CN112206350A - 一种用于制作生物瓣膜的牛心包组织的预处理办法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及用于制作生物瓣膜的牛心包组织的预处理办法包括以下步骤：一、牛心包组织预处理，取新鲜牛心包组织，用抗生素溶液清洗；剔去牛心包组织多余的筋膜和结缔组织，并裁剪成适配尺寸；去除非光滑面的纤维；二、将牛心包组织放入仪器中使其细胞核破碎；三、采用一的工序对二得到的牛心包组织再次处理；四、将三得到的牛心包组织在其非光滑面包被一层高分子材料薄膜，包被薄膜后放进低温箱中预固定；五、压模，具体为取出牛心包组织，进行压模；六、交联固定；七、交联后的牛心包组织经过酸洗或PBS缓冲液多次中和。优点：制作相对简单，表面均一性好，易于内皮化，且不会造成组织表面的杂质沉积，防钙化效果显著。
Description
技术领域
本发明涉及生物组织处理方法，特别涉及一种用于制作生物瓣膜的牛心 包组织的预处理办法。
背景技术
随着现代医学的发展，瓣膜疾病的病种也发生了一定的变化，特别是社 会人口老龄化加剧、不健康饮食习惯和工作压力大等因素影响，狭窄、关闭 不全、钙化等慢性风湿性心脏病(简称“风心病”)的发病率日益增多。风 心病经常累及二尖瓣、主动脉瓣、三尖瓣和肺动脉瓣。据临床统计，单纯的 二尖瓣狭窄约占风心病的40％，20-40岁多见，2/3为女性。单纯的二尖瓣关 闭不全多见于男性，约占3/5,；50％以上同时伴有二尖瓣狭窄。多数主动脉 瓣关闭不全患者同时伴有二尖瓣病变，而大多数主动脉瓣狭窄同时伴有主动 脉瓣关闭不全及二尖瓣病变。
常见的手术治疗包括瓣膜成形术和瓣膜置换术。一般用机械瓣或生物瓣 膜(如牛心包、猪心包)进行修复或替换病变组织，但存在以下问题：
机械瓣排异严重，且需长期抗凝，不适用于易出血患者。
生物瓣易钙化，使用寿命短。
现有的生物组织(如牛心包、猪心包)没有专业的处理办法，组织厚度 不均一，纤维层面(非光滑面)粗糙，可能由于纤维断裂或脱落，造成血栓 的风险。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种，有效的克服了现有技术的缺 陷。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：
一种用于制作生物瓣膜的牛心包组织的预处理办法包括以下步骤：
步骤一、牛心包组织预处理，具体为：
S1、取新鲜牛心包组织，用抗生素溶液清洗，去除表面污血及杂质；
S2、剔去牛心包组织多余的筋膜和结缔组织，并裁剪成适配尺寸；
S3、去除牛心包组织非光滑面的纤维；
步骤二、将预处理后的牛心包组织放入仪器中使其细胞核破碎，并保证 细胞质基质完整；
步骤三、采用步骤一的工序对步骤二得到的牛心包组织再次处理；
步骤四、将步骤三得到的牛心包组织放置于模具中，并在其非光滑面包 被一层高分子材料薄膜，包被薄膜后放进低温箱中预固定；
步骤五、压模，具体为取出牛心包组织，放在压模机上进行压模，使牛 心包组织厚度变薄且表面变平整；
步骤六、交联固定；
步骤七、交联后的牛心包组织经过酸洗或PBS缓冲液多次中和，成型得 成品。
在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
进一步，上述步骤五中，牛心包组织压模后放入PH值为7.2-7.6的PBS 缓冲液中缓存。
进一步，上述步骤二中，将预处理后的牛心包组织放入离心机中，加入 十二烷基苯磺酸钠或十二烷基硫酸钠溶液以及反应酶间断性离心；或将预处 理后的牛心包组织放入水浴振荡器中，在35-38℃条件下，处理48h-72h。
进一步，上述步骤四中，包被薄膜后放进低温箱中，在温度0-4℃的条 件下放置10-20min。
