷基硫酸酯鹽、聚氧伸乙基烷基硫酸酯鹽、烷基磷酸酯鹽、α-磺基脂肪酸酯鹽、N-醯基麩胺酸鹽、醯基-N-甲基牛磺酸鹽、N-烷基肌胺酸鹽、膽酸鹽、脫氧膽酸鹽等陰離子性界面活性劑； 烷基二甲胺、烷基二乙醇胺、烷基三甲基銨鹽、二烷 基二甲基銨鹽、烷基吡啶鎓鹽、烷基苯甲基二甲基銨鹽等陽離子性界面活性劑；烷基二甲基胺氧化物、烷基羧基甜菜鹼、烷基醯胺丙基甜菜鹼、烷基醯胺丙基磺基甜菜鹼、烷基咪唑鎓甜菜鹼、3-[(3-膽醯胺基丙基)二甲胺基]-2-羥基-1-丙烷磺酸鹽(CHAPSO)、3-[(3-膽醯胺基丙基)二甲胺基]-1-丙烷磺酸鹽(CHAPS)等兩性界面活性劑；丙三醇脂肪酸酯、山梨糖醇酐脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、海藻糖脂肪酸酯、聚乙二醇脂肪酸酯、聚氧伸乙基丙三醇脂肪酸酯、聚氧伸乙基山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚氧伸乙基烷基醚、聚氧伸乙基烷基苯基醚、聚氧伸乙基聚氧伸丙基醚、烷基(聚)丙三醇醚、脂肪酸烷醇醯胺、聚氧伸乙基脂肪酸烷醇醯胺、烷基(聚)葡萄糖苷、烷基麥芽糖苷、烷基硫代葡萄糖苷、烷基麥芽糖吡喃苷、烷醯基-N-甲基-D-葡萄糖胺、N,N-雙(3-(D-葡萄糖醯胺基丙基)膽醯胺(BIGCHAP)、N,N-雙(3-D-葡萄糖醯胺基丙基)脫氧膽醯胺(deoxy-BIGCHAP)等非離子性界面活性劑。

界面活性劑從除去細胞之觀點而言，較好為烷基磺酸鹽、烷基硫酸酯鹽、聚氧伸乙基烷基硫酸酯鹽、α-磺基脂肪酸酯鹽、聚氧伸乙基烷基醚、聚氧伸乙基烷基苯基醚、烷基(聚)葡萄糖苷，更好為烷基磺酸鹽、聚氧伸乙基烷基醚、聚氧伸乙基烷基苯基醚、烷基(聚)葡萄糖苷。

將施加高靜水壓之源自生體之組織洗淨時之溫度，只要不會因熱對組織造成傷害之溫度即可，並無 特別限制，從洗淨性良好且對組織之影響少而言，較好為0至45℃，更好為1至40℃，最好為2至35℃。洗淨時，必要時可將洗淨液振盪或攪拌。

2.生體適合性高分子

於本發明，生體適合性高分子係指投予生體時不會造成顯著之有害影響，具有親水性之高分子化合物，具體而言係指(i)重量平均分子量在500以上、(ii)於大鼠經口投予時之LD50在2,000mg/kg以上、(iii)對於水顯示溶解或擴散濕潤性之化合物。於本發明，重量平均分子量係指藉由凝膠滲透層析法(Gel Permeation Chromatography，亦稱為GPC)分析算出之重量平均分子量，係以將四氫呋喃作為溶劑進行GPC測定時聚苯乙烯換算之重量平均分子量或以水作為溶劑進行GPC測定時普魯蘭(pullulan)換算之重量平均分子量。又，將生體適合性高分子藉由含浸或物理吸附進行複合化時，生體適合性高分子之重量平均分子量小時，有複合化變成不充分之情況，因此，生體適合性高分子之重量平均分子量較好在1,000以上，更好在2,000以上。

生體適合性高分子大致區分為源自於天然之生體適合性高分子、將源自於天然者加工之生體適合性高分子及以人工合成之生體適合性高分子。生體適合性高分子中，作為源自天然之生體適合性高分子或將源自天然者加工之生體適合性高分子可列舉例如硫酸軟骨素、皮膚素、肝素、乙醯肝素、褐藻酸、透明質酸、硫酸皮膚素硫酸、硫酸角質素、甲殼素、殼聚糖、果膠、直鏈澱粉支鏈 澱粉、糖原、糊精、右旋糖酐、β 1,3-葡聚糖等多糖類或其鹽；甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羧甲基纖維素、乙酸纖維素、羧甲基殼聚糖等多糖類誘導體或其鹽；膠原、明膠、彈性素、纖維蛋白原、纖維蛋白或纖維蛋白膠、纖維結合蛋白、層黏連蛋白、玻璃黏連蛋白、巢蛋白、血小板反應素、腱糖蛋白(tenascin)、酪蛋白、抗生物素蛋白(avidin)、鈣黏蛋白(Cadherin)、黏液素、蛋白聚糖等多肽或糖蛋白質等。

