TW201636010A - 有機酸的產生促進劑、發炎性腸疾病的預防及／或改善劑 - Google Patents

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Kyuichi Kawabata
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Abstract

本發明之課題為不拘於雙歧桿菌或乳酸菌的數量，而使此等有用菌本身的有機酸產生效率提升。藉由含有多酚作為有效成分且用以促進雙歧桿菌或乳酸菌所引發之有機酸的產生之有機酸的產生促進劑，課題係獲得解決。作為多酚，較佳係使用槲皮素(quercetin)、花旗松素(taxifolin)、根皮素(phloretin)、表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigallocatechin gallate)、或原矢車菊素(procyanidin)。

Description

有機酸的產生促進劑、發炎性腸疾病的預防及/或改善劑
本發明係關於促進雙歧桿菌或乳酸菌所引發之有機酸的產生之有機酸的產生促進劑、以及發炎性腸疾病的預防及/或改善劑。
已知腸內細菌叢與人類的健康或疾病密切相關。在人類的腸內據說棲息有500~1000種、100兆個以上的腸內細菌，一般而言，諸如雙歧桿菌或乳酸菌之具有用性之微生物(有用菌)、及諸如產氣莢膜梭菌之具有害性之微生物(有害菌)係共同棲息。為了人類的健康維持，使有用菌作為優勢種存在於大腸等中實屬重要。
即，雙歧桿菌或乳酸菌係在活體內(腸內)具有產生乳酸或醋酸等有機酸之功能，藉由此等有機酸，能夠抑制或防止腸內細菌叢中之有害菌的增殖，並能夠抑制發生便秘或下痢。此外，亦有報告指出此等所產生之乳酸或醋酸可藉由腸內細菌轉換成酪酸，藉由酪酸可改善發炎性腸疾病等。
另一方面，近年來，便秘或下痢、發炎性腸疾病等之患者數有增加的傾向，遂謀求有效地改善人類的腸內細菌叢。因此，已提出用以在腸內使雙歧桿菌或乳酸菌的菌數增加之各式各樣的手法。
舉例而言，在專利文獻1中，已記載藉由使用聚-γ-麩胺酸作為有效成分，而促進腸內雙歧桿菌的增殖。此外，在專利文獻2中，已記載藉由使用包含源自於植物之脂肪源之脂質組成物，而促進腸內細菌叢的發展。
此外，亦已廣泛施行藉由攝取含有乳酸菌或寡糖之食品或飲料、補給品等，而在腸內使雙歧桿菌或乳酸菌增殖等。
根據此等習知技術，便能夠藉由在腸內使雙歧桿菌或乳酸菌增殖，而使其有機酸的產生量增加。
〔先前技術文獻〕 〔專利文獻〕
〔專利文獻1〕日本專利特開2011-178764號公報
〔專利文獻2〕日本專利特表2013-525421號公報
〔專利文獻3〕日本專利特開平6-166618號公報
〔專利文獻4〕日本專利特開平6-248267號公報
〔專利文獻5〕日本專利特開2012-92138號公報
然而，此等習知技術係藉由使腸內之有用菌的菌數增加而使有機酸的產生增加，其並非使有用菌(微生物)本身之有機酸的產生效率提升。
此外，在包含乳酸菌或寡糖之食品等中，亦有在乳酸菌的殘留性上存在有問題之情形、或因過量攝取而演變成下痢之情形等。
因此，只要能夠不拘於雙歧桿菌或乳酸菌的數量(菌數)，而使有用菌本身之有機酸的產生效率提升，即屬理想。只要能夠使此等有用菌本身之有機酸的產生效率提升，則即便在有用菌的大量攝取係有所困難之情況、或在腸內有用菌的增殖係有所困難之情況，亦能夠改善腸內細菌叢，並能夠期待發炎性腸疾病之預防效果及/或改善效果。
於是，本發明者等人針對各式各樣的植物化學物質給予雙歧桿菌等所引發之有機酸的產生功能之效果進行深入研究之結果，發現藉由使用多酚，可獲得優異的有機酸的產生促進效果。作為此種多酚，特定而言，可列舉槲皮素(quercetin)、花旗松素(taxifolin)、根皮素(phloretin)、表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigallocatechin gallate)、及原矢車菊素(procyanidin)。
此處，作為與使用多酚而進行腸內細菌叢的改善有關連之技術，可列舉專利文獻3中所記載之整腸用組成物。已記載在此整腸用組成物中，係含有表沒食子兒茶素沒食子酸酯等，能夠使人類的腸內之pH值降低，而 改善腸內細菌叢或便秘症。
然而，專利文獻3中所記載之整腸用組成物係在腸內使雙歧桿菌或乳酸菌的菌數增加，其並非能夠與其數量無關地促進雙歧桿菌或乳酸菌所引發之有機酸的產生。