进一步，上述步骤六中，牛心包组织加入0.625％的戊二醛溶液(GA)、 0.1％-0.5％的羟基铬溶液、1％-2％的甘油的混合溶液中，或放入0.3％的戊二醛、 0.625％的京尼平、100％的2,3-丁二醇的任意一种溶液中，通过化学改性方法 进行交联固定；
或牛心包组织采用光氧化交联，具体为采用波长200-300nm紫外光，在 距离反应液10-20cm的高度对牛心包组织辐照处理，其中，反应液为磷酸盐 缓冲液和光反应媒介的混合溶液，磷酸盐缓冲液PH值7.0-7.6，浓度0.01M 或0.05M，光反应媒介为浓度0.01％-0.1％的亚甲基蓝或亚甲基红溶液。
本发明的有益效果是：制作相对简单，表面均一性好，易于内皮化，且 不会造成组织表面的杂质沉积，防钙化效果显著。
具体实施方式
以下本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非 用于限定本发明的范围。
实施例一：
本实施例的用于制作生物瓣膜的牛心包组织的预处理办法包括以下步 骤：
步骤一、牛心包组织预处理，具体为：
S1、取新鲜牛心包组织，用抗生素溶液清洗，去除表面污血及杂质；
S2、利用手术剪剔去牛心包组织多余的筋膜和结缔组织，并裁剪成适配 尺寸；
S3、利用手术剪去除牛心包组织非光滑面的纤维；
步骤二、将预处理后的牛心包组织放入离心机中，加入十二烷基苯磺酸 钠或十二烷基硫酸钠溶液以及反应酶间断性离心，使其细胞核破碎，并保证 细胞质基质完整；
步骤三、采用步骤一的工序对步骤二得到的牛心包组织再次处理；
步骤四、将步骤三得到的牛心包组织放置于模具中，并在其非光滑面包 被一层高分子材料薄膜，包被薄膜后放进低温箱中预固定；
步骤五、压模，具体为取出牛心包组织，放在压模机上进行压模，使牛 心包组织厚度变薄且表面变平整；
步骤六、交联固定，具体的，将牛心包组织加入牛心包组织加入0.625％ 的戊二醛溶液(GA)、0.1％-0.5％的羟基铬溶液、1％-2％的甘油的混合溶液中， 通过醛基与羟基发生脱水缩合反应的化学改性方法交联固定；
步骤七、交联后的牛心包组织经过酸洗或PBS缓冲液多次中和，成型得 成品。
其中，上述步骤四中，包被薄膜后放进低温箱中，在温度0-4℃的条件 下放置10-20min。
上述步骤五中，牛心包组织压模后可以放入PH值为7.2-7.6的PBS缓 冲液中缓存再进行步骤六操作，或直接进入步骤六。
实施例二：
本实施例的用于制作生物瓣膜的牛心包组织的预处理办法包括以下步 骤：
步骤一、牛心包组织预处理，具体为：
S1、取新鲜牛心包组织，用抗生素溶液清洗，去除表面污血及杂质；
S2、利用手术剪剔去牛心包组织多余的筋膜和结缔组织，并裁剪成适配 尺寸；
S3、利用手术剪去除牛心包组织非光滑面的纤维；
步骤二、将预处理后的牛心包组织放入离心机中，加入十二烷基苯磺酸 钠或十二烷基硫酸钠溶液以及反应酶间断性离心，使其细胞核破碎，并保证 细胞质基质完整；
步骤三、采用步骤一的工序对步骤二得到的牛心包组织再次处理；
步骤四、将步骤三得到的牛心包组织放置于模具中，并在其非光滑面包 被一层高分子材料薄膜，包被薄膜后放进低温箱中预固定；
步骤五、压模，具体为取出牛心包组织，放在压模机上进行压模，使牛 心包组织厚度变薄且表面变平整；
步骤六、交联固定，具体的，将牛心包组织放入或放入0.3％的戊二醛溶 液中，通过醛基与羟基发生脱水缩合反应的化学改性方法交联固定；
步骤七、交联后的牛心包组织经过酸洗或PBS缓冲液多次中和，成型得 成品。
其中，上述步骤四中，包被薄膜后放进低温箱中，在温度0-4℃的条件 下放置10-20min。
上述步骤五中，牛心包组织压模后可以放入PH值为7.2-7.6的PBS缓 冲液中缓存再进行步骤六操作，或直接进入步骤六。
实施例三：
本实施例的用于制作生物瓣膜的牛心包组织的预处理办法包括以下步 骤：
步骤一、牛心包组织预处理，具体为：
S1、取新鲜牛心包组织，用抗生素溶液清洗，去除表面污血及杂质；