生體適合性高分子中，作為人工合成之生體適合性高分子可列舉例如聚丙胺酸、聚天冬醯胺、聚天冬胺酸、聚精胺酸、聚異白胺酸、聚鳥胺酸、聚甘胺酸、聚麩胺酸、聚色胺酸、聚酪胺酸、聚組胺酸、聚脯胺酸、聚離胺酸及該等之合成多肽或其鹽；聚乙醇酸、聚乳酸、聚羥基丁酸、聚ε-己內酯、聚酒石酸等聚(羥基羧酸)；聚乙二醇、聚丙三醇等多元醇醚；聚乙烯醇、聚(甲基)丙烯酸、聚丙烯醯胺、聚富馬酸、含有磷酸膽鹼基之聚(甲基)丙烯酸酯、聚(甲基)丙烯酸羥基乙酯、聚(二烯丙基二甲基銨)等自由基聚合之聚合物及其鹽等。

生體適合性高分子中，從施術後在體肉被吸收，對於病患之負擔少之點而言較好為生體吸收性高分子。生體吸收性高分子可列舉源自天然之生體適合性高分子、將源自天然者加工之生體適合性高分子、合成多肽或其鹽、聚(羥基羧酸)，從在體內吸收性之觀點而言，較好為源自天然之生體適合性高分子，從沾黏防止性之點而 言，更好為多糖類或其鹽、多肽或糖蛋白質，又更好為褐藻酸、透明質酸、纖維蛋白膠。

3.纖維蛋白膠

纖維蛋白膠係指在纖維蛋白原中使作為酵素之凝血酶作用，將形成之糊狀凝塊利用於組織閉鎖、臟器損傷部位之接著及止血等之製劑。纖維蛋白膠之種類並無特別限制，纖維蛋白原或凝血酶等之構成成分可為源自血液者，亦可為以重組技術製作者。較好可例示伯依露(Bolheal)(一般財團法人化學及血清療法研究所製造)。伯依露由纖維蛋白原凍結乾燥粉末、纖維蛋白原溶解液、凝血酶凍結乾燥粉末及凝血酶溶解液構成。

4.複合化

去細胞化組織與生體適合性高分子之複合化可列舉去細胞化組織與生體適合性高分子之化學結合、生體適合性高分子物理吸附於去細胞化組織表面、生體適合性高分子含浸於去細胞化組織等，惟，從生體適合性高分子之效果可長期間持續之觀點而言，較好為生體適合性高分子含浸於去細胞化組織。使生體適合性高分子物理吸附於去細胞化組織表面時，可使生體適合性高分子附着或塗佈於去細胞化組織表面。又，將生體適合性高分子含浸於去細胞化組織時，只要將去細胞化組織浸漬於含有生體適合性高分子之溶液即可，惟，為了提昇浸漬效率，較好先將去細胞化組織凍結乾燥後再浸漬，更好於浸漬時進行加壓或減壓(國際公開第WO2013/032009號說明書)。

沾黏防止材之膜厚太薄時，有不能獲得充分膜強度之情況，若太厚，則有在凹凸之患部不易貼上，且於術後之患部造成不適感之情況，因此，沾黏防止材之膜厚較好為10至5,000μm，更好為30至2,000μm，最好為50至1,000μm。

本發明之沾黏防止材特別適用於防止手術時之沾黏。例如，用於防止對於支氣管、肺、心臟、肝臟、脾臟、胰臟、腎臟、子宮、卵巢等疾病之開胸手術、開腹手術、內視鏡手術；跟鍵或手之腱、神經等之縫合手術；剖腹生產後縫合等時，因手術造成之傷口之源自生體組織表面之沾黏。本發明之沾黏防止材可貼在有可能沾黏之組織使用，惟，必要時可縫合於組織。又，應用於組織缺損部位時，對於與應用部位接觸之組織，在防止沾黏之同時，亦可作為缺損組織代替物之機能，亦可應用作為代用生體膜。

將去細胞化組織與纖維蛋白膠進行複合化時，可例示將纖維蛋白膠塗佈於去細胞化組織之方法及將纖維蛋白膠有效成分之粉末(纖維蛋白原粉末、凝血酶粉末)加以散布之方法、將纖維蛋白原含浸於去細胞化組織後以凝血酶作用之方法。塗佈時可例示將纖維蛋白膠塗佈於去細胞化組織之至少一面。亦即，可例示將纖維蛋白膠塗佈於去細胞化組織之單面或雙面。塗佈面較好為應用後預定會與組織接觸或沾黏之面。例如，應用於心膜之缺損部位時，從防止對心外膜沾黏之觀點而言，可例示將纖維蛋白 膠塗佈於連接心外膜之面，從防止於胸膜沾黏之觀點而言，可例示將纖維蛋白膠塗佈於連接胸膜之面或將纖維蛋白膠塗佈於雙方之面。塗佈時可先塗佈纖維蛋白原或凝血酶中之任一者後再塗佈另一者，亦可將該等同時塗佈。亦可選擇使用噴霧器具之噴霧塗佈。將纖維蛋白膠塗佈於去細胞化組織之領域可為去細胞化組織之一部分領域，亦可為全體。於去細胞化組織全體發揮防止沾黏效果時，較好塗佈於全體。塗佈時可將去細胞化組織之表面以纖維蛋白膠之成分塗覆，亦可將纖維蛋白膠之成分浸透至去細胞化組織之內部。較好為將表面塗覆之同時亦浸透至內部。