此外，在專利文獻4中，已記載使用槲皮素或花旗松素等作為有效成分之食品用添加物等。然而，此食品用添加物係用作抗氧化劑，其並非與有機酸的產生促進有關連。
再者，在專利文獻5中，已記載以根皮素等作為有效成分之皮膚化妝料等。然而，此皮膚化妝料等係用作抗發炎劑等，其並非與有機酸的產生促進有關連。
除此以外，並未見到與使用各種多酚作為有效成分且能夠促進雙歧桿菌或乳酸菌所引發之有機酸的產生之組成物等有關連之先前文獻。
本發明係有鑑於上述情事而完成者，其目的為提供能夠不拘於雙歧桿菌或乳酸菌的數量，而使此等有用菌所產生之有機酸量增加之有機酸的產生促進劑、以及發炎性腸疾病的預防及/或改善劑。
為了達成上述目的，本發明係含有多酚作為有效成分且用以促進雙歧桿菌及/或乳酸菌所引發之有機酸的產生之有機酸的產生促進劑。
在本發明之有機酸的產生促進劑中，雙歧桿菌較佳係 設為長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)OLB6290(NITE P-75)、長雙歧桿菌No.7(FERM BP-11242)、及青春雙歧桿菌(Bifidobacterium adolescentis)JCM1275T之任1種或2種以上。乳酸菌較佳為乳酸桿菌屬之乳酸菌，較佳係設為德式乳酸桿菌保加利亞亞種(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus)OLL1181(FERM BP-11269)。
在本發明之有機酸的產生促進劑中，作為由雙歧桿菌及/或乳酸菌所產生之有機酸，可列舉乳酸及醋酸。此外，藉由雙歧桿菌及/或乳酸菌可產生乳酸及醋酸，此等可藉由其他腸內細菌而轉換成酪酸。從而，亦能夠藉由攝取本發明之有機酸的產生促進劑，而在腸內使酪酸的量增加。
在本發明之有機酸的產生促進劑中，作為多酚，較佳係含有類黃酮、根皮素、及原矢車菊素之任1種或2種以上。此時，作為類黃酮，較佳係使用槲皮素、花旗松素、表沒食子兒茶素沒食子酸酯。此外，作為原矢車菊素，較佳係使用可可多酚。
此外，在本發明之有機酸的產生促進劑中，較佳係含有上述多酚以及上述雙歧桿菌作為有效成分，亦較佳係含有上述多酚以及上述乳酸菌作為有效成分。
再者，本發明之發炎性腸疾病的預防及/或改善劑係含有上述有機酸的產生促進劑者。
根據本發明，能夠提供可不拘於雙歧桿菌或乳酸菌的數量，而使此等有用菌本身之有機酸的產生效率提升之有機酸的產生促進劑、以及發炎性腸疾病的預防及/或改善劑。
〔圖1〕示出表示由使用分別含有各種多酚之培養基進行培養之雙歧桿菌所產生之有機酸的濃度之圖表之圖。
〔圖2〕示出表示由使用含有可可多酚作為原矢車菊素之培養基進行培養之雙歧桿菌所產生之有機酸的濃度之圖表之圖。
〔圖3〕示出表示由使用分別含有各種多酚之培養基進行培養之乳酸菌所產生之有機酸的濃度之圖表之圖。
以下，針對本發明之較佳實施形態，詳細地進行說明。
〔第一實施形態〕
首先，針對本發明之第一實施形態所涉及之有機酸的產生促進劑進行說明。本實施形態之有機酸的產生促進劑係含有多酚作為有效成分且用以促進雙歧桿菌或乳酸菌所 引發之有機酸的產生之有機酸的產生促進劑。
雙歧桿菌係革蘭氏陽性的偏性厭氧性桿菌之一種，其係廣泛棲息於動物的活體內。雙歧桿菌係將糖進行分解，而產生乳酸及醋酸之微生物。為了人類的健康維持，遍及一生使雙歧桿菌作為優勢種存在於腸內實屬理想。
在本實施形態之有機酸的產生促進劑中，作為雙歧桿菌，並無特別限定，但較佳為例如長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)OLB6290(NITE P-75)、長雙歧桿菌No.7(FERM BP-11242)、或青春雙歧桿菌(Bifidobacterium adolescentis)JCM1275T等。
長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)OLB6290(雙歧桿菌OLB6290)係以受託編號：NITE P-75之形式於2005年2月3日寄存於日本獨立行政法人製品評估技術基礎機構專利微生物寄存中心之微生物。
長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)No.7(雙歧桿菌No.7)係以受託編號：FERM BP-11242之形式於1993年4月20日寄存於日本獨立行政法人製品評估技術基礎機構專利微生物寄存中心之微生物。