S2、利用手术剪剔去牛心包组织多余的筋膜和结缔组织，并裁剪成适配 尺寸；
S3、利用手术剪去除牛心包组织非光滑面的纤维；
步骤二、将预处理后的牛心包组织放入离心机中，加入十二烷基苯磺酸 钠或十二烷基硫酸钠溶液以及反应酶间断性离心，使其细胞核破碎，并保证 细胞质基质完整；
步骤三、采用步骤一的工序对步骤二得到的牛心包组织再次处理；
步骤四、将步骤三得到的牛心包组织放置于模具中，并在其非光滑面包 被一层高分子材料薄膜，包被薄膜后放进低温箱中预固定；
步骤五、压模，具体为取出牛心包组织，放在压模机上进行压模，使牛 心包组织厚度变薄且表面变平整；
步骤六、交联固定，具体的，将牛心包组织放入0.625％的京尼平溶液中， 通过醛基与羟基发生脱水缩合反应的化学改性方法交联固定；
步骤七、交联后的牛心包组织经过酸洗或PBS缓冲液多次中和，成型得 成品。
其中，上述步骤四中，包被薄膜后放进低温箱中，在温度0-4℃的条件 下放置10-20min。
上述步骤五中，牛心包组织压模后可以放入PH值为7.2-7.6的PBS缓 冲液中缓存再进行步骤六操作，或直接进入步骤六。
实施例四：
本实施例的用于制作生物瓣膜的牛心包组织的预处理办法包括以下步 骤：
步骤一、牛心包组织预处理，具体为：
S1、取新鲜牛心包组织，用抗生素溶液清洗，去除表面污血及杂质；
S2、利用手术剪剔去牛心包组织多余的筋膜和结缔组织，并裁剪成适配 尺寸；
S3、利用手术剪去除牛心包组织非光滑面的纤维；
步骤二、将预处理后的牛心包组织放入离心机中，加入十二烷基苯磺酸 钠或十二烷基硫酸钠溶液以及反应酶间断性离心，使其细胞核破碎，并保证 细胞质基质完整；
步骤三、采用步骤一的工序对步骤二得到的牛心包组织再次处理；
步骤四、将步骤三得到的牛心包组织放置于模具中，并在其非光滑面包 被一层高分子材料薄膜，包被薄膜后放进低温箱中预固定；
步骤五、压模，具体为取出牛心包组织，放在压模机上进行压模，使牛 心包组织厚度变薄且表面变平整；
步骤六、交联固定，具体的，将牛心包组织放入100％的2,3-丁二醇溶 液中，通过醛基与羟基发生脱水缩合反应的化学改性方法交联固定；
步骤七、交联后的牛心包组织经过酸洗或PBS缓冲液多次中和，成型得 成品。
其中，上述步骤四中，包被薄膜后放进低温箱中，在温度0-4℃的条件 下放置10-20min。
上述步骤五中，牛心包组织压模后可以放入PH值为7.2-7.6的PBS缓 冲液中缓存再进行步骤六操作，或直接进入步骤六
实施例五：
本实施例的用于制作生物瓣膜的牛心包组织的预处理办法包括以下步 骤：
步骤一、牛心包组织预处理，具体为：
S1、取新鲜牛心包组织，用抗生素溶液清洗，去除表面污血及杂质；
S2、利用手术剪剔去牛心包组织多余的筋膜和结缔组织，并裁剪成适配 尺寸；
S3、利用手术剪去除牛心包组织非光滑面的纤维；
步骤二、将预处理后的牛心包组织放入离心机中，加入十二烷基苯磺酸 钠或十二烷基硫酸钠溶液以及反应酶间断性离心，使其细胞核破碎，并保证 细胞质基质完整；
步骤三、采用步骤一的工序对步骤二得到的牛心包组织再次处理；
步骤四、将步骤三得到的牛心包组织放置于模具中，并在其非光滑面包 被一层高分子材料薄膜，包被薄膜后放进低温箱中预固定；
步骤五、压模，具体为取出牛心包组织，放在压模机上进行压模，使牛 心包组织厚度变薄且表面变平整；
步骤六、交联固定，具体地，牛心包组织采用光氧化交联，采用波长 200-300nm紫外光，在距离反应液10-20cm的高度对牛心包组织辐照处理， 其中，反应液为磷酸盐缓冲液和光反应媒介的混合溶液，磷酸盐缓冲液PH 值7.0-7.6，浓度0.01M或0.05M，光反应媒介为浓度0.01％-0.1％的亚甲基 蓝或亚甲基红溶液；
步骤七、交联后的牛心包组织经过酸洗或PBS缓冲液多次中和，成型得 成品。
其中，上述步骤四中，包被薄膜后放进低温箱中，在温度0-4℃的条件 下放置10-20min。