纖維蛋白膠應用於去細胞化組織時凝血酶或纖維蛋白原之濃度只要在去細胞化組織之表面，藉由纖維蛋白膠形成凝膠之濃度即可，並無特別限制。例如，為纖維蛋白原時，可例示4mg/mL至250mg/mL，為凝血酶時，可例示1U/mL至1,200U/mL。

應用部位只要是具有細胞組織之部位或可能引起沾黏之組織即可，並無特別限制。又，可應用於與作為原料之源自生體之組織相同之組織，亦可應用於不同之部位。可列舉例如心膜、心臟、心外膜、胸膜、腹壁、腹膜、膀胱、羊膜、子宮、硬膜、橫隔膜、小腸、大腸、胃、肛門、胰臟、脾臟、肝臟、腎臟、肺、皮膚、食道、靱帶及腱。較好可例示心膜及腹壁。

本發明包含去細胞化組織與生體適合性高分子係個別製劑化之代用生體膜套組或沾黏防止材套組。 該套組為術者於使用時將去細胞化組織與生體適合性高分子組合、複合化而應用於患部。去細胞化組織為經凍結乾燥時，可將溶劑含浸於去細胞化組織使復原後應用於患部、亦可塗佈生體適合性高分子。因此，該套組亦可含有復原用之溶劑。又，套組中包含纖維蛋白膠時，可以纖維蛋白原溶液或凝血酶溶液復原。該套組可為經纖維蛋白原或凝血酶之任一者複合化之去細胞化組織及另一者之製劑構成。此時，可例示將經複合化之去細胞化組織使用於患部後再使用另一方之製劑。例如，為將纖維蛋白原複合化之去細胞化組織及凝血酶製劑構成之套組時，可於應用該去細胞化組織後應用凝血酶製劑。

[實施例]

以下，藉由實施例將本發明做更詳細之說明，惟，本發明不只限於該等實施例。又，若無特別說明，實施例中之「份」或「%」為根據質量基準者。

[去細胞化組織]

將真皮層從豬的皮膚分離，獲得墊片狀之真皮(膜厚400μm)。在聚乙烯製附有夾頭的袋中放入該真皮及作為高靜水壓處理之介質之生理食鹽水，使用研究開發用高壓處理裝置(神戶製鋼製、商品名：Dr.Chef)，施加1000MPa之靜水壓15分鐘。將經高靜水壓處理之真皮在含有作為核酸分解酵素之Dnase 20ppm之生理食鹽水中，藉由於4℃，振盪96小時洗淨，另，於80%乙醇中，於4℃振盪72小時後於生理食鹽水中，於4℃振盪2小時，獲得墊片狀之 去細胞化組織(以下，稱為濕潤墊片)。於試驗中係使用濕潤墊片及濕潤墊片經凍結乾燥者(以下，稱為凍結乾燥墊片)。

[實施例1]

將凍結乾燥墊片於褐藻酸鈉之2%生理食鹽水溶液中，於室溫浸漬2小時，獲得實施例1之沾黏防止膜。

[實施例2]

將凍結乾燥墊片於聚乙二醇4000之40%生理食鹽水溶液中，於室溫浸漬2小時，獲得實施例2之沾黏防止膜。

[實施例3]

將凍結乾燥墊片於明膠之10%生理食鹽水溶液中，於室溫浸漬2小時，獲得實施例3之沾黏防止膜。

[比較例1]

將濕潤墊片作為比較例1之沾黏防止膜。

[比較例2]

依據日本特開2013-226166號公報之實施例，將明膠粉末(尼比(Nippi)公司製造，商品名：美迪明膠(MediGelatin))之2.7質量%水溶液塗佈於玻璃板後風乾之，更藉由於140℃之真空烘箱中加熱處理10小時使進行熱交聯，獲得比較例2之膜厚100μm之沾黏防止膜。

[比較例3]

依據日本特開2000-116765號公報之實施例 1，將透明質酸鈉之1質量%水溶液塗佈於玻璃板，更於其上層塗佈含有殼聚糖1質量%及乙酸0.6質量%之水溶液後風乾之，獲得比較例2之膜厚150μm之沾黏防止膜。

[比較例4]