乳酸菌係將糖進行分解，而產生乳酸之微生物，可分類成僅製作出乳酸作為最終產物之同型乳酸菌、及同時產生乳酸以外之物質之異型乳酸菌。作為乳酸菌，可列舉乳酸桿菌屬之乳酸菌、雙歧桿菌屬之乳酸菌、腸球菌屬之乳酸菌、乳球菌屬之乳酸菌、片球菌屬之乳酸菌、 及明串珠菌屬之乳酸菌等。在本說明書中，乳酸菌係意味所謂的雙歧桿菌以外之產生乳酸之微生物。
在本實施形態之有機酸的產生促進劑中，作為乳酸菌，並無特別限定，但較佳為屬於革蘭氏陽性桿菌的乳酸桿菌屬之乳酸菌。舉例而言，較佳為德式乳酸桿菌保加利亞亞種(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus)，具體而言，較佳為德式乳酸桿菌保加利亞亞種(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus)OLL1181(FERM BP-11269)。
德式乳酸桿菌保加利亞亞種(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus)OLL1181(保加利亞乳酸桿菌OLL1181)係以受託編號：FERM BP-11269之形式於2010年7月16日寄存於日本獨立行政法人製品評估技術基礎機構專利微生物寄存中心之微生物。
在本實施形態之有機酸的產生促進劑中，作為由雙歧桿菌或乳酸菌所產生之有機酸，可列舉乳酸及醋酸。此外，由於乳酸及醋酸可藉由腸內細菌而轉換成酪酸，因而亦能夠藉由攝取本實施形態之有機酸的產生促進劑，而在腸內使酪酸的量增加。
由雙歧桿菌或乳酸菌所產生之乳酸及醋酸係在腸內抑制產氣莢膜梭菌等有害菌的增殖，而改善腸內細菌叢，能夠抑制或防止發生便秘或下痢。此外，就酪酸而言，已知對發炎性腸疾病具優異的預防效果及/或改善效果。
根據本實施形態之有機酸的產生促進劑，即 便雙歧桿菌或乳酸菌的數量(菌數)並未增加，亦能夠使由雙歧桿菌或乳酸菌所產生之乳酸及醋酸的量增加。因此，即便於在腸內使雙歧桿菌或乳酸菌增殖係有所困難者攝取本實施形態之有機酸的產生促進劑之情況，亦能夠在腸內使乳酸及醋酸的量增加。然後，通過在腸內使乳酸及醋酸的量增加，腸內細菌叢係獲得改善，能夠獲得對發炎性腸疾病之預防效果及/或改善效果。
在本實施形態之有機酸的產生促進劑中，作為多酚，較佳係包含類黃酮，作為類黃酮，較佳係包含屬於二氫槲皮素之一種的花旗松素。
在本實施形態之有機酸的產生促進劑中，作為花旗松素的含量，較佳為0.001~5.0重量%，更佳為0.01~4.0重量%，再佳為0.1~3.0重量%。
此外，在本實施形態之有機酸的產生促進劑中，作為對人類之每1日之花旗松素的有效量(攝取量、投予量)，較佳為0.1~100mg，更佳為0.5~50mg，再佳為1~10mg。
另外，對人類之每1日有效量可為以1次進行攝取(投予)，亦可為以2次以上的複數次進行攝取。針對以下實施形態亦相同。
此外，在本實施形態之有機酸的產生促進劑中，作為多酚，亦較佳係包含根皮素。
在本實施形態之有機酸產生促進劑中，作為根皮素的含量，較佳為0.0001~50重量%，更佳為0.001~30重量 %，再佳為0.01~15重量%。
此外，在本實施形態之有機酸的產生促進劑中，作為對人類之每1日之根皮素的有效量(攝取量、投予量)，較佳為0.001~50mg，更佳為0.01~30mg，再佳為0.1~15mg。
再者，在本實施形態之有機酸的產生促進劑中，作為多酚，較佳係包含槲皮素、表沒食子兒茶素沒食子酸酯、及原矢車菊素之任1種或2種以上，作為原矢車菊素，特佳係包含可可多酚。
在本實施形態之有機酸的產生促進劑中，作為槲皮素的含量，較佳為0.0001~50重量%，更佳為0.001~30重量%，再佳為0.01~15重量%。此外，在本實施形態之有機酸的產生促進劑中，作為表沒食子兒茶素沒食子酸酯的含量，較佳為0.0001~50重量%，更佳為0.001~30重量%，再佳為0.01~15重量%。此外，在本實施形態之有機酸的產生促進劑中，作為可可多酚的含量，較佳為0.0001~50重量%，更佳為0.001~30重量%，再佳為0.01~15重量%。
此外，在本實施形態之有機酸的產生促進劑中，作為多酚，亦較佳係組合包含槲皮素、花旗松素、根皮素、表沒食子兒茶素沒食子酸酯、及原矢車菊素之任1種或2種以上。此時，藉由使多酚2種以上進行組合，可針對有機酸的產生促進期待相乘效果。
本實施形態之有機酸的產生促進劑能夠作成 由每1餐之單位包裝形態所組成者，亦能夠作成每個該單位包裝包含有效量的多酚之形態。