上述步骤五中，牛心包组织压模后可以放入PH值为7.2-7.6的PBS缓 冲液中缓存再进行步骤六操作，或直接进入步骤六。
实施例六：
本实施例的用于制作生物瓣膜的牛心包组织的预处理办法包括以下步 骤：
步骤一、牛心包组织预处理，具体为：
S1、取新鲜牛心包组织，用抗生素溶液清洗，去除表面污血及杂质；
S2、利用手术剪剔去牛心包组织多余的筋膜和结缔组织，并裁剪成适配 尺寸；
S3、利用手术剪去除牛心包组织非光滑面的纤维；
步骤二、将预处理后的牛心包组织放入水浴振荡器中，在35-38℃条件 下，处理48h-72h，使其细胞核破碎，并保证细胞质基质完整；
步骤三、采用步骤一的工序对步骤二得到的牛心包组织再次处理；
步骤四、将步骤三得到的牛心包组织放置于模具中，并在其非光滑面包 被一层高分子材料薄膜，包被薄膜后放进低温箱中预固定；
步骤五、压模，具体为取出牛心包组织，放在压模机上进行压模，使牛 心包组织厚度变薄且表面变平整；
步骤六、交联固定，具体的，将牛心包组织加入戊二醛溶液(GA)+羟 基铬溶液+甘油的混合溶液中，通过醛基与羟基发生脱水缩合反应的化学改 性方法交联固定；
步骤七、交联后的牛心包组织经过酸洗或PBS缓冲液多次中和，成型得 成品。
其中，上述步骤四中，包被薄膜后放进低温箱中，在温度0-4℃的条件 下放置10-20min。
上述步骤五中，牛心包组织压模后可以放入PH值为7.2-7.6的PBS缓 冲液中缓存再进行步骤六操作，或直接进入步骤六。
实施例七：
本实施例的用于制作生物瓣膜的牛心包组织的预处理办法包括以下步 骤：
步骤一、牛心包组织预处理，具体为：
S1、取新鲜牛心包组织，用抗生素溶液清洗，去除表面污血及杂质；
S2、利用手术剪剔去牛心包组织多余的筋膜和结缔组织，并裁剪成适配 尺寸；
S3、利用手术剪去除牛心包组织非光滑面的纤维；
步骤二、将预处理后的牛心包组织放入水浴振荡器中，在35-38℃条件 下，处理48h-72h，使其细胞核破碎，并保证细胞质基质完整；
步骤三、采用步骤一的工序对步骤二得到的牛心包组织再次处理；
步骤四、将步骤三得到的牛心包组织放置于模具中，并在其非光滑面包 被一层高分子材料薄膜，包被薄膜后放进低温箱中预固定；
步骤五、压模，具体为取出牛心包组织，放在压模机上进行压模，使牛 心包组织厚度变薄且表面变平整；
步骤六、交联固定，具体的，将牛心包组织放入戊二醛+其它抗钙化溶 剂的溶液中，通过醛基与羟基发生脱水缩合反应的化学改性方法交联固定；
步骤七、交联后的牛心包组织经过酸洗或PBS缓冲液多次中和，成型得 成品。
其中，上述步骤四中，包被薄膜后放进低温箱中，在温度0-4℃的条件 下放置10-20min。
上述步骤五中，牛心包组织压模后可以放入PH值为7.2-7.6的PBS缓 冲液中缓存再进行步骤六操作，或直接进入步骤六。
实施例八：
本实施例的用于制作生物瓣膜的牛心包组织的预处理办法包括以下步 骤：
步骤一、牛心包组织预处理，具体为：
S1、取新鲜牛心包组织，用抗生素溶液清洗，去除表面污血及杂质；
S2、利用手术剪剔去牛心包组织多余的筋膜和结缔组织，并裁剪成适配 尺寸；
S3、利用手术剪去除牛心包组织非光滑面的纤维；
步骤二、将预处理后的牛心包组织放入水浴振荡器中，在35-38℃条件 下，处理48h-72h，使其细胞核破碎，并保证细胞质基质完整；
步骤三、采用步骤一的工序对步骤二得到的牛心包组织再次处理；
步骤四、将步骤三得到的牛心包组织放置于模具中，并在其非光滑面包 被一层高分子材料薄膜，包被薄膜后放进低温箱中预固定；
步骤五、压模，具体为取出牛心包组织，放在压模机上进行压模，使牛 心包组织厚度变薄且表面变平整；