依據日本特開2010-284216號公報之實施例1，將嫘縈不織布以單氯乙酸進行羧基甲基化(醚化度0.84、重量分子量160,000)，塗佈於玻璃板，並將透明質酸鈉之1質量%水溶液塗佈於玻璃板，更於其上層塗佈含有殼聚糖1質量%及乙酸0.6質量%之水溶液後風乾之，獲得墊片。將該墊片於4% HCl甲醇溶液(含有水分10%)，於25℃浸漬6小時後依序以50%甲醇水溶液、80%甲醇水溶液、100%甲醇洗淨、乾燥，獲得比較例4之膜厚300μm之沾黏防止膜。

1.縫合性之評估

將Wistar大鼠(雄性，6至12週齡)麻醉，將腹部剃毛，以聚維酮碘溶液(商品名：聚烯吡酮碘(Isodine))將皮膚消毒。以滅菌刀片將腹側部切開，於左右兩個地方作成長15mm、寬15mm之皮膚袋。於皮膚袋下之肌層及腹膜切除長10mm、寬10mm之正方形，將露出之臟器表面以滅菌紗布擦過，於臟器造成損傷。於右腹之切除部位將沾黏防止膜使用縫合線(嬌生-嬌生公司(Johnson & Johnson)公司製造，商品名：愛惜康6-0普理靈(Ethicon 6-0 Prolene))縫合。強度不充分，不能縫合者係不縫合沾黏防止膜，而是以原狀附著於切除部位。對照組為於左腹之切除部位不使用沾 黏防止膜而將腹膜縫合。之後，將皮膚之切開層以縫合線縫合。以下述之基準評估沾黏防止膜之縫合性。結果表示於表1。

○：有強度，於腹膜可縫合

×：強度不充分，於腹膜不能縫合

2.沾黏防止性之評估

將經施術之大鼠飼養7日後開腹，取出施術部位，對於肝臟或小腸與沾黏防止膜或腹膜之沾黏以下述之基準，評估沾黏防止性。結果表示於表1。

5：幾乎看不到沾黏，沾黏防止性非常良好

4：只看到細且可容易剝離程度之沾黏，沾黏防止性良好

3：於狹窄範圍看到1個地方需要輕輕牽引之沾黏，沾黏防止性稍不佳

2：看到1個地方需要稍微牽引之沾黏或2至3個地方需要輕輕牽引之沾黏，沾黏防止性不佳

1：看到有2個以上之地方需要稍微牽引之沾黏或4個地方以上需要輕輕牽引之沾黏，沾黏防止性非常不佳

0：看到強烈的沾黏，看不到沾黏防止性

從表1之結果可明瞭，本發明之沾黏防止膜具有可縫合程度之強度及優越之沾黏防止性。

[實施例4]

1.去細胞化心膜之調製

使用高靜水壓法或界面活性劑處理法製作去細胞化豬心膜。高靜水壓法為將豬心膜與生理食鹽水一同放入聚乙烯袋，密封之，使用Dr.Chef(神戶製鋼公司製造)進行3000至10,000atm之高靜水壓處理。界面活性劑處理法為使用0.05% SDS(十二烷基硫酸鈉(Sodium Dodecyl Sulfate)，和光純藥工業公司製造，離子性界面活性劑)、0.5% SDS、0.5% CHAPS(3-[3-(膽醯胺基丙基)二甲基胺基]-1-丙磺酸鹽(3-[(3-Cholamidopropyl)dimethylammonio]-1-propanesulfonate)、同仁化學公司製造，兩性界面活性劑)或1% Triton X-100 (Sigma公司製造，非離子性界面活性劑)處理之。經高靜水壓或界面活性劑處理之豬心膜藉由含有核酸分解酵素之洗淨液及含有乙醇之洗淨液洗淨。惟，以0.5% SDS處理之豬心膜不以含有核酸分解酵素之洗淨液進行處理。洗淨完成後切取15mm×15mm大小之去細胞化豬心膜。使用真空乾燥裝置(EYELA)將切取之心膜減壓凍結乾燥24小時以上。

2.大鼠心臟沾黏模型實驗

將Wistar大鼠(雄性、10-12週齡)以0.1mL戊巴比妥(somnopentyl)肌肉注射，進行麻醉處理。將側胸部剃毛，以聚烯吡酮碘消毒。於麻醉下，於大鼠氣管插管，連接於呼吸器。將大鼠作成橫臥位，切開側胸部，除去肌層及心膜。將心臟表面以不織布擦過，誘發炎症反應。使用各沾黏防止材將心臟包覆，將大鼠之切開部縫合，自發呼吸安定後進行拔管。

3.群構成及觀察

將纖維蛋白膠塗佈於乾燥去細胞化豬心膜之兩面，製作沾黏防止材。纖維蛋白膠為使用塗佈器具，將80mg/mL纖維蛋白原溶液及250U/mL凝血酶溶液混合，製作。纖維蛋白原溶液為使用伯依露(註冊商標，一般財團法人化學及血清療法研究所製造)之纖維蛋白原凍結乾燥粉末及纖維蛋白原溶解液調製。凝血酶溶液為使用伯依露之凝血酶凍結乾燥粉末及凝血酶溶解液調製。