在本實施形態之有機酸的產生促進劑中，作為包裝形態，能夠使用公知的包裝(包材)，並無特別限制，舉例而言，能夠使用紙、塑膠、玻璃、尼龍、不鏽鋼、鋁、鐵、銅、銀、竹等。在以下實施形態中亦相同。
惟，由於在本實施形態之有機酸的產生促進劑中，含有屬於厭氧性菌的雙歧桿菌或乳酸菌，因而作為包裝形態，較佳係作成不會接觸至空氣或氧者。舉例而言，在有機酸的產生促進劑之製造步驟或包裝步驟中，較佳係設有去除接觸至空氣或氧的可能性之步驟，此外，在將有機酸的產生促進劑進行包裝後之保存中，較佳係選擇空氣或氧不會穿透至內部之包裝(包材)。
在本實施形態之有機酸的產生促進劑中，作為將其進行攝取(投予)之方法，並無特別限定，能夠應用經口、經管、經腸、血管注射、塗藥、塞藥等公知的攝取(投予)形態之全部，較佳係應用經口、經管、經腸，特佳係應用經口。此外，在本實施形態之有機酸的產生促進劑中，作為多酚以外之成分，亦可含有其他能夠攝取之成分、各種添加物、醫藥品之原材料等。針對以下實施形態亦相同。
〔第二實施形態〕
本發明之第二實施形態所涉及之有機酸的產生促進劑 係用以促進雙歧桿菌所引發之有機酸的產生者，就不僅多酚，亦以雙歧桿菌作為有效成分之方面而言，係與第一實施形態有所不同。針對其他方面，能夠設成與第一實施形態相同。
只要將有機酸的產生促進劑作成如第二實施形態般之構成，則由於能夠與多酚共同地，同時攝取經多酚促進有機酸的產生之雙歧桿菌，因而能夠更確實地使雙歧桿菌產生有機酸。
在本實施形態之有機酸的產生促進劑中，作為對人類之每1日之雙歧桿菌的有效量(攝取量、投予量)，較佳為2×107~5×1010個，更佳為1×108~5×1010個，再佳為5×108~2×1010個。
此外，在本實施形態之有機酸的產生促進劑中，在雙歧桿菌之培養物每1g以107個以上含有雙歧桿菌的菌數之情況，作為對人類之每1日之雙歧桿菌之培養物的有效量(攝取量、投予量)，較佳為5~1000g，更佳為50~500g，再佳為80~200g。
此時，在本實施形態之有機酸的產生促進劑中，只要雙歧桿菌之培養物每1g以107個以上、108個以上、109個以上等含有雙歧桿菌的菌數即可，以107個、108個、109個等含有亦可。在本實施形態之有機酸的產生促進劑中，只要使雙歧桿菌之培養物每1g之雙歧桿菌的菌數增加，即能夠在以有效量含有雙歧桿菌的菌數之同時，使雙歧桿菌之培養物的有效量減低，並能夠藉由以較 少量攝取雙歧桿菌之培養物，而充分地獲得有機酸的產生促進效果、以及發炎性腸疾病之預防效果及/或改善效果。就此而言，針對第三實施形態中之乳酸菌亦相同。
在本實施形態之有機酸的產生促進劑中，雙歧桿菌之培養物係能夠以公知的培養基成分，將雙歧桿菌進行培養(增殖)而獲得。然後，藉由將此所獲得之雙歧桿菌之培養液進行離心分離等，便能夠增高培養液之每單位重量之雙歧桿菌的菌數。在本實施形態之有機酸的產生促進劑中，雙歧桿菌可例如呈經培養(增殖)的原樣之狀態，亦可呈經與凍結保護劑等進行混合而凍結之狀態，亦可呈經凍結乾燥之狀態。就此而言，針對第三實施形態中之乳酸菌亦相同。
此外，在本實施形態之有機酸的產生促進劑中，作為將其進行攝取時之溫度，較佳為-30~50℃，更佳為-20~45℃，再佳為0~45℃，再佳為0~30℃，特佳為0~20℃，最佳為0~10℃。就此而言，針對第三實施形態中之乳酸菌亦相同。
〔第三實施形態〕
本發明之第三實施形態所涉及之有機酸的產生促進劑係用以促進乳酸菌所引發之有機酸的產生者，就代替雙歧桿菌，以乳酸菌作為有效成分之方面而言，係與第二實施形態有所不同。針對其他方面，能夠設成與第二實施形態相同。
只要將有機酸的產生促進劑作成如第三實施形態般之構成，則由於能夠與多酚共同地，同時攝取經多酚促進有機酸的產生之乳酸菌，因而能夠更確實地使乳酸菌產生有機酸。
在本實施形態之有機酸的產生促進劑中，作為對人類之每1日之乳酸菌的有效量(攝取量、投予量)，較佳為2×107~5×1010個，更佳為1×108~5×1010個，再佳為5×108~2×1010個。
此外，在本實施形態之有機酸的產生促進劑中，在乳酸菌之培養物每1g以107個以上含有乳酸菌的菌數之情況，作為對人類之每1日之乳酸菌之培養物的有效量(攝取量、投予量)，較佳為5~1000g，更佳為50~500g，再佳為80~200g。
〔第四實施形態〕
本發明之第四實施形態所涉及之發炎性腸疾病的預防及/或改善劑較佳係作成含有第一實施形態~第三實施形態之任一種有機酸的產生促進劑者。
藉由攝取此種發炎性腸疾病的預防及/或改善劑，能夠在腸內提升雙歧桿菌或乳酸菌所引發之有機酸的產生效率。因此，藉由實際上產生之有機酸，在腸內有害菌的增殖係受到抑制，通過腸內細菌叢之改善效果，能夠獲得對發炎性腸疾病之優異的預防效果及/或改善效果。