步骤六、交联固定，具体地，牛心包组织采用光氧化交联，采用波长 200-300nm紫外光，在距离反应液10-20cm的高度对牛心包组织辐照处理， 其中，反应液为磷酸盐缓冲液和光反应媒介的混合溶液，磷酸盐缓冲液PH 值7.0-7.6，浓度0.01M或0.05M，光反应媒介为浓度0.01％-0.1％的亚甲基 蓝或亚甲基红溶液；
步骤七、交联后的牛心包组织经过酸洗或PBS缓冲液多次中和，成型得 成品。
其中，上述步骤四中，包被薄膜后放进低温箱中，在温度0-4℃的条件 下放置10-20min。
上述步骤五中，牛心包组织压模后可以放入PH值为7.2-7.6的PBS缓 冲液中缓存再进行步骤六操作，或直接进入步骤六。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明 的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发 明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种用于制作生物瓣膜的牛心包组织的预处理办法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、牛心包组织预处理，具体为：
S1、取新鲜牛心包组织，用抗生素溶液清洗，去除表面污血及杂质；
S2、剔去牛心包组织多余的筋膜和结缔组织，并裁剪成适配尺寸；
S3、去除牛心包组织非光滑面的纤维；
步骤二、将预处理后的牛心包组织放入仪器中使其细胞核破碎，并保证细胞质基质完整；
步骤三、采用步骤一的工序对步骤二得到的牛心包组织再次处理；
步骤四、将步骤三得到的牛心包组织放置于模具中，并在其非光滑面包被一层高分子材料薄膜，包被薄膜后放进低温箱中预固定；
步骤五、压模，具体为取出牛心包组织，放在压模机上进行压模，使牛心包组织厚度变薄且表面变平整；
步骤六、交联固定；
步骤七、交联后的牛心包组织经过酸洗或PBS缓冲液多次中和，成型得成品。
2.根据权利要求1所述的一种用于制作生物瓣膜的牛心包组织的预处理办法，其特征在于：所述步骤五中，牛心包组织压模后放入PH值为7.2-7.6的PBS缓冲液中缓存。
3.根据权利要求1所述的一种用于制作生物瓣膜的牛心包组织的预处理办法，其特征在于：所述步骤二中，将预处理后的牛心包组织放入离心机中，加入十二烷基苯磺酸钠或十二烷基硫酸钠溶液以及反应酶间断性离心；或将预处理后的牛心包组织放入水浴振荡器中，在35-38℃条件下，处理48h-72h。
4.根据权利要求1所述的一种用于制作生物瓣膜的牛心包组织的预处理办法，其特征在于：所述步骤四种，包被薄膜后放进低温箱中，在温度0-4℃的条件下放置10-20min。
5.根据权利要求1至4任一项所述的一种用于制作生物瓣膜的牛心包组织的预处理办法，其特征在于，所述步骤六中，牛心包组织加入0.625％的戊二醛溶液(GA)、0.1％-0.5％的羟基铬溶液、1％-2％甘油的混合溶液中，或放入0.3％的戊二醛、0.625％的京尼平、100％的2,3-丁二醇的任意一种溶液中，通过化学改性方法进行交联固定；
或牛心包组织采用光氧化交联，具体为采用波长200-300nm紫外光，在距离反应液10-20cm的高度对牛心包组织辐照处理，其中，反应液为磷酸盐缓冲液和光反应媒介的混合溶液，磷酸盐缓冲液PH值7.0-7.6，浓度0.01M或0.05M，光反应媒介为浓度0.01％-0.1％的亚甲基蓝或亚甲基红溶液。
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2020
- 2020-09-23 CN CN202011006936.7A patent/CN112206350A/zh active Pending
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
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