對照群為(1)檢討沾黏防止材非應用群。或使用(2)將伯依露塗佈於心臟擦過部位之群及(3)將乾燥去 細胞化豬心膜浸漬於生理食鹽水之群。觀察期間以1星期及4星期之2群實施。將大鼠安樂死，將胸部切開，評估所見到之沾黏。又，(4)將沾黏防止材及心臟藉由HE染色，以組織學進行評估。

4.結果

於沾黏防止材非應用群於心臟及胸壁看到強固沾黏。於伯依露塗佈群及去細胞化豬心膜生理食鹽水浸漬群看到與對照組同等之沾黏。沾黏防止材群於心臟周圍幾乎看不到沾黏，只有數例觀察到輕微的沾黏。從第7日之HE染色(第1圖)，沾黏防止材群幾乎看不到炎症反應且看到細胞浸潤於去細胞化組織內。藉由此明瞭在具有優越沾黏防止性之同時，亦可作為生體適合性高之代用生體膜使用。

(1)沾黏防止材非應用群：看到強固之沾黏(n=5)

(2)伯依露塗佈群：看到強固之沾黏(n=5)

(3)去細胞化豬心膜生理食鹽水浸漬群：看到強固之沾黏(n=5)

(4)沾黏防止材群(高靜水壓處理)：幾乎看不到沾黏(n=5)

(5)沾黏防止材群(0.05% SDS界面活性劑處理)：幾乎看不到沾黏(n=4)

(6)沾黏防止材群(0.5% SDS界面活性劑處理)：幾乎看不到沾黏(n=5)

(7)沾黏防止材群(0.5% CHAPS界面活性劑處理)：幾乎看不到沾黏(n=5)

(8)沾黏防止材群(1% Triton X-100界面活性劑處理)：幾乎 看不到沾黏(n=5)

[實施例5]

使用高靜水壓法製作去細胞化組織。將豬心膜、牛心膜、豬橫隔膜、豬腹膜、豬膀胱或豬真皮與生理食鹽水一同放入聚乙烯袋，密封之，使用Dr.Chef(神戶製鋼公司製造)進行3,000至10,000atm之高靜水壓處理。經高靜水壓處理之豬心膜、牛心膜、豬橫隔膜、豬腹膜、豬膀胱或豬真皮藉由含有核酸分解酵素之洗淨液、含有乙醇之洗淨液洗淨。

含有去細胞化組織及纖維蛋白膠之沾黏防止材係以下述之操作製作。將去細胞化心膜、去細胞化橫隔膜、去細胞化腹膜、去細胞化膀胱、去細胞化真皮切成3.0cm×2.5cm，作為去細胞化組織。將纖維蛋白膠塗佈於去細胞化組織之兩面，製作沾黏防止材。纖維蛋白膠為使用塗佈器具將80mg/mL纖維蛋白原溶液及250U/mL凝血酶溶液混合而製作。纖維蛋白原溶液為使用伯依露之纖維蛋白原凍結乾燥粉末及纖維蛋白原溶解液調製。凝血酶溶液為使用伯依露之凝血酶凍結乾燥粉末及凝血酶溶解液調製。既存之沾黏防止材係使用於國內認可，可於臨床使用之斯普拉薄膜(Seprafilm)(註冊商標，賽諾菲(Sanofi)公司製造)。

心臟組織沾黏模型為使用5至6個月齡之日本白色種雄性兔子製作。在甲苯噻嗪(xylazine)及氯胺酮(ketamine)鹽酸鹽麻醉下於氣管插管，連接於人工呼吸器。 以第2至第5肋骨切痕為基準，切開胸骨5cm。切除開胸部位正下方之心膜2.0cm×1.5cm。將金屬銼刀於心外膜接觸10分鐘。將開胸創之胸骨、肋骨、肌肉、皮膚縫合，閉胸之。一般飼養1個月後評估於開胸，心外膜擦過部位與胸壁間之沾黏狀態。藉由將外膜擦過部位與胸壁間剝離時之程度，以下述之尺度計分化，評估沾黏。

沾黏等級0：無沾黏

沾黏等級1：可容易的將沾黏剝離

沾黏等級2：可將沾黏鈍性剝離

沾黏等級3：必需將沾黏銳利剝離

於實施例5，評估以下之試驗群。(1)對照群、(2)纖維蛋白膠群、(3)去細胞化組織(豬心膜)群、(4)沾黏防止材(豬心膜)群、(5)沾黏防止材(牛心膜)群、(6)沾黏防止材(豬橫隔膜)群、(7)沾黏防止材(豬腹膜)群、(8)沾黏防止材(豬膀胱)群、(9)沾黏防止材(豬真皮)群、(10)斯普拉薄膜群。(1)為沾黏防止材非應用群。(2)之應用方法為使用塗佈器具，於心膜缺損部位之心外膜將80mg/mL纖維蛋白原溶液及250U/mL凝血酶溶液以1：1之比例混合、塗佈。(3)至(9)之應用方法為於心膜缺損部位，將隣接之自己心膜與試驗群縫合固定。(10)之應用方法為貼在心膜缺損部位之心外膜。以下表示評估沾黏計分之結果。