〔第五實施形態〕
其次，針對本發明之第五實施形態所涉及之乳酸的製造方法進行說明。本實施形態之乳酸的製造方法係使用含有多酚作為有效成分且促進雙歧桿菌及/或乳酸菌所引發之有機酸的產生之組成物，藉由雙歧桿菌及/或乳酸菌，來製造乳酸之方法。此外，本實施形態之乳酸的製造方法亦較佳係設成使用含有多酚、以及雙歧桿菌及/或乳酸菌作為有效成分且促進雙歧桿菌及/或乳酸菌所引發之有機酸的產生之組成物，藉由雙歧桿菌或乳酸菌，來製造乳酸之方法。
在本實施形態之乳酸的製造方法中，就雙歧桿菌或乳酸菌每菌數所製造之乳酸的濃度而言，(以絕對值計)較佳為0.01pM/cfu以上，更佳為0.1pM/cfu以上，再佳為1pM/cfu以上，特佳為0.01nM/cfu以上。此外，在與未添加多酚並藉由雙歧桿菌或乳酸菌來製造乳酸之方法進行比較之情況，在本實施形態之乳酸的製造方法中，就雙歧桿菌或乳酸菌每菌數所製造之乳酸的濃度而言，(以相對值計)較佳係以1%以上，更佳為2%以上，再佳為5%以上，特佳為10%以上增加(受到促進)。
此外，在本實施形態之乳酸的製造方法中，就雙歧桿菌或乳酸菌每108個所製造之乳酸的濃度而言，(以絕對值計)較佳為1nM/108cfu以上，更佳為0.01mM/108cfu以上，再佳為0.1mM/108cfu以上，特佳為1mM/108cfu以上。此外，在與未添加多酚並藉由雙 歧桿菌或乳酸菌來製造乳酸之方法進行比較之情況，在本實施形態之乳酸的製造方法中，就雙歧桿菌或乳酸菌每菌數所製造之乳酸的濃度而言，(以相對值計)較佳係以1%以上，更佳為2%以上，再佳為5%以上，特佳為10%以上進行增加(受到促進)。
另外，作為本實施形態，亦可表現為用以藉由雙歧桿菌及/或乳酸菌來製造乳酸之多酚的用途、用以藉由雙歧桿菌及/或乳酸菌來促進乳酸的製造之多酚的用途等。
〔第六實施形態〕
其次，針對本發明之第五實施形態所涉及之醋酸的製造方法進行說明。本實施形態之醋酸的製造方法係使用含有多酚作為有效成分且促進雙歧桿菌及/或乳酸菌所引發之有機酸的產生之組成物，藉由雙歧桿菌及/或乳酸菌，來製造醋酸之方法。此外，本實施形態之醋酸的製造方法亦較佳係設成含有多酚、以及雙歧桿菌及/或乳酸菌作為有效成分且促進雙歧桿菌及/或乳酸菌所引發之有機酸的產生之組成物，藉由雙歧桿菌或乳酸菌，來製造醋酸之方法。
在本實施形態之醋酸的製造方法中，就雙歧桿菌或乳酸菌每菌數所製造之醋酸的濃度而言，(以絕對值計)較佳為1fM/cfu以上，更佳為0.01pM/cfu以上，再佳為0.1pM/cfu以上，特佳為1pM/cfu以上。此外，在與未添加多酚並藉由雙歧桿菌或乳酸菌來製造醋酸之方法進 行比較之情況，在本實施形態之醋酸的製造方法中，就雙歧桿菌或乳酸菌每菌數所製造之醋酸的濃度而言，(以相對值計)較佳係以1%以上，更佳為2%以上，再佳為5%以上，特佳為10%以上增加(受到促進)。
此外，在本實施形態之醋酸的製造方法中，就雙歧桿菌或乳酸菌每108個所製造之醋酸的濃度而言，(以絕對值計)較佳為0.1nM/108cfu以上，更佳為1nM/108cfu以上，再佳為0.01nM/108cfu以上，特佳為0.1nM/108cfu以上。此外，在與未添加多酚並藉由雙歧桿菌或乳酸菌來製造醋酸之方法進行比較之情況，在本實施形態之醋酸的製造方法中，就雙歧桿菌或乳酸菌每菌數所製造之醋酸的濃度而言，(以相對值計)較佳係以1%以上，更佳為2%以上，再佳為5%以上，特佳為10%以上增加(受到促進)。
另外，作為本實施形態，亦可表現為用以藉由雙歧桿菌及/或乳酸菌來製造醋酸之多酚的用途、用以藉由雙歧桿菌及/或乳酸菌來促進醋酸的製造之多酚的用途等。
〔實施例〕
以下，針對為了確認本發明之實施形態所涉及之有機酸的產生促進劑之效果所實施之試驗詳細地進行說明。惟，本發明並不限定於以下構成。
<試驗1> (試驗方法)
作為多酚，係準備槲皮素、花旗松素、根皮素、及表沒食子兒茶素沒食子酸酯4種。