(1)對照群：沾黏等級3、3、3、3(n=4)

(2)纖維蛋白膠群：沾黏等級3、3、2(n=3)

(3)去細胞化組織(豬心膜)群：沾黏等級3、3、1、0(n=4)

(4)沾黏防止材(豬心膜)群：沾黏等級0、0、0、0(n=4)

(5)沾黏防止材(牛心膜)群：沾黏等級0、0、0、0、0(n=5)

(6)沾黏防止材(豬橫隔膜)群：沾黏等級2、0、0、0、0(n=5)

(7)沾黏防止材(豬腹膜)群：沾黏等級0、0、0、0、0(n=5)

(8)沾黏防止材(豬膀胱)群：沾黏等級0、0、0、0、0(n=5)

(9)沾黏防止材(豬真皮)群：沾黏等級0、0、0、0、0(n=5)

(10)斯普拉薄膜群：沾黏等級3、3、2(n=3)

由上述結果明瞭，將去細胞化組織及纖維蛋白膠進行複合化，確認其非常優越沾黏防止效果。本發明之沾黏防止材(豬心膜、牛心膜、豬腹膜、豬膀胱、豬真皮)藉由曼-惠特尼U檢驗(Mann-Whitney U test)，與對照群、纖維蛋白膠群、去細胞化組織群、斯普拉薄膜群全部進行比較，確認有意義差(＊：P<0.05)。又，本發明之沾黏防止材(豬橫隔膜)藉由曼-惠特尼U檢驗，與對照群、纖維蛋白膠群、斯普拉薄膜群全部進行比較，確認有顯著差(＊：P<0.05)。該結果顯示去細胞化組織與纖維蛋白膠之組合係作為代用心膜之機能，亦證實本發明作為代用生體膜之效果。

[實施例6]

去細胞化組織為使用高靜水壓法製作。將豬心膜與生理食鹽水一同放入聚乙烯袋，密封之，使用Dr.Chef(神戶製鋼公司製造)進行3,000至10,000atm之高靜水 壓處理。經高靜水壓處理之豬心膜係藉由含有核酸分解酵素之洗淨液、含有乙醇之洗淨液洗淨。

含有去細胞化組織及纖維蛋白膠之沾黏防止材係以下述之操作製作。將去細胞化心膜切成2.0cm×2.0cm，作為去細胞化組織。將纖維蛋白膠塗佈於去細胞化組織之兩面，製作沾黏防止材。纖維蛋白膠係使用塗佈器具將80mg/mL纖維蛋白原溶液及250U/mL凝血酶溶液混合而製作。纖維蛋白原溶液係使用伯依露之纖維蛋白原凍結乾燥粉末及纖維蛋白原溶解液調製。凝血酶溶液係使用伯依露之凝血酶凍結乾燥粉末及凝血酶溶解液調製。

腹腔內組織沾黏動物模型為使用8至9週齡SD系雄性大鼠製作。在鹽酸美托咪定(Medetomidine)及鹽酸氯胺酮麻醉下，從劍突至下方約2.5cm之部分沿著正中線，於下部切開約3cm，進行開腹。將盲腸露出，以紗布將表面之直徑1.5cm圓內部擦過50次，更以手術刀片將擦過部位再擦過50次，使點狀出血。接著，以電刀將連接盲腸擦過部位之腹壁表面之直徑1.5cm圓內部進行燒灼。以7-0尼龍縫合線將4個地方固定，使盲腸之擦過部位與腹壁之燒灼部位連接。將開腹創之腹壁與皮膚縫合，閉腹之。經一般飼養30日後開腹，評估盲腸擦過部位與腹壁燒灼部位間之沾黏狀態。藉由盲腸擦過部位與腹壁燒灼部位之間剝離時之程度、出血量、沾黏之面積及沾黏類型，以表1之尺度計分化，評估沾黏。沾黏計分為評估項目A至D之總計分。

於實施例6，評估以下之處置群。(1)對照群、(2)沾黏防止材群。(2)之沾黏防止材為固定於盲腸擦過部位與腹壁燒灼部位之間。表3表示評估沾黏計分之結果。表內之沾黏計分表示總結表1之A至D之計分。

從表3明瞭，將去細胞化組織及纖維蛋白膠複合化，即使於腹部亦確認有非常優越之沾黏防止效果。本發明之沾黏防止材藉由曼-惠特尼U檢驗，與對照群比較，確認有顯著差(＊：P<0.01)。