具體而言，使槲皮素(quercetin，Cayman Chemical Company Inc.)溶解於DMSO(Dimethyl sulfoxide)中並調製成20mM。此外，使花旗松素((+)-Taxifolin 1036 Extrasynthese，Funakoshi股份有限公司)溶解於DMSO中並調製成40mM。此外，使根皮素(Phloretin，Sigma-Aldrich Japan)溶解於DMSO中並調製成40mM。此外，使表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin gallate，Cayman Chemical Company Inc.)溶解於DMSO中並調製成20mM。然後，將此等經調製之槲皮素、花旗松素、根皮素、及表沒食子兒茶素沒食子酸酯之各DMSO溶液以0.01%添加至DMEM培養基(DMEM，Sigma-Aldrich Japan)中。另外，作為對照，係準備將未加入多酚之DMSO(Dimethyl sulfoxide)以0.01%添加至DMEM培養基中而成者。
在上述所調製之各DMEM培養基中，作為雙歧桿菌，係以108cfu/ml接種青春雙歧桿菌(Bifidobacterium adolescentis)JCM1275T，並於37℃以3小時進行厭氣培養。然後，將培養上清液中之乳酸及醋酸藉由長鏈/短鏈脂肪酸分析用之標記化試藥(YMC股份有限公司)進行標記化後，使用高效液相層析(HPLC，high performance liquid chromatography)，測 定培養後之各培養基中之乳酸及醋酸的濃度。作為HPLC之條件，係使用Ascentis RP-amide管柱(100×30mm，3μm，Sigma-Aldrich Japan)，就移動相而言，係將A相(0.01M鹽酸，pH 4.5)：B相(乙腈：甲醇=2：1)設為13：7，且設為0.4ml/分鐘。此外，將管柱溫度設為50℃，將注入量設為4μl，並將檢測波長設為400nm。將其結果示於圖1。
此外，利用培養前後之各培養基的濁度(650nm之吸光度)、及預先作成之檢量曲線計算培養前後之各培養基中之雙歧桿菌的菌數。
作為具體的檢量曲線之作成方法，係測定雙歧桿菌的菌數在溶液中之濁度(650nm之吸光度)後，將雙歧桿菌藉由添加有BCP之平板計數瓊脂培養基於37℃以72小時進行厭氣培養，計測菌落數。然後，作成雙歧桿菌的菌數(cfu/ml)及濁度之檢量曲線。
(試驗結果)
就未添加多酚之培養基(DMSO)中之有機酸的濃度而言，乳酸為3.46mM，醋酸為4.86mM。此外，就添加有槲皮素之培養基(QUE)中之有機酸的濃度而言，乳酸為3.88mM，醋酸為5.41mM。此外，就添加有花旗松素之培養基(TAX)中之有機酸的濃度而言，乳酸為5.88mM，醋酸為7.44mM。此外，就添加有根皮素之培養基(PHL)中之有機酸的濃度而言，乳酸為4.91mM，醋酸 為6.26mM。此外，就添加有表沒食子兒茶素沒食子酸醋之培養基(EGCG)中之有機酸的濃度而言，乳酸為5.25mM，醋酸為7.81mM。
即，藉由槲皮素的添加，乳酸係以12%增加，醋酸係以11%增加。此外，藉由花旗松素的添加，乳酸係以70%增加，醋酸係以53%增加。此外，藉由根皮素的添加，乳酸係以42%增加，醋酸係以29%增加。此外，藉由表沒食子兒茶素沒食子酸酯的添加，乳酸係以42%增加，醋酸係以29%增加。
此外，培養前後之各培養基中之雙歧桿菌的菌數之計算結果，各培養基之雙歧桿菌的菌數皆為約108cfu/ml。由此，可確認培養前後之培養基中之雙歧桿菌的菌數並未發生變化。
從而，由試驗1之結果，可知槲皮素、花旗松素、根皮素、及表沒食子兒茶素沒食子酸酯可在未使雙歧桿菌的菌數發生變化之情形下，提升雙歧桿菌所引發之乳酸及醋酸的產生效率。
<試驗2> (試驗方法)
作為原矢車菊素，係準備可可多酚。
具體而言，使如後述般所製造之可可多酚(Cacao bean polyphenol extract)溶解於DMSO中並調製成100mg/ml。另外，作為對照，係準備將未加入多酚之 DMSO(Dimethyl sulfoxide)以0.01%添加至DMEM培養基中而成者。
依以下之方式製造可可多酚。
首先，將可可豆150kg於80℃以1小時進行加熱。接著，使用壓榨機，將此經加熱之可可豆進行脫脂，獲得可可粉80kg。在此經脫脂之可可粉中加入乙醇(50%)800kg之後，進行加熱。然後，使其溫度達到50℃後，以1小時進行攪拌萃取之後，將此萃取液於4℃以1晚進行放置。使用螺旋傾析器、壓濾器，將此萃取液進行過濾，將此濾液減壓濃縮至27kg之後，加入乙醇(95%)13kg。然後，將此濃縮液於40℃以1小時進行攪拌之後，以1晚進行冷藏保存。使用夏普勒斯離心機(Sharples centrifuge)，將此濃縮液進行離心分離(25℃，12000rpm)。然後，在此離心分離之上清液液中加入酸性白土(Mizuka Ace # 20)35kg之後，以1小時進行攪拌。使用吸濾器，將其進行過濾，將此過濾液進行減壓濃縮之後，進行凍結乾燥，而獲得粉末6.3kg。然後，在此粉末0.5kg中投入樹脂25L、水50L，以30分鐘以上進行攪拌。將此樹脂回收之後，投入乙醇(80%)75L，以20~30分鐘進行攪拌。使用吸濾器，將其進行過濾，將此過濾液進行減壓濃縮之後，進行凍結乾燥，而獲得可可多酚。