[實施例7]

1.調製去細胞化組織

去細胞化組織為使用高靜水壓法製作。將牛之心膜與生理食鹽水一同放入聚乙烯袋，密封之，使用Dr.Chef(神戶製鋼公司製造)進行3,000至10,000atm之高靜水壓處理。經高靜水壓處理之牛心膜藉由含有核酸分解酵素之洗淨液、含有乙醇之洗淨液洗淨，獲得源自牛心膜之去細胞化組織。去細胞化組織之膜厚為400μm。

2.製作沾黏防止材(去細胞化組織及纖維蛋白膠之複合化)

將於1.獲得之去細胞化組織凍結乾燥後，於其兩面塗佈纖維蛋白膠，製作沾黏防止材。纖維蛋白膠為使用塗佈器具將80mg/mL纖維蛋白原溶液及250U/mL凝血酶溶液混合而製作。纖維蛋白原溶液為使用伯依露之纖維蛋白原凍結乾燥粉末及纖維蛋白原溶解液調製。凝血酶溶液為使用伯依露之凝血酶凍結乾燥粉末及凝血酶溶解液調製。

3.兔子腹膜沾黏模型實驗

腹膜沾黏模型實驗為使用15至20個月齡之日本白色種雄性兔子，以如下所述進行。首先，於麻醉處置後除去腹部體毛，將腹部皮膚表面消毒。將經消毒之皮膚使用刀片切開，將皮膚及腹壁剝離。將腹壁切除1.5cm×2cm，確認盲腸之位置。將盲腸表面以電刀燒灼，以盲腸燒灼部位作為體表側，將盲腸縫合固定於腹壁缺損部位。將沾黏防止材2cm×2.5cm縫合於腹壁缺損部位。將肌層、皮膚閉創，進行覺醒處置，確認步行後將兔子放回飼養的籠子，育於規定的期間飼養之。

經一般飼養1星期之試驗期後進行開腹，評估沾黏防止材與盲腸間之沾黏狀態。藉由將沾黏防止材與盲腸剝離時之程度，以以下之尺度計分化，評估沾黏。評估結果表示於表4。

<沾黏防止性評估基準>

沾黏等級0：無沾黏

沾黏等級1：可容易的將沾黏剝離

沾黏等級2：可將沾黏鈍性剝離

沾黏等級3：必需將沾黏銳剝離

[實施例8]

除了將一般飼養之試驗期從1星期變更為4星期以外，進行與實施例7相同之操作，評估結果表示於表4。

[實施例9]

除了將去細胞化組織由牛心膜去細胞化之組織變更為豬小腸黏膜下組織進行去細胞化而得之組織、並將該去細胞化組織之膜厚變更為100μm以外，進行與實施例7相同之操作，評估結果表示於表4。

[實施例10]

除了將一般飼養之試驗期從1星期變更為4星期以外，進行與實施例9相同之操作，評估結果表示於表4。

[比較例5]

將於實施例7調製去細胞化組織而所獲得之去細胞化組織不進行與纖維蛋白膠之複合化，而是以原狀，進行兔子腹膜沾黏模型實驗。一般飼養之試驗期為1星期。結果表示於表4。

[比較例6]

將實施例7調製去細胞化組織所獲得之去細胞化組織不進行與纖維蛋白膠之複合化，而是以原狀， 進行兔子腹膜沾黏模型實驗。一般飼養之試驗期為4星期。結果表示於表4。

從表4之結果明瞭，本發明之沾黏防止材具有優越之沾黏防止性。

[產業上之可利用性]

本發明可利用作為沾黏防止材，尤其是伴隨組織再生之代用生體膜。

Claims (38)