在上述所調製之各DMEM培養基中，作為雙歧桿菌，係以108cfu/ml接種青春雙歧桿菌( Bifidobacterium adolescentis)JCM1275T，並於37℃以3小時進行厭氣培養。然後，與試驗1同樣地，使用HPLC，測定培養後之培養基中之乳酸及醋酸的濃度。將其結果示於圖2。
此外，利用培養前後之各培養基的濁度(650nm之吸光度)、及預先作成之檢量曲線，與試驗1同樣地計算培養前後之各培養基中之雙歧桿菌的菌數。
(試驗結果)
為就未添加多酚之培養基(DMSO)中之有機酸的濃度而言，乳酸為5.70mM，醋酸為11.80mM。此外，就添加有可可多酚之培養基(CBP)中之有機酸的濃度而言，乳酸為6.34mM，醋酸為13.18mM。
即，藉由可可多酚的添加，乳酸係以11%增加，醋酸係以12%增加。
此外，培養前後之各培養基中之雙歧桿菌的菌數之計算結果，各培養基之雙歧桿菌的菌數皆為約108cfu/ml。由此，可確認培養前後之培養基中之雙歧桿菌的菌數並未發生變化。
從而，由試驗2之結果，可知可可多酚可在未使雙歧桿菌的菌數發生變化之情形下，提升雙歧桿菌所引發之乳酸及醋酸的產生效率。
<試驗3> (試驗方法)
作為多酚，係準備槲皮素、花旗松素、根皮素、及表沒食子兒茶素沒食子酸酯4種。
具體而言，使槲皮素(quercetin，Cayman Chemical Company Inc.)溶解於DMSO(Dimethyl sulfoxide)中並調製成200mM。此外，使花旗松素((+)-Taxifolin 1036 Extrasynthese，Funakoshi股份有限公司)溶解於DMSO中並調製成400mM。此外，使根皮素(Phloretin，Sigma-Aldrich Japan)溶解於DMSO中並調製成400mM。此外，使表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin gallate，Cayman Chemical Company Inc.)溶解於DMSO中並調製成200mM。然後，將此等經調製之槲皮素、花旗松素、根皮素、及表沒食子兒茶素沒食子酸酯之各DMSO溶液以0.01%添加至DMEM培養基(DMEM，Sigma-Aldrich Japan)中。另外，作為對照，係準備將未加入多酚之DMSO以0.01%添加至DMEM培養基中而成者。
在上述所調製之各DMEM培養基中，作為乳酸菌，係以108cfu/ml接種德式乳酸桿菌保加利亞亞種(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus)OLL1181(FERM BP-11269)，並於37℃以3小時進行厭氣培養。然後，與試驗1同樣地，使用HPLC，測定培養後之培養基中之醋酸的濃度。將其結果示於圖3。
此外，利用培養前後之各培養基的濁度(650nm之 吸光度)、及預先作成之檢量曲線，與試驗1同樣地計算培養前後之各培養基中之乳酸菌的菌數。
(試驗結果)
就未添加多酚之培養基(DMSO)中之有機酸的濃度而言，醋酸為0.63mM。此外，就添加有槲皮素之培養基(QUE)中之有機酸的濃度而言，醋酸為0.61mM。此外，就添加有花旗松素之培養基(TAX)中之有機酸的濃度而言，醋酸為0.97mM。此外，就添加有根皮素之培養基(PHL)中之有機酸的濃度而言，醋酸為0.72mM。此外，就添加有表沒食子兒茶素沒食子酸酯之培養基(EGCG)中之有機酸的濃度而言，醋酸為0.90mM。
即，藉由槲皮素的添加，醋酸係以3%減少。此外，藉由花旗松素的添加，醋酸係以54%增加。此外，藉由根皮素的添加，醋酸係以14%增加。此外，藉由表沒食子兒茶素沒食子酸酯的添加，醋酸係以43%增加。
此外，培養前後之各培養基中之乳酸菌的菌數之計算結果，各培養基之乳酸菌的菌數皆為約108cfu/ml。由此，可確認培養前後之培養基中之乳酸菌的菌數並未發生變化。
從而，由試驗3之結果，可知槲皮素、花旗松素、根皮素、及表沒食子兒茶素沒食子酸酯可在未使乳酸菌的菌數發生變化之情形下，提升乳酸菌所引發之醋酸的產生效 率。