1. 一種沾黏防止材，其含有去細胞化組織及生體適合性高分子。
2. 如申請專利範圍第1項所述之沾黏防止材，其中，該去細胞化組織為使選自由心膜、膀胱、羊膜、硬膜、腹膜、橫隔膜、筋膜、小腸黏膜下組織及皮膚所成群組之源自生體之組織經去細胞化之組織。
3. 如申請專利範圍第1項或第2項所述之沾黏防止材，其中，該去細胞化組織為對源自生體之組織進行高靜水壓處理或界面活性劑處理而獲得之去細胞化組織。
4. 如申請專利範圍第3項所述之沾黏防止材，其中，該高靜水壓處理包含對源自生體之組織，於介質中施加50至1,500MPa之靜水壓。
5. 如申請專利範圍第1項至第4項中任一項所述之沾黏防止材，其中，該生體適合性高分子為源自天然之生體適合性高分子。
6. 如申請專利範圍第1項至第5項中任一項所述之沾黏防止材，其中，該生體適合性高分子為纖維蛋白膠。
7. 如申請專利範圍第1項至第6項中任一項所述之沾黏防止材，其中，去細胞化組織係與生體適合性高分子複合化。
8. 如申請專利範圍第7項所述之沾黏防止材，其中，該去細胞化組織與生體適合性高分子之複合化為將生體適合性高分子含浸或塗佈於去細胞化組織。
9. 如申請專利範圍第1項至第8項中任一項所述之沾黏防止材，其中，該沾黏防止材為沾黏防止膜，膜厚為10至5,000μm。
10. 一種沾黏防止材之製造方法，其包含使生體適合性高分子與去細胞化組織複合化。
11. 如申請專利範圍第10項所述之製造方法，其中，該複合化為使生體適合性高分子含浸或塗佈於去細胞化組織。
12. 一種沾黏防止材套組，其含有去細胞化組織及生體適合性高分子。
13. 如申請專利範圍第12項所述之套組，其中，該去細胞化組織為使選自由心膜、膀胱、羊膜、硬膜、腹膜、橫隔膜、筋膜、小腸黏膜下組織及皮膚所成群組之組織經去細胞化之組織。
14. 如申請專利範圍第12項或第13項所述之套組，其中，該去細胞化組織為對源自生體之組織進行高靜水壓處理或界面活性劑處理而獲得之去細胞化組織。
15. 如申請專利範圍第14項所述之套組，其中，該高靜水壓處理包含對源自生體之組織，在介質中施加50至1,500MPa之靜水壓。
16. 如申請專利範圍第12項至第15項中任一項所述之套組，其中，該生體適合性高分子為纖維蛋白膠。
17. 如申請專利範圍第12項至第16項中任一項所述之套組，其中，去細胞化組織係與生體適合性高分子複合 化。
18. 如申請專利範圍第17項所述之套組，其中，該去細胞化組織與生體適合性高分子之複合化為將生體適合性高分子含浸或塗佈於去細胞化組織。
19. 如申請專利範圍第12項至第18項中任一項所述之套組，其中，該沾黏防止材為沾黏防止膜，膜厚為10至5,000μm。
20. 一種代用生體膜，其含有去細胞化組織及生體適合性高分子。
21. 如申請專利範圍第20項所述之代用生體膜，其中，該去細胞化組織為使選自由心膜、膀胱、羊膜、硬膜、腹膜、橫隔膜、筋膜、小腸黏膜下組織及皮膚所成群組之源自生體之組織經去細胞化之組織。
22. 如申請專利範圍第20項或第21項所述之代用生體膜，其中，該去細胞化組織為對源自生體之組織進行高靜水壓處理或界面活性劑處理而獲得之去細胞化組織。
23. 如申請專利範圍第22項所述之代用生體膜，其中，該高靜水壓處理係包含對源自生體之組織，在介質中施加50至1,500MPa之靜水壓。
24. 如申請專利範圍第20項至第23項中任一項所述之代用生體膜，其中，該生體適合性高分子為源自天然之生體適合性高分子。
25. 如申請專利範圍第20項至第24項中任一項所述之代用生體膜，其中，該生體適合性高分子為纖維蛋白膠。
26. 如申請專利範圍第20項至第25項中任一項所述之代用生體膜，其中，去細胞化組織係與生體適合性高分子複合化。
27. 如申請專利範圍第26項所述之代用生體膜，其中，該去細胞化組織與生體適合性高分子之複合化為將生體適合性高分子含浸或塗佈於去細胞化組織。
28. 如申請專利範圍第20項至第27項中任一項所述之代用生體膜，其中，該膜厚為10至5,000μm者。
29. 一種代用生體膜之製造方法，其包含使生體適合性高分子與去細胞化組織複合化。
30. 如申請專利範圍第29項所述之製造方法，其中，該複合化為將生體適合性高分子含浸或塗佈於去細胞化組織。
31. 一種代用生體膜套組，其含有去細胞化組織及生體適合性高分子。
32. 如申請專利範圍第31項所述之套組，其中，該去細胞化組織為使選自由心膜、膀胱、羊膜、硬膜、腹膜、橫隔膜、筋膜、小腸黏膜下組織及皮膚所成群組之組織經去細胞化之組織。
33. 如申請專利範圍第31項或第32項所述之套組，其中，該去細胞化組織為對源自生體之組織進行高靜水壓處理或界面活性劑處理而獲得之去細胞化組織。
34. 如申請專利範圍第33項所述之套組，其中，該高靜水壓處理包含對源自生體之組織，於介質中施加50至 1,500MPa之靜水壓。
35. 如申請專利範圍第31項至第34項中任一項所述之套組，其中，該生體適合性高分子為纖維蛋白膠。
36. 如申請專利範圍第31項至第35項中任一項所述之套組，其中，去細胞化組織係與生體適合性高分子複合化。
37. 如申請專利範圍第36項所述之套組，其中，該去細胞化組織與生體適合性高分子之複合化為將生體適合性高分子含浸或塗佈於去細胞化組織。
38. 如申請專利範圍第31項至第37項中任一項所述之套組，其中，該代用生體膜之膜厚為10至5,000μm。