如以上所說明，根據本實施形態之有機酸的產生促進劑，能夠不拘於雙歧桿菌或乳酸菌的菌數(數量)，而增加此等微生物所產生之有機酸的量。且，根據含有此種有機酸的產生促進劑之本實施形態之發炎性腸疾病的預防及/或改善劑，在腸內有害菌的增殖係受到抑制，通過腸內菌叢之改善效果，能夠獲得對發炎性腸疾病之優異的預防效果及/或改善效果。
本發明並不受上述實施形態或實施例所限定，在本發明之範圍內，能夠進行各種變更並實施。舉例而言，在上述實施形態及實施例中，作為多酚，雖然係使用槲皮素、花旗松素、根皮素、表沒食子兒茶素沒食子酸酯、及原矢車菊素，但亦可使用會發揮與此等同樣的效果之其他多酚。此外，當然，作為雙歧桿菌或乳酸菌，亦可使用實施形態所示之菌株以外之微生物。再者，亦可將第二實施形態與第三實施形態進行組合，而含有多酚以及雙歧桿菌及乳酸菌作為有效成分。
〔產業上之可利用性〕
本發明能夠適宜地利用於施行下痢或便秘、發炎性腸疾病等的預防及/或改善。

Claims (20)

  1. 一種有機酸的產生促進劑，其係含有多酚作為有效成分，且用以促進雙歧桿菌或乳酸菌所引發之有機酸的產生。
  2. 如請求項1之有機酸的產生促進劑，其中，前述雙歧桿菌為長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)OLB6290(NITE P-75)、長雙歧桿菌No.7(FERM BP-11242)、及青春雙歧桿菌(Bifidobacterium adolescentis)JCM1275T之任1種或2種以上。
  3. 如請求項1或2之有機酸的產生促進劑，其中，前述乳酸菌為乳酸桿菌屬之乳酸菌。
  4. 如請求項3之有機酸的產生促進劑，其中，前述乳酸桿菌屬之乳酸菌為德式乳酸桿菌保加利亞亞種(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus)OLL1181(FERM BP-11269)。
  5. 如請求項1或2之有機酸的產生促進劑，其中，前述有機酸為乳酸及/或醋酸。
  6. 如請求項1或2之有機酸的產生促進劑，其中，前述多酚為類黃酮。
  7. 如請求項6之有機酸的產生促進劑，其中，前述多酚為花旗松素(taxifolin)。
  8. 如請求項7之有機酸的產生促進劑，其中，前述花旗松素的含量為0.001~5.0重量%。
  9. 如請求項7之有機酸的產生促進劑，其中，前述花 旗松素對人類之每1日投予量為0.1~100mg。
  10. 如請求項1或2之有機酸的產生促進劑，其中，前述多酚為根皮素(phloretin)。
  11. 如請求項10之有機酸的產生促進劑，其中，前述根皮素的含量為0.0001~50重量%。
  12. 如請求項10之有機酸的產生促進劑，其中，前述根皮素對人類之每1日投予量為0.001~50mg。
  13. 如請求項1或2之有機酸的產生促進劑，其中，前述多酚為槲皮素(quercetin)、表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigallocatechin gallate)、及原矢車菊素(procyanidin)之任1種或2種以上。
  14. 如請求項1或2之有機酸的產生促進劑，其係含有前述多酚以及前述雙歧桿菌作為有效成分，且用以促進前述雙歧桿菌所引發之有機酸的產生。
  15. 如請求項14之有機酸的產生促進劑，其中，前述雙歧桿菌的菌數對人類之每1日投予量為2×107~5×1010個。
  16. 如請求項14之有機酸的產生促進劑，其中，在該有機酸的產生促進劑中所含有之前述雙歧桿菌之培養物每1g包含107個以上的雙歧桿菌之情況，前述雙歧桿菌之培養物對人類之每1日投予量為5~1000g。
  17. 如請求項1或2之有機酸的產生促進劑，其係含有前述多酚以及前述乳酸菌作為有效成分，且用以促進前述乳酸菌所引發之有機酸的產生。
  18. 如請求項17之有機酸的產生促進劑，其中，前述乳酸菌的菌數對人類之每1日投予量為2×107~5×1010個。
  19. 如請求項17之有機酸的產生促進劑，其中，在該有機酸的產生促進劑中所含有之前述乳酸菌之培養物每1g包含107個以上的乳酸菌之情況，前述乳酸菌之培養物對人類之每1日投予量為5~1000g。
  20. 一種發炎性腸疾病的預防及/或改善劑，其係含有請求項1或2之有機酸的產生促進劑。
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